Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологическое и биохимическое исследование секреторной деятельности щитовидной железы при экспериментальном синдроме нетиреоидных заболеваний

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфологическое и биохимическое исследование секреторной деятельности щитовидной железы при экспериментальном синдроме нетиреоидных заболеваний"

4853829

ЯГЛОВА Наталья Валентиновна

МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ И БИОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СЕКРЕТОРНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ СИНДРОМЕ НЕТИРЕОИДНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

О 3 0ЕВ 2077

Москва-2011

4853829

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте морфологии человека РАМН

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор

Макарова Ольга Васильевна

Заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Березов Темирболат Темболатович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Яцковский Александр Никодимович

доктор медицинских наук, профессор Ноздрин Владимир Иванович

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Кушлинский Николай Евгеньевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет Росздрава

Защита состоится « 'СиАЛ 2011г. в часов на

заседании диссертационного 'совета Д 001.004.01 при НИИ морфологии человека РАМН по адресу: 117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д.З.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИ морфологии человека РАМН по адресу: 117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д.З.

Автореферат разослан « /в » Л^вй/>Л 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Л.П. Михайлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Синдром нетиреоидных заболеваний развивается при различных соматических заболеваниях у лиц, ранее не страдавших заболеваниями щитовидной железы, и проявляется снижением уровня трийодтиронина и тироксина в сыворотке крови (De Groot L., 2003). Первые сообщения о синдроме нетиреоидных заболеваний в научной литературе появились около 30 лет назад (Wartofsky L. et al., 1982). На сегодняшний день синдром нетиреоидных заболеваний описан при тяжелых формах инфекционных и воспалительных заболеваний, сепсисе, инфаркте миокарда, тяжелых травмах, трансплантации внутренних органов и ряде других заболеваний (Phillips R. et al., 1984; Vexiau P. et al., 1993, Eber B. et.al, 1995; Joosten K. et al., 2000). По данным клинических исследований (Maldonado S.et al., 1992; Kaptein E, 1997; Peeters R. et al., 2005) выраженность синдрома нетиреоидных заболеваний определяет уровень смертности пациентов реанимационных отделений, что обусловливает актуальность этой проблемы. Анализ литературных данных не позволяет сформировать целостное представление о патогенетических механизмах развития и регресса синдрома нетиреоидных заболеваний. Существует точка зрения, что синдром нетиреоидных заболеваний развивается вследствие снижения секреции тироли-берина гипоталамусом и тиреотропного гормона гипофизом, приводящим к снижению продукции тиреоидных гормонов, а также нарушения периферического превращения тироксина в трийодтиронин (Fliers E.et al., 1997; De Groot L., 2003; den Brinker M., 2005). Однако имеются данные клинических и экспериментальных исследований, противоречащие этим гипотезам, в частности, выявление синдрома нетиреоидных заболеваний при нормальном и повышенном уровне тиреотропного гормона в сыворотке крови, и высокая активность

дейодиназ, превращающих тироксин в трийодтиронин при различных заболе- i

( ■

ваниях (Docter R. et al., 1993; Adler S. et al., 2007; Galton V. et al., 2009). ' - r

Наименее изученным аспектом проблемы являются изменения секреторной деятельности клеток щитовидной железы при синдроме нетиреоидных заболеваний. В современной литературе отсутствуют данные о сопоставлении

биохимических данных, характеризующих деятельность щитовидной железы, и морфологических проявлениях секреторной деятельности клеток щитовидной железы при синдроме нетиреоидных заболеваний. В последние десятилетия в научной литературе было опубликовано большое количество экспериментальных работ по изучению влияния воздействия различных физических и химических факторов на деятельность щитовидной железы (Dumont J. et al., 1991; Thomson S. et al., 1998; Derwahl M. et al., 1999; Vella V. et al., 2002). Обнаружение на мембранах фолликулярных клеток щитовидной железы функционально активных толл-подобных рецепторов 4 и 3 (Yamazaki К. et al., 2007; Nicola J. et al., 2009) указывает на возможность непосредственного регулирования их секреторной активности патоген-ассоциированными молекулярными паттернами. Работы в этой области послужат основой для изучения внегипофизарных путей регуляции деятельности щитовидной железы в норме и патологии. Связь щитовидной железы с органами иммунной системы, ее роль в реакциях врожденного и адаптивного иммунитета представляют значительный интерес для исследователей, так как открывают новые пути изучения молекулярных основ общепатологических процессов. Следствием недостаточной изученности механизмов синдрома нетиреоидных заболеваний при различных патологиях является отсутствие патогенетически обоснованных подходов к его коррекции.

Таким образом, изучение морфологических и биохимических основ синдрома нетироесидных заболеваний, его проявлений на разных структурно-функциональных уровнях, влияния на деятельность других органов и систем, позволило бы оптимизировать методы лечения тяжелых соматических заболеваний, а также стать основой нового направления исследования роли патоген-ассоциированных молекулярных паттернов, в том числе и конститутивных, в регуляции секреторной деятельности щитовидной железы и других эндокринных желез в норме и патологии, что и обусловило цель нашего исследования. Цель исследования: изучение морфологических и биохимических изменений секреторной деятельности щитовидной железы при синдроме нетиреоидных заболеваний и обоснование методов его коррекции.

Задачи исследования:

1. Изучить морфологические проявления секреторной деятельности фолликулярных клеток щитовидной железы при развитии синдрома нетиреоидных заболеваний, обусловленного острым грамотрицательным бактериальным эн-дотоксикозом, вызванным введением липополисахарида Е. coli.

2. Провести биохимический анализ изменений тиреоидного статуса а разные сроки после введения липополисахарида и изучить зависимость между изменениями концентраций гормонов и эндотоксина в сыворотке крови.

3. Оценить изменения концентрации основных провоспалительных и имму-норегуляторных цитокинов в сыворотке крови и культуральной среде клеток селезенки в разные сроки после введения липополисахарида во взаимосвязи с изменениями концентрации тиреоидных и тиреотропного гормонов.

4. Изучить морфологические проявления секреторной деятельности фолликулярных клеток щитовидной железы при регрессе синдрома нетиреоидных заболеваний и их особенности в зависимости от выраженности реакций иммунной системы.

5. На основании полученных данных об изменениях секреторной деятельности щитовидной железы при остром грамотрицательном эндотоксикозе обосновать методологические подходы к коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний.

6. Исследовать морфологические проявления секреторной деятельности щитовидной железы при коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний.

7. Изучить цитофизиологические характеристики тучных клеток щитовидной железы и способы выделения ими секреторного материала в разные сроки развития экспериментального синдрома нетиреоидных заболеваний и при его коррекции.

8. Изучить биохимические показатели тиреоидного статуса при коррекции экспериментального синдрома нетиреоидных заболеваний.

9. Изучить изменения концентрации эндотоксина, провоспалительных и иммунорегуляторных цитокинов и активности индикаторных, экскреторных и

секреторных ферментов печени в сыворотке крови и морфологические изменения печени при коррекции экспериментального синдрома нетиреоидных заболеваний.

Научная новизна:

Впервые установлено, что наряду с центральным существует периферический механизм развития синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе. Периферический механизм заключается в разобщающем действии липополисахарида на фазы секреторного цикла фолликулярных тироцитов и проявляется усилением синтеза тиреоглобу-лина и его депонирования в полости фолликулов, и снижением его резорбции и расщепления лизосомами.

Впервые охарактеризованы структурные изменения фолликулярных тироцитов крыс при развитии и регрессе синдрома нетиреоидных заболеваний, обусловленного острым грамотрицательным бактериальным эндотоксикозом. Ранние сроки развития синдрома нетиреоидных заболеваний характеризуются усилением синтетических процессов в фолликулярных клетках, слабой выраженностью резорбции и расщепления тиреоглобулина в периферической зоне долей и признаками неэффективной резорбции в центральной зоне долей щитовидной железы. На более поздних сроках появляются деструкция митохондрий с последующим усилением лизосомальной реакции, признаки макропиноцитоза коллоида. Регресс синдрома нетиреоидных заболеваний морфологически характеризуется усилением и синхронизацией процессов синтеза, резорбции и расщепления тиреоглобулина лизосомами фолликулярных тироцитов.

Впервые выявлены индивидуальные особенности морфологических проявлений секреторных процессов в щитовидной железе в зависимости от выраженности реакций иммунной системы и характеризующиеся различными размерами фолликулов и скоростью процессов резорбции тиреоглобулина фолликулярными тироцитами.

Установлен и охарактеризован молекулярный способ выделения секреторного материала тучными клетками щитовидной железы при воздействии липополисахарида.

Впервые обнаружена обратная зависимость между содержанием эндотоксина и тиреоидных гормонов в сыворотке крови при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе, что указывает на важную роль эндотоксина гра-мотрицательных бактерий в регуляции функций щитовидной железы. Доказано, что патогномоничным симпотомом синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном эндотоксикозе является снижение концентрации тироксина в сыворотке крови, а не трийодтиронина, как считалось ранее.

Разработан и патогенетически обоснован эффективный подход к коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе, основанный на введении супрафизиологической дозы тиреотропного гормона Установлено, что ТТГ оказывает иммуномодули-рующее и гепатотропное действие. Практическая значимость:

Полученные в эксперименте данные о морфологических и функциональных изменениях щитовидной железы, печени, цитокинового профиля, при развитии синдрома нетиреоидных заболеваний и его коррекции тиреотропным гормоном могут быть рекомендованы для разработки новых и совершенствования существующих методов лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными бактериями, включая эндотоксиновый бактериальный шок.

Полученные новые данные о наличии периферического внегипофизарно-го механизма регуляции секреторных процессов в клетках щитовидной железы, о роли эндотоксина в регуляции активности фолликулярных тироцитов и о взаимосвязи выраженности иммунного ответа организма и активности щитовидной железы открывают новые направления в разработке подходов к оценке тяжести состояния больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями, сопровождающимися эндотоксинемией.

При морфологической оценке функциональной активности щитовидкой железы необходимо учитывать, что известные морфологические критерии повышенной функциональной активности (увеличение высоты фолликулярных тироцитов, размеров их ядер, появление ШИК-положительных включений в цитоплазме фолликулярных тироцитов) могут наблюдаться и при пониженной продукции тиреоидных гормонов.

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО Российский университет дружбы народов и кафедре биологической химии лечебного факультета ГОУ ВПО Российский медицинский государственный университет Росздрава. Положения, выносимые на защиту:

1. В развитии синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрица-тельном бактериальном эндотоксикозе принимают участие периферический и центральный механизмы, заключающиеся, соответственно, в нарушении секреторной деятельности фолликулярных тироцитов под воздействием липополи-сахарида и снижении секреции тиреотропного гормона гипофизом.

2. Липополисахарид оказывает на щитовидную железу амбивалентное действие, являясь с одной стороны активатором фазы синтеза, а с другой, ингибитором фазы резорбции и расщепления тироглобулина в фолликулярных тиро-цитах, и играет ведущую роль в развитии синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном эндотоксикозе. Сочетание воздействия липопо-лисахарида с дефицитом тиреотропного гормона характеризуется возникновением разнонаправленных морфодинамических процессов в периферической и центральной зонах долей щитовидной железы и большей сбалансированностью процессов синтеза, выделения и резорбции тиреоглобулина в центральной зоне по сравнению с периферической зоной долей щитовидной железы. Регресс синдрома нетиреоидных заболеваний характеризуется уменьшением размеров фолликулов и восстановлением баланса между фазами секреторного цикла фолликулярных тироцитов.

3. Выраженность поляризации иммунного ответа по Thl типу влияет на темпы присоединения центрального механизма развития синдрома нетиреоид-ных заболеваний к периферическому, что объясняет наличие различных вариантов синдрома нетиреоидных заболеваний с повышенным и пониженным уровнем тирсотропного гормона в сыворотке крови.

4. Тучные клетки щитовидной железы при воздействии липополисахарида усиливают выделение секреторного материала преимущественно молекулярным способом. Развитие системного воспалительного ответа приводит к усилению выделения секреторного материала тучными клетками, как молекулярным способом, так и путем экзоцитоза содержимого секреторных гранул.

5. Введение тиреотропного гормона в супрафизиологических дозах обеспечивает восстановление процессов резорбции и расщепления тирсоглобулина в фолликулярных тироцитах, повышает содержание связанных, а затем и свободных фракций тиреоидных гормонов в сыворотке крови, оказывает иммуномо-дулирующее и гепатотропное действие.

Апробация работы: Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2008г.), III съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009г.), международной научной конференции молодых ученых «Молодежь в науке-2009» (Минск, Беларусь, 2009г.), конференции «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» (Москва, 2010г.), XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010г.), XVIII международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Ялта, Украина, 2010г.), VIII Всероссийской конференции «Патология клетки» (Москва, 2010г.), межлабораторной конференции НИИ морфологии человека РАМН (ноябрь 2010г.)

Публикации: По теме диссертации опубликовано 20 работ, из них 12 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 398 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 267 рисунками и 63 таблицами. Список литературы включает 246 источников, из них 26 отечественных и 220 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 176 самцах крыс Вистар массой тела 200220гг. Крысы содержались в стандартных условиях вивария, получали стандартный рацион питания и воду ad libitum.

Острый грамотрицательный бактериальный эндотоксикоз вызывали однократным внутрибрюшинным введением 74 крысам ЛПС E.coli штамм 026:В6 ("Sigma", США) в дозе 10 мг/кг массы тела. Крысам контрольной группы (п=43) вводили физиологический раствор. После введения ЛПС крыс разделили на две подгруппы: для изучения проявлений СНТЗ - группа ЛПС (п=43) и для коррекции СНТЗ - группа ЛПС+ТТГ (n=31). Животных подгруппы ЛПС выводили из эксперимента через 1, 3, 6, 12, 24, 27, 30, 36, 48 и 72ч после введения ЛПС одновременно с животными контрольной группы. Животным подгруппы ЛПС+ТТГ через сутки после введения ЛПС однократно вводили внутрибрю-шинно ТТГ ("Sigma", США) в дозе 0,01 МЕ/кг массы тела. Крыс подгруппы ЛПС+ТТГ выводили из эксперимента через 1, 3, 6, 12, 24 и 48ч после введения ТТГ, что соответствует 25, 27, 30, 36,48 и 72ч после введения ЛПС. Для сравнения использовали группу крыс, получавших только ТТГ в аналогичной дозе (п=29).

Для изучения индивидуальных различий в развитии и регрессе СНТЗ при остром эндотоксикозе 30 крысам вводили ЛПС E.coli внутрибрюшинно в сублетальной дозе 20мг/кг массы тела. Животных выводили из эксперимента через 1 и 7сут после введения ЛПС. Умерщвление животных проводили передозировкой золетила ("Virbac Santé Animale", Франция), вводимого внутримышечно в дозе 50мг/кг. Эксперимент проведен в соответствии с правилами проведения

работ с использованием экспериментальных животных, утвержденными приказом Минздрава СССР № 577 от 12.08.1977г. На проведение эксперимента получено разрешение этического комитета НИИ морфологии человека РАМН (протокол №5 от 12.02.2007г.).

Печень и одну долю ЩЖ фиксировали в жидкости Буэна, заливали в парафин и изготавливали гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином ("Biovitrum", Россия). Гистологические срезы ЩЖ также окрашивали 1% раствором толуидинового синего pH 2,0 ("Sigma", США), проводили ШИК-реакцию. Срезы печени окрашивали по C.ÍI. Шуенинову для элективного выявления фибрина.

Для определения размеров структур использовали двумерные и одномерные исследования гистологических препаратов ЩЖ с помощью морфометри-ческих программ "Image Scope M" ("Leica myerosystems CMS Gmbh", Австрия) и "Image ProPlus" ("Carl Zeiss", Германия). Выбор изучаемых параметров проводили на основе анализа отечественных и зарубежных литературных данных (Хмельницкий O.K., 2002; Hartoñ-Nielsen M., 2006). Исследование проводили с учетом региональных различий строения ЩЖ по отдельности в периферической (верхняя и нижняя трети долей) и центральной (средняя треть долей) зонах долей ЩЖ. В препаратах ЩЖ определяли размеры фолликулов, долю эпителия в фолликулах, площадь коллоида в срезах фолликулов, долю коллоида в полости фолликулов, индекс Брауна (индекс накопления коллоида), высоту фолликулярных тироцитов и площадь срезов их ядер.

Вторую долю ЩЖ фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида ("Fluka", Швейцария) с постфиксацией в 1% растворе 0s04 ("Fluka", Швейцария). Контрастирование проводили 2,5% спиртовым раствором (70° этиловый спирт) уранила ацетата ("Fluka", Швейцария). Подготовленные кусочки заливали в смесь смол Эпона и Аралдита M ("Fluka", Швейцария). Полутонкие срезы окрашивали азуром II и эозином. Ультратонкие срезы дополнительно контрастировали солями свинца по Рейнольдсу (Уикли Б., 1975г.). Изучение препара-

тов проводили на трансмиссионном электронном микроскопе "Libra 120" с автоматическим сканированием изображений ("Carl Zeiss", Германия).

Анализ популяции тучных клеток ЩЖ проводили в гистологических препаратах, окрашенных толуидиновым синим. По методике Д.П. Линднер с соавт. (1980) определяли количество ТК в мм2 площади среза, цитограмму, ИД и соотношение степеней дегрануляции. Для определения насыщенности TIC секреторным материалом использовали вычисление СГК.

Для оценки цитокинового профиля выделяли клетки селезенки с помощью стеклянного гомогенизатора Поттера. Для индукции синтеза и секреции цитокинов суспензию клеток селезёнки в количестве 106/мл культивировали 24ч в Î мл полной растворной среды с добавлением конканавалина A ("Sigma", США) в конечной концентрации 5 мкг/мл при 37°С в атмосфере 5% С02. По окончании инкубации отбирали супернатант.

Определение концентрации Т4, ТЗ, сТ4, сТЗ, ТТГ, кортикостерона, ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-12, ИНФ-у, неоптерина в сыворотке крови крыс и ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12 и ИНФ-у в культуральной среде клеток селезенки проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа на основе мо-ноклональных антител с помощью коммерческих наборов ("Monobind", "Biosource", Invitrogen Corp.,. "Assay Design",США, "Bender MedSystems", Австрия, США, "IBL", Германия). Определение оптической плотности исследуемых образцов, стандартов и контролен проводили с помощью микропланшетного ри-дера "Anthos 2010" ("ANTHOS Labtec Instruments", Gmbh, Австрия).

С целью оценки тяжести поражения печени в сыворотке крови определяли активность индикаторных ферментов АлАТ (КФ 2.6.1.2) и АсАТ (КФ 2.6.1.1), экскреторного фермента ГГТ (КФ 2.3.2.2), секреторного фермента хо-линэстеразы (КФ 3.1.1.8). Использовали наборы реактивов "DiaSys" ("Diagnostic Systems Gmbh, Германия).

Для определения активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови использовали оптимизированный ультрафиолетовый тест, ГГТ - кинетический фотометрический тест в соответствии с методикой Зейца/Персиджина (Persijin J.,

1976), холинэстеразы бутирилхолиновым методом - кинетический фотометрический тест в соответствии с рекомендациями Международной федерации клинической химии и лабораторной медицины (Schumann G., 2002г.). Определение активности ферментов в сыворотке крови проводили с помощью биохимического анализатора "RAL Clima МС-15" (Испания).

Количественное определение эндотоксина в сыворотке крови проводили по конечной точке в реакции ферментативного расщепления п-нитроанилина при 405нм с помощью коммерческого набора LAL (Limulus Amebocyte Lysate)-test ("Hycult Biotech", США).

Статистическую обработку проводили с помощью пакета прикладных программ STATISTICA ("Statsoft Inc.", США). Центральные тенденции и рассеяния количественных признаков описывали средним значением М и стандартной ошибкой среднего значения гп, а также с помощью медианы Me и ин-терквартильного размаха в зависимости от вида распределения. Сравнение независимых групп по количественному признаку проводили с помощью t-критериев Стыодента и Манна-Уитни. Для анализа корреляции признаков использовали критерий Спирмена. Кластерный анализ проводили по 23 признакам с использованием Ward's method. В связи с множественностью проводимых сравнений был принят более жесткий уровень статистической значимости-0,01.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Введение ЛПС в дозе 10мг/кг приводило к развитию острого грамотрица-тельного эндотоксикоза, сопровождающегося поляризацией иммунного ответа по Thl типу. В сыворотке крови повышалась концентрация ФНО-а, ИЛ-12, вызывающего дифференцировку ThO лимфоцитов в Thl, а затем основных Thl цитокинов ИЛ-2 и ИНФ-у, а также неоптерина, являющегося интегральным показателем иммунного ответа по Thl типу. Развитие системного воспалительного ответа приводило к поражению внутренних органов, в первую очередь печени. Динамическое исследование в сыворотке крови активности АлАТ, АсАТ, ГГТ и холинэстеразы и гистологическое исследование печени выявило через 24ч после введения ЛПС развитие дистрофических изменений, признаки внут-

рипеченочного холестаза, снижение секреторной активности гепатоцитов, увеличение количества нейтрофилов, лимфоцитов в печени, признаки ДВС-синдрома.

Изменения концентрации тиреоидных гормонов и ТТГ в зависимости от уровня эндотоксинемии

Изменения уровня эндотоксина в сыворотке крови носили двухфазный характер (рис.1). Первый пик, наблюдаемый через 1ч после введения ЛПС, был связан с поступлением его в кровеносное русло, а второй, через 24ч после введения ЛПС, с развитием системного воспалительного ответа.

Изучение изменений концентрации тиреоидных гормонов и ТТГ в разные сроки после введения ЛПС показало обратную зависимость между уровнем эндотоксинемии и концентрациями Т4 и ТЗ, нарастающую с развитием системного воспалительного ответа (11=-0,52 и Я=-0,57, р<0,01, соответственно). Через 1ч после введения ЛПС наблюдалось снижение концентрации Т4 в сыворотке крови и повышение концентрации ТТГ по принципу обратной связи (рис.1). Развитие системного воспалительного ответа приводило к повторному снижению концентрации Т4, а также сТ4, сопровождавшемуся уменьшением содержания ТТГ в сыворотке крови.

Таким образом, в развитии СНТЗ прослеживалось два последовательно включающихся механизма. Периферический механизм был обусловлен непосредственным воздействием ЛПС на фолликулярные тироциты, приводящим к снижению продукции Т4. Центральный механизм был обусловлен снижением продукции ТТГ гипофизом на фоне системного воспалительного ответа. Увеличение концентрации ТТГ при повышенном уровне эндотоксина в сыворотке крови не приводило к восстановлению функциональной активности щитовидной железы и повышению концентрации тиреоидных гормонов в сыворотки крови. Регресс СНТЗ происходил только после снижения уровня эндотоксина в крови, что указывает на ключевую роль действия ЛПС на фолликулярные тироциты. Полученные данные позволяют опровергнуть имеющуюся точку зрения ряда авторов (Бе Сгоо1 Ь., 2003; Вое1еп А. е1 а1., 2004; Эе Огоо! Ь., 2006) о

том, что СНТЗ является исключительно следствием снижения функциональной активности центрального звена гипоталамо-гипофизарно-тиреоидной оси и неспецифической реакцией, не зависящей от причины основного заболевания.

Рис.1. Изменения уровня эндотоксинемии и концентрации Т4, сТ4, ТЗ, сТЗ и ТТГ. * - статистически значимые отличия от значений контрольной группы

Морфофункциональные изменения щитовидной железы в разные сроки после введения ЛПС

Ранняя стадия развития СНТЗ (через 1 час после введения ЛПС) развивалась по периферическому механизму и морфологически проявлялась увеличением размеров фолликулов щитовидной железы и высоты фолликулярных ти-роцитов и размеров их ядер (рис.2,3), уменьшением десквамации фолликуляр-

ного эпителия, более выраженными в периферической зоне долей, и усилением синтетических процессов в фолликулярных тироцитах, проявляющихся расширением канальцев ЭПС, цистерн комплекса Гольджи, увеличением количества секреторных гранул, а также отсутствием признаков резорбции и расщепления тиреоглобулина в виде коллоидных капель в цитоплазме и их контакта с лизо-сомами, значительным уменьшением количества лизосом в периферической зоне долей ЩЖ по сравнению с контрольной группой. Изменения в центральной зоне долей ЩЖ свидетельствовали также о разобщении процессов резорбции и расщепления тиреоглобулина, что позволило выделить такое нарушение секреторной деятельности фолликулярных тироцитов как неэффективная резорбция - накопление множественных коллоидных капель в цитоплазме фолликулярных тироцитов, их слияние, образование крупных коллоидных капель и отсутствие их контакта с лизосомами.

Таким образом, ЛПС оказывает на ЩЖ амбивалентное действие, являясь активатором фазы синтеза и ингибитором фазы резорбции и расщепления тиреоглобулина в фолликулярных тироцитах, то есть вызывает десинхронизацию фаз секреторного цикла фолликулярных тироцитов, приводящую к уменьшению продукции ими основного гормона ЩЖ - Т4.

Через Зч после введения ЛПС уровень эндотоксинемии снизился. Морфологические изменения ЩЖ свидетельствовали об усиленной синтетической деятельности фолликулярных тироцитов, но менее выраженной по сравнению с предыдущим сроком исследования. Растяжение фолликулов уменьшилось, о чем свидетельствует и уменьшение размеров фолликулов и снижение индекса Брауна. Уменьшилось количество коллоидных капель в цитоплазме фолликулярных тироцитов центральной зоны долей, что свидетельствует об утилизации резорбированного тиреоглобулина. Таким образом, через Зч после введения ЛПС наблюдалась относительная нормализация секреторных процессов в фолликулярных тироцитах.

Через 6ч после введения ЛПС появились первые признаки усиления синхронизации процессов синтеза и резорбции тиреоглобулина (наличие мелких

коллоидных капель в цитоплазме). Тем не менее, синтетические процессы преобладали над резорбционными.

8000,0 7000,0 6000.0 «5000,0 4000,0 3000,0 2000,0

Площадь фолликулов

■г^ч

V 1 X

1

1ч Зч 6ч 12ч 24ч 27ч 30ч 36ч 48ч 72ч Г ♦ контроль—а- -лпс|

14,0 • 13,0 ■ 12,0 -§1,0 10,0 -9.0 8,0

Высота фолликулярных тароцитов

А

\ /

1ч Зч 6ч 12ч 24ч 27ч 30ч 36ч 48ч 72ч Г—♦— контроль —а -ЛПС ]

25,0 24,0 23.0 ~г22,0 2 21,0 20,0 19,0 18,0

Площадь срезов ядер фолликулярных тироцитов

Т /

Г

гЧ

^ А

Ч _ У \

* * ч

Ку.

1ч Зч 6ч 12ч 24ч 27ч 30ч 36ч 48ч 72ч I—4— контроль —о -ЛПС I

Рис.2. Изменение морфометрических показателей периферической зоны долей щитовидной железы в разные сроки после введения ЛПС. * - статистически значимые отличия от значений контрольной группы.

14,0

13,0

12,0

аи.о

^0,0

9,0 -)

8,0

7,0

Высота фолликулярных тироцитов

Л

-а \

ч НЕ У

Г"

Ъ ,Г* I

*\ * / *

1ч Зч 6ч 12ч 24ч 27ч 30ч 36ч 48ч 72ч [—•♦— контроль —р- — ППС |

Площадь срезов ядер фолликулярных тироцитов

24,0 : 5ч

23,0 *

22,0 : г

3221,0 ;

£

20,0

19,0 -

18,0 1

*

л

/

А-ъ

1ч 3ч 6ч 12ч 24ч 27ч 30ч 36ч 48ч 72ч I—контроль —о. -ЛПС

Рис.3. Изменение морфометрических показателей центральной зоны долей щитовидной железы в разные сроки после введения ЛПС. * - статистически значимые отличия от значений контрольной группы

Присоединение через 24ч после введения ЛПС центрального механизма развития СНТЗ к периферическому морфологически проявлялось разнонаправ-ленностью морфодинамических процессов в периферической и центральной зонах долей ЩЖ. В периферической зоне сохранялись крупные размеры фолликулов, наблюдалось снижение высоты фолликулярных тироцитов (рис.2). В центральной же зоне отмечалось уменьшение размеров фолликулов и высоты фолликулярных тироцитов (рис.3). Наблюдались нарушения микроциркуляции в виде сладжей и стазов форменных элементов. Наблюдалось набухание и гибель митохондрий, усиление лизосомальной реакции. Процессы синтеза протекали активно. Несмотря на усиление лизосомальной реакции, наблюдалось скопление резорбированного коллоида в клетках центральной зоны долей.

Через 27ч после введения ЛПС произошло уменьшение размеров фолликулов как в центральной, так и периферической зонах (рис.2,3). Активировались процессы резорбции тиреоглобулина. В цитоплазме фолликулярных тироцитов резко увеличилось количество коллоидных капель, хорошо выявляемых даже на светооптическом уровне при проведении ШИК-реакции. Увеличение количества и объёма коллоидных капель является следствием их слияния друг с другом, обусловленного уменьшением количества лизосом и резким снижением протеолиза их содержимого лизосомами.

Через 36ч после введения ЛПС по многим морфометричсским показателям ЩЖ крыс опытной группы не отличалась от ЩЖ крыс контрольной группы (рис.2,3). Процессы оформления и выведения секреторных гранул преобладали над синтетическими процессами, особенно в центральной зоне долей. В периферической зоне резко усилились резорбционные процессы. Наблюдался макропиноцитоз коллоида — явление, описанное у крыс при стимуляции ЩЖ большими дозами ТТГ (Алешин Б.В. с соавт., 1983). В данном случае макропиноцитоз коллоида происходил при концентрации ТТГ в сыворотке крови, соответствующей значениям контрольной группы. Количество лизосом оставалось чрезвычайно низким. Наблюдалось выведение резорбированного коллоида через базолатеральную мембрану в межклеточную щель.

Через 48ч после введения ЛПС отмечалось усиление синтетической активности фолликулярных тироцитов, особенно выраженное в периферической зоне. Наряду с синтезом тиреоглобулина увеличилось количество незрелых ли-зосом. В фолликулярных тироцитах появились небольшие по размеру митохондрии без признаков функциональных изменений, что свидетельствует об уменьшении гипоксии и нормализации процессов клеточного дыхания.

Морфологическими проявлениями регресса СНТЗ, наблюдавшиеся через 72ч после введения ЛПС, были уменьшение размеров фолликулов ЩЖ (рис.2,3), усиление синтетической и резорбционной активности ее тироцитов как в центральной, так и периферической зонах, восстановление баланса между синтезом тиреоглобулина, его выделением в полость фолликулов и резорбцией с последующим внутриклеточным расщеплением лизосомами.

Анализ структурных изменений ЩЖ и ультраструктуры фолликулярных тироцитов не позволяет согласиться с мнением, что морфологическим проявлением СНТЗ является уменьшение размеров фолликулов и доли коллоида в полости фолликулов (De Jongh F. et al., 2001), а также с выделением и трактовкой некоторых морфологических критериев функциональной активности ЩЖ (Хмельницкий O.K., 2002). Такие признаки повышения функциональной активности ЩЖ как увеличение высоты фолликулярных тироцитов, размеров их ядер, наличие крупных коллоидных капель в цитоплазме наблюдаются и при снижении продукции гормонов щитовидной железой, так как отражают превалирование отдельных фаз секреторного цикла фолликулярных тироцитов. Как показали данные настоящего исследования, нарушения функциональной деятельности фолликулярных тироцитов могут происходить не только в связи с усилением или снижением секреторной активности клеток, но и за счет десин-хронизации отдельных фаз секреторного цикла. Для установления повышенной функциональной активности ЩЖ необходимо выявление синхронизированного усиления всех фаз секреторного цикла, что не всегда возможно, если исследование проводится только методами световой микроскопии.

Особенности изменения концентрации тирсоидных гормонов при СНТЗ, обусловленном острым эндотокснкозом

Изучение изменений концентраций Т4 и ТЗ в сыворотке крови показали, что ведущим признаком СНТЗ при остром грамотрицательном эндотоксикозе является снижение концентрации не ТЗ, как считалось ранее (Chopra I. et al., 1985; Docter R. et al., 1993; Joosten K. et al., 2000) a T4. Эти данные позволяют опровергнуть сложившееся представление об универсальности изменений ти-реоидного статуса при СНТЗ, обусловленных различными заболеваниями (Adler S. et al., 2007; Warner M. et al., 2010). При динамическом изучении тиреоид-ного статуса, установлено, что снижение продукции Т4 при системном воспалительном ответе, вызванном липополисахаридом, сопровождается сначала увеличением конвертации Т4 вТЗ, а затем, по мере снижения продукции ТЗ -усилением резорбции тиреоглобулина тироцитами путем макропиноцитоза, что является компенсаторными механизмами, направленными на нормализацию тиреоидного статуса.

Индивидуальные особенности реакций иммунной системы, морфофунк-циональкых изменений ЩЖ и тиреоидного статуса при воздействии ЛПС

Для исследования индивидуальных особенностей крысам вводили сублетальную дозу ЛПС. Исследование развития и регресса СНТЗ проводили через 1 и 7сут после введения ЛПС. По результатам кластерного анализа было выявлено два кластера, отличающихся по содержанию эндотоксина, концентрации провоспалительных и Thl цитокинов в сыворотке крови крыс и культуральной среде клеток селезенки (рис.4), тиреоидных гормонов и ТТГ в сыворотке крови (рис.5), ряду морфометрических показателей.

Изучение взаимосвязей между выраженностью проявлений СНТЗ и реакций иммунной системы позволило объяснить формирование двух описанных ранее в научной литературе форм СНТЗ с пониженным и повышенным уровнем ТТГ в сыворотке крови (Adler S. et al., 2007; Warner M. et al., 2010). Исследование показало, что при более выраженной поляризации иммунного ответа по Thl типу, проявляющейся более высокими концентрациями провоспалитсль-

ных и ТЫ цитокинов центральные механизмы развития СНТЗ включаются в более поздние сроки, о чем свидетельствует повышенный уровень ТТГ в крови в сочетании со сниженным содержанием тиреоидных гормонов. При менее выраженной поляризации иммунного ответа по ТЫ типу центральные механизмы развития СНТЗ включаются в более ранние сроки и характеризуются снижением ТТГ на фоне пониженных значений тиреоидных гормонов в крови.

20.0 18.0

«.0

м.з

12.0

10.0

8.0

6.0 г-Ь-

2.0 ! ^шз | м

ИЛ-2 ИНФ-у неоптерии

¡□более вырэженыый ТМ ы менее выргжешый ТЫ

Рис.4. Индивидуальные различия концентрации провоспалительных и ТЫ цитокинов в сыворотке крови (слева) и культуральной среде клеток селезенки (справа) через 1сут после введения ЛПС. Значения контрольной группы принять; за единицу. *- статистически значимые различия между кластерами

Рис.5. Различия показателей тиреоидного статуса через 1сут после введения ЛПС в зависимости от выраженности поляризации иммунного ответа по ТЫ типу. Значения контрольной группы приняты за единицу. *- статистически значимые различия между кластерами

У крыс с более выраженной поляризацией иммунного ответа по ТЫ типу размеры фолликулов были меньше, отмечалось преобладание процессов синтеза тиреоглобулина над его резорбцией (расширение канальцев, увеличение цистерн комплекса Гольджи, формирование и накопление секреторных гранул, от-

сутствие коллоидных капель в цитоплазме). У крыс с менее выраженной поляризацией иммунного ответа по ТЫтипу наблюдаются увеличение размеров фолликулов как в центральной, так и периферической зонах долей ЩЖ, а также выраженные проявления неэффективной резорбции тиреоглобулина (скопление большого числа коллоидных капель в цитоплазме фолликулярных тироцитов, не контактирующих с единичными лизосомами).

Степень выраженности иммунного ответа по Thl типу определяла морфологические и функциональные особенности регресса СНТЗ. У крыс с менее выраженной поляризацией иммунного ответа по Thl типу концентрация ТТГ, ТЗ и сТЗ в сыворотке крови была ниже, чем у крыс с более выраженной поляризацией иммунного ответа по Thl типу, восстановление сбалансированности между процессами синтеза, резорбции и расщеплением тиреоглобулина развивалось преимущественно в центральной зоне щитовидной железы, а у крыс с более выраженной поляризацией по Thl - также и в периферической зоне, что объясняло различия в сроках восстановления тиреоидного статуса организма. Также у крыс с менее выраженной поляризацией иммунного ответа по Thl типу медленнее восстанавливалась структура митохондрий.

Выявленные закономерности и особенности развития и регресса СНТЗ при остром грамотрицательном эндотоксикозе позволяют не согласиться с теорией о ведущей роли провоспалительных и Thl цитокинов в снижении продукции ТТГ и развитии СНТЗ (Boelen А. et al., 1993, 1995, 2004, Rasmussen А., 2000). Резкое увеличение концентрации провоспалительных и Thl цитокинов после введения ЛПС не приводило к снижению концентрации ТТГ в сыворотке крови. Кластерный анализ показал, что снижение секреции ТТГ гипофизом наиболее быстро происходило у крыс с низким уровнем Thl цитокинов и более высоким уровнем эндотоксинемии.

Изучение механизмов развития СНТЗ и разобщающего действия ЛПС на фазы секреторного цикла фолликулярных тироцитов показывают, что коррекция синдрома с помощью препаратов тироксина и трийодтиронина, предлагаемая рядом авторов (Siegel N. et al., 1984; Brent G. et al., 1986; Chapital A. et al.,

2001), является нецелесообразной и будет лишь способствовать усилению действия центрального механизма развития СНТЗ. Патогенетически обоснованным является введение вещества, синхронизирующего фазы секреторного цикла и в первую очередь усиливающего процессы резорбции и расщепления тиреогло-булина. Таковым является ТТГ. Но как показали данные исследования тирео-идного статуса восстановление уровня ТТГ в сыворотке крови до значений контрольной группы не приводило к усилению продукции гормонов, так как продолжал действовать периферический механизм. Следовательно, доза ТТГ должна быть супрафизиологической.

Морфофункциональные изменения щитовидной железы при остром гра-мотрицательном эндотоксикозе в разные сроки после введения тиреотроп-

ного гормона

Через 1ч после введения ТТГ крысам с острым эндотоксикозом морфологические изменения свидетельствовали об усилении процессов резорбции коллоида, в том числе и путем макропиноцитоза, и снижении лизосомальной реакции по сравнению с крысами, не получавшими ТТГ. Процессы синтеза и резорбции тиреоглобулина были сбалансированы и более выражены, а деструктивные изменения митохондрий менее выражены, чем у здоровых крыс после введения им аналогичной дозы ТТГ. В цитоплазме фолликулярных тироцитов наблюдались коллоидные капли, контактирующие с лизосомами. Усилилась десквамация фолликулярных тироцитов.

Через Зч после введения ТТГ отмечалось улучшение микроциркуляции в органе. Процессы синтеза и резорбции были больше выражены в тироцитах периферической зоны долей. В периферической зоне происходила перестройка паренхимы, образование небольших фолликулов из более крупных. Наблюдались признаки усиления резорбции как микро-, так и макропиноцитозом, а также протеолиза тиреоглобулина. В клетках появились митохондрии без деструктивных изменений. Отмечалась активация клеток интерфолликулярного эпителия в виде усиление синтетических процессов.

Через 6ч после введения ТТГ в центральной зоне ЩЖ резко усилились процессы синтеза. Изучение ультраструктуры показало, что большинство фолликулярных тироцитов центральной зоны находилось в ранней стадии синтеза секрета, то есть до формирования секреторных гранул. Резорбированный коллоид расщеплялся лизосомами в основном в тироцитах периферической зоны долей. Выраженность синтетических процессов была выше, чем у крыс с эндо-токсикозом, не получавшим ТТГ. Несмотря на то, что процессы резорбции ти-реоглобулина были снижены по отношению к процессам его синтеза, тем не менее, они протекали боле активно, чем в группе сравнения.

Через 12ч после введения ТТГ в центральной зоне долей ЩЖ размеры фолликулов уменьшились. В фолликулярных тироцитах периферической зоны долей усилились процессы резорбции тиреоглобулина. Скорость процессов резорбции тиреоглобулина была ниже скорости его протеолиза, что приводило к накоплению коллоида в цитоплазме.

Через 24ч после введения ТТГ наблюдалась синхронизация деятельности фолликулярных тироцитов центральной и периферической зон долей. В периферической и центральной зонах долей ЩЖ синтетические процессы преобладали над резорбционными, что приводило к увеличению размеров фолликулов и накоплению в них коллоида. Выраженность синтетических процессов была выше, чем у крыс с эндотоксикозом, не получавших ТТГ.

Через 48ч после введения ТТГ отмечалась асинхронность функционирования фолликулярных тироцитов центральной и периферической зон долей ЩЖ. В периферической зоне во многих клетках отмечалось снижение интенсивности процессов синтеза и оформления секреторных гранул, а также протеолиза резорбированного тиреоглобулина. В центральной зоне процессы синтеза и резорбции протекали более активно. Однако фолликулярные тироциты центральной зоны функционировали асинхронно, то есть в одних клетках была выражена фаза синтеза секрета, а в других — как резорбции тиреоглобулина, так и его протеолиза. Процессы резорбции протекали как с помощью микропиноци-тоза, так и макропиноцитоза. Наблюдались интенсивные процессы трансэндо-

телиального транспорта веществ. В структуре стенок фолликулов появились малодифференцированные клетки, что можно рассматривать как признак усиления процессов восстановления и обновления популяции фолликулярных ти-роцитов. Центральная зона была представлена более крупными фолликулами, выстланными тироцитами меньшей высоты с более базофильной цитоплазмой и меньшими по размеру ядрами, чем у крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ. Доля коллоида в полости фолликулов была выше. В периферической зоне размеры фолликулов, высота тироцитов и размеры ядер были меньше, по сравнению со значениями группы с эндотоксикозом, не получавшей ТТГ. Содержание коллоида в фолликулах было более высоким. Малодифференцированные клетки в стенке фолликулов также не выявлялись. Процессы синтеза у крыс с острым эндотоксикозом были выражены сильнее, а процессы резорбции и протеолиза тиреоглобулина протекали боле активно у крыс, получавших ТТГ.

Таким образом, однократное введение супрафизиологической дозы ТТГ привело к синхронизации фаз секреторного цикла фолликулярных тироцитов, усиливало резорбцию как путем микро-, так и макропиноцитоза, и последующее расщепление тиреоглобулина лизосомами, а также синтетические процессы. Морфологические признаки наблюдаемых изменений были более выражены, чем у здоровых крыс после введения аналогичной дозы ТТГ.

Известно, что ТК играют важную роль в регуляции секреторной деятельности ЩЖ (Ва1Ьош в. й а!., 1980; КаНэшк М. й а1., 1988). Для изучения способов секреции тучных клеток ЩЖ при воздействии ЛПС было проведено их сравнительное исследование методами световой и электронной микроскопии у крыс контрольной группы, под воздействием ТТГ и при коррекции развившегося СНТЗ с помощью ТТГ.

Патофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной железы

при воздействии ЛПС

При изучении цитофизиологических характеристик ТК периферической и центральной зоны долей ЩЖ крыс контрольной группы не выявлено различий

показателей численности ТК, их СГК и ИД. Суточные колебания численности ТК отсутствовали. Отмечалось снижение насыщенности ТК секреторным материалом в ночные часы. Дегрануляция ТК усиливалась в утренние и уменьшалась в ночные часы. Ультраструктура ТК в утренние часы характеризовалась высоким содержанием секреторных гранул высокой и средней электронной плотности. В более поздние сроки появились везикулы по периферии гранул, затем участки оводнения гиалоплазмы вокруг гранул, диспергирование и растворение содержимого гранул.

Через 1ч после введения ЛПС количество выявляемых ТК в ЩЖ крыс статистически значимо не изменялось (рис. 6). Через 6ч после введения ЛПС количество ТК в ЩЖ резко увеличилось, достигнув максимальных значений, превышающих значения контрольной группы з 1,65 раза. При этом ТК часто располагались по периметру фолликулов. В дальнейшем наблюдалось уменьшение количества выявляемых ТК в единице площади среза. Отмечались выраженные изменения показателей цитограммы. Повысилось содержание очень светлых, светлых и темных ТК за счет резкого снижения процентного содержания очень темных ТК. Это указывает на то, что очень темные клетки вступали в фазу выделения секрета. Соответственно, значение СГК статистически значимо уменьшился в 1,4 раза (рис. 6). Под воздействием ЛПС произошли существенные изменения процессов дегрануляции ТК (рис. 6). Через 1ч после введения ЛПС выявлено снижение ИД приблизительно в 2,5 раза в периферической и в 3 раза в центральной зоне. В дальнейшем наблюдалось увеличение количества тучных клеток, накопление в них секреторного материала.

Изучение ультраструктуры ТК в разные сроки после введения ЛПС показало, что воздействие ЛПС усиливает выделение секреторного материала молекулярным способом, что проявлялось появлением, а затем усилением оводнения гиалоплазмы вокруг секреторных гранул, растворением содержимого секреторных гранул вплоть до образования гидропических вакуолей и выделением содержимого гранул в цитоплазму.

Рис.6. Изменения цитофизиологических характеристик тучных клеток щитовидной железы в разные сроки после введения ЛПС. * - статистически значимые отличия от значений контрольной группы

Цитофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной железы при воздействии тиреотропного гормона

Введение ТТГ крысам приводило к увеличению количества выявляемых ТК в ЩЖ в течение 48ч. Через 1ч после введения ТТГ ТК находились в стадии депонирования секреторного материала. Затем наблюдалось уменьшение насыщенности ТК секреторным материалом. Введение ТТГ резко изменило ритм выделения тучными клетками секреторного материала путем экзоцитоза содержимого гранул. Таким образом, после введения ТТГ наблюдалось уменьшение, а затем усиление выделения секреторного материала молекулярным способом, подтвержденное данными ультраструктурного исследования. Выделение секреторного материала характеризовалось появлением просветлений вокруг секреторных гранул в виде пузырьков, затем оводнением гиалоплазмы вокруг секреторных гранул, растворением их содержимого, вплоть до образования гидропических вакуолей. Через 48-72чч после введения ТТГ усиливались процессы синтеза и депонирования секрета.

Введение ТТГ через 24ч после ЛПС привело значительному увеличению количества выявляемых ТК в ЩЖ. Количество выявляемых ТК в единице площади среза было максимальным по отношению к другим опытным и контрольной группам. Наблюдались выраженные изменения в цитограмме, связанные с увеличением количества светлых ТК. Насыщенность ТК секреторным материалом была ниже, чем в других исследуемых группах, в течение всего срока исследования. Количество ТК, выделяющих секреторный материал путем дегра-нуляции, также было снижено. Изменения содержания СГК и ИД носили тот же характер, что и после введения ЛПС.

Последовательная стимуляция ТК сначала липополисахаридом, а затем ТТГ вызвала усиление выделения ими секреторного материала молекулярным способом. Наблюдался костимулирующий эффект действия ЛПС и ТТГ на процессы выделения секрета в течение 6ч. Также отмечалось снижение дегрануля-

ции ТК. Характер динамики ИД совпадал с таковым под воздействием ЛПС, а его численные показатели - под воздействием ТТГ.

Таким образом, можно сделать вывод, что молекулярный способ является основным способом выделения секреторного материала из ТК как в норме, так и при системном воспалительном ответе.

Изменения концентрации гормонов щитовидной железы при коррекции экспериментального СНТЗ тиреотропным гормоном Изменения тиреоидного статуса при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе после введения ТТГ характеризовались последовательным повышением концентрации в сыворотке крови сначала менее активного гормона - Т4, а затем более активного - ТЗ, а также созданием в крови депо гормонов в виде их связи с транспортными белками (рис. 7), что является наиболее благоприятной формой коррекции СНТЗ, так как это не приводит к резкому увеличению наиболее активных свободных форм гормонов.

Изменения концентрации гормонов ЩЖ после введения ТТГ при остром грамотрицательном эндотоксикозе качественно отличались от изменений, наблюдаемых после введения ТТГ в той же дозе здоровым крысам. Введение ТТГ здоровым животным приводило к повышению концентрации ТЗ, а не Т4. Увеличение концентрации Т4 у крыс с острым эндотоксикозом объясняется расщеплением депонированного в полости фолликулов большего количества тиреог-лобулина, синтезированного под воздействием ТТГ.

Наблюдающееся после введения ТТГ увеличение концентрации преимущественно связанных с транспортными белками, а не свободных форм ти-реоидных гормонов, свидетельствует об их нормальной связывающей способности и является косвенным подтверждением того, что снижение концентрации Т4 в сыворотке крови при развитии СНТЗ было обусловлено в первую очередь снижением его продукции щитовидной железой, а не снижением связывающей способности транспортных белков крови.

§<.о |з.

T4

25/1ч 27/34 ЗО/бч 36/12ч 48/244 72/484 1—«октро/ь —а—Л ПС —а- ЛПС+ТП""}

Ivo

СТ4

Эв124 48/244

-коктро/ъ —&—ЛПС -ь- Л ПС* ТТГ {

з&12ч Ш2*

-ЛПС -л- лпс+ттг

0.5! i---£

27/34 30/S4 36/124 46/244 72/484 -контрод. —а—ЛПС -л- ЛПС+ПГ |

Рис.7. Изменения концентрации Т4, сТ4, ТЗ, сТЗ и ТТГ в сыворотке крови крыс с острым грамотрицательным эндотоксикозом после введения суп-рафизиологической дозы ТТГ. * - статистически значимые отличия от показателей крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ

Полученные данные морфологического исследования ЩЖ и биохимических показателей ее активности позволяют опровергнуть точку зрения, высказываемую рядом исследователей (Mendel С. et al., 1991; Kaptein Е., 1996; Janssen О. et al., 2002; Den Brinker M. et al., 2005) о ведущей роли нарушения связывающей способности транспортных белков крови в патогенезе СНТЗ.

Для оценки эффективности разработанного метода коррекции СНТЗ необходимо было провести изучение влияния супрафизиологической дозы ТТГ на уровень эндотоксинемии, изучить реакцию иммунной системы путем оценки изменения концентрации провоспалительных и иммунорегуляторных цитоки-

нов в сыворотке крови, а также изучить влияние на основной орган-мишень эндотоксина - печень, путем определения активности в сыворотке крови индикаторных, экскреторных и секреторных ферментов и гистологического исследования печени.

Изменения уровня эндотоксинемии и концентрации цитокинов в сыворотке крови крыс при коррекции СНТЗ тиреотропным гормоном

После введения ТТГ отмечалось снижение уровня эндотоксинемии по сравнению со значениями крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ (рис. 8). Введение ТТГ здоровым крысам также вызывало снижение содержания эндотоксина в сыворотке крови.

Введение ТТГ приводило к значительному снижению через 1и 3 чч в сыворотке крови провоспалителыюго цитокина ФНО-а, ТЫ цитокинов ИЛ-2 и ИНФ-у как по отношению к значениям показателей крыс с острым эндотоксикозом, так и контрольной группы. В последующие часы наблюдалось увеличение концентраций вышеуказанных цитокинов, но их значения не превышали показатели контрольной группы, за исключением ИЛ-2, концентрация которого резко повысилась через 48ч после введения ТТГ (рис. 8). Концентрация неопте-рина, являющегося интегральным показателем выраженности поляризации иммунного ответа по ТЫ типу, не изменялась (рис. 8). Концентрация ТЪ2 цитокина ИЛ-4 после введения ТТГ была чрезвычайно низкой, такой же как у крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ. После введения ТТГ отмечалось повышение концентрации противовоспалительного иммунорегуляторного цитокина ТФР-р, значения которого соответствовали значениям контрольной группы (рис. 8).

Таким образом, введение супрафизиологической дозы ТТГ оказывало иммуномодулирующее действие, снижая продукцию провоспалительных и ТЫ цитокинов и повышая продукцию противовоспалительных цитокинов без уменьшения выраженности поляризации иммунного ответа по ТЫ типу.

иипрогс, 25/74 27/34 31У6ч Э&1ДЧ 72/48ч

[□ШТС ПППС+ТТГ

контроль 26/14 77/Зч ЗО/бч _3§Л2У. 72М8ч

|алпс влпстпг!

Рис. 8. Изменения уровня эндотоксинемии, концентрации провоспали-тельных и ТЫ цитокинов, ТФР-р в сыворотке крови крыс с острым эндотоксикозом после введения супрафизиологической дозы ТТГ. * - статистически значимые отличия от показателей крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ.

Изменения активности индикаторных, экскреторных и секреторных ферментов в сыворотке крови крыс с острым эндотоксикозом в разные сроки после введения тиреотропного гормона

Введение ТТГ крысам через сутки после введения ЛПС приводило к снижению активности АлАТ в сыворотке крови (рис.9). Через 12ч после введения ТТГ наблюдалось однократное повышение активности АлАТ. Через 72ч после введения ЛПС активность АлАТ в сыворотке крови не отличалась от значений контрольной группы, в отличие от крыс с острым эндотоксикозом, не

27Яы ЗСУбч

¡□лпс елпоттг

получавших ТТГ. Введение ТТГ также вызв&то снижение активности АсАТ в сыворотке крови крыс, но через 48ч после введения ТТГ активность фермента повысилась по отношению к контрольным значениям и не отличалась от значений крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ (рис.9).

После введения ТТГ крысам с острым эндотоксикозом активность ГГТ в сыворотке крови уменьшалась и значимо не отличалась от значений контрольной группы в течение всего исследуемого периода (рис.9).

После введения ТТГ крысам активность холинэстеразы в сыворотке крови повысилась по сравнению со значениями крыс с острым эндотоксикозом, не получавшим ТТГ, и не отличалась от значений контрольной группы (рис.9).

300,0 -250,0 ] _ 200,0 \ 150,0 100,0 50,0

АсАТ

контроль 25Лч 27/34 30/64 35/124 48/244 72/404

а лпсв лпс-ттг

ГГТ

25/14 27/34 30154 ЭЕЛ2ч 48/244 72/48ч

:олпс вплс+ттг I

Холинрстераза

контроль 25/14 27/34 ЗО/бч 36/124 48/24ч 72/484 ¡□ЛПС В ППС+ТТГ

Рис. 9. Изменения активности индикаторных, экскреторных и секреторных ферментов печени крыс с острым эндотоксикозом после введения супрафизиологической дозы ТТГ. * - статистически значимые отличия от показателей крыс с острым эндотоксикозом, не получавших ТТГ

Морфологические изменения печени свидетельствовали об уменьшении выраженности дистрофических процессов в гепатоцитах и повышении их про-лиферативной активности.

контро/ъ

25/14

АлАТ

27/34 30164 36/124 48/244 72/4^

¡□ЛПС олпс+ттг!

Таким образом, введение ТТГ оказывало гепатотропное действие, приводило к снижению выраженности дистрофических изменений и улучшению секреторной и экскреторной функции гепатоцитов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное экспериментальное исследование СНТЗ при остром грамот-рицательном эндотоксикозе установило, что СНТЗ является не только универсальной реакцией ЩЖ на патологические процессы, протекающие в организме, но и может иметь характерные особенности, связанные с непосредственным воздействием на секреторные процессы в фолликулярных тироцитах. Повышение уровня эндотоксина в системном кровотоке приводит к выраженным изменениям секреторного цикла фолликулярных тироцитов, заключающимся в усилении синтеза и выделения тиреоглобулина в полость фолликулов и снижении скорости процессов резорбции и расщепления тиреоглобулина, то есть существует периферический механизм изменения функциональной активности ЩЖ, отличный от центрального, проявляющегося снижением скорости секреторных процессов в фолликулярных тироцитах (рис.10). Периферический механизм является ведущим в развитии СНТЗ. Присоединение центрального механизма определяется выраженностью поляризации иммунитета по ТЫ типу. Наиболее быстро центральный механизм присоединяется к периферическому при менее выраженной поляризации иммунного ответа по ТЫ типу. Этим объясняется наличие двух типов СНТЗ при тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваниях с пониженным и повышенным уровнем ТТГ в сыворотке крови, описанных в научной литературе. Динамическое исследование изменений ЩЖ позволило выявить морфологические признаки СНТЗ на ранних и поздних стадиях его развития, свидетельствующие как о нарушениях секреторных процессов, так и компенсаторных изменениях, направленных на повышение продукции гормонов. Полученные данные позволили опровергнуть имеющуюся точку зрения, что СНТЗ начинается с нарушения превращения Т4 в ТЗ, и лишь по мере развития основного заболевания к снижению концентрации ТЗ в сыворотке крови присоединяется снижение Т4.

Рис. 10. Схема развития и регресса СНТЗ при остром грамотрицателыюм эндотоксикозе и точки приложения коррегирующего воздействия ТТГ. Условные обозначения: X - блокирование звеньев патогенеза СНТЗ тирео-тропным гормоном

Выявленные нарушения секреторной активности фолликулярных тироци-тов позволили разработать патогенетически обоснованный способ коррекции, заключающийся в усилении и синхронизации процессов синтеза, резорбции и расщепления тиреоглобулина с помощью супрафизиологической дозы ТТГ. Введение ТТГ привело к повышению концентрации связанного с сывороточными белками Т4 и ТЗ, опровергнув ранее существовавшую гипотезу о нарушении связывающей способности транспортных белков крови как одного из механизмов СНТЗ.

Выявлен иммуномодулирующий эффект ТТГ, связанный со снижением продукции провоспалительных и Thl цитокинов, а также положительный эффект на морфофункциональные показатели печени (рис.10), что открывает новые потенциальные возможности для применения ТТГ при лечении воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными микроорганизмами.

Исследование морфофункциональных изменений в различных зонах долей ЩЖ в норме, при воздействии ЛПС и ТТГ позволило получить новые данные о гетерофункциональности различных участков паренхимы ЩЖ. С учетом новых данных периферическую зону следует рассматривать как зону ритмичного функционирования, обеспечивающую базальную продукцию тиреоидных гормонов, а центральную — как зону экстренного реагирования, обеспечивающего функциональную секрецию гормонов. Исследование тучных клеток ЩЖ показало, что основным способом выделения ими секреторного материала при действии указанных факторов является молекулярный способ, в основе которого лежит растворение содержимого секреторных гранул и выведения его в цитоплазму.

Полученные данные расширяют представления о функционировании ЩЖ и роли гормонов гипофиза в обеспечении защитных реакций организма и их ор-ганотропном действии и дают новое направление исследованиям о роли различных биологически активных веществ, бактериальных антигенов в регуляции секреторной деятельности эндокринных желез, а также поиску новых эффек-

тивных методов коррекции дисфункций ЩЖ при различных соматических заболеваниях.

ВЫВОДЫ

1. При остром грамотрицательном эндотоксикозе у крыс Вистар развивается синдром нетиреоидных заболеваний, характеризующийся нарушением секреторной деятельности фолликулярных клеток щитовидной железы и снижением концентрации тиреоидных гормонов в сыворотке крови. Выявленные закономерности изменений морфологических и биохимических показателей функционирования щитовидной железы вызваны периферическим и центральным механизмами, лежащими в основе нарушения секреторной деятельности фолликулярных тироцитов. Периферический механизм обусловлен непосредственным влиянием липополисахарида на секреторную деятельность фолликулярных тироцитов, а центральный - уменьшением на фоне системного воспалительного ответа продукции гипофизом тиреотропного гормона.

2. Ранняя стадия развития синдрома нетиреоидных заболеваний обусловлена действием периферического механизма и морфологически проявляется усилением признаков синтетических процессов в фолликулярных тироцитах на фоне снижения или отсутствия признаков резорбции и расщепления лизосомами ти-реоглобулина в периферической зоне долей, или неэффективной его резорбции фолликулярными тироцитами (накопление множественных коллоидных капель в цитоплазме фолликулярных тироцитов и отсутствие их контакта с лизосомами) в центральной зоне долей щитовидной железы, а также уменьшением деск-вамации фолликулярного эпителия.

3. Присоединение к периферическому центрального механизма развития синдрома нетиреоидных заболеваний проявляется разнонаправленностью морфо-динамических процессов в периферической и центральной зонах долей щитовидной железы. В периферической зоне наблюдается преобладание процессов синтеза тиреоглобулина над процессами его резорбции. В центральной же зоне отмечается относительная сбалансированность процессов синтеза и резорбции тиреоглобулина в фолликулярных тироцитах. Набухание и гибель митохондрий

и усиление лизосомальной реакции в фолликулярных тироцитах наблюдается в обеих зонах щитовидной железы.

4. Изменения концентрации тироксина и трийодтиронина имеют обратную зависимость от содержания эндотоксина в сыворотке крови. Снижение концентрации связанного с транспортными белками тироксина, а не трийодтиронина, является основным признаком синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном эндотоксикозе. Низкий уровень тироксина обусловлен уменьшением его продукции щитовидной железой, а не снижением связывающей активности транспортных белков сыворотки крови. Уменьшение продукции тироксина щитовидной железой сопровождается увеличением образования трийодтиронина, а на поздних стадиях также и усилением резорбции тиреог-лобулина тироцитами путем макропиноцитоза, что является компенсаторными механизмами, направленным на нормализацию тиреоидного статуса организма.

5. Увеличение секреции ТТГ при повышенном уровне эндотоксина в сыворотке крови не приводит к восстановлению функциональной активности щитовидной железы и повышению концентрации тиреоидных гормонов в сыворотке крови. Регресс синдрома нетиреоидных заболеваний происходит только после снижения уровня эндотоксина в крови, что указывает на ключевую роль действия липополисахарида на продукцию гормонов фолликулярными тироцитами.

6. Введение липополисахарида крысам приводит к изменению ряда биохимических показателей: повышению концентрации неоптерина в сыворотке крови и ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-12 и интерферона-у в культуральной среде клеток селезенки и сыворотке крови, что свидетельствует о поляризации иммунного ответа по ТЫ типу. При более выраженной продукции провоспапительных и ТЫ ци-токинов снижение секреции тиреотропного гормона (центральный механизм развития синдрома нетиреоидных заболеваний) происходит в более поздние сроки, о чем свидетельствует повышенный уровень ТТГ в крови в сочетании со сниженным содержанием тиреоидных гормонов. При менее выраженной продукции провоспапительных и ТЫ цитокинов центральный механизм развития синдрома нетиреоидных заболеваний включается в более ранние сроки и

характеризуется снижением ТТГ на фоне пониженных значений тиреоидных гормонов и более высокого уровня эндотоксина в сыворотке крови.

7. Выявлены особенности морфологических изменений щитовидной железы при синдроме нетиреоидных заболеваний в зависимости от выраженности реакций иммунной системы. При более выраженной продукции ТЫ цитокинов наблюдаются меньшие размеры фолликулов и преобладание признаков синтеза тиреоглобулина над его резорбцией. При менее выраженной продукции ТЫ цитокинов наблюдаются более крупные размеры фолликулов, а также выраженные проявления неэффективной резорбции тиреоглобулина в центральной зоне долей щитовидной железы.

8. Морфологическими проявлениями регресса синдрома нетиреоидных заболеваний является усиление синтетической и резорбционной активности фолликулярных тироцитов как в центральной, так и периферической зонах, восстановление баланса между синтезом тиреоглобулина, его выделением в полость фолликулов и резорбцией с последующим внутриклеточным расщеплением ли-зосомальными ферментами. У крыс с менее выраженной продукцией ТЪ1 цитокинов указанные процессы развиваются преимущественно в центральной зоне щитовидной железы, а у крыс с более выраженной продукцией ТЫ цитокинов -в центральной и периферической зоне, что определяет различия в сроках восстановления тиреоидного статуса организма.

9. По морфометрическим данным изменения секреторной активности фолликулярных тироцитов периферической зоны долей щитовидной железы крыс как в условиях действия липополисахарида, так и у контрольных животных, более ритмичные и упорядоченные, по сравнению с центральной зоной. Это свидетельствует об участии периферической зоны долей щитовидной железы в обеспечении базальной секреции тиреоидных гормонов, а центральной - в адаптивной, в ответ на действие стрессорных факторов.

10. При воздействии липополисахарида тучные клетки щитовидной железы крыс усиливают выделение секреторных продуктов молекулярным способом, что проявляется оводнением гиалоплазмы вокруг секреторных гранул, раство-

рением их содержимого и последующим его выделением в цитоплазму. Развитие системного воспалительного ответа усиливает накопление секреторного материала в тучных клетках, а затем его выделение как дегрануляцией, так и молекулярным способом.

11. Применение ТТГ в супрафизиологической дозе является патогенетически обоснованным и эффективным методом коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний при остром бактериальном эндотоксикозе. Однократное введение ТТГ синхронизирует фазы секреторного цикла, усиливает резорбцию и расщепление тиреоглобулина, синтетические процессы в фолликулярных тироцитах, а также способствует обновлению их популяции.

12. Введение ТТГ при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе приводит к последовательному повышению концентрации в сыворотке крови сначала менее активного гормона - тироксина, а затем более активного -трийодтиронина, а также к созданию в системном кровотоке депо гормонов в виде их связи с транспортными белками, что является наиболее благоприятной формой коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний, так как не приводит к резкому увеличению наиболее активных свободных форм гормонов.

13. Введение ТТГ при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе оказывает иммуномодулирующее действие, снижая синтез про воспалительных и ТЫ цитокинов и повышая синтез иммунорегуляторного противовоспалительного трансформирующего фактора роста-(3 в сыворотке крови. Тирео-тропный гормон также оказывает гепатотропное действие, проявляющееся снижением активности в сыворотке крови индикаторных и экскреторных и повышением активности секреторных ферментов и уменьшением выраженности дистрофических изменений гепатоцитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ 1. Яглова Н.В. Цитофизиологические особенности популяции тучных клеток щитовидной железы при воздействии липополисахарида. // Морфологические ведомости. - 2008. - №3-4. - С.94-98.

2. Яглова Н.В., Яглов В.В., Березов Т.Т. Проблемы экспериментального моделирования гипо- и гипертиреоидных состояний. // Вестник РАМН. - 2009. -№3.- С.30-35.

3. Яглова Н.В. Тучные клетки и врожденный иммунитет. // Иммунология. -2009. - Т.30.-№2.- С.139-143.

4. Яглова Н.В. Взаимосвязь функциональной активности щитовидной железы и уровня провоспалительных и иммунорегуляторных цитокинов при остром экспериментальном эндотоксикозе. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т.49. - №6. - С.635-638.

5. Яглова Н.В., Березов Т.Т. Роль поляризации иммунного ответа в развитии синдрома нетиреоидных заболеваний. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -2009. -№4. -С.17-20.

6. Макарова О.В., Яблонская A.M., Михайлова Л.П., Яглова Н.В., Солдатов Д.И. Индивидуальные различия реакции органов-мишеней и иммунной системы при экспериментальном эндотоксикозе. // Архив патологии. - 2009. - №4. - С.37-43.

7. Яглова Н.В. Морфофункциональный анализ развития синдрома нетиреоидных заболеваний при экспериментальном эндотоксикозе. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т. 148. — №11. - с.584-588.

8. Яглова Н.В. Регуляторная роль липополисахарида в функциональной деятельности щитовидной железы и гипофиза. // Биомедицинская химия. - 2010. -Т.56. -№2. - С.179-186.

9. Яглова Н.В., Березов Т.Т. Роль тиреотропного гормона в изменении гомо-нального и цитокинового профиля при экспериментальном синдроме нетиреоидных заболеваний. // Иммунология. - 2010. - Т.31. - №3. - С. 146-151.

10. Яглова Н.В. Роль эндотоксина грамотрицательных бактерий в механизмах регуляции тиреоидного статуса организма. // Вопросы питания. - 2010. - №3. -С. 18-24.

11. Яглова Н.В. Морфофункциональные изменения щитовидной железы крыс при остром экспериментальном эндотоксикозе. // Архив патологии. — 2010. — №3. - С.24-27.

12. Яглова Н.В., Березов Т.Т. Синдром нетиреоидных заболеваний: современное состояние проблемы и перспективы ее изучения. // Владикавказский медико-биологический вестник. - 2010. - Т. 10. - С. 118-126.

Другие публикации

13. Яглова Н.В. Гистофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной железы крыс при системном воспалительном ответе, вызванном липо-полисахаридом. // Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины: Сборник тезисов научно- практической конференции молодых ученых. - Санкт-Петербург, 2008. - С.33-34.

14. Яглова Н.В., Макарова О.В., Яглов В.В. Морфология щитовидной железы при экспериментальном остром эндотоксикозе. // III ссъезд Российского общества патологоанатомов: Материалы съезда. - Самара, 2009. - Т.2. - С.594-596.

15. Яглова Н.В. Экспериментальное исследование синдрома нетиреоидных заболеваний при остром эндотоксикозе. // Молодежь в науке-2009: Becui Нацыя-нальнай акадэмй навук Беларусь Материалы международной научной конференции молодых ученых. - Минск, 2009. - Часть 4. - С. 440-445.

16. Яглова Н.В., Черников В.П. Индивидуальные морфофункциональные различия изменений щитовидной железы и цитокинового профиля при экспериментальном синдроме нетиреоидных заболеваний. // Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии: Сборник научных трудов конференции. - Москва, 2010.-С.208-212.

17. Яглова Н.В., Яглов В.В. Регуляция секреторных процессов в фолликулярных тироцитах щитовидной железы при экспериментальном синдроме нетиреоидных заболеваний, обусловленном острым эндотоксикозом. // Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии: Сборник научных трудов конференции. - Москва, 2010. - С.212-216.

18. Яглова Н.В., Березов Т.Т., Макарова О.В. Влияние тиреотропного гормона на функциональное состояние печени при экспериментальном остром эндоток-сикозе. // Человек и лекарство: Сборник материалов XVII Российского национального конгресса. - Москва, 2010. - С.751-752.

19. Яглова Н.В. Синдром нетиреоидных заболеваний при остром эндотоксико-зе: морфофункциональные аспекты развития и патогенетически обусловленная коррекция. // Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии: Труды XVIII международной конференции и дискуссионного научного клуба. - Украина, Ялта, 2010. - Т.2. - С.25-26.

20. Яглова Н.В. Морфологическая характеристика секреторного цикла фолликулярных тироцитов при воздействии липополисахарида // Патология клетки: Сборник научных трудов VIII Всероссийской конференции. - Москва, 2010. -

АлАТ - аланинаминотрансфераза АсАТ - аспартатаминотрансфераза ГГТ - у-глутамилтранспептидаза ИД - индекс дегрануляции ИЛ - интерлейкин

СГК - средний гистохимический коэффициент

СНТЗ - синдром нетиреоидных заболеваний

сТ4 - свободный тироксин

сТЗ - свободный трийодтиронин

Т4 - тироксин

ТЗ -трийодтиронин

ТК - тучные клетки

ТТГ - тиреотропный гормон

ТФР-р - трансформирующий фактор роста-Р

ФНО-а - фактор некроза опухоли-а

ЩЖ - щитовидная железа

С.305-307.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Соискатель

Подписано в печать:

21.12.2010

Заказ № 4742 Тираж - 150 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autorefcrat.ru

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Яглова, Наталья Валентиновна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

Синдром нетиреоидных заболеваний: патогенетические и морфофункциональные аспекты проблемы

История проблемы

Варианты СНТЗ

Патогенетические механизмы СНТЗ

Структура ЛПС и механизмы его действия

Морфофункциональные характеристики щитовидной железы при СНТЗ

Морфофункциональная характеристика секреторного цикла фоллику- 30 лярных тироцитов

Цитология и цитофизиология популяции тучных клеток щитовидной железы

ГЛАВА 2. Материалы и методы

ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований

3.1. Изменения уровня эндотоксина в сыворотке крови, морфофункциональ- 57 ная характеристика печени и изменения активности ферментов печени в сыворотке крови, цитокинового профиля и тиреоидного статуса крыс Вистар в разные сроки после введения липополисахарида Е. coli

3.2. Динамика морфофункциональных изменений щитовидной железы крыс 79 Вистар в разные сроки после введения липополисахарида Е. coli

3.3. Индивидуальные особенности реакций иммунной системы, морфофункциональных изменений щитовидной железы и тиреоидного статуса при воздействии липополисахарида Е. coli

3.4. Морфофункциональные изменения щитовидной железы в разные сроки после введения тиреотропного гормона

3.4.1. Морфофункциональные изменения щитовидной железы при воздейст- 205 вии тиреотропного гормона

3.4.2. Морфофункциональные изменения щитовидной железы при воздейст- 228 вии тиреотропного гормона при остром экспериментальном эндотоксикозе

3.5. Цитофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной железы

3.5.1. Цитофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной же- 260 лезы крыс контрольной группы

3.5.2. Цитофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной же- 267 лезы крыс в разные сроки после введения липополисахарида

3.5.3. Цитофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной же- 286 лезы крыс в разные сроки после введения тиреотропного гормона

3.5.4. Цитофизиологическая характеристика тучных клеток щитовидной же- 294 лезы в разные сроки после введения тиреотропного гормона крысам с острым эндотоксикозом

3.6. Изменения уровня эндотоксина в сыворотке крови, цитокинового профиля сыворотки крови и тиреоидного статуса крыс под действием тиреотропного гормона

3.6.1. Изменения уровня эндотоксина в сыворотке крови, морфофункцио- 308 нальная характеристика печени и изменения активности ферментов печени в сыворотке крови, цитокинового профиля и тиреоидного статуса крыс в разные сроки после введения тиреотропного гормона

3.6.2. Изменения уровня эндотоксина в сыворотке крови, морфофункцио- 321 нальная характеристика печени и изменения активности ферментов печени в сыворотке крови, цитокинового профиля и тиреоидного статуса крыс с острым эндотоксикозом в разные сроки после введения тиреотропного гормона

ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологическое и биохимическое исследование секреторной деятельности щитовидной железы при экспериментальном синдроме нетиреоидных заболеваний"

Актуальность проблемы

Синдром нетиреоидных заболеваний — дисфункция щитовидной железы, развивающаяся в острой стадии соматических заболеваний различного генеза у лиц, ранее не страдавших заболеваниями щитовидной железы, и проявляющаяся снижением продукции тиреоидных гормонов. Первые сообщения о синдроме нетиреоидных заболеваний в научной литературе появились около 30 лет назад [231]. Позднее в ряде работ были даны лабораторные характеристики синдрома нетиреоидных заболеваний при тяжелых формах инфекционных заболеваний, сепсисе, инфаркте миокарда, тяжелых травмах, трансплантации внутренних органов и ряде других заболеваний [92, 121,183, 227]. Результаты клинических исследований [123, 151, 180] показывают, что степень выраженности синдрома нетиреоидных заболеваний напрямую коррелирует с уровнем смертности пациентов реанимационных отделений и отделений интенсивной терапии, что указывает на необходимость его коррекции. Однако роль этиологических факторов и патогенетические механизмы синдрома нетиреоидных заболеваний не ясны. Многими исследователями [57, 77, 81] синдром нетиреоидных заболеваний рассматривается как гипоталамо-гипофизарная дисфункция, приводящая к снижению продукции тиреоидных гормонов, а также как нарушение периферического превращения тироксина в трийодтиронин. Практически не изучены морфологические изменения, отражающие секреторную деятельность фолликулярных тироцитов при синдроме нетиреоидных заболеваний, обусловленном различными заболеваниями. Одной из причин, объясняющих односторонний подход к объяснению механизмов развития синдрома нетиреоидных заболеваний, является хорошо изученное, сложившееся представление о функционировании гипоталамо-гипофизарно-тиреоидной оси и принципах регуляции активности щитовидной железы [2, 12, 154]. Однако вовлеченность щитовидной железы в регуляцию практически всех процессов жизнедеятельности указывают на наличие дополнительных функциональных связей между щитовидной железой и другими органами. В последние десятилетия в научной литературе было опубликовано большое количество экспериментальных работ по изучению влияния воздействия различных физических и химических факторов, а также патологических процессов на деятельность щитовидной железы [82, 88, 218, 226]. Результаты этих исследований показали участие щитовидной железы в адаптивных, дизадаптивных и компенсаторно-приспособительных процессах, развивающихся в ответ на кратковременные и длительные воздействия на организм. Эти работы стали основой для изучения внегипофизарных путей регуляции деятельности щитовидной железы, а также послужили основой для изучения роли тиреоидных гормонов в обеспечении основных свойств живого организма — защитной реакции. Связь щитовидной железы с органами иммунной системы, ее роль в реакциях врожденного и адаптивного иммунитета представляют значительный интерес для исследователей, так как открывают новые пути изучения молекулярных основ типовых патологических процессов. Следствием недостаточной изученности механизмов синдрома нетиреоидных заболеваний при различных заболеваниях является отсутствие патогенетически обусловленных подходов к его коррекции. Особую важность патогенетически обусловленные методы коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний приобретают при лечении заболеваний, сопровождающихся синдромом полиорганной недостаточности. К таким заболеваниям относится в частности сепсис и тяжелые формы инфекционно-воспалительных заболеваний. Смертность при сепсисе в Российской Федерации по данным Министерства здравоохранения и социального развития составляет 24-25%. Таким образом, изучение механизмов СНТЗ, его проявлений на разных структурно-функциональных уровнях, влияния на деятельность других органов и систем, позволило бы оптимизировать методы лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний, а также расширить представления о внегипофизарной регуляции деятельности щитовидной железы в норме и патологии, что и обусловило цель нашего исследования.

Цель исследования: изучение морфологических и биохимических изменений секреторной деятельности щитовидной железы при синдроме нетиреоидных заболеваний и обоснование методов его коррекции.

Задачи исследования: 1. Изучить морфологические проявления секреторной деятельности фолликулярных клеток щитовидной железы при развитии синдрома нетиреоидных заболеваний, обусловленного острым грамотрицательным бактериальным эндотоксикозом, вызванным введением липополисахарида Е. соН.

2. Провести биохимический анализ изменений тиреоидного статуса в разные сроки после введения липополисахарида и изучить зависимость между изменениями концентраций гормонов и эндотоксина в сыворотке крови.

3. Оценить изменения концентрации основных провоспалительных и иммуноре-гуляторных цитокинов в сыворотке крови и культуральной среде клеток селезенки в разные сроки после введения липополисахарида во взаимосвязи с изменениями концентрации тиреоидных и тиреотропного гормонов.

4. Изучить морфологические проявления секреторной деятельности фолликулярных клеток щитовидной железы при регрессе синдрома нетиреоидных заболеваний и их особенности в зависимости от выраженности реакций иммунной системы.

5. На основании полученных данных об изменениях секреторной деятельности щитовидной железы при остром грамотрицательном эндотоксикозе обосновать методологические подходы к коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний.

6. Исследовать морфологические проявления секреторной деятельности щитовидной железы при коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний.

7. Изучить цитофизиологические характеристики тучных клеток щитовидной железы и способы выделения ими секреторного материана в разные сроки развития экспериментального синдрома нетиреоидных заболеваний и при его коррекции.

8. Изучить биохимические показатели тиреоидного статуса при коррекции экспериментального синдрома нетиреоидных заболеваний.

9. Изучить изменения концентрации эндотоксина, провоспалительных и имму-норегуляторных цитокинов и активности индикаторных, экскреторных и секреторных ферментов печени в сыворотке крови и морфологические изменения печени при коррекции экспериментального синдрома нетиреоидных заболеваний.

Научная новизна:

Впервые установлено, что наряду с центральным существует периферический механизм развития синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе. Периферический механизм заключается в разобщающем действии липополисахарида на фазы секреторного цикла фолликулярных тироцитов и проявляется усилением синтеза тиреоглобулина и его депонирования в полости фолликулов, и снижением его резорбции и расщепления лизосо-мами.

Впервые охарактеризованы структурные изменения фолликулярных тироци-тов крыс при развитии и регрессе синдрома нетиреоидных заболеваний, обусловленного острым грамотрицательным бактериальным эндотоксикозом. Ранние сроки развития синдрома нетиреоидных заболеваний характеризуются усилением синтетических процессов в фолликулярных клетках, слабой выраженностью резорбции и расщепления тиреоглобулина в периферической зоне долей и признаками неэффективной резорбции в центральной зоне долей щитовидной железы. На более поздних сроках появляются деструкция митохондрий с последующим усилением лизосо-мальной реакции, признаки макропиноцитоза коллоида. Регресс синдрома нетиреоидных заболеваний морфологически характеризуется усилением и синхронизацией процессов синтеза, резорбции и расщепления тиреоглобулина лизосомами фолликулярных тироцитов.

Впервые выявлены индивидуальные особенности морфологических проявлений секреторных процессов в щитовидной железе в зависимости от выраженности реакций иммунной системы и характеризующиеся различными размерами фолликулов и скоростью процессов резорбции тиреоглобулина фолликулярными тироцитами.

Установлен и охарактеризован молекулярный способ выделения секреторного материала тучными клетками щитовидной железы при воздействии липополисаха-рида.

Впервые обнаружена обратная зависимость между содержанием эндотоксина и тиреоидных гормонов в сыворотке крови при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе, что указывает на важную роль эндотоксина грамотрицатель-ных бактерий в регуляции функций щитовидной железы. Доказано, что патогномо-ничным симпотомом синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном эндотоксикозе является снижение концентрации тироксина в сыворотке крови, а не трийодтиронина, как считалось ранее.

Разработан и патогенетически обоснован эффективный подход к коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе, основанный на введении супрафизиологической дозы тиреотропного гормона. Установлено, что ТТГ оказывает иммуномодулирующее и гепатотропное действие.

Практическая значимость:

Полученные в эксперименте данные о морфологических и функциональных изменениях щитовидной железы, печени, цитокинового профиля, при развитии синдрома нетиреоидных заболеваний и его коррекции тиреотропным гормоном могут быть рекомендованы для разработки новых и совершенствования существующих методов лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными бактериями, включая эндотоксиновый бактериальный шок.

Полученные новые данные о наличии периферического внегипофизарного механизма регуляции секреторных процессов в клетках щитовидной железы, о роли эндотоксина в регуляции активности фолликулярных тироцитов и о взаимосвязи выраженности иммунного ответа организма и активности щитовидной железы открывают новые направления в разработке подходов к оценке тяжести состояния больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями, сопровождающимися эндо-токсинемией.

При морфологической оценке функциональной активности щитовидной железы необходимо учитывать, что известные морфологические критерии повышенной функциональной активности (увеличение высоты фолликулярных тироцитов, размеров их ядер, появление ШИК-положительных включений в цитоплазме фолликулярных тироцитов) могут наблюдаться и при пониженной продукции тиреоидных гормонов.

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО Российский университет дружбы народов и кафедре биологической химии лечебного факультета ГОУ ВПО Российский медицинский государственный университет Росздрава. Положения, выносимые на защиту:

1. В развитии синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицатель-ном бактериальном эндотоксикозе принимают участие периферический и центральный механизмы, заключающиеся, соответственно, в нарушении секреторной деятельности фолликулярных тироцитов под воздействием липополисахарида и снижении секреции тиреотропного гормона гипофизом.

2. Липополисахарид оказывает на щитовидную железу амбивалентное действие, являясь с одной стороны активатором фазы синтеза, а с другой, ингибитором фазы резорбции и расщепления тиреоглобулина в фолликулярных тироцитах, и играет ведущую роль в развитии синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотри-цательном эндотоксикозе. Сочетание воздействия липополисахарида с дефицитом тиреотропного гормона характеризуется возникновением разнонаправленных мор-фодинамических процессов в периферической и центральной зонах долей щитовидной железы и большей сбалансированностью процессов синтеза, выделения и резорбции тиреоглобулина в центральной зоне по сравнению с периферической зоной долей щитовидной железы. Регресс синдрома нетиреоидных заболеваний характеризуется уменьшением размеров фолликулов и восстановлением баланса между фазами секреторного цикла фолликулярных тироцитов.

3. Выраженность поляризации иммунного ответа по ТЫ типу влияет на темпы присоединения центрального механизма развития синдрома нетиреоидных заболеваний к периферическому, что объясняет наличие различных вариантов синдрома нетиреоидных заболеваний с повышенным и пониженным уровнем тиреотропного гормона в сыворотке крови.

4. Тучные клетки щитовидной железы при воздействии липополисахарида усиливают выделение секреторного материала преимущественно молекулярным способом. Развитие системного воспалительного ответа приводит к усилению выделения секреторного материала тучными клетками, как молекулярным способом, так и путем экзоцитоза содержимого секреторных гранул.

5. Введение тиреотропного гормона в супрафизиологических дозах обеспечивает восстановление процессов резорбции и расщепления тиреоглобулина в фолликулярных тироцитах, повышает содержание связанных, а затем и свободных фракций тиреоидных гормонов в сыворотке крови, оказывает иммуномодулирующее и гепа-тотропное действие.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Яглова, Наталья Валентиновна

ВЫВОДЫ

1. При остром грамотрицательном эндотоксикозе у крыс Вистар развивается синдром нетиреоидных заболеваний, характеризующийся нарушением секреторной деятельности фолликулярных клеток щитовидной железы и снижением концентрации тиреоидных гормонов в сыворотке крови. Выявленные закономерности изменений морфологических и биохимических показателей функционирования щитовидной железы вызваны периферическим и центральным механизмами, лежащими в основе нарушения секреторной деятельности фолликулярных тироцитов. Периферический механизм обусловлен непосредственным влиянием липополисахарида на секреторную деятельность фолликулярных тироцитов, а центральный - уменьшением на фоне системного воспалительного ответа продукции гипофизом тиреотропного гормона.

2. Ранняя стадия развития синдрома нетиреоидных заболеваний обусловлена действием периферического механизма и морфологически проявляется усилением признаков синтетических процессов в фолликулярных тироцитах на фоне снижения или отсутствия признаков резорбции и расщепления лизосомами тиреоглобулина в периферической зоне долей, или неэффективной его резорбции фолликулярными ти-роцитами (накопление множественных коллоидных капель в цитоплазме фолликулярных тироцитов и отсутствие их контакта с лизосомами) в центральной зоне долей щитовидной железы, а также уменьшением десквамации фолликулярного эпителия.

3. Присоединение к периферическому центрального механизма развития синдрома нетиреоидных заболеваний проявляется разнонаправленностью морфодинамических процессов в периферической и центральной зонах долей щитовидной железы. В периферической зоне наблюдается преобладание процессов синтеза тиреоглобулина над процессами его резорбции. В центральной же зоне отмечается относительная сбалансированность процессов синтеза и резорбции тиреоглобулина в фолликулярных тироцитах. Набухание и гибель митохондрий и усиление лизосомальной реакции в фолликулярных тироцитах наблюдается в обеих зонах щитовидной железы.

4. Изменения концентрации тироксина и трийодтиронина имеют обратную зависимость от содержания эндотоксина в сыворотке крови. Снижение концентрации связанного с транспортными белками тироксина, а не трийодтиронина, является основным признаком синдрома нетиреоидных заболеваний при остром грамотрицательном эндотоксикозе. Низкий уровень тироксина обусловлен уменьшением его продукции щитовидной железой, а не снижением связывающей активности транспортных белков сыворотки крови. Уменьшение продукции тироксина щитовидной железой сопровождается увеличением образования трийодтиронина, а на поздних стадиях также и усилением резорбции тиреоглобулина тироцитами путем макропи-ноцитоза, что является компенсаторными механизмами, направленным на нормализацию тиреоидного статуса организма.

5. Увеличение секреции тиреотропного гормона при повышенном уровне эндотоксина в сыворотке крови не приводит к восстановлению функциональной активности щитовидной железы и повышению концентрации тиреоидных гормонов в сыворотке крови. Регресс синдрома нетиреоидных заболеваний происходит только после снижения уровня эндотоксина в крови, что указывает на ключевую роль действия липополисахарида на продукцию гормонов фолликулярными тироцитами.

6. Введение липополисахарида крысам приводит к изменению ряда биохимических показателей: повышению концентрации неоптерина в сыворотке крови и ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-12 и интерферона-у в культуральной среде клеток селезенки и сыворотке крови, что свидетельствует о поляризации иммунного ответа по ТЫ типу. При более выраженной продукции провоспалительных и ТЫ цитокинов снижение секреции тиреотропного гормона (центральный механизм развития синдрома нетиреоидных заболеваний) происходит в более поздние сроки, о чем свидетельствует повышенный уровень тиреотропного гормона в крови в сочетании со сниженным содержанием тиреоидных гормонов. При менее выраженной продукции провоспалительных и ТЫ цитокинов центральный механизм развития синдрома нетиреоидных заболеваний включается в более ранние сроки и характеризуются снижением тиреотропного гормона на фоне пониженных значений тиреоидных гормонов и более высокого уровня эндотоксина в сыворотке крови.

7. Выявлены особенности морфологических изменений щитовидной железы при синдроме нетиреоидных заболеваний в зависимости от выраженности реакций иммунной системы. При более выраженной продукции ТЫ цитокинов наблюдаются меньшие размеры фолликулов и преобладание признаков синтеза тиреоглобулина над его резорбцией. При менее выраженной продукции ТЫ цитокинов наблюдаются более крупные размеры фолликулов, а также выраженные проявления неэффективной резорбции тиреоглобулина в центральной зоне долей щитовидной железы.

8. Морфологическими проявлениями регресса синдрома нетиреоидных заболеваний является усиление синтетической и резорбционной активности фолликулярных тироцитов как в центральной, так и периферической зонах, восстановление баланса между синтезом тиреоглобулина, его выделением в полость фолликулов и резорбцией с последующим внутриклеточным расщеплением лизосомальными ферментами. У крыс с менее выраженной продукцией ТЫ цитокинов указанные процессы развиваются преимущественно в центральной зоне щитовидной железы, а у крыс с более выраженной продукцией ТЫ цитокинов - в центральной и периферической зоне, что определяет различия в сроках восстановления тиреоидного статуса организма.

9. По морфометрическим данным изменения секреторной активности фолликулярных тироцитов периферической зоны долей щитовидной железы крыс как в условиях действия липополисахарида, так и у контрольных животных, более ритмичные и упорядоченные, по сравнению с центральной зоной. Это свидетельствует об участии периферической зоны долей щитовидной железы в обеспечении базальной секреции тиреоидных гормонов, а центральной - в адаптивной, в ответ на действие стрессорных факторов.

10. При воздействии липополисахарида тучные клетки щитовидной железы крыс усиливают выделение секреторных продуктов молекулярным способом, что проявляется оводнением гиалоплазмы вокруг секреторных гранул, растворением их содержимого и последующим его выделением в цитоплазму. Развитие системного воспалительного ответа усиливает накопление секреторного материала в тучных клетках, а затем его выделение как дегрануляцией, так и молекулярным способом.

11. Применение тиреотропного гормона в супрафизиологической дозе является патогенетически обоснованным и эффективным методом коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний при остром бактериальном эндотоксикозе. Однократное введение тиреотропного гормона синхронизирует фазы секреторного цикла, усиливает резорбцию и расщепление тиреоглобулина, синтетические процессы в фолликулярных тироцитах, а также способствует обновлению их популяции.

12. Введение тиреотропного гормона при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозе приводит к последовательному повышению концентрации в сыворотке крови сначала менее активного гормона - тироксина, а затем более активного - трийодтиронина, а также к созданию в системном кровотоке депо гормонов в виде их связи с транспортными белками, что является наиболее благоприятной формой коррекции синдрома нетиреоидных заболеваний, так как не приводит к резкому увеличению наиболее активных свободных форм гормонов.

13. Введение тиреотропного гормона при остром грамотрицательном бактериальном эндотоксикозс оказывает иммуномодулирующее действие, снижая синтез про-воспалительных и ТЫ цитокинов и повышая синтез иммунорегуляторного противовоспалительного трансформирующего фактора роста-Р в сыворотке крови. Тирео-тропный гормон также оказывает гепатотропное действие, проявляющееся снижением активности в сыворотке крови индикаторных и экскреторных и повышением активности секреторных ферментов и уменьшением выраженности дистрофических изменений гепатоцитов.

В заключение выражаю глубокую благодарность моим учителям и научным консультантам доктору медицинских наук профессору Ольге Васильевне Макаровой и академику РАМН, доктору медицинских наук профессору Темирболату Темболато-вичу Березову.

376

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное морфофункциональное исследование СНТЗ при остром грамот-рицательном эндотоксикозе установило, что СНТЗ является не только универсальной реакцией ЩЖ на патологические процессы, протекающие в организме, но и может иметь характерные особенности, связанные с непосредственным воздействием на секреторные процессы в фолликулярных тироцитах. Повышение уровня эндотоксина в системном кровотоке приводит к выраженным изменениям секреторного цикла фолликулярных тироцитов, заключающимся в усилении синтеза и выделения ти-реоглобулина в полость фолликулов и снижении скорости процессов резорбции и расщепления тиреоглобулина, то есть существует периферический механизм изменения функциональной активности ЩЖ, отличный от центрального, проявляющегося снижением скорости секреторных процессов в фолликулярных тироцитах (рис.267). Периферический механизм ТЗ является ведущим в развитии СНТЗ. Прекращение действия ЛПС на фолликулярные тироциты приводит к синхронизации фаз их секреторного цикла. Присоединение центрального механизма зависит от степени поляризации иммунитета по ТЫ типу. Наиболее быстро центральный механизм присоединяется к периферическому при менее выраженной поляризации иммунного ответа по ТЫ типу. Этим объясняется наличие двух типов СНТЗ при тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваниях с повышенным и пониженным уровнем ТТГ в сыворотке крови, описанных в научной литературе. Динамическое исследование изменений ЩЖ позволило выявить морфологические признаки СНТЗ на ранних и поздних стадиях ее развития как на светооптическом, так и ультраструктурном уровне, свидетельствующих как о нарушениях секреторных процессов, так и компенсаторных изменениях, направленных на повышение продукции гормонов. Полученные данные позволили опровергнуть имеющуюся точку зрения, что СНТЗ начинается с нарушения превращения Т4 в ТЗ, и лишь по мере развития основного заболевания к снижению концентрации ТЗ в сыворотке крови присоединяется снижение Т4.

ПОВЫШЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛПС В СИСТЕМ НОМ КРОВОТОКЕ

ЕРИ

ПЕРИФЕРИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ РАЗВИТИЯ СНТЗ

14 ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ЛПС

СИНТЕЗ ФНО-а И ТЫ ЦИТОКИНОВ

ЗАПУСК СИСТЕМНОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА

УСИЛЕНИЕ СИНТЕЗА И СНИЖЕНИЕ РЕЗОРБЦИИ И РАСЩЕПЛЕНИЯ ТИРЕОГЛОБУЛИНА

ДЕПОНИРОВАНИЕ ПРОГОР-монов В ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЕ

ГИПОТАЛАМО

ГИПОФИЗАРНАЯ ДИСФУНКЦИЯ

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ

МЕХАНИЗМ РАЗВИТИЯ СНТЗ

ВВЕДЕНИЕ ТТГ

СНИЖЕНИЕ ПРОДУКЦИИ Т4

СНИЖЕНИЕ СКОРОСТИ СЕКРЕТОРНЫХ ПРОЦЕССОВ

ПОРАЖЕНИЕ ПЕЧЕНИ

РЕГРЕСС СИСТЕМНОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА

ПОВЫШЕНИЕ СЕКРЕЦИИ ТТГ ГИПОФИЗОМ

СНИЖЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛПС В СИСТЕМНОМ КРОВОТОКЕ

ПОВЫШЕНИЕ ПРОДУКЦИИ 14

УСИЛЕНИЕ СИНТЕЗА, РЕЗОРБЦИИ И РАСЩЕПЛЕНИЯ ТИРЕОГЛОБУЛИНА

Рис. 267. Схема развития и регресса СНТЗ при остром грамотрицательном эндотоксикозе и точки приложения коррегирующего воздействия ТТГ. Условные обозначения: X - блокирование звеньев патогенеза СНТЗ и поражения печени тиреотропным гормоном.

Выявленные нарушения секреторной активности фолликулярных тироцитов позволили разработать патогенетический способ коррекции, заключающийся в усилении и синхронизации процессов резорбции и расщепления тиреоглобулина с процессами его синтеза с помощью повышенной дозы ТТГ. Введение ТТГ в супрафи-зиологической дозе привело к повышению концентрации связанного с сывороточными белками Т4 и ТЗ, опровергнув ранее существовавшую гипотезу о нарушении связывающей способности транспортных белков крови как одного из механизмов СНТЗ.

Помимо восстановления тиреоидного статуса выявлен иммуномодулирующий эффект ТТГ, связанный со снижением продукции провоспалительных и ТЫ цитоки-нов, а также положительный эффект на морфофункциональные показатели печени, являющейся одним из основных органов-мишеней ЛПС (рис.267), что открывает новые потенциальные возможности для применения ТТГ при лечении воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными микроорганизмами.

Исследование морфофункциональных изменений периферической и центральной зонах долей ЩЖ в норме, при воздействии ЛПС и ТТГ позволило дополнить и переоценить имеющиеся данные о гетерофункциональности различных участков паренхимы ЩЖ. Полученные данные позволяют рассматривать периферическую зону как зону ритмичного функционирования, обеспечивающую базальную продукцию тиреоидных гормонов, а центральную —- как зону экстренного реагирования, обеспечивающего функциональную секрецию гормонов. Исследование тучных клеток ЩЖ показало, что основным способом выделения ими секреторного материала при действии указанных факторов является молекулярный способ, в основе которого лежит растворение содержимого секреторных гранул и выведения его в цитоплазму.

Полученные данные раскрывают ранее неизвестные механизмы функционирования ЩЖ и роль гормонов ЩЖ и ТТГ в обеспечении защитных реакций организма, а также их органотропное действие и дают новое направление исследованиям роли различных биологически активных веществ, бактериальных антигенов в регуляции секреторной деятельности эндокринных желез, а также поиску новых эффективных методов коррекции дисфункций ЩЖ при различных соматических заболеваниях.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Яглова, Наталья Валентиновна, Москва

1. Авцын А.П., Шахламов В А. Ультраструктурные основы патологии клетки. АМН СССР. — М.: Медицина, 1979, 320с., ил.

2. Алешин Б.В., Губский В.И. Гипоталамус и щитовидная железа. — М., Медицина. — 1983. — 184с.

3. Анашкина E.H. Гистофизиология популяций популяций тканевых базофилов щитовидной и околощитовидной желез крыс. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -Ярославль, 2001. 20с.

4. Быков В.Л. Развитие и гетерогенность тучных клеток. // Морфология. — 2000. —№.2. —С.86-92.

5. Власова З.А. Функциональная морфология щитовидной железы при атеросклерозе: Автореф. дисс. докт. мед. наук. Л., 1971. - 38 с.

6. Гайдарская Е.А. Функциональная морфология щитовидной железы у взрослого населения г. Новгорода: Автореф. дисс.канд. мед. наук. Л., 1975. - 29 с.

7. Голья Ф. Биологические эффекты 3,5-дийидотиронина. // Биохимия. — 2005. — Т.70. —С.203-215.

8. Гордиенко В.М., Козырицкий В.Г. Ультраструктура желез эндокринной системы. — Киев: Здоров'я, 1978. — 288с.

9. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C. Цитокины. — СПб. — ООО «Издательство Фолиант». — 2008. — 552с.

10. Линднер Д.П., Поберий И.А., Розкин М.Я., Ефимов B.C. Морфометрический анализ популяции тучных клеток. // Архив патологии. — 1980. — Т.42, №6. — С.60-64.

11. Мариотги С. Нормальная физиология гипоталамо-гипофизарно-тиреоидной системы и ее связь с другими эндокринными железами и нервной системой. // Клиническая и экспериментальная тиреодология. — 2003. — Т.1. — №4. — С. 10-17.

12. Мишнев О. Д., Щегол ев А.И. Печень при эндотоксикозах. — М.: Изд. РАМН, 2001. —236с.

13. Молекулярная эндокринология. Фундаментальные исследования и их отражение в клинике: Пер. с англ./ Под ред. Б.Д. Вайнтрауба.— М.: Медицина, 2003. — 496с.: ил.

14. Пак С.Г., Грачев C.B., Белая О.Ф., Малов В.А., Асташкин Е.И. Патогенетические аспекты синдрома интоксикации в клинике инфекционных болезней. // Вестник РАМН. — 2008. —№11. — С.33-41.

15. Писарев В.Б., Богомолова Н.В., Новочадов В.В. Бактериальный эндотокси-коз: взгляд патолога. —Волгоград.: Изд-во ВолГМУ, 2008. — 308с.

16. Симбирцев A.C. Толл-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета. Иммунология. 2005. №6. с.368-377.

17. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих: Пер. с англ. — М.: Мир, 1975. —319с.

18. Харланова Н.Г. Закономерности биологического действия эндотоксина Е. coli на ультраструктуру органов-мишеней: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. — М., 2001. —37с.

19. Хмельницкий O.K. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. Руководство. — СПб: СОТИС, 2002. — 288с.

20. Хмельницкий O.K. Щитовидная железа жителей Санкт-Петербурга в норме и при патологии. — СПб.: Изд. Дом СПбМАПО, 2003. —228с.

21. Черенков И.А., Глумова В.А., Чучкова H.H. Морфологические особенности щитовидной железы человека в различных экологических условиях. // Современные наукоемкие технологии. — 2005. — №2. — С.48.

22. Яглов В.В. Цитологическое и гистохимическое исследование секреторной деятельности хромаффиннных клеток мозгового вещества надпочечника. Автореф. дис. канд.мед.наук. —М., 1966. — 15с.

23. Яковлев М.Ю. Кишечный липополисахарид: системная эндотоксемия — эн-дотоксиновая агрессия —SIR-синдром и полиорганная недостаточность, как звенья одной цепи. // Бюлл. ВНЦ РАМН. — 2005. — №1. — С. 15-18.

24. Яковлев М.Ю. Системная эндотоксемия в физиологии и патологии человека: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. — М., 1993. — 55с.

25. Ackermann L., Pelkonen J., Harvima I. Staphylococcal enterotoxin В inhibits the production of IL-4 in a human mast cell line HMC-1. // Immunology. -— 1998. — V.94.1. P.247-252.

26. Adamson L., Ingbar S. Some properties of stimulatory effect of thyroid hormones on amino acid transport by embryonic chick bone. // Endocrinology. — 1967. — V.81.1. P.1372-1378.

27. Adler S., Wartofsky L. The nonthyroidal illness syndrome. // Endocrinol. Metab. Clin. N. Am. — 2007. — V.36. — P.657-672.

28. Afandi В., Schussler G., Arafeh A., Boutros A., Yap M., Finkelstein A. Selective consumption of thyroxine-binding globulin during cardiac bypass surgery. // Metabolism.2000. — V.49, No.2. — P.270-274.

29. Agwunobi A., Reid C., Maycock P., Little R., Carlson J. Insulin resistance and substrate utilization in human endotoxinemia. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2000. — V.85, No. 10. — P.3770-3778.

30. Aimers W. Exocytosis. // Annu. Rev. Physiol. — 1990. — V.52. — P.607-624.

31. Amma L., Campos-Barros A., Wang Z., Vennstrom В., Forrest D. Distinct tissue-specific roles for thyroid hormone receptors beta and alpha 1 in regulation of typel deio-dinase expression. // Mol. Endocrinol. — 2001. — V.15, No.3. — P.467-475.

32. Anderson H., Kohn L., Kohn A., Bernardini I., Blom H., Tietze F., Gahl W. Characterization of lisosomal monoiodthyrosine transport in rat thyroid cells. // J. Biol. Chem.1990. — V.265. — P.10950-10954.

33. Arem R., Wiener J, Kaplan S., Kim H., Reichlin S., Kaplan M. Reduced tissue thyroid hormone levels in fatal illnesses. // Metabolism. — 1993. — V.42. — P.1102-1108.

34. Bacci V., Schussler G., Kaplan T. The relationsheep between serum triiodothyronine and thyrotropine during systemic illness. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1982. — V.54. — P.1229-1235.

35. Balboni G., Catini C., Gheri G. Role of the mastocytes during functional activation of the thyroid. // Bull. Assoc. Anat. — 1980. — V.84. — P.55-58.

36. Barath P. The fate of serotonin released from the intrathyroidal mast cells in albino rat. //Endocrinologie. — 1976. — V.67, No.l. — P. 111-114.

37. Barrington E. Some endocrinological aspects of the protochordata. In: Gorbman A., editor. Comparative Endocrinology. New York: John Wiley and sons Inc; 1959. -p.250.

38. Bassett J., Harvey C., Williams G. Mechanisms of thyroid hormone receptor-specific nuclear and extra nuclear actions.// Mol. Cell. Endocrinol. — 2003. — Y.213. — P.l-11.

39. Becker R., Yaughan G., Zeidler M., Seraile L. Goldfarb I. Mansour E., McManus W., Pruitt B., Mason A. Hypermetabolic low triiodothyronine syndrome of bum injury. // Crit. Care Med. — 1982. — V.10. — P.870-875.

40. Beckett G. Thyroid function and thyroid function tests in non-thyroidal illness. // CPD Bulletin: Clinical Biochemistry. — 2006. — V.7. — P.107-116.

41. Beigneux A., Moser A., Shigenaga J., Grunfeld C., Feingold K. Sick euthyroid syndrome is associated with decreased TR expression and DNA binding in mouse liver. // American Journal of Physiology and Metabolism. 2003.V.284. No.l. P.E228-E236.

42. Berk P., Korenblat K. Approach to the patient with jaundice or abnormal liver test results. In: Goldman L, Ausiello D, eds. Cecil Medicine. 23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007: chap 150.

43. Berndorfer U., Wilms H., Herzog V. Multimerization of thyroglobulin during extracellular storage: isolation of highly cross-linked TG from human thyroids. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1996. — V.81. — P. 1918-1926.

44. Beylot M. Regulation of in vivo ketogenesis: role of free fatty acids and control by epinephrine, thyroid hormones, insulin and glucagon.// Diabetes Metab. — 1996. — V.22. — P.299-304.

45. Bianco A., Nunes M., Douglas C. Influence of mast cells on thyroid function. // Endocrinol. Exp. — 1983. — V. 17, No.2. — P.99-106.

46. Bianco A., Salvatore D., Gereben B., Berry M., Larsen P. Biochemistry, cellular and molecular biology, and physiological roles of the iodothyronine selenodeiodinases. // Endocr. Rev. — 2002. — V.23, No.l. — P.38-89.

47. Boelen A., Kwakkel J., Platvoet-Ter Schiphorst M., Baur A., Kohrle J., Wiersinga W. Contribution of interleukin-12 to the pathogenesis of nonthyroidal illness. // Hormone and Metabolic Research. — 2004. — V.36. — No.2. — P. 101-106.

48. Boelen A., Platvoet-Ter Schiphorst M., Bakker O., Wiersinga W. The role of cytokines in the lipopolisaccharide-induced sick euthyroid syndrome in mice. // J. Endocrinol. 1995. V.146, No.3. — P .475-483.

49. Boelen A., Platvoet-Ter Schiphorst M., Wiersinga W. Association between serum interleukin-6 and serum 3,5,3'-triiodothyronine in nonthyroidal illness. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1993. — V.80, No.6.— P. 1695-1699.

50. Brent G., Herschman J. Thyroxine therapy in patients with severe non-thyroidal illnesses and lower serum thyroxine concentration. // J. Clin. Endorinol. Metab. — 1986. — V.63,No.l. —P.l-8.

51. Burman K., Wartofsky L. Endocrine end metabolic dysfunction syndromes in the critically ill: thyroid function in the intensive care unit settings. // Crit. Care Clin. — 2001. —V.17.—P.43-57.

52. Catini C., Legnaioli M. Role of mast cells in health: daily rhythmic variations in their number, exocytosis activity, histamine and serotonin content in the rat thyroid gland. // Eur. J. Histochem. — 1992. — V.36, No.4. — P.501-516.

53. Caton P., Nayuni N., Corder R. Endotoxin induced hyperlactatemia hypoglycemia is linked to decreased mitochondrial phosophoenolpyruvate carboxykinase. // Life Sci. — 2009. — V.84, No.21-22. — P.738-744.

54. Caulfield J., Lewis R., Hein A., Austen K. Secretion in dissociated human pulmonary mast cells. Evidence for solubilization of granule contents before discharge. // J. Cell. Biology. — 1980. — V.85. — P.299-311.

55. Chang L., Zhao J., Yang J., Zhang Z., Du J., Tang Z. Therapeutic effects of ghre-lin on endotoxic shock in rats. // Eur. J. Pharmacol. — 2003. — V.473, No.2-3. — P.171-176.

56. Chopra I. Clinical review 86: euthyroid sick syndrome: is it a misnomer? // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1997. — V.82, No.2. — P.329-334.

57. Crivellato E., Perissin N., Ribatti D. Ultrastructural morphology of adrenal chromaffin cells indicative of a process of piecemeal degranulation. // Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell. Evol. Biol. — 2003. — V.270, No.2. — P.103-108.

58. Crivellato E., Ribatti D. The mast cell: an evolutionary perspective. // Biol. Rev.2010. — V.85, No.2 — P.347-360.

59. Croner N., Hohenberger W., Jeschke M. Hepatic gene expression during en-dotoxemia. //J. Surg. Res. — 2009. — V. 154. No.l. — P. 126-134.

60. Csako G., Zweig M., Benson C., Ruddel M. On the albumin dependence of the measurement of free thyroxin. II. Patients with non-thyroidal illness. // Clin. Chem. 1987. V.33. No.l. P.87-92.

61. Dayan C., Panocker V. Novel insights into thyroid hormones from the study of common genetic variation. //Nat. Rev. Endocrinol. 2009. V.5. No.4. P.211-218.

62. De Forteza R., Banovac K., Koren E. // Effect of mast cell chimase on the morphology of thyroid cells in vitro. // Int. Arch. Allergy Immunol. — 1992. — V.99, No.l.1. P.133-140.

63. De Groot L. "Non-thyroidal illness syndrome" is functional central hypothyroidism, and if severe, hormone replacement is appropriate in light of present knowledge. // J. Endocrinol. Invest. — 2003. — V.26. P.l 163-1170.

64. De Groot L. Non-thyroidal illness syndrome is a manifestation of hypothalamic-pituitary disfunction, and in view of current evidence, should be treated with appropriate replasement therapies. // Crit. Care Clin. — 2006. — V.22, No. 1. — P.57-86.

65. De Jongh F., Jobsis A., Elte J. Thyroid morphology in lethal non-thyroidal illness: a post-mortem study. // Eur. J. Endocrinol. — 2001. — V.144. — P.221-226.

66. De Lloyd A., Bursell J., Gregory J., Rees D., Ludgate M. TSH receptor activation and body composition. // J. Endocrinol. — 2010. — V.204. — P. 13-20.

67. Derwahl M., Broecker M., Kraiem Z. Thyrotropin May Not Be the Dominant Growth Factor in Benign and Malignant Thyroid Tumors. // J. Clin. Endorinol. Metab. — 1999. — V.84. — P.829-834.

68. Di Nardo A., Vitiello A., Gallo R. Cutting edge: mast cell antimicrobial activity is mediated by expression of cathelicidin antimicrobial peptide. // J. Immunol. — 2003. — Vol.170. —P.2274-2278.

69. Dillman W. Biochemical basis of thyroid hormone action in the heart. // Am. J. Med. — 1990. — V.88. — P.626-639.

70. Docter R., Krenning E., de Jong M., Hennemann G. The sick euthyroid syndrome: changes in thyroid hirmone serum parameters and hormone metabolism. // Clin. Endocrinol. (Oxf). — 1993. — V.39. — P.499-518.

71. Dumont J., Lamy F., Roger P., Maenhaut C. Physiologigal and patological regulation of thyroid cell proliferation and differentiation by thyrotropine and other factors. // Physiological review. — 1992. — V.13. — P.596-611.

72. Dumont J., Maenhaut C, Pirson I, Baptist M, Roger PP. Growth factors controlling the thyroid gland. // Baillieres Clin. Endocrinol. Metab. — 1991. — V.5, No.4. — P.727-754.

73. Dumont IE. The action of thyrotropin on thyroid metabolism. // Vitam. Horm. — 1971. — V. 29. — P.287-412.

74. Dunn J. Thyroglobulin: chemistry and biosyntesis. In: The Thyroid. A fundamental and clinical text, edited by Braverman L., Utiger R. Philadelphia, PA: LippincottRaven, 1996. P.85-95.

75. Dvorak A. Human mast cells. In: Advances in anatomy, embryology and cell biology. //Berlin. Springer Verlag. — 1989. —V.l 14. — P. 1-107.

76. Eber B., Schumacher M., Langsteger W., Zweiker R.,Fruh\vald F., Poran R., Gasser R. Eber O., Klein W. Changes in thyroid hormone parameters after acute myocardial infarction. // Cardiology. — 1995. — Y.66, No.2. — V.152-156.

77. Eisenbarth S., Piggot D., Huleatt J. Lipopolysaccharide-enchanced, toll-like receptor-dependent T helper cell type 2 responses to inhaled antigen. // J. Exp. Med. — 2002.

78. V.196. No. 12. — P.1645-1651.

79. Ekholm R., Byorkman U. Thyroid structure and synthesis of thyreoglobulin. // Ann. Clin. Res. — 1972. — V.4. — P.64-69.

80. Ericson L. Exocytosis and endocytosis in the thyroid cell. // Mol. Cell. Endocrinol.1981. — V.22. — P.1-24.

81. Ericson L., Hakanson R., Melander A., Owman C., Sundler F. TSH-induced release of 5-hydroxitryptamine and histamine from rat thyroid mast cells. // Endocrinology.1972. — V.90, No.3. — P.795-801.

82. Essentials of glycobiology. 2nd edition. Ed. A. Varki et al. CSH Press.2009. 784pp.

83. Fisher D., Oddie T., Thompson C. Thyroidal thyronine and non-thyronine iodine secretion in euthyroid subjects. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1971. — V.33. — P.647.

84. Foster M., Montesino-Rodriguez E., Dorshkind K. Proliferation of bone marrow pro-B cells is dependent on stimulation by the pituitary/thyroid axis. // J. Immunol. — 1999. — V.163. — P.5883-5889.

85. Fritz R., Kletzien R. Regulation of glucoso-6phosphate dehydrogenase by diet and thyroid hormone. //Mol. Cell. Endocrinol. — 1987. — V.51. —P.13-17.

86. Galli S. New concepts about the mast cell. // The New England Journal of Medicine. — 1993. — V.328, No.4. — P.257-265.

87. Galton V., Schneider M., Clark A., St.Germain D. Life without T4 to T3 conversion: studies in mice devoid of the 5'-deiodinases. // Endocrinology. — 2009. —V.150, No.6. — P.2957-2963.

88. Gay N., Keith F. Drosophila Toll and IL-1 receptor. // Nature. —1991. V.351. — P.355-356.

89. Geier A., Fickert P., Trauner M. Mechanism of disease: mechanism and clinical implications of cholestasis in sepsis. // Nature reviews Gastroenterology and hepatology. — 2006. — V.3. — P.574-585.

90. Gerber H., Studer IT., von Grunigen C. Paradoxal effects of thyrotropin on diffusion of thyroglobulin in the colloid of rat follicles after long-term thyroxine treatment. // Endocrinology. — 1985. — V.116. — P.303-310.

91. Gharbi J., Torresani J. High affinity thyroxine binding to purified rat liver plasma membrane. // Biochim. Biophys. Res. Commun. — 1979. — V.88. —P.170-177.

92. Giraud A., Siffroi S., Lanet J., Mallet B., Franc J. Thyroglobulin binding to cell surfaces occurs through the acethylcholinesterase-homologous part of the molecule. // J. Endocrinol. Invest. — 1999. — V.22, suppl.6. —P.46.

93. Goldberg D. Structural, functional, and clinical aspects of gamma-glutamyltransferase. // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. — 1980. — V.12, No.l. — P. 1-58.

94. Gurish M., Austen K. The diverse roles of mast cells. // J. Exp. Med. — 2001. — V.194. — P.F1-F5.

95. Harbour D., Kruger T., Coppenhaver D., Smith E., Meyer W. Differential expression and regulation of thyrotropin in T cell lines. // Mol. Cell. Endocrinol. — 1989. — V.64. — P.229-241.

96. Harris A., Fang S., Vagenakis A., Braverman L. Effect of starvation, nutriment replacement, and hypothyroidism on in vitro hepatic T4 to T3 conversion in the rat. // Metabolism. —1978. — V.27, No. 11. — P. 1680-1690.

97. Hartoft-Nielsen M.-L. The influence of iodine and triiodothyronine on autoimmune thyroiditis and type I diabetes mellitus in rats and application of stereological tools on the thyroid gland of rats. // Dan. Med. Bull. —2006. — V.53, No.l. — P.83.

98. Herscovic J., Speyer C., Simples J. LPS enhancement of outward current in lung pericytes. // Lung. — 2002. — V.180, No.4. — P.215-220.

99. Horowitz B., Hensley C., Quintero M., Azumo K., Putman D., McDonough A. Differential regulation of Na,K-ATPase alpha 1, alpha 2, ans beta subunit mRNA and protein levels by thyroid hormone. // J. Biol. Chem. — 1990. — V.265. — P.143308-14314.

100. Hosoi Y., Murakami M., Mizuma H., Ogiwara T., Imamura M., Mori M. Expression and regulation of type II iodothyronine deiodinase in cultured human skeletal muscle cell. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1999. —V.84, No.9. — P.3293-3300.

101. Ikeda T., Funaba M. Altered function of murine mast cells in response to lipopoly-saccaride and peptidoglycan. // Immunol. Lett. — 2003. — V.88, No.l. — P.21-26.

102. Janssen O., Golher H., Grasberger H., Sailer B., Mann K., Refetoff S. Characterization of T4-binding globulin cleaved by human leukocyte elastase. // J. Clin. Endorinol. Metab. — 2002. — V.87, No.3. — P.1217-1222.

103. Jeremic A. Cell secretion: an update. // J. Cell. Mol. Med. — 2008. — V.12, No.4. —P.1151-1154.

104. Kaptein E. Clinical relevance of thyroid hormone alterations in nonthyroidal illness. // Thyroid International. — 1997. — V.4. — P.22-25.

105. Kaptein E. Thyroid hormone metabolism and thyroid diseases in chronic renal failure. // Endocr. Rev. — 1996. — V.17, No.l. — P.45-63.

106. Katsurada A., Iritani N., Fukada H. Effects of nutritients and hormones on transcriptional and posttranscriptional regulation of acetyl-CoA carboxylase in rat liver. // Eur. J. Biochem. — 1990. — V.190. — P.427-433.

107. Kihara S., Wolle J., Ehnholm C., Chan L., Oka K. Regulation of hepatic triglyc-erid lipase by thyroid hormone in HepG2 cells. // J. Lipid Res. // 1993. — V.34. — P.961-970.

108. Kim P., Arvan P. Calnexin and BiP act act as a sequential molecular chaperons during thyroglobulin folding in the endoplasmatic reticulum. // J. Cell. Biol. — 1995. — V.128. —p.29-38.

109. Kim P., Arvan P. Folding and assembly of newly synthesized thyroglobulin occurs in a pre-Golgi compartment. // J. Biol. Chem. — 1991. — V.266. — P.12412-12418.

110. Klein J. The immune system as a regulator of thyroid hormone activity. // Exp. Biol. Med. — 2006. — V.231. — P.229-236.

111. Klein J., Wang H. Characterization a novel set of resident intrathyroidal bone marrow-derived hematopoietic cells: potential for immune-endocrine interactions in thyroid homeostasis. // J. Exp. Biol. — 2004. — V.207. — P.55-65.

112. Kneer N., Lardy H. Thyroid hormone and dehydroepiandrosterone permit gluconeogenic hormone responses in hepatocytes. // Arch. Biochem. Biophys. — 2000. —-V.375. — P.145-153.

113. Kruger T. Immunomodulation of peripheral lymphocytes by hormones of the hy-pothalamo-pitutary- thyroid axis. // Adv. Neuroimmunol. — 1996. — V.6. — P.387-395.

114. Kruger T., Smith E., Harbour D., Blalock J. Thyrotropin: an endogenous regulator of the in vitro immune response. // J. Immunol. — 1989. — V.142. — P.744-747.

115. Kwakkel J., Chassande O., van Beeren H., Fliers E., Wiersinga W., Boelen A. Thyroid hormone receptor a modulates lipopolysaccharide-induced changes in peripheralthyroid hormone metabolism. // Endocrinology. — 2010. — V.151. — No.4. — P. 19591969.

116. Kwakkel J., Chassande O., van Beeren H., Wiersinga W., Boelen A. Lacking thyroid hormone receptor (3 gene does not influence alterations in peripheral thyroid hormone metabolism during acute illness// J. Endocrinol. — 2008. — V.197, No.l. — P.151-158.

117. Labhasetwar V. A milestone in science: discovery of the porosome the universal secretory machinery. // J. Biomed. Nanotechnol. — 2007. ■— V.3, No.2. — P.i-i(l).

118. Lagunoff D. Membrane fusion during mast cell secretion. // The Journal of Cell Biology. — 1973. — V.57. — P.252-259.

119. Landman R., Puder J., Xiao E., Freda P., Ferin M., Wardlaw S. Endotoxin stimulates leptin in the human and nonhuman primate. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2003. — V.88, No.3. — P.1285-1291.

120. Lanni A., Moreno M., Lombardi A. Control of energy metabolism by iodothyroni-nes. // J. Endocrinol. Invest. — 2001. — V.24. — P.897-913.

121. Lasa M., Gil-Araujo B., Palafox M., Aranda A. Thyroid hormone antagonizes tumor necrosis factor-a signaling in pituitary cells through the induction of dual phosphatase 1. // Mol. Endocrinology. — 2010. — V.24. —No.2. — P.412-422.

122. Leal-Berumen I., Conlon P., Marshal J. IL-6 production by rat peritoneal mast cells is not necessarily preceded by histamin release and can be induced by bacterial lipopolysaccharide. // J. Immunol. — 1994. — V. 152. — P.5468-5476.

123. Lee W., Berry M., Hediger M., Larsen P. The type I iodothyronine 5'-deiodinase mRNA is localized to S3 segment of the rat kidney proximal tubule. // Endocrinilogy. — 1993. — V.132, No.5. — P.2136-2140.

124. Lemansky P., Herzog V. Endocytosis of thyroglobulin is not mediated by man-nose-6-phosphate receptors in throcytes. Evidence for low-affinity binding sites operating in the uptake of thyroglobulin. // Eur. J. Biochem. — 1992. — V.209. — P. 111-119.

125. Lenarcie B., Krishnan G., Borukhovich R., Ruck B., Turk V., Moczydlowski E. Saxiphilin, a saxitoxin-binding protein with two thyreoglobulin type-1 domains, is an inhibitor of papain-like cystein. // J. Biol. Chem. — 2000. — V.275. — p.15572-15577.

126. Leonard J., Kohrle J. Intracellular pathways of iodothyronine metabolism. //iL1.:Braverman L., Utiger R. (eds) The Thyroid, 8 ed. Lippincot-Raven, Phipadelphia, 2000. —P.136-173.

127. Li L. Regulation of innate immunity signaling and its connection with human diseases. // Current drug targets-Inflammation and Allergy. — 2004. — No.3. — P.81-86.

128. Liewendahl K., Helenius T., Naveri H., Tikkanen H. Fatty acid-induced increase of serum dialyzable free thyroxine after physical exercise: implication for nonthyroidal illness. // J. Clin. Endorinol. Metab. — 1992. — V.74, No.6. — P. 1361-1365.

129. Malaviya R., Ross E., McGregor J., Ikeda T., et al. Mast cell phagocytosis of FimH-expressing enterobacteria. //J. Immunol. — 1994. — Vol.152. — P.1907-1914.

130. Maldonado S., Murata G., Fleishman J., Braunstein G. Do thyroid function tests independently predict survival in the critically ill? // Thyroid. — 1992. — V.2, No.2. — P.l19-123.

131. Malthiery Y., Lissitzky S. Primary structure of human thyreoglobulin deduced from the sequence of its 8448-base complementary DNA. // Eur. J. Biochem. — 1987. — V.165. — p.491-498.

132. Manole D, Schildknecht B, Gosnell B, Adams E, Derwahl M. Estrogen promotes growth of human thyroid tumor cells by different molecular mechanisms. J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2001. — V.86, No.3. — P. 1072-1077.

133. Marino M., Andrews D., McCluskey R. Binding of thyroglobulin to heparan sulfate proteoglycans. // Thyroid. — 2000. — V.10. — P.551-559.

134. Marino M., McCluskey R. Role of thyroglobulin endocytic pathways in the control of thyroid hormone release. // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. — 2000. — V.279. — P.C1295-C1306.

135. Masuda A., Yoshikai. Y., Matsuguchi T. Th2 cytokine production from mast cells is directly induced by lipopolysaccharide and distinctly regulated by c-Jun N-terminal kinase and p38 pathways. // J. Immunol. — 2002. — V.169. — P.3801-3810.

136. McCurdy J., Lin T.-J., Marshal J. Toll-like receptor 4-mediated activation of murine mast cells. // Journal of Leukocyte Biology. — 2001. — V.70. — P.977-984.

137. Mebis L., Paletta D., Debaveye Y., Ellger B., Langouche L., D'Hoore A., Darras V., Visser T., Van den Berghe G. Expression of thyroid hormone transporters during critical illness. // Eur. J. Endocrinol. — 2009. —- V.161, No.2. — P.243-250.

138. Melander A., Hakanson R., Westgren U., Owman C., Sundler F. Significance of thyroid mast cell in the regulation of thyroid activity. // Agents and Action. — 1973. — V.3, No.3. —P.186.

139. Mendel C., Laughton C., McMahon F., Cavalieri R. Inability to detect an inhibitor of thyroxine-serum protein binding in sera from patients with non-thyroidal illness. // Metabolism. — 1991. — V.40, No.5. — P.491-502.

140. Mendive F., Rivolta C., Moya C., Vassart G., Targovnic H. Genomic organization of the human thyreoglobulin gene: the complete exon-intron structure. // Eur. J. Endocrinol. — 2001. — V.145. — p. 485-496.

141. Modlinger G. Circadian rhythm of the thyroid mast cells in untreated and methyl-thiouracil-treated rats. // Folia Biol. — 1989. — V.37, No.3-4. — P. 155-164.

142. Molina F., Pau B., Granier C. The type-1 repeats of thyreoglobulin regulate thyreoglobulin degradation and T3, T4 release in thyrocytes. // FEBS Lett. — 1996. — V.391. —p.229-231.

143. Montuori N., Pacifico F., Mellone S., Liguoro D., Di Jeso B., Formisano S., Gentile F., Consiglio E. The rat asialoglycoside receptor binds the amino-terminal domain of thyroglobulin. // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2000. — V.268. —P.42-46.

144. Murr C., Widner B., Wirleitner B., Fuchs B. Neopterin as a marker for immune system activation. //Curr. Drug Metabol. — 2002. — V.3, No.2. — P. 175-187.

145. Nicola J., Velez M., Lucero A. , Fozzati L., Pellizas C., Masini-Repiso A. Functional Toll-Like Receptor 4 Conferring Lipopolysaccharide Responsiveness Is Expressed in Thyroid Cells. // Endocrinology. — 2009. — V.150. —No.l. — P. 500-508.

146. Nielsen E. A filamentous network surrounding secretory granules from mast cells. // Journal of Cell Science. — 1990. — V.96. — P.43-46.

147. Nilsson M. Iodide handling by thyroid epithelial cells. // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. — 2001. — V.109, No.l. — P.13-17.

148. Oqunkeye O., Roluga A. Serum cholinesterase activity helps to distinguish between liver disease and non-liver disease aberration in liver function tests. // Pathophysiology. — 2006. — V.13, No.2. — P.91-93.

149. Oren R., Resnick M., Brill S., Dotan I., Zaidel L., Lifshits-Mrecer B., Halpern Z. Thyroxine accelerates proliferation of injured liver cells. // J. Hepatol. — 1998. — V.29, No.4. — P.634-637.

150. Osburne R., Myers E., Rodbard D., Burman K., Georges L., O'Brien J. Adaptation to hypocaloric feeding: physiologic significance of the fall in serum T3 as measured by the pulse wave arrival time. // Metabolism. — 1983. —V.32, No.l. — P.9-13.

151. Paknikar K., Jeremic A. Discovery of the cell secretion machinery. // J. Biomed. Nanotechnol. — 2007. — V.3. — P.218-222.

152. Peeters R. Reduced activation and increased inactivation of thyroid hormone in tissues of critically ill patients. // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2003. — V.88. — P.229-233.

153. Perella M., Hsyien H., Lee W., Shien S., Tsai J., Pattwrson C., Lowenstein C., Long N., Haber E., Shore S., Lee M. Arrest of endotoxin-induced hypotension by transforming growth factor p. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1996.-V.93. P.2054-2059.

154. Persijin J., van der Silk W. A new method for the determination of gamma-glutamiltransferase in serum. // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. — 1976. — V. 14. — P.421-427.

155. Phillips R., Valente W., Caplan E., Connor T., Wisswell J. Circulating thyroid hormone changes in acute trauma: prognostic implications for clinical outcome. // J. Trauma. — 1984. — V.24. — P. 116-119.

156. Pibiri M., Ledde-Columbano G., Cossu C., Simbula G., Menegazzi M., Shinozuka H., Columbano A. Cyclin D1 is an early target in hepatocyte proliferation induced by thyroid hormone (T3). // FASEB J. — 2001.— V. 15. — P. 1006-1013.

157. Ping-Chang Y., Peng-Yuan Z., Chang-Sheng W. Lipopolysaccaride activates human mast cells to induce intestinal epithelial barrier dysfunction. //The Internet Journal of Gastroenterology. — 2005. — V.4, No.3. — P.l-14.

158. Provinciali M., Di Stefano G., Fabris N. Improvement in the proliferanive capacity of natural killer cell activity of murine spleen lymphocytes by thyrotropin. // Int. J. Im-munopharmacol. — 1992. — V. 14. — P. 865-870.

159. Puzanowska-Kuznicka M., Pietrzak M., Turowska O., Nauman A. Thyroid hormones and their receptors in the regulation of cell proliferation. // Acta Biochimica Polo-nica. — 2006. — V.53, No.4. — P.641-650.

160. Rasmussen A. Cytokine actions oh the thyroid gland. // Dan. Med. Bull. — 2000.1. V.47. — No.2. — P.94-114.

161. Reidemann N., Guo R., Neff T. Increased C5a receptor expression in sepsis. // J. Clin. Invest. — 2002. — V.l 10. — P.101-108.

162. Reilly C., Wellby M. Slow thyroxine binding globulin in the pathogenesis of increased dyalizable fraction of thyroxine in nonthyroidal illness. // J. Clin. Endorinol. Me-tab. — 1983. —V.57, No.l. — P.15-18.

163. Reizman H., Woodman P., van Mear G., Marsh M. Molecular mechanisms of en-docytosis. // Cell. — 1997. — V.91. — P.731-738.

164. Rohrer D., Dillmann W. Thyroid hormone markedly increases the mRNA coding for sarcoplasmatic reticulum Ca2+ATPase in rat heart. // J. Biol. Chem. —1989. — V.263. — P.6941-6944.

165. Rosner W., Hryb D., Khan M. Sex hormone-binding globulin mediates steroid hormone signal transduction at the plasma membrane. // J. Steroid Biochem. Mol. Biol.1999. — V.69. — P. 481-485.

166. Rousset B., Mornex R. The thyroid hormone secretory pathway current dogmas and alternative hypoteses. // Mol. Cell. Endocrinol. — 1991. — V,78. — P.89-93.

167. V.139, No.5. — P.2229-2234.

168. Scofield V., Montufar-Solis D., Cheng E., Estes M., Klein J. Intestinal TSH production is localized in villus "hotblocks" and is coupled to IL-7 production. // Immunol. Lett. — 2005. — V.99. — P.36-44.

169. Segal J., Ingbar S. Stimulation by triiodothyronine of the in vitro uptake of sugars by rat thymocytes. // J. Clin. Invest. — 1979. — V.63. — P.507-515.

170. Seljelid R., Reith A., Nakken K. The early phase of endocytosis in rat thyroid follicle cells. // Lab. Invest. — 1970. — V.23. — P.595-605.

171. Sestoft L. Metabolic aspects of the calorigenesis effect of thyroid hormones in mammals.// Clin. Endocrinol. — 1980. — V.13. — P.489-506.

172. Shimazu R., Akashi S., Ogata H., Nagai Y., et al. MD-2, a molecule confers lipopolysaccharide responsiveness on Toll-like receptor 4. // J. Exp. Med. — 1999. — V.189. — P.1777-1782.

173. Simonet W., Ness G. Transcriptional and posttranscriptional regulation of rat hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase by thyroid hormones. // J. Biol. Chem. — 1988. — V.263. — P.12448-12453.

174. Spindler B., McLeod K., Ring J. Thyroid hormone receptors: binding characteristics and lack of hormonal dependency for nuclear localization. // J. Biol. Chem. — 1975. — V.250.—P.4113-4119.

175. Spiro M. Presence of a glucuronic acid-containing carbohydrate unit in human thyroglobulin. // J. Biol. Chem. — 1977. — V.252. — P.5224.

176. St.Germain D., Galton V. The deiodinases family of selenoproteins. // Thyroid. — 1997. — No.7. — P.655-668.

177. St.Germain D., Galton V., Hernandez A. Defining the roles of iodothyronine deiodinases: current concepts and challenges. // Endocrinology. — 2009. — V.150, No.6. — P.1097-1107.

178. Stapleton S., Mitchell D., Salati L., Goodridge A., Triiodothyronine stimulates transcription of the fatty acid syntase gene in chick embryo hepatocytes in culture. // J. Biol. Chem. — 1990. — Y.265. — P. 18442-18446.

179. Supajatura V., Ushio H., Nakao A., Akira S., et al. Differential responses of mast cell Toll-like receptors 2 and 4 in allergy and innate immunity. //J. Clin. Invest. — 2002.1. V.109,Nol0.— P.1351-1359.

180. Takaya K., Nakao K. Alterations of plasma ghrelin levels in rats with lipopolysac-charide induced wasting syndrome and effects of ghrelin treatment on the syndrome. // Endocrinology. — 2003. — V.144, No.12. — P.5365-5371.

181. Takeuchi O., Takeda K., Hoshino K., Adachi O., et al. Cellular responses to bacterial cell wall components are mediated through MyD88-dependent signaling cascades. // Int. Immunol. — 2000. — No.12. — P. 113-117.

182. Taurog A. Hormone synthesis: thyroid iodine metabolism. In: The Thyroid. A fundamental and clinical text, edited by Braverman L., Utiger R. Philadelphia, PA: Lippincott-Raven, 1996. P.47-81.

183. Thomas G., Mains C., Slone D., Craun M., Bar-or D. Potentional disregulation of the pyruvate dehydrogenase complex by bacterial toxins and insulin. // J. Trauma. — 2009. — V.67, No.3. — P.628-633.

184. Thompson S., Franklyn J., Watkinson J., Verhaeg J., Sheppard M., Eggo M. Fibroblast growth factor 1 and 2 and fibroblast growh factor receptor 1 are elevated in thyroid hyperplasia. // J. Clin. Endorinol. Metab. — 1998. —V.83. —P.1336-1341.

185. Tigelaar R., Vaz N. Ovary Z. Immunoglobuline receptors on mouse mast cells. J. Immunol. — 1971. — V. 106. — P.611.

186. Van Oosten M., van de Bilt E., van Berkel T., Kuiper J. New Scavenger ReceptorLike Receptors for the Binding of Lipopolysaccharide to Liver Endothelial and Kupffer Cells. // Infect Immun. — 1998. — V.66, No. 11. — P. 5107-5112.

187. Vassart G, Dumont JE. The thyrotropin receptor and the regulation of thyrocyte function and growth. // Endocrine Rev. — 1992. — V.13. — P.596-611.

188. Vella V., Pandini G., Sciacca L., Mineo R., Vigneri R., Pezzino V. A novel autocrine loop involving IGF-II and the insulin receptor isoform-A stimulates growth of thyroid cancer. // J. Clin. Endorinol. Metab. — 2002. —V.87, No.2. — P.245-254.

189. Visser T. Thyroid hormone transport by monocarboxylate transporters. // Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab. — 2007. — V.21, No.2. — P.223-236.

190. Visser W., Friesema E., Jansen J., Visser T. Thyroid hormone transport in and out of cells. // Trends in Endocrinology and metabolism. — 2008. —V.19,No.2. — P.50-56.

191. Warner M., Beckett G. Mechanism behind the non-thyroidal illness syndrome: an update. //J. Endocrinol. — 2010. — V.205. — P. 1-13.

192. Wartofsky L. Burman K. Alterations in thyroid function in patients with systemic illness: The "Euthyroid sick syndrome". // Endocrine Rev. — 1982. — V.3, No.2. — P.164-217.

193. Weinstein S., Haber R. Differential regulation of glucose transporter isoforms by thyroid hormone in rat heart. // Biochim. Biophys. Acta. 1992. - V.l 136.- P.302-308.

194. Welch T., Frenzke M., Witte D., Davis A. C5a is important in the tubulointestinal component of experimental immune complex glomerulonephritis. // Clin. Exp. Immunol. — 2002. — V.130,No.l. — P.43-48.

195. Wetzel B., Spicer S., Wollman S. Changes in fine structure and acid phosphatase localization in rat thyroid cells following thyrotropin administration. // J. Cell. Biol. — 1965. —V.25. —P.593-618.

196. Wexler H, Oppenheim J. Isolation, characterization, and biological properties of an endotoxin-like material from the gram-positive organism Listeria monocytogenes. // Infect. Immun. — 1979. — V.23, No.3. — P.845-857.

197. Williams G., Franklyn J., Neuberger J., Scheppard M. Thyroid hormone receptor expression in the "euthyroid sick" syndrome. // Lancet. —1989. — No.2(8678-8679). — P.1477-1481.

198. Wrutniak-Cabello C., Casas F., Cabello J. Thyroid hormone action in mitochondria. //J. Mol. Endocrinol. — 2001. —V.26, No.l. — P.67-77.

199. Yamamoto M., Sato S., Hemmi H., Hoshino K. Role of adapter TRIF in the MyD88-independent Toll-like receptor pathway. // Science. 2003. -V.301. -P.640-643.

200. Yamamoto M., Sato S., Hemmi II., Sanjo H., et al. Essential role for TIRAP in activation of the signaling cascade shared by TLR2 and TLR4. // Nature. — 2002. — V.420. P.324-329.

201. Yamamoto M., Sato S., Hemmi H., Uematsu S., Hoshino K., et al. TRAM is specifically involved in the Toll-like receptor-4 mediated MyD88-independent pathway. // Nat. Immunol. — 2003. — V.4. — P. 1144-11850.

202. Yang S., Pollock H., Rawitch A. ulycosylation in human thyroglobulin: location of the N-Iinked oligosahharide units and comparison with bovine thyroglobulin. // Arch. Biochem. Biophys. — 1996. — V.327. — p.61-70.

203. Yoshioka M., Fukuishi N., Kubo Y., Yamanobt H., et al. Human cathelicidin CAP18/LL-37 changes mast cell function toward innate immunity. // Biol. Pharm. Bull. — 2008. — Vol.31, N2. — P.212-216.

204. Yu J., Koenig R. Induction of type I iodothyronine deiodinase to prevent the nonthyroidal illness syndrome in mice. // Endocrinology. — 2006. — V.147, No.7. — P.3580-3585.

205. Yu J., Koenig R. Regulation of hepatocyte thyroxine 5'-deiodinase by T3 and nuclear receptor coactivators as a model of euthyroid sick syndrome. // J. Biol. Chem. — 2000. — V.275, No.49. — P.38296-38301.

206. Zhang W., Tian L., Han Y., Ma H., Wang L., Guo J.„ Gao L., Zhao J. Presence of thyrotropin receptor in hepatocytes: not a case of illegimate transcription. // J. Cell. Mol. Med. — 2009. — V.13, No.l 1-12. — P.4636-4642.