Морфологические основы радиационной устойчивости соединительнотканных трансплантатов

Шангина, Ольга Ратмировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфологические основы радиационной устойчивости соединительнотканных трансплантатов
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические основы радиационной устойчивости соединительнотканных трансплантатов"

□ОЗОББЗЭИ

На правах рукопиби^

Шангина Ольга Ратмировна

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ РАДИАЦИОННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ СОЕДИНИТЕЛЬНОТКАННЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Саранск - 2007

003055396

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Уфа)

Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор

Рафик Талгатович Нигматуллин

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор

Александр Сергеевич Земкин

Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Александр Абрамович Стадников

Доктор медицинских наук, профессор Ирина Петровна Степанова

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет»

Защита диссертации состоится «¿¿» 2007 г.

на заседании диссертационного совета Д ^12.117.01 в ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Автореферат разослан « /¿г » ¿уЬ/*?? 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук,

профессор Владимир Павлович Балашов

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Современную восстановительную хирургию трудно представить без тканевых трансплантатов, с использованием которых выполняются многие реконструктивные операции. Тканевые трансплантаты, используемые для пересадок, согласно международной терминологии трансплантации тканей, принятой в г. Вене в 1967 году, определяются как ауто-, алло- и ксенотрансплантаты (Коваленко П.П., 1975). Оптимальные результаты операций достигаются с применением аллогенных трансплантатов, или биоматериалов", вследствие того, что они вызывают наименьшую иммунную реакцию и стимулируют процессы репаративной регенерации тканей (Salamon A., Hamori J., 1977; Versen R. et.al., 1990; Bujía J. et. al., 1993; Muldashev E.R. et. al., 1999). Известно, что консервированные трансплантаты нежизнеспособны и после пересадки лизируются и замещаются новообразованной тканью реципиента (Seiffert К.Е., 1967; Коваленко П.П., 1975; Мулдашев Э.Р. и соавт., 1978). Подбирая для трансплантации ткани с различной фиброархитектоникой, физико-механическими свойствами и гистохимическим составом, можно прогнозировать свойства регенерата, замещающего пересаженный биоматериал (Мулдашев Э.Р., 1994; Нигматуллин Р.Т., 1996; Muldashev E.R. et al., 1999; Муслимов С.А, 2000).

В настоящее время, для обеспечения возросших потребностей лечебных учреждений в тканевых трансплантатах, во многих странах созданы специализированные тканевые банки, занимающиеся заготовкой, консервацией и стерилизацией кадаверных тканей. В тканевых банках Польши, Германии, Чехии, Бельгии, Франции, США и других стран производится заготовка таких соединительнотканных трансплантатов, как кости, сухожилия, хрящ, твердая мозговая оболочка. Все известные методы физико-химической обработки и консервации направлены на снижение антигенных свойств биоматериалов, при сохранении их коллагенового каркаса. При оптимальном методе физико-химического воздействия, трансплантаты должны иметь свободную от клеток волокнистую структуру (Beigel А. et.al., 1991; Davies А.Н., Parums D.V., 1992; Allaire E. et.al.,1994).

* Развитие технологий тканевых пересадок привело к созданию трансплантатов с модифицированной структурой и гистохимическим составом При их консервации и стерилизации происходит структурная перестройка, а также изменение гистохимического состава Многие авторы для определения подобных трансплантатов используют термин «биоматериал» В данной работе оба термина «биоматериалы» и «трансплантаты» используются нами как синонимы

1984; Туманян М.А., 1989; Пономарев В.Н. и соавт., 1993; РгиББ А., Ваишапп В., 8е1Ьо!с1 М. е1 а1. 2001). Высокая бактерицидная активность и большая проникающая способность радиационного излучения делают этот метод стерилизации наиболее перспективным по сравнению с другими методами. Поиск оптимальных радиационных технологий продолжается, при этом результаты исследований ведущих тканевых банков России и Европы во многом отличаются и нередко противоречат друг другу (Савельев В.И., 2001; Лекишвили М.В., 2005; БиесЫс-Оос^зка А., 2000; Уеггеп Я., 2003). Теоретическая разработка проблем радиационной стерилизации в практике тканевых банков существенно отстает от интенсивно развивающейся клинической и экспериментальной трансплантологии. Стандарты, регламентирующие дозы радиационной стерилизации, разработанные в России и Европейской ассоциации тканевых банков (ЕАТВ), не учитывают структурных особенностей самих биологических тканей и методов их консервации. Радиационная стерилизация часто приводит к нежелательным структурным изменениям в биоматериалах (Ве1коГГ Б.М., 1992; Во§с1ап5ку Б. е1;.а1., 2004; ОгшсЫс-Соёахузка А. е1.а1., 2004). Выбор вида и дозы облучения для стерилизации - это компромисс между радиационным воздействием, необходимым для инактивации микроорганизмов, и сохранением структуры биоматериалов. Поэтому необходимо оптимальное сочетание методов обработки и стерилизации для максимального сохранения биологических свойств биоматериалов. Речь идет о таких свойствах соединительнотканных трансплантатов, как иммуногенность, способность стимулировать процессы ре-паративной регенерации, физико-механические свойства, которые в значительной степени определяют результаты их применения в клинической практике. Научная разработка технологии консервации и стерилизации ал-логенных трансплантатов, позволяющей сохранить весь указанный спектр биологических свойств, является одной из наиболее актуальных проблем современной трансплантологии и восстановительной хирургии (Лекишвили М.В., 2001; Савельев В.И, 2001). На сегодняшний день отсутствует единая теория радиационной устойчивости биоматериалов, которая учитывала бы их структуру, гистохимический состав, метод консервации и цель трансплантации. В этой связи весьма перспективной представляется разработка таких методов радиационной стерилизации, которые, с одной стороны гарантировали бы полную стерильность биоматериалов, а с другой - сохранение их биологических свойств.

Цель исследования: выявить факторы, определяющие радиационную устойчивость различных по структуре соединительнотканных биоматериалов и разработать методы селективной радиационной стерилизации, сохраняющие их фиброархитектонику, физико-механические свойства и способность стимулировать процессы регенерации.

Задачи исследования:

1. Исследовать радиационную устойчивость соединительнотканных биоматериалов с различной фиброархитектоникой.

2. Изучить структуру и физико-механические свойства биоматериалов после физико-химической обработки и радиационной стерилизации в различных режимах и дозах.

3. Изучить особенности резорбции и замещения радиационно-стерилизованных биоматериалов при экспериментальной имплантации.

4. Исследовать инициальную контаминацию биоматериалов на различных стадиях физико-химической обработки и стерилизации.

5.Разработать комплекс адекватных морфологических методов для контроля структурных изменений соединительнотканных биоматериалов после радиационной стерилизации.

6. Разработать методические рекомендации для тканевых банков по радиационной стерилизации соединительнотканных биоматериалов с целью сохранения их биологических свойств.

Научная новизна

Впервые предложена концепция, согласно которой радиационная устойчивость соединительнотканных биоматериалов зависит от эндогенных и экзогенных факторов, а именно - особенности фиброархитектопики и состава неколлагеновых компонентов тканей, химической и физической обработки, вида и дозы радиационного воздействия.

Установлено, что наибольшее деструктивное воздействие на соединительнотканные биоматериалы оказывает стерилизация потоком быстрых электронов, а наименьшее - стерилизация гамма-излучением.

Впервые показано, что лиофилизация оказывает выраженное модифицирующее действие на фиброархитектонику соединительнотканных трансплантатов, что приводит к снижению их прочностных свойств и радиорезистентности.

Разработаны и внедрены новые подходы к радиационной стерилизации тканей, которые позволят прогнозировать возможные деструктивные изменения биоматериалов и использовать селективные методы их стерилизации.

Практическая значимость и внедрение результатов работы

Разработана и предложена для внедрения в практику тканевых банков технология селективной радиационной стерилизации соединительнотканных биоматериалов, позволяющая сохранять их структуру, физико-механические свойства и способность стимулировать регенераторные процессы.

щее время смонтирован на базе тканевого банка Всероссийского центра глазной и пластической хирургии и используется для стерилизации соединительнотканных биоматериалов. Указанная радиационная установка и технология лучевой стерилизации биоматериалов представляют собой непосредственный результат научных исследований данной диссертационной работы.

В настоящее время биоматериалы, прошедшие радиационную стерилизацию по разработанной технологии, поставляются в 378 клиник России и стран СНГ. Трансплантаты прошли обязательные в России токсикологическую экспертизу и процедуру экспериментальных и клинических испытаний при Комитете по новой медицинской технике МЗ РФ (протокол испытаний № 5610, 5611 от 01.12.2005 г. ИЛ ФГУ «ВНИИМТ») и сертифицированы (Регистрационное удостоверение № ФС 01033584/3159-06; Сертификат соответствия № РОСС 1Ш.ИМ 02.В13996; ТУ 42-2-537-2002) Технология изготовления биоматериалов защищена патентом.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Радиационная устойчивость соединительнотканных биоматериалов зависит от нескольких факторов: фиброархитектоники донорских тканей, состава неколлагеновых компонентов, способа физико-химической обработки, типа и дозы радиационного воздействия.

2. В соединительнотканных биоматериалах можно выделить три уровня структурной стабильности, которые характеризуются определенной фибро-архитектоникой и обусловливают степень их радиорезистентности.

3.Наименьшей радиационной устойчивостью обладают биоматериалы с фиброархитектоникой, характерной для первого уровня структурной стабильности, а наибольшей - биоматериалы с третьим уровнем стабильности и высоким содержанием неколлагеновых компонентов.

4. Диапазон радиационной устойчивости соединительнотканных биоматериалов позволяет варьировать видами и дозами ионизирующего излучения и определить оптимальный режим для каждого вида биоматериала.

Апробация работы

ских структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» (Оренбург, 2003г.); на XII Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Брюгге, Бельгия, 2003г.); на VII Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Казань, 2004г.); на XVII Международном Конгрессе Всемирной Ассоциации анатомов (Киото, Япония, 2004г.); на II Всероссийском Симпозиуме «Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий» (Самара, 2004г.); на

XIII Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Прага, Чехия, 2004г.); на XV Российской научно-практической конференции «Новые технологии микрохирургии глаза» (Оренбург, 2004г.); на

XIV Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Флоренция, Италия, 2005г.); на Российской научной конференции «Новое в экспериментально-морфологическом изучении глаза» (Оренбург, 2005г.); на Всероссийской научной конференции «Вопросы морфологии» (Уфа, 2006г.); VIII Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Орел, 2006г.); Юбилейном пленуме правления ВНОАГЭ (Москва, 2006г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 47 научных работ, из них 9 статей в центральной печати и 1 монография. Получены авторские свидетельства на 6 патентов РФ и 1 полезную модель.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 276 страницах машинописного текста и состоит из введения; обзора литературы; четырех глав собственных исследований, включающих материалы и методы для каждой главы; обсуждения полученных результатов и выводов. Список литературы содержит 350 источник, из них 165 отечественных и 185 зарубежных. Работа включает 38 таблиц; иллюстрирована 180 рисунками, обобщающими 175 микрофотографий и 28 графиков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал для исследования был получен от 151 трупа людей обоего пола, скоропостижно скончавшихся в возрасте от 20 до 55 лет. Трансплантаты были изготовлены из различных анатомических структур: сухожилий под-вздошно-реберной мышцы, фиброзной капсулы почки, подкожной жировой клетчатки и дермы опорных участков стопы, реберного хряща.

Забор донорских тканей проводили в чистых, но не стерильных помещениях. Механическая обработка тканей заключалась в очистке материала от остатков мышечной ткани, крови и жира. Далее, в зависимости от физико-химической обработки, все ткани делились на группы. Первая группа -это нативные ткани, т.е. ткани, не прошедшие какую-либо физико-химическую обработку. Вторая группа - это нативные ткани, подвергнутые процессу лиофилизации. Для получения лиофилизированных биоматериалов исходные биологические ткани замораживали в криогенной камере до -45°С и высушивали под вакуумом (остаточное давление 10 мТорр) при помощи лиофильной сушки Dry Winner DW-6, (Heto Holten, Дания).

В третьей группе донорские ткани обрабатывали и консервировали по технологии Аллоплант, разработанной во Всероссийском Центре глазной и пластической хирургии г. Уфы (патент РФ №2189257). Данная технология заключается в следующем - донорский материал подвергали многоступенчатой физико-химической обработке, которая позволяет достигнуть мем-бранолиза и способствует экстракции наиболее иммуногенных компонентов тканей, с сохранением коллагенового каркаса. На первом этапе алло-генные соединительнотканные материалы подвергали механической очистке от крови, остатков прилегающих тканей и посторонних загрязнений и промывали под проточной водой в течение 15-30 минут. На втором этапе ткани последовательно обрабатывали растворами детергентов (додецил-сульфатом натрия, цетилперидиния хлоридом и Тритоном Х-100), с промежуточным многократным ополаскиванием в 0,9% растворе натрия хлорида. Время экспозиции и концентрации растворов подбирали индивидуально, в зависимости от вида обрабатываемой ткани и ее первоначального биохимического состава. Следующий этап заключался в обезжиривании ткани, коагулировании и экстрагировании из ее матрикса остаточных белков с помощью рассчитанных количеств диэтилового эфира и этилового спирта в течение 1 - 5 часов. Затем, после полного удаления органических растворителей, обработанные ткани консервировали в 70% этиловом спирте.

И четвертая группа - это ткани, прошедшие химическую обработку по технологии Аллоплант, а затем лиофилизированные указанным выше методом.

Радиационную стерилизацию полученных соединительнотканных трансплантатов проводили с помощью радиационно-технологического комплекса на базе линейного ускорителя электронов Л У-10-20, разработанном и изготовленном в Российском Федеральном Ядерном центре

(г.Саров). Для стерилизации исследуемых биоматериалов применяли два вида излучения - поток быстрых электронов и тормозное (гамма) - излучение. Образцы облучали до уровней в 15; 25; 40 и 60 кГр при разном темпе набора доз. Для электронного излучения - 5 кГр/сек., для тормозного излучения - 0,0033 кГр/сек. Продолжительность стерилизации зависела от вида и дозы излучения. Облучение потоком быстрых электронов проходило следующим образом: дозой 15 кГр в течение 3 секунд, дозой 25 кГр - 5 секунд, 40 кГр - 8 секунд, 60 кГр - 12 секунд. Стерилизация гамма-излучением дозой 15 кГр прод^жалось 1 час 25 минут, дозой 25 кГр - 2 часа 10 минут, дозой 40 кГр - 3 часа 30 минут, дозой 60 кГр - 5 часов. Все образцы облучали однократно. В качестве контроля использовали ткани, не подвергнутые радиационному воздействию.

Для исследования структурных изменений, происходящих в соединительнотканных биоматериалах после воздействия ионизирующего излучения использовали комплекс морфологических методов.

Гистологические срезы биоматериалов окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван Гизону, по Вейгерту и орсеином по методу Унна-Тенцера. Микроскопические исследования проводили с использованием световых микроскопов JENAVAL и АХЮ IMAGER - ZI (С. Zeiss, Германия).

Изучение фиброархитектоники биоматериалов проводили с использованием способа количественного поляризационно-оптического анализа. Проводили поляризационную микроскопию неокрашенных гистологических срезов толщиной 10 мкм с использованием микроскопа МИН-8 и цифровой фотонасадки Nicon Coolpix 4500 при скрещенных фильтрах. Полученные микрофотографии обрабатывали с помощью лицензионной программы Biovision Professional («Westmedica», Австрия). Производили измерение площади оптически активных объектов препарата по показателям двойного лучепреломления. В данной программе производили расчет отношения площади оптически активных объектов к общей площади выбранного участка. Затем обработанные данные переводили в программу Statistica 5.5. для построения графиков.

Для изучения структуры волокнистого остова биоматериалов использовали также метод импрегнации нитратом серебра по Минигазимову P.C. (Патент РФ № 2270446 «Способ исследования рельефа поверхностей гистологических препаратов»). Суть метода заключается в импрегнации препаратов серебром с его полным восстановлением, что придает светоотра-жательную способность всем импрегнированным структурам. Препараты исследовали с помощью микроскопа AMPLIVAL (С. Zeiss, Германия) с темнопольным эпиобъективом, позволяющим визуализировать объемную картину рельефа поверхности препаратов.

Для исследования ультраструктурных изменений использовали метод сканирующей электронной микроскопии. Подготовка образцов включала обезвоживание их в спиртах возрастающих концентраций, обезжиривание в ацетоне и высушивание с последующим напылением слоем платины в ион-

но-распылительной установке (Волкова О.В. с соавт., 1987). Образцы приклеивали на столики токопроводящим клеем и исследовали с помощью микроскопа JSM-840 (Jeol, Япония).

Физико-механическим испытаниям подвергали трансплантаты сухожилия, дермы и гиалинового хряща. Выбор указанных тканей обусловлен необходимостью сохранения пластических свойств последних. Изучение прочностных характеристик данных трансплантатов проводили на универсальной машине для испытания прочностных свойств материалов модели 1185 Instron (Англия). Диапазон нагрузок от 0 до 100 H (ньютонов), скорость перемещения траверсы от 0,005 до 250 мм/мин. Перед исследованиями механических свойств трансплантатов дермы, из них изготавливали образцы, имеющие стандартную рабочую часть и усиленные концевые фрагменты (Заславский Б.В. 1986). Начальная длина и ширина рабочей части у разных образцов равна соответствующим параметрам штампа, а толщину в каждом случае определяли микрометром. Трансплантаты сухожилия расщепляли на ленты размером 5ммХ50 мм, толщину определяли микрометром. Из трансплантатов гиалинового хряща изготавливали образцы в форме куба размерами ЮммХЮмм. Полученные образцы подвергали одноосному линейному растяжению (сжатию) с графической регистрацией диаграмм зависимости деформация-напряжение, по которым определяли основные механические параметры: предел прочности, модуль упругости, относительное удлинение. Прочностные свойства трансплантатов испытывали при постоянной скорости деформации -1 мм/сек.

Для оценки эффективности радиационной стерилизации проводили бактериологические исследования изучаемых биоматериалов. Исследовали инициальную контаминацию как нативных, так и подвергнутых физической и химической обработке трансплантатов до и после радиационной стерилизации различными видами и дозами ионизирующего излучения.

Контроль стерильности проводили с использованием: 1) плотных питательных сред - агар Хоттингера, МПА; 2) жидких питательных сред: Тио-гликолевая (для контроля стерильности), Сабуро (для выявления грибной флоры), Китта-Тароцци (для роста анаэробов).

Жизнеспособность бактерий определяли по критерию образования макроколоний на твердом питательном агаре. Количественный учет микроорганизмов проводили капельным методом. Обсемененность трансплантатов определяли также методом мембранной фильтрации. Расчет инициальной контаминации вели на 1 см2 поверхности образца.

Контроль стерильности проводили в специальных условиях, предусмотренных приказом Минздрава СССР № 964/410 от 17.09.79г. (О проведении контроля стерильности радиационно-стерилизованной медицинской продукции).

Экспериментальные исследования по имплантации сухожильных трансплантатов с различной степенью сохранности волокнистого остова

проводили на 56 крысах породы Вистар обоего пола массой от 0,18 до 0,2 кг и на 46 кроликах породы Шиншилла обоего пола массой от1,5 до 2 кг. Исследования выполняли с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных». Под тиопентаповым наркозом (тиопентал натрия ЗОмг/кг + 5% кетамина гидрохлорид - 1мл - внутримышечно) животным производили надрез на коже бедра. Сухожильный трансплантат (0,5X0,5 см) помещали внутрь дефекта и фиксировали одним узловым швом к подлежащим мышцам. Накладывали швы на рану. Через 7, 30, 90 и 120 суток-после операции животных выводили из опыта передозировкой наркоза. Для крыс использовали ингаляционный эфирный наркоз. Для гистологического исследования забирали имплантированный трансплантат с окружающими тканями. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону. Микроскопические исследования проводили с использованием световых микроскопов JENAVAL (С. Zeiss, Германия) и MC -50 (MICROS, Австрия).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящей работе нами проведен сравнительный анализ структурных и прочностных изменений, происходящих в соединительнотканных биоматериалах при различных видах и дозах радиационного воздействия с учетом технологии их изготовления.

В качестве объекта исследования были выбраны аплогенные трансплантаты, различные по фиброархитектонике, прочностным свойствам и составу неколла-геновых компонентов, а также наиболее востребованные в клинической практике: сухожилия, дерма, фиброзная капсула почки, подкожная жировая клетчатка и хрящ. Указанный спектр исследуемых разновидностей соединительной ткани необходим для выявления общих закономерностей, характеризующих устойчивость биоматериалов к действию радиационной стерилизации.

На первом этапе исследований изучаемые соединительнотканные биоматериалы подвергались физической и химической обработке. Все известные методы физико-химической обработки и консервации направлены на снижение антигенных свойств биоматериалов, при сохранение их коллагенового каркаса. При оптимальном методе физико-химического воздействия, трансплантаты должны иметь свободную от клеток волокнистую структуру (Davies А.Н., Parums D.V., 1992, Allaire Е. 1994). Вполне понятно, что физическая и химическая обработка донорских тканей могут повлиять на структуру трансплантатов. Поэтому одной из задач нашего исследования являлось изучение структурных особенностей всех вышеперечисленных тканей, как в нативном виде, так и после физической и химической обработки.

Проведенные нами исследования позволили сделать следующее заключение. Обработка химическими детергентами по технологии Аллоплант максимально сохраняет структуру волокнистого остова исследуемых соединительнотканных биоматериалов, что подтверждают данные морфологических исследова-

ний. В то же время, процесс лиофилизации приводит, в большинстве случаев, к изменениям структуры биоматериалов в виде расщепления пучков коллагено-вых волокон и увеличения межпучковых пространств. Модификация волокнистого остова исследуемых трансплантатов с формированием ячеистых структур наблюдается у трансплантатов сухожилия и фиброзной капсулы почки. В структуре трансплантатов подкожной жировой клетчатки, подвергнутых лиофилизации, происходит расщепление пучков колпагеновых волокон стромы. Сохранность структуры после воздействия физической обработки наблюдалась у трансплантатов дермы и гиалинового хряща.

Следующим технологическим этапом изготовления трансплантатов является процесс стерилизации. Для стерилизации соединительнотканных трансплантатов использовали радиационное воздействие потоком быстрых электронов и тормозным (гамма) излучением дозами 15,25,40 и 60 кГр.

Проведение серии экспериментов по изучению эффекта радиационного воздействия потока быстрых электронов и гамма-излучения на микроорганизмы демонстрирует высокую степень надежности данного способа стерилизации биологических материалов, предназначенных для трансплантации.

Результаты бактериологических исследований показали, что минимальная стерилизующая доза, необходимая для создания бактериальной безопасности соединительнотканных трансплантатов, составляет 15 кГр. Данная доза соответствует наименьшей дозе ионизирующего излучения для медицинских изделий, обеспечивающей достижение уровня стерильности 10"6 (Туманян М.А., Каушан-скийД.А„ 1974).

Учитывая, что основу исследуемых соединительнотканных трансплантатов составляют коллагеновые волокна, которые при радиационной стерилизации дозами более 40 кГр подвергаются деструкции (Salehpour А., Butler D.L., Proch F.S., 1995), основное внимание в нашем исследовании было уделено фиброархи-тектонике биоматериалов, как критерию радиационной устойчивости.

На первом этапе данного исследования изучалась радиационная устойчивость трансплантатов сухожилия. Сравнительный морфологический анализ показал, что после стерилизации гамма-излучением, в структуре нашивных, а также обработанных по технологии Ачлоппант трансплантатов сухожилия происходят идентичные изменения. А именно, после воздействия дозой 15 кГр наблюдается фрагментация коллагеновых волокон, образующих рыхлую сеть эндо- и перитенония. Фрагменты оплетающей сети хаотично располагаются на поверхности пучков волокон и в межпучковых пространствах. В результате происходит продольное расщепление коллагеновых пучков на более тонкие. Толщина расщепленных пучков варьирует от 5 до 30 мкм. Однако структура самих волокон и их однонаправленность сохраняются. При увеличении стерилизующей дозы гамма-излучения от 25 до 60 кГр наблюдается деструкция нативных и химически обработанных трансплантатов сухожилия. Наблюдается гомогенизация ткани, поверхность коллагеновых волокон экранируется аморфным матрик-сом, вследствие чего последние приобретают аморфный вид. Поляризационно-оптический анализ демонстрирует значительное снижение оптической активно-

ста коллагеновых волокон. Цифровое значение оптической активности коллаге-новых волокон нативных трансплантатов сухожилия уменьшается в 2,2 раза, обработанных по технологии Аллоплант - в 6 раз по сравнению с контролем (необлученными образцами) (таб.1 и рис.1).

Таблица 1. Трансплантат сухожилия, обработанный по технологии Аллоплант Радиационная стерилизация гамма-излучением Относительная оптическая активность при интенсивности 128-255, % Соответствует рисунку 1.

Кол-во Среднее Доверительный Стандартная

измерении значение интервал ошибка

Без облучения 10 49,26 2,63 0,83

15 кГр 10 42,54 1,90 0,60

25 кГр 10 30,80 2,65 0,84

40 кГр 10 22,00 2,41 0,76

60 кГр 10 8,98 2,71 0,86

100 90 80 "0 00 50 40 30 20 10

-1- ± Доверительней интервал

±Стандартная ошибка ж Среднее значение

Рис.1. Трансплантат сухожилия, обработанный по технологии Аллоплант Радиационная стерилизация гамма-излучением Ось абсцисс: относительная оптическая активность при интенсивности 128-255, %, ось ординат: доза у-облучения, кГр

При стерилизации трансплантатов потоком быстрых электронов морфологическая картина несколько меняется. Как у нативных трансплантатов сухожилия, так и у обработанных по технологии Аллоплант, выраженные морфологические изменения в виде деструкции оплетающей сети коллагеновых волокон и продольного расщепления пучков, отмечаются уже при дозе воздействия 15 кГр. Увеличение дозы поглощения приводит к расщеплению пучков волокон до фибриллярного состояния. Толщина расщепленных волокон неравномерна и варьирует от 3 до 20 мкм, размеры межпучковых пространств местами достигают 100 мкм. Среднее значение оптической активности коллагеновых волокон нативных трансплантатов сухожилия снижается в 2,2 раза, обработанных по технологии Аллоплант в 4 раза (по сравнению с контролем).

Как показали наши исследования, устойчивость к лучевому воздействию лиофилизированных трансплантатов сухожилия определяется видом радиационного воздействия. Процессы деструкции волокон эндо- и перитенония, с последующим продольным расщеплением пучков первого и второго порядка, отмечаются при дозе 15 кГр тормозного облучения. Увеличение стерилизующей дозы приводит к необратимым изменениям в структуре лиофилизированных трансплантатов. Коллагеновые волокна фрагментируются, образуя ячеистые сети, толщина пучков в которых не превышает 20 мкм, а межпучковые расстояния увеличиваются до 40 мкм.

При стерилизации лиофилизированных трансплантатов сухожилия потоком быстрых электронов видимые морфологические изменения в структуре последних отмечаются после увеличения дозы поглощения от 25 до 60 кГр. Волокна эндо- и перитенония, оплетающие коллагеновые пучки, полностью разрушаются. Пучки волокон приобретают сетчатую структуру. Размеры между ячейками, образованными фрагментами коллагеновых волокон, достигают 130 мкм. Данные поляризаци-онно-оптического анализа подтверждают деструкцию волокнистого остова лиофилизированных трансплантатов сухожилия. При максимальной дозе радиационного воздействия гамма-излучением и потоком быстрых электронов среднее значение показателя оптической активности уменьшается в 2 раза.

Результаты исследования структуры, обработанных по технологии Аллоплант и лиофилизированных трансплантатов сухожилия, подвергнутых радиационной стерилизации таковы. Воздействие, как гамма-излучением, так и потоком быстрых электронов, приводит к идентичным изменениям в структуре трансплантатов. Гомогенизация коллагеновых волокон, проявляющаяся ярко-желтым окрашиванием по Ван Гизону, наблюдается при стерилизации дозой 15 кГр. Увеличение дозы любого радиационного воздействия приводит к полной деструкции волокнистого остова данного трансплантата, что подтверждается

данными поляризационно-оптического анализа. Средние значение показателя оптической активности при максимальной дозе поглощения (60 кГр) снижается в 3 раза по сравнению с контролем (таб.2 и рис.2).

Таблица 2. Трансплантат сухожилия, обработанный по технологии Аллоплант, а затем лиофилизированный Радиационная стерилизация потоком быстрых электронов Относительная оптическая активность при интенсивности 128-255, % Соответствует рисунку 2

Кол-во Среднее Доверительный Стандартная

измерении значение интервал ошибка

Без облучения 10 48,44 2,80 0,89

15 кГр 10 35,75 2,77 0,88

25 кГр 10 33,98 2,57 0,81

40 кГр 10 28,57 2,94 0,93

60 кГр 10 15,55 2,86 0,91

100 90 80 ■0 60 50 40 30 20 10 0

-1— ±Доверителыын интервал

' ±Стандартная ошибка * Среднее значение

Рис. 2. Транстантат сухожилия, обработанный по технологии Аллоплант, а затем лиофшизироаанный Радиационная стерилизация потоком быстрых электронов Ось абсцисс: относительная оптическая активность при интенсивности 128-255, %; ось ординат, доза ё-облучения, кГр

Морфологические изменения в структуре трансплантатов сухожилия после радиационной стерилизации приводят к изменению их прочностных свойств. Так, у нативных и обработанных по технологии

Аллоплант трансплантатов сухожилия, наблюдается снижение прочностных характеристик при максимальных дозах радиационного воздействия (40 и 60 кГр). Если среднее значение предела прочности для контрольного образца составляет 104,5±3,3 МПа, то после воздействия гамма-излучением и потоком быстрых электронов дозой 60 кГр данный показатель снижается до значений 64,9±7,0 МПа и 44,7±8,4 МПа соответственно. Изменение модуля упругости данных трансплантатов снижается в 1,5 раза при стерилизации гамма-излучением и в 2 раза -при стерилизации потоком быстрых электронов (по сравнению с необ-лученными образцами). Полученные нами результаты согласуются с данными S. Bogdansky и соавт. (2004), которые отмечают, что для стерилизации консервированных трансплантатов сухожилия могут использоваться дозы поглощения до 15 кГр, т.к. данная доза не изменяет их прочностных свойств. В. М. Fideler и соавт. (1995) также рекомендуют использовать для стерилизации сухожилий гамма-излучение дозами 15-20 кГр. Тенденция к снижению прочностных характеристик по мере увеличения стерилизующей дозы в наибольшей степени выражена у лиофилизированных трансплантатов сухожилий. Значимое уменьшение (приблизительно в 2 раза) средних значений предела прочности и модуля упругости наблюдается при воздействии дозой 15 кГр потоком быстрых электронов и дозой 25 кГр гамма-излучения. Снижение прочностных показателей лиофилизированных сухожилий после стерилизации гамма-излучением отмечали в своих работах G.Rauch и соавт. (1991).

***Таким образом, нативные и обработанные по технологии Аллоплант трансплантаты сухожилия, подвергаются выраженной деструкции, начиная с дозы 15 кГр воздействия потока быстрых электронов и 25 кГр - гамма-излучения. Устойчивость к лучевому воздействию лиофилизированных трансплантатов сухожилий также определяется видом излучения. Что касается обработанного по технологии Аллоплант, а затем лиофилизированного трансплантата сухожилия, то морфологические исследования показали, что данный трансплантат подвергается деструкции при всех исследуемых видах и дозах радиационного воздействия. Полученные результаты свидетельствуют о достаточно низкой устойчивости фиброархитектоники сухожильных трансплантатов к радиационному воздействию и согласуются с данными Saiehpour А., et.al. (1995); Shiiba V. et al., (1999). Выраженные изменения фиброархитектоники радиационно-стерилизованных трансплантатов сухожилия закономерно отражаются в снижении их прочностных характеристик.

Анализ степени деструктивных изменений трансплантатов сухожилия, в зависимости от физико-химической обработки, вида и дозы радиационного воздействия, представлен на рисунках 3,4.

Деструкция,

гвд

аз от

25 кГр

15 КГр

О кГр

Доза облучения, кГр

30 20 10 О

60 <Гр

Д/1ЛОПЛЗ п +лиофипизация ТО

лиофилизация

1С

Аллоплэнт о

нэтиануй

Рис.3. Степень деструктивных изменении трансплантатов сухожилии. стерилизованных гамм а-кзлуче » ц е.м -

Деструкция, %

Аллоплакт ■а-лиофилизгцми ю

лиофилизация 10

■ г :м!н:-:,|

25 кГр

15 кГр

О V

Доза облучения, кГр

№ кГр 40 кГр

Рнс.4. Степень деструктивных изменений трансплантатов сухожилия, стерилизованных потоком быстрых электронов.

Изучение структурных изменений трансплантатов дермы показало, что для данной ткани характерна высокая радиационная устойчивость. Так, у нашивных трансплантатов дермы изменения в структуре после стерилизации гамма-излучением во всех исследуемых дозах не наблюдались. Радиационное воздействие потоком быстрых электронов дозами 40 и 60 кГр приводит к незначительным изменениям фиброархитектоники трансплантатов, а именно к деструкции отдельных солитарных волокон. Структура пучков коллагеновых волокон остается сохранной. Подобная картина наблюдается и при радиационной стерилизации трансплантатов дермы, обработанных по технологии Аллоплант. Как при стерилизации гамма-излучением, так и при стерилизации потоком быстрых электронов, во всех изучаемых дозах и на всех проведенных нами уровнях исследования, структурных изменений не обнаружено.

В фиброархитектонике лиофшизированных трансплантатов дермы после радиационной стерилизации происходят следующие структурные изменения. При воздействии потоком быстрых электронов дозами от 15 до 40 кГр незначительные изменения в структуре лиофилизированных трансплантатов дермы проявляются небольшим увеличением межпучковых пространств. Увеличение стерилизующей долы до 60 кГр приводит к дезорганизации фиброархитектоники трансплантатов дермы. Нарушается картина сложного переплетения пучков и волокон. Межпучковые пространства увеличиваются до 50 мкм, исчезают солитарные волокна. Однако струетура самих коллагеновых волокон не изменяется, о чем свидетельствует сохранение тинкториальных свойств и оптической активности последних.

В процессе стерилизации трансплантатов дермы, обработанных по технологии Аллоплант, а затем лиофшизированных, выраженные изменения в их структуре отмечаются при дозах радиационного воздействия выше 40 кГр. При этом поверхность коллагеновых пучков теряет выраженный фибриллярный рельеф и приобретает аморфный вид, нарушается пространственная ориентация пучков. Уровень оптической активности остается достаточно высоким и свидетельствует о том, что, не смотря на процессы дезорганизации, начавшиеся в волокнистом остове трансплантатов дермы, структура коллагеновых волокон сохраняется (таб.3 и рис.5).

Таблица 3. Транстантат дермы, обработанный по техноюгии Аллоплант илио-фипаированный Радиационная стерилизация потоком быстрых электронов Относительная оптическая активность при интенсивности 95-255, в % Соответствует рисунку 5

Кол-во Среднее Доверительный Стандартная

шмереннй значение интервал ошибка

Без облучения 10 26,90 0.77 0,24

15 кГр 10 26,06 0,97 0,31

25 кГр 10 24,12 0,89 0,28

40 кГр 10 22,51 0,71 0,22

60 кГр 10 19,30 0.75 0.24

^ ±Доверитепьиый интсрвот ^ ±Сгщзяртнм ошибка А с^адм«1н»яенне

40 30

0--

О 25 40 (.0

Рис.5. Трансплантат дермы, обработанный по технологии Аллоплант и лиофилизированных Ось абсцисс: относительная оптическая активность при интенсивности 95-255, в %, ось ординат, доза ё-облучения, кГр

Результаты биомеханических испытаний трансплантатов нативной и обработанной по технологии Аллоплант дермы демонстрируют сохранение прочностных характеристик при всех исследуемых ввдах и дозах радиационного воздействия. В ходе механических испытаний лиофилизированных трансплантатов дермы, подвергнутых радиационной стерилизации, наблюдается тенденция к снижению прочностных характеристик по мере увеличения дозы воздействия. С увеличением дозы радиационной стерилизации потоком быстрых электронов предел прочности снижается в два раза - от 11,5±0,6 МПа (контроль) до 5,5±0,3 (стерилизация потоком быстрых электронов дозой 60 кГр). Изменения модуля упругости (Юнга) носят аналогичный характер. Если у контрольного образца лиофилизированного трансплантата дермы данный показатель равен 22,5±0,3 МПа, то при стерилизации потоком быстрых электронов дозой 60 кГр его значение уменьшается в 2,5 раза - до 9,7±0,5 МПа. Сравнение показателей относительного удлинения выявило сохранение данного параметра при всех исследуемых видах и дозах радиационного воздействия.

Снижение прочностных показателей наблюдаются и у радиационно-стерилизованных трансплантатов дермы, обработанных по технологии Аллоплант, а затем лиофилизированных. Изменение параметров относительного удлинения носит незначительный характер, однако значения предела прочности и модуля упругости (Юнга) уменьшаются в 2 раза по сравнению с контролем.

♦♦♦Исследования фиброархитектоники и прочностных свойств трансплантатов дермы, подвергнутых физической и химической обработке и радиационной стерилизации, показали, что для данной ткани характерна высокая радиационная устойчивость. Выраженные деструктивные изменения, а также снижение биомеханических показателей наблюдаются в лиофилизированных трансплантатах дермы при дозах радиационного воздействия выше 40 кГр.

Анализ степени деструктивных изменений трансплантатов дермы, в зависимости от физико-химической обработки, вида и дозы радиационного воздействие представлен на рисунках 6,7.

Рис.6. Степень деструктивных изменений трансплантатов дермы, стерилизованных галша-изчучатем.

Деструкция,0^

Аллоплант+ лиафилкзэция

лиоф.тлизацчя

натИВМЬИ

60 кГр

40 кГр

кГр

15 кГр

ДоЭй обучения. КГр

Рис.7. Степень деструктивных изменении трансплантатов дермы, стерилизованных потоком быстрых электронов.

Исследовав фиброархитектонику трансплантатов фиброзной капсулы почки после радиационной стерилизации в различных режимах и дозах, мы получили следующие результаты. Структурные изменения нашивных трансплантатов фиброзной капсулы почки и трансплантатов, прошедших химическую обработку по технологии Аллоплант, носят идентичный характер. При радиационной стерилизации гамма-излучением и потоком быстрых электронов дозами от 15 до 40 кГр, деструктивных изменений в названных трансплантатах не обнаружено. На всех уровнях морфологического исследования наблюдается характерная для внутреннего слоя фиброзной капсулы почки сеть густо переплетенных коллагеновых волокон и сохраненные, компактно расположенные, волокна наружного слоя трансплантата.

Увеличение стерилизующей дозы до 60 кГр приводит к выраженной гомогенизации коллагеновых волокон внутреннего слоя трансплантатов. Нарушается ход волокон в пучках, они теряют извилистость, практически исчезает войлочнообразное строение, характерное для внутреннего слоя фиброзной капсулы. В структуре наружного слоя данных трансплантатов видимых изменений не обнаруживается даже при ультраструктурном исследовании.

Как нами было отмечено ранее, внутренний слой лиофилизирован-ных трансплантатов фиброзной капсулы почки имеет ярко выраженную ячеистую структуру. В процессе радиационной стерилизации любым видом ионизирующего излучения, по мере увеличения дозы поглощения усугубляются и структурные изменения в ткани. Если при воздействии дозами 15 и 25 кГр данные изменения представлены увеличением расстояний между разнонаправленными коллагеновыми волокнами, то увеличение стерилизующей дозы до 60 кГр приводит к практически полной гомогенизации коллагеновых волокон. Тонкое фибриллярно-волокнистое ячеистое строение, характерное для внутреннего слоя лиофилизированных трансплантатов фиброзной капсулы почки, исчезает полностью. Достаточно плотный наружный слой трансплантатов уплотняется настолько, что не удается визуализировать отдельные коллагеновые волокна, образуется картина сплошной гомогенной массы. В целом деструкция лиофилизированных трансплантатов фиброзной капсулы почки очевидна.

Трансплантаты фиброзной капсулы почки, обработанные по технологии Аллоплант, а затем лиофилизированные, сохраняют свою структуру при воздействии гамма-излучением дозами до 40 кГр. При стерилизации дозой 60 кГр наблюдается гомогенизация коллагеновых волокон внутреннего слоя, а также уплотнение и так интимно расположенных волокон наружного слоя трансплантата. Радиационная стерилизация потоком быстрых электронов приводит к деструктивным изменениям в трансплантатах, начиная с дозы воздействия 25 кГр. Ультраструктурный анализ выявляет расщепленные пучки коллагеновых воло-

кон, формирующих мелкую сеть, в которой встречаются единичные волокна, неоднородные по толщине и имеющие аморфный вид. Максимальная деструкция трансплантатов фиброзной капсулы почки, обработанных по технология Лллоплант, а затем лиофилизированных, происходит при воздействии потоком быстрых электронов дозой 60 кГр. Измененная структура игами представляет собой тонковолокнистую равномерно^чеистую сеть, образованную расщепленными колла! еновыми волокнами, утратившими характерный поверхностный рельеф. Рыхлая структура внутреннего слоя трансплантатов полностью исчезает, и ткань приобретает более уллишенный вид. Наружный слой также превращается в достаточно плотное образование, состоящее из гомогенизированных коллагенов ых волокон.

***Таким образом, нативные трансплантаты фиброзной капсулы почки проявляют достаточно высокую устойчивость к радиационной стерилизации. Обработанные по технологии Аллонлант, трансплантаты фиброзной капсулы почки подвергаются деструкции при воздействии максимальными стерилизующими дозами (60 кГр). Что касается л и оф ил тированных трансплантатов, то они оказались наименее устойчивыми к любому ионизирующему излучению. Степень деструктивных изменений трансплантатов фиброзной капсулы почки, в зависимости от физикй-хи м и ческой обработки, вида и дозы радиационного воздействия, представлена на рисунках 8,9.

Деструкция, %

АПЛ0ЛЛЗНТ+

лиосЬилизация 10

лиофилизация 10

кГо доза облучения, кГр

Аллоллэнт

Рис.8, Степень деструктивнщх изменений трансплантатов фиброзной капсулы почки, смеритзованных гамма-излучением.

Деструкция, %

100

лиофилизация

Аллоплант

Доза облучения, кГр

Рис. 9. Степень деструктивным изменений трансплантатов фиброзной капсулы почки, стерилизованных потоком быстрых электронов.

Аллоплант* лиогЬилизания 10

Изучив влияние радиационной стерилизации гамма-излучением и потоком быстрых электронов ни трансплантаты подкожной жировой клетчатки

во всех исследуемых дозах, мы получили следующие результаты. На всех уровнях проведенного исследования отмечается сохранение плотно упакованных пучков коллагеновых волокон стромы, как нашивных, так и обра-бвтаниых по технологии Аллоплант трансплантатов. Неизменными также остаются и оболочки жировых долек. Незначительные изменения наблюдаются в структуре эластической сети. При максимальных дозах радиационного воздействия (60 кГр) структура данной сети представлена более тонкими волокнами, что свидетельствует о продольной фрагментации последних.

В структуре лиофилизированных трансплантатов подкожной -жировой клетчатки происходят более выраженные изменения после радиационной стерилизации. При воздействий гамма-излучением дозами 15 и 25 кI р наблюдается деструкция пучков коллагеновых волокон, входящих в состав стромы. Данные волокна расщепляются, увеличиваются расстояния между ними и, как следствие, теряется плотная упаковка волокон в пучках. Увеличение дозы воздействия гамма-излучения от 40 до 60 кГр приводит к усилению процессов деструкции

коллагеновых волокон стромы, а также к деформации оболочек жировых ячеек. При стерилизации лиофилизированных трансплантатов подкожной жировой клетчатки потоком быстрых электронов выраженные структурные изменения также наблюдаются при малых дозах радиационного воздействия. Данные изменения представлены полной гомогенизацией коллагеновых волокон стромы и разрушением оболочек жировых долек. Сеть эластических волокон также претерпевает изменения - эластические волокна приобретают аморфный вид и располагаются на значительных расстояниях друг от друга.

Структурные изменения в трансплантатах подкожной жировой клетчатки, обработанных по технологии Аплоплант, а затем лиофилизированных, носят несколько иной характер. Так, при стерилизации гамма-излучением, структурные изменения в данных трансплантатах наблюдаются при дозах воздействия выше 40 кГр. Нарушается ориентированное расположение пучков коллагеновых волокон стромы. Кроме того, сами волокна на одних участках стромы расщепляются на более тонкие, а на других участках стромы происходит их полная гомогенизация. Оболочки жировых долек приобретают аморфный вид и образуют практически однородную массу. Радиационная стерилизация потоком быстрых электронов трансплантатов подкожной жировой клетчатки, обработанных по технологии Аллоплант, а затем лиофилизированных, приводит к полной деструкции коллагеновых волокон стромы. Начиная с дозы воздействия 25 кГр, наблюдается также деформация оболочек жировых долек,. По мере увеличения стерилизующей дозы усугубляются и деструктивные признаки в фиброархи-тектонике трансплантатов. Сеть эластических волокон приобретает деформированный аморфный вид и уже не оплетает коллагеновые волокна, а покрывает их.

***Проведенные исследования структуры радиационно-стерилизованных трансплантатов подкожной жировой клетчатки показали, что для нативных и обработанных по технологии Аллоплант трансплантатов характерна достаточно высокая степень радиационной устойчивости. Что же касается лиофилизированных трансплантатов, то изменения в их структуре выявляются даже при малых дозах радиационного воздействия. Анализ степени деструктивных изменений трансплантатов подкожной жировой клетчатки, в зависимости от физико-химической обработки, вида и дозы радиационного воздействия представлен на рисунках 10,11.

Деструкция, %

Рис. / 0. Степень Деструктивных изменений трансплантатов подкожной жировой клетчатки, стерилизованных гамма-излучением.

Аллэплант+ лиофилизация

лиофилизация 40 Аллогшант

25 кГр 15 кГр кГр

Деза облучения, кГр

Деструкция,

40 кГр

кГр 15 кГр

Доза облучения, кГр

10 60 КГр

Аллоплант* лиофилизация

лиофилизация

Аллоплант о

нативный

Рис.11. Степень деструктивных изменений трансплантатов подкожной жировой клетчатки, стерилизованных потоком быстрых электронов.

Высокая радиационная устойчивость наблюдается у консервированных трансплантатов гиалинового хряща, что отмечено и другими авторами (Лаврищева Г.И., Оноприенко Г.А.; 1996). Высокая стабильность структуры характерна как для нашивных, так и для обработанных по технологии Аллоплант хрящевых трансплантатов. Наши исследования показали, что радиационная стерилизация потоком быстрых электронов и гамма-излучением не приводит к видимым изменениям фиброархитектоники данных трансплантатов. По совокупности полученных морфологических данных наблюдаются четко различающиеся территориальные и межтерриториальные участки матрикса, характерные для гиалинового хряща.

Определяется сохранение структуры коллагеновых волокон межтерри-ториальйого матрикса и оболочек перицеллюлярных капсул. Среднее значение оптической активности коллагеновых волокон также не претерпевает выраженных изменений (таб.4 и рис.12).

Таб. 4. Трансплантат гиапинового хряща, обработанный по технологии Аллоплант Радиационная стерилизация гамма-излучением Относитечьная оптическая активность при интенсивности 100-255, в % Соответствует рисунку 12

Кол-во измерений Среднее значение Доверительный интервал Стандартная ошибка

Без облучения 10 87.34 1,49 0,47

15 кГр 10 85,69 1,50 0.47

25 кГр 10 83.18 1,44 0,46

40 кГр 10 82,30 1,47 0,47

60 кГр 10 69,61 1,34 0,42

1Е ¿Доверительный интервал (Щ ¿Стандартная ошибка А Среднее значение

0 15 25 40 60

Рис.12. Трансплантат гиалинового хряща, обработанный по технопогии Аллоплант Ось абсцисс, относительная оптическая активность при интенсивности 100-255, в %, ось ординат доза гамма-облучения, кГр 26

Что касается лиофилизированных трансплантатов гналинового хряща, то в данном случае изменение архитектоники зависит от вида радиационного облучения. Если стерилизация гамма-излучением не изменяет структуры данных трансплантатов, то после воздействия потоком быстрых электронов в любой исследуемой дозе наблюдается иная картина. При ультраструктурном исследовании выявляется расщепление коллагеновых волокон межтерриториального матрикса. Расщепленные волокна формируют разнонаправленную тонковолокнистую сеть с включениями в виде лакун. Среднее значение показателя оптической активности при максимальной дозе радиационного воздействия (60 кГр) уменьшается в 2,5 раза по сравнению с контролем (таб.5 и рис.13).

Таб. 5. Лиофилизированный трансплантат гиалинового хряща Радиационная стерилизация потоком быстрых электронов Относительная оптическая активность при интенсивности 100-255, в % Соответствует рисунку 13.__

Кол-во Среднее Доверительный Стандартная

измерений значение интервал ошибка

Без облучения 10 87,34 1,66 0,52

15 кГр 10 56,03 1,44 0,45

25 кГр 10 35,44 1,42 0,45

40 кГр 10 35,38 1,55 0,49

бОкГр 10 31,95 1,33 0,42

+Доверительный интервал С ¿Стандартная ошибка * Среднее значение

Рис.13. Лиофилизированный транспчантат гиапинового хряща Ось абсцисс относительная оптическая активность при интенсивности 100-255, в %; ось ординат

доза ё-облучения, кГр Еще менее устойчивым к радиационному воздействию оказались трансплантаты гиапинового хряща, обработанные по технологии Алло-плант, а затем лиофилизированные. В данном случае при всех исследуемых дозах воздействия гамма-излучением наблюдается деструкция колла-

геновых волокон как территориального, так и межтерриториального мат-риксов. Структура коллагеновых волокон полностью нивелируется, и образуется равномерная редкая сеть, состоящая из разнонаправленных тонких волокон диаметром от I до 5 мкм. Расстояния между ячейками, образованными расщепленными коллагеновыми волокнами, достигают 5 мкм. При увеличении дозы воздействия гамма-излучением до 60 кГр расстояния между ячейками уменьшаются до 2 мкм. Нарушение фироархитектоники лиофилизированного трансплантата хряща приводит к снижению показателя относительной оптической активности в 2 раза по сравнению с контролем (при дозе воздействия 60 кГр).

Изменения структуры обработанных по технологии Аллоплант и лиофи-лизированных хрящевых трансплантатов после стерилизации потоком быстрых электронов носят практически аналогичный характер. Расщепленные и дезорганизованные коллагеновые волокна также образуют сеть, но толщина фрагментированных волокон в данной сети не превышает 2 мкм, а расстояния между ячейками значительно увеличиваются и достигают 15 мкм. Поля-ризационно-оптический анализ демонстрирует низкую оптическую анизотропию коллагеновых волокон, а среднее значение величины оптической активности уменьшается с 85,36 (контроль) до 33,92 (доза 60 кГр).

Прочностные свойства нативных и обработанных по технологии Аллоплант трансплантатов гиалинового хряща не претерпевают достоверных изменений при воздействии ионизирующих излучений. Испытания прочностных характеристик данных трансплантатов демонстрируют, что вследствие упругой деформации при сжатии относительное укорочение не изменяется, и колеблется в пределах от 0,26±0,08 (контроль) до 0,24±0,08 (доза 60 кГр). Среднее значение предела прочности трансплантатов гиалинового хряща также достоверно не изменяется после радиационной стерилизации во всех исследуемых видах и дозах. Сохранение механических свойств консервированного реберного хряща при радиационной стерилизации отмечал в. ЬеЯсоуЙБ (1990).

В то же время у лиофилизированных трансплантатов хряща наблюдается падение упруго-деформативных свойств и показателей предела прочности по мере увеличения доз радиационного воздействия. Максимальное снижение предела прочности наблюдается при стерилизации потоком быстрых электронов дозой 60 кГр. При данной дозе радиационного воздействия значение предела прочности уменьшается в 2,5 раза. ♦♦»Результаты данной серии экспериментов показали, что трансплантаты гиалинового хряща проявляют достаточно высокую устойчивость к радиационному воздействию. Высокая стабильность морфологических структур характерна как для нативных, так и для обработанных по технологии Аллоплант трансплантатов хряща (рис. 14,15). Менее устойчивыми к радиационному излучению оказались лиофилизированные трансплантаты хряща: изменения их фиброархитектоники закономерно отражаются в снижение прочностных свойств.

О кГр

Доза облучения, кГр

Аллоплант+ лиофилизация

лиофилизация

Аллоплант о

дативный О

60 кГр

40 кГр

25 КГр

15 кГр

О кГи

Доза облучения, кГр

Рис. 15. Степень деструктивных изменений трансплантатов гиалинового хряща, стерилизованных потоком быстрых электронов.

Рис. / 4. Степень деструктивных изменений трансплантатов гиалинового хряща стерт изованных зал<ма- излучением

Деструкция, %

Обобщая изложенное, можно заключить, что изученные анатомические структуры (сухожилия, дерма, фиброзная капсула почки, подкожная жировая клетчатка, гиалиновый хрящ), используемые в качестве трансплантатов, имеют различную степень радиационной устойчивости (радиорезистентности). В предыдущих исследованиях нами было показано, что изменения в структуре волокнистого остова соединительнотканных трансплантатов после радиационной стерилизации зависят от фиброархитектоники донорской ткани (Шангина О.Р., 1999). По особенностям фиброархитектоники биоматериалов нами было выделено три уровня структурной стабильности, соответствующие различной устойчивости тканей к радиационному воздействию. Анализ результатов данного исследования дает основание для коррекции, уточнения и расширения ранее сформированных представлений о факторах, обуславливающих радиоустойчивость биоматериалов.

Анализ изменений фиброархитектоники соединительнотканных трансплантатов показал, что наименее устойчивыми к радиационному воздействию являются коллагеновые волокна, связывающие пучки первого порядка. Деструктивные изменения на этом уровне заметны уже при минимальной дозе радиационного воздействия, что позволяет охарактеризовать коллагеновые волокна, соединяющие пучки первого порядка, как структурную единицу, соответствующую первому уровню структурной стабильности.

Пучки второго порядка также оплетаются подобной сетью колла-геновых волокон, которая поддерживает их структурную целостность и связывает между собой. Наличие пучков второго порядка, с оплетающей их рыхлой сетью коллагеновых волокон, рассматривается нами как второй уровень стабильности волокнистых структур. Уже при воздействии малых доз ионизирующего излучения наблюдается деструкция волокон эндо- и перитенония. Фактически теряется основной фактор стабильности для пучков первого и второго порядков, в результате чего происходит продольная фрагм'ентация пучков на отдельные волокна и тонкие пучки. Фиброархитектоника изученных трансплантатов сухожилия соответствует второму уровню структурной стабильности.

Третий уровень структурной стабильности характеризуется сложной пространственной архитектоникой волокнистого остова, в котором пучки коллагеновых волокон имеют спиральный ход, переходя из одного слоя в другой. Подобная фиброархитектоника характерна для трансплантатов дермы, обладающих наибольшей радиорезистентностью из изученных нами волокнистых биоматериалов. Таким образом, третий уровень стабильности обусловливает более высокую устойчивость к радиационному воздействию соеди • гпьнотканных трансплантатов (рис. 16).

Пучки I порядка Пучки II порядка

I уповень И уповень Ш уровень

Рис. 16, Уровни структурной стабильности соединительнотканных биоматериалов.

Для трансплантатов фиброзной капсулы почки характерна гетерогенность уровней структурной стабильности по слоям: в наружном плотном слое трансплантата представлена архитектоника третьего уровня стабильности, а фибро-архитектоника внутреннего слоя с тонкими изолированными пучками колла-геновых волокон соответствует первому уровню стабильности. Поэтому наружные слои трансплантатов фиброзной капсулы почки обладают максимальной радиационной устойчивостью, а внутренние - минимальной.

В трансплантатах гиалинового хряща структура межтерриториального матрикса, представленная однонаправленными тонкими коллагеновыми волокнами и фибриллами, соответствует первому уровню структурной стабильности и, казалось бы, должна подвергаться деструкции после радиационного воздействия. Однако изучение фиброархитектоники радиационно-стерилизованных трансплантатов гиалинового хряща показало высокую степень радиационной устойчивости данной ткани. Особенности радиорезистентности трансплантатов гиалинового хряща, по-видимому, определяются гетерогенностью его структуры. В гиалиновом хряще преобладает коллаген II типа (Павлова В.Н.,1988). Волокна коллагена II типа в матриксе гиалинового хряща разнообразны по диаметру и, как правило, тоньше, чем волокна коллагена I типа в сухожилиях или дерме, и не образуют толстых пучков. Однако в них обнаружено высокое содержание гидроксилизина, что создает условия для возникновения характерных для коллагена II типа внутримолекулярных поперечных связей (Павлова В.Н., 1988). Еще одной отличительной особенностью гиалинового хряща является высокая концентрация сульфатированных гликозаминогликанов (Слуцкий Л.И., 1969). Таким образом, трансплантаты гиалинового хряща можно рассматривать как композитный биоматериал, значительную часть которого составляет внеклеточный аморфный матрикс. Известно, что сульфатированные агрегаты протеогликанов обладают высокой степенью гидратации (Слуцкий Л.И., 1969). При радиационной стерилизации, несмотря на происходящий радио-лиз воды, гидратированные биоматериалы проявляют повышенную устойчивость к лучевому воздействию (ЭгюсЬю-СоЫахузка А., 2000). Кроме того, эндогенные сульфгидридные группы считаются естественными радиопротекторами, уровень содержания которых в значительной степени определяет радиоустойчивость тканей (Тарусов Б.Н., 1954; Бутомо Н.В. и со-авт., 2004; Ярмоненко С.П., 1988, 2004). Естественные радиопротекторы способны переводить различные биохимические системы в состояние повышенной радиорезистентности (Романцев Е.Ф., 1971). Принимая во внимание вышеизложенное, можно заключить, что третий уровень стабильности хрящевых трансплантатов определяется неколлагеновыми компонентами (гликозаминогликанами), которые, как выяснилось, являются важным фактором радиоустойчивости. С точки зрения выдвигаемой нами концепции, высокое содержание неколлагеновых компонентов также можно отнести к эндогенным факторам, обусловливающим высокую радиоустойчивость соединительнотканных биоматериалов.

Необходимо отметить, что неколлагеиовые компоненты в достаточной степени представлены и в трансплантатах дермы, которые обладают исключительно высокой радиорезистентностью. Подобную устойчивость можно объяснить не только сложной фиброархитектоникой дермы, но и тем, что значительную часть данной ткани составляет основное вещество, в которое погружены пучки коллагеновых волокон (Мулдашев Э.Р. и соавт., 1981). Известно, что главным компонентом основного вещества дермы является гиалуроновая кислота (Ноздрин В.И. и соавт., 2005). Радиопротекторные свойства гиалуро-новой кислоты были отмечены в работах Тиунова Л.А. (1964).

Таким образом, в трансплантатах дермы радиоустойчивость определяется двумя эндогенными факторами: сложной пространственной фиброархитектоникой и наличием гиалуроновой кислоты. Подобные же факторы, по-видимому, определяют и радиоустойчивость наружных слоев трансплантатов фиброзной капсулы почки, в которой наряду со сложной фиброархитектоникой представлены также неколлагеиовые компоненты: гиалуроновая кислота и хондроитин-сульфат (Слуцкий Л.И., 1969).

Особое место в ряду соединительнотканных трансплантатов занимают трансплантаты, изготовленные из подкожной жировой клетчатки. Составными элементами структуры данного трансплантата являются жировые дольки, окруженные оболочками, состоящими из тонких коллагеновых волокон, а также соединительнотканные тяжи, состоящие из плотно упакованных пучков третьего порядка. Однонаправленные коллагеновые волокна тяжей в изолированном виде и окружающий их слабо развитый аморфный матрикс представляют собой достаточно радиочувствительную структуру. Но тот факт, что коллагеновые тяжи расположены между жировыми ячейками, содержащими нейтральные жиры, представленные в основном триглицеридами (Ноздрин В.И. и соавт., 2005), по всей вероятности, приводит к увеличению степени радиационной устойчивости данных трансплантатов. В работах М.А. Туманяна и Д.А. Каушанского (1974) отмечается, что высокое содержание нейтральных липидов в тканях повышает радиорезистентность последних. Противолучевые свойства триглицеридов отмечены также Л.А. Тиуновым и соавторами (1964). Таким образом, фактором, в значительной степени определяющим радиорезистентность трансплантатов подкожной жировой клетчатки, следует считать наличие жировых долек. К особенностям структуры данного биоматериала относится изолированное от пучков коллагеновых волокон расположение жировых долек. Поэтому наибольшие деструктивные изменения при лучевой стерилизации обнаруживаются в толстых коллагеновых пучках, формирующих каркас подкожной жировой клетчатки. В то же время тонкие коллагеновые волокна, разделяющие группы жировых клеток внутри долек, подвергаются деструкции только при максимальных дозах радиационного воздействия. Выявленная дифференциация в радиоустойчивости трансплантатов подкожной жировой клетчатки, обусловленная гетерогенностью их структуры, еще раз подтверждает, что важное значение для

радиорезистентности тканей имеет наличие неколлагенового компонента (в данном случае жировых долек).

Таким образом, резистентность соединительнотканных трансплантатов к радиационному воздействию зависит от особенности их фиброархитекто-ники и состава кеколлагеновых компонентов, определяемых нами как эндогенные факторы радиационной устойчивости.

Но существует еще ряд экзогенных факторов, влияющих на радиационную устойчивость биоматериалов. И в первую очередь это химическая и физическая обработка трансплантатов, которая необходима для снижения иммуногенности донорских тканей (Мулдашев Э.Р., 1994; Tauro J.C. et. al., 1991; Allaire E. et. al.,1994; Goble E.M. et.al., 1999).

На сегодняшний день известно множество методов обработки и консервации тканей (Зайкова М.В., 1984; Парфентьева В.Ф., 1986; Подоприго-ра Р.Н., 2004; Канюков В.Н. и соавт., 2005; Beigel A. et.al., 1991; Davies А.Н., Parums D.V., 1992). Как правило, при консервации в жидких средах коллагеновый каркас трансплантатов сохраняется (Мулдашев Э.Р., 1994; Beigel A. et.al., 1991; Bujía J. et. al.,1993; Allaire E. et. al ,1994). Результаты нашего исследования показали, что даже многоступенчатая химическая обработка по технологии Аллоплант не оказывает видимых на гистологическом уровне изменений в фиброархитектонике соединительнотканных биоматериалов.

Из физических методов обработки донорских тканей наиболее распространенным и широко используемым во многих тканевых банках является лиофилизация (Савельев В.И. и соавт., 2001; Лекишвили М.В., 2005; Dziedzic-Goclawska A. et.al., 1991; Zasacki W„ 1991; Verzen R., 1999). Результаты нашего исследования показали, что в лиофилизированных тканях происходят выраженные структурные изменения. Характерной особенностью архитектоники соединительнотканных трансплантатов, прошедших процесс лиофилизации, является образование некоей «губчатости» структуры. Лиофилизированные трансплантаты приобретают строение губки, ячейки которой образованы расщепленными коллагеновыми волокнами. Высушивание тканей в процессе лиофилизации приводит к дегидратации аморфного матрикса, окружающего коллагеновые волокна. В результате этого, в зависимости от степени начальной гидратированности аморфного матрикса, происходят те или иные структурные преобразования ткани. Изменения в структуре лиофилизированых трансплантатов можно рассматривать как деструкцию волокнистого остова, а можно взглянуть на данные структурные изменения с другой стороны. Модифицированная структура лиофилизированных соединительнотканных трансплантатов может использоваться при заполнении объемных дефектов различных тканей (Сироткина И.А., 2005), а также для восстановления тканей с дренажной функцией (Мулдашев Э.Р. и соавт.., 2005). Существенным ограничением в применении лиофилизированных трансплантатов является неэффективность их при

использовании для укрепляющих операций, где главную роль играют физико-механические свойства биоматериала.

Как показали наши исследования, радиационная устойчивость соединительнотканных трансплантатов, прошедших процесс лиофилизации, значительно снижается по сравнению с трансплантатами, консервированными в жидких средах. Надо полагать, что процесс деструкции коллагеновых волокон в лиофилизированных биоматериалах происходит в результате прямого эффекта ионизирующего излучения, тогда как консервированные в жидких средах трансплантаты подвергаются косвенному эффекту облучения. Косвенный эффект радиации приводит к повреждению биологических структур в результате их химического взаимодействия с продуктами радиолиза воды, незначительное количество которой присутствует в жидких консервирующих средах. Лиофилизированные ткани подвергаются радиационной стерилизации в сухом виде и непосредственно поглощают энергию излучения. На значительную роль прямого эффекта радиации для сла-богидратированных структур указывали Б.Н.Тарусов (1954), Н.В. Бутомо и соавт. (2004). Результаты нашего исследования совпадают и с данными А. Ог1ес1гю-Сос1а\¥5ка (2000), которая отмечает, что, несмотря на радиолиз воды происходящий при лучевом воздействии, гидратированные биоматериалы проявляют повышенную радиационную устойчивость. Именно поэтому указанный автор рекомендует сохранять при лиофилизации часть связанной воды при подготовке биоматериала к стерилизации. Выраженную деструкцию лиофилизированных тканей при радиационной стерилизации, связанную с прямым эффектом радиации, отмечает и А. КаггппБМ с соавторами (2002).

Следовательно, такие экзогенные факторы, как химическая и физическая обработка донорских тканей, оказывают различное влияние на фибро-архитектонику биоматериалов. Химическая обработка существенно не изменяет фиброархитектонику и радиорезистентность трансплантатов, однако физическая обработка (лиофилизация) приводит к значительной модификации фиброархитектоники и, как следствие, - к снижению радиационной устойчивости тканей.

К экзогенным факторам резистентности биоматериалов следует отнести виды и дозы радиационного воздействия. Известно, что тормозное (гамма) излучение и излучение потоком быстрых электронов имеют различную физическую природу (Тимофеев-Ресовский Н.В. с соавт., 1981). В ряде исследований (Тару-сов Б.Н., 1954; Тимофеев-Ресовский Н.В. с соавт., 1981; Бутомо Н.В. с соавт., 2004; Ярмоненко С.П., 1988, 2004) установлено, что биологический эффект любого радиационного воздействия напрямую связан с процессами ионизации, происходящими в тканях. Различная биологическая эффективность ионизирующих излучений обусловлена различной плотностью ионизации, т.е. числом образующихся ионов. Поскольку плотность ионизации, создаваемая потоком быстрых электронов, значительно больше, чем у гамма-лучей, то и химические изменения здесь более значительны, и на одну пару ионов приходится гораздо боль-

ше разрывов химических связей. Пробег электронов в ткани невелик, поэтому проникающая способность потока быстрых электронов очень низкая, происходит почти полное поглощение электронов при прохождении их через ткань. Гамма-излучение обладает очень высокой проникающей способностью. Не обладая зарядом, оно беспрепятственно проникает в глубь ткани. Необходимое время для получения заданной дозы гамма-излучения занимает от 1 до 5 часов. Максимальное время набора дозы потока быстрых электронов составляет 30 секунд. Таким образом, наиболее важными различиями между данными видами ионизирующего излучения являются, во-первых, способность ионизирующей радиации проникать внутрь ткани; во-вторых, разное время, необходимое для получения нужной дозы поглощения (Smestad T.I. et al., 1989; Stachowisz W„ 1999; Lancker M. et al., 2000; Tacker M., et al. 2002).

Наши исследования показали, что наиболее выраженные изменения в структуре соединительнотканных биоматериалов наблюдаются при стерилизации потоком быстрых электронов. Поэтому облучение потоком быстрых электронов мы рекомендуем использовать при стерилизации биоматериалов с третьим, наиболее высоким уровнем структурной стабильности, и имеющих определенную геометрическую форму и небольшой объем.

На основании изложенного можно заключить, что радиоустойчивость биоматериалов определяется совокупностью эндогенных и экзогенных факторов. Эндогенные факторы являются своеобразной константой, отражающей исходную структуру донорской ткани, а экзогенными факторами можно варьировать в зависимости от целей практического использования биоматериалов. Отсюда следует, что, манипулируя эндогенными факторами, т.е. подбирая ткани с различным уровнем структурной стабильности, и экзогенными - за счет выбора вида и дозы радиационного воздействия, можно разработать технологические схемы селективной радиационной стерилизации биоматериалов.

Результаты проведенного экспериментального исследования позволили оценить значение селективной радиационной стерилизации биоматериалов для реализации их биологических свойств после имплантации. В качестве имплантируемого биоматериала использовали трансплантаты сухожилия, как материал с низким уровнем структурной стабильности, деструктивные изменения в котором проявляются даже при небольших вариациях доз радиационного воздействия. С другой стороны, структура трансплантатов сухожилия, вследствие своей простоты, позволяет объективно оценить различия в процессе резорбции - замещения после имплантации.

В первой серии экспериментов имплантировали трансплантаты с сохраненной фиброархитектоникой, т.е. трансплантаты сухожилия, обработанные по технологии Аллоплант и стерилизованные гамма-излучением дозой 15 кГр. Во второй серии имплантировали трансплантаты с выраженной деструкцией волокнистого остова - нативные сухожилия, стерилизованные потоком быстрых электронов дозой 25 кГр. И в третьей - трансплантаты с модифицирован-

ной структурой, т.е. обработанные по технологии Аллоплант и лиофилизиро-ванные, стерилизованные гамма-излучением дозой 15 кГр.

У трансплантатов сухожилий, имеющих сохраненную структуру, процесс замещения протекает равномерно от периферии к центру, образуя через 120 суток с момента операции регенерат, повторяющий архитектонику имплантируемого биоматериала, но отличающийся более рыхлым расположением волокнистых пучков.

Трансплантация сухожилий с признаками деструктивных изменений приводит к быстрому и сплошному замещению, при котором исключается роль формообразующего фактора волокнистого остова трансплантата. Происходит быстрый лизис пересаженного трансплантата. Сформировавшийся на 90 сутки регенерат больше напоминает рубцовую ткань с неупорядоченной архитектоникой коллагеновых волокон.

Пересадка лиофилизированного трансплантата сухожилия, имеющего модифицированную структуру, приводит к формированию регенерата, представленного пучками разнонаправленных волокон, характерных для плотной неоформленной волокнистой соединительной ткани. Срок формирования регенерата - 120 суток.

Известно, что скорость и характер замещения трансплантируемого материала в значительной степени зависят от его фиброархитектоники (Мул-дашев Э.Р., 1994; Нигматуллин Р.Т., 1996; Муслимов С.А., 2000). Из результатов проведенных экспериментов видно, что различия в степени сохранности волокнистого остова биоматериала после стерилизации определяют как сроки его лизиса после имплантации, так и характер замещения новообразованной тканью.

Однако, опираясь только на экспериментальный материал, невозможно получить полное представление об истинной ценности того или иного способа консервации и стерилизации применяемых трансплантатов (Савельев В.И., 1987). Трансплантаты, при изготовлении которых используется селективная радиационная стерилизация, получили широкое и успешное применение в различных областях восстановительной хирургии (офтальмохирургия, стоматология, челюстно-лицевая хирургия, травматология, нейрохирургия, урология, кардиохирургия, гинекология, абдоминальная хирургия и т.д.). На сегодняшний день серийно выпускается 83 вида трансплантатов, которыми обеспечиваются потребности 378 клиник России и стран СНГ.

выводы

1. Радиорезистентность соединительнотканных биоматериалов определяется эндогенными и экзогенными факторами. Эндогенными факторами являются особенности фиброархитектоники и состав неколлагеновых компонентов тканей, а экзогенными - их химическая и физическая обработка, вид и доза радиационного воздействия. Выбор вида и дозы ионизирующего излучения с учетом особенностей фиброархитектоники и гистохимического состава трансплантатов обеспечивает их стерильность при сохранении биопластических свойств.

2. По особенностям фиброархитектоники биоматериалов различаются три уровня структурной стабильности тканей, коррелирующие с радиоустойчивостью. Наименее устойчивы к радиационной стерилизации коллаге-новые волокна, образующие сеть вокруг пучков первого и второго порядков, определяются как первый и второй уровни стабильности. Наиболее прочный третий уровень стабильности представлен сложной пространственной организацией пучков коллагеновых волокон.

3. Фактором, влияющим на радиоустойчивость биоматериалов, является состав неколлагеновых компонентов соединительной ткани. Высокое содержание в тканях таких неколлагеновых компонентов, как сульфатиро-ванные гликозаминогликаны и триглицериды жирных кислот, обуславливает их радиорезистентность.

4. Химическая обработка тканей не приводит к нарушению фиброархитектоники и, соответственно, не снижает радиоустойчивость соединительнотканных биоматериалов. Физическая обработка (лиофилизация) тканей приводит к существенному снижению радиоустойчивости за счет фрагментации пучков коллагеновых волокон биоматериалов.

5. Изменения прочностных и деформативных свойств биоматериалов при радиационной стерилизации связаны с нарушениями их фиброархитектоники: выраженные деструктивные изменения радиационно-стерилизованных трансплантатов сухожилия проявляются в уменьшении их биомеханических показателей; сохранение структуры трансплантатов дермы и гиалинового хряща при радиационном воздействии обеспечивает сохранение их прочностных характеристик при различных видах и дозах радиационного воздействия. Радиационная стерилизация лиофилизирован-ных соединительнотканных трансплантатов приводит к снижению предела прочности и модуля упругости, при сохранении деформативных свойств.

6. Изменения фиброархитектоники биоматериалов и их пластических свойств находятся в прямой зависимости от дозы ионизирующего излучения. Стерилизация потоком быстрых электронов оказывает более выраженное деструктивное воздействие, чем гамма-излучение.

ресадке биоматериала с сохраненной фиброархитектоникой происходит его постепенное замещение адекватным регенератом. Деструкция волокнистого остова радиационно-стерилизованного трансплантата приводит к быстрой его резорбции с формированием рубца.

8. Радиационное воздействие потоком быстрых электронов и гамма-излучением дозами 15-25 кГр является эффективным для достижения стерильности соединительнотканных биоматериалов.

Практические рекомендации

1. Разработанная технология селективной радиационной стерилизации биоматериалов позволяет сохранять их биологические и механические свойства, и может быть рекомендована для использования в практической деятельности тканевых банков.

2.Для стерилизации трансплантатов сухожилия нами предложено использовать гамма-излучение дозой, не превышающей 15 кГр. Стерилизация потоком быстрых электронов в любых дозах, а также более высокие дозы гамма-излучения, приводят к нарушению фиброархитектоники и прочностных свойств данных трансплантатов.

3.Время набора максимальной стерилизующей дозы потока быстрых электронов составляет 30 секунд, а гамма-излучения - 5 часов. Поэтому с практической точки зрения, облучение потоком быстрых электронов рекомендуется использовать при стерилизации биоматериалов, обладающих высокой радиационной устойчивостью и имеющих определенную геометрическую форму и небольшой объем.

4. Концепция радиационной устойчивости соединительнотканных биоматериалов, учитывающая особенности их волокнистого остова и состав неколлагеновых компонентов, рекомендуется в качестве теоретической основы при обосновании методов радиационной стерилизации вновь разрабатываемых трансплантатов.

5.Совокупность морфологических методов исследования, включающих количественный поляризационно-оптический анализ, сканирующую электронную микроскопию и модифицированный метод осаждения нитрата серебра на поверхности биоматериала, может использоваться для комплексной оценки сохранности фиброархитектоники соединительнотканных биоматериалов на этапах их физико-химической обработки и радиационной стерилизации.

Список опубликованных статей

1. Шангина O.P. Структура соединительнотканных трансплантатов при различных вицах радиационной стерилизации //Материалы VI научно-практической конференции Екатеринбургского Центра МНТК «Микрохирургия глаза». - Екатеринбург, 1998.-С.141-142.

2. Сельский Н.Е., Мухамадиев Д.М., Шангина O.P., Шумкин А.М. Костная регенерация с применением барьера из аллодермальной ткани//Актуальные проблемы хирургии и морфологии. - Уфа, 1998. - С.159-161.

* 3. Нигматуллин Р.Т., Муддашев Э.Р., Булатов Р.Т., Чернов Н.В., Шангина O.P., Хасанов P.A. Экспериментально-морфологическое исследование гомогенизированных аллотрансплантатов// Новые технологии микрохирургии глаза. -Оренбург, 1998.-С.64-66.

4. Мустафин А.Х, Хасанов P.A., Шангина O.P. Способ получения материала для ' укрытия раневой поверхности печени. Патент РФ на изобретение № 2139735 от

20.10.1999.

5. Шангина O.P. Экспериментальное исследование трансплантата твердой мозговой оболочки // Аюуальные проблемы клинической офтальмологии. - Челябинск, 1999.-С.220-222.

6. Шангина O.P. Биомеханические свойства трансплантатов твердой мозговой оболочки при различных способах радиационной стерилизации//Макро- и микроморфология (межвузовский сборник). - Саратов, 1999.-С. 76-78.

7. Родионов О.В., Галимова Л.Ф., Шангина O.P. Хирургическое лечение ятро-генной субатрофии глазного яблока у больных с сахарным диабетом //Материалы научно-практической конференции офтальмологов, посвященной 10-летию Оренбургского филиала МНТК «Микрохирургия глаза». - Оренбург, 1999. - С.33-34.

8. Нигматуллин Р.Т., Шангина O.P. Устойчивость волокнистых соединительнотканных биоматериалов к воздействию радиационного излучения //Труды научно-исследовательского и учебно-методического центра биомедицинских технологий ВИЛАР. - Москва, 1999.-С.142-147.

9. Шангина O.P., Нигматуллин Р.Т., Саттарова Л.С. Радиационная устойчивость структур опорного аппарата человека//Морфология. Научно-теоретический медицинский журнал.-Санкт-Петербург, 2000. Т. 117, №3.-С. 134-135.

10. Шангина O.P. Радиационная стерилизация соединительнотканных биоматериалов. // Биоимпланшлогия на пороге XXI века. - Москва, 2001. - С. -30-31.

11. Сироткина И.А., Нигматуллин Р.Т., Шангина O.P., Марычева Н.М., Бабайова О.М., Малышева С.Н., Лунина С.Н.. Косметическая реабилитация пациентов после удаления глазного яблока //Материалы IX научно-практической конференции Екатеринбургского МНТК «Микрохирургия глаза». - Екатеринбург, 2001.С-191-193.

12. Шангина O.P., Нигматуллин Р.Т.. Некоторые аспекты радиационной стерилизации трансплантатов.//Материалы XII научно-практической конференции «Новые технологии в микрохирургии глаза». - Оренбург, 2001. С-209-211.

13. Шангина О.Р., Хасанов Р.А.. Устройство для лазерной резки трансплантатов из биологических тканей. Свидетельство на полезную модель № 23402. Зарегистрировано в Гос. Реестре полезных моделей РФ 11 января 2002 года.

14. Шангина О.Р. Радиационная устойчивость биологических структур// Морфология. Научно-теоретический медицинский журнал. - Санкт-Петербург. 2002. Т.12№ 1,№2-3.-С.176-177.

15. O.RJShangina. The biomaterials structure safety depending upon the kind of the conservation and sterilization. Past, Present and Future of Tissue Banking Bratislava, 2002. P.93.

16. Тарасов Ю.В., Хасанов P.А., Шангина О.Р. Способ получения биопротеза для артериальной реконструкции. Патент РФ на изобретение №2189142 от 20.09.2002г.

17. МуддашевЭ.Р., Муслимов С.А., Галимова В.У., Нигматуллин Р.Т., Шангина О.Р., Мусина Л.А. и др. Биомагериалы Аллоплант для регенеративной хирургии. Патент РФ на изобретение № 2189257 от 20.09.2002г.

18. Шангина О.Р. Радиационная устойчивость волокнистых соединительнотканных биоматериалов // Регенеративная хирургия, www.reg-surgeru.ru. - 8 с.

19. Сурков В.А., Плечев В.В., Шангина О.Р., Хасанов Р.А. Способ профилактики тромбэндокардита при протезировании клапанов сердца Патент РФ на изобретение № 2213525 от 10.10.2003г.

20. О.Р. Шангина, РА.Хасанов, А.Р.Мухаметов, Р.З.Султанов. Биомеханические свойства ксеносухожильных нитей//Материалы Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2003». -Уфа-2003.-С 107-108.

21. Шангина О.Р. Сохранность структуры биоматериалов в зависимости от вида консервации и стерилизации//Морфология. Научно-теоретический медицинский журнал. Санкт-Петербург. - №5, том 124,2003г.-С.82.

22. Shangina O.R., Khasanov R.A. Alloplant - biomaterials production process from connective tissues. 12th international congress of the European association of tissue banking. Brugge, Belgium, 2003. - P.75.

23. Биоматериалы Аллоплант для регенеративной хирургии / Методические рекомендации. - Москва-Уфа, 2004. - 40 с.

24. Шангина О.Р., Нигматуллин Р.Т. Морфологические и биофизические критерии радиационной устойчивости аллостатических трансплантатов// Морфология. Научно-теоретический медицинский журнал. Санкт-Легербург. - №4, том 126,2004г. - С-138.

25. Нигматуллин Р.Т., Шангина О.Р. Радиационная чувствительность аллостатических биоматериалов//Материалы II Всероссийского симпозиума с международным участием «Клинические и фундаментальные аспекты клеточных тканевых биотехнологий »- Самара, 28-30 июня 2004г. - С.42-43.

26. Shangina O.R Radiation sensitivity of allostatic biomaterials. 16lh Internacional Congress of the IFAA. Kyoto, Japan, 22-27 august, 2004,- P.231

27. Shangina O.R., Nigmatullin R.T., Musina L.A. The sterilization radiation effect upon the biological properties of the biomaterials. 13th International Congress of European association of tissues banking Prague, Czech Repablic, 13-16 October, 2004.P-141.

28. Muldashev E.R., Muslimov S.A., Musina L.A., Nigmatullin R.T., Lebedeva A.I., Shangina O.R., Khasanov R.A. The role of macrophages in the tissues regeneration stimulated by the biomaterials. Cell and Tissue Banking, Volume 6, Number 2. June 2005.P 99-107.

29. Нигматуллин P.T, Шангина O.P., Гафаров В.Г., Мухаметов A.P. Восстановление структуры сухожилий с применением биоматериалов // Вестник Оренбургского Государственного Университета - Оренбург, сентябрь 2005 г.- С. 148-151.

30. Мустафин М.М., Хасанов P.A., Шангина O.P. Способ устранения дефектов радужной оболочки глаза. Патент РФ на изобретение № 2254842 от 27 июня 2005 г.

31. Нигматуллин Р.Т., Гафаров В.Г., Галимова В.У., Шангина O.P., Мухаметов А.Р. Тендопластика с использованием аплогенных биоматериалов. Краткий очерк. Уфа-2005. - 52с.

32. Лапчик ДР., Шангина O.P. Применение средств мультиплексной голографии в офтальмологии. Материалы 111 Международной технической конференции «Оптические технологии и телекоммуникации». Уфа, ноябрь 2005. - С. 276-277.

33. Shangina O.R., Nigmatullin R.T., Khasanov R.A. Factors, which determine sensitivity of the biomaterials to radiation sterilization. 14* International Congress of European Association of Tissues Banking. Florence, Italy, 08-11 december, 2005.- P. 35.

34. Д.Р. Лапчик, O.P. Шангина,И.В. Девяткин, Н.В.Завьялов, В.Т.Пунин, Н.П. Ситников, В.П. Тарантасов, A.B. Тельнов, И.В. Шориков. Малогабаритный линейный ускоритель электронов для стерилизации изделий медицинского назначения// Материалы научной конференции «Харитоновские научные чтения». - Саров, 21-24 марта 2006г. - С.31-33.

35. Шангина O.P., Нигматуллин Р.Т. Влияние радиационной стерилизации на структуру и свойства биоматериалов // Морфология. Научно-теорегаческий медицинский журнал. Сан кг- Петербург - № 3, том 129,2006г. - С.44-48

36. Шангина O.P. Факторы ращгорезистентности соединительнотканных биоматериалов// Технологии живых систем. Том 3, № 2,2006 г. - С.58-63.

37. Шангина O.P., Мусина Л.А. Экспериментальная пересадка радиадионно-стерилизованных биоматериалов //Труды научно-исследовательского и учебно-методического цетра биомедицинских технологий ВИЛАР. - Выпуск 24, Москва, 23 марта 2006.-С.111-115

38. Шангина O.P., Минигазимов P.C. Применение метода импрегнации нитратом серебра для оценки структурных изменений радаационно-сгерилизованных биоматериалов // Морфологические ведомости. Международный морфологический журнал. Москва - Берлин - № 1 -2,2006 г. - С.127-130.

39. Нигматуллин Р.Т, Шангина O.P., Хасанов P.A. Инновационные технологии в деятельности многопрофильного тканевого банка// Морфологические ведомости. Международный морфологический журнал. Москва - Берлин - № 1-2, приложение]^ 1.-2006. С. 213-215.

40. Шангина O.P. Морфологические основы лучевой стерилизации соединительнотканных биоматериалов//Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия: Ежегодник Российской ассоциации клинических анатомов в составе ВНОАГЭ. Приложение к журналу «Морфологические ведомости» - Вып. 6. -

Оренбург, 2006г. - С.81 -85.

41. Мулдашев Э.Р., Нигматуллин Р.Т., Гафаров В.Г., Муслимов СЛ., Гиззатуллина Л Л., Шангина O.P., Хасанов Р.А. Биологическая прокладка для лечения пульпита. Патент РФ на изобретение № 2276610 от 20 мая 2006г.

42. Шангина O.P. Анализ струюуры волокнистой соединительной ткани при различных видах радиационного воздействия//Морфология. Научно-теоретический медицинский журнал. Санкт-Петербург - № 4, том 129, 2006г. -С. 139.

43. Шангина O.P., Зарудий Р.Ф. Структурная организация аллотрансплашатов костей свода черепа//Морфология. Научно-теоретаческий медицинский журнал. Санкт-Петербург - № 4, том 129,2006г. - С.139.

44. Кадыров Р.З., Шангина O.P. Аллоплант - альтернатива донорской роговице при кератопластике//Вестник Оренбургского Государственного Университета. - Оренбург, ноябрь 2006 г.- С. 132-134.

45. Мулдашев Э.Р., Шангина O.P., Хасанова Ю.С., Хасанов Р.А. Сфуктурные модификации аллогенного сухожильного трансплантата и морфологические основы его замещения // Вестник Оренбургского Государственного Университета. - Оренбург, ноябрь 2006 г.- С. 214-217.

46. Мусина Л.А., Шангина O.P., Мулдашева Н.Э.. Султанов Р.З. Сфуктурные преобразования аллотрансплантатов при пластаке посправматических дефектов орбиты // Вестник Оренбургского Государственного Университета. - Оренбург, ноябрь 2006 г.- С. 222-223.

47. Мулдашев Э.Р., Нигматуллин Р.Т., Шангина O.P., Чернов Н.В., Киселев Е.В. Социальные и медико-биологические аспекты трансплантации тканей. - Уфа-2007.-124 с.

Шангина Ольга Ратмировна Морфологические основы радиационной устойчивости соединительнотканных трансплантатов

03.00.25 - гистология, цитология и клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 25.01.2007. Бумага офсетная. Формат 60x84Vi6. Объем 2,7 печ. листа. Гарнитура Times. Тираж 150 экз. Заказ № 120

Типография ИП Шмаков Р. Б. 450006, г. Уфа, ул. Цюрупы, 149.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Шангина, Ольга Ратмировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Классификация и виды биоматериалов.

1.2.Методы консервации биоматериалов.

1.3.Современные технологии стерилизации биоматериалов.

1.4.Методы радиационной стерилизации, применяемые в биологии и медицине.

1.5.Влияние радиационной стерилизации на структуру и механические свойства биоматериалов.

1.6.Морфологические основы перестройки и замещения соединительнотканных биоматериалов.

ГЛАВА 2. СТРУКТУРНЫЕ ОСНОВЫ РАДИАЦИОННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ СОЕДИНИТЕЛЬНОТКАННЫХ БИОМАТЕРИАЛОВ.

2.1 .Материалы и методы исследования.

2.1.1 .Заготовка аллогенных тканей и методы их физико-химической обработки.

2.1.2.Методы радиационной стерилизации соединительнотканных трансплантатов.

2.1.3.Методы морфологического исследования.

2.2.Структурные особенности соединительнотканных биоматериалов, подвергнутых физической и химической обработке.

2.2.1 .Влияние физической ихимической обработки наструктуру соединительнотканных биоматериалов.

2.3 .Радиационная устойчивость соединительнотканных биоматериалов с различной фиброархитектоникой.

2.3.1. Радиационная устойчивость трансплантатов сухожилия.

2.3.2. Радиационная устойчивость трансплантатов дермы.

2.3.3.Радиационная устойчивость трансплантатов фиброзной капсулы почки.

2.3.4.Радиационная устойчивость трансплантатов подкожной жировой клетчатки.

2.3.5.Радиационная устойчивость трансплантатов гиалинового хряща.

ГЛАВА 3. БИОМЕХАНИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СОЕДИНИТЕЛЬНОТКАННЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ.

3.1.Методы биомеханического исследования.

3.2.Биомеханические свойства соединительнотканных трансплантатов.

3.3.Влияние радиационной стерилизации на биомеханические свойства соединительнотканных трансплантатов.

3.3 Л .Характеристика биомеханических свойств трансплантатов сухожилия.

3.3.2.Характеристика биомеханических свойств трансплантатов дермы.

3.3.3.Характеристикапрочностныхидеформативныхсвойствтрансплан-татов гиалинового хряща.

ГЛАВА 4. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ СТЕРИЛИЗАЦИИ БИОМАТЕРИАЛОВ РАЗЛИЧНЫМИ ВИДАМИ И ДОЗАМИ РАДИАЦИОННОГО ИЗЛУЧЕНИЯ.

4.1 .Материалы и методы бактериологического исследования.

4.2.0ценка эффективности радиационной стерилизации биоматериалов различными дозами и видами ионизирующих излучений.

ГЛАВА 5. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РАДИАЦИОННО-СТЕРИЛИЗОВАННЫХ БИОМАТЕРИАЛОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ.

5.1.Материалы и методы исследования.

5.2.Результаты экспериментально-морфологического исследования.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические основы радиационной устойчивости соединительнотканных трансплантатов"

Современную восстановительную хирургию трудно представить без тканевых трансплантатов, с использованием которых выполняются многие реконструктивные операции. Тканевые трансплантаты, используемые для пересадок, согласно международной терминологии трансплантации тканей, принятой в г. Вене в 1967 году, определяются как ауто-, алло- и ксенотрансплантаты (Коваленко П.П., 1975). Оптимальные результаты операций достигаются с применением ашюгенных трансплантатов, или биоматериалов*, вследствие того, что они вызывают наименьшую иммунную реакцию и стимулируют процессы репаративной регенерации тканей (Salamon A., Hamori J., 1977; Versen R. et.a)., 1990; Bujia J. et. al., 1993; Muldashev E.R. et. al., 1999). Известно, что консервированные трансплантаты нежизнеспособны и после пересадки лизируются и замещаются новообразованной тканью реципиента (Seiffert К.Е., 1967; Коваленко П.П., 1975; Мулдашев Э.Р. и соавт., 1978). Подбирая для трансплантации ткани с различной фиброархитектоникой, физико-механическими свойствами и гистохимическим составом, можно прогнозировать свойства регенерата, замещающего пересаженный биоматериал (Мулдашев Э.Р., 1994; Нигматуллин Р.Т., 1996; Muldashev E.R. et al., 1999; Муслимов С.A, 2000).

Развитие технологий тканевых пересадок привело к созданию трансплантатов с модифицированной структурой и гистохимическим составом. При их консервации и стерилизации происходит структурная перестройка, а также изменение гистохимического состава. Многие авторы для определения подобных трансплантатов используют термин «биоматериал». В данной работе оба термина «биоматериалы» и «трансплантаты» используются нами как синонимы. каркаса. При оптимальном методе физико-химического воздействия, трансплантаты должны иметь свободную от клеток волокнистую структуру (Beigel A. et.al., 199]; Davies А.Н., Parums D.V., 1992; Allaire E. et.al.,1994).

Как известно, биологические ткани являются средой, способной поддерживать в жизнеспособном состоянии многие микроорганизмы и вирусы, что предъявляет повышенные требования к биологической безопасности этих тканей (Pruss А., Као М., Gohs U. et al. 2002). Для достижения безопасности кадаверных тканей используют метод радиационной стерилизации, который считается самым эффективным (Каушанский Д.А. и соавт., 1984; Туманян М.А., 1989; Пономарев В.Н. и соавт., 1993, Pruss A., Baumann В., Seibold М. et al. 2001). Высокая бактерицидная активность и большая проникающая способность радиационного излучения делают этот метод стерилизации наиболее перспективным по сравнению с другими методами. Поиск оптимальных радиационных технологий продолжается, при этом результаты исследований ведущих тканевых банков России и Европы во многом отличаются и нередко противоречат друг другу (Савельев В.И., 2001; Лекишвили М.В., 2005; Dziedzic-GoclawskaA., 2000; VerzenR., 2003). Теоретическая разработка проблем радиационной стерилизации в практике тканевых банков существенно отстает от интенсивно развивающейся клинической и экспериментальной трансплантологии. Стандарты, регламентирующие дозы радиационной стерилизации, разработанные в России и Европейской ассоциации тканевых банков (ЕАТВ), не учитывают структурных особенностей самих биологических тканей и методов их консервации. Радиационная стерилизация часто приводит к нежелательным структурным изменениям в биоматериалах (Belkoff S.M., 1992; Bogdansky S. et.al. 2004; Dziedzic-Godawska A. et.al. 2004). Выбор вида и дозы облучения для стерилизации J - это компромисс между радиационным воздействием, необходимым для инактивации микроорганизмов, и сохранением структуры биоматериалов. Поэтому необходимо оптимальное сочетание методов обработки и стерилизации для максимального сохранения биологических свойств биоматериалов. Речь идет о таких свойствах соединительнотканных трансплантатов, как иммуногенность, способность стимулировать процессы репаративной регенерации, физико-механические свойства, которые в значительной степени определяют результаты их применения в клинической практике. Научная разработка технологии консервации и стерилизации аллогенных трансплантатов, позволяющей сохранить весь указанный спектр биологических свойств, является одной из наиболее актуальных проблем современной трансплантологии и восстановительной хирургии (Савельев Б.И, 2001; Лекишвили М.В., 2001). На сегодняшний день отсутствует единая теория радиационной устойчивости биоматериалов, которая учитывала бы их струюуру, гистохимический состав, метод консервации и цель трансплантации. В этой связи весьма перспективной представляется разработка таких методов радиационной стерилизации, которые, с одной стороны гарантировали бы полную стерильность биоматериалов, а с другой - сохранение их биологических свойств.

Задачи исследования:

3. Изучить особенности резорбции и замещения радиационно-стерилизо-ванных биоматериалов при экспериментальной имплантации.

5. Разработать комплекс адекватных морфологических методов для контроля структурных изменений соединительнотканных биоматериалов после радиационной стерилизации.

Научная новизна

Впервые предложена концепция, согласно которой радиационная устойчивость соединительнотканных биоматериалов зависит от эндогенных и экзогенных факторов, а именно - особенности фиброархитектоники и состава не-коллагеновых компонентов тканей, химической и физической обработки, вида и дозы радиационного воздействия.

Практическая значимость и внедрение результатов работы

Данное исследование выполнено в рамках совместной научной программы Всероссийского Центра глазной и пластической хирургии (г. Уфа) и Российского Федерального Ядерного центра (РФЯЦ г. С аров). Полученные результаты послужили основой для разработки технологии селективной радиационной стерилизации соединительнотканных трансплантатов с учетом факторов их радиорезистентности. Для внедрения представленной технологии в практику, в РФЯЦ был сконструирован радиационно-технологический комплекс на базе линейного ускорителя электронов ЛУ-7-2. Указанный комплекс в настоящее время смонтирован на базе тканевого банка Всероссийского центра глазной и пластической хирургии и используется для стерилизации соединительнотканных биоматериалов. Представленная радиационная установка и технология лучевой стерилизации биоматериалов представляют собой непосредственный результат научных исследований данной диссертационной работы.

В настоящее время биоматериалы, прошедшие радиационную стерилизацию по разработанной технологии, поставляются в 378 клиник России и стран СНГ. Трансплантаты прошли обязательные в России токсикологическую экспертизу и процедуру экспериментальных и клинических испытаний при Комитете по новой медицинской технике МЗ РФ (протокол испытаний № 5610, 5611 от 01.12.2005 г. ИЛ ФГУ «ВНИИМТ») и сертифицированы (Регистрационное удостоверение № ФС 01033584/3159-06; Сертификат соответствия № РОСС RU.HM 02.В13996; ТУ 42-2-537-2002). Технология изготовления биоматериалов защищена патентом.

Основные положения, выносимые на защиту

2. В соединительнотканных биоматериалах можно выделить три уровня структурной стабильности, которые характеризуются определенной фиброар-хитектоникой и обусловливают степень их радиорезистентности.

3. Наименьшей радиационной устойчивостью обладают биоматериалы с фиброархитектоникой, характерной для первого уровня структурной стабильности, а наибольшей - биоматериалы с третьим уровнем стабильности и высоким содержанием неколлагеновых компонентов.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на заседании Башкирского отделения Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов (Уфа, 1999г.); на IV съезде анатомов, гистологов, эмбриологов Российской Федерации (Ижевск, 1999г.); на V конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Ульяновск, 2000г.); на Симпозиуме по проблемам тканевых банков «Биоимплантология на пороге XXI века» (Москва, 2001г.); на XII научно-практической конференции «Новые технологии в микрохирургии глаза» (Оренбург, 2001г.); на VI Конгрессе международной ассоциации морфологов (Уфа, 2002г.); на XI Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Братислава, 2002г.); на Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» (Оренбург, 2003 г.); на XII Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Брюгге, Бельгия, 2003 г.); на VII Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Казань, 2004г.); на XVII Международном Конгрессе Всемирной Ассоциации анатомов (Киото, Япония, 2004г.); на II Всероссийском Симпозиуме «Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий» (Самара, 2004г.); на XIII Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Прага, Чехия, 2004г.); на XV Российской научно-практической конференции «Новые технологии микрохирургии глаза» (Оренбург, 2004г.); на XIV Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Тканевых банков (Флоренция, Италия, 2005г.); на Российской научной конференции «Новое в экспериментально-морфологическом изучении глаза» (Оренбург, 2005г.), на Всероссийской научной конференции «Вопросы морфологии» (Уфа, 2006г.), VIII Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Орел, 2006г.), Юбилейном пленуме правления ВНОАГЭ (Москва, 2006г.).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Шангина, Ольга Ратмировна

ВЫВОДЫ

1. Радиорезистентность соединительнотканных биоматериалов определяется эндогенными и экзогенными факторами. Эндогенными факторами являются особенности фиброархитектоники и состав неколлагеновых компонентов тканей, а экзогенными - их химическая и физическая обработка, г» г г гт tj гтлю пагттхоггплггплгл плтгтл Ллтотла Дг r^nn dt/ttq и ГГЛ91Т т/лиглт/пт/шгггргп 1Ч/Д, fl ди JU ^идгшцииии^! V UV J^VIiV 1 Ll/i/lf l^iMWJ^ W иди 11 ^VJUl ll v* l l li ^il l j 1KJ lii, VI v излучения с учетом особенностей фиброархитектоники и гистохимического состава трансплантатов обеспечивает их стерильность при сохранении биопластических свойств.

2.По особенностям фиброархитектоники биоматериалов различаются три уровня структурной стабильности тканей, коррелирующие с радиоустойчивостью. Наименее устойчивы к радиационной стерилизации коллагеновые волокна, образующие сеть вокруг пучков первого и второго порядков, определяются как первый и второй уровни стабильности. Наиболее прочный третий уровень стабильности представлен сложной пространственной организацией пучков коллагеновых волокон.

3.Фактором, влияющим на радиоустойчивость биоматериалов, является состав неколлагеновых компонентов соединительной ткани. Высокое содержание в тканях таких неколлагеновых компонентов, как сульфатирован-ные гликозаминогликаны и триглицериды жирных кислот, обуславливает их радиорезистентность.

5.Изменения прочностных и деформативных свойств биоматериалов при радиационной стерилизации связаны с нарушениями их фиброархитектоники: выраженные деструктивные изменения радиационно-стерилизованных трансплантатов сухожилия проявляются в уменьшении их биомеханических показателей; сохранение структуры трансплантатов дермы и гиалинового хряща при радиационном воздействии обеспечивает сохранение их прочностных характеристик при различных видах и дозах радиационного воздействия. Радиационная стерилизация лиофилизированных соединительнотканных трансплантатов приводит к снижению предела прочности и модуля упругости, при сохранении деформативных свойств.

7. Сроки и характер замещения соединительнотканных биоматериалов, а также структура регенерата определяются степенью сохранности волокнистого остова трансплантата после радиационной стерилизации. При пересадке биоматериала с сохраненной фиброархитектоникой происходит его постепенное замещение адекватным регенератом. Деструкция волокнистого остова радиационно-стерилизованного трансплантата приводит к быстрой его резорбции с формированием рубца.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Шангина, Ольга Ратмировна, Уфа

1. Абрамян, Е.А. Передача энергии электронным пучком: проблемы и перспективы. Промышленные ускорители электронов. -М.: Энергоатомиздат, 1986.-96 с.

2. Абрамова, И.М. К вопросу о стерилизации ксено биопротезов клапанов сердца / И.М. Абрамова, С.М. Красовская // Дезинфекция и стерилизация. Перспективы развития: матер. Всесоюз. науч. конф. Волгоград, 1983. - С. 4-5.

3. Аброян, А.И. Физические основы электронной и ионной технологии / А.И. Аброян, А.Н. Андронов, А.И. Титов. М.: Высшая школа, 1984. - 75 с.

4. Агроскин, JI.C. Цитофотометрия / JI.C. Агроскин, Г.В. Бабаян. Л., 1977.-297 с.

5. Александров, И .Я. Выбор методов оценки жизнеспособности консервированной ткани / И.Я. Александров // Тез. докл. науч. конф. слушателей академии.-Л.: 1973.-С. 4-5.

6. Афанасьев, Ю.И. Соединительные ткани / Ю.И. Афанасьев, Н.П. Оме-льяненко // Руководство по гистологии: в 2-х т. / Данилов Р.К., Быков В.Л. -СПб.: Спец. литература, 2001. Т. 1 - 495 с.

7. Бактерицидное действие тормозного излучения / С.Г. Щеглов, Е.П. Павлов, М.П. Гринев и др. //Химико-фармацевтический журнал. 1987. - Т. 21, №4.-С. 488-491.

8. Бегун, П.И. Биомеханика. СПб.: Политехника, 2000. - 463 с.

9. Бедило, В.Я. Результаты внутрироговичной пересадки различных тканей в эксперименте / В.Я. Бедило, А.Г. Носов, В.И. Тарабукин // Вестн. офтальмологии. 1980. - № 2. - С. 44-47.

10. Березовский, В.А. Биофизические характеристики тканей человека / В.А. Березовский, Н.Н. Колотилов. Киев: Наукова думка, 1990. - 224 с.

11. Бесядовский, Р.А. Справочное руководство для радиобиологов / Р.А. Бесядовский, В.В. Иванов, А.К. Козюра. -М.: Атомиздат, 1978. 336 с.

12. Бикмуллин, Р.А. Морфологические особенности волокнистого каркаса и органного кровеносного русла кожи стопы человека: автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа, 1996. - 20 с.

13. Бикмуллин, Р.А. Об упругом и эластическом компонентах мягкого остова подкожной основы подошвы человека / Р.А. Бикмуллин // Актуальные вопросы биомедицинской и клинической антропологии: тез. докл. науч. конф. Красноярск, 1992. - С. 94-95.

14. Биокомпозиционные материалы на основе сульфатированных глико-заминогликанов / С.Ю. Иванов, Н.Ф. Бизяев, A.M. Панин и др. // Новое в стоматологии. 1999. - Т. 2, № 5. - С. 37-41.

15. Биологические основы применения биоматериалов «Аллоплант» в хирургии / Э.Р. Мулдашев, С.А. Муслимов, Р.Т. Нигматуллин, JT.A. Мусина // Биоимплантология на пороге XXI века: тез. симп. М., 2001. - С. 48.

16. Биохимия человека: в 2-х т. / Р. Мари, Д. Греннер, П. Мейс, В. Родуэл. -М.: Мир, 1993.-Т. 2.-415 с.

17. Брус, И.Г. Костная пластика формалинизированными трансплантатами / И.Г. Брус, Б.М. Топор, О.Е. Беденкова. Кишинев, 1989. - 116 с.

18. Быков, B.JI. Цитология и общая гистология. СПб., 1999. - 314 с.

19. Василенко, И.Я. Состояние и перспектива исследований биологических действий малых доз радионуклеидов / И.Я. Василенко // Биологические эффекты малых доз радиации. М., 1983. - С. 49-55.

20. Бахрушин, Ю.П. Линейные ускорители электронов для промышленности и медицины / Ю.П. Бахрушин//Атомная энергия.-1983.-Т. 55, вып. 6.-С. 429-433.

21. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.Н. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 252 с.

22. Волкова, О.В. Атлас сканирующей электронной микроскопии клеток, тканей и органов / О.В. Волкова, В.А. Шахламов, А.А. Миронов. М.: Медицина, 1987.-464 с.

23. Волкова, О.В. Основы гистологии с гистологической техникой / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий. М.: Медицина, 1982. - 304 с.

24. Волова, JI.T. Костно-пластические материалы направленного антимикробного действия / Л.Т. Волова, А.Г. Кириленко // Биоимплантология на рубеже XXI века: тез. симп. М., 2001. - С. 16.

25. Восстановительная хирургия повреждений опорно-двигательного аппарата / М.В. Казарезов, A.M. Королева, В.А. Головнев и др.. Новосибирск, 2004. - С.83-86.

26. Говалло, В.И. Иммунологическая тактика при трансплантации тканей /

27. B.И. Говалло // Вопр. иммунол. в трвматол. и ортопедии. Л., 1976. - С. 69-76.

28. Говалло, В.И. Трансплантация тканей в клинике. М., 1979. - 288 с.

29. Григорян, С.С. Биомеханика и некоторые общие вопросы биологии /

30. C.С. Григорян, С.А. Регирер // Тез. докл. третьей Всесоюз. конф. по проблемам биомеханики. Рига, 1983. - Т. 1. - С. 6-7.

31. Гудушаури, О.Н. Стерилизация костной ткани парами формалина / О.Н. Гудушаури, К.Д. Тимашкевич, В .Я. Брускина // Ортопед.,травмотол. И протез. 1970. -№ 9. - С. 15-17.

32. Джагацпанян, Р.В. Введение в радиационно-химическую технологию / Р.В. Джагацпанян, В.И. Косоротов, М.Т. Филиппов. М.: Атомиздат, 1979. -188с.

33. Дунаев, П.В. Органоспецифическая детерминация и индуктивные свойства генетически родственных тканей в онтогенезе / П.В. Дунаев // Российские морфологические ведомости. 1999. - № 1-2. - С. 63.

34. Емельянов, В.А. Трансплантация аллогенного хряща при пластических операциях / В.А. Емельянов // Реконструктивная и трансплантационная хирургия: сб. науч. тр. Ростов н/Д., 2000. - С. 242-248.

35. Зайкова, М.В. Пересадка твердой мозговой оболочки плода человека при прогрессирующей близорукости / М.В. Зайкова, А.Н. Лялин // Вестн. офтальмологии. 1984. - № 6. - С. 33-36.

36. Зайкова, М.В. Пластическая офтальмохирургия. 2-е изд. - М.: Медицина, 1982.- 195 с.

37. Зайчик, Д. Количественные методы изучения распределения изотопов и поглощенных доз на тканевом и структурном уровнях: автореф. дис. канд. тех. наук. -М., 1972.-С. 17.

38. Имамалиев, А.С. Биологическая оценка трансплантируемых тканей. -М.: Наука, 1975.- 184 с.

39. Имамалиев, А.С. Заготовка и консервация тканей опорно-двигательного аппарата. -М.: Медицина, 1970.-224 с.

40. Иоффе, И.Л. Вопросы изучения механических свойств некоторых мяг--I ких тканей и органов тела человека / И.Л. Иоффе, А.Н. Черномашенцев, В.А.

41. Ярцев // Биомеханика. Рига, 1975. - С. 174-176.

42. Использование консервированного аллохряща в ринопластике / И.В.

43. Пантюхин, И.А. Кирилова, В.Т. Подорожная, Н.И. Мосунова // Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий: матер. П Всерос. симп. Самара: Офорт, 2004. - С. 114.

44. Исследование свойств лиофилизированной и стерилизованной потоком быстрых электронов пуповины в эксперименте / М.В. Лекишвили, В.К. Ильина, В.Н. Васильев, И.А. Касымов // Биоимплантология на пороге XXI века: тез. симп. М., 2001. - С. 46-47.

45. Калинин, А.В. Пути совершенствования системы обеспечения лечебных учреждений травматолого-ортопедического профиля консервированными биоимплантатами: автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 2003. - 40 с.

46. Канюков, В.Н. Аллотрансплантация аортой в пластической офтальмо-хирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина. М.: Медицина, 2001.- 128 с.

47. Канюков, В.Н. Биологическое и экспериментально-гистологическое обоснование новых технологий в офтальмохирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина. М.: Медицина, 2005. - 160 с.

48. Каушанский, Д.А. Радиационно-биологическая технология / Д.А. Ка-ушанский, A.M. Кузин. М.: Энергоатомиздат, 1984. - 151с.

49. Клен, Р. Заготовка и консервирование тканей. Прага: Государственное изд-во мед. лит-ры, 1962. - 316 с.

50. Коваленко, П.П. Классификация трансплантационной хирургии / П.П. Коваленко // Реконструктивная и трансплантационная хирургия: сб. науч. тр. Ростов н/Д, 2000.-С. 166-171.

51. Коваленко, П.П. Клиническая трансплантология. Ростов н/Д, 1975. - 368 с.

52. Коваленко, П.П. Консервирование и пересадка хряща / П.П. Ковален-$ ко, В.А. Емельянов. -М.: Медицина, 1966. С. 13-51.

53. Коваленко, П.П. Основы трансплантологии. Ростов н/Д.: Изд-во Ростовского ун-та, 1975. - 179 с.

54. Коваленко, П.П. Современное состояние и перспективы развития консервирования и трансплантации тканей / П.П. Коваленко // Труды 5-го съезда хирургов Северного Кавказа. Ставрополь, 1966. - С. 11-23.

55. Корнилов, Н.В. Итоги деятельности и перспективы развития тканевых банков страны на современном этапе / Н.В. Корнилов, В.И. Савельев // Биоимплантология на рубеже XXI века: тез. симп. М., 2001. - С. 4.

56. Красовская, Г.П. Оценка некоторых способов удаления формальдегида из биологических объектов / Г.П. Красовская, Т.К. Юшина // Трансплантация биологических тканей, стерилизованных и консервированных формалином: сб. науч. тр. Л., 1980. - С. 23-26.

57. Кристинов, Г. Новые проблемы в хирургии. Консервирование и трансплантация тканей и органов. София: Медицина и физкультура, 1975. - Т. П. - 426 с.

58. Кулдашев, Д.Р. Характеристика тканей хряща и сухожилий, консервированных слабыми растворами формалина и их трансплантация: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1978. - 32 с.

59. Лаврищева, Г.И. Кость и хрящ / Г.И. Лаврищева, Л.Н. Михайлова // Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. М.: Медицина, 1987.- 185 с.

60. Лаврищева, Г.И. Морфологические и клинические аспекты репаратив-ной регенерации опорных органов и тканей / Г.И. Лаврищева, Г.А. Оноприенко. М.: Медицина, 1996. - 208 е.

61. Лекишвили, М.В. Варианты деминерализованных костных аллоимп-лантатов для использования в восстановительной хирургии / М.В. Лекишвили

62. Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий. Самара: Офорт, 2004. - С. 92-94.

63. Лекишвили, М.В. Технологии изготовления костного пластического материала для применения в восстановительной хирургии: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 2005. - 47 с.

64. Лимберг, А.А. Биологические и патофизиологические проблемы свободной пересадки собственной кожи. Л.: Наука, 1971. - 18 с.

65. Лучевая стерилизация деминерализованных костных трансплантатов в свете профилактики инфицирования гепатитом В и С / М.В. Лекишвили, Е.И. Исаева, В.Н. Пономарев, М.Г. Васильев // Вестн. травматологии и ортопедии. -2002. № 1. - С. 75-77.

66. Методы стерилизации биологических тканей, используемых для пластических операций / А.С. Имамалиев, Е.Н. Саутин, К.Д. Тимашкевич и др. // Ортопед., травмотол. и протез. 1972. - № 7. - С. 29-33.

67. Мечкерски, С. Влияние радиационной стерилизации на механические свойства тканевых трансплантатов / С. Мечкерски, Н. Петров // Рентгенология и радиология. 1984.-№3.-С. 184-187.

68. Мирский, М.Б. История отечественной трансплантологии. М.: Медицина, 1985.-240 с.

69. Мулдашев, Э.Р. Осложненная глаукома / Э.Р. Мулдашев, Г.Г. Корнилаева, В.У. Галимова. -Спб.: Издательский Дом «Нева», 2005. 192 с.

70. Мулдашев, Э.Р. Влияние экстракта трансплантата для пластики века серии «Аллоплант» на синтез ДНК в культуре клеток / Э.Р. Мулдашев, Т.Д. Уимен, Н.Н. Курчатова// Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1994. - № 1. -С. 50-54.

71. Мулдашев, Э.Р. Некоторые структурно-адаптационные свойства жировой клетчатки подошвы человека / Э.Р. Мулдашев // Моделирование оптимальных морфо-физиологических свойств в здоровом и больном организме: мат. науч. конф. Горький, 1975. - С. 42-43.

72. Мулдашев, Э.Р. Теоретические и прикладные аспекты создания алло-трансплантатов серии «Аллоплант» для пластической хирургии лица: автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 1994. - 40 с.

73. Муслимов, С.А. Морфологические основы применения аллогенных биоматериалов в регенеративной хирургии: автореф. дис. . д-ра мед. наук. -Уфа, 2000.-47 с.

74. Муслимов, С.А. Морфологические аспекты регенеративной хирургии. -Уфа.: Башкортостан, 2000. 168 с.

75. Некоторые биомеханические аспекты пластической и реконструктивной хирургии / Р.Т. Нигматуллин, Э.Р. Мулдашев, А.Ю. Салихов и др. // Достижения биомеханики в медицине: тез. докл. межд. конф. Рига, 1986. - С. 291-296.

76. Некоторые пути подбора новых аллотрансплантатов при офтальмохи-рургии / Э.Р. Мулдашев, А.Г. Габбасов, К.А. Захваткина и др. // Актуальные проблемы пересадки органов и тканей: тр. II МШЛГМИ им. Пирогова. М., 1978.-С. 21-22.

77. Нигматуллин, Р.Т. Анатомические подходы к классификации соединительнотканных аллотрансплантатов / Р.Т. Нигматуллин, Э.Р. Мулдашев, Р.С. Минигазимов // Фундаментальные и прикладные аспекты современной морфологии. СПб., 1997.-Т. 2. - С. 9-11.

78. Нигматуллин, Р.Т. Морфологические аспекты пересадки соединительнотканных трансплантатов: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Новосибирск, 1996.-40 с.

79. Нигматуллин, Р.Т. Очерки трансплантации тканей. Уфа: Ксерокс СТМ, 2003.- 160 с.

80. Нилинчук, В.К. Радиационная стойкость органических соединений / В.К. Нилинчук, В.И. Тупиков. М.: Энергоатомиздат, 1986. - 125 с.

81. Ноздрин, В.И. Кожа и ее производные / В.И. Ноздрин, С.А. Барашкова, В.В. Семченко. Омск; Орел, 2005. - 192 с.

82. Обатуров, Г.М. Биологическое действие тяжелых ионов и малых доз нейтронов на клетки млекопитающих. Биофизическая интерпретация / Г.М. Обатуров // Биологические эффекты малых доз радиации: сб. науч. тр. / под ред. Ю.И.Москалева.-М., 1983.-С. 169.

83. Окропидзе, Г.Г. Микробиологические исследования костного пластического материала после его стерилизации потоком быстрых электронов / Г.Г. Окропидзе, М.В. Лекишвили, В.Н. Пономарев // Биоимплантология на пороге XXI века: тез. симп. М., 2001. - С. 50-51.

84. Омельяненко, Н.П. Ультраструктура коллагеновых волокон и основного вещества дермы кожи человека / Н.П. Омельяненко, Л.Д. Жеребцов, И.Н. Михайлов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1977. - Т. 51, № 4.- С. 69-76.

85. Омельяненко, Н.П. Ультраструктурная организация основного вещества дермы кожи человека / Н.П. Омельяненко // Архив анатомии, гистологии и эмбртологии. 1978. - Т. 74, №4.-С. 101-107.

86. Основы медицинской радиобиологии / Н.В. Бутомо, А.Н. Гребенюк, В.И. Легеза и др.. СПб.: Фолиант, 2004. - 384 с.

87. Панасюк, А.Ф. Хондроэтилсульфаты и их роль в обмене хондроцитов и межклеточного матрикса хрящевой ткани / А.Ф. Панасюк, Е.В. Ларионов // Научно-практическая ревматология. 2000. - № 2 - С. 46-55.

88. Парфентьева, В.Ф. Формалинизированный алло- и ксеногенный материал в трансплантации. Кишинев: Штиинца, 1986. - 135 с.

89. Пересадка и замещения тканей и органов / А.Н. Филатов, Ю.В. Берин-гер, Г.В. Головин и др.. М.: Медгиз, 1960.-324 с.

90. Петров, Н. Исследование механических свойств тканевых трансплантатов / Н. Петров, С. Мечкарский // Биомеханика. НРБ. 1977. - № 5. - С. 25-32.

91. Петров, Р.В. Радиационная иммунология и трансплантация / Р.В. Петров, Ю.М. Зарецкая. -М.: Атомиздат, 1970. 543 с.

92. Пикаев, А.К. Высокотемпературный радиол из воды и водных растворов / А.К. Пикаев, С.А. Кабачки, И.Е. Макаров. М.: Энергоатомиздат, 1988.- 132 с.

93. Пикаев, А.К. Современная радиационная химия. М.: Наука, 1985. - 374с.

94. Пикаев, А.К. Современное состояние радиационной технологии / А.К. Пикаев // Успехи химии. 1995. - Т. 64, № 6. - С. 609-638.

95. Пирс,Э. Гистохимия. М.: Изд-во иностр. лит-ры, 1993. - 962 с.

96. Подопригора, Р.Н. Методы консервации донорского материала / Р.Н. Подопригора II Новые технологии микрохирургии таза. 2004. - № 38. - С. 100.

97. Пономарев, В.Н. Состояние промышленного внедрения радиационного способа стерилизации медицинских изделий однократного применения / В.Н. Пономарев, Т.Н. Носкова // Вестник АДС «Радтех-Евразия». 1993. - № 1.-С. 18-21.

98. Проскурин, А.И. Применение в оториноларингологии хряща, консервированного замораживанием / А.И. Проскурин, М.А. Абжалилов // Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий: матер. П Всерос. симп. Самара, 2004. - С. 122.

99. Путилин, А.А. Стерилизация и трансплантация лиофилизированных сухожилий (методические рекомендации) / А.А. Путилин, Т.Я. Мацкеплишви-ли, В.П. Жилин. Астрахань, 1974. - 40 с.

100. Роль макрофагов в регенерации соединительной ткани при имплантации биоматериалов / JI.A. Мусина, С.А. Муслимов, А.И. Лебедева, О.В. Зыр-ков // Здравоохранение Башкортостана. 2004. - № 4. - С. 146-149.

101. Рудой, В.А. Радиационная технология за рубежом / В.А. Рудой, А.В. Путилов. М.: Энергоатомиздат, 1983. - 61 с.

102. Рябухин, Ю.С. Ускоренные пучки и их применение / Ю.С. Рябухин, А.В. Шальнов. М.: Атомиздат, 1980. - 192 е.

103. Савельев, В.И. Актуальные проблемы трансплантации тканей / В.И. Савельев, Н.В. Корнилов, А.В. Калинин. СПб.: МОРСАРАВ, 2001. - 152 с.

104. Ш.Савельев, В.И. Деминерализованный костный трансплантат: его свойства, заготовка и возможности клинического применения / В.И. Савельев // Проблемы аллопластикики в стоматологии. -М., 1984. -С. 10-15.

105. Савельев, В.И. Трансплантация костной ткани / В.И. Савельев, Е.Н. Родюкова. Новосибирск: Наука, 1992. - 220 с.

106. Салихов, А.Ю. Хирургическое лечение рака век с использованием аллотрансплантатов серии «Аллоплант»: автореф. дис— канд. мед наук. Самара, 1996.-21 с.

107. Саутин, Е.П. Заготовка, консервация и стерилизация тканей / Е.П. Са-утин // Клиника, диагностика и лечение заболеваний и повреждений опорно-двигательного аппарата. М., 1982. - С. 77-79.

108. Сироткина И.А. Формирование опорно-двигательной культи глазного яблока комбинированными биоматериалами «Аллоплант»: автореф. дис. канд. мед.наук. Челябинск, 2005. - 22с.

109. Сельский, Н.Е. Контурная пластика лица комбинированными алло-трансплантатами серии «Аллоплант»: автореф. дис. канд. мед. наук. СПб., 1992.-24с.

110. Сельский, Н.Е. Применение биоматериалов «Аллоплант» в челюст-но-лицевой хирургии. Уфа: Здравоохранение Башкортостана, 2000. - 224 с.

111. Сельский, Н.Е. Устранение дефектов и деформаций лица комбинированными аллотрансплантатами серии «Аллоплант»: автореф. дис. д-ра докт. мед наук. СПб., 2000. - 37с.

112. Семченко, В.В. Гистологическая техника / В.В. Семченко, С.А. Ба-рашкова, В.Н. Артемьев. Омск, 2003. - 152 с.

113. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. М., 1981.-312с.

114. Слуцкий, Л.И. Новые данные о биополимерах соединительной ткани и их роли в процессах регенерации / Л.И. Слуцкий // Соврем, пробл. регенерации: матер. П Всесоюз. шк. молод, ученых и спец. по соврем, проблем, регенерации. Йошкар-Ола, 1982. - С. 52-57.

115. Слуцкий, Л.И. Органический матрикс кости: новые биохимические данные / Л.И. Слуцкий, Н.А. Севастьянова // Ортопед., травматол. и протез.- 1986.-№8.-С. 69-73.

116. Снелл, Д. Совместимость тканей / Д. Снелл, Ж. Доссе, С. Нэтенсон.- М.: Мир, 1979.-500 с.

117. Соединительная ткань как «орган плазмосорбции» / Н.Ф. Воробьева, О.В. Иванова, В.А. Лазарева, Ю.Л. Якимова // Материалы Ш съезда анатомов, гистологов, эмбриологов Российской Федерации. Тюмень, 1994. - С. 44.

118. Сорокин, А.П. Общие закономерности строения опорного аппарата человека. М.: Медицина, 1973. - 264 с.

119. Стадников, А.А. Аллотрансплантаты для пластической офтальмохи-рургии / А.А. Стадников, В.Н. Канюков, О.М. Трубина // Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий: матер. II Всерос. симп. Самара, 2004. - С. 131.

120. Стахеев, И.А. Замещение дефектов трубчатых костей деминерализованными аллотрансплантатами, консервированными различными способами / И.А. Стахеев, В.П. Штин, В.А. Плотникова // Ортопед., травматол. и протез. -1990.-№2.-С. 50-52.

121. Стерилизация газообразной окисью этилена в работе тканевых банков / P.M. Тихилов, В.И. Савельев, А.В. Калинин и др. // Клинические и фундаментальные аспекты клеточных и тканевых биотехнологий: матер. II Всерос. симп. Самара, 2004. - С. 32.

122. Стерилизация и ее роль в системе получения биологических трансплантатов и функционирования тканевых банков / В.И. Савельев, А.В. Войтович, А.В. Калинин и др. // Биоимплантология на пороге XXI века: тез. симп. -М., 2001.-С. 25.

123. Стерилизация медицинских изделий. Микробиологические методы. Часть 2. Испытания на стерильность, проводимые при валидации процесса стерилизации. ГОСТ ISO 11737-2-1998. 35с.

124. Стерилизация медицинской продукции. Требования к валидации и текущему контролю. Радиационная стерилизация. ГОСТ Р ИСО 11137-2000. 30с.

125. Стрелков, Р.Б. Экспресс-метод статистической обработки экспериментальных и клинических данных. М., 1986. - 86 с.

126. Структура дермы подошвы в норме и при аллотрансплантации / Э.Р. Мулдашев, Л.А. Баимова, К. А. Захваткина, Р.Т. Нигматуллин // Материалы конференции молодых ученых БГМИ. Уфа, 1980. - С. 35-38.

127. Сучков, В.Б. Мембранолиз с депротеинизацией как способ снижения иммуноспецифичности аллостатических трансплантатов / В.Б. Сучков, Р.И. Асфандияров, Г.М. Гладченко // Клиническое применение аллотрансплантатов. Саратов, 1982. - С. 8-12.

128. Тарусов, Б.Н. Основы биологического действия радиоактивных излучений М.: Медгиз, 1954. - 140 с.

129. Тендопластика с использованием аллогенных биоматериалов / Р.Т. Нигматуллин, В.Г. Гафаров, В.У. Галимова и др.. Уфа, 2005. - 52с.

130. Технология обеспечения вирусной и бактериальной чистоты анатомического материала / В.И. Грищенко, В.В. Рязанцев, Т.Н. Юрченко и др. // Биоимпланталогия на пороге XXI века: тез. симп. -М., 2001. С. 18-19.

131. Тимашкевич, К.Д. Стерилизация и хранение тканей с применением антисептиков: метод, рекомендации / К.Д. Тимашкевич, Л.Д. Аскеров. М., 1983.-8 с.

132. Тимофеев-Ресовский, Н.В. Введение в молекулярную радиобиологию (физико-химические основы) /Н.В. Тимофеев-Ресовский, А.В. Савич, М.И. Шальнов М.И. М.: Медицина, 1981. - 320 с.

133. Тиунов, Л.А. Противолучевые средства: справочник / Л.А.Тиунов, Г.А. Васильев, Э.А. Вальдштейн. Москва; Ленинград: Наука, 1964. - 318 с.

134. Трансплантационный ангиогенез как медикобиологическая проблема / Р.Т. Нигматуллин, Э.Р. Мулдашев, С.А. Муслимов и др. // Российские морфологические ведомости М., 1999. - № 1-2. - С. 107.

135. Туманян, М.А. Радиационная стерилизация / М.А. Туманян, Д.А. Ка-ушанский. М.: Медицина, 1974. - 304 с.

136. Туманян, М.А. Радиационная стерилизация как биотехнологический процесс и перспективы её развития / М.А. Туманян //1 Всесоюзный радиобиологический съезд. Пущино, 1989. - Т. 3. - С. 805-806.

137. Туманян, М.А. Разработка комбинированных радиационных способов стерилизации / М.А. Туманян, И.И. Самойленко, Е.И. Васильева // Дезинфекция и стерилизация. Перспективы развития: матер. Всесоюз. науч. конф. -Волгоград, 1983.-С. 134-135.

138. Уикли, Б. Электронная микроскопия для начинающих. М., 1975. - 324 с.

139. Фалк, И.Г. Применение коллагено-эластических каркасов из гетерогенного материала для тендо- и остеопластики / И.Г. Фалк, З.П. Модяев // Экспериментальная хирургия и анестезиология. 1966. - № 4. - С. 62.

140. Фейгельман, С.С. О видимости сохранения жизни в тканях, консервированных в слабых растворах формалина / С.С. Фейгельман // Ортопед., травматол. и протез. 1980. - С. 45-50.

141. Фукс, Б.Б. Очерки морфологии и гистохимии соединительной ткани /Б.Б. Фукс, Б.И. Фукс.-Л., 1968.-214 с.

142. Хасанов, Р.А. Инъекционная форма аллотрансплантатов серии «Аллоплант» получение, анализ и биологическая активность: автореф. дис. . канд. фарм. наук. Пермь, 1999. - 24 с. .

143. Хрущев, В.Г. Основные направления работ по освоению в промышленности метода радиационной стерилизации медицинской продукции / В.Г. Хрущев, Е.П. Павлов, В.В. Генералова // Вестник АДС «Радтех-Евразия». -1993.-№1.-С. 13-18.

144. Хрящ / В.Н. Павлова, Т.Н. Копьева, Л.И. Слуцкий, Г.Г. Павлов. М.: Медицина, 1988.-320с.

145. Цветков, У. Ткани трансплантата / У. Цветков, С. Мечкаркий. София, 1988.-241 с.

146. Цитотоксические свойства слабых растворов формальдегида / А.Г. Паныиин, Л.И. Соколова, И.И. Фридлянская и др. // Трансплантация биологических тканей, стерилизованных и консервированных формалином: сб. науч. тр.-Л., 1980.-С. 26-34.

147. Черкасов, М.Ф. Изобретение и новые методы трансплантации донорских тканей, разработанные профессором П.П. Коваленко / М.Ф. Черкасов, В.М. Женило // Реконструктивная и трансплантационная хирургия: сб. науч. тр. Ростов н/Д., 2000. - С. 192-204.

148. Черняев, А.П. Взаимодействие ионизирующего излучения с веществом. М.: Физматлит, 2004. - 152 е.

149. Шангина, О.Р. Влияние радиационной стерилизации на структуру биоматериалов «Аллоплант». Экспериментально-морфологическое исследование: автореф. дис. . канд. биол. наук. Уфа, 1999. - 21 с.

150. Шехтер, А.Б. Воспаление, адаптивная регенерация и диерегенерация (анализ межклеточных взаимодействий) / А.Б. Шехтер, В.В. Серов // Арх. патологии. 1991. - Вып. 3. - С. 7-14.

151. Шиллер, 3. Электронно-лучевая технология: пер. с нем. / 3. Шиллер, У. Гайзиг, 3. Панцер. -М.: Энергия, 1980. 528 с.

152. Шумаков, В.И. Трансплантация органов и тканей настоящее и будущее / В.И. Шумаков // Реконструктивная и трансплантационная хирургия: сб. науч. тр. - Ростов н/Д., 2000. - С. 163-166.

153. Ярмоненко, С.П. Радиобиология человека и животных / С.П. Ярмо-ненко, А.А. Вайсон. М.: Высшая школа, 2004. - 549 с.

154. Ярмоненко, С.П. Радиобиология человека и животных. -М.: Высшая школа, 1988.-368 с.

155. A biomechanical analysis of solvent-dehydrated and freeze-dried human fascia lata allografts. A preliminary report / R. Hinton, R.H. Jinnah, C. Johnson et al. //Am. J. Sports Med. 1992. - Vol. 20, № 5. - P. 607-612.

156. A new bioactive molecule for improving vascular graft patency: exploratory trials in dogs / A. Akoum, R. Guidoin, M. King et al. // Clin. Invest. Med. 1992. -Vol. 15, №4.-P. 318-330.

157. A novel microporous polyurethane blood conduit: biocompatibility assessment of the UTA arterial prosthesis by an organo-typic culture technique /

158. M.F. Sigot-Luizard, M. Sigot, R. Guidoin et al. // J. Invest. Surg. 1993. - Vol. 6, №3.-P. 251-271.

159. Absorption of chitosan to polyester discs in rats after implantation / J. Gosk, K.J. Staniszewska, D. Paluch, R. Rutowski // Polim. Med. 1992. - Vol. 22, № 1-2.-P. 43-52.

160. Alloplant: principles of allogenic tissue selection, theatment and surgery application / S. Muslimov, E. Muldashev, R. Nigmatullin, L. Musina // 12th International Congress of the European Association of tissue Banking. Brugge, Belgium, 2003.-P. 78.

161. Alteraciones estructuralesde los peteroinjertos valvulares de porano preservados en en glutaraldenido / J. Milei, M. Ferreira, R. Storino et al. // Arch. Inst. Cardiol. Мех. 1987. - Vol. 57, № 1. - P. 35-40.

162. Amnion allografts prepared in the Central Tissue Bank in Warsaw / J. Tyszkiewicz, A. Uhryowska-Tyszkiewicz, A. Kaminski, A. Dziedzic-Goclawska // Ann. Transpl. 1999. - Vol. 4. - P. 74-79.

163. Andermann, P. Procument, banking and decontamination of bone and collageous tissue allografts: quidelines for infection control / P. Andermann, O. Jepsen // J. Hosp. Infect. 1991. - Vol. 17, №3.-P. 159-169.

164. Anderson, M.J. Compressive mechanical properties of human cancellous bone after gamma irradiation / M.J. Anderson, J.H. Keyak, H.B. Skinner // J. Bone Joint. Surg. (Am). 1992. - Vol. 74, № 5. - P. 747-752.

165. Antigenicity of contical bone allografts in dogs and effect of ethylene oxide-sterilization / M. Tshamala, E. Cox, H. De Cock et al. // Veterin. Immunol. Immunopatol. 1999. - Vol. 69. - P. 47-59.

166. Aspenberg, P. Dose-dependent reduction of bone inductive properties by ethylene oxide / P. Aspenberg, E. Johnsson, K.G. Thorngren // J. Bone Joint Surg. (Br). 1990. - Vol. 72, № 6. -P. 1036-1037.

167. Asselmeier, M.A. A review of allograft processing and sterilizationtechniques and their role in transmission of the human immunodeficiency virus / M.A. Asselmeier, R.B. Caspari, S. Bottenfield //Am. J. Sports Med. 1993. - Vol. 21, № 1.-P. 21-22.

168. Bao, W. Subcutaneous injection of fatty tissue pearlsexperimental study and clinical applications / W. Bao, Z. Zhand, X. Sun // Chung. Hua. Cheng. Hsing. Shao. Shang. Wai. Ко. Tsa. Chin. 1994. - Vol. 10, № 5. - P. 364-367.

169. Beigel, A. Immunologische Reaktion gegen konservierte Tracheal trasplantate? Untersuchungen bei Ratteninzuchtstammen / A. Beigel, H.U. Wottge, W. Muller-Ruchholtz // Laiyngorhinootologie. 1991. - Bd. 70, № 11. - S. 630-634.

170. Belkoff, S. Microstructurally based model analysis of gamma-irradiated tendon allografts / S. BelkoflF, R Haut // J. Orthop. Res. -1992. Vol. 10, № 3. - P. 461.

171. Biomechanic study of the tensile strength of lyophilized and deep frozen human Achilles tendons following gamma and ethylene oxide sterilization / G. Rauch, M. Gerbersdorf, P. Dorner et al. HZ. Orthop. Ihre. Grenzgeb. 1991 - Vol. 129, №5.-P. 393-399.

172. Bone allografts sterilised by irradiation. Biological properties, procurement and results of 150 massive allografts / B. Loty, J.P. Courpied, B. Tomeno et al. // Int. Orthop. 1990. - Vol. 14, № 3. - P. 237-242.

173. Bone sterilisation by radiation and the HIV vims / P. Hernigou D., Marse, A. Julieron et al. // Rev. Chir. Orthop. Reparatrice. Appar. Mot. 1993. - Vol. 79, №6.-P. 445-451.

174. Bone-inducing factors in osteoinductive implants / К. Takaoka, H. Yoshikawa, S. Miyamoto et al. // Human Biomaterials Application. N. Jersey: Humana Press, 1996.-P. 91-98.

175. Bright, R. Sterilisation of human bone by irradiation / R. Bright // Osteochondral Allografts, Biology, Banking and Clinical Applications / ed. by G.E. Friedlaender. Boston, Toronto: Little Brown, 1987. - P. 223-232.

176. Burchard, H. Transplantation of bone / H. Burchard, W. Ennenking // Surg. Clin. North Am. 1978. - № 3 . - P. 58-73.

177. Buring, K. Effects of ionizing radiation on the bone induction principal in the matrix of bone implants / K. Buring, M.R. Urist // Clin. Orthop. 1967. - № 55. -P. 225-231.

178. Buring, K. Ionizing radiation for sterilization of bone / K. Buring // Sterilization and Preservation of Biological Tissues by Ionizing Radiation. International atomic energy agency. Vienna, 1970. - P. 71-78.

179. Campbell, D. Sterilisation of HTV with irradiation: relevance to infected bone allografts / D. Campbell, P. Li // Aust. N. Z. J. Surg. -1999. Vol. 69, № 7. - P. 517-521.

180. Cantore, G. Neurosurgical use of human durra mater sterilized by gamma rays and stored in alcohol: long-term results / G. Cantore, B. Guidetti, R. Delfini // J. Neurosurg. 1987. - Vol. 66, № 1. - P. 93-95.

181. Changes in the loads on an inter-nal spinal fixator after iliac-crest autograft / A. Rohlmann, G. Bergmann, F. Graichen et al. // J. Bone Joint Surg. (Br.). 2000. -Vol. 82, №3.-P. 445-449.

182. Clark, J.L. Preparation of allogeneic cartilage and bone for grafting / J.L. Clark, H.B. Neel 3rd, E.B. Kern // Surg. Forum. 1978. - Vol. 29. - P. 580-582.

183. Clinical efficacy and compatibility of allogeneic avital tissue transplants sterilized with a peracetic acid/ethanol mixture / A. Pruss, C. Perka, P. Degenhardt et al. // Cell Tissue Banking. 2002. - № 3. - P. 235-243.

184. Clinical efficacy of allografs sterilized using controlled high-dose gamma ^ radiation / D. Fred, M.D. Cushner, P. Greg, Ph.D. Bertenshaw //14th International Congressof European Association of Tissues Banking. Florence, Italy, 2005. - P. 54.

185. Clinical use of fresh, frozen soft tissue allografts / E.J. Olson, C.D. Harner,

186. F.H. Fu, М.В. Silbey//Orthopedics. 1992.-Vol. 15, № 10.-P. 1225-1232.

187. Collagen synthesis, studied by sub microscopic methods in beta-propiolactone and in tendon homografts, preserved by gamm irradiation / S. Antal, B. Jozsef, H. Jozsef et al. // Magy Traumatol. Orthop. Helyreallito. Seb. 1976. -Vol. 19, №4. -P. 272-283.

188. Comparative study of the effect of different chemical procedures on the antigenicity of allogenic transplants of the human trachea / J. Bujia, E. Wilmes, J. Bartual-Pastor, C. Hammer.//Asta Otorrinolaringo. 1993. - Vol. 44, №3 -P.209-216.

189. Comparision of the efficacy of virys inactivation methods in allogeneic avital bone tissue transplants / A. Pruss, A. Hansen, M. Kao et al. // Cell Tissue Banking. -2001. № 2. - P. 201-215.

190. Comparison of bovine collagen xenografts to autografts in the rabbit / J.C. Tauro, J.R. Parsons, J. Ricci et al. // Clib. Orthop. 1991. - Vol. 266. - P. 271-284.

191. Compressive strength of autologous and allogenous bone grafts for thoracolumbar and cervical spine fusion / R.H. Wittenberg, J. Moeller, M. Shea et al.// Spine. 1990. -Vol. 15, №6.-P. 1073-1078.

192. Cook, S. Simian immunodeficiency virus (human HIV-II) transmission in allograft bone procedures / S. Cook, S. Salked, A. Prewett // Spin. 1995. - № 20. -P. 1338-1342.

193. Currey, J.D. Effects of ionizing radiation on the mechanical properties ofhuman bone / J.D. Currey, J. Foreman, I. Laketic // J. Orthop. Res. 1997. - Vol. 15, № l.-P. 111-117.

194. Danielson, N.E. The use of ethylene oxide in the hospital setting / N.E. Danielson // Sterilization of medical products. L.: Johnson&Johnson, 1991. - P. 194-200.

195. De-Deyne, H. Some effects of gamma irradiation on patellar tendon allografts / H. De-Deyne, R.C. Haut // Connect. Tissue Res. 1991. - Vol. 27, № 1. -P. 51-62.

196. Doherty, M.J. Effect of ethylene oxide sterilization on human demineralized bone / M.J. Doherty, R.A.B. Mollan, D.J. Wilson // Biomaterials. 1993. - Vol. 14, № 10.-P. 994-998.

197. Donald, P.J. Cartilage grafting in facial reconstruction with special consideration of irradiated grafts / P.J. Donald // Laryngoscop. 1986. - Vol. 96, № 7. - P. 786-807.

198. Dose-dependent response of gamma irradiation on mechanical properties and relatied biochemical composition of goat bone-patellar tendon-bone allografts / A. Salehpour, D.L. Butler, F.S. Proch et al. // Orthop Res. 1995. - Vol. 13, № 6. - P. 898-906.

199. Dziedzic-Goclawska A. The risk of infection disease transmission with tissue allografts // Allograft against disability: mater. 2 World Congress on Tissue Banking. Warsaw, 1999. - P. 15-16.

200. Dziedzic-Goclawska, A. Is it possible to diminish the damage induced by radiation-sterilization to connective tissue grafts? / A. Dziedzic-Goclawska, A. Kaminski // 13th International Congress of the European Association of tissue

201. Banks. Prague, 2004. - P. 108.

202. Dziedzic-Goclawska, A. Sterilisation of tissue allografts / A. Dziedzic-Goclawska, W. Stachowicz//Advances in Tissue Banking. 1997. - Vol. 1. - P.261-321.

203. Dziedzic-Goclawska, A. The application of ionising radiation to sterilize connective tissue allografts / A. Dziedzic-Goclawska// Radiation and tissue banking. IAEA: world scientific. Singapore, 2000. - P. 57-99.

204. Dziedzic-Goclawska, A. The effect of radiation sterilization on connective tissue allografts / A. Dziedzic-Goclawska // Allograft against disability: mater. 2 World Congress on Tissue Banking. Warsaw, 1999. - P. 48.

205. Eastlund, T. Infectious disease transmission through cell, tissue, and organ transplantation: reducing the risk through donor selection / T. Eastlund // Cell Transplant. 1995. - Vol. 4, № 5. - P. 455-477.

206. Effect of gamma irradiation on human cortical bone transplants contaminated with enveloped and non-enveloped viruses / A. Pruss, M. Kao, U. Gohs et al. // Biological. 2002. - № 30. - P. 125-133.

207. Effect of gamma irradiation on human immunodeficiency virus and coagulation proteins / A. Kitchen, G. Mann, J. Harrison, A. Zuckerman // Vox. Sang.- 1989. Vol. 56, № 4. - P. 223-229.

208. Effect of sterilization on bone morphogenetic protein / S. Ij iri, T. Yamamuro, T. Nakamura et al. // J. Orthop. Res. 1994. - Vol. 12, № 5. - P. 628-636.

209. Effects of solvent preservation with or without gamma irradiation on the material properties of canine tendon allografts / A. Maeda, M. Inoue, K. Shino et al.//J. Orthop. Res.- 1993.-Vol. 11, № 2. P. 181-189.

210. Efficacy of autologous peritoneum as a biological membrane in cardiac surgery / J.K. Pacholewicz, C. Daloisio, O. A. Shawarby et al. // Eur. J. Cardiothorac. Surg. 1994.-Vol. 8, № 10. - P. 563-565.

211. Ethanol treatment of tendon allografts: a potential HIV inactivating procedure / M. Anastasescou, O. Cornu, X. Banse et al. // Int. Orthopaed. 1998. -Vol. 22, №4.-P. 252-254.

212. Experimental transplantation of composite grafts by microsurgical vascular anastomosis / T. Krizek, T. Tani, I. Desprez, CI. Kiehn // Plast. Reconst. Surg. -1965. -Vol. 36.-P. 538-546.

213. Flahiff C.M.Biomechanical analysis of patellar tendon allografts as a function of donor age /, Brooks A.T., Hollis J.M. et al. // Sports Med. -1995, May-Jun.-Vol. 23, №3.-P. 354-358.

214. Flahiff, C. Biomechanical analysis of patellar tendon allografts as a function of donor age / C. Flahiff, A. Brooks, J. Hollis // Sports Med. 1995. - Vol.f 23, №3.-P. 354-358.

215. Free radicals in bone grafts sterilized with ionizing radiation / K. Ostrowski, Z. Kecki, A. Dziedzic-Goclawska et al. // Sb Ved Pr Lek Fak Karlovy Univerzity

216. Hradci Kralove. 1969. - P. 561-563.

217. Fresh autogenetic, frozen allogeneic, and decalcified allogeneic bone grafts in dogs / N. Schwarz, G. Schlag, M. Thurnher et al. // J. Bone Joint Surg. (Br.). 1991. - Vol. 73, № 5. - P. 787-790.

218. Further evaluation of amniotic membrane banking for transplantation in ocular surface diseases / P. Rama, R. Giannini, A. Bruni et al. // Cell Tissue Banking.-2001.-№ 2.-P. 155-163.

219. Gamma irradiation of collagen/mineral mixtures / T.I. Smestad, D. Prows, G.H. Chu et al. // United States Patent № 4,865,602 from 12.02.1989.

220. Gamma irradiation of human bone allografts alters medullary lipids and releases toxic compounds for osteoblast-like cells / M.F. Moreau, Y. Gallois, M.F. Baslye et al. // Biomaterials. 2000. - Vol. 21, № 4. - P. 369-376.

221. Gamma irradiation: effects on biomechanical properties of human bone-patellartendonbon allografts /B. Fideler, T. Vangness, B. Lu et al. //Am. J. Sports. Med. 1995. - Vol. 23, № 5. - P. 643-646.

222. Gaugran, E. Sterilization of Medical Products / E. Gaugran, R. Morrisey. Multiscience, Montreal, 1981. - 152 p.

223. Gendler, E. Perforated demineralized bone matrix: a new form of osteoinductive biomaterial / E. Gendler//J. Biomed. Mat. Res. 1986. - Vol. 20, № 6.-P. 687-697.

224. Godette, G. Biomechanical effects of gamma irradiation in fresh frozen allografts in vivo / G. Godette, J. Kopta, D. Egle // Orthopedics. 1996. - Vol. 19, №8.-P. 649-953.

225. Goertzen, M. Anterior cruciate ligament reconstruction using cryopreserved irradiated bone-ACL-bone-allograft transplants / M. Goertzen, H. Clahsen, K. Schulitzf II Knee Surg. Sports Traumatol. Arthrosc. 1994. - Vol. 2, № 3. - P. 150-157.

226. Goullet, D. Sterilization of biocompatible materials: which method to choose? / D. Goullet //Agressologie. Spec. 1992. - Vol. 3, № 33. - P. 121-123.

227. Hagiwara, H. Immunoelectron microscopic study of proteoglycans inrat epiphyseal growth plate cartilage after fixation with ruthenium hexamine trichloride (RHT) / H. Hagiwara//Histochemistry. 1992. - Vol. 98, № 5. - P. 305-309.

228. Hammer, A J. Changes in allograft irradiation at different temperatures / A.J. Hammer, I. Stockley, R.A. Elson // J. Bone Joint Surg. (Br). 1999. - Vol. 81, №2.-P. 342-344.

229. Haut, R.C. The effects of test environment and cyclic stretching on the failure properties of human pattelar tendons / R.C. Haut, A.C. Powlison // J. Orthop. Res. 1990. - Vol. 8, № 4. - P. 532-540.

230. Hernigou, P. Massive allografts cold-preserved and radiation sterilized. Article in French / P. Hernigou, G. Delepine, D. Goutallier // Rev. Chir. Orthop.- 1986. Vol. 72, № 6. - P. 403-413.

231. Hsiue, G.H. Preparatoin and of a biomaterial: НЕМА grafed SBS by gamma-ray irradiation / G.H. Hsiue, J.M. Yang, R.L. Wu // J. Biomed. Mater. Res.- 1988. Vol. 22, № 5. - P. 405-415.

232. Human iuman immunodeficiency virus irradiation / M. Salai, A. Vonsover, M. Pritch et al. //Ann. Transplant. 1997. - № 2. - P. 55-56.

233. Inactivation of human immunodeficiency virus by gamma radiation and its effect on plasma and coagulation factors / H. Hiemstra, M. Tersmette, A. Vos et al. // Transfusion. 1991. - Vol. 31, № 1. - P. 32-39.

234. Infection in massive bone allografts sterilized by radiation / B. Loty, B. Tomeno, J. Evrard, M. Postel // Int. Ortop. 1994. - Vol. 18, № 3. - P. 164-171.

235. Influence of gamma-irradiation sterilization and temperatureon the fracture toughness of ultra-high-molecular-weight polyethylene / R. Pascaud, W. Evans, P.

236. McCullagh, D. FitzPatrick // Biomaterials. 1997. - Vol. 18, № 10. - P. 727-735.

237. Influence of post-mortem time and temperature on osteoinductive activity of demineralized micropeforated ethylene oxide sterilized syngeneic bone implant in the rat / T.M. Moore, R. Artal, M. Arenas et al. // Clin. Orthop. 1990. - № 299. -P. 239-244.

238. Influence of sterilization processes on poly (epsilon-caprolactone) nanospheres / V. Masson, F. Maurin, H. Fessi, J.P. Devissaguet // Biomaterials. -1997.-Vol. 18, №4.-P. 327-335.

239. Irradiation of bone autografts: an alternative to massive bone allografts? / G. Sys, B. Poffen, L. Van Hoorebeke et al. // 12th International Congress of the European Association of tissue Banking. Brugge, Belgium, 2003. - P. 55.

240. Irradiation-sterilization of rat bone matrix gelatin / N. Schwarz, H. Redl, A. Schiesser et al. //Acta Orthop. Scand. 1988. - Vol. 59, № 2. - P. 165-167.

241. Jerosch, J. Stability of humah bone cortex following various preservation and sterilization methods / J. Jerosch, H. Muchow, H. Clahsen // Z. Orthop Ihre. Grenzgeb. 1991. - Vol. 129, № 4. - P. 295-301.

242. Jorgensen, P.H. Mechanical properties of skin graft wounds/Р.Н. Jorgensen, C. Bang, T.T. Andreassen // Br. J. Plast. Surg. 1993. - Vol. 46, № 7. - P. 565-569.

243. Kakiuchi, M. Defatted, gas-sterilised cortical bone allografts for posterior lumbar interbody vertebral fusion / M. Kakiuchi, K. Ono // Int. Orthopaed. 1998.-Vol. 22, № 2. P. 69-76.

244. Kakiuchi, M. Preparation of bank bone using defatting, freeze-drying and sterilisation with ethylene oxide gas. Part 2. Clinical evaluation of its efficacy and safety / M. Kakiuchi, K. Ono // Int. Orthopaed. -1996. Vol. 20, № 3. - P. 147-152.

245. Knaepler, H. Biomechanical properties of heat and irradiation treated spongiosa / H. Knaepler, H. Haas, H.U. Puschel // Unfallchirurgie. 1991. - Bd. 17, № 4. - S. 194-199.

246. Komender, J. Evaluation of radiation sterilized tissue in clinical use / J. Komender, A. Komender // Sterilization of medical products by ioning radiation.- Montreal: Multisc. Publ. Ltd, 1977. P. 188.

247. Komender, J. Therapeutic effects of transplantation of lyophilized and radiation-sterilized, allogenic bone / J. Komender, H. Malczewska, A. Komender // Clin. Orthop. 1987.-P. 109-125.

248. Komender, J. Therapeutic effects of transplantation of lyophilized and radiation-sterilized, allogeneic bone / J. Komender, H. Malczewska, A. Komender // Clin. Orthop. 1991. - Vol. 272. - P. 38-49.

249. Kouvalchouk, J.F. Irradiation of bone homografts. Their use following I■ tumor resection. Apropos of 4 cases / J.F. Kouvalchouk, A. Paszkowski // Rev. Chir.

250. Orthop. 1986.-Vol. 72, № 6. - P. 393-401.

251. Larson, D.L. Preservation of the orbital contents in cancer of the maxillarysinus /D.L. Larson, J.E. Christ, R.H. Jesse //Arch. Otolaryngol. 1982. - Vol. 108, № 6. - P. 370-372.

252. Laser welding and irradiation in alcohol preserved homografts / S. Wang, M. Gennaro, C. Marini, F.G. Baumann //ASAIO Trans. 1991. - Vol. 37, № 3. - P. 268-269.

253. Lefkovits, G. Irradiated homologous costal cartilage for augmentation rhinoplasty / G. Lefkovits //Ann. Plast. Surg. 1990. - Vol. 25, № 4. - P. 317-327.

254. Lin, J. Pathologic classification of 435 primary orbital tumors / J. Lin, E. Li //Yen. Ко. Hsueh. Pao. 1993. - Vol. 9, № 2. - P. 66-69.

255. Little, K. Some effects of sterilizing doses of radiation on biological tissues / K. Little // Sterilization and Preservation of Biological Tissues by Ionizing Radiation. International atomic energy agency. Vienna, 1970. - P. 37-41.

256. Liu, B. The effect of gamma irradiation on injectable human amnion collagen / B. Liu, R. Harrell, R. Davis // J. Biomed. Mater. Research. 1989. - Vol. 23.-P. 833-844.

257. Liu, S.H. Biomechanics of two types of bone-tendon-bone graft for ACL reconstruction / S.H. Liu, J.M. Kabo, L. Osti // J. Bone. Jount Surg. (Br.). 1995. -Vol. 77, №2.-P. 232-235.

258. Lo Grippo, G. Procedure for bone sterilization with beta-propiolactone / G. Lo Grippo // J. Bone Joint Surg. (Am.). 1987. -№ 39. - P. 1356-1364.

259. Mader, K. Gamma-sterilization-induced radicals in biodegradable drug delivery systems / K. Mader, A. Domb, H. Swartz // Appl. Radiat. Isot. 1996. - Vol. 47, № 11-12.-P. 1669-1674.

260. Mahnel, H. Sensitiveness of viruses to gamma radiation / Mahnel H., H. Stettmund von Brodorotti, K. Ottis // Zbl. Bakt. (В.). -1980. Bd. 170, № 1-2. - S. 57-70.

261. Mandibular reconstruction by secondary reimplantation of resected segments: a preliminary report/ S. Jisander, P. Aspenberg, L. Salemark, J. Wennerberg // Int. J. Maxillofac. Surg. 1995. - Vol. 24, № 4. - P. 288-292.

262. Massive allografts sterilised by irradiation. Clinical results / P. Hernigou, G. Delepine, D. Goutallier, A. Julieron // J. Bone Joint Surg. (Br.). 1993. - Vol. 75, №6.-P. 904-913.

263. Matthes, G. Tissue preservation in the DRG / G. Matthes, R. von-Versen // Beitr. Orthop. Traumatol. 1990. - Vol. 37, № 8. - P. 435-440. McLaughlin W.L. In High Dose Dosimetry for Radiation processing. - IAEA, Vienna, 1991. - P. 3.

264. Meniscal substitutes human experience /Е.М. Goble, D. Kohn, R. Verdonk, S.M. Kane // Scand. J. Med. Sci. Sports. Vol. 9, № 3. - P. 146-157.

265. Naidu, S. Radiation-induced physical changes in UHMWPE implant components / S. Naidu, B. Bixler, M. Moultin // Orthopedics. 1997. - Vol. 20, № 2.-P. 137-142.

266. Nair, P. Currently practiced sterilization methods-some inadvertent conseq uences /P. Nair// J. Biomater. Appl. 1995.-Vol. 10, №2.-P. 121-135.

267. Nordstrom, M.R. Dura mater for soft- tissue augmentation. Evaluation in a rabbit model / M.R. Nordstrom, T.D. Wang, N.B. Neel // Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 1993.-Vol. 119, № 2. - P. 208-214.

268. Parizek, J. Duraplasty with pretreated freeze-dried sterilized human dura mater / J. Parizek, P. Mericka // Sb Ved Pr Lek Fak Karlovy Univerzity Hradci Kralove. 1990. - Vol. 33, № 2. - P. 135-143.

269. Pelker, R.R. Biomechanical properties of bone allografts / R.R. Pelker, G.E. Friedlaender, T.C. Markham // Clin. Orthop. 1983. - № 174. - P. 54-57.

270. Phillips, G.O. Technical and Economic Comparison of Irradiation and Conventional Methods IAFA. Vienna, 1988. - P. 69.

271. Phillips, G.O. The International Atomic Energy Agency (IAEA)programmer in radiation and tissue banking: past, present and future / G.O. Phillips, J.M. Pedraza // Cell Tissue Banking. 2003. - № 4. - P. 69-76.

272. Prabhasawat, P. Preserved amniotic membrane transplantation for conjunctival surface reconstruction / P. Prabhasawat, N. Tesavibul // Cell Tissue Banking. 2001. - № 2. - P. 213-222.

273. Preserved irradiated homolgous cartilage for orbital reconstruction / J.V. Linberg, R.L. Anderson, J.J. Edwards et al. // Ophthalmic. Surg. 1980. - Vol. 11, № 7. - P. 457-462.

274. Prolo, D.J. Ethylene oxide sterilization of bone, dura and fascia lata for human transplantation / D.J. Prolo, P.W. Pedrotti, D.H. White // Neurosurg. 1980. -№ 6.-P. 529-539.

275. Quality issues in tissue banking: quality management systems / R. Verzen, H. Moenig, M. Salai, D. Bettin // Cell Tissue Banking. 2000. - № 1. - P. 181 -192.

276. Quantitative comparisons of healing in cranial fresh autografts, frozen autografts and processed autografts, and allografts in canine skull defects / S.A. Oklund, D.J. Prolo, RV. Gutierrez et al. // Clin. Orthop. -1986. № 205. - P. 269-291.

277. Radiosensitivity of HIV-l: Potential application to sterilization of bone allografts / B. Conway, W. Tomford, H. Mankin et al. //AIDS. -1991. Vol. 5, № 5.-P. 608-609.

278. Rao, S.B. Sterilization of chitosan: implications / S.B. Rao, C.P. Sharma // J. Biomater. Appl. 1995. -Vol. 10, № 2. - P. 136-143.

279. Reconstruction and limb salvage using a free vascularised fibular graft for periacetabular malignant bone tumours / S. Nagoya, M. Usui, T. Wada et al. // J. Bone Joint Surg. (Br.).-2000.-Vol. 82.-P. 1121-1124.

280. Reconstruction of the frontal calvarian continuity in a child using a freezepreserved autogenous bone graft / J. Lenz, K. Henkel, V. Hingst et al. // Cranio. Maxillofacial. Surg. -2003. № 31. -P. 154-158.

281. Reyes, M. The use of radiation sterilized xenografts in Mexico / M. Reyes,

282. D. Luna, M. Martinez //12th Intermational Congress of the European Association of tissue Banking. Brugge, Belgium, 2003. - P. 147.

283. Reynolds, E.S. The use of lead citrate at hight pH as an electronopaque stain in electron microscopy / E.S. Reynolds // J. Cell Biology. 1963. - Vol. 17. - P. 208-212.

284. Russell, A. Radiation sterilization. A. Ionizing radiation / A. Russell, W. Hugo, (i. Aylitte // Principles and practice of disinfection, preservation and sterilization. -Oxford: Blackwell Science, 1999. P. 675-687.

285. Russell, J.L. Clinical utility of demineralized bone matrix for osseous defects, arthodesis, and reconstruction: impact of processing techniques and study methogology / J.L. Russell, J.E. Block // Orthopedics. 1999. - Vol. 22, № 5. - P. 524-531.

286. Salamon, A. Development of collagenous fibres in autologous and preserved homologous tendon grafts /A. Salamon, J. Hamori //ActaMorphol. Acad. Sci. Hung. 1976. - Vol. 24, № 1-2. - P. 11-22.

287. Sang, H. A comparative study of ethylene oxide and ionizing radiation for sterilizing bone grafts / H. Sang, Y. Hu, Y. Sun // Chung. Hua. Wai. Ко. Tsa. Chih. 1996. - Vol. 34, № 8. - P. 457-459.

288. Sauer, W. Fatigue perfomans of ultra-high-molecylar-weight polyethylene:effect of gamma radiation sterilization / W. Sauer, K. Weaver, N. Beals // Biomaterials. -1996.-Vol. 17, №20.-P. 1929-1935.

289. Scheuner, G. Polarisationsoptische analyse der interzellung lorsubstanz des bindegewebes / G. Scheuner //Anat. Anz. Vol. 150, teil. 1. - P. 125-138.

290. Seiffert, K.K. Biological Aspects of Collagenous Homografts / K.K. Seiffert //Acta Otorhinolaryngol. Belg. 1970. - Vol. 24, № 1. - P. 27-33.

291. Shafik, A. Perianal injection of autologous fat for treatment of sphincteric incontinence / A. Shafik // Dis. Colon. Rectum. 1995. - Vol. 38, № 6. - P. 583587.

292. Shangina, O. Alloplant biomaterials production process from connective tissues / O. Shangina, R. Khasanov // 12th International Congress of the European Association of tissue Banking. - Brugge, Belgium, 2003. - P. 75.

293. Shangina, O. The biomterials structure safety depending upon the kind of the conservation fnd sterilization / O. Shangina // 11 International Conference on Tissue Banking and EATB Annual Meeting. Bratislava, 2002. - P. 93.

294. Smith, C. Mechanical properties of tendons: changes with sterilization and preservation / C. Smith, I. Young, J. Kearney // J. Biomech. Eng. 1996. - Vol. 118, №1.-P. 56-61.

295. Stachowicz, W. Technical aspects of radiation sterilization of tissue allografts / W. Stachowicz //Allograft against disability: mater. 2 World Congress on Tissue Banking. Warsaw, 1999. - P. 22.

296. Sterilization of HIV by gamma irradiation. A bone allograft model / D. Campbell, P. Li, A. Stephenson, R. Oakeshott // Int. Orthop. 1994. - Vol. 18, № 3. -P. 172-176.

297. Sundaresh, D.C. Vascularised rib graft for defects of the diaphysis of the humerus in children / D.C. Sundaresh, D. Gopalakrishnan, N. Shetty // J. Bone Joint Surg. (Br.). 2000. - Vol. 82, № 1. - P. 28-32.

298. Technique of harvesting and preparation of amniotic membranes / O. Franck, G. Descaragues, E. Menguy et al. // J. Fr. Ophthalmol. 2000. - № 23. -P. 729-734.

299. The effect of storage on the biomechanical behavior of articular cartilage-a large strain study / M.K. Kwan, S.A. Hacker, S.L. Woo, J.S. Wayne // Biomech. Eng.-1992.-Vol. 114, № 1. P. 149-153.

300. The effect of various sterilization procedures on the osteoinductive properties of demineralized bone matrix / K.K. Hallfeldt, S. Kessler, M. Puhlmann et al. // Unfallchirurg. 1992. - Vol. 95, № 7. - P. 313-318.

301. The effects of 4 Mrad of gamma irradiation on the initial mechanical properties of bone-patellar tendon-bone grafts / T. Rasmussen, S. Feder, D. Butler, F. Noyes //Arthroscopy. 1994. - Vol. 10, № 2. - P. 188-197.

302. The effects of irradiation dose on the stiffinness off cartilage grafts / P.J. Donald, K. Deckard-Janatpour, N. Sharkey, M. Lagunas-Solar // Ann. Plast. Surg. 1996.-Vol. 36, № 3.-P. 297-303.

303. The effects of processing and low dose irradiation on cortical bone grafts / T. Jinno, A. Miric, J. Feighan et al. // Clin. Orthop. 2000. - № 375. - P. 275285.

304. The fate of autogenous tendon grafts / J.G. Seiler3rd, C. Chu, S.O. Abrahamsson, R.H. Gelberman // Iowa Orthop. J. 1993. - № 13. - P. 107-116.

305. The role of macrophages in the tissues regeneration stimulated by thebiomaterials / E. Muldashev, S. Muslimov, L. Muusina et al. // Cell Tissue Bank.- 2005. Vol. 6, № 2. - P. 99-107.

306. The sterilization radiation effect upon the biological properties of the biomaterials / 0. Shangina, R. Nigmatullin, L. Musina // 13 International Congress of the European Association of tissue Banks. Prague, 2004. - P. 141.

307. The use of the alloplant biomaterials to prolong the drugs effect / E. Muldashev, R. Khasanov, S. Muslimov et al. // 13 International Congress of the European Association of tissue Banks. Prague, 2004. - P. 139.

308. Thoren, K. Ethylene oxide sterilization impairs allograft incorporation in a conduction chamber / K. Thoren, P. Aspenberg // Clin. Orthop. 1995. - № 318. -P. 259-264.

309. Treated xenografts as gliding tendon prosthesis in an ovine/B.K. Milthorpe, K. Schindhelm, C.R. Howlett et al. //Biomaterials. -1991. Vol. 12, № 6. - P. 577583.

310. Use of allografts in knee reconstruction: I basic science aspects and current status / W. Shelton, S. Treacy, A. Dukes, A. Bomboy // J. Am. Acad. Orthop. Surg.- 1998.-Vol. 6, №3.-P. 165-168.

311. Validation of radiation dose received by frozen femoral heads during terminal sterilization /M. Eagle, P. Rooney, R. Lomas, J. Kearney //13th International Congress of the European Association of tissue Banks. Prague, 2004. - P. 109.

312. Validation of sterilization procedure of allogeneic avital bone transplants using peracetic acid-ethanol/A. Pruss, B. Baumann, M. Seibold et al. // Biological. -2001.-№29. -P. 59-66.

313. Vascularised bone grafting for fibrous dysplasia of the upper limb / S.M.

314. Kumta, P.C. Leung, J.F. Griffith et al. // J. Bone Joint Surg. (Br). 2000. - Vol. 82, №3.-P. 409-412.

315. Verfahren zur Herstellung von Weichteilpreparaten fuur die KlinischeAnwendunng / R. Verzen, G. Matthes, A. Schimmack.// 3rd International Meeting of Tissue Bank Specialists. Rostock. - 1990. - Vol. 12. - P.l 81-183.

316. Vertical guided bone-graft augmentation in a new canine mandibular model / O.T. Jensen, R.O. Greer Jr., L. Johnson, D. Kassebaum // Jnt. J. Oral. Maxillofac. Implants. 1995. - Vol. 10, № 3. - P. 335-344.

317. Verzen, R. Application of sterilized human amnion for reconstruction of the ocular surface / R. Verzen, U. Hesselbarth, D. Muller // Cell Tissue Banking. -2003.-№ l.-P. 1-9.

318. Verzen, R. Musculoskeletal tissue banking in Europe regulations and quality assurance / R. Verzen // Ann. Chir. Gynaecol. - 1999. - P. 215-220.

319. Verzen, R. The peracetic acid/low pressure cold sterilization new method to sterilize corticocancellous bone and soft tissue / R. Verzen, R. Starke // Ztschr. Exp. Chirurgie. Transplant. Kunstl. Organe. - 1989. -№ 22. - P. 18-21.

320. Virus safety of avital bone tissue transplants: evalution of sterilization steps of spongiosa cuboids using a peracetis acid-methanol mixture / A. Pruss, M. Kao, H. Kiesewetter et al. // Biological. 1999. - № 27. - P. 195-201.

321. Viterbo, F. Fat-tissue injection versus graft: experimental study in rabbits / F. Viterbo, M. Marques, M. Valente //Ann. Plast. Surg. 1994 - Vol. 33, № 2. - P. 184-192.

322. Vogt, P.M. Prospects of tissue transfer and tissue culture / P.M. Vogt, F.W. Peter, H.U. Steinau // Orthopedic. 1998. - Vol. 27, № 1. - P. 45-50.

323. Vrabec, M.P. Subconjunctival librosis after conjunctival autograft / M.P. Vrabec, R.W. Weisenthal, S.H. Elsing // Cornea. 1993. - Vol. 12. - P. 181-183.

324. Wientroub, S. Influence of irradiation on the osteoinductive potetial of demineralized bone matrix / S. Wientroub, A.H. Reddi // Calcif. Tissue Int. 1988.-Vol. 42, №4.-P. 255-260.

325. Wolman, M. Polarized light microscopy in the study of collagen and reticulin / M. Wolman, F.H. Kasten // Histochem. 1986. - Vol. 85. - P. 41-49.

326. Woods, R. Applied Radiation Chemistry. Radiation Processing / R. Woods, A. Pikaev. -N. Y., 1994. P. 15.

327. Yahia, L.H. The irradiation effect on the initial mechanical properties of men iscal grafts / L.H. Yahia, G. Drouin, D. Zukor // Biomed. Mater. End. 1993. -Vol. 3,№4.-P. 211-221.

328. Zasacki, W. The effecacy of application of lyophilized, radiation-sterilized bone graft in orthopedc surgery / W. Zasacki // Clin. Orthop. 1991. - № 272. - P. 82-87.

329. Zhang, Q. Ethylene oxide does not extinguish the osteoinductive capacity of demineralized bone: a reappraisae in rats / Q. Zhang, O. Cornu, C. Delloy // Acta Orthop. Scand.-1997.-Vol. 68, №2.-P. 104-108.

Информация о работе

Шангина, Ольга Ратмировна
доктора биологических наук
Уфа, 2007
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфологические основы радиационной устойчивости соединительнотканных трансплантатов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы