Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Морфологические изменения фабрициевой бурсы цыплят при специфической профилактике болезни Гамборо разными вакцинами

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Морфологические изменения фабрициевой бурсы цыплят при специфической профилактике болезни Гамборо разными вакцинами"

На правах рукописи

КУНДРЮКОВА УЛЬЯНА ИВАНОВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ФАБРИЦИЕВОЙ БУРСЫ ЦЫПЛЯТ ПРИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКЕ БОЛЕЗНИ ГАМБОРО РАЗНЫМИ ВАКЦИНАМИ

06.02.01 - диагностика болезней и -терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 8 НОЯ 2013

ОМСК-2013

005541088

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина»

Научный руководитель: Герунов Владимир Иванович

доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты: Мкртчан Офелия Завеновна

доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры биологии ФГБОУ ВПО «Омский государственный педагогический университет»

Жуков Владимир Михайлович

доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой анатомии и гистологии ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная

сельскохозяйственная академия имени академика Д.К.Беляева»

Защита состоится «20» декабря 2013 г., в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина» по адресу: 644008, г. Омск, ул. Институтская площадь, 2, тел. (3812) 24-15-35, факс (3812) 24-39-63, e-mail: lescheva@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина

Автореферат разослан «18» ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. ветеринар, наук, доцент

Н.А. Лещёва

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Птицеводство является одной из динамично развивающихся и эффективных отраслей сельского хозяйства. Современное ведение промышленного птицеводства вышло на качественно новый уровень. Во всем мире и в нашей стране ведется целенаправленная селекционная работа по увеличению потенциала, как в мясном, так и в яичном направлениях. По прогнозам международных организаций к 2022 г. прошводство мяса птицы будет занимать первое место в мире [Алексеева С.И., 1992; Жаров АВ., 2000; Крюкова ЕА., 2005; Земляная З.Е., 2009; ФисининВИ., 2010].

Главная задача птицеводства состоит в том, чтобы, наращивая объемы производства, обеспечить население собственной, качественной, экологически безопасной продукцией [Груздев К.Н., 2005; Бакулин В А., 2006; Боровков М.Ф., 2008; Калашник АЛ., 2009]. Для осуществления этой задачи необходимо проводить профилактическую вакцинацию [Болотников ИА., 1982; Борисов АВ., 1999;Мудрак Н.С., 2010].

Специфическая профилактика должна осуществляться с учетом эпизоотической ситуации в птицеводческом хозяйстве, биологических свойств возбудителей и результатов лабораторно-диагностических исследований [Стрельников А.П., 1990; Бакулин ВА., 1991; Алиев А.С., 1991, 1993, 1999; Бирман БД., 1996; Джавадов ЭД. 2004; Ивашкина Л.Н., 2009; Алиева АХ., 2012].

Для иммунизации птиц используют живые и инактивированные вакцины, зарегистрированные в РФ. В установленные сроки осуществляют контроль напряженности поствакцинального иммунитета у птицы с использованием серологических реакций (РТГА, РДП, ИФА и др.) и гистологических исследований. В случае неудовлетворительного результата проводят ревакцинацию птицы, а также корректировку схемы вакцинопрофилактики [Муляк СВ., 1996; Борисов АВ. и др., 1999; Смоленский ВН., 1999; Герман ВВ2000;Кэлнек Б.У., 2003; Фосс М., 2008].

Морфологический контроль иммунного статуса в поствакцинальный период до настоящего времени не нашел своего применения в практическом птицеводстве. Совершенствуя существующие программы

вакцинопроф илактики, и разрабатывая новые, ветеринарные специалисты не принимают во внимание изменения в органах иммуногенеза, возникающие при вакцинациях.

Одной из актуальных проблем птицеводства является повышение жизнеспособности и устойчивости к заболеваниям птицепоголовья. В этой связи, особое значение приобретает изучение реакции лимфовдных органов, имеющих непосредственное отношение к иммунобиологическим процессам. Среди лимфоидных органов птиц особое значение имеют - тимус (вилочковая

железа) и фабрициева бурса (клоакальная сумка) [Пилипенко М.Е., 1965; Селезнев С.Б., 2001; Турицына Е.Г., 2010].

Степень разработанности. В настоящее время проведено значительное количество исследований по изучению морфологии органов иммунной системы птицы [Ильин П.А., 1980; Лозовой В.П., Шергин С.М., 1981; Софронов Б.Н. и др., 1995; Селезнев С.Б., 2000; Aitken I.D., 1982]. Однако, многие аспекты морфологического мониторинга при изучении действия различных вакцин на органы иммунной системы недостаточно освещены в литературе, в том числе и ультрамикроскопические исследования.

Таким образом, изучение морфологических изменений в органах иммунной системы, в том числе, в фабрициевой бурсе современных высокопродуктивных кроссов птиц в поствакцинальный период является актуальной проблемой.

Цель исследования: определить комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят, иммунизированных против болезни Гамборо двумя вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е в сравнительном аспекте.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Выявить морфологические изменения в фабрициевой бурсе цыплят разного возраста до и после иммунизации вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.

2. Изучить ультраструктурные особенности фабрициевой бурсы цыплят до и после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.

3. Провести микроморфометрическую оценку фабрициевой бурсы после специфической профилактики испытуемыми вакцинами.

4. Разработать морфофункциональные критерии оценки эффективности применяемых вакцин.

Научная новизна.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведено комплексное морфологическое (гистологическое, ультрамикроскопическое и морфометрическое) исследование фабрициевой бурсы птиц разного возраста до и после иммунизации двумя разными вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е против болезни Гамборо. Выявленный нами комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе в результате специфической профилактики служит научно обоснованным критерием оценки для применения различных вакцин.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость состоит в том, что для более полного представления об ответной реакции организма птицы при испытании той или иной вакцины, необходимо кроме прижизненных методов исследования, проводить гистологические исследования центральных органов иммунной системы взависимости от вида вырабатываемого иммунитета. Динамика смены клеточных популяций (лимфоидных, плазматических, тучных), а также ультраструктурных изменений в органах иммунной системы наиболее полно отражает иммунную перестройку организма при вакцинации.

Практическая значимость проведенных исследований по морфологии, морфометрии, ультрамикроскопии фабрициевой бурсы и результатам серологических исследований при испытании вакцин АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е свидетельствуют о том, что в промышленном птицеводстве наиболее приемлема вакцина НОБИЛИС ГАМЮЮ 228Е, при применении которой формируется стойкий иммунитет при незначительных морфологических изменениях органа.

Методология и методы исследования. Методологической основой диссертационного исследования явились труды отечественных и зарубежных исследователей, в которых представлен комплексный подход к изучению широко распространенного и опасного для отрасли птицеводства вирусного заболевания - болезни Гамборо. Но в связи с тем, что в каждом конкретном хозяйстве исходя из эпизоотической ситуации, для специфической профилактики применяют различные вакцины, необходимо было сравнить эффективность вакцины АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМЮЮ 228Е. С этой целью нами были проведены комплексные исследования, включающие серологические, патоморфологические, гистологические,

ультрамикроскопические и морф (метрические исследования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Морфология фабрициевой бурсы суточных цыплят кросса РодонитЗ свидетельствуют о продолжении формирования структурных единиц органа, а возрастные изменения в фабрициевой бурсе 20-ти суточных цыплят характерны для м орфологической зрелости органа В -системы иммунитета.

2. Морфологические изменения в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммунизации вакциной АВИВАК ИББ характеризуются нарастающими иммуноморфологическими, патологическими и компенсаторно-приспособительными процессами.

3. Комплекс гистологических, ультрамикроскопических и микроморф(метрических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки

после специфической профилактики вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е свидетельствует об иммунологической перестройке организма.

Реализация результатов исследования. Вакцина НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е внедрена в производство и используется в ряде птицефабрик Свердловской области (акт внедрения в ОАО ППЗ «Свердловский»).

Полученные данные морфологических и ультрамикроскопических изменений фабрициевой бурсы в поствакцинальный период могут быть использованы ветеринарными специалистами птицеводческих предприятий и внедрены в учебный процесс при обучении студентов на морфологических кафедрах аграрных ВУЗов: Пермская ГСХА им. Д.Н.Прянишникова; Казанская ГАВМ им. Н.Э. Баумана; Ивановская ГСХА им. академика Д.К.Беляева; Костромская ГСХА; Северокавказский зональный НИВИ.

Степень достоверности и апробация полученных результатов.

Основные положения диссертационной работы обсуждены на XII Международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, посвященной 70-летнему юбилею Уральской государственной сельскохозяйственной академии, (Екатеринбург, 2010); конференции Всероссийского конкурса (I этап) на лучшую научную работу студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ, (Екатеринбург, 2010); конференции Всероссийского конкурса (II этап) на лучшую научную работу среди студентов высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ Уральского Федерального округа в номинации «Ветеринария», (Троицк, 2010);

ЬХХ Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодежная наука 2010: технологии, инновации», посвященной 80-летию Пермской ГСХА (Пермь, 2010); научной конференции «Молодежь и наука - 2011» (Екатеринбург, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» (Казань, 2011); Международной научно-практической конференции, посвященной памяти заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарных наук, профессора Э.Ф. Ложкина (Кострома, 2013).

Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них три в научных журналах, включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

2. Собственные исследования 2.1. Материал и методы исследований

Производственные исследования проведены на ОАО ППЗ «Свердловский» в период выращивания и вакцинации цыплят против болезни Гамборо в 2009-2013 гг. Поголовье птицы было подвергнуто серологическим исследованиям на наличие материнских антител к вирусу болезни Гамборо. С учетом результатов серологического мониторинга для проведения эксперимента было подобрано две группы цыплят одного возраста в разных производственных помещениях.

Серологические исследования проводили в производственной ветеринарной лаборатории ОАО ППЗ «Свердловский» с помощью иммуноферменгного анализа с использованием программного обеспечения и тест-систем ком пании«В юС Ьек В .V.» (Голландия).

Объектом исследования являлись клинически здоровые интактные и иммунизированные против болезни Гамборо цыплята кросса «Родонит 3» разных возрастных групп. Цыплят первой группы иммунизировали культуральной вирус-вакциной АВИВАК ИББ (штамм «Винтерфильд 2512», ВНИИЗЖ, г. Владимир), второй - сухой живой вирус-вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е (Нидерланды), вакцины применяли в соответствии с программ ой вакцинации м етодом вы паивания.

Микро- и ультраморфологические исследования проведены на кафедре анатомии и физиологии ФГБОУ ВПО «Уральского государственного аграрного университета» и кафедре анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии ФГБОУ ВПО «Омского государственного аграрного университета им. ПА.Столыпина», в соответствии с темой научно-исследовательской работы «Морфологические изменении фабрициевой бурсы цыплят при специфической профилактике болезни Гамборо разными вакцинами». Работа является самостоятельным разделом комплексных исследований по теме: «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» (№ государственной регистрации 01.2.00100602).

Исследованию была подвергнута фабрициева бурса птиц разного возраста при иммунизации вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМЮЮ 228Е (п=80).

Цыплят для эксперимента отбирали в первые сутки и в 20-ти суточном возрасте (до вакцинации, которые служили контролем); в 21-е сутки (через сутки после вакцинации) и в 30-ти суточном возрасте (на девятые сутки после вакцинации). В каждый период было отобрано по 10 голов как контрольных, так и опытных групп при испытании каждой из вакцин в соответствии со схемой опыта (табл. 1).

Таблица 1. Схема опыта

Возраст птицы, сут. Наименование вакцины Количество птицы

птичник №31 птичник №32

1 КОНТРОЛЬ 10 10

20 КОНТРОЛЬ 10 10

21 АВИВАК ИББ 10 -

21 НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е - 10

30 АВИВАК ИББ 10 -

30 НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е - 10

Итого 40 40

Для световой микроскопии фабрициеву бурсу фиксировали в 10%-м растворе нейтрального формалина. Для исследования микроструктуры готовили тотальные парафиновые срезы органа толщиной 5-6 мкм, по общепринятым методикам на санном микротоме с последующим дифференциальным окрашиванием гематоксилином (по рецептуре Майера) и эозином. Окраску гематоксилином и эозином использовали для общей оценки развития, состояния и взаимодействия исследуемых тканей, а также структурного и функционального состояния соединительнотканных структур. Для выявления плазматических клеток проводили гистохимическую реакцию с использованием метилового зеленого-пиронина по Браше [Роскин Г.И, 1951]. Для выявления реакции тучных клеток применяли гистохимическую реакцию по Шубичу [Шубич М.Г., 1961], с использованием основного коричневого с докраской гематоксилином. Для визуализации и документирования морфологических изменений использовали микроскоп Leica ICC50 HD (Германия) и фотокамеру Leica DFC 295 (Германия).

Для ультрамикроскопических исследований материал отбирали бритвенным лезвием в виде пластинки толщиной 0,1 см и помещали в предварительно очищенный 2,5% раствор глютаральдегида. В растворе пластинки разрезали на кусочки величиной 0,1 мм3 и фиксировали в свежей порции данного раствора в течение 4-6 часов. Далее кусочки отмывали в фосфатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при t+4°C. В качестве заливочных сред использовали аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме LKB-III, контрастировали 2% спиртовым раствором уралнилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу [Уикли Б., 1975]. Для визуализации процессов использовали увеличение от 1800 до 44000 на электронном микроскопе Morgagni 280D (Япония).

Морф (метрические исследования проведены с помощью микроскопа Leica ICC50 HD (Германия) с использованием программного обеспечения анализа изображений ImageScope Color (Россия). В складках фабрициевой бурсы измеряли отношение площадей лимфоидной и соединительной ткани и высоту эпителия. Массив морф (метрических данных, полученных в ходе исследования, заносили в листы Microsoft Excel с формированием базы данных. Математико-статистическое описание данных исследования и оценка значимости различия полученных величин проведена с помощью персонального компьютера с использованием пакетов прикладных программ Microsoft Excel 2007 с учетом рекомендаций Гланца С. [1999], Автандилова Г.Г. [2002]. Статистический анализ и визуализация данных выполнены в пакете Statistica [StatSoft inc., 2001].

Для морф (метрических исследований использовали гистологические препараты фабрициевой бурсы пяти цыплят из каждой группы. Измерения проводили на изображениях органа, полученных при увеличении объектива 10х. Измерения площадей соединительной и лимфоидной ткани проводили в 3-х складках фабрициевой бурсы каждого цыпленка (всего 75 измерений). Высоту эпителия фабрициевой бурсы цыплят из каждой группы оценивали по 50 промерам в 3-х складках (всего 750 измерений). На основе результатов измерений сформирована база данных морф (метрических характеристик фабрициевой бурсы цыплят.

2.2. Серологический мониторинг уровня материнских антител при вакцинации против болезни Г амборо на ОАО ППЗ «Свердловский»

С целью выявления материнских антител исследована сыворотка крови цыплят, начиная с трехсуточного возраста, в производственной ветеринарной лаборатории ОАО ППЗ «Свердловский».

Дату вакцинации против болезни Гамборо рассчитывали с учетом периода полураспада антител (составляет 5-6 дней). Пробы крови получали от цыплят в количестве 24-х и проводили анализ между 3-ми и 10-ми сутками жизни, в период рассасывания желточного мешка и максимального выброса материнских антител в кровь. Сыворотку крови исследовали методом иммуноферменгного анализа (ELISA) с использованием программного обеспечения и тест -систем компании «BioChekB.V.» (Голландия).

При этом в каждом отдельном корпусе определяли свой средний тигр материнских антител, для выявления благоприятного дня эффективной вакцинации цыплят.

Дата вакцинации соответствует дню, когда средний тигр материнских антител снижается до уровня, при котором вакцина может использоваться эффективно, он к 20-м суткам был менее 1000 (от 600 до 850).

2.3. Сравнительная морфология, ультрамикроскопия и морфометрия фабрициевой бурсы цыплят перед вакцинацией и иммунизированных

разными вакцинами против болезни Гамборо 2.3.1. Морфология фабрициевой бурсы интактных цыплят суточного

возраста

Отличительной особенностью фабрициевой бурсы суточных цыплят было то, что фолликулы, расположенные в складках бурсы были различной степени зрелости, что определялось их клеточным составом. Одни из них плотные, однородные, окрашенные базофильно, представлены большими, средними и малыми лимфоцитами без строгой зональности. Другие, более просветленные, представлены в основном ретикулярными, эпителиальными и лимфоидными клетками. Реже в складках регистрировали фолликулы, у которых было выражено зональное расположение клеток. Строма складок представлена тонкими прослойками соединительной ткани, в которой при проведении гистохимической реакции по Шубичу, выявлены тучные клетки, а при гистохимической реакции по Браше, в центрах просветленных фолликулов регистрируются плазматические клетки. Эпителий, выстилающий просвет бурсы, равномерно покрывает складки. Ядра эпителиальных клеток расположены базально, просветлены, в них просматриваются зерна хроматина.

В этом возрасте продолжается процесс формирования лимфоидных фолликулов, основной функциональной единицы центрального органа В-системы иммунитета.

2.3.2. Морфология фабрициевой бурсы цыплят 20-ти суточного возраста перед иммунизацией против болезни Гамборо вакциной АВИВАК ИББ

При морфологическом исследовании фабрициевой бурсы 20-ти суточных цыплят корпуса №31 перед вакцинацией было выявлено, что в складках фолликулы плотно прилегают друг к другу. В фолликулах корковая и мозговая зоны отчетливо отграничены, при этом корковая более плотная, а мозговая рыхлая. Соединительнотканные прослойки тонкие, четко отделяющие один фолликул от другого. Эпителий бурсы равномерно покрывает всю ее внутреннюю поверхность. Ядра эпителия расположены базально в один ряд, их базофильная окраска четко подчеркивает базальную мембрану эпителия. Наряду со зрелыми эпителиальными клетками, выявляются размножающиеся эпителиальные клетки с крупными округлой или овальной формы ядрами. В центрах некоторых фолликулов отмечается некроз единичных лимфоидных клеток. В лимфатических сосудах, которые расширены, регистрируется застой лимфы, кроме того, состояние отека наблюдается и в некоторых фолликулах.

10

При этом в кровеносных сосудах стромы четко прослеживается пролиферация клеток эндотелия и адвентиции.

При проведении гистохимической реакции по Шубичу периваскулярно обнаруживается усиление тучно-клеточной реакции. Тучные клетки располагаются как в межфолликулярной соединительной ткани, так и по всей строме складок фабрициевой бурсы. Все отмеченные нами изменения можно отнести к приспособительным процессам и связанными с развитием растущей птицы. Сравнительное исследование фабрициевой бурсы 20-ти суточной птицы разных корпусов не выявило, каких либо патологических или иммуноморфологических изменений на другие виды вакцинаций.

2.3.3. Комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 21-й день жизни (1-е сутки после иммунизации против болезни Гамборо

вакциной АВИВАК ИББ)

У цыплят в первые сутки после иммунизации вакциной АВИВАК ИББ против болезни Гамборо и 20-ти суточной птицей гистологическими исследованиями нами не выявлено существенных различий в строении фабрициевой бурсы. В фабрициевой бурсе усилился рисунок корковой зоны фолликулов, расширились их центральные части, за счет увеличения количества клеточных элементов. Наблюдается активизация клеток эпителия слизистой оболочки фабрициевой бурсы. В эпителии появляются более глубокие борозды, и усиливается неровность эпителия в пределах одной и той же складки. В некоторых участках слизистой оболочки в эпителии просматривается двух и трехслойное расположение клеток. В эпителии отдельных складок у цыплят отмечается появление микрокистозных полостей разных размеров и усиленное слизеобразование при активной пролиферации эпителия. Плазмоклеточная реакция остается на прежнем уровне, но выявлена пролиферация лимфобластов в центрах фолликулов.

2.3.4. Комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммунизации против болезни Гамборо вакциной

АВИВАК ИББ

На 9-е сутки после иммунизации вакциной АВИВАК ИББ бурса всех исследуемых цыплят была несколько увеличена в объеме по сравнению с 21-суточной птицей, флюктуировала, при разрезе ее полость была заполнена мутной слизью. Слизистая оболочка набухшая, слегка покрасневшая, обильно покрыта слизью, складчатость выражена. При гистологическом исследовании фабрициевой бурсы этих цыплят обнаружен комплекс морфологических изменений, распространяющихся на все структуры органа. Складки

11

фабрициевой бурсы становятся короче, рисунок их грубо исчерчен, прослеживается уменьшение фолликулов в объеме и снижение их количества в складке. При этом заметно разрастание соединительной ткани, как между ф олликулам и, так и в основе каждой складки.

Лимфатические сосуды при этом расширены, что является отражением компенсаторно-приспособительной реакции органа для осуществления оттока лимфы от органа в разросшихся прослойках соединительной ткани. В некоторых участках фабрициевой бурсы фолликулы отсутствуют, и их место замещает соединительная ткань.

В эпителии слизистой оболочки продолжает увеличиваться количество кистозных полостей разной величины, запустевших или заполненных секретом. Наряду с этим, в фолликулах фабрициевой бурсы, появляются кистсзные полости.

Кроме того, в центре многих фолликулов выявляются железистые структуры, которые свидетельствуют об угнетении лимфоидной системы.

Эпителий фабрициевой бурсы неоднородный, прослеживается его аденоматозное перерождение, за счет чего в полости бурсы видны многочисленные карманы. Четко выражено активное слизеобразование и пролиферация клеток эпителия, что характерно для катарального воспаления. Периваскулярная полим орф ноклеточная инфильтрация, представленная в основном, лимфоцитами и плазматическими клетками, расположена как в подапителиальной зоне, так и в лимфоидных фолликулах, что свидетельствует об активном антителообразовании и подтверждено при проведении гистохимической реакции по Браше. Среди клеток инфильтрата присутствуют эозинофилы, что характерно для аллергической реакции органа и организма в целом.

При проведении гистохимической реакции по Шубичу регистрируется усиленная тучно-клеточная реакция соединительной ткани, при этом тучные клетки, как правило, лишены зерен, видны только ядра, то есть наблюдается дегрануляция тучных клеток. Здесь же постоянно встречались «фигуры митоза». Наряду со стромой органа происходит утолщение серозной и мышечной оболочки фабрициевой бурсы, то есть практически все составляющие соединительной ткани находятся в состоянии активного пролиферативного процесса. Анализ морфологических изменений, обнаруженных в фабрициевой бурсе на 9-е сутки после иммунизации вакциной АВИВАК ИББ, свидетельствует о глубокой перестройке данного органа, представленной им м у ном орф ологическим и, тяжелыми патологическими и ком пенсаторно-приспособительным и процессам и.

2.3.5. Морфологическая реакция фабрициевой бурсы цыплят на 20-е сутки,

до иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е

При гистологическом исследовании фабрициевой бурсы цыплят корпуса №32 на 20-е сутки (до вакцинации) видна хорошо выраженная складчатость. Фолликулы в складках равномерно распределяются в основном в два ряда, разделенные соединительнотканной прослойкой. В большей части фолликулов просматривается центральная, пограничная и периферическая зоны. В центрах фолликулов наряду с пролиферацией лимфоцитов видна плазмоклеточная трансформация лимфоидных клеток. Эпителий бурсы равномерно покрывает складки бурсы и находится в состоянии умеренной секреции. Ядра эпителиоцитов располагаются в основном в один ряд, но имеются незначительные очаги гиперплазии эпителия. Апикальный край клеток ровный, базальная мембрана четко выражена. Межфолликулярная соединительная ткань узкими прослойками отделяет фолликулы один от другого.

Строма складок представлена тяжами соединительной ткани с расположенными в ней сосудами артериального и венозного типа.

Кровеносные сосуды стромы, в основном запустевшие, стенка артериальных сосудов несколько утолщена за счет пролиферации клеток адвентиции.

При проведении гистохимической реакции по Шубичу, тучно-клеточная реакция умеренно выражена, в основном просматривается периваскулярно, в области расположения сосудов стромы.

При проведении гистохимической реакции по Браше в центре фолликулов видна незначительная плазмоклеточная трансформация.

2.3.6. Морфологическая реакция фабрициевой бурсы цыплят на 21-е сутки (1-е сутки после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е)

В первые сутки после вакцинации против болезни Гамборо при гистологическом исследовании фабрициевой бурсы прослеживается активизация секреции клеток эпителия, усиление тучно-клеточной реакции и пролиферация клеток лимфоидного рада, что связано с начальным этапом ответной реакции на антигенное воздействие на организм птицы и фабрициевой бурсы в том числе.

23.7. Комплекс морфологических шмененнн в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммушвации против болезни Гамборо вакциной НОБИЛИС ГАМБОЮ 228Е

На девятые сутки после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМ БОЮ 228Е при гистологическом исследовании препаратов фабрициевой бурсы выявлено умеренное утолщение серозной и мышечной оболочек органа и разрастание соединительной ткани. Фолликулы равномерно расширены их корковый слой состоит ш двух рядов резко базсфильных лимфоцитов, а расширенная мозговая зона представлена рыхло расположенными клетками лимфоидного ряда разной степени зрелости и значительным количествам макрофагов, фибробластов и плазмобластов, что свидетельствует об активном процессе выработки иммунитета.

Эпителий фабрициевой бурсы равномерно выстилает еще более выраженные складки бурсы, а также образует микрокистозные пузырьки и полости.

В соединительнотканной строме регистрируется активизация пролиферации кровеносных сосудов мелкого калибра, что свидетельствует о разрастании соединительнотканной стромы органа.

При проведении гистохимической реакции по Шубичу субэпигелиально и периваскулярно наблюдается умеренная тучно-клеточная реакция, причем просматривается дегрануляция тучных клеток, а при проведении гистохимической реакции по Браше в центре лимфоидных фолликулов установлена активная плазмоклеточная трансформация.

Таким образом, оценивая морфологическую реакцию фабрициевой бурсы птицы кросса «Родонит 3», в первые и на девятые сутки после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОЮ 228Е против болезни Гамборо, нами обнаружены изменения, характеризующие иммуноморфологический процесс на вакцинацию, включающий плазмоклеточную трансформацию и инфильтрацию, а также пролиферативную реакцию элементов сосудистой стенки. Появление микрокистозных полостей, можно отнести, к активной секреторной реакции эпителия.

2.3.8. Ультраструктура фабрициевой бурсы при использовании вакцины НОБИЛИС ГАМБОЮ 228Е

При ультрзамикроскопическом исследовании фабрициевой бурсы птицы до вакцинации в эпителиальных клетках железистого эпителия на их поверхности выявлены редко расположенные многочисленные ворсинки. Цитоплазма клеток гомогенного вида бедна органеллами. В апикальной части

клеток выявляется скопление секреторных гранул, свидетельствующих об активной секреции эпителия.

В фолликулах клетки лимфоидной ткани в основном круглой формы, но ближе к центру они принимают неправильную форму в связи с деформацией их секретом содержащемся в фолликуле. Цитоплазма лимфоцитов гомогенного вида в ней просматриваются единичные митохондрии и фрагменты канальцев эндоплазматической сети.

У птицы после вакцинации произошло увеличение количества секреторных гранул в цитоплазме эпителия и кровенаполнение капилляров. Более существенные ультраструктурные изменения прослеживаются в фолликулярной части фабрициевой бурсы. Прежде всего, отмечено утолщение соединительнотканной прослойки между эпителием и фолликулярной частью, в ней видны полнокровные кровеносные сосуды, в некоторых из них отмечена деструкция клеток эндотелия. В фолликулах отмечается гиперплазия лимфоидной ткани. Кроме увеличения количества лимфоидных клеток, отмечена их гипертрофия. Лимфоциты приобретают неправильную форму -деформированы, за счет сдавливания. Межклеточные контакты плотные, отростки цитоплазмы набухшие, и выполняют полностью межклеточное пространство. Лимфоидные фолликулы равномерно заполнены лимфоидными клетками, при этом просвета в фолликулах не просматривается. В цитоплазме лимфоидных клеток выявляются очаги деструкции от небольших, до гигантских.

Кроме деструкции лимфоцитов, патологических процессов при ультрамикроскопическом исследовании в фабрициевой бурсе у птицы после иммунизации ее вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е нами не выявлено. Все обнаруженные ультрамикроскопические изменения фабрициевой бурсы характерны для поствакцинальных, иммуноморфологических процессов.

Ультрамикроскопическое исследование фабрициевой бурсы цыплят до и после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е и сравнительный анализ ультраструктурного состояния всех компонентов фабрициевой бурсы птицы до и после иммунизации свидетельствует об иммуноморфологическом процессе, при котором неизбежна деструкция и гибель единичных лимфоидных клеток при выработке активного иммунитета.

2.3.9. Морфометрическая характеристика фабрициевой бурсы при использовании вакцин АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е

Морфометрия фабрициевой бурсы включала измерение соотношения площади соединительной и лимфоидной ткани, а также высоты эпителия.

При сравнительном морфометрическом исследовании фабрициевой бурсы цыплят контрольной и опытных групп различия оценивали с помощью критерия

Краскела-Уоллеса (Н). Для исследуемых параметров межгрупповые различия оказались значимы: по соотношению соединительной и лимфоидной ткани фабрициевой бурсы - Н (4, п= 75) =49.20; р < 0.001; по высоте эпителия - Н (4, п= 75) =43.49; р < 0.001. Сравнительный аналш проведенных морфометрических исследований на цыплятах, вакцинированных против болезни Гамборо, показал, что обе вакцины (АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМ БОЮ 228Е) вызвали иммунный ответ.

Парные сравнения между исследуемыми группами проведены с помощью критерия Манна-Уитни (и). Высота эпителия фабрициевой бурсы у птицы ш контрольной группы существенно меньше по сравнению с птицами всех исследованных групп, кроме группы птиц, вакцинированной АВИВАК ИББ (1 -е сутки после вакцинации). При этом группы птиц одного возраста после вакцинации (21-е сутки и 30-е сутки), но вакцинированные разным и вакцинам и, не различаются.

При парных сравнениях групп цыплят по соотношению соединительной и лимфоидной ткани фабрициевой бурсы выявлено, что контрольная группа существенно отличается от групп 30-ти суточного возраста, иммунизированных раз ным и вакцинам и против болез ни Гам боро.

Различия в вакцинах обнаружены только для одновозрастных цыплят на 9-е сутки после вакцинации.

Таким образом, на 9-е сутки после вакцинации высота эпителия и разрастание соединительной ткани больше по сравнению с не вакцинированными цыплятами или цыплятами на следующий день после вакцинации. Полученный результат согласуется с представлениями о том, что для изменения морфологических признаков, считающихся наиболее консервативными (по сравнению с биохимическими, физиологическими и др.) необходим временной лаг между воздействием и эффектом.

В то же время нами выявлено, что вакцина АВИВАК ИББ вызывает выраженные патологические процессы, которые при иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Еотсутствовали.

Полученная нами качественная оценка морфологических изменений в фабрициевой бурсе при иммунизации разными вакцинами подтверждена морфометрическими исследованиями. Проведенные комплексные исследования показывают преимущества вакцины НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е по сравнению с АВИВАК ИББ, и рекомендованы для использования в ОАО ППЗ «Свердловский», рекомендации и акт внедрения имеются.

3. Выводы

1. Морфология фабрициевой бурсы суточных цыплят кросса «Родонит 3» характеризуется образованием фолликулов разной степени зрелости, включающих зрелые лимфоциты, лимфобласты, эпителиальные и ретикулярные клетки, без строгой зональности в фолликулах, что свидетельствует о продолжении формирования структурных единиц органа.

2. В фабрициевой бурсе 20-ти суточных цыплят выявлены возрастные изменения включающие увеличение количества лимфоидных фолликулов в складках бурсы, строгую зональность клеточных элементов, входящих в их состав, равномерное распределение стромы в складках и полноценную ее васкуляризацию, что характерно для морфологической зрелости органа.

3. Комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят в первые сутки после иммунизации вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е проявляется в виде активизации центров лимфоидных фолликулов, пиронинофилии плазматических клеток фолликулов, периваскулярной полиморфноклеточной инфильтрации стромы и пролиферации клеток стенки сосудов и свидетельствует о начале иммуноморфологической перестройки органа.

4. Морфологические изменения в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммунизации вакциной АВИВАК ИББ представлены нарастающими иммуноморфологическими процессами, патологическими изменениями, в виде метаплазии эпителия слизистой оболочки с формированием разной величины кистозных полостей, некрозом центров фолликулов и их аденоматозным перерождением, резким разрастанием соединительнотканной стромы, накоплением и дегрануляцией тучных клеток и нарастающими компенсаторно-приспособительными процессами.

5. Комплекс гистологических и электронно-микроскопических изменений в фабрициевой бурсе птицы на 9-е сутки после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е свидетельствует об иммунологической перестройке организма и представлен, иммуноморфологическими и компенсаторно-приспособительными процессами.

6. На основании результатов морфометрического анализа подтверждена высокая степень иммунного ответа при введении вакцины НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е по сравнению с вакциной АВИВАК ИББ.

4. Практические предложения

Гистологические, ультрамикроскопические исследования фабрициевой бурсы цыплят разного возраста при иммунизации их вакцинами АВИВАК ИББ и НОЕИЛИС ГАМБОРО 228Е выявили преимущество вакцины НОБИЛИС ГАМ ЮЮ 228Е. Полученные результаты отражены в практических рекомендациях «Морфологическое обоснование вакцинопрофилактики при болезни Гамборо», Екатеринбург, 2013, и метут быть использованы:

- в птицеводческих хозяйствах при иммунизации птицы против болезни Гамборо;

- в учебном процессе на биологических и факультетах ветеринарной медицины;

- при написании соответствующих разделов учебных пособий по морфологии органов иммунной системы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Дроздова, Л.И. Морфологическая реакция органов В-системы иммунитета на вакцинацию против болезни Гамборо / Л.И. Дроздова, У.И. Кундрюкова, Л.Н. Ивашкина // Аграрный вестник Урала. - Екатеринбург, 2010. - №6 (72) июнь. - С.52-53.

2. Кундрюкова, У.И. Морфология гепато-лиенальной системы птицы при вакцинации против болезни Гамборо / У.И. Кундрюкова, Л.И. Дроздова // Материалы LXX Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 80-летию Пермской ГСХА «Молодежная наука 2010: технологии, инновации». - Пермь, 2010. - С.245-248.

3. Кундрюкова, У.И. Морфологическая реакция фабрициевой бурсы птицы как показатель качества иммунитета / У.И. Кундрюкова, Л.И. Дроздова // Современные научно-практические достижения в ветеринарии. - Киров, 2011. - Выпуск 2. - С.54-57.

4. Кундрюкова, У.И. Морфология вакцинного процесса у кур при болезни Гамборо / У.И. Кундрюкова, Л.И. Дроздова // Сборник материалов научной конференции студентов и аспирантов факультета ветеринарной медицины «Молодежь и наука - 2011». - Екатеринбург, 2011. - С.74-77.

5. Кундрюкова, У.И. Морфологическая реакция организма цыплят на вакцинацию против болезни Гамборо / У.И. Кундрюкова, Л.И. Дроздова // Сборник научных трудов по материалам 17-й Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных». - Москва, 2011. — С.66-69.

6. Кундрюкова, У.И. Комплекс морфологических изменений в организме птицы после вакцинации против болезни Гамборо / У.И. Кундрюкова // Materialy VII Miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji «Perspektywiczne opracowania sa nauka i technikami - 2011» Vol.44. Weterynaria. Ekologia. - Przemysl, Nauka i studia, 2011. - S.8-13.

7. Дроздова, Л.И. Инволютивные процессы в фабрициевой бурсе при вакцинации против болезни Гамборо / Л.И. Дроздова, У.И. Кундрюкова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана. - Казань, 2011. - Том 207. -С.195-197.

8. Кундрюкова, У.И. Сравнительная морфология фабрициевой бурсы цыплят разных кроссов при иммунизации их различными штаммами вакцин против болезни Гамборо / У.И. Кундрюкова, Л.И. Дроздова // Аграрный вестник Урала. - Екатеринбург, 2012. - №11-2 (106) ноябрь. - С.15-18.

9. Кундрюкова, У.И. Сравнительная ультрамикроскопия фабрициевой бурсы птицы до и после вакцинации против болезни Гамборо / У.И. Кундрюкова, Л.Г. Тулакина // Сборник статей международной научно-практической конференции, посвященной памяти заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарных наук, профессора Э.Ф. Ложкина «Механизмы и закономерности индивидуального развития организма млекопитающих». -Караваево, Костромская ГСХА, 2013. - Том II. - С.67-69.

Подписано к печати 14.11.2013. Формат бумаги 15x21. Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Отпечатано в типографии ООО «Вариант-Омск» 644043, г. Омск, ул. Фрунзе, 1, корп. 3. 20

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Кундрюкова, Ульяна Ивановна, Омск

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ

П.А.СТОЛЫПИНА»

04201450899

На правах рукописи

КУНДРКЖОВА УЛЬЯНА ИВАНОВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ФАБРИЦИЕВОЙ БУРСЫ ЦЫПЛЯТ ПРИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКЕ БОЛЕЗНИ ГАМБОРО

РАЗНЫМИ ВАКЦИНАМИ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель -

доктор ветеринарных наук, профессор

Герунов Владимир Иванович

Омск 2013

Оглавление

Введение............................................................................. 4

1. Обзор литературы............................................................... 11

1.1. Характеристика инфекционной бурсальной болезни (болезни Гамборо)............................................................................... 11

1.1.1. Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб................................................................................. 11

1.1.2. Возбудитель болезни...................................................... 14

1.1.3. Эпизоотология............................................................. 16

1.1.4. Патогенез..................................................................... 16

1.1.5. Течение и клиническое проявление..................................... 17

1.1.6. Патологоанатомические признаки.................................... 18

1.1.7. Диагностика и дифференциальная диагностика...................... 19

1.1.8. Иммунитет, профилактика, лечение, специфическая профилактика..................................................................... 20

1.2. Фабрициева бурса - место развертывания

иммуноморфологических процессов при болезни Гамборо............... 25

1.2.1. Структура и функции фабрициевой бурсы............................ 27

1.3. Характеристика испытуемых вакцин против болезни Гамборо... 35

1.3.1. Характеристика сухой культуральной вирус-вакцины против болезни Гамборо АВИВАК ИББ................................................ 35

1.3.2. Характеристика сухой живой вирус-вакцины против болезни Гамборо НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.......................................... 36

2.Собственные исследования..................................................... 37

2.1. Материал и методы исследований......................................... 37

2.1. Серологический мониторинг уровня материнских антител при вакцинации против болезни Гамборо на ОАО 11113 «Свердловский»... 42 2.3. Сравнительная морфология, ультрамикроскопия и морфометрия фабрициевой бурсы цыплят перед вакцинацией и иммунизированных разными вакцинами против болезни Гамборо.............................. 48

2.3.1. Морфология фабрициевой бурсы интактных цыплят суточного

возраста............................................................................... 48

2.3.2. Морфология фабрициевой бурсы цыплят 20-ти суточного возраста перед иммунизацией против болезни Гамборо вакциной АВИВАКИББ....................................................................... 53

2.3.3. Комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 21-й день жизни (1-е сутки после иммунизации против болезни Гамборо вакциной АВИВАК ИББ)............................. 58

2.3.4. Комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммунизации против болезни Гамборо вакциной АВИВАК ИББ.......................................................... 64

2.3.5. Морфологическая реакция фабрициевой бурсы цыплят на 20-е сутки, до иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.......... 71

2.3.6. Морфологическая реакция фабрициевой бурсы цыплят на 21-е сутки (1-е сутки после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е).................................................................... 76

2.3.7. Комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммунизации против болезни Гамборо вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.............................................. 80

2.3.8. Ультраструктура фабрициевой бурсы при использовании вакцины НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.......................................... 84

2.3.9. Морфометрическая характеристика фабрициевой бурсы при использовании вакцин АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.. 91

3. Заключение........................................................................ 100

4. Выводы............................................................................. 104

Список сокращений и условных обозначений................................ 106

Список литературы............................................................... 107

Введение

Актуальность темы исследования. Птицеводство является одной из динамично развивающихся и эффективных отраслей сельского хозяйства. Современное ведение промышленного птицеводства вышло на качественно новый уровень. Во всем мире и в нашей стране ведется целенаправленная селекционная работа по увеличению потенциала, как в мясном, так и в яичном направлениях. По прогнозам международных организаций к 2022 году производство мяса птицы будет занимать первое место в мире [Алексеева С.И., 1992; Жаров A.B., 2000; Крюкова Е.А., 2005; Земляная З.Е., 2009; Фисинин В.И., 2010].

Главная задача птицеводства состоит в том, чтобы, наращивая объемы производства, обеспечить население собственной, качественной, экологически безопасной продукцией [Груздев К.Н., 2005; Бакулин В.А., 2006; Боровков М.Ф., 2008; Калашник А.Н., 2009].

Для осуществления этой задачи необходимо соблюдать комплекс организационно-хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий, специфической профилактики (вакцинации) и своевременной диагностики инфекционных болезней для защиты птицефабрик от проникновения возбудителей заразных болезней и предупреждения их распространения за пределы предприятия. В обязательном порядке должна осуществляться профилактическая вакцинация поголовья кур против целого ряда вирусных инфекционных заболеваний [Болотников И.А., 1982; Борисов A.B., 1999; Мудрак Н.С., 2010].

Вакцинопрофилактика является лишь частью комплекса профилактических мероприятий, без выполнения которых невозможно обеспечить эпизоотическое благополучие хозяйства. Специфическая профилактика должна осуществляться с учетом эпизоотической ситуации в птицеводческом хозяйстве, биологических свойств возбудителей и результатов лабораторно-диагностических исследований [Стрельников А.П.,

1990; Бакулин В.А., 1991; Алиев A.C., 1991, 1993, 1999; Бирман Б.Я., 1996; Джавадов Э.Д. 2004; Ивашкина JI.H., 2009; Алиева А.К., 2012].

Для иммунизации птиц используют живые и инактивированные вакцины, зарегистрированные в РФ. В установленные сроки осуществляют контроль напряженности поствакцинального иммунитета у птицы с использованием серологических реакций (РТГА, РДП, ИФА и др.) и гистологических исследований. В случае неудовлетворительного результата проводят ревакцинацию птицы, а также корректировку схемы вакцинопрофилактики [Муляк C.B., 1996; Борисов A.B. и др., 1999; Смоленский В.И., 1999; Герман В.В., 2000; Кэлнек Б.У., 2003; Фосс М., 2008].

Морфологический контроль иммунного статуса в поствакцинальный период до настоящего времени не нашел своего применения в практическом птицеводстве. Совершенствуя существующие программы

вакцинопрофилактики, и разрабатывая новые, ветеринарные специалисты не принимают во внимание изменения в органах иммуногенеза, возникающие при вакцинациях.

Одной из актуальных проблем птицеводства является повышение жизнеспособности и устойчивости к заболеваниям птицепоголовья. В этой связи, особое значение приобретает изучение реакции лимфоидных органов, имеющих непосредственное отношение к иммунобиологическим процессам. Среди лимфоидных органов птиц особое значение имеют - тимус (вилочковая железа) и фабрициева бурса (клоакальная сумка) [Пилипенко М.Е., 1965; Селезнев С.Б., 2001; Турицына Е.Г., 2010].

Степень разработанности. В настоящее время проведено значительное количество исследований по изучению морфологии органов иммунной системы птицы [Ильин П.А., 1980; Лозовой В.П., Шергин С.М., 1981; Софронов Б.Н. и др., 1995; Селезнев С.Б., 2000; Aitken I.D., 1982]. Однако, многие аспекты морфологического мониторинга, при изучении

действия различных вакцин на органы иммунной системы недостаточно освещены в литературе, в том числе и ультрамикроскопические исследования.

Таким образом, изучение морфологических изменений в органах иммунной системы, в том числе в фабрициевой бурсе, современных высокопродуктивных кроссов птиц в поствакцинальный период является актуальной проблемой.

Цель исследования: определить комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе цыплят, иммунизированных против болезни Гамборо двумя вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е в сравнительном аспекте.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Выявить морфологические изменения в фабрициевой бурсе цыплят разного возраста до и после иммунизации вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.

2. Изучить ультраструктурные особенности фабрициевой бурсы цыплят до и после иммунизации вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е.

3. Провести микроморфометрическую оценку фабрициевой бурсы после специфической профилактики испытуемыми вакцинами.

4. Разработать морфофункциональные критерии оценки эффективности применяемых вакцин.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведено комплексное морфологическое (гистологическое, ультрамикроскопическое и морфометрическое) исследование фабрициевой бурсы птиц разного возраста до и после иммунизации двумя разными вакцинами АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е против болезни Гамборо. Выявленный нами комплекс морфологических изменений в фабрициевой бурсе в результате

специфической профилактики служит научно обоснованным критерием оценки для применения различных вакцин.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость состоит в том, что для более полного представления об ответной реакции организма птицы при испытании той или иной вакцины, необходимо кроме прижизненных методов исследования, проводить гистологические исследования центральных органов иммунной системы в зависимости от вида вырабатываемого иммунитета. Динамика смены клеточных популяций (лимфоидных, плазматических, тучных), а также ультраструктурных изменений в органах иммунной системы наиболее полно отражает иммунную перестройку организма при вакцинации.

Практическая значимость проведенных исследований по морфологии, морфометрии, ультрамикроскопии фабрициевой бурсы и результатам серологических исследований при испытании вакцин АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е свидетельствуют о том, что в промышленном птицеводстве наиболее приемлема вакцина НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е, при применении которой формируется стойкий иммунитет при незначительных морфологических изменениях органа.

Методология и методы исследования.

Методологической основой диссертационного исследования явились труды отечественных и зарубежных исследователей, в которых представлен комплексный подход к изучению широко распространенного и опасного для отрасли птицеводства вирусного заболевания - болезни Гамборо. Но в связи с тем, что в каждом конкретном хозяйстве исходя из эпизоотической ситуации, для специфической профилактики применяют различные вакцины, необходимо было сравнить эффективность вакцины АВИВАК ИББ и НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е. С этой целью нами были проведены комплексные исследования, включающие серологические,

патоморфологические, гистологические, ультрамикроскопические и морфометрические исследования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Морфология фабрициевой бурсы суточных цыплят кросса РодонитЗ свидетельствуют о продолжении формирования структурных единиц органа, а возрастные изменения в фабрициевой бурсе 20-ти суточных цыплят характерны для морфологической зрелости органа В-системы иммунитета.

2. Морфологические изменения в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после иммунизации вакциной АВИВАК ИББ характеризуются нарастающими иммуноморфологическими, патологическими и компенсаторно-приспособительными процессами.

3. Комплекс гистологических, ультрамикроскопических и микроморфометрических изменений в фабрициевой бурсе цыплят на 9-е сутки после специфической профилактики вакциной НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е свидетельствует об иммунологической перестройке организма.

Реализация результатов исследования. Вакцина НОБИЛИС ГАМБОРО 228Е внедрена в производство и используется в ряде птицефабрик Свердловской области (акт внедрения в ОАО 1ШЗ «Свердловский»).

Полученные данные морфологических и ультрамикроскопических изменений фабрициевой бурсы в поствакцинальный период могут быть использованы ветеринарными специалистами птицеводческих предприятий и внедрены в учебный процесс при обучении студентов на морфологических кафедрах аграрных ВУЗов: Пермская ГСХА им. Д.Н.Прянишникова; Казанская ГАВМ им. Н.Э. Баумана; Ивановская ГСХА им. академика Д.К.Беляева; Костромская ГСХА; Северокавказский зональный НИВИ.

Степень достоверности и апробация полученных результатов.

Основные положения диссертационной работы обсуждены на XII Международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, посвященной 70-летнему юбилею Уральской государственной сельскохозяйственной академии, (Екатеринбург, 2010); конференции Всероссийского конкурса (I этап) на лучшую научную работу студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ, (Екатеринбург, 2010); конференции Всероссийского конкурса (II этап) на лучшую научную работу среди студентов высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ Уральского Федерального округа в номинации «Ветеринария», (Троицк, 2010);

ЬХХ Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодежная наука 2010: технологии, инновации», посвященной 80-летию Пермской ГСХА (Пермь, 2010); научной конференции «Молодежь и наука - 2011» (Екатеринбург, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» (Казань, 2011); Международной научно-практической конференции, посвященной памяти заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарных наук, профессора Э.Ф. Ложкина (Кострома, 2013).

Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них три в научных журналах, включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Личный вклад. Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования проведены автором самостоятельно. Теоретический и практический анализ полученных результатов проведен совместно с руководителем.

Работа выполнена на кафедрах:

• анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии ФГБОУ ВПО «Омского государственного аграрного университета им. П.А.Столыпина»

• анатомии и физиологии ФГБОУ ВПО «Уральского государственного аграрного университета»

Экспериментальные исследования выполнены на птице кросса «Родонит 3», селекционированном на ОАО 11113 «Свердловский».

Структура и объем диссертационной работы. Диссертация изложена на 124 страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, списка использованной литературы. Список литературы включает 182 наименований, из них 53 зарубежных авторов. Материалы диссертационной работы иллюстрированы шестью таблицами, двумя гистограммами и 61 рисунком.

1. Обзор литературы 1.1. Характеристика инфекционной бурсальной болезни

(болезни Гамборо)

Инфекционная бурсальная болезнь (лат. - Bursitis infectiosa avium; англ.

- Infectious Bursae Disease; инфекционный бурсит кур, болезнь Гамборо, ИББ)

- широко распространенное, высококонтагиозное вирусное заболевание молодых цыплят, преимущественно 2-15-недельного возраста, характеризующееся высокой смертностью и иммунодепрессивным действием возбудителя, обуславливающим проявление секундарных инфекций [Бакулин В.А., 1991; Алиев A.C., 1991, 1993; Борисов A.B., 1995; Ибрагимов A.A., 1978].

Клинически при болезни Гамборо развивается диарея, возникает потеря аппетита, иммунная депрессия, глубокая прострация и смерть [Бакулин В.А., 1982; Алтухов H.H., 1990; Lasher H.N., 1994].

Основными клетками мишенями являются лимфоидные, особенно В-клетки, из тканей наиболее тяжелому поражению подвергается лимфоидная ткань клоакальной сумки [Cosgrove A.S., 1962]

1.1.1. Историческая справка, распространение, степень опасности и

ущерб

Впервые инфекционная бурсальная болезнь была зарегистрирована в 1957 г. в США, штат Делавер, в районе Гамборо, откуда и получила свое первоначальное название. В середине 60-х годов инфекционная бурсальная болезнь регистрировалась в большинстве стран с развитой индустрией птицеводства. В 1962 году эту специфическую, новую болезнь описал Cosgrove [Cosgrove A.S., 1962].

Вспышки инфекционной бурсальной болезни, вызванные высоковирулентным штаммом вируса болезни Гамборо, впервые в 1986 г.

были зарегистрированы в Голландии и Бельгии, которые сопровождались гибелью почти 30% бройлеров и 70% несушек [Матиас Фосс, Ханц Филлипп, 2008], в дальнейшем было отмечено быстрое распространение высоковирулентных штаммов вируса ИББ во многих странах мира, что стало настоящим бедствием для птицеводческой отрасли. Вспышки были �