Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания

Кавцевич, Николай Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания"

На правах

Кавцевич Николай Николаевич

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОК КРОВИ МОРСКИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ В СВЯЗИ С АДАПТАЦИЕЙ К СРЕДЕ ОБИТАНИЯ

03.03.01 - физиология 03.02.04-зоология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 О НОЯ 2011

грозаводск-2011

4859075

Работа выполнена в Мурманском морском биологическом институте Кольского научного центра Российской академии наук

Научный консультант: Доктор биологических наук

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук Доктор биологических наук, профессор Доктор ветеринарных наук, профессор

Муравейко Владимир Матвеевич

Илюха Виктор Александрович Микряков Вениамин Романович Крячко Оксана Васильевна

Ведущая организация:

Мурманский государственный технический университет

Защита диссертации состоится 24 ноября 2011 года в II00 час. на заседании диссертационного совета ДМ 212.087.02 при Карельской государственной педагогической академии по адресу: 185680, г. Петрозаводск, ул. Пушкинская, 17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Карельской государственной педагогической академии

Автореферат разослан2011 года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук, доцент А.И. Малкиель

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Естественная среда обитания морских млекопитающих постоянно ухудшается в результате загрязнения океана. Все усложняющиеся условия проживания, вопросы сохранения здоровья целых популяций животных привели в настоящее время биологическую науку к осознанию необходимости детального изучения процессов адаптации к меняющимся условиям окружающей среды. Заболевания и гибель содержащихся в океанариумах животных являются важнейшими факторами, препятствующими разведению водных млекопитающих. Проблема оценки эффективности механизмов резистентности к воздействию неблагоприятных факторов актуальна не только для содержащихся в неволе и редких, но и для промысловых видов морских млекопитающих, численность которых существенно снижается из-за распространяющихся в последние годы интоксикаций и эпизоотий (Бобовникова и др., 1986; Алмквист и др., 1987; Harwood, Reijnders, 1988; Хураськин и др., 2002).

Особенности строения и функционирования системы крови и лимфоидной системы могут играть существенную роль в патогенезе заболеваний у морских млекопитающих, эволюционировавших в чистой океанической среде, не содержавшей патогенных микроорганизмов суши (Сыкало, 1982; Arvey, 1976; Cavagnolo, 1979; Baiker, 1984). В то же время, лимфоидная система китообразных и ластоногих, как и система крови в целом, изучены недостаточно для определения их функциональных возможностей.

Помимо клинической диагностики, кровь и органы гемопоэза являются объектами для исследования организмов разного филогенетического уровня, обитающих в различных экологических условиях. В этом отношении морфологические и функциональные характеристики отдельных гемопоэтических ростков в каждом классе и отряде позвоночных имеют существенные различия (Заварзин, 1985; Горышина, Чага, 1990; Галактионов, 2005). С таких позиций, интерес к сравнению наземных и водных млекопитающих связан с тем, что они обитают в разных средах, а это, несомненно, отразилось на механизмах кроветворения и иммунной защиты.

Несмотря на значительные успехи исследований плазмы и клеток крови в норме и при патологии, заболеваемость и смертность мелких китообразных и ластоногих остаются на высоком уровне. Основной причиной этого являются вирусные, бактериальные и грибковые инфекции (Захарова, Дралкин, 1985; Воронков, 1990, 1992; Денисенко, 2003; Денисенко, Соколова, 2008; Шестопалов и др., 2010; Raethel, 1962; Ridgway, 1975; Cordes, 1982; Pillen, 1983; Murmann et al., 1984; Daniel, 1985; Schumacher et al., 1990).

Большая часть исследований крови, связанных с проблемами токсикологии и заболеваний морских млекопитающих, выполняется биохимическими методами, изучение клеток играет, какправило, подчиненную, вспомогательную роль. Данные о морфофункциональных характеристиках, качественном и количественном составе клеток крови в научной литературе

немногочисленны.

Результаты исследований, осуществленных на неоднородных по возрасту, полу и условиям обитания группах морских млекопитающих

разных видов не дают возможности сформировать единое представление об адаптивных изменениях в организме, происходящих в новых для него экологических условиях, раскрыть механизмы этих изменений. Мало изучены вопросы, связанные с влиянием ноогенных условий на клеточный иммунитет, а работы, посвященные исследованию этой проблеме в период адаптации к неволе, вообще единичны (Романов, Сергиевская, 1989; Швацкий и др.1990, Романов, 1991; Матишева, Шапунов, 1990; Соколова, 2002, 2006). Отсутствуют комплексные исследования, позволяющие оценить связь адаптивных изменений, развивающихся на клеточном и субклеточном уровне, с регуляторными влияниями организма.

В экспериментальных и клинических исследованиях установлено, что

определениеклеточногосоставакровипоморфологическимицитохимическим

признакам позволяет не только определять, но и прогнозировать состояние систем специфического и неспецифического иммунитета и организма в целом (Соколов и др.,1975; Голубева и др., 1978; Исаева, 1980; Комиссарова, 1983; Нарциссов, 1984,1988; Робинсон и др., 1986; Гольдберг, Новицкий, 1986; Нагоев, 1988; Летягин, Шурлыгина, 1987).

Проведение комплексных исследований с изучением морфологии и метаболизма клеток крови морских млекопитающих различных видов дает возможность выяснить механизмы приспособительных изменений, связанных с водной средой обитания, происходящих на клеточном уровне, а также при адаптации к новым экологическим условиям и при различных физиологических и патологических состояниях.

Цель исследования. Выявить характер и закономерности изменений качественного и количественного состава клеток периферической крови представителей китообразных и ластоногих по морфологическим и цитохимическим признакам в связи со спецификой среды обитания, а также в различные периоды адаптационного процесса в условиях неволи. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный цитологический и цитохимический анализ, дать характеристику особенностей клеток крови дельфинов и тюленей.

2. Определить возрастные особенности клеточного состава крови тюленей.

3. Выяснить структуру популяции лимфоцитов периферической крови дельфинов афалин для поиска критериев оценки состояния лимфоидной системы, ее зависимость от физиологического статуса животных.

4. Выявить изменения гематологических показателей при адаптации дельфинов и тюленей к условиям неволи.

5. Определить цитологические и цитохимические показатели при воздействии различных иммуномодулирующих и экстремальных факторов на дельфинов и тюленей.

Научная новизна результатов работы. Впервые в природных условиях и у адаптирующихся к неволе тюленей выявлено уравнивание на определенных этапах индивидуального развития числа лимфоцитов и нейтрофилов - "физиологический перекрест" лейкоцитарной формулы крови, обусловленный формированием системы специфического иммунитета. Установлено, что изменения клеточного состава крови у тюленей на ранних

этапах адаптации к условиям неволи (3 недели) в значительной степени обусловлены стрессом. После 10-12 месяцев адаптации цитохимическая структура популяции лимфоцитов крови стабилизируется.

Впервые проведено сравнительное морфологическое и морфометрическое исследование районов организаторов ядрышка лимфоцитов периферической крови представителей морских млекопитающих девяти видов. Создана основа для оценки изменений в важнейшей части генома, связанной с синтезом белков, в онтогенезе, при заболеваниях, различных физиологических состояниях у китообразных и ластоногих. Показано, что активность ядрышкового аппарата лимфоцитов серого и гренландского тюленей снижается с возрастом, отражая интенсивность развития лимфоидной системы в различные периоды раннего постнатального онтогенеза.

Показано, что лимфоциты дельфинов афалин различаются по количеству и характеру внутриклеточного распределения окрашенных продуктов цитохимических реакций на неспецифическую эстеразу, сукцинатдегидрогеназу, НАДН- и НАДФН-тетразолий редуктазы, гликоген, нуклеиновые кислоты, в состав популяции лимфоцитов периферической крови афалин входят две группы клеток - с высокой и с низкой активностью неспецифической эстеразы и дегидрогеназ, аналогичные выявляемым у наземных млекопитающих. Установлено, что корреляции между цитохимическими характеристиками популяции лимфоцитов афалин соответствуют особенностям внутриклеточных метаболических процессов. Найдено, что состав популяции лимфоцитов по активности неспецифической эстеразы и сукцинатдегидрогеназы, сила и направленность корреляций параметров распределения лимфоцитов по активности этих ферментов и числа пгакогенсодержащих лимфоцитов различны у здоровых, больных инфекционными заболеваниями, адаптированных и не адаптированных к условиям неволи афалин.

Впервые проведено комплексное исследование морфологических и структурно-метаболических показателей клеточного состава крови в процессе систематического наблюдения за группами морских млекопитающих, пребывающих в различных условиях. Показаны пути адаптации, связанные с водным образом жизни, сходные у китообразных и ластоногих.

Практическая и теоретическая значимость работы. Результаты изучения механизмов формирования экологически обусловленного уровня резистентности организма дельфинов и тюленей могут быть использованы для разработки профилактических мероприятий, методов контроля адаптации иммунной системы в новых условиях проживания. Полученная информация позволяет понять и оценить предпосылки формирования иммунодефицитных проявлений, достаточно часто встречающихся в условиях загрязнения воздушной и водной среды обитания, расширить представления об эволюции системы крови. Результаты работы могут использоваться при объяснении механизмов изменений, происходящих на клеточном уровне, как при адаптации человека и животных к новым условиям обитания, так и для лучшего понимания механизмов специфических и неспецифических адаптационных реакций.

Полученные материалы используются при чтении лекционных курсов и пров едении практических занятий для студентов биологического факультета Мурманского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Период становления костномозгового кроветворения у детенышей тюленей занимает относительно большую часть раннего постнатального онтогенеза, чем у наземных млекопитающих, в связи с меньшим количеством костного мозга и длительным голоданием перед началом самостоятельного питания после молочного вскармливания.

2. Структура популяции лимфоцитов по морфологическим и цитохимическим признакам адекватно отражает изменения, происходящие в системе крови дельфинов и тюленей с возрастом, при изменениях иммунологического статуса и воздействии экстремальных факторов. Показатели клеточного состава крови и структурно-метаболического статуса лимфоцитов могут быть использованы для оценки течения процесса адаптации и зависят от регуляторных влияний целостного организма на различных его этапах.

3. Морфологическое и цитохимическое изучение клеток крови дельфинов и тюленей позволяет различать особей, по-разному реагирующих на воздействие иммуномодулирующих и экстремальных факторов. Неадаптированные к условиям неволи афалины отличаются от адаптированных высоким уровнем корреляций между параметрами распределения лимфоцитов по активности неспецифической эстеразы, сукцинатдегидрогеназы и содержания гликогена, т.е., более высокой метаболической активностью лимфоидной системы. Резкие колебания состава лимфоцитов при состояниях, сопровождающихся иммунодепрессией, можно рассматривать как косвенное доказательство сниженной иммунологической реактивности морских млекопитающих в современной среде обитания.

Апробация материалов диссертации. Результаты работы докладывались и обсуждались на 8 и 9 Всесоюзных совещаниях по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих (Астрахань, 1982; Архангельск, 1986);1съездеанатомов,гистологов,эмбриологов Белоруссии (Минск, 1984); Всесоюзной конференции по физиологии морских животных (Мурманск, 1989); Международном симпозиуме по изучению морских млекопитающих (Troms0, Норвегия, 1994); евро-американском конгрессе по изучению млекопитающих (Santiago de Compostela, Испания, 1998); VI и VII съездах Териологического общества РАН (Москва, 1999,2003); международных научно-технических конференциях "Наука и образование" (Мурманск, 2005, 2007); I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); 13 Международном совещании по эволюционой физиологии (СПб, 2006); Международной научно-практической конференции "Морские биотехнические системы. Биологические и технические аспекты" (Ростов-на-Дону, 2008); II международной конференции "Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных" (Саранск, 2009); 4 международном симпозиуме "Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введенных в зоокультуру" (Петрозаводск, 2009); на I-VI конференциях

"Морские млекопитающие Голарктики" (Архангельск, 2000; Иркутск, 2002; Коктебель, 2004; Санкт-Петербург, 2006; Одесса, 2008; Калининград, 2010).

Публикации. Всего по теме диссертации опубликовано 105 научных работ, в том числе 17 в ведущих научных журналах, перечень которых утвержден ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 243 страницах, состоит из введения, обзора литературы, главы "Материалы и методы исследования", 4-х глав с результатами исследований и их обсуждением, заключения, выводов, списка литературы, включающего 410 источников, из которых 206 на русском языке, содержит 81 рисунок и 32 таблицы.

Автор выражает искреннюю признательность академику Г. Г. Матишову за поддержку и содействие в выполнении данной работы, благодарит коллег и соавторов из Мурманского морского биологического института КНЦ РАН И.А. Ерохину, A.A. Кондакова, Т.В. Минзкж, В.Н. Светочева, сотрудников Государственного океанариума Украины, г. Севастополь, К.К. Горбачеву, Н.В. Каганову, Л.Н. Лукину, С.К. Матишеву, М.О. Сергиевскую.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ КРОВИ МОРСКИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ (обзор литературы)

Показано, что, несмотря на многолетний опыт изучения плазмы и клеток крови биохимическими и иммунологическими методами как в природных условиях, так и в условиях неволи, целостное представление об адаптационных возможностях морских млекопитающих отсутствует. Детальные исследования морфологии, свойств и функций клеток крови этих животных единичны. В результате анализа данных литературы, свидетельствующих о высокой диагностической и прогностической ценности комплексного применения морфологических и цитохимических методов, обосновываются цель и задачи исследования.

На основании анализа литературных данных представлены сведения о различных формах патологии у морских млекопитающих. Рассмотрены результаты исследований, посвященных проблеме оценки и охраны здоровья китообразных и ластоногих. Подчеркивается, что необходим переход с ретроспективно-констатационного на прогностическое направление исследований.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования: дельфин афалина (Tursiops truncatus), обыкновенная морская свинья (Phocoena phocoenä), белуха (Delphinapterus leu-cas), гренландский (Phoca groenlandica) и серый (Halichoerus grypus) тюлени, тюлень-хохлач (Cystophora crystata), морской заяц (Erignathus barbatus), кольчатая нерпа (Phoca hispida), северный морской котик (Callorhinus ursinus). Материалы

были получены в дельфинарии г. Севастополя (после 1991г. - Государственный океанариум Украины), на морской биологической станции ИПЭЭ РАН (пос. Малый Утриш); в аквариальном комплексе ММБИ; во время береговых экспедиций на острова прибрежья Мурмана и на зверобойном промысле (пос. Чапома Мурманской области, пос. Койда Архангельской области).

Общее число исследованных животных составило: афалина - 55; белуха - 2; обыкновенная морская свинья - 6; гренландский тюлень - 256; серый тюлень - 36; тюлень-хохлач - 13; кольчатая нерпа - 5; морской заяц - 2; северный морской котик - 1.

Методики исследования. Кровьу дельфинов и белух брали при помощи стерильной иглы для подкожных инъекций длиной 30 мм и диаметром 1.2 мм по методике, описанной С. Риджвеем и соавторами (Ridgway et al., 1970). Взятие крови у тюленей осуществляли из внутрипозвоночной (экстрадуральной) вены (Geraci, Smith, 1975) при помощи иглы для спинномозговой пункции в шприц с гепарином, удерживая тюленя в неподвижном состоянии 2-3 мин.

Изготовленные общепринятым способом мазки цельной крови и лейкоцитарного концентрата окрашивали смесью Романовского. Применяли также следующие цитохимические методики. Выявление ферментов: неспецифической эстеразы (Müller et al., 1975, в модификации) - для оценки состояния лизосомного аппарата; сукцинатдегидрогеназы (Quaglino, Hay-hoe, 1960; Нарциссов, 1969) как ключевого фермента цикла Кребса; НАДН- и НАДФН-тетразолий редуктаз (Novikoff, Masek, 1958) - в качестве показателей общей интенсивности окислительных процессов в клетке. Выявляли также гликоген (McManus, 1946; Hochkiss, 1948), суммарное количество нуклеиновых кислот при окрашивании смесью галлоцианин-хромовые квасцы (Boer, Sar-naker, 1956), белки районов организаторов ядрышка (Howell, Black, 1980). Препараты исследовали при увеличении 1000 (объектив хЮО, окуляр хЮ). Морфометрическое исследование лимфоцитов проводили на компьютерных анализаторах изображений "Omnicon" (США, модель FAS-2) и AxioVision, версия 4.5 (Германия, CarlZeiss Vision). Мерой активности ферментов и содержания нуклеиновых кислот служила интегральная оптическая плотность, активности ядрышек - относительная площадь районов организаторов ядрышка.

Математические методы анализа результатов. Обработку полученных результатов проводили при помощи пакетов программ Statsoft Statistica V6.0, Exel, Systat 5W. При статистических оценках и сравнениях клеточного состава крови по морфологическим и цитохимическим признакам использовали стандартные параметрические и непараметрические методы (Урбах, 1963). Для оценки структуры популяции лимфоцитов по цитохимическим признакам использовали следующие характеристики: средняя (М); среднеквадратичное отклонение (S); коэффициент вариации (V); показатели асимметрии (As) и эксцесса (Ех), энтропия (Н), информационная избыточность (R). Н = -SPxlogP, где Р - относительная частота клеток в данном классе гистограммы; R=((Hm -H)/Hm)xl00, ще Hm - энтропия, максимально возможная для гистограммы с данным числом классов - при равенств е частот всехклассов, Н - действительная

энтропия гистограммы. Информационный анализ проводили в соответствии с методическими рекомендациями А.С. Леонтюка и соавторов (1981).

В качестве показателей для оценки особенностей клеточного состава крови при сравнении групп животныхи отдельныхособейприменяли критерии Колмогорова-Смирнова, х2> Стьюдента. При анализе субпопуляционного состава лимфоцитов использовали методы аппроксимации распределений нормальными, гауссовыми (Урбах, 1963; Bhattacharia, 1969). Достоверность значений статистических параметров и сходства-различия при статистических сравнениях оценивали при уровнях значимости 0.95 и 0.99.

Глава 3. МОРФОЛОГИЯ И ЦИТОХИМИЯ КРОВИ ДЕЛЬФИНОВ И

ТЮЛЕНЕЙ

3.1. Морфологическая характеристика различных типов клеток крови дельфинов и тюленей

В окрашенных по Романов скому-Гимза мазках крови афалин, обыкновенных морских свиней и белух наиболее многочисленный тип лейкоцитов - нейтрофилы. Гранулоцитарный профиль лейкоцитарной формулы крови характерен и для тюленей. Однако в некоторые периоды раннего постэмбрионального развития у серых, гренландских и тюленей хохлачей, как и у ряда исследованных в данном отношении наземных животных, число лимфоцитов достигает уровня нейтрофилов либо превышает его. Цитоплазма нейтрофильных гранулоцитов тюленей, как правило, окрашивается менее интенсивно, чем у дельфинов. Гранулы слабо различимы. Такая же особенность окрашивания по Романовскому-Гимза свойственна нейтрофилам наземных хищных млекопитающих - собак и кошек (Риган и др., 2000). Большинство гранулоцитов тюленей имеют сегментированные или палочковидные ядра. Однако у новорожденных и кормящихся молоком серыхи гренландских тюленей в значительном числе встречаются юные, т.е., низкодифференцированные клетки гранулоцитарного ряда, метамиелоциты. Метамиелоциты присутствуют также у дельфинов афалин, как больных, так и здоровых.

Вмазкахкровисерыхтюленейвстречаютсяклеткиссегментированным ядром и розовыми цитоплазматическими гранулами неправильной формы с размытыми границами, "гетерофилы". Их число у обследованных серых тюленей составляет 0-2.5% от всех гранулоцитов. Такие лейкоциты выявляются у собак (Риган и др., 2000). Гетерофилы - обычный компонент крови сиреновых (Bossart, Bigger, 1994; Bossart et al., 2001). Они дают положительную реакцию на миелопероксидазу (МПО), подобно нейтрофилам человека, собаки, кошки и лошади (Kiehl, Schiller, 1994).

Сопоставление результатов морфологического исследования и выявления миелопероксидазы в мазках крови серых тюленей свидетельствует, что гетерофилы серых тюленей также МПО-положительны. Это позволяет отнести их к нейтрофильному ряду. Другой заметной особенностью состава крови серых тюленей является наличие гигантских тромбоцитов, обычного компонента крови кошек, вне зависимости от состояния животных (Риган и др., 2000).

Среди гранулоцитов тюленей встречаются клетки с ядрами необычной формы: отдельные сегменты соединены друг с другом нитями хроматина, сходящимися в одной точке (рис. 1), а не последовательно, как у человека, лабораторных и сельскохозяйственных животных (Никитин, 1956; Кудрявцев и др., 1969; Абрамов, 1985; Риган и др., 2000). Это, вероятно, является одной из особенностей дифференцировки части клеток миелоидного ростка кроветворения у тюленей. Выявлены также лейкоциты, представляющие, по-видимому, предшествующую стадию дифференцировки (рис. 1г).

Я fi R Г

Рис. 1. Лейкоциты тюленей с ядрами необычной формы. Масляная иммерсия, объектив ЮОх.

У дельфинов и белух клетки с характерными признаками базофильных гранулоцитов не обнаружены. В мазках крови тюленей они присутствуют, однако не во всех случаях. Ядро этих клеток, как правило, не сегментировано, по размеру они больше нейтрофилов и эозинофилов. По литературным данным, их число у ластоногих невелико: 0-2 % (Medway, Geracy, 1964; Ridgway et al., 1970; Богданова, Лебедев, 1971; Monte, Pilleri, 1979; Engelhardt, 1979), а у китообразных они, как правило, не выявляются.

Среди лимфоидных клеток дельфинов, белух и тюленей наиболее часты типичные малые лимфоциты с узким ободком базофильной цитоплазмы. Некоторые из лимфоцитов дельфинов и тюленей имеют необычную форму ядра: 2 выемки на одном полюсе и третья, менее глубокая, - на другом (рис. 2д).

Кроме типичных малых и средних лимфоцитов как у здоровых дельфинов, так и у афалин с кожными и респираторными инфекциями присутствуют лимфоциты больших размеров с признаками активации. Ядра этих клеток округлые, реже почковидные, хроматин рыхлый, цитоплазма сильно базофильна (рис. 2е, ж).

Большие лимфоциты выявлены у всех исследованных детенышей тюленей. Небольшое количество таких клеток (2-5%) встречается и у взрослых гренландских тюленей. У некоторых щенков гренландского тюленя ("заморышей" и "нормальных") число больших лимфоцитов повышено (2025%). Больные пневмонией белухи и обыкновенные морские свиньи в начале отравления нефтепродуктами также отличались повышенным (15-20%) содержанием больших лимфоцитов.

В цитоплазме части средних лимфоцитов различимы азурофильные метахроматически окрашенные гранулы, часто очень мелкие, на пределе разрешающей способности светового микроскопа. Их число колеблется от единиц до десятков. Азурофилией (на электронно-микроскопическом уровне - осмиофилией) обладают лимфоциты, осуществляющие естественную, не индуцированную иммунизацией, цитотоксичность против опухолевых и инфицированных вирусами клеток (Малыгин, 1985). Такие клетки, "большие

ф ф ф

а б в

Рис. 2. Лимфоциты серого тюленя: а-д - малые лимфоциты; е - малый и большой лимфоциты; ж - большой лимфоцит и нейтрофил. Масляная иммерсия, объектив ЮОх.

гранулярные лимфоциты" (БГЛ), выявлены нами у всех представителей изучаемых видов дельфинов и тюленей. БГЛ, вероятно, являются предшественниками Т-лимфоцитов в эволюции системы иммунитета позвоночных (Jams, 1988). Соотношение БГЛ, других субпопуляций лимфоцитов, а также гранулоцитов и моноцитов может быть использовано как показатель, отражающий потенциальный уровень клеточных защитных реакций различной степени специфичности.

Моноциты дельфинов, морских свиней и белух отличаются большим разнообразием по величине клетки, форме, плотности и относительным размерам ядра. Часть их содержит в цитоплазме мелкие азурофильные гранулы. В типичных случаях ядро бобовидное, подковообразное или неправильной формы с одной или несколькими лопастями. Некоторые моноциты небольших размеров сходны с лимфоцитами (рис. 3). Тем не менее, судя по структуре хроматина и характеру окрашивания цитоплазмы, принадлежность этих клеток к моноцитарному ряду более вероятна. Подобные трудности при различении моноцитов и лимфоцитов китообразных отмечались ранее (Monte, Pilleri, 1979).

Моноциты тюленей менее разнообразны по морфологии ядра. Как правило, это клетки больших размеров (больше гранулоцитов), с

Ф #

г Л

Рис. 3. Лейкоциты афалин: нейтрофил, эозинофил и моноцит. Масляная иммерсия, объектив ЮОх.

многолопастным светлым ядром неправильной формы. В цитоплазме этих клеток зачастую содержатся вакуоли диаметром 0.5-2 мкм.

В крови тюленей присутствуют предшественники эритроцитов, базофильные и полихроматофильные нормоциты. Особенно часто они встречаются у новорожденных животных. В мазках крови последних содержатся также предшественники нормоцитов, пронормоциты. И для бельков, и для серок тюленей характерны анизоцитоз и гипохромность эритроцитов. Костномозговое кроветворение новорожденных тюленей находится на стадии становления. Кроме того, тюлени в течение голодания после молочного вскармливания и ювенильной линьки не получают железа, витамина В12 и других веществ, необходимых для нормального кроветворения. Это может обусловить и анизоцитоз эритроцитов, и наличие в периферической крови нормоцитов. Оксифильные и полихроматофильные нормоциты а также гипохромные эритроциты постоянно встречаются также в мазках крови взрослых дельфинов.

3.2. Цитохимические реакции в лейкоцитах морских млекопитающих

Неспецифическая эстераза. Лейкоциты изученных китообразных и ластоногих различаются интенсивностью и характером реакции на неспецифическую эстеразу (НЭ). Гранулоциты афалин, морских свиней и белух в большинстве случаев проявляют реакцию в виде слабой диффузной окраски (рис. 4г), иноцца эстеразоотрицательны. Наиболее высока активность фермента в моноцитах. Продукт реакции распределен в них диффузно, закрывая часть ядра, которое выглядит как более светлая область на коричневом фоне (рис. 4м).

В моноцитах НЭ находится в клеточной мембране, в то время как в лимфоцитах она связана главным образом с лизосомами и лишь изредка обнаруживается на мембране клетки (Вогс1еЬ, Ватит, 1981; Воевеп, 1984).

В гранулоцитах тюленей, в отличие от дельфинов и белух, активность НЭ, как и в моноцитах, высока. Она проявляется в виде диффузных отложений окрашенного продукта реакции, часто закрывающих часть ядра. Характерно, что гранулоциты норки и песца также имеют высокую активность НЭ (Шеп-Ьаеуа, 1989). Это представляет интерес, поскольку предками тюленей были древние хищные.

Лимфоциты разнообразны по размерам, форме, числу и локализации зон, содержащих окрашенный продукт реакции. Число последних варьирует

Рис. 4. Неспецифическая эстераза в клетках крови афалины: Л - лимфоциты; М - моноцит; | Г - гранулоциты; Э - эритроциты. Лейкоцитарный концентрат, масляная иммерсия, объектив 100х.

Л А, %

»»

от 1 до 20 и более в одном лимфоците. Величина гранул колеблется в широких пределах: от долей до нескольких микрометров. Наиболее крупные из них располагаются напротив выемки в ядре, где у лимфоцитов находится основная масса цитоплазмы. При визуальном микроскопическом исследовании различимы два типа реакции на НЭ: "гранулярная" (рис. 5в) и "парануклеарная" (рис. 5г). Тип эстеразной реакции лимфоцитов, при котором часть цитоплазмы напротив выемки в ядре заполнена окрашенным ее продуктом, обозначают как "глобулярный" (Treves, Ali-Khan, 1983), "крупногранулярный" (Уманский и др., 1981), "парануклеарный". Мы применяем термины, использованные авторами, представившими ультраструктурные и иммунологические характеристики лимфоцитов с различными типами эстеразной реакции (Ferrarini et al„ 1980; Zicca et al., 1981). Реакцию парануклеарного типа на неспецифическую эстеразу, бета-глкжуронидазу и кислую фосфатазу проявляют нулевые клетки, Т-лимфоциты-супрессоры и киллеры. Гранулярная реакция характерна для Т-клеток-хелперов и части В-лимфоцитов.

Оба типа локализации окрашенного продукта эстеразной реакции выявлены нами в мазках крови и лейкоцитарного концентрата афалин, обыкновенной морской свиньи, белухи, серого и гренландского тюленей, морского зайца, кольчатой нерпы, тюленя-хохлача, северного морского котика.

Дегидрогеназы. При использовании в реакционной смеси в качестве красителя (акцептора электронов) нитро-тетразолия синего (Novikoff, Masek, 1958; Quaglino, Hayhoe, 1960) наблюдается окрашивание в виде диффузных отложений и отдельных гранул. Последний тип реакции характерен для сукцинатдегидрогеназы (СДГ). В реакциях на НАДН- и, в особенности, НАДФН-тетразолий редуктазу преобладает диффузная окраска. Эти различия вполне объяснимы известными данными биохимии о внутриклеточной локализации и функциях окислительных ферментов (Ленинджер, 1985).

Характер реакции на СДГ с пара-нитротетразолием фиолетовым при еевыявлении по методу Р.П. Нарциссова (1969) для визуальной количественной оценки активности дегидрогеназ отличается от описанного выше. Весь продукт реакции сосредоточен в отдельных гранулах одинакового размера.

Гликоген. В отличие от прочих лейкоцитов, окрашивающихся диффузно, ШИК-положительные лимфоциты афалин, морских свиней и белух содержат гранулы ярко-красного цвета. Такой тип реакции характерен

Рис. 5. Особенности распределения окрашенного продукта эстеразной реакции в клетках крови дельфинов: а и б - в моноцитах и гранулоцитах; виг

- в лимфоцитах и гранулоцитах. б

- ядра не окрашены, а, в, г - ядра окрашены толуидиновым синим. Масляная иммерсия, объектив 90х.

для лимфоцитов человека и других наземных млекопитающих (Бутенко и др., 1974; Кисляк, Ленская, 1978; Хейхоу, Кваглино, 1983). Гранулы чаще всего одиночные, изредка образуют замкнутое кольцо вокруг ядра. По форме они, как правило, округлые, но бывают и овальными, и неправильной формы.

Только у 48 из 205 щенков гренландского тюленя обнаружены содержащие гликоген лимфоциты (1-2%). Это можно было бы объяснить отрицательным энергетическим балансом детенышей во время голодания после молочного вскармливания. Однако взрослые гренландские тюлени также имеют невысокое число лимфоцитов, дающих положительную реакцию на гликоген (1-5%). У людей до одного года значения этого показателя составляют 33-84%, от 16 до 35 лет - 16-32%, от 36 до 60 лет - 6-26% (Лецкий, 1973). В лимфоцитах взрослых особей и щенков серого тюленя и кольчатых нерп, половозрелых самца и самки морских зайцев, северного морского котика гликоген нами не выявлен. Лимфоциты собак также, как правило, 1ПИК-отрицательны (Бутенко и др., 1974).

Белки районов организаторов ядрышка (ЯОРАд). Белки ядрышек, участвующие в процессах биосинтеза и созревания пре-рРНК, окрашиваются солями серебра (Crocker, 1990). Число и размеры ЯOPAg лимфоцитов крови - видоспецифичные признаки. Они изменяются при нарушениях в соответствующих участках генома и патологических состояниях (Mayr et al.., 1983). В лейкоцитахисследованных представителей китообразныхи ластоногих выявляются от 1 до 4-х ЯОР. Это согласуется с результатами цитогенетических исследований: кариотип соматических клеток исследуемых видов морских млекопитающих содержит 2 пары хромосом с организаторами ядрышка (Агпа-son, 1974,1981). Лимфоциты, моноциты и гранулоциты дельфинов и тюленей различаются по размерам, форме, числу и локализации ЯОРАд (рис. 6).

Таким образом, клетки крови дельфинов и тюленей проявляют высокий уровень гетерогенности по цитохимическим признакам. Особенно разнообразна картина реакции на неспецифическую эстеразу: лимфоциты различаютсяразмерами,формой,числомилокализациейокрашенного продукта реакции. Среди них присутствуют клетки, обладающие морфологическими и цитохимическими особенностями, по которым у наземных млекопитающих различаются лимфоциты с различными иммунологическими свойствами и функциями. Эти характеристики отражают, по-видимому, и функциональную разнородность лимфоцитов морских млекопитающих.

районы организаторов ядрышка в клетках крови серого тюленя: а, б - сегментоядерный и палочкоядерный гранулоциты; в - эозинофил; г - лимфоцит; д - моноцит; е - нормоцит и лимфоцит.

' Рис. 6. Окрашенные серебром

а б

3.3. Количественный анализ структуры популяции лимфоцитов крови афалин по цитохимическим признакам

Форма распределения лимфоцитов афалин по активности ферментов и содержанию нуклеиновых кислот разнообразна. Встречаются как одно-, так и многовершинные гистограммы. Лишь 16 из 126 распределений близки к нормальным по низким значениям показателей асимметрии и эксцесса (Р=0.99). Характерно, что среди распределений лимфоцитов по активности НЭ близких к нормальным не оказалось. Положительные асимметрия и эксцесс свидетельствуют, что в популяции лимфоцитов крови афалин присутствует большая группа клеток с относительно низкими значениями цитохимических признаков и что группы лимфоцитов, различающиеся по цитохимическим характеристикам, сильно перекрываются (табл. 1). Вариабельность распределения по суммарному содержанию ДНК и РНК ниже, чем по активности ферментов, оно обладает наименьшей асимметрией. По-видимому, лимфоциты периферической крови афалин, как и исследованных в данном отношении видов наземных млекопитающих, различаются, главным образом, количеством РНК. Последнее подтверждается тем, что распределения лимфоцитов после обработки РНК-азой, в отличие от необработанных, унимодальны и сдвинуты влево.

Таблица 1. Статистические параметры суммарных распределений лимфоцитов афалин по активности ферментов и содержанию нуклеиновых кислот.

№ Реакции Количество клеток М±т, усл.ед. V,0/» Лг Ех

1. НЭ 2188 1.71+0.03 69.6+1.5 1.300+0.052 1.390+0.104

2. сдг 2700 0.75+0.01 67.9+1.3 1.075+0.047 1.354+0.094

3. НАДНр 2700 1.60+0.02 60.1+1.1 1.018+0.047 0.917+0.094

4. НАДФНр 2600 1.35+0.02 66.3+1.3 1.144+0.048 1.198+0.096

5. ДНК+РНК 2400 5.08+0.02 17.1+0.3 0.598+0.050 1.320+0.100

Исходя из того, что гетерогенность по цитохимическим признакам рассматривается как проявление метаболических различий между субпопуляциями лимфоцитов с различными иммунологическими функциями, мы провели попарное сравнение гистограмм распределения лимфоцитов по различным признакам и по каждому из признаков в отдельности - с суммарными распределениями по критерию Колмогорова-Смирнова (\). По общему числу сходных гистограмм (при определении степени сходства как по каждому признаку, так и между признаками) больные афалины отличаются и от здоровых, и от беременных (36.5%, 49.5% и 49.7%, соответственно, Р=0.99).

Суммарные гистограммы различаются (сравнение по критерию хи-квадрат, р<0.001). Численность же лимфоцитов в классах со значениями, большими средних, наоборот, одинакова (р<0.01) в 9 случаях из 10 (табл. 2).

Разложение суммарных распределений на нормальные составляющие по В.Ю. Урбаху (1963), показало, что число клеток с высокой (выше средней)

Таблица 2. Сопряженность суммарных частот лимфоцитов с высокими значениями цитохимических признаков (нумерация признаков согласно табл. 1)

Пары признаков, х2

1-2 1-3 1-4 1-5 2-3 2-4 2-5 3-4 3-5 4-5

1.35 8.15 3.00 0.87 3.20 0.37 0.04 1.35 3.78 0.64

активностью ферментов равно: НЭ - 13.1%; СДГ - 11.0%; НАДНр - 13.6%; НАДФНр - 13.1%. Средние этих групп лимфоцитов выше средних суммарных распределений в 1.9-2.4 раза. Сходный результат был получен при анализе субпопуляционного состава лимфоцитов человека и лабораторных животных по активности дегидрогеназ (Катосова, 1971; Михайлова и др., 1972; Соколов и др., 1975; Нарциссов, 1978; Робинсон и др., 1986). Более точное определение числа и параметров нормальных компонент в составе суммарных распределений проведено по методу Ч. Бхаттачариа (ВЬаИасЬагуа, 1967). Оно оказалось неодинаковым для различных признаков: от трех для НАДНр до шести для СДГ.

Тем не менее, лимфоциты составляют две группы: многочисленную, с относительно низкими значениями средних и малочисленную из одного (в случае НЭ - из двух) нормального распределения со средней, выше общей средней в 2.5-3.4 раза для ферментов и в 1.4 раза - для нуклеиновых кислот. Таким образом, по крайней мере, часть лимфоцитов периферической крови афалин обладают одновременно высокими или низкими значениями нескольких параметров. Это, по данным литературы, различает Т- и В-лимфоциты у ряда видов животных.

Два основных дифференцировочных типа лимфоцитов (Т- и В-клетки) представлены множеством субпопуляций и клонов, стимуляция которых происходит при различных специфических воздействиях. Поэтому, для выяснения направленности и силы связей между цитохимическими признаками в популяции лимфоцитов в целом мы вычисляли коэффициенты линейной корреляции статистических и информационных параметров гистограмм распределения лимфоцитов, с различной степенью обобщения отражающих разнообразие клеток. Как существенные, приняты значения коэффициентов корреляции, достоверные при Р=0.95 и Р=0.99 (рис. 7, пунктирные и сплошные линии, соответственно).

По числу и силе корреляционных связей друг с другом цитохимические признаки неравноценны. Наибольшее число статистически значимых коэффициентов корреляции друг с другом имеют НАДНг и НАДФН2-тетразолий редуктазы как ферментные системы, выполняющие функцию окисления коферментов-

Рис. 7 - Корреляции между цитохимическими признаками лимфоцитов афалин

переносчиков электронов для энергозависимых биохимических реакций. В силу общности функции ферментов, а также наличия непосредственной метаболической связи между НАД и НАДФ, существенные корреляции между параметрами распределений по НАДНр и НАДФНр многочисленны.

Характерно также, что из 9 корреляций распределений по содержанию НК 7 приходятся на НАДНр и НАДФНр, поскольку синтез РНК, не прекращающийся в циркулирующих лимфоцитах, является энергозависимым процессом. Деятельность сукцинатдегидрогеназы непосредственно связана с НАД и НАДФ, что отражается в прочных корреляционных связях ее с параметрами распределения по активности НАДН- и НАДФН-дегидрогеназ. Из 15 существенных корреляций НЭ 11 приходятся на НАДФНр. Это отражает зависимость окислительно-восстановительных процессов в цитоплазме клетки от состояния ферментов лизосом. Промежуточным же переносчиком электронов в цитоплазматическом матриксе является НАДФН2 (Ленинджер, 1985).

Наибольшее число существенных корреляций имеет НАДФН-тетразолий редуктаза. Согласно принципам метода корреляционных плеяд (Терентьев, 1959), НАДФНр может играть роль признака-индикатора в данном комплексе цитохимических признаков.

Несмотря на существование у морских млекопитающих особенностей обмена веществ, связанных с водным образом жизни, направленность и сила корреляций между параметрами, отражающими состав популяции лимфоцитов афалин по цитохимическим признакам, соответствует принятой общей схеме внутриклеточных метаболических процессов.

Глава 4. ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА КРОВИ

ТЮЛЕНЕЙ

4.1. Серые тюлени

Определение лейкоцитарной формулы крови щенков серых тюленей различных возрастных групп позволило выявить существенные различия между ними. У животных, закончивших молочное вскармливание, отношение числанейтрофилов(С)кчислу лимфоцитов (Л) близкок 1 (рис. 8). К возрастным особенностям состава крови относится уравнивание в определенные периоды количества лимфоцитов и нейтрофилов, "физиологический перекрест". У человека это явление отмечается на 4-е сутки после рождения и в 4 года (Бобова и др., 2003). Позднее окончательно устанавливается нейтрофильный профиль крови. Периоды сближения числа нейтрофилов и лимфоцитов известны у лошадей, крупного рогатого скота, кроликов, свиней, кур (Любин, Конова, 2005; Бессарабов и др., 2009).

Неспецифическая эстераза (НЭ) при коротком периоде окрашивания (2 часа) выявляется лишь в части лимфоцитов тюленей. У ряда видов млекопитающих: человека (Kulenkampif et al., 1977), обезьяны (Kato, Kurihara, 1980), овцы (Dixon, Moriarty, 1980), быка (Yang et al., 1979), мыши (Müller et al., 1975), крысы и кошки (Dockrell et al., 1978) а также обыкновенной жабы, Bufo bufo (Garavini, 1981), большинство эстеразоположительных лимфоцитов - Т-клетки. У серых тюленей число эстеразоположительных лимфоцитов значительно повышается к периоду начала самостоятельного

% лейкоцитов

□ Новорожденные ОКормяоиеся молоком. 2-3 нед.

■ Закончивсше молочное вскармливание, 1-1.5 мес.

□ Кормяи*1еся рыбой. 3-4мес Ш Кормящлеся рыбой. 1 год

■ Кормящееся рыбой, 3.5 года

Рис. 8. Соотношение лейкоцитов различных типов у серых тюленей разного возраста.

Ю П С Э Б М

Типы лейкоцитов

питания (табл. 3), что, вероятно, связано с развитием имммунной системы, дифференцировкой Т-лимфоцитов. У новорожденных человека количество Т-клеток и эстеразоположительных лимфоцитов возрастает в первые недели жизни (Lassila, Alanen, 1982). При длительном периоде окрашивания (21 час) НЭ выявляется во всех лимфоцитах тюленей и дельфинов. Число гранул окрашенного продукта в реакции на НЭ (показатель уровня активности лизосомного аппарата клетки) снижается во время начала самостоятельного питания, а затем возрастает. Число лимфоцитов с парануклеарной эстеразной реакцией (ПН) (у человека это "нулевые" клетки, Т-супрессоры и "киллеры") также падает, а затем повышается, оставаясь, тем не менее, на более низком уровне, чем у новорожденных и кормящихся молоком детенышей ("бельки").

Среднее число ЯOPAg в одном лимфоците у тюленей, кормящихся рыбой (табл. 4), ниже, чем у остальных (р=0.001-0.05). Изменение величины Таблица 3. Показатели лейкоцитов крови щенков серых тюленей (М±ш)

№ Группы тюленей ЯOPAg НЭ, г/кл ПН, % НЭ+, % Лф, % Лкц хЮ'

1 Новорожденные, п=8 1.52+0.05 2.87±0.27 19.0+3.6 44.012.8 23.312.2 11.5+1.3

2 Бельки, 2-3 нед., п=12 1.6410.05 3.01+0.14 19.8+1.9 57.912.7 23.912.1 10.4+0.9

3 Серки, 1-1.5 мес., п=8 1.49±0.04 3.34±0.22 14.911.6 64.8+2.9 42.615.1 6.310.4

4 Кормящиеся рыбой, 3-4 мес., п=6 1.15±0.01 2.2310.18 9.211.3 83.312.4 28.112.4 7.510.6

5 Кормящиеся рыбой, 1 год, п=4 1.05+0.01 2.8010.04 10.211.5 96.710.5 33.7+4.7 11.310.8

6 Кормящиеся рыбой, 3.5 года, п=2 1.1410.03 2.5610.15 14.512.5 92.015.0 34.217.3 6.0+0.2

Примечание. ЯOPAg - среднее число окрашенных серебром районов организаторов ядрышка в одном лимфоците; НЭ - среднее число эстеразоположительных гранул в лимфоците; НЭ+ - число эстеразоположительных лимфоцитов; ПН - процент лимфоцитов с парануклеарным типом эстеразной реакции; Лф - относительное число лимфоцитов; Лкц - абсолютное число лейкоцитов в 1 л крови.

Таблица 4. Статистические параметры распределений лимфоцитов серых тюленей по величине отношения площади ЯOPAg к площади ядра

Группы тюленей М±т А$ Ех С.У.,%

1 0.127±0.001 0.707 0.887 24.7

2 0.134±0.001 0.275 0.001 28.1

3 0.122±0.001 0.351 0.404 25.2

4 0.104±0.001 0.723 1.043 25.9

5 0.099±0.002 0.447 0.166 33.9

6 0.088±0.002 1.064 1.875 32.1

отношения площади ЯOPAg к площади ядра также свидетельствует о снижении с возрастом активности организаторов ядрышка (р<0.01).

В первых 3-х группах тюленей а также в 5-й показатель эксцесса, т.е. "крутизна" распределения ниже, чем в 4-й и б-й, что может быть обусловлено существованием в организме тюленей множества субпопуляций лимфоцитов, значительно различающихся по активности организаторов ядрышка.

Таким образом, после рождения, в течение лактации и затем после завершения молочного вскармливания, во время ювенильной линьки происходят значительные изменения лейкоцитарного состава крови детенышей серых тюленей. Представленные данные свидетельствуют, что у щенков серого тюленя становление клеточного иммунитета наиболее интенсивно происходит в первые 1.5 месяца жизни. В возрасте 3-4-х месяцев, когда животные начинают самостоятельно питаться рыбой, процессы пролиферации и дифференцировки лимфоидных клеток, осуществляющих реакции специфического иммунитета, замедляются.

4.2. Гренландские тюлени

В мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза, у гренландских тюленей, как и у многих видов наземных млекопитающих (Кудрявцев и др., 1969), включая представителей отряда хищных, филогенетически наиболее близких к настоящим тюленям, численно преобладают нейтрофилы (табл. 5).

Щенки 1994 года рождения имеют более низкое, чем детеныши предыдущих лет, относительное число лимфоцитов. Такие же сдвиги в лейкоцитарной формуле крови наблюдались у северных морских котиков при адаптации к неволе (Занина, Занин, 1990) и сивучей при 20-дневном голодании (Коваль и др., 1986). Мы не исключаем, что одной из причин этих различий может быть то, что от времени окончания молочного вскармливания до взятия крови у различных особей в разные годы прошло неодинаковое время. Однако отмеченную особенность формулы крови имеют как серки, нормально перелинявшие и нормально упитанные, так и серки-заморыши, и заморыши-хохлуши. В отличие от ушастых, у настоящих тюленей период голодания во время ювенильной линьки и некоторое время после нее является естественным. Кроме того, по количеству гликогена в гранулоцитах щенки разного возраста различаются незначительно (табл. 6) . В 1991-1993 годах у щенков гренландских тюленей обнаружено ежегодное увеличение степени носительства микобактерий, представляющих потенциальную угрозу

Таблица 5. Лейкоцитарная формула крови гренландских тюленей (М±т),'

Группа тюленей Н Э Б М Л

1987 г.

Серки, п = 12 68.5±3.2 3.5±0.4 1.0±0.3 9.6Ю.8 17.412.5

1989 г.

Серки, п = 10 65.2±4.4 4.1±1.5 0 5.311.0 25.414.1

1990 г.

Серки, п = 11 63.6±2.3 2.0±0.3 0.3±0.2 4.510.8 29.612.9

1991 г.

Серки, п = 65 64.2±1.2 1.8±0.2 2.2 ±0.3 7.810.5 24.011.2

Серки-заморыши, п = 21 64.8±2.6 1.5 ±0.4 2.410.6 8.610.9 22.712.5

1992 г.

Серки, п = 10 60.8±5.8 1.6±0.6 0.2±0.1 9.010.1 28.416.6

Серки-заморыши, п = 10 61.3±4.0 2.0±0.4 0.210.1 10.1±1.1 26.414.4

Взрослые, п = 10 53.8±3.6 19.3±2.6 0.110.1 2.7±0.4 24.1 ±4.2

1994 г.

Серки,п =14 81.0±1.5 1.2±0.4 0.110.1 8.111.2 9.611.1

Серки-заморыши, п = 16 80.0±2.7 0.4±0.2 0.310.1 9.811.7 9.512.1

Хохлуши-заморыши, п = И 81.4±7.4 0.6±0.3 0.210.1 10.611.6 7.212.2

1998 г.

Бельки, п = 20 41.4±3.2 3.0±0.5 0.710.2 8.011.1 46.912.7

1999 г.

Бельки, п = 45 40.7±3.0 1.7Ю.З 0.710.2 4.6Ю.8 52.312.8

зависит и от возраста самок, участвовавших в размножении, число молодых среди которых в 1980-е годы снизилось и продолжает падать (Тимошенко, 1998). Различия по средним значениям показателей лейкоцитарной формулы крови могут быть следствием воздействия любого из упомянутых факторов либо результатом их суммарного влияния.

Бельки имеют более высокое, чем остальные тюлени, число лимфоцитов. Такая особенность состава крови, наиболее вероятно, обусловлена активной пролиферацией лимфоцитов, связанной с развитием иммунной системы новорожденных. Об этом, в частности, свидетельствует повышенная активность организаторов ядрышка, являющаяся показателем потенциальных возможностей клеток синтезировать белки. Лимфоцитов, дающих положительную реакцию на неспецифическую эстеразу, у бельков гренландских, так же как и у серых тюленей, значительно меньше, чем у серок и взрослых (табл. 6).

Таблица 6. Цитохимические показатели гренландских тюленей различного возраста_

Группы тюленей НЭ+лимфоциты, % flOPAg Гликоген, у.е.

Бельки 1 нед. 32.4±1.6 1.53 ±0.03 1.60±0.15

"Заморыши" 1-1.5 мес. 77.5±4.4 1.30±0.03 1.67±0.06

Серки 1-15 мес. 67.4±6.1 1.25 ±0.02 1.70±0.08

Серки 35-4 мес. 72.0±6.4 1.21 ±0.03 1.79±0.13

Взрослые 84.7±2.2 1.17±0.06 1.53 ±0.06

Уровень эозинофилов, выявленный нами у взрослых гренландских тюленей, оказался необычно высоким (6.5-36.0%) по сравнению с данными литературы для ластоногих различных видов и наземных млекопитающих. В крови тюленей, как настоящих, так и ушастых, содержание этих лейкоцитов невелико - от нуля до нескольких процентов (Ridgway, 1972, Engelhardt, 1979). Эозинофилия - известная особенность крови китообразных (Monte, Pillen, 1979). Наиболее вероятной причиной её возникновения считают паразитарные инвазии (Ridgway, 1972). Однако гельминтозы чрезвычайно распространены и среди ластоногих (Murmann et al., 1984). Повышение же количества эозинофилов в периферической крови наблюдается при аллергических реакциях различного происхождения. Роль аллергенов могут играть и вещества, выделяемые гельминтами, и различные другие ксенобиотики. При стрессе число эозинофилов, наоборот, падает (Андреев, 1979). Этим можно объяснить различия в клеточном составе крови между взрослыми тюленями, застреленными на промысле, и щенками, которых удерживали при взятии крови в течение нескольких минут, что достаточно для начала стресс-реакции. По-видимому, низкое число эозинофилов, выявляемое у тюленей, является во многих случаях результатом стресса при взятии крови.

У тюленей-сеголетков (возраст 3-4 мес.), мигрировавших нев северную часть Баренцеваморя,ккромкельдов,основнойрайонкормления гренландских тюленей, а в Кандалакшский залив Белого моря, где весной нет достаточного для них количества корма, содержание эозинофилов составило 16.6±5.4%. Детеныши млекопитающих, переходя после молочного вскармливания на самостоятельное питание, неизбежно получают с пищей (в качестве пищи) вещества, с которыми они ранее не контактировали, и реагируют на них как на аллергены. Однако не ясно, естественны ли отмеченные гематологические особенности для начинающих питаться морскими организмами детенышей тюленей, либо они - следствие того, что переход к самостоятельному питанию был неравномерным из-за отсутствия в Белом море весной достаточного количества корма.

Возрастные изменения средних размеров районов организаторов ядрышка у гренландских тюленей менее значительны, чем у серых (0.086±0.001, 0.095±0.001, 0.093Ю.001, 0.082±0.001 у бельков, серок, серок-заморышей и взрослых, соответственно). Однако распределения по относительной площади HOPAg существенно (р<0.01) различаются (рис. 9).

Наибольшую относительную площадь HOPAg имеют голодающие щенки-мигранты (0.104±0.001). По видимому, это обусловлено тем, что во

% лифоцитов

□ бельки (1 нед.)

Sсерки (1-1.5 мес.), нормальные

ЭЯОРАд/БЯ

Рис. 9 Распределения лимфоцитов гренландских тюленей по относительной площади ЯОРА^

время голодания тюленей белки являются одним из источников получения энергии (№гс10у, ВИх, 1991; №)гс10у, 1992), и их интенсивная утилизация в этом качестве приводит к повышению активности системы синтеза белка.

Исследование фагоцитоза нейтрофилов. Фагоцитарное число нейтрофилов гренландских тюленей (табл. 7) в большинстве случаев не выходит за пределы колебания этого показателя у здоровых людей (30-80 %) (Дуглас, Куи, 1983). Различия между средними для групп тюленей по всем показателям статистически низкодостоверны (р>0.05). Это согласуется с результатами исследования обыкновенного, серого и гренландского тюленей: фагоцитарная активность лейкоцитов новорожденных животных и взрослых самок одинакова, в конце периода лактации у щенков она выше, чем у их матерей, затем постепенно снижается (Бгошп е1: а1., 2010).

Одинаковый уровень фагоцитарных показателей нейтрофилов у Таблица 7. Показатели фагоцитарной активности лейкоцитов гренландских тюленей (М±т, в скобках - пределы колебания показателей)

Группы тюленей ФЧ ФИ

Спонт. Стимул. ИС1, % Спонт. Стимул. ИС2, %

Взрослые, п = 6 58.5±6.7 (32-74) 68.34±5.8 (41-80) 17.7 (0-25.4) 18.2+1.4 (14.2-23.5) 22.7+2.3 (14.2-31.6) 25.0 (0-54.1)

Серки, п = 10 61.3±4.4 (36-86) 70.6±4.5 (58-86) 15.1 (0-72.6) 13.7+1.6 (8.7-26.5) 16.2±1.8 (10.0-25.5) 18.3 (0-31.2)

Заморыши, п = 10 49.5±5.0 (30-68) 56.2+5.4 (29-79) 13.5 (0-45.7) 16.0±1.6 (10.4-24.7) 20.6±2.0 (13.5-31.5) 28.2 (0-110)

примечание. ФЧ - фагоцитарное число, % фагоцитирующих нейтрофилов; ФИ -фагоцитарный индекс, среднее число поглощенных частиц латекса на 1 нейтрофил;. ИС - индекс стимуляции продигиозаном.

взрослых тюленей и щенков и более низкое число эстеразоположительных лимфоцитов у последних можно рассматривать как свидетельство того, что система фагоцитоза у детенышей тюленей, завершивших ювенильную линьку, находится на более высокой стадии зрелости, чем система специфического иммунитета.

4.3. Детеныши тюленя хохлача Хохлачам свойствен ряд особенностей, отличающих их от настоящих тюленей других видов. К ним относятся: ювенильная линька во время внутриутробного развития, самый короткий среди млекопитающих период лактации (около 4-х дней), раннее половое созревание - самки хохлача становятся половозрелыми в 2-3 года (Бурдин и др., 2009). Это позволяет также ожидать у этих тюленей более быстрого постнатального развития различных систем организма, включая систему кроветворения.

Однако это предположение не подтвердилось. Очевидно, клеточный состав крови детенышей тюленей определяется другими, более значимыми факторами. У всех исследованных животных встречаются юные формы клеток - метамиелоциты, оксифильные нормоциты (предшественники эритроцитов, содержащие ядро) и ретикулоциты (эритроциты с остатками ядер). В значительном количестве присутствуют палочкоядерные (низкодифференцированные) формы лейкоцитов - в среднем 11.1±1.2%, что больше, чем у щенков гренландского и серого тюленей в данный возрастной период (3.8±0.3 и 1.6±0.3%, соответственно). Число лимфоцитов выше числа сегментоядерных нейтрофилов (табл. 8).

Средняя величина БЯОРА^БЯ у гренландских тюленей и хохлачей возраста 1-1.5 мес. различается незначительно (0.095±0.001 и 0.099Ю.001, соответственно), у серого тюленя она гораздо выше (0.122±0.001). Однако число клеток с четырьмя районами организаторов ядрышка у хохлача - 3.8%, а у представителей других исследованных нами в данном отношении видов тюленей они встречаются очень редко (0-0.5%). Среднее число ЯOPAg в одном лимфоците у тюленей одинакового возраста (1-1.5 мес.) составило: 1.29±0.05 (гренландский тюлень); 1.31±0.05 (серый тюлень); 1.91±0.08 (хохлач). Таблица 8. Лейкоцитарная формула крови хохлачей различных возрастных групп (М±т)

Типы лейкоцитов, %

Группы тюленей Ю П С Э Б М Л

1*, 5 4 дня п = 9 Н.Д. 58±8 4±3 0 10±4 27±8

2", 1-1.5 мес., п=13 0.4±0.2 11.1±1.2 37.912.2 7.5±1.6 1.9±0.4 3.510.8 37.712.4

3*, взрослые самцы, п=5 н.д. 79±3.0 7±2 2±1 312 1013

4*, взрослые самки, п=6 н.д. 76±2 61 2 312 813 913

Примечание.* Залив Св. Лаврентия, 11-13 марта 2001г. (по: ВоПу й а!., 2006); ** Гренландское море 25 апреля - 3 мая 2009г. (собственные данные).

Согласно полученным результатам, изменения в составе лейкоцитарной формулы крови у хохлача, серого и гренландского тюленей подчинены ряду общих закономерностей. Так, высокое содержание нейтрофилов в крови новорожденных сменяется уменьшением его в первые дни или месяцы жизни и нарастанием их числа в более позднем возрасте.

Для новорожденных и взрослых тюленей хохлача характерен нейтрофильный профиль крови. После завершения молочного вскармливания происходит уменьшение относительного числа сегментоядерных нейтрофилов и повышение - лимфоцитов, т.е. "физиологический перекрест" лейкоцитарной формулы крови. Это явление отмечено нами у "бельков" гренландского тюленя, т.е. детенышей, питающихся молоком матери. У серых тюленей он установлен в возрасте 1-1.5 месяцев (т.е., после завершения молочного питания). Щенки же гренландского тюленя после завершения молочного кормления и ювенильной линьки уже имеют нейтрофильный профиль крови. Высокий уровень сегментоядерных нейтрофилов в первые дни и месяцы жизни обусловлен поступлением с молоком матери гормонов и рассматривается как приспособление, обеспечивающее неспецифическую защиту организма от инфекцийвраннемонтогенезе.Повышениежеотносительногочислалимфоцитов связывают с интенсивной пролиферацией лимфоидных клеток развивающейся системы специфического иммунитета. Синтез белка в клетках формирующейся системы иммунитета детенышей тюленей более интенсивен, чем у взрослых, что проявляется в большем числе ЯОР циркулирующих лимфоцитов. Видовой и, возможно, индивидуальный уровень параметров активности ядрышек устанавливается лишь при половом созревании (раздел 5.3).

ГЛАВА 5. ИЗМЕНЕНИЯ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ АДАПТАЦИИ ДЕЛЬФИНОВ И ТЮЛЕНЕЙ К УСЛОВИЯМ НЕВОЛИ

5.1. Особенности состава крови адаптированных и неадаптированных к условиям неволи дельфинов афалин

Лейкограмма афалин, как большинства китообразных, (McNeil, 1975; Monte, Pilleri, 1979) и ряда наземных млекопитающих, имеет гранулоцитарный профиль. Количество эозинофилов высоко, часто превышает относительное число лимфоцитов. Базофилы отсутствуют. Между исследованными группами афалин выявлены различия по числу некоторых типов лейкоцитов (табл. 9). Число лимфоцитов у больных животных ниже, чем у здоровых (р<0.01).

Таблица 9. Лейкоцитарная формула крови афалин (М±т, пределы колебания)

Группы афалин Типы лейкоцитов, %

НС С Э Б М Л

Здоровые адаптированные 1.410.5 0-5.0 49.214.5 24.0-71.0 22.212.6 9.0-38.0 0 2.410.3 0-4.0 24.713.5 11.0-48.0

Здоровые неадаптированные 3.312.2 0-18.0 51.417.8 29.0-86.0 17.815.0 0-40.0 0 2.110.6 0-4.5 25.513.9 8.0-42.0

Больные неадаптированные 3.111.1 1-9.0 60.615.7 45.0-85.0 20.614.5 0.5-36.0 0 1.410.5 0-3.5 14.412.1 8.5-22.0

Сравнение по нескольким параметрам свидетельствует о существенных различиях между группами афалин (табл. 10). Таблица 10. Параметры суммарных распределений лимфоцитов афалин различных групп по цитохимическим признакам (средняя±стандартная ошибка)_

№ Группы дельфинов НЭ СДГ ШИК+

ПН, % Число гранул Число гранул

М V,»/« А$ Ех М V. % А$ Ех

1 Здоровые адаптированные 31.1 ±1.0 2.72 ±0.05 76.1 ±1.8 1.69 ±0.06 2.52 ±0.11 21.46 ±0.33 45.3 ±1.2 0.88 ±0.08 0.96 ±0.16 26.7 ±1.0

2 Здоровые неадаптированные 30.9 ±1.3 1.85 ±0.03 60.2 ±1.6 1.65 ±0.07 2.43 ±0.14 21.25 ±0.36 42.1 ±1.4 0.75 ±0.10 0.42 ±0.20 19.9 ±1.3

3 Больные неадаптированные 36.5 ±1.1 2.04 ±0.03 63.1 ±1.3 1.44 ±0.05 2.13 ±0.11 18.60 ±0.32 54.1 ±1.4 1.31 ±0.07 2.00 ±0.15 22.6 ±1.0

Примечание. ПН - лимфоциты с парануклеарной реакцией на неспецифическую эстеразу; М - средняя, V - коэффициент вариации (%), Ав и Ех - показатели асимметрии и эксцесса, соответственно, ШИК+ - содержащие гликоген лимфоциты (%).

Согласно результатам корреляционного анализа (рис. 10, показаны корреляции, достоверные при Р>0.95), наиболее высок уровень скоррелированности характеристик распределения лимфоцитов у здоровых неадаптированных животных. Причем, корреляции (за исключением связи энтропии распределения по активности НЭ и показателя эксцесса по активности СДГ) свидетельствуют об однонаправленности изменений субпопуляционного состава лимфоцитов по активности обоих ферментов. Увеличение среднего числа эстеразоположительных гранул и разнообразия лимфоцитов по этому параметру сопряжено с возрастанием гетерогенности лимфоцитов по активности СДГ (снижается Ех). Сближение субпопуляций с различной активностью ферментов (возрастает Ех), упрощение распределения по активности СДГ (увеличивается И) связано с повышением числа ШИК-положительных лимфоцитов. Знак корреляций соответствует ходу процессов, происходящих при стимуляции лимфоцитов: сначала возрастает активность ферментов лизосом и митохондрий, затем снижается количество гликогена (Хейхоу, Кваглино, 1983).

Здоровые адаптированные НЭ СДГ

Здоровые неадаптированные

Рис. 10 Корреляции между

параметрами распределений

лимфоцитов афалин:

ПН - лимфоциты с парануклеарной

реакцией на неспецифическую

эстеразу; М - средняя;

Б - среднеквадратичное отклонение;

V - коэффициент вариации;

А$ и Ех - показатели асимметрии и

эксцесса, соответственно;

Н - энтропия;

й - информационная избыточность.

Корреляция гликоген-СДГ здоровых, здоровых адаптированных и неадаптированных афалин также свидетельствует о зависимости числа гликогенсодержащих лимфоцитов от уровня их разнообразия по активности СДГ: чем он выше (снижаются Ав, Ех, И), тем ниже содержание ШИК-положительных лимфоцитов. У больных животных существенныхкорреляций числа ШИК-положительных лимфоцитов и параметров распределения лимфоцитов по активности СДГ не выявлено. Это может быть связано с пониженной эффективностью утилизации гликогена в их клетках, учитывая, что средний уровень активности СДГ у больных афалин снижен.

Корреляции для всей группы животных слабые (г=0.3-0.4), несмотря на статистическую их достоверность (р<0.05). Исключение составляет связь числа лимфоцитов с парануклеарной эстеразной реакцией (ПН) и ШИК-положительных лимфоцитов (г=0.57). Она значительна также у здоровых адаптированных и больных дельфинов. Это, а также сниженная активность СДГ и повышенный процент ПН лимфоцитов у больных животных может свидетельствовать о низкой метаболической активности ПН лимфоцитов афалин.

Увеличение силы корреляций между показателями активности гидролаз и дегидрогеназ лимфоцитов выявлено при аутоиммунных и некоторых профессиональных заболеваниях (Соколов и др., 1975; Робинсон и др., 1986), В то же время, установлено, что животные, отличающиеся высоким уровнем корреляций энзиматических характеристик лимфоцитов, выживают после введения стафилококкового токсина (Катосова и др., 1975). Возрастание силы корреляций метаболических параметров лимфоцитов происходит в ранние сроки после введения антигена при экспериментальной иммунизации (Михайлова и др., 1972). В первые месяцы неволи у дельфинов из-за резкого увеличения обсемененности их микроорганизмами развивается состояние, рассматривающееся как предболезнь (Биркун, 1986). Согласно представленным результатам, оно характеризуется значительными сдвигами в системе иммунитета, проявляющимися в усилении сопряженности процессов активации ферментов лизосом и митохондрий и утилизации гликогена в лимфоцитах. Однако у дельфинов в неволе, в среде с высоким содержанием микроорганизмов, при неблагоприятном влиянии других факторов (стресс, гиподинамия, корм, отличающийся от природного), процессы иммуногенеза часто оказываются недостаточно эффективными.

Выявленные особенности состава лимфоцитов крови по цитохимическим признакам могут быть использованы для контроля течения процесса адаптации дельфинов к условиям неволи и его коррекции препаратами, влияющими на функции и метаболизм лимфоидных клеток. При этом показателем уровня адаптации является степень приближения значений цитохимических параметров и корреляций между ними у адаптирующихся животных к таковым у здоровых адаптированных дельфинов.

5.2. Начальный этап адаптации гренландских тюленей к условиям

неволи

Период адаптации мор ских млекопитающих послеотловаи помещения их в неволю может длиться от нескольких недель до нескольких месяцев (Белькович, Гуревич, 1971; Шс1д\уау, 1972; Аврег, 1975). Первые недели после

отлова считают критическими и во многом определяющими выживаемость и дальнейшую жизнь животных в неволе (Шс^угау, 1972).

Общее число лейкоцитов у щенков тюленей в течение периода наблюдения варьировало незначительно: 8.2±1.1, 7.5±1.б и 7.9±1.3 тыс./мкл (3-й, 10-й и 18-й дни в неволе, соответственно). Процент же лимфоцитов достоверно (р<0.05) упал к третьему дню, а к 18-му снизился в 3 раза по сравнению с контролем (12 интактных щенков такого же возраста, 1-1.5 мес.) и величиной этого показателя у взрослых животных. Достоверное снижение числа эозинофилов наблюдалось в 10-й день (рис. 11). Такие же сдвиги в лейкоцитарной формуле крови происходили у сивучей при адаптации к неволе (Занина, Занин, 1990) и 20-дневном голодании (Коваль и др., 1986). Неадаптированные к неволе афалины в первые 3 недели после отлова также имели сниженный уровень лимфоцитов по сравнению с адаптированными здоровыми дельфинами (9.50±4.48% против 20.25±2.42%) (Соколова, 2004). В третий и десятый дни снизился уровень гликогена, а наиболее резкое падение числа эстеразоположительных лимфоцитов отмечено в 10 день (рис. 11).

После того, как щенки начали активно питаться, привыкли к ваннам, в которых они находились, и присутствию людей (18 день пребывания в океанариуме), значения среднего уровня гликогена и числа эстеразоположительных (НЭ+) лимфоцитов восстановились до исходных величин.

Анализ состава лимфоцитов по размеру, форме и числу эстеразоположительных гранул показал, что в первые дни пребывания в океанариуме у щенков существенно (р<0.01) снизилось число клеток с парануклеарным типом реакции, достигнув величины взрослых животных (табл. 11).

В это же время (3-й день в неволе) увеличилась активность организаторов ядрышка, а число эстеразоположительных гранул, отражающее уровень активности лизосомного аппарата клетки, снизилось. Впоследствии рассматриваемые показатели не отличались (р>0.05) от показателей взрослых тюленей, за исключением повысившегося в 10-й день процента ПН лимфоцитов.

Рис. 11 Изменения показателей лейкоцитов щенков гренландских тюленей в первые дни содержания в океанариуме: Нф - нейтрофилы; НЭ+ - эстеразоположительные лимфоциты;

Гл - гликоген в лейкоцитах (усл. ед.); Лф - лимфоциты; Эф - эозинофилы.

Таблица 11. Показатели активности неспецифической эстеразы и организаторов ядрышка гренландских тюленей

Показатель Группы животных, периоды исследования

Контроль 3-й день 10-й день 18-й день Взрослые

KOVkg 1.2510.02 1.4510.04 1.3610.06 1.3710.06 1.1710.06

НЭ:

ПН 52.712.0 26.512.5 34.212.4 24.416.5 14.912.2

ЭГ 4.1010.27 3.3310.21 3.0410.15 3.1410.26 3.1910.22

As 0.86710.071 0.93610.087 0.79210.087 0.86110.087 1.37910.077

Ex 0.63910.141 0.600Ю.173 0.52910.173 0.97110.173 1.998Ю.155

Примечание. ПН - число лимфоцитов (%) с парануклеарной реакцией на НЭ; ЭГ - среднее число эстеразоположительных гранул в 1 лимфоците;; As Ex - показатели асимметрии и эксцесса распределения по числу НЭ+ гранул; HOPAg - среднее число окрашенных серебром ЯОР.

Наиболее вероятной причиной резкого падения числа НЭ+ лимфоцитов был стресс, развившийся после транспортировки и помещения животных в ванны. Об этом свидетельствует повышение концентрации глюкозы в плазме крови, сопровождавшее снижение числа эозинофилов (Ерохина, Кавцевич, 1998). При стрессе часть зрелых, дифференцированных Т-лимфоцитов мигрирует в костный мозг, и в популяции клеток крови увеличивается число незрелых, не завершивших дифференцировку лимфоцитов (Юшков и др., 1999). При общей тенденции - снижении числа эстеразоположительных лимфоцитов к 10-му дню пребывания в неволе с последующим его повышением в 18-й день, выявились также индивидуальные особенности изменений этого показателя. В частности, у 2-х тюленей отмечено последовательное возрастание процента НЭ+ лимфоцитов.

5.3. Изменения цитологических и цитохимических параметров крови гренландских тюленей при длительном содержании в неволе

4 щенка-сеголетка гренландского тюленя в возрасте 3.5-4 месяца, мигрировавшие в Кандалакшский залив, были доставлены в океанариум для длительного содержания и исследования. Некоторые гематологические показатели щенков выходили за пределы возрастной "нормы", предложенной Ф.Р. Энгельгардтом (Engelhardt, 1979). Наиболее существенные отклонения наблюдалисьутюленей№2и№З.Особеннозначительнымбылоповышениеуних скорости оседания эритроцитов (32-55 мм/час), что могло свидетельствовать о наличии патологического (вероятно, воспалительного) процесса. Кроме того, эти тюлени отличались сниженным числом эритроцитов. Согласно результатам биохимических исследований (Кавцевич, Ерохина, 2003), у всех животных также было повышено, по сравнению с возрастной нормой, содержание глюкозы, что является одним из показателей стресс-реакции; нарушен минеральный обмен. У щенка № 2, несмотря на нормальную упитанность, наблюдался дисбаланс обмена белка. Оценка состояния животных осложнялась наличием у них гельминтоза (ленточные и круглые черви в желудочно-кишечном тракте).

В результате последующих анализов клеточного состава крови

найдено, что наиболее значительно в период наблюдения изменялось абсолютное число эозинофилов (рис. 12).

Рис. 12. Динамика изменения числа эозинофилов у щенков гренландского тюленя.

Обследованные животные различаются по характеру динамики уровня лимфоцитов и нейтро-3.5года фиЛОВ (рИС. 13). В одну группу вошли тюлени №1 и №2

(успешно прошедшие период адаптации), во вторую - №3 и №4 (погибшие через 18 и 34 месяца пребывания в неволе, соответственно). У тюленей №3 и №4 не наблюдался так называемый "физиологический перекрест", являющийся характерной возрастной особенностью клеточного состава крови млекопитающих. Это позволяет предполагать, что утрата упомянутых характерных особенностей может рассматриваться как показатель снижения уровня жизнеспособности детенышей тюленей.

По данным биохимического анализа крови, период реабилитации у щенков гренландского тюленя составил более 3-х месяцев (Кавцевич, Ерохина, 2003,2009). После года пребывания в неволе отмечена утрата резких индивидуальных различий в биохимическом статусе животных, что, видимо, обусловлено одинаковыми и комфортными по сравнению с природной

3 месяца

Рис. 13. Динамика изменения соотношения лейкоцитов различных типов у щенков гренландскихтюленей.Ю,П,С-юные,палочкоядерныеисегментоядерныенейтрофилы, Э - эозинофилы; Б - базофилы; М - моноциты; Л - лимфоциты, соответственно.

средой условиями жизни (отсутствие врагов, регулярное кормление, уход, ветеринарное обеспечение).

В первые месяцы после отлова и помещения в океанариуму животных наблюдались значительные колебания среднего числа ЯOPAg. Далее, по мере взросления тюленей, колебания снизились, и оно приблизилось к уровню взрослых (рис. 14).

1.6

-№1

1.5 -) ч -•-N22

-№3

О)

<1.4 О.

к 1.з ^

о с и

£1.2 Н 1.1

1.0

Рис. 14. Возрастные изменения числа ЯOPAg в лимфоцитах щенков гренландских тюленей, адаптирующихся неволи.

к условиям

3 мес.

1 гад

2 года 3 года

Возраст

Видовой и индивидуальный уровень параметров активности ядрышек устанавливается, вероятно, при | половом созревании, которое з.5 года начинается у гренландских тюленей в 3-4 года.

Стабилизация числа больших гранулярных лимфоцитов и общего числа лейкоцитов произошла в тот же период, что и изменение активности ядрышек (рис. 15). Однако это снижение числа БГЛ, по-видимому, связанное с развитием у молодых тюленей системы специфического иммунитета, у взрослых половозрелых особей 10-15 лет вновь сменяется его повышением (табл. 12).

V. БГЛ 18

Змее.

1 пвд 2 года

Згода

3 чес.

1 год

2 года

Рис. 15 Динамика изменения числа БГЛ и лейкоцитов.

Згода

Что касается числа эстеразоположительных лимфоцитов, большинство из которых являются, предположительно, Т-клетками, то оно изменялось иначе, чем предыдущие 3 показателя. После 9-ти месяцев пребывания в неволе произошло падение ниже исходного уровня, а затем -подъем до уровня, приближающегося к таковому взрослых животных.

Таким образом, при адаптации изучаемых видов морских млекопитающих к условиям неволи происходят существенные изменения

Таблица 12. Число БГЛ (% от общего числа лимфоцитов) у гренландских тюленей разного возраста

№ Группы тюленей М±т

1 Бельки, 1 нед. (п=38) 6.7±0.5

2 Серки, 1.5 мес., п=27 18.0±1.2

3 Серки-"заморыши", 15 мес., п=36 19.1±1.3

4 Серки-мигранты, 3-4 мес., п=6 8.6±1.4

5 Взрослые животные, п=10 13.9±1.7

в соотношении лейкоцитов различных типов и в структуре популяции лимфоцитов периферической крови по цитохимическим признакам. Колебания клеточного состава крови у детенышей тюленей зависят от возраста и индивидуальных особенностей состояния животных. Наиболее значительны они в первые недели и месяцы неволи, ковда животные подвергаются воздействию стресса, а через10-12 месяцев стабилизируются.

Глава 6. ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ И ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ И ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ

6.1. Отравление обыкновенных морских свиней нефтепродуктами

Мы проводили наблюдения за четырьмя взрослыми самцами обыкновенной морской свиньи, находившимися в воде, загрязненной мазутом. После 6 дней пребывания в загрязненной воде погиб первый дельфин, остальные - через 7, 9 и 10 суток. На третий день наблюдения у трех дельфинов в 1.5-2 раза повысилось общее содержание лейкоцитов, у одного - скорость оседания эритроцитов, т. е. появились признаки острого воспалительного процесса. У одного из дельфинов более чем в 2 раза возросло количество лимфоцитов. В день, предшествовавший гибели, отклонения были наиболее значительными: снизилось количество эозинофилов, что является одним из признаков развития стресс-реакции, у трех дельфинов повысилось число "юных", низкодифференцированных нейтрофилов.

Соотношение лимфоцитов с различным числом эстеразоположительных гранул достоверно изменилось на третий день наблюдения у всех четверых животных. Причем у двух дельфинов уже на второй день значительно повысилось число клеток, содержащих 3 и более гранул. Дельфины, лимфоциты которых проявили более раннюю и сильную реакцию, прожили дольше других.

За день до гибели форма распределения лимфоцитов отличалась от исходной наиболее значительно. Более половины лимфоцитов составили клетки с одной эстеразоположительной гранулой. При этом содержание лимфоцитов с парануклеарной реакцией на неспецифическую эстеразу, низкодифференцированных клеток, не несущих рецепторов Т- или В-лимфоцитов (Соколов, Иванова, 1982), изменялось мало (28.7±2.6, 32.5±2.8 и 31.1±2.2 в разные периоды, соответственно) Таким образом, быстрое (в течение нескольких дней) снижение числа эстеразоположительных гранул

свидетельствовало о неспособности лимфоидной системы (и, вероятно, других систем организма) активно реагировать на раздражение.

6.2. Беременность у афалин

В течение 17 месяцев мы наблюдали четырех самок дельфинов-афалин, две из которых были беременны, две - здоровы и небеременны. У одной из беременных имелись, кроме того, симптомы инфекции (примесь гноя в моче). Наличие беременности в период исследования было подтверждено ретроспективно, после рождения доношенных детенышей, учитывая, что ее продолжительность у афалин равна 12 месяцам (Ожаровская, 1982).

Содержание лимфоцитов с "парануклеарным" типом эстеразной реакции было значительно, в 2-2.5 раза, повышено у беременных самок, по сравнению с небеременными, в течение всего срока беременности. Значения этого показателя до наступления беременности составляли у них 31.0 и 33.0%. Число эстеразоположительных гранул у беременной здоровой было снижено, а у беременной больной не отличалось от уровня здоровых (табл. 13).

Таблица 13. Показатели активности неспецифической эстеразы в лимфоцитах беременных и небеременных самок дельфинов афалин

Показатели №6, небеременная здоровая п=12 №29, небеременная здоровая, п=11 №13, беременная здоровая, п=13 №28., беременная больная, п=10

ПН лимфоциты, % 21.Ш.2 27.8±1.4 64.6±1.4 51.3±1.6

Число гранул в 1 лимфоците 2.77±0.06 2.9110.06 2.14±0.06 2.71±0.06

Согласно современным представлениям, беременность рассматривается как имплантация генетически чужеродного материала в организм матери. Она сопровождается повышением концентрации ингибиторов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов, что приводит к снижению количества иммунокомпетентных клеток. Поэтому повышение числа ПН лимфоцитов при беременности можно считать дополнительным свидетельством того, что и у морских млекопитающих они -низкодифференцированные клетки.

6.3. Изменения клеточного состава крови при инфекционных заболеваниях у гренландского тюленя и белух

В 1986г. в океанариум ММБИ из Архангельска (СевПИНРО) были доставлены 4 щенка гренландского тюленя. По заключению ветеринарного врача, у одного из них началась пневмония. В последующие 10 дней был проведен курс лечения.

Из показателей общего анализа крови наиболее велики в динамике лечения заболевания были колебания общего количества лейкоцитов (табл. 14). При выздоровлении тюленя заметно изменилась лейкоцитарная формула: стало меньше нейтрофилов с несегментированным ядром (низкодифференцированных) и значительно больше эозинофилов. Последнее является, наиболее вероятно, следствием длительного применения высоких доз антибиотиков.

Соотношение групп лимфоцитов с различной активностью неспецифической эстеразы в ходе лечения существенно изменялось. При

Таблица 14. Показатели общего анализа крови гренландского тюленя, переболевшего пневмонией

Период Гемоглобин, г/л Эритроциты, 106/мкл Лейкоциты, 103/мкл Н,% э, % Б, % М, % Л,%

несегм. сегм.

29 июня, лечение 224.0 4.2 30.2 5.5 63.0 3.5 0 7.0 21.0

15 июля, лечение 228.0 4.6 7.4 3.0 60.5 2.0 0.5 6.0 28.0

5 ноября, выздоровление 222.0 5.2 22.6 1.5 53.5 19.5 0 4.0 21.5

выздоровлении распределение лимфоцитов по числу эстеразоположительных гранул приобрело асимметричную форму, характерную для здоровых дельфинов и тюленей. Наибольшее среднее число гранул в реакции на неспецифическую эстеразу (5.93±0.30) отмечено 29 июня, в начале лечения, в остальные сроки оно было достоверно ниже (р<0.01). Согласно данным литературы, высокое число эстеразоположительных гранул в активной фазе заболевания отражает возрастание числа и изменение локализации лизосом при стимуляции лимфоцитов. Устойчивое снижение этого показателя и приближение формы распределения лимфоцитов к свойственной здоровым тюленям следует считать, согласно приведенным данным, прогностически благоприятными признаками.

Число лимфоцитов с парануклеарной эстеразной реакцией (ПН) при выздоровлении возросло в 3 раза, превысив уровень здоровых щенков 1.5-месячного возраста (более 50%). Процент ПН лимфоцитов у взрослых гренландских тюленей значительно ниже (14.9±2.2%). Наблюдавшееся после заболевания повышение числа ПН клеток может быть обусловлено и супрессией активно развивавшихся в период заболевания гуморальных иммунологических реакций, и возрастанием количества предшественников зрелых Т-лимфоцитов в связи с прекращением интенсивной антигенной стимуляции системы иммунитета возбудителями заболевания.

В Мурманском морском биологическом институте (поселок Дальние Зеленцы) содержались две самки белухи в возрасте 2 и 5 лет. Одна из белух (более молодая) была явно больна (обширные поражения кожи на спинной стороне тела, гнилостный запах и выделения из дыхала). У второй самки признаком заболевания было искривление хвостового стебля, являющееся симптомом глубокой инфекционной патологии (Томилин, Близнюк, 1981). Скорость оседания эритроцитов составляла 43 и 40 мм/час.

В мазках крови белух была повышена численность лимфоцитов с высокой активностью неспецифической эстеразы, часто встречались клетки с признаками активации, имеющие светлое ядро и многочисленные эстеразоположительные гранулы. Среднее число гранул было очень высоким - 7.28±0.37 и 6.20±0.31.

Распределения лимфоцитов белух по числу эстеразоположительных гранул симметричны (у здоровых тюленей и дельфинов они асимметричны, сдвинуты влево). Такие признаки характерны для афалин с гнойно-септическими заболеваниями (Колесса и др., 1986). У афалин распределение

лимфоцитов с описанными чертами также соответствовало крайне тяжелому состоянию, предшествовавшему гибели животных.

6.4. Изменения клеточного состава крови у афалин при иммунизации

Иммунизировали двух самок, содержавшихся в океанариуме 6 лет. Ни микобактерии туберкулеза, ни антитела против них у афалин не выявлены (Денисенко, Соколова, 2002; Розанова и др., 2006; Романов и др., 2006). Поэтому, иммунный ответ на введение БЦЖ у дельфинов является первичным. Через 7 месяцев после иммунизации БЦЖ производили вакцинацию стандартной вакциной против рожи свиней (ВР-2). У исследованных животных ее повторяли каждые 6 мес., и иммунный ответ на ВР-2 - вторичный.

Через 11 месяцев после иммунизации БЦЖ одна из самок (№17) родила доношенного живого детеныша. Таким образом, первая иммунизация состоялась на первом месяце беременности, вторая - на седьмом.

Исходное количество лейкоцитов было близким у обоих животных как при первой, так и при второй иммунизации и находилось в пределах, установленных для здоровых адаптированных к неволе афалин (7-10 тыс./мкл). Однако после введения БЦЖ оно оставалось на одинаковом уровне в течение 3-х дней, а введение вакцины ВР-2 вызвало на 3-й день заметный лейкоцитоз у обоих афалин, причем, более сильный у самки №17 (беременной). Сильная лейкоцитарная реакция на БЦЖ наблюдалась у одной из самок лишь на 7-й день, что по-видимому, является следствием большей продолжительности индукционного периода при первичном иммунном ответе.

Заметны различия между беременной и небеременной афалинами как при первичном, так и при вторичном иммунном ответе. Сравнения по комплексу из семи параметров позволило выявить особенности реагирования животных и в 1-м, и во 2-м эксперименте. Причем, по изменениям параметров в первые дни после иммунизации можно судить о характере их изменений в дальнейшем.

ВЫВОДЫ

1. Комплексный морфологический и цитохимический анализ клеточного состава крови свидетельствует о существовании у дельфинов и тюленей особенностей системы крови, обусловленных водным образом жизни.

2. Для дельфинов и тюленей характерен нейтрофильный профиль лейкоцитарной формулы крови. Гренландскому и серому тюленям и морскому зайцу свойственны особенности дифференцировки клеток миелоидного ряда, проявляющиеся в морфологии ядра и цитоплазмы части гранулоцитов. Взрослые гренландские тюлени отличаются высоким уровнем эозинофилов -до 36%, в среднем - 19.3%.

3. К возрастным особенностям клеточного состава крови тюленей относится уравнивание числа лимфоцитов и нейтрофилов - физиологический перекрест лейкоцитарной формулы крови. Это явление отмечается у гренландского тюленя в более ранние сроки постнатального онтогенеза, чем у серого тюленя и тюленя хохлача. Его наличие или отсутствие может служить признаком, позволяющим судить о жизнеспособности детенышей тюленей.

4. У всехисследованныхвидов морских млекопитающих выявлены лимфоциты, сходные с Т-лимфоцитами-супрессорами, нулевыми лимфоцитами и

Т-клетками-киллерами по парануклеарно локализованным скоплениям окрашенного продукта цитохимической реакции на неспецифическую зстеразу. Возрастание их числа у дельфинов сопряжено с увеличением числа гликогенсодержащих лимфоцитов и снижением активности сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов.

5. На ранних этапах процесса адаптации тюленей к условиям неволи в соотношении различных типов лейкоцитов и структуре популяции лимфоцитов крови происходят сдвиги, отражающие снижение уровня резистентности в специфическом и неспецифическом звеньях иммунитета. Процесс адаптации длится не менее одного года, имеются индивидуальные сроки стабилизации клеточного состава крови.

7. Здоровые и больные, адаптированные и неадаптированныек неволе афалины различаются формой распределения лимфоцитов по активности НЭ и СДГ, силой и направленностью корреляций между параметрами распределения лимфоцитов по активности НЭ и СДГ и числом гликогенсодержащих лимфоцитов. Эти различия могут быть использованы для оценки течения периода адаптации к условиям неволи и отбора наиболее адаптированных особей.

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Публикации в журналах из перечня ВАК

1. Ерохина И.А., Кавцевич H.H. Состав и свойства белков сыворотки крови щенков гренландского тюленя Pagophilus groenlandica в период адаптации к неволе // Журнал эвол. биохимии и физиологии. 1998. Т. 34, № 6. С. 654-660.

2. Кавцевич H.H. Клеточный состав крови гренландских тюленей различного возраста // Доклады Российской академии наук. 2001. Т. 380, №2. С. 280-282.

3. Кавцевич H.H. Особенности клеточного состава крови гренландских тюленей (Pagophilus groenlandicus) различного возраста // Зоологический журнал. 2003. Т. 82, № 6. С. 758-761.

4. Ерохина И.А., Кавцевич H.H. Чувствительность эритроцитов морских млекопитающих к осмотическому лизису // Вет. практика, 2007, №3 (38). С. 60-63.

5. Кавцевич H.H., Матишов Г.Г., Кондаков A.A. Под дождем в полярную ночь на Айновых островах // Природа. 2007, № 7. С. 74-78.

6. Кавцевич H.H., Юрко A.C. Активность организаторов ядрышка в лимфоцитах гренландских тюленей разного возраста // Доклады Российской академии наук. 2007. Т.416, №5. С. 706-708.

7. Войнов В.Б., Кавцевич H.H., Михайлюк А.Л., Зотов A.C. Поведенческие и физиологические признаки адаптации серых и гренландских тюленей к ныряющему образу жизни // Доклады Российской академии наук. 2008. Т. 420, №2. С.271-274.

8. Войнов В.Б., Синютин С.А, Синютин A.C., Кавцевич H.H., Зотов A.C. Средства и способ исследования поведения и физиологии морских млекопитающих // Бюллетень эксп. биол. и мед. 2008. Т. 145, №3. С. 248-250.

9. Ерохина И. А., Кавцевич H.H. Квопросу об оценке жизнеспособности щенков тюленей по некоторым параметрам крови // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2009, № 3. С. 3-8.

10. Кавцевич H.H., Минзюк Т.В. Клеточный состав крови серых тюленей различного возраста // Доклады Российской академии наук. 2010. Т.432, №. 4. С. 552-555.

11. Минзюк Т.В., Кавцевич H.H. Новые данные о клеточном составе крови тюленя хохлача // Доклады Российской академии наук. 2010. Т. 435, № 5. С. 714-717.

12. Кавцевич H.H., Минзюк Т.В. Лейкоцитарные индексы и активность организаторов ядрышка лимфоцитов щенков серых тюленей И Вестник Южного научного центра РАН. 2010. Т. 6, № 4. С. 76-83.

13. Кавцевич H.H. Гематологические показатели обыкновенных морских свиней при отравлении нефтепродуктами // Известия Самарского научного центра РАН. 2011 Т. 13, № 1 (5). С. 1109-1112.

14. Кавцевич H.H. Цитохимическое исследование структуры популяции лимфоцитов периферической крови афалин // Известия Самарского научного центра РАН. 2011 Т. 13, № 1 (5). С. 1113-1118.

15. Кавцевич H.H. Цитохимические особенности лимфоцитов крови дельфинов афалин при содержании в неволе // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2011, № 3 (11). С. 18-23.

16. Кавцевич H.H., Минзюк Т.В. Особенности клеточного состава крови серых тюленей (Halihoerus grypus) разного возраста // Зоологический журнал. 2011. Т. 90, № 9. С. 1122-1126.

17. Ерохина И.А., Кавцевич H.H. Новые данные к характеристике метаболического статуса тюленя-хохлача (Cystophora cristata Erxleben, 1777) и гренландского тюленя (Pagophilus groenlandica Erxleben, 1777) в раннем постнатальном периоде развития // Доклады Российской академии наук. 2011. Т. 440, № 3. С. 420-422.

Публикации в других изданиях

18. Кавцевич H.H. Гетерогенность лимфоцитов крови черноморской афалины по цитохимическим признакам // Морфогенез органов и регулирующих систем в норме и эксперименте Сб.тр. Минского гос. мед. инта. Минск, 1985. С. 135-138.

19. Мишин В.Л., Кавцевич H.H., Кочетков Н.В. Содержание в неволе некоторых видов морских млекопитающих Арктики. Изд. КФ АН СССР, Апатиты, 1987. 70 с.

20. Мишин В.Л., Елфимова Т.Б., Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Особенности полноценного жизнеобеспечения настоящих тюленей в неволе

// Содержание в неволе и обучение ластоногих северного региона. Апатиты, 1992. С. 12-60.

21. Кавцевич Н.Н. Некоторые результаты исследования лейкоцитов морских млекопитающих // Эколого-физиологические исследования млекопитающих северных морей. Апатиты, 1992. С. 8-19.

22. Кавцевич Н.Н., Мишин В.Л., Ерохина И. А. Результаты обследования гренландского тюленя беломорской популяции в 1991-1992гг. Апатиты: КНЦ РАН, 1993.19 с.

23. Кавцевич Н.Н. Вариабельность цитологических параметров крови гренландских тюленей беломорской популяции // Арктические моря: биоиндикация состояния среды, биотестирование и технология деструкции загрязнений. Апатиты: КНЦ РАН, 1993. С. 109-116.

24. Kavtsevich N.N., Yerokhina I.A. Biochemical and cytochemical features of harp seal blood // Abstr. Rep. Int. Symp. on Mar. Mamm., Tromso, Norway, 1994. P. 93.

25. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Биохимические и цитологические исследования морских млекопитающих в Арктике. Апатиты: КНЦ РАН, 1996. 169 с.

26. Kavtsevich N.N. Morphological and cytochemical features of marine mammal blood И J. of Morphology, 1997. V. 232, N3. P. 122.

27. Kavtsevich N.N. Some cytochemical features of marine mammal lymphocytes // Abstr. Euro-Amer. Mammal Congr., Santiago de Compostela, 19-24 July, 1998. Santiago de Compostela, 1998. P. 199.

28. Yerokhina I.A., Kavtsevich N.N. On haematological indicators of arctic pinnipeds populations state // Abstr. Euro-Amer. Mammal Congr., Santiago de Compostela, 19-24 July, 1998. Santiago de Compostela, 1998. P. 203.

29. Мишин В.Л., Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Контроль функционального состояния морских млекопитающих в аквакомплексах // Адаптация и эволюция живого населения полярных морей в условиях океанического перигляциала. Апатиты: КНЦ РАН. 1999. С. 357-377.

30. Ерохина И.А., Кавцевич Н.Н. Методические аспекты оценки здоровья морских млекопитающих // Оптимизация использования морских биоресурсов и комплексное управление прибрежной зоной Баренцева моря. Мурманск, 1999. С. 31-33.

31. Кавцевич Н.Н. Гематологические показатели обыкновенных морских свиней при отравлении нефтепродуктами // Морские млекопитающие Голарктики. Матер. Междунар. конф. Архангельск, 21-23 сентября 2000г. Архангельск, 2000. С. 146-149.

32. Кавцевич Н.Н. Морфологические и некоторые цитохимические особенности крови гренландских тюленей разного возраста // Морские млекопитающие Голарктики. Матер. Междунар. конф. Архангельск, 21-23 сентября 2000г. Архангельск, 2000. С. 150-154.

33. Кавцевич Н.Н. Морфологическое и цитохимическое исследование крови // Гренландский тюлень (современный статус вида и его роль в функционировании экосистем Белого и Баренцева морей). Мурманск, 2001. С. 48-72.

34. Кавцевич H.H. Параметры клеток крови щенков гренландского тюленя при адаптации к условиям неволи // Гренландский тюлень (современный статус вида и его роль в функционировании экосистем Белого и Баренцева морей). Мурманск, 2001. С. 127-133.

35. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Некоторые особенности состава крови щенков гренландского тюленя, совершающих аномальные миграции // Современные проблемы физиологии и экологии морских животных. Апатиты: Изд. КНЦ РАН, 2003. С. 174-185.

36. Ерохина И.А., Кавцевич H.H. О возможности применения гематологических данных в мониторинге популяций ластоногих II Ученые записки Тернопольского национального педагогического университета. Серия: Биология. 2005. № 4 (27). С. 82-83.

37. Кавцевич H.H., Ерохина И. А., Юрко A.C. Параметры крови морских млекопитающих в системе биоиндикации состояния окружающей среды // Современное состояние экосистем Кольского полуострова. Мурманск: ЦНТИ, 2005. С. 103-122.

38. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. "Физиологический перекрест" лейкоцитарной формулы крови - показатель жизнеспособности щенков тюленей? // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. науч. тр. СПб., 2006. С. 230-234.

39. Юрко A.C., Кавцевич H.H. Районы организаторов ядрышка гренландских тюленей разного возраста // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. науч. тр. СПб., 2006. С. 576-580.

40. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Воинов В.Б. Оценка и контроль физиологических и функциональных параметров ластоногих // Экспериментальные исследования морских млекопитающих в условиях Кольского залива Апатиты: Изд. КНЦ РАН, 2007.С. 125-161.

41. Кавцевич H.H., Минзюк Т.В. Некоторые морфологические и цитохимические особенности крови щенков серого тюленя // Биология: Теория, практика, эксперимент: Матер, междунар. науч. конф. В 2-х кн. Саранск: ООО "Бьюти", 2008. Кн. 2. С. 167-171.

42. Минзюк Т.В., Кавцевич H.H. Содержание больших гранулярных лимфоцитов у гренландских тюленей разного возраста II Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введенных в зоокультуру. Матер. 4 междун. симп. Петрозаводск, 2009. С. 181186.

43. Кавцевич H.H., Минзюк Т.В. Выявление миелопероксидазы в лейкоцитах серых тюленей // Пробл. изуч. и охр. животного мира на Севере. Матер, всеросс. конф. Сыктывкар, 2009. С. 327-328.

44. Минзюк Т.В., Кавцевич H.H. Морфометрия районов организаторов ядрышка лимфоцитов серых тюленей // Пробл. изуч. и охр. животного мира на Севере. Матер, всеросс. конф. Сыктывкар, 2009. С. 332-333.

45. Ерохина И.А., Кавцевич H.H. Проблема охраны здоровья морских млекопитающих // Соврем, научно-практ. достижения в ветеринарии. Сб. статей Междунар. конф. 15-16 апреля 2010г. Киров. 2010. С. 73-76.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

БГЛ - большие гранулярные лимфоциты,

БЦЖ - вакцина, живые лиофилизированные микобактерии туберкулеза,

ВР-2 - вакцина против рожи свиней,

МПО - миелопероксидаза,

НАДНр - НАДНгтетразолий редуктаза,

НАДФНр - НАДФН2-тетразолий редуктаза,

НК - нуклеиновые кислоты,

НЭ - неспецифическая эстераза,

НЭ - лимфоциты с положительной реакцией на неспецифическую эстеразу, ПН - лимфоциты с парануклеарно локализованными скоплениями окрашенного продукта цитохимической реакции на неспецифическую эстеразу, СДГ - сукцинатдегидрогеназа,

ШИК - реакция реактив Шиффа-иодная кислота для выявления гликогена, ШИК+ лейкоциты (лимфоциты) - содержащие гликоген лейкоциты (лимфоциты),

ЯOPAg - окрашенные серебром белки районов организаторов ядрышка, SЯOPAg - площадь районов организаторов ядрышка, БЯ - площадь ядра,

SЯOPAg/SЯ - относительная площадь ЯОРА£.

Кавцевич Николай Николаевич

Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 27.09.2011. Заказ №5-2011 Формат 60490/16. Усл. печ. л. 2,12. Тираж 100 экз.

Отпечатано в издательском центре ММБИ КНЦ РАН г. Мурманск, ул. Владимирская, 17. Тел. 25-39-81

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Кавцевич, Николай Николаевич

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ КРОВИ МОРСКИХ

МЛЕКОПИТАЮЩИХ (обзор литературы)

1.1 Проблема оценки и охраны здоровья морских млекопитающих.

1.2 Гематологические исследования китообразных и ластоногих.

1.3 Цитологические и цитохимические исследования крови млекопитающих.

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3 МОРФОЛОГИЯ И ЦИТОХИМИЯ КРОВИ ДЕЛЬФИНОВ И

ТЮЛЕНЕЙ.

3.1 Морфологическая характеристика различных типов клеток крови.

3.2 Цитохимические реакции в лейкоцитах морских млекопитающих.

3.3 Количественный анализ структуры популяции лимфоцитов крови дельфинов афалин по цитохимическим признакам.

Глава 4 ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА КРОВИ

ТЮЛЕНЕЙ.

4.1 Серые тюлени.

4.2 Гренландские тюлени.

4.3 Детеныши тюленя хохлача.

Глава 5 ИЗМЕНЕНИЯ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ

АДАПТАЦИИ ДЕЛЬФИНОВ И ТЮЛЕНЕЙ К УСЛОВИЯМ НЕВОЛИ.

5.1 Особенности состава крови адаптированных и неадаптированных к условиям неволи афалин.

5.2 Начальный этап адаптации гренландских тюленей к условиям неволи.

5.3 Изменения цитологических и цитохимических параметров крови гренландских тюленей при длительном содержании в неволе.

Глава 6 ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ И ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ И

ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ.

6.1 Отравление обыкновенных морских свиней нефтепродуктами.

6.2 Беременность у афалин.

6.3 Изменения клеточного состава крови при инфекционных заболеваниях у гренландского тюленя и белух.

6.4 Изменения клеточного состава крови афалин при иммунизации.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания"

Актуальность проблемы. Естественная среда обитания морских млекопитающих постоянно ухудшается в результате загрязнения океана. Все усложняющиеся условия проживания, вопросы сохранения здоровья целых популяций животных привели в настоящее время биологическую науку к осознанию необходимости детального изучения процессов адаптации к меняющимся условиям окружающей среды. Заболевания и гибель содержащихся в океанариумах животных являются важнейшими факторами, препятствующими разведению водных млекопитающих. Проблема оценки эффективности механизмов резистентности к воздействию неблагоприятных факторов актуальна не только для содержащихся в неволе и редких, но и для промысловых видов морских млекопитающих, численность которых существенно снижается из-за распространяющихся в последние годы интоксикаций и эпизоотий (Бобовникова и др., 1986; Алмквист и др., 1987; Натооё, 11е]пс1ег8, 1988; Хураськин и др., 2002).

Особенности строения и функционирования системы крови и лимфоидной системы могут играть существенную роль в патогенезе заболеваний у морских млекопитающих, эволюционировавших в чистой океанической среде, не содержавшей патогенных микроорганизмов суши (Сыкало, 1982; Агуеу, 1976; Сауа§по1о, 1979; Ва1кег, 1984). В то же время, лимфоидная система китообразных и ластоногих, как и система крови в целом, изучены недостаточно для определения их функциональных возможностей.

Большая часть исследований крови, связанных с проблемами токсикологии и заболеваний морских млекопитающих, выполняется биохимическими методами, изучение клеток играет, как правило, подчиненную, вспомогательную роль. Данные о морфофункциональных характеристиках, качественном и количественном составе клеток крови в научной литературе немногочисленны. 1

Результаты исследований, осуществленных на неоднородных по возрасту, полу и условиям обитания группах морских млекопитающих разных видов не дают возможности сформировать единое представление об адаптивных изменениях в организме, происходящих в новых для него экологических условиях, раскрыть механизмы этих изменений. Мало изучены вопросы, связанные с влиянием ноогенных условий на клеточный иммунитет, а работы, посвященные исследованию этой проблемы в период адаптации к неволе вообще единичны (Романов, Сергиевская, 1989; Швацкий и др., 1990; Романов, 1991; Матишева, Шапунов, 1990; Соколова, 2002, 2006). Отсутствуют комплексные исследования, позволяющие оценить связь адаптивных изменений, развивающихся на клеточном и субклеточном уровне, с регуляторными влияниями организма.

В экспериментальных и клинических исследованиях установлено, что определение клеточного состава крови по морфологическим и цитохимическим признакам позволяет не только определять, но и прогнозировать состояние систем специфического и неспецифического иммунитета и организма в целом (Соколов и др.,1975; Голубева и др., 1978; Исаева, 1980; Комиссарова, 1983; Нарциссов, 1984, 1988; Робинсон и др., 1986; Гольдберг, Новицкий, 1986; Нагоев, 1988; Летягин, Шурлыгина, 1987).

Для достижения цели были поставлены следующие задачи.

2. Определить возрастные особенности клеточного состава крови тюленей.

4. Выявить изменения гематологических показателей при адаптации дельфинов и тюленей к условиям неволи.

Научная новизна результатов работы. Впервые в природных условиях и у адаптирующихся к неволе тюленей выявлено уравнивание на определенных-этапах индивидуального развития числа лимфоцитов и нейтрофилов -"физиологический перекрест" лейкоцитарной формулы крови, обусловленный формированием системы специфического иммунитета. Установлено, что изменения клеточного состава крови у тюленей на ранних этапах адаптации к условиям неволи (3 недели) в значительной степени обусловлены стрессом. После 10-12 месяцев адаптации цитохимическая структура популяции лимфоцитов крови стабилизируется.

Показано, что лимфоциты дельфинов афалин различаются по количеству и характеру внутриклеточного распределения окрашенных продуктов цитохимических реакций на неспецифическую эетеразу, сукцинатдегидрогеназу, НАДН- и НАДФН-тетразолий редуктазы, гликоген, нуклеиновые кислоты, в состав популяции лимфоцитов периферической крови афалин входят две группы клеток - с высокой и с низкой активностью неспецифической эстеразы и дегидрогеназ, аналогичные выявляемым у наземных млекопитающих. Установлено, что корреляции между цитохимическими характеристиками популяции лимфоцитов афалин соответствуют особенностям внутриклеточных метаболических процессов. Найдено, что состав популяции лимфоцитов по активности неспецифической эстеразы и сукцинатдегидрогеназы, сила и направленность корреляций параметров распределения лимфоцитов по активности этих ферментов и числа гликогенсодержащих лимфоцитов различны у здоровых, больных инфекционными заболеваниями, адаптированных и не адаптированных к условиям неволи афалин.

Впервые проведено комплексное исследование морфологических и структурно-метаболических показателей клеточного состава крови в процессе систематического наблюдения за группами морских млекопитающих, пребывающих в различных условия. Показаны пути адаптации, связанные с водным образом жизни, сходные у китообразных и ластоногих.

Полученные материалы используются при чтении лекционных курсов и проведении практических занятий для студентов биологического факультета Мурманского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Период становления костномозгового кроветворения у детенышей тюленей занимает относительно большую часть раннего постнатального онтогенеза, чем у наземных млекопитающих, в связи с меньшим количеством костного мозга и длительным голоданием перед началом самостоятельного питания после молочного вскармливания.

Апробация материалов диссертации. Результаты работы докладывались и обсуждались на 8 и 9 Всесоюзных совещаниях по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих (Астрахань, 1982; Архангельск, 1986); I съезде анатомов, гистологов, эмбриологов Белоруссии (Минск, 1984); Всесоюзной конференции по физиологии морских животных (Мурманск, 1989); Международном симпозиуме по изучению морских млекопитающих (Tromso, Норвегия, 1994); евро-американском конгрессе по изучению млекопитающих (Santiago de Compostela, Испания, 1998); VI и VII съездах Териологического общества РАН (Москва, 1999, 2003); международных научно-технических конференциях "Наука и образование" (Мурманск, 2005, 2007); I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); 13 Международном совещании по эволюционой физиологии (СПб, 2006); Международной научно-практической конференции "Морские биотехнические системы. Биологические и технические аспекты" (Ростов-на-Дону, 2008); II международной конференции "Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных" (Саранск, 2009); 4 международном симпозиуме "Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введенных в зоокультуру" (Петрозаводск, 2009); на I-VI конференциях "Морские млекопитающие Голарктики" (Архангельск, 2000; Иркутск, 2002; Коктебель, 2004; Санкт-Петербург, 2006; Одесса, 2008; Калининград, 2010).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Кавцевич, Николай Николаевич

ВЫВОДЫ

4. У всех исследованных видов морских млекопитающих выявлены лимфоциты, сходные с Т-лимфоцитами-супрессорами, нулевыми лимфоцитами и Т-клетками-киллерами по парануклеарно локализованным скоплениям окрашенного продукта цитохимической реакции на неспецифическую эстеразу. Возрастание их числа у дельфинов сопряжено с увеличением числа гликогенсодержащих лимфоцитов и снижением активности сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов.

6. В состав популяции лимфоцитов периферической крови афалин входят 2 неравные по объему группы клеток. Численно преобладает субпопуляция с относительно низкой активностью НЭ, СДГ, НАДНр и НАДФНр. НАДФН-тетразолий редуктаза играет роль признака-индикатора в комплексе цитохимических реакций, включающем определение активности НЭ, СДГ, НАДНр, НАДФНр и содержания нуклеиновых кислот. Корреляции между характеристиками распределения лимфоцитов по этим цитохимическим признакам отражают ход внутриклеточных метаболических процессов. 7. Здоровые и больные, адаптированные и неадаптированные к неволе афалины различаются формой распределения лимфоцитов по активности НЭ и СДГ, силой и направленностью корреляций между параметрами распределения лимфоцитов по активности НЭ и СДГ и числом гликогенсодержащих лимфоцитов. Эти различия могут быть использованы для оценки течения периода адаптации к условиям неволи и отбора наиболее адаптированных особей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Первое исследование гемопоэза морских млекопитающих было выполнено В. Кноллем (Knoll, 1939, 1942), на плодах амазонского дельфина {Inia geoffrensis), дельфина {Delphinus spec.), обыкновенной морской свиньи (Phocoena phocoena) и кашалота (Physeter catodon) среди зубатых китов и финвала (Balaenoptera physalus) и синего кита (.Balaenoptera musculus) среди усатых китов, фиксированных в формалине и затем хранившихся в этиловом спирте. Кнолль обнаружил эритропоэз в гистологических препаратах печени, селезенки и тимуса этих животных, в то время как в позвоночнике и ребрах плодов почти полного срока никаких следов гемопоэза не было. Эти результаты, объединенные с обнаружением предшественников эритроцитов - мегалобластов и нормобластов (нормоцитов, по современной терминологии) в крови взрослых животных, подкрепили гипотезу Кнолля, о том, что взрослые киты имеют эритропоэз эмбрионального типа, как у человеческих плодов между пятым и седьмым месяцами.

Более поздние исследования показали, что в кроветворных органах дельфинов присутствуют те же типы клеток, что и у наземных млекопитающих (Monte, Pilleri, 1968), а необычные сдвиги в клеточном составе крови обусловлены изменениями при агонии, поскольку материал для иследования получали от животных, добытых на промысле.

Морфологическое исследование крови морских млекопитающих, как правило, рассматривают в качестве "рутинного" метода, позволяющего определять соотношение лейкоцитов различных типов при ветеринарном обслуживании животных. В последние годы все более широко применяются автоматические счетчики, позволяющие быстро проводить анализы большого количества материала, но не дающие возможности выявлять тонкие особенности в клеточном составе и строении клеток. Так, в одной из немногих работ по гематологии гренландского тюленя и тюленя хохлача (Boily et al., 2006) дифференцированный подсчет лейкоцитов осуществлялся с помощью автоматического анализатора. В результате количество эозинофилов, по данным этих авторов, оказалось заниженным в несколько раз, учитывая, что взятие крови производилось стандартным способом и не вызывало стресса, при котором уровень эозинофилов падает. Результаты нашей работы свидетельствуют, о том, что и у гренландского тюленя, и у хохлача содержание эозинофилов выше, чем считалось ранее. Высоко оно и у тюленей других исследованных нами видов. При обычном микроскопическом (не автоматическом) исследовании эти ярко окрашенные клетки отнести к другому типу лейкоцитов невозможно. Высокий процент эозинофилов считается нормой для китообразных, что используется при диагностике и прогнозе стрессовых состояний. Здесь следует заметить, что мелкие китообразные (афалина, гринда, косатка и другие дельфины) - обычные обитатели океанариумов и аквапарков (Клумов, Соколов, 1971). Длительное содержание тюленей практикуется в гораздо меньшей степени и, соответственно этому, гематологические исследования этих животных в стационарных условиях более редки.

Для представителей изученных видов морских млекопитающих характерен гранулоцитарный профиль лейкоцитарной формулы крови. Однако в некоторые периоды раннего постэмбрионального развития у серых, гренландских и тюленей хохлачей число лимфоцитов достигает уровня нейтрофилов. Это явление, "физиологический перекрест лейкоцитарной формулы крови", отмечено у ряда видов наземных млекопитающих и у птиц (кур). В раннем постнатальном онтогенезе наиболее детально оно исследовано лишь у человека (Гематология детского возраста, 1998). В первые дни жизни среди лейкоцитов преобладают нейтрофилы. На 4-е сутки количество лимфоцитов и нейтрофилов уравнивается (первый физиологический перекрест). Вследствие роста числа лимфоцитов, в возрасте 1-2 года лимфоциты составляют 65%, нейтрофилы - 25%. В дальнейшем относительное число лимфоцитов постепенно снижается, и в 4 года наступает второй физиологический перекрест — количество лимфоцитов и нейтрофилов становится одинаковым, а окончательно нейтрофильный профиль устанавливается к 14 - 15 годам, т.е., при половом созревании. Клеточный состав крови человека с 16 - 18 до 60 лет в норме остается стабильным (Бобова и др., 2003).

Согласно результатам наших исследований (раздел 4.2), у гренландских тюленей физиологический перекрест наблюдается в 2-3 недели, а уже в возрасте 1.5 месяцев они имеют нейтрофильный профиль крови. У серых тюленей численность гранулоцитов и лимфоцитов уравнивается в 1.5-2 месяца, а в возрасте 3-4 месяца лейкоцитарная формула уже не отличается от таковой взрослых животных. У тюленя хохлача физиологический перекрест лейкоцитарной формулы крови отмечен также в возрасте 1.5 месяца, перед началом самостоятельного кормления водными организмами. Однако у всех изученных детенышей тюленей отмечаются низкодифференцированные клетки -метамиелоциты и предшественники эритроцитов, содержащие ядро. Это можно рассматривать как одно свидетельств незавершенности процессов становления костномозгового кроветворения. Из-за необходимости быстрого перехода к самостоятельному питанию а также меньшего количества костного мозга у морских млекопитающих эти процессы продолжаются и в начальный период водного образа жизни.

Выявление особенностей структуры популяции лимфоцитов и их функционально-иммунологическая интерпретация - одна из актуальных задач исследования морских млекопитающих. В данной работе она была решена в той степени, в которой это позволяет сделать современный уровень изученности лимфоидной системы морских млекопитающих. Различия внутриклеточного обмена веществ лимфоцитов связаны с их специализацией при осуществлении иммунологических функций. Однако эта связь опосредованна. В работах Р.П.Нарциссова (1969-1984) и других авторов сформировалось понятие о лимфоците как "ферментном зеркале" организма. Воздействие факторов различной природы, способных существенно влиять на состав внутренней среды организма, проявляется в изменении метаболического состояния лимфоцитов, от которого, в свою очередь, зависят течение и эффективность иммунологических процессов.

Результаты ряда исследований свидетельствуют, что определенные цитохимические и биохимические различия между Т- и В-лимфоцитами существует не только у млекопитающих. Так, найдено, что у представителя класса земноводных, обыкновенной жабы, активность неспецифической эстеразы в Т-лимфоцитах так же, как у человека, обезьяны и мыши, выше, чем в В-клетках ( Garavini, 1981). Состав изоферментов лактатдегидрогеназы в Т- и В-клетках человека (Матвейков и др., 1981; Ringoir, Plum, 1975) и аксолотля ( Guillet, Tournefier, 1981) сходен. Однако строгого доказательства существования фундаментальных, свойственных всем животным с развитой лимфоидной системой метаболических различий между лимфоцитами, выполняющими определенные иммунологические функции, нет. Напротив, исследования лимфоцитов наземных млекопитающих свидетельствуют, что характер взаимосвязи цитохимических и иммунологических признаков, уровень метаболических характеристик лимфоцитов зависят от видовой принадлежности животных. Поэтому вопрос о соотношении иммунологических и цитохимических свойств лимфоцитов должен решаться для каждого вида в отдельности. Субпопуляции лимфоцитов с парануклеарным и гранулярным типами эстеразной реакции выделены нами при морфологическом исследовании на основании данных литературы. Впоследствии было найдено, что число лимфоцитов с парануклеарной реакцией (ПН) коррелирует о числом ШИК-положительных лимфоцитов. Процент ПН лимфоцитов у больных афалин выше, а активность сукцинатдегидрогеназы, наоборот, ниже, чем у здоровых. У самок в период беременности число ПН лимфоцитов скачкообразно повышалось. В литературе тип эстеразной реакции лимфоцитов, при котором большая часть цитоплазмы напротив выемки в ядре заполнена окрашенным её продуктом, обозначают как "глобулярный" ( Treves, AliKhan, 1983), "крупногранулярный" (Уманский и др., 1981), "парануклеарный". Последний термин используется авторами, представившими ультраструктурные и иммунологические характеристики лимфоцитов с таким и другими типами реакции ( Реггапш е1 а1., 1980; 2юса е! а1., 1981). Согласно данным этих авторов, нулевые клетки в Т-лимфоциты-супрессоры проявляет эстеразную реакцию парануклеарного типа. Такой же тип реакции в нулевых лимфоцитах и Т-лимфоцитах-супрессорах дают Р-глюкуронидаза и кислая фосфотаза (Реггапш е! а1., 1980). В клинических исследованиях определение содержания лимфоцитов с крупными гранулами продукта реакции на неспецифическую эстеразу и кислую фосфатазу используется в качестве замены иммунологических тестов по выявлению Т-лимфоцитов-супрессров и нулевых лимфоцитов (Соколов, Иванова, 1982; Болтовский и др., 1985; Виксман и др., 1985). Повышенное содержание лимфоцитов с высокой активностью другого лиззосомного фермента, кислой фосфатазы, является неблагоприятным признаком при предсказании исхода вакцинации или экспериментальной иммунизации (Комиссарова, Кудряшова, 1970; Тареев, Комиссарова, 1982). У беременных женщин снижено количество Т-лимфоцитов, повышена активность Т-супрессоров и число нулевых лимфоцитов (Гулянский, 1978; Фогел, 1982). Тем не менее, отождествлять лимфоциты афалин с парануклеарной эстеразной реакцией с Т-клетками-супрессорами или нулевыми лимфоцитами только по сходству топографии внутриклеточного распределения окрашенного продукта реакции и некоторым косвенным признакам нет оснований.

Выявленные нами корреляция между параметрами, отражающими состав популяции лимфоцитов афалин, можно рассматривать как частный случай проявления известных закономерностей внутриклеточного метаболизма. Однако наличие их у афалин нельзя считать очевидным. Накапливаются данные о существовании у водных млекопитающих особенностей обмена веществ, 1 отличающих их от наземных животных. Так, П.В. Хочачка и соавторы (НосЬасЬка е! а1., 1975) в результате исследования накопления конечных продуктов анаэробиоза у двух видов тюленей и афалины высказали предположение о том, что помимо гликолиза у ныряющих млекопитающих могут существовать другие, связанные с расщеплением аминокислот источники энергии. Кроме того, по мнение этих авторов, у водных млекопитающих повышена активность ферментов анаэробного гликолиза. Приводится и противоположная точка зрения, согласно которой особых метаболических приспособлений, существенно отличающих их от наземных млекопитающих, у китов и тюленей нет. Большие запасы гликогена, быстрый переход при нырянии на анаэробный путь метаболизма наряду со снижением основного обмена, перераспределением крови, большими запасами и высокой эффективностью утилизации кислорода считают достаточными предпосылками для обеспечения длительной задержки дыхания (Castellini , 1985, 1988; Eisner, 1988). Однако достаточно убедительного подтверждения ни у одной из этих гипотез нет. В то же время существенно, что даже у норок, околоводных животных, активность пятой фракции лактатдегидрогеназы, обеспечивающей анаэробный путь гликолиза, выше, чем у песцов (Кожевникова и др., 1982).

Морским млекопитающим присущи определенные особенности обмена липидов. В частности, в сыворотке крови дельфинов и тюленей выявлено повышенное по сравнению с наземными млекопитающими содержание свободных жирных кислот, общих липидов, холестерина (Постоянова, Короткое, 1989). Количество последнего а также фосфолипидов коррелирует со способностью к длительной задержке дыхания (Солдатов, Богданова, 1989). М.В. Левитиной (1989) установлено, что у кольчатой нерпы в головном мозге, органе, в наименьшей степени подвергающемся гипоксии, более низок, чем у наземных млекопитающих, процент липидов, содержащих гидроксикислоты, и наоборот, высока пропорция насыщенных жирных кислот. Это объясняют снижением активности соответствующих ферментов в связи с водным образом жизни. Особенностью морских млекопитающих является также повышенный уровень начальных продуктов перекисного окисления липидов и как приспособление к нему - высокая активность ферментов антиоксидантной системы (Рецкий и др., 1989). При длительной гипоксии развивается типичная стресс-реакция, повышается перекисное окисление липидов, выделяются аутоантителоподобные факторы, т.е. развиваются процессы, влияющие на состояние лимфоидной системы.

Согласно результатам настоящей работы, уровень окислительных процессов в лимфоцитах афалин высок. Если средняя активность сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов здоровых детей составляет 12.9±0.7 гранул на клетку (Соколов и др., 1975), кроликов - 8-12 (Голубева и др., 1978), морских свинок - 10.4-12.7 (Смирнов др., 1983), мышей - 15-16 (Катосова и др., 1975), то здоровых афалин -более 20 гранул. При исследовании дегидрогеназ лимфоцитов крови человека и лабораторных животных найдено, что большая часть популяции 70-95% представлена клетками с относительно низкой активностью ферментов (Катосова, 1971; Михайлова и др., 1972; Нарциссов, 1978; Робинсон и др., 1986; Летягин, Шурлыгина, 1978). В.В. Соколовым и соавторами (1975), применившими один из методов разложения распределения лимфоцитов по активности ферментов на нормальные компоненты, найдено, что доля клеток с высокой активностью сукцинат-, лактат-, Р-глицерофосфатдегидсогеназы составляет 5-12%. Сходный результат получен нами при анализе субпопуляционного состава лимфоцитов афалин.

Согласованность числа лимфоцитов с высокими значениями цитохимических признаков свидетельствует о том, что в популяции лимфоцитов афалин существуют клетки, имеющие высокий или низкий уровень одновременно нескольких метаболических характеристик. В цитохимических исследованиях лимфоцитов складывается комплекс признаков, по которому различаются циркулирующие Т- и В-лимфоциты - высокая и низкая активность гидролитических и окислительных ферментов, неодинаковое количество и скорость синтеза РНК и некоторые другие. Однако, как отмечалось в начале раздела, судить о соотношении Т- и В-лимфоцитов по результатам цитохимического исследования без дополнительных исследований иммунологическими методами неправомочно.

Гематологические исследования морских млекопитающих достаточно многочисленны. Однако изучение клеток осуществляется, как правило, при помощи "рутинных" методов (в частности, это определение числа эритроцитов, гематокрита, количества гемоглобина, дифференцированный подсчет клеток и некоторые другие). Из-за трудностей в получении материала группы животных редко бывают достаточно однородными и представительными для сравнительных исследований. В данной работе, кроме традиционных методов анализа клеток крови, применены цитохимические а также морфометрические методы, позволяющие определять, физиологическое состояние клеток в связи с состоянием организма в целом. Не менее существенно то, что изучались достаточно однородные группы животных (по возрасту, состоянию здоровья, времени пребывания в неволе). Отмеченные условия исследований позволили получить новые сведения об особенностях клеточного состава крови тюленей и дельфинов, отражающие определенные изменения состояния организма. Полученные результаты могут служить основой для разработки критериев оценки состояния системы крови и лимфоидной системы морских млекопитающих и применения их в сравнительных исследованиях.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Кавцевич, Николай Николаевич, Мурманск

1. Абрамов М. Г. Гематологический атлас. М.: Медицина, 1985. 344 с.

2. Автандилов Г.Г., Суханов С.Г. Методика расчета сложности морфологических систем при „ морфометрических исследованиях // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1982, № 8. С. 77-80.

3. Алешкин В. А., Новикова Л. И., Лютов А. Г., Алешкина Т. Н. Белки острой фазы и их клиническое значение // Клин. мед. 1988. Т. 66, № 8. С. 39-48.

4. Алмквист Л., Олссон М., Тормосов Д.Д., Яблоков A.B. Состояние популяции и проблемы охраны тюленей Балтики // Зоол. журн. 1987. Т. 66, № 4. С. 588-598.

5. Амосова A.B., Подугольникова O.A., Каминер Л.Б. Количественная оценка площади Ag-окрашенных ядрышкообразующих районов хромосом человека // Цитология. 1986. Т. 28, № 1. С. 113-116.

6. Анбиндер Е.М. Кариология и эволюция ластоногих. М.: Наука, 1980. 152 с.

7. Андреев О.М. Динамика плотности эозинофилов периферической крови как тест-стандарт для оценки адаптивных состояний // Морфофизиологические критерии адаптивных состояний: Науч. Тр. Иркутск. Мед. Ин-та. 1979. Вып. 146. С. 5-10.

8. Атлас морских млекопитающих СССР. М.: Пищевая промышленность, 1980. 184 с.

9. Балаж А., Блажек П. Эндогенные ингибиторы клеточной пролиферации. М.: Мир, 1982. 302 с.

10. Беликова В.В. Энзиматический статус лейкоцитов периферической крови у детей, больных бронхиальной астмой: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Запорожье, 1974. 18 с.

11. Белькович В.М., Гуревич B.C. Отлов, транспортировка и медицинское обслуживание дельфинов // Тез. докл. IV Всесоюз. совещ. по изучению морских млекопитающих. М., 1969. С. 91-96.

12. Белькович K.M., Гуревич B.C. Вопросы отлова и длительного содержания дельфинов в неволе // Исследования морских млекопитающих / Тр. АтлантНИРО. 1971. Вып. 34. С. 286-295.

13. Бережков Н.В. Pit-клетки тканевая форма больших гранулосодержащих лимфоцитов с естественной киллерной активностью // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1991. Т. 100, № 3. С. 5-15.

14. Березин В.В. Проблемы охраны здоровья морских млекопитающих // X Всесоюз. совещ. по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих, г. Светлогорск, 2-5 октября 1990 г.: Тез. докл. М., 1990. С. 19-21.

15. Бессарабов Б.Ф., Клепикова Л.В., Копоть О.В. Защитные механизмы птицы в постэмбриональном периоде развития // Птицеводство. 2009. № 10. С. 46-49.

16. Бианки В. В., Карпович В. Н. Влияние аномальной ледовитости Белого моря и Мурмана в 1966 году на птиц и млекопитающих // Зоол. журн. 1969. Т. 48, вып. 6. С. 871-875.

17. Биркун A.A. Микробиологический аспект адаптации дельфинов к условиям неволи // IX Всесоюз. совещ. по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих, 9-14 сентября 1986 г., г. Архангельск: Тез. докл. Архангельск, 1986. С. 41^43.

18. Биркун A.A., Милосердова H.A. К характеристике микрофлоры китообразных Черного моря // Гидробиол.журн. 1989.Т. 25, № 5. С. 38-42.

19. Бобова Л.П., Кузнецов С.Л., Сапрыкин В.П. Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза. М.: ООО "Изд-во Новая волна", 2003. 157 с.

20. Бобовникова Ц.И., Вирченко Е.П., Дибцева A.B. и др. Водные млекопитающие индикаторы присутствия хлорорганических пестицидов иполихлорированных бифенилов в водной среде // Гидробиол. журн. 1986. Т.22, №2. С. 63-65.

21. Богданова JI.H., Лебедев В.Г. Некоторые клинические показатели крови черноморских дельфинов // Морфология и экология морских млекопитающих (дельфины). М.: Наука, 1971. С. 126-129.

22. Болтовский В.М., Захарова Т.Р., Титова Н.С. и др. Иммуноцитохимические показатели коревого вакцинального процесса // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1985. № 8. С. 54-57.

23. Букина Л.А. Фагоцитарная реакция крови у детенышей северного морского котика // IX Всесоюз. совещ. по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих, 9-14 сентября 1986 г., г. Архангельск: Тез. докл. Архангельск, 1986. С. 60-61.

24. Бурдин A.M., Филатова O.A., Хойт Э. Морские млекопитающие России: справочник-определитель. Киров: ОАО "Кировская областная типография", 2009. 208 с.

25. Бутенко З.А., Глузман Д.Ф., Зак К.Н. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев: Наукова думка, 1974. 248 с.

26. Виксман М.Е., Бендукидзе Н.Г., Бериашвили Н.Д. Определение иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов у детей с помощью эстеразной метки // Вопр.охр.материнства и детства. 1985. Т. 30. С. 14-17.

27. Воронков A.C. Лечение заболевания афалины, вызванного микробами ешерихиа коли и протеус мирабилис // Морские млекопитающие: Тез. докл. 10 Всес. совещ. по изуч., охране и рац. исп. мор. млек. Светлогорск, М. 1990. С. 64.

28. Воронков A.C. Содержание и профилактика заболеваний черноморских афалин в океанариумах // Автореф. дис. . канд.биол.наук. Всерос. с.-х. ин-т заочного образования. М. 1992 16 с.

29. Воронцова М.Н., Черноок В.И., Глазов Д.М., Филиппова A.B. Современные угрозы выживания беломорской популяции гренландского тюленя // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. научн. тр. Одесса, 2008. С. 586-592.

30. Галактионов В.Г. Эволюционная иммунология: Учеб. пособие. М.: ИКЦ "Академкнига", 2005. 408 с.

31. Галиновская Л.В., Леонтюк A.C., Матишева С.К., Сыкало А.И., Ожаровская Л.В., Шапунов В.М. Некоторые аспекты размножения дельфина афалины // Морские млекопитающие: Тез. докл. VII Всес. совещ. (г.Симферополь, 20-23 сент. 1978 г.). М., 1978 С. 80-81.

32. Гдовский П.А., Флеров Б.А. Физиолого-биохимические механизмы действия хлорорганических соединений у водных животных // Гидробиол. журн. 1979. Т. 15, №6. С. 76-85.

33. Гематология детского возраста: руководство для врачей. СПб.: Гиппократ. 1998. 544 с.

34. Глузман Д.Ф. Диагностическая цитохимия гемобластозов. Киев: Наукова думка, 1978. 216 с.

35. Глушен C.B. Автоматический анализ размеров ядер лимфоцитов периферической крови морских млекопитающих // Тез. докл. 8 Всес. совещ. по изуч., охране и рац. исп. морских млекопит., 5-8 окт. 1982г., г. Астрахань: 1982. С. 93-94.

36. Говалло В.И. Иммунитет к трансплантатам и опухолям. Киев: Вища школа, 1977. 384с.

37. Говалло В.И. О взаимоотношениях сывороточных и клеточных показателей иммунитета при беременности // Акушерство и гинекология. 1975. №1. С. 1216.

38. Гольдберг Е.Д., Карпова Г.В., Мелик-Гайказян Е.В., Пахреева Г.Н. Содержание лизосомального фермента кислой фосфатазы в лимфоидных органах в норме и при экстремальных состояниях в эксперименте // Структура и функции лизосом. Новосибирск, 1980. С. 54.

39. Гольдберг Е.Д., Карпова Г.В., Мелик-Гайказян Е.В., Пахряева Г.Н. О содержании кислой и щелочной фосфатазы в лимфоидных элементах периферической крови и кроветворных органов у интактных крыс и мышей // Бюлл.экспер.биол. 1978. Т. 85, №3. С. 158-159.

40. Горышина E.H., Чага О.Ю. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии. Д.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1990. 320 с.

41. Гулянский Л.Н. Влияние гормонов на клеточный и гуморальный иммунитет при беременности // Акушерство и гинекология. 1978. №9. С. 1-5.

42. Денисенко Т.Е. Микрофлора черноморской афалины (Tursiops truncatus) в различные периоды адаптации к условиям неволи: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Моск. гос. акад. вет. мед. и биотехнол., Москва, 2003. 20 с.

43. Дозморов И.М. О возможности отождествления субпопуляций лимфоцитов с различными функциями // Иммунология. 1985. № 3. С. 94-96.

44. Дуглас С. Д., Куи П. Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике. М., 1983. 325 с.

45. Ездакова И.Ю., Соколова О.В. Изучение морских млекопитающих новое направление экологической иммунологии // Ветеринария и кормление. 2008. №4. С. 14-15.

46. Ерохина И. А. Аминокислотный состав сыворотки крови щенков гренландского тюленя в период адаптации к неволе // Укр. биох. ж. 1998. Т. 70, №5 С. 153-165.

47. Ерохина И.А., Кавцевич H.H. Состав и свойства белков сыворотки крови щенков гренландского тюленя Pagophilus groenlandicus в период адаптации к неволе // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1998. Т. 34, № 6. С. 654660.

48. Ефимочкина Т.К. Содержание нуклеиновых кислот в лимфоцитах периферической крови больных красной волчанкой // Патогенез и терапия кожных и венерических болезней. Горький, 1974. С. 46-49.

49. Жарикова H.A. Эмбриогенез лимфатических узлов водных млекопитающих // VIII Всесоюз. совещ. по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих, 5-8 октября 1982 г., г. Астрахань: Тез. докл. Астрахань, 1982. С. 120-121.

50. Жарикова H.A., Сыкало А.И. Гемопоэз в эмбриональной печени водных млекопитающих // VIII Всесоюз. совещ. по изучению, охране ирациональному использованию морских млекопитающих, 5-8 октября 1982 г., г. Астрахань: Тез. докл. Астрахань, 1982. С. 121-122.

51. Журавлева Т.Б., Прочуханов P.A. Значение количественной энзимологии для функционально-морфологического анализа различных биологических систем // Введение в количественную гистохимию ферментов М.: Медицина, 1978. С. 200-219.

52. Зававрзин A.A. Основы сравнительной гистологии. JL: Изд-во Ленингр. ун-та, 1985. 400 с.

53. Зак К.П., Бутенко А.К. "Большие гранулосодержащие лимфоциты" новое понятие в гематологии и иммунологии // Гематол. и трансфузиол. 1985. Т. 30, №9. С. 45-53.

54. Захарова Т.И., Дралкин A.B. Болезни кожи китообразных // Ветеринария. 1985. №4. С. 36-39.

55. Исаева Э.Г. Популяционные и цитохимические особенности центральных и периферических лимфоидных органов в динамике развития инфекционного и неинфекционного иммунитета. Автореф. дис. . докт. мед. наук: Киев, 1980. 33 с.

56. Исанин H.A., Яковлев А.Ю. Участие лизосомного аппарата клеток в регуляции клеточной пролиферации // Цитология. 1977. Т. 19, № 6. С. 575584.

57. Кавцевич H.H. Гетерогенность лимфоцитов крови черноморской афалины по цитохимическим признакам // Морфогенез органов и регулирующих систем в норме и эксперименте: Сб.трудов Минского гос. мед. ин-та. Минск, 1985. С. 135-138.

58. Кавцевич H.H. Применение модифицированной методики для выявления неспецифической эстеразы в лимфоцитах морских млекопитающих // Физиология морских животных: Тез. докл.Всес. конф., г.Мурманск, 1989г. Апатиты, 1989. С. 162.

59. Кавцевич H.H. Некоторые результаты исследования лейкоцитов морских млекопитающих // Эколого-физиологические исследования млекопитающих северных морей. Апатиты, 1992. С. 8-19.

60. Кавцевич H.H. Клеточный состав крови гренландских тюленей различного возраста // Доклады РАН. 2001. Т. 380, № 2. С. 280-282.

61. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Биохимические и цитологические исследования морских млекопитающих в Арктике. Апатиты: Изд-во КНЦ РАН, 1996. 170 с.

62. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. Некоторые особенности состава крови щенков гренландского тюленя, совершающих аномальные миграции // Современные проблемы физиологии и экологии морских животных. Апатиты: Изд. КНЦ РАН, 2003. С. 174-185.

63. Кавцевич H.H., Ерохина И.А. К вопросу об оценке жизнеспособности щенков тюленей по некоторым параметрам крови // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2009. № 3. С. 3-8.

64. Кавцевич H.H., Ерохина И.А., Мишин B.J1. Результаты обследования гренландского тюленя беломорской популяции в 1991-1992 гг. Апатиты: Изд-во КНЦ РАН, 1993. 18 с.

65. Кавцевич H.H., Матишов Г.Г., Кондаков A.A. Под дождем в полярную ночь на Айновых островах // Природа. 2007. № 7. С. 74-78.

66. Кавцевич H.H., Минзюк T.B. Клеточный состав крови серых тюленей различного возраста // Доклады РАН. 2010. Т. 432, № 4. С. 552-555.

67. Каганова Н.В. Методика определения степени стрессоустойчивости афалин (Tursiops truncatus) // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. научн. тр. по материалам 6 международной конференции. Калининград, 11-15 октября 2010 г). Калининград, 2010. С. 242-245.

68. Кадыров Х.К., Антомонов Ю.Г. Синтез математических моделей биологических и медицинских систем. Киев: Наук, думка, 1974. 223 с.

69. Караулов A.B., Сильвестров В.П., Хроменков Ю.И. и др. Исследование активности цитохрома Р-450 в субпопуляциях иммунокомпетентных клеток // Иммунология. 1984. №4. С. 30-32.

70. Катосова JI.K. Цито- и гистохимическое изучение лимфоцитов и некоторых органов при иммунизации и гиперчувствительности замедленного типа в эксперименте. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1971. 20 с.

71. Катосова JI.K., Катосова Р.К., Левина Л.А., Нарциссов Р.П. Преморбидный прогноз исхода и диагностика токсикоинфекций по энзиматическому статусу лимфоцитов и нейтрофилов крови // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1975. № 1. С. 75-78.

72. Катосова Р.К. Прогноз и диагностика инфекционного процесса по состоянию некоторых ферментных систем лейкоцитов крови (экспериментальное цитохимическое исследование): Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1974. 20 с.

73. Катосова Р.К., Ченчикова Э.П. Гистохимическое изучение некоторых дегидрогеназ в органах морских свинок при гиперчувствительности замедленного типа // Бюлл. эксперим. биол. 1972. № 2. С. 35-38.

74. Киндзельский Л.П., Бутенко А.К. Естественные клетки-киллеры и их роль в противоопухолевой защите организма // Эксперим. онкол. 1983. Т. 5, № 3. С. 3-10.

75. Кисляк Н.С., Ленская Р.В. Клетки крови у детей в норме и патологии. М.: Медицина, 1978. 176 с.

76. Кисляк Н.С., Самочатова Е.В., Ильин Л.Б. Цитохимическая характеристика лимфоцитов периферической крови у детей раннего возраста после вакцинации АКДС // Тр. II Моск. мед. ин-та. Сер. Педиатрия. М., 1974. Вып. 4. С. 108-113.

77. Клумов С.К., Соколов В.Е. Океанарии США и Японии // Экология и морфология морских млекопитающих. М.: Наука, 1971. С. 153-172.

78. Кожевникова Л.К., Осташкова В.В., Поспелов Н.И. Особенности энергетического обмена у ныряющих и сухопутных млекопитающих // Вопросы эволюционной физиологии: Тез. сообщ. 8 совещ. Л., 1982. С. 89-90.

79. Колесса О.В. Пролиферативная гетерогенность лимфоцитов как тест на выживаемость афалин в условиях неволи // Тез. 9 Всес.совещ.по изуч., охране и рац.исп.морских млекопит., 9-14 сент. 1986г., г.Архангельск. Архангельск, 1986. С. 201-202.

80. Комар В.Е. Молекулярные механизмы вступления клеток в митотический цикл // Современные проблемы регенерации. Йошкар-Ола, 1980. С. 184-190.

81. Комиссарова И.А., Кудряшова Н.М. Активность окислительных ферментов и кислой фосфатазы в лимфоцитах крови у детей после введения антигенных препаратов // Педиатрия. 1970. № 4. С. 31-36.

82. Коржуев П.А., Глазова Т.Н. Биохимический аспект адаптации китообразных // Морфология и экология морских млекопитающих (дельфины). М.: Наука, 1971. С.130-135.

83. Красная книга Мурманской области / Коллектив авторов. Мурманск: Мурманское книжное изд-во, 2003. 400 с.

84. Краснов Ю.В., Николаева Н.Г. Об аномальных миграциях гренландского тюленя в Белом море // Бюлл. МОИП. Отд. Биол. 2001. Т. 106. Вып. 2. С. 7-13.

85. Краткая медицинская энциклопедия: в 3-х томах, АМН СССР. М.: Советская энциклопедия. Т. 1. 1989. С. 513.

86. Кудрявцев A.A., Кудрявцева JI.A., Привольнев Т.И. Гематология животных и рыб. 1969. М.: Колос. 320 с.

87. Левитина М.В. О гликолипидах головного мозга байкальской нерпы в связи с адаптацией к нырянию // Физиология морских животных: Тез.докл. Всес. конф., Мурманск, 1989. Апатиты, 1989. С. 96.

88. Ленинджер А.Л. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. 1056 с.

89. Леонтюк A.C., Леонтюк Л.А., Сыкало А.И. Информационный анализ в морфологических исследованиях. Минск: Наука и техника, 1981. 160 с.

90. Летягин А.Ю., Шурлыгина Л.В. Структурно-временная организация иммунной системы // Функциональная морфология иммунной системы. Новосибирск: Наука, 1987. С. 179-236.

91. Лецкий В. Б. Цитохимические исследования лейкоцитов (методические рекомендации). Л.: Медицина, 1973. 33 с.

92. Линг Н.Р. Стимуляция лимфоцитов. М.: Медицина, 1971. 288 с.

93. Лойда 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. М.: Мир, 1982. 272с.

94. Лукьяненко В.И. Об антителообразовательной функции у дельфинов Phocoena phocoena // Докл. АН СССР. 1964. Т. 157, № 3. С. 737-739.

95. Лукьяненко В.И. Сравнительная характеристика гуморальных факторов естественного иммунитета дельфинов Phocoena phocoena // Журн. общ. биологии. 1965. Т.26, № 3. С. 372-374.

96. Луппа X. Основы гистохимии. М.: Мир, 1980. 343 с.

97. Львицина Г.М., Зарецкая Ю.С. Энзиматическая активность лимфоцитов как отражение их иммунореактивности при аллотрансплантации // Иммунология. 1980. № 6. С. 20-23.

98. Любин H.A., Конова Л.Б. Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у сельскохозяйственных и лабораторных животных при патологиях. Ульяновск: ГСХА, 2005. 113 с.

99. Малыгин A.M. Натуральные киллеры и их физиологическое значение // Цитология. 1985. Т. 27, № 10. С. 1091-1100.

100. Матвейков Г.П., Кошелев В.К., Петрович Э.И. и др. Результаты цитоиммунологических исследований при СКВ, РА, ССД // Клеточные факторы иммунитета в диагностике ревматических болезней. Новосибирск, 1981. С.80-84.

101. Матулис А., Карлене В. Соотношение нуклеиновых кислот в лимфоцитах крови больных ревматизмом // Ревматология. Вильнюс, 1977. С. 80-84.

102. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2 томах. 9-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1984. Т. 2. 576 с.

103. Маянская H.H., Панин Л.Е., Соболева И.Г. Новые данные об участии лизосом в активации хроматина // Тез.докл. V Всес. биохим. съезда. 1986. Т. 2. С. 282-283.

104. Мерецков В.В., Таршис И.А., Пинегин Б.В. Изучение активности ряда ферментов в Т- и B-лимфоцитах селезенки мышей СВА // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1979. №1. С. 91-94.

105. Мисюра А.Г., Богданова Л.Н. Система крови черноморской афалины // Черноморская афалина Tursiops truncatus ponticus: морфология, физиология, акустика, гидродинамика. М.: Наука, 1997. С. 186-213.

106. Михайлова З.М., Нарциссов Р.П., Катосова Л.К. Влияние иммунизации на ферментативную активность лимфоцитов и некоторых органов в эксперименте //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиологии. 1972. № 5. С. 106-112.

107. Млекопитающие Советского Союза / Под ред. В.Г. Гептнера. М.: Высшая школа, 1976. Т.2, ч. 3. 718 с.

108. Нарциссов Р.П. Применение п-нитротетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека // Архив анат., гистол.и эмбриол. 1969. № 5. С. 85-91.

109. Нарциссов Р.П. Диагностическая и прогностическая ценность цитохимического определения дегидрогеназ лимфоцитов // Вестн. АМН СССР. 1978. №7. С. 71-74.

110. Нарциссов Р.П. Прогностические возможности клинической цитохимии // Сов. педиатрия. Вып.2. М.: Медицина, 1984. С. 267-275.

111. Никитин В.Н. Гематологический атлас сельскохозяйственных и лабораторных животных. М.: СельхозГиз, 1956. 260 с.

112. Новиков Д.К., Новикова В.И. Клеточные методы иммунодиагностики. Минск: Беларусь, 1979. 188 с.

113. Орлов М.М., Мухля A.M., Постоянова Н.И., Каганова Н.В. Биохимическая адаптация китообразных при содержании в неволе // Ж. эвол. биохимии и физиологии 1991. Т. 27, № 4. С. 446-451.

114. Петров Р. В. Иммунология и иммуногенетика. М.: Медицина, 1976. 336 с.

115. Пирс Э. Гистохимия. М.: Изд. иностр. лит., 1962. 962 с.

116. Постоянова Н.И., Короткое C.B. Особенности липидного обмена у морских млекопитающих // Физиология морских животных: Тез. докл. Всес. конф. Мурманск, 1989. Апатиты, 1989. С. 112.

117. Потапова С.Г., Шахбазян Т.П., Демидова Н.В., Козинец Г.И. Цитохимическое изучение кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов // Лаб.дело. 1981. №2. С. 74-76.

118. Редкие и нуждающиеся в охране растения и животные Мурманской области. Мурманск, 1999. С. 105-107.

119. Рецкий М.И., Бузлама B.C., Мещеряков Н.П. и др. Перекисное окисление липидов и система антиоксидантной защиты у морских и наземных млекопитающих // Физиология морских животных: Тез. докл. Всес. конф., Мурманск, 1989. Апатиты, 1989. С. 110-111.

120. Риган Д., Сандерс Т.Г., Деникола Д.Б. Атлас ветеринарной гематологии. М.: Аквариум ЛТД. 2000. 135 с.

121. Робинсон М.В., Топоркова Л.Б., Труфакин В.А. Метаболизм и морфология лимфоцитов. Новосибирск: Наука, 1986. 128 с.

122. Розанов А .Я., Трещинский А. И., Хмелевский Ю.В. Ферментативные процессы и их коррекция при экстремальных состояниях. Киев: Здоровье, 1985. 208 с.

123. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир, 2000. 582 с.

124. Романов В.В. Иммунный статус афалин, содержащихся в неволе, как критерий инфекционной устойчивости. Дис. . канд. биол. наук, М.: 1991, 230 с.

125. Романов В.В., Сергиевская М.О. Динамика гематологических показателей черноморских афалин в ходе послеотловной адаптации // Физиология морских животных: Тез. докл. Всесоюз. конф., г. Мурманск, 1989. Апатиты: Изд-во КНЦ АН СССР, 1989. С. 112.

126. Романов В.В., Сыкало А.И. Возможности выделения субпопуляций лимфоцитов крови по энзимоцитохимическим признакам / Ред. журн. "Здравоохранение Белоруссии". Минск, 1984. 11 с. Деп. в ВНИИМИ 25.06. 84, ВД-8048.

127. Рубис И.Р. Изменения лейкергии, щелочной и кислой фосфатаз и сукцинатдегидрогеназы лейкоцитов периферической крови при ревматизме. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Иркутск, 1974. 24 с.

128. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям / Под ред. Л.Г. Смирновой и Е.А. Кост. М.: Медгиз, 1960. 963 с.

129. Сабанеева Е.В. Специфичность окрашивания ядрышковых организаторов азотнокислым серебром //Цитология. 1989. Т.31, № 1. С. 5-14.

130. Сиренко O.A., Худо лей B.B. Загрязнение гидросферы канцерогенными веществами и опухоли у рыб и моллюсков // Гидробиол.журн. 1979. Т. 15, № 5. С. 85-90.

131. Смирнов B.C., Мерецков В.В., Лебединский В.А., Гарин Н.С. Изменения активности некоторых дегидрогеназ в лимфоцитах морских свинок и кроликов после иммунизации сибиреязвенными вакцинами // Иммунология. 1983, №3. С. 43-46.

132. Созанский O.A., Терехов С.М. Клональный анализ межклеточной вариабельности функционирования ядрышкообразующих районов хромосом человека//Бюлл.эксп.биол.и мед. 1984. Т.108, № 5. С. 592-595.

133. Соколов В.В., Иванова Л.А. Цитохимическая маркировка и морфологическая характеристика субпопуляций лимфоцитов в норме и патологии // Лаб. дело. 1982. № 10. С. 11-14.

134. Соколов В.В., Нарциссов Р.П., Иванова Л.А. Цитохимия ферментов в профпатологии. М.: Медицина, 1975. 120 с.

135. Соколов В.Е. Фауна мира: Млекопитающие. М.: Агропромиздат, 1990. 254с.

136. Соколов В.Е., Шишков В.П., Березин В.В. Проблемы эпизоотологии и патологии диких теплокровных животных и охрана животного мира // Успехи современной биологии. 1988. Т. 105, вып. 2. С. 269-283.

137. Соколова О.В. Некоторые иммунологические и биохимические показатели у афалины (Tursiops truncatus) при адаптации к условиям жизни в неволе // Доклады РАН. 2004. Т. 395, № 4. С. 569-573.

138. Соколова O.B. Иммунный статус черноморской афалины (Tursiops truncatus ponticus Barabash, 1940) в период адаптации к условиям жизни в неволе. Дис. . канд. биол. наук, М.: 2006. 143 с.

139. Солдатов A.A., Богданова J1.H. Особенности липидного обмена у морских млекопитающих // Физиология морских животных: Тез. докл. Всес. конф., Мурманск, 1989. Апатиты, 1989. С. 109.

140. Справочник по болезням сельскохозяйственных животных / Н. А. Ковалев, И. М. Карпуть, М. В. Якубовский и др. / Под ред. И. С. Жарикова. Минск: Ураджай, 1985. 344 с.

141. Степанова O.A. Вирусные болезни морских млекопитающих // Экология моря. 1998. Вып. 47. С.56-59.

142. Стогний В.И., Голик В.П., Ткаченко В.В., Воропаева JÏ.B., Полякова C.B. Способ определения активности лизоцима в слюне и сыворотке крови // Лаб.дело. 1989. №8. С. 54.

143. Сыкало А.И., Герасимова Т.Н. Возможности ультраструктурного исследования клеток морских млекопитающих // Физиология морских животных: Тез.докл.Всес.конф., г.Мурманск, 1989г. Апатиты, 1989. С. 167-168.

144. Тамбовцев Б. М. Массовые подходы детенышей гренландского тюленя к берегам Белого моря // Рыбн. хоз-во. 1966. № 12. С. 17.

145. Таранов М. Т., Сабиров А. X. Биохимия кормов. М.: Агропромиздат, 1987. 224 с.

146. Тареев Е. М., Комиссарова И. А. Цитохимические изменения лимфоцитов периферической крови в процессе иммуногенеза и при аутоиммунных заболеваниях // Морфологические основы клинической и экспериментальной патологии. М., 1972. С. 69-73.

147. Татишвили Н. Н., Бакрадзе Н. Д. Гистохимическое изучение фосфатаз при иммуногенезе // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1966. Т. 62, № 9. С. 72-76.

148. Терентьев П.В. Метод корреляционных плеяд // Вестник ЛГУ. Сер. биол. 1959. Вып. 2. С. 137-141.

149. Тимошенко Ю.К. Антропогенное воздействие на беломорскую популяцию гренландского тюленя // X Всесоюз. совещ. по изучению, охране и рациональному использованию морских млекопитающих, г. Светлогорск, 1990 г.: Тез. докл. М., 1990. С. 294-295.

150. Тимошенко Ю.К. Особенности распределения и миграции гренландского тюленя (Pagophilus groenlandicus) в Белом море в 1987г. // Экология. 1992. № 1. С. 26-33.

151. Ткачишин В.В. Роль плаценты в иммунологических взаимоотношениях матери и плода // Акушерство и гинекология. 1976. №10. С. 1-7.

152. Тогайбаев A.A., Кургузкин A.B., Рикун И.В., Карибжанова P.M. Способ диагностики эндогенной интоксикации // Лаб.дело. 1988. №9. С. 22-24.

153. Томилин А.Г., Близнюк Я.И. Заболевания афалин, содержащихся в неволе //Бюлл. МОИП, отд. биол. 1981. Т. 86, № 1. С. 13-18.

154. Трещев В.В. Гельминты промысловых морских млекопитающих европейского сектора Арктики: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1970. 20 с.

155. Трофимов Г.К., Аутеншлюс А.И., Тимофеева JI.H. Динамика Т- и В-лимфоцитов по данным количественной цитохимии // Журн.микробиол. 1979. №9. С. 23-26.

156. Трунова JI.A. Реакции трансплантационного иммунитета при физиологически протекающей беременности // Акушерство и гинекология. 1975. №1. С. 1-9.

157. Труфакин В.А. Иммуноморфологические аспекты аутоиммунных процессов. Новосибирск: Наука, 1983. 178 с.

158. Улитин A.A., Григорьев М.Ю. Некоторые параметры сыворотки крови гренландского тюленя в период ювенильной линьки // Тез.докл. 8 Всес.совещ.по изуч., охране и рац.исп.морских млекопит., 5-8 окт.1982г., г.Астрахань.-Астрахань, 1982. С. 377-378.

159. Уманский Ю.А., Глузман Д.Ф., Юдин В.М. Цитохимическая идентификация Т- и B-лимфоцитов мышей // Докл. АН СССР. 1975. Т. 221, № 5. С. 1193-1195.

160. Уманский Ю.А., Сидоренко Д.Ф., Глузман Д.Ф. Цитохимические особенности Т- и B-лимфоцитов с различными поверхностными рецепторами //Докл.АН СССР. 1981. Т. 259, №1. С. 212-215.

161. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. М.: Изд. АН СССР, 1963.234 с.

162. Фогел П.И. Особенности клеточного и гуморального иммунитета при физиологически протекающей беременности // Акушерство и гинекология. 1980. № 7. С. 6-9.

163. Фримель X., Брок Й. Основы иммунологии. М.: Мир, 1986. 254 с.

164. Хейхоу Ф., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. М.: Наука, 1983. 319 с.

165. Челидзе П.В. Ультраструктура и функции ядрышка интерфазной клетки. Тбилиси: Мецниереба, 1985. 119 с.

166. Хураськин J1.C., Захарова H.A., Кузнецов В.В., Шестопалов А.Б., Хорошко В.И. О причинах массовой гибели каспийского тюленя в 2000 г. // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. науч. тр. М., 2002. С. 276-278.

167. Шестопалов А.М., Алексеев А.Ю.,Розанова Е.И., Абрамов А.В. Вирусы гриппа у морских млекопитающих // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. науч. тр. Калининград, 2010. С. 645-648.

168. Шубич М.Г., Могильная Г.М. Значение ШИК-метода в гистохимическом анализе углеводных и углеводсодержащих биополимеров // Арх. анат., гистол. и эмбриол. 1982. Т. 82, №5. С. 90-98.

169. Юдин В.М. Соотношение Т- и В-клеток в лимфатических узлах мышей при метилхолантреновом канцерогенезе. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Киев, 1975. 18 с.

170. Юшков Б.Г., Климин В.Г., Северин М.В. Система крови и экстремальные воздействия на организм. Екатеринбург: УроРАН, 1999. 202 с.

171. Яблоков А.В. Каков уровень изученности морских млекопитающих? // Рыбное хозяйство. 2003. № 4. С. 40-41.

172. Яблоков А.В., Белькович В.М., Борисов В.И. Киты и дельфины. Монографический очерк. М.: Наука, 1972. 473 с.

173. Adams L., Kamentsky L. Machine caracterisation of human leucocytes by acridine orange fluorescence // Acta cytol. 1971. Vol. 15. P. 289-291.

174. Andersen S.H. The physiological range of the formed elements in the peripheral blood of the harbour porpoices, Phocoena phocoena (L) in captivity // Nord. Vet. Med. 1966. P. 51-65.

175. Andersen S.H. Experiences with harbour porpoices, Phocoena phocoena, in captivity: mortality, autopsy findings and influence of captive environment // Aquatic mammals. 1978. Vol. 6. N 1. P. 39-49.

176. Andreeff M., Beck J., Darjinkievicz Z. RNA-content in human lymphocyte subpopulations // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1978. Vol. 75. N 4. P. 1938-1942.

177. Arnason U. Comparative chromosome studies in Pinnipedia // Hereditas. 1974. Vol. 76. N2. P. 179-225.

178. Arnason U. Localization of NORs in cetacean karyotypes // Hereditas. 1981. Vol. 95. P. 269-275.

179. Arvey L. The unknows of the lymphatic system in Cetacea // Invest. Cetacea. 1976. Vol. 7. N2. P. 169-179.

180. Astaldi G., Verga L. The glycogen content of the cells of lymphatic leukaemia // ActaHaemat. 1957. Vol. 17. P. 1-29.

181. Aubin D.J.S., Austin T.P., Geraci J.R. Effects of handling stress on plasma enzymes in harp seals, Phoca groenlandica // J. Wildlife Diseases. 1979. Vol. 15. N 4. P. 569-572.

182. Baker J.K. The pathology of the grey seal (Halichoerus grypus) // Br. Vet. J. 1980. Vol. 136. P. 443^147.

183. Baker J.K. Mortality and morbidity in grey seals (Halichoerus grypus). Studies on its causes, effects of environment, the nature and sources of infectious agents and the immunological status of pups // J. Zool. 1984. Vol. 203. N 1. P. 245-257.

184. Beck E.G., Schmidt P. Activitat der Lymphocyten Nucleoli // Zbl. Bakt. Hyg. 1988. Bd. 185. N3. P. 258-263.

185. Bhattacharya C. A simple method of a resolution of a distribution into Gaussian components//Biometrics. 1967. Vol. 23. N l.P. 115-135.

186. Blessing M.N., Peitz G. Anisakisbefall in Gefangeschaft gehaltener mariner Sauger 11XII Int. Symp. "Erkrankungen Zootiere". Budapest, 1970. S. 283-286.

187. Boer J., Sarnaker R. // Med.Proc.S.A. 1956. Vol. 2. P. 218. Цит.по: Пирс Э. Гистохимия. 1962. С. 647-648.

188. Boesen A. Ultrastructural localization of acid alpha-naphthylacetate esterase in human normal and neoplastic lymphocytic and monocytic cells and in hairy cells // Scand. J. Haematol. 1984. Vol. 32. N 4. P. 367-375.

189. Bogel G., Roche H., Houvet D. Les indicateurs physiologiques de toxicite en milieu marin//Oceanis. 1991. Vol. 17. N 4. P. 351-365.

190. Bossart G.D. Suspected acquired immunodeficiency in an Atlantic bottlenosed dolphin with chronic-active hepatitis and lobomycosis // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1984. Vol. 185. N 11. P. 1413-1414.

191. Bossart G.D., Reidarson Т.Н., Dierauf L.A., Duffield D.A. Clinical pathology // Handbook of marine mammal medicine. 2nd Edition. CRC Press, Boca Raton, Florida, 2001. P. 383-436.

192. Bozdech M., Bainton D. Identification of alpha-naphthylacetate esterase as a plasma membrane ectoenzyme of monocytes and as discrete intracellular membrane-bounded organelle in lymphocytes // J. Exp. Med. 1981. Vol. 153. N 1. P. 182-195.

193. Brittinger G., Cohen G., Douglas S., Konig E. Low number of lysosomes and low activity of lysosomal enzymes in human peripheral blood lymphocytes: a marker for B cells? // 14 Int. Congr. Hematol. 1972. P. 198-204.

194. Busch H., Smetana K. The nucleolus. N.Y.: Acad.Press, 1970. 626 p.

195. Burns J.M., Lestyk K.C., Folkow L.P. et al. Size and distribution of oxigen stories in harp and hooded seals from birth to maturity // J. Comp. Physiol. B. 2007. N 177. P. 687-700.

196. Cabanac A.J. Blood volume in hooded seal: implications for diving // Can. J. Zool. 2000. Vol. 78. N 7. P. 1293-1299.

197. Castellini M.A. Metabolic depression in tissues and organs of marine mammals diving: living longer with less oxigen // Mol. Physiol. 1985. Vol. 8. N. 3. P. 427437.

198. Castellini M., Davis R., Kooyman G. Blood chemistry regulation during repetitive diving in Weddel seals // Physiol, zool. 1988. Vol. 61. N. 5. P. 379-386.

199. Castellini M., Kooyman G., Ponganis, P. Metabolic rates of freely diving Weddell seals: correlations with oxygen stores, swim velocity and diving duration // J. Exp. Biol., 1992. Vol. 165. P. 181-194.

200. Cavagnolo R. The immunology of marine mammals // Develop. Comp. Immunol. 1979. Vol. 3. N 2. P. 245-257.

201. Chern J.-H., Lee Y.-C., Yang M.-H., Chang S.-C., Perng R.-P. Usefulness of Argyrophilic Nucleolar Organizer Regions Score to Differentiate Suspicious Malignancy in Pulmonary Cytology // Chest. 1997. Vol. 111. N. 6. P. 1591-1596.

202. Clark P., Boardman W., Duignan P. Cytology of haematological cells of otariid seals indigenous to Australasian waters // Aust. Vet. J. 2002. Vol. 80. N 3. P. 161164.

203. Colgrove G. A survey of Erysipelothrix insidiosa agglutinating antibody titers in vaccinated porpoises (Tursiops truncatus) // J. Wildlife Diseases. 1975. Vol. 11. N. 2. P. 234-236.

204. Colgrove G. Stimulation of lymphocytes from a dolphin (Tursiops truncatus) by phytomitogens // Amer. J. Vet. Res. 1978. Vol. 39. N 4. P. 141-144.

205. Converse L.S., Fernandes P.S., Mac Williams and Bossar, G.D. Hematology, serum chemistry and morphometric reference values for Antillean manatees (Trichechus manatus manatus), J. Zoo Wildl. Med. 1994. Vol. 25. P 423-431.

206. Cordes D.O. Dolphins and their diseases // N.Z. Vet. J. 1982. Vol.30, № 4. P.46-49.

207. Cordes D.O., O'Hara P.J. Diseases of captive marine mammals // N. Z. Vet. J. 1979. Vol. 27. N7. P. 147-150.

208. Cornell, L.H., , Hematology and clinical chemistry values in the killer whale, Orcinus orca // J. Wildl. Dis. 1983. Vol. 19. P. 259-264.

209. Cornell, L.H., Duffield, D.A., Joseph, B.E., Stark, B. Hematology and serum chemistry of the beluga (Delphinapterus leucas) // J. Wildl. Dis. 1988. Vol. 24. P. 220-224.

210. Dailey M.D. The distribution and intraspecific variation of helminth parasites in pinnipeds // Rapp. p.-v. Rein. Cons. Int. Explor. Mer. 1975. Vol. 169. P. 338-352.

211. Dailey M. Diseases of mammalia: Cetacea // Diseases Mar. Anim. Vol.4, Pt.2. Hamburg, 1985. P. 805-847.

212. Dawe C. Implications of aquatic animal health for human health // Environ. Health Perspect. 1990. Vol. 86. P. 245-255.

213. Day K.E., Metcalfe J.L., Batchelar S.P. Changes in intracellular free amino acids in tissues of the caged mussel, Elliptio complanata, exposed to contaminated environments // Arch. Environ. Contam. and Toxicol. 1990. Vol. 19. N 6. P. 816827.

214. Delong R.L., Gilmartin W.G., Simpson J.G. Premature births in California sea lions: assotiation with high organochlorine pollutant residue levels // Science. 1973. Vol. 181. N4105. P. 1168-1170.

215. Diengdoh I., Turk J. Immunological significance of lysosomes in vivo // Nature. 1965. Vol. 207. P. 1405-1410.

216. Dixon K., Moriarty K. Alpha naphthyl acetate esterase activity is not a marker for ovine T-lymphocytes // Veter. Immun. Immunopathol. 1980. Vol. 4. N 3. P. 505512.

217. Dockrell H., Scymor G., Playfair J. Cytochemical identification of T and B cells in mouse lymphoid tissue and lymph nodes from the rat, gerbil, and cat // Ann.Immunol. (Inst.Past.). 1978. N 129. P. 617-633.

218. Draber P., Nouza K. Study of thymus and peripheral lymphocyte populations caracterised by the dominant nucleolar type // Folia biol. 1975. Vol. 21. N6. P. 387389.

219. Eisner R. Anaerobic contributions to metabolism in diving seals // Can. J. Zool. 1988. Vol. 66. N l.P. 142-143.

220. Engelhardt F.R. Haematology and plasma chemistry of captive pinnipeds and cetaceans // Aquat. Mammals. 1979. Vol. 7. N 1. P. 11-20.

221. Fay F.H., Rausch V.R., Feltz E.T. Cytogenetic comparison of some pinnipeds (Mammalia: Eutheria) // Can. J. Zool. 1967. Vol. 45. P. 773-778.

222. Ferrarini M., Cadoni A., Franzi A. et al. Ultrastructure and cytochemistry of human peripheral blood lymphocytes. Similarities between the cells of the third population and T-lymphocytes // Eur. J. Immunol. 1980. Vol. 10. N 7. P. 562-570.

223. Fleischmann K.W., Squire R.A. Verni nous pneumonia in the California seal lion (Zalophus californianus) // Patol. Vet. 1970. Vol. 7. P. 89-101.

224. Fossum S. Non-specific acid esterase activity in rat lymphocytes // Scand.J.Immunol. 1978. Vol. 8. N 4. P. 273-277.

225. Frankie Y., Kej Ch. Cytochemical staining of non-specific acid alpha-naphthyl acetate esterase (ANAE) of circulating human T-lymphocytes // Can. J. Med. Technol. 1981. Vol. 43. N 2. P. 91-96.

226. Frese K., Weber P. Eine Dermatitis bei Mahnenrobben (Otaria bryonis Blainville), hervorgerufen durch Dermatophilus congolensis // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. 1971. Bd. 84. S. 50-54.

227. Frouin H., Lebeuf M., Hammill M., Fournier M. Phagocytosis in pup and adult harbour, grey and harp seals // Veterinary Immunology and Immunopathology. 2010. Vol. 134. P. 160-168.

228. Gales N., Duignan P., Childerhouse S., Gibbs N. New Zealand sea lion mass mortality event, January/February 1998 // Descriptive epidemiology: Society for Marine Mammalogy, 13th Biennial Conference, Wailea, Maui, Hawaii, nov. 29-dec. 3. 1999. P.63.

229. Garavini C. Nonspecific acid esterase activity in lymphoid cells of Bufo bufo // Experientia. 1981. Vol. 37. N4. P. 516-517.

230. Gaskin D.E. Status of the Harbour Porpoice, Phocoena phocoena, in Canada // Can. Field-Natur. 1992. Vol. 106. N 1. P. 36-54.

231. Geraci J.R. Functional hematology of the harp seal Pagophilus groenlandicus // Physiol. Zool. 1971. Vol. 44. N 3. P. 162-170.

232. Geraci J.R. Epidemiology of bottlenose dolphin disease -U.S. Atlantic coast, 1987-1988 // Oceans"88 Proc.: Parthership Mar.Interests, Baltimore, Md, 31 oct.-2 nov., 1988. New York, 1988. Vol. 4. P. 1634.

233. Geraci J.R. Investigation of the 1987-1988 mass mortality of the bottlenose dolphin//Nat. Res. Reu. 1989. Vol. 41. N 2. P. 2-10.

234. Geraci J.R., Ridgway S.H. On disease transmission between cetaceans and humans // Mar.Mamm.Sci. 1991. Vol. 7. N 2. P. 191-194.

235. Geraci J.R., Smith T.G. Functional hematology of ringed seals (Phoca hispida) in the Canadian arctic // J. Fish. Res. Board. Can. 1975. Vol. 32. P. 2559-2564.

236. Gilmartin W.G., Allen J.F. Ridgway S.H. Vaccination of porpoises (Tursiops truncatus) against Erysipelothrix rhusiopathiae infection // J. Wildlife Diseases. 1971. Vol. 7. N. 4. P. 292-295.

237. Goldberg A., Barka T. Acid phosphatase activity in human blood cells // Nature. 1962. Vol. 189. P. 297-301.

238. Greenwood A.G., Taylor D.C. Clinical and pathological findings in dolphins in1976 // Aquat.Mammals. 1977. Vol. 5. N 1. P.34-39

239. Greenwood A.G., Taylor D.C. Clinical and pathological findings in dolphins in1977 // Aquat.Mammals. 1978. Vol. 6. N 2. P. 33-38.

240. Greenwood A.G., Taylor D.C. Clinical and pathological findings in dolphins in1978 // Aquat. mammals. 1979. Vol. 7. P. 71-74.

241. Griffiths D.J. Clinical examination of marine mammals. Part A // Aust. Vet. Practit. 1983a. Vol. 13. N 1. P. 13-21.

242. Griffiths D.J. Clinical examination of marine mammals. Part B. // Aust. Vet. Practit. 1983b. Vol. 13. N 2. P. 81-88.

243. Grundmann E. Der morphologische Nachweis von zwei Lymphocytensystem beim Menschen // Klin.Wochenschr. 1959. Bd. 37. N18. S. 941- 946.

244. Guillet F., Tournefier A. Lactate dehydrogenase isoenzyme pattern as a marker of lymphocyte populations in the axolotl (Ambistoma mexicanum) // Develop.Comp.Immunol. 1981. Vol. 5. N 4. P. 617-628.

245. Harkness D.R., Grayson V. Erythrocyte methabolism in the bottle-nosed dolphin, Tursiops truncatus // Comp.Biochem.Physiol. 1969. Vol. 28. P. 1289-1301.

246. Harwood J., Reijnders F. Seals, sense and sensibility // New Sci. 1988. Vol. 119. N. 1634. P. 28-29.

247. Haug T. Gronlandssel. Havets ressurser og miljo 2006 // Fisken og havet, saernummer. 2006. P. 45-47.

248. Haug T., Svetochev V. Seals in the Barents Sea // Management Strategies for Commercial Marine Species in Northern Ecosystems. 10th Norwegian-Russian Symposium, Bergen, Norway 27-29 August 2003, Bergen, Norway. 2004. P. DIMS.

249. Haug T., 0igârd T. Gronlandssel. Havets ressurser og milje 2009 // Fisken og havet, sœrnummer 1. 2009. P. 43-45.

250. Herceg M., Skreblin M., Huber J. Eitrige Mastitis und Speiserchrenkandidose bei einem kalifornischen Seelowen // XIX Int. Symp. "Erkrankungen Zootiere". Mulhouse, 1979. P. 213-214.

251. Hermansky F., Lodorova V., Benesova E., Salkova L. Staining pattern of acid non-specific esterase in lymphocytes, monocytes and leukaemic cells // Folia haematol. 1980. Vol. 107. N 5. P. 738-746.

252. Higgi K.E., Burns G.F., Hayhoe F.G. Discrimination of B, T and null lymphocytes by esterase cytochemistry // Scand. J. Haematol. 1977. Vol. 18. N 5. P. 437-448.

253. Hochachka P.W., Owen T.G., Allen J.F., Whittow G.C. Multiple products of anaerobiosis in diving vertebrates // Comp.Biochem.Physiol. 1975. Vol. 50. N 1. P. 17-22.

254. Hochkiss R.D. Arch. Biochem. Vol. 16. P. 131 Цит. по: Бутенко З.А. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев, 1974. С. 98.

255. Holt S.J. Factor effecting the validity of staining methods for enzymes and their bearing upon the Gomori acid phosphatase techniques // Exp. Cell. Res. 1959. Vol. 18. Suppl. 1.7. P. 1-4.

256. Horwitz D., Allison A., Ward P., Knight N. Identification of human mononuclear leucocyte populations by esterase staining // Clin. Exp. Immunol. 1977. N30. P. 289-298.

257. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver-staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer. A 1-step method // Experientia. 1980. Vol. 36. P. 1014-1015.

258. Hunter L., Madin S. H. Clinical values of the northern fur seal, Callorhinus ursinus // J. Wildlife Diseases. 1976. Vol. 12. N 4. P. 526-530.

259. Isaksen K. Bakken V.,Wiig 0. Potential effects on seabirds and marine mammals of petroleum activity in the northern Barents sea. Meddelelser № 154. Norsk Polarinstitutt. Oslo, 1998. 66 p.

260. Jams S.P. Large granular lymphocytes in the liver // Hepatology. 1988. Vol.8. N 2. P. 419-421.

261. Jauniaux Т., Coignoul F. Pathologie des infections par les morbillivirus chez les mammiferes marins // Ann. med. vet. 2001. Vol. 145 N 2. P. 76-96.

262. Kato S., Kurihara K. Nonspecific esterase activity in monkey thymus lymphocytes: study of distribution in lymphocyte subpopulations // Experientia. 1980. Vol. 37. N 9. P. 1026-1027.

263. Kennedy S., Smyth J.A., Cush P.F., Duignan P., Platten M., McCullough S.J., Allan G.M. Histopathologic and immunocytochemical studies of distemper in seals // J. of Veterinary Pathology, 1989. Vol. 26. P. 97-103.

264. Kiehl A.R., Schiller C.A. A study of manatee leukocytes using peroxidase stain // Vet. Clin. Pathol. 1994 Vol. 23. P 50-53.

265. Knoll W. Blüt und embryonale Blütbildung bai den Whalen // Z. Fischerei, Beih.1. 1939. Vol. 39. P. 1-12.

266. Knoll W. Beobachtungen über die Blütcellbildung bei Barten- und Zahwhalembryonen // Z. Fischerei, Beih. 2. 1942. Vol. 39. P. 1-29.

267. Knowles D., Halper J. Human medullary and cortical thymocytes are distinquishable according to presence or absence of cytochemically demonstrable alpha-naphthyl acetate esterase (ANAE) activity // J. Immunol. 1980. Vol. 125. N 6. P. 2823-2825.

268. Kremer B.P. Robbenepidemie in der Nordsee // Naturwiss. Rdsch. 1989. Vol. 42. N9. P. 359-361.

269. Kühne W.D., Lindan K.S. Augenerkrankungen bei Robben // Haltungs Probleme in zoologischen Garten: XIX Int. Symp. Erkrankungen Zootiere. Poznan. 1977. S.311-315.

270. Kulenkampff J., Janossy G., Greaves M. Acid esterase in human lymphoid cells and leukaemic blasts: a marker for T lymphocytes // Brit. J. Haemat. 1977. Vol. 36. N2. P. 231-240.

271. Lassila O., Alanen A. Alpha-naphthyl acetate esterase activity in human adult and cord blood rosette forming cells // Acta pathol. microbiol. Scand. 1982. Vol. C90.N3.P. 155-158.

272. Lauchner G. Diseases of Mammalia: Pinnipedia // Dis. of M.A. 1985. Vol. 4. N2. P. 709-793.

273. Lenfant C. Physiological properties of blood of marine mammals // Biology of marine mammals. 1969. P. 95-116.

274. Lisiewich J. Semiquantitative cytochemical determination of acid phosphatase and beta-glucuronidase in peripheral blood lymphocytes // Folia Haematol. 1975. Vol. 102. N6. P. 625-633.

275. Luke A. What is killing the Mediaterranean's dolphins? // New Sci. 1990. Vol. 127. N 1734. P. 23.

276. Makiewicz S., Brelinska-Peskalska R., Celinska-Szpytko E. Cytochemical studies of rosette-forming cells // Z. Immunutatsforsch. 1975. Vol. 148. N 5. P. 462466.

277. Maljima K., Nagase S. Hematological and clinicobiochemical studies on F344 rats inhaled diesel engine exhaust // "Man and Ecosyst.": Proc.8th World Clean Air Congr., the Hague, 11-15 sept., 1989, Amsterdam, 1989. Vol. 2. P. 149-154.

278. Malmstrom P., Jonson A., Sjogren H. ANAE pattern of rat lymphocytes. Lack of correlation with lymphocyte subclasses // Scand.J.Immunol. 1981. Vol. 14. N 5. P. 523-527.

279. Martineau D., De Guise S., Fournier M., Shugart L., Girard C, Lagace A., Beland P. Pathology and toxicology of beluga whales from the St. Lawrence estuary, Quebec, Canada-past, present and future.// Sci. Total Environ., 1994. Vol. 154. P. 201-215.

280. Mayr В., Schellander K., Schleger W. Investigation of nucleolar markers in the peripheral blood smear cells in nine species of domestic animals and in man // Zbl.Vet.Med. 1983. Bd. 30. N 2. P. 725-736.

281. McConnel L.C., Vaughan R.W. Some blood values in captive and free-living common seals (Phoca vitulina) // Aquat.Mamm. 1983. Vol. 10. N 1. P. 9-13.

282. McManus J.F. // Nature. 1946. Vol. 158. P.202. Цит. по: Бутенко З.А. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев, 1974. С. 98.

283. McNeil A. Blood values for some captive cetaceans // Canad. Vet. J. 1975. Vol. 16. N7. P. 187-193.

284. Medway W. Some bacterial and mycotic diseases of marine mammals // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1980. Vol. 177. P . 831-834.

285. Medway W., Geraci J. Hematology of bottlenosed dolphin (Tursiops truncatus) // Amer. J. Physiol. 1964. Vol. 207. N 7. P. 1367-1370.

286. Medway W., Geraci J. Clinical pathology of marine mammals // Zoo and Wild Animal Medicine / Ed. E. Murray. Philadelphia, London, Toronto, 1978. P. 604609.

287. Medway W., Moldovan F. Blood studies of the North Atlantic pilot whale, Globicephala melaena (Traill, 1809) // Physiol. Zool. 1966. Vol. 39. N4. P. 110-116.

288. Menier K. Origine et evolution du parasitisme chez les mammiferes marins: L'exemple des "Pinnipedes" // Rev. med. vet. (France). 2000. Vol. 151. N 4. P. 275280.

289. Micu D., Olinescu V. Supravital staining of nucleoli from T and B rosette-forming lymphocytes // Rev. Roum. Med. Int. 1977. Vol. 15. N3. P. 289-290.

290. Micu D., Olinescu V., Constantineanu I. Particularities nucleolaries des lymphocytes T and B formateurs de rosettes // Rev. Roum. Med. Int. 1977. Vol. 15. N2. P. 157-160.

291. Mihok S., Descoteaux J.-P., Lawton T., Lobreau A., Schwartz B. The azurocyte: a new kind of leucocyte from wild voles (Microtus) // Can. J. Zool. 1987. Vol. 5. N 1. P.54-62.

292. Milinkovich M.C., Orti G., Meyer A. Revised phylogeny of whles suggested by mitochondrial ribosomal DNA sequences // Nature. 1993. Vol. 361. P. 346-348.

293. Mix M.C. Cancerous diseases in aquatic animals and their association with environmental pollutants: a critical literature review // Mar. Environ. Res. 1986. Vol. 20. N 1. P. 1-141.

294. Monte T., Pilleri G. Cetacean hematology. II. The blood cells // Invest. Cetacea. 1979. Vol. 10. P. 289-306.

295. Monte T., Pilleri G. Nucleated cells of the peripheral blood of Stenella styx Gray and Delphinus delphis L. from the western Mediterranean and description of the haemomyelogram of Delphinus delphis // Z.Saugetierkunde. 1968. Vol. 33. N 2. P. 108-116.

296. Morimoto Y., Takata M., Sudzuchmi M. Untersuchngen iiber Cetacea. I. Vorversuche // Tohoku J. Exp. Med. 1921. Vol. 2. P. 21-25.

297. Muller J., Brun del Re G., Buerki H., Keller H.U., Hess M.W., Cottier H. Nonspecific acid esterase activity: a criterion for differentiation of T and B lymphocytes in mouse lymph nodes // Eur. J. Immunol. 1975. Vol. 5. N 4. P. 270275.

298. Mumford D., Stockman G., Barsales P. et al. Lymphocyte transformation // Experientia. 1975. Vol. 31. N 4. P. 498-500.

299. Murmann W., Schoon A., Schulz L. Pathologie der marinen Sauger // Tierarztl. Prax. 1984. Vol. 12.N1.P. 105-115.

300. Myers B.J. The rearing of a grey seal in captivity // Canad. Field. Natur. 1955. Vol. 69. N4. P. 1-3.

301. Mysliwska J., Witkowski J., Mysliwska A. The relationship between mitogen-induced rosette formation and the ability of expression alpha-naphthyl acetate esterase activity by mouse thymocytes // Immunobiology. 1980. Vol. 157. N 2. P. 190-195.

302. Nash D.R., Mach J.-P. Immunoglobulin classes in aquatic mammals//J. Immunol. 1971. Vol. 107. P. 1424-1430.

303. Needham D. V. Diseases of marine animals // Proc. № 36 for Course of Veterinarians: Fauna Sydney Australia, Post Graduate Committee in Vet. Sci. 1978. P. 675-708.

304. Nielsen E., Andersen S. Clinical chemistry and hematologic findings in the harbour porpoise (Phocoena phocoena) from Danish waters // Aquat. Mamm. 1982. Vol. 9. N 1. P. 1-3.

305. Nordoy E.S., Blix A.S. Glucose and ketone body turnover in fasting grey seal pups//Acta Physiol. Scand. 1991. Vol. 141. P. 565-571.

306. Novikoff A. Lysosomes in the physiology and pathology of cells: contributions of staining methods // Caba Foundation Symp.of Lysosomes. Boston, 1963. P. 3643.

307. Novikoff A., Masek B. // Hystochem. Cytochem. 1958. Цит. по: Бутенко З.А. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев, 1974. С. 73-74.

308. Otten T., Andrews В., Edwards D. D. Hand-rearing a California sea lion (Zaiophus californianus) // Int. Zoo Yearbook. 1977. Vol. 17. P. 215-218.

309. Novikoff A., Masek B. // Hystochem.Cytochem. 1958. Vol. 6. P. 217. Цит.по: Бутенко З.А. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев, 1974. С. 73-74.

310. Pangalis G.A., Kuhl W., Waldman S.R., Beutler E. Acid hydrolases in normal В and T blood lymphocytes // Acta haematol. 1978. Vol. 59. N 5. P. 285-292.

311. Parker J., Wakasa H., Lukes R. The morphologic and cytochemical demonstration of lysosomes in lymphocytes incubated with phytohemagglutinin by electron microskopy // Lab.Invest. 1965. Vol.14. N 8. P. 1736-1744.

312. Pedrazzini N. , Mamaev T., Slavutsky I. // Mol. Pathol. 1998. Vol. 51. N 1. P. 39^12.

313. Pilleri G. Cetaceans in captivity // Invest. Cetacea. 1983. Vol. 15. P. 221-249.

314. Poore Т., Barrett S., Kadin M., Bainton D. Ultrastructural localization of acid phosphatase in rosetted T and В lymphocytes of normal human blood // Amer.J.Pathol. 1981. Vol. 102. N 1. P. 72-83.

315. Poore Т., Kadin M., Barrett S., Bainton D. Ultrastructural localisation of acid phosphatase (AcP) in rosetted T and В lymphocytes from normal human blood // Fed.Proc. 1977. Vol. 36. N3. P. 1089.

316. Potelov V.A., Golikov A.P., Bondarev V.A. Estimated pup production of harp seals Pagophilus groenlandicus in the White Sea, Russia, in 2000 // ICES J. Mar. Sei. 2003. Vol. 60. P. 1012-1017.

317. Priddel D., Wheeler R. Hematology and blood chemistry of a Bryde's whale Balaenoptera edeni // Mar. Mamm. Sei. 1998. Vol. 14. N 1. P. 72-81.

318. Puiseux-Dao S. Problems toxicologiques lies au milieu marin: donnees actuelles et perspectives // Oceanis. 1991. Vol. 17, N 3. P .215-221.

319. Quaglino D., Hayhoe F. // Nature. 1960. Vol. 187. P. 85. Цит.по: Бутенко З.А. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев, 1974. С. 72.

320. Quay W.B. The blood cells of cetacea with particular reference to the beluga Delphinapterus leucas Pallas, 1776 // Saugetierkund. 1954. Mitt. 2. S. 49-54.

321. Radzum H., Parwaresch M., Kulenkampff Ch., Standinger M., Stein H. Lysosomal acid esterase: activity and isoenzymes in separated normal human blood cells // Blood. 1980. Vol. 55. N 6. P. 891-897.

322. Raethel H.S. Häufige Robbenerkrankungen in zoologischen Garten // Hord. Vet. Med. 1962. Vol. 14. N. 1. P. 344-355.

323. Ranki A., Tötterman Т., Hayry P. Identification of resting human T and В lymphocytes by acid alpha naphthyl acetate esterase staining combined with rosette formation // Scand. J. Immunol. 1976. Vol. 5. N5. P. 1129-1138.

324. Rashka J., Rychter Z., Smetana K. Fibrillar centres and condensed nucleolar chromatin in resting and stimulated human lymphocytes // Z. mikrosk. anat. Forsch. 1983. Bd. 97. N1. P. 15-32.

325. Reddi M., Vikram R., Rajan A. et al. Demonstration of acid alpha naphthyl acetate esterase activity in bovine leucocytes in the peripheral blood smears // Curr.Sci. 1980. Vol. 49. N 24. P. 954.

326. Reddy S.L.N., Venugopal N.B.R.K. Fluoride induced changes in protein metabolism in the tissues of freshwater crab Barytelphusa guerini // Environ. Pollut. 1990. Vol. 67. N2. P. 97-108.

327. Reed R.E., Migaki G., Cummings J.A. Coccidioidomycosis in a Californias sea lion (Zalophus californianus) // J. Wildl. Diseases. 1976. Vol. 12. P. 372-375.

328. Reijnders P.J.H. Ecotoxicological perspectives in marine mammalogy: research principles and goals for a conservation policy // Mar.Mammal.Sci. 1988. Vol.4. N 2. P.91-102.

329. Reijnders P.J.H. Reproductive failure in common seals feeding on fish from polluted coastal waters //Nature. 1986. Vol. 324. N 6096. P.456-457.

330. Ridgway S.H. Homeostasis in aquatic environment // Mammals of the sea, biology and medicine. 1972. Ch. 10. P. 590-747.

331. Ridgway S.H. Medical care of marine mammals // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1965. Vol. 147. N 10. P. 1077-1085.

332. Ridgway S.H., Geraci J.R., Medway W. Diseases of pinnipeds // Rapp. P.-v. Rein. Cons. Int. Explor. Mer. 1975. Vol. 169. P. 327-337.

333. Ridgway S.H., Simpson J.G., Patton G. S., Gilmartin W.G. Hematologic findings in certain small cetaceans // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1970. Vol. 157. N 5. P. 566-575.

334. Ringoir S., Plum J. LDH isozymes of human T and B lymphocytes // Clin. Chem. Acta. 1975. Vol. 60. N 2. P. 379-383.

335. Ronald K., Foster M. E., Johnson E. The harp seal, Pagophilus groenlandicus (Erxleben, 1777). 2. Physical blood properties // Can. J. Zool. 1969. Vol. 47. N 3. P. 461-468.

336. Ross P. S., Pohajdak B., Bowen W. D., Addison R. F. Immune function in freeranging harbor seal (Phoca vitulina) mothers and their pups during lactation // J. Wildlife Diseases. 1993. Vol. 29. N 1. P. 21-29.

337. Schumacher U., Welsch U. Histological, histochemical and fine structural observations on the spleen of seals // Amer. J. Anat. 1987. Vol. 179. P. 4 21-487.

338. Smetana K. Nucleoli of human leucemic blood lymphocytes // Present problems in hematology. Praque, 1974. P. 186-191.

339. Smetana K., Leinar J., Potmesil M. Furser contribution to the demonstration of RNA and nucleoli of blood cells in smear preparations // Folia haematol. 1969. Vol. 91. N4. P. 381-394.

340. Smetana K., Leynar J., Salkowa J. Studies on nucleoli in rosetted t and B lymphocytes of the human peripheral blood // Folia haematol. 1980. Vol. 107. N 5. P. 720-722.

341. Smetana K., Lykowsky Z. Morphological studies on ring shaped nucleoli in frog erithroblasts // Exp. Cell. Res. 1971. Vol. 69. N 1. P. 65-70.

342. Smith A.W., Vedros N.A., Akers T.G., Gilmartin W.G. Hazards of disease transfer from marine mammals to land mammals: review and recent findings // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1978. Vol. 173. N9. P. 1131-1133.

343. Sohnle P., Colling-Lech C. Inhibition of lymphocyte transformation responses to phytohemagglutinin by normal human plasma // Cell.Immunol. 1979. Vol. 42. N 2. P. 428-436.

344. Stockinger L., Kellner G. Der Lymphocytennucleolus // Wien. Z. Inn. Med. 1952. Bd. 33. N4. P. 135-141.

345. Stroud R.K., Roelke M.E. Salmonella meningoencephalitis in a northern fur seal (Callorhinus ursinus) //J. Wildl. Diseases. 1980. Vol. 15. N 1. P. 15-18.

346. Stroud R.K., Roffe T.I. Causes of death marine mammals stranded along the oregon coast // J. Wildl. Diseases. 1979. Vol. 15, N 1. P. 91-97.

347. Sur E., Celik I., Oznurlu Y., Ay din M., Sen I., Ozparlak H. Enzyme histochemistry and AgNOR numbers in the peripheral blood leukocytes of 6 month-old Kangal bred Anatolian shepherd dogs // Revue Méd. Vét. 2003. Vol. 154. N. 10. P. 591-598.

348. Sweeney J.C. Common diseases of pinnipeds // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1974a. Vol. 165. N 9. P. 805-810.

349. Sweeney J.C. Procedures for clinical management of pinnipeds // J.Amer.Vet.Med.Assoc. 1974b. Vol. 165. N 9. P. 811-814.

350. Sweeney J.C. Infectious diseases of body systems // Zoo and Wild Animal Medicine / Ed. E. Murray. Philadelphia, London, Toronto, 1978. P. 589-592.

351. Takeuchi T., Utsunomija S. Sensitivity of cytochemical demonstration of alcaline and acid phosphatase in blood cells // Acta Pat.Jap. 1952. Vol. 2. N l.P. 5761.

352. Tamaoki N., Essner E. Distribution of acid phosphatase, betaglucuronidase and N-acetyl-beta-glucosaminidase activities in lymphocytes of lymphatic tissues of man and rodents // J.Histochem. 1968. Vol. 17. N 4. P. 238-243.

353. Travis J.C., Sanders B.C. Whale immunoglobulins.!. Light chain types//Comp.Biochem.Physiol.l972. Vol. 43B. P. 627-637.

354. Treves S., Ali-Khan L. Granular and globular acid alpha naphthyl acetate esterase staining patterns of resting and mitogen-activated murine lymphocytes // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1983. Vol. 72. P. 273-278.

355. Uzenbaeva L. B. Activity of non-specific alpha-naphthyl-acetate esterase in the fur-bearing animal blood leucocytes // Scientific. 1989. Vol. 13. N 2. P. 101-103.

356. Ward P. The influence of fixation and composition of incubating medium on alpha-naphthyl acetate esterase staining of T-lymphocytes and monocytes in human peripheral blood // J. Immunol. Meth. 1981. Vol. 41. N 1. P. 23-24.

357. Williamson W.M., Tilden E.B., Getty R.E. Mycotic infections occuring an eight year period at Chicago Zoological Park // Brookfield, Illinois: Bijdr. Dierk. 1963. Vol. 33. P. 83-85.

358. Wilson T.M., Long J.R. The harp seal, Pagophilus groenlandicus (Erxleben, 1777). XII. Staphylococcal granulomas (Botryomycosis) in harp seals // J. Wildlife Diseases. 1970. Vol. 6. N 3. P.155-159.

359. Wilson T.M. Diffuse muscular degeneration in captive harbour seals // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1972. Vol. 161. N 6. P. 608-610.

360. Wohlsein P., Peters M., Geburek F., Seeliger F., Boer M. Polioencephalomalacia in captive harbour seals (Phoca vitulina) // J. Vet. Med. A. 2003. Vol. 50. N 3. P. 145-150.

361. Wood F.G. Marine mammals and man. Washington: R.B. Luce, 1973. 264 p.

362. Yang T., Jantzen P., Williams L. Acid alpha-naphthylacetate esterase: presence of activity in bovine and human T and B lymphocytes // J. Immunol. 1979. Vol. 38. N l.P. 85-93.

363. Zicca A., Leprini A., Cadoni M., Grossi C. Ultrastructural localisation of alpha-naphthyl acid esterase in human Tm lymphocytes // Amer. J. Pathol. 1981. Vol. 105. N l.P. 40-46.

Информация о работе

Кавцевич, Николай Николаевич
доктора биологических наук
Мурманск, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы