Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Морфологические и функциональные изменения при овариогистероэктомии у собак с пиометрой

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Морфологические и функциональные изменения при овариогистероэктомии у собак с пиометрой"

На правах рукописи

"Мк-

Кузнецова Татьяна Шамильевна

Морфологические и функциональные изменения при овариогистероэктомии у собак с пиометрой

Специальность 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 8 НОЯ 2013

Москва-2013

005539918

005539918

Работа выполнена на кафедре оперативной хирургии с основами топографической анатомии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» Министерства сельского хозяйства РФ

Научный руководитель: Виденин Владимир Николаевич,

доктор ветеринарных наук, профессор кафедры оперативной хирургии с основами топографической анатомии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Официальные оппоненты: Поляков Виктор Филипиович,

доктор биологических наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории биохимии «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко»

Капустин Роман Филиппович,

доктор биологических наук, профессор кафедры морфологии и физиологии ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Российский Университет Дружбы народов»

Защита диссертации состоится г>г. в // часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220.042.02 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии име1ш К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д.23; тел.377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» Автореферат разослан « 2013 г.

Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ http://www.vak2.ed.Rov.ru « /¿Р » /-¿¿2Я^&>2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета СотликоваЛ.Ф

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. В общей структуре заболеваемости собак патологии репродуктивной системы составляют от 5,7% (Волков П.А., 2005) до 12 — 20% (Федин A.A., 2005; Шафикова A.B., 2006, Емельянова Н.С., 2007). У животных старшего возраста они приводят в 8,82 % случаев к летальному исходу (Кудряшов A.A. с соавт., 2007).

В последние годы неуклонно возрастает частота воспалительных заболеваний репродуктивной системы у сук. В России за последние 5 лет инцидентность этой патологии увеличилась на 45% и продолжает расти (Карташов С.Н., 2005; Кудряшов A.A., 2006, Чулкова Г.Б., 2007). Среди всех гинекологических заболеваний на дошо пиометры приходится более 60 % (Лебедев A.B. с соавт., 2000).

Согласно современным представлениям о ходе гиперпластических и воспалительных заболеваний в репродуктивной сфере молекулярную основу патогенеза составляют не только гормон-зависимые, но и другие биологические процессы (Кетлинский С.А., Симбирцев A.C.,2008, Петров A.M., Аржаев A.M., 2009, Киселев В.И. с соавт., 2010). Это обусловило необходимость изучения не только гормональных нарушений, но также иммунобиологических и биохимических изменений при этих патологических состояниях.

Особенностям морфофункционапыюго статуса органов репродукции у собак посвящены работы Дюльгера Г.П. (2002), Зуевой Н.М. (2003), Слесаренко H.A. (2004). Вместе с тем изучение изменений репродуктивной системы, происходящих при разных патологиях, актуально и на сегодняшний день.

Особый интерес вызывает система цитокиновой регуляции защитных механизмов организма при септических процессах в репродуктивных органах. Цитокины (интерлейкины, хемокины, лимфокины, монокины, иитерфероны и др.) относятся в настоящее время к числу наиболее изучаемых биологически активных молекул. Они играют важную роль в патогенезе многих заболеваний, оказывая существенное влияние на формирование и ход различных процессов в органах и тканях (Borich L.C., Steinke J.W., 2003), осуществляя координацию и взаимосвязь между нервной, эндокринной и иммунной системами организма (Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., 2008). Однако их роль в патогенезе пиометры у собак изучена недостаточно и требует дополнительных углубленных научно-практических изысканий.

В доступной отечественной и зарубежной литературе практически отсутствуют сведения, касающиеся роли цитокинов в развитии пиометры у собак, о наличии корреляционных связей между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами, а также о динамике гематологических, биохимических показателей и некоторых цитокинов в ранний послеоперационный период.

Расшифровка патогенеза воспалительных процессов даст возможность выбрать оптимальный метод лечения, определить временные интервалы, а также профилактировать заболевания репродуктивной сферы.

Цели и задачи исследования. Цель исследования - оценить морфологические и функциональные изменения организма при пиометре и ее оперативном лечении у собак.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Выявить особенности морфологических, биохимических показателей крови у собак при пиометре и их динамику в раннем послеоперационном периоде после овариогистероэктомии.

2. Охарактеризовать особенности гормонального статуса у собак с пиометрой и в динамике раннего послеоперационного периода после овариогистероэктомии.

3. Установить критерии оценки эндогенной интоксикации у собак с пиометрой и в динамике раннего послеоперационного периода.

4. Определить цитокиновый статус и выяснить наличие корреляционных связей между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами при пиометре у сук.

5. Изучить микробный пейзаж влагалища сук при пиометре и после овариогистероэктомии.

6. Определить характер гистологических изменений, происходящих в тканях матки при пиометре у сук.

Научная новизна. Представлена комплексная сравнительная эндокринная, иммунобиологическая, морфологическая, микробиологическая характеристика организма в до- и послеоперационный период при пиометре у собак. При данной патологии выявлены характерные признаки эндогенной интоксикации, выражающиеся в увеличении ее маркеров -фракций средних молекул и лейкоцитарного индекса.

Показаны изменения уровней цитокинов (фактора некроза опухоли, интерлейкина-4 и гамма-интерферона) в сыворотке крови собак при пиометре и их динамика в раннем послеоперационном периоде. Выявлены биологические корреляционные связи между провосналительными и противовоспалительными цитокинами при пиометре у сук.

Представлены и детализированы данные о состоянии обмена веществ больных животных.

Показано, что морфологическим эквивалентом иммунобиологических нарушений являются деструктивные изменения, происходящие в тканях матки (шейка и рога), которые характеризуются наличием кист, извитых маточных желез, скоплением лимфоцитов в строме эндометрия и миометрия.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана научная концепция о полиэтиологичности развития пиометры у собак. Показана интегративная роль цитокиновой регуляции защитных механизмов в патогенезе воспалительного процесса. Обоснована необходимость выявления корреляционных связей между цитокинами, которая позволяет оценить физиологическое состояние организма. Выявлено, что маркеры эндогенной интоксикации отражают состояние детоксикационных систем организма. Установлены клинико-морфологические корреляции в развитии пиометры, проявляющиеся в гемодинамических и гормональных сдвигах и сопровождающиеся деструктивными изменениями органов репродукции.

Выявленные показатели могут являться прогностическими тестами течения послеоперационного периода.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Морфологические и функциональные изменения организма при пиометре и ее оперативном лечении у собак.

2. Динамика гематологических, биохимических показателей и уровней цитокинов у собак при пиометре соответствует септическому процессу.

3. Реакции цитокинового статуса и эндогенной интоксикации в раннем послеоперационном периоде, как критерии оценки степени тяжести воспалительного процесса.

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены, обсуждены и получили положительную оценку на:

- 61-й научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ (2007г.),

- Международной научной конференции, посвященной 200-летию высшего ветеринарного образования в России и 200-летию СПбГАВМ (2008г.);

- Всероссийском Съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов аграрных вузов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (2009г.);

- Simpozionstiintific international «35 ani de invatamant superior medical Veterinär din república Moldova» (2009г.);

- Международной научной конференции по вопросам ветеринарной хирургии «Внедрение новых технологий в профилактику и лечение хирургической патологии у животных» (2009г.);

- Международной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (2011, 2012,2013 гг.).

Внедрение результатов исследования. Основные положения теоретического обоснования эндогенной интоксикации при пиометре, основанные на анализе выявленных морфофункциональных нарушений, используются в учебном процессе на кафедре оперативной хирургии с основами топографической анатомии, кафедре ветеринарного акушерства и гинекологии им. И.А. Бочарова ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», кафедре диагностики внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО «Омский аграрный государственный университет им. П.А.Столыпина», кафедре акушерства, гинекологии и биотехнологии размножения животных им. Я.Г. Губаревича, кафедре общей, частной и оперативной хирургии УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины».

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, из которых 6 статей в изданиях, входящих в «Перечень ведущих журналов и изданий, рекомендованных ВАК РФ»: Международный вестник ветеринарии - 1, Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии - 3, Ветеринарная медицина - 2.

В соавторстве опубликовано учебное пособие «Оперативная хирургия у животных» под ред. проф. Б.С. Семенова (2012 г.), допущенное Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов сельскохозяйственных вузов, по специальности ветеринария.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа содержит 15 таблиц и 12 рисунков. Список литературы включает 170 литературных источников, из них 49 - зарубежная литература.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалы и методы исследований.

Работа выполнена на кафедре оперативной хирургии с основами топографической анатомии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» с 2008 по 2013 гг.

Объектом исследования служили 69 самок собак различных пород (немецкая овчарка, ротвейлер, английский кокер-спаниель, пудель, эрдельтерьер, боксер, пекинес) и метисы в возрасте от 4,5 до 12 лет.

Подопытная группа включала 49 собак с диагнозом пиометра.

В контрольную группу вошли 20 животных аналогичного возраста без патологии репродуктивных органов.

Эксперимент исследования.

Овариогистероэктомию проводили с соблюдением правил асептики и антисептики по общепринятому методу (Магда И.И., 1990).

Клиническое обследование экспериментальных животных проводили в динамике:

-до оперативного вмешательства;

- на 3 сутки после овариогистероэктомии;

- на 10 сутки после овариогистероэктомии.

В эти же сроки брали кровь для морфологических и биохимических исследований, определения содержания гормонов, цитокинов, фракций средних молекул. Материалом для гистологических исследований служили ткани матки (шейка и рога), отобранные во время овариогистероэктомии.

Микробиологические исследования производили до овариогистероэктомии и на 7 сутки после нее.

Взятие проб крови у животных производили из подкожной вены предплечья.

Дня гематологических исследований в пробу крови добавляли гепарин, из расчета 5 ЕД на 1 мл крови. Гематологические исследования (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, нейтрофилы, эозинофилы, моноциты, базофилы, лимфоциты, тромбоциты) проводили на гематологическом анализаторе MICROS.

Расчет лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) осуществляли по формуле Я.Я. Кальф-Калифа, в модификации Островского В.К. с соавт. (1983):

ЛЬИ = —^ —. где пл. — плазматические клетки, мц. — миелоциты, ю. — юные

клетки, п. — палочкоядерные нейтрофилы, е.— сегментоядерные нейтрофилы, л. — лимфоциты, м. — моноциты, э. — эозинофилы, б. — базофилы.

Биохимические исследования сыворотки крови проводили в «Клинико-биохимической лаборатории СПбГАВМ». Количество общего белка определяли биуретовым методом, альбумин, а-,Р-,7-глобулины - нефелометрическим методом по Оллу и Маккорду в модификации Каршока (Пилаева Н.В. с соавт, 2002). Все биохимические исследования были выполнены на биохимическом анализаторе фирмы CLIMAMC-15 (Испания) с использованием готовых наборов реактивов фирмы КлиниТест-ОБК.

Исследования фракций средних молекул выполняли на биохимическом анализаторе «Hospitex Diagnostics» (Швейцария — Италия) с использованием реактивов этой же фирмы.

Эстрадиол, прогестерон, фолликулостимулирующий гормон определяли на автоматической иммунохемишоминисцентной системе IMMULITE ONE фирмы DPC (США). Тестостерон в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (TsangB.K. et all., 1980) на иммуноферментном анализаторе Boehringer Mannheim

б

Immunodiagnostics ES 300 (Германия) с использованием реактивов этой же фирмы (EnzymeJmmunologicalteslinvitro «BoehringerMannheim»).

3. Цитокины (гамма-иптерферон, иитерлейкин-4, фактор некроза опухоли-альфа) определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (Рябичева Т.Г. с соавт., 2004) на анализаторе "Мультискан", используя наборы фирмы «Вектор-Бест» (Россия).

Микробиологические исследования проводили в бактериологическом отделе ГУ СПб «Горветлаборатория».

Отбор проб клинического материала из влагалища собак производили согласно методическому пособию (Яшин А.В., 2009).

Видовую идентификацию микроорганизмов осуществляли общепринятыми методами, используя номенклатуру Берджи (Bergey, 1997) и руководство по клинической микробиологии (Бойцов А.Г., 1999).

Для гистологических исследований брали материал из области шейки матки и рогов, фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина, проводили через спирты возрастающей крепости и кусочки тканей заливали в гистологическую среду HISTOMIX.

В дальнейшем кусочки фиксировали на деревянных брусках и делали гистосрезы толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином (Меркулов Г.А., 1969). Для светооптического изучения гистологических срезов использовали микроскоп Leica DMLS2 (Германия), для микрофотографирования цифровую камеру Leica DFC 290 (Германия).

Полученные в результате исследований данные были проанализированы и подвергнуты статистической обработке. Выборки были репрезентативными, различия считали достоверными при р < 0,05.

Чтобы оценить различие средних в двух выборках (подопытная — собаки с пиометрой, контрольная — здоровые самки) использовали параметрический t-критерий Стыодента (Донелли Р., 2007). Для выяснения являются ли полученные эмпирическим путем распределения нормальными, использовали критерий согласия Колмогорова, обладающий достаточной чувствительностью даже при малом числе значений (Большее JI.H. с соавт., 1983).

Корреляционный анализ проводили при помощи коэффициента корреляции Пирсона, который дает возможность выяснить существует ли связь между разными показателями, какова ее мощность и направленность (Лакин Г.Ф, 1990, Ивантер Э.В.с соавт., 2005).

Расчет эмпирических значений коэффициента корреляции (г) проводили в программе Microsoft Excel с использованием функции KOPPEJI. Ошибку коэффициента корреляции

рассчитывали по формуле: шг = ^¡777 (Ивантер Э.В. с соавт., 2005, с.66). Эмпирический

критерий t Стыодента для проверки значимости коэффициентов рассчитывали по формуле: tr= г/m,. Далее сравнивали полученное эмпирическое значение t-коэффициента Стыодента с табличным значением для уровня значимости а = 0,05 и числа степеней свободы df = п-2 При t3M > W разницу считали достоверно значимой.

Расчеты производили в программе Microsoft Excel (Мидлтон М.Р., 2005).

Результаты собственных исследований и их обсуждение.

В таблице 1 представлены результаты общего клинического анализа крови у собак контрольной и подопытной групп на этапах лечения.

Таблица 1.

Показатели общего анализа крови собак с пиометрой до и после _овариогистероэктомии (М ± т)._

Группы Гематологические показатели (референтный интервал)

СОЭ, мм/час (2-6) Нв, г/л (120-180) Эритроциты, 1012/л (5-8) Лейкоциты, 109/л (8-17) Гематокрит,% (37-55)

Контроль (п=16) 6,17 ±0,37 161,44±4,73 6,51 ±0,28 7,52 ± 0,35 20,34 ± 0,62

До операции(п=16) 30,49 ± 1,27* 99,75 ±2,83* 5,14±0,13* 26,61 ± 1,49* 37,85 ± 1,27*

3-сутки после операции(п=16) 28,99 ± 1,14* 100,78±2,28* 5,80 ±0,18* 25,42 ± 1,18* 36,88 ± 1,31*

10-е сутки после операции(п=16) 22,91 ±2,16* 109,22±4,74* 6,39 ±0,29 13,89 ± 1,49* 24,17±2,19*

Примечание: СОЭ — скорость оседания эритроцитов, * - достоверные отличия от контроля,

при р < 0,05

При анализе полученных данных мы наблюдали достоверное (р < 0,05) увеличение СОЭ у собак с пиометрой (30,49 ± 1,27 мм/ч) по сравнению с контрольными животными (6,17 ± 0,37 мм/ч). На 3-й сутки после овариогистероэктомии этот показатель оставался по-прежнему достоверно (р <0,05) выше (28,99 ± 1,14 мм/ч) у подопытных животных по сравнению с контрольными. На 10-е сутки после операции обнаружена тенденция к снижению уровня СОЭ (22,91 ±2,16 мм/ч), однако он был достоверно выше контрольного показателя (р < 0,05).

Количество гемоглобина у больных собак до операции (99,75 ± 2,83 г/л) было достоверно (р < 0,05) ниже по сравнению со здоровыми животными (161,44 ± 4,73 г/л). На 3-и сутки после операции его значения оставались достоверно (р < 0,05) ниже 100,78 ± 2,28 г/л в сравнении с контролем. На 10-е сутки после операции показатель гемоглобина незначительно увеличился у подопытных особей (109,22 ± 4,74 г/л), но оставался достоверно (р < 0,05) ниже такового у контрольных.

Собаки с пиометрой по количеству эритроцитов достоверно (р < 0,05) уступали здоровым животным 5,14 ± 0,13 10|2/л против 6,51 ± 0,28 1012/л. Аналогичная ситуация сохранялась на 3-й сутки послеоперационных наблюдений. Однако на 10-е сутки прооперированные животные не имели достоверных отличий по данному показателю от контрольных аналогов (табл.1).

Следует подчеркнуть, что больные животные достоверно (р < 0,05) превосходили своих контрольных сверстников по количеству лейкоцитов (26,61 ± 1,49 109/л и 7,52 ± 0,35 Ю'/л, соответственно). На 3-сутки после операции количество лейкоцитов у прооперированных животных снизилось (25,42 ± 1,18 10'7л) и было достоверно (р < 0,05) выше аналогичного показателя у контрольных особей. Важно отметить, что на 10-е сутки послеоперационного периода значение лейкоцитов (13,89 ± 1,49 109/л) было достоверно выше (р < 0,05) у подопытных животных в сравнении с контролем, но достигло референтного диапазона.

Аналогичная картина была обнаружена по показателям гематокрита. У животных до операции этот показатель (37,85 ± 1,27 %) был достоверно (р < 0,05) выше контрольного значения (20,34 ± 0,62 %). На 3-й сутки после операции гематокрит достоверно (р < 0,05) превышал (36,88 ± 1,31 %) контрольный уровень. На 10-е сутки после операции у подопытных собак его значние (24,17 ± 2,19 %) достоверно не отличалось от такового у контрольных.

Таким образом при анализе гематологических показателей у собак с пиометрой выявлено достоверное (р < 0,05) увеличение лейкоцитов, что характерно для гнойно-

воспалительных процессов (Коидрахин И.П., 2004). Достоверное увеличение количества эритроцитов у больных животных связано с повышением уровня глобулинов (в частности у-глобулинов), которые возрастают при многих воспалительных процессах (Кондрахин И.П., 2004). Снижение уровня гемоглобина, а также увеличение гематокрита у собак с пиометрой отражает наличие острого воспалительного процесса и интоксикации организма.

Результаты биохимических показателей сыворотки крови собак с пиометрой до и после овариогистероэктомии в сравнении со значениями здоровых самок отражены в таблице 2.

Таблица 2.

Биохимические показатели сыворотки крови собак с пиометрой на этапах лечения (М ± ш).

Группы Определяемые показатели (референсный интервал)

Общий белок, г/л (57-76) Альбумины, г/л (28-39) Билирубин общий, мкмоль/л (0-4) Креатинин, мкмоль/л (60-128) Мочевина, ммоль/л (3,1-10,9) ЩФ,МЕ/л (18-94)

Контроль, (п=16) 63,00 ±2,83 32,68 ± 1,48 2,58 ± 0,30 90,56 ±2,10 5,0 ±0,53 29,13 ±2,05

До операции,(п= 16) 70,69 ± 1,04* 22,61 ±0,65* 7,00 ±1,13* 131,86±3,23* 13,18±0,58* 125,41 ±3,40*

3-сутки после операции, (п=16) 71,69± 1,21* 22,39 ±0,42* 6,91 ±0,09* 126,78 ±3,21* 12,66 ±0,73* 123,83 ±3,36*

10-сутки после операции, (п=16) 66,50±3,14 26,79 ±0,73* 4,98±0,12* 126,67 ±2,78* 11,94 ±0,58* 104,83 ±3,09*

Примечание; ЩФ — щелочная фосфатаза, достоверные отличия от контроля *- р < 0,05.

Из полученных данных следует, что показатель общего белка подопытных собак (70,69 ± 1,04 г/л) достоверно (р < 0,05) превышал уровень контрольных (63,00 ± 2,83 г/л). На 3-й сутки после оперативного вмешательства уровень общего белка оставался без изменений (71,69 ± 1,21 г/л), достоверно (р < 0,05) превышая контрольные значения. На 10-е сутки после операции значение общего белка в опыте снизилось до уровня 66,50 ± 3,14 г/л, что не имело достоверных отличий от контроля.

Уровень альбуминов в сыворотке крови у больных животных (22,61 ± 0,65 г/л) был достоверно (р < 0,05) ниже по сравнению со значениями у контрольных животных (32,68 ± 1,48 г/л). На 3-й сутки после овариогистероэктомии он не отличался в сравниваемых группах. На 10-е сутки после операции значения альбуминов повысились до (26,79 ± 0,73 г/л), но оставались достоверно (р < 0,05) ниже у подопытных животных по отношению к контрольным.

Концентрация билирубина у собак с пиометрой (7,00 ± 1,13 мкмоль/л) была достоверно (р < 0,05) выше относительно контроля (2,58 ± 0,3 мкмоль/л). На 3-й сутки после операции показатель билирубина (6,91 ± 0,09 мкмоль/л) сохранял высокое значение, достоверно (р < 0,05) превышая контрольный уровень. На 10-е сутки после операции билирубин несколько снизился (4,98 ±0,12 мкмоль/л), но все же был достоверно (р < 0,05) выше у подопытных особей по сравнению с контролем.

У собак с пиометрой уровень креатинина (131,86 ± 3,23 мкмоль/л) достоверно (р < 0,05) превышал таковой у контрольных аналогов (90,56 ± 2,10 мкмоль/л). На 3-й сутки после проведенной овариогистероэктомии он (126,78 ± 3,21 мкмоль/л) достоверно (р < 0,05) превышал контрольный уровень. На 10-е сутки после операции аналогичная картина сохранялась (табл.2).

Концентрация мочевины у подопытных животных (13,18 ± 0,58 ммоль/л) достоверно (р < 0,05) превышала таковую в контрольной группе (5,00 ± 0,53 ммоль/л). На 3-й сутки после операции значение мочевины (12,66 ± 0,73 ммоль/л) было достоверно (р < 0,05) выше

контроля. На 10-е сутки послеоперационного периода уровень мочевины (11,94 ± 0,58 ммоль/л) по-прежнему достоверно (р < 0,05) превышал контроль.

Значения щелочной фосфатазы (ЩФ) у больных собак до операции (125,41 ± 3,40 МЕ/л) были достоверно (р < 0,05) выше таковых в контрольной группе (29,13 ± 2,05 МЕ/л), что сохранялось на 3-й сутки послеоперационных наблюдений (табл. 2). К 10-м суткам наблюдали тенденцию к снижению уровня ЩФ (104,83 ± 3,09 МЕ/л) в подопытной группе, но этот показатель оставался достоверно (р < 0,05) выше чем в группе контроля.

Таким образом, увеличение количества мочевины, креатинина, ЩФ свидетельствует о полиорганной недостаточности, а повышение значений билирубина отражает усиление гемолиза эритроцитов при пиометре у собак.

Значения креатинина, билирубина и мочевины на 10-е сутки после операции хоть и превышали значения контрольных животных, но находились практически на верхних границах референсных интервалов.

Процентное представительство белковых фракций представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Значения альбумина и глобулинов сыворотки крови у собак с пиометрой на этапах исследования (М ± ш).

Группы Белки крови, % (референсный интервал)

альбумин, % (45-57) а-птобулин,% (10-18) Р- глобулин, % (6-12) у-глобулин,% (15-20)

Контроль (п=16) 44,09 ±0,99 19,03 ± 1,89 12,12 ±2,02 20,96 ± 1,00

До операции(п=16) 33,03 ± 1,09* 19,24 ±2,34 12,49 ± 1,98 39,78 ± 1,70*

3-й сутки после операции(п=16) 32,21 ±1,91* 21,46 ± 1,63 10,91 ±0,69 32,66 ±2,17*

10-е сутки после операции(п= 16) 38,29 ±1,90* 19,55 ± 1,70 12,77 ± 1,27 29,04 ± 1,88*

Примечание: * - достоверные отличия от контроля (р < 0,05)

Процентное содержание альбуминов у больных собак до операции было достоверно (р < 0,05) ниже (33,03 ± 1,09 %) по сравнению с контрольным значением (44,09 ± 0,99 %). На 3-й сутки (32,21 ± 1,91 %) и 10-е сутки (38,29 ± 1,90 %) после оперативного вмешательства содержание альбуминов было достоверно (р < 0,05) снижено относительно контрольных показателей. Процентное содержание а-глобулинов, р-глобулинов на всех этапах исследования статистически значимых отличий от контроля не имели при р < 0,05.

Иная картина была обнаружена при анализе динамики у-глобулинов. До операции они (39,78 ± 1,70%) были достоверно (р < 0,05) выше контрольных величин (20,96 ± 1,00 %). На 3-й сутки после операции (32,66 ± 2,17 %) и на 10-е сутки после операции (29,04 ± 1,88 %) значения у-глобулинов несколько снизились, но были достоверно (р < 0,05) выше контроля.

У собак с пиометрой мы отмечали статистически значимое снижение процентных значений альбумина. Можно допустить, что низкий уровень альбуминов в крови больных животных связан с их вымыванием в результате полиурии, или наличием кровотечения в матке, что нередко при данной патологии, или недостаточной биосинтезиругощей активностью печени. Кроме того, альбумин является негативным острофазным белком, вследствие чего при воспалении часто наблюдается слабая протеинемия (Грызунов Ю.А. с соавт., 1998, Мейер Д. с соавт., 2007).

Увеличение у - глобулинов свидетельствует об активации иммунной системы при пиометре у собак. Достоверное уменьшение содержания у - глобулинов в сыворотке крови можно объяснить снижением антигенной нагрузки в послеоперационном периоде в связи с удалением основного септического очага.

Клиническое значение имеет концентрация в крови таких ферментов, как аспартатаминотрансфераза (ACT) и аланинаминотрансфераза (AJTT), коэффициент де Ритиса

определяется их соотношением (АСТ/АЛТ). Полученные нами данные представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Уровень ACT, АЛТ и коэффициент де Ритиса у собак с пиометрой на этапах исследования

(М±т).

Показатели Контроль (п=16) До операции (п=16) 3-й сутки после операции(п=16) 10-е сутки после операции(п=16)

ACT, МЕ/л 39,48 ± 1,40 89,98 ±1,80* 88,62 ±1,59* 79,47 ±1,63*

АЛТ, МЕ/л 57,68 ±2,77 93,59 ±2,15* 91,92 ± 1,53* 90,29 ±1,56*

Коэффициент де Ритиса (АСТ/АЛТ) 0,69 ± 0,04 0,96 ±0,03* 0,97 ±0,03* 0,88 ± 0,02*

Примечание: ACT - аспаргатамшготрансфераза, АЛТ - аланинаминотралсфераза, коэффициент де Ритиса — АСТ/АЛТ, достоверные отличия от контроля *- р < 0,05.

Анализ полученных данных свидетельствует, что показатели ACT у собак с пиометрой до операции (89,98 ± 1,8 МЕ/л) были достоверно (р < 0,05) повышены относительно контрольных значений (39,48 ± 1,4 МЕ/л). На 3-й сутки после операции показатели ACT были также достоверно (р < 0,05) повышены (88,62 ± 1,59 МЕ/л). На 10-е сутки после операции показатели ACT составляли 79,47 ± 1,63 МЕ/л, что достоверно (р < 0,05) превышало показатели здоровых собак.

Значения АЛТ у собак с пиометрой (93,59 ±2,15 МЕ/л) были достоверно (р < 0,05) выше, чем у здоровых животных (57,68 ± 2,77 МЕ/л). На 3-й сутки после операции показатели АЛТ были также достоверно (р < 0,05) повышены (91,92 ± 1,59 МЕ/л). На 10-е сутки после операции значения АЛТ в подопытной группе несколько снизились (90,29 ± 1,56 МЕ/л), но достоверно (р < 0,05) превышали контрольные значения.

Коэффициент де Ритиса у больных животных до операции был равен 0,96 ± 0,03 и достоверно (р < 0,05) превышал данный показатель в контрольной группе 0,69 ± 0,04 .На 3-й сутки после операции коэффициент де Ритиса не претерпевал существенных изменений (табл.4). На 10-е сутки происходит снижение коэффициента де Ритиса до значения 0,88 ± 0,02, но все же был достоверно выше контрольного уровня 0,69 ± 0,04 (р < 0,05).

По мнению некоторых авторов (Рослый И.М. с соавт. 2002) увеличение концентрации ферментов в крови может быть вызвано усилением метаболической активности вследствие функциональных сдвигов при различных состояниях организма. По Карташовой Е.В. (2011) метропатии у собак могут сопровождаться нарушением гемодинамики в паренхиматозных органах (печени).

Так как при пиометре у сук в сыворотке крови увеличение ACT (в 2 раза) более выражено, чем АЛТ (в 1.5 раза), то возрастает коэффициент де Ритиса (соотношение АСТ/АЛТ), что может быть сопряжено с острой воспалительной реакцией организма и полиорганной недостаточностью.

Фракции средних молекул (ФрСМ) и лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) являются маркерами эндогенной интоксикации (Шано В.П.,2011), поэтому представляет интерес определение динамики этих показателей у собак с пиометрой до и после овариогистероэктомии. Полученные данные отражены в таблице 5.

Таблица 5.

Значения фракций средних молекул и лейкоцитарного индекса интоксикации в

Группы ФрСМ, усл. ед. ЛИИ, усл. ед.

Контроль(п=16) 0,25 ±0,01 1,18 ±0,41

До операции (п=16) 0,29 ±0,01* 4,30 ± 1,40**

3-й сутки после опсрацші(п 1ґ>) 0,27 ±0,01* 3,75 ± 1,01**

10-е сутки после операции(п=16) 0,26 ±0,01 1,47 ±0,58

Примечание: *- достоверные отличия от контроля, (р< 0,05), **- достоверные отличия от контроля, (р< 0,01).

До операции у больных животных значения ФрСМ (0,29 ± 0,01 усл. ед.) были статистически значимо (р < 0,05) выше по сравнению со значениями контрольных животных (0,25 ± 0,01 усл. ед.). На 3-й сутки после операции значение ФрСМ подопытных особей (0,27 ± 0,01 усл. ед.) достоверно (р < 0,05) превышало контрольное значение. На 10-е сутки послеоперационного периода значения ФрСМ (0,26 ± 0,01 усл. ед.) статистически значимых (р < 0,05) отличий от контроля не имели.

Показатель ЛИИ у больных животных (4,30 ± 1,40 усл. ед.) достоверно превышал (р < 0,01) ЛИИ здоровых самок (1,18 ± 0,41).На 3-й сутки после овариогистероэктомии ЛИИ (3,75 ± 1,01усл. ед.) был достоверно выше (р < 0,01) по сравнению с контрольным показателем. На 10-е сутки ЛИИ (1,47 ± 0,58 усл. ед.) у прооперированных собак достоверных отличий от контрольных значений не имел при р < 0,05.

У собак с пиометрой нами выявлены признаки эндогенной интоксикации, которые кроме клинических симптомов, имели клеточно-молекулярное отражение, проявляющееся в повышении количества фракций средних молекул в сыворотке крови и увеличении значения индекса лейкоцитарной интоксикации. Молекулы средней массы используют как лабораторный маркер эндогенной интоксикации при различных патологиях: почечной недостаточности, перитоните, панкреатите, опухолевых заболеваниях (Назаренко Г.И. с соавт., 2006, Шано В.П., 2011). Лейкоцитарный индекс интоксикации на сегодняшний день считается одним из самых распространенных индексов, применяемых в различных областях биологии и медицины человека и животных (Сперанский И.И. с соавт. [Электронный ресурс]). Полученные нами данные значений ФрСМ и ЛИИ отражают морфофункциональное состояние организма.

Как известно, половой цикл собак регулируется посредством гормонов. Нарушение регуляции, вызванное теми или иными причинами, может привести к гормональному дисбалансу, и, как следствие, заболеванию животного. Нам представлялось актуальным определение значений гормонов эстрадиола, прогестерона, фолликулостимулирующего гормона, тестостерона в до- и послеоперационный период. Полученные данные представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Концентрация эстрадиола, прогестерона, фолликуло-стимулирующего гормона и _тестостерона в крови собак на этапах исследования (М ± ш)._

Группы Гормоны

Эстрадиол, пкмоль/л Прогестерон, нмоль/л ФСГ, МЕ/л Тестостерон, нмоль/л

КЬнтроль(п=10) 91,50 ±2,34 1,39 ±0,27 11,62 ± 1,58 1,27 ±0,39

До операции (п=10) 110,9 ±5,70* 2,79 ± 0,45* 59,02 ± 4,22** 1,91 ±0,91

3-й сутки после операции(п=10) 105,80 ±5,47* 2,30 ± 0,32* 53,04 ±5,21** 1,09 ±0,82

10-е сутки после операции(п=10) 92,4 ± 6,67 1,63 ± 0,24 43,21 ±6,03** 1,60 ±0,98

Примечание: ФСГ-фолликулостимулирующий гормон, достоверные отличия от контроля * - р<0,05,

** -р<0,001.

Изучая полученные в ходе эксперимента данные, нами выявлено достоверное увеличение (р < 0,05) количества эстрадиола у собак до операции (110,9 ± 5,70 пкмоль/л) по сравнению с контрольным значением (91,50 ± 2,34 пкмоль/л). На 3-й сутки после операции аналогичная картина сохранялась (табл.6). На 10-е сутки после операции уровень эстрадиола (92,4 ± 6,67 пкмоль/л) не имел статистически значимых отличий по сравнению с контрольным уровнем.

При анализе количества прогестерона мы определили достоверное увеличение (р < 0,05) гормона до операции 2,79 ± 0,45 нмоль/л, а также на 3-й сутки после операции 2,30 ± 0,32 нмоль/л по сравнению с контрольным уровнем 1,39 ± 0,27 пмоль/л. На 10-е сутки послеоперационных наблюдений достоверных отличий уровня прогестерона (1,63 ± 0,24 нмоль/л) в подопытной группе относительно контрольной обнаружено не было.

При определении количества ФСГ нами было установлено его достоверное (р < 0,001) увеличение (в 5 раз) до операции 59,02 ± 4,22МЕ/л, по сравнению со значениями у здоровых животных 11,62 ± 1,58 МЕ/л. На 3-й сутки после операции уровень ФСГ был по прежнему достоверно (р < 0,05) выше 53,04 ± 5,21 МЕ/л относительно уровня контроля 11,62 ± 1,58 МЕ/л. На 10-е сутки после операции значения ФСГ продолжали оставаться достоверно (р < 0,05) более высокими 43,21 ± 6,03 МЕ/л, превышая уровень у здоровых животных в 4 раза.

Также нами был исследован гормон тестостерон у собак с пиометрой до и после оперативного вмешательства. Его значения по нашим данным на всех этапах исследования статистически значимых отличий от контроля не имели (р > 0,05).

Парное увеличение значений эстрадиола и прогестерона отражает гормональный дисбаланс при пиометре у сук. Повышение значений фолликулостимулирующего гормона может индуцировать наличие увеличенных фолликулов, что нередко при пиометре (Давтян А.Р., 2011).

Цитокины, как молекулы с широким биологическим действием, участвуют в формировании, регуляции воспалительного процесса и являются связующим звеном между различными системами организма. В связи с этим уровень этих молекул отражает ход воспалительной реакции до и после операции. Полученные данные сгруппированы в таблице 7.

Таблица 7.

Цитокиновый профиль сыворотки крови собак с пиометрой на этапах исследования (М ± т).

Группы Цитокины

ИЛ-4, пг/мл ФНО-а, пг/мл у-ИНФ, пг/мл

Контроль, (п=10) 15,81 ± 1,93 10,37 ± 1,25 20,11 ± 1,99

До операции, (п=10) 50,17 ±2,09* 50,32 ± 1,79* 110,40 ±6,11*

3-й сутки после операции, (п=10) 48,79 ±2,03* 46,19 ±2,02* 105,60 ±6,00*

10-е сутки после операции, (п=10) 35,39 ±2,74* 32,79 ± 2,52* 80,49 ±8,35*

Примечание: ИЛ-4 - интерлейкин 4, ФНО-а - фактор некроза опухолей альфа, у-ИНФ - гамма-интерферон, М — среднее значение, ш- доверительный интервал, *- достоверные отличия от контроля, (р< 0,05).

Проведя анализ данных, полученных в ходе исследования цитокинового профиля сыворотки крови подопытных животных, нами было установлено достоверное увеличение значений ИЛ-4 до операции 50,17 ± 2,09 пг/мл по сравнению с контрольными значениями 15,81 ± 1,93 пг/мл (р < 0,05). На 3-й сутки после овариогистероэктомии наблюдали незначительное снижение количества ИЛ-4 до 48,79 ± 2,03пг/мл, что было достоверно (р < 0,05) выше контрольного уровня. На 10-е сутки после операции снижение количества ИЛ-4 было более выражено 35,39 ± 2,74 пг/мл, но достоверно превышало (р < 0,05) значения контроля.

В ходе эксперимента мы отмечали достоверное (р < 0,05) повышение значений ФНО-а у собак с пиометрой 50,32 ± 1,79 пг/мл в сравнении с контрольными значениями 10,37 ± 1,25

пг/мл. На 3-й сутки после овариогистероэктомии происходило снижение уровня ФНО-а -46,19 ± 2,02 пг/мл, но этот показатель оставался достоверно (р < 0,05) выше контрольного уровня. На 10-е сутки после операции уровень ФНО-а продолжал снижаться до 32,79 ± 2,52 пг/мл, но достоверно (р < 0,05) превышал контрольные значения.

В нашем исследовании мы наблюдали достоверное (р < 0,05) повышение уровня у-ИНФ у больных животных 110,4 ± 6,11 пг/мл по сравнению со значениями здоровых животных 20,11 ± 1,99 пг/мл. На 3-й сутки после операции значения у-ИНФ составили 105,6 ± 6,00 пг/мл, а на 10-е сутки 80,49 ± 8,35 пг/мл, что в обоих случаях было достоверно выше контрольных значений(р < 0,05).

При анализе данных, сгруппированных в таблице 7 можно видеть, что значения всех исследуемых цитокинов у больных животных были достоверно (р < 0,05) выше при сравнении этих показателей у здоровых особей. На 3-й сутки после овариогистероэктомии изучаемые показатели имели тенденцию к снижению, которая была более выражена к 10-м суткам после операции.

Для выяснения взаимосвязи между уровнями исследуемых цитокинов в различные временные интервалы у больных собак, а также сравнения их с показателями контрольных животных нами был проведен попарный корреляционный анализ между значениями цитокинов. Сильной корреляционную связь считали, если коэффициент корреляции не ниже ± 0,6, значения ниже ± 0,6 указывали на среднюю связь, а ниже ± 0,3 — на слабую (Ивантер Э.В., Коросов A.B., 2005, с.65). В таблицах 8, 9, 10, 11 представлены вычисленные коэффициенты корреляции между изучаемыми цитокинами на этапах исследования, в скобках указаны ошибки коэффициентов корреляции.

Из приведенных в таблице 8 данных видно, что у здоровых собак выявлена статистически значимая (р < 0,05) положительная корреляция между ФНО-а и ИЛ-4 0,63 (0,27). Коэффициенты корреляции между у-ИФН и ИЛ-4, между у-ИФН и ФНО-а статистически значимыми (р < 0,05) не являлись.

Таблица 8.

Цитокины ИЛ-4 ФНО-а

ФНО-а 0,63 (0,27)* -

у-ИФН -0,62 (0,28) -0,38 (0,33)

*- достоверные отличия для уровня значимости а=0,05 У собак с пиометрой до операции (таблица 9) была выявлена сильная положительная корреляционная связь между ФНО-а и ИЛ-4 при коэффициенте корреляции 0,97 (0,09), который был статистически значимым при р < 0,001, что свидетельствует об очень выраженной зависимости между уровнем ФНО-а и уровнем ИЛ-4 при таком септическом процессе как пиометра. Коэффициенты корреляции между у-ИФН и ИЛ-4, а также между у-ИФН и ФНО-а статистически значимыми не являлись (р < 0,05).

Таблица 9.

Цитокины ИЛ-4 ФНО-а

ФНО-а 0,97(0,09)*** -

у-ИФН 0,50(0,31) 0,41 (0,32)

***-достоверные отличия для уровня значимости а=0,001.

На 3-й сутки после овариогистероэктомии (таблица 10) статистически значимым был коэффициент корреляции между у-ИФН и ФНО-а и составил 0,83 (0,20) при р < 0,01, что свидетельствует о существовании сильной положительной корреляционной связи между этими цитокинами. Коэффициенты корреляции между ФНО-а и ИЛ-4, между у-ИФН и ИЛ-4 статистически значимыми (р < 0,05) не являлись.

Таблица 10.

Коэффициенты корреляции между цитокинами у собак с пиометрой на 3-й сутки

Цитокины ИЛ-4 ФНО-а

ФНО-а 0,60 (0,28) -

у-ИФН 0,40 (0,32) 0,83(0,20)**

**- достоверные отличия для уровня значимости а=0,01 На 10-е сутки после операции статистически значимых корреляционных связей между рассматриваемыми цитокинами обнаружено не было (таблица 11).

Таблица 11.

Коэффициенты корреляции между цитокинами у собак с пиометрой на 10-е сутки

Цитокины ИЛ-4 ФНО-а

ФНО-а 0,43 (0,32) -

у-ИФН 0,45(0,31) 0,28(0,34)

ФНО-а принадлежит к провоспалительным цитокинам, ИЛ-4 и у-ИНФ относятся к противовоспалительным цитокинам (Симбирцев А.С., 2002,). Полученные данные можно объяснить с точки зрения гипотезы патологического процесса Bone R. (Bone R. et al., 1997). Согласно этой гипотезе при воспалительном ответе после выделения первых провоспалительных медиаторов организм начинает компенсаторную противовоспалительную реакцию, стимулируя высвобождение контрагентов — противовоспалительных цитокинов. Целью этой противовоспалительной реакции является подавление синтеза провоспалительных медиаторов и модулирование их эффектов, тем самым сохраняя гомеостаз. Похожие реакции организма при септических состояниях были описаны и другими авторами (Остатнин А.А. с соавт., 2002; Минаев С.В., 2004; Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., 2008).

Для оценки роли микроорганизмов в патогенезе пиометры мы провели ряд микробиологических исследований, позволяющих оценить эффективность выбранного лечения. В результате исследований установлено, что при острых воспалительных процессах во влагалище у сук изменяется количественный состав как индигешюй, так и транзиторной микрофлоры. Полученные данные свидетельствуют о ее количественных и качественных изменениях. При пиометре во влагалище сук мы наблюдали увеличение количества как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов. Из грамположительных это были Lactobacillus ssp., Bifidobacterium ssp., а также было отмечено появление различных видов Staphylococcus ssp. и Streptococcus ssp. Из грамотрицательных бактерий — Proteus ssp., Escherichia coli и Citrobacter freundii. После проведенного оперативного вмешательства и антибактериальной терапии все количественные значения изучаемых микроорганизмов были значительно снижены: Streptococcus ssp., коагулазоположительные стафилококки, Escherichia coli присутствовали в незначительных количествах, Proteus ssp. и Citrobacter freundii отсутствовали. Lactobacillus ssp., Bifidobacterium ssp., коагулазоотрицательные стафилококки, Enterococcus faecalis не отличались от количественных значений у контрольных животных.

При пиометре у собак в связи с гормональным дисбалансом и наличием очага воспаления нами обнаружены морфологические изменения в тканях матки (рисунки 1-4).

Рисунок 1, Киста миометрия рога матки, гематоксилин и эозин, об.20, ок.10.

1 - фиброзная строма эндометрия;

2 — стенка кисты, выстланная уплощенным эпителием;

3 — полость кисты;

4 — эндометриальные железы, выстланные призматическим эпителием.

Рисунок 2. Киста в мышечном слое шейки матки, гематоксилин и эозин, об. 10, ок.10.

1 - многослойный плоский эпителий, выстилающий стенку кисты;

2 - полость кисты, заполненная оксифильной жидкостью и нейтрофильными лейкоцитами;

3 - гладкомышечные миоциты.

Рисунок 3. Микроморфология рога матки с хроническим гнойным эндометритом, простая гиперплазия эндометрия. Гематоксилин и эозин, об.20, ок.10.

1 - эндометриальные железы, выстланные призматическим эпителием, некоторые их них содержат в просвете разрушающиеся нейтрофильные лейкоциты;

2 - стенка кисты эндометрия, выстланная уплощенным эпителием;

3 - просвет кисты эндометрия, содержащий большое скопление нейтрофильных лейкоцитов.

Рисунок 4. Микроморфология шейки матки с хроническим гнойным эндометритом на фоне простой гиперплазии эндометрия. Гематоксилин и эозин, об.20, ок.10.

1 - эндометриальные железы, высланные призматическим эпителием, содержащие в просвете разрушающиеся нейтрофильные лейкоциты;

2 — лимфоцитарно-лейкоцитарная инфильтрация стромы эндометрия вокруг эндометриальных желез.

Анализ гистологического материала показывает, что морфологические изменения, происходящие в тканях матки (шейка и рога) при пиометре у сук (наличие кист, извитых

маточных желез, скопление лимфоцитов и лейкоцитов в строме эндометрия и миометрия, выпадение гемосидерина) носят деструктивный характер. Выявленная нами простая гиперплазия эндометрия также может способствовать развитию пиометры, на что указывают и данные других авторов (Мордашева Э.Б., 2003, Давтян А.Р., 2011).

Полученные данные свидетельствуют о наличии острого воспалительного процесса при пиометре у сук, наличии эндогенной интоксикации, полиорганной недостаточности, гормонального дисбаланса, активации иммунного ответа и цитокиновой системы регуляции, формировании деструктивных процессов в тканях матки. Таким образом, выявленные изменения отражались на различных функциях организма. После проведенной овариогистероэктомии вектор изменений изучаемых показателей имел положительную направленность, что позитивно отражалось на морфофункционалыгом состоянии животных.

3. ВЫВОДЫ

1. Установлена полифакториальность развития пиометры у собак, которая выражается морфологическими и функциональными изменениями в организме животных. Это подтверждается достоверными (р < 0,05) изменениями морфологических, биохимических показателей крови, значений цитокинов, уровня гормонов, структурными нарушениями в тканях матки.

2. Выявлены системные и локальные эффекты пиометры, проявляющиеся в гормональном дисбалансе, наличии полиорганной недостаточности, что подтверждается достоверным (р < 0,05) увеличением значений креатинина, мочевины, щелочной фосфатазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови и деструктивными изменениями в тканях матки (шейка и рога), которые характеризуются наличием кист, извитых маточных желез и лейкоцитарно-лимфоцитарной инфильтрацией эндо- и миометрия.

3. У собак при пиометре установлена эндогенная интоксикация организма, характеризующаяся достоверным (р < 0,05) увеличением маркеров эндогенной интоксикации - фракций средних молекул (0,29 ± 0,01при контроле 0,25 ± 0,01) и лейкоцитарного индекса (4,30 ± 1,40 при контроле 1,18 ±0,41).

4. Обнаружено достоверное (р < 0,05) увеличение значений цитокинов (фактора некроза опухоли-альфа, гамма-интерферона, интерлейкина-4) при пиометре у собак. Выявлена статистически значимая корреляционная связь между провоспалительными (ФНО-а) и прошвоспалительными цитокинами (ИЛ-4 и у-ИФН), свидетельствующая об интегративной роли цитокиновой регуляции защитных сил организма..

5.Нормализация показателей гомеостаза на 10-е сутки после оперативного вмешательства подтверждается референтными значениями эритроцитов, общего белка, альбуминов, креатинина, мочевины, билирубина, щелочной фосфатазы, эстрадиола, прогестерона, и в тоже время тенденцией к нормализации показателей СОЭ, лейкоцитов, гематокрита, гемоглобина, процентного соотношения альбумина, гамма-глобулина, коэффициента де Ритиса, фолликулостимулирующего гормона.

6. Эффективность выбранных методов лечения собак с пиометрой подтверждается изменениями количественного и качественного состава микрофлоры влагалища, которая по видовым признакам практически не отличалась от таковых у контрольных особей.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

1. Показатели фракций средних молекул и лейкоцитарного индекса интоксикации

рекомендуется использовать как маркеры эндогенной интоксикации при гнойных

воспалительных процессах в матке у собак.

2. Определение корреляционных связей между цитокинами позволяет оценить стадию воспалительного процесса и этот показатель можно использовать с прогностической целью.

3. Полученные результаты рекомендовано использовать в учебном процессе биологических и зооветеринарных вузов при чтении лекции и проведении лабораторно-практических занятий по акушерству, гинекологии, репродукции животных, иммунологии и общей патологии.

ОСНОВНЫЕ НАУЧНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО

ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Кузнецова Т.Ш. Состав микрофлоры влагалища у сук при овариогистероэктомии /Кузнецова Т.Ш., Антонен Е.Ю.//Материалы 61-й научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ, 2007 с.56-57.

2. Кузнецова Т.Ш. Коэффициент де Ритнса у собак с пиометрой /Кузнецова Т.Ш.//Международный вестник ветеринарии. (Тематический выпуск «Внедрение новых технологий в профилактику и лечение хронической патологии у животных»), №4,2009, с.60-62.

3. Кузнецова Т.Ш. Определение фракций средних молекул в крови собак, больных пиометрой/Кузнецова Т.Ш.//Материалы Всероссийского съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», 2009, с.40-41.

4. Кузнецова Т.Ш. Некоторые показатели воспаления в крови собак, больных пиометрой/Кузнецова Т.Ш.// Simpozion stiintific intemational «35 ani de invatamant superior medical veterinar din república Moldova» 2009, с. 149-151.

5. Кузнецова Т.Ш. Показатели некоторых гормонов в крови собак, больных пиометрой/Кузнецова Т.Ш.// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, №4,2009, с.26-28.

6. Кузнецова Т.Ш. Характеристика функционального состояния печени у собак, больных пиометрой./Кузнецова Т.Ш.// Ветеринарная медицина №1,2010, с.38-39.

7. Кузнецова Т.Ш. Изменения цитокиновой системы собак в динамике оперативного лечения пнометры/Чернигов Ю.В., Чернигова С.В., Кузнецова Т.Ш.//Ветсринарная медицина №1,2011, с.61-62.

8. Кузнецова Т.Ш. О пномстрс у различных видов животных/Семенов Б.С., Видении В.Н., Кузнецова Т.Ш.//Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, №3,2013, с.106-107.

9. Кузнецова Т.Ш. Возможности использования статистического анализа при изучении цитокпнового статуса собак с пиомстрой/Ссменов Б.С., Иголинская М.К., Кузнецова Т.Ш.// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, №3,2013, с.109-111.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ - аланинаминотрансфераза

АСТ - аспартатаминотрансфераза

ЩФ - щелочная фосфатаза

ФрСМ - фракции средних молекул

ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации

ИЛ-4 - интерлейкин - 4

ФНО-а - фактор некроза опухоли - альфа

у-ИНФ - гамма-интерферон

ФСГ - фолликулостимулирующий гормон

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

Подписано в печать 14.11.2013 Формат 60x90/16 Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,25 Тираж 100 экз. Заказ 563

Отпечатано в типографии «Адмирал» 199178, Санкт-Петербург, В.О., 7-я линия, д. 84 А

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Кузнецова, Татьяна Шамильевна, Санкт-Петербург

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

04201365483 На правах рукописи

КУЗНЕЦОВА ТАТЬЯНА ШАМИЛЬЕВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ОВАРИОГИСТЕРОЭКТОМИИ У СОБАК С ПИОМЕТРОЙ.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Специальность 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Видении В.Н.

Санкт-Петербург -2013

ОГЛАВЛЕНИЕ Стр.

ВВЕДЕНИЕ. 4 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1.1. Пиометра (этиология и патогенез). 10

1.2. Диагностика и методы лечения собак с пиометрой 19 (консервативные и оперативные).

1.3. Белки плазмы крови и их роль в поддержании гомеостаза. 23

1.4. Некоторые аминотрансферазы и их диагностическая роль. 24

1.5. Молекулы средней массы, как маркер эндогенной 26 интоксикации.

1.6. Цитокины и их регуляторная функция при септических 27 процессах.

1.7. Заключение. 33 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Организация исследования, формирование и характеристика 34 групп обследованных животных.

2.2. Используемые в работе методы исследования. 36

2.2.1. Лабораторные исследования крови. 36

2.2.2. Микробиологические исследования. 38

2.2.3. Гистологические исследования. 38

2.3. Статистический анализ данных. 38 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Особенности гематологических, биохимических показателей 40 и цитокинового статуса у собак с пиометрой.

3.2. Динамика гематологических, биохимических показателей и 46 цитокинов при пиометре у сук до и после овариогистероэктомии.

3.2.1. Динамика гематологических показателей при пиометре 46 у сук до и после овариогистероэктомии.

3.2.2. Динамика биохимических показателей при пиометре у 48 сук до и после овариогистероэктомии.

3.2.3. Маркеры эндогенной интоксикации у собак с 52 пиометрой на этапах лечения.

3.2.4. Динамика цитокинов у собак с пиометрой на этапах 53 исследования.

3.2.5. Динамика половых гормонов у собак с пиометрой на 57 этапах исследования.

3.3. Состав микрофлоры влагалища сук при пиометре и после 60 овариогистероэктомии.

3.4. Гистологическая картина тканей матки у собак с пиометрой 61

Заключение. 68

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. 69

ВЫВОДЫ. 79 РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ

ВЫВОДОВ. 80

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. 82

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. 83

СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА. 100

ПРИЛОЖЕНИЕ. 101

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы. На протяжении многих лет ученых интересуют вопросы правильного содержания животных и их размножение. С этой точки зрения поддержание здоровья репродуктивной системы животных представляется важнейшей задачей.

В общей заболеваемости собак болезни репродуктивной системы по разным данным составляют от 5,7% (Волков П.А., 2005) до 12 - 20% (Федин A.A., 2005; Шафикова A.B., 2006; Емельянова Н.С., 2007). Среди причин летального исхода у собак старшего возраста болезни репродуктивной системы составляют 8,82 % (Кудряшов A.A. с соавт., 2007).

В последние годы отмечено повышение частоты воспалительных заболеваний репродуктивной системы у сук (Болдарев А.А.с соавт., 2008). Так в России за последние 5 лет инцидентность этой патологии увеличилась на 45% и продолжает расти (Карташов С.Н., 2005; Кудряшов A.A., 2006; Чулкова Г.Б., 2007), на долю пиометры приходится более 60% всех гинекологических болезней (Лебедев A.B. с соавт., 2000).

Согласно современным представлениям о ходе гиперпластических и воспалительных заболеваний в репродуктивной сфере молекулярную основу патогенеза составляют не только гормон-зависимые, но и другие биологические процессы (Кетлинский С.А., Симбирцев A.C.,2008; Петров A.M., Аржаев A.M., 2009; Киселев В.И. с соавт., 2010). Это обусловило необходимость изучения не только гормональных нарушений, но также иммунологических и биохимических изменений при этих заболеваниях.

Особенностям морфофункционального состояния репродуктивной системы собаки посвящены работы Дюльгера Г.П. (2002), Зуевой Н.М. (2003), Слесаренко H.A. с соавт. (2004), но изучение изменений репродуктивной системы, происходящих при разных патологиях, актуально и на сегодняшний день.

Особый интерес вызывает система цитокиновой регуляции защитных реакций организма при септических процессах в репродуктивных органах.

Цитокины (интерлейкины, хемокины, лимфокины, монокины, интерфероны и др.) относятся в настоящее время к числу наиболее активно изучаемых биологически активных молекул. Они играют значительную роль в патогенезе многих заболеваний, оказывая существенное влияние на формирование и ход различных процессов в органах и тканях (Borich L.C., Steinke J.AV., 2003), осуществляя координацию и взаимосвязь между нервной, эндокринной и иммунной системами организма (Симбирцев A.C.,2002). Однако их роль в патогенезе пиометры у собак изучена недостаточно полно и требует дополнительных исследований.

На сегодняшний день овариогистероэктомия является одним из основных способов лечения пиометры у собак (Шебиц X., Брасс В., 2007). Несмотря на значительное количество работ, посвященных лечению пиометры у собак, актуальным продолжает оставаться изучение морфофункциональных: реакций, в частности биохимических, физиологических, иммунологических и гормональных показателей в раннем послеоперационном периоде и их динамика с целью определения адекватности реакций направленных на восстановление гомеостаза, а также оценки состояния животного.

Степень научной разработанности проблемы.

Близкие по теме исследования последних лет были проведены следующими авторами: Мордашева Э.Б. (2003) «Дифференциальная диагностика эндометрита и гиперплазии эндометрия у собак»; Саженева Е.В. (2004) «Биологические свойства микрофлоры, выделенной при синдроме эндометрита-пиометры у собак»; Карташов С.Н. (2005) «Метропатии собак (диагностика, классификация, лечение)»; Волков П.А. (2005) «Построение и использование индексов тяжести при диагностике и лечении пиометры у сук»; Федин A.A. (2005) «Экспериментальное обоснование и разработка эффективных методов терапии при послеродовом эндометрите и пиометре у сук»; Шафикова A.B. (2006) «Этиология, диагностика и лечение при эндометритах у собак»; Рябуха Л.А. (2006) «Адаптационные реакции в организме плотоядных при метропатиях и их коррекция»; Емельянова Н.С.

(2007) «Эндометриты домашних плотоядных (диагностика, лечение и профилактика)»; Чулкова Г.Б. (2007) «Разработка методов превентивной терапии и профилактики хронического эндометрита у собак»; Хамитова Л.Ф.

(2008) «Нарушение полового цикла самок собак и методы их коррекции»; Гарнцева Н.В. (2009) «Использование гомеопатических препаратов при воспалительных процессах в матке плотоядных»; Болдарев A.A. (2009) «Диагностика и органосохраняющая терапия при пиометре у сук»; Федорович В.В. (2009) «Эффективность иммуномодулятора " Баксин-вет " при лечении хронического эндометрита сук с кистой яичников»; Карташова Е.В.(2010) «Прогнозирование, донозологическая диагностика и коррекция метропатий у собак». Однако в отечественной и зарубежной литературе мы не нашли сведений, касающихся роли цитокинов в развитии пиометры у собак, о наличии корреляционных связей между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами. А также не изучена динамика гематологических, биохимических показателей, некоторых цитокинов в ранний послеоперационный период. Не выясненным оказался вопрос о гистологических изменениях, происходящих в рогах матки при пиометре у сук.

Изучение патогенеза воспалительных процессов имеет большое научное значение и позволит более полно выявить причины и механизмы воспаления, что в свою очередь даст возможность выбрать оптимальный путь лечения, определить его временные интервалы, а также профилактировать заболевания репродуктивной сферы.

Цель исследования - оценить морфологические и функциональные изменения в организме при пиометре и ее оперативном лечении у собак.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Выявить особенности морфологических, биохимических показателей крови у собак при пиометре и их динамику в раннем послеоперационном периоде после овариогистероэктомии.

2. Охарактеризовать особенности гормонального статуса у собак о пиометрой и в динамике раннего послеоперационного периода после;

овариогистероэктомии.

3. Установить критерии оценки эндогенной интоксикации у собак с ииометрой и в динамике раннего послеоперационного периода.

4. Определить цитокиновый статус и выяснить наличие корреляционных связей между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами при пиометре у сук.

5. Изучить микробный пейзаж влагалища сук при пиометре и после овариогистероэктомии.

6. Определить характер гистологических изменений, происходящих в тканях матки при пиометре у сук.

Научная новизна.

Представлена комплексная сравнительная эндокринная,

иммунобиологическая, морфологическая, микробиологическая характеристика организма в до- и послеоперационный период при пиометре у собак. При данной патологии выявлены характерные признаки эндогенной интоксикации, выражающиеся в увеличении ее маркеров - фракций средних молекул и лейкоцитарного индекса.

Показаны изменения уровней цитокинов (фактора некроза опухоли альфа, интерлейкина-4 и гамма-интерферона) в сыворотке крови собак при пиометре и их динамика в раннем послеоперационном периоде. Выявлены биологические корреляционные связи между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами при пиометре у сук.

Представлены и детализированы данные о состоянии обмена веществ больных животных.

Показано, что морфологическим эквивалентом иммунобиологических нарушений являются деструктивные изменения, происходящие в тканях матки (шейка и рога), которые характеризуются наличием кист, извитых маточных желез, скоплением лимфоцитов в строме эндометрия и миометрия.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Разработана научная концепция о полиэтиологичности развития

пиометры у собак. Показана интегративная роль цитокиновой регуляции защитных механизмов в патогенезе воспалительного процесса. Обоснована необходимость выявления корреляционных связей между цитокинами, которая позволяет оценить физиологическое состояние организма. Выявлено, что маркеры эндогенной интоксикации отражают состояние детоксикационных систем организма. Установлены клинико-морфологические корреляции в развитии пиометры, проявляющиеся в гемодинамических и гормональных сдвигах и сопровождающиеся деструктивными изменениями органов репродукции.

Выявленные показатели могут являться прогностическими тестами течения послеоперационного периода.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Морфофункциональные реакции организма при оперативном лечении пиометры у собак.

2. Изменения гематологических, биохимических показателей и уровня цитокинов у собак при пиометре соответствует септическому процессу, но имеет ряд особенностей.

3. Реакции цитокинового статуса и эндогенной интоксикации в раннем послеоперационном периоде. Корреляционная связь между провоспалительными и противовоспалительными цитокинами при пиометре у сук.

Личный вклад автора выражается в проведении многоэтапного исследования, включающего изучение научной литературы по основным аспектам проблемы, участие в иммунологических исследованиях, участие в клинических и лабораторных исследованиях, анализе и обобщение полученных результатов.

Обоснованность и достоверность результатов исследования обеспечивается использованием методов, адекватных цели и задачам работы и корректностью применения статистических методов анализа полученных данных, воспроизводимостью результатов исследования и апробацией выводов,

полученных в ходе работы.

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены, обсуждены и получили положительную оценку на 61-й научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ (2007), Международной научной конференции, посвященной 200-летию высшего ветеринарного образования в России и 200-летию СПбГАВМ (2008г.), Всероссийском Съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов аграрных вузов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (2009г.), Simpozion stiintific international «35 ani de invatamant superior medical Veterinär din república Moldova» (2009г.), Международной научной конференции по вопросам ветеринарной хирургии «Внедрение новых технологий в профилактику и лечение хирургической патологии у животных» (2009г.), Международной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (2011, 2012, 2013 г.г.).

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре оперативной хирургии с основами топографической анатомии и кафедре ветеринарного акушерства и гинекологии им. И.А. Бочарова ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», кафедре диагностики внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО «Омский аграрный государственный университет им. П.А. Столыпина», кафедре акушерства, гинекологии и биотехнологии размножения животных им. Я.Г. Губаревича, кафедре общей, частной и оперативной хирургии УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины». Материалы диссертации вошли в учебное пособие «Оперативная хирургия у животных» под редакцией профессора Б.С. Семенова (2012 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, из которых 6 статей в изданиях, входящих в «Перечень ведущих журналов и изданий, рекомендованных ВАК РФ»: Международный вестник ветеринарии - 1

(2009г.), Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии — 3 (2009, 2013 гг.), Ветеринарная медицина - 2 (2010, 2011гг.).

В соавторстве опубликовано учебное пособие «Оперативная хирургия у животных» под ред. проф. Б.С. Семенова (2012 г.), допущенное Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов сельскохозяйственных вузов, по специальности ветеринария.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Материал работы изложен на 103 страницах компьютерного текста, содержит 17 таблиц и 11 рисунков. Список литературы включает 170 литературных источников, из них 49 - зарубежная литература.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В общей заболеваемости собак болезни репродуктивной системы составляют по данным разных авторов от 5,7% (Волков П.А., 2005) до 12 - 20% (Федин A.A., 2005; Шафикова A.B., 2006, Емельянова Н.С., 2007). На долю пиометры приходится более 60% всех гинекологических болезней (Лебедев A.B. с соавт., 2000). По данным С.Н. Карташова (2005) во всех странах мира в последние годы отмечено повышение частоты воспалительных заболеваний репродуктивной системы у сук. В России за последние 5 лет инцидентность этой патологии увеличилась на 45% и продолжает расти (Болдарев A.A. с соавт., 2008).

1.1. Пиометра (этиология и патогенез).

Пиометра (от греч. pyos - гной, metra - матка) - гнойное воспаление матки, септическое состояние организма, при котором происходит скопление гноя в полости матки.

Пиометра часто встречается у собак, содержащихся в мегаполисе (Аллен

В.Э.,2002; Feldman Е.С. et al., 1989,), и входит в пятерку наиболее распространенных гинекологических заболеваний (Андреев Г.М. с соавт., 2003).

В основном, пиометрой болеют собаки, достигшие среднего возраста и старше (Федин A.A.,2005). Установлены возрастные границы для сук опасные относительно возникновения гиперплазии эндометрия: для крупных пород — 4-7 лет, для средних - 5-8 лет, для мелких 10-12 лет (Мордашева Э.Б., 2003). Автор считает эти периоды критическими с точки зрения возрастных изменений гормонального статуса организма. Отмечается, что нерожавшие собаки входят в группу риска по развитию гиперплазии эндометрия. Патология обнаружена у 76% нерожавших сук относительно 24% рожавших сук.

A.B. Шафикова (2006) считает, что наиболее предрасположены к заболеваниям матки метисы, сенбернары, московские сторожевые, курцхаары, французские бульдоги и тойтерьеры. При этом эндометрит чаще диагностируется у метисов, кавказских, среднеазиатских овчарок и пуделей.

Ряд авторов указывает на выраженную сезонность заболевания, связанную с сезонностью течек - наибольшее распространение заболевания встречается в весенний и летне-осенний период (Мордашева Э.Б., 2003; Волков П.А., 2005; Емельянова Н.С., 2007). Анатомические дефекты репродуктивных органов у животных также способствуют возникновению пиометры (Cozens E.R., 2009, Ragni R.A ,2005).

Пиометра встречается не только у таких привычных для нас видов животных как кошки и собаки (Аллен