Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Диагностика и морфофункциональная характеристика риккетсиозов у собак

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Диагностика и морфофункциональная характеристика риккетсиозов у собак"

На правах рукописи

Раевская Мария Андреевна

ДИАГНОСТИКА И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РИККЕТСИОЗОВ У СОБАК

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 О .'Ч'Я......>

п. Персиановский 2012

Л

с--.-)

005042469

Работа выполнена и Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Карташов Сергей Николаевич

Официальные оппоненты: Шинкаренко Александр Николаевич

доктор ветеринарных наук, профессор ФГВОУ ВПО «Волгоградский государственный аг рарный университет» заведующий кафедрой инфекционной патологии и судебной ветеринарной медицины Дроздова Людмила Ивановна доктор ветеринарных наук, профессор ФГВОУ НПО «Уральская Госесльхочакадемия» заведующая кафедрой анатомии и гистологии

Ведущая организация: ФПЮУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «23» мая 2012 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.028.03 при ФПЮУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» по адресу: 346493, Ростовская область. Октябрьский район, п. Псрсиановский, ДонГАУ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГКОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет».

Автореферат разослан 23 2012 г.

Ученый секретарь диссертационног о совета Т.П. Дерезина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы.

Проблема заболеваний собак, инфекциями, переносчиками которых являются иксодовые клещи, приобретает все большее значение для многих регионов России и в первую очередь для южных регионов (Авроров В.Н., 1991). В последнее время существенно расширились представления о распространении сочетанных очагов трансмиссивных клещевых инфекций риккетсиозной, бактериальной и протозойной природы на территории Российской Федерации (Коренберг Э.И., 2007, Мерзлова Н.Б., 2009).

В Ростовской области и Краснодарском крае отмечается резкое и устойчивое повышение уровня заболеваемости собак пиронлазмидозами и появилась новая проблема - клещевые риккетсиозы.

Риккетсиозы — группа заболеваний многих видов животных и человека, вызываемых внутриклеточными паразитами (риккетсиями), которые передаются в основном трансмиссивно и проявляются у животных лихорадками, пневмониями, ринитами, абортами и послеродовыми эндометритами, а также поражением лимфатической системы и форменных элементов крови. Риккетсии - довольно многочисленная группа, представленная патогенными и непатогенными видами. В природе риккетсии обитают преимущественно в организме насекомых (вшей, блох, клещей), а также грызунов, диких и сельскохозяйственных животных (Борисович Ю.Ф., Кириллов JI.B.,1987, Шутова H.A., 2004).

На сегодняшний день возбудитель риккетсиозов собак классифицируется следующим образом: царство Procariotae, Тип Proteobacteria, Class Alphaproteobacteria, порядок Rickettsials, Семейство Anaplasmataceae, включает роды: Aegyptianella, Anaplasma, Ehrlichia, Neorickettsia (Антонов Б.A., 1987, Мерзлова Н.Б., 2008).

Род Anaplasma включает следующие виды: Anaplasma bovis, Anaplasma ovis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum. Для собак патогенными являются последние два вида, и заболевания, вызываемые этими видами, называют анаплазмозами. А. phagocytophilum, кроме того, патогенна для человека.

Род Ehrlichia включает так называемую группу Е. canis, в которой три вида: Е. canis, Е. chaffeensis, Е. ewingii, все патогенны для собак и человека, и заболевания, вызываемые этими видами, называют эрлихиозами.

Возрастанию интереса к этой группе инфекций способствовало и появление «новых» и пока не изученных для России инфекций -гранулоцитарного анаплазмоза собак (ГАС) и моноцитарного эрлихиоза собак

(МЭС). Разные виды риккетсий заражают различные типы лейкоцитов, что обусловливает названия передаваемых ими болезней: A. phagocytophilum и Е. ewingii - граиулоциты, в основном, нейтрофилы (гранулоцитарный анаплазмоз собак - ГАС и гранулоцитарный эрлихиоз собак — ГЭС), Е. chaffeensis, Е. mûris, Е. canis - моноциты (моноцитарный эрлихиоз собак - МЭС) (Anderson В.Е., Dawson J.E., 1991).

Разные виды риккетсий связаны с различными видами иксодовых клещей. Переносчиками риккетсиозов служат клещи рода Dennacentor, Rhipicephalus, Amblyomma, Ixodes (Dumler J.S., Barbet A.F., 2001 ).

Однако реальная роль этих клещевых патогенов в инфекционной патологии собак на территории Ростовской области пока не изучена. Нет данных по распространению этих инфекций, слабо разработана диагностическая база по их выявлению. В доступной литературе мало данных по морфофункциональным изменениям в органах и тканях собак при риккетсиозах, что и послужило целью нашего исследования.

1.2. Цель работы.

Изучить распространение и морфофункциональные изменения при риккетсиозах у собак с разными клиническими синдромами, разработать способ диагностики и терапии собак больных риккетсиозами.

1.3. Задачи исследования:

- провести анализ эпизоотической ситуации при риккетсиозах собак в Ростовской области в зависимости от возраста, породы, сезона года;

- установить клинические критерии у собак, больных риккетсиозами;

- изучить морфологические и биохимические показатели крови собак при риккетсиозах;

- создать набор для диагностики риккетсиозных инфекций у собак в реакции Г1ЦР;

- провести сравнительное изучение терапевтической эффективности схем лечения с текущим контролем по гематологическим показателям.

1.4. Научная новизна.

Изучено распространение риккетсиозов у собак в Ростовской области в зависимости от возраста, породы, сезона года. Выявлены клинические и гематологические особенности при риккегсиозе у собак. Разработан диагностический алгоритм при риккетсиозах у собак. Выявлены основные синдромы характерные для этих заболеваний, и установлены их диагностические критерии. Найден эффективный способ комплексной терапии собак, больных риккетсиозами.

1.5. Практическая значимость.

Разработан набор для детекции генетического материала риккетсий в реакции ПЦР. Полученный научный материал, позволяет точно и объективно оценить тяжесть течения риккетсиозов, выяснить основные изменения в системах организма, поврежденных патологическим процессом. Предложены схемы комплексной терапии собак, больных риккетсиозами с гепатопривным синдромом.

1.6. Основные положения, выносимые на защиту:

- распространение риккетсиозов собак в Ростовской области;

- клинико-морфологические критерии диагностики риккетсиозов у собак, основные синдромы и симптомы риккетсиозов у собак;

- особенности терапии при разной степени тяжести риккетсиозов у собак.

1.7. Реализация результатов исследований.

Практические предложения реализуются в практической работе ветеринарных клиник Ростовской области, ГБУ РО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» в отделе донозологической и клинической диагностики, лаборатории функциональной диагностики болезней животных ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лаборагорно-практических занятий на кафедре внутренних незаразных болезней и патофизиологии ФГБОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет» по курсу «Болезни мелких домашних животных».

1.8. Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ГНУ СКЗНИВИ; на четырех международных и двух всероссийских научно-практических конференциях: Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых учёных, аспирантов и студентов факультета РУДН, г. Москва; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы производства и переработки продуктов животноводства», п. Нижний Архыз; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины», г. Ростов-на-Дону; Международной научно-практической конференции «Пути интенсификации производства и переработки продуктов животноводства»,г. Черкесск; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства», г. Новочеркасск; Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства», г. Новочеркасск;

1.9. Публикации.

По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

1.10. Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 127 страницах текста компьютерного исполнения, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений для практики и списка литературы. В диссертации приведено 23 таблицы, она иллюстрирована 14 рисунками. Список литературы включает 191 источник литературы, в том числе 114 на иностранных языках.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы и исследования

Настоящая работа выполнена в ГНУ СКЗНИВИ в лаборатории функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных.

Научно-производственные опыты, апробация и производственные испытания полученных результатов проведены в ветеринарных клиниках Ростовской области. При изучении распространения риккетсиозов у собак использовались отчетные материалы Новочеркасской, Таганрогской, Ростовской, Шахтинской ветеринарных клиник.

В работе использовались клинический, гематологический, биохимический, цитологический и гистологический методы исследований.

Для диагностики риккетсиозов использовали разработанный нами диагностический набор для обнаружения риккетсий методом ПЦР. Дифференцировали риккетсиозы от бабезиоза, лептосиироза, аденовирусного гепатита в ГБУ РО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» путем постановки реакции микроаглютинации и методом ПЦР.

Клиническую оценку тяжести болезни проводили гто не специфическим симптомам, характеризующим общее состояние животного. Температуру тела измеряли ректально термометром. Пульс прощупывали у собак на внутренней стороне бедра на бедренной артерии, оценивали по частоте и качеству. Определяли частоту сердечных сокращений по пульсовой волне при соблюдении всех правил данного исследования.

Морфологические исследования крови проводили на морфологическом анализаторе Огаглэ-З. В цельной крови определяли число эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, выводили лейкограмму, количество гемоглобина, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС), гематокрит.

В сыворотке крови определяли: общий белок с помощью биуретовой реакции, альбумин - по реакции с бромкрезоловым зеленым, глобулиновые

фракции - турбидиметрическим методом, активность

аланинаминотрансферазы - по методу Райтмона-Френкеля, общий билирубин -по методу Йендрашика-Грофа, мочевину по реакции с диацетилмоноаксимом в сильно кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа, глюкозу орто-толуидиновым методом, активность щелочной фосфатазы - по реакции гидролиза п-нитрофенилфосфата натриевой соли.

В плазме крови определяли рН и уровень калия ионометрическим методом с применением ионоселекгивных электродов, протромбиновое время - по реакции с тромбопластин-кальцием.

Выясняя вопросы тяжести течения гепатопривного синдрома у собак при риккетсиозах, особое внимание уделяли проведению цитологического исследования по приведенной ниже методике исследования пунктата печени.

Цифровой материал обрабатывали с использованием методов вариационной статистики (Г.Ч. Лакин, 1980) на персональном 1ВМ-совместимом компьютере, разницу между двумя величинами считали достоверной на уровне вероятности р<0,05 и 0,001. Числовой материал представили в единицах СИ, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения и стандартом СЭВ 1062-68.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространение риккетсиозов собак в Ростовской области

За период с 2008 по 2010 гг. анализу подвергнуто 3445 проб крови собак подвергнутых нападению клещей и, полученных из 1 1 ветеринарных клиник Ростовской области. У 132 животных был поставлен диагноз риккетсиозы. Из них у 106 животных был поставлен диагноз анаплазмоз, у 26 выявлен эрлихиоз. Таким образом, распространение анаплазмоза в Ростовской области составляет 3,07 %, эрлихиоза 0,75 %. Общее количество риккетсиозных инфекций составило 3,82 % среди укушенных клещами животных.

Отмечается сезонная динамика риккетсиозов. Как в крупных городах области, так и в сельской местности, отмечаются два подъема заболевания — весенний и осенний, которые следуют за аналогичными пиками активности иксодовых клещей со сдвигом в несколько дней (длительность инкубационного периода от 7 до 20 дней).

Осенняя волна риккетсиозов продолжается в среднем с середины сентября по середину декабря и характеризуется более высоким показателем тяжелого течения заболевания. Среди всех заболевавших собак превалируют

собаки неопределенных пород (метисы). Всего их среди заболевших животных было более 50 %. Все эти животные были из сельской местности, и в анамнезе, кроме снятия с них клещей, отмечалось бродяжничество, то есть все эти животные в определенный период покидали своих хозяев и свободно передвигались по прилегающим территориям. Среди породистых собак наибольший процет заболевших отмечался среди лаек — 10,6%, немецкой овчарки и ее помесей 9,09 %, и среди курцхааров 8,34 %. Кроме того нами был проведен анализ особенностей содержания животных, заразившихся риккетсиозами. Так из 132 собак заразившихся риккетеиозами 116 собак были из сельской местности, что составило 87,8 %. Причем 61 из них, 52,6 % в анамнезе были уличены в бродяжничестве, то есть убегали из места содержания и от 3-х до 30-и дней находились в местах неизвестных для их хозяев. После возвращения из таких прогулок хозяева и замечали у животных первые признаки заболевания. Еще в 47,4 % случаев собаки заражались, если их брали на охоту или выезжали с ними на природу, при этом на охоте заразились 37 собак, что составило 31,8 %. Только 16 из 132 собак заразились в городских условиях, что составило 12,1 % от всех заболевших животных. При этом в результате бродяжничества заболело 4 собаки, на охоте заразилось 9 собак. Все собаки, которых брали на охоту, от 3 до 19 дней проживали со своими хозяевами в сельской или лесостепной местности, внегородской черты.

Со всех собак, которые заболели риккетсиозами в большом количестве, снимали клещей Dermacentar marginatus, Dermacentor pictus и Rhipicephalus sanguineus.

Таким образом, бесспорным фактором риска заражения собак риккетсиозами является проживание в сельской местности, бродяжничество и охота.

3.2. Разработка набора для диагностики и идентификации риккетснй

Исследования на риккетсиозы проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в агарозном геле. В основе метода лежит амплификация специфического участка за счет многократного повторения циклов денатурации ДНК в исследуемой пробе, отжига специфических олигонуклеотидных затравок (праймеров) и синтеза цепей ДНК с помощью фермента Тац-полимеразы.

Кровь для исследования в ПЦР отбиралась из яремной вены в объеме 7 мл с использованием одноразовых пробирок GreenVac-Tube. Полученную центрифугированием пробирок при 3000 обхмин"' в течение 15 минут.

Выделение ДНК из образцов крови производили набором «ДНК-Сорб В» (ФГ'У ЦНИИЭ Роспогребнадзора, г. Москва) в соответствии с

рекомендациями изготовителя. Метод выделения основан на специфической обратимой сорбции ДНК на частицы силикагеля.

Диагностика полученных образцов ДНК на присутствие генетического материала риккетсий производилась с использованием набора реагентов и родоспецифических праймеров (EhrF 5'- AGT ТАС TTG ТСС АСА ТАС GTG С -3' и EhrR 5'- СТА CGT GTG GTA ССТ AAC GTG -3'), фланкирующих участок генома размером в 344 пар нуклеотидов (п.н.).

Продукты ПЦР анализировали путем электрофоретического разделения в 1,5% агарозном геле.

Для видовой идентификации представителей рода Ehrlichia и Anaplaswa использовали вариант ПЦР в реальном времени, для чего были подобраны видоспецифичные праймеры и зонды, на консервативную область генома Е. canis и A. phagocytophUum.

Нуклеотидные последовательности генов-мишеней для ПЦР были получены из баз данных NCBI GenBank. Анализ нуклеотидных полноразмерных геномов и участков генов, проводили с применением программы «BioEdit 6.0» и «Oligo 4.0».

При идентификации видов риккетсий использовали мультиплексную TaqMan ПЦР с двумя разработанными зондами, содержащими различные флуоресцентные метки на 5' конце и гасители флуоресценции BHQ-типа на 3' конце: Ehrl 1 (6FAM-5'-CTG AG A GGA CGA ТС A GCC АСА CT-3'-BHQ-l) и Anphl2 (JOE-5'-GAC GGT ACC TAT AG A AG A AGT CCC-3'-BHQ-l), для селективного детектирования амплификационных фрагментов 13S-pPHK Е. canis и A. phagocytophUum соответственно.

3.3. Симптомы болезни

Риккетсиоз у собак имеет некоторые особенности проявления в зависимости от породы, возраста, степени вовлечения в патологический процесс паренхимы печени, почек, сердечно-сосудистой системы.

По нашим наблюдениям, у молодняка риккетсиоз протекал с более выраженными признаками и чаще вызывал смерть животного. На основании клинических признаков клиническое течение риккетсиозов у собак можно подразделить на: легкое, среднее, тяжелое и крайне тяжелое клиническое течение.

Выраженность клинических симптомов риккетсиозов в зависимости от общего состояния животных представлена в таблице 1.

Как видим из таблицы, у 43 животных заболевание протекало с легким клиническим течением, что составило 32,5%. У 57 (43,18%) животных риккетсиоз протекал со средней тяжестью, у 21 (15,9%) животного

клиническое течение риккетсиоза было тяжелым и у 11 (8,33%) собак очень тяжелым.

Показателями легкой формы риккетсиозов служили следующие признаки: общее состояние удовлетворительное, температура тела не превышала 39,5°С, аппетит сохранен, но ослаблен, тахикардия и тахипноэ отсутствуют.

Критериями средней тяжести риккетсиозов являлись: температура тела от 39,5 до 39,9°С, пульс 131-140, частота дыхательных движений 31-40, умеренно выраженная астения, увеличение скорости наполнения капилляров до 5 секунд, рвота один-два раза в день пенистая (может отсутствовать), со слизью или с содержимым двенадцатиперстной кишки, понос однократно (может отсутствовать), кал жидкий, легкая бледность склер, увеличение размеров печени, выраженная дегидратация организма.

К критериям тяжелой формы риккетсиозов относились: температура тела 39,9-40,9°С, пульс 141-160, частота дыхательных движений 41-50; скорость наполнения капилляров 5-6 секунд, рвота от 2 до 5 раз в сутки с содержимым двенадцатиперстной кишки, понос до 5 раз в сутки, кал жидкий, зелено-коричневого цвета, возможна незначительная примесь крови, хорошо выраженная бледность, иногда слабо выраженная желтушность слизистых, дегидратация, увеличение размеров печени. В ряде случаев отмечались запоры, а рвота отсутствовала. На слизистых ротовой полости отмечались петехиальные кровоизлияния.

Критериями крайне тяжелой формы риккетсиозов являлись: температура тела ниже 40,0 С, пульс менее 55, частота дыхательных движений менее 12, адинамия, скорость наполнения капилляров более 6 секунд, выраженная астения, увеличение лимфатических узлов, понос с кровью или запоры, выраженная желтушность, значительное увеличение размеров печени, сильно выраженная дегидратация организма. Кровоизлияния по всему телу, некрозы в ротовой полости. Поражения глаз являются непостоянным признаком риккетсиозов, так, только у 14 собак из 132 нами были обнаружены увеиты, кератиты и конъюнктивиты.

Практически у всех собак с тяжелым и очень тяжелым клиническим течением заболевания отмечались кровоизлияния в виде петехий и экхимозов по брюшной стенке, очень часто кровоизлияния отмечаются в ротовой полости, и у 2-х собак мы отмечали кровоизлияния по всему телу. Надо отметить, что у пигментированных собак определить наличие мелких петехиальных кровоизлияний очень тяжело. И часто этот признак при клиническом осмотре пропускается ветеринарными специалистами. В связи с этим осмотр ротовой полости собак, подвергшихся нападению клещей, должен

быть обязательной процедурой, в первую очередь для обнаружения мелких кровоизлияний и уже во вторую очередь - для обнаружения желтушности.

Таблица 1

Частота встречаемости клинических признаков при риккетсиозах в зависимости от формы заболевания

Клиническое течение заболевания

Клинический признак легкая (п=43) средняя (п=57) тяжелая (п—21) крайне тяжелая (п=1 П

% % % %

Гипертермия 42,6 93,3 100 73,3

Атаксия 12,4 73,3 99,7 100

Тахикардия 13,1 6,7 93,3 100

Тахипноэ, одышка 19,4 44,6 77,4 100

Анорексия 26,7 56,7 96,7 100

Бледность слизистых оболочек 24,3 49,6 100 100

Риниты . 7,1 34,3 21,3 41,3

Лимфадениты 43,2 71,3 89,5 91,5

Желтушность слизистых - - 23,3 56,3

Гепатомегалия 3,7 12,1 43,33 55,7

Рвота 13,1 37,9 45,2 81,3

Понос 4,7 22,1 52,7 47,3

Задержка мочи - - 3,3 22,3

Признаки обезвоживания - 5,3 21,3 47,2

Признаки энцефалопатии - - 13,3 33,7

Кровоизлияния на слизистых и коже 2,3 7,8 87,3 99,3

Увеиты, кератиты, конъюнктивиты - 3,4 29,7 71,4

Хрипы в легких 7,8 23 2 43,4 89,4

Парезы и параличи - 3,4 7,1 11,4

Некоторые симптомы риккетсиозов, так называемые манифестирующие, полностью соответствуют тяжести течения заболевания и встречаются практически всегда при тяжелой и крайне тяжелой формах, тогда как при легкой не наблюдаются. Такие симптомы, характеризующие тяжесть течения риккетсиозов, мы назвали общими. Кроме того, при риккетсиозах встречаются симптомы, которые не всегда встречаются при тяжелой форме заболевания, такие симптомы мы назвали синдромальными, поскольку они соответствуют

синдромам, встречающимися при риккетсиозах: гемолитический, гепагопривный, уремический, кардиодепрессивный и гастроинтестинальный синдромы. Мы установили, что синдромапьная симптоматика зависит от возраста животного.

Таблица 2

Проявление различных синдромов при тяжелой форме риккетсиозов у собак в зависимости от возраста

Синдромы при риккетсиозах с тяжелым течением Возрастная группа Всего заболело

до 2-х лет- от 2-х до 7 лет старше 7 лет

голов голов голов голов %

Гемолитический синдром 23 14 "8 3 40 30,3

Гепатопривный синдром 21 6 35 26,5

Уремический синдром \1 11 4 32 24,2

Кардиодепрессивный синдром 1 4 : 10 15 11,4

Гастроинтестинальный 9 1 10 7,6

синдром

Всего собак 132 100

3.4. Результаты морфологических и биохимических исследовании крови у собак больных риккегсиозами с гемолитическим, гепатопривным и уремическим синдромами

Результаты морфологического исследования крови у собак, больных риккетсиозами с гемолитическим синдромом, представлены в таблице 3.

Такие показатели крови, как число эритроцитов (6,4±0,92 при легкой и 1,6±0,4х10|2/л крайне тяжелой формах), количество гемоглобина (93,61 ±9,15 -30,6±7,05 г/л), гематокрит (0,35±0,05 - 0,07±0,02), число тромбоцитов (127±17,4при легкой и 47±11,7 при крайне тяжелой форме) указывали на то, что на первый план клинической картины выходят признаки анемии и кровоизлияний на слизистых и коже. По мере нарастания тяжести течения риккетсиозов с гемолитическим синдромом так же происходили изменения лейкограммы, которые характеризовались повышением абсолютного числа эозинофилов (5,7±0,08 - 6,16±0,02%) при легкой и средней тяжести

заболевания и их снижением (2,97±0,03 - 1,08±0,01%) при тяжелой и крайне тяжелой форме, снижением лимфоцитов до 5,33±0,05% при норме 26,36% и резким моноцитозом (8,09±0,03 - 48,22±0,01%) с одновременным ростом числа нейтрофилов с 8,2±0,1% при легкой до 23,53±0,01% при крайне тяжелой форме. Уровень мочевины увеличивался при тяжелой степени риккетсиозов с гемолитическим синдромом до 7,6±0,64 ммоль/л и при крайне тяжелой до 1 1,8±0,22 ммоль/л при норме 4,95 ммоль/л.

Наряду с повышением уровня мочевины происходило увеличение протромбинового времени с 8,5 сек. при легкой до 13,8±0,5! сек. - при крайне тяжелой форме риккетсиозов с гемолитическим синдромом (р<0,001).

Таблица 3

Показатели крови у собак, больных риккетсиозами с гемолитическим

синдромом

Показатели Гемоглобин, г/л Клинически здоровые животные " 142,68±8~94 Больные животные, клинические формы болезни

легкая 93.61±9,15* средняя 74.2±9.43** тяжелая 44.3 ±7,7 8 ** ~ крайне тяжелая 311.6: 7.05"**

Эритроциты, х10'7л 7.04±0.87 6,4±0.92 4.8±0.91 ** 2.7±0,78** 1,6±0.4***

Гематокриг 0.43±0,03 0,35±0,05 0.24±0.06 0,13±0.01 0,07±0,02*

АлАТ, Е/л 82,3±7,83 82,3±7,83 92.1±8,96 147,17± 19.34 165,54±10,64*

Мочевина, ммоль/л 4.95±0,39 4.95±0,39 6.9±0.48* 7.6±0.64* 11.8±0,22**

Билирубин, мкмоль/л 4.31 ±0,31 4,31 ±0,31 14.21±0.46* * * 26±0.55*** 37,08±0,47***

рН плазмы 7.4±0.01 7,4±0.01 7.41 ±0.01 7,49±0,02 7.48±0,03

Протромб. время, с 8.5±0.41 8,5±0,64 9.3±0,81 10,21±0,58 13,8±0,51

*- р0.05; ** - р<0,01; *** -р<0.001

В зависимости от тяжести течения риккетсиозов с гемолитическим синдромом отмечали увеличение уровня общего билирубина в крови от 14,21 ±0,46 мкмоль/л при средней до 37,08±0,47 мкмоль/л при крайне тяжелой форме (р<0,001). С нарастанием тяжести риккетсиозов с гемолитическим синдромом происходили значительные изменения кислотно-основного и водно-электролитного балансов, которые характеризовались нарастающими гиперкалиемией и алкалозом. Главными причинами данных нарушений

являются значительная потеря кислой составляющей буферной системы крови при выраженной одышке.

Морфологическими исследованиями крови у собак, больных риккетсиозами с гепатопривным синдромом, выявлены изменения в содержании числа эритроцитов, лейкоцитов и количества гемоглобина в зависимости от формы болезни (таблица 4).

Таблица 4

Показатели крови у собак, больных риккетсиозами с гепатопривным

синдромом

Показатели крови Клинически здоровые животные Больные животные, клинические формы болезни

легкая средняя тяжелая крайне тяжелая

Гемоглобин, г/л 142.68±8.94 126,39±4,62 131,7± 10,26 115,34±7,69 97,8±5,28

Эритроциты, хЮ|2/л 7,04±0.87 7,1±0,3 5,8±0.4 5,1±0.6 4,6±0,3

Гематокрит 0,43±0,03 0,4±0,1 0.43±0,03 0,39±0.15 0,39±0,02

АлАТ, Е/л 82.3±-7.83 133.5±10 182.13tl6.06* 305,62± 13,57 336,06± 15,71 **

Мочевина, ммоль/л 4.95±0,39 6,76±0,27 6,27±0.38 10,55±0.46** 10.88±0,81*

Билирубин, мкмоль/л 4,31±0,3 1 9,18±0,93 13,93±0.46** 15,19±0,66** * 22,8±0,62***

рН плазмы 7,4±0.01 7.3±0,01 8,13±0,01 7,58±0.03 7,58±0,01

Протромб. время, с 8,5±0,41 14,1±0,86 16,9±0,5 20,99±0,65** 27,5±0,86**

*- р<0,05: ** - р<0,01; *** -р<0,001

При легкой и средней степени заболевания отмечается не выраженна: анемия, количество гемоглобина составляет 126,39±4,62 - 131,7±10,26 г/л I более выраженная анемия при тяжелой и очень тяжелой формах 115,34±7,69 -97,8±5,28 г/л, количество эритроцитов изменяется с 7,1±0,3 - 5,8±0,4><10|2Л при легкой и средней степени до 5,1 ±0,6 -4,6±0,3><10|2/л при тяжелой и очеш тяжелой форме гепатопривного синдрома. Для всех тяжестей течени; заболевания характерно увеличение активности аланинаминотрансферазы 1 сыворотке крови соответственно от 133,5±10 и до 336,06±15,71Е/л (р<0,001) Отмечали, также, увеличение активности щелочной фосфатазы с 130,67±9,6! Е/л при легкой форме, до 335,12±12,59 - при крайне тяжелой (р<0,05). Пр1

риккетсиозах с гепатопривным синдромом отмечали незначительный рост уровня мочевины до 10,88±0,81 ммоль/л при крайне тяжелой форме заболевания, показатели функции почек отображают лишь общее тяжелое состояние организма, при котором нарушается фильтрующая функция органа.

Наряду с увеличением мочевины также выявляли повышение в крови общего билирубина (с 9,18±0,93 до 22,8±0,62 ммоль/л), как следствие развития паренхиматозного холестаза.

Результаты морфологического исследования крови у собак, больных риккетсиозами с уремическим синдромом, представлены в таблице 5. При уремическом синдроме также отмечается снижение таких показателей как гемоглобин (110,24±5,94 - 67,4±4,73 г/л), эритроциты (6,42±0,44 - 3,1±0,38 х10|2/л) и гематокрит (0,46±0,02 - 0,13±0,05).

Таблица 5

Показатели крови у собак, больных риккетсиозами с уремическим синдромом

Показатели Клинически здоровые животные Больные животные, клинически формы ' болезни

легкая 110Т24±5.94 6.42:10,44 средняя 89.4 • 9.13 5,4:10,57 тяжелая крайне тяжелая

Гемоглобин, г/л Эритроциты. ><10|2/л 142.68±8.94 7,04±0.87 75.7±6,74 4.2±0.29 67,4±4,73 3,1±0,38**

Гематокрит 0,43±0,03 0,46±0,02 0,35±0,04 0,24±0,04 0,13±0,05

АлАТ, Е/л 82,3±7.83 97.23±8,63 96,61±21,7 122,6±8,3 163,15± 10,55

Мочевина, ммоль/л 4,95±0.39 16,75±0.3* 26,9±0,81* 31±0.44** 41,43±0,33**

Билирубин, мкмоль/л 4,31±0.31 6,82±0,37** 8.7:10.41** 12.76±0.3 15.82±1,09**

рН плазмы 7,4±0.01 8.2К .0.03 8,0 ¿±0,03' 8,58±0,01~1 8,16±0,02

Протромб. время, с 8,5±0,41 9,01±0,75 8,7±0,61 9,5±0,49 13,9±0,95*

* - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Уровень мочевины значительно повышался при тяжелой форме риккетсиозов с уремическим синдромом до 31 ±0,44 и до 41,43±0,33 ммоль/л при крайне тяжелой, против 4,95 ммоль/л у здоровых животных.

Снижение общего белка, альбумина, а также повышение протромбинового времени указывало на развитие при тяжелом и крайне тяжелом . течении риккетсиозов с уремическим синдромом признаков повреждения печени, но гораздо менее выраженных, чем при гепатопривном синдроме.

Таким образом, при гепатопривном синдроме отмечаются наиболее сильные изменения аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы; при уремическом синдроме отмечаются наибольшие поражения почек, чем при остальных синдромах и колебания уровня мочевины составляют от 16,75±0,3 до 41,43±0,33 ммоль/л, а при гепатопривном и гемолитическом колебания составляют всего лишь 6,9±0,48 - 15,33±0,42 ммоль/л. При гемолитическом синдроме отличительной особенностью является значительное снижение гемоглобина и количества эритроцитов, общего белка (56,72±0,33 ммоль/л) и альбумина (20,39±0,91 ммоль/л) при относительно незначительных повышениях уровней мочевины, аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы.

3.5. Сравнительная эффективность методов лечения собак, больных

риккетсиозами

Нами были отобраны 18 собак с клиническим проявлением нескольких синдромов (гемолитического, уремического и гепатопривного). Течение заболевания было острое, клиническая тяжесть течения - тяжелое. Лечение было комплексным, одним из направлений которого было устранение факторов, способствующих поражению печени.

Всех животных разделили на три группы по 6 собак в каждой. Первая группа - контрольная, и две опытные группы животных.

Схема 1. Доксимаг в дозе 0,3 мл/кг в сутки однократно на курс лечения 5 инъекций; внутривенно 5%-й раствор глюкозы 2,0 мл/кг в смеси с инсулином 1 ЕД и калия хлоридом 4% 2мл на каждые 100 мл 5% раствора глюкозы один раз в день; полиглюкин капельно в дозе 10 мл/кг живой массы один раз в день, гептрал из расчета 1 мл готового раствора на 10 кг массы тела собаки через день, подкожно витамины В|, В6, В|2 один раз в три дня, чередуя между собой в дозах: В, - 10-20 мкг/кг, Вг, - 50-250 мг, В,2 - 10-20 мкг/кг живой массы; аскорбиновую кислоту 10 мг/кг живой массы один раз в день; внутримышечно ампициллин в дозе 10-20 мг/кг живой массы 4 раза в день в течение 7-10 дней; внутрь лактулозу в дозе 5-20 мл 3 раза в день ежедневно.

Животных первой опытной группы лечили по схеме 2.

Схема 2. Террамицин ЬА в дозах 0,1 мл на 1 кг веса животного; внутривенно 5%-й раствор глюкозы 2,0 мл/кг в смеси с инсулином 1 ЕД и калия хлоридом 4% 2мл на каждые 100 мл 5% раствора глюкозы один раз в день; полиглюкин капельно в дозе 10 мл/кг живой массы один раз в день, гептрал из расчета 1 мл готового раствора на 10 кг массы тела собаки через день, подкожно витамины Вь В^, В|2 один раз в три дня, чередуя между собой в дозах: В, - 10-20 мкг/кг, В6 - 50-250 мг, В,2 - 10-20 мкг/кг живой массы;

аскорбиновую кислоту 10 мг/кг живой массы один раз в день; внутримышечно ампициллин в дозе 10-20 мг/кг живой массы 4 раза в день в течение 7-10 дней; внутрь лактулозу в дозе 5-20 мл 3 раза в день ежедневно.

Собак второй опытной группы лечили по схеме 3.

Схема 3. Драксин в дозе 0,1 мл на 1 кг массы животного однократно; внутривенно 5%-й раствор глюкозы 2,0 мл/кг в смеси с инсулином 1 ЕД и калия хлоридом 4% 2мл на каждые 100 мл 5% раствора глюкозы один раз в день; полиглюкин капельно в дозе 10 мл/кг живой массы один раз в день, гептрал из расчета 1 мл готового раствора на 10 кг массы тела собаки через день, подкожно витамины В,, В6, В12 один раз в три дня, чередуя между собой в дозах: В, - 10-20 мкг/кг, В6 - 50-250 мг, Вп - 10-20 мкг/кг живой массы; аскорбиновую кислоту 10 мг/кг живой массы один раз в день; внутримышечно ампициллин в дозе 10-20 мг/кг живой массы 4 раза в день в течение 7-10 дней; внутрь лактулозу в дозе 5-20 мл 3 раза в день ежедневно.

У животных контрольной группы при использовании традиционных средств в схеме 1 (доксимаг) продолжительность лечения в среднем составила 17,37±0,68 суток с выздоровлением 80 % животных. Испытание схемы 2 на собаках больных риккетсиозами показало, что комплексное применение препаратов (террамицин, изотонический раствор натрия хлорида, полиглюкин, глюкоза, витамины Вь В6, В|2, С, ампициллин, гептрал) позволило вылечить 83,3 % животных при продолжительности лечения 15,25±0,32 суток. При лечении собак, больных риккетсиозами по схеме 3, и использовании драксина позволило при продолжительности лечения 9,2-1-0,4 суток добиться ремиссии у всех животных.

4. ВЫВОДЫ

1. В Ростовской области риккетсиоз собак протекает преимущественно как трансмиссивная эпизоотия собак, которая имеет тенденцию к нарастанию. В 2007 году было диагностировано 3 случая, в 2008 году 10 случаев, в 2009 году 119 случаев заболевания собак риккетсиозами. Инцидентность риккетсиозных инфекций среди всех укушенных клещами собак в Ростовской области составила 3,83%, при этом распространение анаплазмоза, вызванного Anaplasma phagocytophilum составляет 3,07 %, эрлихиоза, вызванного Ehrlichia cania 0,75%.

2. Отмечаются два подъема заболевания — весенний и осенний, которые следуют за аналогичными пиками активности иксодовых клещей со сдвигом в несколько дней (длительность инкубационного периода от 7 до 20 дней). Осенняя волна риккетсиозов продолжается в среднем с середины сентября по середину декабря и характеризуется более высоким показателем тяжелого

течения заболевания. В весенний период смертность от риккетсиозов у собак составляет 3,4%, в осенний период отмечается смертность на уровне 10,7%, а в среднем смертность от риккетсиозов у собак составила 6,7%.

3. Среди заболевших риккетсиозами собак 87,8 % были из сельской местности, 52,6% заболевших животных были уличены в бродяжничестве, в 47,4 % случаев собаки заражались, если их брали на охоту или выезжали с ними на природу. Только 12,2% от всех заболевших собак содержались в городских условиях в квартире или частном доме, заразившись в результате бродяжничества или на охоте.' Среди заболевших животных превалируют беспородные собаки.

4. Основными переносчиками риккетсиозов собак в Ростовской области явялются клещи Dermacentar marginatus, Dermacentor pictus и Rhipicephalus sanguineus.

5. Гемолитический синдром при риккетсиозах у собак характеризуется кровоизлияниями на слизистых оболочках и коже, анемией, тромбоцитопенией. Гемоглобин снижается до 30,6±7,05 г/л, число тромбоцитов всегда ниже 60x109/л.

Гепатопривный синдром при риккетсиозах собак характеризуется желтушностью слизистых оболочек, увеличением размеров печени, уровнем аланинаминотрансферазы повышается в среднем до 133,5±10 Е/л при легкой форме и 336,06±15,71 Е/л при крайне тяжелой, билирубина 9,18±0,93 мкмоль/л при легкой форме и 22,8±0,62 при крайне тяжелой.

При уремическом синдроме уровень наиболее патогномоничным является значительное повышение уровня мочевины до 16,75±0,3 ммоль/л при легкой форме и до 41,43±0,33 при крайне тяжелой.

6. У животных контрольной группы при использовании традиционных средств в схеме 1 (доксимаг, глюкоза 5%, атрапид, калия хлорид, эссенциале форте, аскорбиновая кислота, витаминов группы В, ампициллин) продолжительность лечения в среднем составила 17,37±0,68 суток при выздоровлении 80 % животных. При продолжительности лечения 9,2±0,4 суток по схеме 3 (драксин, глюкоза 5%, атрапид, калия хлорид, полиглюкин, витамины В|, В6, В,2, С, ампициллин, гептрал, лактулоза), выздоровело 100% больных риккетсиозами собак.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предложен диагностический набор для детекции ДНК возбудителей

риккетсиозов собак методом ПЦР.

2. Предложен способ комплексной терапии собак, больных риккетсиозами с

острым течением, препаратами драксин, 5% раствор глюкозы в смеси с

атрапидом и калия хлоридом, полиглюкин, глюкоза, витамины В|, В6, В|2, С, ампициллин, гептрал, лактулоза.

3. Разработанные практические предложения могут реализоваться в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий в высших и среднеспециальных учебных заведениях.

4. Материалы исследований могут быть использованы при написании соответствующих разделов справочных и учебных пособий по паразитологии и лечению мелких домашних животных.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Приходько М.А. Клиншсо-лабораторные особенности эрлихиоза у собак. /М.А. Приходько, С.Н. Карташов, А.Г. Ключников, A.M. Ермаков// «Ветеринария Кубани», 2010.-№4.-С.24-26.

2. Раевская М.А. Изменение показателей крови при эрлихиозе у собак / М.А. Раевская // «Ветеринарная патология», 2011.- № 1-2 (36). - С.58-61.

3. Приходько М.А. Некоторые особенности клинического течения эрлихиоза у собак /М.А. Приходько// Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы производства и переработки продуктов животноводства».- Нижний Архыз, 2010. - С. 509512.

4. Карташов С.Н. Морфологические и биохимические исследования крови у собак при эрлихиозе /С.Н. Карташов, A.A. Миронова, М.А. Приходько// Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы производства и переработки продуктов животноводства».- Нижний Архыз, 2010. - С. 468-472.

5. Приходько М.А. Эрлихиоз собак в Ростовской области /М.А. Приходько// Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства».- Новочеркасск, 2010. - С. 93-96.

6. Карташов С.Н. Морфофункциональные аспекты эрлихиоза собак / С.Н. Карташов, A.A. Миронова, М.А. Приходько // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства».- Новочеркасск, 2010. - С. 96100.

7. Карташов С.Н. Поражение гепатобилиарной системы при эрлихиозе / С.Н. Карташов, И.В. Ромашевский, М.А. Приходько // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства».-Новочеркасск, 2010. - С. 100-106.

8. Раевская М.А. Некоторые особенности диагностики риккетсиозных инфекций у собак. / М.А. Раевская // «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства». Материалы Всероссийской научно-практической конференции ГНУ СКЗНИВИ.- г. Новочеркасск, 2011. - С. 213-216.

9. Раевская М.А. Морфофункциональные аспекты векторных заболеваний у собак / М.А. Раевская // «Инновационные процессы в АПК». Сборник статей III Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых учёных, аспирантов и студентов факультета РУДН. - Москва, 20П.-С. 347-349.

10. Раевская М.А. Особенности клинического течения риккетсиозов у собак в Ростовской области / М.А. Раевская, И.С. Майборода // Материалы IV Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины».- Ростов-на-Дону, 2011.-С. 125-126.

11. Раевская М.А. Особенности клинического течения эрлихиоза у собак / М.А. Раевская // Материалы Международной научно-практической конференции «Пути интенсификации производства и переработки продуктов животноводства».- Черкесск, 2011. - С. 204-206.

ЛП 65-13 от 15.02.99. Подписано в печать 19.04.2012 г. Формат 60x84/16. Уч.-изд.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 141.

РИО ФГБОУ ВПО АЧГАА 347740, Зерноград. Ростовской области, ул. Советская. 15

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Раевская, Мария Андреевна, Новочеркасск

61 12-16/132

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

СЕВЕРО-КАВКАЗСКИЙ ЗОНАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

Раевская Мария Андреевна

ДИАГНОСТИКА И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РИККЕТСИОЗОВ У СОБАК

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Карташов Сергей Николаевич

г. Новочеркасск-2012

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ......................................................................................................................3

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................................................................6

1.1. Историческая справка...........................................................................................6

1.2. Токсономическое положение и свойства возбудителей риккетсиозов............7

1.3. Заболевания, вызываемые риккетсиями...........................................................13

1.4. Распространение, векторы и природные резервуары возбудителей риккетсиозов собак.....................................................................................................17

1.5. Особенности клинического течения риккетсиозов..........................................25

1.6. Диагностика риккетсиозов.................................................................................32

1.7. Лечение инфекций, вызванных риккетсиями...................................................35

1.8. Профилактические меры.....................................................................................37

1.9. Заключение...........................................................................................................38

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................................................39

2.1. Материал и методы исследований.....................................................................39

2.2. Распространение риккетсиозов собак в Ростовской области.........................43

2.3. Разработка для выявления и идентификации риккетсий................................47

2.4. Симптомы болезни..............................................................................................50

2.5.Особенности риккетсиозов у собак, проявляющихся преимущественно гемолитическим синдромом......................................................................................57

2.5.1. Особенности клинического проявления и течения риккетсиозов при остром течении с гемолитическим синдромом................................................................................57

2.5.2. Результаты морфологических исследований крови у собак при остром течении риккетсиозов с гемолитическим синдромом........................................................60

2.5.3. Результаты биохимических исследований крови у собак при остром течении риккетсиозов с гемолитическим синдромом.......................................................................62

2.6. Особенности риккетсиозов у собак, проявляющихся преимущественно гепатопривным синдромом.......................................................................................65

2.6.1. Особенности клинического проявления и течения риккетсиозов при гепатопривном синдроме.......................................................................................................65

2.6.2. Результаты морфологических исследований крови при остром течении риккетсиозов у собак с гепатопривным синдромом...........................................................69

2.6.3. Результаты биохимических исследований крови у собак при остром течении риккетсиозов с гепатопривным синдромом........................................................................71

2.7.0собенности риккетсиозов у собак, проявляющихся преимущественно уремическим синдромом...........................................................................................73

2.7.1. Особенности клинического проявления и течения риккетсиозов с острым течением при уремическом синдроме...................................................................................73

2.7.2. Результаты морфологических исследований крови у собак с острым течением риккетсиозов с уремическим синдромом.............................................................................76

2.7.3. Результаты биохимических исследований крови у собак при остром течении риккетсиозов с уремическим синдромом.............................................................................78

3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕТОДОВ ЛЕЧЕНИЯ СОБАК, БОЛЬНЫХ РИККЕТСИОЗАМИ..............................................................82

4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ..........................................96

5. ВЫВОДЫ.................................................................................................................105

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ................................................................107

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..........................................108

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Проблема заболеваний собак инфекциями, переносчиками которых являются иксодовые клещи, приобретает все большее значение для многих регионов России и в первую очередь для южных регионов [2]. В последнее время существенно расширились представления о распространении сочетанных очагов трансмиссивных клещевых инфекций риккетсиозной, бактериальной и протозойной природы на территории Российской Федерации [4, 7]. В Ростовской области и Краснодарском крае отмечается резкое и устойчивое повышение уровня заболеваемости собак пироплазмидозами и появилась новая проблема -клещевые риккетсиозы. Возрастанию интереса к этой группе инфекций способствовало и появление «новых» и пока не изученных для России инфекций - гранулоцитарного анаплазмоза собак (ГАС) и моноцитарного эрлихиоза собак (МЭС). Однако реальная роль этих клещевых патогенов в инфекционной патологии собак на территории Ростовской области пока не изучена. Нет данных по распространению этих инфекций, слабо разработана диагностическая база по их выявлению. В доступной литературе мало данных по морфофункциональным изменениям в органах и тканях собак при риккетсиозах, что и послужило целью нашего исследования [4, 26, 37].

Цель работы. Изучить распространение и морфофункциональные изменения при риккетсиозах у собак с разными клиническими синдромами, разработать способ диагностики и терапии собак, больных риккетсиозами.

Достижение намеченной цели осуществлялось решением следующих

задач:

1. провести анализ эпизоотической ситуации при риккетсиозах собак в Ростовской области в зависимости от возраста, породы, сезона года;

2. установить клинические критерии у собак, больных риккетсиозами;

3. изучить морфологические и биохимические показатели крови собак при риккетсиозах;

4. создать набор для диагностики риккетсиозных инфекций у собак в реакции ПЦР;

5. провести сравнительное изучение терапевтической эффективности схем лечения с текущим контролем по гематологическим показателям.

Научная новизна. Изучено распространение риккетсиозов у собак в Ростовской области в зависимости от возраста, породы, сезона года. Выявлены клинические и гематологические особенности при риккетсиозе у собак. Разработан диагностический алгоритм при риккетсиозах у собак. Выявлены основные синдромы, характерные для этих заболеваний, и установлены их диагностические критерии. Найден эффективный способ комплексной терапии собак, больных риккетсиозами.

Практическая значимость. Разработан набор для детекции генетического материала риккетсий в реакции ПЦР. Полученный научный материал позволяет точно и объективно оценить тяжесть течения риккетсиозов, выяснить основные системы организма, поврежденные патологическим процессом. Предложены схемы комплексной терапии собак, больных риккетсиозами с гепатопривным синдромом.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ГНУ СКЗНИВИ; на четырех международных и двух всероссийских научно-практических конференциях: Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых учёных, аспирантов и студентов факультета РУДН, г. Москва; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы производства и переработки продуктов животноводства», п. Нижний Архыз; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины», г. Ростов-на-Дону; Международной научно-практической конференции «Пути интенсификации производства и переработки продуктов животноводства»,г. Черкесск; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства», г. Новочеркасск; Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства», г. Новочеркасск.

Реализация результатов исследований. Практические предложения реализуются в практической работе ветеринарных клиник Ростовской

области, ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» в отделе донозологической и клинической диагностики, лаборатории функциональной диагностики болезней с.-х. животных ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре внутренних незаразных болезней и патофизиологии Дон ГАУ по курсу «Болезни мелких домашних животных».

Публикации. По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 в издании, рекомендованном ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 127 страницах текста компьютерного исполнения, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений для практики и списка литературы. В диссертации приведено 23 таблицы, она иллюстрирована 15 рисунками. Список литературы включает 191 источника литературы, в том числе 114 на иностранных языках.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1) распространение риккетсиозов собак в Ростовской области;

2) клинико-морфологические критерии диагностики риккетсиозов у собак, основные синдромы и симптомы риккетсиозов у собак;

3) особенности терапии при разной степени тяжести риккетсиозов у собак.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Историческая справка

Риккетсиозы собак - группа трансмиссивных, инфекционных заболеваний домашних собак и других представителей семейства псовых, эндемичных на различных территориях, но, однако, широко распространенные во всём мире [10, 14, 18].

Основным представителем риккетсиозов собак является Ehrlichia canis. Е. canis впервые была обнаружена в Алжире в 1935 году. Внимание на заболевание было обращено во время войны во Вьетнаме, когда эрлихиоз приводил к смерти сотен служебных военных собак. Позднее МЭС вызвал интерес в 1987 году, когда Е. chaffeensis, очень похожий организм, был идентифицирован как возбудитель моноцитарного эрлихиоза человека. В 1996 году было доказано, что заражение Е. chaffeensis вызывает у собак признаки, неотличимые от заражения Е. canis [1, 8, 16].

До 1986 года считалось, что эрлихиоз - это проблема чисто ветеринарная, но в 1986 у 51-го летнего мужчины из Детройта, укушенного клещом в районе Арканзаса, в крови были обнаружены эрлихии. В 1990 агент человеческого эрлихиоза был изолирован крови резервиста армии США в v/ Форте Chaffee, Арканзас, далее была проведена генетическая экспертиза возбудителя, и он был назван Е. chaffeensis [8, 28, 34].

В 1950 г. в Японии Misao Kobayashi из костного мозга больного с симптомами мононуклеоза выделил возбудителя, которого вначале относили к риккетсиям, и лишь в 1984 г. возбудитель отнесен к эрлихиям Ehrlichia sennetsu. Заболевание, получившее название «лихорадка сеннетцу», наблюдалось в ограниченном регионе Японии. Всего с 1953 по 1978 гг. наблюдалось 46 случаев. В различных штатах США заболеваемость колеблется в пределах 3,3—5,3 случаев на 100 000 населения в год [3,64, 70].

Наибольшую известность эрлихиоз собак получил после вспышки инфекции у британских военных собаках в Сингапуре в 1963 и у военных собак Соединенных Штатов во Вьетнаме, эпизоотия началась в 1968, что

привело к гибели более чем 200 собак в течение 4-х лет, при этом все собаки погибли от тяжелой панцитопении [5, 7, 9, 28, 30, 82, 84].

Эрлихиозы и анаплазмозы являются типичными трансмиссивными природноочаговыми зоонозами. Если заболевания животных переносят, главным образом, клещи родов Dermacentor, Rhipicephalus, Amblyomma, то в передаче эрлихиозов человека велика роль клещей рода Ixodes. Наибольшее значение, как патогены человека, имеют виды Ehrlichia chaffeensis, E.muris и Anaplasma phagocytophilum, в 2001 г. вычлененные из рода Ehrlichia [12, 18, 17, 20, 21, 39, 72]. Известны единичные случаи заболеваний человека, вызываемые E.canis и E.ewingii, возбудителями эрлихиозов собак [10, 13, 15, 22, 85, 86].

Имеется группа не связанных с клещами эрлихий (в настоящее время их относят к роду Neorickettsia [12, 23, 24]), переносчиками которых служат гельминты, а заражение происходит алиментарным путем. Человек заражается N. sennetsu при употреблении недостаточно термически обработанной рыбы, содержащей инфицированных трематод [12, 18, 29, 35, 59, 62].

N.(E.) risticii локализуется в трематодах, паразитирующих в улитках и различных водных насекомых. Вызывает тяжелые заболевания лошадей и собак, которые заражаются, поедая траву с зараженными улитками, или с водой естественных водоемов[28,41, 65, 67].

1.2. Токсономическое положение и свойства возбудителей риккетсиозов

Риккетсиозы - группа заболеваний многих видов животных и человека, вызываемых внутриклеточными паразитами (риккетсиями), которые передаются в основном трансмиссивно и проявляются у животных лихорадками, пневмониями, ринитами, абортами и послеродовыми эндометритами, а также поражением лимфатической системы и форменных элементов крови [19, 80, 81, 83].

Риккетсии названы в честь американского микробиолога Говарда Тейлора Риккетса, открывшего в 1909 году возбудителя одного из

риккетсиозов - пятнистую лихорадку Скалистых гор и погибшего при ее исследовании [19, 73, 74, 80, 81].

Риккетсии - довольно многочисленная группа, представленная патогенными и непатогенными видами. Патогенных видов значительно меньше. В природе риккетсии обитают преимущественно в организме насекомых (вшей, блох, клещей), а также грызунов, диких и сельскохозяйственных животных [19, 20, 21, 80, 81].

До 2001 года согласно Определителя бактерий Берджи (1984; 1994) риккетсии классифицировались следующим образом: царство Procariotae, отдел Gracilicutes, секция 9 - Rickettsii et Chlamydii, порядок Rickettsiales [19], который включал три семейства: Rickettsiaceae, Bartonellaceae и Anaplasmataceae. В семейство Rickettsiaceae входили следующие роды: Rickettsia, Rochalimaea, Coxiella, Ehrlichia, Cowdria, Neorickettsia, Wolbachia и Rickettsiella. В семейства Bartonellaceae два рода: Bartonella и Grahamella. В семейство Anaplasmataceae четыре рода: Anaplasma,

Aegyptianella, Haemobartonella, Eperhytrozoon [2, 48, 77, 79].

В настоящее время таксономическое положение риккетсий устанавливают с помощью молекулярно-генетических методов. У этих бактерий выявлены три различных кластера генов, на основании чего их разбили на три группы [6, 27, 31].

На сегодняшний день токсономия возбудителей риккетсиозов собак выглядит следующим образом: царство Procariotae, Тип Proteobacteria, Class Alphaproteobacteria, порядок Rickettsiales, Семейство Anaplasmataceae, включает роды: Aegyptianella, Anaplasma, Ehrlichia, Neorickettsia [7,11, 32, 63, 66, 75].

Род Aegyptianella включает виды, патогенные для птиц. Род Anaplasma включает следующие виды: Anaplasma bovis, Anaplasma ovis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum. Для собак патогенными являются последние два вида, и заболевания, вызываемые этими видами, называют анаплазмозами. A. phagocytophilum, кроме того, патогенна для человека. Род Ehrlichia включает так называемую группу Е. canis, в которой три вида: Е.

canis, E. chaffeensis, E. ewingii, все патогенны для собак и человека, и заболевания, вызываемые этими видами, называют эрлихиозами. И наконец, род Neorickettsia, включает виды Neorickettsia helminthoeca, Neorickettsia risticii, Neorickettsia sennetsu. N. helminthoeca и N. risticii могут болеть собаки и кошки, а N. sennetsu патогенен для человека [7, 33, 44, 50, 57].

Таким образом, патогенные возбудители для собак собраны в три основные группы. В первой группе вместе с Ehrlichia chaffeensis и Ehrlichia canis находится Ehrlichia (Cowdria) ruminantium; все они переносятся иксодовыми клещами [31, 44].

Во вторую группу попали бактерии, также переносимые иксодовыми клещами: возбудитель гранулоцитарного эрлихиоза у человека, сходный с Ehrlichia equi, а также сама Ehrlichia equi, Ehrlichia phagocytophila и Anaplasma marginale [11, 27, 48, 61, 63].

И наконец, в третью группу вместе с Ehrlichia sennetsu попали эрлихии, обитающие в трематодах, хозяевами которых служат рыбы. Эта группа и по генетическим признакам, и по занимаемой экологической нише далеко отстоит от возбудителей человеческих эрлихиозов, обнаруженных в США [2, 27, 66, 75, 77, 79].

Для первых двух групп эрлихий резервуаром служат млекопитающие, а переносчиками - иксодовые клещи. Личинки и нимфы инфицируются при кровососании и сохраняют возбудителя от линьки к линьке до конца жизни. Трансовариальная передача им несвойственна. Заражение происходит при укусах клеща [ 11, 27, 31, 44, 77, 79].

Строение риккетсий аналогично строению прочих бактерий. У риккетсий выделяют оболочку, цитоплазму и зернистые включения [9, 13, 50, 57]. Ядерная структура представлена глобулами (от 1-2 до 4). В клетках выявляют ДНК и РНК. Риккетсии полиморфны. Все многообразие их форм может быть сведено к четырем основным морфологическим типам: кокковидные, монозернистые риккетсии, размер 0,3-1 мкм (чаще 0,5 мкм) в диаметре, этот тип наиболее патоген и типичен для интенсивного размножения возбудителя в клетках; палочковидные, биполярные

(гантелевидные), размер: ширина 0,3 мкм, длина 1-1,5 мкм (также выделяются при активном развитии риккетсиоза); бациллярные, удлиненные, обычно изогнутой формы, размер: в шири�