Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологическая характеристика эпителия десны и щеки в норме и при некоторых дисгормональных состояниях

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологическая характеристика эпителия десны и щеки в норме и при некоторых дисгормональных состояниях"

На правах рукописи

РГБ О

5ЯНВ2Ш

САПРОНОВА Елена Александровна

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭПИТЕЛИЯ ДЕСНЫ И ЩЕКИ В НОРМЕ И ПРИ НЕКОТОРЫХ ДИСГОРМОНАЛЬНЫХ СОСТОЯНИЯХ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток, 2003

Работа выполнена в Дальневосточном государственном медицинском университете

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор

Рыжавский Борис Яковлевич Служаев Иван Федорович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

кандидат медицинских наук

Черток Виктор Михайлович Ларионова Диана Борисовна

Ведущая организация:

Амурская государственная медицинская академия

Защита диссертации состоится ¿Ю» 2004 г. в 12

часов на заседании диссертационного совета Д208.007.01 при Владивостокском государственном медицинском университете по адресу 690050, г. Владивосток, пр. Острякова, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета

Автореферат диссертации разослан.

2003 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.007.01

доктор медицинских наук, профессор Рева Г.В.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. В современной медицине результаты цитологического анализа эпителиальных тканей заняли лидирующие позиции в диагностике многих патологических процессов. Они являются основополагающими для постановки клинического диагноза, позволяют раскрыть патогенетические механизмы заболевания, обеспечить эффективность назначенного лечения (Е.Г. Новикова и соавт., 1998; JI.T. Базелюк, Бакеева С.А., 1999; B.J1. Эмануэль и соавт., 2002). В последнее время в стоматологии все больше внимания уделяется цитоморфологическим исследованиям. Большой потенциал диагностических возможностей, простота и доступность цитологического анализа позволяет применять эти методы в массовых профилактических обследованиях (К.П. Ганина и соавт., 1999; Л.Ф. Власова, Л.М. Непомнящих, 2000; A.C. Григорьян, А.И. Грудянов, 2001).

Несмотря на значительные успехи, которые были достигнуты в изыскании новых и совершенствовании известных способов цитологической диагностики заболеваний парадонта и слизистой оболочки полости рта, до сих пор отсутствуют нормативные цитоморфометрические показатели эпителия, учитывающие половые различия и особенности, связанные с физиологическими изменениями гормонального статуса женщин в разные фазы менструального цикла. В немалой степени это обусловлено недостаточной изученностью этих вопросов, что не позволяет адекватно оценить морфофункциональные изменения слизистой оболочки полости рта и, следовательно, сделать это исследование прогностически значимым и максимально информативным.

Эпителиальные ткани разных органов являются гормонально-зависимыми (Волков H.A., 1996; L. Vitellaro-Zuccarello, 1997; L. Langbein et al., 2002). В слизистой оболочке десны имеются рецепторы, в том числе и к 178-эстрадиолу и токсостеролу, которые преимущественно находятся в ядрах эпителиоцитов промежуточного и герминативного слоев (J. Vittek et al., 1982). В то же время остается спорным вопрос о наличии рецепторов к эстрогенам в буккальном эпителии (Н. Coleman et al. 2001; F. Schmidt et al. 2002).

Известно, что концентрация половых стероидов повышена при мастопатии - группе дисгормональных доброкачественных новообразований молочных желез, распространенность, которой достигает 50% среди женского населения и раке молочной железы -гормональнообусловленном злокачественном процессе, занимающем первое место по частоте возникновения среди злокачественных опухолей у женщин (Л.А. Ли, В.В. Мартынюк, 1999; М. Уайттхауз, М. Слевин, 1999; В.А. Тазалов и соавт., 2002). Поэтому есть основания предполагать изменения морфофункциональных и цитохимических параметров

слизистой оболочки полости рта при данной патологии. Исходя из актуальности проблемы, была поставлена цель и определены задачи исследования.

Цель исследования

Дать морфологическую характеристику, базирующуюся на количественной цитохимиии и морфометрии, эпителия десны и щеки в норме, а также при некоторых дисгормональных состояниях (мастопатии и раке молочной железы).

Задачи исследования

1. Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у мужчин.

2. Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у женщин репродуктивного возраста в разные фазы менструального цикла.

3. Сопоставить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у мужчин и у женщин репродуктивного возраста в разные фазы менструального цикла.

4. Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у женщин репродуктивного возраста, больных мастопатией в разные фазы менструального цикла.

5. Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у женщин репродуктивного возраста, больных раком молочной железы.

6. Изучить степень микробной контаминации эгштелиоцитов, зависящие от пола, фазы менструального цикла, наличия мастопатии и рака молочной железы.

Научная новизна

Новыми в настоящей работе являются следующее.

1. Получены комплексные данные о морфометрических и цитохимических половых различиях эпителия десны и щеки у мужчин и женщин в разные фазы менструального цикла.

2. Получены данные о морфометрических и цитохимических различиях эпителия десны и щеки у женщин, больных мастопатией в разные фазы менструального цикла.

3. Получены данные о морфометрических и цитохимических особенностях эпителия десны и щеки у женщин, больных раком молочной железы.

4. Установлены общие для эпителия десны и щеки изменения и особенности их реагирования, в зависимости от локализации, развивающиеся при мастопатии и раке молочной железы.

5. На основании цитологических исследований определена степень микробной контаминации эпителиоцитов, ее зависимость от

пола, фазы менструального цикла, наличия мастопатии и рака молочной железы.

Научная и практическая значимость работы

1. Установленные количественные морфометрические и цитохимические параметры слизистой оболочки десны и щеки у практически здоровых мужчин и у практически здоровых женщин, в зависимости от фазы менструального цикла, могут быть использованы в качестве контрольных параметров в работе цитологических лабораторий.

2. Выявленные особенности дифференцировки и цитофизиологии эпителия слизистой оболочки десны и щеки у практически здоровых женщин в зависимости от фазы менструального цикла, могут быть применены при диагностике, а также - при определении оптимального срока лечебных и профилактических мероприятий в каждом конкретном случае.

3. Полученные в работе данные комплексного изучения эпителия десны позволили раскрыть особенности дифференцировки и цитофизиологии эпителия слизистой оболочки десны и щеки у женщин при мастопатии и раке молочной железы.

4. Результаты проведенных исследований могут быть использованы в практической работе стоматологических поликлиник, стоматологических отделений стационаров и стоматологических отделений общепрофильных поликлиник; использованы в учебном процессе на кафедрах гистологии и эмбриологии, терапевтической, хирургической и ортопедической стоматологии медицинских ВУЗов, при обучении студентов, интернов, клинических ординаторов, на курсах усовершенствования врачей.

Личный вклад автора

Автором лично был получен весь исследованный материал. Осуществлено приготовление гистологических и цитологических препаратов, проведены цитохимические реакции. Лично автором проведены все морфометрические исследования, сделаны описания препаратов, микрофотографии, проведен статистический анализ материала.

Внедренне результатов работы в практику

Результаты исследования внедрены в практику работы врачей стоматологической поликлиники ДВГМУ, МУЗ стоматологической поликлиники № 20, МУЗ краевой стоматологической поликлиники «Регион», стоматологической поликлиники Института повышения квалификации специалистов здравоохранения Хабаровского края.

Материалы диссертации используются в лекционном курсе и при проведении практических занятий по гистологии и терапевтической стоматологии со студентами стоматологического факультета, курсантами факультета повышения квалификации Дальневосточного государственного медицинского университета.

Апробация работы

Апробация работы проведена на расширенном заседании кафедр гистологии, терапевтической стоматологии, физиологии, нормальной и патологической анатомии. Основные положения работы изложены и обсуждены на конференциях: конференция молодых ученых ДВГМУ (2001), научно-практическая конференция «Актуальные вопросы стоматологии» (2002), Дальневосточный стоматологический форум с международным участием «Стоматологическая практика. Клиническая и организационная эффективность новых технологий» (2002), 4-й Тихоокеанская научно-практическая конференция студентов и молодых ученых с международным участием (2003), краевая научно-практическая конференция «Профилактика стоматологических заболеваний. Проблеммы, перспективы развития» (2003), Дальневосточный стоматологический форум (2003).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Морфометрические и цитохимические показатели эпителия слизистой оболочки десны у практически здоровых мужчин и у практически здоровых женщин имеют половые различия.

2. Показатели дифференцировки, цитоморфометрии, данные компьютерного анализа изображений ядра и ядрышкового организатора эпителия десны у женщин имеют различия, обусловленные фазой менструального цикла. '

3. Эпителий щеки у практически здоровых женщин в меньшей степени зависим от фазы менструального цикла, чем эпителий десны.

4. Эпителий десны и щеки при мастопатии подвержен изменениям в течение менструального цикла. По показателям дифференцировки, морфометрическим и цитохимическим показателям они отличаются от таковых в контроле в соответствующие фазы цикла.

5. Эпителий десны и щеки у женщин при раке молочной железы имеет достоверные различия морфометрических и цитотохимических показателей по сравнению с таковыми у практически здоровых женщин и у женщин при мастопатии.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, 2 статьи приняты к печати. Получено удостоверение на рационализаторское предложение «Способ забора цитологического материала со слизистой оболочки десны» № 2210 от 20.11.2002, принятое к использованию Дальневосточным государственным медицинским университетом.

Объем и структура диссертации

Диссертация написана на русском языке, изложена на 182 страницах и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка литературы, который включает 298 источников. Результаты морфологического анализа материала отражены в 12 таблицах, 9 графиках и 35 микрофотографиях.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Данные настоящей работы основаны на 105 клинических наблюдениях пациентов, посещавших стоматологическую клинику Дальневосточного государственного медицинского университета, маммологический центр и отделение полихимиотератии краевого онкологического диспансера г. Хабаровска. Цитологические исследования проводились на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии и в Центральной научно-исследовательской лаборатории Дальневосточного государственного медицинского университета.

За основу возрастной периодизации обследованных пациентов взята клинико-патогенетическая классификация рака молочной железы, в которой возрастные границы 28-50 лет соответствуют яичниковой форме рака молочной железы (В.Ф. Семиглазов и соавт., 1992; Л.А. Путырский, 1998). Главная патогенетическая особенность яичниковой формы -предшествующая мастопатия - группа дисгомональных доброкачественных заболеваний молочных желез. Исходя из этих данных и возрастных показателях нами обследованных, средний возраст составил 36,9±0,4б лет.

Все обследованные пациенты были разделены на шесть групп. Первую группу составили 18 практически здоровых женщин в фазу пролиферации менструального цикла (9-11 день) в возрасте от 28 до 45 лет (средний возраст - 36,9±1,0б). Вторую группу составили 23 практически здоровые женщины в фазу секреции менструального цикла (21-23 день) в возрасте от 30 до 47 лег (средний возраст - 36,7±1,04). Третья группа была представлена 12 практически здоровыми мужчинами в возрасте от 30 до 44 лег (средний возраст - 36,4±1,19). В четвертую группу вошли 17 женщин, больных мастопатией в фазу пролиферации менструального цикла в возрасте от 28 до 45 лет (средний возраст - Зб,9±1,06). В пятой группе было 18 женщин, больных мастопатией в фазу секреции менструального цикла в возрасте от 30 до 47 лет (средний возраст - 36,7±1,04). Шестая группа была представлена 17 женщинами, больных раком молочной железы, в фазу пролиферации менструального цикла в возрасте от 28 до 46 лет (средний возраст -37,6+1,25).

У пациенток основных групп, обратившихся в поликлинику онкологического диспансера, диагноз мастопатии или рака молочной железы устанавливали на основании данных анамнеза, в которых учитывали: возраст, условия труда и профессиональные вредности, данные о наследственности, перенесенные и сопутствующие заболевания, и данные комплексного клинико-лабораторного обследования, включающего в себя: осмотр врача-маммолога или врача-онколога, данные маммографии, цитологического анализа аспирата молочной железы, ультразвукового исследования молочных желез.

У пациентов как основных, так и контрольных групп на момент исследования, учитывая данные анамнеза, были исключены: заболевания JlOP-органов, заболеваний желудочно-кишечного тракта и желчно-выводящих путей, сердечно-сосудистой системы, сахарного диабета и другой эдокринной паталогии, гнойно-септические процессы, туберкулез, а также наличие беременности, использование гормональных методов контрацепции за 6 месяцев до настоящего исследования, табакокурение, злоупотребление алкоголем и острой пищей, использование жевательной резинки.

Для клинической оценки состояния слизистой оболочки десны и щеки у практически здоровых пациентов и у больных доброкачественными и злокачественными заболеваниями молочных желез были использованы следующие методы исследования (А.И. Грудянов, 1998).

В качестве теста гигиенического состояния использовали индекс Силнесса-Лоэ. При показателях индекса гигиены от 2,0 и выше баллов констатировали отсутствие регулярного ухода за полостью рта и в дальнейшее исследование пациентов не включали. Присутствие зубного камня, которое количественно определялось с помощью индекса Грина-Вермильона, являлось критерием исключения пациентов из исследования. Интенсивность и распространенность воспалительной реакции определяли с помощью индекса РМА. Подвижность зубов оценивали по шкале Миллера в модификации Флезара. Для оценки рецессии десны использовали классификацию P.D. Miller. При показателях, указывающих на присутствие воспалительно-деструктивных процессов в слизистой оболочки десны, пациентов из дальнейшего исследования исключали.

При клиническом осмотре слизистой оболочки щеки отмечали, изменение цвета (бледность, гиперемия, цианоз), отечность и геморрагии.

Для оценки морфологической характеристики эпителия десны и щеки были применены морфологические, морфометрические и цитохимические методики.

При заборе материала применяли усовершенствованный нами метод поверхностного соскоба. Поверхностный соскоб у мужчин и женщин брали с интактного эпителия десны в области межзубных десневых сосочков шести нижних фронтальных зубов и с эпителия щеки, на 1,5-2 см ниже линии смыкания зубов. Забор материала у женщин осуществлялся на 9-11 дни и на 21-23 дни менструального цикла, (во время осмотра полости рта врачом-стоматологом, до проведения стоматологических вмешательств и лечебных мероприятий основного заболевания). Для стандартизации обследования и исключения влияния циркадных изменений, поверхностный соскоб брали в одно и то же время суток (10-12 часов).

Мазки готовили на стекле, подсушивали на воздухе, фиксировали 96% этанолом. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином и изучали с помощью микроскопа «Микмед-1»при увеличении х200 и х400.

При этом обращали внимание на следующие количественные и качественные критерии оценки цитологической картины: определение типов клеток и их соотношение в препарате; число клеток, имевших признаки деструкции и без них; число клеток с разной степенью микробной контаминации; количество эритроцитов и лейкоцитов; наличие цитоплазматических включений; степень окрашивания цитоплазмы и ядра, степень выраженности и сохранности границ цитоплазмы и ядра, тинкториальные свойства и сохранность внутриядерных структур. Все эти показатели рассчитывали на 100 эпителиоцитов мазка.

Маркерами дифференцировки эпителиоцитов являются белки цитокератинового ряда (P. Tomakidi et al., 1997; A.W. Barret et al., 1998, 2000). Кроме того, кератиноциты синтезируют пептиды, которые обладают бактерицидными свойствами (Y. Albico et al., 2001; В.А. Dale et al., 2001; A. Dünsche et al., 2002). Известно, что одним из маркеров белоксинтетической функции является ядрышковый организатор (Г. Билич и соавт., 1999; В.Н. Эллиниди и соавт., 2000). Поэтому мы сочли целесообразным изучить концентрацию суммарного белка во взаимосвязи с морфометрическими показателями ядра, цитоплазмы и зонами ядрышкового организатора промежуточных клеток эпителия десны.

Для определения суммарного белка мазки окрашивали амидочерным 10Б по методике В.А. Брумберга и J1.3. Певзнера, (1972) и определяли на аппаратно-програмном комплексе «МЕКОС-ц»: периметр, площадь ядра и цитоплазмы, ядерно-цитоплазматическое соотношение, оптическую плотность цитоплазмы и ядра.

Для выявления зон ядрышковых организаторов мазки окрашивали 50% раствором азотнокислого серебра по методике H.H. Мамаева и C.B. Мамаевой, (1989) и на аппаратно-програмном комплексе «МЕКОС-ц» определяли: число зон ядрышковых организаторов, их суммарный периметр, площадь ядра, фактор формы зон ядрышковых организаторов и ядра, относительную и абсолютную суммарную площадь зон ядрышковых организаторов. Перечисленные показатели измерялись в каждом случае в 50 эпитеолиоцитах промежуточного слоя.

Результаты исследования были занесены в специально разработанную компьютерную базу данных. При помощи программы «Statistica» версия 6 результаты проведенных исследований были подвергнуты статистической обработке.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе исследованы два эпителия разной локализации -ороговевающий эпителий десны и неороговевающий эпителий щеки. При изучении морфологической картины мазков эпителия десны было отмечено, что соотношение клеток разной степени зрелости зависело, во-

число роговых чешуек*

максимальная микробная контаминация *,

минимальная микробная контаминация*, * *

площадь ядрышковых организаторов в ядре*

число ядрышковых организаторов в ядре

концентрация белка в ядрах'

число поверхностных клеток"

число промежуточных клеток*

число клеток без деструктивных изменений '

площадь цитоплазмы промежуточных клеток*,* **

площадь ядер промежуточных клеток*

концентрация белка в цитоплазме* **

Рис. 1. Особенности мазков эпителия десны в норме у женщин в разные фазы менструального цикла и у мужчин (за 100% взяты показатели в фазу пролиферации)

I Фаза пролиферации_~*~Фаза секреции_-А- Мужчины

* - различия достоверны между показателями в фазу пролиферации и фазу секреции; между показателями в фазу пролиферации и показателями у мужчин; ** - различия достоверны между показателями в фазу секреции и показателями у мужчин. Степень достоверности сравниваемых показателей - р<0,05.

первых, от пола. Во-вторых, у женщин оно отличалось в разные фазы менструального цикла. Так в фазу пролиферации, характеризующуюся высокой концентрацией эстрогенов и низкой - прогестерона, преобладали промежуточные клетки (49,4±2,24%). На долю поверхностных клеток и роговых чешуек приходилось 26,9±1,95% и 22,5±2,03% соответственно. В фазу секреции в мазках доминировали роговые чешуйки, составлявшие 43,6±3,68%, тогда как на долю промежуточных приходилось 36,6±3,50%, а на долю поверхностных - 19,7±1,58%. Таким образом, при смене фазы цикла от пролиферативной к секреторной в мазках отмечался отчетливый «сдвиг» в сторону терминальной стадии дифференцировки эпителиоцитов.

Интересные данные были получены при сравнении этих результатов с показателями, выявленными при изучении мазков десневого эпителия у мужчин. Процент эпителиоцитов разной степени зрелости в эпителии десны мужчин значительно и достоверно отличался от соответствующих показателей у женщин в фазу пролиферации (рис. 1). В то же время, соотношение различных эпителиоцитов у мужчин и женщин в фазу секреции не имело достоверных различий. По-видимому, эти данные можно расценивать как свидетельство того, что прогестерон, концентрация которого максимальна в фазу секреции, не является определяющим половые различия соотношения эпителиоцитов, находящихся на разных стадиях дифференцировки. Сопоставление этих данных позволяет предположить, что выявленные межгрупповые различия определялись различиями концентраций половых стероидов у пациентов разного пола, а также у женщин в пролиферативную и секреторную фазы цикла, первая из которых характеризуется максимальной концентрацией эстрогенов.

Количество клеток, не имевших деструктивных изменений, у женщин в фазу пролиферации и в фазу секреции не имело достоверных отличий. У мужчин процент клеток без признаков деструкции был максимальным, достоверно превышая его у женщин в обе фазы менструального цикла (рис. 1), т.е. выраженность деструктивных процессов у них была ниже, чем у женщин.

Различные типы деструктивных изменений были неодинаково представлены в сравниваемых группах. Так, у мужчин наиболее часто наблюдался кариолизис (23,4±1,25%), реже - кариопикноз (3,2+0,77%). У женщин же, наоборот, частота встречаемости кариопикноза превышала более чем в 12 раз этих показателей у мужчин и достоверно не различалась по фазам цикла, хотя процессы кариолизиса также имели место. Вакуолизация ядер была отмечена во всех препаратах сравниваемых групп, но у женщин в фазу секреции эти показатели были наименьшими. По-видимому, это дает основание полагать, что как процессы дифференцировки поверхностных эпителиоцитов, так и их деструктивные изменения зависят от пола, а у женщин - от фазы менструального цикла.

Сравниваемые группы различались также и ' по числу микроорганизмов, контактирующих с эпителиоцитами. Их минимальные величины характеризовали эпителий десны мужчин. У них было наибольшее число эпителиоцитов, контактирующих с единичными микроорганизмами или с 5-25, а также - наименьшее количество клеток, соприкасающихся с 26-50 и более микроорганизмами (рис. 1). У женщин большее число клеток, имеющих контакты с 51 и более микроорганизмами, определялось в фазу секреции (рис. 1).

Изучение промежуточных клеток показало, что размеры их цитоплазмы и ядер имеют половые различия. У мужчин оба эти показатели были меньше, чем у женщин в фазу секреции, а размер цитоплазмы - чем в фазу секреции и пролиферации. Ядерно-цитоплазматическое отношение в данных клетках у мужчин было выше, чем у женщин в обе фазы цикла. Параллельно с этим выявлялось, что размеры цитоплазмы, ядер промежуточных клеток эпителия десны у женщин в фазу секреции было более высоким, чем в фазу пролиферации (рис. 1). '

Концентрация белка, определяемая в цитоплазме и ядрах промежуточных эпителиоцитов десны, у мужчин была выше, чем у женщин в обе фазы цикла. У женщин же достоверных различий этих показателей, обусловленных фазой цикла, не обнаружено. Однако сопоставление размеров цитоплазмы этих клеток с концентрации в ней белка позволяет считать, что суммарное содержание белковых соединений в цитоплазме в разные фазы цикла имело различия: оно было более высоким в фазу секреции.

Число зон ядрышковых организаторов не различалось в клетках сравниваемых групп. В то же время, размеры зон ядрышковых организаторов имели выраженные межгрупповые различия: у женщин в фазу секреции они были достоверно меньше, чем в фазу пролиферации. У мужчин площадь зон ядрышкового организатора была достоверно меньше, чем у женщин в фазу пролиферации (рис. 1).

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что андрогены, концентрация которых в крови у мужчин существенно выше, чем у женщин, стимулируют заключительные стадии дифференцировки его клеток (С. Clarke, R. Sutherland, 1990), а более высокая концентрация белка в цитоплазме промежуточных клеток у мужчин могла обеспечивать им более высокую антимикробную и механическую устойчивость, учитывая, что тонофибриллы и антимикробные вещества имеют белковую природу (A. Weinberg et al., 1998; В.A. Dale et al„ 2001). Кроме того, можно предполагать, что отсутствие параллелизма между показателями синтеза РНК, необходимой для синтеза белка в промежуточных клетках, с одной стороны, и концентрацией белка в клетке (рис. 1), с другой, является следствием более интенсивного синтеза белка в клетках глубжележащих слоев. Хотя, учитывая данные литературы о наличии рецепторов к

эстрогенам и в клетках промежуточного слоя (7. УШек е1 а1., 1982), мы не исключаем их прямого гормонального действия.

Соотношение буккальных эпителиоцитов разной степени зрелости у женщин в разные фазы менструального цикла не имело статистически достоверных различий. У мужчин содержание поверхностных и промежуточных эпителиоцитов было близко к таковому у женщин в фазе секреции и достоверно различалось с показателями в фазу пролиферации. При исследовании степени распространенности деструктивных процессов, мы выявили, что число клеток без признаков деструкции было максимальным у мужчин (73±1,71%). Проявления деструктивных изменений в сравниваемых группах не имели резких различий. Отмечалось лишь, что у мужчин процент клеток, содержащих пикнотизированные ядра, был достоверно меньше, чем у женщин в обе фазы менструального цикла, а процент клеток с явлениями кариолизиса был выше, как и у женщин в фазу секреции.

Количество адсорбированных на эпителиоцитах микроорганизмов было минимальным в буккальном эпителии у мужчин, и достоверно отличалось от такового у женщин, как в фазу секреции, так и пролиферации. Эти закономерности были однотипны с выявленными при изучении эпителиоцитов десны.

Промежуточные клетки эпителия щеки имели крупные размеры. Площадь их цитоплазмы в мазках составила 2799±84,9 мкм2 у мужчин, 3122±7б,4 мкм2 у женщин в фазу пролиферации и 3312+110,3 мкм2 у женщин в фазу секреции. Эти показатели существенно выше, чем таковые у промежуточных клеток эпителия десны.

Концентрация белка в цитоплазме промежуточных клеток щеки была минимальной в фазу пролиферации. Данный показатель у мужчин не отличался от такового у женщин в фазу секреции и был достоверно выше, чем в фазу пролиферации. Подобное соотношение концентрации белка в данных трех группах наблюдалось и в ядрах промежуточных эпителиоцитов десны (рис. 1).

Число зон ядрышковых организаторов в ядрах промежуточных клеток было максимальным у женщин в фазу пролиферации. Их размерные характеристики (площадь, периметр) не имели достоверных межгрупповых различий, тогда как фактор их формы у мужчин был ближе к единице, чем у женщин (1,14±0,02 против 1,50±0,11 и 1,64±0,23 в фазу пролиферации и секреции соответственно). Относительная площадь зон ядрышкового организатора в ядре у женщин в фазу секреции и у мужчин была достоверно большей, чем у женщин в фазу пролиферации (табл. 1).

Таким образом, исследования особенностей эпителия щеки позволило констатировать, что он, как и эпителий десны, обладает половым диморфизмом, причем его отличия у мужчин и женщин в обе фазы цикла однотипны с изменениями в эпителии десны. Однако фаза

Таблица 1

Морфометрические и цитохимические показатели промежуточных клеток эпителия щеки у женщин в разные фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа

Женщины, фаза пролиферации Женщины, фаза секреции Мужчины

Площадь цитоплазмы, мкм2 3122±76,4 3312±110,3 2799184,9**

Площадь ядра, мкм 86±2,9 86±2,6 10115,3* **

Концентрация белка в цитоплазме, усл.ед. 151,7±16,49 259,3±10,01* 254,4117,59*

Концентрация белка в ядре, усл.ед. 328,2±33,26 551,3127,92* 498,3129,49*

Число зон ЯОР 2,9±0,12 2,2±0,10* 2,310,10*

Площадь зон ЯОР, мкм2 0,66±0,04 0,78±0,05 0,7010,11

Площадь зон ЯОР/площадь ядра, % 0,67+0,05 1,0510,07* 0,9710,10*

* - различия достоверны между 1 и 2 группой, 1 и 3 группой; * * -различия достоверны между 2 и 3 группой.

менструального цикла не оказала влияния на соотношение разных типов клеток, размеры цитоплазмы и ядер. В то же время концентрация суммарного белка в цитоплазме и ядрах и относительная площадь зон ядрышковых организаторов этих клеток в фазу секреции была выше, чем в фазу пролиферации (табл. 1). Можно предполагать, что изменения эпителия щеки, который не содержит рецепторов к эстрогенам, в течение менструального цикла могут быть следствием опосредованного влияния гормонов, через изменения соединительной ткани слизистой оболочки (В.Л. Быков, 1998; Н. Coleman et al. 2001; 1.0 Thompson et al., 2001; F. Schmidt et al. 2002.).

Отличия мазков, обусловленные фазой цикла, у женщин при мастопатии были (рис. 2) однонаправлены с таковыми у здоровых женщин, но показатели у женщин при мастопатии и у практически здоровых количественно были различными. Так, количество роговых чешуек у

женщин в фазу пролиферации при мастопатии было меньше, чем в норме, в 2,8 раза при увеличении количества промежуточных клеток в 1,5 раза. В фазу секреции различия составили почти 2 раза и 1,4 раза соответственно, т.е. повышение в этой фазе цикла концентрации прогестерона не «нейтрализовало» полностью влияние повышенного содержания эстрогена.

Степень деструктивных изменений эпителия десны у женщин при мастопатии в фазу секреции была большей, чем в фазу пролиферации, что проявлялось различиями процента клеток без деструктивных изменений -41,4±2,65% в фазу секреции, 52,4±3,13% в фазу пролиферации. В норме различия этого показателя были незначительны и статистически недостоверны.

ЕРроговые ШЗповерхностные □ промежуточные

Рис. 2. Соотношение разных типов клеток эпителия десны при мастопатии 1 - практически здоровые женщины, фаза пролиферации; 2 - женщины, больные мастопатией, фаза секреции; 3 - практически здоровые женщины, фаза секреции; 4 - женщины, больные мастопатией, фаза секреции

Степень контаминирования эпителиоцитов десны

микроорганизмами, как в пролиферативную, так и секреторную фазы менструального цикла у женщин при мастопатии не имела достоверных различий с таковой в норме. При этом так же, как и у практически

здоровых женщин, при мастопатии выявлялись отличия данного показателя, зависящие от фазы цикла.

Концентрация суммарного белка, как в цитоплазме, так и ядре промежуточных эпителиоцитов при мастопатии не имела различий ни с одной из сравниваемых групп. Однако, в обе фазы цикла, возрастали число зон ядрышковых организаторов и их абсолютная и относительная суммарные площади, по сравнению с контрольными группами. Размеры ядер, цитоплазмы и ядерно-цитоплазматического отношения при мастопатии в фазу секреции были меньше, чем в фазу пролиферации и имели достоверные отличия от показателей у практически здоровых (табл. 2).

Таблица 2

Морфометрические и цитохимические показатели промежуточных клеток эпителия десны у практически здоровых женщин и у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла

Показатели 1группа 2 группа Згруппа 4 группа

Площадь цитоплазмы, мкм2 1434140,1 1453153,2 1843+61,5 1460+100,8**

Площадь ядра, мкм2 53+1,4 6012,4* 6712,2 4815,2* *л

Ядерно- цитоплазматическое отношение, % 3,7±0,09 4,210,15* 3,7+0,14 3,3+0,24л

Число зон ЯОР 1,4±0,07 1,710,11* 1,410,10 1,910,15**

Периметр зон ЯОР, мкм 2,3+0,08 3,2+0,30* 1,8+0,09 2,610,17**

Площадь зон ЯОР, мкм2 0,55+0,05 0,9910,21* 0,3910,02 0,6510,10**

Площадь зон ЯОР/площадь ядра, % 1,1910,15 1,83+0,32 0,6510,04 1,1110,11**л

* - различия достоверны между 1 (здоровые, фаза пролиферации) и 2 группой (мастопатия, фаза пролиферации); ** - различия достоверны между 3 (здоровые, фаза секреции) и 4 группой (мастопатия, фаза секреции); л - различия достоверны между 2 и 4 группой.

Сравнение показателей, полученных при изучении эпителия щеки при мастопатии, в разные фазы менструального цикла, показало, что по большинству параметров имеются достоверные различия.

В эпителии щеки при мастопатии, по сравнению с нормой, наблюдается изменение соотношения эпителиоцитов в мазках в фазу пролиферации: увеличивается доля менее зрелых (промежуточных клеток) и снижается доля клеток поверхностных клеток, что было характерно и для эпителия десны при мастопатии (табл. 3).

Таблица 3

Цитологические показатели эпителия щеки у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла

Показатели 1группа 2 группа Згруппа 4 группа

Роговые чешуйки, % 1,9±0,68 0,6±0,24 2,5+0,44 3,911,06л

Поверхностные клетки,% 23,3±1,77 18,6+1,38* 28,613,24 26,3+2,63л

Промежуточные клетки,% 74,7±2,09 80,811,31* 69,113,19 69,8+3,48л

Ядросодержащие эпителиоциты с деструктивными изменениями, %

Кариолизис 4,6±1,10 0,510,26* 8,011,07 0,510,24**

Кариопикноз 23,8±3,40 32,411,42* 20,7+2,05 58,715,45**л

Цитолиз 0,8±0,57 5,910,85* 0,210,13 5,811,37**

Мелкокапельная вакуолизация ядра 5,8±1,09 0,710,24* 6,111,29 0,210,14**

Крупнокапельная вакуолизация ядра 1,3+0,48 1,1+0,33 0,9+0,35 0,810,59

Эпителиоциты с адсорбированными микроорганизмами, %

Без микроорганизмов или с единичными 75,4+3,12 76,7+3,84 57,314,89 30,015,12**л

С 5-25 19,8±2,80 22,9+3,84 37,6+4,64 38,913,64л

С 26-50 4,7±1,21 0,4+0,17* 5,7+1,46 26,415,17**л

С 51 и более 0,0+0,00 0,0+0,00 0,0+0,00 4,711,55**л

Наличие клеток крови, %

Эритроциты 0,0±0,00 0,010,00 0,0+0,00 0,010,00

Моноциты 0,8+0,30 5,411,12* 2,3+0,60 10,1+2,39**

Лимфоциты 0,2±0,10 0,410,15 0,7+0,32 4,411,17**л

Нейтрофилы 0Д±0,06 0,010,00 0,3+0,18 0,010,00

* - различия достоверны между 1 (здоровые, фаза пролиферации) и 2

группой (мастопатия, фаза пролиферации); ** - различия достоверны между 3 (здоровые, фаза секреции) и 4 группой (мастопатия, фаза секреции); л - различия достоверны между 2 и 4 группой.

Многократно возрастало число клеток с явлениями цитолиза, кариопикноза, как в фазу пролиферации, так и в фазу секреции, что не было характерно для контрольных групп, а также для эпителия десны. Параллельно с этим, эпителий щеки в фазу секреции, в отличие от эпителия десны, характеризовался значительным возрастанием степени микробной контаминации, что сочеталось с увеличением более чем в 6 раз числа моноцитов и лимфоцитов (табл. 3).

Морфометрические показатели размеров ядра и ядерно-цитоплазматического соотношения эпителия щеки при мастопатии зависели от фазы цикла (табл. 4), в отличие от показателей практически здоровых женщин, и были однотипны с изменениями в эпителии десны.

Таблица 4

Морфометрические и цитохимические показатели промежуточных клеток эпителия щеки у практически здоровых женщин и у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла

Показатели 1группа 2 группа 3 группа 4 группа

Площадь цитоплазмы, мкм2 3121176,4 3034±127,4 3312+110,3 37511240,0Л

Площадь ядра, мкм2 86±2,9 112+8,1* 8612,6 68+4,5**л

Ядерно- цитоплазматическое отношение,% 2,8+0,1 4,010,5* 2,710,1 1,810,1**л

Число зон ЯОР 2,9±0,12 2,910,47 2,2+0,10 3,5+0,19**

Площадь зон ЯОР, мкм2 0,66+0,04 1,39+0,22* 0,7810,05 1,16+0,10**

Площадь зон ЯОР/площадь ядра, % 0,67+0,05 1,39+0,15* 1,0510,07 1,38+0,14**

* - различия достоверны между 1 (здоровые, фаза пролиферации) и 2 группой (мастопатия, фаза пролиферации); ** - различия достоверны между 3 (здоровые, фаза секреции) и 4 группой (мастопатия, фаза секреции); л - различия достоверны между 2 и 4 группой.

Абсолютная и относительная площадь зон ядрышковых организаторов при мастопатии были в обе фазы цикла достоверно и значительно больше, чем в норме.

Таким образом, отличия, обусловленные фазой цикла, эпителия десны и щеки становятся существенными и однонаправленными при мастопатии.

У обследованных женщин, больных раком молочной железы, в фазу пролиферации различия в эпителии десны были меньшими, чем в эпителии щеки, по сравнению с показателями при мастопатии. Так только в эпителии щеки изменялось соотношение разных типов клеток: увеличивалось число поверхностных клеток и уменьшалось количество промежуточных клеток, у которых морфометрические параметры ядра и ядерно-цитоплазматического отношения были меньше, чем при мастопатии и не отличались от показателей здоровых, что сочеталось с увеличением концентрации суммарного белка в ядрах и цитоплазме и относительной площади зон ядрышковых организаторов, достоверно превышая показатели здоровых и при мастопатии (рис. 3).

В эпителии десны увеличивались площадь только ядер и число зон ядрышковых организаторов, а концентрация белка в них была уменьшена.

Один из показателей, исследованных нами - количество различных лейкоцитов. Полученные данные свидетельствуют о его прямой зависимости от степени микробной контаминации эпителиоцитов и от их деструктивных изменений (рис. 3). Все эти показатели резко возрастают у женщин, больных раком молочной железы и в эпителии десны и щеки. Увеличение числа лейкоцитов можно считать, во-первых, следствием усиленной деструкции эпителиоцитов, при которой освобождаются агенты, усиливающие хемотаксис лейкоцитов (Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев, 2001; Л.А. Дмитриева, 2001). Во-вторых, это изменения свойств соединительной ткани, проницаемости кровеносных сосудов, описанные при злокачественных опухолях (Patterson 1990; Albeit et al„ 1998). B-третьих, изменения состояния иммунной системы, развивающиеся в процессе онкогенеза (Севостьянова, 2000; Т. Щетинина и соавт., 2000; I. Zusman et al., 2001). Изложенные факты свидетельствуют о том, что даже одноименные ткани, имеющие общий источник развития, расположенные рядом друг с другом, могут не однотипно изменяться при одинаковых воздействиях. Что может быть объяснением причин избирательной локализации патологических процессов в определенных участках слизистой полости рта (А.Г. Шаргородский, 1999; Е.В. Боровский, А.Л. Машкиллейсон, 2001).

Таким образом, мы полагаем, что изложенные в работе данные, во-первых, расширяют и детализируют информацию об эпителии ротовой полости. Во-вторых, данные, полученные при изучении эпителиев десны и щеки в норме, могут использоваться как нормативные. Можно полагать, что это весьма актуально, т.к. развитие и внедрение в клиническую практику компьютерных морфометрических технологий позволяет более

число роговых чешуек 250

максимальная микробная контаминация

минимальная микробная контаминация

площадь ядрышковых организаторов в ядре'

число ядрышковых организаторов в ядре

число поверхностных клеток

число промежуточных клеток

число клеток без деструктивных изменений"

площадь цитоплазмы промежуточных клеток

концентрация белка в ядрах" " площадь ядер промежуточных клеток"

концентрация белка в цитоплазме"

Рис. 3. Особенности мазков эпителия щеки при раке молочной железы (за 100% взяты показатели в фазу пролиферации в норме)

норма мастопатия * рак

* — различия достоверны между показателями в норме и при раке молочной железы; ** - различия достоверны между показателями при мастопатии и при раке молочной железы. Степень достоверности сравниваемых показателей - р<0,05.

широко применять объективные морфологические исследования в стоматологии (N. Mollaoglu et al., 2001; В.И. Цыганков, С.Г. Выборов, 2003). В-третьих, полученные данные могут учитываться при определении оптимальных сроков оперативных вмешательств (С. Marchetti et al., 2002), с учетом состояния эпителия, определяемого фазой менструального цикла. В-четвертых, изложенные факты позволяют лучше понимать природу изменений, происходящих в ротовой полости при весьма распространенных патологиях - мастопатии и раке молочной железы, а также при других состояниях, характеризующихся изменением гормонального фона - половом созревании, беременности, климаксе (G. Schneider, 1997; Ю.М. Максимовский и соавт., 1999; Л.М. Лукиных и соавт., 2000; S. Verkovaora et al., 2000; E.B. Боровский, А.Л. Машкиллейсон, 2001). В-пятых, они могут учитываться при диагностике, служить предпосылкой внесения корректив в терапию органов ротовой полости и проведении профилактических мероприятий у больных мастопатией и раком молочной железы (М. Уайттхауз, М. Слевин, 1999; Ю.В. Цвелев, А.Б. Ильин, 1999; В.А. Тазалов и соавт., 2002).

ВЫВОДЫ

1. Цитологические показатели мазков эпителия десны и щеки в норме имеют половые и зависящие от фазы менструального цикла различия, выявляющиеся при использовании морфометрических методов исследования.

2. Цитологические показатели мазков эпителия десны у мужчин отличаются от мазков у женщин большим процентом поверхностных клеток, меньшим числом клеток с признаками деструкции, меньшей микробной контаминацией эпителиоцитов, меньшими размерами цитоплазмы и ядер промежуточных клеток, более высокой концентрацией белка в их цитоплазме и ядрах, меньшей площадью зон ядрышковых организаторов.

Цитологические показатели мазков эпителия щеки у мужчин отличались от таковых у женщин меньшим числом клеток с деструкцией и меньшей микробной контаминацией, меньшими размерами цитоплазмы и большими размерами ядер промежуточных клеток. Кроме того, от мазков, взятых у женщин в фазу пролиферации, они отличаются большим процентом поверхностных и меньшим — промежуточных клеток, более высокой концентрацией белка в их цитоплазме и ядрах.

3. Выраженность морфологических различий, обусловленных фазой менструального цикла, у эпителия десны большая, чем у эпителия щеки. В эпителии десны при смене фазы цикла от пролиферативной к секреторной отмечался отчетливый «сдвиг» в сторону терминальной стадии дифференцировки эпителиоцитов, усиливалась их микробная

контаминация, увеличивались размеры цитоплазмы и ядер промежуточных клеток.

4. Цитологические отличия мазков эпителия десны и щеки в норме состоят в следующем: в эпителии десны значительно больше клеток, находящихся на терминальных стадиях дифференцировки (поверхностные клетки, роговые чешуйки), клеток, имеющих признаки деструкции и высокую микробную контаминацию. Промежуточные эпителиоциты в эпителии десны имеют меньшие размеры, более высокую концентрацию белка в цитоплазме и ядрах, меньшее число зон ядрышковых организаторов по сравнению с таковыми в эпителии щеки.

5. У женщин, больных мастопатией, эпителий десны и щеки, претерпевает циклические изменения, обусловленные фазой менструального цикла. Их направленность однотипна с таковой практически здоровых. В ядрах промежуточных эпителиоцитов десны и щеки при мастопатии увеличена площадь зон ядрышковых организаторов.

6. У женщин в стадию пролиферации менструального цикла, больных раком молочной железы, в промежуточных эпителиоцитах десны и щеки увеличена площадь зон ядрышковых организаторов. В эпителии десны, кроме того, значительно уменьшена доля роговых чешуек, концентрация белка в ядрах промежуточных эпителиоцитов.

7. Характерными особенностями мазков эпителия десны и щеки у женщин, больных раком молочной железы, в стадии пролиферации, является существенное увеличение числа клеток, имеющих деструктивные изменения, высокая степень микробной контаминации эпителиоцитов, значительное число лейкоцитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сапронова Е.А. Морфометрическое изучение зон ядрышковых организаторов эпителия слизистой оболочки полости рта у больных раком молочной железы // Тезисы докладов Ш-й Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Владивосток. - 2002. - С. 22.

2. Сапронова Е.А., Рыжавский Б.Я., Служаев И.Ф. и соавт. «Цитоморфологический анализ эпителия слизистой оболочки десны» // Материалы международного симпозиума «Доказательная медицина -основа современного здравоохранения». - Хабаровск. — 2003. -С.113-115.

3. Сапронова Е.А., Служаев И.Ф., Рыжавский Б.Я. и соавт. «Изменения слизистой оболочки полости рта у больных злокачественными новообразованиями» // Материалы международного симпозиума «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения». -Хабаровск. - 2003. - С.116-118.

4. Сапронова Е.А. Состояние тканей парадонта у больных онкопатологией II Материалы научно-практической конференции «Вопросы формирования здоровья и паталогии человека на Севере факты, проблеммы и перспективы». - Якутск. - 2002. - С. 252-254.

5. Сапронова Е.А., Рыжавский Б.Я., Служаев И.Ф. Особенности дифференцировки эпителия слизистой оболочки десны у практически здоровых женщин // Материалы межобластной научно-практической конференции «Актуальные вопросы стоматологии». - Благовещенск. -2002. - С. 39.

6. Сапронова Е.А., Рыжавский Б.Я, Служаев И.Ф. Цитологические особенности эпителия слизистой оболочки десны у женщин в разные фазы менструального цикла и у мужчин // Дальневосточный медицинский журнал. - 2003. -№2. - С. 19-22.

7. Sapronova Е.А. Peculiarities of gingival smears epithelium in women during different phases of menstrual cycle // Тезисы докладов IV-й Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Владивосток. - 2003. - С. 22.

8. Сапронова Е.А. Цитологическая характеристика эпителия слизистой оболочки десны у женщин при мастопатии // Материалы докладов IV-й Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Владивосток. -2003.-С. 22.

9. Сапронова Е.А. Информативность метода цитологической диагностики заболеваний слизистой оболочки десны // Здравоохранение Дальнего Востока. - 2003. - №3. - С.85.

10. Сапронова Е.А., Скакун JI.A., Войтенко M.JI. Диагностическая ценность цитологического показателя адсорбции микроорганизмами эпителия десны у больных онкопатологией // Здравоохранение Дальнего Востока. - 2003. - №3. - С.86.

11. Сапронова Е.А., Служаев И.Ф., Рыжавский Б.Я Морфологические и цитохимические особенности эпителия слизистой оболочки десны у женщин в разные фазы менструального цикла // Стоматология, принята к печати.

12. Сапронова Е.А., Рыжавский Б.Я, Служаев И.Ф. Сравнительная морфологическая характеристика десневого и буккального эпителия у женщин в разные фазы менструального цикла // Клиническая лабораторная диагностика, принята к печати.