Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфогенетическая изменчивость верхушечной почки побега пшеницы и ее зависимость от светового фактора в культуре IN VITRO

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Морфогенетическая изменчивость верхушечной почки побега пшеницы и ее зависимость от светового фактора в культуре IN VITRO"

р V 6 ОД

- 4 ЛПР 13^

ИОС~.ОЁСККЛ ГОСУЛУСгВЕЙКаП УНИВЕРСИТЕТ

;п.;зш1 "*. Е, Го:.:оносс2а

факудыех

Еа правая рукописи УДУ.: £21.1.0£3. 23

сошли елашзп-г дздреееяч

ямогенегическая :а1ЕМЧИГССТЬ верхузечноя ПОЧНИ побега йгенйдн И ее здвзслкхлъ О? светового ФАКТОРА в культуре 1н у1тш

Специальность - 03.00.12£;зкологкя растешЛ

Автсрэфэрат диссертации на соискание ученой стапснп кандидата биологических наук

ЮСНВА - 1994 год

Работа вьшонанс. ка г.а£сдрг физкохонз: разтешй! г ь^крсь::-ологил бкзлсгичесгаго фшсультеха Саратозсгаго ордена Трудового Красного Знамени государственного университета к>£ К Г. ЧгркызЕо-кого.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор В. А. Кулаков н доцэкт, какдздат бгалогкчесчкх наук Е. Г. Еьков-

цзв.

Официальные ощоректк: ^доктор' бковэгкческкх наук,

профессор Иванов В. Б.,

каядадая биологических наук,

Косуллна Л. Г.

■ Бедуцэе учреждение: Институт физцологик растений АН России

ЗаЛЕяа состоится *' 14 "" апрели 1994 г. в ___ чао. На заседании Специализированного Совета К. 053.05.14. по присуждению ученой степени кандидата биологических Еаук в псковском государственном университете по адресу: 119899, Москва, Воробьевы горы, ИРУ, биологический факультет.

С диссертацией когзго ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ. ;

Автореферат - разослан " 19 " Авраля 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических паук

0. Т. Полесская

общая характеррютИКА работы

Актуальность теш. Вопрос организации и аизнедеятедьности лерхутпэчной почки побега пшеницы давно прзгалекает исследователей зашглаюлихся проблемой морфогенеза растения, постольку решение ее позволяет понять не только законы "сложения форкк растений", и г'зхешзш регуллшп! ростовых процессов, раскрызаяпих при--дпшс-следстЕЭНвые связи £Саяпст,19бЗ; Бутёямо »195-4; Сэребряко-1Q?1; ^розова, 19?53.

Слсзссть решения я валюсть проблемы морфогенеза, связанной о организацией, интеграцией и саморегуляцией функциональных систем организма на всех уровнях, по прочему оставляют за ней статус основной задачи Физиологии растений [ЬЪкрсноссз, 1993]. Особое внимание заслуживает исследование апикальных меристем С ALi) побега, постольку 'тжкко здесь происходит закладка и йосмкзавакне надзе:.тьк органов, определяется последовательность и гасрдинацпз органогенных процессов и ветвление стеблей.

В рззз^ш&таэмся растении начальный объем органогенной деятельности зерхусечнсй меристемы, еэ потенции зна'пггельно зыпе, чем конечный результат продуктивности. Эта особенность чериотем ойкадзгзпзает л придает определенную значимость решению вопросов, связанных з конечном счете с урожайностью [Ростовцева, 19343.

•ЗсрюобрззэзагельЕие процессы, происходящие з зерхупках побегов, з ластся^эе иречя лу^э есэго представлены анатомо-морфоло-гп«»сга!Д! аоглздсгааишя ССгробрякова, 1571; Эзау, 19803. Одиа-. кздсстслсчксг зягясе ^"иогстпи этих процессов сдергивает яегзнпг пгссл.ем, сдязгпньзс с чсссегенегсм,

В "¿."лыаг j цоследсе.^:;:"» /ст^гозг.гннс, что А.М

гзльнш: ^zzziyzz:?, как и ^тсо.иптгз С-гкссносоз, iQGS3,

C--:-:"^;. -гтг гагл:-:? растер к см: ™ггатедькд:е депеегда едет С:?£З;Л.Й.ТЬ ;:ei7cep'vZor~e::Hcs зд;г?'.Н\о на деп'.'ользссгз н;±з-цзнт".:. Однако, сссСеннссть ¡'.гстсполсг^нпл и .-^зде-лег::-"•Dci:c5 сос:сл;;::з к'зтек AM "слс:.пя:ст :д:

.п .г .••"т::-.:.: ассоциациях, изучаем: var;? на цеяд: растениях

Г&гкрлгь сголцз взашижзогения г.е^сду агскшыяз элемента:::!, растения, как. правило, удается с пешзю ;ададьпа гкедержеа-тез, проводимых па объектах различной едогаостн CEjTesnov 19903-

- 4 - .

В качестве модельного объекта, ио&ьоляюсего -

связанные с деятельностью меристем, юазт быть успеано kcuü^öo-вана верхушечная почка. представляющая собой побег в атюое. Тем более, что развитие любого растения начинается с фор/жроза-нил этого сложного структурного комплекса.

Вопрос о регуляторных механизмах меристем, представленных з почке большинством клеточных образований, непосредственно участвующих в шрфогенетических трансформациях структур (кетаыерах), формирующихся элементов (листовых примордяев - ЛИ, узлов, междоузлий и т.д.), и факторах регуляции их деятельности в мочение онтогенеза - остается мало изученным и заслуживает особого внимания. Решение этой проблемы актуально не только для теоретических разработок, ко и в связи с разкплеи пезо.: отрасли - биотехнологии, получившей широкое распространение ь сельском хозяйстве. селекционно-генетических исследованиях. На первый плач здесь выдвинулись трудности с . культивированием изолированны:: апексов, особенно злаковых. бобоЕых и древесных растения/ а такие с эмбриоидами, которые однажды возникнув, ».»гут длительное время находиться в покое или приступать к аномальному развитию.

Однако, исследования, направленные ка непосредственное изучение деятельности АЫ побега in vitro, малочислен« и в большинстве своем проводятся на двудольных травянистых растениях, характери-зухвдкея высотой регенерацконноЯ способностью. У злаков, в виду отсутствия камбия, регенерационнке процессы ограничены. Поэтов, биотехпологичеекке пр::зш, кспользуемкз в селекционном процессе злаковьс культур, 'не могут быть высоко зф£ооти»ньш Саз vstko разработанной теории ^уккцюткрозанпз /:М в культуре in vtt*-o i; npaiCKweotos рекомендаций ло регулщ:>ш irre деятельности.

Цель п заца^г ;:ce.r:ar;o"e;ir:i. Дэдьл данной работы являлось -изучение щр$огенгтичзской- х^/одькости образовательных тканей, эдекентоз и структур пэч.сл г-ошщи» кзолфошшой ка начальных этапах онтогенеза поиага,. игроведонной с культуру in vitro я подвергнутой воздакстс;^ йлеогдаез фсжсроз (питательной среды - ED, света). В связи с stzm а задачу mmz исследований входило:

1. Выявить иорфофиззюдагдогсказ особенности строения вегетативных главных почек шееннц, вводимых в }сультуру in vitm

2. Представить ьэрфофизкологическую характеристику сортовых особенностей роста апексов побега пшеницы,, культивируемых in vitro на различных вариантах ИЗ.

3. Определить ачатомо-морфологическую реакция изолированных почек ссешщы, культивируемых in vitro, на сзетовыз воздействия.

4. Разработать модель почка побега пкокшы, функционирующей в условиях освещения.

Научна* новизна

1. Епервь-е предпринято исследование деятельности образовательных тканей изолированной н культив/руемой in vitro главной почки псекицы, сод&рлаагй различное число метзысроз. Б результате установлено, что емсость почки способна повлиять на тип ростовой реакции Ail Показано, что такой л'орфологпческий признак, как высота узла баззльногс метамера, мо?кт Сыть причиной низкой ростовой активности меристем. ввиду происходящих в нем регенерацношпк процессов.

2. Впервые для апекссз пзеиицы минимального размера, культи-внруемух in vitro, разработала и оптимизирована ГУ, особенностью которой следует считать - высокое соотнесение фосфора к азоту к катаю (2,5:1:1), не встречаете ни з одной из ранее разработанных сред, используемых для этой частя побега ппеницы. Другим ватным компонентом дачной ПС является тирозин, . используемый как рострегулирукдее соединение, иьтпбирушке каллусогелез и поддер-лзшаю-дее ростопке реакции почки в корне.

Я. Шг/чену , новые данные о влиянии гллто-зеленой области спектра излучения на ыорсогенет:~;ескпе реакции мэржтеч верхуши • псСега Установлено, что зта область cneirrpa стимулирует ростовую активность • меристем ЛИ Синий - оказкзает пологательнсе .влияние на деятельность лМ и ускоряет дифференциале» ЛП. Красный свет ннгкбируег деятельность меристем конуса нарастания (1Ш).

4. Представлена оригинальная блочная модель развиЕаощейся в условиях освещения вегетативной почти псекшш - автономного ре-гулятерпего контура побега, отраяавдая роль а место £П в последовательной цепи шр^огенйтичгских собктиЧ

Тесрет'лч&сгзя и практическая ценность.

Установленные особенности развития изолированных апексов в культуре in vitro, выращенных на свету различного качества и интенсивности, мояно использовать как фактический материал для ' разработки концепции регуляторной роли света б морфогенетической деятельности образовательных тканей верхушек поСегов.

Другим важным фактором регуляции развития элементов метамера -почки следует считать тирозин, являющийся одним из важных источ- •

виков эндогенных физиологически активных вевдзств (ФАВ) в регуля-торном пуде ингябигорно- схимуляторного коиплегеа.

Факт существования установленных иорфогенетических реакций AM побега на свет свидетельствует в пользу концепции экологической эволюции и в частности гелиоюрфогенеза, ведущее место в которой занимает строение вегетативной почта [Серебрякова, 1971j.

Штодологические подходы, использованные при разработке состава Ш, также шгут cjsузд?гь базой для решения аналогичных задач.

Практическая ценность работы заключается в возможности использовании результатов исследования для оздоровления, размножения и вырадавания ппеницы в культуре in vitro. Это положение особенно актуально в селекционных, исследованиях, где приходиться работать методом отдаленной гибридизации. Как известно [Ивановская, 19833, ременной материал, . полученный от таких растений, часто имрет аномальные зародыши, неспособные развиваться в естественных условиях выращивания.

Штоды стерилизации, изолирования и культивирования на специальной Ш, разработанные нами для апексов, пшеницы, позволяет получать жизнеспособные растения, что бесспорно является полезным и шиет бить испольаованэ в селекционных исследованиях га определенном этапе .технологического процесса получения новых линий.

Более того, изменяя условия освещения шжно воздействовать на Ali почки, ст5щулирул прохождение органогенных процессов е них.

Апробация работа Штеризлы диссертации докгадьталксь на конференции молодых ученых ИВСРЫ Ail СССР (Саратов,1932), конференции молодых учекых СГУ (Саратов,!984),. семинаре .Поволжского отделения BMP (Саратов, 1984,1986,1992), V Республиканской конференции "йтаологические основы повышения продуктивности и устойчивости зерновых культур" (Целиноград,1934), Рамзаевских чтениях СГУ С Саратов, 198&)научно-практической конференции "Повьшенке эффективности" агропромышленного производства" НГЮ "Элита Поволжья" (Саратов, 1389), кафедре физиологии растений МГУ (Москва, 1330), Ш-ег.! Всероссийском съезде ВОЙ1 (С.-Петербург, 1993).

Публикации. По материалам днссертахрш опубликовано 10 работ, в печати находятся - две.

Структура и об'ьам работы. Диссертационная работа из'ложзка на 207 страницах кашшописного текста, содержит 28 таблиц и 40 рисунков. Список литературы насчитывает 250 источников, из шгх 94 иностранных. авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. ОБЪЕКТЫ И" МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В качестве объектов исследования использовали верхушечные почки различной емкости, выделенные из двухсуточных проростков и зрелых зерновок трех сортов пшеницу s/ягксй: высоко рог лая - Саратовская 36-, подукарлчковая, мексиканской селекции - Нздадсрес 63 и производная от них - среднерсслый, дочерний сорт Саратовская 52. Яизненная форма всех исследуемых ппониц - яровая.

Исходным материалом для создания селенного фонда послужили чистосорглые семена, полученные из лаборатории яровых пшениц НПО "Элита Поволжья". Семенной материал елэгодио воспроизводили на опытном поле лаборатории физиологии растений того хе НПО. Отобранные из средней части колоса, однотипные по фор;,«, пигментации. самой, крупной фракции семена использовали в экспериментах и высевали на делянках 1,5-3,0 кв. м, в трех аовторностях.

Агротехника возделывания яровой лсеяицы соответствовала общепринятой для данного района. Семена высевали вручну», аппаратом конструкции ВСГК. Норма высева 400 семян на 1 кв. м.

Лабораторные опыты включали: а} выделение почек из зерновок с поысаьп двух препаровальных игл. одну из которых оттачивали .до узкого зытянутого конуса, другую - в виде ланцета;

С) морфологический контроль за состоянием главной почки зрелого зародыза и двухсуточных срсрсстков, с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа - МБС-9;

з) анатомирование и приготовление постоянных препаратов верху-печных почек, ко Диенсену (1967): фиксировали 20 мизптг в смеси Бродского, схлагденной до 5-7сС. Тслсина срезов 8-10 мкм. Препарированные почки екрааизали гематоксилином Гайденгзйна ЕПрозияа, 19653, с^сьв азур II - эозин' С Ка^.гаг, Козлов, 1555]. Клеточные стенки щюкрззивали ашиаяовым cifflsi [Дупла. 1978]. Объекты списывали, измеряли и фотографировали, с ггомоеф» переходных колец собственной конструкции через микроскопы Виолам Р-12 и МЕС-9, фотокамерой "Зенит-Е". Фзрму и площадь КН определяли по Ростовцевой (1S&4) .объекты измеряли окулярмикрометром ШВ-1-lSx;

г) культивирование почек in vitro, которое состояло из 1) обеззараживания исходного материала по модифицированной нами методике; 2) вакуум-инфильтрации обеззараженных семян с целью ускорен-

кого выделения почек испытуемых в условиях освещения; 3) пассирования на Ш: Мураснге и Скуга ЕБутенко, 1954]; В-5, Гамборга; Щенка и йшьдебрандта [Калинин' к др. , 1980]; Т Г Dud its ot all, 1975], - в 10 мл npoOiîpicax, содержащие б мл ПС. Длительность пассата 20 дней. Температура окружающей среды в течение пассата 25±1оС. Изучение реакции зкеплантов на условия освещения проводили в (¿злегабаритной установке, собственной конструкции, состоящей из осветительного устройства и фотокамеры.

Исследование влияния интенсивности излучения проводили при двух редиках освещения - 4,25 и 1,01 Ёг/кв. kl Источником освещения слугала лампа нагсалзязаниа IE £20-500.

Изучение компетентности апексов к спетральному составу излучения проводили на красном, хздто-зеленом и синен свету. Для создания пере число вниз: спектров использовали стеклянные промышленные светофильтры; красный свет - КС-15; г.елто-зелекый -СЗС-22 + £>17; СИШЙ - CSC-22 + СС-15 С ГОСТ 9411-81].

фодэггзггелькогть периода освещения составляла 14+0,4 часа. Топкость светового Г.ОТОГЛ 13ИЗРЯДИ в Ïir/KB. м,. с помощью чзмэ-ргггелй средних цазгеггой и енергии лазерного излучения ИМ0-2К,

рассч^лшзалп на основали:! оаэна квадратов расстояний при посто-

г "

явном световой потоке по формуле E^/Eo-lS /1< СЦопкна, 1985]. • Оптические cro'.e?ia листовых фрагментов глаыюго побега пег-шцдз. находлегхел в третьего листа, изучали с помощ-в

елок*poCoro;.:cTpii CI-EG. гакл^гшиг мэгду ксарцев1£.к стекам, по Еракту к î'creeBoi; ( i£-<P), о::и устанавливались в г:аретку :: промэрядпсь в диапазоне 833-640 и::. -

Полученные результаты обрабатывались на БЕ.; iJTI-01.

п. izszstz'Ji iwc;;г,:-?:.::;л л iz обитзеее

;.Г, . ', j„ i. vitra

Ср:д;: сух^егьу^его соруоьугй ы^згссбрагия пздшь без пред-лаг:~ельного иэр-со-;;з:1элэп;,;с,с!-лго схозя» выделить дл.»

акспгр:;::ента мэд-^йзНЫЗ copï, по рискуя дыорать такой, ткззк и г-откп œropero :-згу? о::гь не готовы к воспржтк» 'ш&орг<хж извне. поставку »s СуивдташлъЕЬ» систем к? догтпглп опред-.» хзяного ¡гачеегьекюго состояния. Лсотсму, прогедс-ние сраюш»хь-ной иор^зс-нглюлогичеегаи характеристики ьерхущки побого пшеницы,

используемой в качестве модели и вводимой з культуру in vitro, явилось необходимым фрагментом насего исследования.

В результате анатомоморфологических исследований глазной почки ппеницы зернонк;г испытуемых сортов было установлено, что между ними существуют различия. Так, низкорослый сорт по числу клеток в тунике и корпусе КН, превышает саратовские, а среднероелкй отличался от высокорослого большей площадью я интенси: ной окраской цитоплазм клеток кедулярной меристе?.<ы. ' Другим важнш признаем функционального различия AM являлась форма КН (табл.). Для низкорослой пшеницы характерен вытянутый конус (h/d=l,3), двум другим - удлиненный (h/a-O,8-1,1). Однако, по размеру КН, дочерний, среднерослый сорт уступая высокорослому.

Используя шкалу оценочных показателей состояния верхушки побега, разработанную АЬЬэ, Fhinney (.1954), удалось установить, что полукарлик находится на стадии третьего позднего пластохро-на, дочерний сорт - а ранней подстадии четвертой стадии пластох-рона, а высокорослая пвеница - четвертой стадии, средней подстадии. Перечисленные различил мезду сортам этим не ограничивались. Сюда следовало отнести различия в размерах развивающихся элементов метамеров - ЛП, узловых зон, а тага» в степени их дифференциации, в том числе состоянии Формирующейся проводяшзй системы JUL Исследуема сорта по этому показателя располагались • з следующей убывающей последовательности: Саратовская 36 > Саратовская 52' > Нададорес 63. Примечательно, что та же последовательность з данном ряду сортов, была установлена при рассмотрении степени дифференциации проваекулярной системы и перецикла базальных метамеров зародыша (Егорова, Быховцев, 1S85).

Различия между пшеницами обнаруживались л з развитая узловой зоны (табл.). Особенностью саратовских пшениц является наличие широкой узловой зоны. Причем, для гибрида характерна наиболее сплюснутая форма узловой части метамера, независимо от "емкости почки" (числа ЛП в ней). Для высокорослой пшеницы свойственен узел широкий я высокий, полукарлику - зауженный и низкий.

К тому' яе было установлено, что между развитием почта; и массой зерновки существует прямая связь. Так, высокорослая пшеница по массе зерновки, в трех из четырех лет, достоверно превосходила полукарли!^ Б неблагоприятные года межсортовые различия по данному параметру нивелировались. Причем, влияние было тем значительней, че.».; экстремальней экологическая, обстановка складьва-

Таблица.

кзрфофизиологическая характеристика исходного состояния структур верхушечной почки зрелого зародыша по сортам пшеницы (х в ыкы). средние значения за 1982-1986 г. г.

Показатели 1 1 | 1 1 Саратовская 35| Саратовская 52| | 1 Нздадорес 63

Конус нарастания:

высота (h) А 42,1+2,5 36,4+0,8

В 62.8+2.8 69,0+3,5

диаметр (d) А 50,3+2,4 43.4+1,1

В 55,9+2,8 57,3+2,0

h/d А 0,9 0,8

В 1.1 1.3

А 1653,0+86,1 1245,4+63,0

В 1У-Й 2821,2+144,9 метамер: 3220.2+165,9

h узловой гоны А 30,3+1,5 31,3+1,7

d - А »3,6+4,2 67,4+3.4

II 1-й метамер:

h "воротничка" А 155,6+8,3 101 >4+6,6

В 108,1+5,2 98.5+11,5

Ь узловой зоны А 57,1+2,3 46,0+2,6

В - 35,7+1,2 35,8+1,4

d ■ Л 125,0+6,9 110,8+2,4 \

" В 116,2+3,9 99,0+6,9 '

II-ft яеташр:

h "капшона" А •339,1+14.9 289.4+15.7

В ' 261,5+6,2 . 256,5+13,4

h угловой гоны А 84,0+3,2 70,2+1,3

:В 55,2+5,2 62,0+2,3

d -•*- ■ А . -229.5+10,2 205,6+8.0

В 212,0+8,9 187,2+14,2

1-й метамер:

h "колпачка" А ,911.9+38,9 764,7+54.3

В 753,0+17,9 763,1+30,2

h узловой 80НЫ А 94.5+3,9 77,2+2.3

В 86,2+9,3 93,9+5,9

d А 424,7+17,6 408,9+8,5

В 427,5+9.0 359,6+13,7

Цримачааие: А - почка с 4-я, В - с 3-я мэтамерами. Саратовская 35 />-5; Саратовская 52 А л-2, В л=4; Нададорэс 63

- 11 -

лась з период формирования зерновки.

На основании подученных данных заключили: 1) неординарность в развитии почки, у пшениц, различающихся типом роста, представляется как результат неравноценного вклада АН в регуляция програчсл развития ее структур; 2) из верхупечных почек ппеницы различающихся "емкостью" преимущество в росте долгий иметь тс из них, которые обладают болызим количеством Ш или более дифференцированной системой проводящих тканей.

В результате исследования почек сантиметровых проростков, отобранных через 24 часа прсрацивания, было установлено, что все испытуем сорта находятся на четвертой стадии пластохрона и обладают однотипной формой КН. Однако, межортовыз различия сохраняются: по подстадиям пластохрона, степени развития AM конуса, ЛП и их проводящей систем Следовательно, при введение почек в культуру in vitro очень важно учитывать их исходное состояние.

II. 2. Регу-тася раг"гпп гЕолгрото-'агсй гэрхуг^сз^.почкя rraiora ссстазсм геггсгэгылй среди in vitro.

Непременны?.« залогом успеха подобного эксперимента яелялось -обеспечение устойчивого онтогенеза, ведущего к сохранению нормальной организации и физиологических функций зкспланта, опреде-ляюдузсся в основном сло.тшой системой взаимозависимостей. которые '• имеот более или менее рэгуляторный характер. Огсяда понятна не- . обходимость добиваться опткмнзашш состава ПС, направленной на поддергзанке у зксплантов подвижного разновесия и стабильной ответной реакции на условия культивирования.

С этой целью первоначально мы дрэдпргзпяли ncnurity селективным путем определить среди известных Ш наиболее приемлемую, учитывая реакция зксплантов на in: химический состав. Однако, из четырех сред, ни одпа не отвечала главное требованию: высокой приживаемости .почек. Эта причина поолудаха-основанием к анализу хими- : ческого состава ПС,' реакции зксплантов и создания на базе одной из них (среды Т) - собственной.

Основными критериями пригодности ПС были определены следующие • физико-химические показатели: отношение аммонийной и нитратной' форм азота,. NFK, уровень рН, дозы и состав ФАВ. С учетом всего этого для разрабатываемой среды были определены следующие значения: соотношение аммонийного к нитратному азоту - 1:24, NPK -4:1:1, рН - 5,4-5,5. Основным исаочником аммония и фосфора -

NffyH^PQ}, нитратного азота - NaNOj, железа - Fe-шгграт, ФАВ -2, 4,5-Т и тирозин.

Реакцию эксплантов на разработанной нами ПС, именуемой как АЛ, оценивали по приживаемости и каллусогенезу. Оказалось, что ванная среда по сравнению с другими испытуемыми более эффективна. Однако, и ка Hef5 проявлялась сортоспецифичность пшениц, кото, рая с уменьшением размеров почки становилась еще очевидней. Данный факт послужил причиной для проведения оптимизации среды AIL

В результате были определены четыре испытуемых компонента среды: KrtjH»PO^. Fe-цитрат, 2,4,5-Т и тирозин,- которые, с нашей точки зрения, способны существенно повлиять на морфогенез почки, ее компетентность к световому фактору, устаноьлены варианты доз. Для решения поставленной задачи.была разработана матрица четы-рехфакторного пятиуровневого латинского квадрата. Таким образом определили 25 опытных вариантов среды AIL Полученные фактические данные интерпалировались на 625 матричных варианта В результате было установлено: 1) наиболее оптимальными для развития почек являлись варианты с отношением NPK - 2,5:1:1, аммонийного и нитратного азота - 1:16; 2) три испытуемых компонента из четырех оказались взаимосвязаны - NH^HgPO^, 2,4,5-Т и тирозин.

Поскольку 2,4,5-Т и тирозин явдяотся мощными морфогенныш факторами [Conger at'allЛ978; Kishor, 19893, способными повлиять на эндогенный ннгибиторао-стимуляторный комплекс почки, а апекс побега является центрам биосинтеза ауксина [Полевой, 19803, го возник вопрос - целесообразности использования этих веществ и в каких концентрациях?

Ё результате морфофизиологического контроля почек, содермзлих два метамера и культивируемых на среде АЛ, установили, что любые дозы 2,4,5-Т в ней стимулировали деление клеток в тканях. Однако, эффективность' доз для различных составляющих почки неравноценна и в большей степени зависит'от их развития. Так, по проли-феративной активности они распределились в следующей убывающей последовательности: проводящие пучки 3-го. 4-го ЛП, сердцевинные клетки узловых зон одноименных метамеров, корпус и туника в КЕ

Наличие 2,4,5-т в среде приводило к изменению типа роста AM в почках, независимо от их сортовой принадлежности. Установлено, что AM конуса изменяли органогенный рост на пассивный (площадь КН увеличивалась за счет растяжения клеток) или эмбриональный (количество клеток в конусе увеличивалось, а их площадь уменьша-

лась, при этом возникали локусы меристематической активности).

Доказательством изменения типа роста в AM могут служить данные анализа роста КН почек исследуемых пшениц. На основании которых заключили, что все сорта однозначно реагировали на 2,4,5-Т, которая ингибировзда рост конуса в зысоту и ширину. Такая ответная реакция AM вызвана в основном активацией каллусоге-нсза в базальком метамере, его узловой части и Ж

Иной реакцией обладали почки, выращенные на ПС с тирозином. В данном случае клетки КН увеличивались по размеру в 3-4 раза, наблюдались митозы, ядрыдек чаще - 3 (что типично для клеток ин-тактных растений). Рост ЛП был аналогичен, наблюдаемым в норме: а) листовая щель третьего ЛП смыкалась, прикрывая КН; б)' четвертый ЛП разрастался, как по окружности, так и в высоту.

Агаивность ростовых процессов во многом зависела от исходного состояния узловой зоны базадького метамера почки после выделения ее из проростка. Если при препарировании удалялось больше 1/2 части узловой зсны, то рост четвертого ЛП преобладал над предыдущим, если zee 1/2 и меньше - то развитие его определял третий ЛП, что соответствует норме.

Как правило, каллуоообразование и заживление раневого слоя, имеющего обычно размеры - 30+3 мкм, завершалось уж в течение первой недели культивирования, фи этом, 'аномальных явлений в деятельности AM не наблюдалось, судя по сохранению ими зональности и постоянству формы КН, достигаемой равномерным.приростом з ширину и высоту. Примечательно, что AM пшениц обладали, различной. компетентностью к испытуемым дозам тирозина Причиной этого является их онтогенетическая разнокачественность.

Итак, на основании установленных различий в реакции составляющих элементов почки на присутствие 2,4,5-Т и тирозина в ПС мы окончательно'определили ее состав: исключив 2,4,5-Т и сохраняв тирозин в дозе 60 мг/л, поскольку данная аминокислота не вызывала отклонений от нормального роста и являлась необходимой для эрганизации фоторегуляторных и фотосинтетических .комплексов.

II. 3. Шрфогенетическая изменчивость верхуйэчкьк почек побегов тратты, культивируемых in vitro, в связи с условиями освезэння.

Одним из механизмов морфогеяной деятельности образовательной 'кани апекса вегетативного побега является фитохромная система >егуляции ['Уоринг.Ф/ллняе 19Ц43. Известно, что КН вегетативного

побега злаков прикрыт многочисленными Ш и листовьйй! влагал/щами, "образующими вокруг него темную и влаляуга камеру" С Добрынин, 1966]. Однако ыехду этш! фактами существует противоречие. Поскольку совершенно -неясно, как объяснить наличие большого количества фитохрома в тканях апекса, если он надежно защищен от СЕета. Во-вторых, действительно ли роль ДП и обкладок сводится к защите АЫ от тормозящего действия света.

«¿акт пропускания и отфильтровывания света листьями растений широкс известен £Gates et ail, 1965]. Выделяют два пути проникновения сзета в тело растений: а) диффузно; б) локально, по про-водягчм тканям [Маргна,Бриге, 1984]. Однако в обеих случаях речь идет о структурах дифференцированных,' отсутствующих в почке.

Нами были проведены эксперименты, по установлению оптически свойств листовых фрагментов проростка, находящегося в фазе шильца третьего листа Высечки колеопткля, первого и втог ?го листьев взятые на уровне расположения КН были проанализированы на СФ-26. Установлено, что: 1) излучение, достигающее АМ, имеет низкий уровень мощности; 2) основу его составляют две области спектра -аелто-зелепая С 535-580 им) и•краснел (680 и > нм); 3) кроющие КН листья различаются степенью пропускания и поглощения света.

Полученные результаты обнадеживали. При культивировании почек с различным числом метамеров, на интенсивном свету и в темноте в течение 40 дней, установили, что ка свету зкепланты формировали не только больше корней (до 6-и) и длиннее (до 10 см), но закладывали чаще 3-4 ЯП В 'темноте корней было меньш на половину. Ш , размеру сни уступай! в 2,5 раза. КН закладывал всего один ли С сокращением числа метамеров в почке снижалось число ответных реакций в обоих вариантах. Однако, на свету увеличивалась приживаемость зкеплантоа, и базапьньй ЛП разрастался в ширину.

СортоЕал принадлежность плениц, îîx .онтогенетические различия оказывали существенное влияние на величину и изменчивость параметров. Высокая стабильность ответных реакций компонентов ночки сорта Саратовская 36 послужила основанием для продолжения дальнейших опытов только с ним. . :

. Изучение фотомсрфогенетических реакций почек, высажнных вертикально и горизонтально на. субстрат, -'проводили в двух режимах освещения - 1.01 и 4,35 Вг/м2. Оказалось, что, независимо от положения, почки сохраняли высокую чувствительность к свету. Однако различия ь, реакции АМ на условия освещения четче проявлялись

•у почек выращиваемых вертикально. Так, . КН имел куполообразную ферму (11/(3=0,55) при освещении в 1,01 Вг/м2, 4-кратное увеличение интенсивности света приводило к удлинению конуса (Ь/сМ,62) за счет изменения размеров клеток АН. Горизонтально высаженные почки, независимо от уровня освещенности, имели удлиненную форму КН, но с большим абсолютным размеров.

Независимо от "емкости" почки, размера клеток АЫ имели большую площадь при мощности света - 4,35 Вт/м? Причем, значительная роль в этом принадлежит кленам корпуса, а судя по данным анализа диаметра их ядер - периферическому слою. Не менее динамичными были клетки туники, которые при пониженном освещении достигали размеров корпуса Аналогичный эффект обнаруживался у почек с меньшим числом метамеров, выращенных при повышенном освещении.

Чувствительность почек пшеницы к спектральному составу света оценивали по морфологическим и анатомическим показателям. Влияние спектра сказывалось на форме листовой пластинки, росте ЛП -"бугорке", в различиях пигментированное™ ЛИ Причем, реакция зкеплантов на качество света тем сложнее и многообразней, чем Сольсе "емкость" почки. С уменьшением числа метамеров в ней сокращалось число показателей, что является доказательством разно-качествешгости в'степени развития их фоторегудяторных систем.

Пространственное положение•почки на субстрате также вносило изменения з развитие ее элементов. Так, у зкеплантов выращиваемых горизонтально, базальные ЛП развивались быстрее. Причина этого не только з изменении направленности освещения, но и в ослаблении апикального доминирования при нарушении полярности.

Максимум зеленения ЛП всегда наблвдали на синем свету (СС), на красном'(КС) и "белом" (БС) - характерна светло-зеленая окраска ЛП, на желто-зеленом (ЖЗС) - буро-зеленая пигментация, оводнение и разрыхление тканей листовой пластинки. .

Весовой анализ 4-метамерных зкеплантов показал, что почки культивируемые .вертикально не различались по массе. Тогда как почки, выращиваемые горизонтально,, на КС.превосходили контрольные (вариант БС) на 35Х.СС - на 162, при освещении.МЗС были равнозначны БС. С удалением из почки метамера различия сглаживались.

На основании сравнения, мощности потоков излучения: КС -22,75; БС - 4,35; ЯЗС - 0,53; СС - 0,38 Вт/М2 и различий в пигментации тканей мы пришли к выводу, что свет' к накоплению массы эксплантами имел косвенное отнопение, поскольку данные световые

условия выступали в роли индуктора фоторегудяторных процессов б биосинтеткческих реакциях гетеротрофного организма, а не фотосинтеза. Убедительным доказательством насего утверждения являются результаты ачалкза"прироста базального Jßl, который снижался в таком порядке: БС> ЕЗС> СС> КС. Удаление метамера заметно сштаа-ло различия, а двух - нивелировало.

Судя по реакции тканей ЛП первого метамера на КЗС мы пришли к в:тводу, что зтот спектр вызывает у зксплантоз ауксикоподобный эффект, СС - гаэтетинолодсбный. Тип реакции зксплантов на КС схож с контролем и был блимэ к варианту ЕЭС, чем СО.

Не звксимо от положения экспяаята на агаризоганном субстрате трансформация форма КН зависела лишь от условий освещения и развития всего комплекса метачеров.

С целью выявления наличия фотозазксимой связи между КН и ЛП, мы провели сравнительный анализ ответных реакций этих элементов почки, на основания результатов которого были установлены их спектры действия (рис. 1.). Б качестве контроля использовали зкспланты, выращенные на ЕС,' спектр излучения которого включал всю область ФАР.

Представленные на рисунке данные позволяют: 1).дифференцированно оценить относительные различия в приросте ЛП и КН; 2) проследить реакцию этих компонентов на спектр, излучения, при нахождении их в почке. В первом случае мы наблюдали характерную реакций КН и одноименных ЛП на качество света, которая соответствует выге рассмотренной. .Во-втором - просматривается четкая последовательность чередования приростов ЛП и КН, в частности на СС и ЕЭС. Так, на СС элементы почки располагались в следующей последовательности: п-З-ЛП (min) > n-2-ЛП (шах) > n-1-ЛП (min) > п-ЛП (rraxj > КН (max). На ЕЭС: пгЗ-ЛП (min) > n-2-ЛП (max) > n-1-ЛП (min) > ггЛП (пах) > КН (mm).

Удаление метамера из почки не влияло на ход и распределение ростовых реакций. Однако Эффективность прироста резко снижалась.

feeмстря на значительное развитие составляющих структур четьь рехметаиерных почек очевидно, что освещенность конуса не снижалась до критического уровня, а поступающий сигнал из развиваю-эяхея листьев не обладал достаточной информацией, позволяющей , системе" перейти на новый виток органогенной деятельности.

ксследозалиь реакции AM почки на качество света показало, что сип по-ра?асму реагировали на спектральный состав излучения.

А

í. Спектр r.cñzTZ'ASí pocroErix резктпЗ стру::тур.чах з.-пкснтса

,-V2x\lr.,A ITïîf)f'"'[J'ï , p

— íiJ,?C Iii p(3C 7QÍÍ

.г-:—. — np'iKrtp«

J ► * l.i - .f > . . ^ /Ц,

— г:спп:;Л лист (i).

д-^шл полег:

r^ ( »íjj ) *--V—'JCTSCpTlvfí np;!'Jnp,V!i» ( ) »

*.:; (3);--¡;тсроЛ п?;:кордкЛ <2):

Так, если клетки туники и корпуса на ОС и КС имели равные площади. то на ЮС корпус превосходил тунику. При снижении емкости почки на метамер AM реагировали: увеличением площади КН во всех вариантах освещения, а на ЖЗС КН к тому же и удлинялся.

Другим важным доказательством реакции клеток AM на спектр освещения явилось изменение диаметра их ядер. Причем, более активно реагировали на КС клетки корпуса, большая часть которых имела дламетр ядра (ст 9,1 до >15,0 мкм). На СС ядра по размеру совпадали с контролем, а на ЖЗС все осевые клетки корпуса имели ядра большого диаметра (не менее 9,1 мкм).

П. 4. Цодоля ззагстахиЕКОй почкк песхсщы, фукгазхншррх^а а уаяо-2И22 оевеВДШЕ!.

Из многочисленных определений вегетативной почки ГКрамер,Козловский, 1983;БЭ2,1986;Серебрякова,1989] наиболее точно на наш взгляд характеризует почку пшеницы, как слоляу?з систему, данное Шаппом [Schupp, 19381: почка - это крупная ростовая единица, объединяющая рост соостзенно КН и молодых фотонов (фитокеров) и являющаяся высс^й степенью формообразования.

изложение в почке КН и первого метамера позволяет рассматривать их как "входных" регуляторных контуров (первичных приемников информации окружающей среды) в последовательной цепи блокоз. Расположенные меяду ними мэтамеры являются "внутренними". Деятельность внутренних метачероа в значительной степени зависит от поступающей информации из "входных" регуляторных контуров; напи-¡чия субстрата и возмущавшего воздействия среды - стрессора

для объяснения функционирования структур почки мы использовали известную модель регуляторного контура С Боннер, 19643.

Елок-схеьа представленного, контура лишь ь самом общем виде wozet описать принцип регуляции преобразовательных процессов. Ьодель га структуркьд компонентов печки пшеницы, способная адекватно отразить регуляцию морфогенеза з ней, должна быть более слоякой. Шмкмо "памяти" с набором различных программ, она должна обладать, способностью выбирать необходимые программы в соответствии с характером среды, т. е. быть самоорганизующейся.

Если принять возникновение "инициального кольца" как начальный акт дифференциации, усиливающейся в последующих метамерах, <. рост как процесс затухаящий по мере дифференциации, то модце. представить. как распределяются они в каждом структурном бловд

точки. С нашей точки зрения, выражение обоих процессов в виде затухающее синусоидных кривых, направленных навстречу друг другу, наглядно отражает распределение их в структурах почки (рис. 2.). Считается [Летунов, 1958], что распределение активности по волновому принципу наиболее оптимально и информационно выгодно.

Рис. 2. Соотношение процессов роста (1) и дифференаировки (2) в верхушечной почке побега ппеницы ЕН - конус нарастания; п-М, (п-1)-М, (п-2)-М, (п-З)-К' - порядковый номер метзмера в последовательном ряд."

В общем виде блок-схему функционирующей вегетативной почки шепида, состоящей из пяти регуляторных контуров, модно представь з следующем виде (рис. 3). - Каждый регуляторкый контур почта общей организации на уровне исполнительных блоков является ¡та-кей предыдущего. различия среди форшруидася мзташров ?.ают>-аются в онтогенетическом их ссстоянии. Отсюда понятие, что чис-о реализуемых органогенных программ в них доляно быть разлило в значительной степени зависит от голодания иетагера в почке, величиваясь по мере их ди$ференш;эц:ш.

Высокая степень развития иззоегруетуры форм5фу£5£Гося листа риводит к тому, что значительная доля поступающего ка него све-а поглащаетея и используется Б еиоскнтентетичесгак реакциях. 1сгь излуче.чпг., отг.гль'грсвсйгсьч Л1, распространяется далее 2

тадаспГСР- преобразователь; М- иоддлятор; Ф- фенотип; П- паидть; С£- скесктель; Л9- логическое устройство; С- стрессор; ДБ - датчик набора; 00- фильтр оптический.

глубь почки, качественно и количественно изменившись. В результате освещенность каждого последующего метамера снижается, и КН оказывается в условиях освещения узкой области ФАР.

В тоже время, возрастание биосинтеза веществ в базальном ме-гамере, их объема, увеличивает поступление метаболитов к вышележащим струтотурам почки. Таким образом, в ее структурных компонентах (п-2, n-1, п - мет&чэрах и КН) происходит усиление проли-деративной активности по зонам роста, фактически оба фактора (сзет и питательные вещества) по мере пркблилсения к КН явно качественно и количественно изменяются, причем, содержание их постоянно талеблется. Следовательно, деятельность меристем проходит :-;а фоке критического уровня факторов близкого к дефициту.

Таким образом, меркстеш КН, настроенные на реализацию единственной программы - оптимизацию роста, соответственно уровню внутреннего н внешнего градиента факторов. Решение ее достигается с помощью тестирования величин обоих факторов, настройка Фушщиональной актизностк идет по лимиту, тем самым увеличивается или сохраняется исходное количество клеток, создавая таким образом механические нагрузки (напряжение з зоне формирования инициального кольца), которые могут зазерситься следующим: а) включением процесса дифференциации, являющегося началом специализации клеток, посредством детерминации пути.их развития; 0) продолтением неорганизованного деления клеток (кадлусогенез).

Клетки, находящиеся в основании КН. с увеличением притока we-тгбогяоз, отсутствия конкуренции за ш со стороны инйциалей АМ л np:i ссвеценкя продолжают организованно делиться. Сб-

p;;.sciv:;.Hi:o "инициального кольца". являг^егося начальным звеном з псследсзатедько сменяющихся программ детерминированного сусапнкалькых кзрпстем, папрстлз про.че^одя? прн.дефици-пп:ат5льяга гесестз :i otkvsws се::еще;г:л. с отсго ;:смента по

зосоЗ-оглпбтся лет образовала очередного п-кетанэра. Уаох, предлагаемая модель позволяет улс-т.ггь прздстазлояия о ;сг>.:о::аюм способе интеграции отдельна нзвастккх актов развит/л í способах его регуляции светом з вегетативной почке ппенипн.

В Ы В О Л Ы

.. Сходство сортов ппеницы по форме КН вегетативной почки и очевидное количественное раьенство ЛП в ней не является признаками однозначности морфофизиологического состояния Ш побега.

Вэобходт» уч^-.^зть пламохроан;..-1 с.сд.-1 •. ; •.. .... сорта по этому показателю при введен:-^ в ху.?..-••,•.'•./ -Г: ' '-^-о, 2. Критерием сзпзго-гагшюгз различия кагду 1иаы-

слуггтгь степень р&ьвикж проЕэлщгй скстсхь а усгэшш, сОеспечизаядая прал-'^а-Змосаг- ^ол!'*»-

ванньк почек таять:, являетса - уьеличеь'йе урэвк? /шчАт:^ . •азота в ПС: до зц^чеша близких дая иатЕКГНыг рташ^З!'. .

причем, азот д-лпан быль преде мал»«-. ка-: ¿ц-дсин^.!, .•'.:.•. ¿и-ЮаКйнзй формам., с преобладание« дол:: першего.

4. С введзняем ткрззана б соотаь ПО удается: поз^оагь гл'.Ехиьг.?-мсть зкеплантоь, пэддергзть норл:алэНь:-1 ход ссстоачт: процессов г. вегетативна: яэч:«^: пгаяыег, дусс^ч езгаше одалн-лг:. развитие структурагз: комлэдентов ярч-с«, ап^лминро^а:«- заакз-лонке раневой позерхаост;;, сохрашг.'ь 1СН л аэн£Х.лос?1. его меристем.

5. ФАР, достигаюпкя ¿М почта, ел»*? ксс^-лкао .с-.ц^ освещенности, в зависимости от "еукоегк паегг. м к-л-дстагдз™ на двум.: облаатяый спектра - дазьяиа красным :;

<2. Прикрывающие КЕ езормированнне "листья и ¿21 исчлв ссстгасгюг

ансамбль оптические фильтров. 7. Поддержание кужмэввдвой ели удлиненной формы конуса оо^щес-;-вляется за счет деятельности иаициалей корпуса, регулируемся условиями освевзкия почта;. Бри это;.:, периферический кор-

■ пуза выполняет функцию триггера, способного, г оавпслА-исти о*? слояившихся условий, компенсировать деятель г.ое'.п. тутшкл ь.та осевых клето?: корпуса, теы са!Ш обеспечивая ослраакосгь

иы и организации конуса. 5. Езрегод Ш побега в еосгсян1;е орг^ге&з&и ¿»яч&ггезт.а ЕусгЕляегся повыгзнкэа ¿"рсг:-:л осезд^ктсстп ркспл^г^:, .. .ь-ез хгр~'зд5гг к Сг.скгдсги^зсгагс розе.чет!.? палок ь ростов;-.;:, еонгх КЕ Р. Су2К2Н05шр02аа:^ ¡¿1 пХьга пс;, едс-ь.

кгак» клею.: псуиусс: :: ссстгд.2 :и>ху-

■ - пзрзс:? к Тл^ьйже.^ кг&оть-кезн, згр::угг::г зоЗггг, ¿1 с^з::;:^ ¿¿зэдиера,

усллслпе прсцссссд г печлз, I «гл.« шиэнеяке кд-

тепсивпсст::» спектр?. - есть трс^е звено е цэс:

;■/*:" сгрл-стугюк с~г_:т:."загя: л

'-лгст.т:. гг-спс.'::.;aurore нэ сссс:;:: к

гз с:з.т.г;

12. рогггг л::Йэрз:гег?оы^: в .

ГО SUJETS!?.

garçon n.iScr. сзуЗ^-кссачси: та д;:ссоогглг2Г.

1. IL я. Сгс5экз©с?п куатазирогажа in vitro епэкооз побега ееле1:щ:;;нно-гекзС!йчеек:к форм псэшзды// йззко-

коследсБгзгя ргзтеЕй и л^фэергашгзк-ов. Сарагог: СГ:\ i5£2.- С. 12-13.

2. Cr^sx Б. . Гл:озцзз Б. Г., Герго52.:оза О. П. Акагсмо-корфо-логэтескнэ ссзг&кнссгп- кахззгсооЗргзоватеяыюго прсцесга у апексов пшащн з культуре in vitro// йгзкогогяческие оокогн продуктивности Q.-Z.- растешй па Юго-Взсто;». - Саратов: СИ!, 1983.-С. 48т 50. ' ' - "

3. Сш-зак В. А., Степанов С. А., Еыховцез Б. Г., Згорэвз С. IL Оценка селекшсокно-геЕзтпческпг форм ппшюы по анатою-трфоло-гкческим пр.чзнг:^! состояния органов в процессе вегетации// Тез. v республиканской конференции. ®гакологическ::е основы повызйнкя продуктивостя и устойчивости зерновых культур. - Целзшоград, 1984,- С. 66. .

4. Сзтивак 3. А. Влияние азотных компонентов среды на [.гарфеге-нез апексов псеницы в культуре m vitro// Вопросы биологии растений и животных Поволжья. - Саратов:' СГУ.1984. - С. 38-48. -

5. Спивак R А., Выховцев R Г., Безруков А. Ii Среда для культивирования апексов. побега проростков пшеницы-in" vitro. A.c. 1208612 СССР //Открытия. Изобретения. - 1985. - N 10.

6. Спивак RA., Кууагоз В.А. Реакция изолированных вегетатив-' ных верхушечных почек побега Tritlcum aestlvun L , ¡сультетируе-кых in vitro, на качество излучения// Физиология сельскохозяйственных растений. - Саратов: СХИ, 1987.- С. 49-57.

7. Спивак R А., Быховцев Б. Г., Кирюхин С. Р. Влияние света на

органогенез верхушечной зародышевой почки побега псеницы в культуре in vitro/'/ Физиология сельскохозяйственных растений. - Саратов: СХЙ, 1987,- С. 57-61.

S. Спкаак В. А., Еигаев L К. Влияние тирозина и n-KywapoEoi; касхотн на рост главной почки пжшшы in vitro// Тез. науч. кснф. Изучение, охрана и рациональное использование природных ресурсов. - Уфа, 1989. - ч. 2. - С. 134.

9. Саивак а А. > Евдокимова О. А. Регулирование поздневегета-тивного органогенеза верхушки побега Triticuai asstivra L. , з культуре in vitro// Вопросы биохимии и физиология растскгй к микроорганизмов.- Саратов: СГУ, 1SQ1.- С. 47-51.

10. Спивак В. А.. Быховцев Б. Г. Реакция изолированной верхушечной почки пшеницы культивируекмой in vitro па различные условия освещения// II 1-й съезд Всероссийского общества физиологов растений (24-29 июня 1993 г., Санкт-Петербург). Тезисы докладов. - С.-Петербург: С. -ИГУ, 1993. - С. 206.

11. Спивак В. А. Реакция образовательных тканей конуса нарастания побега пшеницы на световые воздействия в культуре in vitro. - 7 с. (в печати).

12. Спивак Е А. Особенности организации модели вегетативной пачки пшеницы.- 9 о. (в печати).

В заключении.автор искренне благодарен всем кто прямо или косвенно оказывал ему помоешь и поддержу при выполнении работы, особо благодарен своим руководителям, и в частности доценту В. Г. ¡Виховцзву, являющегося моим первым учителем, наставником, подав-шш касгь изучения данной проблемы, а таетэ предоставившим воз, мощность и место для проведения исследований. Я благодарю ьюкя • близок, веявших на себя на вреьн оформления рукописи бреия со-мзйных забот.

Подписано; .к печати 1^02.1994 г. - Заказа ii 3£ Усл.печ.л. 10 - Тиран 100 .экз.

Отпечатало на ротапринте Саратовского университета ' 4I0G7T Саратов. Астраханская, 83.