Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональные изменения в очаге раневого воспаления при введении Анавидина (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные изменения в очаге раневого воспаления при введении Анавидина (экспериментальное исследование)"

На правах рукописи

СКЛЯНОВА Юлия Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОЧАГЕ РАНЕВОГО ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ВВЕДЕНИИ АНАВИДИНА (экспериментальное исследование)

03 00 25 - гистология, цитология, клеточная биология 14 00 21 - стоматология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ои^и^---

Иркутск - 2007

003058906

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Изатулин Владимир Григорьевич

Ушаков Рафаэль Васильевич

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор

Лебединский Владислав Юрьевич

доктор медицинских наук, доцент

Дыдыкин Виталий Федорович

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 22 мая 2007 г в 9 часов на заседании диссертационного Совета Д 001 54 01 при ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения РАМН» по адресу 664003, г Иркутск, ул Тимирязева, 16

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения РАМН»

Автореферат разослан 20 апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Шолохов Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Морфофункциональные особенности течения раневого процесса изучены подробно рядом авторов (Струков А И , 1975, Чернух А М , 1979, Серов В В , 1981, 1995, ЦаревВН, 1991-1996, Васильева Л С , 1995, АлешкинИ Г, 1996, Ушаков РВ , 1998-2005, Изатулин В Г, 2000, Робустова ТГ, 2006, Johansson А , 2000, Mombelh А , 2002, Slots J, 2002), но до конца остаются не изучены и актуальны вопросы коррекции воспалительного процесса с помощью антисептиков Решение задачи адекватного лечения одонтогенной инфекции заключается в проведении комплекса лечебных мероприятий, в котором важное место занимает местная противомикробная терапия Наиболее часто встречающиеся инфекционно-воспалительные процессы зубочелюстной системы связаны с инфицированием микробной флорой (кариес и его осложнения, пародонтит и пр ) Выбор препаратов для местного лечения гнойно-воспалительных процессов затруднен, так как в возникновении и развитии большинства форм одонтогенной инфекции участвуют разнообразные микробные ассоциации

Отличительной особенностью воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и местных послеоперационных инфекционно-воспалительных осложнений является то, что большинство из них вызываются эндогенной микрофлорой, представленной бактериями, грибами и вирусами При этом в ассоциациях часто превалируют неспорообразующие анаэробные виды Наличие микрофлоры в очаге воспаления может менять течение воспалительного процесса в зависимости от вирулентности микробного агента, что характеризует выраженность воспалительной реакции

С внедрением в медицинскую практику антибиотиков внимание к разработке новых эффективных антисептиков ослабло, а сфера их применения в местном лечении гнойно-воспалительных заболеваний необоснованно сузилась Вместе с тем, антисептики нашли самое широкое распространение в стоматологии Они используются при проведении лечения всех воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области (Ушаков Р В , 2004)

Последние годы отмечены появлением новых разнообразных видов хими-отерапевтических средств для местного применения в инфицированных ранах полости рта и челюстно-лицевой области К ним в первую очередь следует отнести производные гуанидина (Царев В Н , 2004)

Из группы гуанидинов наибольшее распространение в стоматологии как антисептики получили хлоргексидина биглюконат и лактацид (полисепт)

В Иркутском НИИ органической химии имени М Г Воронкова (РАН) было синтезировано соединение, производное полигексаметиленгуанидина, которое получило название Анавидин По предварительным данным препарат обладает антимикробным действием в отношении как грамположительных, так и гра-мотрицательных микроорганизмов (Царев В Н , 2004) Однако его влияние на течение воспаления и антимикробное действие в отношении возбудителей гной-

но-воспалительных заболеваний и осложнений при операциях в челюстно-ли-цевой области изучено недостаточно Нет данных по его влиянию на морфо-функциональные изменения тканевых структур при воспалении, на тканевые структуры стенок полости рта, что не позволяет его использовать не только как дезинфектант, но и препарат для местного антимикробного воздействия непосредственно в ране Без изучения этих вопросов в эксперименте невозможно грамотно и эффективно использовать его в клинической практике

Все выше изложенное и определило цель нашего исследования

Изучить закономерности морфофунщиональных изменений в тканевых структурах стенки ротовой полости при экспериментальном воспалении и обосновать эффективность применения Анавидина как антисептика.

Задачи:

1. Изучить общие морфологические закономерности и локальные особенности течения воспалительного процесса в тканях щеки в эксперименте

2. Выявить влияние Анавидина на морфофункциональные особенности течения воспалительного процесса в стенке ротовой полости и подкожной соединительной ткани

3. В эксперименте определить оптимальную концентрацию препарата Анавидин, обладающую минимальным раздражающим эффектом и максимальным лечебным эффектом на течение воспалительной реакции

4. Провести сравнительное изучение влияния Анавидина на микрофлору полости рта у человека, в том числе на возможных основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний полости рта, челюстно-лицевой области m vitro

5. На основании данных клинико-экспериментального изучения обосновать методику применения препарата Анавидин в стоматологии как антисептика

Научная новизна работы

Впервые проведено изучение морфофункциональных изменений при использовании препарата Анавидин, которые свидетельствуют, что сохраняются общебиологические закономерности и не нарушается фазность течения воспалительного процесса В эксперименте изучено влияние антисептического препарата, производного полигексаметиленгуанидина - Анавидин, на ткани щеки и подкожной соединительной ткани (слизистой оболочки, мышц, кожи) При морфологическом анализе установлено, что ответная реакция и характер течения острого асептического воспаления в тканях щеки и подкожной соединительной ткани на введение различных характеристик Анавидина находится в прямой зависимости от концентрации препарата

Установлено отсутствие побочного воздействия препарата при течении острого асептического воспаления в тканях щеки и подкожной соединительной ткани, что свидетельствует о низкой токсичности последнего и возможности его использования в хирургической стоматологической практике

При сравнительном изучении антибактериальной активности Анавидина, выявлена минимальная бактерицидная концентрация препарата в отношении

возможных возбудителей гнойно-воспалительных процессов полости рта и инфекционных послеоперационных осложнений В результате исследования выявлено, что наименьшим раздражающим и наибольшим лечебным эффектом обладает 0,25% раствор Анавидина

На основании результатов сравнительного анализа выявлена оптимальная концентрация антисептика, которая может быть рекомендована для включения в разрешительные документы и последующего использования препарата в местном антимикробном лечении инфекционно-воспалительных заболеваний и послеоперационных осложнений в полости рта и челюстно-лицевой области

Практическая значимость работы заключается в том, что выявленные параметры токсикометрии Анавидина, на основании гистоморфологического заключения, определили оптимальную концентрацию антисептика для использования его при лечении патологических процессов челюстно-лицевой области (слизистой оболочки полости рта, мышц, кожи), сопровождающихся выраженной воспалительной реакцией

Исследования антимикробной активности препарата показали высокую эффективность Анавидина в отношении антибиотикорезистентных штаммов при гнойно-воспалительных процессах и послеоперационных осложнений полости рта и челюстно-лицевой области, что обосновывает дальнейшие совершенствование методов применения этой группы фармокологических препаратов

Экспериментальные данные позволяют рекомендовать Анавидин для более широкого клинического применения в стоматологической практике

Апробация материала

Основные положения диссертации опубликованы в научных статьях центральной и местной печати, представлены на XIV Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы стоматологии» (Москва, 2004), на первой Российско-Монгольской научной конференции (Иркутск, 2005), на XII Российско-Японском медицинском симпозиуме (Красноярск, 2005), II Монгольско-Российской научной конференции (Улан-Батор, 2006), на конференциях ассоциации врачей стоматологов (Иркутск, 2004, 2006)

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анавидин не нарушает общебиологические закономерности течения воспаления, а сокращает длительность фаз и выраженность воспалительной реакции

2. 0,25% концентрация Анавидина является наиболее оптимальной для клинического использования вследствие того, что обладает наименьшим раздражающим действием и выраженным противовоспалительным эффектом

3. Анавидин обладает высоким бактерицидным и фунгицидным действием, что позволяет использовать его как антисептик в отношении стоматогенной микрофлоры, выделенной из условно-чистой и инфицированной послеоперационных ран полости рта

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, двух глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы Список использованной литературы включает 172 источника, из них 95 отечественных и 77 иностранных авторов Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 41 рисунком

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Экспериментальная часть исследования

Методы исследования

Гистологический Для оценки влияния инъекций Анавидина изучали реакции тканей щеки и подкожной соединительной ткани у 480 животных в месте его введения Для изучения противовоспалительного действия Анавидина в эксперименте использовали модель раневого воспаления, которое вызывали инъекционной иглой диаметром 2 мм, погружая ее на глубину 4 мм с одновременным введением препарата (физиологический раствор или Анавидин) Для объективизации влияния препарата на течение воспаления были выбраны две области нанесения травмы — ткани щеки и подкожной соединительной ткани в области холки животных Такая модель одновременно с нанесением травмы позволяет вводить испытываемый препарат в раневой канал Для апробации вводили 0,05, 0,12,0,25 и 0,5% растворы Анавидина Динамическое наблюдение за развитием раневого воспаления (клеточными и тканевыми реакциями) осуществляли через 12 часов, на 3, 5, 7 и 15-е сутки с момента введения препарата (табл 1)

Таблица 1

Распределение животных по сериям в эксперименте_

Параметры Серии

1 2 3 4 5

Концентрации вводимого раствора (Анавидин, физ р-р), % 0,85 0,5 0,25 0,12 0,05

Объем вводимого раствора (мл) 0,5 и 1,0 0,5 и 1,0 0,5 и 1,0 0,5 и 1,0 0,5 и 1,0

Место введения Ткани щеки и подкожная соединительная ткань

Сроки наблюдения (часы, сутки) 12 часов, 3, 5 , 7 и 15 сутки

Количество животных 80 100 100 100 100

Сроки наблюдения животных соответствуют максимальному развитию лейкоцитарной, макрофагальной, фибробластической фазам воспалительной реакции в зоне инъекции и введения препарата

Для изучения морфофункционального состояния тканей и оценки динамики воспалительной реакции в месте инъекции полученные срезы окрашивали гемотоксилин-эозином и азур II эозином Оценку реакции тканевых и клеточных элементов оценивали по

■ диаметру сосудов,

■ относительному объему сосудистого русла,

ш степени гидратации тканей в зоне воспаления (относительный объем жидкости),

■ площади инфильтрата (в мкм2),

■ содержанию в инфильтрате нейтрофилов (в %),

■ содержанию мононуклеаров и макрофагов (в %),

■ относительному объему фибробластов (в %),

■ относительному объему детрита (в %)

Морфометрический Для оценки воспалительного процесса в динамике использовался метод точечного счета (Гуцол А А , Кондратьев Б Ю , 1988, Ав-тандиловГГ с соавт, 1980), предложенный А А Глаголевым (1931) если на плоскость наблюдения, содержащую несколько объектов, наложить систему точек, то отношение количества точек, попавших на объекты, к общему числу точек равно удельной площади объектов Основная формула

p/P = S/A или Рр = Sa, где Р - общее количество точек, р — количество точек, попавших на объекты, Sa - удельная площадь, А - общая площадь, S — площадь объекта При увеличении х400 с помощью окулярной морфометрической сетки учитывали не менее 1000 точек, поГГ Автандилову (1984,1990) использовали тест-сетку с 289 точками, наблюдение проводили в 10-15 полях зрения Относительные объемы исследуемых тканевых компонентов выражали в % соответственно числу точек измерительной сетки

Бактериологический Посев материала с целью получения изолированных колоний осуществляли секторальным методом на чашки Петри с 5% сердечно-мозговым гемин-агаром, приготовленным на основе Brain-Heart Agar компании Difco (USA)

Культивирование анаэробных культур бактерий осуществляли в анаэрос-тате с бескислородной газовой смесью, состоящей го 80 % азота, 10 % водорода, 10 % углекислого газа, при температуре 37 °С от 48 часов до 7 дней

Проводили подсчет количества и идентификацию выросших колоний с использованием бинокулярной лупы и выполняли пересчет на один тампон Количество бактерий выражали в колониеобразующих единицах (КОЕ)

Чистую культуру получали путем посева исследуемого материла из изолированной колонии, выросшей на чашке Петри, в пробирку с сердечно-мозго-

вым бульоном, которую затем помещали в анаэростат Чистые культуры получали через 48 часов культивирования в термостате при температуре 37 °С

Для определения оптимальной концентрации мы выявляли диапазон концентраций, включая минимальную подавляющую концентрацию (МПК) для всех тестируемых препаратов Чувствительность к антибактериальным препаратам различных классов культур анаэробных и микроаэрофильных бактерий с определением минимальной подавляющей концентрации для 90 % штаммов (МПК90), выделенных из ран, осуществляли с помощью кассетного микрометода (Ушаков Р В , Царев В Н , 1991), представляющего собой модификацию диффузионного способа определения чувствительности в плотной агаровой среде (5% кровяной гемин-агар) Для проведения исследования были использованы близкие по своей активности антисептические препараты, производимые в Российской Федерации полисепт, хлоргексидин, бензолкония хлорид, Анавидин, хлоргексидин Они широко используются в стоматологической практике, в том числе и в хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии

Для проведения исследования готовили разведения исследуемых препаратов от 0,5 до 200 мг/л в физиологическом растворе, которые затем помещали в лунки триацетатных кассет с объемом 0,2 мл каждая Далее раствор препарата высушивали и непосредственно перед выполнением эксперимента заполняли таким же объемом расплавленного гемин-агара с добавлением 5 % крови Через 40-60 мин после застывания среды осуществляли посев исследуемых культур бактерий Для обеспечения стерильности и более продолжительного хранения кассеты со средой предварительно помещали в стерильные чашки Петри (срок хранения до 1 мес при температуре 4 °С)

При оценке чувствительности культур к антибактериальным препаратам готовили взвесь бактерий в физиологическом растворе (концентрация 1 млн кл /мл по оптическому стандарту мутности), которую вносили на поверхность питательной среды в лунках кассеты в объеме 10 мкл

Оценку результатов проводили по определению отсутствия роста микрофлоры в кассетах, фиксировали минимальную подавляющую концентрацию Культивирование проводили в аэробных при 37 °С, 24 часа и анаэробных условиях в микроанаэростате, заполненном газовой смесью 10 % водорода, 70 % азота, 20 % углекислого газа при температуре 37 °С в течение 5-7 дней

В качестве тест-культур использовали музейные штаммы бактерий, Staphylococcus aureus Р 209, Escherichia coli АТТС 25922, Bacillus subtilis ATTC 6633, Pseudomonas aeruginosae ATTC 27853, дрожжеподобных грибов Candida albicans NCTC 686

Кроме этого проведено тестирование клинических штаммов микроорганизмов, выделенных из полости рта при условно-чистых и инфицированных ранах полости рта

факультативно-анаэробные виды: 1 Streptococcus salivarius,

2 Streptococcus sanguis,

3 Bacillus cereus

грибы:

4 Candida albicans,

облигатно-аиаэробпые и микроаэрофилыше виды

5 Prevotella oralis,

6 Prevotella intermedia,

I Porphyromonas gmgivalis,

8 Actmomyces Israelit,

9 Streptococcus intermedius,

10 Peptostreptococcus micros,

II Fusobacterium nucleatum

Всего исследовали 124 штамма представителей названных выше видов, полученных в клинических условиях Такое разнообразие микроорганизмов использовано нами в связи с тем, что они имеют различную устойчивость к факторам внешней среды и антибактериальным веществам, т е обладают различной степенью защиты

Клиническая характеристика больных

Все больные в соответствии с задачами проводимого исследования были поделены на две группы

Первую группу составили 12 человек, у которых провели изучение состава микрофлоры условно-чистых ран раны после операций по поводу дентальной имплантации (7 человек), углубления преддверья полости рта (5 человек)

Вторую группу составили 20 человек, у которых провели изучение состава микрофлоры инфицированных ран цистэктомии (7 человек), резекция верхушки корня (8 человек), лоскутной операции (5 человек)

В результате обследования у 32 пациентов выделено 124 штамма микроорганизмов (от 4 до 8 видов, в среднем 5,75 ± 0,7 %)

Статистический анализ результатов исследования проводили стандартными параметрическими методами с использованием t-критерия Сгьюдента (Ллойд Э , Ледерман У, 1989) Данные считались достоверно отличающимися при Р < 0,05 Статистическая обработка результатов произведена с помощью пакета программ Statistica 5 5 и Statistica 6 0 for Windows Все результаты исследований представлены в виде рисунков и таблиц в тексте диссертации

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование показало, что на месте инъекций физиологического раствора в ткани щеки и подкожной соединительной ткани развивается асептическое воспаление Через 12 часов формируется инфильтрат, площадь которого зависит от вводимой дозы раствора и места инъекций (табл 2, 3)

Таблица 2

Показатели морфофункционального состояния тканей щеки при введении физиологического раствора

Показатели Интактные ткани Сроки наблюдения (часы, сутки) 0,5 мл 1,0 мл

Инфильтрат, мкм2 - 12 6400± 115 6670±124

3 3129±112* 3230±117*

5 - -

Гидратация ткани, % 21,4 ±0,6 12 40,4 ± 0,3* 39,8 ±0,8

3 34,2 ± 0,5* 36,7 ±0,7

5 33,4 ± 0,3 34,6 ± 0,4

7 30,3 ±0,7 29,0 ±0,3

15 22,5 ± 0,25* 22,3 ± 0,06*

Детрит - 12 21 2 + 0,9 23,8 ±04

3 14,4 + 0,1* 10,8 ±0,6*

5 7,2 ± 0,45* 7,1 ± 0,28*

7 0,8 ± 0,05* 0,8 ± 0,02*

Нейтрофилы 4,7 ±0,5 12 36,6 ± 0,2* 40,9 ± 0,6*

3 15,6 ±0,7* 10,7 ±0,4*

5 15,5 ±0,4 14,7 ± 0,35

7 7,9 ±0,3* 8,4 ± 0,3*

15 7,0 ±0,25 6,9 ± 0,28

Мононуклеары и макрофаги 9,6 ±0,8 12 34,5 ± 0,6* 29,9 ± 0,6*

3 62,1 ± 0,7* 67,5 ± 0,5*

5 40,7 ± 0,45 39,5 ±0,6

7 15,4 ±0,8* 16,0 ± 0,5*

15 13,1 ±0,37 13,4 ±0,4

Фибробласты 16,4 ± 1,4 12 1,9 ±0,3* 2,0 ± 0,3*

3 7,6 ± 0,4* 6,2 ± 0,7*

5 6,8 ±0,4 7,5 ± 0,5

7 25,8 ±0,9* 25,5 ± 0,4*

15 15,4 + 0,45* 15,1 ± 0,6*

Примечание: * - достоверность по сравнению с предыдущим сроком (р < 0,05)

В месте инъекции развивается выраженная сосудистая реакция, которая проявляется в отеке тканей Степень гидратации в тканях щеки в этот срок увеличивается в 1,8-2,3 раза, в подкожной соединительной ткани в 2 раза В инфильтрате преобладают нейтрофильные лейкоциты и составляют в тканях щеки от 36,6 ± 0,2 до 40,9 ± 0,6 % и от 46,8 ± 0,8 до 44,3 ± 0,4 % в подкожной соединительной ткани Содержание мононуклеаров и макрофагов в этот период не велико В тканях щеки и подкожной соединительной ткани в среднем они составляют в месте инъекции 34,5 ± 0,6 % соответственно Относительный объем детрита в тканях щеки составляет 21,2 ± 0,9 %, а в подкожной соединительной ткани 16,4 ± 0,6 %

Фибробластов в зоне локального воспаления немного и в среднем они составляют в тканях щеки 1,95 ± 0,3 и 2,75 ± 0,3 % в подкожной соединительной ткани (табл 2, 3)

К 3 суткам наблюдения воспалительная реакция в зоне инъекции физиологического раствора сохраняется, хотя выраженность ее значительно сниже-

Таблица 3

Показатели морфофупкционального состояния подкожной соединительной ткани при введении физиологического раствора

Показатели Интактные ткани Сроки наблюдения (часы, сутки) 0,5 мл 1,0 мл

Инфильтрат, мкм2 - 12 4420 + 120 4060 ± 80

3 2940+ 105* 2950 ± 60*

5 - -

Гидратация ткани, % 23,4 + 1,7 12 50,4 ± 1,2* 51,9 ± 1,1*

3 26,2 ± 0,9* 25,5 + 0,4*

5 34,4 + 0,28* 33,1 ±0,5*

7 23,8 ± 0,2* 24,1 ± 0,4*

15 27,7 ± 0,45 28,1 ±0,3

Детрит - 12 16,4 ±0,6 15,9 ±0,4

3 9,4 ± 0,8* 8,4 ± 0,2*

5 8,1 ± 0,3 7,4 + 0,42

7 0,8 ± 0,04* 0,9 ± 0,02*

Нейтрофилы 4,4 ±0,5 12 46,8 ± 0,8* 44,3 ± 1,1*

3 32,9 ± 0,5* 26,7 ± 1,3*

5 23,0 ±0,33* 22,6 ± 0,4*

7 9,5 ± 0,6* 6,3 ± 0,4*

15 5,2 ±0,4 5,9 ± 0,55

Мононуклеары и макрофаги 10,3 + 0,7 12 34,6 ± 0,2* 28,8 ± 0,6*

3 47,8 ± 0,6* 54,3 ±0,4*

5 36,5 ± 0,45* 38,1 ± 0,6*

7 11,5 + 0,7* 12,7 ±0,6*

15 11,4 + 0,5 12,2 ±0,4

Фибробласты 20,9 ± 1,2 12 2,4 ± 0,3* 3,1 ± 0,4*

3 8,8 ±0,7* 10,7 ±0,6*

5 12,0 ±0,36 12,2 ±0,3

7 23,1 ± 0,4* 22,4 ± 0,6*

15 24,1 ±0,4 24,0 ± 0,5

Примечание * - достоверность по сравнению с предыдущим сроком (р < 0,05)

на Она приобретает локальный характер Площади инфильтратов уменьшаются на 23 % Снижается гидратация в тканях щеки до 34,2 ±0,5 %, а в подкожной соединительной ткани до 26,2 ± 0,9 % Изменяется клеточный состав инфильтрата Содержание нейтрофилов в тканях щеки составляет в среднем 13,1 ± 0,5 %, тогда как мононуклеаров и макрофагов достигает 64,8 ± 3,3 % Количество детрита за истекшие двое суток уменьшается в среднем на 44 % (р < 0,05) Содержание фибробластов в зоне инъекции увеличивается в 3-4 раза (р < 0,05) В подкожной соединительной ткани аналогичная картина

К пятым суткам наблюдения в тканях щеки и подкожной соединительной ткани наблюдается снижение гидратации тканей Содержание клеточных элементов в очаге воспаления изменяется согласно общепринятым закономерностям воспалительного процесса

К исходу 7-х суток инфильтрат на месте инъекции отсутствует Уровень гидратации тканей практически не отличается от показателей интактных животных Уровень детрита снижается в области инъекции в 20-25 раз по сравне-

нию с предыдущим сроком Содержание клеточных элементов (нейтрофилов, мононуклеаров и макрофагов, фибробластов) не существенно отличается от таковых показателей у интактных животных

К 15-м суткам содержание всех клеточных элементов в очаге воспаления приближено к интактным тканям

Вышеизложенное позволяет заключить, что на месте инъекции физиологического раствора развивается асептическое воспаление, которое обусловлено механической травмой инъекции Так как механическая травма кратковременная и незначительная, то асептическое воспаление в месте инъекций завершается в основном к 7-м суткам Выявленные различия в проявлении воспалительной реакции тканей щеки и подкожной соединительной ткани обусловлены локальными особенностями и носят несущественный характер

Важным этапом доклинического исследования препаратов для местного лечения ран является изучение их влияния на ткани Даже при использовании препаратов для промывания ран, возможно их сохранение в сформированных карманах, затеках, что способно вызывать дополнительное раздражающее действие на ткани

Результаты проведенного гистологического исследования показали, что введение Анавидина в ткани щеки и подкожную соединительную ткань, оказывает влияние на течение асептического воспаления Сформированные к окончанию 12 часов в месте введения лейкоцитарные инфильтраты в зависимости от концентрации препарата имеют различные площади Наибольших размеров инфильтрат наблюдается при введении 0,12 % Анавидина в ткани щеки (6200 ± 284 мкм2), а в подкожной соединительной ткани при введении 0,05 % (4200 ± 84 мкм2) Наименьший лейкоцитарный инфильтрат формировался на месте введения 0,25 % раствора Анавидина (3 800 ± 217 мкм2 и 2500 ± 151 мкм2 соответственно)

К третьим суткам наблюдения площади инфильтратов значительно снижаются в среднем на 48 % Наилучшие показатели при этом отмечены при введении 0,25 и 0,5 % раствора Анавидина (рис 1)

К 5 суткам инфильтрат отсутствовал во всех случаях Немаловажное значение для оценки раздражающего действия препарата на ткани является выраженность отека тканей Так наибольшая сосудистая реакция проявляется на введение 0,05 и 0,12 % Анавидина Уровень гидратации тканей при этом составляет 46,4 ± 1,32 и 44,1 ± 1,4 %, тогда как у интактных животных она равна 23,4 ± 1,7 и 21,4 ± 0,6 % соответственно Наилучшая динамика снижения отека тканей отмечается при введении 0,25 и 0,5 % раствора Анавидина С 12 часов по 7 сутки уровень гидратации тканей снижается почти до нормы иравен23,9±0,3 % (у интактных животных - 23,4 ±1,7 %) При других же концентрациях (0,05, 0,12 %) уровень гидратации тканей в этот период остается еще значительный и составляет 18-25 % (рис 2)

В сформированном к 12 часам лейкоцитарном инфильтрате во всех случаях преобладают нейтрофильные лейкоциты Их удельный вес в этот период в

7000 6000 5000 1 4000 3 3000 2 ООО 1000 О

физ-й р-р 0,05% 12 часов и 3 сутки

V_;

ткани щеки

0,12% 0,25% 0.50%

а 12 часов □ 3 сутки

V_)

подкожная соединительная ткань

Рис. 1. Лейкоцитарный инфильтрат а месте введения Анавидина в тканях щеки в первые 12 часов, 3 сутки и подкожной соединительной ткани в первые 12 часов, 3 сутки.

50

физ-й р-р 0,05% 0,12% 0,25% 0.50%

и интактные ткани в 12 часов и 3 сутки 13 5 сутки а 7 сутки □ 15 сутки

Рис. 2. Выраженность гидратации тканей щеки в месте введения Анавидина.

тканях щеки составляет от 19 до 53 % клеточного состава. Наименьшее их содержание отмечается при введении 0,25 и 0,5 % Анавидина (37,8 ± 0,6 % и 38,9 ± 1,35%), а наибольшее при 0,05 и 0,12% растворе препарата (51,12 ± 0,62 % и 55,04 ± 8,35 %) (рис. 3).

физ-Й р-р 0,05% 0,12% 0,25% 0,50%

I интактные ткани 0 12 часов а 3 сутки О 5 сутки и 7 сутки а 15 сутки

Рис. 3. Содержание непрофильных лейкоцитов е тканях щеки при введении Анзвидина

60

физ-й р-р

0.05%

0,12%

0,25%

0,50%

L интактные ткани Q 12 часов и 3 сутш ш 5 сутки са 7 сутш 0 15 сутки

Рис. 4. Содержание нейтрофильных лейкоцитов а подкожной соединительной ткани при введении Анавидина.

К исходу третьих суток ситуация диаметрально изменяется. Количество нейтрофилов согласно общим закономерностям течения воспаления уменьшается (Васильцов М.К., 1974; Черных A.M., 1979; Изатулин В.Г.,2000), Их удельный вес в лейкоцитарном инфильтрате составляет в зависимости от концентра-14

|

ции вводимого препарата от 7 до 35 % от клеточного состава. Причем наименьшее содержание их отмечается при введении 0,25 % Анавшшна - 6,9 ± 0,5 %. А к7и 15 суткам их содержание при этой концентрации Анавидина приближается к показателю интактных тканей (4,7 ± 0,5 %) и составляет 4,8 ± 0,6 % (рис. 4).

Аналогичные результаты выявлены при введении Анавидина в подкожную соединительную ткань.

Наряду с нейтрофильными лейкоцитами из сосудистого русла эмигрируют и мононуклеары. Исследование количества мононуклеаров и макрофагов в зоне локального воспаления в местах введения различных концентраций Анавидина показало, что их удельный вес в первые 12 часов эксперимента в тканях щеки составляет от 20 до 47 % от клеточного состава. Минимальное количество мононуклеаров и макрофагов в тканях щеки отмечается при введении 0,05 и 0,12 % Анавидина (28,8 ± 0,72 % и 30,5 ± 0,7 % соответственно) (рис. 5).

фиэ-й р-р 0.05% 0,12% 0.25% 0,50%

и интактные ткани 0 12 часов а 3 сутки О 5 сутки в 7 сутки О 15 сутки

Рис. 5, Содержание мононуклеаров и макрофагов 8 лейкоцитарном инфильтрате тканей щеки при введении Анавидина.

Содержание мононуклеаров и макрофагов на протяжении последующих сроков существенно изменяется. К исходу третьих суток удельный вес мононуклеаров и макрофагов в инфильтрате увеличивается, они составляют от 35 до 77 % клеточного состава. Наименьшее содержание их отмечается при введении 0,05% раствора Анавидина (62,1 ± 1,1 %), Наибольшее содержание мононуклеаров и макрофагов выявлено при введении 0,25% Анавидина (68,4 ± 0,5 %). Это, вероятно, обусловлено актвной миграцией мононуклеаров в зону введения препарата с последующей их дифференцировкой в макрофаги. С 5 по 15 сутки течения воспаления происходит снижение количества мононуклеаров и макрофагов в 2,5 раза.

При введении Анавидина в подкожную соединительную ткань нами получены аналогичные результаты (рис. 6). Мононуклеары и макрофаги в первые 12 часов эксперимента в подкожном инфильтрате составляли от 25 до 37 %, а к третьим суткам их удельный вес составил уже 37-59 %, т.е. увеличился в среднем в !,5 раза.

С 7 по 15 сутки наблюдения во всех случаях содержание мононуклеаров и макрофагов снижается и существенно не отличается от аналогичных показателей интактных тканей.

60

фи 3-й р-р 0.05% 0,12% 0.25% 0,50%

В иятактные ткани 3 12 часов Е2 Зсутки О 5 сутк/ в 7 сутки о 15 сутк/

Рис. 6. Содержание мононуклеаров и макрофагов в подножной соединительной ткани при введении различных концентраций Анавидина

В местах инъекций развивается отек тканей, который менее выражен при введении 0,25 и 0,5% раствора Анавидина, а наибольший при 0,05 и 0,12% растворе.

Лучшая динамика снижения гидратации тканей, с 12 часов по 7 сутки, наблюдается при введении 0,25% Анавидина. Уровень гидратации тканей практически возвращается к исходным показателям и равен 22,1 ± 1,! %. При этих концентрациях препарата отмечается и самое быстрое очищение очага воспаления от продуктов распада, что подтверждает снижение количества детрита с 12 часов по 3 сутки эксперимента (21,7 ± 0,9 и 15,02 ± 0,6 % относительного объема), к 5 суткам он составляет всего 3,3 ± 0,4 %, а к 7 суткам -0,2 ±0,1 % (рис. 7).

Несомненно, эго указывает ка быструю дифференцяровку мононуклеаров В макрофага и последующую утилизацию ими продуктов распада, что обеспечивает своевременное очищение очага воспаления и последующее развитие репаративных процессов. Это подтверждает число фибробластов, количество

которых к третьим суткам воспаления значительно увеличивается и составляет 10,9 ± 1,1 и 6,4 ± 0,6 % относительного объема, к 7 суткам - 25,9 ± 0,7 и 26,1 ± 0,8 % соответственно, а к 15 суткам - 17,1 ± 0,4 и 16,6 ± 0,28 %, что приближается к уровню интактных тканей (20,9 ± 1,2 %} {рис. 8).

25

20 15 ■

с 10

зиа-й р-р

0,05%

0,12%

0,25%

0,50%

в 12 часов □ Зсутки □ 5 сутки П 7 сутки

Рис. 7. Содержание детрита в лейкоцитарном инфильтрате тканей щеки при введении Анавидика.

ЗС

фиэ-й р-р 0,05% 0.12% 0,25% 0,50%

я интактные ткани □ 12 часов □ Зсутки □ 5 сутки □ 7 сутки □ 15 сутки

Рис. 8. Содержание фибробластов в лейкоцитарном инфильтрате тканей щеки при введении Анабидина

Суммируя выше изложенное, можно заключить, что введение Анавидина не изменяет общебиологические закономерности течения воспалительной реакции в тканях щеки и подкожной соединительной ткани.

Результаты сравнительного анализа показали, что воспалительная реакция, развивающаяся в зоне инъекции при введении различных концентраций препарата имеет разную степень выраженности. Изменяются клеточные и тканевые реакции в зоне инъекции препарата, продолжительность фаз воспалительной реакции, выраженность отека, скорость очищения очага воспаления от детрита и проявления репаративных процессов.

Проведенное исследование и последующий сравнительный анализ результатов показал, что низкие концентрации Анавидина (0,05 и 0,12 %) существенно не влияют на течение раневого воспаления.

Введение 0,25 % Анавидина снижает воспалительный отек, сокращает лейкоцитарную и макрофагальную фазы воспаления, ускоряет развитие репаративных процессов, что подтверждается нормализацией к 7-м суткам воспалительного процесса всех клеточных показателей. Последующее повышение концентрации раствора до 0,5 % достоверно не изменяет качественные показатели раневого процесса.

Рис. 9, Содержание тканевых и клеточных элементов s области введения 0,25% Анавидина в динамике в тканях щеки.

Это говорит в пользу того, что А нави ли и не вызывает раздражающего эффекта и ускоряет смены фаз воспалительного процесса в тканях теки и подкожной соединительной ткани.

Клинико-бактериологический анализ исследования препарата Анавидин выявил высокое бактерио статическое действие его на ф л кул ьтати в и о-а н аэр о б-

ную и облигатно-анаэробную микрофлору, полученную из условно-чистой и инфицированной послеоперационных ран полости рта (табл 4)

Таблица 4

Состав микрофлоры условно-чистой и инфицированной послеоперационной раны полости рта до обработки антисептиками _(124 штамма)_

Условно- Инфицированная

Параметр чистая рана рана

M±m M±m

Обсемененность резидентной флорой, Ig КОЕ/мл 7,4 ± 0,1 8,0 ±0,3

Streptococcus sanguis 6,2 ± 0,1 4,4 ±0,2

Streptococcus salivarius 5,4 ±0,1 5,5 ±0,3

S milleri 4,5 ±0,3 3 2 ± 0,2

Staphylococcus aureus 0 4,1 ± 0,4

Veillonella parvula 3,3 ±0,2 0

Prevotella oralis 5,5 ±0,2 5,7 ± 0 2

Neisseria spp 3,5 ±02 4,1 ±0,3

Corynebactenum spp 5,4 ±0,1 3,2 ±0,2

Bacillus cereus 3,7 ± 0,2 3,5 ± 0,2

Обсемененность пародонто-патогенной флорой, Ig КОЕ/мл 6,1 ±0,1 7,6 ± 0,2

Prevotella intermedia 0 6,7 ±0,7

Porphyromonas gmgivalis 0 7,2 ±0,6

Fusobacterium spp 4 7 ± 0 1 6,4 t 0,5

Peptostreptococcus micros 5,1 ±0,1 7,3 ±06

Streptococcus mtermedius 4,2 ± 0 15 5,5 ±0,2

Actinomyces israelii 0 5,5 ± 0,3

Actinomyces naeslundu 3,1 ± 0,2 5,0 ±0,2

Candida spp 3 1 ±0,1 5,1 ±0,3

Сравнительный анализ эффективности изучаемых антисептиков в отношении факультативно-анаэробных и аэробных тест культур и клинических изо-лятов бактерий показал, что все исследуемые препараты обладали достаточно высокой активностью в отношении большинства тестируемых видов микроорганизмов МПК90 колебалась от 10 до 100 мкг/мл

Особого внимания, по-нашему мнению, заслуживают данные о влиянии бигуанидов Анавидина и Хлоргексидина на грибы рода Candida как референтные, так и клинические штаммы (МПК90 30-60 мкг/мл), а так же на бациллы (МПК90 30 мкг/мл) Эти микроорганизмы способны формировать эндоспоры, крайне устойчивые к антисептикам, в то время как в стоматологии применяется довольно большая группа антимикробных средств, не оказывающих воздействия на грибы и на споры микроорганизмов (табл 5)

Более однотипные результаты получены нами при изучении влияния антисептиков на референтные штаммы Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosae, вместе с тем МПК90 Анавидина ниже, чем у остальных антисептиков (табл 6) Следовательно, в отношении референтных штаммов микроорганизмов, которые рекомендуются для тестирования новых и уже известных антимикробных средств препараты группы бигуанидов весьма эффективны

Меньшая минимальная подавляющая концентрация бигуанидов по сравнению с бензалкония хлоридом была отмечена и в отношении факультативно-

Таблица 5

Антибактериальная активность антисептиков (МПКп) в отношении музейных тест-штаммов микроорганизмов, мкг/мл

Вид микроорганизма Полисепт Анавидин Хлоргексидин Бензалкония хлорид

Staphylococcus aureus Р 209 60 30 50 30

Bacillus subtilis АТТС 6633 60 30 30 >200

Escherichia coli АТТС 25922 60 30 60 60

Pseudomonas aeruginosae АТТС 27853 50 50 100 60

Candida albicans NCTC 686 100 60 60 100

Таблица 6

Антибактериальная активность антисептиков (МПК90) в отношении клинических штаммов микроорганизмов мкг/мл_

Вид микроорганизма Полисепт Анавидин Хлоргексидин Бензалкония хлорид

Streptococcus sanguis 30 10 30 30

Streptococcus salivanus 30 20 30 60

Bacillus cereus 30 30 60 60

Prevotella oralis 30 20 30 60

Prevotella intermedia 30 15 30 30

Porphyromonas gingivalis 20 10 20 30

Peptostreptococcus micros 60 20 60 60

Streptococcus mtermedius 60 20 60 30

Fusobacterium nucleatum 60 30 30 30

Actinomyces israelii 30 20 30 20

Candida spp (Клинические) 100 30 60 100

анаэробной микрофлоры ран Streptococcus sanguis, Streptococcus sahvarius, Bacillus cereus

В отношении таких анаэробных грамположительных кокков, как Peptostreptococcus anaerobius и Streptococcus mtermedius, меньшей МПК обладает Анавидин (20 мкг/мл)

Неспорообразующие грамотрицательные анаэробные виды группы бактероидов Prevotella intermedia, Prevotella orahs и Porphyromonas gingivalis имеют, по нашим данным, чувствительность к хлоргексидину биглюконату (МПК90 30-60 мкг/мл) Наиболее чувствительны эти два анаэробных вида к Анавидину (МПК90 10-20 мкг/мл)

Таким образом, необходимо отметить более высокую чувствительность анаэробных видов бактерий (Peptostreptococcus anaerobius, Streptococcus intermedius, Porphyromonas gmgivahs, Propionibacterium acnes, Prevotella melaninogenica и Fusobacterium nucleatum) по сравнению с аэробными к полисепту и Анавидину

Бактериологические испытания препарата показали, что Анавидин, обладает высокой антимикробной активностью в отношении микрофлоры послеоперационной раны полости рта по сравнению с другими изучаемыми бигуанидами

Полученные гистологические и бактериологические результаты позволяют рекомендовать 0,25 % раствор анавидина для антисептической обработки полости рта с целью снижения и профилактики послеоперационных воспалительных осложнений

ВЫВОДЫ

1. Анавидин не зависимо от концентрации и дозы не изменяет общебиологические закономерности течения воспалительной реакции, а сокращает продолжительность фаз и их интенсивность

2. Концентрация 0,25% раствора Анавидина снижает выраженность отека, сокращает лейкоцитарную и макрофагальную фазы воспаления, ускоряет развитие репаративных процессов

3. Минимально подавляющая концентрация для факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры полученной из условно-чистой и инфицированной послеоперационных ран полости рта составляет 10-30 мкг/мл

4. По сравнению с широко используемыми в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии антисептиками хлоргексидином биглюканагом и бензалко-ния хлоридом, Анавидин обладает большей (более чем в 1,4 раза) бактерицидной и фунгицидной активностью в отношении референтных и клинических штаммов микроорганизмов

5 Установленное в исследовании отсутствие раздражающего эффекта и выраженное противомикробное действие 0,25% раствора Анавидина позволяют разработать методику для его применения как антисептика в стоматологии

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Отсутствие токсичности и выраженное противомикробное действие Анавидина позволяет рекомендовать его в клинической практике в виде 0,25 % раствора для лечения инфекционно-воспалительных процессов и профилактики послеоперационных осложнений в стоматологической практике

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Перспективы применения производных гуанидина в стоматологии / В Н Царев, Р В Ушаков, Ю.А Склянова и др // Стоматолог - 2005 - № 7 -С 35-37

2 Казимирский В А Применение производных полигексаметиленгуани-дина в комплексном лечении флегмон челюстно-лицевой области / В А Казимирский, Ю А Склянова, К С Гилева // Мат I Российско-Монгольской студенческой стоматологической научн конф - Иркутск-Улан-Батор, 2005 - С 4243

3 Экспериментальное обоснование применения Фогуцида (Анавидина) в стоматологии / Ю А Склянова, Р В Ушаков, В А Казимирский и др // Бюл ВСНЦ СО РАМН -2006 -№4 -С 344-346

4 Сравнительная характеристика чувствительности тест-культур и микрофлоры инфицированной раны in vitro к антисептикам производных гуаниди-на/ЮА Склянова, РВ Ушаков, В Г Изатулинидр //Бюл ВСНЦ СО РАМН -2006 -№6(52) -С 315-317

5 Экспериментально-клиническая апробация и перспективы применения Анавидина в инфицированной ране / Ю А Склянова, Р В Ушаков, В Г Изату-линидр //Инфекционная патология -2006 -Т 13, №3—4. -С 45-46

Подписано в печать 20 04 2007 Бумага офсетная Формат 60х841/.

Гарнитура Тайме Уел печ л 1,0 _Тираж 100 экз Заказ № 076-07_

РИО НЦ PBX ВСНЦ СО РАМН (Иркутск, ул Борцов Революции, 1 Тел 29-03-37 E-mail arleon@rol ru)

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Склянова, Юлия Анатольевна

Принятые сокращения в тексте.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Раневое воспаление в борьбе с инфекцией.

1.2. Роль микрофлоры полости рта в развитии воспалительных ^ ^ заболеваний челюстно-лицевой области.

1.3. Антимикробные препараты, применяемые в стоматологии ^ и челюстно-лицевой хирургии.

1.4. Сравнительная характеристика производного полигексаметиленгуанидина - Анавидина с Хлоргексидина 25 биглюконатом из группы бигуанидов.

1.5. Перспективы использования препаратов группы гуанидинов ^ в стоматологии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Экспериментальные группы животных и методы ^ исследования.

2.2. Изучение влияния Анавидина на микрофлору полости рта ^ и инфицированной раны in vitro.

2.3. Статистические методы исследования.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ АНАВИДИНА

НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ 49 ТКАНЕЙ.

3.1. Влияние различных доз и концентраций Анавидина ^ на морфо-функциональное состояние тканей щеки

3.2. Влияние различных доз и концентраций Анавидина на морфо-функциональное состояние подкожной соединительной ткани.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ

ГЛАВА 4. АНАЛИЗ ДЕЙСТВИЯ АНАВИДИНА НА

МИКРОФЛОРУ ПОЛОСТИ РТА

4.1. Определение микрофлоры послеоперационной раны полости ^ рта.

4.2. Изучение чувствительности тест-культур и микрофлоры ^ послеоперационных ран полости рта к антисептикам.

ГЛАВА 5. ОБУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональные изменения в очаге раневого воспаления при введении Анавидина (экспериментальное исследование)"

Актуальность темы

Морфофункциональные особенности течения раневого процесса изучены подробно рядом авторов [34, 65, 68, 69, 70, 74, 76, 77, 79, 85-89, 91, 127, 131, 153]. Но до конца остаются, не изучены и актуальны вопросы коррекции воспалительного процесса с помощью антисептиков.

Одной из наиболее актуальных проблем хирургической стоматологии является проблема лечения инфекционно-воспалительных заболеваний челюст-но-лицевой области и полости рта [64, 65]. Это обусловлено, прежде всего, значительным количеством больных с данной патологией - 60-70 % [65, 76, 90], которые составляют от 10 до 20 % хирургических больных, обращающихся в стоматологические поликлиники, и около 50 % больных, госпитализированных в челюстно-лицевые стационары. Это убедительно свидетельствует о большой социально-экономической и медицинской значимости данной проблемы в масштабах России [65].

Решение задачи адекватного лечения одонтогенной инфекции заключается в проведении комплекса лечебных мероприятий, в котором важное место занимает местная противомикробная терапия. Наиболее часто встречающиеся инфекционно-воспалительные процессы зубочелюстной системы связаны с инфицированием микробной флорой (кариес и его осложнения, пародонтит и пр.). Выбор препаратов для местного лечения гнойно-воспалительных процессов затруднен, так как в возникновении и развитии большинства форм одонтогенной инфекции участвуют разнообразные микробные ассоциации.

Отличительной особенностью воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и местных послеоперационных инфекционно-воспалительных осложнений является то, что большинство из них вызываются эндогенной микрофлорой, представленной бактериями, грибами и вирусами. При этом в ассоциациях часто превалируют неспорообразующие анаэробные виды.

Анаэробные (неспорообразующие) и смешанные (анаэробно-аэробные) инфекции представляют одну из самых значительных категорий гнойно-воспалительных заболеваний у человека и среди них наибольшее клиническое значение имеют представители родов Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Peptostreptocjccus, Peptococcus, Clostridium и некоторые другие [23, 80, 83, 84, 126, 127, 131, 1157]. В последнее десятилетие среди выделенных штаммов количество анаэробов увеличивалось с 33-34 % [61] или с 43 % [156, 166] до 6080% [62, 166]. Преимущественно обнаруживаются грамнегативные формы -бактероиды и фузобактерии, грампозитивные кокки и в небольшом количестве грампозитивные бактерии - лактобациллы, актиномицеты, клостридии и др. По данным Р.В. Ушакова, В.Н. Царева [77, 79, 80, 83], при одонтогенной инфекции преобладают анаэробы, но вместе с ними в процесс вовлекаются экосистемы резидентов нормальной микрофлоры полости рта.

С внедрением в медицинскую практику антибиотиков внимание к разработке новых эффективных антисептиков ослабло, а сфера их применения в местном лечении гнойно-воспалительных заболеваний необоснованно сузилась. Вместе с тем, антисептики нашли самое широкое распространение в стоматологии. Они используются при проведении лечение всех воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области [57].

Последние годы отмечены появлением новых разнообразных видов хи-миотерапевтических средств для местного применения, как в полости рта, так и в инфицированных ранах, в том числе и челюстно-лицевой области. К ним в первую очередь следует отнести гуанидины [90].

Из группы гуанидинов наибольшее распространение в стоматологии как антисептики получили хлоргексидина биглюконат и лактацид (полисепт).

В Иркутском НИИ органической химии имени М.Г. Воронкова РАН было синтезировано соединение, производное полигексаметиленгуанидина, которое получило название Анавидин. По предварительным данным препарат обладает антимикробным действием в отношении как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов [90]. Однако его влияние на течение воспаления и антимикробное действие в отношении возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений при операциях в челюстно-лицевой области изучено недостаточно. Нет данных по его влиянию на морфофункцио-нальные изменения тканевых структур при воспалении, на тканевые структуры стенок полости рта, что не позволяет его использовать не только как дезинфек-тант, но и препарат для местного антимикробного воздействия непосредственно в ране. Без изучения этих вопросов в эксперименте не возможно грамотно и, эффективно использовать его в клинической практике.

Все вышеизложенное и определило цель нашего исследования.

Цель исследования

Изучить закономерности морфофункциональных изменений в тканевых структурах стенки ротовой полости и экспериментально обосновать эффективность применения Анавидина в стоматологической практике.

Задачи исследования:

1. Изучить общие морфологические закономерности и локальные особенности течения воспалительного процесса в тканях щеки в эксперименте.

2. Выявить влияние Анавидина на морфофункциональные особенности течения воспалительного процесса в стенке ротовой полости и подкожной соединительной ткани.

3. В эксперименте определить оптимальную концентрацию препарата Анавидин, обладающую минимальным раздражающим эффектом и максимальным лечебным эффектом на течение воспалительной реакции.

4. Провести сравнительное изучение влияния Анавидина на микрофлору полости рта у человека, в том числе на возможных основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний полости рта, челюстно-лицевой области, in vitro.

5. На основании данных клинико-экспериментального изучения обосновать методику применения препарата Анавидин в стоматологии как антисептика.

Научная новизна исследования

Впервые проведено изучение морфофункциональных изменений при использовании препарата Анавидин, которые свидетельствуют, что сохраняются общебиологические закономерности течения и не нарушается фазность воспалительного процесса. В эксперименте изучено влияние антисептического препарата, производного полигексаметиленгуанидина - Анавидин, на ткани щеки и подкожной соединительной ткани (слизистой оболочки, мышц, кожи). При многофакторном морфологическом анализе установлено, что ответная реакция и характер течения острого асептического воспаления в тканях щеки и подкожной соединительной ткани на введение различных характеристик Ана-видина находится в прямой зависимости от концентрации.

Установлено отсутствие побочного воздействия препарата при течении острого асептического воспаления в тканях щеки и подкожной соединительной ткани, что свидетельствует о низкой токсичности последнего и возможности его использования в хирургической стоматологической практике.

При сравнительном изучении антибактериальной активности Анавидина, выявлена минимальная бактерицидная концентрация препарата в отношении возможных возбудителей гнойно-воспалительных процессов полости рта и инфекционных послеоперационных осложнений. В результате исследования выявлено, что наименьшим раздражающим и наибольшим лечебным эффектом обладает 0,25 % раствор Анавидина.

На основании результатов сравнительного анализа выявлена оптимальная концентрация антисептика, которая может быть рекомендована для включения в разрешительные документы и последующего использования препарата в местном антимикробном лечении инфекционно-воспалительных заболеваний и послеоперационных осложнений в полости рта и челюстно-лицевой области.

Практическая значимость работы заключается в том, что выявленные параметры токсикометрии Анавидина, на основании гистоморфологического заключения, определили оптимальную концентрацию антисептика для использования его при лечении патологических процессов челюстно-лицевой области (слизистой оболочки полости рта, мышц, кожи) сопровождающихся выраженной воспалительной реакцией.

Исследования антимикробной активности препарата показали высокую эффективность Анавидина в отношении антибиотикорезистентных штаммов при гнойно-воспалительных процессах и послеоперационных осложнений полости рта и челюстно-лицевой области, что обосновывает дальнейшие совершенствование методов применения этой группы фармакологических препаратов.

Экспериментально-лабораторные данные позволяют рекомендовать Ана-видин для более широкого клинического применения в стоматологической практике.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анавидин не нарушает общебиологические закономерности течения воспаления, а сокращает длительность фаз и выраженность воспалительной реакции.

2. 0,25 % концентрация Анавидина является наиболее оптимальной для клинического использования вследствие того, что обладает наименьшим раздражающим действием и выраженным противовоспалительным эффектом.

3. Анавидин обладает высоким бактерицидным и фунгицидным действием, что позволяет использовать его как антисептик в отношении стоматоген-ной микрофлоры выделенной из условно-чистой и инфицированной послеоперационных ран полости рта.

Апробация работы

Основные положения диссертации опубликованы в научных статьях центральной и местной печати, представлены на XIV Всероссийской научнопрактической конференции «Актуальные вопросы стоматологии» (Москва,

2004), на первой Российско-Монгольской научной конференции (Иркутск,

2005), на XII Российско-Японском медицинском симпозиуме (Красноярск, 2005), второй Монголо-Российской научной конференции (Улан-Батор, 2006), на конференциях ассоциации врачей стоматологов (Иркутск, 2004, 2006).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 3 в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования России.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 2-х глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Список использованной литературы включает 172 источника, из них 95 отечественных и 77 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 41 рисунком.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Склянова, Юлия Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Анавидин независимо от концентрации и дозы не изменяет общебиологические закономерности течения воспалительной реакции, а сокращает продолжительность фаз и их интенсивность.

2. Концентрация 0,25 % раствора Анавидина снижает выраженность отека, сокращает лейкоцитарную и макрофагальную фазы воспаления, ускоряет развитие репаративных процессов.

3. Минимально подавляющая концентрация для факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры, полученной из условно-чистой и инфицированной послеоперационных ран полости рта, составляет 10-30 мкг/мл.

4. По сравнению с широко используемыми в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии антисептиками хлоргексидином биглюканатом и бензалко-ния хлоридом, Анавидин обладает большей (более чем в 1,4 раза) бактерицидной и фунгицидной активностью в отношении референтных и клинических штаммов микроорганизмов.

5. Установленное в исследовании отсутствие раздражающего эффекта и выраженное противомикробное действие 0,25 % раствора Анавидина позволяют разработать методику для его применения как антисептика в стоматологии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Отсутствие токсичности и выраженное противомикробное действие Анавидина позволяет рекомендовать его в клинической практике в виде 0,25% раствора для лечения инфекционно-воспалительных процессов и профилактики послеоперационных осложнений в стоматологической практике.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Склянова, Юлия Анатольевна, Иркутск

1. Агапова B.C. Инфекционные воспалительные заболевания челюстно-лицевой области / B.C. Агапова, С.Д. Арутюнова, В.В. Шулакова. - М.: МИА, 2004.- 184 с.

2. Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патанатомической диагностики болезней в аспектах морфологии / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1984. - 243 с.

3. Альперн Д.Е. Воспаление (вопросы патогенеза) / Д.Е. Альперн. М., 1959.-С. 13-22.

4. Антибактериальная активность антисептиков, применяемых в стоматологии / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев, В.А. Лопырев и др. // Журнал инфекционной патологии. 1996. - № 2. - С. 23-25.

5. Антибиотики: клиническая фармакология: Руководство для врачей. -Смоленск: «АмиПресс», 1994. 387 с.

6. Антимикробная активность дезинфекционных средств на основе четвертичных аммониевых соединений / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев, М.С. Саркисян и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. 2000. - № 1. - С. 75-77.

7. Балин В.Н. Практическая периодонтология / В.Н. Балин,

8. A.К. Иорданишвили, A.M. Ковалевский. СПб.: Питер-пресс, 1995. - 272 с.

9. Барер Г.М. Влияние местного применения комплекса антибактериальных препаратов на течение хронического периодонтита / Г.М. Барер,

10. B.В. Кочержинский, И.А. Овчинникова // Клинич. стоматология. 1997. -№ 3. - С. 12-14.

11. Барер Г.М. Опыт клинического применения антибактериального геля пролонгированного действия «Элизол» при лечении пародонтита / Г.М. Барер, О.В.Соловьева, О.О. Янушевич // Пародонтология. 2001. - №3 (21).1. C.40—42.

12. Баркова Н.П. Полигексаметиленгуанидины эффективные и безопасные антимикробные препараты / Н.П. Баркова // В сб.: Научные труды IX Всесоюзного симпозиума по целенаправленному изысканию физиологически активных веществ. - Рига, 1991. - С. 96-97.

13. Баркова Н.П. Сравнительная токсикологическая оценка эффективных бактерицидных препаратов / Н.П. Баркова // Сб. IX Всесоюзного симпозиума по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Рига, 1991. -С. 96.

14. Баркова Н.П. Применение солей полигексаметиленгуанидина в качестве антисептиков при анаэробной и смешанной инфекции / Н.П. Баркова // Сб. материалов IV Российско-Японского международного медицинского симпозиума. Иркутск, 1996. - С. 57.

15. Баркова Н.П. Квантовомеханические характеристики и токсичность гуанидин содержащих антисептиков / Н.П. Баркова // Гигиена и санитария. -№4.- 1995.-С. 38-42.

16. Баркова Н.П. Закономерности биологического действия и квантовомеханические характеристики перспективных антисептических препаратов как основа новых принципов их выбора: Автореф. дис.канд. мед. наук. М., 1997.-41 с.

17. Белоусов Ю.Б. Антибактериальная химиотерапия / Ю.Б. Белоусов, С.М. Шатунов. М.: «Р-Врач», 2001. - 473 с.

18. Бобро Л.И. Фибробласты и их значение в тканевых реакциях / Л.И. Бобро // Архив патологии. 1990. - Т. 12, № 52. - С. 65-68.

19. Большая Российская энциклопедия лекарственных средств. М.: «Ремедиум», 2001. - Т. 2. - 468с.

20. Боровский Е.В. Атлас заболеваний слизистой оболочки полости рта / Е.В. Боровский, Н.Ф. Данилевский. М.: Медицина, 1981. - 287 с.

21. Будаевская Т.Н. Обоснование выбора и рационального применения антисептиков для лечения апикального периодонтита: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1993. - 17 с.

22. Буданов С.В. Ступенчатая антибиотикотерапия инфекций / С.В. Буданов // Клинический вестник. 1996. - № 4. - С. 20-22.

23. Васильцов М.К. Морфология очага воспаления при нарушении обмена биогенных аминов: Дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 1974. - 267 с.

24. Вичканова С.А. Данные клинического исследования антимикробного растительного препарата «Сангвиритрин» / С.А. Вичканова // Пародонтоло-гия. 2002. - № 3 (24). - С. 69-70.

25. Внутрибольничные инфекции в хирургической стоматологии. / B.C. Агапов, С.В. Тарасенко, Г.М. Трухина и др. М.: Медицина, 2002. - 255 с.

26. Войтевич А.А. Восстановительные процессы и гормоны / А.А. Войтевич. Л.: Медицина, 1965. - 252 с.

27. Воспаление и стресс / Л.С. Васильева, В.В. Малышев, В.В. Кузьменко и др. Иркутск, 1995. - 124 с.

28. Гамбарин П.П. Крыса / П.П. Гамбарин, Н.М. Дукельская. М.: Советская наука, 1955. - 254 с.

29. Григорьев Е.Г. Новые сибирские антисептики / Е.Г. Григорьев, А.С. Коган // В кн.: Хирургия тяжелых гнойных процессов. Новосибирск: Наука, 2000. - С. 286-313.

30. Грудянов А.И. Лекарственные средства, применяемые при заболеваниях пародонта / А.И. Грудянов, Н.А. Стариков // Пародонтология. 1998. -№2 (8).-С. 6-17.

31. Дмитриева Л.А. Клинические и микробиологические аспекты применения реставрационных материалов и антисептиков в комплексном лечении заболеваний пародонта / Л.А. Дмитриева, А.Е. Романов, В.Н. Царёв. М.: МЕДпресс, 2002. - 94 с.

32. Елисеев В.Г. Морфология асептического воспаления / В.Г. Елисеев // Труды Омского мед. института. Омск, 1950. - С. 17-19.

33. Заболевания полости рта / Л.И. Шугар, Й.К. Баноци, И.С. Рац и др. -Будапешт: Изд-во Академии Венгрии, 1980. 383 с.

34. Завадский Р.В. Профилактика воспалительных осложнений операций на альвеолярном отростке: Дис. канд. мед. наук. М., 2004. - 118 с.

35. ИзатулинВ.Г. Влияние пролактина на морфологию очага острого асептического воспаления в подкожной соединительной ткани: Дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 1986. - 238 с.

36. Изатулин В.Г.Пролактин в механизмах формирования воспалительно-репаративных процессов при экстремальных состояниях: Автореф. д-ра мед. наук. Иркутск, 2000. - 37 с.

37. Канканян А.П. Болезни пародонта: Новые подходы в этиологии, патогенезе, диагностике, профилактике и лечении / А.П. Канканян, В.К. Леонтьев. Ереван: Тигран Мец, 1998. - 360 с.

38. Кнаппвост А.И. Депофорез гидроокиси меди-кальция. Научно обоснованная альтернатива в стоматологии / А.И. Кнаппвост // Клинич. стоматология. 1998. - № 2. - С. 12-15.

39. Красильников А.П. Современные проблемы антисептики / А.П. Красильников, А.А. Адарченко, Ю.К. Абаев // Здравоохранение Белоруссии.-1990.-№ 11.-С. 52-58.

40. Кузина М.И. Раны и раневая инфекция / М.И. Кузина, Б.М. Костюченок. М., 1981. - С. 55-161.

41. Мазур Р. Новое в стоматологии / Р. Мазур // Стоматология. 2000. — № 4 (84). - С. 78-80.

42. Майборода А.А. Динамическая структура очага воспаления /

43. A.А. Майборода // Науч. тр. Иркутского медицинского института. Иркутск, 1979. - Вып. 146. - С. 38-46.

44. Малышев В.В. Взаимосвязь между воспалением и стресс реакцией /

45. B.В. Малышев, Л.С. Васильева, В.В. Кузьменко // Патологическая физиология и общая патология. 1992. - № 10. - С. 348-349.

46. Маянский Д.Н. Роль клеток соединительной ткани в процессах регенерации / Д.Н. Маянский // В кн.: Современные проблемы регенерации. — Йошкар-Ола, 1980.-С. 114-123.

47. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1983. - 254 с.

48. Мечников И.И. Лекции о сравнительной патологии воспаления / И.И. Мечников. М.: Медгиз, 1947. - 188 с.

49. Микробиология ран / В кн. Раны и раневая инфекция / Отв. ред. М.И. Кузина. М.: Медицина, 1990. - 2-ое издание. - С. 149-168

50. Михайлов А.А. Превентивная антибактериальная терапия при хирургическом лечении посттравматических деформаций лицевого черепа: Дис. . .канд. мед. наук. М., 2001. - 127 с.

51. Музыкант Л.И. Современные данные о функциональной морфологии клеток грануляционной ткани в кожной ране / Л.И. Музыкани, Г.Н. Дудников // Архив патологии. 1975. - № 5. - С. 80-87.

52. Николаев А.И. Практическая терапевтическая стоматология /

53. A.И. Николаев, Л.М. Цепов. СПб., 2001. - 388 с.

54. Общие закономерности и особенности морфологических перестроек структур кожи при оптимизации заживления операционной раны / М.К. Васильцов, В.Ю. Лебединский, В.Г. Изатулин и др. // Бюл. ВСЬЩ СО РАМН.-2005.-№6.-С. 127-131.

55. Ойвин И.А. Физико-химические изменения в коже в начальной стадии воспаления / И.А. Ойвин, В.И. Сомин // Сб. работ каф. патофизиологии мед. института. Душанбе, 1954. - Т. 13, Вып. 1. - С. 42-51.

56. ОлейникИ.И. Микробиология и иммунология полости рта / И.И. Олейник // Биология полости рта. М., 1990. - С. 48.

57. Особенности влияния хлоргексидин-содержащих препаратов на состояние микробиоценоза полости рта у больных пародонтитом / В.Н. Царёв,

58. B.И. Чувилкин, Н.А. Мегрелишвили и др. // Стоматология. М., 2003. -№ 2 (27). - С. 49-53.

59. Пасхина Т.С. Роль факторов белковой природы в изменениях проницаемости капилляров при воспалении: Дис. д-ра мед. наук. М., 1961. - С. 221-272.

60. Плахтий Л.Я. Тактика антибактериальной терапии пародонтита, основанная на результатах микробиологического и молекулярно-генетического исследования: Дис. .д-ра мед. наук. -М., 2002. 290 с.

61. Применение антисептиков в стоматологической практике для профилактики инфекционно-воспалительных осложнений / Р.В. Ушаков,

62. B.Н. Чувилкин, И.И. Солощанский и др. // Dental Forum. 2004. -№ 1 (13).1. C. 71-74.

63. Применение гидрофильного геля «Тизоль» и его специализированных композиций в лечении гнойных хирургических заболеваний: Методические рекомендации для врачей / В.А. Козлов, Н.Л. Кузнецова, Е.Ю. Левчик и др. -Екатеринбург: УГМА, 2000. 11 с.

64. Применение макролидных антибиотиков нового поколения для профилактики и лечения инфекционных процессов в стоматологической практике: Учеб. пособие / В.Н. Царев, В.Н. Чувилкин, Н.А. Филатова и др. М.: ВУМЦ МЗ РФ, 2002. - 30 с.

65. Профилактика инфекционно-воспалительных осложнений в хирургической стоматологии: учебн. пособие / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев, Е.Н. Сердюк и др. -М, 2003. -40 с.

66. Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев, Е.А. Очиров и др. // Стоматолог. 2004. - № 4. -С. 20-24.

67. Результаты изучения влияния различных лекарственных форм хлор-гексидина на клеточный фактор воспаления in vitro / В.Н. Царёв, С.Ю. Иванов, В.И. Чувилкин и др. // Тр. Российск. нац. конгр. «Человек и лекарство». М., 2002. - С. 718.

68. Робустова Т.Г. Руководство по хирургической стоматологии и челю-стно-лицевой хирургии / Т.Г. Робустова. М.: Медицина, 2000. - Т. 1. - 568 с.

69. Робустова Т.Г. Одонтогенные воспалительные заболевания / Т.Г. Робустова. М.: Медицина, 2006. - 662 с.

70. Романов В.А. Влияние метоклопромида на морфологию очага асептического воспаления / В.А. Романов. Иркутск, 1986. - 280 с.

71. Романенко Н.В. Профилактика инфекционных осложнений внутрикостной имплантации с применением новых лекарственных форм хлоргексиди-на: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1999. - 24 с.

72. Серов В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. М.: Медицина, 1981.-311 с.

73. Серов В.В. Воспаление: Руководство для врачей / В.В. Серов, B.C. Пауков. М.: Медицина, 1995. - 640 с.

74. Сопоставительный анализ и закономерности изменений струпа и биомеханических свойств кожи в очаге асептического воспаления / И.А. Буланкина, Н.И. Арсентьева, В.Ю. Лебединский и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. 2005. - № 6. - С. 122-127.

75. Сравнительная характеристика антибактериальной активности новых антисептиков и перспективы их использования в стоматологической практике / Л.А. Дмитриева, А.Е. Романов, В.Н. Царев и др. // Стоматология. 1997. - Т. 76, №2.-С. 26-28.

76. Страчунский Л.С. Антибиотикопрофилактика в хирургии: взгляд клинического фармаколога / Л.С. Страчунский, Р.С. Козлов // Рациональные подходы к профилактике инфекционных осложнений в хирургии: Методические рекомендации. М., 1997. - С. 12-21.

77. Страчунский Л.С.Антибактериальная терапия: Практическое руководство / Л.С. Страчунский, Ю.Б. Белоусов, С.М. Козлова. М.: «Фарммедин-фо», 2000. - 180 с.

78. Струков А.И. Некоторые современные аспекты в течении воспаления / А.И. Струков // Архив патологии. 1972. - № 4. - С. 9-15.

79. Струков А.И. О процессах заживления ран / А.И. Струков // Тр. XXIX Всесоюз. съезда хирургов. Киев, 1975. - С. 4-16.

80. Терапия воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области с использованием производных имидазола / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев, Б.Д. Дугаров и др. // Стоматология. 1992. - № 3-6. - С. 72-75

81. Ушаков Р.В. Диагностика и лечение гнойно-воспалительных заболеваний лица и шеи.: Дис. д-ра мед. наук. -М., 1992. 323 с.

82. Ушаков Р.В. Чувствительность возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и шеи к антибактериальным препаратам / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев // Стоматология. 1993. - № 1. - С. 66-70

83. Ушаков Р.В. Этиология и этиотропная терапия неспецифических инфекций в стоматологии / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев. Иркутск, 1997. - 116 с.

84. Ушаков Р.В. Микрофлора полости рта и ее значение в развитии стоматологических заболеваний / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев // Стоматология для всех. 1998. - № 3. - С. 22-24.

85. Ушакова Т.В. Клинико-лабораторное обоснование применение нита-зола в комплексном лечении хронического генерализованного пародонтита: Автореф. дис. канд. мед. наук. ММСИ. М., 1992. - 20 с.

86. Фринденштейн А .Я. Клеточные основы иммунитета /

87. A.Я. Фринденштейн, И.Л. Чертков. М.: Медицина, 1969. - 256 с.

88. Царев В.Н. Комплексная бактериологическая и иммунологическая диагностика воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и шеи: Метод, рекомен. / В.Н. Царев, Р.В. Ушаков. М., 1991. - 28 с.

89. Царев В.Н. Лекции по клинической микробиологии для студентов стоматологических факультетов / В.Н. Царев, Р.В. Ушаков, М.М. Давыдова. — Иркутск, 1996. 82 с.

90. Царев В.Н. Иммуномодулирующая активность водорастворимых форм противоанаэробных антибактериальных препаратов / В.Н. Царев, Р.В.Ушаков, В.А. Лопырев // Журнал инфекционной патологии. 1997. -№2-3.-С. 42-45.

91. Царев В.Н. Химиотерапия в стоматологии / В.Н. Царев, Р.В. Ушаков // Вестник стоматологии. 1998. - № 5. - С. 79-81

92. Царев В.Н. Принципы применения новых макролидных антибиотиков для профилактики воспалительных осложнений дентальной имплантации /

93. B.Н. Царев, В.И. Чувилкин, А.Г. Трефилов // Стоматология для всех. 2001. -№ 3. - С. 68-71

94. Царев В.Н. Принципы профилактики инфекционно-воспалительных осложнений в стоматологической практике / В.Н. Царев, Р.В. Ушаков,

95. A.А. Ласточкин // 5-я конференция «Современные проблемы антимикробной химиотерапии». М., 2003. - С. 54-55.

96. Царев В.Н. Местное антимикробное лечение в стоматологии /

97. B.Н. Царев, Р.В. Ушаков. М.: МИА. - 2004. - 135 с.

98. Царев В.Н. Антимикробная терапия в стоматологии / В.Н. Царев, Р.В. Ушаков. М.: МИА. - 2004. - 143 с.

99. Чернух А.М. Воспаление / A.M. Чернух. М.: Медицина, 1979. -445 с.

100. Чимитов В.Д. Динамика макрофагальных элементов в очаге хронического воспаления / В.Д. Чимитов // Изв. СО АН СССР. Сер Биология. 1975. -Вып. 1, № 5. - С. 143-148.

101. ШубичМ.Г. Медиаторные аспекты воспалительного процесса /« М.Г. Шубич, М.Г. Авдеева // Архив патологии. 1997. -Т. 59, № 2. - С. 3-8.

102. Энциклопедия лекарств. Регистр лекарственных средств России (РЛС), 2003. С. 343.

103. Эхте А.А. Длительность активности некоторых антимикробных препаратов в корневых каналах зубов при лечении верхушечного периодонтита / А.А. Эхте // Актуальные вопросы эндодонтии. М., 1990. - С. 111-114.

104. Abbott P.V. The periapical space + a dynamic interface / P.V. Abbott // Ann R Australas Coll Dent Surg. 2000. - Oct. - N 15. - P. 223-234.

105. Abbott P.V. Antibiotics and endodontics / P.V.Abbott, W.R.Hume, J.W. Pearman // Austral Dental J. 1990. - Vol. 35. - P. 50-60.

106. Almstahl A. Microflora in oral ecosystems in primary Sjogren's syndrome / A. Almstahl, M. Wikstrom, U. Kroneld // Rheumatol. 2001. - May, Vol. 28 (5). -P. 1007-1013.

107. Anderson M.H. A review of the efficacy of chlorhexidine on dental caries and the caries infection / M.H. Anderson // J. Calif Dent Assoc. 2003. - Mar, Vol.31 (3).-P. 211-214.

108. Antibiotic resistance of subgingival species during and after antibiotic therapy / M. Feres, A.D. Haffajee, K. Allard et al. // J. Clin Periodontol. 2002. -Aug., Vol. 29 (8). - P. 724-735.

109. Anti-plaque effect of tempered 0.2% chlorhexidine rinse: an in vivo study / J. Konig, V. Storcks, T. Kocher et al. // J. Clin Periodontol. 2002. - Mar., N29(3).-P. 207-210.

110. Association of black-pigmented bacteria with endodontic infections / J.C. Baumgartner, B.J. Watkins, K.S. Bae et al. // J. Endod. 1999. - Jun, N 25 (6). -P. 413-415.

111. Bogle G. Locally delivered doxycyline hyclate: case selection, preparation, and application / G. Bogle // Compend Contin Educ Dent. 1999. - N 20 (4 Suppl.). - P. 26-33.

112. Brook I.J. Effect of Streptococcus feacalis on the growth of Bacteroides species and anaerobic cocci in mixed infectin / I.J. Brook // Surgery. 1988. -Vol. 103.-P. 107-110.

113. Brook I.J. Isolation of capsulate anaerobic bacteria from orofacial abscesses / I.J. Brook // Med Microbiol. 1986. - Vol. 22. - P. 171-174.

114. Catuogno С. The antibacterial properties of solid supported liposomes on Streptococcus oralis biofilms / C. Catuogno, M.N. Jones // Int J Pharm. 2003. -May, Vol. 12, N 257 (1-2). - P. 125-140.

115. Characterisation of aerobic gram-negative bacteria from subgingival sites of dogs—potential bite wound pathogens / B. Sorsblom, E. Sarkiala-Kessel, A. Kanervo et al. // J. Med Microbiol. 2002. - Mar., N 51 (3). - P. 207-220.

116. Cvitkovitch D.G. Genetic competence and transformation in oral streptococci / D.G. Cvitkovitch // Crit Rev Oral Biol Med. 2001. - Vol. 12 (3). - P. 217243.

117. Effects of low-concentrated chlorhexidine on growth of Streptococcus sobrinus and primary human gingival fibroblasts / S. Dogan, H. Gunay, G. Leyhausen et al. // Clin Oral Investig. 2003. - Dec., Vol. 7 (4). - P. 212-216.

118. Effects of periodontopathic bacteria on the expression of endothelin-1 in gingival epithelial cells in adult periodontitis / T. Ansai, E. Yamamoto, S. Awano et al. // Clin. Sci. (bond). 2002. - Sep., N 1. - P. 103.

119. Efficacy of subgingival irrigation using herbal extracts on gingival inflammation / A. Pistorius, B. Willershausen, E.M. Steinmeier et al. // J. Periodontol.- 2003. May, N 74 (5). - P. 616-622.

120. Endodontics in the adult patient: the role of antibiotics / L.P. Longman, A.J. Preston, M.V. Martin et al. // J. Dent. 2000. - Nov., N 28 (8). - P. 539-548.

121. Fibronectin binding by Streptococcus milleri group strains and partial characterisation of the fibronectin receptor of Streptococcus anginosus F4 / M.D. Willcox, C.Y. Loo, D.W. Harty et al. // Microb. Pathog. 1995. - N 19. -P. 129-137.

122. GjermoP. Chlorhexidine and related compounds / P. Gjermo // J. Dent Res. 1989. - Vol. 68 (Spec. Issue). - P. 1602.

123. Gomes A.C. Effect of rinsing with 1.5% hydrogen peroxide (Peroxyl) on gingivitis and plaque / A.C. Gomes, M.L. Shakun, L.W. Ripa // Clin Prevent Dent.- 1984.-N 6.-P. 21.

124. Haffajee A.D. Evidence of bacterial etiology: a historical perspective / A.D. Haffajee, S.S. Socransky // Periodontology. 2000. - Vol. 1994, N 5. - P. 725.

125. He L. The efficacy of the chlorchexidine chip following scaling and root planning (SRP) and compared to SRP alone / L. He, S. Geng, C. Cao // Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi. 2001. - Nov., N 36 (6). - P. 443-445.

126. Hidalgo E. Cytotocxicity mechanisms of sodium hepochlorite in cultured human dermal fidroblasts and its dactericidal effectiveness / E. Hidalgo, R. Bartolome, C. Dominguez // Chem. Biol. Interact. 2002. - Mar. 20, N 139 (3).- P. 265-282.

127. Hydrolysis of epithelial junctional proteins by Porphyromonas gingivalis gingipains / J. Katz, Q.B. Yang, P. Zhang et al. // Infect Immun. 2002. - May., N70 (5).-P. 2512-2518.

128. In vitro assay for the screening of the plaque-reducing activity of antimicrobial agents / F.A. Pitten, S. Doering, A. Kramer et al. // Arzneimittelforschung. -2003.-N53 (3).-S. 182-187.

129. Initial effect of controlled release chlorhexidine on subgingival microorganisms / N. Daneshmand, M.G. Jorgensen, H. Nowzari et al. // J. Periodontal Res.- 2002. Oct., N 37 (5). - P. 375-379.

130. Interactions between periodontal bacteria and human oral epithelial cells: Fusobacterium nucleatum adheres to and invades epithelial cells / Y.W. Han, W. Shi, G.T. Huang et al. // Infect Immun. 2000. - Jun., N 68 (6). - P. 31403146.

131. Jacobs J.A. The "Streptococcus milleri" group: Streptococcus anginosus, Streptococcus constellatus, and Streptococcus intermedius / J.A. Jacobs // Rev. Med. Microbiol. 1997. - N 8. - P. 73-80.

132. Johansson A. Inhibition of Actinobacillus actinomycetemcomitans leuko-toxicity by bacteria from the subgingival flora / A. Johansson, L. Hanstrom, S. Kalfas // Oral Microbiol Immunol. 2000. - Aug., N 15 (4). - P. 218-225.

133. Jorgensen M.G. The ins and outs of periodontal antimicrobial therapy / M.G. Jorgensen, J. Slots // Calif Dent Assos. 2002. - Apr., N 30 (4). - P. 297305.

134. Kawashima Y. Simple and rapid detection of serum antibody to periodon-topathic bacteria by dotblotting. / Y. Kawashima, I. Ishikawa // J. Periodontal Res. — 2002. Jun., N 37 (3). - P. 223-229.

135. KononenE. Development of oral bacterial flora in young children / E. Kononen // Ann Med. 2000. - Mar., N 32 (2). - P. 107-112.

136. Local antibiotic therapy guided by microbiological diagnosis / A. Mombelli, B. Schmid, A. Rutar et al. // J. Clin. Periodontal. 2002. - Aug., Vol. 29 (8). - P. 743-749.

137. Lucas G.Q. Preventive action of short-term and long-term chlorhexidine rinses / G.Q. Lucas, O.N. Lucas // Acta Odontol Lftinoam. 1999. -N 12 (1). -P. 645-658.

138. Luppens S.B. The effect of the growth phase of Staphylococcus aureus on resistance to disinfectants in a suspension test / S.B. Luppens, F.M. Rombouts, T. Abee // J. Food Prot. 2002. - Jan., N 65 (1). - P. 124-129.

139. Marsh P.D. Plaque as a biofilm: pharmacological principles of drug delivery and action in the sub- and supragingival environment / P.D. Marsh // Oral Dis.-2003.-N9, Suppl l.-P. 16-22.

140. Mechanism of action of sodium hypochlorite / C. Estrela, E.L. Barbin, O.C. Sprano et al. // Braz Dent J. 2002. - N 13 (2). - P. 113-117.

141. Moderation of oral bacterial adhesion on saliva-coated hydroxyapatite by polyaspartate / Y.H. Guan, D.L. Lath, T. Graaf et al. // J. Appl Microbiol. 2003. -N94 (3).-P. 456-461.

142. Montebugnoli L. Effectiveness of metronidazole gel on cyckjsporine-induced gingival overgrowth in heart transplant patients / L. Montebugnoli, D. Servidio, C. Prati // Clin Oral Investing. 2002. - Mar., N 6 (1). - P. 24-27.

143. Oral mucous membrane flora in patients using saliva substitutes / G. Johansson, G. Andersson, R. Attstom et al. // Gerodontology. 2000. - Dec., N17 (2).-P. 87-90.

144. Oyarzun A. Immunohistochemical evaluation of the effects of sodium hypochlorite on dentin collagen and dlycosaminodlycans / A. Oyarzun, A.M. Cordero // J. Endod. 2002. - Mar., N 28 (3). - P. 152-156.

145. Possible association between amniotic fluid micro-organism infection and microflora in the mouth / C. Bearfield, E.S. Davenport, V. Sivapathasundaram et al. // BJOG. 2002. - May, Vol. 109(5). - P. 527-533.

146. Randomized, clinical evaluation of the safety and efficacy of a novel oral irrigator / J.A. Frascella, P. Fernandez, R.D. Gilbert et al. // Am. J. Dent. 2000. -Apr., Vol. 13 (2).-P. 55-58.

147. Real-time interaction of oral streptococci with human salivary components / M. Kawashima, N. Hanada, T. Hamada et al. // Oral Microbiol Immunol. -2003. Aug., N 18 (4). - P. 220-225.

148. Role of Fusobacterium nucleatum and coaggregation in anaerobe survival in planktonic and biofilm oral microbial communities during aeration /

149. DJ. Bradshaw, P.D. Marsh, G.K. Watson et al. // Infect Immun. 1998. - Oct, Vol. 66 (10).-P. 4729-4732.

150. Salivary IgA subclasses and bacteria-reactive IgA in patients with aggressive periodontitis / S. Hagewald, J.P. Bernimoulin, E. Kottgen et al. // J. Periodontal Res. 2002. - Oct., N 37 (5). - P. 333-339.

151. Salivary microbiota levels in relation to periodontal status, experience of caries and miswak use in Sudanese adults / I.A. Darout, J.M. Albandar, N. Skaug et al. // J. Clin Periodontol. 2002. - May, Vol. 29 (5). - P. 411-420.

152. Septic pulmonary embolism associated with periodontal disease: reports of two cases and review of the literature / Y. Shiota, H. Arikita, N. Horita et al. // Chest. 2002. - Feb., N 121 (2). - P. 652-654.

153. Sequence conservation and distribution of the fusobacterial immunosuppressive protein gene, fipA / S. Hunt Gerardo, S.C. Yoder, D.M. Citron et al. // Oral Microbiol Immunol. 2002. - Oct., N 17 (5). - P. 315-320.

154. Sheen S. Effect of toothpaste on the plaque inhibitory properties of a cetylpyridinium chloride mouth rinse / S. Sheen, M. Eisenburger, M. Addy // Surg Infect (Larchmt). 2001. - Spring., N 2 (1). - P. 5-18.

155. Shiltitoe E.J. The amj viral spectrum of Listerme antiseptic / E.J. Shiltitoe, R.G. Caffesse // OralPathol, OralRadiol. Endod. 1995. - Apr. -P. 442-448.

156. Siqueira Junior J.F. Antifungal effects of tndodontic medicaments / J.F. Siqueira Junior, J.N. Rocas, F.A. Magalhaes // Aust Endod J. 2001. - Dec., N27 (3).-P. 112-114.

157. Slots J. Selection of antimicrobial agents in periodontal ltherapy / J. Slots // J. Periodontal Rec. 2002. - Oct., N 37 (5). - P. 389-398.

158. Socransky S.S. Subgingival microbial profiles in refractory periodontal disease / S.S. Socransky, C. Smith, A.D. Haffajee // J. Clin Periodontol. 2002. -Mar., N 29 (3). - P. 260-268.

159. Sreenivasan P. Antiplaque biocides and bacterial resistance: a review / P. Sreenivasan, A. Gaffar // J. Clin Periodontol. 2002. - Nov., N29(11). -P. 965-974.

160. Streptococcus milleri group: renewed interest in an elusive pathogen. Eur. J. Clin. Microbiol / S.C. Piscitelli, J. Shwed, P. Schreckenberger et al. // Infect. Dis. 1992.-Nil.-P. 491-498.

161. Stress as a determinant of saliva-mediated adherence and coadherence of oral and nonoral microorganisms / J.A. Bosch, M. Turkenburg, K. Nazmi et al. // Psychosom Med. 2003. - Ju-Aug, Vol. 65 (4). - P. 604-612.

162. Suci P. A. A method for discrimination of subpopulations of Candida albicans biofilm cells that exhibit relative levels of phenotypic resistance to chlorhexi-dine / P.A. Suci, B.J. Tyler // J. Microbiol Methods. 2003. - Jun., N 53 (3). -P. 313-325.

163. Synergistic inhibitory effect of cationic peptides and antimicrobial agents on the growth of oral streptococci / S.S. Kim, S. Kim, E. Kim et al. // Caries Res. -2003. Nov-Dec., N 37 (6). - P. 425-430.

164. Systemic release of endotoxins induced by gentle mastication: association with periodontitis severity / S.O. Geerts, M. Nys, M.P. De et al. // J. Periodontol. -2002. Jan., Vol. 73 (1). - P. 73-78.

165. TanK.S. Cytolethal distending toxin of Actinobacillus actinomycetem-comitans. Occurrence and association with periodontal disease / K.S. Tan, K.P. Song, G. Ong // J. Periodontal Rec. 2002. - Aug., N 37 (4). - P. 268-272.

166. The collagenase activity of Porphyromonas gingivalis is due to Arg-gingipain / M.A. Houle, D. Grenier, P. Plamondon et al. // FEMS Microbiol Lett. -2003.-Apr., Vol. 25, N221 (2).-P. 181-185.

167. The N-terminal half part of the oral streptococcal antigen I/IIf contains two distinct binding domains / M.A. Sciotti, I. Yamodo, J.P. Klein et al. // FEMS Microbiol. Lett. 1997. -N 153. - P. 439-445.

168. The relationship between the presence of periodontopathogenic bacteria in saliva and halitosis / S. Awano, K. Gohara, E. Kurihara et al. // Int Dent J. -2002. Jun. - N 52. - Suppl. 3. - P. 212-216.

169. Theron A.J. Investigation of the anti-inflammatory and membrane-stabilizing potential of spiramycin in vitro / A.J. Theron, C. Feldman, R. Anderson // Antimicrob Chemother. 2000. - Aug., N 46 (2). - P. 269-271.134

170. Three case reports of aggressive perio-dontitis associated with Porphyro-monas gingivalis in younger patients /1. Ishikawa, Y. Kawashima, S. Oda et al. // J. Periodontal Res. 2002. - N. 12(8)- P.97-102

171. Yang S.E. Scanning electron microscopy study of the adhesion of Prevotella nigrescens to the dentin of prepared root canals / S.E. Yang, K.S. Dae // J. Endod. 2002. - Jun., N 28 (6). - P. 433^37.