Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические особенности раневого процесса в коже при региональном лечебном воздействии

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические особенности раневого процесса в коже при региональном лечебном воздействии"

На правах рукописи

АЛЕКСЕЕВА Наталия Тимофеевна

Морфологические особенности раневого процесса в коже при региональном лечебном воздействии

03.03.04 — клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Д.Б. Никитюк доктор медицинских наук, профессор A.A. Глухов

005559825

3 MAP 2015

Оренбург 2015

005559825

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Воронежская государственная медицинская академия им. H.H. Бурденко» Минздрава России

Научные консультанты:

- доктор медицинских наук, профессор Никитюк Дмитрий Борисович

- доктор медицинских наук, профессор Глухов Александр Анатольевич

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН

Банин Виктор Васильевич

Зам. руководителя Научно-исследовательского центра биомедицинских технологий ФГБНУ ВИЛАР

- доктор медицинских наук, профессор Семченко Валерий Василевнч, профессор кафедры анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина».

- доктор медицинских наук, профессор Соловьев Георгий Сергеевич

Зав. кафедрой гистологии, цитологии, эмбриологии ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия».

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится «<Р/ »с,11рс<1Х 2015 г. в ¡Счасов на заседании диссертационного совета Д. 208.066.04 при ГБОУ ВПО «Оренбургский государственный медицинский университет» Минздрава России по адресу: 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации 446000, г. Оренбург, ул., Советская, 6; http://www.orgma.ni/).

Автореферат разослан «_»_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, Доктор биологических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

В настоящее время возрастание производственного и бытового травматизма связано с повышением воздействия на организм человека негативных антропогенных факторов в результате техногенных катастроф, криминогенных ситуаций, что сопровождается возникновением механических ранений опорно-двигательного аппарата и чаще всего приводит к нарушению целостности покровных тканей - образованию кожных ран. Поэтому исследования по проблемам регенерации тканей не утратили своей актуальности в современной фундаментальной и прикладной медицине. Частота встречаемости кожных ран, высокий процент бактериальной загрязнённости, проблема ткансспсцифичности регенерата в области дефекта с целью улучшения косметических свойств требуют дальнейшего поиска эффективных методов регионального воздействия в хирургической практике с учётом морфологических особенностей регенерации в различных тканях и стадий раневого процесса (Миронов В.И., 2009; Scales В.S., 2013; Chéret J. et al., 2014; Hamed S. et al., 2014).

На современном этапе накоплен большой фактический материал, посвященный вопросам изучения раневого процесса с учётом теоретических и клинических аспектов регенерации (Аничков H.H. и соавт., 1951; Давыдовский И.В., 1952; Саркисов Д.С., 1970;;0динцова И.А., 2004; Данилов Р.К., 2008; Привольнев B.B., 2011; Мнихович М.В., 2013., Eming S.A., 2007, 2009; Gurtner G.C. et al., 2008; Sen S.K., 2009; Kuffler D.P., 2010; Roubelakis M.G., 2014). Существующий клинический опыт отечественной и мировой хирургии позволяет использовать высокоэффективные подходы к лечению ран (Кузин М.И. и соавт., 1990; Гостищев В.К., 2007; Мошуров И.П. и соавт., 2007; Винник Ю.С. и соавт., 2008; Ларичев А.Б. и соавт., 2008; Глухов A.A. и соавт., 2010; Затолокин В.Д. и соавт., 2010; Чернеховская H.E. и соавт., 2013, Darly I.A., 2007; Holle G. et al., 2007; Bryant R., 2012; Morris M.W. et al., 2014), но для улучшения результатов следует продолжать научно-обоснованные исследования с целью выявления морфологического эквивалента регионального лечения, для оптимизации течения репаративных процессов.

Первая реакция живых организмов на повреждения - закрытие раневого дефекта - присуща всем группам животных при всех формах регенеративного ответа (Бабаева А.Г., 2009; Wong V.W., 2013). Репаративная регенерация при раневом процессе связана с воспалительной реакцией и формирует единый комплексный ответ на повреждение (Серов В.В., Пауков B.C., 1995; Пальцев М.А., Аничков Н.М., 2001; Нузов Б.Г., Стадников A.A., 2012; Li J., 2007). Морфологические аспекты участия различных клеток в процессе восстановления целостности кожи при раневом процессе продолжают оставаться в центре внимания, так как для определения структурных изменений при заживлении имеет большое значение степень вовлечения в данный процесс составляющих клеточного компонента.

Использование методов гистохимической оценки метаболических превращений в зоне повреждения при раневом процессе, привлечение иммуногистохимии для выяснения пролиферационной активности эпидермиса, анализ клеточных дифферонов, участвующих в процессе регенерации в зоне дефекта тканей, позволяет получить новые данные морфологического обоснования методов лечения с учётом фазности течения раневого процесса, характеристики

ран, обеспечить систематизацию экспериментального материала, необходимую для выбора рациональных и результативных методов регионального воздействия. Применение структурно-метаболической оценки взаимоотношений клеточного и волокнистого элементов, а также межклеточных взаимоотношений в динамике воспалительных и пролиферативных изменений в зоне повреждения, позволяет выяснить показатели, свидетельствующие о восстановительных изменениях клеток и тканей в различные временные периоды и предложить способы морфофункциональной оценки эффективности используемых методов лечения.

Полнота регенерации обусловлена многими факторами, поэтому одной из задач прикладной и клинической медицины является поиск новых методов воздействия на течение регенерации в области раны с целью увеличения органоспецифичности регенератов (Мяделец О.Д., Адаскевич В.П., 2006; Ноздрин В.И. и соавт., 2008; Озерская О.С. и соавт., 2010, Van der Veer W.M., 2009; de Lima F.J.C., 2014; Olczyk P., 2014). Правильное применение существующего арсенала методов и лекарственных средств обеспечит практическую хирургию результативными подходами и позволит улучшить качество жизни пациентов. В связи с этим, особую значимость приобретает изучение пространственных взаимоотношений составляющих кожи на различных этапах заживления раны. Также очень важны вопросы диагностического прогнозирования эффективности хирургической тактики местного лечения ран, основанного на морфологических критериях. Комплексный подход в разработке проблем взаимодействия клеток в зоне повреждения при кожной ране позволит сформировать целостное представление о процессах посттравматической регенерации тканей и обеспечить выбор оптимальных лечебных мероприятий с учётом фазности течения раневого процесса и клинической характеристики ран, а также создаст теоретическое обоснование для врачей и раскроет перспективы новых эффективных лечебных мероприятий.

В процессе исследования эффективности применения новых методов лечения ран кожа будет рассматриваться как орган, представляющий собой систему гетерогенных элементов, составляющих системно-образующий фактор, обеспечивающий барьерную функцию организма.

Исходя из вышеизложенного, были определены цель и задачи настоящего исследования.

Цель работы: установить структурные закономерности и особенности репаративной регенерации поврежденной кожи, определить морфофункциональные критерии эффективности использования различных новых методов регионального воздействия при заживлении кожных ран. Задачи:

1. Изучить морфологические особенности кожи при репаративной регенерации в различные фазы раневого процесса при применении новых методов регионального воздействия, основанных на использовании магнитотерапии, светотерапии, гидропрессивных технологий и обогащенной тромбоцитами плазмы крови.

2. Представить морфофункциональное обоснование эффективности методов регионального воздействия, основанного на применении различных режимов магнитотерапии, светового фактора, гидропрессивных технологий и обогащенной тромбоцитами плазмы крови в комплексе заживления асептических и гнойных ран.

3. Морфологически оценить механизм действия изучаемых методов регионального воздействия (магнитотерапия, светотерапия, обогащенная тромбоцитами плазма крови) по отношению к поверхностному и глубокому слоям кожи.

4. Изучить динамику изменений состояния клеточного и волокнистого компонентов в области раневого дефекта, особенности гистохимических реакций в зависимости от фаз раневого процесса при применении различных методов регионального воздействия.

5. Оценить структурно-метаболический эквивалент изменений при применении изучаемых методов регионального воздействия (магнитотерапия, светотерапия, обогащенная тромбоцитами плазма крови) в асептических и гнойных ранах.

6. Изучить морфофункциональные изменения системы тучных клеток в процессе репаративной регенерации при различных вариантах течения раневого процесса и методах регионального воздействия.

7. Разработать математическую модель динамики состояния клеточного и волокнистого компонентов регенерата в зависимости от вида течения раневого процесса и способов регионального воздействия.

8. Изучить с помощью разработанной математической модели прогностические характеристики оценки динамики площади раневого дефекта и прочности на разрыв тканетипического регенерата в зависимости от показателей гистохимических маркеров, количественных характеристик активности тучных клеток и данных иммуногистохимии.

Научная новизна.

В настоящей работе впервые на адекватных экспериментальных моделях проведено комплексное морфофункциональное исследование репаративной регенерации кожных покровов под влиянием магнитотерапии, светового фактора, гидропрессивных технологий, обогащенной тромбоцитами плазмы крови. С помощью гистологических и иммуногистохимических методов выявлены изменения структурно-функциональной организации в пределах дифферонов на уровне эпидермиса и дермы при восстановлении кожных покровов после раневого процесса под действием предложенных методов регионального влияния.

Установлены особенности изменений структурно-функциональной организации кожи при асептическом и инфицированном течении раневого процесса под действием селективного и комбинированного влияния региональных методов.

Продемонстрированы неизвестные ранее отличия гистохимической реакции РНК и сульфгидрильных групп на уровне эпидермиса в различные периоды раневого процесса. Впервые обнаружены закономерности метаболических превращений, свидетельствующие о процессах дифференцировки и стратификации эпителиального пласта кожи при заживлении ран.

Выявлены корреляционные закономерности структурно-функциональных изменений эпидермиса и дермы при заживлении асептических и гнойных ран, что позволяет определить наиболее эффективные комплексные методы воздействия на репаративную регенерацию кожных ран с учетом фаз раневого процесса.

Впервые проведены морфометрические и гистохимические исследования эпидермиса, дермы в области раневой зоны для оценки эффективности избранных методов регионального воздействия.

Дана морфофункциональная характеристика реактивных изменений тучных клеток в различные периоды раневого процесса. Новыми являются сведения о количестве тучных клеток, степени их насыщения биологически активными веществами и интенсивности дегрануляции при регенерации кожных ран на фоне используемых методов регионального воздействия. Впервые выявлена зависимость морфологической реакции тучных клеток при заживлении гнойных кожных ран от применяемых региональных воздействий в комбинации с санационными мероприятиями.

Впервые изучены особенности иммуноморфологической характеристики эпидермиса при заживлении кожных ран на фоне селективного и комплексного применения методов региональных воздействий (магнитотерапии, светового фактора, гидропрессивных технологий, обогащенной тромбоцитами плазмы крови). Установлена ассоциация хронологии раневого процесса и экспрессии Ki-67, инволюкрина, отражающих пролиферативные изменения в эпидермисе и процессы его созревания, что имеет важное значение для прогнозирования состоятельности регенерата.

Экспериментально определен морфологический эквивалент механизмов действия предложенных методов регионального воздействия с учетом фаз раневого процесса на основе гистохимических показателей, оценки соотношения клеточно-волокнистого компонента в области раны, тканевых изменений.

Впервые предложена оценка механической прочности регенерата с целью обоснования эффективности воздействия региональных факторов при заживлении экспериментальных ран (патент на изобретение №105824 РФ : МПК А61В19/00. Устройство для измерения прочности послеоперационного рубца на разрыв в эксперименте / Глухов A.A., Остроушко А.П., Алексеева Н.Т./ 2011 г.). Разработан новый метод планиметрической оценки площади раневого дефекта с использованием цифровой фотографии и моделирования площади раны, располагающейся на цилиндрической поверхности.

Впервые проведен комплексный математический анализ, позволивший выявить неизвестные ранее зависимости прочностных характеристик зоны регенерата, планиметрических данных и гистохимической активности на уровне эпидермиса в зависимости от фазы течения раневого процесса и вида регионального санационного воздействия.

Приоритетным является выявление тесных корреляционных зависимостей, по данным многофакторного регрессионного анализа, маркеров белковосинтетической активности на уровне эпидермиса, площади раневого дефекта, скорости его закрытия, времени репарации от метода санационного воздействия как категориального предиктора вне зависимости от вида течения раневого процесса

Разработана математическая модель течения раневого процесса, связывающая динамику процессов репарации, прочностные характеристики регенерата, гистохимические маркеры и морфометрические характеристики волокнистого компонента дермы при различных видах регионального воздействия и степени инфицированное™ раны.

Сопоставление экспериментальных данных и результатов моделирования продемонстрировало высокую точность разработанной модели и позволяет использовать ее в качестве эталона при оценке различных методов регионального воздействия.

Результаты работы позволяют обосновать морфофункциональную эффективность применения новых методов регионального воздействия при заживлении кожных ран и могут быть использованы для коррекции лечебной тактики.

Теоретическая и практическая значимость.

Данная работа содержит фундаментальные данные по проблеме репаративной регенерации, имеющие большое прикладное значение. В результате проведенного комплексного исследования структурно-функциональных изменений при заживлении кожных ран, на основании планиметрических, морфологических и иммуногистохимических характеристик расширены современные представления о системе репаративной регенерации в кожных покровах, получены качественные и количественные нормативы, позволяющие унифицировать подход к применяемым биологическим моделям, широко используемых в медико-биологической практике.

Разработана математическая модель для характеристики изменений клеточного состава соединительной ткани дермы, что позволяет оценивать характер течения раневого процесса.

Экспериментально обоснована целесообразность селективного и комплексного подходов при применении различных режимов магнитотерапии, светового фактора, обогащенной тромбоцитами плазмы крови в хирургической практике, что существенно повысит эффективность заживления кожных ран.

Данные о морфофункциональной организации клеточного и волокнистого компонентов при раневом процессе способствуют пониманию механизмов репаративной регенерации, позволяют оценить изменения в зоне повреждения тканей в зависимости от течения восстановительного периода, а также обеспечивают осуществление адекватного выбора медикаментозной коррекции в хирургической практике.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Выявлен комплекс динамических структурно-метаболических изменений, формирующих морфофункциональный эквивалент, специфический для исследованных методов регионального воздействия (магнитотерапии, гидроимпульсной санации, светотерапии и обогащенной тромбоцитами плазмы крови).

2. Установлены закономерности, позволяющие проводить оценку восстановительных процессов в пределах эпидермиса и дермы, и осуществлять на их основе выбор метода воздействия для стимуляции репаративной регенерации.

3. Морфологические особенности репаративной регенерации кожных ран отражают реакцию элементов разных клеточных дифферонов, характерную для различной степени инфицированности ран.

4. Проведена оценка морфофункционального состояния тучноклеточной популяции, отражающая регулирующее влияние данных клеток на репаративную регенерацию и характеризующаяся наличием специфических паттернов, связанных со степенью инфицированное™ ран.

5. Установлен фазный характер белково-синтетической активности в клетках эпидермиса в зависимости от течения раневого процесса, что определяет рациональный выбор метода санационного воздействия.

6. Создана математическая модель для прогнозирования скорости изменения площади раневого дефекта с учетом его прочностных характеристик для различной степени инфицированное™ ран и способов регионального воздействия,

гистохимических маркеров белково-сиитетической активности, активности тучных клеток и диаметра волокон в области регенерата.

Апробация диссертации

Основные положения работы доложены и обсуждены на X и XI Конгрессах Международной ассоциации морфологов (Ярославль, 2010; Самара, 2012), VIII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010), конференции с международным участием «Наследие Пирогова: прошлое, настоящее, будущее» (Санкт-Петербург, 2010), XI международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке. Научные и прикладные аспекты концепции здоровья и здорового образа жизни» (Москва, 2010), научной конференции «Новые технологии в экспериментальной и клинической хирургии» (Саратов, 2011), VIII научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2011), XXXV, XXXVI и XXXVIII международных научно-практических конференциях «Применение лазеров в медицине и биологии» (Харьков, Украина, 2011; Судак, Украина, 2011; Ялта, Украина, 2012), Всероссийской научной конференции «Регенеративная биология и медицина» (Москва, 2011), VI Всероссийской научно-практической конференции «Цитофотометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2011), II международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2011), III эмбриологическом симпозиуме Всероссийского научного медицинского общества анатомов, гистологов, эмбриологов «ЮГРА-ЭМБРИО-2011. Закономерности эмбрио-фетальных морфогенезов у человека и позвоночных животных», (Ханты-Мансийск, 2011), I международном конгрессе «Раны и раневая инфекция» (Москва, 2012), научно-практической конференции врачей России с международных участием «Успенские чтения» (Тверь, 2012), IV Всероссийской научной конференции с международным участием «Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2012), Международном медицинском конгрессе «ЕВРОМЕДИКА» (Ганновер, Германия, 2013), Объединенном XII Конгрессе МАМ и VII Съезде ВНОАГЭ (Тюмень, 2014), международная научно-практическая конференция «Макро-микроскопическая анатомия органов и систем в норме, эксперименте и патологии» (Витебск, Беларусь, 2014).

Внедрение в практику.

По результатам исследования подготовлены методические рекомендации:

1. Оценка зоны регенерата с помощью методов гистологического исследования.

2. Макро- микроскопический методы оценки процессов регенерации в зоне раневого дефекта.

3. Применение тензометрии как критерия состоятельности регенерата.

По результатам проведенного исследования оформлено 2 рационализаторских предложения: «Метод планиметрического исследования раневого дефекта», рацпредложение №1422 от 12.09.2014 г. и «Метод расчета площади раневого дефекта округлой формы на цилиндрической поверхности», рацпредложение № 1423 от 12.09.2014 г. Результаты проведенного исследования внедрены в учебный процесс кафедры анатомии и гистологии медицинского института федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Белгородского государственного национального исследовательского университета, кафедр

нормальной анатомии человека, общей хирургии, гистологии государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Воронежской государственной медицинской академии им. H.H. Бурденко, кафедры анатомии человека Витебского государственного медицинского университета, кафедры анатомии и физиологии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Воронежского государственного педагогического университета, в научно-исследовательскую работу НИИ экспериментальной биологии и медицины государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Воронежской государственной медицинской академии им. H.H. Бурденко.

Личный вклад автора

Автор самостоятельно планировал экспериментальные исследования с учетом поставленной цели и задач данной работы. Подбор и анализ литературы, проведение экспериментов, статистическая обработка экспериментальных данных и их анализ осуществлялись непосредственно соискателем.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 73 научные работы, из них 17 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ, 3 монографии, 3 методические рекомендации для врачей. Получен 1 патент.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 327 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав и заключения. В первой главе рассматриваются история вопроса, патогенез и современные направления лечения ран. Вторая глава посвящена характеристике объектов исследования, описанию технического обеспечения, материалов и методов экспериментальных исследований. В третьей главе излагаются результаты собственных исследований. В четвертой главе проводится обсуждение полученных результатов. В конце диссертационной работы приводятся заключение, выводы, список литературы, который включает 332 источников, в том числе 186 отечественных и 146 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 131 рисунком, 14 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Общая характеристика объектов исследования и способ моделирования экспериментального раневого процесса

Исследования проведены на 1092 белых лабораторных крысах-самцах массой 240±12,5 г. Животных содержали в условиях клиники НИИ Экспериментальной биологии и медицины ГБОУ ВПО ВГМА им. Н.Н.Бурденко. Содержание, кормление, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии со строгим соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам лабораторной практики Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Для оценки регенерации при заживлении кожных ран животные были разделены на три блока, схема эксперимента приведена в таблице 1. Для моделирования асептической раны под наркозом («Золитил-100» в дозе 8мк/кг (согласно инструкции производителя) на выбритом от шерсти участке наружной поверхности средней трети бедра производили линейный разрез кожи, подкожно жировой клетчатки длиной 1,0 см. Рану закрывали давящей марлевой асептической

повязкой, лечение начинали сразу после моделирования. Для моделирования гнойных ран применяли суточную культуру Staphylococcus aureus в дозе Ю10 в 1мл физиологического раствора, которую вносили в рану после раздавливания стенок и дна зажимом Кохера. Рану закрывали асептической повязкой. На третьи сутки развивалась модель острого гнойного воспаления с обильным гнойным отделяемым.

Таблица 1

Схема эксперимента_

Группы исследований Количество животных Характер воздействия

Асептические кожные раны при воздействии ПеМП

Контрольная 28+14* Магнитотерапия не проводилась

1 опытная группа 28+14* Синусоидальное ПеМП, 10 мТл, 10 мин

2 опытная группа 28+14* Синусоидальное ПеМП, 30 мТл, 10 мин

3 опытная группа 28+14* Пульсирующее ПеМП, 10 мТл, 10 мин

4 опытная группа 28+14* Пульсирующее ПеМП, 30 мТл, 10 мин

Гнойные кожные раны при воздействии ПеМП

Контрольная 28+14* Магнитотерапия не проводилась

1 опытная группа 28+14* Синусоидальное ПеМП, 10 мТл, 10 мин

2 опытная группа 28+14* Синусоидальное ПеМП, 30 мТл, 10 мин

3 опытная группа 28+14* Пульсирующее ПеМП, 10 мТл, 10 мин

4 опытная группа 28+14* Пульсирующее ПеМП, 30 мТл, 10 мин

Гнойные кожные раны на фоне селективного и комбинированного воздействия ПМ

Контрольная 28+14* ГИС

1 опытная группа 28+14* ГИС+ПМ

2 опытная группа 28+14* ГИС+ПМ через повязку с мазью «левомеколь»

Асептические кожные раны при воздействии светотерапии

Контрольная 28+14* Лечение не проводилось

1 опытная группа 28+14* Поляризованное облучение 1 раз в сутки в течение 8 минут

2 опытная группа 28+14* Поляризованное облучение 2 раза в сутки в течение 8 минут с интервалом 8 часов

Гнойные кожные раны при воздействии светотерапии

Контрольная 28+14* ГИС 1 раз в сутки

1 опытная группа 28+14* Поляризованное облучения 2 раза в сутки в течение 8 минут с интервалом 8 часов

2 опытная группа 28+14* ГИС 1 раз в сутки и поляризованное облучения 2 раза в сутки в течение 8 минут с интервалом 8 часов

Асептические кожные раны под воздействием ОТПК

Контрольная 28+14* Дополнительное воздействие не проводилось

1 опытная группа 28+14* ГИС

2 опытная группа 28+14* Нанесение ОТПК

Гнойные кожные раны при воздействии ОТПК

Контрольная 28+14* Дополнительное воздействие не проводилось

1 опытная группа 28+14* ГИС

2 опытная группа 28+14* ОТПК

3 опытная группа 28+14* ГИС, а затем ОТПК

* - исследование регенерата на 21-е сутки; 7 животных - гистологического исследования и 7 животных для изучения прочностных характеристик регенерата.

2.2. Планиметрические исследования

Планиметрическими методами оценивали скорость заживления раны, которая представляет собой величину, характеризующую изменение площади раны за единицу времени. Для определения процента уменьшения площади раны рассчитывают отношение: S1-S2/S1* 100, где Sr начальная площадь раны; S2-площадь раны в исследуемый промежуток времени. Для определения скорости заживления кожных ран производили расчет по формуле Vs=So-Sn/n, где So -исходная площадь раны, Sn - площадь ран в соответствующий экспериментальный срок, п - изучаемый экспериментальный срок. Для оценки механических свойств регенерата определялась прочность тканей на разрыв в области рубца с помощью разрывного устройства (Патент 105824 РФ МПК А61В19/00 Глухов A.A. и соавт. 2011). Измерения диаметров волокон проводилось на препаратах, окрашенных по Ван-Гизону, и применением программы ImageJ, анализировалось не менее 7-и полей зрения, по 20 волокон в каждом срезе.

2.3. Гистологические исследования Для забора материала животных выводили из эксперимента на 1, 3, 5, 7 и 21 сутки для оценки особенностей репаративной регенерации в различные фазы раневого процесса (Кузин М.И., 1981). Биологический материал забирали таким образом, чтобы захватывалась область раны и неизмененных тканей. Материал фиксировался в 10% нейтральном формалине с последующим обезвоживанием и изготовлением парафиновых срезов толщиной 6—7 мкм. Для выявления общей гистологической картины была использована окраска гематоксилином и эозином. Для оценки изменений в соединительной ткани применяли окраску пикрофуксином по Ван-Гизону (Саркисов Д.С., 1996). Тучные клетки подсчитывали в тканях, окружающих рану, с учетом общего числа и морфофункциональных типов при окраске толуидиновым синим при рН=5,6. Плотность тучных клеток определяли с помощью светового микроскопа при увеличении 40x10. Подсчет клеток и их типирование проводили в 20 полях зрения с последующим перерасчетом на единицу площади (S=0,01mm"). Функциональную активность тучных клеток оценивали по индексу дегрануляции, который представляет собой отношение числа дегранулированных клеток к общему числу анализируемых клеток, выраженное в процентах.

2.4. Гистохимические методы исследования Для выявления РНК использовали методику с Азуром В (Shea S., 1970), которая дает возможность количественной обработки микропрепаратов. Для оценки процессов созревания эпидермиса проводили выявление сульфгидрильных групп феррицианидным методом по Шевремону и Фредерику (Пирс Э., 1962).

2.5. Иммуноморфологические методы Для детального изучения репаративной регенерации в области раневого дефекта использовали иммуногистохимические методы, применяя метод двойного непрямого маркирования. Для оценки пролиферативных процессов применяли моноклональные антитела к Ki-67 и инволюкрину. Из парафиновых блоков изготавливали срезы толщиной 5 мкм. Постановку иммуногистохимических реакций осуществляли на базе лаборатории ЗАО «Ретиноиды» (г.Москва) согласно рекомендациям фирмы-производителя Labvision (США). После необходимой обработки срезов, включающей депарафинирование и регидратацию, проводили демаскирование антигенов путем кипячения под повышенным давлением в растворах Trilogy при выявлении Ki-67, и Decler - при выявлении инволюкрин-

позитивных клеток (Cell marque, США). Для визуализации результатов применяли метод непрямой стрептавидин-биотиновой пероксидазной реакции с использованием Ultra Vision Detection System HRP/DAB, фермент - пероксидаза хрена, субстрат - 3,3-диаминобензидин.

2.6. Оборудование, применяемое в эксперименте

Для проведения микроскопии в проходящем свете по методу светлого поля использовались современные тринокулярные микроскопы Микромед-3 и AmScope. Регистрация микрофотографических изображений осуществлялась с помощью цифровых камер, при микроденситометрическом исследовании применялся сертифицированный аппаратно-программный комплекс «Видеотест» производства ООО «Иста-Видеотест».

2.7. Статистические методы анализа

Для анализа данных использовались статистические пакеты Statistica 6.1 фирмы StatSoft, использованы методы описательной статистики, одномерный и многомерный дисперсионный анализ (ANOVA и MANOVA), в качестве апостериорного критерия применялся критерий Шеффе (Поллард Дж., 1982). С целью углубленного анализа полученных данных в ходе данной работы был создан ряд многомерных регрессионных моделей, позволявших проводить оценку динамики и в дальнейшем осуществлять прогнозирование течения процессов репарации в ране в зависимости от их вида и применяемого лечения.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Восстановление целостности кожи и ликвидация повреждения при заживлении раневого дефекта является примером репаративной регенерации, при которой тесно взаимосвязаны процессы воспаления и пролиферации тканей, при этом формируется общая реакция на повреждение, в которой активно участвуют различные клеточные диффероны, обеспечивающие тканевой гомеостаз. Реактивные свойства кожи чётко выражены при действии внешних факторов, приводящих к механическим повреждениям кожного покрова. Полученные данные показали, что ранозаживляющим действием обладают различные факторы регионального воздействия, кроме этого существуют особенности морфологических реакций тканей, обусловленные степенью инфицированности раневого дефекта, а также зависящие от комплексов применяемых методов воздействия.

Проведенные исследования показали, что магнитотерапия стимулирует процессы репаративной регенерации в асептических ранах, наибольшим влиянием обладают режимы 2-й (синусоидальное ПеМП 30 мТл) и 3-й (пульсирующее ПеМП 10 мТл) опытных групп, когда отмечается снижение воспалительной реакции, уменьшение гидратации за счет постепенного прекращения экссудации и нарастание восстановительных процессов с вовлечением всех слоев кожи. Изучение восстановительных процессов под влиянием различных режимов магнитотерапии показало, что в асептических ранах регенерационные процессы более активно протекают при воздействии пульсирующего переменного магнитного поля (10 мТл), а также синусоидального переменного магнитного поля (30 мТл), что подтверждалось планиметрическими данными, гистоморфологическими характеристиками (рис. 1).

Установлено, что светотерапия потенцирует репаративные процессы в эпидермисе и оказывает позитивное влияние на дерму околораневой зоны. Планиметрическое изучение скорости заживления раневой поверхности указывает,

что при асептическом течении раневого процесса оптимальным является двукратное применение режима светотерапии. Биологический эффект светотерапии имеет следующие проявления: улучшение микроциркуляции, что активизирует образование грануляционной ткани и стимулирует репарацию эпидермиса, а также активизирует синтез ростковых факторов, повышающих пролиферацию фибробластов, повышение синтеза коллагена, что подтверждается планиметрическими данными (рис. 2).

14

2 о

1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

Рис. 1. Динамика скорости заживления раневого дефекта при асептическом течении и различных видах регионального воздействия. ПеМП. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - мм"/сут.

13,0

12,0 А

АР 1 опытная АР 2 опытная АР 3 опытная АР 4 опытная АР контроль

4,0

1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

АР 1 опытная АР 2 опытная АР контроль

Рис. 2. Динамика скорости заживления раневого дефекта под воздействием светотерапии при асептическом течении. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - мм /сут.

Морфологический анализ восстановительных процессов при заживлении асептических кожных ран выявляет высокую реактивность тканей при воздействии ОТПК (рис. 3).

19,0 17,0 15,0 13,0 11,0 9,0 7,0 5,0 3,0

-АР контроль -АРГИС АР ОТПК

Рис. 3. Динамика скорости заживления раневого дефекта под воздействием ОТПК при асептическом течении. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - мм2/сут.

При этом в эпидермисе преобладает активация пластических функций, а в соединительной ткани ускоряется купирование воспалительной реакции с последующим усилением пролиферативных процессов. Под действием ОТПК начальные изменения связаны с привлечением клеток в область раны, а затем ускоряются процессы дифференцировки клеточного компонента. Применение ОТПК в период фазы альтерации позволяет получить состоятельный эпидермис и качественно зрелые волокна коллагена в пределах дермы. ОТПК играет роль каркаса, обеспечивающего регенерацию в ранах. Выбор санационных воздействий должен быть оправданным, так как чрезмерное вмешательство в репаративные процессы дает негативное последствие. Гидроимпульсная санация, предназначенная для купирования воспалительной реакции, вызывает лишнюю травматизацию тканей при асептических ранах, поэтому восстановительные процессы происходят медленнее, чем после селективного применения ОТПК. Изменение клеточной составляющей в период фазы воспаления при заживлении ран выражается в преобладании нейтрофильных лейкоцитов в 1-е сутки, увеличение количества макрофагов с 3 суток, повышение содержания тканевых базофилов в состоянии различной функциональной активности. Миграция ТК в зоне повреждения, их дифференцировка обусловлены сложным взаимодействием между ТК и компонентами локального микроокружения (Быков В.Л., 2000).

Увеличение общего количества ТК в 1-е сутки при селективном влиянии ОТПК на регенерационный процесс в асептических кожных ранах может быть связано с непосредственным влиянием данного регионального фактора на миграционную способность клеток. Тромбоцитарный фактор роста играет важную роль в переходе фазы воспаления в фазу регенерации, но данный фактор вырабатывается также фибробластами и эндотелиоцитами. Следовательно, эти клетки также играют значимую роль в восстановительных процессах при заживлении кожных ран, (Омельяненко Н.П., Слуцкий Л.И., 2009; Abe R., et al., 2001) фибробласты вырабатывают цитокинины стимулирующего и тормозящего действия, поэтому являются важным звеном в регуляции регенерационного процесса (Бобро Л.И., 1990).

Вне зависимости от используемых видов воздействий в асептических ранах отмечалось повышение индекса дегрануляции, сопровождавшееся пропорциональным увеличением скорости заживления раневого дефекта, что

1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

подтверждает данные (УатапШо Т., 2000; Коша У., й а1., 2005; Эрепап К., й а1.,

2009) о стимулирующем влиянии тучноклеточной популяции на репарацию, выражающееся в модулирующем воздействии на клетки воспалительного ряда, а также в активирующем влиянии на фибробласты, и, как следствие, на стимуляцию коллагеногенеза. Это согласуется с данными, свидетельствующими, что при заживлении ран может происходить активация клеток фибробластического дифферона и они активно участвуют в пластических процессах (Бозо И.Я. и соавт.,

2010).

Во всех группах отмечается активное участие тучноклеточной популяции в процессах репаративной регенерации. При всех видах регионального воздействия в асептических ранах индекс дегрануляции превышает контрольный уровень, максимальные значения определяются на 5-е сутки для ПеМП и светотерапии, для ОТПК данный показатель достигает максимальных значений уже на 1-е сутки (рис.

4).

80,0% 80.0%

Е ::

20.0%

^^^^ 30.0%

0.0% 20-0%

1су1 3 су! 5 су! 7 су! 21 су! 10-0%

* Интактныйконтроль —•—Контрольная группа

—»— Синус. ПеМП (10 мТл) —»—Синус. ПеМП (30 мТл)

д —Пульсир. ПеМП(ЮмТл) —»—Пульсар ПеМП (30мТл) г'

** £> —•—контроль АР СТ —•—1 группа АР СТ —•—2 группа АР СТ

100.0% 90.0% 80.0% 70.0% 60.0% 50,0% 40.0% 30.0% 20.0% 10.0%

1 сут 3 сут 5 сут У сут 21 сут

Инга ктный контроль * АР контроль • ГИС • ОТПК

Рис. 4. Индекс дегрануляции ТК в дерме околораневой зоны в различные фазы регенерации асептических ран при различных видах воздействия. А - ПеМП; Б -светотерапия; В - ГИС и ОТПК. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - % дегранулированных ТК.

В целом, для указанных значений индекса дегрануляции тучных клеток и при использовании магнитотерапии, и под воздействием ОТПК, отмечались близкие значения скорости заживления раневого дефекта.

Стимулирование гистохимических процессов проявлялось повышением накопления РНК и SH-белков, обеспечивало повышение сопротивляемости тканей к повреждающему фактору. Наши исследования подтверждают имеющиеся в литературе данные о том, что эпителизация кожи при заживлении раневых дефектов протекает через мобилизацию клеток росткового слоя. Проведенный эксперимент показал, что репаративные процессы активнее протекают под действием ОТПК, что согласуется с данными (Kim D.H., et al., 2011). Изменения в обмене РНК и SH-групп белков указывали на активизацию пластических процессов и ускорение дифференцировки в эпидермисе (табл. 2). Применение ГИС при

асептических ранах оказывало травмирующее влияние и замедляло восстановительные процессы.

Таблица 2

Гистохимические показатели в пределах росткового слоя эпидермиса при асептическом течении раневого процесса под воздействием региональных

Среднее значение оптической плотности (М±т) Сутки Асептические раны ПеМП

Контрольная группа 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа

РНК 1 0,28±0,003 0,29±0,003 0,32±0,002* 0,32±0,004* 0,3±0,003*

3 0,28±0,004 0,29±0,003 0,31±0,003* 0,3±0,002* 0,28±0,005

5 0,32±0,002 0,29±0,005* 0,33±0,003 0,33±0,002 0,3±0,003*

7 0,33±0,001 0,31 ±0,003* 0,34±0,001* 0,35±0,002* 0,31 ±0,001*

SH-rpynna 1 0,27±0,003 0,28±0,004 0,3±0,003* 0,29±0,002* 0,27±0,003

3 0,27±0,004 0,3±0,003* 0,34±0,002* 0,32±0,003* 0,29±0,005

5 0,28±0,002 0,26±0,006* 0,32±0,003* 0,3±0,003* 0,28±0,006

7 0,29±0,002 0,29±0,002 0,34±0,001* 0,33±0,003* 0,27±0,002*

Продолжение таблицы 2

Среднее значение оптической плотности (М±ш) Сутки Асептические раны

Светотерапия ОТПК

Контр, группа 1 группа 2 группа Контрольна я группа 1 группа 2 группа

РНК 1 0,26±0,004 0,27±0,005 0,31 ±0,005* 0,29±0,003 0,29±0,004* 0,3±0,005*

3 0,29±0,004 0,3±0,005 0,33±0,004* 0,28±0,004 0,3±0,004* 0,34±0,002*

5 0,3±0,003 0,33±0,003* 0,35±0,001* 0,32±0,001 0,31 ±0,002 0,36±0,001*

7 0,31±0,005 0,32±0,003 0,37±0,004* 0,33±0,001 0,32±0,003 0,37±0,001 *

SH-rpynna 1 0,28±0,002 0,28±0,003 0,3±0,003* 0,28±0,003 0,28±0,007 0,29±0,004

3 0,27±0,002 0,29±0,002* 0,3±0,001* 0,27±0,005 0,29±0,003* 0,29±0,003*

5 0,3±0,003 0,3±0,002 0,33±0,001* 0,29±0,003 0,28±0,003 0,38±0,001*

7 0,3±0,003 0,29±0,003 0,31 ±0,004 0,27±0,002 0,34±0,001* 0,34±0,001*

Сопоставление полученных результатов, при изучении влияния различных методов лечения на асептические кожные раны, показало высокую эффективность применения ОТПК, что согласуется с мнением (Liu Y., et al., 2002) об активации пролиферации фибробластов и усилении коллагеногенеза. Это проявлялось стимулирующим влиянием на активность соединительной ткани - ускорением появления и созревания грануляционной ткани, более ранней заменой клеток воспалительного ряда на клетки, обеспечивающие пролиферацию; более ранним появлением коллагеновых волокон и преобладанием среди них горизонтально направленных. ОТПК оказывало положительное воздействие на регенерацию эпидермиса, что подтверждается увеличением количества Ki-67-положительных клеток.

Определение Ki-67 в клетках, которые готовятся к делению, показало положительную динамику восстановительных процессов при увеличении сроков заживления асептических ран. Увеличение Ki-67-позитивных клеток на фоне применения ОТПК позволило констатировать активацию пролиферации. После применения ГИС отмечается снижение экспрессии Ki-67 кератиноцитами. Реакция инволюкрин-положительных клеток в верхних слоях эпидермиса слабо выражена.

Это позволяет предположить, что на фоне пролиферативной активности клеток герминативного слоя эпидермиса, обеспечивающих восстановление целостности, клетки раньше вступают в фазу терминальной дифференцировки с целью создания барьерной функции кожи (рис. 5).

^тШшт яяшшшш ттшж г

Рис. 5. Иммуногистохимическая реакция тканей при заживлении асептических ран под влиянием ОТПК. 7 сутки. Экспрессия Кл-67 кератиноцитами. Продукт реакции коричневого цвета, докраска ядер гематоксилином. А) Контрольная группа; Б) 1 опытная группа, ГИС; В) 2 опытная группа, ОТПК

Проведенное исследование показывает, что ранозаживляющим действием обладают различные факторы регионального воздействия, кроме этого существуют особенности морфологических реакций тканей, обусловленные степенью инфицированности раневого дефекта, а также зависящие от комплексов применяемых методов воздействия.

Увеличение общего количества ТК в период фазы воспаления при спонтанном гнойном процессе можно объяснить участием данных клеток в гистионе воспаления (рис 6.).

Рис. 6. Выявление ТК в зоне раневого дефекта при регенерации гнойных ран под действием светотерапии. 3 сутки. Окраска толуидиновым синим. Ок.Ю. Об. 100. А) контрольная группа; Б) 1 опытная группа, селективное воздействие светотерапии; В) 2 опытная группа, комбинированное воздействие ГИС и светотерапии.

Восстановительные процессы в коже при заживлении гнойных ран под действием программируемой магнитотерапии более выражены при комбинированном использовании в сочетании с гидроимпульсной санацией, создающей условия для купирования проявлений воспаления (рис. 7).

II б|| I..

сразу 1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

■ контроль Ш1 опытная ■ 2 опытная

Рис. 7. Динамика изменения площади ран при заживлении в условиях инфицирования при воздействии программируемой магнитотерапии; * обозначены статистически значимые различия для р<0,05 по сравнению с контрольной группой. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - мм2.

Регенерация в условиях инфицирования на фоне воздействия поляризованного света также протекает более интенсивно при комбинированном применении гидроимпульсной санации и светотерапии, так как гидроимпульсная санация обеспечивает более быстрое очищение дефекта тканей от гнойно-некротического содержимого и подготавливает зону восстановления к образованию и созреванию грануляционной ткани с последующей эпителизацией.

Комбинированное применение светотерапии обеспечивает ускорение сокращения площади раневого дефекта при заживлении гнойных ран, на что указывают планиметрические данные (рис. 8).

''' ■■■ НИЩ ■ контроль

30

■ 1 опытная

■ 2 опытная

*

■ || ...

сразу 1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

Рис. 8. Динамика изменения площади ран при заживлении в условиях инфицирования при воздействии светотерапии; * обозначены статистически значимые различия для р<0,05 по сравнению с контрольной группой. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат -мм2.

В гнойных ранах оптимальные значения соответствующих индекса дегрануляции и скорости заживления смещались в сторону больших величин индекса дегрануляции, по сравнению с данными для асептического течения раневого процесса (рис. 9). Наиболее выраженная реакция тучных клеток определяется при селективном влиянии ОТПК на 3-й сутки и на 5-е сутки при комбинированном воздействии ГИС и ОТПК, что указывает на стимулирование 18

репаративных процессов данным региональным фактором. Значительное повышение индекса дегрануляции на 5-е сутки при применении светотерапии можно объяснить мобилизацией тучных клеток из субэпидермальной зоны, что связано с более поверхностным действием поляризованного света.

Рис. 9. Индекс дегрануляции ТК в дерме околораневой зоны в различные фазы регенерации гнойных ран. А) ИМ; Б) светотерапия; В) селективное и комбинированное действие ОТПК. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - % дегранулированных ТК.

Зсуг 5 сут 7 суг 21 сут

—•—гн гис —гн+отпк —"—гн+гиоотлк В

Усиление гистохимических процессов, что проявляется повышением содержания РНК и сульфгидрильных белков в пределах росткового слоя эпидермиса, повышает мобилизационные способности герминативных клеток, определяющих репаративные процессы (табл. 3).

Таблица 3

Гистохимические показатели в пределах росткового слоя эпидермиса при

заживлении гнойных ран под воздействием региональных факторов (усл.ед.)

Среднее значение оптической плотности (М±т) Сутки Гнойные раны ПеМП

Контр, гр 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа

РНК 1 0,3±0,004 0,31±0,003 0,32±0,005* 0,32±0,003* 0,31±0,004

3 0,3±0,003 0,31±0,003 0,34±0,005* 0,34±0,002* 0,33±0,005*

5 0,28±0,003 0,33±0,003* 0,34±0,003* 0,35±0,004* 0,33±0,005*

7 0,3±0,001 0,34±0,005* 0,32±0,004* 0,33±0,004* 0,34±0,004*

5Н-группа 1 0,26±0,004 0,27±0,002 0,28±0,003* 0,29±0,001* 0,28±0,004*

3 0,28±0,003 0,29±0,003 0,31±0,002* 0,33±0,004* 0,3±0,004*

5 0,28±0,002 0,3±0,003* 0,32±0,005* 0,34±0,002* 0,32±0,001*

7 0,3±0,003 0,33±0,001* 0,32±0,003* 0,31±0,005* 0,34±0,003*

Продолжение таблицы 3

Среднее значение оптической плотности (М±т) Сутки Гнойные раны

Светотерапия ПМ

Контр, группа 1 группа 2 группа Контр, группа 1 группа 2 группа

РНК 1 0,31±0,004 0,3±0,005 0,31±0,003 0,29±0,005 0,26±0,005* 0,29±0,004

3 0,3±0,003 0,29±0,005 0,3±0,004 0,3±0,002 0,31±0,003 0,32±0,003*

5 0,31 ±0,002 0,33±0,002* 0,32±0,004 0,28±0,001 0,31±0,003* 0,33±0,001*

7 0,3±0,002 0,3±0,002 0,34±0,001* 0,28±0,001 0,33±0,002* 0,35±0,001*

БН-группа 1 0,32±0,006 0,32±0,004 0,31±0,006 0,29±0,004 0,29±0,003 0,31±0,005*

3 0,3±0,004 0,29±0,003 0,3±0,002 0,31±0,006 0,31±0,003 0,38±0,003*

5 0,33±0,004 0,32±0,003 0,36±0,001* 0,32±0,003 0,31±0,003 0,38±0,001*

7 0,35±0,003 0,32±0,004* 0,32±0,006* 0,33±0,001 0,33±0,005 0,38±0,001*

Среднее значение оптической плотности (М±ш) Сутки Гнойные раны ОТПК

Контр, группа 1 группа 2 группа 3 группа

РНК 1 0,3±0,004 0,29±0,003 0,29±0,004 0,29±0,004

3 0,3±0,003 0,32±0,001* 0,3±0,004 0,33±0,002*

5 0,28±0,001 0,33±0,003* 0,3±0,003* 0,35±0,001*

7 0,3±0,001 0,31±0,001* 0,31±0,003* 0,32±0,002*

вН-группа 1 0,26±0,004 0,29±0,003* 0,28±0,005 0,29±0,004*

3 0,28±0,003 0,31±0,004* 0,28±0,005 0,32±0,005*

5 0,28±0,002 0,33±0,004* 0,3±0,004* 0,35±0,004*

7 0,3±0,004 0,32±0,003* 0,3±0,003 0,35±0,003*

Продолжение таблицы 3

Величины характеристик скорости репарации приближаются к значениям контрольной группы при асептическом течении, но не достигают таковых ни при одном из использованных видов регионального воздействия. Репаративная регенерация в гнойных ранах более интенсивно протекала при комбинированном воздействии ОТПК, что подтверждается планиметрическими данными (рис. 10).

1 сут 3 сут

11 опытная ■ 2 опытная

5 сут

7 сут

Рис. 10. Динамика изменения площади ран при заживлении в условиях инфицирования по срокам исследования на фоне комбинированного применения ОТПК; * обозначены статистически значимые различия для р<0,05 по сравнению с контрольной группой. По оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - мм2. 20

Иммуногистохимически определяется наибольшая активация пролиферативных процессов после комбинированного воздействия ГИС и ОТПК по сравнению с другими группами с наибольшей выраженностью репаративной регенерации к 7-м суткам (рис. 11).

Анализ прочности регенерата показал, что наибольшая прочность на разрыв отмечалась при режимах магнитотерапии (2, 3, 4 группы) и селективном воздействии ОТПК при асептическом течении. В гнойных ранах количественные показатели выше, так как наблюдаются фиброзные изменения различной степени выраженности при воздействии различных режимов ПеМП, при селективном и сочетанном использовании ГИС и ОТПК (рис. 12).

Увеличение прочности по сравнению с интактной кожей обусловлено толщиной, степенью зрелости волокон и особенностями их архитектоники. Как показало проведенное исследование, состояние регенерата и его формирование зависит от преимущественного влияния региональных факторов, как на фазы регенерации, так и на слои кожи. Новообразование эпидермиса происходит параллельно с развитием коллагеновых волокон в процессе созревания грануляционной ткани. Так как магнитотерапия оказывала большее влияние на пролиферативные процессы на уровне соединительной ткани дермы, использование данного фактора приводило к формированию более прочного регенерата при всех применяемых режимах магнитотерапии при гнойном течении. Близкие данные показывала группа, где для стимуляции регенерационного процесса используется светотерапия с предварительным проведением ГИС, а также при селективном воздействии ГИС. Комбинированное применение ГИС и ОТПК в гнойных ранах способствовало повышению прочности регенерата, это сопровождалось упорядоченным расположением волокон параллельных поверхности кожи и меньшей выраженностью клеточного компонента в зоне регенерата, что согласуется с данными, свидетельствующими об уменьшении количества фибробластов в период фазы рубцевания (Николаев А.Б. и соавт., 1977). Таким образом, морфологическая оценка тканей в зоне рубца при заживлении гнойных ран указывает, что более качественное восполнение раневого дефекта отмечается при комбинированном применении ГИС и ОТПК, а также после сочетания ГИС и ПМ.

Рис. 11. Иммуногистохимическая реакция тканей при заживлении гнойных ран под влиянием ОТПК. 7 сутки. Экспрессия К1-67 кератиноцитами. Продукт реакции коричневого цвета, докраска ядер гематоксилином. А) 1 опытная группа, ГИС; Б) 2 опытная группа, ОТПК; В) 3 опытная группа, ГИС+ОТПК.

н

2,4 2,2

Рис. 12. Прочность на разрыв в зоне регенерата при различных видах регионального воздействия (Н). А) асептические раны; Б) гнойные раны.

Интересные данные получены при оценке динамики процента заживления ран и скорости заживления. Процент уменьшения площади вычислялся по формуле:

% 8заж—(8 исх- 8 п )/8 исх, где Бисх - исходная площадь раны, 8П - площадь раны на п день исследования. Скорость заживления определяется по формуле:

Узаж-(^исх~^п)/пСуТ

где 8ИСХ - исходная площадь раны, 8П - площадь раны на п день исследования, псут -день исследования.

Результирующие графики для указанных параметров представлены на рис. 13. Как видно из представленных диаграмм, скорость эпителизации дефекта увеличивается к 3-м суткам во всех трех группах, а затем постепенно снижается.

13,0 12,0 11,0 10,0 9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 4,0

1 сут 3 сут 5 сут 7 сут

— ГН 1 опытная ГН 2 опытная ГН контроль АР 1 опытная АР 2 опытная АР контроль

а)

г)

I 7 сут ■ 5 сут ■ 3 сут ■ 1 сут б)

1 сут

■АР 1 опытная -АР контроль -ГН 4 опытная

3 сут

-АР 2 опытная -ГН 1 опытная -ГН контроль

5 сут

-АР 3 опытная -ГН 2 опытная

7 сут

-АР 4 оп> -ГН 3 от

д)

I 3 сут ■ 1 сут

-ГН

-гн+гис+отпк

-АР ОТПК

В) е)

Рис 13. Динамика % площади ран и скорости заживления ран при различных видах регионального воздействия: % площади ран в различные сроки при: а) светотерапии, б) магнитотерапии, в) ОТПК; скорость заживления ран при: г) светотерапии, д) магнитотерапии, е) ОТПК; по оси абсцисс - сроки заживления; по оси ординат - мм2/сут.

Интегральная оценка полученных данных при различном виде течения раневого процесса была проведена с помощью корреляционного и регрессионного анализов, а также методов математического моделирования. В результате проведенного моделирования был получен ряд регрессионных моделей, пример одной из них приведен на рис. 14.

40 35 30

2 25 г

ш 20 м 15 10 5 0

0.26 0,27 0.23 0,29 0,30 0,31 0,32

рнк

Рис. 14. График регрессионной зависимости площади асептических ран от содержания РНК. 8=227,7136-7188576*х; 0,95 доверительный интервал.

Полученные результаты указывают на тесную регрессионную зависимость (г=0,97) изменения площади асептической раны и содержания РНК как маркера биосинтетических процессов при использовании в качестве метода местной терапии ОТПК. Значения полученных коэффициентов корреляции в рамках использовавшихся моделей приведены на рис. 15.

о 0,2 0,4 0,6 0,8 1

□ асептические раны Ш гнойные раны

Рис. 15. Значение коэффициента корреляции содержания РНК и площади ран. Примечание: контроль - контрольные группы; ТК - группы с применением ТК; ГИС -группы с применением ГИС; ГИС+ТК - группы с комплексным лечением ГИС+ТК.

Для характеристики регенерационных процессов была проведена оценка зависимости площади остаточного раневого дефекта от диаметра коллагеновых волокон. Известно (Озерская О.С., 2007), что выраженные фиброзные изменения в зоне регенерата могут сопровождаться уменьшением скорости заживления и являются основой формирования келоидных рубцов.

В контрольной группе при асептическом течении раневого процесса определялось наличие прямой зависимости площади раны от диаметра волокон, большему остаточному дефекту соответствовал больший диаметр коллагеновых

волокон (рис. 16, А). Использование ГИС сохраняло сходный характер регрессионных зависимостей, но обращает внимание большая толщина образующихся волокон при большей (на 45-50%) площади остаточного раневого дефекта (рис. 16, Б). Применение ОТПК резко меняло ход результирующих кривых: зависимость носит обратный характер - большему диаметру волокон соответствуют меньшие размеры остаточного раневого дефекта, а его площадь сокращается на 60-85% по сравнению с контрольной группой. Обращает внимание тот факт, что диаметр образованных волокон приближается к таковым в интактной коже (рис. 16, В).

Рис 16. Регрессионная зависимость площади остаточного раневого дефекта от диаметра волокон на уровне дермы при асептическом течении раневого процесса. А) контрольная группа; Б) ГИС; В) ОТПК.

При применении магнитотерапии в 1 и 2 опытных группах отмечалась динамика, сходная с изменениями под действием ОТПК, но наблюдалась тенденция к увеличению диаметра образующихся волокон, что сопровождается пропорциональным увеличением остаточного раневого дефекта. Наиболее близкие данные к результатам экспериментальной группы с применением ОТПК были показатели планиметрии во 2 опытной группе при использовании соответствующего режима ПеМП.

В гнойных ранах отмечаются значительные изменения размеров остаточного раневого дефекта при всех методах регионального воздействия по сравнению с контрольной группой (рис. 17, А). Наилучший результат, с точки зрения минимальных размеров раневого дефекта, отмечался при селективном применении ГИС и под воздействием ГИС в сочетании с ОТПК. При этом наблюдалось

изменение характера зависимости площади раневого дефекта от диаметра образующихся волокон. Наименьшая площадь определялась при сочетанном использовании указанных методов воздействия (рис. 17, Б). Применение ПеМП сопровождалось достоверным увеличением диаметра образованных волокон и выраженной положительной динамикой площади остаточного раневого дефекта, особенно в 3 и 4 группах (рис. 17, В).

Рис. 17. Регрессионная зависимость площади остаточного раневого дефекта от диаметра волокон на уровне дермы при гнойном течении. А) контрольная группа; Б) ГИС и ОТПК; В) ПеМП.

Анализ хода регрессионных зависимостей демонстрировал сходство характера скорости изменения планиметрических показателей и величины индекса дегрануляции для спонтанного течения раневого процесса и использования светотерапии. Данное подобие может объясняться более мягким, физиологическим эффектом этого вида регионального воздействия на популяцию тучных клеток, локализующихся преимущественно на субэпидермальном уровне, без вовлечения в реакцию их большей доли из системного пула. При применении магнитотерапии, особенно при воздействии ОТПК, увеличение индекса дегрануляции приводило к росту скорости сокращения площади раневого дефекта, при этом дальнейшее увеличение индекса дегрануляции не приводило к увеличению данного планиметрического показателя (рис. 18).

Сопоставление динамики планиметрических показателей ран и функционального состояния ТК при различной степени инфицированное™ тканей позволяет констатировать, что скорость заживления раневого дефекта 26

демонстрировала тесные корреляционные связи с величинами индекса дегрануляции ТК, так как развитие раневого процесса уже в начальной фазе сопровождалось изменениями морфофункционального состояния клеток данного дифферона. Данная связь носила нелинейный характер и для каждого вида регионального воздействия можно было выделить оптимальные значения индекса дегрануляции, после достижения которого увеличения скорости заживления дефекта не происходило (рис. 19).

Скорость,АРкс«троль=.13.2776И251732в'х-'5Э.3497-х"2

Скорость АР'ОТПК = 15.69-46.Л5в8'*+56.9вВЗ'**2. 0.95 Пред И

52 0.5« 0.56 0,58 0,80 0.62 0,64 0,66 ИД АР соетотерапия I! группа

Рис. 18. Зависимость скорости заживления раневого дефекта от индекса дегрануляции в асептических ранах. А) контрольная группа, Б) при региональном воздействии ОТПК. В) при региональном воздействии магнитотерапии, Г) при региональном воздействии светотерапии.

Скорость ГН ГИООТПК = -55,0026*200.1736**-150,7977-х"2

Рис. 19. Зависимость скорости заживления раневого дефекта от индекса дегрануляции в гнойных ранах. А) контрольная группа, Б) ГИС+ОТПК.

По результатам проведенных исследований были построены математические

модели изменений площади раневого дефекта в зависимости от прочности регенерата на разрыв, диаметра коллагеновых волокон, показателей среднего значения оптической плотности РНК в пределах росткового слоя эпидермиса под влиянием различных методов регионального воздействия. Визуализация построенных моделей представлена в виде системы квадратичных уравнений, отражающих взаимосвязь трех анализируемых параметров и трехмерных квадратичных поверхностей.

Анализ состояния кожной раны в контрольной группе показал, что наименьшие значения площади раневого дефекта на 7 сутки соответствуют диаметру волокнистого компонента, близкого к значениям интактной кожи. Увеличение диаметра коллагеновых волокон, по данным модели, приводило к увеличению площади раневого дефекта при одновременном увеличении прочности на разрыв. Это согласуется с наблюдаемыми в эксперименте явлениями выраженного фиброза при относительно большей площади в пределах данной группы остаточного раневого дефекта на 7-е сутки (рис. 20, А).

площадь ОТПК АР контроль = В08.625&9,3754,к+371.164"у*0.0244'х,И13613'*"у-116769'у'у плоишь. ГИС АР 1 фулпа = -98.0573+07647'к-в7966"у-0 0014'х,*Д(Ю29'х'уад92'А

площадь ОТПКАР2фулла = -198.4563.074874<*129.2312^-0.00ш"х'х-0,2118'х"у-22.49э3'у"у

О < -0 5

В Ш -

Рис. 20. Зависимость площади раневой поверхности от прочности на разрыв и диаметра волокон. А) контрольная группа; Б) ГИС; В) ОТПК.

При использовании гидроимпульсной санации характер результирующей поверхности менял свой ход, отмечалась тенденция к увеличению диаметра волокон. Динамика площади раневого дефекта на 7-е сутки демонстрировала тенденцию к более быстрому сокращению по сравнению с контрольной группой (рис. 20, Б). При этом значения прочности на разрыв регенерата, по данным моделей, демонстрировали незначительно выраженную тенденцию к ее снижению при увеличении диаметра волокон. Это можно связать с нарушением процесса

созревания коллагеновых волокон в условиях травмирующего воздействия ГИС. Применение ОТПК показало наилучшие результаты: при физиологическом значении диаметра волокон, характерного для интактной кожи, отмечалась минимальная остаточная площадь раневого дефекта на 7-е сутки и наибольшая прочность на разрыв при всем диапазоне выявленного диаметра волокон (рис. 20 В).

Морфологически отмечалась картина восстановительных процессов, протекающих наиболее адекватно при региональном воздействии ОТПК, благоприятно влияющей на процессы репаративной регенерации при заживлении кожных ран и проявлявшаяся ускорением созревания грануляционной ткани, преобладанием волокнистого компонента над клеточным в зоне регенерата и более выраженным горизонтальным направлением коллагеновых волокон.

Анализ белково-синтетической активности в контрольной группе показал увеличение оптической плотности РНК на всем анализируемом диапазоне площади раневого дефекта при одновременном колоколообразном ходе результирующих поверхностей в сопоставлении с диаметром волокон. В целом, выявленная динамика изменений соответствовала данным нормального распределения, что и отразилось на форме результирующей поверхности (рис. 21, А).

Рис. 21. Зависимость площади раневой поверхности от содержания РНК и диаметра волокон. А) контрольная группа; Б) ГИС; В) ОТПК.

При использовании ГИС по данным моделирования отмечалась тенденция к увеличению диаметра волокон, сопровождавшаяся уменьшением активности РНК и относительным увеличением площади раневого дефекта, что полностью согласовалось с наблюдавшейся микроскопической картиной (рис. 21, Б). Вероятно, это является отражением травмирующего действия ГИС не только на

дерму, но определенного тормозящего влияния на кератиноциты, которые обеспечивают поверхностное закрытие раневого дефекта. Использование ОТПК вносило малые изменения в форму результирующей поверхности модели по сравнению с контрольной группой, однако отмечалось значительно более быстрое уменьшение площади раневого дефекта, сопровождавшееся гармоничным повышением оптической плотности РНК, как показателя метаболических процессов, и одновременным увеличением диаметра коллагеновых волокон (рис. 21, В). По данным микроскопии стимулирование гистохимических процессов под влияние ОТПК, что проявлялось повышенным отложением продукта реакции при выявлении РНК, обеспечивало повышение сопротивляемости тканей к повреждающему фактору и потенцировало новообразование эпидермиса, закрывающего раневой дефект.

Анализ взаимосвязи величин остаточного раневого дефекта и среднего диаметра волокон регенерата демонстрирует нелинейную и неоднозначную зависимость между данными параметрами. В гнойных ранах наиболее часто отмечается тесная взаимосвязь малых размеров дефекта и больших средних значений диаметра волокон. Исключением из установленной закономерности является 4-я опытная группа при воздействии ПеМП, а также ОТПК, и ГИС в сочетании с ОТПК. При селективном и комбинированном использовании ОТПК отмечалось «гармоничное» изменение диаметра волокон, архитектоника характеризуется преимущественно горизонтальным направлением волокон, морфологические сходства по сравнению с интактной кожей более выражены после воздействия ГИС и ОТПК, что согласуется с данными о стимулирующем влиянии ОТПК на процессы коллагеногенеза и ангиогенеза новообразованной соединительной ткани (Горбач E.H., и соавт., 2001). Использование различных режимов ПеМП сопровождалось достоверным увеличением среднего диаметра волокон до 20% по сравнению с группами после селективного или комбинированного применения ОТПК. Применение светотерапии сопровождалось наименьшим приростом образования волокон, наилучшие значения отмечаются под воздействием сочетания ГИС и светотерапии.

При асептическом течении раневого процесса, вне зависимости от регионального воздействия, отмечалось более гармоничное по сравнению с гнойными ранами изменением диаметра образованных волокон. Сохранялась тенденция к увеличению диаметра волокон при использовании ПеМП вне зависимости от применяемого режима, что подчеркивает активное влияние магнитотерапии на глубокие слои кожи, наибольшие значения данного параметра выявляются при применении ГИС, что отражает травмирующее действие данного фактора на неогенез волокнистого компонента дермы при низкой степени инфицированности раны. Наибольшее приближение к значению диаметра волокон интактной кожи выявляется при селективном воздействии ОТПК, а также используемых режимах светотерапии. Архитектоника регенерата в указанных группах характеризуется наличием тонких коллагеновых волокон, ориентированных преимущественно параллельно поверхности кожи.

Таким образом, результаты математического моделирования продемонстрировали возможность наглядной прогностической оценки динамики площади раневого дефекта в зависимости от анализировавшихся параметров и в соответствии с видом регионального воздействия. Применение ГИС приводило к более выраженным изменениям, как со стороны поверхностных структур кожи, так 30

и со стороны волокнистого компонента дермы, что можно расценивать как травмирующее действие данного санационного метода при асептическом течении ран. Использование ОТПК оказывало позитивное воздействие на все элементы регенерата и потенцировало скорейшее закрытие раны с наилучшими морфологическими характеристиками структур в области регенерата.

Выявленные особенности характера моделирующих поверхностей позволяют рекомендовать их для быстрой визуальной оценки результатов эксперимента при большом числе анализируемых взаимосвязанных параметров и различных видах регионального воздействия.

Заключение

Проведенный комплекс морфогистохимических исследований позволил оценить структурно-метаболические особенности репаративной регенерации в коже. Установлено, что различные методы регионального воздействия оказывают избирательно-доминирующее влияние на эпидермис и дерму, вовлекая в восстановительные реакции различные диффероны клеток. Разнообразие морфофункционального состояния тучноклеточной популяции, наличие секреции в норме и при процессах репаративной регенерации, изменение уровня выработки биологически активных веществ указывают на способность тучных клеток активно участвовать в восстановительных процессах при заживлении кожных ран.

Усиление метаболической активности клеток росткового слоя эпидермиса в период преобладания пролиферативных процессов в зоне раны соответствует нарастанию индекса дегрануляции тучных клеток, которые обеспечивают репаративные процессы, выделяя биологически активные вещества. Повышение уровня гистохимических реакций в зоне эпидермиса на 1-е сутки раневого процесса указывает, что восстановление целостности кожного покрова начинается сразу после образования дефекта и сопровождается формирование тонкого эпителиального пласта. Данная реакция является универсальной, но степень выраженности имеет отличия, и зависит от метода регионального воздействия и уровня инфицированности тканей.

Процессы регенерации имеют свои особенности в асептических и гнойных ранах, поэтому региональное воздействие определяется степенью инфицированности дефекта тканей. Для активации репаративных процессов необходимо осуществлять дифференцированный выбор методов санации раневой поверхности. Исследование показало, что при заживлении асептических ран, характеризующихся минимальным некротическим компонентом и низким уровнем бактериального обсеменения, применение метода гидроимпульсной санации, отличающегося высокой механической очищающей способностью, нецелесообразно из-за повышенной травматизации тканей, что снижает скорость репаративных процессов и ухудшает морфологических характеристики регенерата, сформированного в зоне раневого дефекта.

Целесообразно для ускорения регенерации при заживлении гнойных ран использовать комбинированные методы, например, гидроимпульсную санацию в сочетании с оптимальным режимом физических факторов (магнитотерапия или светотерапия) или применять обогащенную тромбоцитами плазму крови. Данная схема позволяет обеспечивать достаточный уровень санации тканей и оказывать стимулирующее воздействие на регенерацию эпидермиса, что проявляется не только сокращением сроков эпителизации раневого дефекта, ускорением стратификации, но и приводит к оптимальному соотношению клеточного и

волокнистого компонентов в зоне регенерата.

Иммуногистохимически подтверждается, что обогащенная тромбоцитами плазма крови создает условия для более полноценной регенерации эпидермиса в зоне рубца. Прочностные характеристики сформировавшейся нормотрофической рубцовой ткани указывают на эффективность комбинированного применения гидроимпульсной санации в сочетании с оптимальными режимами переменного магнитного поля или обогащенной тромбоцитами плазмы крови.

Полученные данные стали основой для создания математической модели, отражающей зависимости изменения площади раневого дефекта и скорости его эпителизации от гистохимических и морфометрических количественных предикторов, а также индекса дегрануляции.

Таким образом, морфологические особенности репаративной регенерации при заживлении кожных ран зависят от состояния единого структурно-функционального комплекса, включающего в себя эпидермис и соединительную ткань дермы, которые обладают определенным восстановительным потенциалом, усиливающимся при рациональном применении региональных факторов (рис. 22).

Гемостаз -*■ Остановка кровотечения

-Хемотаксис

Воспаление

Пролиферация

Дифференцировка Созревание *—

Ш

—*---- 1е, макрофаги

т

Кератиноциты Фибробласты

и

Кератиноциты Фибробласты

Новообразование сосудов Формирование и созревание грануляционной ткани

Ремоделирование регенерата

Коллагеногенез

Волокнистый компонент

СТ, ПеЭМП,

Органотипический

Тканетипический

Диаметр волокон Прочность волокна

Рис. 22. Схема влияния региональных факторов на репаративную регенерацию

кожи.

ВЫВОДЫ:

1. Комплекс структурно-метаболических изменений, выявленных при регенерации кожных ран, характеризуется реактивными превращениями в тканевых элементах и волокнистом компоненте. В фазе воспаления на уровне дермы преобладают явления полнокровия сосудов, увеличение численности (наиболее значительное - до 2,5 раз в асептических ранах при применении ОТПК) и дегрануляция тучных клеток во всех экспериментальных группах (от 4% до 154% в зависимости от вида воздействия). В фазе пролиферации доминирующим паттерном является повышение гистохимической активности в эпидермисе в виде

32

увеличения оптической плотности РНК, наиболее выраженное при использовании светотерапии вне зависимости от вида течения раневого процесса - до 17% и программируемой магнитотерапии в гнойных ранах - до 25%. В фазе реорганизации рубца определяются прогрессивно нарастающие структурные изменения на уровне дермы с инверсией соотношения волокнистого и клеточного компонентов.

2. Определены морфологические эквиваленты влияния методов регионального воздействия на процессы заживления кожной раны, проявляющиеся в виде выраженной пролиферативной реакции эпидермиса - увеличения скорости заживления раневого дефекта в асептических ранах под действием ОТПК во все исследуемые сроки с максимумом до 19,1 мм2/сут и в гнойных ранах при использовании сочетанной терапии ГИС и ОТПК - до 10 мм2/сут, что выше данных адекватного контроля на 46% и 51% соответственно.

3. Установлена тесная зависимость уменьшения пощади раневого дефекта снижения содержания клеток воспалительного ряда, преимущественно лейкоцитов, ангиогенеза, процессов формирования волокнистого компонента дермы под действием обогащенной тромбоцитами плазмы крови в асептических ранах- Я2 0,86 и сочетанном воздействии гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы крови в гнойных ранах Я2 0,73.

4. Выявлено избирательное влияние различных методов регионального воздействия на эпидермис и дерму. Так, при использовании светотерапии в асептических и гнойных ранах установлено увеличение белково-синтетической активности - повышение оптической плотности РНК во все сроки от 14% до 10% и БН-групп как маркера дифференцировки на 5 сут - от 16% до 9%. Сочетанное применение гидроимпульсной санации с программируемой магнитотерапией или обогащенной тромбоцитами плазмы крови приводит к более гармоничному изменению диаметра волокон дермы по сравнению с их изолированным применением - 10% и 22% по сравнению с виварным контролем. Таким образом, выбор методов регионального воздействия зависит от степени инфицированное™ раны и должен определяться исходя из селективных особенностей воздействия, а также возможностью их комбинированного использования.

5. Гистохимические маркеры позволяют регламентировать рациональный выбор метода регионального воздействия: фазный характер белково-синтетической активности клеток эпидермиса отражает переход фазы воспаления в фазу пролиферации, вне зависимости от степени инфицированное™ раны с максимальными значениями уровня оптической плотности РНК в пределах росткового слоя эпидермиса к 5-м суткам - от 3,1% до 25,0%, при этом минимальное увеличение соответствует использованию светотерапии в гнойных ранах, максимальное - при сочетанном воздействии гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы.

6. Установлена тесная взаимосвязь белково-синтетических процессов на уровне эпидермиса по данным микроденситометрии - оценки оптической плотности РНК с размерами раневого дефекта и скоростью его сокращения. Выявлена тесная корреляционная зависимость данных показателей - г=0,99 и 0,88 для асептических ран при использовании гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы крови соответственно, что достоверно ниже (р<0,001) аналогичных параметров для инфицированных ран (г=0,42 и 0,43), что согласуется с динамикой экспрессии Ю-67 в зоне регенерата.

7. Морфологические и иммуногистохимические маркеры выявляют особенности реакции клеточных дифферонов, участвующих в репаративной регенерации раневого дефекта, в зависимости от степени инфицированное™ тканей. Так, в асептических ранах отмечается увеличение числа Ю-67 позитивных клеток на 7 сут, что свидетельствует об активации митотических процессов в ростковом слое и сочетается с увеличением протяженности новообразованного эпидермиса; в гнойных ранах указанные изменения менее выражены и корректируются при сочетанном использовании гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы.

8. Восстановление барьерной функции кожи протекает более полноценно в ранние сроки при применении обогащенной тромбоцитами плазмы крови в асептических ранах и гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы крови - в гнойных ранах. Сульфгидрильные группы, отражающие процессы стратификации эпидермиса и инволюкрин, как фактор изменения терминальной дифференцировки кератиноцитов демонстрируют тесную корреляционную зависимость от них площади остаточного раневого дефекта (Я =0,98 и 0,67 соответственно для асептических и гнойных ран).

9. Выявлены особенности региональных лейкоцитарных реакций в зависимости от типа течения раневого процесса и метода регионального воздействия, что помимо качественно наблюдавшихся изменений, в виде формирования лейкоцитарного вала, сопровождается увеличением числа тучных клеток. Развитие воспалительной реакции характеризуется увеличением количества тучных клеток в состоянии дегрануляции различной степени. На 1 сут при асептическом течении и применении обогащенной тромбоцитами плазмы выявлено увеличение численности тучных клеток до 2,54 раза, в гнойных ранах -от 2,72 при ее изолированном применении и до 3 раз - сочетанном с гидроимпульсной санацией по сравнению с интактной кожей. Указанные изменение опережают данные спонтанного течения раневого процесса вне зависимости от типа течения.

10. Установлено, что продолжительность дегрануляции тучных клеток зависит не только от объема миграции клеток из системного пула, но и от методов регионального воздействия, способствующих восстановлению общего числа тучных клеток. Отмечается статистически достоверное (р<0,05) увеличение пула дегранулированных клеток в гнойных ранах к 7 суткам - индекс дегрануляции от 40,2 до 70,4% в зависимости от вида регионального воздействия в сравнении с таковым 25,1-30% при асептическом течении. Данные изменения отражают большую вовлеченность тучных клеток как источника медиаторов и гепарина в фибробластическую фазу воспаления в гнойных ранах, особенно при использовании регионального воздействия. Степень выраженности дегрануляции согласовывается с приближением диаметра волокон дермы к значениям интактной кожи, при этом наилучшие результаты выявлялись при использовании сочетанного воздействия гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы.

11. Наибольшая структурно-функциональная реакция тучных клеток выявляется при заживлении гнойных кожных ран в период макрофагальной фазы при селективном действии обогащенной тромбоцитами плазмы крови (индекс дегрануляции возрастает до 1,4 раз - от 63,2% до 88,3% в сравнении с адекватным контролем), в фибробластическую фазу воспаления под действием магнитотерапии (индекс дегрануляции возрастает от 66,5% до 79,1%), при комбинированном

влиянии гидроимпульсной санации и поляризованного облучения (индекс дегрануляции возрастает от 69,0% до 84,6%), а также при комбинированном влиянии гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы крови (индекс дегрануляции возрастает от 66,5% до 80,1%).

12. Предлагается осуществлять прогноз течения экспериментального раневого процесса с использованием разработанной математической модели -системы квадратичных уравнений. В результате использования созданной модели выявлены наиболее значимые количественные маркеры динамики репарации. Установлена нелинейная зависимость планиметрических показателей и прочностных характеристик от морфометрических и гистохимических предикторов как отражение фазного характера системы воспалительных и пролиферативных реакций в ране. Учет влияния динамики отдельных предикторов модели позволяет оптимизировать выбор регионального воздействия с учетом степени инфицированное™ раны.

13. Математическое моделирование прочности регенерата показывает, что в асептических ранах под действием обогащенной тромбоцитами плазмы крови выявляется наилучшее соответствие модельных данных и экспериментальных результатов в динамике образования коллагеновых волокон и уровня РНК (коэффициент детерминации при использовании обогащенной тромбоцитами плазмы и светотерапии 0,99 и 0,97 соответственно, р<0,001). В гнойных ранах наилучшее соответствие данных разработанной модели динамики площади ран отмечено при использовании гидроимпульсной санации и обогащенной тромбоцитами плазмы крови (коэффициент детерминации 0,93, р<0,01).

Практические рекомендации:

1. Количественные показатели клеточного и волокнистого состава регенерата, их соотношение с морфометрическими характеристиками могут быть использованы для обоснования выбора методов регионального воздействия.

2. Разработанные критерии оценки структурно-метаболических изменений в зоне регенерата необходимо учитывать при прогнозировании результативности регенерации.

3. Полученные данные о механических свойствах регенерата при различных видах регионального воздействия позволяют дифференцировать подход при лечении асептических и гнойных ран с целью оптимизации лечебных мероприятий.

4. Установленные структурно-функциональные превращения в тучноклеточной популяции расширяют современные представления о реактивности тучных клеток, раскрывают проявления модулирующего влияния данных клеток на регенерацию тканей в области кожных ран при различной степени инфицированное™.

5. Результаты исследования о репаративной регенерации в зоне кожных ран необходимо учитывать в процессе преподавания анатомии и гистологии кожного покрова, а также соответствующих разделов дерматологии, хирургии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Алексеева Н.Т., Остроушко А.П., Лобцов A.B., Лобас C.B. Морфологическая характеристика тканевой реакции в ране при применении светотерапии / Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко, A.B. Лобцов, C.B. Лобас // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - Воронеж. 2008. - Т. 1, № 1. - С. 51 - 56.

2. Глухов A.A., Скорынин О.С., Алексеева Н.Т. Оптимизация лечения экспериментальных ран путем применения программируемой магнитотерапии / A.A. Глухов, О.С. Скорынин, Н.Т. Алексеева // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - М., 2009. - Т. 8, № 3. - С.697-700.

3. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Скорынин О.С. Морфологическое обоснование применения переменного магнитного поля при лечении ран / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, О.С. Скорынин // Однораловские морфологические чтения: сб. научн. тр. / под ред. проф. Н.Э. Есауленко. - Воронеж, Изд-во ВГУ, 2009. - вып. 8. - С. 288-292.

4. Глухов A.A., Алексеева H.T., Остроушко А.П., Бугримов Д.Ю. Морфофункциональный анализ тканевой реакции при использовании обогащенной тромбоцитами плазмы крови / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко, Д.Ю. Бугримов // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2009. - Т. 8, № 4. - С. 924-926.

5. Глухов A.A., Лобцов A.B., Алексеева Н.Т. Оптимизация лечения ран мягких тканей с применением поляризованного облучения и гидропрессивных технологий / A.A. Глухов, A.B. Лобцов, Н.Т. Алексеева // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2010. - Т. 9, № 1. - С. 253-256.

6. Алексеева H.T., Остроушко А.П. Оценка морфофункциональных реакций при использовании обогащенной тромбоцитами плазмы крови / Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. Приложение. -Воронеж, 2010. - С. 10 - 11.

7. Глухов A.A., Семенов С.Н., Алексеева H.T., Скорынин, О.С. Морфологическая характеристика репаративных процессов в ране после применения переменного магнитного поля / A.A. Глухов, С.Н. Семенов, Н.Т. Алексеева, О.С. Скорынин // Саратовский научно-медицинский журнал. - Т. 6, № 1.-2010.-С. 213.

8. Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологические особенности заживления мягких тканей при применении обогащенной тромбоцитами плазмы / Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Актуальные вопросы организации, оказания первичной, специализированной мед. помощи в условиях многопрофильного стационара и на догоспитальном этапе: матер. IV научн.-практ. конф. Воронеж, 2010. - С. 80 - 82.

9. Глухов A.A., Остроушко А. П., Семенов С.Н., Алексеева H.T., Бугримов Д.Ю. Структурно-функциональные особенности заживления асептических ран мягких тканей при использовании обогащенной тромбоцитами плазмы крови / A.A. Глухов, Остроушко А.П., С.Н. Семенов, Н.Т. Алексеева, Д.Ю. Бугримов // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - Воронеж, 2010. - Т. 3, № 3.-С. 210-213.

10. Алексеева Н.Т., Глухов A.A., Остроушко А.П. Морфологическая характеристика регенераторных процессов в мягких тканях при использовании различных методов регионального воздействия / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов, А.П. Остроушко // Морфология. - 2010. - Т. 137.-№4.-С. 15.

11. Алексеева H.T., Глухов A.A., Лобцов A.B. Особенности процессов регенерации мягких тканей при воздействии поляризованной светотерапии / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов, A.B. Лобцов // Морфология. - 2010. - Т. 137. - № 4. - С. 15.

12. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологическая оценка реакции мягких тканей при лечении гнойных ран в эксперименте / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Журнал теоретической и практической медицины. -2010.-Спецвыпуск. - Т. 8.-С. 56-58.

13. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологическая оценка репаративных процессов при использовании обогащенной тромбоцитами плазмы крови / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Сб. научн. тр. VIII Всероссийская конференция по патологии клетки. - Москва, 2010. - С. 6 - 9.

14. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Анализ динамики морфофункциональных изменений эпидермиса после применения обогащенной тромбоцитами аутоплазмы крови при лечении ран мягких тканей в эксперименте / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Наследие Пирогова: прошлое, настоящее, будущее: научная конференция с междунар. участием. - СПб., 2010. - С. 389.

15. Глухов A.A., Семенов С.Н., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Гистохимический анализ репаративных процессов в асептических экспериментальных ранах при использовании гидроимпульсной санации и тромбоцитарного концентрата / A.A. Глухов, С.Н. Семенов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - Воронеж, 2010. - Т. 3, № 4. - С. 210 - 368 - 372.

16. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Лобцов A.B. Клинико-морфологическое обоснование применения гидропрессивной санации и поляризованного облучения при лечении ран мягких тканей в эксперименте / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, A.B. Лобцов // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. -Воронеж, 2010. - Т. 3, № 2. - С. 133 - 145.

17. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П., Бугримов Д.Ю., Лобцов A.B. Светотерапия и гидропрессивные технологии в лечении ран мягких тканей (клинико-морфологические особенности раневого процесса): монография / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко, Д.Ю. Бугримов, A.B. Лобцов. - Воронеж. - 2010. - 136 с.

18. Глухов A.A., Остроушко А.П., Алексеева Н.Т. Экспериментальное обоснование применения обогащенной тромбоцитами плазмы крови при лечении асептических ран / A.A. Глухов, А.П. Остроушко, Н.Т. Алексеева // Здоровье и образование в XXI веке. Научные и прикладные аспекты концепции здоровья и здорового образа жизни / XI международный конгресс. - М., 2010. - С. 81.

19. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П., Бугримов Д.Ю., Лобцов, A.B. Светотерапия и гидропрессивные технологии в лечении ран мягких тканей / Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П., Бугримов Д.Ю., Лобцов A.B. // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований / матер, конф.: Актуальные вопросы науки и образования. - 2011. - № 7. - С. 29.

20. Глухов A.A., Алексеева Н.Т. Восстановительная реакция кожи при экспериментальном раневом процессе после применения обогащенной тромбоцитами аутоплазмы крови / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева // Успехи современного естествознания / матер.конф.: Гомеостаз и инфекционный процесс. - Египет, 2011. -№ 4. - С. 87 - 89.

21. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологическое обоснование применения тромбоцитарного концентрата для ускорения регенерации в асептических ранах / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Новые технологии в экспериментальной и клинической хирургии / матер, научн.конф. - Саратов, 2011. -С. 53 - 54.

22. Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Оценка восстановительных процессов в коже при применении тромбоцитарного концентрата и гидроимпульсного воздействия / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Ретиноиды / Бабухинские чтения в Орле: матер, научн. конф. -М., 2011.-С. - 127- 132.

23. Glukhov А.А., Bugrimov D.Yu., Alexeeva N.T., Ostroushko A.P. The platelets concentrate usage efficiency in the soft tissues experimental woundscomplex treatment / A.A. Glukhov, Bugrimov D.Yu., N.T. Alexeeva, A.P. Ostroushko // Перспективы науки. - Тамбов, 2011. - № 5 (20). - С. 222 - 225.

24. Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Применение светотерапии в лечении гнойных ран мягких тканей / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Применение лазеров в медицине и биологии / матер. XXXV междунар. научно-практ. конф. - Харьков, 2011.-30-32.

25. Алексеева Н.Т., Глухов А.А., Остроушко А.П. Восстановительные процессы в эпидермисе при использовании различных методов лечения экспериментальных ран мягких тканей / Н.Т. Алексеева, А.А. Глухов, А.П. Остроушко // Вестник новых медицинских технологий. - Тула, 2011. - Т. 18, № 2. С. 91-94.

26. Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Применение программируемой магнитотерапии в лечении гнойных ран мягких тканей / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований / матер, конф. Фундаментальные и прикладные исследования в медицине. - Сочи, 2011. - № 9. - С. 90 - 92.

27. Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Гистоморфологические особенности заживления асептических ран мягких тканей на фоне применения светотерапии / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Применение лазеров в медицине и биологии: матер. XXXVI Междунар. научно-практ. конф. - Судак, 2011. - С. 99 - 101.

28. Глухов А.А., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Особенности регенерации тканей в асептических ранах на фоне применения тромбоцитарного концентрата / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Регенеративная биология и медицина: матер. Всерос. научн. конф. - М., 2011. - С. 47 - 48.

29. Пашков А.Н., Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Цитофотометрическая оценка гистохимических процессов в экспериментальных ранах / А.Н. Пашков, А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Цитофотометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты: матер. VI Всерос. научно-практ. конф. - М., 2011. - С. 4 - 6.

30. Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Восстановительные процессы при заживлении гнойных ран на фоне применения программируемой магнитотерапии / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине / Сб. статей II междунар. научн.-практ.конф. -СПб., 2011.-С.11-13.

31. Семенов С.Н., Глухов А.А., Алексеева Н.Т. Динамика реакционной способности сульфгидрильных групп в герминативных слоях эпидермиса при заживлении экспериментальных ран / С.Н. Семенов, А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева // Морфология, 2011. - Т. 140, № 5. - С. 113-114.

32. Глухов А.А., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Сравнительный анализ восстановительных процессов в асептических ранах на фоне применения программируемой магнитотерапии / А.А. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований / Приоритетные направления развития науки, технологий и техники. - Египет, 2011. -№10.-С. 46-47.

33. Глухов А.А., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Отдаленные результаты регенерации кожи на фоне применения тромбоцитарного концентрата / А.А. Глухов, 38

Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований/Практикующий врач. -2011. -№11.-С. 18-19.

34. Алексеева Н.Т., Глухов A.A. Морфологическая характеристика репаративных процессов в экспериментальных ранах на фоне применения программируемой магнитотерапии / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов // Украинский морфологический альманах / материалы научно-практ.конф. с междунар. участием. -2011.-Т 9 №3 -С. 8- 10.

35. Глухов A.A., Лобцов A.B., Остроушко А.П. Применением системы поляризованного облучения «Биоптрон» и гидропрессивных технологий в комплексе лечения больных с гнойными ранами мягких тканей / A.A. Глухов, A.B. Лобцов, А.П. Остроушко // Материалы V Всероссийской конференции молодых ученых, организованной воронежским, курским и казанским медицинскими вузами. -Воронеж: ИПЦ ВГУ, 2011. - С. 57 - 63.

36. Алексеева H.T., Глухов A.A. К вопросу о роли тучных клеток в процессе заживления ран / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов// Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2011. - Т. 4, № 4. - С. 864 - 871.

37. Глухов A.A., Алексеева H.T., Скорынин О.С., Остроушко А.П., Д.Ю. Бугримов. Магнитотерапия в лечении ран мягких тканей: монография / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, О.С. Скорынин, А.П. Остроушко, Д.Ю. Бугримов. - Воронеж, 2011. - 144 с.

38. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологическая оценка эффективности применения светотерапии в лечении ран мягких тканей / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2012. - № 2. - С. 72-73.

39. Алексеева Н.Т., Никитюк Д.Б., Глухов A.A. Особенности гистохимической реакции микроциркуляторного русла на фоне применения светотерапии при заживлении асептических ран / Н.Т. Алексеева, Д.Б. Никитюк, A.A. Глухов // Ангиология и сосудистая хирургия, 2012.-Т. 18.-С. 10-11.

40. Никитюк Д.Б., Глухов A.A., Алексеева Н.Т. Иммуногистохимическая оценка репаративных процессов в экспериментальных ранах на фоне применения тромбоцитарного концентрата / Д.Б. Никитюк, A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева // Морфология, 2012. - Т. 141, № 3. - С. 114.

41. Никитюк Д.Б., Глухов A.A., Алексеева Н.Т. Морфологическая оценка отдаленных результатов регенерации кожи в экспериментальных ранах после светотерапии / Д.Б. Никитюк, A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева // Международный журнал экспериментального образования, 2012. - № 5. - С. 30 - 31.

42. Алексеева H.T., Никитюк Д.Б., Глухов A.A., Сереженко Н.П. Гистохимические изменения в зоне раневого дефекта в динамике после применения гидроимпульской санации и поляризованной светотерапии / Н.Т. Алексеева, Д.Б. Никитюк, A.A. Глухов, Н.П. Сереженко // Вестник новых медицинских технологий, 2012. - Т. 19, № 2. - С. 82 - 85.

43. Алексеева Н.Т. Отдаленные результаты регенераторного процесса в коже при заживлении асептических ран / Н.Т. Алексеева // Журнал анатомии и гистопатологии. - 2012. - № 2. - С. 15-18.

44. Алексеева Н.Т, Глухов A.A., Остроушко А.П. Гистохимическая характеристика эпидермиса при заживлении асептических ран на фоне магнитотерапии / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов, А.П. Остроушко // Современные наукоемкие технологии. - 2012. - № 8. - С. 7-8.

45. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологическое обоснование применения тромбоцитарного концентрата и гидроимпульсной санации при лечении гнойных ран мягких тканей / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Раны и

раневая инфекция: I международный конгресс посвященный 90-летию проф. Б.М. Костюченка. - Москва, 2012. - С. 267 - 268.

46. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Лобцов A.B. Отдаленные результаты применения светотерапии при лечении ран / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, A.B. Лобцов // Применение лазеров в медицине и биологии: матер. XXXVIII Междунаар. научно-практ. конф. - Ялта, 2012. - С. 92 - 94.

47. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Лобцов A.B. Комбинированное лечение гнойных ран мягких тканей с применением поляризованного облучения и гидропрессивной санации / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, A.B. Лобцов // Вестник экспериментальной и клинической хирургии (приложение). - Воронеж, 2012. - С. 15 -17.

48. Алексеева Н.Т., Глухов A.A., Остроушко А.П. Роль клеток фибробластического дифферона в процессе заживления ран / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов, А.П. Остроушко // Вестник экспериментальной и клинической хирургии.

- Воронеж, 2012. - Т. 5, № 3. - С. 601 - 608.

49. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфологическое обоснование применения тромбоцитарного концентрата при лечении ран мягких тканей / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Успенские чтения: матер.научн.-практ. конф. врачей России с междунар.участием, посвящ. 75-летию Тверской областной клинической больницы. - Тверь, 2012. - С. 28.

50. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Лобцов A.B. Комбинированное применение поляризованного облучения и гидропрессивной санации в лечении пациентов с гнойными ранами мягких тканей / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, A.B. Лобцов // Инновационные технологии медицинской реабилитации в клинике и санаторно-курортной практике: материалы юбилейной межрегиональной научно-практической конференции. - Воронеж: Кварта, 2012. - С. 141-146.

51. Глухов A.A., Алексеева Н.Т., Остроушко А.П. Морфофункциональные изменения в тканях при заживлении ран на фоне применения тромбоцитарного концентрата / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко // Новости хирургии.

- 2013. - Т. 21, № 1. - С. 15 - 22.

52. Глухов A.A., Фролов Р.Н., Алексеева Н.Т., Андреев A.A. Гистохимическая характеристика восстановительных процессов при заживлении ран / A.A. Глухов, Р.Н. Фролов, Н.Т. Алексеева, A.A. Андреев // Фундаментальные исследования. -2013. - №7 (часть 1). - С. 55 - 60.

53. Глухов A.A. Лечение ран с применением гидроимпульсных технологий и аутоплазмы крови: монография / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева, А.П. Остроушко. -Воронеж, ИПЦ «Научная книга», 2013. - 159 с.

54. Alexeeva N.T., Nikityuk D.B. The morphology of a skin wound in the course of the treatment by light therapy / N.T. Alexeeva, D.B. Nikityuk // Euromedica / Internationaler medizinischer kongress. - Gannover, 2013. - P. 22 - 23.

55. Глухов A.A., Никитюк Д.Б., Алексеева Н.Т. Особенности репаративной регенерации в ране при применении светотерапии / A.A. Глухов, Д.Б. Никитюк, Н.Т. Алексеева // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. -2013.-№7,-С. 88-89.

56. Глухов A.A., Фролов Р.Н., Алексеева Н.Т., Андреев A.A. Гистохимические изменения при заживлении ран / A.A. Глухов, Р.Н. Фролов, Н.Т. Алексеева, A.A. Андреев // Журнал анатомии и гистопатологии. - 2013. - Т. 2, № 2. - С. 38 - 43.

57. Алексеева Н.Т., Глухов A.A., Лобцов A.B. Морфологическая характеристика отдаленных результатов применения светотерапии при лечении ран / Н.Т. Алексеева, A.A. Глухов, A.B. Лобцов // Применение лазеров в медицине и биологии / матер. ХХХХ между нар. научно-практ. конф. - Харьков, 2013. - С. 113-114.

58. Алексеева Н.Т., Никнтюк Д.Б., Глухов A.A. Репаратнвная регенерация в зоне раневого дефекта на фоне применения светотерапин / Н.Т. Алексеева, Д.Б. Никнтюк, A.A. Глухов // Морфология. - 2013. - С. 60.

59. Алексеева Н.Т. Морфологические аспекты применения аутоплазмы крови при лечении ран / Н.Т. Алексеева // 1 Национальный конгресс по регенеративной медицине: матер, конгресса. - Москва, 2013. - С. 12.

60. Алексеева Н.Т., Никитюк Д.Б., Глухов A.A. Исследование воздействия различных методов лечения гнойных ран на формирование рубца / Н.Т. Алексеева, Д.Б. Никитюк, A.A. Глухов // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2013. - Т. 6, № 4. - С. 418 - 424.

61. Glukhov A.A., Alexeeva N.T. Morphological assessment of the healing of skin wounds with different methods of regional treatment / A.A. Glukhov, N.T. Alexeeva // Archive Euromedica. - 2013. - V.3, №2. - P. 53.

62. Глухов A.A., Алексеева Н.Т. Оценка морфологической реакции при комбинированном применении гидропрессивной санации для лечения экспериментальных гнойных ран / A.A. Глухов, Н.Т. Алексеева // Хирургическая обработка ран и гнойно-некротических очагов у детей и взрослых / Матер, междунар. научн-практ. конф. - Москва, 2014. - С. 76 - 77.

63. Алексеева Н.Т., Никитюк Д.Б., Глухов A.A. Морфологический анализ применения различных методов регионального воздействия для лечения кожных ран / Н.Т. Алексеева, Д.Б. Никитюк, A.A. Глухов // Морфология, 2014. - Т. 145, № 3. - С. 13.

64. Алексеева Н.Т. Участие клеточного компонента в регенерации раны / Н.Т. Алексеева//Журнал анатомии и гистопатологии. -2014. -Т. 3, № 1. - С. 9 - 15.

65. Алексеева Н.Т. Морфологическая оценка регенерата при заживлении гнойных ран под влиянием различных методов регионального воздействия / Н.Т. Алексеева // Журнал анатомии и гистопатологии. - 2014. -Т. 3, № 2. - С. 14 - 18.

66. Алексеева Н.Т. Применение математического моделирования для комплексной оценки восстановительных процессов при заживлении кожных ран на фоне различных методов регионального воздействия / Н.Т. Алексеева // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 598 - 604.

67. Пат. 105824 РФ : МПК А61В19/00. Устройство для измерения прочности послеоперационного рубца на разрыв в эксперименте / Глухов A.A., Остроушко А.П., Алексеева Н.Т.

Подписано в печать 20.01.2015. Формат 60 х 84/16. Усл. печ. л. 2,44. Тираж 100 экз. Заказ 6.

Отпечатано в типографии ООО ИПЦ «Научная книга» 394026, г. Воронеж, Московский пр-т, 116 Тел. +7 (473) 200-81-02, 220-57-15 http://www.n-kniga.ru. E-mail: zakaz@n-kniga.ru