Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональное исследование цитопротекторного действия аланинамидных производных бетулоновой кислоты на модели цитотоксического повреждения органов

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональное исследование цитопротекторного действия аланинамидных производных бетулоновой кислоты на модели цитотоксического повреждения органов"

На правах рукописи

□03058В39

Позднякова Светлана Васильевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ АЛАНИНАМИДНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ БЕТУЛОНОВОЙ КИСЛОТЫ НА МОДЕЛИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ОРГАНОВ

03.00.25- гистология, цитология, клеточная биология 14.00.25- фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Новосибирск - 2007

003058639

Работа выполнена в ГОУ ВПО Новосибирском государственном медицинском университете Росздрава, Новосибирском институте органической химии им Н Н Ворожцова СО РАН, Институте цитологии и генетики СО РАН (г Новосибирск)

Научный консультант

доктор медицинских наук,

профессор Грек Олег Рувимович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор Рябчикова Елена Ивановна

доктор биологических наук Архипов Сергей Алексеевич

доктор биологических наук,

профессор Плотников Марк Борисович

Ведущая организация

ГУ НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (г Новосибирск)

Защита состоится «_»_2007 г в «10 00 » на заседании диссертационного совета Д 208 062 05 при ГОУ ВПО Новосибирском государственном медицинском университете Росздрава, 630091, Новосибирск, Красный проспект, 52

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского государственного медицинского университета (630091, Новосибирск, Красный проспект, 52)

Автореферат разослан «_»_2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета Доктор медицинских наук, профессор

Волков А В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Современные цитостатические средства позволяют добиваться значительных успехов в лечении ряда заболеваний, связанных со злокачественными новообразованиями, но в условиях «жесткой» химиотерашш неизбежно возрастает частота токсических осложнений

Во время химиотерапии структурные поражения печени (Грек О Р и др , 2002, Агеева Т А , 2002, Молодых О П и др , 2006, Zobain М et al, 1999), почек (Арефьева А К и др , 1990, Козловская Л В и др , 2002, Пиманов С И, 2005, Pinnaro Р et al, 1986) и гемодепрессии (Гольдберг Е Д и др , 1999,

2000, Домникова НП и др , 2005) являются основными причинами снижения дозировок цитостатиков, удлинения интервалов между курсами, отсрочки лучевой терапии, что увеличивает вероятность сохранения резидуального клеточного клона и развития рецидива опухоли (Гершанович МЛ, 2001, Акимов М А , Гершанович М Л , 2002, Агеева Т А , 2002)

Все это позволяет понять важность создания системы эффективной защиты клеток, не вовлеченных в опухолевый процесс, от разрушающего воздействия химиотерапии Система защиты здоровых тканей включает в себя повышение резистентности к повреждению и/или увеличение репаративного потенциала

Достижение максимальной эффективности существующих методов лечения злокачественных новообразований связывают, в частности, с перспективой разработки новых фармакологических средств, которые предотвращали бы развитие химиотерапевтических цитотоксических поражений тканей и органов и при этом не снижали антинеопластический эффект цитостатиков (Hoekman К et al, 1999, Гнездилова А В , 2001, Гольдберг Е Д , Зуева Е П , 2002, Звартау Э Э , Птушкин В В , 2004)

За последние десятилетия изучено несколько тысяч потенциальных ци-топротекторов Однако даже наиболее эффективный из них - фосфорилиро-ванный аминотиоловый радиопротектор, амифостин (RW-2721, этиол) нельзя признать идеальным, поскольку препарат способен вызывать системные кумулятивные токсические эффекты (Maism J R, 1998, Jahnukamen К et al,

2001, Машковский M Д , 2006) К тому же данный препарат имеет зарубежное происхождение и с экономической точки зрения доступен далеко не всем больным

Все вышесказанное делает актуальным поиск средств, обладающих широким спектром регулирующих эффектов, повышающих резистентность тканей к повреждению, а также низкой токсичностью и стоимостью

Тритерпеноиды ряда лупана привлекают внимание исследователей широким спектром их медико-биологического действия (Enwerem N М et al, 2001, Kanamoto Т et al, 2001, Zhang Z et al, 2002, Chandramu С et al, 2003) и технологической доступностью бетулина - исходного синтона (Jaaske-lamen Р , 1981, Сымон А В и др , 2003) Суммарные запасы бетулина в природе значительны (Кислицин А Н , 1994) Это позволяет использовать его для получения новых соединений Бетулин легко превращается в аллобету-лин, бетулиновую, бетулоновую кислоты (Флехтер ОБ и др , 2002) Целе-

направленная модификация последних приводит в ряде случаев к получению эффективных соединений, которые обладают более широким спектром действия и сравнительно низкой токсичностью (Флехтер ОБ и др , 2000, 2002, Погребняк А В и др , 2002, Сымон А В и др , 2003) Широкий спектр медико-биологического действия хорошо представлен в основном для разнообразных производных бетулина (Флехтер ОБ и др , 2002, Карачурина JI Т и др, 2003), бетулиновой кислоты (Флехтер ОБ и др , 2004, Sun 1С et al, 2003, Yogeeswan P, Sriram D , 2005) Все это делает актуальным поиск новых биологически активных соединений, включая новые виды активностей и в другом ряду лупановых тритерпеноидов

Новосибирским институтом органической химии им H H Ворожцова СО РАН и Институтом органической химии Уфимского научного центра РАН проведены химические модификации доступного лупанового тритерпеноида - бетулина, выделяемого из коры белоствольных берез, распространенных на территории Российской федерации и обладающею широким спектром биологической активности На его основе синтезированы амиды бетулоно-вой кислоты, содержащие различные аминокислотные остатки у атома С-28 (Петренко H И идр,2002)

Из большого числа амидов в качестве корректоров побочных эффектов цитостатиков нами выбраны оригинальные соединения, предварительно показавшие высокие антиоксидантные свойства (Сорокина ИВ и др, 2003, Жоголь Р А, 2006) Протестированы производные, содержащие в С-28 положении р-аланин [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3 аминопропионовая кислота (АБК) и метиловый эфир [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3 аминопро-пионовой кислоты (МЭАБК)

Цель исследования - выявить закономерности изменений структурных элементов печени и почек, гематологических показателей на модели цито-токсического повреждения органов, оценить морфофункциональные аспекты цитопротекторной эффективности бетулоновой кислоты и ее аланина-мидных производных в этих условиях

Задачи исследования:

1 Изучить характер морфофункциональных изменений в печени и почках, особенности клеточного состава костного мозга и периферической крови при длительном введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных здоровым животным

2 На светооптическом уровне изучить структурные изменения в печени и почках, особенности клеточного состава костного мозга и периферической крови на модели цитотоксического повреждения органов при введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных животным без опухолей и животным с перевиваемыми опухолями

3 Изучить влияние бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных на рост перевиваемых опухолей мышей (лимфомы RLS, карциномы легких Lewis), метастазирование и эффективность экспериментальной химиотерапии опухолей

4 Исследовать роль аиоптогенного и некрогенного действий в противоопухолевом эффекте бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных в сравнении с референтными апоптозиндуцирующими средствами -циклофосфамидом и бетулиновой кислотой в основном опухолевом узле у мышей-опухоленосителей

5 Исследовать уровень цитокинов (ИЛ-1р, ФНО-а, ИЛ-4) в сыворотке крови мышей с карциномой легких Lewis

6 Изучить изменение активности микросомальных монооксигеназ гепа-тоцитов при введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных здоровым животным и животным в условиях модели цитотоксического повреждения органов

7 Выявить механизмы повышения резистентности органов аланинамид-ными производными бетулоновой кислоты к повреждающему действию ци-тостатиков и опухолевого процесса

Научная новизна исследования:

1 Впервые выявлен спектр стереотипных и специфических тканевых изменений, сопровождающих модель программного цитотоксического повреждения органов у экспериментальных животных без опухолей и животных с перевиваемыми опухолями

2 Впервые установлено, что цитотоксические структурные изменения формируются одновременно в стромальном и паренхиматозном компар-тментах, проявляясь сочетанием нарушений в системе микроциркуляции с альтерацией клеток и снижением уровня регенерации

3 Впервые изучены фармакологические эффекты новых низкотоксичных полусинтетических соединений из группы тритерпеноидов лупанового ряда, [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3-амино-пропионовой кислоты и метилового эфира [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3-амино-пропионовой кислоты, на модели цитотоксического повреждения органов у животных без опухолей и животных с перевиваемыми опухолями

4 Впервые установлено, что бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные, воздействуя на механизмы клеточных повреждений, оказывают положительное влияние на микрогемодинамику в печени и почках, уменьшают выраженность деструктивных процессов в органах, интенсифицируют регенерацию паренхимы печени, корригируют функцию микросомальных монооксигеназ на модели цитотоксического поражения органов в эксперименте

5 Впервые установлена селективность цитопротекторного действия бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных в отношении клеток, не вовлеченных в опухолевый рост

6 Сформулирована концепция механизма цитопротекторного действия исследуемых производных бетулоновой кислоты при осложнениях программной химиотерапии злокачественных опухолей

Теоретическая н практическая значимость

Найдены новые низкотоксичные индукторы микросомальных моноокси-геназ печени (МОП) из класса тритерпеноидов лупанового ряда Результаты исследования могут служить методологической основой для поиска соединений, усиливающих МОП-опосредованные механизмы цитопротекции органов при цитостатической терапии

Наличие антитоксического, антигипоксического, антиоксидантного и ци-топротекторного свойств у новых соединений обосновывает перспективность их дальнейших исследований Результаты исследования могут быть использованы при разработке новых лекарственных средств

• усиливающих механизмы детоксикации организма, опосредованные микросомальными монооксигеназами печени,

• участвующих в программах цитостатической химиотерапии опухолевого роста в качестве селективных цитопротекторов,

• потенцирующих терапевтическое действие противоопухолевых препаратов

Перспективным соединением на расширенные испытания в качестве препарата сопроводительной терапии (цитопротектора) предлагается амид бету-лоновой кислоты, сама бетулоновая кислота - как основа для дальнейших химических модификаций

Основные положения, выносимые на защиту

1 Структурная организация печени и почек, клеточный состав костного мозга и периферической крови у здоровых крыс, длительно получавших бе-тулоновую кислоту и ее аланинамидные производные, сохраняются в пределах контрольных значений

2 Морфофункциональные проявления повреждений в печени и почках, вызванные комплексом цитостатиков, существенно ослабляются при введении исследуемых соединений как животным без опухолей, так и животным с перевиваемыми опухолями

3 Восстановление клеточного состава костного мозга и преодоление лейкопении в периферической крови после цитостатической депрессии ускоряются при введении исследуемых соединений животным без опухолей

4 Бетулоновая кислота и ее производные обеспечивают эффективную коррекцию нарушенной цитостатиками активности микросомальных моно-оксигеназ печени крыс

5 Бетулоновая кислота и оба ее амида не снижают противоопухолевую активность антибластомных препаратов Амид бетулоновой кислоты потенцирует противоопухолевое и антиметастатическое действие комплекса цитостатиков в отношении перевиваемой карциномы легкого Lewis

6 Полученные данные свидетельствуют об избирательности цитопро-текторного действия в отношении клеток, не вовлеченных в опухолевый рост В механизме цитопротекторного действия производных бетулоновой кислоты существенное значение имеют P-450-индуцирующие и антиокси-дантные свойства этих соединений

Апробация диссертационного материала Основные положения диссертации представлены на 2-ом съезде российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003), Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Саратов, 2004), научно-практической конференции с международным участием «Медицина и образование в XXI веке» (Новосибирск, 2004), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Клинико-морфологические аспекты общепатологических процессов при социально-значимых заболеваниях» (Новосибирск, 2004), 2-й всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004), международном семинаре «Медицина XXI века» (Низкие Татры, 2004), всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005), международном симпозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005), Межрегиональной научно-практической конференции «Экспериментальные и клинические исследования новых лекарственных средств» (Томск, 2006)

Работа выполнена в рамках Интегральной программы СО РАН (№146) «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины Фундаментальные основы и их реализация»

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 34 работы, из них 9 в рецензируемых научных журналах согласно Перечню ВАК РФ

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 270 страницах машинописного текста, иллюстрирована 52 рисунками, содержит 35 таблиц, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы Библиографический указатель включает 230 отечественных и 198 зарубежных источников литературы

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследуемые соединения

В работе изучены новые полусинтетические соединения, синтезированные в лаборатории медицинской химии Новосибирского института органической химии СО РАН им Н Н Ворожцова (зав лаб - д х н, проф Э Э Шульц) из бетулина (3-оксо-20(29)-лупен-28-ол) бетулоновая кислота - (3-оксо-20(29)-лупен-28-овая кислота) и два ее пептидных производных, содержащих у атома С-28 р-аланин - 3-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-аминопроппоновая кислота и метиловый эфир 3-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-аминопропионовойкислоты (Петренко НИ и др , 2002)

Исследуемые соединения растворяли ex tempore в водно-твиновом растворе (твин 40) и вводили через зонд в желудок в дозе 50 мг/кг (Сорокина ИВ идр 2003)

Лабораторные животные

Эксперименты проведены на 432 крысах-самках популяции Wistar, массой 180-200 г, 140 мышах-самцах лини C57BL/6 и 70 - линии CBA/Lac массой тела 22-25 г, предоставленных лабораторией разведения экспериментальных животных Института цитологии и генетики СО РАН (г Новосибирск) Животных содержали в пластмассовых ванночках по 10-12 особей в стандартных условиях вивария ЦНИЛ НГМУ (зав лаб - д м н, проф Мичурина С В ) при естественном освещении на гранулированном комбикорме «ПК 120-3» («Лабораторснаб») и воде ad libitum Перед декапитацией, проводимой под эфирным наркозом, животных лишали корма на 12 часов, забор материала проводили в утренние часы

Все манипуляции с лабораторными животными проводили, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (1986)

Экспериментальные модели патологических состояний

В качестве экспериментальной модели исследования использовали ци-тотоксическое повреждение печени, почек и костного мозга комплексом антибластомных препаратов с различными механизмами действия, выбрав классическую химиотерапевтическую программу CHOP (Зарицкий А Ю, Алексеева Б А , 2001) циклофосфан, доксорубицин (гидроксидауномицин), винкристин (онковин), преднизолон

Цитотоксическую модель создавали однократным внутрибрюшинным введением комплекса противоопухолевых препаратов в дозах, равных 1/5 ЛД50, рассчитанных методом графического пробит-анализа (Беленький Л М , 1963) для крыс - циклофосфан («Биохимик», Саранск), - 21 мг/кг, доксорубицин («ЛЭНС-Фарм», Москва) - 2,1 мг/кг, винкристин («Гедеон Рихтер», Венгрия) - 0,04 мг/кг, преднизолон («Гедеон Рихтер», Венгрия) - 2,1 мг/кг массы тела (Мишенина С В , 2002), для мышей с перевиваемыми опухолями - циклофосфан («Биохимик», Саранск) - 50 мг/кг, доксорубицин («ЛЭНС-Фарм», Москва) - 4 мг/кг, винкристин («Гедеон Рихтер», Венгрия) - 0,1 мг/кг и преднизолон («Гедеон Рихтер», Венгрия) - 5 мг/кг массы тела (Каледин В И и др, 2000) Группа контрольных животных получала внутрибрюшинно стерильный изотонический раствор натрия хлорида в том же объеме

В качестве экспериментальных моделей злокачественного роста в работе были использованы опухоли, отличные по гистогенезу, чувствительности к цитостатикам и степени злокачественности - лимфома RLS (RLS) и карцинома легких мышей Lewis (CLL), полученные из банка лаборатории регуляции экспрессии генов Института цитологии и генетики СО РАН г Новосибирска (зав лаб - д б н Т И Меркулова) Опухоли поддерживаются в асцитной форме серийными пассажами на сингенных животных, при внутримышечной перевивке растут в виде солидного узла, спонтанной регрессии не подвергаются

Методы перевивки опухолей Трансплантацию солидных опухолей, RLS и CLL, производили суспензией опухолевых клеток в стерильном изотоническом растворе натрия хлорида (концентрация 2х105 клеток/мл) мышам линий CBA/Lac и С57В1/6, соответственно В эксперименте опухоли перевивали всем животным в мышцы бедра задней лапы в объеме 0,1 мл инокулята Данный раздел выполнен совместно с в н с , к б н Калединым В И и в н с , к м н Николиным В П Поповой Н А (Зав Лаборатории экспрессии генов Института цитологии и генетики СО РАН - д б н Т И Меркулова) Когда опухоли достигали 1 см3 (на 5-й день роста лимфомы RLS и 10-й день роста карциномы легких Lewis) животных делили на группы по 10-12 особей, после чего проводили лечение по соответствующей схеме

Основными критериями оценки противоопухолевого эффекта исследуемых соединений служили динамика и торможение роста опухоли, частота метастазирования, объемная плотность метастазов в органах (печени, почках, легких) и индекс ингибирования метастазирования

Схемы введения изучаемых соединений

Для решения поставленных задач проведено несколько серий экспериментов

Целью 1-й серии экспериментов было исследование характера и выраженности повреждающего действия самими исследуемыми соединениями организма экспериментальных животных по оценке структурной организации печени и почек, клеточного состава костного мозга и периферической крови у крыс при повторном длительном введении им бетулоновой кислоты и ее производных Данный аспект изучали на здоровых крысах в условиях ежедневного перорального введения БК-соединений в течение 7, 14 и 40 дней Острую токсичность изучали на неинбредных мышах Токсикологические исследования проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Хаб-риев Р У , 2005)

Цель 2-й и 3-й серий экспериментов - оценить выраженность миелосу-прессии и характер структурной реорганизации органов (печени и почек), вызванных комбинацией цитостатиков в эксперименте, значимость новых полусинтетических производных БК как корректоров токсических эффектов цитостатиков и самого опухолевого процесса Цитотоксическую модель воспроизводили на животных без опухолей (крысы) и животных с перевиваемыми опухолями (мыши)

Крысы через 1 сутки после введения им комплекса цитостатиков (ПХТ) получали исследуемые соединения на протяжении 7 и 14 дней

Мыши-опухоленосители были поделены на 2 подгруппы одной за 1 сутки до введения исследуемых соединений проводили полихимиотерапию, другие в том же режиме получали БК-соединения в виде монотерапии, без цитостатиков Животных выводили из эксперимента после 7 дней введения исследуемых соединений

В этих же экспериментах (3-я серия) исследовали влияние бетулоновой кислоты и ее амидов на развитие лимфомы RLS и карциномы легкого Lewis у мышей линий СВ A/Lac и С57В1/6

4-я серия экспериментов. В дополнительном эксперименте посчитали необходимым дать предварительную оценку клеточных механизмов противоопухолевого действия бетулоновой кислоты (БК) и ее амида (АБК), уровня цитокинов в сыворотке у мышей с карциномой легких Lewis В гистологических препаратах подсчитывали количество митозов и число клеток, гибнущих в форме апоптоза и некроза (Ahn J M, 1997, Anilkumar T V, et al, 1992) В данном эксперименте мыши линии С57В1/6 с перевиваемой карциномой легких Lewis получали однократно внутрижелудочно БК, АБК и 2 референтных препарата в отношении апоптозиндуцирующих свойств циклофосфамвд -классический (Каледин В И и др , 2000) и бетулиновую кислоту, сходную по химической структуре с исследуемыми соединениями (Fulda S et al, 1998, 2004) Животных выводили ш эксперимента через 48 часов

Для объяснения механизма селективной цитопротекции клеток, не вовлеченных в опухолевый процесс, определяли влияние БК и ее аланинамидных производных на активность некоторых изоформ цитохрома Р-450 (IIIA4, IIE1 и IIC)

5-я серия экспериментов. Для оценки влияния исследуемых соединений на активность микросомальных монооксигеназ печени крыс как на модели цитотоксического повреждения, так и у здоровых животных проведены эксперименты с «однократным» и «многократным» (на протяжении 7 и 14 суток) введением исследуемых соединений В группах «однократного» введения исследуемых соединений здоровые животные за 6 часов до забора материала внутрижелудочно получали БК или ее производные (контроль), а животные, получавшие комплекс цитостатиков - за 6 часов до проведения полихимиотерапии (ПХТ) Забор материала у последних проводился на 7 и 14-е сутки

Оценку влияния исследуемых соединений на активность микросомальных монооксигеназ печени крыс при их «многократном» введении проводили на материале, полученном от животных 1-й и 2-й серий экспериментов

Методы оценки фармакологических эффектов исследуемых соединений

Учитывая отмечаемые в клинике полиорганность и малосимптомность лекарственных поражений органов и тканей было проведено морфологическое исследование пораженных органов (Ушкалова Е А , 2003) Наиболее важными морфологическими показателями, отражающими выраженность деструктивных процессов в печени и почках при повреждении цитостатика-ми, являются дистрофические и некробиотические изменения клеток (Агеева Т А , 2002, Молодых ОН и др , 2006, Подымова С Д, 2006)

Гистологическое исследование

Объектами для светооптического исследования служили печень, почки, легкие и ткань первичного опухолевого узла

Гистологические срезы Печень, почки, легкие экспериментальных животных фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина Для дальнейшей гистологической обработки вырезали из правого легкого и большой доли печени образцы толщиной 3-5 мм путем поперечного рассечения Из левой почки брали продольный срез, охватывающий всю толщину органа от капсулы до лоханки, что обеспечивало попадание в него всех слоев органа

Забранные образцы подвергали стандартной обработке на гистологическом комплексе MICROM («Карл Цейс» Германия) обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, заливали в парафин Гистологические срезы (по 3-4 среза) толщиной 4-5 мкм изготавливали на ротационном микротоме НМ 335Е, окрашивали гематоксилином Лили - Майера и 10 % эозином на автомате HMS 70 (время окраски 1 час 15 мин) (Лилли Р, 1969, Волкова О В , Елецкий Ю К ,1971, Саркисов Д С , Перов Ю Л , 1996) Дополнительно гистологические препараты печени и почек окрашивали полихромным методом ШИК - гематоксилин - оранжевый G (Пирс Э , 1962, Лилли Р , 1969)

Для исследования в световом микроскопе полутонких срезов брали образцы печени объемом 1 мм3, в количестве 7-8 от одного животного, фиксировали в 1% водном растворе 0s04 на фосфатном буфере рН 7,2-7,4 (Millonmg G , 1962), затем обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в эпоновые смолы (Миронов А А и др , 1994, Уикли Б , 1975) От каждого животного получали по пять блоков образцов органов (Непомнящих Л М и др , 1981) Из каждого блока на ультрамикротоме LKB получали полутонкие срезы (1 мкм), которые окрашивали по методу ШИК-азур-эозин

Гистологические и полутонкие срезы были изготовлены в Лаборатории фармакологических исследований Новосибирского института органической химии им НН Ворожцова СО РАН (зав лаб -дбн,проф Толстикова Т Г)

Препараты исследовали в световом микроскопе Axioscop 40 Микрофотографии сделаны на комплексе, состоящем из микроскопа Axioscop 2 plus, фотокамеры AxioCam MRc и компьютера, с использованием программного обеспечения Ахю Vision

Морфометри ческий анализ

Морфометрическое исследование структур органов проводили в соответствии с рекомендациями, изложенными в многочисленных работах, посвященных теоретическому обоснованию и конкретным примерам применения этого метода (Перов Ю Л , 1984, Автандилов Г Г , 1990, 2002, Непомнящих Л М и др , 1984, 2003)

Определение структурной организации забранных органов проводили при увеличении микроскопа х400 или хЮОО с использованием вмонтированной в окуляр сетки на 289 точек Подсчет проводили в 10-15 полях зрения каждого препарата от 10 животных в каждой из указанных выше групп Тем самым было выполнено по 100-150 определений морфометрических параметров соответствующих структур органов на группу экспериментальных животных (Непомнящих JIM и др , 1981)

На гистологических препаратах печени подсчитывали объемную плотность (Vv) гепатоцитов с дистрофическими и некротическими изменениями, синусоидов, цитоплазмы и ядер гепатоцитов, численную плотность (Nai) двуядерных гепатоцитов, синусоидальных клеток, на гистологических препаратах почек - объемную плотность (Vv) эпителиоцитов канальцев с дистрофическими и некротическими поражениями, интерстициальной ткани и просвета канальцев У мышей с перевиваемыми опухолями дополнительно оценивали объемную плотность (Vv) метастазов в гистологических препаратах печени и почек у животных с перевиваемой лимфомой RLS, в препаратах легких и печени - у мышей с карциномой легких Lewis Морфологическое определение митозов и апоптоза в опухолевой ткани

На гистологических препаратах первичного опухолевого узла подсчитывали численную плотность лттозов и апоптозных телец на 1000 опухолевых клеток Дифференцирование данных объектов проводили на основании специфических морфологических изменений цитоплазмы и ядра Клетки, находящиеся в состоянии апоптоза, имеют несколько отдельных фрагментов ядра, находящихся в цитоплазме без нарушения цитоплазматической мембраны (Ahn J М , 1997, Amlkumar Т V . et al, 1992)

Цитологическая оценка лейко- и миелограмм.

Определяли общее количество лейкоцитов в периферической крови и проводили ог^енку лейкограмм традиционными гематологическими методами (Меньшиков В В , 1987)

Подсчет общего количества миелокариоцитов и приготовление мазка костного мозга для подсчета миелограмм (качественный состав) проводили согласно рекомендациям Гольдберга ЕД с соавторами (1992)

Биохимические методы исследования Оценка выделительной функции почек.

Крыс помещали на 24 ч в метаболические клетки и в спонтанном режиме собирали суточную мочу, в которой определяли общие свойства мочи плотность мочи, pH, содержание сахара, белка, кетонов, нитритов, уробилиноге-на, билирубина, крови, используя диагностические полифункциональные тест-полоски для анализа мочи (Дека ФАН лейко) по эталонной шкале

В пробах мочи и крови фотометрически определяли концентрацию креа-тинина по реакции с пикриновой кислотой на спектрофотометре СФ-46 По клиренсу эндогенного креатинина рассчитывали скорость клубочковой фильтрации и канальцевую реабсорбцию Расчетные показатели функции почек определяли в соответствии с общепринятыми формулами (Наточин Ю В , 1974)

Оценка активности ферментных систем биотрансформации

Активность монооксигеназной системы печени оценивали по скорости микросомального метаболизма тест-субстратов (амидопирина, эритромицина и анилина) в инкубационной среде с добавлением ЗмкМ НАДФ-Н и белка микросом Данный раздел работы выполнен совместно со старшим преподавателем кафедры биохимии НГМУ к м н Жоголем Р А (зав каф биохимии - д м н, профессор Шарапов В И)

Фракцию микросом печени выделяли методом дифференциального центрифугирования (Арчаков А И, 1975)

Методы расчета активности ферментов отдельных форм цитохрома Р-450

Каталитическую активность изоформ P-450IIC и P-450IIIA определяли по скорости нарастания продуктов катаболизма, характерных для данных изоформ тест-субстратов амидопирина, эритромицина (Щербаков В М , Тихонов А В , 1995) Скорость катаболизма указанных соединений оценивали по нарастанию содержания формальдегида при реакции N-деметилирования (количественное содержание выражали в нМоль/мин/мг белка микросом) Количество формальдегида определяли по методу Nash Т (Nash Т, 1953)

Каталитическую активность P-450IIE1 определяли по скорости р-гидроксилирования анилина (Щербаков В М , Тихонов А В , 1995) Оценку р-гидроксилирования проводили по количеству образовавшегося р-аминофенола (Irnrn Y, 1966)

Содержание белка во фракции микросом определяли по методу Lowry О Н и соавт (Lowry ОН et al, 1951) Расчет содержания белка проводили по калибровочной кривой, построенной с использованием бычьего сывороточного альбумина ("Sigma", USA) Содержание белка выражали в мг/мл исследуемого образца

Методика определения IL-lß IL-4 и TNF-a

Определение содержания IL-lß, TNF-a и IL-4 в сыворотке мышей проводили с помощью коммерческих наборов для иммуноферментного анализа (DRG, Германия) Измерения концентраций цитокинов, IL-lß, TNF-a и IL-4, проводили на вертикальном спектрофотометре «Мультискан МСС-340» при длине волны 450 нм Количественное содержание выражали в пкг/мл

Статистическая обработка результатов

Обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ «Microsoft Excel» Для выявления статистической значимости различий использовали параметрический критерий Стьюдента Различия с контролем сравниваемых средних величин считали достоверными при р<0,05 (Гублер Е В , 1978, Лакин Г Ф , 1990)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфофункциональная характеристика печени и почек, клеточный состав костного мозга и периферической крови

при введении бетулоновой кислоты и ее амидов крысам в условиях модели цитотоксического повреждения органов

Проведенные исследования установили, что в результате непосредственного токсического действия комплекса цитостатиков (ПХТ) в дозах 1/5 ЛД50 на 7-е сутки в печени крыс наблюдали морфологические изменения, которые начинались с гемомикроциркуляторных нарушений центральные вены расширены, полнокровны, дилатация и стаз крови в собирательных венах, синусоиды сужены В паренхиме печени наблюдали мелкокапельную липидную инфильтрацию цитоплазмы гепатоцитов

К 14-м суткам эксперимента нарушения гемодинамики нарастали В просветах центральных вен и вен портальных трактов отмечали сладж эритроцитов Отмечали некротическую гибель гепатоцитов, преимущественно в центролобу-лярных зонах В перипортальной зоне долек печени усиливалась дистрофия гепатоцитов отмечалось укрупнение размеров и увеличение количества капель

В условиях применения бетулоновой кислоты и ее производных в печени экспериментальных животных улучшилась микроциркуляция, уменьшилась выраженность деструктивных проявлений (табл 1) К 7-м суткам эксперимента доля гепатоцитов с дистрофическими изменениями уменьшилась у животных, получавших БК и ее производные К этому же сроку происходило и уменьшение зон некрозов в печени животных, которым вводили пептидные производные, АБК и МЭАБК, тогда как у крыс, получавших саму БК -только к 14-м суткам (табл 1)

Восстановление структуры печени у животных, получавших БК и ее производными, сопровождалось нормализацией ядерно-цитоплазматического соотношения Численная плотность двуядерных гепатоцитов, отражающих интенсивность репаративных процессов в печени, к 14-м суткам достигала исходных значений во всех тестируемых группах, тогда как в контрольной группе данный показатель был меньше соответствующего у интактных (табл 1)

Альтеративные изменения наблюдали и в почках крыс Введение комплекса цитостатиков крысам нарушало клубочковую фильтрацию и процессы реабсорбции воды в канальцах почек, что способствовало значительному увеличению сывороточного креатинина (рис 1)

У крыс, получавших БК и ее амидные производные в качестве сопроводительной терапии, концентрация креатинина в сыворотке крови была ниже относительно соответствующего показателя в группе животных после ПХТ, но превышала исходные значения, улучшились процессы реабсорбции и скорость клубочковой фильтрации (рис 1)

Проведенные морфологические исследования показали, что нарушение выделительной функции почек у крыс, совпадало, главным образом, со степенью тубулоинтерстициальных, и в меньшей степени, гломерулярных

Таблица 1

Результаты морфометрического исследование печени крыс, получавших бетулоновую кислоту или ее прошводные

после введения им комплекса цитостатнков (М±ш)

Сроки эксперимента Синусоиды Некрозы Дистрофически щмененные Ядерно-цито плазматиче- Синусоидальные клетки Двуядерные гепатоциты

гепатоциты ское соотношение

УУ„ % УУ„ % УУ„ % Р]/ Р1, уел ед ИУ, N0,, %

Интактные (гр № 1) 25,63±0,83 1,19+0,31 2,78±0,42 0,25±0,009 7,20±0,34 7,74±0,51

Однократное введение комплекса цитостатиков (ПХТ, гр № 2 - контроль)

7 сутки 12,83±0,661 17,90±0,751 62,80±2,311 0,14+0,006* 3,8^0,99* 3,5110,56*

14 сутки 13,74±1,40' 11,31+0,601 64,82±1,151 0,20±0,011 2,67±0,941 4,75±0,461

ПХТ+Бетулоновая кислота (ПХТ+БК, гр № 3)

7 сутки 19,82±0,621,2 17,05+1,191 30,28±4,991,2 0,17±0,00712 4,50±1,20 5,35+0,71

14 сутки 21,51+1,082 1,72±0,632 5,63±0,6012 0,28±0,022 5,14±0,65 б,46±0,52

ПХТ+Амид бетулоновой кислоты (ПХТ+АБК, гр № 4)

7 сутки 14,78±0,771 9,05±0,88123 35,00±2,801'2 0,1610,007* 6,60±1,18 3,3б±0,511

14 сутки 23,22±0,992 7,36±1,1812,3 16,39±0,77123 0,26±0,02 5,58±0,76 6,95±0,562

ПХТ+Метиловый эфир амида бетулоновой кислоты (ПХТ+МЭАБК, гр № 5)

7 сутки 13.59dtO.511 12,86±1,5112'3 41,67±4,2212 0,19±0,011-2 8,51±0,742 3,48±0,621

14 сутки 24,63±1,262 6,14±0,68123 16,47±1,171,2'3 0,31+0,022 8,80±0,82 7,53±0,602

Примечание Р, - число тестовых точек, попавших на структуру, Уу, - объемная плотность структуры (%), - численная плотность (число структур в единице объема), - численная плотность профилей структуры I в площади среза (%) 12,3 - изменения достоверны по отношению к группам животных с соответствующим номером при р< 0,05

Концентрация креатинина в сыворотке крови крыс

Скорость клубочкоеой фильтрации

пхт(г)

ГКТ+БК|3! ПХТ 141 ПХТ+Ма1Л (Я

лталтмы! н]

ГСКТ+АБКН) тТ+МЗАБК

га

Концентрация кретиннна в моче крыс

Канальцевая раабсорбция

ПХТ+БК {30 ГРСГ+АЕК (4] ПХТ+У^К

га

и

^■ггеш чье] 11)

ПХТ 421

ГКТ+ЕК 13) ТХТ+АБК [4] ПХТ+МЗАЕК (51

Рис. I. Влияние БК-Соединений на выделительную функцию почек крыс н гЩетцитостатический период

Примечание: БК - бетулоповая кислота, ДЬК - амид бетулоновой кислоты, МЭДБК - метиловый эфир амида бетулоновой кислоты, ПХТ - комплекс цитостатичесхих препаратов: циклофосфамид, доксорубицин, винкристин, преднизолон.

повреждений Канальцевый эпителий в состоянии дистрофии, щеточная кайма проксимальных эпителиоцитов частично разрушена, отмечали единичные некрозы Просвет канальцев и собирательных трубок, почти на всем протяжении значительно расширен, заполнен белково-клеточными массами, изредка встречали гиалиновые цилиндры В некоторых клубочках отмечали усиленное кровенаполнение, полость капсулы была равномерно расширена

При введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных крысам объемная плотность дистрофических изменений эпителия канальцев животных в этих группах уже к 7-м суткам эксперимента была меньше в сравнении с аналогичным показателем в контрольной группе (ПХТ), но нормализации данного показателя не наблюдали до конца срока исследования Объемная плотность некрозов эпителиоцитов канальцев, уменьшалась к 7-м суткам эксперимента, достигая значений у интактных животных к 14-м суткам исследования во всех опытных группах (животные, получавшие БК-соединения) (табл 2)

В костном мозге крыс после однократного введения комплекса цитоста-тиков наблюдали снижение общего количества миелокариоцитов, сохранявшееся до 14-го дня опыта (рис 2) Гипоплазия костного мозга была обусловлена снижением числа клеток эритроидного и лимфоцитарного ростков костного мозга Число клеток эритроидного ростка восстанавливалось к 14-му дню эксперимента Тогда как, вызванное комплексом цитостатиков угнетение лимфоцитарного ростка кроветворения, сохранялось на протяжении всего срока исследования (рис 2)

Введение крысам производных бетулоновой кислоты привело к ускорению процессов восстановления лимфопоэза и общего количества клеток костного мозга Общее количество миелокариоцитов под влиянием бетулоновой кислоты и ее амида нормализовалось к 7-м суткам, в условиях введения метилового эфира амида бетулоновой кислоты - только к 14-м суткам (рис 2)

В периферической крови крыс динамика общего количества лейкоцитов соответствовала таковой в костном мозге Более интенсивное восстановление относительного числа лимфоцитов наблюдали у крыс, получавших бе-тулоновую кислоту и ее амид (рис 3)

Морфофункциональная характеристика печени и почек, клеточный состав костного мозга и периферической крови при введении бетулоновой кислоты и ее амидов мышам с перевиваемыми опухолями на модели цитотоксического повреждения органов

Обширные опухолевые инфильтраты (на обеих опухолевых моделях) нарушали архитектонику печени В центре и по периферии метастатических очагов в печени наблюдали рассеянные мелко- и крупноочаговые некрозы, отложения фибрина в просвете синусоидов, вокруг опухолевых клеток Эти проявления, по мнению ряда авторов (Наридадзе И Ш, 1989, Лягинский А В, Егоров Б Б, 1989), связаны с нарушениями в системе гемостаза,

Таблица 2

Результаты морфометрического исследования почек крыс, получавших бетулоновую кислоту или се про_ изводные, на модели цито токсического повреждения (М±ш) _

Сроки введения препаратов Просвет канальца Некрозы Дистрофически измененные эпителио-циты Интерстициальная ткань

УУ„ % Уу„ % % %

Интактные (гр № 1) 6,81 ±0,73 0,22±0,10 1,02±0,29 6,88±0,76

Однократное введение комплекса цитостатиков (ПХТ, гр № 2 - контроль)

7 сутки 10,83±0,771 1,87±0,401 8Д0±0,88' 13,39±1,481

14 сутки 8,13+0,82 0,58+0,Об1 13,14+0,381 7,38+0,82

ПХТ+Бетулоновая кислота (ПХТ+БК, гр № 3)

7 сутки 9,62±1,03 0,51±0,0712 5,49±0,84! 7,63±0,912

14 сутки 7,68±0,81 0,36±0,14 3,63±0,2612 6,01±0,71

ПХТ+Амид бетулоновой кислоты (ПХТ+АБК, гр № 4)

7 сутки 8,78±0,95 0,27±0,122 4,86±0,4512 8,98±0,992

14 сутки 7,86±0,84 0,24±0,052 4,53±0,2012 8,14±0,95

ПХТ+Метиловый эфир амида бетулоновой кислоты (ПХТ+МЭАБК, гр № 5)

7 сутки 8,13±0,86 0,41±0,142 4,80±0,531'2 ПЩ±\,191

14 сутки 6,82+0,71 0,23±0,052 4,11±0,1812 7,36±0,85

Примечание Р! - число тестовых точек, попавших на структуру, Уу, - объемная плотность струкгуры (%), Ыу, -численная плотность (число структур в единице объема), Йа, - численная плотность профилей структуры I в площади среза (%)

12 3 - изменения достоверны по отношению к группам животных с соответствующим номером при р< 0,05

Общее количество миелокариоцитов

Лимфоциты

ГКТ Н ГКТ+ЕК Его

и

ПХТ+БК £35

ПХТ+АьК (4)

(Я

Рис. 2. Общее количество миело кар ион шо и и лимфоидных клеток в костном мозге крыс в посгцито стагич ее к и й период

Общее количество лейкоцитов

Ияг«г1м|1) тока ПХТ+БК М ПХГ+АбКЦ) ПХТ+МЭАЕК

15)

Пимфоциты

14 П ГГЛ

■ II 11 1 и, п

Инг*тиые(1) пхт (2) ГИТ+БК (3) '"•I .Л-,- (4) ГКТ+МЙАБН

(Я

Рис. 3. Общее количество лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови крыс в постцито статический период

Примечание: БК - бету ломовая кислот, АЬК - амид бегу ло попой кислоты, МЭАБК - метиловый эфир амида бетулоновой кислоты, ПХТ- комплекс щггост этических препаратов: циклофосфамил, доксорубицип. виккристин, преднизолон.

играющей важную роль в метастазировании и генерализации опухолевого процесса

У мышей с перевиваемой лимфомой RLS паренхима печени находилась в состоянии дистрофии, формировались моноцеллюлярные некрозы (табл 3), холестаз

Таблица 3

Результаты морфометрического исследования структурных изменений в печени

мышей с перевитой лимфомой RLS (Объемные плотности - Vv„ %; M±m)

Группа Дистрофические изменения Некротические изменения Синусоиды

1 Контроль (без лечения) 58,84±1,46 19,85±3,37 11,63+0,51

2 ПХТ 43,58±3,311 38,63+0,63' 9,90+1,27

3 ПХТ+БК 48,27±2,42 26,67±2,642 11,39±0,76

4 ПХТ+АБК 51,85±2,15 17,55±1,5923 14,13±1,142

5 БК 45,б9±2,69 29,46±1,342 12,91+1,34

6 АБК 56,63+1,492 18,28±2,0825 11,87±0,92

Примечание БК — бетулоновая кислота, АБК - амид бетулоновой кислоты, ПХТ - комплекс цитостатических препаратов циклофосфамид, доксорубицин, винкри-стин, преднизолон

1 2 3 - изменения достоверны по отношению к группам животных с соответствующим номером при р< 0,05

При самостоятельном применении (в виде монотерапии) исследуемых соединений у мышей-опухоленосителей не происходило уменьшение зон деструктивных изменений в печени в сравнении с аналогичной величиной в контроле (табл 3) Несколько улучшилась метаболическая функция гепато-цитов, о чем свидетельствовало увеличение содержания в них гликогена

Однократное введение цитостатиков мышам с перевиваемой лимфомой RLS сопровождалось дальнейшим нарушением структуры печени наблюдали увеличение объемной плотности зон некрозов, развивалась дистрофия преимущественно баллонная, гликоген определялся в виде мелких глыбок, лейкоцитарной инфильтрации не наблюдали (табл 3)

Явления гепатоцеллюлярного холестаза у мышей с лимфомой RLS, получавших БК-соединения после цитотоксического повреждения, были менее выражены, увеличено содержание гликогена в гепатоцитах по сравнению с животными, получавшими только цитостатическую терапию Во всех группах отмечена тенденция к восстановлению объема синусоидального русла, как следствие уменьшения явлений дистрофии гепатоцитов, и признаков холестатического поражения

Введение в схему лечения БК или АБК способствовало уменьшению объемной плотности зон некрозов в печени мышей-опухоленосителей в сравнении с аналогичным показателем в контрольной группе животных (табл 3) Полученные данные согласуются с результатами биохимических анализов, которые показали уменьшение уровней щелочной фосфатазы, трансаминаз в сыворотке крови этих мышей, что является показателем снижения степени некробиотических повреждений клеток печени (Сорокина ИВ и др , 2004) Указанные положительные сдвиги проявлялись наиболее ярко у мышей, которые получали АБК

В почках мышей-опухоленосителей (контрольная группа) также наблюдали развитие тубулоинтерстициального нефроза, обусловленного наличием опухоли и метастатическим поражением органа мелкоочаговые метастазы, локализованные периваскулярно или диффузно в интерстициальной ткани, сдавливающие часть канальцев В канальцевом эпителии почек мышей с лимфомой RLS наблюдали дистрофию и десквамацию эпителиоцитов, фрагментацию щеточной каймы В просвете канальцев обнаружены слущенные клетки, фрагменты щеточной каймы, единичные гиалиновые цилиндры

При самостоятельном применении БК-соединений у мышей с перевиваемыми опухолеми БК и АБК уменьшили объемную плотность зон некрозов в почках относительно такового показателя у мышей контрольной группы (табл 4)

Таблица 4

Результаты морфомстрического исследования структурных изменений в почках у животных с перевитой лимфомой RLS _ (Объемные плотности - Vv,, %; M±m)__

Группа Дистрофические изменения Некротические изменения Просвет канальцев Интерсти-ционная ткань

1 Лимфома (контроль) 53,48±1,93 19,24±1,03 14,12±0,65 7,13±0,60

2 ПХТ 49,73±2,42 24,85±0,761 13,41±1,74 6,92+0,99

3 ПХТ+БК 62,17±1,972 13,06±1,2121 12,98±0,93 5,94±0,44

4 ПХТ+АБК 69,51±2,372'1 7,18±0,7312'3 9,62±0,421,3 6,98±0,30

5 БК 58,74+0,892 11,33±0,9821 14,84±1Д7 8,10±0,51

6 АБК 67,68±2,5221 9,42±0,9112 9,97±0,6612 6,83±0,81

Примечание БК - бетулоновая кислота, АБК - аланинамидное производное бету-лоновой кислоты, МЭАБК - метиловый эфир аланинамидного производного бетуло-новой кислоты, ПХТ - комплекс цитостатических препаратов циклофосфамид, док-сорубицин, винкристин, преднизолон

12 3 - изменения достоверны по отношению к группам животных с соответствующим номером при р< 0,05

Проведение полихимиотерапии мышам с лимфомой RLS осложняло течение нефроза и сопровождалось нарастанием альтеративных изменений за счет увеличения доли некрозов в эпителии канальцев (табл 4) Эпителиоци-ты были отечные, просвет проксимальных канальцев полностью заполнен некротизированной щеточной каймой, а также клеточным детритом Отмечали незначительное по сравнению с контрольной группой увеличение объема просвета канальцев, обусловленное некробиотическими изменениями канальцевого эпителия Выраженный отек интерстициальной ткани, вероятно, способствовал еще большей ишемии клеток канальцевого эпителия

Под влиянием изучаемых тритерпеновых соединений, вводимых мышам-опухоленосителям на фоне полихимиотерапии, отмечали уменьшение структурных повреждений в почках Это проявлялось снижением доли очаговых некрозов канальцевого эпителия, восстановлением просвета канальцев и объемной плотности интерстициальной ткани Отмеченные положительные изменения наиболее ярко выражены в группе мышей, которым вводили амид бетулоновой кислоты В почках этих животных методом морфометрического анализа выявлено уменьшение объемной плотности некротизированных эпителиоцитов В группе животных, получавших бетулоновую кислоту, аналогичные сдвиги проявлялись в меньшей степени, чем у животных получавших амид бетулоновой кислоты (табл 4)

У мышей с карциномой легких Lewis альтеративные изменения в печени также характеризовались выраженными дистрофическими и некробиотическими изменениями гепатоцитов, нарушениями микроциркуляции В просвете синусоидов - опухолевые и лейкоцитарные клетки Гликоген в клетках сохранялся в виде мелких глыбок Большая часть гепатоцитов у мышей с карциномой Lewis - в состоянии дистрофии (табл 5)

При самостоятельном применении исследуемых соединений только АБК уменьшил объемную плотность некрозов в сравнении с аналогичным показателем у контрольных мышей с перевиваемыми опухолями

Применение БК и АБК, но не МЭАБК в качестве терапии сопровождения уменьшало объемные плотности зон некрозов относительно группы ПХТ В экспериментах на мышах с перевиваемыми опухолями отмечали гепатопро-текторные свойства амидов бетулоновой кислоты (АБК и МЭАБК) и самой бетулоновой кислоты - уменьшение объемной плотности некрозов и увеличение содержания гликогена, косвенно указывающего на улучшение специфических функций гепатоцитов, участвующих в лекарственном метаболизме (Лукьянова Л Д , 1985)

Что касается гематологических показателей, то у всех животных с перевиваемыми опухолями, наблюдаемые нарушения соотношения между ростками кроветворения были выражены в большей степени, чем у крыс без опухолей Показатели общего количества клеток периферической крови и костного мозга в группах мышей с лимфомой RLS, леченных БК-соединениями, в основном не отличались от соответствующих значений в контроле (мы-шей-опухоленосителей) Назначение БК и ее производных животным с пере-

витой карциномой легких Lewis также не имело эффекта на изучаемые показатели костного мозга и периферической крови

Таблица 5

Результаты морфометрического исследования структурных изменений в печени у животных с перевитой карциномой легких Lewis (Объемные плотности - Vv„ %; M±m)

Группа Дистрофические изменения Некротические изменения Синусоиды Лейкоцитарная инфильтрация

1 Контроль (без лечения) 64,89±1,31 8,30±0,11 19,36+0,73 1,75±0,51

2 ПХТ 62,50±0,25 14,59±0,631 15,43±0,511 3,25±0,52

3 ПХТ+БК 63,09±0,48 6,86+0,68*2 20,17±0,542 4,78±0,56х

4 ПХТ+АБК 65,34+1,24 4,78±0,18123 20,99±0,932 2,48±0,7823

5 ПХТ+МЭАБК 61,64+0,30 13,87±1,341 17,21±1,12 2,57+0,57

6 БК 64,23±0,34 10,84±0,301,23 18,70±0,28 2,02±0,27

7 АБК 63,99±0,65 4,08±0,41126 27,37±0,411,2 1,27±0,21

8 МЭАБК 64,08±0,43 9,35+0,562 18,86±0,72 2,50±0,23

Примечание БК - бет>лоновая кислота, АБК - аланинамидное производное бету-лоновой кислоты, МЭАБК - метиловый эфир аланинамидного производного бетуло-новой кислоты, ПХТ - комплекс цитостатических препаратов циклофосфамид, док-сорубицин, винкристин, преднизолон

1,:2'3 - изменения достоверны по отношению к группам животных с соответствующим номером при р< 0,05

Проведение программной химиотерапии мышам-опухоленосителям (с лимфомой RLS и карциномой легких Lewis) индуцировало более глубокую депрессию эритроидного и лимфоидного ростков гемопоэза по отношению к соответствующим данным, полученных у контрольных мышей с перевиваемыми опухолями

Согласно многочисленным работам Гольдберга Е Д с соавторами (1990, 1991, 1995, 1998, 1999, 2000) продолжительная депрессия эритроидного и лимфоидного ростков костного мозга объясняется, видимо, повреждающим действием комплекса цитостатиков непосредственно на коммитированные клетки-предшественники эритроидного и лимфоцитарного ростков кроветворения, неодинаковой чувствительностью элементов гемопоэзиндуци-рующего микроокружения

БК-соединения показали слабое стимулирующее действие на костномозговой эритро- и лимфопоэз, подавленные комплексом цитостатиков у мы-

шей-опухоленосителей, у которых, вероятно, были нарушены основные ре-гуляторные механизмы гомеостаза У мышей с перевиваемыми опухолями наблюдали только нормализацию соотношения молодых и зрелых клеточных форм эритроидного и миелоидного ростков в костном мозге

Таким образом, исследуемые соединения предупреждали нарушение ге-момикроциркуляции в органах, развитие повреждений в тканях печени, почек, вызванных цитостатиками как у крыс, так и у мышей с перевиваемыми опухолями, ускоряли восстановление количества клеток костного мозга и периферической крови, прежде всего, лимфоидного ростка у крыс, но не у мышей-опухоленосителей, где нарушена регуляция компенсаторных процессов

Противоопухолевое и антиметастатическое действия БК-соединений

Влияние БК-соединепий на развитие лимфо мы RLS

Комплекс цитостатиков показал слабую противоопухолевую активность в отношении лимфомы RLS Введение АБК в схему терапии усилило противоопухолевую эффективность антибластомных химиопрепаратов (рис 4а)

При самостоятельном применении БК-соединений эффекта БК и ее производных на рост первичного опухолевого узла лимфомы RLS не обнаружено (рис 46)

Показатели процесса метастазирования в печень у мышей, леченных БК-соединениями, как в качестве сопроводительной терапии, так и при самостоятельном применении соответствовали контрольным значениям В то же время, у мышей, получавших АБК в постцитостатический период, наблюдали уменьшение объемной плотности метастазов в почках по сравнению со значениями у животных-опухоленосителей после ПХТ (рис 5) Влияние БК-соединений на развитие карциномы легких Lewis БК и ее оба амида, применяемые самостоятельно для лечения животных с карциномой легких Lewis, не влияли на развитие основного опухолевого узла (рис 66) АБК усиливал эффект ПХТ, увеличивал процент торможения роста опухоли Остальные соединения не оказывали значимого влияния на антибластомную активность комплекса цитостатиков (рис 6а)

В печени у мышей с карциномой легких Lewis, леченых БК и ее производными в комбинации с ПХТ, объемная плотность метастазов не отличалась от таковой в группе животных, получавших только цитостатики, тогда как при изолированном применении АБК наблюдали ингибирование процесса метастазирования У мышей данной группы (АБК) объемная плотность метастазов в печени была ниже, чем в других группах (рис 7)

БК-соединения повышали эффективность классической цитостатической химиотерапии в отношении метастазирования карциномы легких Lewis в легкие При изолированном применении БК и АБК также показали высокий индекс ингибирования метастазирования в легкие Особенно это было характерно для АБК (рис 7)

Сутки

О у ту

а о

Рис. 4. Динамика роста внутримышечных трансплантантов лимфомы RLS у мышей линии CBA/Lac. получавших ЬК-соединения

Печень

БК-соединения

П ХТ+ БК-соединения

БК-соед мнения

Г1ХТ+БК- соединения

Рис. 5. Объемная плотность метастазов лимфомы RLS легкого 8 печени и лег ких мышей линии CDA/Lac,

получавших БК-соединеняя

Почки

□ Контроль ОБК

□ АБК о ПХТ

■ ПХТ+БК

□ ПХТ+АБК

Примечание: ЬК - бетулоновая кислота. АБК - амид бетулоновой кислоты, МЭАЬК - метиловый эфир амида бетулопстон кислоты, ПХТ - комплекс цигост атических препаратов: цихлофосфамид, доксорубяцин, винкристин, иреднизолон.

- Контроль

- - -А — * ПХТ+БК

--X--- ПХТ+АЬК

--•--ПХТ+МЭАЕК

^-------*---- *

♦—

■ - - ' БК

А- - -ASK

• — - МЭАБК

to

СП

Рис. 6. Динамика роста внутримышечных трансплантантов карциномы легких Lewis у мышей линии С57В1/6, получавших БК-соедмнения

Печень

'нЬ'/'рт»! ь I >j

П ЕХ И D А£К W D ЧЭАБК i ll ■ ТОТ (5) в 'КТ+ЬК 1'м • ГЯТ+А5К {7)

п I-1+мэабк

Легкие

БК-соеди нения

ПХТ+БК-с овдинения

БК-соединвния

П ХТ+Б К-с оеди н ен и я

Рис. 7. Объемная плотность метастазов карциномы легких Lewis н печени и легких мышей линии С5 7В1/6.

получавших БК-соединен и я

Примечание-. БК - бетулоновая кислота, АБК - амид бетулоновой кислоты. МЭАБК - метиловый эфир амида бетулоновой кислоты, ] 1ХУ - комплекс цитостатических препаратов: цаклофосфамид, доксорубицин, винкр истин, ирсднизолон.

Таким образом, в экспериментах на моделях перевиваемых мышам лим-фомы RLS и карциномы легких Lewis не отмечено стимулирующего эффекта БК-соединений на рост первичных опухолей и развитие процесса метаста-зирования При применении АБК наблюдали достоверное увеличение противоопухолевого и антиметастатического действий комбинации цитостати-ков в отношении карциномы легкого Lewis Следует отметить, что введение АБК вызывало достоверное ингибирование процесса метастазирования карциномы легкого Lewis в легкие и печень мышей Прослеживалась тенденция к торможению роста основных опухолевых узлов - лимфомы RLS и карциномы легких Lewis Метилирование карбоксильной группы амида бетулоно-вой кислоты приводит к потере ее антиметастатической активности

Исследование клеточных механизмов противоопухолевого действия амида бетулоновой кислоты

Исследование клеточных механизмов действия БК и АБК на карциноме легких Lewis показали, что противоопухолевый эффект при их однократном введении реализуется через различные механизмы Как показали результаты морфометрического исследования через 48 ч после введения препаратов воздействие АБК, наряду с увеличением числа апоптотических телец, сопровождалось уменьшением количества митозов в основном опухолевом узле (табл 6) Бетулиновая кислота и БК также индуцировали гибель клеток в данной опухоли по типу апоптоза, хотя в значительно меньшей степени, чем АБК Циклофосфамид наряду с индукцией апоптоза вызывал некроз опухолевых клеток в большей степени, чем БК-соединения (табл 6)

Таблица 6

Клеточные механизмы противоопухолевого действия БК-соединеннй при карциноме легких Lewis (численная плотность, Na„ M±m)

Группа наблюдения Апоптотические тельца Некроз Митозы

1 Контроль (без воздействия) 1,68±0,22 22,04±4,79 2,37±0,64

2 Бетулиновая кислота 16,32±2,91 1,49±0,19

3 Бетулоновая кислота ЭДЗнЮ^1 9,06±1,13 2,03±0,45

4 Амид бетулоновой кислоты 8,01±0,78123 13,16±2,77 0,54+0,1912

5 Циклофосфамид 5,66±0,991 16,92±2,77 1,Ю±0,45

Примечание 1 2 — достоверные отличия в отношении группы с соответствующим номером, при р<0,05

Ано1 [тогенное действие препаратов сопровождалось снижением концентрации основного провоспалительного цитокина (1Ь-1|3) после введения бе-тулиновой, бетулоновой (БК) кислот и амидного производного бетулоновой кислоты (АБК), тогда как через 48 часов после введения циклофосфамида, реализующего свой противоопухолевый эффект на данных моделях через аиоптоз и некроз, высокие концентрации данного цитокина сохранялись (рис. 8). Последнее, вероятно, связано с важной ролью в инициации воспаления 1Ь-1р, который активирует эндотелий и лейкоциты, усиливая экспрессию адгезивных белков, оказывает выраженное праймирующее действие на нейтрофилы, существенно увеличивая уровень продукции фагоцитами активных форм кислорода.

•ххю

Э500

эооо

с 2500 •Ь 2000

с 1Б00 10С0 500

о

Ксмтропъ

'(д.'" у кислота

■ •

Л&К ЦуКПОфСефЕМЦС,

гоо

150 100 50 О

ш _

4-

Каттропь

Б^т-^п^веэя киопстэ

АБК

Цикл оф схфам^ц

ИЛ-4

Циклофосфамед

Рис. S. Концентрация цитокинов в сыворотке крови мышей с карциномой легких Lewis Примечание. БК - бетулоновая кислота, ЛБК — амид бетулоновой кислоты.

Таким образом, проапоптотическое действие амида бетулоновой кислоты совпадало со снижением концентрации как макрофагальных цитокинов -ИЛ-1р и ФНО-а, так и ИЛ-4, ответственного за гуморальный иммунитет

Активность Р-450 - зависимых монооксигеназ печени при введении бетулоновой кислоты и се амидов здоровым животным и животным на модели цитотоксического повреждения органов

Известно, что монооксигеназная система печени, участвуя в метаболических превращениях противоопухолевых препаратов, играет значительную роль в реализации их фармакологического действия Увеличение или уменьшение ее активности приводит к изменению соотношения токсического и лечебного действий цитостатических препаратов (Богуш ТА и др, 2002) К тому же, клеточный метаболизм, такой, как синтез и эстерификация холестерина, образование и конъюгации желчных кислот, превращения билирубина, обмен фосфолипидов и р-окисление жирных кислот тесно связаны с системой монооксигеназ эндоплазматического ретикулума гепатоцитов (Посохова Е А , 1995)

В связи с этим проведена оценка активности монооксигеназ в печени у крыс в условиях применения БК-соединений по скорости метаболизма соответствующих тест-субстратов Все БК соединения при введении здоровым крысам показали себя как индукторы изучаемых изоформ цитохрома Р-450 (рис 9)

В условиях цитотоксического повреждения печени наблюдали снижение активности изоформ цитохрома Р-450 - Р-450ПС и Р-450ША4, активность Р-450ПЕ1 не была затронута комплексом противоопухолевых препаратов (рис 10)

БК-соединения ликвидировали ингибирующее влияние ПХТ на систему цитохромов и улучшали детоксицирующую функцию цитохом Р-450-зави-симых монооксигеназ печени (Р-450ПС, 450ША4) у крыс Колебания активности ферментов зависели от длительности применения БК-соединений Многократное введение БК-соединений после цитостатической депрессии цитохром-зависимых монооксигеназ привело не только к восстановлению, но и стимуляции некоторых изоформ цитохрома Р-450 (Р-450НЕ1, 450П1А4) БК и АБК восстановили скорость И-деметилирования амидопирина и эритромицина на все сроки наблюдения Скорость И-деметилирования эритромицина при применении МЭАБК превышала исходные значения на все сроки наблюдения (рис 10)

Скорость р-гидроксилирования анилина превышала контрольные значения в микросомах крыс, получавших пептидные производные — МЭАБК и АБК (рис 10)

Скорость метаболизма амидопирина (Р-45011С)

5

0

1 *

3

*

х

\ 2

Контроль (гр. № 1) БК (гр № 2) АБК (гр. № Э) МЭАБК (гр № 4)

Контроль (гр № 1) ЁК (гр. № 2) АБК (гр. № 3) МЭЛБК (гр № Л)

Скорость метаболизма эр игр о м и ци на 4 Р-4501 ИМ)

МЭАБК (гр. № 4)

Скорость метаболизма анилина (Р-45011Е1)

Контроль (гр N5 1)

БК (гр №2) АБК(гр №3)

Рис. 9. Активность монооксигеназ печени после многократного введения БК-соединений здоровым животным

Примечание: БК - бегулоиовая кислота, АБК - амид бетулоновой кислоты, МГ)АБК - метиловый эфир амида бетулоновой кислоты, Г1ХТ - комплекс цитостати-чееких препаратов: циклофосфамид, доксорубицин, виикристин, преднизолон

□ 7 сутки ■ 14 сутки

Скорость метаболизма амидопирина (P-4501IC)

Контроль {гр. Na ]) ПХТ (гр, Гй 2) ПХТ+БК(гр № Э) Г1Х7+А6К: ГГр № 4) ПХТ+МЭ№К (гр. Ш 5)

Скорость четзбопича &р^Гр0И4ЧИна {P-450II1A4)

Кйгропь(=р. № 1) Пи-1- [ip. Ne 2] ГЭСГ+БК jrp. NSGTI ГМ+АЬК (Гр. ГКТ+МЗДЗК

Скорость метаболизма анилина (P-4501IE1)

I

! s

! I

1 I

Контроль (г p. Nt 1) ПХТ (fp. Na 2) ПКТ+6К (гр. Ni Э> ПХТ+АБК (гр. № 4) ЛХТ+МЭАБК (гр. № 5)

Рис. 10. Активность монооксигеназ печени после ми о го красного введения БК-со единений крысам на модели цитотоксического повреждения

Примечание: БК - бетулоновая кислота, ЛБК - амид бетудоновой кислоты, МЭАБК - метиловый эфир амида бетулоновой кислоты, ПХТ - комплекс цито статических препаратов: циклофосфамид, доксорубицин, винкристин, прелнизолон

Структурная организация печени и почек, клеточный состав костного мозга и периферической крови при длительном введении бетулоновой кислоты и сс амидов здоровым крысам

Первичная токсикологическая характеристика была проведена но алгоритму, изложенному в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Хабриев Р.У., 2005).

7 C/rw 14 сутки '

Острую токсичность исследуемых соединений при пероральном введении определяли на 100 белых беспородных мышах- самцах массой 18-22 грамм Величины ЛД50 доз рассчитывали методом графического про-бит-анализа (Беленький Л М , 1963) Из-за низкой токсичности исследуемых соединений нельзя было определить ЛД50 Максимальная доза соединений, возможная для энтерального введения через зонд и составившая 5000 мг/кг массы тела животных, не вызывала гибели животных

На основании проведенных исследований сделан вывод о том, что данные агенты не обладают токсичностью и могут быть отнесены к IV классу низкотоксичных веществ - LD50 свыше 5000 мг/кг (ГОСТ 12 1 007-76)

Субхроническую токсичность изучали на крысах Назначение БК и ее производных крысам в течение 40 дней в дозах 50 мг/кг не вызывало гибели животных В период проведения опыта и по его завершении у здоровых животных, длительно получавших БК-соединения, не отмечено каких-либо изменений в поведении животных, их отношении к корму Массы органов и привес массы тела животных соответствовали контрольным значениям Пи-рогенного действия не отмечено Соединения не влияли на клеточный состав белой крови, костный мозг представлен всеми ростками кроветворения

Исследуемые соединения не обладали гепатотоксичностью патологических изменений в структуре печени не обнаружили, сохранен регенераторный потенциал печени

Соединения не вызывали гистоморфологических изменений в почках, биохимические показатели функции почек - белок, креатинин, глюкоза в моче, креатинин в сыворотке крови не отличались от соответствующих значений в контрольной группе

Таким образом, в результате выполненного исследования найдены новые селективные протекторы клеток, не вовлеченных в опухолевый рост, при цитостатической терапии злокачественного роста из класса тритерпеноидов лупанового ряда, проявляющие выраженные МОП-корригирующие, нефро-и гепатопротекторные свойства и характеризующиеся антигипоксической, холеретической активностью (рис 11)

При этом исследуемые соединения не симулировали рост перевиваемых опухолей, тормозили метастазирование карциномы легких Lewis в легкие Перечисленные свойства выгодно отличают БК-соединения от классических индукторов МОП (фенобарбитала, бензонала, зиксорина) и корректоров цитостатической терапии (декстразоксана, амифостина) А в связи с безопасностью исследуемых соединений и невысокой себестоимостью, бетулоновую кислоту и ее аланинамидные производные можно рекомендовать как перспективные лекарственные средства

В качестве механизма повышения резистентности органов к повреждающему действию антибластомных средств и повышения противоопухолевой эффективности последних следует рассматривать способность исследуемых соединений нормализовать активность монооксигеназ печени после их депрессии цитостатиками (рис 11) Для оптимального действия цитостатиков необходим некий определенный уровень активности этой ферментной сис-

темы, ниже которой противоопухолевый препарат теряет свою активность и повышается его токсичность (Богуш ТА и др , 2002)

Цитопротективный эффект усиливается улучшением барьерной и мат-риксной функцией мембран клеток, что обусловлено подавлением индуцированного цитостатиками и самим опухолевым процессом ПОЛ (Сорокина ИВ и др , 2004, Жоголь Р А , 2006), выраженным мембраностабилизирую-щим (Мотолова Т И и др , 2005) и противоишимическим свойствами соединений (Шарапов ИВ и др , 2004) (рис 11)

Эти результаты позволяют рассматривать бетулоновую кислоту и ее производные как перспективные фармакологические препараты сопроводительной терапии заболеваний, связанных с опухолевым ростом, повышения эффективности цитостатической химиотерапии

Рис 11 Схема защиты паренхиматозных, органов БК- соединениями и механизмы повреждающего действия цитостатиков, опухолевого процесса

Обозначения МОП - микросомалъные монооксигеназы печени, ПОЛ - перекис-ное окисление линидов

Перспективным соединением на расширенные испытания в качестве ци-топротектора предлагается АБК, сама БК как основа для дальнейших химических модификаций

выводы

1 Бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные при длительном пероральном введении здоровым животным в дозе 50 мг/кг не изменяют гематологические показатели и морфологическую организацию печени, почек

2 Гепато- и нефропротекторные свойства производных бетулоновой кислоты обусловлены восстановлением гемомикроциркуляции, предупреждением развития структурных повреждений органов при исследовании на модели цитотоксического поражения органов у животных без опухолей и животных с перевиваемыми опухолями

3 Бетулоновая кислота и ее производные обеспечивают эффективную коррекцию активности монооксигеназ эндоплазматического ретикулума ге-патоцитов печени крыс, нарушенной цитостатиками, обладают выраженным P-450-индуцирующим эффектом в отношении N-деметилирующей активности изоформ цитохрома P-450IIC, P-450IIIA4 и р-гидрокаптирующей активности цитохрома P-450IIE1 у интактных животных

4 Восстановление клеточного состава костного мозга и периферической крови у крыс после цитостатической депрессии ускоряется при введении животным бетулоновой кислоты и ее амидов

5 Бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные не стимулируют рост опухолей (лимфомы RLS и карциномы легких Lewis), процесс метастазирования и не снижают эффективность базовой противоопухолевой терапии

6 Амид бетулоновой кислоты усиливает противоопухолевое и антиметастатическое действия комплекса цитостатиков в отношении карциномы легкого Lewis, обусловленные усилением апоптотической гибели опухолевых клеток

7 Механизм предупреждения в органах (печени, почках) деструктивных поражений, вызванных антибластомными средствами, и повышения противоопухолевой эффективности базовой противоопухолевой химиотерапии связан со способностью производных бетулоновой кислоты восстанавливать активность микросомальных монооксигеназ печени после их депрессии цитостатиками

8 Найденные биологические свойства бетулоновой кислоты и ее производных делают перспективным поиск в этом ряду соединений, обладающих цитопротекторным и/или противоопухолевым действиями Амид бетулоновой кислоты проявляет более заметные цитопротекторные свойства в сравнении с его метиловым эфиром

Рекомендации по внедрению результатов исследования

Полученные результаты исследования могут быть использованы для дальнейшего целенаправленного химического синтеза новых полусинтетических соединений в ряду бетулоновой кислоты как избирательных цито-протекторов, так и низкотоксичных противоопухолевых препаратов

Результаты исследования по бетулоновой кислоте, амиду бетулоновой кислоты и метиловому эфиру амида бетулоновой кислоты могут быть включены в материалы по доклиническим испытаниям изученных соединений

Материалы диссертации могут быть внедрены в программы лекционных курсов на кафедрах фармакологии, патологической анатомии и патологической физиологии медицинских ВУЗов

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Позднякова С В Изменения функционального состояния почек крыс после цитостатического воздействия / С В Позднякова, В И Майбородина // Фундаментальные проблемы фармакологии сб тез 2-го съезда рос науч об-ва фармакологов (Москва, 21-25 апр 2003 г) М,2003 -Ч 2 - С 90

2 Позднякова С В Изменения клеточного состава периферической крови крыс после цитостатического воздействия / С В Позднякова, В И Майбородина // Фундаментальные проблемы фармакологии сб тез 2-го съезда рос науч об-ва фармакологов (Москва, 21-25 апр 2003 г) М , 2003 -4 2-С 91

3 Грек О Р Эффективность бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных при восстановлении паренхимы печени в постцитостатический период / О Р Грек, С В Позднякова, В С Пронин, И В Сорокина, Е Б Волкова, Н А Жукова, Т Г Толстикова, Н И Петренко, Э Э Шульц, Н В Узен-кова // Медицина и образование в XXI веке тез докл науч -практ конф с междунар Участием (Новосибирск, 21 апр 2004 г)-Новосибирск, 2004 -С 45

4 Грек О Р Коррекция нефротоксического действия цитостатической полихимиотерапии бетулоновой кислотой и ее аланинамидными производными / О Р Грек, С В Позднякова, А С Фунтиков, И В Сорокина, Е Б Волкова, Н А Жукова , Т Г Толстикова, Н И Петренко, Э Э Шульц, Н В Узен-кова // Медицина и образование в XXI веке тез докл науч -практ конф с междунар участием (Новосибирск, 21 апр 2004 г ) - Новосибирск, 2004 -С 44

5 Грек О Р Сравнительные эффекты бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных на процессы регенерации кроветворной ткани при цитостатических миелосупрессиях / О Р Грек, С В Позднякова, А Ю Дер-гачев, И В Сорокина, Е Б Волкова, Н А Жукова, Т Г Толстикова, Н И Петренко, Э Э Шульц, Н В Узенкова // Медицина и образование в XXI веке тез докл науч -практ конф с междунар участием (Новосибирск, 21 апр 2004 г) - Новосибирск, 2004 - С 126

6 Жоголь Р А Активность мембраноповреждающих процессов при тепловой ишемии ткани печени и их коррекция природными антиоксидантами / Р А Жоголь, Т И Мотолова, С В Позднякова, Т Г Толстикова, И В Власова, О Р Грек, В И Шарапов // Медицина и образование в XXI веке тез докл науч -практ конф с междунар участием (Новосибирск, 21 апр 2004 г)-Новосибирск, 2004 - С 58-60

7 Сорокина И В Коррекция побочных эффектов цитостатической полихимиотерапии аланинамидными производными бетулоновой кислоты /ИВ Сорокина, Е Б Бубнова, Т Г Толстикова, Н А Жукова, И В Узенкова, Н И Петренко, Э Э Шульц, С В Позднякова, О Р Грек // Медицина XXI века тез докл междунар семинара (Низкие Татры, 10-24 янв , 2004 г) - Словакия, Низкие Татры, 2004 - С 21-22

8 Сорокина И В Новые пептидные производные бетулоновой кислоты - корректоры токсических эффектов цитостатиков /ИВ Сорокина, Н А Жукова, Е Б Волкова, Т Г Толстикова, Э Э Шульц, С В Позднякова, О Р Грек // Химия и технология растительных веществ тез докл 3-й всерос конфер (Саратов, 7-10 сент 2004 г)-Саратов, 2004 - С 161-163

9 Позднякова С В Бетулоновая кислота и ее аланинамидное производное - перспективные органопротекторы / С В Позднякова, О Р Грек, И В Сорокина, Н А Жукова, Т Г Толстикова, Н И Петренко, И В Каледин, В П Николин, Н А Попова, Е Б Волкова, Э Э Шульц, Н В Узенкова // Компенсаторно-приспособительные процессы фундаментальные, экологические и клинические аспекты материалы 2-й всерос науч практ конф (Новосибирск, 5-7 окт 2004 г) - Новосибирск, 2004 - С 385-386

10 Позднякова С В Реакция фолликулов лимфоидных структур кишечника и брыжеечных лимфатических узлов на введение комплекса противоопухолевых препаратов / С В Позднякова, В И Майбородина, О Р Грек // Компенсаторно-приспособительные процессы фундаментальные, экологические и клинические аспекты материалы 2-й всерос науч -практ конф (Новосибирск, 5-7 окт 2004 г) - Новосибирск, 2004 - С 64-65

11 Жукова Н А Морфологическое исследование эффектов бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных при экспериментальной полихимиотерапии /НА Жукова, С В Позднякова, Т Г Толстикова, Д Е Семенов // Клинико-морфологические аспекты общепатологических процессов при социально-значимых заболеваниях материалы всерос науч -практ конф с междунар участием, посвящ памяти проф Ю Г Целлариуса / Новосибирск ГУ НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН, НГМА МЗ РФ, Ин-т цитологии и генетики СО РАН, 2004 -С 100-101

12 Жукова НА [3-оксо-20-(29)-лупен-28-оил]-3-амино-пропионовая кислота - новое производное бетулоновой кислоты с противоопухолевй активностью /НА Жукова, И В Сорокина, Т Г Толстикова, Э Э Шульц, С В Позднякова, О Р Грек, В П Николин, Н А Попова, С И Ильницкая, В И Каледин // Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии материалы междунар конф и дискуссионного науч клуба-Ялта, Гурзуф, 2004 - С 20

13 Позднякова С В Коррекция гематотоксического действия комплекса цитостатических средств водным экстрактом пятилистника кустарникового / С В Позднякова, О Р Грек, ТА Волхонская//Бюлл СО РАМН-2004 -№ 1 -С 112-115

14 Сорокина И В Бетулоновая кислота и ее производные - новая группа агентов, снижающих побочное действие цитостатиков /ИВ Сорокина, Т Г

Толстикова, H А Жукова, H И Петренко, Э Э Шульц, H В Узенкова, С В Позднякова, О Р Грек, Г А Толстиков // Доклады Академии наук - 2004 -Т 399, № 2 - С 1-4

15 Volkova Е V The influence of betulonic acid and its amides on blood and bone marrow values in postcytostatic period / E V Volkova, N A Zhtukova, IV Sorokina, Tolstikova T G , Petrenko NI, Uzenkova N V, E E Shults, S V Pozdnjakova, О R Grek // 2-nd International Conference on Natural Products and Physiologically Active Substances (ICNPAS-2004) / Novosibirsk, Russia September 12-17, 2004 Poster Presentation -2004 -P 122

16 Майбородин И В Дистопия лимфоидных фолликулов в лимфатических узлах после полихимиотерапии как возможный показатель их регенерации /ИВ Майбородин, В И Майбродина, С В Позднякова, О Р Грек, H В Банул // Клиническая онкология - 2004 - № 2 - С 4-7

17 Майбородин И В Пейеровы бляшки и брыжеечные лимфатические узлы крыс после полихимиотерапии / В Майбородин, В И Майбродина, С В Позднякова, О Р Грек, H В Банул // Клиническая онкология - 2004 -№2 - С 11-15

18 Грек О Р Эффективность бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных при восстановлении паренхимы печени крыс в постцитостати-ческий период / О Р Грек, С В Позднякова, А П Надеев, В С Пронин, H А Жукова, И В Сорокина, Е Б Волкова, Т Г Толстикова // Эксперим и клин фармакология -2005 -Т 68, № 6 - С 49-51

19 Позднякова С В Изучение цитопротекторного и антиметастатического эффектов бетулоновой кислоты и ее аланинамидного производного / С В Позднякова, О Р Грек, В И Шарапов, Р А Жоголь, Т Г Толстикова, И В Сорокина, H А Жукова, H И Петренко, H А Попова, В И Каледин, В П Николин / Современные проблемы фармакологии и фармации тез докл всерос науч-практ конф (Новосибирск, 18-19 мая 2005 г ), - Новосибирск, 2005 - С 117-121

20 Жукова H А Влияние бетулоновой кислоты и ее производного (3-оксо-20(29)-лупен-28-оил)-3-аминопропионовой кислоты на структуру печени мышей с лимфомой RLS /НА Жукова, Д Е Семенов, И В Сорокина, Т Г Толстикова, С В Позднякова, О Р Грек // Бюлл эксперим биол и медицины -2005 - Т 140, № 9 - С 348-351

21 Zhukova N A Effect of Betulonic Acid and its Derivative [3-0хо-20(29)-Lupene-28-Oyl]-3-Ammopropionic Acid on Liver Structure m Mice with RLS Lymphoma / N A Zhukova, D E Semenov , I V Sorokina, T G Tolstikova, S V Pozdnjakova, О R Grek // Bull Exper Biol Med - 2005 - Vol 140, № 3 -P 361-364

22 Жоголь P А Влияние бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных на процессы перекисного окисления липидов в гомогенате и микросомах /РА Жоголь, В И Шарапов, О Р Грек, С В Позднякова, Т Г Толстикова, И В Сорокина // Молекулярные механизмы регуляции функции клеток материалы междунар симп (Тюмень, 12-16 сент 2005 г ) - Тюмень, 2005 - С 117-119

23 Майбородин И В Сходство и различия реакции пейеровых бляшек и брыжеечных лимфатических узлов крыс на полихимиотерапию /ИВ Майбородин, В И Майбродина, С В Позднякова, О Р Грек // Антибиотики и химиотерапия -2005 -Т 50, № 2-3 - С 8-13

24 Позднякова С В Бетулоновая кислота и ее аланинамидное производное - перспективные органопротекторы при химиотерапии опухолей / С В Позднякова, О Р Грек, И В Сорокина, Т Г Толстикова, Н А Жукова, Н А Попова, В И Каледин, В П Николин // Жур эксперим и клин медицины -2005 -№4 - С 53-59

25 Майбородин ИВ Результаты применения водного экстракта Pentaphylloides fruticosa после полихимиотерапии /ИВ Майбородин, В И Майбородина, С В Позднякова, О Р Грек, Н В Банул, Т В Башмакова // Хирургия, морфология, лимфология - 2005 - Т 2, № 4 - С 40-46

26 Сорокина И В Изучение влияния бетулоновой кислоты и ее амидных производных на рост и метастазирование перевиваемых опухолей у мышей / И В Сорокина, Н А Жукова, Т Г Толстикова, С В Позднякова, О Р Грек, Н А Попова, Е М Андреева, В И Каледин, В П Николин // Вопросы биол мед и фармацевтической химии - 2006 - № 1 - С 29-31

27 Жукова Н А Влияние производных бетулина на структуру почки при лимфоме RLS /НА Жукова, Д Е Семенов, И В Сорокина, Т Г Толстикова Т Г, С В Позднякова, О Р Грек // Сиб науч вестн - 2006 - вып IX - С 4951

28 Позднякова С В Активность монооксигеназ печени и биологические эффекты бетулоновой кислоты и ее амидных производных / С В Позднякова, О Р Грек, Р А Жоголь, И В Шарапов, В И Шарапов, И В Сорокина, Т Г Толстикова // Вестник Новосибирского государственного университета Серия Биология, клиническая медицина - 2006 - Т 4 - Вып 3 - С 66-70

29 Позднякова С В Аланинамидные производные бетулоновой кислоты - новые индукторы монооксш еназной системы печени / С В Позднякова, О Р Грек, Р А Жоголь, И В Шарапов, В И Шарапов, И В Сорокина, Т Г Толстикова//Бюл сибирской медицины -2006 -Приложение 2 -С 63-65

30 Позднякова С В Сравнительное изучение нефропротективной активности бетулоновой кислоты и ее производных при экспериментальной полихимиотерапии / С В Позднякова, О Р Грек, А С Фунтиков, Н А Жукова, И В Сорокина, Т Г Толстикова // Журнал экспериментальной и клинической медицины -2006 -№1-2 - С 15-17

31 Майбородина В И Особенности изменений структуры лимфоидных структур тонкой кишки и брыжеечных лимфатических узлов крыс после введения комплекса противоопухолевых препаратов / В И Майбородина, С В Позднякова, О Р Грек, И В Майбородин, В Е Войцицкий, Е В Бабаянц // Журнал экспериментальной и клинической медицины - 2006 - № 1-2 -С 18-24

32 Карева Н П Эффективность миллиметровных волн при восстановлении костного мозга и паренхимы печени в постцитостатический период / Н П Карева, А В Ефремов, М И Лосева, Т А Агеева, С В Позднякова //

Миллиметровые волны в биологии и медицине - 2006 - Т 43, № 3 -С 51-58

33 Позднякова С В Аланинамидные производные бетулоновой кислоты в лечении органотоксического действия цитостатиков / С В Позднякова, О Р Грек, Р А Жоголь, И В Шарапов, В И Шарапов, И В Сорокина, Т Г Толстикова // Сибирский консилиум - 2006 - № 3 - С 90-93

34 Кареева Н П Влияние миллиметровых волн на кроветворную систему в условиях нормы и в постцитостатический период / Н П Карева, А В Ефремов, М И Лосева, Т А Агеева, С В Позднякова // Вестник Новосибирского государственного университета Серия Биология, клиническая медицина -2007 - Т 5 - Вып 1 - С 74-80

Список сокращений используемых в тексте

БК-соединения - бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные

БК - бетулоновая кислота

АБК - аланиамидное производное бетулоновой кислоты

МЭАБК - метиловый эфир аланинамидного производного бетулоновой кислоты

ПХТ - полихимиотерапия

ПОЛ - перекисное окисление липидов

МОП — микросомальные монооксигеназы печени

Подписано в печать 13 04 07 г Формат 60 х 84/16 Уел печ л 2,0 Тираж 100 экз Изд № 25п/07 Заказ № 125п

Оригинал-макет изготовлен издательством «Сибмедиздат» НГМУ г Новосибирск, ул Залесского, 4 Тел (383) 225-24-29 E-mail sibmedisdat@ramblei ru

Отпечатано в типографии НГМУ г Новосибирск, ул Залесского, 4 Тел (383) 225-24-29

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Позднякова, Светлана Васильевна

Список сокращений.

Общая характеристика работы.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Осложнения цитостатической химиотерапии, возможности их профилактики и коррекции.

1.1.1. Гемодепрессии.

1.1.2. Морфофункциональные изменения в печени, возникающие в процессе цитостатического химиотерапевтического лечения.

1.1.3. Морфофункциональные изменения в почках, возникающие в процессе цитостатического химиотерапевтического лечения

1.1.4. Некротическая энтеропатия.

1.1.5. Морфофункциональные изменения в сердце, возникающие в процессе цитостатического химиотерапевтического лечения

1.2. Амифостин.

1.3. Биологическая активность и фармакологическая эффективность тритерпеноидов ряда лупана.

1.3.1. Суммарные препараты березы. Применение их в медицине

1.3.2. Биологическая активность экстрактивных тритерпеноидов из коры березы и их полусингетических производных.

1.3.2.1. Лупеол и его производные.

1.3.2.2. Бетулин и его производные.

1.3.2.3. Бетулиновая кислота и ее производные.

1.3.2.4. Бетулоновая кислота и ее производные.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Исследуемые соединения.

2.2. Лабораторные животные.

2.3. Экспериментальные модели и схемы введения БК-соединений

2.3.1. Моделирование цитотоксического химиотерапевтического поражения органов.

2.3.2. Экспериментальные опухоли.

2.4. Методы оценки фармакологических эффектов исследуемых со- 76 единений.

2.4.1. Гистологическое исследование.

2.4.2. Цитологическая оценка лейко- и миелограмм.

2.4.3. Биохимические методы исследования.

2.4.3.1. Оценка выделительной функции почек.

2.4.3.2. Оценка активности ферментных систем биотрансформации

2.4.4. Иммуноферментный анализ. Методика определения 1Ь-1(3,1Ь

4 и ТМЧх.

2.4.5. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Морфофункциональная характеристика печени и почек, особенности клеточного состава костного мозга и периферической крови при введении бетулоновой кислоты и ее амидов здоровым крысам.

3.1.1. Структурная организация и активность микросомальных мо-нооксигеназ печени крыс при введении бетулоновой кислоты и ее амидов.

3.1.1.1. Морфологическое исследование печени крыс при введении бетулоновой кислоты и ее амидов.

3.1.1.2. Исследование активности Р-450-зависимых монооксигеназ печени крыс при введении бетулоновой кислоты и ее амидов

3.1.2. Структурная организация и выделительная функция почек крыс при введении бетулоновой кислоты и ее амидов.

3.1.2.1. Морфологическое исследование почек крыс при введении бетулоновой кислоты и ее амидов.

3.1.2.2. Оценка выделительной функции почек крыс при введении бетулоновой кислоты и ее амидов.

3.1.3. Клеточный состав костного мозга и периферической крови при введении бетулоновой кислоты и ее амидов здоровым крысам.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональное исследование цитопротекторного действия аланинамидных производных бетулоновой кислоты на модели цитотоксического повреждения органов"

Актуальность проблемы. Современные цитостатические средства позволяют добиваться значительных успехов в лечении ряда заболеваний, связанных со злокачественными новообразованиями, но в условиях «жесткой» химиотерапии неизбежно возрастает частота токсических осложнений.

Во время химиотерапии структурные поражения печени (Грек O.P. и др., 2002; Агеева Т.А., 2002; Молодых О.П. и др., 2006; Zobain M. et al., 1999), почек (Арефьева А.К. и др., 1990; Козловская JI.B. и др., 2002; Пиманов С.И., 2005; Pinnaro P. et al., 1986) и гемодепрессии (Гольдберг Е.Д. и др., 1999; 2000; Дом-никова Н.П. и др., 2005) являются основными причинами снижения дозировок цитостатиков, удлинения интервалов между курсами, отсрочки лучевой терапии, что увеличивает вероятность сохранения резидуального клеточного клона и развития рецидива опухоли (Гершанович M.JL, 2001; Акимов М.А., Гершано-вич М.Л., 2002; Агеева Т.А., 2002; Непомнящих Л.М. и др., 2003).

Все это позволяет понять важность создания системы эффективной защиты клеток, не вовлеченных в опухолевый процесс, от разрушающего воздействия химиотерапии. Система защиты здоровых тканей включает в себя повышение резистентности к повреждению и/или увеличение репаративного потенциала.

Достижение максимальной эффективности существующих методов лечения злокачественных новообразований связывают, в частности, с перспективой разработки новых фармакологических средств, которые предотвращали бы развитие химиотерапевтических цитотоксических поражений тканей и органов и при этом не снижали антинеопластический эффект цитостатиков (Hoekman К. et al., 1999; Гнездилова А.В., 2001; Гольдберг Е.Д., Зуева Е.П., 2002; Звартау Э.Э., Птушкин В.В., 2004).

За последние десятилетия изучено несколько тысяч потенциальных цито-протекторов. Однако даже наиболее эффективный из них - фосфорилирован-ный аминотиоловый радиопротектор амифостин (RW-2721, этиол) нельзя признать идеальным, поскольку препарат способен вызывать системные кумулятивные токсические эффекты (Maisin J.R., 1998; Jahnukainen К. et al., 2001; Машковский M.Д., 2006). К тому же данный препарат имеет зарубежное происхождение и с экономической точки зрения доступен далеко не всем больным.

Все вышесказанное делает актуальным поиск средств, обладающих широким спектром регулирующих эффектов, повышающих резистентность тканей к повреждению, а также низкой токсичностью и стоимостью.

Тритерпеноиды ряда лупана привлекают внимание исследователей широким спектром их медико-биологического действия (Enwerem N.M. et al., 2001; Kanamoto T. et al., 2001; Zhang Z. et al., 2002; Chandramu C. et al., 2003) и технологической доступностью бетулина- исходного синтона (Jaaskelainen Р., 1981; Сымон A.B. и др., 2003). Суммарные запасы бетулина в природе значительны (Кислицин А.Н., 1994). Это позволяет использовать его для получения новых соединений. Бетулин легко превращается в аллобетулин, бетулиновую, бетуло-новую кислоты (Флехтер О.Б. и др., 2002). Целенаправленная модификация последних приводит в ряде случаев к получению эффективных соединений, которые обладают более широким спектром действия и сравнительно низкой токсичностью (Флехтер О.Б. и др., 2000; 2002; Погребняк A.B. и др., 2002; Сымон A.B. и др., 2003). Широкий спектр медико-биологического действия хорошо представлен в основном для разнообразных производных бетулина (Флехтер О.Б. и др., 2002; Карачурина JI.T. и др., 2003), бетулиновой кислоты (Флехтер О.Б. и др., 2004; Sun I.C. et al., 2003; Yogeeswari P., Sriram D., 2005). Все это делает актуальным поиск новых биологически активных соединений, включая новые виды активностей и в другом ряду данной группы тритерпеноидов.

Новосибирским институтом органической химии им. H.H. Ворожцова СО РАН и Институтом органической химии Уфимского научного центра РАН проведены химические модификации доступного лупанового тритерпеноида - бетулина, выделяемого из коры белоствольных берез, распространенных на территории Российской федерации и обладающего широким спектром биологической активности. На его основе синтезированы амиды бетулоновой кислоты, содержащие различные аминокислотные остатки у атома С-28 (Петренко Н.И. и др., 2002).

Из большого числа амидов в качестве корректоров побочных эффектов цитостатиков нами выбраны оригинальные соединения, предварительно показавшие высокие антиоксидантные свойства (Сорокина И.В. и др., 2003; Жоголь P.A., 2006). Протестированы производные, содержащие в С-28 положении ß-аланин: [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3 аминопропионовая кислота (АБК) и метиловый эфир [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3 аминопропионовой кислоты (МЭАБК).

Цель исследования - выявить закономерности изменений структурных элементов печени и почек, гематологических показателей на модели цитоток-сического повреждения органов; оценить морфофункциональные аспекты ци-топротекторной эффективности бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных в этих условиях.

Задачи исследования:

1. Изучить характер морфофункциональных изменений в печени и почках, особенности клеточного состава костного мозга и периферической крови при длительном введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных здоровым животным.

2. На светооптическом уровне изучить структурные изменения в печени и почках, особенности клеточного состава костного мозга и периферической крови на модели цитотоксического повреждения органов при введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных животным без опухолей и животным с перевиваемыми опухолями.

3. Изучить влияние бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных на рост перевиваемых опухолей мышей (лимфомы RLS, карциномы легких

Lewis), метастазирование и эффективность экспериментальной химиотерапии опухолей.

4. Исследовать роль апоптогенного и некрогенного действий в противоопухолевом эффекте бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных в сравнении с референтными апоптозиндуцирующими средствами - цикло-фосфамидом и бетулиновой кислотой в основном опухолевом узле у мышей-опухоленосителей.

5. Исследовать уровень цитокинов (ИЛ-ip, ФНО-а, ИЛ-4) в сыворотке крови мышей с карциномой легких Lewis.

6. Изучить изменение активности микросомальных монооксигеназ гепатоцитов при введении бетулоновой кислоты и ее аланинамидных производных здоровым животным и животным в условиях модели цитотоксического повреждения органов.

7. Выявить механизмы повышения резистентности органов аланинамидными производными бетулоновой кислоты к повреждающему действию цитоста-тиков и опухолевого процесса.

Научная новизна исследования:

1. Впервые выявлен спектр стереотипных и специфических тканевых изменений, сопровождающих модель программного цитотоксического повреждения органов у экспериментальных животных без опухолей и животных с перевиваемыми опухолями.

2. Впервые установлено, что цитотоксические структурные изменения формируются одновременно в стромальном и паренхиматозном компартментах, проявляясь сочетанием нарушений в системе микроциркуляции с альтерацией клеток и снижением уровня регенерации.

3. Впервые изучены фармакологические эффекты новых низкотоксичных полусинтетических соединений из группы тритерпеноидов лупанового ряда, [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3-амино-пропионовой кислоты и метилового эфира [3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-3-амино-пропионовой кислоты, на модели цитотоксического повреждения органов у животных без опухолей и животных с перевиваемыми опухолями.

4. Впервые установлено, что бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные, воздействуя на механизмы клеточных повреждений, оказывают положительное влияние на микрогемодинамику в печени и почках, уменьшают выраженность деструктивных процессов в органах, интенсифицируют регенерацию паренхимы печени, корригируют функцию микросомальных моно-оксигеназ на модели цитотоксического поражения органов в эксперименте.

5. Впервые установлена селективность цитопротекторного действия бетулоно-вой кислоты и ее аланинамидных производных в отношении клеток, не вовлеченных в опухолевый рост.

6. Сформулирована концепция механизма цитопротекторного действия исследуемых производных бетулоновой кислоты при осложнениях программной химиотерапии злокачественных опухолей.

Теоретическое и практическое значение

Найдены новые низкотоксичные индукторы микросомальных моноокси-геназ печени (МОП) из класса тритерпеноидов лупанового ряда. Результаты исследования могут служить методологической основой для поиска соединений, усиливающих МОП-опосредованные механизмы цитопротекции органов при цитостатической терапии.

Наличие антитоксического, антигипоксического, антиоксидантного и цитопротекторного свойств у новых соединений обосновывает перспективность их дальнейших исследований. Результаты исследования могут быть использованы при разработке новых лекарственных средств:

• усиливающих механизмы детоксикации организма, опосредованные микросомальными монооксигеназами печени;

• участвующих в программах цитостатической химиотерапии опухолевого роста в качестве селективных цитопротекторов;

• потенцирующих терапевтическое действие противоопухолевых препаратов.

Перспективным «кандидатом» на расширенные доклинические испытания в качестве препарата сопроводительной терапии (цитопротектора) предлагается амид бетулоновой кислоты, сама бетулоновая кислота - как основа для дальнейших химических модификаций.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Структурная организация печени и почек, клеточный состав костного мозга и периферической крови у здоровых крыс, длительно получавших бетулоно-вую кислоту и ее аланинамидные производные, сохраняются в пределах контрольных значений.

2. Морфофункциональные проявления повреждений в печени и почках, вызванные комплексом цитостатиков, существенно ослабляются при введении исследуемых соединений как животным без опухолей, так и животным с перевиваемыми опухолями.

3. Восстановление клеточного состава костного мозга и преодоление лейкопении в периферической крови после цитостатической депрессии ускоряются при введении бетулоновой кислоты и ее амидов животным без опухолей.

4. Бетулоновая кислота и ее производные обеспечивают эффективную коррекцию нарушенной цитостатиками активности микросомальных монооксигеназ печени крыс.

5. Бетулоновая кислота и оба ее амида не снижают противоопухолевую активность антибластомных препаратов. Амид бетулоновой кислоты потенцирует противоопухолевое и антиметастатическое действие комплекса цитостатиков в отношении перевиваемой карциномы легкого Lewis.

6. Полученные данные свидетельствуют об избирательности цитопротекторно-го действия в отношении клеток, не вовлеченных в опухолевый рост. В механизме цитопротекторного действия производных бетулоновой кислоты существенное значение имеют Р-450-индуцирующие и антиоксидантные свойства этих соединений.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на 2-ом съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003), Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ» (Саратов, 2004), научно-практической конференции с международным участием «Медицина и образование в XXI веке» (Новосибирск, 2004), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Клинико-морфологические аспекты общепатологических процессов при социально-значимых заболеваниях» (Новосибирск, 2004), 2-й Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004), Международном семинаре «Медицина XXI века» (Низкие Татры, 2004), Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005), международном симпозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005), Межрегиональной научно-практической конференции «Экспериментальные и клинические исследования новых лекарственных средств» (Томск, 2006).

Работа выполнена в рамках Интегральной программы СО РАН (№146) «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и их реализация».

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 34 работы, из них 9 в рецензируемых научных журналах согласно Перечню ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 270 страницах машинописного текста, иллюстрирована 52 рисунками, содержит 35 таблиц, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 230 отечественных и 198 зарубежных источника литературы.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Позднякова, Светлана Васильевна

223 ВЫВОДЫ

1. Бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные при длительном пероральном введении здоровым животным в дозе 50 мг/кг не изменяют гематологические показатели и морфологическую организацию печени, почек.

2. Гепато- и нефропротекторные свойства производных бетулоновой кислоты обусловлены восстановлением гемомикроциркуляции, предупреждением развития структурных повреждений органов при исследовании на модели цитотоксического поражения органов у животных без опухолей и животных с перевиваемыми опухолями.

3. Бетулоновая кислота и ее производные обеспечивают эффективную коррекцию активности монооксигеназ эндоплазматического ретикулу-ма гепатоцитов печени крыс, нарушенной цитостатиками, обладают выраженным P-450-индуцирующим эффектом в отношении N-деметилирующей активности изоформ цитохрома P-450IIC, P-450IIIA4 и р-гидроксилирующей активности цитохрома P-450IIE1 у интактных животных.

4. Восстановление клеточного состава костного мозга и периферической крови у крыс после цитостатической депрессии ускоряется при введении животным бетулоновой кислоты и ее амидов.

5. Бетулоновая кислота и ее аланинамидные производные не стимулируют рост опухолей (лимфомы RLS и карциномы легких Lewis), процесс метастазирования и не снижают эффективность базовой противоопухолевой терапии.

6. Амид бетулоновой кислоты усиливает противоопухолевое и антиметастатическое действия комплекса цитостатиков в отношении карциномы легкого Lewis, обусловленные усилением апоптотической гибели опухолевых клеток.

7. Механизм предупреждения в органах (печени, почках) деструктивных поражений, вызванных антибластомными средствами, и повышения

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Позднякова, Светлана Васильевна, Новосибирск

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия М.: Медицина, 1990. - 384 с.

2. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. М.: Медицина, 2002. - 340 с.

3. Агеева Т.А. Патоморфологические аспекты постцитостатических поражений печени и желудка при гемобластозах: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Новосибирск, 2002. - 48 с.

4. Акимов М.А., Гершанович М.Л. Модификаторы биологических реакций в лечении диссеминированной меланомы // Вопросы онкологии. 2002. -Т. 48, №2.-С. 172-178.

5. Арефьева А.К., Рыков В.А., Митрохина Л.Н. Противоопухолевая эффективность и нефротоксичность оксоплатины // Вопр. онкологии. 1990. -Т. 36, №3.-С. 331-335.

6. Арушанян Э.Б., Алъ-Абси Дж.М., Чеботарев В.В. Лечебные возможности мелатонина и его влияние на иммунологические показатели у больных экземой // Экспер. и клин, фармакол. -2003. Т. 66, № 3. - С. 59-66.

7. Арцимович Н.Г. Иммуномодуляторы, их природа и иммунотерапевтиче-ский эффект // Гематол. и трансфузиол. 1988. - № 10. - С. 37-41.

8. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М., 1975. - 327 с.

9. Бакибаев A.A., Новожеева ТТ., Ахмеджанов P.P., Саратиков A.C. Индукторы фенобарбиталового типа (обзор) // Хим.-фармацевт. журнал. -1995.-№3.-С. 3-14.

10. Барнаулов О. Д. Экстрактивные вещества древесных растений: Тез докл. Новосибирск, 1986.-С. 160.

11. Беленький Л.М. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л., 1963. - С. 81-106.

12. Белицкий К.П. Лекарственные растения и рак. — Киев, 1982. С. 161-174.

13. Богданов А.Н., Максимов А.Г., Саржевский В.О., Аносов H.A. Особые формы неходжкинских лимфом // Практическая онкология. 2004. - Т.5, № 3. - С. 216-222.

14. Богданов П.П. Дендрология М.: Лесная промышленность, 1974. 125 с.

15. Богуш Т.А., Богуш Е.А., Дурное Л.А., Сыркин А.Б. Снижение токсичности и повышение эффективности противоопухолевой химиотерапии путем коррекции активности монооксигеназ печени: от эксперимента в клинику // Вопросы онкологии. - 2002. - № 7. - С. 37-41.

16. Богомолов П. О., Павлова Т.В. Неалкогольный стеатогепатит. Патофизиология, патоморфология, клиника и подходы к лечению // Фарматека. Гастроэнтерология. 2003. - Т. 73, № 10. - С. 61-69.

17. Бурлакова Е.Б., Палъмина Н.П. Антиоксиданты в химиотерапии опухолей. Обзор. // Вопросы онкологии. 1990. - Т. 36, № 10. - С. 1155-1162.

18. Бушма М.И., Зиматкин С.М., Амбрушкевич Ю.Г. и др. Роль антиокси-дантной системы печени и предрасположенность крыс к гепатотоксиче-скому действию этанола // Экспер. и клин. фарм. 2003. - Т. 66, № 1. - С. 60-63.

19. Василенко Ю.К., Семенченко В.Ф., Фролова Л.М. и др. Фармакологические свойства тритерпеноидов коры березы // Экспер. и клин, фармакол. -1993.-Т. 56, №4.-С. 53-55.

20. Венгеровский А.И., Чучалин B.C., Саратныков A.C. Гепатозащитные свойства экстракта из наземной части Salsola collina Pallidum II Растительные ресурсы. 1993. - Вып. 4. - С. 575-579.

21. Владимирская Е.Б., Казначеев К.С., ОсиповаЮ.Б. и др. Позднее миелосу-прессивное воздействие программной химиотерапии при остром лимфоб-ластном лимфолейкозе у детей // Гематол. и трансфузиол. 2000. - Т. 45, № 1. - С. 3-6.

22. Волкова О.В., Елецкий ЮЖ. Основы гистологии с гистологической техникой. М.: Медицина, 1971. - 272 с.

23. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. М.: Ньюдиамед, 2003. - Т. 2.-С. 206-231.

24. Воробьев, А.И., Горелов В.Г., Городецкий В.М., Шулутко Е.М. Критические состояния при гемобластозах (типичные формы и выживаемость в условиях отделения реанимации) // Тер. архив. 1993. - № 7. - С. 3-7.

25. Ворожейкина Е.Г., Савченко В.Г., Варшавский В.А., Голицына Е.П., Ка-планская И.Б., Бирюкова Л. С. Поражение почек при гемобластозах // Терапевтический архив. 2005. - № 7. - С.16-22.

26. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Кузьменко М. Антистрессорные реакции и ак-тивационная терапия. М., 1998.

27. Гершанович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М.: Медицина, 1982. - 224 с.

28. Гершанович М.Л. Современные проблемы химиотерапии рака // Гедеон Рихтер. -2001(a). № 1. - С. 30-36.

29. Гершанович М.Л. Кардиотоксичность противоопухолевых антрациклино-вых антибиотиков и возможности ее предупреждения кардиоксаном (дек-сразоксаном) в онкологической практике // Вопр. онкол. 2001(6). - Т.47, № 1.-С. 119-122.

30. Гершанович М.Л., Пайкин М.Д. Симптоматическое лечение при злокачественных новообразованиях. 2-е изд. - М.: Медицина, 1986. - 288 с.

31. Гершанович М.Л., Филов В.А., Акимов М.А., Акимов А.А Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей / С.-Пб., Сатис, 1999. 70.

32. Гершанович М.Л., Тихонова В.В. Применение метадоксила для коррекции гепатотоксического действия полихимиотерапии у онкологических больных // Вопросы онкологии. 2002. - Т. 48, № 4-6. - С. 598-600.

33. Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии с атласом и микрофотографиями. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1989. 468 с.

34. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск, Изд-во ТГУ, 1992. - 264 с.

35. Голъдберг Е.Д., Новицкий В.В., Запускалова ОБ., Климова М.Ю. Проблемы отдаленных последствий повреждающего действия цитостатических препаратов на кроветворение и лимфоидную ткань // Вестн. АМН СССР. 1990. -№9. с. 52-57.

36. Голъдберг Е.Д., Дыгай A.M., Агафонов В.И. Принципы создания лекарственных препаратов-стимуляторов кроветворения природного происхождения // Эксперим. и клин, фармакол. 1995. - Т. 85, №1. - С. 3-7.

37. Голъдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Механизмы цитостатического повреждения и регенерации кроветворной системы // Вестн. РАМН. -1998(a). -№ 10.-С. 6-10.

38. Голъдберг Е.Д., Фомина Т.Н., Ветошкина Т.В. и др. Морфология печени в ранние и отдаленные сроки после введения противоопухолевых препаратов. И Бюлл. эксперим. биол. мед. 1998(6). - Т. 126, № И. - С. 561-565.

39. Голъдберг Е.Д., Белъский Ю.П., Данилец М.Г. и др. Механизмы предлей-козной гипоплазии эритроидного ростка костного мозга у мышей линии AKR/JY // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1999(a). - Т. 127, № 6. - С. 633634.

40. Голъдберг Е.Д., Дыгай AM., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миело-супрессиях. Томск, 1999(6). 115 с.

41. Голъдберг Е.Д., Карпова Г.В., Тимина Е.А., Хлусов И.А. Индуцированная гибель клеток в развитии гипоплазии кроветворной ткани после цитостатического воздействия // Бюл. эксперим. биол. и медицины. 1999(b). - Т. 124, № 1.-С. 39-42.

42. Голъдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шерстобоев Е.Ю. Механизмы локальной регуляции кроветворения. Томск, 2000. 120 с.

43. Голъдберг Е.Д., Зуева Е.П. Препараты из растений в комплексной терапии злокачественных заболеваний. Томск: Изд-во Томского ун-та, 2000. -125 с.

44. Гончарова И.П., Соколов С.Я., Замотаев A.C. Справочник по лекарственным растениям. 1985. - 145 с.

45. Городецкий В.М. Осложнения противоопухолевой терапии // Гематология и трансфузиология. 1998. -№ 1.-С. 11-15.

46. Грек О.Р., Мишенина СВ., Пупышее Л.Б. Протективное действие энтерос-геля на лизосомы печени крыс при введении комплекса цитостатических препаратов // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2002. - Т. 1343, № 10. - С. 413-417.

47. Гришаноеа А.Ю., Мельникова Е.В., Каледин В.И. и др. Возможная роль Р-гликопротеина в устойчивости к циклофосфамиду перевиваемой мышиной лимфосаркомы RLS // Бюл. экспер. биол. 2005. - № 5. - С. 573-577.

48. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Д.: Медицина, 1978. - 193 с.

49. Гусева Н.Г. Ревматические болезни и опухоли. Паранеопластический синдром // Нов. мед. журн. 1998. - № 3-4. - С. 8-10.

50. Данилова А.Б., Окулов В.Б., Папаян Л.П., Афанасьеф Б.В. Нарушения системы свертывания крови у онкологических больных // Вопр. онкологии. -1989.-Т. 44, № 1.-С. 12-18.

51. Данченко Е.О. Влияние препаратов желчных кислот на биосинтез ДНК, апоптоз и некроз гепатоцитов in vitro d Вопр. мед. химии. 2001. - № 4. -С. 61-65.

52. Дельгадо Ф.Г. Новые подходы в терапии неходжкинских лимфом // Практическая онкология. 2002. - Т. 3, № 4. - С. 305-308.

53. Денисенко М.В., Одинокоеа Н.Э., Денисенко В.А., Уварова H.H. Окисление бетулина, дигидробегулина и ЗР-28-дигидрокси-18-лепена тетраокси-дом рутения // Химия природн. соед. 1991. - № 3. - С. 430-436.

54. Джевоский Ю., Робак Т. Взаимодействие противоопухолевых препаратов с другими лекарственными средствами // Нов. фармации и медицины. -1991. -№ 6.-С. 159-163.

55. Дыгай A.M., Жданов В.В., Хлусов И.А. и др. О возможности стимуляции глицирамом костномозгового кроветворения в условиях цитостатической гемодепрессии // Эксперим. и клин, фармакол. 1995. - Т. 58, № 2. - С. 40-42.

56. Домникова Н.П., Дегтярева В.В., Мухин О.В., Непомнящих U.M. Особенности гемограммы и миелограммы при прогрессировании неходжкинских лимфом // Бюл. эксперим. биол. и медицины. 2005. - Т. 140, № 7. - С. 95-99.

57. Дурнев АД., Середенин С.Б. Мутагены: Скрининг и фармакологическая профилактика воздействий // М.: «Медицина», 1998. 326 с.

58. Дурное Л.А., Поляков В.Г., Иванова Н.М. и др. Современные возможности полихимиотерапии солидных злокачественный опухолей у детей // Вестн. РАМН. 2001.-№3.-С. 83-84.

59. Жанаева С.Я., Короленко Т.А., Некрасов Б.Г. и др. Стимуляция макрофагов усиливает, а депрессия тормозит метастазирование двух перевиваемых опухолей мышей в печень и легкие // Бюл. эксперим. биол. и медицины. 2005. - Т. 140, № 10. - С. 450-452.

60. Жоголь P.A. Нарушения метаболизма ксенобиотиков и их коррекция производными бетулина: автореф. дис. . канд. мед. наук Новосибирск, 2006.-21 с.

61. Жукова H.A. Патоморфология гепаторенальной недостаточности при коррекции бетулоновой кислотой и ее амидом у животных с перевитой лим-фомой RLS: автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 2006. - 22 с.

62. Зарицкий А.Ю., Алексеева Ю.А. Стандартная химиотерапия CHOP при неходжкинских лимфомах // Гедеон Рихтер. 2001. - Весна. - № 1. - С. 20-25.

63. Зборовский А.Б., Тюренков И.Н. Осложнения фармакотерапии. М.: Медицина, 2003.-540 с.

64. Звартау Э.Э., Гнездгшова A.B. Симптоматическое лечение осложнений современной химиотерапии и текущего опухолевого процесса // Гедеон Рихтер. -2001. -№ 1.-С. 35-39.

65. Зверева И.Ф. Состояние кроветворения при цитостатической болезни в условиях присоединяющейся герпетической инфекции: автореф. дис. канд. биол. наук. Томск, 1999. - 24 с.

66. Зимин Ю.В., Сяткин С.П., Березов Т.Т. Молекулярные механизмы метаболической адаптации патологически измененной печени при токсическом гепатите // Вопр. мед. химии. 2001. - № 3. - С.35-40.

67. Ивашкин В. Т., Шульпекова Ю.О. Неалкогольный стеатогепатит // Русский медицинский журнал. Болезни органов пищеварения. 2000. - Т. 2, № 2. -С. 17-23.

68. Иванов A.C., Захарова Т.С,. Одинокова Л.Э., Уварова Н.И. Гиполипиде-мические свойства гликозидов бетулина // Хим.-фарм. журнал. 1987. -№9.-С. 1091-1093.

69. Ижогш Д.Г., Бояришнов В.К., Долгополоа И.С. и др. Тиофосфамид в режимах высокодозной терапии у детей // Вопр. онкол. 2000. - Т. 46, № 4. -С. 401-406.

70. Ильина Т. В., Семенова Е. А., Плясунова О. А. и др. Производные растительных тритерпенов — ингибиторы обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека // Бюлл. СО РАМН. 2002. - Т. 104, № 2. - С. 20—24.

71. Ильина Т. В., Семенова Е. А., Ильичева Т.Н. и др. Иммуностимулирующая активность тритерпенойдов растительного происхождения и их производных. // Журнал микробиологии, эпидимиологии, иммунологии. -2001. № 2. - С. 53-56.

72. Ильичева Т. Н., Проняева Т. Р., Шулъц Э. Э. и др. Иммуностимулирующая активность тритерпенов растительного происхождения и их производных. // Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. 2001. № 2. - С. 53—56.

73. Каледин В.И., Николин В.П., Агеева Т.А., Тимофеева O.A. Циклофосфа-мид-индуцирующий апоптоз клеток мышиной лимфосаркомы в условиях in vivo // Вопр. онкологии. 2000. - Т.46, № 5. - С. 588-590.

74. Калъф-Калиф Я.Я. О лейкоцитарном индексе интоксикации и его практическом значении // Врачебное дело. 1941. - № 1. - С. 31-33.

75. Карачурина Л.Т., Сапожникова Т.А., Зарудий Ф.С. и др. Исследование некоторых фармакологических свойств бисгемифталата бетулина / JI.T. Карачурина JI.T. // Эксперим. клинич. фармакол. 2003. - Т. 66, № 4. - С. 56-59.

76. Карачурина Л.Т., Сапожникова Т.А., Зарудий Ф.С. и др. Противовоспалительное и противоязвенное свойства бисгемифталата бетулина // Хим.-фарм. журнал. 2002. - Т. 36, № 8. - С. 32-33.

77. Каримов Х.Я., Иноятов Ф.Ш., Дадажанов Ш.Н., Исрашов Р.И. Морфологические особенности реакции печени крыс на хроническое воздействие ксенобиотиками // Морфология. 2002. - Т. 122, № 5. - С. 25-27.

78. Карпова Г.В., Фомина Т.И., Тимина Е.А. и др. О миелотоксичности вепе-зида // Эксперим. клинич. фармакол. 1998. - Т. 61, № 2. - С. 51-53.

79. Картамышева Н.Н., Чумакова О.В. Некоторые механизмы формирования тубулоинтерстициального компонента при хронических заболеваний почек // Нефрология и диализ. 2001. - Т. 3, № 3. - С.

80. Кипнис В.М. Зиксорин в комплексной терапии псориаза // Вестн. дерма-тол. 1990. - № 4. - С. 73-74.

81. Кислицын А.Н. Экстрактивные вещества бересты: выделение, состав, применение (обзор) // Химия древесины. 1994. - № 3. - С. 3-28.

82. Ковалева Л.Г. Острые лейкозы. М.: Медицина, 1990. - 272 с.

83. Козловская Л.В., Туганбекова С.К., Сейсембеков Т.Э., и др. Паранеопла-стическое поражение почек при солидных опухолях // Нефрология и диализ. 2002. - Т. 4, № 2. - С. 34-38.

84. Кончаловский М.В. Цитостатическая болезнь / В кн. Волковой М.А. Клиническая онкогематология. М.: Медицина. - 2001. - Гл. 34. - С. 495-506.

85. Купин В.И., Полевая Е.Б., Сорокин A.M. Повышение иммунологической реактивности онкологических больных с помощью экстракта элеутеро• кокка// 1986.-Т. 22, № 7.-С. 21-25.

86. Лакин Г.Ф. Биометрия. М., 1990. 250 с.

87. Лакин К.M., Крылов Ю.Ф. Биотрансформация лекарственных веществ. -М.: Медицина, 1981.-341 с.

88. Панкин В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих / Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. -М., 1981. С. 76-95.

89. Лили Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / М.: Мир, 1969. 648 с.

90. Лукиенко П.И., Бушма М.И. Биологическая роль монооксигеназ и пути управления их активностью // Вопр. мед. химии. — 1996. Т. 32, В. 5. - С. 14-20.

91. Лукиенко П.И., Заводник Л.Б., Бушма М.И. Последствия индукции цито-хромов Р450 // Эксперим. и клин, фармакол. — 1995. Т. 58, № 1. - С. 6873.

92. Лукъянчук В.Д., Савченкова Л.В., Новосельцева Н.В. Монооксигеназная система как мишень в действии гипоксий в сочетании с гипертермией // Врачеб. дело. 1995. - № 5-6. - С. 100-102.

93. Любимова Л. С. Перспективы применения препарата этиол (амифостин) в гематологии // Вопр.гематол., онкол. и иммунол. в педиатрии. 2003. - Т. 2, № 1.-С. 95-100.

94. Майбородин КВ., Майбородина В.И., Позднякова C.B. и др. Сходство и различия реакции пейеровых бляшек и брыжжеечных лимфатических узлов на полихимиотерапию // Антибиотики и химиотерапия. 2005. - Т. 50, №2-3.-С. 8-13.

95. Майбородина В.И. Лимфатический регион тонкой и толстой кишки крыс после полихимиотерапии: автореф. дис. . канд. мед. наук Новосибирск, 2003. - 25 с.

96. Де Майо 77. Терпеноиды. М., 1963. - 424 с.

97. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: «Новая волна», 2006. - 1206 с.

98. Медведев В.В., Волчек Ю.З. Клиническая лабораторная диагностика: Справочник для врачей / Под ред. В.А. Яковлева. Изд. 2-е, стереотипн. — СПб.: Гиппократ, 1997. - 208 с.

99. Межебавский В.Р. Эффективность лечения больных туберкулезом легких с использованием гепатопротектора зиксорина // Пробл. туб. 1990. - № 10.-С. 32-35.

100. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник, В.В.Меньшиков (ред.), Медицина, Москва, 1987. 255 с.

101. Минушкин О.Н. Некоторые гепатопротекторы в лечение заболеваний печени // Лечащий врач. 2002. - №6. - С. 55-58.

102. Мишенина C.B. Повреждение мембран клеток печени крыс при введении цитостатических препаратов и их коррекция энтеросгелем: автореф. дис. .канд. мед. наук. Новосибирск, 2002. - 19 с.

103. Моисеев C.B. Лекарственная гепатотоксичность // Клин, фармакол. и те-рап. 2005. - № 1.-С. 10-14.

104. Молодых О.П., Лушникова ЕЖ, Клиникова М.Г., Непомнящих J1.M. Структурная реорганизация печени крыс при цитотоксическом действии доксорубицина И Бюл. эксперим. биол. и медицины. 2006. - Т. 141, № 5. -С. 579-585.

105. Мухин H.A., Хасабов H.H. Паранеопластические нефропатии // Нефрология. Руководство для врачей под ред. И.Е. Тареевой. М., «Медицина», 2000.-С. 105-132.

106. Мухина Ю.Г., Бельмер C.B., Дегтярева A.B., Гасилина Т.В. Холестаз и пути его коррекции в педиатрической практике: применение урсофалька // Фарматека. 2005. - Т. 97, № i.c. 10-23.

107. Назаренко М.Е., Штрыголь С.Ю., Слободин В.Б. Нефропротективный эффект билобила при экспериментальной острой почечной недостаточности // Эксперим. клин, фармакол. 2003. - Т. 66, № 6. - С. 29-31.

108. Наридадзе И.Ш. Рак, гемостаз и коагулоактивные препараты // Вопросы онкологии. 1989.-Т. 35, № 12. - С.1411-1418.

109. Натан Д.Г., Зыфф К.А. Регуляция кроветворения // Гематол. и трансфузи-ол. 1994. - Т. 39, № 2. - С. 3-10.

110. Наточын Ю.В. Физиология почки. Формулы и расчеты. Наука. Ленинград, 1974.

111. Непомнящих Л.М. Морфогенез важнейших общепатологических процессов в сердце. Новосибирск: Наука СО, 1991. - 352 с.

112. Непомнящих U.M., Лушникоеа Е.Л., Колесникова Л.В. Статистическое обеспечение оптимального объема выборки в морфологических исследованиях // Арх. анат. 1981. - № 10. - С. 91-99.

113. Непомнящих Л.М., Лушникоеа Е.Л., Колесникова Л.В. и др. Морфологический и стериометрический анализ миокарда (Тканевая и ультраструктурная организация). Новосибирск: Изд-во АМН СССР, 1984. - 158 с.

114. Непомнящих Л.М., Лушникоеа Е.Л., Семенов Д.Е. Особенности внутриклеточной регенерации кардимиоцитов при пластической недостаточности миокара // Бюлл. экперим. биол. и мед. 2000. - Т. 130, № 10. - С. 463-468.

115. Непомнящих Л.М., Лушникоеа Е.Л., Семенов Д.Е. Регенераторно-пластическая недостаточность сердца: Морфологические основы и молекулярные механизмы / М.: Изд-во РАМН, 2003. -255 с.

116. Нигматуллина Л.Н. Синтез новых физиологически активных веществ на основе тритерпеноидов лупанового ряда: дис. . канд. хим. наук. Уфа: ИОХ УНЦ РАН, 2002.

117. Никитенко Е.В. Патоморфологическое изучение эффективности липосо-мальной формы цисплатина на метастазы опухоли ГА-1 в печень: авто-реф. дис. . .канд. мед. наук. Новосибирск, 2003. - 16 с.

118. Никитина И.Л. Поиск и фармакология новых индукторов монооксиге-назной системы — производных азолов: автореф. дис. д-ра мед. наук. -Волгоград, 2004. 47 с.

119. Новицкий В.В., Запускалова О.Б., Богдашин КБ., Голъдберг Е.Д. Механизмы нарушения регуляции кроветворения в отдаленные сроки после введения цитостатических препаратов // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1991. -№3,-С. 12-14.

120. Новожеева Т.П., Саратиков A.C. Индукторы монооксигеназной системы печени и перспективы их клинического использования. Обзор литературы // Эксперим. клин, фармакология. 1993. - Т. 56, № 3. - С. 69-71.

121. Носик H.H., Дерябин П.Г., Исаева Е.И. и др. Интерферониндуцирующие свойства сухого экстракта бересты и его влияние на экспериментальную инфекцию, вызванную вирусом гепатита С // Вопросы вирусологии -2005.-№ 5.-С. 29-32.

122. Одинокова Л.Э., Малиновская Г.В., Похилло Н.Д., Уварова Н.И. Тритер-пеноиды коры веточек Brtula Dahurica И Химия природных соединений. -1985.-№3.-С. 414.

123. Одинокова Л.Э., Денисенко В.А., Похилло Н.Д., Уварова H.H. Кофеат олеаноловой кислоты из внешней коры Betula dahurica // Химия природных соединений 1985. - № 2. - С. 270-271.

124. Орел Н.Ф. Кардиотоксичность антрациклинов: возможности преодоления // Соврем, онкология. 2004. - Т. 60, № 3. - С. 230-235.

125. Осадчий С.А., Шулъц Э.Э., Толстиков Г.А. Исследование алкалоидов флоры Сибири и Алтая. Синтез новых производных элатидина // Изв. АН. Сер. Химия.-2001. -№ 5.-С. 868-872.

126. Островский В.К., Киьиенина Л.А., Плаксина Н.С. и др. Некоторые показатели крови и лейкоцитарного индекса интоксикации при злокачественных опухолях // Вопросы онкологии. 2005. - Т. 51, № 5. - С. 567-570.

127. Переводчикова Н.И., 1993 Противоопухолевая терапия. Справочник / Под. Ред. Н.И. Переводчиковой. Москва, 1996. - 222 с.

128. Перов Ю.Л. Морфометрическое изучение почки в норме и при патологии: возможности и ограничения // Арх. пат. 1984. - № 7. - С. 78-84.

129. Петренко Н.И., Еланцева Н.В., Петухова В.З. Синтез производных бету-лоновой кислоты, содержащих аминокислотные фрагменты //Химия природных соединений. 2002. - № 4. - С. 276-283.

130. Погребняк A.B., Василенко Ю.К., Оганесян Э.Т. и др. Компьютерный прогноз и направленный синтез нового производного бетулина, обладающего противотуберкулезным действием // Хим.-фарм.журнал. 2002. - Т. 36, № 10.-С. 18-20.

131. Подымова С Д. Жировой гепатоз. Неалкогольный стеатогепатит (эволюция представлений о клиноко-морфологических особенностях, прогнозе, лечении) // Терапевтический архив. 2006. - № 4. - С. 32-38.

132. Покровский А.Г., Плясунова O.A., Ильичева Т.Н. и др. Синтез производных растительных тритерпеноидов и исследование их противовирусной и иммуностимулирующей активности // Химия в интересах устойчивого развития. 2001. - Т. 9. - С. 485-491.

133. Посохоеа Е.А. Микросомальная система печени и желчеобразование // Эксперим. и клин, фармакол. 1995. - Т. 58, № 1. - С. 73-77.

134. Поспелова Т.И. Клинико-функциональные и метаболические особенности поражения печени при некоторых формах гемобластозов: автореф. дисс. . д.м.н.- 1998. -48 с.

135. Поспелова Т.И., Нечунаева И.Н. Типы метаболизма при гемобластозах. Научное издание. НГМА, Новосибирск, 2004. 231 с.

136. Похыло Н.Д., Малиновская Г.В., Маханъков В.В. и др. Тритерпеноиды из листьев Betula lanata // Химия природных соединений. 1980. - № 4. - С. 513-518.

137. Похило Н.Д., Денисенко В.А., Маханъков В В. Уварова Н.И. Тритерпеноиды и флавоноиды из листьев сибирских видов рода Betula // Химия природных соединений. 1983. -№ 3. - С. 392-394.

138. Похило Н.Д., Денисенко В.А., Новиков В.Л., Уварова Н.И. 14-оксикориофиллен-4,5-оксид новый секвитернен из Betula pubescens II Химия природных соединений. - 1984. -№ 5. - С. 598-603.

139. Похило Н.Д., Малиновская Г.В., Маханъков В.В. и др. Тритерпеноиды из листьев сибирских видов берез Betula nana и Betula exilis // Химия природных соединений. 1985(a). -№ 3. - С. 352-355.

140. Похило H Д., Денисенко В. А., Уварова Н.И. Тритерпеноиды и флавоноиды из женских сережек Betula exilis II Химия природных соединений. -1985(6). -№ 1. С. 124-125.

141. Похило H Д., Денисенко В. А., Маханъков ВВ. Уварова Н.И. II Химия природных соединений. 1986(a). - № 4 - С. 189.

142. Похило H Д., Денисенко В. А., Баранов В.И., Уварова Н.И Тритерпеноиды из внешней коры maximowicziana И Химия природных соединений. -1986(6).-№ 5.-С. 650-651.

143. Похило Н.Д, Уварова Н.И. Изопреноиды различных видов рода Betula // Химия природных соединений. 1988. - № 3. - С. 325-341.

144. IJoxwio H.Д., Уварова Н.И. Успехи в изучении природных соединений / Ред. Стоник В.А. Владивосток: Дальнаука, 1999. С. 8-17.

145. Пронин B.C. Экспериментальное изучение эффектов повреждающего действия цитостатиков на сердце. // Тез. докл. ежегодна, конкурс-конференции студентов и молодых ученых «Авиценна-2003»:. Новосибирск: Сибмедиздат, 2003. - С. 112-113.

146. Пронин B.C. Кардиопртективные эффекты бетулоновой кислоты и ее производного при перевиваемой опухоли у мышей // Тез. докл. ежегодна, конкурс-конференции студентов и молодых ученых «Авиценна-2005»:. -Новосибирск: Сибмедиздат, 2005. С. 370-371.

147. Птушкин В.В. Лечение и профилактика осложнений химиолучевой терапии // Практическая онкология. 2004. - Т. 5, № 3. - С. 223-230.

148. Птушкин В.В., Багирова Н.С. Инфекционные осложнения у больных с онкогематологическими заболеваниями. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей / Под ред. М.А. Волковой. М.: Медицина, 2001. -С. 507-528.

149. Птушкин В.В., Волкова М.А. Гемопоэтические факторы роста: биологические основы функционирования и клиническое применение. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей / Под ред. М.А. Волковой. -М.: Медицина, 2001. С. 52-71.

150. Ража А., Манделъ С., Шетти В. И др. Новые представления о биологии миелодиспластических синдромов: усиленный апоптоз и роль цитокинов // Гематол. и трансфузиол. 1999. - № 4. - С. 25-29.

151. Ратнер М.Я. Современные представления о значении медиаторов в патогенезе фиброза почечного ингерстиция // Терапевтический архив. 1997. -№ 12.-С 87-88.

152. Руковицин O.A. Роль иммунотерапии в лечении больных заболеваниями системы крови // Вопросы онкологии. -2002. Т. 48, № 2. - С. 186-192.

153. Рыжов А.И., Фомина Т.Н. Морфологические изменения пищеварительных органов при введении противоопухолевых антибиотиков, рубомици-на икарминомицина//Антибиотики. 1978.-Т. 23, №2.-С. 125-128.

154. Сакаева Д.Д. Оксиметилурацил как корректор осложнений химиотерапии злокачественных опухолей // Эксперим. клин, фармакол. 2004. - Т. 67, № 1. - С. 51-53.

155. Саратиков A.C., Венгеровский А.И. Новые гепатопротекторы природного происхождения // Эксперим. и клин, фармакол. 1995.- Т. 58, № 1. - С. 811.

156. Саратиков A.C., Литвиненко Ю.А., Буркова В.Н. и др. Гепатопротектив-ные свойства липроксола // Эксперим. и клин, фармакол. 2002. - Т. 65, №2.-С. 31-33.

157. Саратиков A.C., Новожеева Т.П., Венгеровский А.И. Эффективность ферментиндуцирующих средств при экспериментальном поражении печени тетрахлорметаном // Эксперим. и клин, фармакол. 2003. - Т. 66, №4. с. 47-49.

158. Саратиков A.C., Скакун Н.П. Желчеобразование и желчегонные средства. Изд. 2-е. Томск: Изд-во Том. ун-та. - 1991. - 260 с.

159. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника: Руководство, М.: Медицина, 1996. 544 с.

160. Сафонова С.А., Гершанович М.Л. Метадоксил в лечении гепатотоксиче-ского действия цитостатиков // Вопросы онкологии. 2005. - Том. 51, №5. С.599-600.

161. Семенов A.A. Очерки химии природных соединений. Новосибирск: Наука, 2000.

162. Семенова Е.А., Плясунова Е.А. Петренко H.H. и др. Ингибирование активности рекомбинантной интегразы ВИЧ-1 производными высших тер-пеноидов//Докл. АН.-2003.-Т. 391, №4.-С. 556-558.

163. Семенченко В.Ф. Исследование биологической активности тритерпенои-дов из коры березы и корней ложных солодок: автореф. дис. . д-ра фармацевт. наук. — Пятигорск. 1993. - 46 с.

164. Семенюк A.B., Колесникова Л.И., Ситникова Д.В. Роль перекисного окисления липидов в регуляции активности микросомальных монооксигеназ печени животных при холодовом воздействии // Бюл. эксперим. биол. и медицины. 1983. - Т. 45, № 1. - С. 37-39.

165. Семиглазов В.Ф. Предупреждение кардиотоксического действия антра-циклинов с помощью кардиоксана // Вопр. онкологии. 1997. - Т. 43, № 6.-С. 569-574.

166. Серов В.В., Лапиш К. Морфологическая диагностика заболеваний печени. -М.: Медицина. 1989. - 336 с.

167. Сорокина И.В., Толстикова Т.Г. Бубнова Е.Б. и др. Изучение антиокси-дантных свойств производных бетулоновой кислоты на модели острого токсического гепатита // Научный вестник Тюменской медицинской академии. 2003. - № 1.-С. 60-61.

168. Софьина З.П., Сыркин А.Б., Голдин А., Кляйн А. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. М.: Медицина, 1980.-296 с.

169. Суколинский В.H. Перспективы применения антиоксидантов в комбинированном лечении злокачественных опухолей (обзор) // Вопр. онкологии -1999.-Т. 36, №2.-С. 138-144.

170. Сымон A.B. Молекулярная модификация Бетулиновой кислоты как анти-меланомного средства: автореф. дис. . .канд. хим. наук. М., 2004. 25 с.

171. Сымон A.B., Каплун А.П., Власенкоеа Н.К. и др. Эпимеризация гидро-ксильной группы в тритерпенах лупанового ряда // Биоорган, химия. -2003.-Т. 29, №2.-С. 208-213.

172. Сырье для производства биологически активных добавок к пище «Бересты экстракт сухой». Регистрационный номер СЭЗ 77.99.03.936. Б 000201.02.04 от 16 февраля 2004 г.

173. Tapeee Е.М. Клиническая нефрология / М., Медицина. 1983. - Т. 2. -415с.

174. Тареева И.Е., Андросова С.О. Тубулоинтерстициальные нефропатии / В кн. Тареева И.Е. Нефрология. 1995. - Т. 2. - С. 101-109.

175. Толстиков Г.А., Щулъц Э.Э., Болтина Л.А., Толстикова Т.Г. Солодка. Неиспользуемые возможности здравоохранения России // Химия в интересах устойчивого развития. 1997(6). - Т. 5, № 1. - С. 57-73.

176. Толстиков Г.А., Флехтер О.Б., Шулъц Э.Э. и др. Бетулин и его производные. Химия и биологическая активность // Химия в интересах устойчивого развития. 2005. - Т. 13. - С. 1-30.

177. Толстикова Т.Г., Сорокина КВ., Толстиков Г.А. и др. Терпеноиды лупана- биологическая активность и фармакологические перспективы. 1. Природные производные лупана. 1 часть // Биоорг. химия. 2006(a). - Т. 32, № 1.- С. 42-55.

178. Толстикова Т.Г., Сорокина И.В., Толстиков Г. А. и др. Терпеноиды Лупана- биологическая активность и фармакологические перспективы. 1. Полусинтетические производные лупана. 2-ая часть И Биоорг. химия. -2006(6).-Т. 32, №3,-с. 291-307.

179. Удут Е.В., Жданов В.В., Гуръянцева Л.А., Дыгай A.M., и др. Роль гемопо-этических факторов в регенерации кроветворения при миелосупрессиии, вызванной введением этопозида // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2001. - Т. 131,№5.-С. 512-516.

180. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. -324 с.

181. Успехи в изучении природных соединений / Ред. Стоник В.А. Владивосток: Дальнаука, 1999. 98 с.

182. Ушкалова Е.А. Мененджмент желудочно-кишечных побочных реакций, индуцированных противоопухолевыми средствами // Фарматека. -2002(a). Т. 63, № 12. - С. 20-34.

183. Ушкалова Е.А. Место эссенциальных фосфолипидов в современной медицине // Фарматека. 2002(6). - Т. 63, № 12. - С. 43-48.

184. Ушкалова Е.А. Лекарственные поражения печени // Гастроэнтерология. -2003. Т. 73, № 10. - С. 138-144.

185. Флехтер О.Б., Ашавина О.Ю., Бореко Е.И. и др. Синтез З-О-ацетил-бетулинового и бетулонового альдегидов по сверну и фармакологическаяактивность их оксимов // Хим.-фарм. журнал. 2002(а). - Т. 36, № 2. - С. 21-24.

186. Флехтер О. Б., Медведева Н. И., Карачурина Л. Т. и др. Синтез и противовоспалительная активность новых ацилпроизводных бетулина. // Хи-мико-фармвцевт. журнал. 2002(6). - Т. 36, № 9. - С. 29—32.

187. Флехтер О Б., Бореко Е.И. Нигматуллина Л.Р., Павлова Н.И. и др. Синтез и противовирусная активность гидразидов и замещенных бензальгид-разидов бетулиновой кислоты и ее производных // Биоорган. Химия. -2003 (а). Т. 29, № 3. - С. 326-332.

188. Флехтер О.Б., Бореко Е.И., Нигматуллина Л.Р., Третьякова Е.В., и др. Синтез и противовирусная активность уреидов и карбаматов бетулиновой кислоты и ее производных // Биоорг. химия. 2003(6). - Т. 29, № 6. - с. 655-661.

189. Флехтер О.Б., Бореко Е.И., Нигматуллина Л.Р., Павлова Н.И. и др синтез и противовирусные свойства производных лупановых тритерпеноидов // Хим. -фарм. журн. 2004(а). - Т. 38. - С. 10-13.

190. Флехтер О.Б., Бореко Е.И., Нигматуллина Л.Р., Третьякова Е.В. и др. Синтез и противовирусная активность амидов и конъюгатов бетулоновой кислоты с аминокислотами /7 Биоорган, химия. 2004(6). - Т. 30, № 1. -С. 89-98.

191. Флехтер О.Б., Бореко Е.И., Нигматуллина Л.Р., Павлова Н.И. и др. Синтез и противовирусные свойства лупановых тритерпеноидов // Хим.-фарм. жур. 2004(в). - Т. 38, №7.-С. 10-13.

192. Флехтер О.Б., Карачурина Л.Т., Порошков В.В. и др. Синтез эфиров тритерпеноидов группы лупана и их гепатопротекторная активность // Биоорг. химия. 2000. - Т. 26, № 3. - С. 213-215.

193. Флехтер О.Б., Медведева Н.И, Карачурина Л. Т. и др. Синтез и фармакологическая активность эфиров бетулина, бетулиновой кислоты и аллобе-тулина // Хим. -фарм. жур. 2005. - Т. 39, № 8. - С. 9-12.

194. Флехтер О. Б., Нигматуллина Л. Р., Болтина Л. А. и др. Получение бету-линовой кислоты из экстракта бетулина. Противовирусная и противоязвенная активность некоторых родственных терпеноидов. // Хим.-фарм. жур. 2002(а). - Т. 36, № 9. С. 27—28.

195. Флехтер О. Б., Третьякова Е. В., Галин Ф. 3. и др. Противовоспалительная активность хинопимаровых кислот и синтез амидов этих кислот // Хим.-фарм. журнал. 2002(6). Т. 36, № 8. С. 29—31.

196. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических вещств / Под редакцией чл.-корр. РАМН, проф. Р.У. Хабриева. 2-изд., перераб. и доп. - М.: ОАО Изд-во «Медицина», 2005. - 832 с.

197. Хамаганова И.В. Зиксорин в лечении детей атопическим дерматитом // Вести, дерматол. 1991. - № 4. - С. 47-49.

198. Цымбал И.Н., Сторожок Н.М., Петренко Н.И., Толстиков Г.А. К вопросу о механизме антиоксидантной активности пептидных производных бе-тулоновой кислоты / Биоантиоксидант: тез. докл. 6-й междунар. конф.— М., 2002. С. 607-609.

199. Чекман И.С., Посохова Е.А., Береговая Е.Г. Микросомальная ферментная система организма. Киев, 1996. - 80 с.

200. Чернов С. В., Шулъц Э. Э., Шакиров М. М., Толстиков Г. А. Синтетические трансформации высших терпеноидов. VII. Синтез лабдановых тетра-гидро-b -карболинов // Журн. орган, химии, 2002. Т. 38, № 5. - С. 703— 709.

201. Чехун В.Ф., Пелъкис Ф.П., Кулик Г.И. Роль системы монооксигеназ в реализации биологических эффектов цисплатина // Вопр. онкологии. 1991. -Т. 37, №9-10.-С. 954-958.

202. Цымбал И.Н., Сторожок Н.М. Влияние смесей производных тритерпе-ноидов и а-токоферола на процесс окисления // Биоантиоксидант: тез. докл. 6-й междунар. конф. -М., 2002(a). -С. 606-607.

203. Цымбал И.Н., Сторожок Н.М., Петренко Н.И., Толстиков Г.А. К вопросу о механизме антиоксидантной активности пептидных производных бе-тулоновой кислоты // Биоантиоксидант: тез. докл 6-й Междунар. конф. -М, 2002(6). С. 607-609.

204. Шарапов В.И. Метаболизм ксенобиотиков и коррекция его изменеий в постгипоксическом периоде: авгореф. дис. . д-ра мед. наук. Новосибирск, 1993.-21 с.

205. Шевела Е.А., Крюкова И.В., Норкин М.Н. и др. Роль моноцитов в развитии функциональных нарушений Т-клеток у больных лимфомами при проведении полихимиотерапии // Гематол. и трансфузиол. 2000. - Т.45, № 3. - С. 34-36.

206. Шилов Е., Андросова С. Лекарственные поражения почек // Врач. 2002. -№6.-С. 47-51.

207. Шинтяпина А.Б., Покровский А.Г., Шулъц Э.Э., Толстиков Г.А. Индукция апоптоза бетулоновой кислотой в опухолевой клеточной линии человека /СПИД, рак и общественное здоровье: тез. докл. 14-й Международ, конф.-2005.- Т. 9, № 3 С. 10.

208. Шон Ле Банг, Посыпанова ГЛ., Колибаба Л.Г. и др. Исследование цито-токсической активности бетулиновой кислоты, ее производных и липо-сомной формы in vitro // Вопросы биол., мед. и фармацев. химии. 2002. -№4.-С. 31-34.

209. Щербаков В.М., Тихонов А.В. Изоформы цитохрома Р-450 печени человека. 1995. - 102 с.

210. Якубов А.В., Усманова Р.И., Ганиев П1.А. и др. Цитохром P-450-зависимая монооксигеназная система печени и состояние перекисного окисления липидов при язвенной болезни // Мед. журн. Узбекистана. — 1988. № 11. -С. 61-63.

211. Якубовская М.Г., Белицкий Г.А. Микросомальные монооксигеназы печени у мышей с перевиваемыми опухолями // Вопросы онкологии. 1989. - Т. 35, № 12.-С. 1461-1464.

212. Abanobi S.E., Lombardi В., Shinozuka Н. Stimulation of DNA synthesis and cell proliferation in the liver of rats fed a choline-devoid diet and their suppression by phenobarbital // Cancer Res. 1982. - Vol. 42, № 2. - P. 412-415.

213. Ahn J.M., Kim S.J., Kim H. et al Triton X-100 induces apoptosis in human hepatoma cell lines 11 Yonsei Med. J. 1997. - Vol. 38, № 1. - P. 52-59.

214. Akihisa Т., Ogihara J., Kato J. Inhibitory effects of triterpenoids and sterols on human immunodeficiency virus-l reverse transcriptase // Lipids. 2001. -Vol. 36, №5.-p. 507-512.

215. Akihisa Т., Takamine Y., Yoshizumi К et al. Microbial transformations of two lupane-type triterpenes and anti-tumor-promoting effects of the transformation products // J Nat Prod. 2002. - Vol. - 65, № 3. - P. 278-282.

216. Amor E.C., Villasenor I.M., Yasin A., Choudhary M.I. Prolyl endopeptidase inhibitors from Syzygium samarangense (Blume) Merr. & L. M. Perry. // Z. Naturforsch. C. 2004. - Vol. 590, № 1-2. - P. 86-92.

217. Andrikopoulos N.K., Kaliora A.C., Assimopoulou A.N., Papapeorgiou V.P. Biological activity of some naturally occurring resins, gums and pigments against in vitro LDL oxidation // Phytother. Res. 2003. - Vol. 17, № 5. - P. 501-507.

218. Angelico F., Ben M.D., Conti R. et al. Non-alcoholic fatty liver syndrome: A Hepatic consequence of common metabolic diseases // Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2003. -№ 5. - P. 588-594.

219. Anilkumar T.V., Sarraf C.E., Hunt 71, Alison M.R. The nature of cytotoxic drug-induced cell death in murine intestinal crypts // Br. J. Cancer. 1992. -Vol. 65, № 4. - P.552-558.

220. Antoniou T., Tseng A.L. Interactions between antiretrovirals and antineoplastic drug therapy // Clin. Pharmacokinet. 2005. - Vol. 44, № 2. - P. 111-145.

221. Anthony H.M., Schoran C.J. Severe hypovitaminosis C in lung-cancer patients: the utilization of vitamin C in surgical repair and lumphocyte related host resistance // Br. J. Cancer. 1982. - Vol. 46, № 3. - P. 354-367.

222. Baliga R., Zhang Z., Baliga M., Ueda N., Shah S. V. In vitro and in vivo evidence suggesting a role for iron in cisplatin-induced nephrotoxicity // Kidney Int. 1998.-Vol. 53, №2. -P. 394-401.

223. Baltina L.A., Flekhter O.B., Nigmatullina L.R. et al. Lupane Triterpenes and Derivatives with Antiviral Activity // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. - Vol. 13, №20.-P. 3549-3552.

224. Berkovitch M., Matsui D., Zipursky A. Hepatotoxicity of 6-mercaptopurine in childhood acute lemphocytic leucemia: pharmacokinetic characteristics / Med. Pediatr. Oncol., 1996. Vol. 26, № 2. - P. 85-89.

225. Bernard P., Scior T., Didier B., Hibert M., Berthon J.Y. Ethnopharmacology and bioinformatic combination for leads discovery: application to phospholi-pase A(2) inhibitors // Phytochemistry. 2001. - Vol. - 58, № 6. - P. 865-874.

226. Boelsteri U.A. Mechanisms of NSAID-induced hepatotoxicity. Focus on nime-sulide // Drug Saf. 2002. - Vol. 25. - P. 633-48.

227. Brij Kishore, Hazra, D.U., Sachan A.S. et al. // The Effect of Liv 52 on Liver Functions of Tubercular Patients Receiving Second Line Anti-Tubercular Drugs // Probe. 1978 - Vol. XVII, № 2. P. 125-131.

228. Bringmann G., Saeb W., Assi LA. et al. Betulinic acid: isolation from Triphyo-phyllum peltatum and Ancistrocladus heyneanus, antimalarial activity, and crystal structure of the benzyl ester. // Planta Med. 1997. - Vol. 63, № 3. - P. 255-257.

229. Brock N., Pohl J., Sekar J. Studies on the urotoxicity of oxazaphosphorine cytostatics and its prevention—I. Experimental studies on the urotoxicity of alkylating compounds. // Eur. J. Cancer. 1981. - Vol. 17, № 3 6. - P. 595-607.

230. Brock N., Stekar J., Pohl J. et al. Acrolein, the causative factor of urotoxic side-effects of cyclophosphamide, ifosphamide, trofosphamide and sufos-phamid // Arzneim. Forshe Drug Res. 1979. - Vol. 29. - P. 659-661.

231. Bronchud M.H., Scarffe J.H., Thathcher N. et al. Phase I/II study of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor in patients receiving intensive chemotherapy for small cell lung cancer // Br. J. Cancer. 1987. - Vol. 56, №6.-P. 809 -813.

232. Brugger W, Rosenthal FM, Kanz L, Mertelsmann R Clinical role of colony stimulating factors. // Acta Haematol. 1991. - Vol. 86, № 3. - P. 138-147.

233. Brunson M.E., Alexander J.W. Mechanisms of transfusion-induced immunosuppression // Transfusion. 1990. - Vol. 30, № 7. - P. 651-658.

234. Buratti S., Lavine J.E. Drugs and liver: advances in metabolism, toxicity, and therapeutics // Curr. Opin. Pediatr. 2002. - Vol. 14. - P. 601-607.

235. Burke B.E., Gambliel H., Olson et al. Prevention by dextrazoxane of down-regulation of ryanodine receptors gene expression in antracycline cardiomyopathy in the rat // Br. J. Pharmacol. 2000. - Vol. 131. - P. 1-4.

236. Burton C.Y., Walls Y. Interstitial inflammation and scarring: messages from the proximal tubular cell // Nephrol. Dial. Transplant. 1996. - № 11. - P. - 15051508.

237. Buzaid A.C. Strategies for combined chemotherapy and biotherapy in melanoma // Cancer Control. 2000. - Vol. 7. - P. 185-197.

238. Calabro-Jones PM., Aguilera J.A., Ward J.F., et al. Uptake of WR-2721 derivatives by cells in culture: Identification of the transported from the drug // Cancer Res. 1988. - Vol. 48. - P. 3634-3640.

239. Cannizaro R., Crivellari D., Margi D. Treatment of liver toxicity in women undergoing adjuvant chemotherapy for breast cancer by ursodesoxycholic acid: pilot study // Hepathology. 1999. - Vol. 30, № 4. - P.550.

240. Carmo-Pereira J., Costa F.O., Henriques E. et al. Primary chemotherapy with mitoxantrone and prednisone in advanced breast carcinoma. A phase II study. // Eur J Cancer Clin Oncol. 1988. - Vol. 24, № 3 - P. 473-476.

241. Chandramu C., Manohar R.D., Krupadanam D.G., Dashavantha R.V. Isolation. Characterization and biological activity of betulinic acid and ursolic acid from Vitex negundo L. // Phytother. Res. 2003. - Vol. 17, № 2. - P. 129-134.

242. Chaturvedula V.S.P., Schilling J.K., Johnson R.K., Kingston D.G.I. New cytotoxic lupane triterpenoids from the twigs of Coussarea paniculata // J. Nat. Prod. -2003. Vol. 66, № 3. - P. 419-422.

243. Chiba N., Bernard L., OBrien B.J. et al. A Canadian Physician survey of dyspepsia management // Can. J. Gastroenterol. 1998, № 12. - P. 83-90.

244. Cichewicz R.H., Kouzi S.A. Chemistry, biological activity, and chemotherapeu-tic potential of betulinic acid for the prevention and treatment of cancer and HIV infection. // Med Res Rev. 2004. - Vol. 24, № 1. - P. 90-114.

245. Coleman R.E. Bisphosphonate treatment of bone metastases and hypercalcemia of malignancy // Oncology (Huntington NY). 1991. - Vol. 5, № 8. - P. 5560.

246. Curran C.F., Narang P.K., Reynolds R.D. Toxicity profile of dexrazoxane (Zi-necard, ICRF-187, ADR-529, NSC-169780), a modulator of doxorubicin car-diotoxicity // Cancer Treat. Rev. 1991. - Vol. 18. - P. 241-252.

247. De Beer E.L., Bottone A.E., Van Rijk M.C. et al. Dextrazoxane pretreatment protects skinned rat cardiac trabeculae against delayed doxorubicin-induced impairment of crossbridge kinetics // Br. J. Pharmacol. — 2002. Vol. 135. - P. 1707-1714.

248. DeCastro C.M., Gockerman J.P., Moore J.O. et al. Preliminary results of a phase II stady of amifostine for patients with myelodysplastic syndrome // Blood. 1997. - Vol. 80. - P. 4034 (suppl 1) (abstr).

249. DeLeve L.D., Kaplowitz N. Mechanisms of drug-induced liver disease // Gastroenterol. Clin. N Am. 1995. - Vol. 24. - P. 787-810.

250. Deng Y., Snyder J.K. Preparation of a 24-nor-l,4-dien-3-one triterpene derivative from betulin: a new route to 24-nortriterpene analogues. // J Org Chem. -2002. Vol. 67, № 9. - P. 2864-2873.

251. Denzlinger C., KappA., Grimberg M. et al. Enhanced endogenous leukotriene biosynthesis in patients treated with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor // Blood. 1990. - Vol. 76, № 9. - P. 1765-1770.

252. Doroshow J.H., Davies K.J. Redox cycling of anthracyclines by cardiac mitochondria. II. Formation of superoxide anion, hydrogen peroxide, and hydroxyl radical//J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261, № 7. - P. 3068-3074.

253. Douay L., Hu C., Giarratana M.C., et al. Amifostine improves the antileukemic therapeutic index of mafosfamide: Implications for bone marrow purging // Blood. 1995. - Vol. 86. - P. 2549-2855.

254. Duker-Eshun G., Jaroszewski J. W., Asomaning W.A. et al Antiplasmodial constituents of Cajanus cajan // Phytother. Res. 2004. - Vol 18, № 2. - P. 128130.

255. El-Ghissassi F., Verhaehg G., Hainaut P. Modulation of wild-type p53 protein activity by the aminothiol amifostine // Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 1997. -Vol. 16. -P. 1958 (abstr).

256. El-Demerdash E., Ali Azza A., Osman A.M. New aspects in probucol cardioprotection against doxorubicin-induced cardiotocity // Cancer Chemotherapy and pharmacology. 2003. - Vol. 52, № 5. - P. 411-416.

257. Erlinger S. Drug-induced cholestasis // J Hepatol. 1997. - Vol. 26 (suppl. 1). -P. 1-4.

258. Evers M., Poujade C., Soler F. et al. Betulinic acid derivatives: a new class of human immunodeficiency virus type 1 specific inhibitors with a new mode of action // J. Med. Chem. 1996. - Vol. 39, № 5. - P. 1056-1068.

259. Fulda S., Friesen C., Los M. et al. Betulinic acid triggers CD95 (APO-l/Fas)-and p53-independent apoptosis via activation of caspases in neuroectodermal tumors // Cancer Res. 1998. - Vol. 58, № 24. - P. 5876-5877.

260. Fulda S., Jeremias I., Debatin K.M. Cooperation of betulinic acid and TRAIL to induce apoptosis in tumor cells // Oncogene. 2004. - Vol. 23, № 46. - P. 7611-7620.

261. Fulda S., Jeremias I., Steiner H.H., et al. Betulinic acid: a new cytotoxic agent against malignant brain-tumor cells. // Int. J. Cancer. 1999. - Vol. 82, № 3. -P. 435-441.

262. Fulda S., Susin S.A., Kroemer G., Debatin K.M. Molecular ordering of apoptosis induced by anticancer drugs in neuroblastoma cells // Cancer Res. 1998. -Vol. 58, № 19.-P. 4453-4460.

263. Fulda S, Scaffidi C., Susin S.A. et al. Activatin of mitochondria and release of mitochondrial apoptogenic factors by betulinic acid // J. Biol. Chem. 1998. -Vol. 273, № 51. - P. 33942-33948.

264. Funakoshi N., Onizuka M., Ynagi K. et al. A new model of lung metastasis for intravital studies // Microvasc. Res. -2000. Vol. 59, № 3. - P. 361-367.

265. Fung A.S.C., Leikis M.J., Mcmahon L.P. Acute renal failure associated with legionella pneumonia and acute cholecystitisn // Nephrology. 2004. - № 2. - P. 105-108.

266. Fuskevag O.M., Krisiansen C., Olsen R. et al. Microvascular perturbation in rats receiving the maximum tolerated dose of methotrexate or its major metabolite 7-hudroxymethotrexate // Ultrastruct. Pathol. 2000. - Vol. 24. - P. 325-332.

267. Gao H., Wu L., Kuroyanagi M. et al. Antitumor-promoting constituents from Chaenomeles sinensis KOEHNE and their activities in JB6 mouse epidermal cells.//Chem. Pharm. Bull. 2003. - Vol. 51, № 11.-P. 1318-1321.

268. Gelin S., Lundholm K. The metabolic response to cancer // Proc.Natr. Soc. -1992. Vol. 1, № 2. - P. 279-284.

269. Giri S.N., Ali M., Du X. et al. Amelioration of doxorubicin-induced cardiac and renal toxicity by pirfenidone in rats // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 2004. - Vol. 25, № 3. - P. 141-150.

270. Glover D., Click J.H., Weiler C., et al. WR-2721 protects against the hematologic toxicity of cyclophosphamide: A controlled phase II trial // J. Clin. Oncol. 1986. - Vol. 4. - P. 584-588.

271. Grdina D.J., Constantmou A., Shigematsu N. et al. Inhibition of topoisomerase II alpha activity in CHO KI cells by 2-(aminopropyl)-amino.-ethanethiol (WR-1065) 11 Radiat. Res. 1994. - Vol. 138. - P. 44-52.

272. Grdina D.J., Sigdestad C.P. Radiation protectors: The unexpected benefits // Drug Metab. Rev. 1989. - Vol.20. - P. 13-42.

273. Grdina D.J., Sigdestad C.P Chemical Protection and cell-cycle effects onradia-tion-induced mutagenesis I I Cell Prolif. 1992. - Vol. 25. - P. 23-29.

274. Gu J.Q., Wang Y., Franzblau S.G. et al. Antitubercular constituents of Valeriana laxiflora. // Planta Med. 2004. - Vol. 70, № 6. - P. 509-514.

275. Guevara A.P., Amor E., Russel G. Antimutagenes from Plumeria acuminate ait // Mutat Res. 1996. - Vol. 361, № 2-3. - P. 67-72.

276. Gurtoo H.L., Hipkens J.H., Sharma S.D. Role of glutathione in the metabolism-dependent toxicity and chemotherapy of cyclophosphamide // Cancer Res. -1981.-Vol. 41.-P. 3584-3591.

277. Gutfreund K.S., Idikio H.A. Prolonged acute hepatitis after clarithromycin and amoxicillin // Hepatology. 1999. - Vol. 30, № 4. - P 549.

278. Han S., Li Z. Antitumor effect of extract of birch bark and its influence to the immune function // Zhong Yao Cai. 2000. - Vol. 23. - P.23, № 6. - P. 343345.

279. Harman A. W., Maxwell M.J. An evalution of the role of calcium in cell injury. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol 1995. - Vol. 35. - P. 129-144.

280. Hata K., Hori K., Ogasawara H., Takahashi S. Anti-leukemia activities of Lup-28-al-20(29)-en-3-one, a lupane triterpene. // Toxicol. Lett. 2003(a). -Vol. 143, № 1.-P.1-7.

281. Hata K., Hori K., Takahashi S. Differentiation- and apoptosis-inducing activities by pentacyclic triterpenes on a mouse melanoma cell line //. J. Nat. Prod. -2002. Vol. 65, № 5. - P. 645-648

282. Hata K., Hori K„ Takahashi S. Role of p38 MAPK in lupeol-induced B16 2F2 mouse melanoma cell differentiation // J. Biochem. 2003(6). - Vol. 134, № 3. P. 441-445.

283. Hata K., Ishikawa K., Hori K., Konishi T. Differentiation-inducing activity of lupeol, a lupane-type triterpene from Chinese dandelion root (Hokouei-kon), on a mouse melanoma cell line. // Biol. Pharm. Bull. 2000. - Vol. 23, № 8. -P. 962-967.

284. Hashimoto F., Ogawa R., Kameyama O. Control engineering and electromyographic kinesiology analyses of normal human gait // J. Orthop. Sci. 2000. -Vol.5, №2.-P. 139-149.

285. Henry D. Haematological toxicities associated with dose-intensive chemotherapy, the role for and use of recombinant growth factors // Ann. Oncol. 1997. -Vol. 8, №7.-P. 7-10

286. Hoefsloot L.H., Van Amelsvoort M.P., Breeders L.C. et al. Erythropoietin-induced activation of STAT5 is impaired in the myelodysplastic syndrome // Blood. 1997. - Vol. 89. - P. 1690-1700.

287. Hoekman K., van der Vijgh, Vermorken J.B. Clinical and preclinical modulation of chemotherapy-induced toxicity in patients with cancer// Drugs. 1999. -Vol. 57, №2.-P. 133-156.

288. Holwitt E.A., Coda E., Swenberg C.E. Enhancement of topoisomerase 1-mediated unwinding of supercoiled DNA by the radioprotector WR-33278 // Radiat. Res. 1990. - Vol. 124. - P. 107-109.

289. Holz-Smith S.L., Sun I.C., Jin L. et al Role of human immunodeficiency virus (HIV) type 1 envelope in the anti-HIY activity of the betulinic acid derivative IC9564 // Antimicrob. Agents Chemother. 2001. - Vol. 45, № 1. - P. 60-66.

290. Huang L., YuanX., Aiken C., Chen C.H. Bifunctional anti-human immunodeficiency virus type 1 small molecules with two novel mechanisms of action // Antimicrob. Agents. Chemother. 2004. - Vol. 48, № 2. - P. 663-665.

291. Huang Y.S. Chern H.D., Su W.J. et al Cytochrome P-450 2E1 genotype and the susceptibility to antituberculosis drug-induced hepatitis // Hepatology. -2003.-Vol. 37.-P. 924-930.

292. Hughes W.T., Armstrong D., Bodey G.P. et al. Guidelines for the use of antimicrobial agents inneutropenic patients with unexplained fever // J.Infect. Dis. -1990.-Vol. 161.-P. 381-396.

293. Hwang B.Y., Chai H.-B., Kardono L.B.S. et al. Cytotoxic triterpenes from the twigs of Celtis philippinensis // Phytochemistry. 2003. - Vol. 62, № 2. - P. 197-201.

294. Imai Y. Evidence for biochemically different types of vesicles in the hepatic microsomal fraction // J. Biochem. 1966. - Vol. 60, № 4. - P. 417-425.

295. Imondi A.R., Torre P.D., Mazue et al. Dose-response relationship of dexra-zoxan for prevention of doxorubicin-induced cardiotoxicity in mice, rats, and dogs // Cancer Res. 1996. - Vol. 56. - P. 4200-4204.

296. Jaaskebainen P. Betulinol and its utilization // Paperi ja Puu. 1981. - Vol. 63, № 10.-P. 599-603.

297. Jahnukainen K., Jahnukainen T., Salmi T.T. et al. Amifostine protects against early but not late toxic effects of doxorubicin in infant rats // Cancer Res. -2001. Vol. 61, № 17. - P. 6423-6427.

298. Jeong H.-J., Chai H.-B., Park S.-Y., Kim D.S.H.L. Preperation of amino acid conjugates of betulinic acid with activity against human melanoma // Bioorg. And Med. Chem. Lett. 1999. - Vol. 9, № 8. - P. 1201-1204.

299. Kala M., Suhas C., Kulkarni H. et al. Protective effect of Liv.52 on Na+-K+-ATPase activity in Paracetamol-induced Hepatotoxicity // Medicine Update. -2002. Vol. 10, № 5. - P. 53-56.

300. Kaplowitz N. Causality assessment versus Guilt-by-association in drug hepatotoxicity // Hepatology. 2001. - Vol. 33, № 1. - P.308-309.

301. Kashiwada Y., Chiyo J., Ikeshiro Y. et al. Synthesis and anti-HIV activity of 3-alkylamido-3-deoxy-betulinic acid derivatives. // Chem. Pharm. Bull. 2000. -Vol. 48, №9.-P. 1387-1390.

302. Kashiwada Y., Chiyo J., Ikeshiro Y. et al. 3,28-Di-0-(dimethylsuccinyl)-betulin isomers as anti-HIV agents. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001. - Vol. 11, №2.-P. 183-185.

303. Kashiwada Y., Hashimoto F., Cosentino L.M. et al. Betulinic acid and dihy-drobetulinic acid derivatives as potent anti-HIV agents // J. Med. Chem. -1996. Vol. 39, № 5. - P. 1016-1017.

304. Kashiwada Y, Sekiya M, Ikeshiro Y. et al. 3-O-Glutaryl-dihydrobetulin and related monoacyl derivatives as potent anti-HIV agents // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004. - Vol. 14, № 23. - P. 5851-5853.

305. Kaya H., Oral B., Ozguner F. et al. The effect of melatonin application on lipid peroxidation during cyclophosphamide therapy in female rats // Xentralbl. Gy-nakol. 1999. - Vol. 121. - P. 499-502.

306. Kim D.S.H.L, Pezzuto J.M., Pisha E. Synthesis of betulinic acid derivatives with activity against human melanoma. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. -Vol. 8, № 13.-P. 1707-1712.

307. Kim J.Y., Koo H.-M., Kim D.S.H.L. Development of C-20 modified betulinic acid derivatives as antitumor agents. // Bioorg. Med. Chem Lett. 2001. - Vol. 11,№ 17.-P. 2405-2408.

308. Klimeski W., Heaton H., Glinsmann-Gibson B. et al. Amifostine suppresses apoptosis in myelodysplastic CD34+ cells and promotes progenitor growth via polyamine-like effects //Blood. 1997. - Vol. 80(suppl 1). - P. 520a (abstr).

309. Komarov P.G., Komarova E.A., Kondratov R. V. et al. A chemical inhibitor of p53 that protects mice from the side effects of cancer therapy // Science. -1999.-Vol 285, № 5434.-P. 1733-1737.

310. Krough R., Kroth R., Berti C. et al. Isolation and identification of compounds with antinociceptive action from Ipomoea pes-caprae (L.) R. Br // Pharmazie. -1999. Vol. 54, № 6. - P. 464-469.

311. Larrey D, Pageaux G.R. Genetic predisposition to drug-induced hepatotoxicity // J. Hepatol. 1997. - Vol. 26 (suppl. 2). - P. 12-21.

312. Levi C., Lindor K.D. Drug-induced cholestasis // Clin. Liver Dis. 2003. -Vol. 7.-P. 311-330.

313. Li F., Goila-Gaur R., Salzwedel K. et al. PA-457: a potent HIV inhibitor that disrupts core condensation by targeting a late step in Gag processing // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2003. Vol. 100, №23.-P. 13555-13560.

314. List A.F., Brasfield F., Heaton R. et al. Stimulation of hematopoiesis by amifostine in patients with myelodysplastic syndrome // Blood. 1997. - Vol. 90. -P. 3364-3369.

315. List A.F., Garewal H.S., Sandberg A.A. The myelodysplastic syndromes: Biology and implications for management // J. Clin. Oncol. 1990. — Vol. 8. — P. 1424-1441.

316. List A.F., Heaton R., Glinsmann-Gibson B. et al. Amifostine stimulates formation of multipotent and erythroid bone marrow progenitors // Leukemia. -1998.-Vol. 12.-P. 1596-1602.

317. Liu W.K., Ho J.C., Cheung F. IV., Liu B.P. et al. Apoptotic activity of betulinic acid derivatives on murine melanome B 16 cell line // Eur. J. Pharmacol. -2004. Vol. 498, № 1-3. - P. 71-78.

318. Liu W.K., Ho J.C., Che C.T. Apoptotic activity of isomalabaricane triterpenes on human promyelocytic leukemia HL60 cells // Cancer lett. 2005. - Vol. 230,№ l.-P. 102-110.

319. Lowry O.H. Protein measurement with the Folin phenol reagent //J. Biol. Chem.- 1951.-Vol. 193, № l.-P. 265-275.

320. Maisin J.R. Bacq and Alexander Award lecture-chemical radioprotection: past, present, and future prospects // Int. J. Radiat. Biol. 1998. - Vol. 73, № 4. - P. 443-450.

321. Malini M.M., Lenin M., Varalakshmi P. Protective effect of triterpenes on calcium oxalate crystal-induced peroxidative changes in experimental urolithiasis //Pharmacol. Res. 2000. - Vol. 41, № 4. - P. 413-418.

322. Manez S., Recio M.C., Giner R.M., Rios J.L. Effect of selected triterpenoids on chronic dermal inflammation // Eur. J.Pharmacol. 1997. - Vol. 334, № l.-P. 103-105.

323. Mayaux J.-F., Bousseau A., Pauwels R. et al Triterpene derivatives that block entry of human immunodeficiency virus type 1 into cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91, № 9. - P. 3564-3568.

324. Merchav S., Wagemaker G., Souza L.M. et al. Impaired response of myelodysplasia marrow progenitors to stimulation with recombinant haemopoietic growth factors // Leukemia. 1991. - Vol. 5. - P. 340-346.

325. Mitaine-Offer A.C., Hornebeck W., Zeches-Hanrot M. Triterpenes and phytos-terols as human leucocyte elastase inhibitors II Planta Med. 2002. - Vol. 68, № 10.-P. 930-932.

326. Mitchell J.L., Judd G.G., Diveley R.R. et al. Involvement of the polyamine transport system in cellular uptake of the radio-protectants WR-1065 and WR-33278 //Carcinogenesis. 1995,- Vol. 16.-P. 3063-3068.

327. Mukherjee R, Jaggi M., Rajendran P. et al. Betulinic acid and its derivatives as anti-angiogenic agents // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004. - Vol. 14, № 9. -P. 2181-2184.

328. Mutai C., Abatis D., Vagias C. et al. Cytotoxic lupane-type triterpenoids from Acacia mellifera // Phytochemistry. 2004. - Vol. 65, № 8. - P. 1159-1164.

329. Mutstafa G., Anis E., Ahmed S. et al. Lupene-type triterpenes from Periploca aphylla // J. Nat. Prod. 2000. - Vol. 63, № 6. - P. 881-886.

330. Nash T. The colorirnetric estimation of formaldehyde by means of the Nashzsch reaction//Biochem. J. 1953.-Vol. 55. -N4.-P. 416-421.

331. Nguyen Q.S., Nguyen V.H, Santarsiero B.D. et al. New 3-O-acyl betulinic acids from Strychnos vanprukii Craib // J. Nat. Prod. 2004. - Vol. 67, № 6. - P. 994-998.

332. Noda Y., Kaiya T., Kohda K., Kawazoe Y. Enhanced cytotoxicity of some triterpenes toward leukemia L1210 cells cultured in lowpH media: possibility of a new mode of cell killing // Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 1997. - Vol. 45,№ 10.-P. 1665-1670.

333. Orellana M., Rodrigo R., Thielemann L., Guajardo V. Bile duct ligation and oxidative stress in the rat: effects in liver and kidney.Comp Biochem Physiol C //Toxicol Pharmacol.-2000.-Vol. 126, №2.-P. 105-111.

334. Parke D.V., Ioannides C., Lewis D.F.V. The role of the cytochrome P-450 in the detoxication and activation of drugs other chemicals // Physiol and Pharmacol. 1991. - Vol. 69. - P. 537-549.

335. Pavlova N.I., Savinova O. U., Nikolaeva S.N. et al. Antiviral activity of betulin, betulinic and betulonic acids against some enveloped and non-enveloped viruses // Fitotherapia. 2003. - Vol. 74, № 5. - P. 489-492.

336. Philchenkov A. Caspases as regulators of apoptosis and other cell functions // Biochem. 2003. - Vol. 68, № 4. - P. 365-376.

337. Pinnaro P., Ruggeri E.M., Carlini P. et al. Cummulative or delayed nephrotoxicity after cisplatin (DDR) Tretment // Tumori. 1986. - Vol. 72. - P. 197200.

338. Pisha E., Chai H., Lee L.-S. et al. Descovery of betulinic acid as a selective inhibitor of human melanoma that functions by induction of apoptosis // Nat. Med. 1995.-Vol. 1,№ 10.-P. 1046-1051.

339. Pounds J.G., Long G.J., Rosen J.F. Cellular and molecular toxicity of lead in bone // Environ.Health.Perspect. 1991. - Vol. 91. - P. 17-32.

340. Preisler H., Venugopal P., Galvez A. et al. Effective treatment of poor prognosis AMI // Blood. 1997. - Vol. 80. - P. 2257a (suppl 1) (abstr)

341. Price F.V., Chambers S.K., Carcangiu M.L. et al. Intravenous cisplatin, doxorubicin, and cyclophosphamide in the treatment of uterine papillary serous carcinoma (UPSC) // Gunecol. Oncol. 1993. - Vol. 51. - P. 383-389.

342. Raizova M., Hossini A.M., Eberle J. et al. The Bax/Bcl-2 ratio determines the susceptibility of human melanoma cells to CD95/Fas-mediated apoptosis // J. Invest. Dermatol.-2001.-Vol. 117, №2.-P. 333-340.

343. Ramires-Apan A.A., Perez-Castorena A.L., de Vivar A.R. Anti-inflammatory constituents of Mortonia greggii Gray // Z Naturforsch C. 2004. - Vol. 59, №3-4.-P. 237-243.

344. Raza A., Andric T., Quawi H. et al. Combination of pentoxifylline, ciprofloxacin, dexamethasone with amifostine improves ineffective hemopoiesis in patients with myelodysplastic syndromes 11 Blood. 1997. - Vol. 80. - P. 367a (sup 1) (abstr).

345. Raza A., Gezer S., Mundle S. et al. Apoptosis in bone marrow biopsy samples involving stromal and hemopoietic cells in 50 patients with myelodysplasia syndromes // Blood. 1995. - Vol. 86. - P. 268-376.

346. Recio M.C., Giner R.M., Manez S. et al. Investigetions on the steroidal anti-flammatory activity of triterpenoids from diospyros leucomelas // Planta Med. 1995.-Vol. 61, № l.-p. 9-12.

347. Robert J., Illiadis A., Hoerni B. et al. Pharmacokinetics of adriamycin in patients with breast cancer: correlation between pharmacokinetic parameters and clinical short-term response // Europ. J. Cancer Clin. Oncol. 1982. - Vol. 18, №8.-P. 739-745.

348. Saleem M., Afaq F., Adhami V.M., Mukhtar H. Lupeol modulates NF-kappaB and PI3K/Akt pathways and inhibits skin cancer in CD-I mice // Oncogene. -2004.-Vol. 23, №30.-P. 5203-5214.

349. Sawada N., Kataoka K., Kondo K. et al. Betulinic acid augments the inhibitory effects of vincristine on growth and lung metastasis of B16F10 melanoma cells in mice // Br. J. Cancer. 2004. - Vol. 90, № 8. - P. 1672-1678.

350. Schiano TD, Black M. Drug-induced and toxic liver disease / In: Friedman LS, Keefe EB, Maddrey WC (ed.). Handbook of Liver Disease. Churcill Livingstone 1998: P. 103-123.

351. Schroeder P.E. Hasinoff B.B. The doxorubicin-cardioprotective drugs undergoes metabolism in rat to its metal ion-chelating from adr-925 // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 2002. - Vol. 50, № 6. - P. 509-513.

352. Setzer W.N., Zetzer M.C., Bates R.B., Jackes B.R. Biologically active triterpenoids of Syncarpia glomulifera bark extract from Paluma, north Queensland, Australia // Planta Med. 2000. - Vol. 66, № 2. - P. 176-177.

353. Setzer W.N., Setzer M.C. Plant-derived triterpenoids as potential antineoplastic agents II Mini Rev.Med. Chem. 2003. - Vol. 3, № 6. - P. 540-556.

354. Shirwaikar A., Setti M., Bommu P. Effect of lupeol isolated from Crataeva nur-vala Buch.-Ham. stem bark extract against free radical induced nephrotoxicity in rats // Indian J. Exp. Biol. 2004. - Vol. 42, № 7. - P. 686-690.

355. Sigdestad C.P., Bergquist B.L., Grdina D.J. The effect of chemical radiation protectors on cell cycle progression after gamma or neutron irradiation // Cell. Prolif. 1991. - Vol. 24. - P. 271-280.

356. Sisson S.D., Dinarello C.A. Production of interleukin-1 alpha, interleukin-1 beta and tumor necrosis factor by human mononuclear cells stimulated with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor // Blood. 1988. - Vol. 72, №4.-P. 1368-1374.

357. Smoluk G.D., Fahey R.C., Calabro-Jones PM. et al. Radio-protection of cells in culture by WR-2721 and derivatives: Form of thedrug responsible for protection // Cancer Res. 1988. - Vol. 48. - P. 3641-3647.

358. Soler F., Poujade C., Evers M. et al. Betulinic acid derivatives: a new class of specific inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 entry // J. Med. Chem. 1996.-Vol. 39, №5.-P. 1069-1083.

359. Stravitz R.T., Sanyal A.J. Drug-induced steatohepatitis // Clin Liver Dis. -2003.-Vol. 7.-P. 435-451.

360. Stuart J.J., Crocker D.L., Roberts H.R. Treatment of busulfan-induced pancytopenia//Arch. Intern. Med. 1976. -Vol. 136, №4.-P. 1181-1183.

361. Sturm S., Gil R.R., Shai H.B. et al. Lupane derivatives from Lophopetalum wallichii with farnesyl protein transferase inhibitory activity // J. Nat. Prod. -1996. Vol. 59, № 7. - P. 658-663.

362. Su B.N., Cuendet M., Farnsworth N.R. et al. Activity-guided fractionation of the seeds of Ziziphus jujuba using a cyclooxygenase-2 inhibitory assay // Planta Med. 2002. - Vol. 68, № 12.-P. 1125-1128.

363. Sun I.C., Chen Ch.-H., Kashiwada Y. et al. Anti-AIDS agents 49. Synthesis, anti-HIV, and anti-fusion activities of IC9564 analogues based on betulinic acid // J. Med. Chem. 2002. - Vol. 45, № 19. - P. 4271-4275.

364. Sun I.C., Kashiwada Y., Morris-Natschke S.L., Lee K.-H. Plant-derived terpenoids and analogues as anti-HIV agents // Curr. Top. Med. Chem. 2003. -Vol. 3, № 2. - P. 155-169.

365. Suksamrarn A., Tanachatchairatana T., Kanokmedhakul S. Antiplasmodial triterpenes from twigs of Gardenia saxatilis // J. Ethnopharmacol. 2003. -Vol. 88, №2-3.-P. 275-277.

366. Tan Y, Yu R., Pezzuto J.M. Betulinic acid-induced programmed cell death in human melanoma cells involves mitogen-activated protein kinase activation // Clin. Cancer. Res. 2003. - Vol. 9, № 7. - P. 2866-2875.

367. Thumher D., Turhani D., Wannemacher B. et al. Betulinic acid: a new cytotoxic compound against malignant head and neck cancer cell // Head Neck. -2003.-Vol. 25.-P. 732-740.

368. Thummel K.E., Wilkinson G.R. In vitro and in vivo drug interactions involving human CYP3A // Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1998. - Vol. 38. - P. 389430.

369. Torre P., Imondi A.R., Bernardi C. et al. Cardioprotection by dexrazoxan in rats treaded with doxorubicin and paclitaxel // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 1999. - Vol. 44, № 2. - P. 138-142.

370. Tzoracoleftherakis E., Tsamandas A. C. Liver pathology in patients with previous mastectomy for breast cancer // Hepatology. 1999. - Vol. 30, № 4. - P. 685a.

371. Urban M., Sarec J., Klinot J. et al. Synthesis of A-seco derivatives of betulinic acid with cytotoxic activity // J. Nat. Prod. 2004. - Vol. 67, № 7. - P. 11001105.

372. Wasserman T.H., Phillips T.L., Ross G. et al. Differential protection against cytotoxic chemotherapeutic effects on bone marrow CPUs by WR-2721 // Cancer Clin. Trials. 1981. - Vol.4. - P. 3-6.

373. Watkins M.D. Role cytochromes P-450 in drug metabolism and hepatotoxicity // Seminars in liver disease. 1990. - Vol. 10, № 4. - P. 235-250.

374. Weber G.F. Actiation of the anticancer drug ifosphamide by rat liver microsomal P450 enzymes // Biochem. Pharmacol. 1993. - Vol. - 45. - P. 16851694.

375. Xu M.F., Tang P.L., Qian Z.M., Ashraf M. Effects by doxorubicin on myocardium are mediated by oxygen free radicals II Life Sci. 2001. - Vol. 68. - P. 889-901.

376. Xu R., Fazio G.C., Matsuda S.P. On the origins of triterpenoid skeletal diversity // Phytochemistiy. 2004. - Vol. 65, №3.-P. 261-91.

377. Yamagichi F., Furuhama K. Application of hematopoietic progenitor assays for the estimation of hematotoxicity in rats // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 1994.-Vol. 31, №2.-P. 71-77.

378. You Y.J., Nam N.H., Kim Y. et al. Antiangiogenic activity of lupeol from Bom-bax ceiba // Phytother. 2003. - Vol. 17, № 4. - P. 341-344.

379. Yun Y., Han S., Park E. et al. // Immunomodulatory activity of betulinic acid by producing pro-inflammatory cytokines and activation of macrophages // Arch. Pharm. Sci. 2003. - Vol. 26, № 12.-P. 1087-1095.

380. Zdzisiska B., Rzeski W., Paduch R. et al. Differential effect of betulin and betulinic acid on cytokine production in human whole blood cell culture // Polish. J. Pharmacol. 2003. - Vol. 55. - P. 235-238.

381. Zhang H.-J., Tan G.T., Hoang V.D. et al. Natural anti-HIV agents. Part IV. Anti-HIV constituents from Vatica cinerea // J. Nat. Prod. 2003. - Vol. 66, № 2.-P. 263-268.

382. Zhang Z, Elsohly H.N., Jacob M.R. et al. Natural products inhibiting Candidi albicans secreted aspartic proteases from Tovomita krukovii II Planta Med. -2002. Vol. 68, № 1. - P. 49-54.

383. Zhou-Pan X.R., Seree E., Zhou X.J. et al. Involvement of human liver cytochrome P-450IIIA in vinblastin metabolism: drug interactions II Cancer Res. -1993.-Vol. 54.-P. 5121-5126.

384. Zhu M., Phillipson J.D., Greengross P.M., Bowery N.G. Chemical and biological investigation of the root bark of Clerodendrum mandarinorum // Planta Med. 1996. - Vol. 62, № 5. - P. 393-398.

385. Zimmerman H.J. Acetaminophen (paracetamol) hepatotoxicity with regular intake of alcohol: analysis of instances of therapeutic misadventure // Hepatol-ogy. 1995. - Vol 22. - P. 767-73.

386. Zimmerman H.J. Drug-induced liver disease // In: Schiff E., Sorrell M., Madrey W., eds. Schiffs diseases of the liver 8th ed Philadelphia:Lippin-cott-raven, 1999.-P. 973-1064.

387. Zimmerman H.J. Drug-induced liver disease // Clin. Liver Dis. 2000. - Vol. 4.-P. 73-96.

388. Zuco V., Supino R., Righetti S. C. et al. Selective cytotoxicity of betulinic acid on tumor cell lines, but not on normal cells // Cancer. Lett. 2002. - Vol. 175, № 1. - P. 17-25.