Морфофункциональная характеристика С-клеток щитовидной железы в онтогенезе и эксперименте

Титова, Марина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональная характеристика С-клеток щитовидной железы в онтогенезе и эксперименте
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная характеристика С-клеток щитовидной железы в онтогенезе и эксперименте"

На правах рукописи

ТИТОВА МАРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА С-КЛЕТОК ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ОНТОГЕНЕЗЕ И ЭКСПЕРИМЕНТЕ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САРАНСК-2003

Работа выполнена на кафедре нормальной анатомии Казанского государственного медицинского университета

Научный руководитель -

доктор медицинских наук, профессор Киясов Андрей Павлович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Валиуллин Виктор Владимирович

доктор медицинских наук, профессор Гунин Андрей Германович

Ведущая организация -Московская государственная медицинская академия имени И.М. Сеченова

г. Москва

Защита диссертации состоится "/.¿'НС&рМ 2003 г.

в /Очасов на заседании диссертационного совета Д 212.117.01 при Мордовском государственном университете имени Н.П. Огарева

(430000, республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева

Автореферат разослан " " _2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета(

доктор биологических наук, профессор П.П. Кругляков

g-oog-A

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ. В связи с неблагоприятной экологической обстановкой в большинстве регионов России особую актуальность приобретают исследования, посвященные действию токсических веществ и, в первую очередь, солей тяжелых металлов на различные органы и ткани человека. Щитовидная железа (ЩЖ) является органом-мишенью для различных неблагоприятных экзогенных факторов (Майстеренко В.Н., 1996; Шадлинский В.Б., 1999; Риггз Б.Л., 2000) и в последние годы интенсивно изучалось их влияние на различные морфофункциональные характеристики ЩЖ и синтез йодсодержащих гормонов (Бонецкий A.A., 1999; Шадлинский В.Б.,1999; Окороков А.Н., 2001). Вместе с тем, в ЩЖ С-клетки синтезируют кальцитонин, который участвует в поддержании гомеостаза кальция (Ca) в организме. Трудно предположить, что при различных неблагоприятных воздействиях на организм, популяция С-клеток останется не чувствительна к этим факторам. Особую актуальность имеют исследования по возможному влиянию солей тяжелых металлов, в частности свинца (Зербино Д.Д., 1997), на С-клетки ЩЖ и костную ткань, так как свинец способен накапливаться в скелете, замещая Ca (Майстеренко В.Н., 1996) и изменяя гомеостаз Ca в организме. Известно, что регуляция содержания Ca в крови и костной ткани осуществляется несколькими гормонами, среди которых наиболее важными следует признать паратиреоидный гормон, кальцитонин, витамин Дз и эстрогены. Изменение содержания любого из них неизбежно вызывает нарушение кальциевого обмена. В частности, снижение уровня синтеза эстрогенов, например в менопаузу, приводит к нарушению процессов ремоделирования костной ткани и, как следствие, развитию остеопороза. Большое количество больных с такой патологией, не изученность влияния изменения уровня эстрогенов на морфофункциональное состояние С-клеток ЩЖ, обуславливает актуальность изучения механизмов регуляции функционирования С-клеток (Окороков А.Н., 2001). В настоящее время для лечения и профилактики постменопаузального остеопороза широко используются препараты кальцитонина, Ca и эстрогенов (Риггз Б.Л., 2000). Однако, в виду недостаточности литературных данных (Greenberg С., 1986; Dick I.M., 1991; Saggese G., 1992) о причинах снижения секреции кальцитонина С-клеткими к моменту наступления менопаузы (Sekulic М., 1998; Hurley D.L., 1989; Deroisy R., 1989), гормональная и кальциевая терапия таких больных не всегда обоснована и часто не приводит к желаемому результату. Ввиду того, что данные о влиянии эстрогенов на С-клетки ЩЖ единичны и противоречивы, ответ на вопрос, как реагируют эти клетки на снижение уровня эстрогенов, в том числе на фоне лечения Са-содержащими или гормональными препаратами, поможет обоснованию корригирующей терапии для лечения остеопороза.

Известно, что поведение любых клеток при различных воздействиях связано с особенностями их происхождения^ в ходе

онтогенеза. С-клеткам посвящен ряд исспедоввддйивТВКЛ'орых показаны

| ТЗГ-Щ

изменения их морфологических характеристик в процессе онтогенеза, причем почти все эти исследования выполнены методами классической гистологии (Волкова О.В., 1976; Алешин Б.В., 1982, 1983; Архипенко В.И., 1983, Шадлинский В.Б., 1999). В то же время, для изучения механизмов и закономерностей дифференцировки, и получения новых научных фактов о характеристиках С-клеток ЩЖ в ходе онтогенеза, необходимо использование более информативных иммуногистохимических методов исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ - изучить динамику морфофункциональных изменений популяции С-клеток щитовидной железы в онтогенезе крысы и человека, а так же при свинцовой интоксикации у крыс и овариоэктомии у кроликов.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1 .Иммуногистохимически изучить экспрессию кальцитонина и нейронспецифической енолазы в С-клетках щитовидной железы человека и крысы в онтогенезе.

2.Исследовать влияние однократного введения нитрата свинца на экспрессию кальцитонина и нейронспецифической енолазы С-клеток щитовидной железы крысы.

3.Изучить влияние овариоэктомии на иммуногистохимические характеристики С-клеток щитовидной железы кроликов.

4.Изучить влияние препарата кальция с витамином Дд, в том числе на фоне введения эстрогенов, на С-клетки щитовидной железы кроликов при лечении экспериментального остеопороза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Получены новые данные о появлении в онтогенезе нейронспецифической енолазы и кальцитонина в С-клетках щитовидной железы человека и крысы. На основании иммуногистохимической идентификации уточнены сроки появления дефинитивного фенотипа различных клеток щитовидной железы. Впервые получены доказательства реакции С-клеток щитовидной железы в ответ на интоксикацию нитратом свинца. Новыми следует признать данные о том, что после овариоэктомии, и при коррекции метаболических нарушений, вызванных ею, специфически изменяются размеры и иммуногистохимические характеристики С-клеток. Впервые продемонстрировано, что заместительная терапия эстрогенами и препаратами кальция с витамином Дз после овариоэктомии приводит к нормализации морфологических параметров С-клеток щитовидной железы кролика.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ.

Проведенное исследование выявило морфологические закономерности развития щитовидной железы человека и крысы в пренатальном и постнатальном онтогенезе. Полученные в работе данные приближают нас к пониманию патогенеза некоторых заболеваний щитовидной железы, связанных с нарушениями функционирования С-клеток. Кроме того, результаты исследования могут оказаться полезными для травматологов при лечении спонтанных цереломов костей в период менопаузы, данные работы * г/ * чг;--

демонстрируют важную роль С-клеток щитовидной железы млекопитающих в поддержании гомеостаза Са в условиях свинцовой интоксикации и при уменьшении содержания эстрогенов. Полученные результаты будут иметь как несомненный теоретический интерес, так и практическое значение для гистологии, эмбриологии, травматологии, токсикологии и эндокринологии.

По материалам диссертации опубликовано 16 работ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Первым фенотипическим маркером С-клеток щитовидной железы является нейронспецифическая енолаза, тогда как экспрессия кальцитонина в этих клетках начинается позднее.

2. Малые дозы нитрата свинца вызывают в щитовидной железе увеличение числа клеток, экспрессирующих нейронспецифическую енолазу и кальцитонин, что по времени не совпадает с пролиферацией клеток паренхимы.

3. Нарушение гомеостаза кальция, вызванное овариоэктомисй, приводит к активации С-клеток, которая наиболее выражена на фоне введения алиментарного кальция.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследований доложены и обсуждены на IV-й Всероссийской научной конференции «Влияние антропогенных факторов на структурное состояние органов, тканей и клеток организма человека и животных» (Казань, 1997), III Республиканской научно-технической конференции молодых ученых и специалистов (Казань, 1997), III Съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1997), научной конференции ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в клинике и эксперименте» (Казань, 1997), Международном симпозиуме по фундаментальной и прикладной гистохимии (Братислава, 1998, Словакия), научной конференции Военно-медицинской академии «Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей» (Санкт-Петербург, 2001), XVIII Съезде физиологического общества имени И.П.Павлова (Казань, 2001), VI конгрессе международной ассоциации морфологов (Уфа, 2002), научно-практической конференции «Современные методы исследования в медицине и фармации» (Казань, 2002).

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 152 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав результатов собственных исследований с обсуждением полученных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографии. Диссертация содержит 4 таблицы и 58 рисунков. Список литературы включает 266 наименование, из которых 86 русскоязычных и 180 иностранных работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение морфологии ЩЖ в пренатальный и постнатальный периоды развития проведено на 64 эмбрионах, плодах и крысятах белой беспородной крысы от 16 дня гестации до 28 дня постнатального развития с датированной

беременностю, для чего самок подсаживали на ночь к самцам и день обнаружения спермиев во влагалищных мазках считали первым днем беременности. Животных декапитировали под эфирным наркозом. Изучение морфологии ЩЖ человека в пренатальном онтогенезе проведено на 22 эмбрионах и плодах с 4 до 20 недель гестации (на основании анамнеза и теменно-копчиковых размеров) (ГТэтген Б., 1959; O'Rahilly, 1979; Desmet V., 1992). Весь материал получен после легальных абортов и спонтанных выкидышей.

Создание модели экспериментального повреждения ЩЖ нитратом свинца (НС) проводили на 110 белых беспородных лабораторных крысах-самцах весом 180-210 грамм. НС растворяли в воде для инъекций, вводили внутривенно однократно и двукратно через 216 часов после первой инъекции в хвостовую вену в дозе 100 мкМ/кг веса животного (Columbano A. et al., 1983; Shinozuka Н., 1994). Животным контрольной группы вводили по такой же схеме соответствующий объем растворителя. Для исключения влияния суточных биологических ритмов на пролиферативные процессы, инъекции были проведены с 9 ч до 12 ч утра. Животных забивали декапитацией под эфирным наркозом на сроках 1,8, 16, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 168, 240, 288 часов после однократной инъекции и 288 часов после двукратной от начала эксперимента и извлекали ЩЖ.

Модель экспериментального остеопороза* выполнена проведением овариоэктомии под тиопенталовым наркозом (Mori Н., 1997) у 27 половозрелых самок кроликов породы Шиншилла, весом 2,5-3,0 кг. Еще 9 кроликов составили контрольную (не оперированную) группу. Определение биохимических показателей " проводили до операции и через 3, 6, 12, 20 и 30 недель после операции. Содержания Са в крови и моче производили унифицированным калориметрическим методом. Уровень ФСГ в крови исследовался на тест-системах фирмы "Хема-Медика" иммуноферментным анализом (Ермакова И.П., 1998, Fransis R., 1998). Развитие остеопороза подтверждали рентгенологическими и денситометрическими исследованиями, оценивая плотность костной ткани нижней челюсти овариоэктомированных и не оперированных (контрольных) крольчих по снижению с 127,4±0,33 до 85,3±0,16 условных единиц (р<0,05) (Wahner H.W., 1994; Риггз Б.Л., 2000) сравнительного исследования гистограмм с использованием компьютерной радиовизиографии «TROFHY». Через 8 недель после овариоэктомии животные с подтвержденным остеопорозом были разделены на группы (по 9 кроликов): группа А - животные, не получавшие корригирующей терапии; группы В и С -животным ежедневно внутрижелудочно вводили препарат, содержащий ионизированный Са и витамин Дз - «Кальций Седико шипучий быстрорастворимый» (Седико) из расчета 0,056 г препарата на 1 кг веса

" Исследования выполнены совместно скин., Салеевой Г. Т. " Исследования выполнены совместно с к.б.н , с н.с. ЦНИЛ КГМУ Ванеевой И.Х.

кролика. Животным группы С дополнительно 1 раз в месяц внутримышечно вводили лекарственный препарат, содержащий эстрогены - «Гинодиан Депо» (Schering), из расчета 0,014 мл на 1 кг веса животного.

Основная часть исследования выполнена методами иммуногистохимии: непрямым иммунопероксидазным и стрептавидин-биотиновым (Киясов А.П., 1998). В настоящей работе были использованы коммерческие моноклональные и поликлональные антитела фирмы DAKO (Denmark). Для выявления клеток паренхимы ЩЖ были использованы антитела против белков, являющихся маркерами этих клеток. С-клетки выявляли антителами к капьцитонину и нейронспецифической енолазе (НСЕ), тиреоциты - антителами к тиреоглобулину. Эмбриональную ЩЖ до экспрессии основных клеточных маркеров, окрашивали антителами против цитокератинов (ЦКР) № 7 и № 19 и против виментина. Пролиферативные процессы изучали с помощью антител к ядерному антигену пролиферирующих клеток (Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA) (Hall P., 1993).

Морфометрическое исследование клеток ЩЖ, экспрессирующих PCNA, кальцитонин и НСЕ проводили для определения количественных изменений (абсолютных и относительных) в онтогенезе у человека и крыс и после воздействия НС у крыс. Для подсчета клеток использовали морфометрическую окулярную сетку при увеличении х400 на микроскопе Leika DMLS. Площадь поля, в котором вели подсчет, равнялась 0,04 мм2. Исследовали не менее трех срезов ЩЖ каждого объекта. На каждом срезе подсчитывали клетки в 12 полях зрения, преимущественно в центре дольки. Измерение размеров С-клеток, экспрессирующих кальцитонин и НСЕ у кроликов при экспериментальном остеопорозе, проводили по этапам: 1) передавали изображения срезов ЩЖ при помощи встроенной в световой микроскоп (Leika DMLS) видеокамеры на персональный компьютер; 2) измеряли площади сечения С-клеток, используя компьютерную программу Corel Photo-Paint 10. Обработку результатов осуществляли с помощью пакета статистических программ «ORIGIN 41».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Закладку ЩЖ до начала экспрессии кальцитонина и тиреоглобулина удалось обнаружить у эмбриона человека на сроке 4 недели гестации, окрашивая серийные срезы эмбрионов антителами против ЦКРов, которые присутствуют в цитоплазме всех эпителиальных клеток, в том числе и в ЩЖ, и экспрессируются парами. Антитела к ЦКРу № 19 наиболее часто используются для дифференциальной диагностики опухолей ЩЖ (Baloch K.Y., 1999; Lam К.Y., 2001; Erkilic S., 2002; Beesley M.F., 2002). Из парных ЦКРов № 7 и № 19 в ЩЖ на сроке 4 недели гестации экспрессируется только ЦКР № 19, что может говорить о нарушении парности экспрессии ЦКРов. Экспрессия ЦКРа № 7 началась на 8-й неделе гестации в клетках, расположенных по периферии и в небольшой группе в центре правой доли железы. На этом сроке и в тех областях ЩЖ, где появился ЦКР № 7, окрасились первые клетки антителами против

тиреоглобулина (по периферии) и С-клетки, экспрессирующие кальцитонин и НСЕ (в центре). Видимо, экспрессия ЦКРа № 7 началась в клетках, уже вступивших на путь дифференцировки. На этом сроке и до 12-ой недели гестации в ЩЖ наблюдалась экспрессия виментина. Именно этот белок клеток мезенхимного происхождения экспрессируют многие эпителии при дифференцировке в ходе онтогенеза и регенерации (Coclet J., 1991). На сроке 12,5 недель гестации экспрессия виментина прекратилась. Паренхима ЩЖ, и в большей степени ее правая доля, приобрела фолликулярное строение. В фолликулах появился коллоид и десквамированные эпителиальные клетки, явно указывающие на высокую функциональную активность тиреоидного эпителия. Пролиферативный процесс снизился почти в два раза и с этого срока количество клеток, находящихся в процессе пролиферации, больше не превышало 4 %. Все вместе может означать, что к 12,5 неделе гестации фолликулярный эпителий ЩЖ перешел в стадию функциональной активности. На этом сроке С-клеток, экспрессирующих НСЕ, больше, чем клеток, экспрессирующих кальцитонин, что не встречается в норме в зрелой ЩЖ. Только после 14,5 недель гестации качественный и количественный состав популяции С-клеток становится, сопоставим с популяцией С-клеток зрелой железы (Wolfe H.J., 1975, Быков В.Л., 1979).

Не зависимо от того, что ранее было показано, что секреторная активность тиреоидного эпителия начинается на сроке 9 недель эмбрионального развития человека (Волкова О.В., 1976; Бесова Н.В., 1990), полученные результаты позволили сделать заключение о первом проявлении синтетической, а может быть и секреторной активности ЩЖ человека, на сроке 8 недель гестации.

Полученные данные не вступают в противоречие, а могут объясняться использованием разных антител и разных методов визуализации иммуногистохимического окрашивания.

Рис. 1. Динамика изменения числа клеток паренхимы ЩЖ экспрессирующих РСЫА, кальцитонин и НСЕ в пренатальном онтогенезе человека.

По оси абсцисс - время (недели). По оси ординат -процент клеток в единице площади (0,04 мм2). *-единичные клетки, экспрессирующие кальцитонин.

Приблизительно к 12,5 неделе фолликулярный эпителий и к 14,5 неделе гестации - С-клетки ЩЖ человека, по-видимому, заканчивают свою первичную дифференцировку. Весьма вероятно предположение, что именно к сроку 14,5 недель гестации, а не к 16 неделям внутриутробной жизни, как предполагалось ранее (Волкова О.В., 1976; Бесова Н.В., 1990), эпителий ЩЖ человека в целом заканчивает свое развитие.

Мы решили проследить развитие ЩЖ белой беспородной крысы, полагая, что это даст возможность лучше понять процессы становления ЩЖ человека.

Пролиферативная активность эпителия ЩЖ крысы с 16-го дня гестации до 28-го дня постнатального развития сохранялась на высоком уровне, обнаруживая «всплески» максимальной пролиферативной активности, на фоне которых происходило не только увеличение числа клеток паренхимы, но и их качественное изменение (рис 2).

Так, на фоне первого всплеска пролиферации в ЩЖ появились клетки, экспрессирующие тиреоглобулин и НСЕ, а через 2 дня, на том же месте, где были обнаружены НСЕ-позитивные клетки, окрасились клетки антителами против кальцитонина.

Можно предположить, что на первых этапах дифференцировки С-клетки экспрессируют НСЕ, а экспрессия кальцитонина начинается позже. С началом экспрессии кальцитонина сохраняется иммунореактивность

зо%

25% 20% 15% 10% 5% 0%

17** 18** 19* 20 21(0) 1

п ■■ I

5 10 14 18 25 28

□ РОЧА □кальцитонин ВНСЕ

Рис. 2. Динамика изменения числа клеток, экспрессирующих РСЫА, кальцитонин и ПСЕ в раннем пренатальном онтогенезе человека.

По оси абсцисс - время (недели). По оси ординат - % клеток в единице измерения (площадь - 0,04 мм2). *- единичные клетки, экспрессирующие кальцитонина.

клеток по НСЕ. Возможно, что часть С-клеток со временем перестает экспрессировать НСЕ или цитоплазма таких клеток так плотно заполняется

гранулами с кальцитонином, что иммуногистохимически сложно выявить в них экспрессию НСЕ (Алешин Б.В., 1983; Рящиков С.Н., 1989; Южаков В.В., 1996). Видимо, при определенных ситуациях возможен и обратный процесс.

Смену экспрессии НСЕ и кальцитонина можно проиллюстрировать следующим образом:

НСЕ(-) / кальцитонин(-)

НСЕ(+) / кальцитонин(-) <-> НСЕ(+) / кальцитонин(+) <-> НСЕ(-) / кальцитонин(+)

Самый большой всплеск пролиферации совпал с днем рождения крысят. На его фоне число клеток, экспрессирующих кальцитонин, превысило число С-клеток, экспрессирующих НСЕ, и качественный и количественный состав С-клеток уже на этом сроке соответствовал таковому зрелой ЩЖ крысы (Сатезе11еЛя,1994, Tunegina N.. 1998). В этот же период в ЩЖ сформировались первые фолликулы, но сразу началась десквамации эпителия, и фолликулярная структура железы была утрачена, что может говорить о начале функцианальной активности ЩЖ (Волкова О.В., 1976). На 10-й день жизни, на фоне еще одного всплеска пролиферации, ЩЖ вновь приобрела фолликулярную структуру и в фолликулах появился тиреоглобулин, а к 18-му дню жизни стали хорошо различимы центральная и периферическая зоны паренхимы.

На фоне еще одного небольшого всплеска пролиферации на 25 день постнатального развития, увеличилось число, как С-клеток, так и тиреоцитов. Скорее всего, к этому сроку закончились процессы адаптации организма к условиям внешней среде, и возникла потребность в увеличении синтеза гормонов ЩЖ для дальнейшего развития и роста.

Таким образом, пролиферативная активность эпителия ЩЖ в онтогенезе представляет собой волнообразный процесс со всплесками максимальной активности, на фоне которых происходят как количественные, так и качественные изменения клеток паренхимы.

Результаты проведенных исследований не противоречат данным, что к 30 дню жизни ЩЖ крысят полностью сформирована (Быков В.Л., 1976, Ре1со М., 1976), но показывают, что уже с 18 дня жизни фолликулярный эпителий и после 20 дня гестации популяция С-клеток соответствует таковым у взрослого животного.

Гетерогенность популяции С-клеток и возможность смены экспрессии белков-маркеров, что позволяет этим клеткам быстро реагировать на различные вмешательства, изменяющие концентрацию Са в организме, было подтверждено в следующем эксперименте.

При отравлении солями свинца (Зебрино Д. Д., 1997), которые накапливаются в скелете, замещая Са (Майстренко В.Н., 1996), снижается концентрация Са в организме. Скорее всего, свинец вмешивается в гомеостаз Са по принципу конкуренции с Са, или, воздействуя непосредственно на С-

клетки, чем вызывает их ответную реакцию. Действительно, введение в организм крысы НС повлекло за собой значительное увеличение числа С-клеток, экспрессируюших НСЕ и кальцитонин уже через 16 часов после инъекции. В это время пролиферация не отличалась от нормы. Всплеск пролиферативной активности произошел только через 36 часов от начала эксперимента. Очевидно, что для быстрого увеличения числа С-клеток в первую очередь был запущен не процесс пролиферации, а процесс смены гормонообразовательной деятельности уже имеющихся в ЩЖ С-клеток, что не исключается другими авторами (Алешин Б.В., 1982; Саз1а§па М., 1989), причем, может быть, и тех, которые находились в неактивном состоянии и не экспрессировали клеточные маркеры (по предложенной выше схеме).

Динамика изменения числа С-клеток, экспрессирующих кальцитонин и НСЕ после воздействия НС представлена на рисунке № 3. Очевидно, что после воздействия НС, уменьшение числа клеток, экспрессирующих НСЕ, началось с 4-х суток эксперимента, а экспрессирующих кальцитонин - с 7-х суток. К 12-ти суткам количество С-клеток и интенсивность экспрессии маркеров приблизились к контрольным значениям, что может свидетельствовать о процессе нормализации С-клеток.

Рис. 3. Динамика изменения числа клеток паренхимы 1ЦЖ экспрессирующих

кальцитонин и НСЕ после воздействия НС.

По оси абсцисс - число клеток в поле зрения (площадь - 0,04 мм2).

По оси ординат - время после воздействия НС (часы).

Для каждого значения указаны границы доверительного интервала (р<0,05).

То, что произошла именно нормализация, а не истощение белка и фермента клеток, и часть клеток опять перешла в латентное состояние, а не погибла, подтвердилось в результате дополнительного введения НС в

первоначальной дозе на 9 сутки от начала эксперимента. На третьи сутки после второй инъекции, т.е. к тем же 12-ти суткам эксперимента, произошло не снижение числа С-клеток, как при однократной инъекции НС, а скорее увеличение как числа, так и интенсивности экспрессии как кальцитонина, так и НСЕ.

Таким образом, мы считаем, что свинец способен вмешиваться в гомеостаз Са в организме и вызывать увеличение числа , экспрессирующих кальцитонин и нейронспецифическую енолазу С-клеток не только за счет пролиферации, но в первую очередь, изменяя их секреторную активность.

Общеизвестно, что наибольший обменный фонд Са находится в скелете. В ходе обмена, каждый день примерно 10 ммоль (0,4 г) вещества поступает в кости и столько же покидает скелет. Этот процесс необходим для того, чтобы поддержать сколь возможно стабильный уровень Са в плазме, который в норме колеблется незначительно. Поддерживают этот уровень несколько гормонов. Наиболее значимыми являются паратиреоидный гормон (ПТГ), усиливающий резорбцию костей, повышая уровень Са в плазме и кальцитонин, который являясь антогонистом ПТГ ингибирует этот процесс. Витамин Оэ увеличивает концентрацию Са путем усиления реабсорбции Са в почках и всасывания его в кишке. На гомеостаз Са способны влиять и эстрогены. Вместе с кальцитонином они подавляют активность остеокластов, резорбирующих костный матрикс. В результате между остеобластами, клетками, создающими костный матрикс, и остеокластами в норме сохраняется равновесие. Дефицит эстрогенов ведет к увеличению активности остеокластов и нарушению баланса между процессами синтеза и резорбции кости в сторону резорбции. В данной ситуации только присутствие кальцитонина сдерживает активность остеокластов. Что же происходит с С-клетками, а также с синтезом и секрецией кальцитонина в ответ на снижение уровня эстрогенов?

Для снижения уровня эстрогенов в плазме крови была проведена овариоэктомия у половозрелых самок кроликов. Падение уровня эстрогенов, подтвердилось повышением уровня ФСГ в сыворотке крови с 0,45±0,05 МЕд/л до 1,17±0,07 МЕд/л (р<0,05). В результате овариоэктомии развился остеопороз. Через 8 недель после овариоэктомии животные с подтвержденным остеопорозом были разделены на группы, в зависимости от предстоящей терапии.

В группе животных, не получавших никаких препаратов коррекции, только с 20 недели появились крупные, интенсивно окрашенные на кальцитонин и НСЕ С-клетки, достоверно отличающиеся от контрольных. В дальнейшем С-клетки, экспрессирующие кальцитонин, так и не приобрели нормальных размеров. Такого рода реакции могут носить компенсаторный характер в ответ на длительную гиперкальциемию, и то, что эти реакции не связаны напрямую с недостатком эстрогенов, показывает факт их отсутствия через 12 недель после операции (рис. 4).

Наиболее значительные изменения и наибольшие размеры С-клеток были обнаружены в щитовидной железе кроликов, получавших препараты Са и

витамина Д3 несмотря на то, что концентрация Са в крови и в моче в этой группе и в группе животных не получавших терапии была одинаково высокой. Гипертрофия С-клеток в этой группе животных выглядит еще ярче выраженной, если учесть, что размеры клеток, окрашенных антителами против НСЕ, были больше размеров С-клеток, экспрессирующих кальцитонин (рис.- 5). Повышенное напряжение С-клеток можно объяснить двумя моментами:

Во-первых, дополнительное экзогенное поступление Са из кишки в кровь на фоне и так повышенной его концентрации в крови, вызвало максимальную активацию С-клеток, что отразилось на их размерах. Высокая активность С-клеток препятствовала дальнейшему повышению концентрации Са выше допустимых пределов.

Рис. 4. Динамика изменения размеров С-клеток, экспрессирующих кальцитонин, ЩЖ кроликов после овариоэктомии.

К - площадь сечения С-клеток интактных (контрольных) животных; А - не получавших терапии; В - получавших препарат Са и витамин Дз; С - получавших препараты Са и витамин Дз + эстрогены. На оси ординат - площади сечения С-клеток(мкм2) (М±доверительный интервал); по оси абсцисс - недели после овариоэктомии; * -достоверное отличие от значения в контроле по /-критерию Стьюдента (Р < 0,05).

Поэтому не была обнаружена разница концентраций Са в сыворотке крови и моче у животных этой группы, то есть получавшей препарат Са и животными не получавшими терапии, которая в обеих группах и так была максимальной (таблица).

И во-вторых: существует гипотеза, высказанная еще в 1989 году (ОкоповР.!., 1989), что не только концентрация Са в сыворотке, но и повышение ее в просвете кишки, еще до поступления в кровь, тоже может стимулировать активность С-клеток. Полученные результаты косвенно подтверждают эту гипотезу.

450 400 350 300 250 200 150 100

К 12 20 30

—гД ^кальцитонин ■ НСЕ

Рис. 5. Динамика изменения размеров С-клеток, экспрессирующих кальцитонин и НСЕ в ЩЖ овариоэктомированных кроликов, получавших препарат Са и витамин Дз. На оси ординат - площади сечения (мкм2) С-клеток (М±доверительный интервал); по оси абсцисс — недели после овариоэктомии; К - контрольные (интактные) животные; * - достоверное отличие от значения в контроле по /-критерию Стьюдента (Р < 0,05).

Таблица. Изменение концентрации Са крови и моче кроликов в различные сроки после овариоэктомии

Сроки недели) Опытная группа животных

Уровень Са в крови мМ/л Уровень Са в моче мМ/л

контроль 1,79±0,27 0,73±0,6

3 2,04±0,40* 0,99±0,21 *

6 2,47±0,67* 1,18±0,18*

8 терапия А В С А В С

12 3,0±0,1* 2,9*0,2* 2,2±0,2* 1,5±0,3* 1,8±0,1* 1,0±0,2*

20 3,2±0,1* 3,1±0,1* 1,5±0,1 2,1±0,8* 2,1±0,2* 0,9±0,9

'30 3,4±0,1* 3,5±0,2* 1,710,2 2,1±0,8* 2,2±0,4* 0,7±0,2

Примечание: А - Группа А (без терапии); В - Группа В (терапия) Са + витамин ДЗ; С - Группа С (терапия) Са + витамин ДЗ + эстрогены; * - достоверное различие результатов с контрольными значениями по /-критерию Стьюдента, р<0,05;

Результаты исследований С-клеток в группе животных, получавших вместе с препаратом Са и витамином Дз эстрогены, показали, что на 12 неделе эксперимента, интенсивность экспрессии и размер С-клеток, экспрессирующих кальцитонин, были больше нормы. Даже четыре недели терапии гормональным препаратом достаточный срок для приобретения С-клетками нормальной иммунореактивности на кальцитонин и нормальных размеров, но

нормализация всех характеристик произошла лишь к 20 неделе эксперимента, то есть только тогда, когда нормализовался обмен Са и его концентрация в сыворотке крови и моче приблизились к значениям контрольных животных.

Скорее всего, эстрогены не могут напрямую стимулировать секрецию кальцитонина, а влияют на С-клетки лишь опосредовано, через нормализацию процесса ремоделирования кости и, как следствие, нормализацию уровня Са в крови. Таким образом, повышение концентрации Са в крови после овариоэктомии приводит к увеличению размеров С-клеток и усилению в них экспрессии кальцитонина.

Максимальное увеличение размеров С-клеток и усиление в них экспрессии кальцитонина и НСЕ, происходит при коррекции метаболических нарушений, вызванных овариоэктомией, препаратом, содержащим Са и витамин Дз. Полная нормализация показателей гомеостаза Са и морфометрических характеристик С-клеток, происходит при применении лекарственных препаратов, содержащих эстрогены, Са и витамин Дз

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При изучении С-клеток щитовидной железы как в процессе онтогенеза и в эксперименте, так и в диагностике щитовидной железы, для получения полной картины о С-клеточной популяции, необходимо использовать два маркера этих клеток -калыштонин и нейронспецифическую енолазу.

2. Так как соли тяжелых металлов, в частности соли свинца, в конкуренции с Са за место связывания способны изменять гомеостаз Са в организме, в токсикологии при отравлении тяжелыми металлами необходимо учитывать, что в этом процессе будут задействованы С-клетки щитовидной железы.

3. Для решения вопроса о назначении корригирующей терапии лицам с постменопаузальным остеопорозом и последующем диспансерном наблюдении считать необходимым обязательную консультацию эндокринолога и включение в комплекс лечебных мероприятий препаратов, содержащих Са.

ВЫВОДЫ

1. У человека в щитовидной железе:

- с 4-ой недели гестации экспрессируется цитокератин № 19, а с 8 недели гестации выявляются цитокератин № 7, тиреоглобулин, кальцитонин и нейронспецифическая енолаза.

- до 14,5 недели гестации клеток, экспрессирующих нейронспецифическую енолазу больше, чем клеток экспрессирующих кальцитонин.

2. У крысы в щитовидной железе:

- максимальная пролиферативная активность клеток происходит на 18-й и 21-й дни гестации, и на 10-й и 25-й дни постнатального развития.

- тиреоглобулин начинает экспрессироваться на 17-й день гестации, а формирование фолликулов происходит с 20-го дня гестации.

- клетки, экспрессирующие нейронспецифическую енолазу выявляются на 17-й день гестации, а экспрессирующие кальцитонин - на 19-й день гестации.

3. После введения нитрата свинца, в щитовидной железе крысы обнаружено, что:

- через 16 часов увеличивается число С-клеток, экспрессирующих как нейронспецифическую енолазу, так и капьцитонин;

- происходит усиление пролиферативной активности клеток паренхимы в интервале от 24-х до 48-ми часов, с максимумом через 36 часов;

- к 12 суткам после однократной инъекции происходит нормализация числа С-клеток и интенсивности окрашивания их на нейронспецифическую енолазу и капьцитонин;

- через три дня после повторной инъекции, к 12-ти суткам после первой, в железе обнаруживается повторное увеличение, числа С-клеток с высокой интенсивностью окраски на нейронспецифическую енолазу и кальцитонин.

4. Метаболические нарушения после овариоэктомии вызывают в щитовидной железе кролика увеличение размеров С-клеток и усиление в них экспрессии кальцитонина.

5. При коррекции метаболических нарушений, вызванных овариоэктомией у кроликов:

- введение препарата, содержащего Ca и витамин Дз, приводит к значительному увеличению размеров С-клеток и усилению в них экспрессии кальцитонина и нейронспецифической енолазы;

- введение препаратов, содержащих эстрогены, Ca и витамин Д-, приводят к полной нормализации морфометрических характеристик С-клеток щитовидной железы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гумерова A.A. Индуцированная пролиферация отдельных клеточных типов печени, поджелудочной и щитовидной желез / A.A. Гумерова, М.А. Титова, А.П. Киясов // Материалы науч. конф., посвящ. 190-летию кафедры анатомии человека КГМУ и 100-летию со дня рождения чл.-корр. All СССР П.Г. Колосова «Влияние антропо1енных факторов на структурное состояние органов, тканей и клеток организма человека и животных»: Проблемы экологии в медицине: - Казань: Медицина, 1997. - С. 37.

2. Минсафина А.Р. Пролиферативный ответ гепатоцитов, испытавших повреждение нитратом свинца, на его повторное воздействие / А.Р. Минсафина., A.A. Гумерова, А.П. Киясов, Н.С. Тюнегина, М.А. Титова // Материалы науч. конф., посвящ. 35-летию ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в клинике и эксперименте»: - Казань: КГМУ. -Часть 1,- 1997.-С. 51.

3. Орлов С.Б. Васкуляризация аутотрансплантата щитовидной железы крысы / С.Б. Орлов, М.А. Титова // Материалы IN республиканской науч.-технич. конф. молодых ученых и специалистов: Тез. док. / Казань, 1997. - С. 15.

4. Орлов С.Б. Морфофункциональная характеристика аутотрансплантата щитовидной железы / С.Б. Орлов, М.А. Титова, И.А. Мухина // Материалы науч. конф. Военно-медицинской академии «Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей»: Тез. докл. / Санкт - Петербург, 2001. - С. 63.

5. Орлов С.Б. Резекция тонкой кишки, как экспериментальная модель гипотиреоза / С.Б. Орлов, М.А. Титова, И.А. Мухина // Морфология. - Т. 121. - № 2-3. - 2002. - С. 117-118.

6. Орлов С.Б. Реактивные изменения щитовидной железы кошки при экспериментальной резекции тонкой кишки / С.Б. Орлов, М.А. Титова, A.A. Рахматуллин, И.А. Мухина // XVIII Съезд физиологического общества имени И.П. Павлова (25-28 сентября, 2001 г): Тез. докл. / Казань; М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - С. 624.

7. Титова М.А. Анализ возможностей применения панели коммерческих антител для иммуногистологического изучения щитовидной железы крысы / М.А. Титова, Н.С. Тюнегина, А.П. Киясов и др. // Материалы науч. конф., посвящ. 35-летию ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в клинике и эксперименте»: - Казань: КГМУ. - Часть 1.- 1997.-С. 67.

8. Титова М.А. Иммуногистохимическое изучение эпителия щитовидной железы после воздействия на организм крысы нитрата свинца / М.А. Титова, С.Б. Орлов, A.A. Гумерова, А.П. Киясов // Материалы науч. конф., посвящ. 190-летию кафедры анатомии человека КГМУ и 100-летию со дня рождения чл.-корр. АН СССР Н.Г. Колосова «Влияние антропогенных факторов на структурное состояние органов, тканей и клеток организма человека и животных»: Проблемы экологии в медицине: - Казань: Медицина, 1997.-С. 92.

9. Титова М.А. Морфофункциональное состояние щитовидной железы крысы при воздействии нитрата свинца / М.А. Титова, С.Б. Орлов, A.A. Гумерова, А.П. Киясов // Материалы 3-его Съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. / Новосибирск, 1997. - С. 230.

10. Титова М.А С-клетки щитовидной железы при экспериментальном остеопорозе / М.А. Титова, Г.Т. Салеева, И.Х. Валеева и др. // Морфология. - Т. 123. - № 2. - 2003. - С. 68-72.

11. Титова М.А. Дифференцировка эпителия щитовидной железы крысы в онтогенезе / М.А. Титова, С.Б. Орлов, А.П. Киясов // Материалы науч.-практич. конф., посвящ. 40-летию образования ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в медицине и фармации»: Тез. докл. / Казань, 2002. - С. 36-37.

12. Титова М.А. Дифференцировка эпителия щитовидной железы человека в онтогенезе / М.А. Титова, С.Б. Орлов, А.П. Киясов // Материалы науч.-практич. конф., посвящ. 40-летию образования ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в медицине и фармации»: Тез. докл. / Казань, 2002. - С. 37-38.

13. Титова М.А. С-клстки щитовидной железы в процессе остеопороза / М.А. Титова, Г.Т. Салеева, И.Х. Валеева// Морфология. - Т. 121. - № 2-3. -2002. - С. 155.

14. Тюнегина Н.С. Пролиферативная активность эпителия щитовидной железы крысы, индуцированная нитратом свинца / Н.С. Тюнегина, М.А. Титова, A.A. Гумерова // Материалы III республиканской науч.-технич. конф. молодых ученых и специалистов: Тез. докл. / Казань, 1997. - С. 19.

15. Тюнегина Н.С. Экспрессия нейронспецифической енолазы и кальцитонина в С-клетках щитовидной железы / Н.С. Тюнегина, М.А. Титова, А.П. Киясов // Материалы науч. конф., посвящ. 35-летию ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в клинике и эксперименте»: Тез. докл. / Казань, 1997. - С. 68.

16. Tunegina N. The expression of the neuroendocrine system markers in different cell types of thyroid and parathyroid glands / N. Tunegina, M. Titova // International symposium Progress in basic, applied an d diagnostic histochemistry / Bratislava, Slovak Republic, 1998. - P. 36.

Р 1664 0

\Шо

Подписано в печать /£/, /О. 2.00 3г. Бумага офсетная 60x84/16 Ризография Объем /, О усл.печ.л. Тираж 100

Заказ № (О! 420012 г.Казань Бутлерова, 49 типография КГМУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Титова, Марина Александровна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Клеточный состав щитовидной железы млекопитающих.

2.1.1. Фолликулярные клетки щитовидной железы (тиреоциты).

2.1.2. С-клетки щитовидной железы.

2.1.2.1. Морфология С-клеток.

2.1.2.2. Взаимоотношения С-клеток с фолликулярным эпителием в щитовидной железе млекопитающих.

2.1.2.3. Функции С-клеток.

2.2. Пренатальный гистогенез щитовидной железы млекопитающих.

2.3. Клеточные маркеры.

2.3.1. Белки цитоскелета.

2.3.2. Маркеры фолликулярных и С-клеток щитовидной железы.

2.4. Гормональная регуляция гомеостаза кальция.

2.5. Нитрат свинца, как конкурент кальция в кальциевом гомеостазе.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Объекты исследования.

3.1.1. Изучение щитовидной железы крысы в пренатальном и раннем постнатальном онтогенезе.

3.1.2. Изучение щитовидной железы человека в пренатальном онтогенезе.

3.1.3. Модель повреждения щитовидной железы крысы нитратом свинца.

3.1.4. Модель экспериментального остеопороза.

3.1.5. Корригирующая терапия при остеопорозе.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Биохимические методы исследования при экспериментальном остеопорозе.

3.2.2. Иммуногистохимические методы.

3.2.2.1. Непрямой иммунопероксидазный метод.

3.2.2.2. Стрептавидин-биотиновый метод.

Ф 3.2.2.2.1. Специфика окрашивания парафиновых срезов щитовидной железы человека антителами к цитокератинам 7, № 19 и виментину.

3 .3. Морфометрические методы исследования.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Изучение дифференцировки эпителия щитовидной железы в пренатальном и раннем постнатальном онтогенезе.

4.1.1. Исследование фенотипических изменений клеток щитовидной железы в пренатальном и раннем постнатальном онтогенезе крысы.

4.1.1.1. Выявление экспрессии ядерного антигена пролиферирую-щих клеток.

4.1.1.2. Выявление экспрессии тиреоглобулина.

4.1.1.3. Выявление экспрессии кальцитонина.

4.1.1.4. Выявление экспрессии нейронспецифической енолазы.

4.1.2. Исследование клеток щитовидной железы в пренатальном онтогенезе человека.

4.1.2.1. Выявление экспрессии цитокератинов № 7, № 19 и виментина.

4.1.2.2. Выявление экспрессии тиреоглобулина.

4.1.2.3. Выявление экспрессии кальцитонина.

4.1.2.4. Выявление экспрессии нейронспецифической енолазы.

4.1.2.5. Выявление экспрессии ядерного антигена пролиферирующих клеток.

4.1.3. Сравнительный анализ основных этапов пренатального развития крысы и человека.

4.2. Изучение реакции эпителиальных клеток щитовидной железы крысы после воздействия нитрата свинца.

4.2.1. Изучение экспрессии ядерного антигена пролиферирующих клеток в щитовидной железе и печени после воздействия нитрата свинца.

4.2.2. Иммуногистохимическое изучение С-клеток щитовидной железы после воздействия нитрата свинца.

4.3. Изучение С-клеток щитовидной железы кроликов при экспериментальном остеопорозе.

4.3.1. Исследование динамики показателей сыворотки крови и мочи.

4.3.1.1. Динамика изменения уровня ФСГ.

4.3.1.2. Динамика изменения концентрации кальция в сыворотке крови и моче.

4.3 .2. Иммуногистохимический и морфометрический анализ С-клеточной популяции.

4.3.3. Сравнительный морфометрический анализ С-клеток.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональная характеристика С-клеток щитовидной железы в онтогенезе и эксперименте"

АКТУАЛЬНОСТЬ. В связи с неблагоприятной экологической обстановкой в большинстве регионов России особую актуальность приобретают любые исследования, посвященные воздействию токсических веществ и, в первую очередь, солей тяжелых металлов на различные органы и ткани человека. Известно, что щитовидная железа является одной из самых чувствительных из эндокринных желез к воздействию различных эндогенных факторов [47, 56, 68, 74, 84]. Вот почему в последние годы много исследований посвящено изучению морфофункциональных характеристик щитовидной железы при различных воздействиях на нее. Однако большая часть таких исследований посвящена влиянию этих факторов на синтез йодсодержащих тиреоидных гормонов фолликулярными клетками [21, 56, 59, 81, 84]. Вместе с тем, щитовидная железа наряду с синтезом Т3 и Т4 обеспечивает синтез С-клетками кальцитонина, являющегося ключевым фактором в поддержании гомеостаза кальция (Са) в организме. Трудно предположить, что при различных неблагоприятных воздействиях на щитовидную железу, популяция С-клеток останется не чувствительна к этим факторам. Особенно актуальным является исследование возможного влияния солей тяжелых металлов, в частности солей свинца [29] на С-клетки щитовидной железы и костную ткань, так как свинец способен накапливаться в скелете, замещая Са [47], а это изменяет гомеостаз Са в организме. Известно, что регуляция содержания Са в крови и костной ткани осуществляется несколькими гормонами, среди которых наиболее важными следует признать паратиреоидный гормон, кальцитонин, витамин Д3 и эстрогены. Изменение синтеза любого из них вызывает нарушение кальциевого обмена. В частности, снижение уровня синтеза эстрогенов с наступлением менопаузы приводит к нарушению регуляции процессов новообразования и резорбции костной ткани, что и приводит к остеопорозу. Большое количество больных с такой патологией, обуславливает актуальность изучения механизмов регуляции функционирования С-клеток [59]. Вместе с тем, как сказывается изменение уровня эстрогенов на морфофункциональное состояние С-клеток щитовидной железы до конца не изучено. Для лечения и профилактики постменопаузального остеопороза широко используются препараты кальцитонина, Са и эстрогенов [58, 66]. Однако, в виду достаточно противоречивых литературных данных [95, 106, 127, 135] о причинах снижения секреции кальцитонина С-клеткими к моменту наступления менопаузы [138, 216, 240, 250], гормональная и кальциевая терапия таких больных с остеопорозами не достаточно обоснована и не всегда приводит к желаемому результату. Исходя из того, что данные о влиянии эстрогенов на С-клетки щитовидной железы единичны и противоречивы, ответ на вопрос, как ведут себя эти клетки при снижении уровня эстрогенов, а тем более на фоне лечения Са-содержащими или гормональными противоостеопорозными препаратами, поможет обоснованию корригирующей терапии для лечения остеопороза.

Известно, что поведение любых клеток при различных воздействиях связано с особенностями их происхождения, механизмами дифференцировки и принадлежностью к конкретной ткани. Вопросам онтогенеза С-клеток посвящено ряд исследований, в которых показаны изменения их морфологических характеристик, причем почти все эти исследования выполнены методами классической гистологии [6, 8, 11, 23, 40, 84], которые не позволяют связать морфологические изменения с функциональной активностью клеток.

Для изучения возможных механизмов регуляции дифференцировки и структуряофункциональных характеристик С-клеток щитовидной железы, нами предпринято их иммуногистохимическое и морфометрическое изучение в онтогенезе у человека и крысы. Кроме того, изучено возможное влияние на эти характеристики С-клеток щитовидной железы при свинцовой интоксикации у крыс, а у кроликов при овариоэктомии.

1. Иммуногистохимически изучить экспрессию кальцитонина и нейронспецифической енолазы в С-клетках щитовидной железы человека и крысы в онтогенезе.

2. Исследовать влияние однократного введения нитрата свинца на экспрессию кальцитонина и нейронспецифической енолазы С-клеток щитовидной железы крысы.

3. Изучить влияние овариоэктомии на иммуногистохимические характеристики С-клеток щитовидной железы кроликов.

4. Изучить влияние препарата кальция с витамином Д3 в том числе на фоне введения эстрогенов, на С-клетки щитовидной железы кроликов при лечении экспериментального остеопороза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Получены новые данные о последовательности экспрессии нейронспецифической енолазы и кальцитонина С-клетками щитовидной железы человека и крысы в онтогенезе. Уточнены сроки появления дефинитивного состояния различных клеточных типов щитовидной железы и проявления их функциональной активности. Впервые получены доказательства участия С-клеточной популяции щитовидной железы в ответной реакции организма на интоксикацию нитратом свинца. Новыми следует признать данные о том, что после овариоэктомии, и при коррекции метаболических нарушений, вызванных ею, специфически изменяются размеры и иммуногистохимические характеристики С-клеток. Впервые продемонстрировано, что заместительная терапия эстрогенами и препаратами кальция с витамином Д3 после овариоэктомии приводит к нормализации морфологических параметров С-клеток щитовидной железы кролика. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Проведенное исследование выявило морфологические закономерности развития щитовидной железы человека и крысы в пренатальном и постнатальном онтогенезе. Полученные в работе данные приближают нас к пониманию патогенеза некоторых заболеваний щитовидной железы, связанных с нарушениями функционирования С-клеток. Кроме того, результаты исследования могут оказаться полезными для травматологов при лечении спонтанных переломов костей в период менопаузы, данные работы демонстрируют важную роль С-клеток щитовидной железы млекопитающих в поддержании гомеостаза Са в условиях свинцовой интоксикации и при уменьшении содержания эстрогенов. Полученные результаты будут иметь как несомненный теоретический интерес, так и практическое значение для гистологии, эмбриологии, травматологии, токсикологии и эндокринологии.

По материалам диссертации опубликовано 16 работ. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

3. Нарушение гомеостаза кальция, вызванное овариоэктомией, приводит к активации С-клеток, которая наиболее выражена на фоне введения алиментарного кальция.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 152 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав результатов собственных исследований с обсуждением полученных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографии. Диссертация содержит 4 таблицы и 58 рисунков. Список литературы включает 266 наименований, из которых 86 русскоязычных и 180 иностранных работ.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Титова, Марина Александровна

6. ВЫВОДЫ

1. У человека в щитовидной железе:

- с 4-ой недели гестации экспрессируется цитокератин № 19, а с 8 недели гестации выявляются цитокератин № 7, тиреоглобулин, кальцитонин и нейронспецифическая енолаза. до 14,5 недели гестации клеток, экспрессирующих нейронспецифическую енолазу больше, чем клеток экспрессирующих кальцитонин.

2. У крысы в щитовидной железе:

3. После введения нитрата свинца, в щитовидной железе крысы обнаружено, что:

- через 16 часов увеличивается число С-клеток, экспрессирующих как нейронспецифическую енолазу, так и кальцитонин;

- к 12 суткам после однократной инъекции происходит нормализация числа С-клеток и интенсивности окрашивания их на нейронспецифическую енолазу и кальцитонин;

Метаболические нарушения после овариоэктомии вызывают в щитовидной железе кролика увеличение размеров С-клеток и усиление в них экспрессии кальцитонина.

При коррекции метаболических нарушений, вызванных овариоэктомией у кроликов:

- введение препарата, содержащего Са и витамин Дз, приводит к значительному увеличению размеров С-клеток и усилению в них экспрессии кальцитонина и нейронспецифической енолазы;

- введение препаратов, содержащих эстрогены, Са и витамин Дз приводят к полной нормализации морфометрических характеристик С-клеток щитовидной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При изучении С-клеток щитовидной железы как в процессе онтогенеза и в эксперименте, так и в диагностике щитовидной железы, для получения полной картины о С-клеточной популяции, необходимо использовать два маркера этих клеток - кальцитонин и нейронспецифическую енолазу.

126

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Титова, Марина Александровна, Казань

1. Абросимов А.Ю. Гистологическая и иммуногистохимическая характеристика медулярного рака щитовидной железы // Арх. патол. 1996. -№4. - С. 43-48.

2. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М: Медицина, 1990.-384 с.

3. Авцын А.П., Жаворонков А.А., Риш М.А. Микроэлементы человека. М.: Медицина, 1991. - 442 с.

4. Аксенова Н.П. Морфологическая характеристика возрастных изменений щитовидной железы человека в постнатальном онтогенезе: Автореф. дис. .канд. мед. Наук. Новосибирск. - 1981. - 20 с.

5. Алешин Б.В. Источники и регуляция роста щитовидной железы // Арх. анат. 1973. - Т. 65. - №. 10. - С. 5-18.

6. Алешин Б.В. О некоторых спорных вопросах современной цитофизиологии щитовидной железы // Успехи соврем, биол. 1982. - Т. 93. - № 1. -С. 121-138.

7. Алешин Б.В., Ус J1.A. Влияние симпатических импульсов на парафолликулярные клетки (К-клетки) щитовидной железы // Бюл. экспер. биол. 1981. - Т. 91. - № 6. - С. 725-727.

8. Алешин Б.В., Ус JI.A. Парафолликулярные клетки в регенерирующей щитовидной железе // Бюл. экспер. биол. и мед. 1983. - Т. 95. - № 4. - С. 91-93.

9. Анализ возможностей применения панели коммерческих антител для иммуногистологического изучения щитовидной железы крысы / Титова М.А., Тюнегина Н.С., Киясов А.П. и др. // Материалы научн. Конф. ЦНИЛ КГМУ

10. Современные методы исследования в клинике и эксперименте». Казань, 1997. - С. 67.

11. Антов Г.П., Иванович Е., Запрянов 3. Исследование комбинированного воздействия вибрации и свинца на метаболизм печени и почек белых крыс // Гигиена труда и профессиональные заболевания. 1978. - № 5. - С. 54-56.

12. Архипенко В.И., Федченко Н.П. Некоторые особенности структурной организации щитовидной железы // Арх. анат. 1983. - Т. 85. - № 12. - С. 27-34.

13. Безель B.C., Архипова О.Г., Павловская Г.И. Моделирование обмена свинца в организме человека // Гигиена и санитария. 1984. - № 4. - С. 46-49.

14. Биохимические методы исследования общих механизмов повреждения и воздействия ксенобиотиков / Валеева И.Х., Зиганшина JI.E. Казань: КГМУ. -1998. - 37 с.

15. Бомаш Н.Ю. Морфологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. М. : Медицина, 1981.

16. Будников Г.К. Тяжелые металлы в экологическом мониторинге водных систем // Соросовский образовательный журнал, Москва, 1998. № 5. - С. 2329.

17. Быков B.JI. Возрастные изменения щитовидной железы мышей А/Не (морфометрическое и гистохимическое исследование) // Арх. анат. 1976 (б). -Т. 70. - № 6. - С. 41-47.

18. Быков B.J1. Гетерогенность щитовидной железы млекопитающих и возрастные изменения органа // Арх. анат. гист. эмбр. 1979. - № 10. - С. 61-71.

19. Вальков В.Ф. Почвы Ростовской области // Ростов: Изд-во Ростовского ун-та, 1994.- 123 с.

20. Валеева И Х., Гумерова А.А., Киясов А.П. О механизме пролиферации гепатоцитов, индуцированной нитратом свинца // Каз. мед. ж. 2000. - Т. 81. -№3. - С. 195-197.

21. Васин В.В. Белки и некоторые белковые компоненты крови у работающих в контакте со свинцом // Вопросы профессиональной патологии: сб. научн. трудов. Рязань. - 1972. - Т. 43. - С. 9-11.

22. Вегетативный статус детей, проживающий в условиях йодной недостаточности / Бонецкий А.А., Обидина O.K., Султаналиева Р.Б. и др. // Пробл. эндокринол. 1999. - № 6. - С. 16-18.

23. Виноградов С.Ю., Погорелов Ю.В. Нейромедиаторные биоамины щитовидной железы и структурно-функциональные аспекты ее гомеостаза // Арх. анат., гист., эмбр. 1987. - № 1. - С. 12-22.

24. Волкова О.В., Пекарский М.И. Эмбриогенез и возрастная гистология внутренних органов человека. М. : Медицина, 1976. - 415 с.

25. Гистология (введение в патологию) / Н.В. Бойчук, P.P. Исламов, Э.Г. Улумбеков, Ю.А. Челышев; под ред. Э.Г. Улумбекова, Ю.А. Челышева. М. : ГЭОТАР, 1997.-960 с.

26. Гольдбурт Н.Н. Патологическая диагностика опухолей человека. М., 1993. - С. 349-367.

27. Гумерова А.А., Валеева И.Х., Киясов А.П. «Прямой митоген» нитрат свинца вызывает усиление перекисного окисления липидов и активацию клеток Ито в печени крыс // Онтогенез. 1999. - Т. 30. - № 4. - С. 289-295.

28. Ермакова И.П., Пронченко И.А. Современные биохимические маркеры в диагностике остеопороза// Остеопороз и остеопатии. 1998. - № 1. - С. 24-27.

29. Зербино Д.Д., Соломенчук Т.Н., Поспишиль Ю.А. Свинец этиологический фактор поражения сосудов: основные доказательства // Арх. патол. 1997. -№ 1. - С. 9-12.

30. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах по программам. -М. : Медицина, 1990.

31. Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека (Руководство для врачей-морфологов) / Под редакцией С.В. Петрова. Казань, 2000. - 166 с.

32. Имунногистохимическое исследование закладки и первичной дифференцировки парафолликулярных клеток щитовидной железы человека / Бесова Н.В., Савельев С.В., Истомин А.А., Черников В.П. // Изв. Акад. Наук, 1990. С. 615-618.

33. Качалка О.В. Пространнственная организация фолликулов щитовидной железы у новорожденных детей // Арх. анат., гистол., эмбр. 1986. - Т. 60. - № 5. - С. 63-68.

34. Киясов А.П. Методы иммуногистохимии // Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека (Руководство для врачей-морфологов). -Казань. 1998. - С. 9-34.

35. Киясов А.П. Современные технологии морфологических исследований. Методическое пособие для студентов, аспирантов и врачей-патологов, Казань, 2001. 38 с.

36. Киясов А.П., Гумерова А.А., Билалов М.М. Экспрессия цитокератинов в пре- и постнатальном онтогенезе печени крыс // Онтогенез. 1997. - Т. 28. - № 5. - С. 389-393.

37. Климович В.Б. Моноклональные антитела против тиреоглобуина человека: исследование специфичности // Биотехнология. 1998. - № 4. - С. 5156.

38. Кобозева Н.В., Гуркин Ю.А. Перинатальная эндокринология. JL: Медицина, 1986. - 312 с.

39. Кондаленко В.Ф., Калинин А.П., Одинокова В.А. Ультраструктура щитовидной железы человека в норме и при патологии // Арх. пат. 1973. - № 4. -С. 25-33.

40. Корниенко Г.Г., Кожин А.А. Сравнительное исследование морфо-функциональных изменений щитовидной железы у сазанов и крыс в результате нахождения в среде с повышенным содержанием свинца // Цитология. 1997. -Т. 39. -№ 1. - С. 5-9.

41. Краевский Н.А., Райхлин Н.Т. Гистогенетические основы классификации опухолей щитовидной железы в свете современных представлений о строении и функции этого органа // Арх. пат. 1975. - Т. 37. - № 1. - С. 22-30.

42. Краевский Н.А., Райхлин Н.Т., Михайлов И.Г. Биогенные моноамины в клетках Ашкинази (Гюртля) щитовидной железы // ДАН СССР, 1971. Т. 199. -№ 2. - С. 501-502.

43. Лашне Я.И. Гистофизические особенности эндокринных желез новорожденного // Арх. пат. 1987. - № 9. - С. 9-13.

44. Литвинов Н.Н., Ламентова Т.Г., Казачков В.И. Структурно-функциональные изменения в печени беременных крыс и их плодов при воздействии кадмия, бензола и нитрата свинца // Гигиена и санитария. 1991. -№ 5. - С. 19-22.

45. Лусте Л.А. Возрастные особенности щитовидной железы в постнатальном периоде онтогенеза: Автореф. дис. Черновцы, 1974. - 20 с.

46. Майстеренко В.Н., Хамитов Р.З., Будников Г.К. Экологический мониторинг суперэктотоксикантов. М. : Химия. - 1996. - 320 с.

47. Макарова С.А., Аметов А.С. Результаты лечения альфакальцидолом остеопороза в менопаузе // Остеопороз и остеопатии. 1998. - № 3. - С. 32-35.

48. Макашев К.К. Обменные процессы при сатурнизме. Алма-Ата, 1976. -273 с.

49. Меркулов Г А. Курс патологогистологической техники. Л. : Медгиз. -1961.-340 с.

50. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования / Под ред. проф. Меньшикова В В. М. -1973. - 173 с.

51. Михайлов И.Г. Классификация тканей и явления метаплазии в свете принципа тканевой детерминации // Арх. пат. 1972. - Т. 62. - № 6. - С. 12-33.

52. Морфофункциональные изменения щитовидной железы крысы при действии хлорида лития / Семенов В.В., Глумова В.А., Петров Н.П., Кузнецова В.М. // Бюл. экспер. биол. и мед.- 1981. Т. 91. - № 6. - С. 754-757.

53. Морфофункциональное состояние щитовидной железы крысы при воздействии нитрата свинца / Титова М.А., Орлов С.Б., Гумерова А.А., Киясов А.П. // Материалы 3-го Съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. -Новосибирск, 1997. С. 230.

54. Новые дифференцировочные маркеры эпителиальных клеточных линий человека / Энгельгардт Н.В., Фактор В.М., Баранов В Н. и др. // Онтогенез. -1991. Т. 22. -№2. - С. 197-203.

55. Общие механизмы токсического действия / Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. // АМН СССР. Л. : Медицина, 1986. - 280 с.

56. Объекты биологии развития / Э.Д. Бакунина, B.C. Баранов, Л.В. Белоусов и др., отв. ред. Т.А. Детлаф. М. : Наука. - 1975. - 580 с.

57. Одинокова В.А., Кондаленко В.Ф. Биохимические исследования в травматологии и ортопедии. М.: Медицина. 1972. - 155 с.

58. Окороков А Н. Физиология щитовидной железы / Диагностика болезней внутренних органов. М., Медицинская литература. 2001. - 275 с.

59. Орлов С.Б., Титова М.А., Мухина И.А. Резекция тонкой кишки, как экспериментальная модель гипотиреоза // Морфология. 2002. - Т. 121. - № 2-3. -С. 117-118.

60. Панкова Т.М., Старостина М.В., Тарасова А.Е. Нейрон-специфический антиген, выявляемый моноклональными антителами в развитии нервной ткани // Бюл. Сиб. отделения РАМН. 1999. - №1. - С. 72-76.

61. Пэттен Б.М. Эмбриология человека. М. Медгиз. - 1959. - 768 с.

62. Реактивные изменения щитовидной железы кошки при экспериментальной резекции тонкой кишки / Орлов С.Б., Титова М.А., Рахматуллин А.А., Мухина И.А. // Материалы XVIII Съезда физиологического общества имени И.П. Павлова. Казань, 2001. - С. 624.

63. Реакция щитовидной железы на введение кальцитонина / Сандомирская Л.Д., Потова В.И., Кокорева Т.А., Курбатова Л.А. // Морфология. 2000. - Т. 117.-№3.-С. 106.

64. Риггз Б.Л., Мелтон III Л.Д. Остеопороз. Этиология, диагностика, лечение. Пер. с англ. М. СПб.: ЗАО, Изд. БИНОМ, «Невский диалект», 2000. - 558 с.

65. Рящиков С.Н. Некоторые аспекты компенсаторно-приспособительных модификаций С-клеточного аппарата щитовидной железы крыс разного возраста в норме и при частичной десимпатизации // Арх. анат., гист., эмбр,-1989. Т. 97. -№ 11. - С. 31-38.

66. Саркисов Д.С. Очерки истории общей патологии. М.: Медицина, 1993. -512 с.

67. Селятицкая В.Г., Одинцова С.В. Морфо-функциональные изменения щитовидной железы у лабораторных животных при действии холода // Пробл. эндокринол. 1998. - № 4. - С. 40-42.

68. Смирнова Е.А. Клетки Ашкинази (В-клети) щитовидной железы в регуляции ее функций. / Морфология эндокринной системы при некоторых патологических состояниях. Л., 1973. С. 8-9.

69. Смирнова Е.А. Распространение «Б» клеток (клеток Ашкинази) в щитовидной железе человека. / Гистохимия и электронная микроскопия в клинической и экспериментальной онкологии. М., 1975. С. 156-159.

70. Современные методы в биохимии. М. : Медицина, 1977. - 315 с.

71. Современные методы изучения функциональной морфологии эндокринных клеток / Южаков В.В., Райхлин Н.Т., Кветной И.М. и др. // Арх. патол. 1996. - № 2. - С. 21-28.

72. Состояние органов и тканей при свинцовой интоксикации в эксперименте на белых крысах / Харченко Т.И., Носова Л.И., Андреева СВ. и др. // Морфология некоторых органов и тканей человека и млекопитающих. -Симферополь, 1986. Т. 196. - С. 174 - 179.

73. Тарабаева Г.И. Действие свинца на организм и лечебно-профилактические мероприятия. Алма-Ата, 1961. 288 с.

74. Титова М.А., Салеева Г.Т., Валеева И.Х. С-клетки щитовидной железы в процессе остеопороза// Морфология. 2002. - Т. 121. - № 2-3. - С. 155.

75. Титова М.А., Орлов СБ., Киясов А.П. Дифференцировка эпителия щитовидной железы крысы в онтогенезе // Материалы научно-практической конференции «Современные методы исследования в медицине и фармации». -Казань, 2002. С. 36-37.

76. Титова М.А., Орлов С.Б., Киясов А.П. Дифференцировка эпителия щитовидной железы человека в онтогенезе // Материалы научно-практической конференции «Современные методы исследования в медицине и фармации». -Казань, 2002. С. 37-38.

77. Тюнегина Н.С., Титова М.А., Гумерова А.А. Пролиферативная активность эпителия щитовидной железы крысы, индуцированная нитратом свинца // Материалы III республиканской научно-технической конф. молодых ученых и специалистов. Казань, 1997. - С. 19.

78. Тюнегина Н.С., Титова М.А., Киясов А.П. Экспрессия нейрон-специфической енолазы и кальцитонина в С-клетках щитовидной железы // Материалы научной конференции ЦНИЛ КГМУ «Современные методы исследования в клинике и эксперименте». Казань, 1997. - С. 68.

79. Угрюмов МБ. Современные методы иммуноцитохимии и гистохимии / Итоги науки и техники ВИНИТИ, серия "Морфология". 1991. - Т. 15. - 115 с.

80. Федченко Н.П. Механизм фолликулогенеза в щитовидной железе крыс при длительной гиперкальциемии // Арх. анат., гистол., эмбр. 1982. - Т. 82, №3. - С. 60-66.

81. Хэм А., Кормак Д. Гистология. М. : Мир., 1983. - Т. 5. - 293 с.

82. Шадлинский В.Б. Влияние внешних струм огенных факторов на морфологию щитовидной железы в различные возрастные периоды // Проблемы эндокринол. 1999, - № 6. - С. 16-18.

83. Шварц Г.Я. Витамин D, D-гормон и альфакальцидол: молекулярно-биологические и фармакологические аспекты действия // Остеопороз и остеопатии. 1998. - № 3. - С. 2-6.

84. Явербаум П.М. Активность некоторых ферментов в печени при выраженной свинцовой интоксикации у белых крыс // Гигиена труда и профессиональные заболевания. Иркутск, 1972. - С. 110-111.

85. Abundant calcitonin receptors in isolated osteoclasts. / Nicholson G.C., Moseley J.M., Sexton P.M. et al. // J.Clin. Invest. 1986. - V. 78. - P. 355-360.

86. Age-related characteristics of osteopenia in rats caused by deficient support loads on hind limbs / Durnova G.N., Alekseev E.I., Loginov V.I., Kaplanskiij A.S. // Aviakosm Ekolog Med. 2001. - V. 35. - № 1. - P. 24-28.

87. Age-related peptide production byhuman thyroid С cells / Kendall C.H., Homer C.E., Bishop A.E., Polak J.M. // An immunohistochemical stude "Virchows Arch." 1986, - V. 410. - № 2. - P. 97-101.

88. Ahren B. Regulatory peptides in the thyroid gland a reviev on their localization and function // Acta Endocrinol. - 1991. - № 124. - P. 225-232.

89. Altman, P.L., Dittmer, D.S. (ed) Growth. Biological Handbooks, FASEB. -1962.-240 c.

90. A new organotypic culture of thyroid tissue maintains three-dimensional follicles with С cells for a long term / Toda S., Watanabe K., Yokoi F. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. - V. 294. - № 4. - P. 906-911.

91. Ansari M.A., de Mello D.E., Devaskar U P. Effect of prenatal glucocorticoid on fetal lung ultrastructural maturation in hyt/hyt mice with primary hypothyroidism // Biol Neonate. 2000. - V. 77. - № 1. - P. 29-36.

92. Askanazy M. Pathologisch-anatomische Beitrage zur Kenntniss des Morbus Basedow», insbesondere ueber die dabei auftretende Muskelerkrankung // Dtsch. Arch. Klin. Med. 1898. - Bd. 61. - S. 118-180.

93. Aterman K. The stem cells of the liver a selective review // J. Cancer. Res. Clin. Oncol. - 1992. -V. 118. - P. 87-115.

94. Avian osteoclasts as estrogen target cells / Oursler M.J., Osdoby P, Pyfferoen J., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991. V. 88. - P. 6613-6617.

95. Beesley M.F., McLaren K.M. Cytokeratin 19 and galectin-3 immunohistochemistry in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules // Histopathology, 2002. V.41. - № 3. - P. 236-243.

96. Beskid M.A., Kobuszewska-Faryna M. Adenoma oncocyticum glandulae thyroidae // Folia Histochem. Cytochem. 1972. - V. 10. - P. 31-36.

97. Bone turnover in postmenopausal osteoporosis: effect of calcitonin / Civitelli R., Connelli S., Zacchei F, et al. // J. Clin Invest. 1988.-V. 82. - P. 1268-1271.

98. Bouwens L., De Blay E. Islet morphogenesis and stem cell markers in rat pancreas // J. Histochem.Cytochem. 1996. - V. 44. - P. 947-951.

99. Biochemical characterization and subcellular localization in different cell lines / Ridinger K., Schafer B.W., Durussel I., Cox J.A., Heizmann C.W. // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275. - № 12. - P. 8686-8694.

100. Bisgaard K., Pluzek K. Water soluble polymer conjugates for enzyme immuno assays // Acta Histochem et Cytochem. 1996. - V. 29. - P. 88-89.

101. Butt E.U. Trace metal levels in human serum and blood // Arch. Environ. Health. 1964. - V. 8. - P. 52-57.

102. Calcitonin and stanniocalcin. Particular aspects of the endocrine regulation of phospho-calcium metabolism in mammals and fish / Barlet J.P., Gaumet N., Coxam V„ Davicco M.J. //Ann Endocrinol. 1998. - V. 59. - 3 4. - P. 281-290.

103. Calcitonin and the calcium-regulating hormones in postmenopausal women: effect of oestrogens / Stevenson J.C., Abeyasekara G, Hillyard C.J. et al. // Lancet. -1981.-V. l.-P. 693-695.

104. Calcitonin mRNA is produced in liver by two different splicing pathways / Bracq S, Taboulet J, Machairas M. et al. // Mol Cell Endocrinol. 1997. - V. 128. - № 1-2. -P. 111-115.

105. Calvert R. Transitional cells in the postnatal thyroid gland of the rat // Anat. Rec. 1972. - V. 174. - P. 341-359.

106. Care A.D. The regulation of the secretion of calcitonin // Bone Miner. 1992. -V. 16. - P. 182-185.

107. С cells in normal thyroid aspirates / de Lima M.A., Santos B.M., Tiveron F.S., de Abreu M.E. // Acta Cytol. 1999. - V. 43. - № 4. - P. 558-562.

108. Changes in galectin-7 and cytokeratin-19 expression during the progression of malignancy in thyroid tumors: diagnostic and biological implications / Rorive S., Eddafali В., Fernandez S. et al. // Mod. Pathol. 2002. - V. 15. - № 12. - P. 12941301.

109. Christov K., Bollman R. A. Thomas C. Structure and function of thyroid С cells in newborn rats // Beitr. Pathol. Anat. 1972. - V. 147. - P. 341-351.

110. Chronic hypervitaminosis D3 determines a decrease in C-cell numbers and calcitonin levels in rats / Martin-Lacave I., Ramos F., Utrilla J.C. et al. // J. Endocrinol. Invest. 1998. - V. 21. - № 2. - P. 102-108.

111. Cloning of the mouse somatostatin receptor subtype 5 gene: promoter structure and function / Gordon D.F., Woodmansee W W., Lewis S.R. et al. // Endocrinology. -1999. V. 140. - № 12. - P. 5598-5608.

112. Cooper D., Schermer A., Sun T.T. Biology of disease. Classification of human epithelia and their neoplasm using monoclonal antibodies to keratins, strategies, applications and limitations // Lab. Invest. 1985. - V. 52. - P. 243-256.

113. Coordinate expression of cytokeratins 7 and 20 in feline and canine carcinomas / Espinosa de los Monteros A., Fernandez A., Millan M.Y. et al. // Vet. Pathol. -1999. V. 36. - № 3. - P. 179-90.

114. Correlation between gender and spontaneous C-cell tumors in the thyroid gland of the Wistar rat / Martin-Lacave I., Bernab R., Sampedro C. et al. // Cell Tissue. Res. 1999. - V. 297. - № 3. - P. 451-457.

115. Currey J.C. The mechanical adaptation of bones. Princeton // Princeton University Press. 1984.

116. Demasking of epitopes and nucleic acids prior to immunohistochemistry and in situ hybridization / Werner M., Wilkens L., Nolte M., et al. // Acta Histochem. et cytochem. 1996 (b). - V. 29. - P. 40-41.

117. Demonstration of sugar residues in the ultimobranchial fubule and thyroid C-cells of the rat using peroxidase labelled lectins / Moreno A.M., Martin-Lacav I., Montero C. et al. //Anat. Histol. Embryol. 1989. - V. 18. - № 2. - P. 114-121.

118. Demster D.W. Bone remodeling. In: Сое FL, Favus M.J., eds. Disoders of bone and mineral metabolism. New York: Raven Press. - 1992. - P. 355-380.

119. Desmet V.J. Embryology of the liver and intrahepatic biliari tract, and an overview of malformations of the bile duct // Oxford textbook of clinical hepatology.-Oxford-New York-Tokio: Oxford Universiti Press, 1992. V. 1. - P. 497-519.

120. Delaisse J.M, Vaes G. Mechanism of mineral solubilization and matrix degradation in osteoclastic bone resorption // Rifkin B.R., Gay C.V. et al.-Boca Raton, FL: CRC Press. 1992. - P. 289-314.

121. Development of the parafollicular cells in recurrent goiter / Rink Т., Fitz H., Schroth H.J., Braun S. // Eur. J. Endocrinol. 2001. - V. 144. - № 5. - P. 485-489.

122. Developmental change in expression of highly polysialylated neural cell adhesion molecule in C-cells in rat thyroid gland / Nishiyama I., Ogiso M., Oota T. et al. // Anat. Embryol. 1996. - V. 194. - № 4. - P. 419-426.

123. Dick I.M., Princ R.I. Transdermal estrogen replacement does not increase calcitonin secretory reserve in post-menopausal women // Acta Endocrinol. 1991. -V. 125. - P. 241-245.

124. Differential expression of cytokeratins in follicular variant of papillary carcinoma: an immunohistochemical study and its diagnostic utility / Baloch Z.W., Abraham S., Roberts S., Li Volsi V.A. // Hum. Pathol. 1999. - V. 30. - № 10. - P. 1166-1171.

125. Different clones of С cells detected by immunohistochemical double staining / Castagna M., Fierabracci A., Bevilacqua GBaschieri L. // Basic and Appl. Histochem. 1989. - V. 33. - C. 26.

126. Downs K.M., Davies T. Staging of gastrulating mouse embryos by morphological landmarks in the dissecting microscope // Development. 1993. - V. 118. -№4. - P. 1255-1266.

127. Estimation of the C-cell number in rat thyroid glands using the optical fractionator / Feinstein R.E., Westergren E., Bucht E., Sjoberg H.E. // J. Histochem. Cytochem. 1996. - V. 44. - № 9. - P. 997-1003.

128. Estrogen Binding, receptor mRNA, and biologic response in osteoblast-like osteosarcoma cells / Komm B.S., Terpening C.M., Benz D.G. et al. // Science -1988. V. 241. - P. 81-84.

129. Effects of antigen retrieval by microwave heating in formalin-fixed tissue sections on a broad panel of antibodies / Von Wasielewski R., Werner M., Notle M. et al. // Histochem. 1994. - V. 102. - P. 165-172.

130. Effects of and progesterone on calcitonin secretion / Greenberg C., Kukreja S.C., Bowser E.N. et al. // Endocrinologi. 1986. - V. 118. - № 6. - P. 2594-2598.

131. Effect of calcitonin given intransally on bone mass and fracture rates in established osteoporosis: a dose-response study / Overgaard K., Hansen M.A., Jensen S.B. et al. // Br. Med. J. 1992. - V. 305. - P. 556-561.

132. Effect of chronic administration of cadmium on the rat thyroid: radioimmunological and immunohistochemical studies / Pilat-Marcinkiewicz B, Sawicki B, Brzoska M M., Moniuszko-Jakoniuk J. // Folia Histochem. Cytobiol. -2002. V. 40. - №2. - P. 189-190.

133. Effects of oral contraceptive and estrogen administration on plasma calcitonin in pre- and postmenopausal women / Hurley D.L., Tiegs R.D., Barta J. et al. // J. Bone Miner. Res. 1989. - V. 4. - P. 89-95.

134. Erkilic S., Aydin A., Kocer N.E. Diagnostic utility of cytokeratin 19 expression in multinodular goiter with papillary areas and papillary carcinoma of thyroid // Endocr. Pathol. 2002. - V. 13. - № 3. - P. 207-211.

135. Evidence of estrogen receptors in normal human osteoblast-like cells / Eriksen E.F., Colvard D.S., Berg N.J. et al. // Science. 1988. - V. 241. - P. 84-86.

136. Expression cloning of an adenylate cyclase-coupled calcitonin receptor / Lin H.Y., Harris T.L., Flannery M.S. et al. // Science. 1991. - V. 254. - P. 1022-1024.

137. Expression of cytokeratins and vimentin in epithelial cells of normal and pathologic thyroid tissue / Henzen-Logmans S.C., Mullink H., Ramaekers F.C. et al. // Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 1987. - V. 410. - № 4. - P. 347-354.

138. Expression of intermediate filaments in neuroendocrine tumors / Kimura N., Nakazato Y., Nagura H., Sasano N. // Arch. Pathol. Lab. Med. 1990. - V. 114. - № 5. - P. 506-510.

139. Expression of laminin-2 by normal and neoplastic rat С cells during the development of medullary thyroid carcinoma / Lekmine F., Feracci H., Milhaud G. et al. // Virchows Arch. 1999. - V. 434. - № 4. - P. 325-332.

140. Expression of peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase: an in situ hybridization and immunocytochemical study / Braas K.M., Harakall S.A., Ouafik L. et al. // Endocrinology. 1992. - V. 130. - P. 2778-2788.

141. Expression of the genes for alpha-type and beta-type calcitonin gene-related peptide during rat embryogenesis / Terrado J., Gerrikagoitia I., Dominguez L. et al. // Neuroscience. 1999. - V. 92. - № 2. - P. 713-27.

142. Farina V., Zedda M. On the expression of cytokeratins and their distribution in some rabbit gland tissues // Eur. J. Histochem. 1992. - V. 36. - № 4. - P. 479-488.

143. Fransis R., Sutcliffe A.M., Scane A.C. Pathogenesis of osteoporosis // Osteoporosis, eds. J. Stevenson and R. Lindsay. Chapman & Hall Medicsl, London, 1998. P. 29-51.

144. Fujita T. Osteoporosis: past, present and future // Osteoporosis. 1997. - V. 7. -№ 3. - P. 6-9.

145. Gao C., Kennedy S., Ponder K.P. Lipopolysaccharide potentiates the effect of hepatocyte growth factor upon replication in lung, thyroid, spleen, and colon in rats in vivo // Mol. Ther. 2001. - V. 3. - № 4. - P. 462-475.

146. Garel J.M.A., Jullienne A. Plasma calcitonin levels in pregnant and newborn rats // J. Endocrinol. 1977. - V. 75. - P. 373-382.

147. Garel J.M.A., Barlet J.P. Calcitonin in the mother, fetus and newborn // Ann. Bioll. Anim. Biochim. Biophys. 1978. - V. 18. - P. 53-68.

148. Gastrin-releasing peptide gene expression in developing hyperplastic human thyroid C-cells / Sunday M.E., Wolfe H.J., Chin W W., Spindel E. // Endocrinology. 1988.-V. 122.-P. 1551-1558.

149. Genealogies of mouse inbred strains / Beck J.A., Lloyd S., Hafezparast M. et al. // Nat Genet. 2000. - V. 24. - № 1. - P. 23-25.

150. Gershon M., Munez E.A. Histochemical and radioautographic stadies of serotonin and parafollicular cell in the thyroid gland of prehibernating cell, in thyroid of the prehibernating bat // Endocrinology. 1970. - V. 86. - № 2. - P. 160-181.

151. Gmunder-Lehner R., Okamoto E., Hedinger C. Verteilung der C-Zellen in menschlichen Schilddrusen. Schweiz 11 med. Wochenschr. 1983. - B. 113. - S. 1385-1394.

152. Godwin M.C. Complex IV in the dog with special emphasis on the relation of the ultimobranchial body to interfollicular cells in the postnatal thyroid gland // Am. J. Anat. 1937. - V. 60. - P. 299-339.

153. Gown A.M. Heat-induced epitope retrieval and quality control in diagnostic pathology // Acta Histochem. Cytochem. 1996. - V. 29. - P. 88-89.

154. Himi Т., Kataura A. Distribution of С cells in the thyroid gland with pyriform sinus fistula// Otolaryngol. Head. Neck. Surg.-1995. V. 112. - P. 268-273.

155. Hirsch P.F., Munson P L. Thyrocalcitonin // Physiol. Rev. 1969. - V. 49. - P. 548.

156. Hofmann P., Schrotter K.H. Hypophyseal-hypothalamo-thyroid axis in affective disorders // Acta Med. Austriaca. 1999. - V. 26. - № 4. - P. 123-125.

157. Hormonalregulation and biological actions of insulin-like growth factor binding proteins in isolated ovine thyroid follicles / Phillips I.D., Becks G.P., Wang J.F. et al. // Endocrinology. 1994. - V. 134. - P. 1238-1246.

158. Htdinger Ch., Williams E.D., Sobin L.H. Histological Typing of Thyroid Tumours. (International Histological Classification of Tumours. 2-ud Ed.). Berlin, 1988.

159. Human chromogranin A gene. Molecular cloning, structural analysis, and neuroendocrine cells-specific expression / Mouland A.J., Revan S., White J.H., Hendi G.N. // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 6918-6926.

160. Human giant cell tumors of the bone (osteoclastomas) are estrogen target cells / Oursler M.J., Pederson L, Fitzpatrick L. et al. // J. Bone Miner. Res. 1992. - V. 7. -P. 111.

161. Immunohistochemical distribution pattern of intermediate filament proteins in 50 feline neoplasms / Martin de las Mulas J., Espinosa de los Monteros A., Carrasco L. et al. // Vet Pathol. 1995. - V. 32. - № 6. - P. 692-701.

162. Immunohistochemical localization of chromogranin a in endocrine tissues and endocrine tumors of dogs / Doss J.C., Grone A., Capen C.C., Rosol T.J. // Vet. Pathol. 1998. - V. 35. - № 4. - P. 312-315.

163. Immunohistochemical localization of indoleamine 2,3-dioxygenase in the argyrophilic cells of rabbit duodenum and thyroid gland / Watanabe Y., Yoshida R., Sano M., Hayaishi O. // J. Histochem. Cytochem. 1981. - V. 29. - № 5. - P. 623632.

164. Intermediate filaments in normal thyrocytes: modulation of vimentin expression in primary cultures / Coclet J., Lamy F., Rickaert F. et al. // Mol. Cell. Endocrinol. 1991. - V. 76. - № 1-3. - P. 135-148.

165. Isled cell and thyroid antibody prevalence in patients with hepatitis virus infection: effect of treatment with interferon / Piquer S., Hernandez C., Enriquez J. et al. //J. Lab. Clin. Med. 2001. - V. 137. -№ 1. -P. 38-42.

166. Kameda Y. Age associated increase of С cell follicles in guinea pig thyroid glands // Anat. Rec. 1986. - V. 216. - № 2. - P. 175-180.

167. Kameda Y. Co-expression of vimentin and 19S-thyroglobulin in follicular cells located in the C-cell complex of dog thyroid gland // J. Histochem. Cytochem. -1995. -V. 43. P. 1097-1106.

168. Kameda Y. Electron microscopic studies on the parafollicular cells and parafollicular cells complexes in the dog // Arch. Histol. Jap. 1973. - V. 36. - P. 89105.

169. Kameda Y. Immunohistochemical demonstration of keratins in the cysts of thyroid glands, parathyroid glands, and C-cell complexes of the dog // Am. J. Anat. -1987. V. 180. - P. 87-99.

170. Kameda Y. Production of monoclonal antibodies against a ovel glicoprotein synthesized and secreted by dog thiroid C-cell // J. Histochem. Cytochem. 1992. -V. 40. - P. 541-553.

171. Kohrle J. Thyroid hormone metabolism and action in the brain and pituitary // Acta Med. Austriaca. 2000. - V. 27. - № 1. - P. 1-7.

172. Lam K.Y., Lui M.C., Lo C.Y. Cytokeratin expression profiles in thyroid carcinomas // Eur. J. Surg. Oncol. 2001. - V. 27. - № 7. - P. 631-635.

173. Larsson L.I. Differential changes in calcitonin, somatostatin and gastrin/cholecystokinin-like immunoreactivites in rat thyroid parafollicular cells during ontogeny // Histochemistry. 1985. - V. 82. - P. 121-130.

174. Latropoulos M.J., Williams G.M. Proliferation markers // Exp. Toxicol. Pathol. 1996. -V. 48. -№2-3. - P. 175-181.

175. Le Douarin N., Le Lievre C. Demonstration de l'origine neurale des cellules a calcitonine du corps ultimobranchial chez l'embryon de Poulet // Paris. C.R.Acad. Sci. 1970. - V. 270.-P. 2857.

176. Linder M.C. Other trace elements and the liver // Semin. Liver Dis. 1984. - V. 4. - P. 164-276.

177. Ljungberg O., Nilsson P.O. Hyperplastic and neoplastic changes in ultimobranchial remnants and in parafollicular (C) cells in bulls: a Histologic and immunohistochemical study// Vet. Pathol. 1985. - V. 22. - P. 95-103.

178. Long-term excess of endogeneous calcitonin in patients with medullary thyroid carcinoma does not affect bone mineral density / Wuster C., Raue F, Meyer C. et al. // J. Endocrinol. 1992. - V. 134. - P. 141-147.

179. Maile S., Merker H.J. C-cells of marmosets (Callithrix jacchus) // Anat. Anz. -1996.- V. 178. -№2.-P. 159-167.

180. Mausle E. Elektronemikroskopische Befunde an menschlichen Neugeborenen Schilddrusen // Beitr. Pathol. 1971. - Bd. 142. - S. 360-380.

181. Massive osteolysis in a girl with agenesis of thyroid C-cells / Korsic M., Jelasic D., Potocki K. et al. // Skeletal Radiol. 1998. - V. 27. - № 9. - P. 525-528.

182. McMillan P.J., Hooker W.M., Deftos L.J. Distribution of calcitonin-containing cells in the human thyroid // Am. J. Anat. 1974. - V. 140. - P. 73-80.

183. Methods in laboratory investigation. Differential diagnosis of gastrointestinal carcinomas by using monoclonal antibodies specific for individual keratin polypeptides / Osborn M., Van L.G., Weber K. et al. // Lab. Invest. 1986. - V. 55. -P. 497-504.

184. Miettinen M., Franssila K.O. Variable expression of keratins and nearly uniform lack of thyroid transcription factor 1 in thyroid anaplastic carcinoma // Hum. Pathol. 2000. - V. 31. -№9. - P. 1139-1145.

185. Milcu S., Tasca C. The Morphofunctional Heterogeneity of the thyroid // Rev. Roum. Endocr. 1976. - V. 14. - P. 93-102.

186. Mixed medullary-follicular carcinoma of the thyroid gland: a clinicopathologic variant of medullary thyroid carcinoma. / Mizukami Y., Nonomura A., Michigishi T. et al. // Mod. Pathol. 1996. - V. 9. - № 6. - P. 631-635.

187. Moll R., Schiller D.A., Franke W.W. Identification of protein IT of the intestinal cytoskeleton as a novel type I cytokeratin with unusual properties and expression patterns // J.Cell Biol. 1990. - V. 11. - P. 567-580.

188. Nagle R.B. A review of intermediate filament biology and their use in pathologic diagnosis // Mol. Biol. Reports. 1994. - V. 19. - P. 3-21.

189. Neuroendocrine differentiation in non-neuroendocrine thyroid carcinoma / Kargi A., Yorukoglu Y„ Aktas S. et al. // Thyroid. 1996. - V. 6. - № 3. - P. 207-210.

190. Neuromedin U-like immunoreactivity in the thyroid gland of the rat I Domin J., Al-Madani A.M., Desperbasques M. et al. // Cell Tissue Res. 1990. - V. 260. - P. 131-135.

191. Neve P., Vollman S.H. Fine structure of ultimobranchial follicles in the thyroid gland of the rat // Anat. Rec. 1971. - V. 171. - P. 259-272.

192. Nunez E.A., Gershon M.D. Structural emodelling of bat thyroid parafollicular (C) cells during development // Am. J. Anat. 1980. - V. 157. - P. 191-204.

193. Okada H., Shigeta Y., Un-No Y. C-cell distribution in ovine thyroid gland // Anat. Histol. Embryol. 1995. - V. 24. - № 4. - P. 281-284.

194. O'Rahilly. Growth. Early human development and the chief source of information on staged human embryos // Eur. J. Obstet. Gynec. Reprod. Biol. 1979. -V9.-P. 273.

195. Osseointegration of dental implants in rabbit bone with low mineral density / Mori H., Manabe M., Kurachi Y., Nagumo M. // J. Oral. Maxillofac. Surg. 1997. -V. 55(4).-P. 351-361.

196. Patterns of expression of cytoskeletal proteins in human thyroid gland and thyroid carcinomas / Dockhorn-Dworniczak В., Franke W.W., Schroder S. et al. // Differentiation. 1987. - V. 35(1). - P. 53-71.

197. Pawlicowski M., Stepien H. Inhibition of mitotic activity in rat thyroid by calcitonin // Endocrinol. Pol. 1984. - V. 35. - № 6. - P. 929.

198. Pearse A.G.E., Calvalheira A.F. Citochemical evidense for an ultimobranchial origin of rodent thyroid C-cells // Nature. 1967. - V. 214. - P. 929.

199. Pearse A.G.E., Polak J.M. Cytochemical evidence for the neural crest origin of mammalian ultimobranchial C-cells // Histochemie. 1971. - V. 27. - P. 96-102.

200. Petco M., Rigo G., Varga Z. Quantitative changes of the C-cell population in the rat thyroid during postnatal ontogenesis // Cell. Tiss. Res. 1976. - V. 166. - P. 541-552.

201. Pianzola H.M., Ottino A., Castelletto R.H. Solid cell nests of the Thyroid gland. Optic and immunohistochemical study at autopsies // Acta Anat. Basel. 1992. - V. 143. - P. 243-249.

202. Postnatal variations in the number and size of C-cells in the rat thyroid gland / Conde E., Martin L.I., Utrilla J.C. et al. // Cell. Tissue Res. 1995. - V. 280. - № 3. -P. 659-663.

203. Potts J.T. Chemistry of the calcitonins // Bone Miner.-1992.-V. 16.-P. 169-173.

204. Preliminary evaluation of endocrine cells in the rat respiratory tract after thyroid and parathyroid gland removal / Sawicki В., Kasacka I., Azzadin A. et al. // Folia Histochem. Cytobiol. 2001. - V. 39. - № 2. - P. 193-194.

205. Pueblitz S., Weinberg A G., Albores-Saavedra J. Thyroid С cells in the Di George anomaly: a quantitative study // Pediatr. Pathol. 1993. - V. 13. - № 4. - P. 463-473.

206. Respiratory muscle function and serum enzymology in hyperthyroidism before and after treatment / Yuan Y., He Т., Zhang H. et al. // Hua Hsi I Ко Та Hsueh. Hsueh. Pao. 1998. - V. 29. - № 2. - P. 204-208.

207. Ring P., Bjorkman U., Ekholm R. Effect of cooling on intracellular transport and secretion of thyroglobulin // Cell Tissue Res.-1987. V. 247. - P. 505-513.

208. Robertson D.R. Endocrinology of amphibian ultimobranchial glands // J. Exp. Zool.-1971. V. 178. - P. 101.

209. Roediger W.E.W. A comparative study of the normal human neonatal and the canine thyroid C-cell //J. Anat.-1973. V. 115. - P. 253-276.

210. Roediger W.E.W. The oxyphil and С cells of the human thyroid gland. A cytochemical and histopathological review // Cancer. 1975. -V. 36. - P. 1758-1770.

211. Roles of growth factors of tumor necrosis factor-a on liver cell proliferation induced in rats by lead nitrate / Shinozuka H., Kubo Y., Katyal S.L. et al. // Lab. Invest. 1994. - V. 71. - № 1. - P. 35-41.

212. Sakai K., Yamada S., Yamada K. Effects of ovariectomy on parafollicular cells in the rat // Okajima Folia Anat. Jpn.-2000. V. 76. - № 6. - P. 311-319.

213. Samaan N.A., Anderson C.D., Adam-Mayne M.E. Immunoreactive calcitonin in the mother, neonate, child and adult // Am. J. Obstet. Gynecol. 1975. - V. 121. -P. 622-625.

214. Savelhev S., Herrmann H.J. Die Ontogenese der Ultimobranchial korper des Urodelen chtung // Zool. Anat. 1986. - В. 114. - S. 529.

215. Sawicki B. C-Zellen in der Schilddruse und in den Resten des Ultimobranchialkorpers des Wisents // Ann. Anat. 1993. - V. 175. - P. 343-347.

216. Sawicki B. Evaluation of the role of mammalian thyroid parafollicular cells // Acta Histochem. 1997. - V. 97. - P. 389-399.

217. Sawicki B. Ultimobranchial follicles and cysts in the European bison thyroid // Acta Theriol. 1991. - V. 36. - P. 349-356.

218. Sawicki В., Siuda S., Kasacka I. Microscopic structure of the thyroid gland in the European bison // Acta Theriol. 1992. - V. 37. - P. 171-179.

219. Sawicki В., Zabel M. Immunocytochemical study of parafollicular cells of the thyroid and ultimobranchial remnants of the European bison // Acta histochem. -1997. -V. 99. P. 223-230.

220. Sawicki В., Zabel M. Immunocytochemical study of parafollicular (C) cells of the thyroid in some wild rodents // Anat. Anz. 1999. - V. 181. - № 2. - P. 173-180.

221. Schumacher G.H. Embryonale entwicklung des Menschen // B.:Veb. Verlag. Volk. und Gesundheit. 1974. - S. 178.

222. Shi S.H., Key M.E., Kalra K.L. Antigen retrieval in formalin-fixed, paraffm-embeded tissues: an enhancement method for immunohistochemical staining based on microwave heating of tissue section // J. Histochem. Cytochem. 1991. - V. 39. -p. 741-748.

223. Solid cell nests of the thyroid gland / Ozaki O., lto K., Sugino K. et al. //

224. Virchows. Arch. Pathol. Anat. Histopathol. 1991. - V. 418. - № 3. - P. 201-205.

225. Solid cells nests of thyroid: light microscopy and immunohistochemical profile / Cameselle T.J., Varela D.J., Sambade C. et al. // Hum. Pathol. 1994. - V. 25. - P. 684-693.

226. Solid cells nests of the thyroid. A histologic and immunohistochemical study / Mizukami Y., Nonomura A., Michigishi T. et al. // Am. J. Clin. Pathol. 1994. - V. 101. -P. 186-191.

227. Solid cells nests of the thyroid in medullary thyroid carcinoma / Ozaki O., Ito K., Fujisawa T. et al. // Histopathology. 1994. - V. 24. - P. 77-80.

228. Soyama F. Development and differentiation of lateral thyroid // Endocrinol. -1973. V. 20. - P. 565-580.

229. Specific immunostaining for ССР II, a novel calcitonin carboxyl terminal peptide encoded by the calcitonin/CGRP gene / Giscard D.S., Ghillani P., Taboulet G. et al. // J. Histochem. Cytochem. 1993. - V. 41. - P. 1605-1610.

230. Stevenson J.C. Regulation of calcitonin and parathyroid hormone secretion by oestrogens // Matuntas. 1982. - V. 4. - P. 1-7.

231. Stimulatory effect of insulin on calcitonin secretion / Care A.D., Abbas S.K., Pell J. et al. // Horm. Metab. Res. 1998. - V. 30. - № 4. - P. 200-205.

232. Synthesis and storage in rat thyroid C-cells / Thomas G.A., Neonakis E., Davies H.G. et al. // J. Histochem. Cytochem. 1994. - V. 42. - № 8. - P. 1055-1060.

233. Gastrin-releasing peptide gene expression in developing hyperplastic human thyroid C-cells // Sunday M.E., Wolfe H.J., Chin W.W., Spindel E. // Endocrinology.- 1988. -V. 122. P. 1551-1558.

234. Tasso F., Michel B.M. Le phenomene oncocytaire: observations dans la thyroide et le pancreas humains // J. Microscopie. 1972. - V. 14. - P. 94a.

235. Tellini U., Pellizzari L., Pravadelli B. Thyroid function in elderly with neoplasms//Minerva Med. 1999. - V. 90. - № 4. - P. 111-121.

236. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells / Moll R., Franke W.W., Schiller D.A. et al. // Cell. 1982.- V.31.-P. 11-24.

237. The cytoskeleton / Alberts В., Bray D., Lewis J. et al. // Molecular biology of the cell. New York, London. Garland Publishing, Inc., 1989. - P. 613-618.

238. The human keratins genes and their differential expression / Fuchs E., Tyner A.L., Gindice G.J. et al. // Curr. Top. Dev. Biol. 1987. - V. 22. - P. 5-34.

239. Thyroid autoantibodies in depressive disorders / Konig F., von Hippel C., Petersdorff Т., Kaschka W. // Acta Med. Austnaca. 1999. - V. 26. - № 4. - P. 126128.

240. Thyroid С cells of middle-aged rats treated with estradiol or calcium / Sekulic M., Lovren M., Milosevic V. et al. // Histochem. Cell. Biol. 1998. - V. 109. - № 3. -P. 257-262.

241. Thyroid hormone deficiency before the onset of hearing causes irreversible damage to peripheral and central auditory systems / Knipper M., Zinn C., Maier H. et al. //J. Neurophysiol. 2000. - V. 83. -№ 5. - P. 3101-3112.

242. Tiegs RD, Heath H. Effects of altered calcium intake on diurnal and calcium-stimulated plasma calcitonin in normal women // J. Bone Miner. Res. 1989. - V. 4. -P. 407-412.

243. Ultrastructural features of "solid cell nest" of the human thyroid gland: a study of 8 cases / Martin V., Martin L., Viennet G. et al. // Pathol. 2000. - V. 24. - № 1. -P. 1-8.

244. Vaes G. Cellular biology and biochemical mechanisms of bone resorption // Clin. Orthop. Relat. Res. 1988. - V. 231. - P. 239-271.

245. Wahner H.W., Fogelman I. The evaluation of osteoporosis: dual energy x-ray absorptiometry in clinical practice // London: Martin Dunitz, 1994. P. 102.

246. Werner M. von Wasielelewski R., Komminoth P. Antigen retrieval, signal amplification and intensification in immunohistochemistry // Histochem. Cel. Biol.-1996(a). -V. 105. P. 261-267.

247. Witschi. Growth / Altman P.L., Dittmer D.S. (ed) Biological Handbooks, FASEB // Fed. Soc. Exp. Biol., Washington. 1962. - P. 275.

248. Wolfe H.J., Voekel E.F., Tashjian A.H. Distribution of calcitonin-containing cells in normal adult thiroid gland. A correlation of morphology with the peptide contet // J. Clin. Endocrinol. Metabol. 1974. - V. 38. - P. 688-694.

249. Zabel M. Citophysiologi of thyroid parafollicular cell. Gegenbauers morphol. Jahrb. 1989. - V. 135. - № 2. - P. 344.

250. Zabel M., Dietel M. S-100 protein and neuron-specific enolase in parathyroid glands and C-cells of the thyroid // Histochemistry. 1987. - V. 86. - № 4. - P. 389392.

251. Zabel M., Schafer H. Effect of hypercalcemia on parafollicular cells in the rat thyroid gland // Histochemistry. 1988. - V. 88. - № 3-6. - P. 623-628.

252. Zabel M., Schafer H. Ultrastructural localization of calcitonin and somatostatin in С cells of rabbit thyroid // Cell and Tissue Res. 1986. - V. 245. - № 3. - P. 667672.

Информация о работе

Титова, Марина Александровна
кандидата биологических наук
Казань, 2003
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфофункциональная характеристика С-клеток щитовидной железы в онтогенезе и эксперименте - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы