Морфофункциональная характеристика миокарда при экспериментальной патологии и коррекции препаратами метаболического типа действия

Герасимова, Наталья Геннадьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональная характеристика миокарда при экспериментальной патологии и коррекции препаратами метаболического типа действия
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная характеристика миокарда при экспериментальной патологии и коррекции препаратами метаболического типа действия"

На правах рукописи

Герасимова Наталья Геннадьевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯХАРАКТЕРИСТИКА МИОКАРДА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ И КОРРЕКЦИИ ПРЕПАРАТАМИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО ТИПА

ДЕЙСТВИЯ

03 00 25 - гистология, цитология, клеточная биология 14 00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук

ООЗ163932

Саранск 2008

003163932

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им Н П Огарева» (г Саранск) и Российском университете дружбы народов (г Москва)

Научные консультанты:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Доктор биологических наук, профессор Кругляков Павел Павлович

Доктор биологических наук, профессор Балашов Владимир Павлович

Доктор медицинских наук, профессор Ямщиков Николай Васильевич

Доктор медицинских наук, профессор Павлович Евгений Ростиславович

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Серпов Лев Николаевич

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет»

Защита диссертации состоится » & 2008г

на заседании диссертационного совета Д 212 117 01 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им Н П Огарева» по адресу 430000, Республика Мордовия, г Саранск, ул Большевистская, 68

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им Н П Огарева» по адресу 430000, Республика Мордовия, г Саранск, ул Большевистская, 68

Автореферат разослан «у^» 2008г

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук,

профессор

Тельцов JI. П.

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В последнее десятилетие в связи с сохранением высоких показателей заболеваемосз и ишемической болезнью сердца во всем мире поддерживается интерес к изучению патогенеза повреждения миокарда (Драпкина О М и др, 2000, Арзамасцев А П и др, 2003, Сапрунова В Б, 2003, Голиков П П , 2004, Марков X М, 2005, Мартынов А И и др , 2005, Благонравов М Л , 2007, Barton С Н , 2001, Bian К , Murad F , 2003) Учитывая, что последствия ишемии определяются не только гемо-динамическими изменениями, но и тканевыми повреждениями, в современной клинической практике все большее значение придают миокардиальной цитопротекции (Голиков А П , 2003, Лукьянова Л Д , 2004, Смирнов Л Д, 2005, Лапша В И и др , 2005)

Особое внимание в настоящее время уделяется изучению морфофунк-ционапьных изменений тканевых, клеточных и субклеточных компонентов миокарда, осуществляющих структурно-метаболические, адаптационные и регенераторные процессы в сердце, а также обеспечивающие эффективное функционирование сердечно-сосудистой системы (Евсевьева М Е , 2000, Непомнящих Л М , 2001, Павлович Е Р , 2001) Одним из важных направлений исследования морфофункциональной организации сердца явилось открытие комплекса сигнальных молекул, обеспечивающих тригеррные функции органов и систем организма, одной из них является оксид азота (Bian К et al, 2003) Эндогенный оксид азота проявляет свойства вазодилятатора (Ванин А Ф , 1998) Именно нарушение продукции эндотелиальными клетками оксида азота рассматривается как один из факторов в патогенезе ишемических и стрессорных повреждений миокарда, приводящих к дисфункции сосудистого эндотелия (Марков X М , 2005, Л А Бокерия и др , 2006)

нее время группа лекарственных средств, получившая название «препараты метаболического типа действия» К ним относят такие средства как диме-фосфон, мексидол, креатинфосфат, кудесан и другие Они обладают широким спектром биологической активности, в том числе проявляют кардио-тропные свойства (Меерсон Ф 3 и соавт , 1989, Ончинников В Д , 1989, Сер-нов Л Н , Гацура В В , 1989, Сернов Л Н , Смирнов Л Д , 1996, Рябинин ВА и соавт, 1996) Однако реализуются ли эти кардиотропные свойства на морфологическом уровне, а также имеются ли у них другие фармакодинамические аспекты на сегодняшний день остается достаточно серьезной неисследованной проблемой медицины Учитывая актуальность проблемы и необходимость ее дальнейшего изучения, нами было предпринято данное исследование

Цель работы: изучение морфофункциональных изменений миокарда при экспериментальной патологии (стрессорном и ишемическом повреждении миокарда) и анализ возможностей коррегирующего влияния препаратов метаболического типа действия на структурную организацию мышечных и сосудистых компонентов сердца

Задачи исследования.

1 Изучить изменения морфологии миокарда и нарушения функции левого желудочка мышей при различной экспериментальной патологии (стрессорном и ишемическом повреждении миокарда)

2 Исследовать особенности ультраструктурных изменений сердечной мышечной ткани и сосудов микроциркуляторного русла при экспериментальной терапии мексидолом, неотоном и димефосфоном в условиях хронического иммобилизационного стресса

3 Изучить фармакотоксикологические свойства мексидола, неотона и димефосфона при длительном применении в условиях хронического стресса

4. Изучить кардиопротекторное действие мексидола, неотона и димефосфона при экспериментальном ишемическом повреждении миокарда

5. Оценить участие ферментов семейства ЫО-синтаз и их морфофунк-циональные проявления, а также медиаторов симпатоадреналовой системы в реализации стрессорного повреждения миокарда

6 Оценить влияние препаратов метаболического типа действия на состояние МО-синтазной системы и на участие симпатоадреналовой системы в реализации их стресс-протекторного эффекта

Научная новизна.

применение неотона, мексидола, димефосфона в условиях хронического стресса, умеренно коррегирует стрессорные изменения ультраструктуры миокарда, уменьшая зоны пересокращения миофибрилл, их деструкцию, участки внутриклеточного и интерстициального отека и количество измененных митохондрий с конденсированным матриксом, спазмированных сосудов

Изучено кардиопротекторное действие мексидола, неотона и димефосфона при экспериментальном ишемическом и стрессорном повреждении миокарда Выявлено, что выраженность противоишемического эффекта всех изучаемых препаратов примерно равнозначна Установлено, что изучаемые препараты не оказывают влияния на летальность подопытных животных в условиях хронического экспериментального стресса и являются безопасными при длительном применении

Препараты неотон, мексидол, димефосфон способны коррегировать стрессорные повреждения миокарда, влияя на экспрессию конститутивной эндотелиапьиой изоформы >Ю-синтазы в эндотелии кровеносных сосудов, что компенсирует эндотелиальную дисфункцию в условиях хронического стресса, и индуцибельной изоформы в кардиомиоцитах что, приводит к снижению токсического эффекта оксида азота Выявлено, что неотон, мексидол и димефосфон коррегируют содержание оксида азота в миокарде мышей в условиях хронического иммобилизационного стресса

Показано, что неотон, мексидол способны предотвращать стрессорные повреждения миокарда, влияя на концентрацию медиаторов симпатоадрена-ловой системы

Научно-практическая значимость и внедрение

результатов исследования.

Полученные результаты подтверждают целесообразность использования данной модели стресса для изучения хронической токсичности кардио-тропных средств при их доклинических испытаниях и изучения влияния препаратов метаболического типа на коррекцию стрессорных изменений в миокарде Полученные данные о морфологических изменениях миокарда на фоне хронического иммобилизационного стресса и участии в этом процессе ЫО-синтазной системы должны учитываться в клинике ишемических и стрессорных поражений сердца, а также при изучении молекулярных основ компенсаторно-приспособительных процессов в эксперименте Полученные результаты углубляют знания о механизмах кардиопротекторных эффектов препаратов метаболического типа действия (неотона, мексидола, димефосфона) По материалам диссертации получено удостоверение на рационализаторское предложение (2007г) Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедры цитологии, гистологии и эмбриологии с курсом медицинской биологии Мордовского государственного университета, кафедры фармакологии и служат обоснованием для продолжения исследования кардиотропных эффектов препаратов метаболического типа действия в условиях стресса

Положения, выносимые на защиту

1 Длительное применение препаратов метаболического типа действия в условиях хронического стресса не сопровождается негативными изменениями морфофункционального состояния миокарда Изменения микроскопических и субмикроскопических структур миокарда можно рассматривать как компенсаторно-адаптационные, ведущие к поддержанию эффективного морфофункционального состояния миокарда

2 Неотон, димефосфон и мексидол способны эффективно ограничивать альтеративные процессы в миокарде при моделировании экспериментального инфаркта Выраженность противоишемического эффекта всех препаратов примерно равнозначна и соответствует эффекту пропранолола

3 Препараты метаболического типа действия способны коррегировать стрессорные повреждения миокарда на уровне NO-синтазной и симпатоадре-наловой систем

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на IV научной конференции молодых ученых МГУ им Н П Огарева (Саранск, 1999), научной конференции МГУ им Н П Огарева «Клинико-экспериментапьные аспекты современной медицины» (Саранск, 1999), межрегиональной научной конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Пенза, 2000), на Всероссийской научно-практической конференции "Экология, здоровье и природопользование" (Саратов, 2000), на III международном конгрессе молодых ученых «Науки о человеке» (Томск, 2002), на I Всероссийского конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2002), на научной конференции МГУ им Н П Огарева «XXXI Огаревские чтения» (Саранск, 2003), на II Всероссийского конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2003), на VI Международном славянском конгрессе по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца (Санкт-Петербург, 2004), на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета им Н П Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2005), 4-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2005), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти Я В Костина «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005), IV национальной научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005), на 2-ой Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005), на 11 научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета им Н П Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2006), на Всероссийской науч-

но-практической конференции «Неотложные состояния при сердечнососудистых заболеваниях» (Москва, 2006), на V Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2006), на научно-практической международной конференции «Актуальные вопросы эволюционной, возрастной и экологической морфологии» (Белгород, 2006), на VII международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006), на XXXV научной конференции «Ога-ревские чтения» медицинского факультета Мордовского госуниверситета «медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2006), на 6-й Всероссийской научной конференции, «Ретиноиды (Орел, 2007), на конференции, посвященной 70-летию Тверской государственной медицинской академии к 100-летию со дня рождения основателя кафедры анатомии человека, профессора И С Кудрина (Санкт-Петербург, 2006), на XII международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2007), 5-ой национальной научно-практической конференции с международным участием "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" (Смоленск, 2007), XII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им Н П Огарева (Саранск, 2007)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 39 научных работ, из них 10 научных работ в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК и 1 монография, получено удостоверение на рационализаторское предложение (2007г)

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 219 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, включающего 332 источника (184 отечественных авторов, 148 - зарубежных авторов) Работа иллюстрирована 74 рисунками, из них 49 микрофотографий и 14 таблицами

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Характеристика подопытных животных

Эксперименты проводили на различных лабораторных половозрелых животных обоего пола, краткие сведения о которых представлены в табл 1 Лабораторные животные находились в боксированных помещениях на стандартной диете с соблюдением всех правил и Международных рекомендаций Европейской Конвенции по защите животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997) Все манипуляции, причиняющие животным боль, проводились под наркозом Для анестезии использованы эфирный наркоз, тиопенталовый наркоз (35 мг/кг, внутрибрюшинно), уретан (800 мг/кг внутрибрюшинно)

Таблица 1

ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ И БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

№ Раздел исследования Вцд животных п Масса, г

1 Электронно-микроскопическое исследование миокарда мыши 50 20-22

2 Иммуногистогистохимическое исследование мыши 75 20-22

3 Определение содержания оксида азота в миокарде мыши 50 20-22

4 Изучение острой токсичности мыши 373 18-20

5 Изучение размеров зон ишемии и некроза крысы 42 200-350

6 Адреналиновые микронекрозы мыши 67 20-22

7 Острые окклюзионные аритмии крысы 82 200-350

8 Определение сократительной функции певого желудочка сердца кошки 50 1800-4500

9 Определение фармакотоксикологических свойств препаратов при длительном применении мыши 225 20-22

10 Определение концентрации катехолами-нов в ткани сердца мыши 50 20-22

Всего Мыши 890 Крысы 124 Кошки 50

Метод моделирования хронического иммобилизационного стресса и изучения стресспротекторного действия

Для изучения стресс-протекторной активности метаболических средств нами была использована модель 25%-ного иммобилизационного стресса по И А Коломейцевой (1988), предложенная В П Балашовым и соавт в 2002 году для оценки безопасности потенциальных противоаритмических средств как наиболее простой, дешевый и адекватный метод Иммобилизационный

стресс воспроизводили ежедневным помещением животных в тесные пеналы объемом 42 см3, ограничивающие подвижность животных Длительность иммобилизации составляла 6 часов (25%) в течение 30 дней Исследуемые соединения вводили ежедневно однократно внутрибрюшинно до стресса в объеме 0,2 мл на инъекцию в эффективных дозах

Животные были разделены на пять групп 1- интактные мыши (контроль), 2 — животные, подвергнутые хронической иммобилизации, 3 - животные, подвергнутые хронической иммобилизации и получающие мексидол (внутрибрюшинно, 20 мг/кг, 30 суток, 6 раз в неделю), 4 - те же условия + неотон (внутрибрюшинно, 100 мг/кг, 30 суток, 6 раз в неделю), 5 - те же условия + димефосфон (внутрибрюшинно, 100 мг/кг, 30 суток, 6 раз в неделю)

0 токсическом эффекте лекарственных препаратов судили по показателю летальности животных

Электронио-микроскопическое исследование миокарда

Для электронно-микроскопического исследования миокарда левого желудочка проводили проводку и заливку материала по традиционному методу Кусочки ткани фиксировали в 3% глутаровом альдегиде на 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,2) в течение 12 часов при 4° С После промывки 0,15 М фосфатным буфером (3 смены) проводили постфиксацию 2% растворе осмиевой кислоты в течение 2 часов при 4° С, далее кусочки проводили через батарею спиртов возрастающей концентрации до абсолютного этанола (50°, 70°, 96°, -

1 смена по 30 минут при 4° С и 100° - 3 смены по 30 минут при 18° С) и окиси пропилена Перед заливкой производили пропитку материала в смеси эпоксидных смол с окисью пропилена в отношении 1 1 в течение 3 часов, далее кусочки помещали в заливочную смесь эпоксидных смол на 30 минут при 60°С Заливку осуществляли с использованием смеси эпоксидных смол ЭПОН-АРАЛДИТ (Mollenchauer, 1964) с последующей полимеризацией в течение 2- суток при 60°С, ультратонкие срезы получали на микротоме, монтировали их на сетки и бленды, контрастировали уранилацетатом (5% раствор на метиловом спирте), цитратом свинца (Reynolds, 1963, Venable J, Coggeshal R , 1965), препараты изучали на электронном микроскопе ЭМ-125 при ускоряющем напряжении 75 кВ

Иммуногистохимическое исследование экспрессии eNOS и iNOS в миокарде

Проводили иммуногистохимическое исследование миокарда левого желудочка по традиционной методике (пероксидазный метод) с использованием первичных антител к индуцибельной и эндотелиальной изоформам NO-синтазы (eNOS, iNOS, Santa Cruz Biotechnology, США, в концентрации 1 400) В качестве контроля использовали инкубацию без первичных антител Животных гильотинировали под легким эфирным наркозом После извлечения сердце помещали в раствор фиксатора (4% раствор параформапьдегида на 0,1 М фосфатном буфере, рН=7,4) на 6-8 часов при 4 °С После криопро-текции (15% и 30 % сахароза) и замораживания, на криостате готовили срезы (15-20 мкм) Далее срезы помещали в 0,3 % раствор перекиси водорода на

холодном 70% метаноле на 30 минут Проводили промывку в 0,1 М фосфатном буфере в течение 15 минут Далее проводили блокирование в 10 % растворе сыворотки (goat blocking serum) Инкубацию срезов в растворе первичных антител проводили в течение ночи при 4 °С После отмывки первичных антител в фосфатном буфере в течение 15 минут препараты инкубированы с вторичными антителами, связанными с биотином (1 300) (Santa Cruz Biotechnology, США) в течение 1 часа и затем с ABC комплексом (ABC Staining System) в течение 1 часа (в концентрации, рекомендуемой производителем (Santa Cruz Biotechnology, США)) Как хроматоген был использован диаминобензидин - DAB (Santa Cruz Biotechnology, США) Все инкубированные растворы готовили с использованием 0,2 % Triton Х- 100 Полученные препараты просматривали в световой микроскоп Zeiss, снабженный цифровой фотокамерой Полученные изображения обрабатывали с помощью Adobe Photoshop 6,0

Методы исследования кардиофармакологических свойств испытуемых препаратов

метод определения острой токсичности

Острую токсичность исследуемых соединений изучали на белых мышах при внутрибрюшинном ведении водных растворов изучаемых фармакологических препаратов Показатель острой токсичности (ЛД50) вычисляли графически по методу Миллера и Тейнтера (Беленький М Л , 1963, Сернов Л Н , Гацура В В , 2000)

дифференциальный индикаторный метод определения размеров зон ишемии и некроза у крыс

Метод предложен Серновым Л Н , Гацура В В (1989) После окклюзии коронарной артерии животных забивали путем декапитации под эфирным наркозом, извлекали сердце, канюлировали восходящую часть дуги аорты, промывали в течение 1-2 мин физиологическим раствором хлорида натрия при t=37 °С под давлением 135 мм водн ст, а затем перфузировали на протяжении 5-6 мин 0,025% раствором синьки Эванса на физиологическом растворе под прежним давлением Перфузия продолжалась до темно-синего окрашивания интактных зон миокарда Затем поврежденный и неповрежденный участки помещали в 2 отдельных бюкса, куда добавляли предварительно подогретый до 37 °С фосфатный буфер, содержащий трифенил-тетразолия хлорид («Sigma», Германия) (1 мг/мл) в соотношении 1 9 (соответственно веса участков ткани и буфера) Бюксы инкубировали в термостате в течение часа при t 37 °С Через сутки после окрашивания участки поврежденного и неповрежденного отделов миокарда раздельно гомогенизировали в соответствующем инкубационном буфере В гомогенатах определяли содержание красного формазана (индикатор зоны некроза) и синьки Эванса (индикатор зоны ишемии)

модель адрена пиновыхаритмий

В качестве подопытных животных использованы белые мыши массой 20-22 г, которым при легком тиопенталовом наркозе (35 мг/кг, внутрибрю-шинно) эндотрахеапьно вводили фторотан в объеме 0,02 мл, после чего в бедренную вену вводили раствор адреналина гидрохлорида в дозе 16,5 мг/кг

У животных регистрировали ЭКГ во II стандартном отведении, однако основным критерием противоишемической активности являлся показатель выживаемости мышей

ранние окклюзиош1ы1 и рг.ш.рфузионные аритмии моделировали на беспородных кошках обоего пола массой 1800-4500 г (Сторожук В Г , 1985, Manning et al, 1986) Наркотизированных уретаном животных переводили на искусственную вентиляцию легких, производили торакотомию и, рассекая перикард, обнажали сердце Под переднюю нисходящюю ветвь левой коронарной артерии подводили лигатуру, концы которой продевали в полость полиэтиленовой трубки с фиксатором При подтягивании концов лигатуры (в течение 30 минут) достигалась окклюзия коронарной артерии, при ослаблении лигатуры восстановление коронарного кровотока - реперфузия Об изменениях ритма сердечной деятельности судили по ЭКГ, которую регистрировали во II стандартном отведении Состояние сократительной активности миокарда левого желудочка сердца в любой момент определяли соотношением «сила-скорость», кривая этой зависимости соответствует максимальной скорости нарастания давления в левом желудочке (dP/dtmax)

биохимическое определение ка 7 ехоламинов в миокарде Использован метод, предложенный У Эшлер и Ф Лимайко, в модификации Э Ш Матлиной в 1967 году (Карпищенко А И , 2002) Извлеченное сердце омывали холодным 0,9% раствором хлорида натрия, отделяли левый желудочек, образец замораживали и взвешивали, затем тщательно гомогенизировали на холоде (0-4°С) Далее надосадосадочную жидкость (1,8 мл) добавляли в стеклянные пробирки с 25 мг ЭДТА с доведением рН до 8,2- 8,5 Надосадочную жидкость с ЭДТА заливали в хроматографическую колонку, для оседания катехоламинов на окиси алюминия Затем колонку промывали раствором аммиачной воды Элюирование проводили 0,25 н уксусной кислотой (двумя порциями по 3,5 мл) Полученные специфически флюоресцирующие биогенные амины подвергали фотометрированию на анализаторе биожидкостей «Флюорат- 02 АБЛФ

определение содержания оксида азота в миокарде Об уровне содержания оксида азота в миокарде судили по содержанию нитрит-иона, для определения которого использовали реактив Грисса, состоящий из N- нафтилэтилендиаминдигидрохлорида (12,5 мМ) и сульфани-ловой кислоты (37,5мМ) в равных соотношениях (Guevara Е et al, 1998) Содержание нитрит-иона определяли спектрофотометрически Статистическая обработка результатов, морфометрия

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (t) и критерия %2 при 5% уровне значимости (Закс Л , 1976, Фисенко В П , 2000) Данные обрабатывали в программе STAT - 2, на базе процессора Intel Pentium 333 Морфометрия проведена с помощью программы Scion Image for Windows (Release Alpha 4 0 3 2)

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Исследование острой токсичности испытуемых соединений

Исследование острой токсичности неотона проведено, используя субстанцию креатинфосфата (Реанал, Венгрия). Определить дозу, вызывающую у животных летальный исход, не удалось даже при введении 1500 мг/кг креатинфосфата. Острая токсичность мексидола составила 419+36 мг/кг (423426). Согласно данным литературы (Арбузов Б.А., 1968) ЛД50 димефосфона находится в диапазоне 2500 мг/кг. Анализ полученных результатов с учетом требований ГОСТа 12.1.007-76 (Березовская И.В., 2003) показал, что мекси» дол относятся к классу умеренно токсических соединений (ЛД50, в диапазоне 40-1250 мг/кг), тогда как димефосфон и неотон - к классу малотоксичных веществ (ЛД50, более 1250 мг/кг).

3.2. Исследование фармакотоксикологических свойств препаратов при длительном применении

Результаты исследования фармакотоксикологических свойств метаболических препаратов при длительном применении в условиях эксперемен-тального хронического иммобилизационного стресса, моделированного по методу И.А. Коломейцевой представлены на рис.1. Результаты исследования показали, что мексидол и неотон не влияют на стресс-опосредованную летальность подопытных животных. При применении димефосфона наблюдается наиболее выраженная тенденция к снижению процента летальности мышей. Важным является тот факт, что летальность животных при длительной терапии препаратами метаболического типа действия не увеличивалась, что является свидетельством отсутствия у них летальногенных свойств и, следовательно, их высокой безопасности.

3.3. Морфологические изменения миокарда белых мышей при длительной экспериментальной терапии метаболическими средствами в условиях хронического стресса

В отвег на длительное стрессорное воздействие у животных развивались характерные морфологические изменения в миокарде Изменения тонкой структуры мышечной оболочки всгречались мозаично Оболочки отдельных кардиомиоцитов выглядели размытыми, в них отмечалось неоднородность электронной плотности сарколеммы Отмечался более электронно-плотный матрикс органелл, в частности митохондрий и эндоплазматичсеской сети Часто встречались кардиомиоциты с крупными, вытянутыми ядрами, в некоторых случаях ядерные оболочки образовывали складки, инвагинации, выпячивания (рис 2а) Количество гетерохроматина существенно увеличивалось, и его скопления концентрировались по периферии ядра, что может косвенно свидетельствовагь о полиплоидности ядер, типичной для кардиомиоцитов Однако значительная часть нуклеоплазмы содержала эухроматин, что характерно для клеток с высокой синтетической активностью

В кардиомиоцитах обнаруживался умеренный внутриклеточный отек, чаще наблюдающийся в периферических отделах клеток Отмечалось и нарушение структуры вставочных дисков В некоторых участках миокарда отмечается их дезорганизация с нарушением чередования специализированных контактов (Рис 2в) Обнаруживались миофибриллярные структуры кардиомиоцитов с признаками значительного пересокращения (контрактуры 1-Ш степени), чаще контрактуры II степени, а также обнаруживались участки разрыхления и разволокнения миофибрилл (Рис2б)

В кардиомиоцитах выявлялись два вида митохондрий «светлые» - с хорошо выраженными кристами и «темные» - с конденсированным матрик-сом, причем количество последних преобладает (Рис 2а), что возможно свидетельствует о нарушении энергетических процессов в клетках В зоне деструкции крисг обнаруживались точечные зоны просветления Кроме того, наблюдался «феномен» скопления митохондрий под сарколеммой, что может свидетельствовать о адаптационно-компенсаторном ответе энергетических структур кардиомиоцитов на длительное стрессорное воздействие Иногда встречались гиганские митохондрии с разрушенными кристами и просветленным матриксом

Выявлялся значительный интерстициальный отек, наблюдалось увеличенное содержание коллагеновых волокон и соединительнотканных клеток, что может свидетельствовать о склерозе интерстициапьной ткани миокарда, обусловленном, возможно, частичной гибелью кардиомиоцитов Обнаруживалось изменение ультраструкгуры сосудов микроциркуляторного русла, проявлявшееся истончением эндотелиоцитов и снижением содержания в них пиноцитозных пузырьков, большое количество спазмированных сосудов (Рис 2в), что свидетельствовало о нарушении метаболического обмена в миокарде

Рис. 2. Фрагмент кардиомиоцита мыши па 30 сутки иммобилизационного стресса, а - Атипичное ядро с большим количеством инвагинаций, скопление митохондрии с уплотненным мат-риксом в саркоплазме. Обозначения: Мх - митохондрии, Я - ядро (х 24000); 6 - Участки пересокращения миофибрилл (контрактуры II степени). Разволокнение миофибрилл (стрелки). Обозначения: Мх - митохондрии (х 22000); в - Спазмированный сосуд в миокарде мыши на 30 сутки им-мобилизационного стресса. Выраженный интерстициальный отек. Дезорганизация вставочного диска с преобладанием десмосомоподобных контактов. Обозначения: КС - кровеносный сосуд, ИО - интерстициальный отек, ВД - вставочный диск (стрелки) (х 26000).

В группах животных, находящихся в условиях длительного иммобили-зационного стресса и получающих терапию метаболическими средствами (димефосфона, мексидола, неотона) обнаруживались подобные изменения ультраструктуры миокарда, что и в группе «стресс-контроль». Однако выраженность и распространенность этих изменений в миокарде животных данных групп значительно снижалась. Форма клеточных ядер характеризовалась полиморфизмом. В основном наблюдались кардиомиоциты с неизмененными ядерными оболочками или ядерные оболочки образовывали незначительные инвагинации (Рис.За). Распределение гетеро и эухроматина в ядре свидетельствовало о том, что клетка являлась метаболически активной. В некоторых кардиомиоцитах сохранялся умеренный внутриклеточный отек, который занимал часть саркоплазмы.

шш

)у ■

111?"

«ЙИбС

■шшт о штг¥ • , Лг^ Ж;«. шшшт

Рис 3. я - Ядро с незначительными инвагинациями ядерной обо мышей, получаиших димефосфои. Обозначения: Я - ядро (х 24000); б - У.

1ки в кардном поит е растру ктура вста воч-

ного диска с преобладанием десмосомоподобных контактов в миокарде мыши, получающей ди-мефосфон в условиях хронического иммобилизационного стресса. Обозначения: вставочный диск (предки) (х 28000).

Протекция димефосф.оном и мексидолом умеренно отражалась на структурной целостности сократительного аппарата кардиомиоцитов. Признаки пересокращения миофибрилл выявлялись с умеренной частотой в кар-

диомиоцитах (контрактуры I степени) (Рис.4а) наряду с нормальными сократительными структурами с хорошо выраженными изотропными участками, 2-линиями. В меньшей степени сократительного аппарата клеток коснулась протекция неогоном. Чаще, чем при применении других препаратов обнаруживались признаки пересокращения миофибрилл (контрактуры 1-11 степени) (Рис 46).

Рис.4, а - Участки пересокращения миофибрилл (контрактуры I степени) в кардиомиоците мыши, получающей димефосфон в условиях хронического иммобилизационного стресса. Обозначения: Мф - миофобриллы (х 20000);. б - Участки пересокращения миофибрилл (контрактуры II степени) в миокарде левог о желудочка мыши, получающей пеотон в условиях хронического иммобилизационного стресса. Область соединения двух кардиомиоцитов. Обозначения: Мф - миофибрил-лы, вставочный диск (стрелки), Мх - митохондрии (х 16000),

В группе животных, получающих терапию метаболическими средствами, обнаруживалось преобладание «светлых» митохондрий с многочисленными, хорошо выраженными кристами (Рис.5а), что может свидетельствовать о положительном влиянии препаратов на энергетические процессы в кардиомиоцитах и компенсации негативных последствий стресса. Однако в некоторых участках желудочкового миокарда обнаруживались скопления «темных» митохондрии с конденсированным матриксом (Рис.56), что возможно связано с локальными обратимыми изменениями ультраструктурных компонентов, как результат позитивного воздействия препаратов.

Рис.5, а - Преобладание «светлых» митохондрии, с хорошо выраженными кристами в кардиомиоците мыши, получающей димефосфон в условиях хронического иммобилизационного стресса. В кардиомиоците расположены интактные миофибриллы. Обозначения: Мф миофобриллы, Мх митохондрии (х 28000); б - Митохондрии 2-х видов: с уплотненным матриксом (Mxl), и с хорошо выраженными кристами (Мх2). Разволокпение и некоторая дезорганизация миофибрилл в кардиомиоците мыши, получающей мексидол в условиях хронического иммобилизационного стресса. Обозначения: Мф миофобриллы, Я - ядро (х 21000).

Ультраструктура кровеносных сосудов не претерпевала значительных изменения. При применении метаболических средств в большинстве случаев отмечались незначительный интерстициальный отек. Эндотелиоциты капилляров имели нормальную ультраструктуру, в их цитоплазме обнаруживались пиноцитозные пузырьки, что свидетельствует об активном двустороннем транспорте веществ, как результат позитивного действия препарата при стрессорном воздействии. Сосуды микроциркуляторного русла значительной части желудочкового миокарда характеризовались полнокровием. Интерстициальный отек был выражен в меньшей степени, чем в миокарде животных группы «стресс-контроль».

6. а - Ультраструктура кровеносного сосуда миокарда мыши, получающей мексидол в условиях хронического иммобилизационного стресса. Эндотелий сосуда содержит большое количество пи-ноцитозных пузырьков (стрелки), хорошо выражены складки, миковорсинки. Обозначения: КС -кровеносный сосуд, Мв - микроворсинки (х 22000); б - Полнокровный капилляр в миокарде левого желудочка мыши, получающей неотон в условиях хронического иммобилизационного стресса. Обозначения: Мх - митохондрии, Кп - капилляр (х 18000).

Морфометрия проведена с помощью программы Scion Image for Windows (Release Alpha 4.0.3.2). Проводилось измерение оптической плотности митохондрий. Оптическая плотность представляла собой среднее значение интенсивности оттенка серого множества пикселей, образующих отображение структуры на микрофотографии. В качестве фона измерялась оптическая плотность цитоплазматических структур, расположенных в непосредственной близости к митохондриям, которая вычиталась из показателей оптической плотности митохондрий. В условиях длительного иммобилизационного стресса без применения метаболических средств отмечается достоверное увеличение оптической плотности митохондрий, которая составила 50,46±0,41 у.е. В условиях длительного иммобилизационного стресса и применения метаболических средств (мексидола, неотона, димефосфона) отмечается достоверное уменьшение оптической плотности митохондрий по сравнению с группой животных «стресс-контроль» - 35,34±2,34; 24,25±2,14 и 27,33±2,1 соответственно. Как показали результаты морфометрии, у животных группы «стресс-контроль» поврежденные митохондрии с конденсированным матриксом составляют 70 % (при х 20000). В группе животных получающих мексидол, неотон и димефосфон в условиях длительного иммобилизационного стресса отмечается достоверное уменьшение количества ми-

тохондрий с конденсированным матриксом (40 %, 15 %, 15 % при х 20000) соответственно по сравнению с группой животных «стресс-контроль».

группы животных

Рис. 7. Показатели оптической плотности митохондрий при хроническом иммоби-лизационном стрессе и применении метаболических средств Примечание: А - отличия от контроля достоверны при р<0,05; * - отличия от стресс- контроля достоверны при р<0,05

группы ЖИВОТНЫХ

Рис, 8. Количество измененных митохондрий при хроническом иммобшшзационном стрессе и применении метаболических средств

Примечание: * - отличия от «стресс» достоверны при р<0,05

Таким образом, в результате проведенного исследования показано, что иммобилизационный стресс способствует развитию структурных нарушений миокарда. Все изученные препараты оказывают протекторное действие на комплекс морфологических повреждений миокарда при стрессе, а изученные изменения ультраструктуры можно рассматривать как компенсаторно-адаптационные проявления, способствующие эффективному восстановлению его морфофункционального состояния.

3.4. Исследование антиишемических свойств исследуемых соединений

Учитывая выраженный кардиоцитопротекторный эффект мексидола, неотона, димефосфона при хроническом стрессе, представляет интерес оценить протекторные свойства указанных препаратов при экспериментальной ишемии миокарда С этой целью использованы различные методические приемы и в первую очередь дифференциальный индикаторный метод определения зоны некроза и ишемии в ранние сроки острого инфаркта миокарда у крыс Результаты опытов представлены в таблице 2

Таблица 2

ВЛИЯНИЕ ИССЛЕДУЕМЫХ ПРЕПАРАТОВ НА РАЗМЕРЫ ЗОНЫ ИШЕМИИ И НЕКРОЗА У КРЫС ЧЕРЕЗ 4 ЧАСА ПОСЛЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИНФАРКТА МИОКАРДА

Условия опыта Доза, мг/кг п Зона ишемии/ масса миокарда (%) Зона некроза/ масса миокарда (%) Зона некроза/ зона ишемии (%)

Контроль - 16 34,5±2,3 21,2±2,4 62,5±4,3

Пропранолол 1,0 6 29,7±3,0 12,1±1,4* 40,5±5,2*

Креатинфосфат 200,0 8 30,1 ±2,7 16,4±1,7* 51,2±3,4*

Димефосфон 200,0 6 31,0±4,0 15,0±1,8* 49,0±5,3*

Мексидол 20,0 6 35,1±3,4 9,8±2,6* 32,4±6,7*

Примечание *- отличия от соответствующего показателя в контрольной серии опытов достоверны при р<0,05

Неселективный бета-адреноблокатор - пропранолол не изменял площадь зоны ишемии у подопытных крыс, однако весьма эффективно ограничивал зону некроза Этот показатель через четыре часа после перевязки венечной артерии по отношении к общей массе миокарда составил 12,1±1,4 %, в отношении к зоне ишемии - 40,5±5,2 % (р<0,05) Противоишемический эффект всех трех испытуемых веществ был сопоставим с эффектом пропрано-лола Креатинфосфат, димефосфон и мексидол не оказывали статистически достоверного влияния на размер зоны ишемии, которая в основном определяется местом перевязки коронарной артерии Поскольку "высота" лигиро-вания артерии во всех опытах была стандартной, понятно, почему величина зоны ишемии во всех опытах была примерно одинакова Напротив, отношения зоны некроза к общей массе миокарда и к зоне ишемии, как и под влиянием препарата сравнения заметно снижались под действием всех трех испытуемых веществ

Таким образом, креатинфосфат, димефосфон и мексидол были способны эффективно ограничивать альтеративные процессы в миокарде при моделировании экспериментального инфаркта Выраженность противоишемиче-ского эффекта всех препаратов примерно равнозначна и по своему качественному и количественному выражению соответствует эффекту бета-адреноблокатора - пропранолола

Другим методическим приемом для оценки противоишемических свойств лекарственных средств, являлось тестирование эффективности пре-

паратов при кагехоламиновых микронекрозах сердца у мелких лабораторных грызунов. Результаты опытов представлены на рис. 9.

Рис.. 9. ПГОТИВОИШЕМИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ АДРЕНАЛИНОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ БЕЛЫХ МЫШЕЙ

Примечание: *■■ отличия от соответствующего показателя в контрольной серии опытов достоверны при р<0,05; ЖЭ - желудочковые экстрасистолы

Препарат сравнения пропранолол оказывал дозозависимое протекторное действие: снижение дозы пропранолола до 0,5 мг/кг сопровождалось развитием оптимального противоишемического и противоаритмического эффекта. Опыты показали, что мексидол, по сравнению со всеми другими препаратами, включенными в исследование, снижал смертность животных (8 % в опыте, против 43 % в контроле). Противоишемический эффект мексидо-ла не сопровождался снижением вероятности развития эктопических желудочковых аритмий и блокад проведения. Димефосфон (200 мг/кг) не проявил достоверного противоаритмического действия в условиях данной экспериментальной патологии. Тем не менее, представляется важным тот факт, что на фоне димефосфона, в отличие от других метаболических средств и традиционных антиаритмиков, в меньшей степени угнеталась деятельность СУ и реже возникали синоаурикулярные, атрио-вентрикулярные внутрижелудоч-ковые блокады проведения. По выраженности этого эффекта димефосфон приравнивался к эффекту пропранолола в дозе 0,5 мг/кг. Креатинфосфат был исследован в одной серии экспериментов (150 мг/кг). Препарат не проявил статистически значимого противоишемического и противоаритмического действия в условиях данной экспериментальной патологии. В связи с этим, на модели адреналиновых аритмий у мышей отчетливо проявлялся противоишемический эффект лишь антагониста бета-адренергических рецепторов и мексидола, который в рамках рассматриваемой модели, вероятно, являлся наиболее мощным антиишемическим препаратом.

В качестве косвенного показателя тяжести ишемического процесса определена интенсивность аритмий при окклюзии и реперфузии коронарной

артерии у животных. Применялся метод комплексной сравнительной оценки противоаритмической активности ряда соединений, основанный на вычислении суммарного индекса терапевтической активности (СИТА), предложенный в работах Балашова В.П. и соавт. (2007). Результаты исследований представлены на рис. 10. В контрольной серии величина СИТА равна 6 условным единицам (по числу регистрируемых показателей). В опытных сериях величина СИТА обратно пропорциональна антиаритмической активности вещества. Из представленных расчетов видно, что в целом максимальную эффективность при данной экспериментальной патологии проявили препараты сравнения - пропранолол и верапамил, тогда как эффективность препаратов метаболического типа действия оказалась заметно ниже. Креатинфосфат был менее эффективен как кардиопротектор, тогда как димефосфон и мексидол проявляли более выраженные противоишемические свойства.

группы животных

Рис. 10 ВЕЛИЧИНЫ СУММАРНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ИНДЕКСОВ ИССЛЕДУЕМЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ОСТРЫХ ОККЛЮЗИОННЫХ АРИТМИЯХ У КРЫС

Состояние сократительной активности миокарда левого желудочка сердца определяли соотношением «сила-скорость» в опытах на кошках. Кри вая этой зависимости соответствует максимальной скорости нарастания давления в левом желудочке (с1Р/с)1;тах). С целью изучения гемодинамики в условиях острой ишемии, последнюю воспроизводили путем перевязки нисходящей ветви левой коронарной артерии после регистрации исходных значений. Результаты исследования <№/с11:тах и среднего динамического артериального давления представлены на рис. 1 1. и рис 12.

Рис I 1 ИЗМГ.11! ИИ1. Л'МТшах В % ПО ОТНОШГИИЮ К ИСХОДНЫМ ЗНАЧЕНИЯМ В КОНТРОЛЕ И ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ У КОШЕК С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ИНФАРКТОМ МИОКАРДА

Примечание отличия от контроля достоверны при наличии маркировки

Рис 12 ВЛИЯНИЕ ИССЛЕДУЕМЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ДИНАМИКУ АРТЕРИАЛЬНОГО ДАВЛЕНИЯ (В ММ РТ СТ) У КОШЕК С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ИНФАРКТОМ МИОКАРДА Примечание отличия от исходных значений достоверны при наличии маркировки

Мексидол оказывал отчетливый протекторный эффект На фоне его введения, начиная с 20 минуты наблюдения, значения dp/dt достоверно удерживались на более высоком уровне, чем в контрольных экспериментах В течение 60 минут наблюдения мексидол не влиял на величину артериального давления Однако следует отметить, что в контрольных опытах угнетение этого показателя достигало достоверного уровня лишь через 1 час наблюдения В этот период времени препарат проявлял отчетливую тенденцию к поддержанию уровня среднего динамического артериального давления Наиболее значимым эффектом димефосфона явилась его способность надежно препятствовать депрессии инотропной функции желудочкового миокарда подопытных животных Так на фоне димефосфона, уже на пятой минуте эксперимента значения dp/dt были статистически достоверно выше, чем в контрольной серии опытов (соответственно 99±1,3% и 80±8,6 %) В дальнейшем этот эффект сохранился на протяжении всего периода наблюдения и через час инотропная функция миокарда под влиянием димефосфона сохранялась на уровне 92±5,2% от исходного уровня, тогда как в контроле она в среднем составила 64±8,0% (р<0,05) В заключительной серии экспериментов оцени-

вали гемодинамические эффекты неотона у кошек, в той же экспериментальной постановке. Неотон вводили в двух дозах (50,0 и 100,0 мг/кг). При этом режимы введения препарата различались. В дозе 50,0 мг/кг креатинфосфат вводили одномоментно болюсно через 1 минуту после лигирования коронарной артерии. В дозе 100,0 мг/кг препарат вводили дробно в течение всего 1,5 часового периода наблюдения. При первом способе введения (50,0 мг/кг) Креатинфосфат не оказал статистически значимых эффектов на показатель сократимости миокарда левого желудочка кошек и величину артериального давления. При титровании большей дозы (100,0 мг/кг) креатинфосфат не менее эффективно, чем мексидол и димефосфон предупреждал негативное влияние острой коронароокклюзии на регистрируемые гемодинамические характеристики. Как свидетельствуют данные исследования препарат статистически достоверно уменьшал депрессию иногропной функции миокарда гто тесту dp/dt начиная с пятой минуты наблюдения. Статистически значимого действия на уровень среднего динамического давления данный препарат не оказал и в этом режиме введения.

3.5. Исследование некоторых механизмов кардиотропного действия мексидола, димефосфона и неотона

Результаты исследования содержания биогенных аминов в миокарде при длительном применении метаболических препаратов в условиях экспериментального хронического иммобилизациоиного стресса представлены на рис. 13.

Рис. 13. СОДЕРЖАНИЕ КА'ГЕХОЛАМИНОВ В МИОКАРДЕ ЖИВОТНЫХ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В УСЛОВИЯХ ИММОШЛЮАЦИИ Примечание: А - отличия от контроля достоверны при р-0.05; * - отличия от сгресс-контроля достоверны мри р<0,05

В ответ на длительное стрессорное воздействие у животных отмечается статистически достоверное повышение концентрации адреналина в миокарде (11,06±2,51нмоль/г) по сравнению с животными интактного контроля (4,97±0,62 нмоль/г).

При терапии мексидолом и неотоном у животных отмечается статистически достоверное снижение концентрации адреналина в миокарде до 4,02±0,39 нмоль/г и 5,51±0,72 нмоль/г, соответственно по сравнению с животными, подвергнутыми хронической иммобилизации без применения метаболических средств (1 1,06±2,51 нмоль/г). Димефосфон также проявлял выраженную тенденцию к снижению концентрации адреналина в миокарде (6,40±1,06 нмоль/г), однако она не носила статистически достоверного характера.

Результаты исследования концентрации медиатора симпатической нервной системы - норадреналина свидетельствуют (Рис 13.), что при длительном стрессориом воздействии в миокарде животных не отмечается статистически достоверного изменения концентрации норадреналина (9,4±2,07 нмоль/г) по сравнению с животными интактного контроля (7,06±1,60 нмоль/г). У животных при длительном иммобилизационном стрессе и применении мексидола, неотона и димефосфона не отмечается статистически достоверного изменения концентрации норадреналина в миокарде (8,14±1,69 нмоль/г), (12,28±2,53 нмоль/г) и (11,25±1,88 нмоль/г) соответственно по сравнению с животными группы стресс-контроля.

Таким образом, комплекс полученных данных позволяет с уверенность утверждать, что мексидол и неотон способны влиять на механизмы стрессор-ного повреждения миокарда на уровне симпатоадренаповой системы, тогда как димефосфон не оказывал подобного эффекта.

Результаты проведенных исследований содержания оксида азота, представленные на Рис.14, свидетельствует о заметном дисбалансе этого важного мессенеджера в условиях стрессорного повреждения. Препараты метаболического типа действия эффективно нормализуют количество N0 в ткани сердца подопытных животных.

35 -30 25

| 20 -

1 15 10 -

группы животных

Рис.14. ВЛИЯНИЕ СТРЕССА И ПРЕПАРАТОВ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО ТИПА НА СОДЕРЖАНИЕ ОКСИДА АЗОТА В МИОКАРДЕ МЫШЕЙ Примечание. А ■ огличия от контроля достоверны при р<0,05; * - отличия от стресс - контроля достоверны при р<0,05

3.6. Исследование экспрессии eNOS и ¡NOS в миокарде животных

У животных в ответ на длительное стрессорное воздействие выявляется значительная экспрессия индуцибельной изоформы в различных участках миокарда (Рис.15а). В больших концентрациях, образующихся, как правило, индуцибельной изоформой NO-синтазы, оксид азота может оказывать на клетки токсический эффект, связанный с образованием сильного окислителя, очень реакционного и токсичного свободнорадикального соединения перок-синитрита. Токсический эффект проявляется прежде всего в ингибировании митохондриапьных ферментов, что приводит к снижению выработки АТФ и ухудшению метаболических процессов в миокарде.

' " '.s*.-*-- ■ ■.'..К А

: ' ' ,

* l'-rp^J*- ' ~ 4 « . >с

■БШННННННВ

ШШМйёШШЖ

¡¡¡¡¡¡| .¿; * ■ ■ v ■ '

и <.....' .. :• '.:■?„.. 6 < ' ■ V ■ " ' Si ' ; :

Рис.15, а - Значительная экспрессия iNOS в эндотелии кровеносных сосудов миокарда мышей при хроническом стрессе х 380; б - Слабая экспрессия iNOS в миокарде мышей при хроническом стрессе и применении неотона х 260. Пероксидазный метод.

Выявление эндотелиальной изоформы в эндотелии кровеносных сосудов при хроническом стрессе по нашим данным, напротив понижается по сравнению с животными контрольной группы. Известно, что оксид азота является мощным сосудорасширяющий агентом. Расширение сосудов связано с диффузией NO из эндотелия к соседним гладкомышечным клеткам стенки сосуда, активацией в них гуанилатциклазы и образованием цГМФ.

У животных в условиях хронического иммобилизационного стресса и применения метаболических средств (неотона, димефосфона и мексидола) выявляется усиление экспрессии конститутивной эндотелиальной изоформы NO-синтазы в эндотелии кровеносных сосудов, по сравнению с животными, подвергнутыми иммобилизационному стрессу без применения данных препаратов.

Экспрессия индуцибельной изоформы в кардиомиоцитах при применении метаболических средств имеет тенденцию к снижению (Рис.156) но сравнению с животными, подвергнутыми хроническому иммобилизационному стрессу без применения препаратов метаболического типа действия. Это, очевидно, приводит к снижению токсического эффекта на клетки и проявляется повышением активности митохондриапьных ферментов, повышению выработки АТФ и улучшению метаболических процессов в миокарде.

Оценка интенсивности экспрессии изоформ МО-синтазы проводилась с помощью стандартной морфометрической сетки Автандилова и представлена в условных единицах от 0 до 3 баллов. Результаты исследования интенсивности экспрессии индуцибельной и эндотелиальной изофоры МО-синтазы представлены на Рис, 16. Можно отметить селективность влияния препаратов на ЫО-синтазную систему, так мексидол в равной степени проявил влияние как на индуцибельную (1,2^+0,13 у.е.), так и на эндотелиальную (1,6+0,16 у.е) изоформу фермента. Неотон проявил большее влияние на эндотелиальную изоформу фермента (1,7^0,21 у.е), тогда как отмечалось незначительное снижение экспрессии индуцибельной изобормы фермента (1,9+0,24 у.е.) по сравнению с животными стресс-контроля. Димефосфон же напротив вмешивался в механизмы экспрессии индуцибельной изоформы МО-синтазы, значительно снижая ее экспрессию (0,9+0,15 у.е.), по сравнению с животными стресс-контроля. Увеличение экспрессии эндотелиальной изоформы МО-синтазы при длительном применении димефосфона в условиях хронического иммобилизационного стресса было незначительным (0,9+0,17 у.е).

Рис.! 6. Иммуиогистохимическая реакция к еЫОБ и ¡ЫОЭ сиитазе в миокарде мышеи в условиях стресса и терапии метаболическими препаратами

Примечание: А - отличия от контроля достоверны при р<0,05; * - отличия от стресс- контроля достоверны при р<0,05

Результаты исследования показали, что мексидол, неотон, димефосфон способны коррегировать стрессорные повреждения миокарда на уровне МО-синтазой системы.

Таким образом, выполненные исследования свидетельствует о наличии у препаратов метаболического типа действия выраженных противоишемиче-ских и стресс протекторных свойств. Это подтверждается их универсальной способностью ограничивать размеры зоны некроза при экспериментальном инфаркте миокарда, снижать летальность при адреналиновой интоксикации подопытных животных и устранять ишемически опосредованные желудоч-

новые нарушения сердечного ритма Кроме того, исследованные препараты эффективно коррегируют обусловленное ишемией угнетение сократимости миокарда левого желудочка Результаты выполненных экспериментов показали, что важную роль приобретают стресспротекторные свойства указанных препаратов, которые проявляются в поддержании жизнеспособности животных и предупреждении формирования стресс опосредованной гипертрофии миокарда Длительное применение препаратов метаболического типа действия в условиях хронического стресса не сопровождается негативными изменениями на морфологические характеристики миокарда Установлено, что применение метаболических препаратов в условиях хронического стресса предупреждает стрессорные изменения ультраструктуры миокарда, уменьшая зоны пересокращения миофибрилл, их деструкцию, участки внутриклеточного и интерстициального отека и количество измененных митохондрий, спазмированных сосудов, что способствует эффективному восстановлению его морфофункционального состояния Благодаря выполненным экспериментам нам удалось расширить представления о механизмах фармакодина-мики указанных средств Исследуемые препараты эффективно устраняют ги-перадреналингистию, вызванную стрессом, что может иметь важное значение в механизме антиишемического действия препаратов Кроме того, мек-сидол, неотон, димефосфон способны коррегировать стрессорные морфологические изменения миокарда, влияя на экспрессию индуцибельной и эндо-телиальной изоформы ЫО-синтазы, содержание оксида азота, что приводит к компенсации эндотелиальной дисфункции и снижению токсического эффекта оксида азота в в миокарде Таким образом, выполненный комплекс исследований обосновывает использование препаратов метаболического типа действия в качестве кардиоцитопротекторных средств

ВЫВОДЫ

1 Экспериментальная патология способствует развитию структурных (I) и функциональных (И) нарушений миокарда

(I) При иммобилизационном стрессе наблюдаются ультраструктурные изменения кардиомиоциов левого желудочка сердца - нарушается ядерный аппарат кардиомиоцитов, наблюдаются контрактурные повреждения 1-Ш степени и разволокнение миофибрилл, повреждение митохондрий с конденсацией матрикса и деструктивными изменениями их мембран, дезорганизация вставочных дисков, экстра- и интрацеллюлярный отек Иммобилизационный стресс приводит к изменению ультраструктуры сосудов микроциркуляторно-го русла, проявляющемуся истончением эндотелиоцитов и снижением содержания в них пиноцитозных пузырьков, просветлением цитозольного матрикса Иммобилизационный стресс приводит к появлению большого количества спазмированных сосудов При иммобилизационном стрессе наблюдаются склероз интерстициальной ткани миокарда, сопровождающийся повыше-

нием содержания клеток и фибриллярных компонентов соединительной ткани миокарда

(II) Экспериментальная очаговая ишемия миокарда сопровождается угнетением сократительной функции миокарда левого желудочка, снижением уровня среднединамического артериального давления и развитием желудочковых аритмий

2 Длительное применение препаратов метаболического типа действия в условиях хронического стресса сопровождается уменьшением выраженности негативных морфологических изменений миокарда Мексидол, неотон, ди-мефосфон обладают стресспротекторной активностью, однако, данная активность препаратов неодинаково проявилась в отношении различных структур кардиомиоцитов и сосудов микроциркуляторного русла

I Неогон оказывает коррегирующее влияние на мембранные структуры клеток, уменьшая степень выраженности инвагинаций ядерных оболочек и количество измененных митохондрий в кардиомиоцитах Однако при применении препарата отмечается лишь незначительное положительное действие на сократительный аппарат кардиомиоцитов контрактурные повреждения миофибрилл сохраняются (пересокращения до II степени) Сосуды микроциркуляторного русла желудочкового миокарда характеризуются выраженным полнокровием

II Димефосфон предупреждает деструктивные изменения мембранных структур клеток, а также оказывает положительное влияние на сократительный аппарат кардиомиоцитов

III Мексидол оказывает умеренное протекторное действие в отношении сократительного аппарата кардиомиоцитов, однако препарат в меньшей степени, чем неотон и димефосфон предупреждает деструктивные изменения мембранных структур кардиомиоцитов

3 Длительная экспериментальная терапия препаратами метаболического типа действия в дозах составляющих 5% от LD50% не увеличивает летальность животных в условиях хронического стресса, что является свидетельством их безопасного применения

4 Мексидол, неотон, димефосфон в дозах составляющих 5% от LD50% проявляют противоишемическое действие, что проявляется способностью эффективно ограничивать альтеративные процессы в миокарде при моделировании экспериментального инфаркта, а также эффективно коррегируют коронаро-генные нарушения сердечного ритма, препятствуют ишемически опосредованной депрессии сократительной функции миокарда и эффективно поддерживают уровень среднего динамического артериального давления В рамках рассматриваемой модели катехоламиновой интоксикации среди исследуемых препаратов лишь мексидол проявляет притивоишемическое действие, снижая летальность животных

5 Длительное стрессорное воздействие приводит к уменьшению экспрессии эндотелиалыюй изоформы NO-синтазы и усилению экспрессии индуцибель-ной изоформы фермента Содержание оксида азота в миокарде мышей груп-

пы стресс-контроля снижается, что косвенно свидетельствует об интенсивном образовании токсических продуктов метаболизма N0

6 Мексидол, неотон и димефосфон, в изученных дозах, коррегируют стресс-опосредованные изменения экспрессии индуцибельной и эндотелиальной изоформ ЫО-синтазы, нормализуют содержание оксида азота в миокарде мышей, что отражает компенсацию эндотелиальной дисфункции и снижение токсического эффекта оксида азота в миокарде

7 Неотон и мексидол не влияя на уровень норадреналина, снижают стресс-опосредованное увеличение адреналина в миокарде подопытных животных Фармакодинамика димефосфона не опосредована его действием на активность симпатоадреналовой системы

8 В условиях эксперимента мексидол, неотон и димефосфон оказывают протекторное действие на конечные точки патогенетической цепи стрессорного повреждения миокарда - комплекс повреждений ультраструктур сократительных кардиомиоцитов, что обосновывает использование препаратов метаболического типа действия в качестве средств кардиоцитопротекции при заболеваниях сердца

Практические рекомендации

I. Полученные данные служат обоснованием использования препаратов метаболического типа действия в качестве средств эффективной и безопасной кардиоцитопротекции

2 В комплекс мероприятий по доклиническому изучению кардиотропных средств следует включать оценку влияния тестируемых препаратов на летальность животных, подвергаемых хроническому стрессу Интенсивность стрессорного воздействия рекомендуется подбирать таким образом, чтобы в контрольной серии летальность находилась в диапо-зоне 30 -35% Исследуемые соединения следует вводить животным ежедневно на протяжении 1 месяца

3 Результаты работы открывают дальнейшую перспективу для проведения научных исследований по изучению механизмов действия препаратов метаболического типа и ультраструктурных аспектов их фармакологических эффектов

4 Результаты исследования должны учитываться в учебном процессе кафедр цитологии, гистологии и эмбриологии, фармакологии, патологии и постдипломном образовании практических врачей

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Герасимова Н Г Исследование нервного аппарата сердца в пренатальном онтогенезе человека // Материалы Всероссийской научно-практической конференции "Экология, здоровье и природопользование" - Саратов, 2000 - С 61-62

2 Иванов Н М , Герасимова Н Г, Савина И В Развитие нервного аппарата сердца в пренатальном онтогенезе человека // Материалы научной конферен-

ции МГУ им Н П Огарева «Актуальные проблемы современного здравоохранения и медицины» - Саранск, 2001 -С 15-17

3. Герасимова Н.Г., Иванов IIIM Нервный аппарат сердца в пренаталь-ном онтогенезе человека и при некоторых врожденных пороках // «Морфологические ведомости». - Москва - Минск, 2002. - № 1-2. - С. 13-15.

4 Герасимова Н Г , Ледяйкина Л В , Кемаева Н Н Особенности иннервации сердца при врожденных пороках // Тезисы III международного конгресса молодых ученых «Науки о человеке» -Томск,2002 - С 54

5 Герасимова Н Г , Ледяйкина Л В , Верещагина В С , Ермолаева Т В Вегетативная иннервация сердца в пренатальном онтогенезе человека и при некоторых врожденных пороках // Межвузовский сборник научных трудов «Естественно-технические исследования теория, методы, практика» - Саранск, 2002 -С 142-145

6 Герасимова Н Г., Ледяйкина Л В Особенности вегетативной иннервации сердца при некоторых врожденных пороках у детей // Материалы I Всероссийского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» -Москва,2002 - С 94

7 Герасимова Н Г , Иванов Н М , Кругляков П П Характеристика нервного аппарата сердца в пренатальном онтогенезе человека и некоторых животных // Ученые записки Ульяновского государственного университета - Ульяновск, 2002. - Серия биологическая, выпуск 1 (6) - С 15-21

8 Герасимова Н Г Изменения вегетативной иннервации сердечнососудистой системы при врожденных пороках сердца // Материалы II Всероссийского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» -Москва,2003 -С 99-100

9. Герасимова Н.Г., Иванов Н.М. Вегетативная иннервация сердечнососудистой системы в пренатальном онтогенезе человека и ее морфо-функциональные изменения при врожденных пороках сердца // Морфологические ведомости. - Москва-Минск, 2003.-№ 3-4. - С. 7-10.

10 Герасимова Н Г , Ледяйкина Л В , Алексаткина Л В Функциональные изменения вегетативной иннервации сердечно-сосудистой системы при врожденных пороках сердца // Материалы научной конференции «XXXI Огаревские чтения» - Саранск, 2004 - Часть 2, «Естественные науки» - С 54-55

11 Герасимова Н Г Изменение вегетативной иннервации при врожденных пороках сердца ii Вестник аритмологии Материалы VI Международного славянского конгресса по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца - Санкт-Петербург, 2004 - №35, приложение А - С 180

12 Герасимова Н Г , Иванов Н М Морфофункционапьные изменения вегетативной иннервации сердечно-сосудистой системы при врожденных пороках сердца // Ученые записки Ульяновского государственного университета -Ульяновск, 2004 - Серия «Биология», выпуск 1 (8) - С 52-53

13 Герасимова Н Г Роль оксида азота в регуляции функций физиологических систем организма // Материалы научной конференции молодых ученых, аспиратов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета им Н П Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности ор-

ганизма в норме, патологии и эксперименте» - Саранск, 2005 - Выпуск 3, экспериментальная медицина - С 54

14 Герасимова Н.Г., Маркелова И А , Таланова Е В , Балашов В П , Кругляков П П , Ховряков А В Ферменты семейства NO-синтаз в миокарде мышей в условиях хронического стресса // Материалы 4-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» — Орел - 2005 - «Ретиноиды» — Альманах - Выпуск21 -С59-60

15. Герасимова Н.Г., Кругляков П.П., Балашов В.П., Маркелова И.А., Ховряков A.B. Влияние хронического стресса и мексидола на экспрессию изоформ NO-синтаз в миокарде мышей П Морфологические ведомости. - Москва-Берлин, 2005. -№ 1-2. - С. 8-10.

16. Герасимова Н.Г., Кругляков П.П., Балашов В.П., Маркелова И.А., Ховряков AB. Исследование NO -синтазы в миокарде мышей при хроническом стрессе на фоне применения препаратов метаболического типа действия // Морфологические ведомости. - Москва-Минск, 2005. - № 3-4. -С. 16-17.

17 Герасимова Н Г, Липатова Н А , Балашов В П , Кругляков П П Влияние стресса и метаболических средств на концентрацию катехоламинов в миокарде мышей // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти Я В Костина «Общество, здоровье, лекарство» -Саранск, 2005 - С 40-41

18 Герасимова Н.Г, Балашов В П , Кругляков П П , Балыкова Л А , Маркелова И А , Ховряков А В Влияние мексидола на экспрессию NO-синтаз в миокарде мышей при хроническом стрессе // Материалы IV национальной научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» - Смоленск, 2005 - С 132-33

19 Кругляков П П , Герасимова Н Г, Балашов В П Участие NO -синтазной системы в стрессорных повреждениях миокарда мышей // Материалы 2-ой Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» - Ульяновск, 2005 - С 55-56

20 Герасимова Н.Г. Иммуногистохимические и ультраструктурные аспекты стрессорного повреждения миокарда // Материалы 11 научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета им Н П Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» - Саранск, 2006 -Выпуск 4- С 8-9

21 Герасимова Н Г Влияние препаратов метаболического типа на концентрацию катехоламинов в миокарде при экспериментальном стрессе // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Неотложные состояния при сердечно-сосудистых заболеваниях» - Москва, 2006 - С 43

22 Ивянский С. А , Балыкова Л А , Балашов В П , Корнилова Т И , Герасимова Н Г , Горбунова И А Изучение эффективности препаратов метаболического типа действия в профилактике и лечении стрессорной кардиопатии у детей-спортсменов // Материалы V Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» - Москва, 2006 - С 147

23 Герасимова Н Г , Балашов В Г1 , Кругляков П П , Альмяшева М И Морфологическая характеристика изменений миокарда при стрессе // Материалы научно-практической международной конференции «Актуальные вопросы эволюционной, возрастной и экологической морфологии» - Белгород, 2006 -С 42

24. Герасимова Н.Г., Кругляков П.П., Альмяшева М.И., Балашов В.П., Ховряков A.B., Ивянский С.А. Исследование влияния хронического стресса и неотона на ультраструктуру миокарда мышей // Журнал Морфологические ведомости. - Москва, 2006 - № 1-2. - С. 8-10.

25. Герасимова Н Г., Балашов В.П., Ховряков A.B., Кругляков П.П., Медведев Д.И. Возможности фармакологической коррекции стрессор-ных повреждений миокарда (ультраструктурные аспекты) // Вестник РУДН. - Москва, 2006 - Серия «Медицина». - № 5. - С. 45-47.

26 Герасимова Н Г, Кругляков П П , Балашов В П , Ледяйкина J1 В Влияние метаболических средств на симпатоадреналовую систему в миокарде при стрессе // Материалы VI! международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» - Москва, 2006 - С 127

27 Герасимова Н Г, Кутляева Г X Влияние метаболических средств на содержание оксида азота в миокарде // Материалы XXXV научной конференции «Огаревские чтения» медицинского факультета Мордовского госуниверситета «медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте - Саранск, 2006 - Выпуск 5 - С 8

28. Герасимова Н.Г., Кругляков П П., Балашов В.П. Ультра структур а миокарда мышей в условиях хронического стресса и применения метаболических препаратов // Морфологические ведомости - Москва, 2006.-№ 3-4.-С.18-21.

29. Герасимова Н.Г., Кругляков П.П., Балашов В.П. Морфологические особенности стрессорного повреждения миокарда и их фармакологическая коррекция // Материалы конференции, посвященной 70-летию Тверской государственной медицинской академии к 100-летию со дня рождения основателя кафедры анатомии человека, профессора И.С. Кудрина. - Морфология. — Санкт-Петербург, 2006,- № 5. - С.36

30 Герасимова Н Г , Балашов В П , Кругляков П П Влияние стресса и метаболических средств на ультраструктуру миокарда мышей // Журнал Ученые записки Ульяновского государственного университета Ульяновск, 2006 -Серия «Биология» - Выпуск 1(10) - С 19-24

31 Герасимова Н Г , Кругляков П П , Балашов В П Влияние метаболических средств на NO-синтазную систему в миокарде // Материалы 6-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» - Орел, 2007 -«Ретиноиды» -Альманах - Выпуск 25 - С 14-15

32 Герасимова Н Г Морфологические аспекты кардиотропных эффектов препаратов метаболического типа действия И Герасимова Н Г , Балашов В П , Кругляков П П - Саранск, 2007 - Изд-во Мордов ун-та - 104 с

33 Герасимова Н Г, Кругляков П П , Балашов В П Ультраструктурные и иммуногистохимические аспекты кардиотропных эффектов препаратов ме-

таболического типа действия // Материалы XII международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации» - Москва, 2007 - С 101102

34 Балашов В П , Смирнов Л Д , Бапыкова Л А , Герасимова Н Г , Маркелова И А , Кругляков П П , Таланова Е В Исследование роли индуцибельной изо-формы ЫО-синтазы в стресспротекторной активности антиоксиданта этилме-тилгидроксипиридин сукцината // Российский кардиологический журнал, Москва, 2007. - №2 - С 95-97

35 Герасимова Н Г Оценка противоишемической активности метаболических средств // Материалы XII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им Н П Огарева - Саранск, 2007 - Часть 2 - Естественные и технические науки -С 3-4

36 Герасимова Н Г Роль ферментов МО-синтазы в стресспротекторной активности метаболических средств // Материалы 5-ой национальной научно-практической конференции с международным участием "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" - Смоленск, 2007 - С 65.

37. Герасимова Н.Г., Балашов В.П., Кругляков П.П. Исследование влияния стресса и метаболических средств на ультраструктуру миокарда мышей. // Морфологические ведомости. - Москва-Берлин, 2007,- № 1-2. -С.44-47.

38. Балашов В.П., Блинова Е.В., Блинов Д.С., Маркелова И.А., Кругляков П.П., Альмяшева М.И., Герасимова Н.Г., Абрамов В.Н., Моськин К.С.Сравиительная морфофункциональная характеристика миокарда мышей в условиях хронического стресса и терапии веществами с антиаритмической активностью. // Морфологические ведомости. - Москва-Берлин, 2007.- № 1-2. - С. 15-16.

39 Балашов В П , Герасимова Н Г , Маркелова И А , Альмяшева М И Способ оценки хронической токсичности потенциальных противоаритмических средств // Удостоверение на рационализаторское предложение, ГОУ ВПО «МГУ им Огарева» (№ 1050 от 26 06 07) - Саранск, 2007

Ьумша офсепия Форма! 60x84 1/16 I арнтура 1аймс Петь способом риюграфии Уел печ л 2,15 Уч - шл л 2 66 (ираж 1001К1 Закат № 15

Ошсчашни с ори! инала-максы ык<нчика в ООО «Рефери п» 430000,1 Саранск, нр Ленина, 21 ■ сл (8142) 48-25-31

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Герасимова, Наталья Геннадьевна

ВВЕДЕНИЕ---------------------------------------------—

ГЛАВА 1. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ СТРЕССОРНОГО И ИШЕМИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ МИОКАРДА И ПУТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ФАРМАКОКОРРЕКЦИИ (Обзор литературы)

1.1. Влияние стресса и ишемии на сердечно-сосудистую систему.

1.2. Ультраструктура миокарда в норме и патологии

1.2.1. Ультраструктура миокарда интактных животных

1.2.2. Морфология миокарда при патологических состояниях.

1.2.3. Ультраструктура миокарда при воздействии стресса

1.2.4. Влияние кардиотропных средств на ультраструктуру миокарда.

1.3. Оксид азота в сердце животных и человека

1.3.1. Общая характеристика нитрооксидсинтазы

1.3.2. Роль оксида азота в сердце животных и человека в норме и при патологических состояниях

1.4. Фармакологическая коррекция стрессорного повреждения миокарда—

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика подопытных животных

2.2. Метод моделирования хронического иммобилизационного стресса и изучения стресспротекторного действия

2.3. Характеристика лекарственных препаратов

2.4. Электронно-микроскопическое исследование миокарда—.

2.5. Иммуногистохимическое исследование экспрессии eNOS и iNOS в миокарде

2.6. Методы исследования кардиофармакологических свойств испытуемых препаратов.

2.7. Методы исследования механизмов кардиотропного действия испытуемых фармакологических препаратов

2.8. Статистическая обработка результатов, морфометрия.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Исследование острой токсичности испытуемых соединений

3.2. Исследование фармакотоксикологических свойств метаболических препаратов при длительном применении

3.3. Морфологические изменения миокарда белых мышей при длительном применении метаболических средств в условиях хронического стресса.

3.3.1. Исследование ультраструктуры миокарда в условиях хронического иммобилизационного стресса

3.3.2. Ультраструктура миокарда в условиях хронического иммобилизационного стресса и применения неотона

3.3.3. Ультраструктура миокарда в условиях хронического иммобилизационного стресса и применения димефосфона.

3.3.4. Ультраструктура миокарда в условиях хронического иммобилизационного стресса и применения мексидола.

3.4. Исследование антиишемических свойств исследуемых соединений—

3.5. Исследование некоторых механизмов кардиотропного действия мексидола, димефосфона и неотона

3.6. Исследование экспрессии eNOS и iNOS в миокарде.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональная характеристика миокарда при экспериментальной патологии и коррекции препаратами метаболического типа действия"

Актуальность проблемы. В последнее десятилетие в связи с сохранением высоких показателей заболеваемости ишемической болезнью сердца во всем мире поддерживается интерес к изучению патогенеза повреждения миокарда (Драпкина О. М. и др., 2000; Арзамасцев А.П. и др., 2003; Сапрунова В.Б., 2003; Голиков П.П., 2004; Марков Х.М., 2005; Мартынов А.И. и др., 2005; Благонравов М.Л., 2007; Barton С.Н., 2001; Barouch L.A.et al., 2002; Bian К., Murad F., 2003;). Учитывая, что последствия ишемии определяются не только гемодинамическими изменениями, но и тканевыми повреждениями, в современной клинической практике все большее значение придают миокардиальной цитопротекции (Голиков А.П., 2003; Лукьянова Л.Д , 2004; Смирнов Л.Д., 2005; Семенкова Г.Г., Кокорева Л.В., 2007).

Особое внимание в настоящее время уделяется изучению морфофункциональных изменений тканевых, клеточных и субклеточных компонентов миокарда, осуществляющих структурно-метаболические, адаптационные и регенераторные процессы в сердце, а также обеспечивающие эффективное функционирование сердечно-сосудистой системы (Евсевьева М.Е., 2000; Непомнящих Л.М., 2001; Павлович Е.Р., 2001; Тверская М.С. и др., 2004; Лушникова и др. 2005; Непомнящих Л.М., Розенберг В.Д., 2006;). Одним' из важных направлений исследования морфофункциональной организации сердца явилось открытие комплекса сигнальных молекул, обеспечивающих тригеррные функции органов и систем организма, одной из них является оксид азота (Охотин В.Е., Шуклин А.В., 2006; Bian К. et al., 2003; Godecke A., Schrader J., 2004). Эндогенный оксид азота проявляет свойства вазодилятатора (Ванин А.Ф., 1998; Champion H.C.et al., 2004;). Именно нарушение продукции эндотелиальными клетками оксида азота рассматривается как один из факторов в патогенезе ишемических и стрессорных повреждений миокарда, приводящих к дисфункции сосудистого эндотелия (Марков Х.М., 2005; Мартынов А.И. и др.,2005; Ребров А.П. и др., 2005; Бокерия Л.А. и др. 2006).

Большое значение при изучении морфофункциональных изменений сердечно-сосудистой системы и компенсаторных реакций в условиях патологии имеют исследования влияния целого ряда лекарственных средств на восстановление структурно-метаболических параметров и поддержание эффективной деятельности сердца (Северина И.С., 2002; Голиков П.П., 2004; Сернов JI.H и соавт., 2004; Гейченко В.П. др., 2005; Бульон В.В. и др., 2007; Ismailoglu U.B. et. al., 2001). В распоряжении клиницистов имеется большой арсенал лекарственных средств, позволяющий достаточно успешно бороться с последствиями стрессорного и ишемического повреждения миокарда. Однако механизм действия большинства препаратов основан на снижении потребности миокарда в кислороде, что, как правило, достигается угнетением его сократимости и может способствовать развитию сердечной недостаточности. Что касается современных стресспротекторов (седативные препараты, транквилизаторы, Р-адреноблокаторы и др.), то по своей природе они являются средствами дезадаптационной природы: снижают остроту восприятия ситуации, угнетают психо-моторные функции организма, уменьшают реактивность сердечно-сосудистой и других систем организма. В связи с этим большой интерес представляет появившаяся в последнее время группа лекарственных средств, получившая название «препараты метаболического типа действия». К ним относят такие средства как димефосфон, мексидол, креатинфосфат, кудесан и другие. Они обладают широким спектром биологической активности, в том числе проявляют кардиотропные свойства (Меерсон Ф.З. и др., 1989; Ончинников В.Д., 1989; Сернов Л.Н., Гацура В.В., 1989; Сернов Л.Н., Смирнов Л.Д., 1996; Рябинин В А. и др., 1996). Однако реализуются ли эти кардиотропные свойства на морфологическом уровне, а также имеются ли у них другие фармакодинамические аспекты на сегодняшний день остается достаточно серьезной неисследованной проблемой медицины. Учитывая актуальность проблемы и необходимость ее дальнейшего изучения, нами было предпринято данное исследование.

Задачи исследования.

1. Изучить изменения морфологии миокарда и нарушения функции левого желудочка мышей при различной экспериментальной патологии (стрессорном и ишемическом повреждении миокарда).

2. Исследовать особенности ультраструктурных изменений сердечной мышечной ткани и сосудов микроциркуляторного русла при экспериментальной терапии мексидолом, неотоном и димефосфоном в условиях хронического иммобилизационного стресса.

3. Изучить фармакотоксикологические свойства мексидола, неотона и димефосфона при длительном применении в условиях хронического стресса.

4. Изучить кардиопротекторное действие мексидола, неотона и димефосфона при экспериментальном ишемическом повреждении миокарда.

5. Оценить участие ферментов семейства NO-синтаз и их морфофункциональные проявления, а также медиаторов симпатоадреналовой системы в реализации стрессорного повреждения миокарда.

6. Оценить влияние препаратов метаболического типа действия на состояние NO-синтазной системы и на участие симпатоадреналовой системы в реализации их стресс-протекторного эффекта.

Научная новизна исследования.

В результате проведенных исследований впервые установлено, что при длительном применении препаратов метаболического типа действия в условиях хронического стресса наблюдаются компенсаторно-адаптационные изменения ультраструктуры кардиомиоцитов, ведущие к поддержанию эффективности морфофункционального состояния миокарда. Установлено, что применение неотона, мексидола, димефосфона в условиях хронического стресса, умеренно коррегирует стрессорные изменения ультраструктуры миокарда, уменьшая зоны пересокращения миофибрилл, их деструкцию, участки внутриклеточного и интерстициального отека и количество измененных митохондрий с конденсированным матриксом, спазмированных сосудов.

Изучено кардиопротекторное действие мексидола, неотона и димефосфона при экспериментальном ишемическом и стрессорном повреждении миокарда. Выявлено, что выраженность противоишемического эффекта всех изучаемых препаратов примерно равнозначна. Установлено, что изучаемые препараты не оказывают влияния на смертность подопытных животных в условиях хронического экспериментального стресса и являются безопасными при длительном применении.

Препараты неотон, мексидол, димефосфон способны коррегировать стрессорные повреждения миокарда, влияя на экспрессию конститутивной эндотелиальной изоформы NO-синтазы в эндотелии кровеносных сосудов, что компенсирует эндотелиальную дисфункцию в условиях хронического стресса, и индуцибельной изоформы в кардиомиоцитах что, приводит к снижению токсического эффекта оксида азота. Выявлено, что неотон, мексидол и димефосфон коррегируют содержание оксида азота в миокарде мышей в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Показано, что неотон, мексидол способны предотвращать стрессорные повреждения миокарда, влияя на концентрацию медиаторов симпатоадреналовой системы.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Полученные результаты подтверждают целесообразность использования данной модели стресса для изучения хронической токсичности кардиотропных средств при их доклинических испытаниях и изучения влияния препаратов метаболического типа на коррекцию стрессорных изменений в миокарде. Полученные данные о морфологических изменениях миокарда на фоне хронического иммобилизационного стресса и участии в этом процессе NO-синтазной системы должны учитываться в клинике ишемических и стрессорных поражений сердца, а также при изучении молекулярных основ компенсаторно-приспособительных процессов в эксперименте. Полученные результаты углубляют знания о механизмах кардиопротекторных эффектов препаратов метаболического типа действия (неотона, мексидола, димефосфона). По материалам диссертации получено удостоверение на рационализаторское предложение (2007г). Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедры цитологии, гистологии и эмбриологии с курсом медицинской биологии Мордовского государственного университета, кафедры фармакологии и служат обоснованием для продолжения исследования кардиотропных эффектов препаратов метаболического типа действия в условиях стресса.

Положения, выносимые на защиту

1. Длительное применение препаратов метаболического типа действия в условиях хронического стресса не сопровождается негативными изменениями морфофункционального состояния миокарда. Изменения микроскопических и субмикроскопических структур миокарда можно рассматривать как компенсаторно-адаптационные, ведущие к поддержанию эффективности морфофункционального состояния миокарда.

2. Неотон, димефосфон и мексидол способны эффективно ограничивать альтеративные процессы в миокарде при моделировании экспериментального инфаркта. Выраженность противоишемического эффекта всех препаратов примерно равнозначна и соответствует эффекту пропранолола.

3. Препараты метаболического типа действия способны коррегировать стрессорные повреждения миокарда на уровне NO-синтазной и симпатоадреналовой систем.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на IV научной конференции молодых ученых МГУ им. Н.П. Огарева (Саранск, 1999); научной конференции МГУ им. Н.П. Огарева «Клинико-экспериментальные аспекты современной медицины» (Саранск, 1999); межрегиональной научной конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Пенза, 2000); на Всероссийской научно-практической конференции "Экология, здоровье и природопользование" (Саратов, 2000); на III международном конгрессе молодых ученых «Науки о человеке» (Томск, 2002); на I Всероссийского конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2002); на научной конференции МГУ им. Н.П. Огарева «XXXI Огаревские чтения» (Саранск, 2003); на II Всероссийского конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2003); на VI Международном славянском конгрессе по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца (Санкт-Петербург, 2004); на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2005); 4-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Орел, 2005); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти Я.В.Костина «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005); IV национальной научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005); на 2-ой Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005); на 11 научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2006); на Всероссийской научно-практической конференции «Неотложные состояния при сердечно-сосудистых заболеваниях» (Москва, 2006); на V Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2006); на научно-практической международной конференции «Актуальные вопросы эволюционной, возрастной и экологической морфологии» (Белгород, 2006); на VII международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006); на XXXV научной конференции «Огаревские чтения» медицинского факультета Мордовского госуниверситета «медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2006); на 6-й Всероссийской научной конференции, «Ретиноиды (Орел, 2007); на конференции, посвященной 70-летию Тверской государственной медицинской академии к 100-летию со дня рождения основателя кафедры анатомии человека, профессора И.С. Кудрина (Санкт-Петербург, 2006); на XII международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2007); 5-ой национальной научно-практической конференции с международным участием "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека" (Смоленск, 2007); XII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им Н.П. Огарева (Саранск, 2007). Публикации

Диссертация изложена на 219 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, включающего 332 источника (184 отечественных авторов; 148 - зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 74 рисунками, из них 49 микрофотографий и 14 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Герасимова, Наталья Геннадьевна

4. Результаты исследования должны учитываться в учебном процессе кафедр цитологии, гистологии и эмбриологии, фармакологии, патологии и постдипломном образовании практических врачей.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АКФ - активные формы кислорода

СОД - супероксиддизмутаза цГМФ - циклический гуанозинмонофосфат

ЭФР - эндотелиальный фактор релаксации сосудов eNOS - эндотелиальная синтаза оксида азота iNOS - индуцибельная синтаза оксида азота

NOS - оксид азота

ONOO" - пероксинитрит

КС - кровеносный сосуд

ИО - интерстициальный отек

Мф - миофобриллы

Мх- митохондрии

Я - ядро

Фц- фиброцит

Фб - фибробласт

ИО - интерстициальный отек

КГ - комплекс Гольджи

ВД - вставочный диск

Jin - липиды

СПР - саркоплазматический ретикулум К - кардиомиоцит Сл — сарколемма

ПОЛ - перекисное окисление липидов ПО — периваскулярный отек 1111 — пиноцитозные пузырьки АОС - антиоксидантная система КФ — креатинфосфат АТФ - аденозинтрифосфат

ЛЖ - левый желудочек nNOS — нейрональная синтаза оксида азота

НАДФН - восстановленный никотинамидадениндинуклеотидфосфат

ДНКЖ - динитрозильные комплексы железа

CoQ - коэнзим Q

Фкр - фосфокреатин

ЭКГ - электрокардиография

АД - артериальное давление

LD50 - доза, вызывающая летальный исход в 50% случаев dP/dtmaX - максимальная скорость нарастания давления

PBS - фосфатный буфер

DAB - диаминобензидин

ЖЭ - желудочковые экстрасистолы

ЖТ - желудочковая тахикардия

ФЖ - фибрилляция желудочков

ОКА — окклюзия коронарной артерии

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные служат обоснованием использования препаратов метаболического типа действия в качестве средств эффективной и безопасной кардиоцитопротекции.

2. В комплекс мероприятий по доклиническому изучению кардиотропных средств следует включать оценку влияния тестируемых препаратов на смертность животных, подвергаемых хроническому стрессу. Интенсивность стрессорного воздействия рекомендуется подбирать таким образом, чтобы в контрольной серии летальность находилась в диапозоне 30 -35%. Исследуемые соединения следует вводить животным ежедневно на протяжении 1 месяца. ч

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Герасимова, Наталья Геннадьевна, Саранск

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия/ Г.Г.Автандилов // Рук-во.- М.: Медицина, 1990.-384 с.

2. Агеносова О.Г. Исследование механизмов противоаритмического действия кватернидина./ О.Г. Агеносова // Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Купавна, 2005. - 15с.

3. Аракелов Г.Г. Стресс и его механизмы / Г.Г. Аракелов // Вестник МГУ.- Сер. 14 (Психология). -1995. -№ 4. -С. 45 54.

4. Арбузов Б.А. Синтез и новые биологические эффекты фосфорорганических соединений с низкой токсичностью / Б.А Арбузов, А.О Визель, К.М. Ивановская // Доклады А.Н. СССР. 1968.- Т.182, №1. С.101-104.

5. Арзамасцев А.П. Экзогенные доноры оксида азота и ингибиторы NO-синтаз (химический аспект)/ А.П. Арзамасцев, И.С. Северина, Н.Б. Григорьев, Граник В.Г. // Вест. РАМН. 2003. - № 12. - С. 88-95.

6. Арзамасцев Е.В. В кн. «Федеральное руководство по экспериментальному (доклиническому) исследованию фармакологических веществ» / Под ред. В.П. Фесенко, Е.В. Арзамасцев М., 2000. - 398с.

7. Аряев В.Л. Особенности дифференцированного подхода к терапии стресс-синдрома с учетом стадийности процесса / В.Л. Аряев, В.И. Кресюн // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1990. -Т. 110. - № 11. -С. 499501.

8. Афанасьев Ю.И. Современные представления об ультраструктуре кардиомиоцитов млекопитающих / Ю.И. Афанасьев, В.Л. Горячкина // Архив анатомии. 1977. - №10. - С. 88-94.

9. Ахмедов Д.Р. Клинико-патогенетическое значение антиоксидантной системы при инфекционных заболеваниях / Д.Р. Ахмедов // Клин мед. -1994;-№ 1(72).- С. 24-26.

10. Балашов В.П. Новый метод оценки безопасности потенциальных противоаритмических средств/ В.П. Балашов и соавт.// Бюллетеньэспериментальной биологии и медицины.-2002. Т. 133.-№5.-с. 598600.

11. Балыкова JI.A. Экспериментально-клиническое исследование эффективности метаболической терапии нарушений ритма сердца. / JI.A. Балыкова// Автореф. дисс. .докт. мед. наук. Казань, 1999. - 15с.

12. Биленко И.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов / И.В. Биленко М. - 1989. - С. 123-130.

13. Бирлюкова Д.В. Морфологические изменения миокарда белых мышей на фоне введения веропамила и эмоксипина при иммобилизационном стрессе./ Д.В. Бирлюкова // Дисс.к.м.н. Саранск, 2002, - 97.

14. Бор В.А. Влияние экспериментальной гипокинезии на адренореак-тивность сердечно-сосудистой системы у кроликов / В.А. Бор // Физиология животных. -1993. Т. 39. -№ 4. - С. 88-91.

15. Брюне Б. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути / Б. Брюне, К.Сандау, А. фон Кнетен // Биохимия. 1998. - Т. 63. - № 7. - С. 966-975.

16. Быков В.JI. Цитология и общая гистология / В.Л. Быков С-Пб.: Сотис.-1999.-520 с.

17. Ванин А. Ф. Оксид азота в биологии: история, сосгояние и перспективы исследований / А. Ф. Ванин // Биохимия. 1998. - Вып.7.-С.867-869.

18. Ванин А.Ф. Динитрозильные комплексы железа и s-нитрозотиолы -две возможные формы стабилизации и транспорта оксида азота в биосистемах / А.Ф. Ванин // Биохимия. 1998. - Т. 63. - № 7. - С. 924938.

19. Верещагина B.C. Исследование некоторых аспектов механизма противоаритмического действия димефосфона и мексидола./ B.C. Верещагина // Автореф. дисс. .канд. мед. наук. Купавна, 2002. - 15с.

20. Визир А.Д. Состояние свободнорадикального окисления у больных гипертонической болезнью II стадии / А.Д. Визир, Н.Ф. Башкин., И.Ф. Беленичев, Д.А. Тараненко // Тер арх. 1995. - №12. -С. 18 - 19.

21. Винк Д.А. Значение химических свойств оксида азота для лечения онкологических заболеваний / Д.А.Винк, Й. Водовоз, Д.А. Кук // Биохимия. 1998. - Вып.7. - С. 948-957.

22. Волин М.С. Механизмы передачи сигнала оксидант-оксид азота в сосудистой ткани / М.С. Волин, К.А. Дэвидсон, П.М. Камински, Р.П.Фэйнгерш, X. Мохаззаб // Биохимия. 1998. - Т. 63. - № 7. - С. 958965.

23. Гацура В.В. Противоишемический кардиопротекторный эффект мексидола / В.В. Гацура, В.В. Пичугин, Л.Н. Сернов, А.Д. Смирнов // Кардиология. 1996. № - 11. С. 59 -61.

24. Гацура В.В. Кардиопротекторные свойства некоторых синтетических антиоксидантов / В.В. Гацура, А.Д. Смирнов // Хим. фарм. 1992. - № 1-С. 10-15.

25. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ишемизированного миокарда /В.В. Гацура. М.: Антекс. - 1993.- 254 с.

26. Гацура В.В. Коронарогенный метаболический ацидоз и проблема его фармакологической коррекции / В.В. Гацура, А.Ф. Сидоренко //Успехи физиол. наук.-1986.- Т.17, № 4.- С.38-56.

27. Генденштейн Э.И. Противоаритмическое действие комбинации N-пропилаймалинбромида с противоаритмическими препаратами разных классов / Э.И. Генденштейн, Я.В. Костин, В.П. Балашов //Фармакол. и токсикол. -1990.- № 4. С. 28-30.

28. Генденштейн Э.И. Сочетанное комбинированное действие антиаритмических средств / Э.И. Генденштейн, Я.В. Костин, В.П. Балашов, В.Э.Олейников // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -1991.- № 6,-С. 623-625.

29. Гервазиев Ю.В. Механизмы регуляции кальмодулином активности синтазы окиси азота / Ю.В. Гервазиев, Н.Н. Соколов.// Вопросы медицинской химии- 1999. № 3. -С. 1-15

30. Голиков А.П. Свободнорадикальное окисление и сердечно-сосудистая система. Коррекция антиоксидантами / А.П. Голиков, С.А. Бойцов, В.Ю. Полумисков // Лечащий врач. 2003 -№ 4. С. 70-74.

31. Голиков А.П. Антиоксидант эмоксипин: влияние на формирование очага некроза и репаративные процессы при инфаркте миокарда / А.П. Голиков, В.Л. Овчинников, В.Ю. Полумисков //Кардиология. 1990. -№ 7. - С. 50 - 53.

32. Голиков П.П. Оксид азота в клинике неотложных заболеваний. / П.П. Голиков. -М: Медпрактика-М, 2004. С. 1598-162.

33. Горрен А. К. Универсальная комплексная энзимология синтазы оксида азота / А. К. Горрен, Б.Майер // Биохимия. 1998. - Вып. 7. - С. 870-880.

34. Гуськова Т.А. Медико-биологические аспекты применения антиоксидантов эмоксипина и мексидола: эксперименты и клиническое изучение. М. 1992. - С. 44-45.

35. Данилов В.И. Димефосфон корректор регуляторных механизмов мозгового кровообращения / В.И. Данилов, Х.М. Шульман, Ю.Е. Москаленко // "Человек и лекарство" Росс. науч. конгр. - Тезисы. - М. - 1992.- С. 131.

36. Драпкина О. М. Особенности синтеза оксида азота у больных инфарктом миокарда / О. М. Драпкина, О. О Задорожная, В. Т. Ивашкин // Клин. мед. 2000. - № 3. - С. 19-23.

37. Дюмаев К.М. Антиоксиданты в профилактике и терапии патологии ЦНС / К.М. Дюмаев, Т.А.Воронина, Л.Д. Смирнов М.- Издательство института биомедицинской химии ГАМН. - 1995. - 27 с.

38. Евсевьева М.Е. Стрессорная перестройка миокарда: динамика структурных изменений при различных видах стресса / М.Е. Евсевьева //Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000.- Т. 130.- № 10,- С. 378-381.

39. Елисеев О.М. Триметазидин (предуктал). Новый подход в борьбе с ишемией миокарда / О.М. Елисеев // Тер арх. 1995.- № 8.- С. 57- 63.

40. Завалишин И.А. Оксидантный стресс общий механизм повреждения при заболеваниях нервной системы / И.А.Завалишин, М.Н. Захарова // Журн. неврологии и психиатрии 1996. - № 2.- С. 111-114.

41. Задиоченко B.C. Состояние эндотелия и оксид азота при сердечной недостаточности / В.С.Задиоченко, И.В. Погонченкова, Нестеренко О.И., Холодкова Н.Б., Богатырева К.М. // Российский кардиологический журнал. -2005.- № 1,- С. 80-87.

42. Закирова А.Н. Корреляционные сдвиги перекисного окисления липидов, антиоксидантной защиты и микрореологических нарушений в развитии ИБС / А.Н. Закирова // Тер. арх. 1996. № 9 (68). - С. 37 - 40.

43. Закс JI. Статистическое оценивание/ JI. Закс.// Статистика, М -1976. -С. 598.

44. Зенков Н. К. Окислительный стресс / Н. К. Зенков, В. 3. Панкин, Е. Б. Меньшикова // Интерпериодика. - Минск: Наука 2001. - 344 с.

45. Зиганшина JI.E. Участие димефосфона в регуляции активности перекисного окисления липидов и превращений глутатиона./ JI.E. Зиганшина, А.У. Зиганшин, И.А. Студенцова, Н.Н. Демакова // Российская научная конференция. Тезисы. - М. - 1992. - С. 88 -89.

46. Зиганшина JI.E. Влияние димефосфона на процессы экссудации и пролиферации./ JI.E. Зиганшина, И.А.Студенцова, И.В. Заиконникова // Фарм. и токсикология. 1990.- № 1. - 57-59.

47. Зиганшина JI.E. К Механизму адаптогенного действия димефосфона./ JI.E. Зиганшина, И.А. Студенцова, А.У. Зиганшин // Эколог, проблемы фарм. и токсикол.- Тезисы. Казань. - 1990.- С. 38.

48. Зорькина А.В. Влияние гиподинамии на развитие патологических изменений в легких в эксперименте, их профилактика и коррекция./ А.В. Зорькина// Дисс.канд. мед. наук-Казань, 1994.-17с.

49. Зорькина А.В. Фармакологическая коррекция пролонгированного иммобилизационного стресс-синдрома./ А.В. Зорькина// Автореф. дисс.докт. мед. наук Старая Купавна, 1997.- 34с.

50. Ивашкин В. Т. Особенности синтеза оксида азота у больных с хронической сердечной недостаточностью / В. Т. Ивашкин, С.В. Горбатенова, О.М. Драпкина / Клин. мед. 2004. - № 2. - С. 20-23.

51. Ивашкин В.Т. Клиническое значение оксида азота и белков теплового шока / В.Т. Ивашкин, О.М. Драпкина-М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. С.14-18.

52. Инчина В.И. Влияние гиподинамии и различных режимов адаптации на развитие патологических изменений в печени, миокарде и аорте, их профилактика и коррекция./ В.И. Инчина// Автореф. дисс. .докт. мед. наук. Казань, 1994.

53. Камбург Р.А. Сравнительная характеристика антиатеросклеротических эффектов ксимедона и пармидина / Р.А. Камбург, О.Б. Ибрагимов, М.Б. Кондратьев// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - № 8. - С. 205-208.

54. Карпищенко А.И. Справочник Медицинские лабораторные технологии/ А.И. Карпищенко.- Санкт-Петербург: «Интермедика», 2002.- 2 том.- С. 40-52.

55. Кахновский И.М. Опыт применения эмоксипина у больных с нестабильной стенокардией./ И.М. Кахновский, В.И. Калмыкова, В.А. Пырников //Бюлл. ВНЦ БАВ.- М.- 1992. С. 34-37.

56. Коган А.Х. Антиоксидантная терапия селенитом натрия и а-токоферолом инфаркта миокарда / А.Х. Коган, А.Н. Кудрин, С.М. Николаев // Доклады МОИП. Общая биология.- 1978.- С. 68-76.

57. Коган А.Х. СПОЛ и патогенез коронаро-оклюзионного инфаркта миокарда. Свободнорадикальное окисление в норме и патологии / А.Х. Коган, А.Н. Кудрин, С.М. Николаев М.- 1976. - С. 68 - 76.

58. Коган А.Х. Об образовании краевой и прооксидантной зоны и её роли в усилении ПОЛ в области ишемизированного миокарда. / А.Х. Коган, Н.И. Лосев, А.Н. Кудрин // Бюлл. экспер.биол. и мед.- 1986.- № 5. С. 538 -539.

59. Коган А.Х. Кислородные свободнорадикальные процессы в патогенезе ишемической болезни сердца и перспективы применения антиоксиданта коэнзима Q 10 (убихинона) для их коррекции. / А.Х. Коган, А.Л. Сыркин // Кардиология. 1997. - №12.- С.- 67-71.

60. Коломейцева И.А. Изменение структуры сна при разных сроках стрессирования / И.А. Коломейцева // Экспериментальные неврозы их фармакологическая терапия. М.:Наука, 1988. - С. 53-60.

61. Костин Я.В. Противоаритмическое действие четвертичных производных тримекаина и аймалина / Я.В. Костин //Автореф. дисс. докт. мед. наук .-Казань, 1989.- 32 с

62. Котляров А.А. Фармакологическая коррекция кардиальных побочных эффектов противоаритмических средств / А.А. Котляров // Автореф. дисс. док. мед. наук. Купавна, 2004. - 50 с.

63. Красных И.Г. Рентгенологические и патоморфологические изменения в сердце собак при шестимесячной гипокинезии / И.Г. Красных, Н.А. Гайдамакин, В.Г. Петрухин // Космич. биол. и авиакосмич. мед.- 1985. Т. 10.- №5. - С. 41-46.

64. Кричковская JI.B. Применение биологически активных веществ при адаптации к стрессовым воздействиям / JI.B. Кричковская, Н.В. Гуляева // Физиол. актив. Речовини. 2000. - № 2. - С. 72-74.

65. Кругляков П.П. Ультраструктура миокарда мышей в условиях хронической гиподинамии и терапии димефосфоном./ П.П. Кругляков, В.П. Балашов, Е.Н. Шувалова // Морфологические ведомости. 2004 -№ 5. - С. 60-62.

66. Крыжановский С.А. Особенности антиаритмической активности фосфокреатина в острой стадии экспериментального инфаркта миокарда / С.А.Крыжановский, М.Б. Витинова, Н.В. Каверина // Кардиол.-1988.-Т.28,№ 11.-С. 100-102.

67. Крыжановский С.А. Электрофизиологическое исследование механизмов аритмического действия фосфокреатина при острой ишемии и реперфузии миокарда / С.А.Крыжановский, В.Г. Качарова, Р. Марко //Кардиол. -1991. № 11.- С. 66-70.

68. Кузнецова Л.С. Влияние дибунола на работоспособность функции надпочечников и показатели ПОЛ у тренированных и нетренированных крыс /Л.С. Кузнецова, Г.С. Тнимова, А.П. Семавин // 4-ая конф. Биоантиоксидант. Москва. -1993. - С.102-103.

69. Кузнецов В.И. Адаптационные возможности гипокинетического сердца крыс к нагрузке сопротивлением и роль нервной регуляции / В.И. Кузнецов, Г.М. Пруссе // Косм. биол. 1987. № 2. С. 55-58.

70. Кузьмин В.И. Синтез и биологическая активность 2-фенил-З-оксипиридинов / В.И. Кузьмин, А.С. Лосев, И.С. Морозов, И.П. Павлова // Хим. фарм. журн. 1993.- № 8.- С. 19-24.

71. Кушаковский М.С. Гипертоническая болезнь / Кушаковский М.С. СП.: Сотис. - 1995.-311 с.

72. Лазебник Л.Б. Место антиоксиданта эмоксипина в комплексной терапии острого осложненного инфаркта миокарда / Л.Б.Лазебник, А.И. Фришберг, В.Н. Дроздов // Кардиология. 1994 - № 2. С. 122 - 126.

73. Ланкин В.З. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы / В.З. Ланкин, А.К. Тихадзе, Ю.Н. Биленков //Кардиология. 2000.-№7.-С. 49-61.

74. Лапша В.И. Структурно-функциональные изменения в правом предсердии у крыс при кратковременном и длительном тепловом стрессе / В.И. Лапша, В.И. Богарова, В.Н. Турин// Морфология. № 5. -2005. - С. 48-52.

75. Лукьянова Л.Д. Особенности антигипоксического действия мексидола, связанные с его специфическим влиянием на энергетический обмен / Л.Д. Лукьянова, В.Б. Романова // Хим. фарм. Журнал. 1990. - № 8. -С. 9-11.

76. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции / Л.Д. Лукьянова // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -1997. -Т. 124, №9. -С. 244-253.

77. Лукьянова Л.Д. Роль биоэнергетических нарушений в патогенезе гипоксии / Л.Д. Лукьянова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2004 - №2.- С.2-11.

78. Люсов В.А. Инфаркт миокарда / В.А. Люсов.// Кардиология. 1999. № 9. С. 8 - 12.

79. Мазур Н. А. Дисфункция эндотелия, монооксид азота и ишемическая болезнь сердца / Н. А. Мазур // Тер. архив. 2003. - № 4. - С. 84-86.

80. Малышев И.Ю. Введение в биохимию оксида азота: Роль оксида азота в регуляции основных систем организма / И.Ю. Малышев // Рос. жур. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. - № 1. - С. 49-55.

81. Малышев И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.Б. Манукина // Биохимия.-1998. Т. 63, вып 7. - С.992-1006.

82. Маргулис Б.А. Белки стресса в эукариотической клетке / Б.А. Маргулис, И.В. Гужова // Цитология. 2000. - Т. 42. - № 4. - С. 323-339.

83. Маркова Е.А. Изменение активности перекисных липидов в миокарде взрослых и старых крыс при стрессе / Е.А. Маркова, И.Р. Мисула // Патолог, физиол. и эксперим. терапия. 1994.- № 3. - С. 37-38

84. Марков Х.М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия / Х.М. Марков // Пат. физиология и экспериментальная терапия. 2005. -№ 4. - С. 5-9.

85. Мартынов А.И. Эндотелиальная дисфункция и методы ее определения / А.И. Мартынов, Н.Г. Аветяк, Е.В. Акатова, Н.Г.

86. Гороховская, Г.А. Романовская // Российский кардиологический журнал. 2005. - №4(54). - С. 94-98.

87. Матлина Э.Ш. Клиническая биохимия катехоламинов / Э.Ш. Матлина, В.В. Меньшиков. М.:Медицина, 1967. - 304с.

88. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца / Ф.З. Меерсон. М.: Медицина, 1984.-272 с.

89. Меерсон Ф.З. Применение антиоксидантов для предупреждения экспериментального инфаркта миокарда и реоксигенационных нарушений функций сердца / Ф.З. Меерсон, JI.M. Белкина, А.А. Уголев //Кардиология. 1989. - № 10.- С. 81-86:

90. Меерсон Ф.З. Роль клеточных онкогенов в развитии адаптации сердца к повышенной нагрузке и ишемии /Ф.З. Меерсон, В.В.Диденко // Кардиология. 1992. № 2. - С. 82-90.

91. Меерсон Ф.З. Феномен адаптационной стабилизации структур и-: защита сердца / Ф.З. Меерсон, И.Ю. Малышев. М.: Наука, 1993. - 158 с.

92. Мотавкин П. А. Клиническая и экспериментальная патофизиология легких / П.А. Мотавкин, Б.И. Гельцер. М.: Наука, 1998.-366 с.

93. Меерсон Ф.З. Первичное стрессорное повреждение миокарда и аритмическая болезнь сердца//Кардиол.- 1993.- № 4.- С. 50-59.

94. Меерсон Ф.З. Первичное стрессорное повреждение миокарда и аритмическая болезнь сердца / Ф.З. Меерсон // Кардиол.- 1993.- № 5.-С. 58-64.

95. Недоспасов А.А. Биогенный оксид азота: десять лет второго пришествия. Предыстория открытия аргининзависимого биосинтеза NO / А.А. Недоспасов // Биоорганическая химия 1999. - Т. 25. - № 6. -С. 403-411.

96. Недошивин А.О. Применение неотона (эндогенного фосфокреатина) в комплексной терапии хронической сердечной недостаточности / А.О. Недошивин, Н.Б. Перепеч // Клиническая медицина 1996. - № 9. - С. 45-48.

97. Непомнящих JI.M. Альтернативная недостаточность мышечных клеток сердца при метаболических и ишемических повреждениях / Л.М. Непомнящих М.: Изд-во БЭБИМ РАМН, 1998.- 111 с.

98. Непомнящих Л.М. Морфогенез важнейших общепатологических процессов в сердце / Л.М. Непомнящих. Сибирь: Наука, 1991. - 352 с.

99. Непомнящих Л.М. Патологическая анатомия и ультраструктура сердца / Л.М. Непомнящих. Новосибирск: Наука, 1991. - 352 с.

100. Непомнящих Л.М. Фотохимическое флюорохромирование в выявлении преднекротических изменений миофибрилл кардиомиоцитов / Л.М. Непомнящих, В.Г. Циммерман // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1999. Т. 128. № 9. С. 356-360.

101. Непомнящих Л.М. Морфология атрофии сердца. Трехмерная тканевая и ультраструктурная организация / Л.М. Непомнящих, Л.В. Колесникова, Г.И. Непомнящих. Новосибирск: Наука - 1989.- 306 с.

102. Непомнящих Л.М. Морфогенез и варианты ремоделирования атеросклеротического сердца / Л.М. Непомнящих, В.Д. Розенберг // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. - № 6.-С.692-698.

103. Никитин Н.П. Влияние длительной терапии эналаприлом на клиническое состояние, ремоделирование и функцию левого желудочка у больных с дилатационной кардиомиопатией / Н.П. Никитин, А.Л. Аляви, В.Ю. Голоскокова // Кардиология 1999. -№ 6.-С. 45—48.

104. Нифонтова JI.А. Изучение свободнорадикального гемостаза при хронической гипертонической энцефалопатии / Л.А.Нифонтова, М.П. Шерстнев, Н.В. Владимиров // Всероссийский съезд неврологов: 7-й. Тезисы докладов. Нижний Новгород. - 1995. С. 279.

105. Ольбинская Л.Н. Коронарная и миокардиальная недостаточность / Л.Н. Ольбинская, П.Ф. Литвицкий. М: Медицина, 1986.-272 с.

106. Овчинников В. Д. Влияние антиоксиданта эмоксипина на сократительную и пропульсивную функцию сердца у больных с острым инфарктом миокарда / В.Д. Овчинников // Республ. сборник научных трудов. Лечение инфаркта миокарда. М. - 1989; С. 10-14.

107. Охотин В.Е. Значение нейрональной, эндотелиальной и индуцибельной изоформ NO-синтаз в гистофизиологии сердечной мышцы / В.Е. Охотин, А.В. Шуклин // Морфология. 2006. -№ 1. - С. 7-17.

108. Павлович Е.Р. Ультраструктура миокарда сердца кролика в поздние сроки иммобилизационного стресса / Е.Р. Павлович // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2001. - Т.132, №7.- С. 99-101.

109. Полумисков В. Ю. Антиоксидант эмоксипин в патогенетической терапии инфаркта миокарда / В. Ю. Полумисков// Бюлл. ВНЦ БАВ. -М.-1992.-С. 108.

110. Пшенникова М.Г. Феномен стресса, эмоциональный стресс и его роль в патологии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия / М.Г. Пшенникова. 2000. - № 2. - С. 2431.

111. Ребров А.П. Эндотелиальная дисфункция и особенности изменения уровня цитокинов и С-реактивного белка у больных с хронической сердечной недостаточностью / А.П. Ребров Е.Ю. Сажина, М.И. Тома // Российский кардиологический журнал. 2005. - № 2.- С.24-28.

112. Репин А.Н. Опыт клинического использования эмоксипина в тромболитической терапии острого инфаркта миокарда./ А.Н.Репин, И.В. Максимов, Г.А. Буймов. // Бюлл. ВНЦ БАВ. М. - 1992. - С. 93 -95.

113. Реутов В. П. Проблема оксида азота в биологии и медицине и принцип цикличности / В. П. Реутов, Е. Г. Сорокина, Н. С. Косицын, В. Е. Охотин. М.: Наука, 2003. - 96 с.

114. Реутов В.П. NO-синтазная и нитритредуктазная компоненты цикла оксида азота / В. П. Реутов, Е. Г. Сорокина // Биохимия. 1998. -Т. 63.-№7.-С. 1029-1040.

115. Реутов В.П. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих / В. П. Реутов, Е. Г. Сорокина, Н. С. Косицын, В. Е. Охотин. М.: Наука, 1997. -159с.

116. Розенштраух JI.B. О механизмах антиаритмического действия фосфокреатина при ишемии миокарда / JI.B. Розенштраух, В.А.Сакс, Е.П. Анюховский // Кардиол. -1985. № 4. - С. 80-85.

117. Розенштраух JI.B. Электрофизиология аспекты действия креатинфосфата на клеточную активность миокарда в нормальныхусловиях и при ишемии / JI.B. Розенштраух, Р. Витт, Г. Розанский //Кардиол.-1990.- № 2.- С. 97-102.

118. Рябинин В. А. Клиническая эффективность антиоксиданта эмоксипина при нестабильной стенокардии / В.А.Рябинин, А.П. Голиков, В. Ю. Полумисков // "Человек и лекарство". Рос с. науч. конгр.: 3-й. Тезисы. Москва. - 1996. - С. 95.

119. Сапрунова В.Б. Ультраструктура митохондриального аппарата кардиомиоцитов крыс при апоптозе, индуцированная длительным действием аноксии / В.Б. Сапрунова, JI.E. Бакееева, JI.C. Ягужинский // Цитология. 2003. -Т. 45.- №11.- С. 1074-1082.

120. Саркисов Д.С. Обновление структур организма / Под ред. Саркисова Д.С.// Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. М.: Медицина, 1987. - С.20 - 36.

121. Светликова И.В. Противоишемическая активность некоторых производных 3-оксипиридина и оксиникотиновой кислоты / И.В. Светликова //Автореф. дисс. канд. мед. наук. Купавна, 1994.-16 с.

122. Северина И. С. Оксид азота. Роль растворимой гуанилатциклазы в механизмах его физиологических эффектов / И. С. Северина // Вопр. мед. химии. 2002. - Вып. 1. - С. 4-30.

123. Северина И.С. Растворимая форма гуанилатциклазы в молекулярном механизме физиологических эффектов окиси азота и в регуляции процесса агрегации тромбоцитов / Северина И. С. // Биохимия. 1998. - Т. 63. - № 7. - С. 939-947.

124. Седова Д.Г. Исследование противоаритмической активности некоторых комбинаций антиаритмиков и интермедиантов тканевого дыхания / Д.Г. Седова // Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Казань, 1995. — 16 с.

125. Семенкова Г.Г. Сравнительная эффективность лечения больных сердечно-сосудистой недостаточностью с применением миокардиальной цитопротекции / Г.Г. Семенкова, JI.B. Кокорева // Российский кардиологический журнал. -2007.- № 2.- С. 77-82.

126. Семеновский M.JI. Фосфокреатин: биохимическое и фармакологическое действие и клиническое применение / M.JI. Семеновский, В.И. Шумаков, JI.A. Махотина, Г.М. Могилевский. -1990.-С. 303-314.

127. Сернов JI.H. Дифференцированный индикаторный метод определения размеров зоны некроза и ишемии при экспериментальном инфаркте миокарда у крыс / JI.H. Сернов., В.В. Гацура // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1989 № 5 - С. 534 - 535.

128. Сернов JI.H. Фармакологическая коррекция регионарного метаболического ацидоза и органические зоны некроза при острой ишемии миокарда./ Л.Н.Сернов // Автореф. дисс. .докт. мед. наук. -Купавна, 1991.

129. Сернов Л.Н. Производные 3-оксипиридина (3-ОП) и оксиникотиновой кислоты (ОНК) как потенциальные кардиопротекторные средства / Л.Н.Сернов, Л.Д. Смирнов // "Человек и лекарство". Росс. науч. конгр.: 3-й. Тезисы. Москва. 1996.- С. 203.

130. Сернов JI.H. Анализ механизмов антиангинального кардиопротективного действия 3-оксипиридина / Л.Н.Сернов // Тез. докл. II Нац. конгресса "Человек и лекарство". М, 1995. - С. 328.

131. Сернов Л.Н. Биотехнологический цитохром С / Л.Н.Сернов, В.В. Береговых, Е.Р. Давидов, В.В. Гацура // Химия, фармакология.- М: Антекс, 1997.-239 с.

132. Сернов Л.Н. Клинико-экспериментальное исследование противоишемической и гиполипидемической активности мексикора / Л.Н. Сернов, Л.Д. Смирнов, Г.И. Шапошникова, Н.Н. Гуранова // Клин, исслед. лекарств, средств в России. 2004. - № 1. - С. 24-28.

133. Серов В.В. Ультраструктурная патология / В.В. Серов, B.C. Пауков.- М.: Медицина, 1975.- 432 С.

134. Смирнов А.В. Структурные особенности нервно-мышечного аппарата сердца развивающегося организма в условиях дозированной гиподинамии и гипокинезии / А.В.Смирнов // Автор. Дисс. . канд. мед. наук. Волгоград, 1998. - 18С.

135. Смирнов Л.Д. Целенаправленное изыскание физиологически активных веществ / Л.Д.Смирнов, К.М. Дюмаев. Рига.- 1989. - С. 3 -44.

136. Смирнов Л.Д. Особенности влияния мексидола и эмоксипина на липидный обмен / Л.Д.Смирнов, А.К. Матвеева // Бюлл. ВНЦ БАВ. М. -1992.-С. 27-31.

137. Смирнов JI. Д. Перспективные направления поиска антиоксидантов и лекарственных средств в ряду азотистых гетероциклов / Л.Д.Смирнов // Тез. Докл. V Росс. Нац. конгр. "Человек и лекарство". М., 1998.- С. 621.

138. Смирнов Л. Д. Структура, фармаклогические свойства и медицинское применение гетероароматических антиоксидантов / Л.Д.Смирнов // Химическая и биологическая кинетика. Новые горизонты. М.: Химия, 2005.-С. 102-109.

139. Спасов А.А. и др. Антиоксидантные вещества радикальная основа для поиска актопротекторных средств / А.А. Спасов, А.В. Цибанев, О.В. Островский.// 4-я конф. "Биоантиоксидант" Тезисы.-Москва. - 1992. - С. 58.

140. Стокле Ж-К. Гиперпродукция оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов / Ж-К. Стокле, Б. Мюлле, Р. Андриан Цитохайна,

141. A. Клещев //Биохимия. 1998. - Т. 63. - № 7. - С. 939-947.

142. Студенцова И.А. Фармакотоксическая характеристика димефосфона / И.А. Студенцова, Р.С. Гараев, В.Т. Исмаилов // Экологические проблемы фармакологии и токсикологии. Тезисы. -Всесоюз. науч. конф. Казань. 1990. -С. 101-102.

143. Тверская М.С. Патоморфология сократительного миокарда: сравнительное исследование при увеличении постнагрузки левого и правого желудочка сердца / М.С. Тверская, О.Д. Мишнев, А.П. Ракша,

144. B.В. Карпова, В,В. Сахопарова, М.С. Измайлова, А.О. Вирганский,

145. М.Х. Кадырова, Н.З. Абдулкеримова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004. - № 12.- С.693-697.

146. Федоров Б.М. Стресс и система кровообращения / Б. М. Федоров. -Медицина.- 1991. -320 с.

147. Форбс М.С. Ультраструктура миокарда млекопитающих// Физиология и патофизиология сердца. / М.С. Форбс, Н.С. Сперелакис. В 2 Т. Пер с англ. М.: Медицина, 1990. Т. 1.- С. 15-66.

148. Фролов В.А. Морфология митохондрий кардиомиоцита в норме и патологии / В.А. Фролов, В.П. Пухлянко. М.: Изд-во УДН. - 1989. -142 с.

149. Хафизьянова Р.Х. Влияние димефосфона и фосфатбензида на развитие токсического отёка мозга животных / Р.Х. Хафизьянова // Актуальные вопр. экспер. и клин, фармак. Сб. науч. работ. Смоленск. -1994.-С. 128- 129.

150. Хафизьянова Р.Х. Состояние ПОЛ мозга крыс при введении неантихолинэстеразных фосфороорганических соединений фосфатбензида и димефосфона / Р.Х. Хафизьянова // Фармация и фармакология. Тезисы. -Международ, науч.- практ. конф. - Пермь 1993. С. 131.

151. Хафизьянова Р.Х. Экспериментальное обоснование применения димефосфона в терапии инсультов / Р.Х. Хафизьянова // "Человек и лекарство". Росс. науч. конгр.: 3-й. Тезисы. М.- 1996. С. 230.

152. Хафизьянова Р.Х. Димефосфон вазоактивное средство для нормализации функции НС / Р.Х. Хафизьянова, И.А. Студенцова и др. // Казанский мед. журн. 1993. № 74 (1). с. 8-12.

153. Хаценко О. Взаимодействие оксида азота и цитохрома Р-450 в печени / О. Хаценко // Биохимия. 1998. - Т. 63. - № 7. - С. 984-991.

154. Хитров Н.К. Адаптация сердца к гипоксии / Н.К. Хитров, B.C. Пауков. М.: Медицина, 1991. - 240 с.

155. Цыбулькина В.Н. Оптимизация клинического применения димефосфона на основе исследования ведущих механизмов его действия/ В.Н. Цыбулькина// Автореф. дисс. .докт. мед. наук. -Казань, 1997. С. 54-56.

156. Шабалин А.В. Защита кардиомиоцита. Современное состояние и перспективы / А.В. Шабалин, Ю.П. Никитин // Кардиология. 1999;№ 3. - С. 4 - 10.

157. Шаров В.Г. Ультраструктура сердца / В.Г. Шаров, Ш.Б. Иргашева. М: Медицина, 1988. - 208 С.

158. Шеворакова Т.И. Фармакологические эффекты препаратов, обладающих противоаритмической активностью при длительном применении. / Т.И.Шеворакова // Автореферат дисс. канд. биол. наук. -Саранск, 2000,- 18 с.

159. Шувалова Е.Н. Морфофункциональная характеристика миокарда белых мышей под влиянием этацизина и димефосфона в условиях хронического стресса. / Е.Н.Шувалова // Автореферат дисс. канд. мед. наук. Саранск, 2003, - 18 с.

160. Adcock I.M. Oxidative stress induces NF-kappa-B DNA-binding and inducible NOS messenger RNA in human epithelial cells / I.M. Adcock, C.R. Brown, O.G. Kwon, P.J. Barnes // Biochem. and Byophys. Res. Commun.- 1995. - Vol. 19.-№ 2.-P. 141-168.

161. Addicks K. Nitric oxide modulates sympathetic neurotransmission at the prejunctional level / K. Addicks, W. Bloch, M. Feelisch // Microsc. Res. Tech. 1994.-Vol. 29.-№ 2.-P. 161-168.

162. Aragona M. Chronic stress and histological effects on the human centrial nervous system and other organs / M. Aragona, F. Aragona // Funct-Neurol. 1994. May-Jun. V. 9.N 3.P. 121-131.

163. Asano K. Constitutive and inducible nitric oxide synthase gene-expression, regulation and activity in human lung epithelial cells / K. Asano, C.B. Chee, B. Gaston et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. US. 1994. - Vol. 91. -N21. P. 1198-1205.

164. Atoji Y. Innervation of NADPH-diaphorase-containing neurons correlated with acetylcholinesterase, tyrosine hydroxylase and neuropeptides in the pigeon cloaca / Y. Atoj, Y. Yamamoto, Y. Suzuki // J. Anat. 2001. -Vol. 198-№2.-P. 181-188.

165. Barton C.H. Effect of severe aortic banding above the renal arteries on nitric oxide synthase isotype expression / C.H. Barton, Z. Ni, N.D. Vazary // Kidney Int. 2001. - Vol. 59. - №2.-P. 654-661.

166. Barouch L.A. Nitric oxide regulates the heart by spatial confinement of nitric oxide synthase isoforms / L.A. Barouch, R.W. Harrison, M.W. Skafetal.// Nature. 2002.- V. 415. - № 6873. - P. 337-339.

167. Bassoulet C. Differential immunolocalization of type I, II, III nitric oxide synthase isoforms in murine lung epithelium / C. Bassoulet, Lonchampt., E. Canet // Europ. Respirat. J. 1996. - Vol. 9. - P. 23-124.

168. Bataineh A. Angiotensin II, Nitric Oxide and end-organ damage in hypertension / A.Bataineh, L. Raij // Kidney Int Suppl. 1998. - № 68. - P. 14-19.

169. Benjamin I. J. Steess (Heat shock) Proteins/ Molecular Shaperones in Cardiovascular Biology and Diseases / I. J. Benjamin, R. McMilan // Circ. Res. 1998. - Vol. 83. - P. 117-132.

170. Berridge M.J. Inositol triphosphat and calcium signalling / M.J. Berridge//Nature. 1993.-Vol. 361. - P. 315-325.

171. Bernardi P. Mitochondria and cell death / P. Bernardi, L. Scorrano, R. Colonna et al. // Eur. J. Biochem. 1999. -V. 264. -N 3. - P. 687-701.

172. Bers D.M. Cardiac excitation-contraction couping/ D.M. Bers // Nature.- 2002. V. 415. - P. 198-205

173. Bian K. Nitric oxide (NO) biogeneration, regulation, and relevence to human diseases / K. Bian, F. Murad // Frontiers in Bioscience. - 2003. -Vol. 8. - P. 264-278.

174. Bolli R. Mechanism of myocardial "stunning" / R. Bolli // Circulation. 1990.- № 82. - P. 723-738.

175. Bredt D.S. Isolation of nitric oxide synthase, a calmodulin-requiring enzyme / D.S. Bredt, S.H. Snyder // Proc. Nat. Sci. US. 1990. - Vol. 87. -P. 682-685.

176. Brookes P.S. Increased Sensitivity of Mitochondrial Respiration to Inhibition by Nitric Oxide in Cardiac Hypertrophy /P.S. Brookes, J. Zhang, L. Dai, D.A Parks. // J. Mol Cell Cardiol. 2001. - Vol. 33. - № 1. - P. 6982.

177. Ceconi C. Lipid paroxidation during myocardial reperfusion / C. Ceconi, A.Cargnoni, E. Pasini et al. // Mol. Cel. Biochem. 1992. - № 111.-P. 49-54.

178. Champion H.C. Modulation of vivo cardiac function by viocyto-specific nitric oxide synthase-3 / H.C. Champion, M.W. Skaf, E. Takimoto et al. // Circ. Res.-2004.-V. 94. -№>5.-P. 657-663.

179. Chello M. Protection by coenzyme Q10 from myocardial reperfusion injury during coronary artery bypass grafting./ M. Chello, P. Mastroroberto, R. Romano et al. // Ann. Thorac. Surg. 1994. -№ 58 (5). - P. 1427-1432.

180. Cooke J. P. Derangements of the nitric oxide synthase pathway, L-arginine, and cardiovascular diseases / J. P. Cooke, V. J. Dzau // Circulation. 1997. - Vol. 96. - P. 379-382.

181. Cooke J. P. Nitric oxide synthase: Role in the genesis of vascular disease / J. P. Cooke, V. J. Dzau // Annu. Rev. Med. 1997. - Vol. 48. - P. 489-509.

182. Cooper C.L. The role of stress in the health and disease process. / C.L. Cooper // Br. J. Hosp. Med. 1993. - V. 50.- № 9. - P. 3 - 16.

183. Devereux R. Hypertensive Cardiac Hypertrophy: Pathophysiological and Clinical Characteristics / R. Devereux, M.J. Roman// In hypertension: Pathophysiology/ Diagnosis. New York: Raven Press Ltd. 1995. - P. 409432.

184. Devereux R.B. Left ventricular geometry, pathophysiology and prognosis / RB. Devereux // J. Am. Coel. Cardiol. 1995. - Vol.25. - P. 885 -887.

185. Devereux R.B. Role of preclinical cardiovascular disease in the evoluation from risk factor expossure to clinical morbid event / R.B. Devereux, M.H. Alderman // Circulation 1993. Vol. 88. - P.1444-1455.

186. Devereux R.B. Left ventricular hypertrophy and hypertension / R.B. Devereux, G. Simone, A. Ganon el al. // Clin. Exp. Hypertens. 1993. -Vol.15. - P. 1025 - 1032.

187. Devereux R.B. Whole blood viscosity as a determinant of cardiac hypertrophy in hypertension / R.B. Devereux, J.H. Drayer, S. Chien // Am.J.Cardiol. 1984. - Vol. 54. - P. 592 -595.

188. Digerness S.B. Peroxynitrite irreversibly decreases diastolic and systolic function in cardiac muscle / S.B. Digerness, K.D. Harris, J.W. Kirklin, F. Urthaler // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 27 - № 11-12. -P. 1386-1392.

189. Dusting G. J. Nitric oxide in cardiovascular disorders / G. J. Dusting // J.Vasc. Res. 1995. -Vol.32.- P. 143-161.

190. Eddy L. Frei radical productions enzyme, xantine oxidose, is undetectable in human hearts// Am. J. Physiol. - 1987. - Vol. 253. - P. 709 -711.

191. Fabiani J.N. Cardioprotective effect oftrimetazidine during coronary artery graft surge / L. Eddy, J. Steward et al. / J.N. Fabiani // J Cardiovasc Surgery. 1992. - Vol.33. -№ 4. - P. 486-491.

192. Felaco M. Endothelial NOS expression and ischemia-reperfusion in isolated working rat heart from hypoxic and hyperoxic conditions / M. Felaco, A. Grilli, N. Gorbunov, P. Di Napoli // Biochim Biophys Acta. -2001. Vol. 1594. - M 2-3. - P. 203-211.

193. Ferdinandy P. Peroxynitrite is a major contributor to cytokine-induced myocadial contractile failure / P. Ferdinandy, H. Danial, I. Ambrus et al. // Circ. Res. 2000. - Vol. 87. - P. 242-247.

194. Feron O. The ins and outs of caveolar signaling m2 muscaring cholinergic receptors and eNOS activation versus neuregulin and Erb B4 signaling in cardiac myocites / O. Feron, Y.Y. Zhao, R.A. Kelly // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1999. - № 874. - P. 11-19.

195. Ferrans V.J. Intermyofibrillar and nuclear-myofibrillar connections in human and canine myocardium: an ultrastractural study / V.J. Ferrans, W.C. Roberts //J.Molec. Cell. Cardiol. 1973. V. 5. P. 247-257.

196. Ferrari R. Occurrence of oxidative stress during myocardial reperfusion / R. Ferrari, C. Ceconi, S. Currela et al. // Mol. Cel. Biocchem. -1992.-№ 3.-P. 61-69.

197. Ferrari R. Hibernating myocardium in patients with coronary artery disease: identification and clinical importance / R. Ferrari, G. La Canna, R. Glubbini et al. // Cardiovasc Drugs Ther 1992. № 6. - P. 287-293. .

198. Filogamo G. Models of neuronal plasticity and repair in the enteric nervous system: a review / G. Filogamo, C. Cracco // Ital. J. Anat. Embriol. -Vol. 100-№1.-P. 185-195.

199. Frass O. Enhanced gene expression of calcium regulatory proteins in stunned porcine myocardium / O. Frass, H.S. Sharma, R. Rnoll et al. // Cardiovase Res. 1993. - Vol. 27. - P. 2037- 2043.

200. Freeman B.A. Nitric oxide: A central regulatory species in pulmonary oxidant reactions / B.A. Freeman // Amer. J. Physiol. Lung Cell, and Mol. Physiol. - 1995. - Vol. 268. - № 12. - P. L697-L698.

201. Furchgott R.F. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholin / R.F. Furchgott, J. Zawadski //Nature. 1980. - Vol. 288. - P. 373-376.

202. Furukawa K. Expression of nitric-oxide synthase hyman nasal-mucosa / K. Furukawa, D.G. Harrison, D. Saleh et al. // Amer. J. Respirat. and Crit. Care. Med. 1996. -Vol. 153.-N 2.-P. 847-850.

203. Gard V.C. Nitric oxide-generating vasodilatators and 8-bromocyclic guanosinemonophosphate ihibit mitogenesis and proliferation of cultured rat vascular smooth muscle cells / V.C. Gard, A. Hassid // J. Clin. Invest. -1989.-Vol. 83.-P. 1774-1777.

204. Godeclce A. The Janus faces of NO? / A. Godecke, J. Schrader // Circ. Res. 2004. - V. 94. -№ 6- P. e55.

205. Gorren A.C.F. The versatile and Complex Enzymology of Nitric Oxide Synthase / A. C.F. Gorren., B. Mayor // J.Biochem. 1998. - Vol. 63. - Publ. 7. - P. 870-880.

206. Gratton J.P. Caveolae and caveolins in the cardiovascular system / J.P. Gratton, P. Bernantchez, W.C. Sessa // Circ. Res. 2004. - V. 94. - P. 1408.

207. Gutierrez H.H. Pulmonary alveolar epithelial inducible NO synthase gene expression: Regulation by inflammatory mediators / H.H. Gutierrez, B.R. Pitt, M. Schwarz et al. // Amer. J. Physiol. Lung Cell, and Mol. Physiol. - 1995. - N 3. - P. L501-L508.

208. Gyurko R. Modulation of mouse cardiac function in vivo by eNOS and ANP / Rs Gyurko, P. Kunlencordt, M.C. Fishman, P.L. Huang // Am. J. Physiol. Heart Circ Physiol. 2000. - Vol. 278. № 3. - P. 971-981.

209. Halliwell В. Free radicals, antioxidants and human disease : Where are we now? / B. Halliwell, 3. M. C. Gutteridge, С. E. Cross // J. Lab. Clin. Med. 1992. - Vol. 119. - P. 598-620. .

210. Halliwell В. Nitric oxide and peroxy nitrite. The ugly, the uglier and not so good: a personal view of recent controversies / B. Halliwell, K. Zhao, M. Whiteman// Free Radic Res. 1999. - Vol. - 31. P. 651-658.

211. Haugen S. E. Glucocorticoid and ACTH regulation of rat peritonea I phagocyte chemiluminescence and nitric oxide production in culture / S. E. Haugen, P. Wiik // Acta Physiol. Scand. -1997. Vol. 161. -P. 93-101.

212. Hattori R. Structure and function of nitric oxide synthases / R. Hattori, K. Sase, H. Eizawa, K. Kosuga, T. Aoyama, R. Inoue, S. Sasayama, C. Kawai, Y. Yui // Infl. J. Cardiol. 1994. - Vol. 47. - P. S71-S75.

213. Hope V.T. Histochemical characterization of neuronal NADPH-diaphorase / V.T. Hope, S.R. Vincent // J. Histochem. Cytochem. 1989. -Vol. 37.-P. 653-661.

214. Ignarro I. J. Physiology and pathophysiology of nitric oxide / L.G. Ignarro // Kidney Intern. 1996. - VoL 49. - P. 52-55.

215. Ismailoglu U. B. Effects of aminoguanidine and N -nitro-L- arginine methyl ester on vascular hyporeactivity induced by endotoxaemia / U. B. Ismailoglu, C. Parkiner, K. Yogranci, I. Sahin-Erdemli // Eur. J.Surg. 2001. Vol. 167.-P. 803-809.

216. Johnson M. L.R. Roles of nitric oxide in surgical infection and sepsis / M. L. Johnson, T. R. Billiar// World J. Surg. -1998,- Vol. 22. P. 187-196.

217. Jordan M. I. Regulation of inducible nitric oxide production by intracellular calcium / M. I. Jordan, B.Rominski, A. Jaquins-Gerstl et al // Surgery. 1995. - Vol. 118. - P. 138-146.

218. Kane D.L. Bcl-2 inhibition of neural death: Decease generation of reactive oxygen species s ciece / D.L. Kane, A. Sarafian., R. Anton et al. // -1993. Vol. 262. - P. 1274-1277.

219. Kaneko M. Stunned myocardium and oxygen free radicals sarcolemmal membrane damage due to oxygen free radicals / M. Kaneko, H. Hayasshi, A. Kobayashi // Jpn. Circular J. 1991.- № 55. -P.855 - 892.

220. Klimaschewski L. Nitric oxide synthase in cardiac nerve fibers and neurons of rat and guinea pig heart / L. Klimaschewski, W. Kummer, B. Mayer, J.Y. Couraud, U. Preissler, B. Philippin, C. Heym // Circ. Res. -1992. Vol. 71. - № 6. - P. 1533-1537.

221. Kogan A. Phagocytare Free radical dependant autoagressive diseases in oxidantive stress and redox regulation:cellular signaling / A. Kogan, S. Grachyov, A Sumarokov// AIDS. Cancer and ofher diseases. -Paris. - 1996.-P. 300.

222. Kooy N.W. Evidence for in vivo peroxynitrite production in human acute lung injury / N.W. Kooy, J.A. Royall, Y. Z. Ye // Amer. J. Respirat. and Crit. CareMed. -1995.-Vol. 151.-№ 4.-P. 1250-1254.

223. Krantz D.S. Mentel stress as a trigger of myocardial ischemia and infarction / D.S .Krantz, W.J. Кор, H.T. Santiago, J.S. Gottdiener // Cardiol. Clin. 1996. - V. -14. N2. - P. 271-287.

224. Kubler W. Cardioprotection: definition, classification and fundamental principles / W. Kubler, M. Haas // Heart. 1996. - Vol. 75.- P.330-333.

225. Kuklinski B. Coenzyme Q10 and antioxidants in acute myocardial infarction / B. Kuklinski, E.Weissenbacher, A. Fahnrich // Mol. Aspects of Med. 1994. - № 15. - P. 143-147.

226. Lamas S. Endothelial nitric oxide synthase: molecular cloning and characterization of a distinct constitutive enzyme isoform / S. Lamas, P.A. Marsden, G.KLi, P. Temst, T. Michel // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - Vol. 88. - P. 6348-6352

227. Leone A.M. Constitutive and inducible nitric oxide synthases incorporate molecular oxigen into both nitric oxide and citrulline / A.M. Leone, R.M. Palmer, R.G. Knowles et al. // Ibid. 1991. - Vol. 266. - P. 23790-23795.

228. Lefer A. M. Endothelial dysfunction in myocardial ischemia and reperfusion: role of oxygen-derived radicals / A. M. Lefer, D.J. Lefer // Basic Res. Cardiol. 1991. - Vol. 86 (Suppl 2). - P. 109-116.

229. Lindpaintner K. The cardiac renin-angiotensin system. An appraisal of present experimental and clinical evidence / K. Lindpaintner, D. Ganten // Circ. Res. 1991. - № 68. - P. 905-920.

230. Manimegalai R. Effect of v. E on hioktatdiet induced hyperlipidemia in rats / R. Manimegalai, A.Geetha, K.Rajalakshmi // Indian J. Exp.Biol. -1993. Vol.31. № 8. - P. 704-707.

231. Maning A.S. Reperfusion induced arrythmias: the major determing factor / A.S. Maning //1. Mol. Cell. Cardiol. 1986. - V. 18. - P. 49-53.

232. Mason R.S. Vit. E and cardiovascular disease / R.S. Mason // Complemenaru Ther. med. 1993. - № 1. - P. 19-23.

233. Matter C.M. Effect of NO donors on LV diastolic function in patients with severe pressure overload hypertrophy / C.M. Matter, L. Mandinov, P.A. Kaufmann, G. Vassali, Z. Jiang., O.M. Bess // Circulation. - 1999. -Vol. 99. - № 18. - P. 2396-2401.

234. Mayer B. Brain nitric oxide synthase is a biopterin- and flavin-containing multi-functionfl oxido-reductase / B. Mayer, M. John, B. Heinzel et al. //Ibid. 1991. № 288. - P. 187-191.

235. Mollenchauer H. Plastic embedding microscopy use in electron microskopy / H. Mollenchauer // Stain technology. 1964. - V.39. - №1. - P. 111-114.

236. Moncada S. Nitric Oxide: Physiology, phatophysiology and pharmacology / S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs // Pharmacol. Rev. -1991.-Vol. 43.-P. 256.

237. Moncada S. The L-arginine nitric oxide pathway / S. Moncada, A. Higgs // New engl. Med. -1993. - Vol. 329. - P. 2002-2012.

238. Mullane K. Harnessing an endogenous cardioprotective mechanism: cellular sources and sites of action of adenosine / K. Mullane, D. Bullough // J. Mol. Cell. Cardiol. 1995.-№ 27.-P. 1041-1054

239. Munzel T. Evidence for a role of oxygen-derived free radicals and protein kinase С in nitrate tolerance / T. Munzel, D. G. Harrison // J.Mol. Med. -1997. VoL75. - P. 891-900.

240. Nava E. Alteration to the nitric oxide pathway in the spontaneously hypertensive rat / E. Nava, A. L. Farre, C. Moreno, S. Casado, P. Moreau, F. Cosentino, T. F. Luscher // J. Hypertens. 1998. Vol. 16. - № 5. - P. 609615.

241. Nikonic J. The effect of immobilization on catecholamini stores in some central and peripheral tissues in the rat / J. Nikonic, S. Drongak, S. Stepanovic, V.V. Varagic // Acta Vet. 1993. - V. 43. - № 5-6. - P. 279-285.

242. Niroomand F. Impaired functions of inhibitory G proteins / F. Niroomand, R. Strasser // Circ. Res.- 1995. Vol. 76. P. 861-870.

243. Ogura H. Effect of inhaled nitric oxide on pulmonary function after sepsis in a swine model / H. Ogura W.G. Cioffi, P.J. Offher et al. // Surgery. 1994.-Vol. 166.-N2.-P. 313-321.

244. Opie L.H. Cardiac metabolism emergence, decline and resurgence / L.H. Opie // Cardiovasc. Res. Part I. - 1992. - Vol. 26. - P. 721-733.

245. Palmer R.M.J. Vasculare endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine / R.M.J. Palmer, D.S. Ashton, S. Moncada // Nature. 1988. -Vol 333. - P. 664-666.

246. Palmer R.M.J. Nitric oxide accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor / R.M.J. Palmer, A.G .Ferrige, S. Moncada // Ibid. 1987. - Vol. 327. -P. 524.

247. Palmer R. M. J. The role of nitric oxide in endothelial cell damage and its inhibition by glucocorticoids / R. M. J. Palmer, L. Bridge, N. A. Foxwell, S. Moncada //Brit. J. Pharmacol. 1992. - Vol. 105. - P. 11-12.

248. Pollock J.S. Purification and characterization factor synthase from cultured and native bovine aortic endothelial cells / J.S. Pollock, U. Forstermann, J.A. Mitchell et al. // Proc. Nat. Acad. Scien. US. -1991. Vol. 88. - P. 10480.

249. Quinn A.C. Nitric oxide: an endogenous gas / A.C. Quinn, A.J. Petros, P. Vallance // Brit. J. Anaesth. 1995. - Vol. 74. - P. 443-451.

250. Rahimtoola S.H. Postoperative exercise response in the evaluation of the physiologic status after coronary bypass surgery / Rahimtoola S.H. // Circulation. 1982. - Vol. 65. - № 11. - P. 106-114.

251. Rahimtoola S.H. The hibernating myocardium / S.H. Rahimtoola // Am Heart J. 1989.-Vol. 117.-P. 211-221.

252. Raij L. Nitric oxide in hypertension: relationship with renal injury and left ventricular hypertrophy / L. Raij // Hypertension. 1998. - Vol. 31. - № 3.-P. 189-193.

253. Ramis I., Lorente J., Rosello-Catafau J. et al. Differential activity of nitric-oxide synthase in human nasal-mucosa and polyps // Rupor. Respirat. J. -1996. Vol. 9. - N 2. - P. 202-206.

254. Rapola J.M. Randomised trial of alpha-tocopherol and beta-carotene supplements on incidence of major coronary events in men with previous myocardial infarction / J.M .Rapola, J. Vitramo, S. Ripatti et al. // Lancet. -1997. Vol.349. -P. 1715-1720.

255. Ritchie R.H. Angiotensin II-induced hypertrophy of adult rat cardiomyocytes is blocked by nitric oxide / R.H. Ritchie, R. J. Schiebinger, M.C. La Pointe, J.D. Marsh // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - № 4. - P. 1370-1374.

256. Rohitzhi L. Lipid peroxidation and antioxidative vitamis under exstreme endurance stress / L. Rohitzhi, E. Logemann, A.N. Sagredos et al // Acta physiol. scana. 1994. - Vol. 151. № 2. - P. 49-158.

257. Rossi G.P. Changes in left ventricular anatomy and primary aldosteronism / G.P. Rossi Sacchetto, P.A.Visentin // Hypertension. 1996. - Vol. 27. - № 27. - P. 1039-1045.

258. Saito T. Inhibition of NOSH prevents cardiac dysfunction in myocardial infarction and congestive heart failure / T. Saito, F. Ни, L. Tayara et al.//Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2002. - V. 283. - № 1. -P. H339-H345.

259. Schwaiger M. Expression of myocardial glucose transporter (GLUT) mRNAs in patients advanced coronary artery disease / M. Schwaiger, D. Sun, N. Deeb et al. // Circulation. 1994. - Vol. 90.- № 4. - P. 1-113.

260. Schwarz P. Endogenous and exogenous nitric oxide inhibits norepinephrine release from rat heart sympathetic nerves / P. Schwarz, R. Diem, N. J. Dun, U. Forstermann // Circ Res. 1995. - Vol. 77. - № 4. - P. 841-848.

261. Skulachev B.P. Mitochondria in the aging / B.P. Skulachev // 2nd Europ. Congr. Biogerontol. from Molecules to Humans. Успехи геронтологии. Saint Petersburg, 2000. - C. 15-16.

262. Shah A. M. Paracrine and autocrine effects of nitric oxidb on myocardial function / A. M. Shah, P. A. MacCarthy // Pharmacol. 2000. -Ther. - Vol. 86. - № 1. - P. 49-86.

263. Simko F. The potential role of nitric oxide in the hypertrophic growth of the left ventricle / F. Simko, J. Simko // Physiol. Res. 2000. - Vol. 49. -№ l.-p. 107-114.

264. Stapfer UJ. Apports de vit E et risgue de coronaropathie chez la jemme / U.J. Stapfer, Ch. H. Henne Kens, J.E. Manson et al. // J.int. mea. -1993.- Vol. 278.-P.31 -38.

265. Stephens N.G. A randomized controlled trial of vitamin E patients with coronary disease; the Cambridge Heart Antioxidant Study (CHAOS) / N.G. Stephens, A.Parsons, P.M. Schofield et al. // Lancet. 1996. - Vol. 347.-P.781-786.

266. Stein B. Increased expression of constitutive nitric oxide synthase III, but not inducible nitric oxide synthase II, in human heart failure / B. Stein,

267. Т. Eschenhagen, J. Rudiger, H. Scholz, U. Forstemann, I. Gath // J. Am. Coel. Cardiol. 1998. - Vol. 32. -№5. - P. 1179-1186.

268. Takemoto K.A. Abnormalities of diastolic filling of the left ventricle associated with aging are less pronounced in exercise-trained individuals / K.A.Takemoto, L. Bernstein, J.F. Lopez et al. // Am.Heart. J. 1992. - Vol. 124.-P. 143 - 148.

269. Tniemermann C. Vascular hyporeactivity to vasoconstrictor agents and hemodynamic decompensation in hemorrhagic shock is mediated by nitric oxide / C. Tniemermann, C. Szabo, J. A. Mitchell // Proc. Natl. Sd. USA. 1993.-Vol. 90.-P. 267-271.

270. Tanaka K. Ultrastructural localisation of nerve terminals containing nitric oxide synthase in rat adrenal gland / K. Tanaka, T. Chiba // Neurosci Lett. 1996. Vol. 204.-№3.-P. 153-156.

271. Tanaka K. The vagal origin of preganglionig fibers containing nitric oxide synthase in the guinea pig heart / K. Tanaka, T. Chiba // Neurosci Lett 1998. - Vol. 252. - № 2. - P. 135-138.

272. Tanaka K. Distribution of intracardiac neurones and nerve terminals that contain a marker for nitric oxide, NADPH-diaphorase in the guinea pig heart / K. Tanaka, C.J. Hassa., G. Bumstock // Cell Tissue Res. 1993. -Vol. 273. - № 2. - P. 293-300.

273. Тео К.К. Effects of prophylactic antiarrhythmic drug therapy in acute myocardial infarction. An overview of results from randomized controlled clinical trials / K.K Teo, S. Yusuf, C.D.Furberg JAMA -1993.- C. 15891595.

274. Toth T. The role of catecholamines in lethal immobilization stress /T.Toth//Acta-Physiol-Hung. 1990. - V. 75. - N 2.- P. 95-99.

275. Topol E.J. Hypertensive hypertophic cardiomyopathy of the elderly / E.J. Topol, T.A. Traill, N. J. Fortuin // N. Engl. Med. 1985. - Vol. 312. - P. 277-283.

276. Ursell P.C. The majority of nitric oxide synthase in pig heart is vascular and not neural / P.C. Ursell, M. Mayes // Cardiovasc. Res. 1993. -Vol. 27.-№ 11.- P. 1920-1924.

277. Ursell P.C. Anatomic distribution of nitric oxide synthase in heart / P.C. Ursell, M. Mayes // Int. J. Cardiol. 1995. - Vol. 50. - № 3. - P. 217223.

278. Ursell P.C. Endothelial isoform of nitric oxide synthase in rat heart increases during development / P.C. Ursell, M. Mayes // Anat. Rec. 1996. -Vol. 246. - № 4. - P. 465-472.

279. Vallance P. Role of endogenous nitric oxide in septic shock / P. Vallance, S. Moncada //New-Horiz. 1993. - Vol. 1. - N 1. - P. 77-86.

280. Vapaatalo H. Role of endothelium and nitric oxide in experimental hypertension / H. Vapaatalo, E.Mervaala, M.L. Nurminen // Physiol, res. -2000. Vol. 49. - № l.-P. 1-10.

281. Vasan R.S. The role of hypertension in the pathogenesis of heart failure. A clinical mechanistic overview / R.S. Vasan, D. Levy // Arch. Intern Med. 1996. - Vol. 156. - P. 1789-1796.

282. Vincent S.R. Nitric oxide: A radical neurotransmitter in the central nervous system / S.R. Vincent // Progr. Neurobiol. 1994. - Vol. 42. - P. 129-160.

283. Wang Y. G. Nitric oxide signaling mediates stimulation of L-type Ca 2+ current elicited by withdrawal of acetylcholine in cat atrial myocytes / Y.

284. G. Wang, С. E. Rechenmacher, S. L. Lipsius // J. Gen. Physiol. 1998. Vol. 111. - № 1. - P. 113-125.

285. Wolf G. Nitric oxide and nitric oxide synthase: biology, pathology, localization / G. Wolf// J. Histol. Histopathol. 1997. - Vol. 12. - № 1. - P. 251-261.

286. Zacikova L. Effect of the immobilisation stress on changes in expression of the Na/Ca exchanger in heart parts / L. Zacikova, R. Kvetnansky, O. Krizanova// Physiol.Res. -1998.- V. 47. N3. - P. 15.

287. Xiu Q. Cloning and characterization of inducible nitric oxide synthase from mouse macrophages / Q. Xiu, Hi Cho, J. Calaycay, R.A. Mumford, K.M. Swiderk, T.D. Lee, A.Ding, T. Troso, C. Nathan // Science. 1992. -Vol. 256. - P. 225-228.

288. Yano M. Altered intracellular Ca2+ handling in heart failure / M.; Yano, Y. Ikeda, M. J. Matsuzaki // Clin. Invest.- 2005. V. 115. -№ 3 . - P. 556-564.

289. Yu С. M. Plasma nitric oxide level in heart failure secondary to left ventricular diastolic dysfunction / С. M. Yu, P. С .Fung, G. Chan et al. // Am. J. Cardiol. 2001. - Vol. 88. - P. 867-870.

Информация о работе

Герасимова, Наталья Геннадьевна
доктора медицинских наук
Саранск, 2008
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфофункциональная характеристика миокарда при экспериментальной патологии и коррекции препаратами метаболического типа действия - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы