Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональная адаптивность эритроцитов птиц при смешанных инвазиях

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная адаптивность эритроцитов птиц при смешанных инвазиях"

На правах рукописи

Алабов Артур Муаедович

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АДАПТИВНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ ПТИЦ ПРИ СМЕШАННЫХ ИНВАЗИЯХ

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Махачкала - 2005

Работа выполнена в Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии на кафедре эпизоотологии и паразитологии

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук, доцент Кожоков Мухамед Кадирович

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор Шахмурзов Мухамед Музакирович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Пшикова Ольга Владимировна

доктор ветеринарных наук, профессор Атаев Агай Мухтарович

Ведущая организация:

Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт

Защита диссертации состоится « оЦ,СС<Ц 2005 г. В

на заседании диссертационного совета К 212.051.03 при Дагестанском государственном педагогическом университете по адресу: 367003, г. Махачкала, ул. М. Ярагского, 57.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Дагестанского государственного педагогического университета

Автореферат разослан

«ОН 0/^1-.

Ш 2005 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Алиев Ш.К.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. При высокой концентрации на ограниченной площади и непрерывности технологического процесса содержания птицы сохраняются условия для одновременного заражения их несколькими видами паразитов, в частности, гельминтами и простейшими (аскаридия-ми и кокцидиидами) (Ю.Ф. Петров, 1988, 2003; М.К. Кожоков и др., 1994,2004).

В последние годы в литературе появились работы, где отмечается, что с участием гельминтов в организме хозяина формируется микропара-зитоценоз, сочленами которого являются гельминты, патогенные простейшие, бактерии и грибы, в результате чего возникают смешанные заболевания (Д.И. Панасюк, 1984; Ю.Ф. Петров, 1988; В.Ф. Никитин, 1989; Pavlasek J. et э1., 2001; М.К. Кожоков, 2004).

Для диагностики болезней животных и птиц, контроля лечебных и профилактических мероприятий, оценки естественной резистентности организма важно изучить показатели системы эритрона, так как в ранний период после воздействия повреждающего фактора в ней возникают морфологические и функциональные изменения (Ю.А. Ватников, 2002; В.В. Салаутин, 2003).

Эффективность адаптационных реакций на уровне красной крови следует оценивать не только с количественной стороны, но и с качественной. Известно, что популяция эритроцитов не является однородной по своему составу, а представлена совокупностью клеток, различных как в отношении кислородтранспортных возможностей, так и механических характеристик, определяющих их способность к нормальной микроциркуляции. На основании этих характеристик оценивается функциональная активность популяции эритроцитов (Н.Б. Никулина, В.М. Аксенова, 2003).

Следовательно, особенности популяционного состава эритроцитов можно рассматривать как диагностический и прогностический фактор течения болезни.

Все вышеизложенное определило актуальность и целесообразность нашего исследования.

Цель и задачи исследований. Цель работы: изучение морфофунк-циональной адаптивности эритроцитов птиц при смешанных инвазиях.

В задачи исследований, результаты которых выкосятся на защиту, входило изучить:

- видовой состав кишечных паразитов птиц в условиях Центрального Кавказа;

- возрастную и сезонную динамику инвазированности птиц кишечными паразитами;

- паразито-хозяинные отношения при смешанных инвазиях;

- некоторые параметры клеток красной крови у птиц разных возрастов и пород, а также оценить влияние условий содержания птицы на систему эритрона;

- эффективность метода определения осмотической резистентности субпопуляций эритроцитов для оценки резервных возможностей системы эритрона при смешанных инвазиях;

- разработать методику построения цитометрических кривых (ЦМК), показывающих распределение эритроцитов по объему, для изучения их функциональной активности при гельминто-протозойных инвазиях.

Научная новизна. Изучено смешанное заболевание птиц, вызываемое аскаридиями, эймериями и криптоспоридиями, видовой состав кишечных паразитов, вопросы эпизоотологии, возрастная и сезонная динамика болезни, а также паразито-хозяинные отношения при паразитоцено-зах в условиях Центрального Кавказа. Видовой состав кишечных паразитов представлен двумя видами гельминтов (Ascaridia galli, Heterakis gallinarum), восемью видами простейших, в том числе, семью видами эйме-рий (Eimeria tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, E.praecox, E.mitis, E.brunetti) и одним видом криптоспоридий (Cryptosporidium baileyi). Впервые представлены данные по морфологическим параметрам и функциональной активности эритроцитов птиц при смешанных паразитарных болезнях. Комплексно изучен популяционный состав клеток эритрона птиц с построением дифференциальных цитометрических кривых распределения эритроцитов по объему. Выявлена специфическая чувствительность субпопуляций эритроцитов к осмотическому давлению в виде гемолиза, фрагментации и растяжения их мембран при смешанных инвазиях птиц.

Практическая значимость работы. Изучены вопросы эпизоотологии кишечных паразитов птиц (видовой состав, возрастная и сезонная динамика, а также паразито-хозяинные отношения) при смешанных инвазиях. Основные положения результатов работы вошли в разработанные нами «Рекомендации по применению кондуктометрического счетчика микрочастиц Picoscale (Psl-4) для количественного и качественного анализа эритроцитов при гельминтозах птиц» (утв. на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН, Москва-Нальчик, 2002 г.) и рекомендации «Методика сочетанного исследования популяции клеток эритроидного ряда с определением их осмотической резистентности при смешанных инвазиях птиц» (утв. МСХ КБР, Нальчик, 2004 г.). Материалы исследо-

ваний используются в учебном процессе Кабардино-Балкарской ГСХА, КБГУ, а также сотрудниками Института экологии горных территорий и специалистами Госветслужбы республики.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и одобрены на научно-производственной конференции по проблемам и перспективам повышения продуктивных и племенных качеств с.-х. животных (Нальчик, 2000); юбилейной научной конференции, посвященной 20-летию КБ ГСХА (Нальчик, 2001); секции «Инвазионные болезни с.-х. животных» РАСХН (Москва-Нальчик, 2002 г.); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 125-летию со дня рождения К.И. Скрябина (Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями, Москва, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы и перспективные направления прикладной биологической науки в начале XXI века» (Москва-Нальчик, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 2 рекомендации, в которых изложены основные материалы диссертации.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов и заключение, выводы и предложения, список литературы. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 13 рисунками. Список литературы включает 230 источников, в том числе 65 иностранных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Обзор литературы

В главе дается характеристика гельминто-протозойных инвазий птиц: их распространение, комбинации ассоциаций, типы взаимоотношений в организме хозяина. Рассматриваются патогенетические механизмы воздействия стресс-факторов на систему эритропоэза, эффективность адаптационных реакций на уровне красной крови при смешанных инвазиях птиц.

2. Материал и методы исследования

Работу по изучению вопросов эпизоотологии смешанных гельмин-то-протозойных кишечных инвазий птиц проводили в период с 2000 по 2004 гг. на ФГУП ППЗ «Котляревский», птицефабриках «Нартановская» и «Нальчикская» Кабардино-Балкарской республики на поголовье более 27700 голов птиц постнатального, ювенального и продуктивного периодов выращивания.

Для изучения видового состава кишечных паразитов провели полные и неполные гельминтологические вскрытия 2170 голов птиц по К. И. Скрябину (1928). Обнаружение личинок гельминтов проводили по методу Бермана. Определение видового состава гельминтов проводили с помощью определителей (К.И. Скрябин, Н.П. Шихобалова, Р.С. Шульц, 1954) и атласа по дифференциальной диагностике гельминтозов по морфологической структуре яиц и личинок возбудителей (А.А. Черепанов, А.С. Москвин, ГА. Котельников, В.М. Хренов, 2001). Интенсивность инвазии устанавливали по количеству гельминтов, обнаруженных в кишечнике вскрытых птиц. Материалом для исследования на зараженность кокцидиями служили пробы помета из кишечника птиц и мазки-отпечатки со слизистой оболочки кишечника погибших и убитых цыплят. Для копроскопической диагностики паразитов птиц применялся набор для диагностики паразитарных болезней «ДИАПАР» (ВИГИС).

Для дифференциации видов эймерий по ооцистам пользовались описаниями Е.М. Хейсина (1967), В.Р. Гобзема (1972), Н.Н. Колабского и П.И. Пашкина (1974) и определителем простейших М.В. Крылова (1996). Интенсивность кокцидиозной инвазии определяли в соответствии с ГОСТом 25383-82 (ст. СЭВ. - 2547-80) «Методы лабораторной диагностики кокцидиоза». Определение простейших рода Cryptosporidium проводили, в основном, с помощью консультаций и публикаций В.Ф. Никитина, И.Ф. Павласека (1989), У.Г. Тайчинова (1992), М.К. Кожокова (1994,2004), а также S.I. Upton, W.L. Current (1986).

Помимо сбора и анализа эпизоотологических данных течения гель-минто-протозойных кишечных инвазий, для определения прямых потерь от них, было проведено экспериментальное заражение 10-дневных цыплят инвазионными яйцами аскаридий и спорулированными ооцистами эймерий. Яйца аскаридий выделяли из гонад половозрелых самок, собранных из кишечников кур на птицефабрике «Нальчикская».

Инвазионные яйца аскаридий задавали цыплятам пипеткой, проведя их предварительный подсчет в 1 капле. Заражение однократное. Для заражения цыплят эймериями применяли смешанную культуру ооцист (E.tenella - 40%, E.acervulina - 60%), полученную из ВНИВИП. Культуру задавали с помощью шприца с канюлей после предварительного подсчета количества ооцист по методу Г.А. Котельникова и др. (2001) с использованием «ДИАПАР». Результаты эксперимента учитывали путем полного гельминтологического вскрытия цыплят в 50-дневном возрасте и микро-скопирования мазков-отпечатков.

Для характеристики эритроцитов проводились исследования птиц различных пород в количестве 300 голов (5 групп). Кормление и содер-

жание птиц осуществлялось по общепринятым методикам по принципу аналогов.

Во всех группах изучались морфологические параметры и показатели функциональной активности эритроцитов: RBC - общее количество эритроцитов в 1 мкл; RDW - характер распределения эритроцитов по объему; MCV - средний объем эритроцитов; соотношение малых, средних и больших эритроцитов. В 5 группе дополнительно к вышесказанному определялась осмотическая резистентность эритроцитов. Данные параметры изучались с помощью кондуктометрического счетчика частиц Picoscale (Psl-4).

Результаты исследований обработаны методами вариационной статистики (Е.К. Меркурьева, 1970).

3. Этиологическая структура смешанных инвазий птиц

Установлено, что у птиц паразитируют два вида гельминтов: As-caridia galli (сем. Ascariidae, подотряд Ascaridata) и Heterakis gallinarum (cем.Heterakidae, подотряд Oxyurata) и 8 видов простейших типа Apicom-plexa, класс Sporozoa, подкласс Coccidia: Eimeria tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, Epraecox, E.mitis, E.brunetti (сем. Eimeriidae) и Cryptosporidium baileyi (сем. Cryptosporidiidae).

Чаще всего встречались эймерии следующих видов: Eimeria tenella (ЭИ=71,2%), E.acervulina (13,7%) и E.maxima (8,6%). У 67,7% обследованной птицы обнаружены аскаридии (A.galli) (рис. 1).

Рис. 1. Диаграмма соотношения кишечных паразитов у птиц на ФГУП ППЗ «Котляревский», птицефабриках «Нартановская» и «Нальчикская»

Выделение ооцист криптоспоридий (Cryptosporidium baileyi) отмечается у 29,4% птицы. Остальные виды выявленных нами паразитов обнаруживались значительно реже: Heterakis gallinarum - 0,8%, E.necatrix -0,6%, E.praecox - 0,3%, E.mitis - 0,2% и E.brunetti - 0,2%.

Анализа этих данных показал, что у птиц часто наблюдается одновременное паразитирование простейших и гельминтов. Так, из числа обследованной птицы (2170 гол.) у 1009 голов (46,5%) обнаруживаются одновременное паразитирование аскаридий и эймерий (A.galli+ Eimeria sp.), у 291 (13,4%) - аскаридий и криптоспоридий (A.galli+ Cr. baileyi), что суммарно составляет 59,9%. Следовательно, в структуре инвазиро-ванности птиц паразитами преобладает смешанная гельминто-протозойная инвазия.

Учитывали также количество гельминтов (ИИ, экз.), обнаруженных в кишечнике вскрытых птиц. Количество аскаридий колебалось от 5 до 47 экземпляров, в среднем 26±0,5экз., гетеракисов от 2 до 22экз., в среднем 12±0,Зэкз. Количество ооцист эймерий в 1г помета составило от 10 тыс. до 137тыс, в среднем 53± 1,9 тыс., количество ооцист криптоспоридий в 1 г помета от 12 тыс. до 97 тыс., в среднем 47±1,4 тыс.

В результате исследований выявлено, что наиболее часто встречается одновременное заражение птицы аскаридиями и эймериями (46,5%), аскаридиями и криптоспоридиями (13,4%). Следовательно, более чем у половины обследованного поголовья птицы установлена смешанная форма гельминто-протозойной кишечной инвазии.

Установлено, что первое выделение ооцист эймерий у цыплят начинается с 12-дневного возраста (ЭИ=6%) с последующим нарастанием экстенсивности инвазии. С 24-дневного возраста уже более половины (52%) обследованных цыплят были инвазированы эймериями. Максимальную зараженность наблюдали в 30 и 45-дневном возрасте (97% и 94% соответственно).

В дальнейшем ЭИ эймериями снижалась незначительно, до уровня 52% к 3-месячному возрасту (рис. 2).

Первое выделение ооцист криптоспоридий обнаруживали с 17-дневного возраста у 14% обследованных цыплят. До 27-дневного возраста наблюдалось плавное нарастание ЭИ до 22%, затем отмечалось резкое повышение инвазированности (с пиком на 50-й день жизни) до 60% с последующим снижением на 80-й день жизни до 7%.

Аскаридии обнаружены с 28-дневного возраста у 3% обследованных цыплят. ЭИ аскаридиями плавно повышалась до конца периода исследования. В 75-дневном возрасте было инвазировано 50%, а к 3-месячному возрасту ЭИ достигала 60%.

эи,%

1

Л, А

л* ГУ И ц \с >

/ 1 т

Н1 р* ■■л к \

. ,ЬИП11*Т¥Т1 II 1ТГШ "Гг Sl а м Дни

1- IX 13 14 КИ г к и м » « и » и К П » » » » « « « « й и |>аШ '^■■•■■■Енпегп «р. •■•■■■Сг. Ва11еу} | « т< и

Рис.2. Возрастная динамика инвазированности ремонтного молодняка птиц кишечными паразитами

Следовательно, у ремонтного молодняка до 3-месячного возраста установлено четыре пика инвазированности разными видами кишечных паразитов. Первые два - в возрасте 30 и 45 дней жизни - эймериями, третий - в возрасте 50 дней - криптоспоридиями, и, четвертый - в возрасте 90 дней - аскаридиями. У ремонтного молодняка птиц к 3-месячному возрасту наблюдается увеличение случаев одновременного паразитиро-вания гельминтов и простейших (смешанная аскаридиозно-кокцидиидозная инвазия), которая достигает 47% от общего количества обследованных цыплят.

Изучение сезонной динамики показало, что наивысшая зараженность птиц паразитами наблюдалась в летне-осенний период (ЭИ=69 %), а наименьшая - в зимний период (ЭИ=30 %).

4. Паразито-хозяинные отношения при смешанных инвазиях Для изучения паразито-хозяинных отношений при смешанных инвазиях использовали в качестве критерия показатели среднесуточного прироста, количество обнаруженных яиц и личинок гельминтов и ооцист эймерий, которые имеют особое значение как величины, отражающие в конечном счете взаимодействие в системе «паразит-хозяин». Результаты, полученные в ходе этого эксперимента показали, что на 21-й день после заражения выявлена следующая закономерность: повышение дозы заражения цыплят с 200 до 800 инвазионных яиц аскаридий сопровождалось уменьшением числа личинок аскаридий в среднем с 20,4±1,1 экз. до

2,1±0,4 экз. При заражении смешанной культурой (яйца аскаридий и ооцисты эймерий) также отмечалась тенденция к снижению числа обнаруживаемых личинок аскаридий с увеличением дозы заражения. При этом число обнаруженных личинок у вскрытых цыплят колебалось от 37,7±2,9 экз. до 4,0±0,8 экз. В отличие от данных по заражению яйцами аскаридий, повышение дозы заражения ооцистами эймерий сопровождалось увеличением числа обнаруживаемых эймерий. При эймериозной моноинвазии количество ооцист в одном поле зрения микроскопа увеличилось от 27±4,1 до 51,8±4,4 экз. При смешанной инвазии также повышение дозы заражения сопровождалось увеличением числа обнаруживаемых ооцист с 25±3,2 до 66,0±5,3 экз. соответственно.

Среднесуточные привесы у инвазированных цыплят были значительно ниже, чем в контрольной группе. Замечена зависимость среднесуточного привеса от дозы заражения. Так, при увеличении дозы заражения среднесуточные привесы снижались во всех испытуемых группах. Наименьшие привесы отмечались в группах, зараженных смешанными культурами. В среднем этот показатель составил в группе со смешанной инвазией - 3,3±1,О г. При аскаридиозной моноинвазии данный показатель был равен 5,0±1,25 г, при эймериозной - 3,7±1,4 г. Среднесуточный привес при аскаридиозе цыплят составил 54,4% по отношению к контрольной группе, при эймериозе - 40,2%, а при смешанной инвазии - 35,9%.

Повышение дозы заражения цыплят с 200 до 800 инвазионных яиц аскаридий приводит к снижению числа обнаруживаемых аскаридий в 50-дневном возрасте с 43,5 до 3,0, но среднесуточные привесы при дозе заражения более 200 яиц аскаридий на цыпленка резко снижаются (с 23,7 до 16,4 г). В среднем, у цыплят, инвазированных аскаридиями, среднесуточные привесы составляют 20,1 г. Повышение дозы заражения эйме-риями с 10 до 40 тыс. ооцист привело к увеличению числа эймерий с 52,8 до 61,2 экз. в одном поле зрения. Среднесуточные привесы у цыплят, инвазированных эймериями, также снижались с 14,9 до 11,6 г с увеличением дозы заражения, и в среднем, составили 13,3 г в сутки.

У цыплят, зараженных смешанной культурой ооцист эймерий и яиц аскаридий, отмечалась более интенсивная инвазированность. Количество обнаруженных аскаридий и ооцист эймерий на 40-й день после заражения составило 16,5-91,5 и 63,0-124,1 экз. соответственно. Этот факт указывает, по нашему мнению, на синергический тип взаимоотношений между вышеуказанными видами паразитов. При смешанной инвазии наблюдается аналогичная тенденция, как и при моноинвазиях, т.е. с увеличением дозы заражения повышается количество обнаруживаемых ооцист эймерий с 63,0 до 124,1 и снижается количество обнаруживаемых аскаридий с 91,5 до 16,5.

Среднесуточные привесы при смешанной инвазии были ниже, чем при моноинвазиях и, в зависимости от дозы заражения, составляли 9,5 -10,0 г, а в среднем - 9,8 граммов. В контрольной группе, где цыплята были «чистыми», т.е. неинвазированными, среднесуточные привесы составляли 27,5 г.

Таким образом, среднесуточные привесы при аскаридиозе были на 26,9%, при эймериозе на 51,6%, а при смешанной аскаридиозно-эймериозной инвазии на 64,4% ниже, чем в контрольной группе. Следовательно, при смешанной аскаридиозно-эймериозной инвазии наблюдается более значительное отставание в росте и развитии цыплят, чем при моноинвазии.

5. Показатели системы эритрона птиц в зависимости от различных факторов

В результате исследований выявлено, что преобладание малых эритроцитов у 12-дневных цыплят, по сравнению с 240-дневными птицами, а также нарастание их количества у 30-, 40- и 58-дневных свидетельствует о напряженности адаптационных реакций в системе эритрона в данных возрастных группах с максимумом у 58-дневных птиц (табл. 1).

Таблица 1

Распределение эритроцитов по объему (К1)\¥) у _птиц разных возрастов

Объем эритроцитов, (мкм3) Соотношение субпопуляций э ригроцитов, %

12 дн. Х±т* 30 дн. Х±п\ 40 дн. Х±т, 58 дн. Х + п\ 240 дн. Х±т,

32,4 0,6 ±0,09 2,7 ±0,27 2,5 ±0,17 1,9 ±0,16 0,8 ±0,05

43,2 3,1 ±0,16 9,1 ±1,22 10,2 ±0,88 41,6± 1,41 1,5 ±0,10

54,0 3,2 ±0,27 24,5 ± 1,28 38,5 ±0,44 27,9 ±0,81 1,6 + 0,11

64,8 15,9 ±0,56 24,5 ±0,96 18,9 ±0,50 13,2 ±0,27 0,9 ±0,11

75,6 22,2 ±0,73 13,4 ±0,43 И,4±0,21 9,9 ±0,11 4,4 ±0,39

86,4 16,4 ±0,22 7,9 ±0,23 8,2 ±0,07 3,6 ± 0,18 10,2 ±0,76

97,2 8,1 ±0,24 6,6 ±0,25 4,6 ±0,11 1,1 ±0,18 10,8 ±0,36

108,0 8,0 ±0,29 3,7 ±0,21 2,3 ±0,08 0,5 ±0,16 12,2 ±1,15

118,8 5,7 ±0,34 3,2 ±0,14 1,5 ±0,05 0,1 ±0,11 8,4 ±0,59

129,6 5,8 ±0,20 2,0 ±0,12 1 +0,07 ОД ± 0,05 9,7 ±0,31

140,4 4,0 +0,06 1,4 ± 0,13 0,4 ±0,03 0 8,3 ±0,25

151Д 2,7 ±0,12 0,5 ±0,06 ОД ±0,04 0 5,7 ±0,14

162,0 1,6 ±0,05 0,3 ± 0,05 0,2 ±0,03 0 6,0 ±0,18

172,8 1,2+0,08 0,2 + 0,03 0.1 + 0,02 0 5,8 + 0,16

183,6 0,6 + 0,05 0 0 0 5.1 +0,20

194,4 0,3 ±0,05 0 0 0 3,5 ±0,13

205,2 0,3 ±0,05 0 0 0 3,8 ±0,21

216,0 0,3 ±0,02 0 0 0 1,3+0,12

RBC, млн/мкл 2,51 ±0,03 2,60 ±0,19 2,75 ±0,04 2,89 ±0,19 3,47 ±0,03

У птиц напольного содержания в соотношении субпопуляций эритроцитов преобладали клетки со средними объемами, что указывает на отсутствие напряжения в системе эритрона. В группе же птиц, находившихся в условиях клеточного содержания, в популяции преобладали эритроциты с малыми объемами (табл. 2).

Таблица 2

Соотношение субпопуляций малых, средних и больших эритроцитов в крови птиц с различными условиями содержания

Условия содержания Содержание эритроцитов с объемами, %:

32,4-75,6 (мкм3) 86,4-151,2 (мкм3) 162,0-216,0 (мкм3)

Клеточное 58,0 38,2 3,8

Напольное 10,0 71,3 18,7

Следует полагать о напряженной адаптационной реакции красной крови птиц при клеточном содержании, когда количественный недостаток эритроцитов компенсируется появлением малых форм клеток эри-трона, которые легче проникают в капиллярную сеть и, вероятно, эффективнее участвуют в кислородном обмене.

6. Особенности эритроцитарного звена крови птиц при смешанных инвазиях

В результате исследований выявлено (табл. 3), что эритроцитов с объемом 32,4 мкм3 в крови инвазированных птиц содержалось больше (4,9±0,63%), чем у здоровых (1,9±0,16%). Последующие 4 объема клеток - 43,2, 54,0, 64,8 и 75,6 мкм3 преобладали в крови здоровых птиц, составив соответственно 41,6+1,41, 27,9±0,81, 13,2±0,27 и 9,9±0,11% против 39,8±2,21, 26,2± 1,75, 12,2±0,35 и 8,2±0,17% у больных (Р < 0,001). В сумме процент эритроцитов этих объемов был равен у здоровых 92,6%, а у больных - 84,4%, разница достоверна (Р<0,01).

Клетки с большими объемами чаще регистрировались у зараженных птиц, составив в сумме 8,7% против 5,5% у сравниваемой группы. Средний объем эритроцитов у здоровых птиц был равен 54,7 мкм3, а у больных - 55,3 мкм3.

Следует отметить, что у больных птиц в крови было повышено содержание самых маленьких и самых больших эритроцитов. А у здоровых преобладали клетки со средними объемами.

Таблица 3

Распределение эритроцитов по объему у здоровых и больных птиц

Объемы эритроцитов, (мкм3) Соотношение субпопуляций эритроцитов, %

здоровые, RDW Х±Шх больные, RDW Х±Шх

32,4 19 ±0,16 4,9 ± 0,63

43,2 41,6 ±1,41 39,8 ±2,21

54,0 27,9 ±0,81 26,2 ±1,75

64,8 13,2 ± 0,27 12,2 ±0,35

75,6 9,9 ±0,11 8,2 ±0,17

86,4 3,6 ±0,18 5,3 ±0,21

97,2 1,1 ±0,18 1,7 ±0,14

108,0 0,5 ±0,16 0,7 ±0,14

118,8 0,1 ±0,11 0,4 ±0,14

129,6 0,2 ± 0,05 0,4 ±0,11

140,4 - 0,1 ±0,07

151,2 - 0,1 ±0,11

162,0 - •

172,8 - -

183,6 - -

194,4 - -

205,2 - -

216,0 - -

КБС 2,89 2,77

Появление у больных птиц мельчайших эритроцитов, вероятно, обусловлено тем, что часть молодых незрелых эритроидных клеток, имеющих большой объем, из органов кроветворения попадает в капилляры. Там они максимально деформируются и подвергаются фрагментации, то есть делению на 2-3-4 малые клетки. Данные клетки способны проникать в капиллярную сеть, где и осуществляют газообмен с тканями. Таким образом, возрастание в крови количества малых и больших эритроцитов является терминальным адаптивным механизмом для приспособления организма больной птицы к условиям возникшей гипоксии. Поскольку часть молодых клеток при деформации может разрушаться путем гемолиза, в крови одновременно идут процессы гемолиза и фрагментации. Этим, по-видимому, объясняется несущественная разница общего количества эритроцитов в сравниваемых группах.

Проведенное сравнительное исследование осмотической резистентности субпопуляций эритроцитов здоровых и инвазированных птиц позволило оценить не только процент гемолиза клеток, но и их деформируемость.

Сравнивая осмотическую устойчивость эритроцитов в слабогипото-ничном растворе (0,46-0,52 %) в группах здоровых и больных птиц (табл.4) было выявлено, что уменьшение популяции клеток с объемами от 32,4 до 64,8 мкм3 происходило более активно в группе здоровых птиц - их количество сократилось на 56,4%, в то время как у птиц со смешанными инвазиями этот показатель был равен 10,6%. Это указывает на большую гибкость мембран эритроцитов здоровых птиц. Процент гемолиза при этом у больных птиц был выше, чем у здоровых на 4,7%.

Высокую осмотическую устойчивость к деформации проявили малые эритроциты больных птиц и в условиях высокогипотоничного раствора №0 (0,30-0,34 %): они сократились на 46,5% против 58,1% у здоровой группы.

Процентное увеличение макроцитов в условиях гипотонических растворов обусловлено переходом малых и средних клеток в разряд больших. Отмечено, что у здоровых птиц, уже в условиях слабогипото-ничного раствора, большая часть малых и средних клеток, набухая, превращается в большие. На этом их деформируемость исчерпывается, и в высокогипотоничном растворе они начинают интенсивно разрушаться.

У инвазированных птиц мембраны эритроцитов при погружении их в слабогитютоничный раствор оказались более устойчивыми к растяжению. И лишь в высокогипотоничном растворе переход микроцитов в нормо- и макроциты был существенным. При этом процент гемолиза был выше в группе здоровых птиц на 7,65%.

На рис. 3 изображены ЦМК здоровых и больных птиц. Показатели снимались с эритроцитов, помещенных в 0,46-0,52% раствор №0. Первая кривая, построенная по параметрам крови здоровых птиц, унимодальная, имеет вершину с координатами 86,4 мкм3 и 18,4%, RDW гомогенный, нормоцитарный, основание занимает все объемы за исключением самого большого - 216,0 мкм3.

Вторая кривая, отражающая цитометрические показатели больных птиц, смещена влево, то есть в сторону малых объемов, унимодальная, с вершиной на 54.0 мкм3 и 18,0%, представлена преимущественно микро-цитами RDW гомогенный, микроцитарный, основание расположено между 32,4 мкм3 и 216,0 мкм3.

Таблица 4

Распределение эритроцитов по объему в растворах №С1 различной концентрации у здоровых

_______и больных птиц__ _

Объем эритроцитов (мкч3) Соотношение субпопуляции эритроцитов, %

у здоровых птиц у больных птиц

Изотонический р-р №С1, X ± ггц. 0,46-0,52% р-р NaCI, RDW, X±mx 0,30-0,34% р-р NaCI, RDW, X±mlí Изотонический р-р NaCI, RDW, X ± mx 0,46-0,52% р-р NaCI, RDW, X±my 0,30-0,34% р-р NaCI, RDW, X ± mx

32,4 1,4 ±0,09 0,9 ±0,13 0,2 ± 0,02 2,4 ±0.13 0,8 ±0,14 0,6 ± 0,09

43,2 17,9 ±0,86 2,0 ±0,19 1,0 ±0,08 12,8 ± 1,01 12,5 ±2,25 2,7 ± 0,23

54,0 26,6 ± 0,54 2,5 ±0,13 2,3 ± 0,20 24,2 ± 0,43 18,0 ± 1,36 2,5 ± 0,24

64,8 20,6 ± 0,27 4,7 ±0,38 4,6 ±0,38 19,7 ±0,47 17,2 ±0,67 6,8 ± 0,26

75,6 14,1+0,38 13,3 ±0,73 12,0 ±0,36 16,2 ±0,36 14,0 ± 0,73 12,4 ±0,48

86,4 9,4 ±0,31 18,4 ±0,53 17,6 ±0,29 10,5 ±0,31 9,1 ±0,77 13,9 ±0,34

97,2 5,0 ± 0,27 16,2 ±0,22 13,2 ±0,26 6,2 ±0,29 6,0 ± 0,35 11,5 ±0,34

108,0 2,6 ± 0,20 10,5 ±0,40 10,2 ±0,18 2,7 ±0,12 5,4 ± 0,22 10,4 ± 0,10

118,8 1,0 ±0,06 9,9 ± 0,42 8,2 ±0,21 1,6±0,10 4,3 ±0,32 7,4 ±0,13

129,6 0,6 ± 0,04 8,5 ± 0,21 8,1 ± 0,37 1,3 ±0,08 2,8+0,19 9,1 ±0,13

140,4 0,4 ± 0,02 5,7 ± 0,22 8,9 ± 0,21 0,9 ± 0,06 2,8 ± 0,22 7,0 ±0,14

151,2 0,2 ± 0,02 3,4 ±0,23 5,3 ±0,17 0,3 ± 0,03 1,9 ±0,23 5,У ±0,18

162,0 0,2 ± 0,02 2,1 ±0,18 3,4 ±0,13 0,3 ± 0,03 1,6 ±0,20 3,5 ±0,18

172,8 0 1,0 ±0,12 2,8 ±0,14 0,3 ± 0,02 1,3 + 0,16 3,0 ±0,15

183,6 0 0,4 ± 0,05 1,0±0,16 0,3 ± 0,02 0,7 ± 0,09 1,4 ±0,11

194,4 0 0,3 ± 0,04 0,7 ± 0,06 0,2 ± 0,02 0,9 ±0,11 1,2 ±0,06

205,2 0 0,2 ± 0,02 0,5 ± 0,04 0,1 ± 0,02 0,6 ± 0,06 0,5 ± 0,03

216,0 0 0 0 0 0,1 ±0,02 0,2 ± 0,02

RBC 2,94 ±0,13 2,92 ±0,17 2,36 ± 0,21 2,98 ± 0,34 2,82 ± 0,09 2,62 ± 0,22

Рис.3. Цитометрические кривые распределения эритроцитов по объему в 0,46-0,52% растворе №0 у здоровых и больных птиц

На рис.4 изображены цитометрические кривые распределения эритроцитов по объему в высокогипотоничном растворе у здоровых и больных птиц.

Различия идентичны предыдущим, но не столь существенны.

Из полученного следует, что размах между минимальной и максимальной резистентностью эритроцитов у больных птиц значительно шире, чем у здоровых. То есть, в популяции эритроцитов больных птиц есть субпопуляции как высокоустойчивых, так и низкоустойчивых к осмотическому давлению клеток.

Можно предположить, что этими клетками являются молодые незрелые эритроциты, выбрасываемые из кроветворных органов в ответ на паразитарную интоксикацию, следствием которой является гемическая, циркуляторная и тканевая гипоксия.

Комплекс проведенных исследований по изучению процессов, происходящих в системе эритрона у птиц в зависимости от возраста и условий содержания, больных (инвазированных) в сравнении со здоровыми, а также определение резистентности эритроцитов к гипотоническим растворам выявили, что возникающие морфологические изменения в эритроцитах стереотипны и не зависят от причин, вызвавших развитие данного адаптивного синдрома.

\с(ткшЗ)

1*"эдоровые "■•"•больны«

Рис. 4. Цитометрические кривые распределения эритроцитов по объему в 0,30-0,34% растворе №0 у здоровых и больных птиц.

Изучение влияния смешанной инвазии, возраста птиц (1-60 дней), условий клеточного содержания, осмотического давления на систему эритрона показало очевидную однонаправленность процессов, происходящих в системе красной крови: увеличение содержания в популяции эритроцитов субпопуляций малых клеток; уменьшение среднего объема эритроцитов; увеличение осмотической резистентности субпопуляций малых эритроцитов. Увеличение количества больших клеток и среднего объема эритроцитов у инвазированных птиц обусловлено острой гипоксией, при которой выброс незрелых клеток из органов кроветворения преобладает над их фрагментацией, то есть механизмы компенсации в данном случае не эффективны. Таким образом, морфофункциональные изменения популяционного состава эритроцитов можно рассматривать как диагностический и прогностический фактор болезни.

Метод дифференциальной цитометрии с использованием кондукто-метрического счетчика микрочастиц Р1со5са1в (Ря1-4) нетрудоемок, затрачивает мало времени, при сравнении с идеальной ЦМК распределения эритроцитов по объему, позволяет зарегистрировать патологические сдвиги в популяции эритроцитов. Использование данной методики в вет-лабораториях в качестве оперативной экспресс-диагностики при различных патологиях птиц позволит объединить два фактора: диагностический

и прогностический. Метод сочетанного использования дифференциальной цитометрии и определение осмотической резистентности эритроцитов для оценки резервных возможностей системы эритрона может способствовать эффективному биомониторингу при проведении превентивных мер при паразитозах птиц. Определение среднего объема эритроцитов, их распределение на субпопуляции по объему, оценка способности различных субпопуляций к деформации - надежные методы, позволяющие следить за динамикой болезни, определять появление различных осложнений.

ВЫВОДЫ

1. В условиях Центрального Кавказа у птиц паразитируют следующие виды кишечных паразитов: Ascaridia galli, Heterakis gallinarum, Eimeria tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, E.praecox, E.mitis, E.brunetti, Cryptosporidium baileyi.

2. Наибольшее растространение имеют: Ascaridia galli - 67,7%, Eimeria tenella - 71,2%, Cryptosporidium baileyi - 29,4%, E.acervulina -13,7%, E.maxima - 8,6%. Инвазированность остальными видами гельминтов и эймерий составляет менее 1% от обследованной птицы. Преобладает одновременное паразитирование аскаридий с эймериями (46,5%) и аскаридий с криптоспоридиями(13,4%).

3. Возрастная и сезонная динамика инвазированности птиц кишечными паразитами имеет определенную закономерность:

- эймерии регистрируются с 12-дневного возраста с пиками инвазированности на ЗО-й и 45-й дни жизни;

- криптоспоридии регистрируются с 17-дневного возраста с пиком инвазии на 50-й день жизни;

- аскаридии обнаруживаются с 28-дневного возраста с постепенным подъемом инвазированности к 3-месячному возрасту до максимума;

- смешанная аскаридиозно-кокцидиидозная инвазия встречается с 30-дневного возраста, с нарастанием ЭИ к 90 дню жизни цыплят;

- зараженность птиц паразитами наивысшая в летне-осенний период (ЭИ=69 %), наименьшая - в зимний период (ЭИ=30 %).

4. Паразито-хозяинные отношения гельминтов и простейших в организме птиц носят синергический характер. При смешанной инвазии наблюдается более значительное отставание в росте и развитии цыплят, чем при моноинвазии.

5. Предложенный нами метод дифференцированного исследования эритроцитов птиц позволяет проследить физиологические и патологические процессы, происходящие в системе эритрона.

6. Преобладание в популяции эритроцитов 12-дневных цыплят малых клеток, а также тенденция к их увеличению у 30-, 40-дневных, с пиком в 5 8-дневном возрасте, свидетельствует о напряженности адаптационных реакций в системе эритрона в данных возрастных группах. При клеточных условиях содержания происходит снижение общего количества эритроцитов и возрастание субпопуляций малых клеток, что расценивается как адаптационный синдром.

7. Выявлены закономерности процессов адаптации системы эритро-на птиц к смешанной инвазии: появление субпопуляций самых малых и самых больших эритроцитов вследствие выброса из кроветворных органов молодых клеток с их последующей фрагментацией.

8. Сочетанное использование дифференциальной цитометрии и определение осмотической резистентности эритроцитов выявило закономерности ответа системы эритрона на гельминто-протозойную инвазию птицы: появление в популяции эритроцитов как высокоустойчивых, так и низкоустойчивых к осмотическому давлению клеток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработанный нами метод дифференциальной цитометрии с использованием кондуктометрического счетчика микрочастиц Р1со5са1в (Ря1-4) в сравнении с идеальной цитометрической кривой (ЦМК) распределения эритроцитов по объему позволяет регистрировать патологические сдвиги в популяции эритроцитов. Данная методика рекомендуется в качестве оперативной экспресс-диагностики при смешанных инвазиях птиц как диагностический и прогностический фактор.

2. Для оценки резервных возможностей системы эритрона птиц, предлагается применение метода сочетанного использования дифференциальной цитометрии и определения осмотической резистентности эритроцитов, что может способствовать эффективному биомониторингу при проведении превентивных мер при паразитозах птиц.

3. Материалы исследований используются в учебном процессе Кабардино-Балкарской ГСХА, КБ ГУ. а также сотрудниками Института экологии горных территории и специалистами Госветслужбы республики.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кожоков М. К., Тисленко В. М., Алабов А. М. Интегрированная система мероприятий при микропаразитоценозах птиц // Проблемы и перспективы повышения продуктивных и племенных качеств сельскохозяйственных животных: Сб. научн. статей. Часть II. КБГСХА-Нальчик, 2000.- С. 45-46.

2. Кожоков М. К., Алабов А. М. Морфологическая структура эритроцитов птиц // Проблемы и перспективы повышения продуктивных и племенных качеств сельскохозяйственных животных: Сб. научн. статей. Часть II. КБГСХА-Нальчик, 2000.- С. 79-82.

3. Алабов А. М. Динамика эритроцитарного звена крови у бройлерных птиц разных возрастов // Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 20-летию КБГСХА.- Нальчик, 2001. - С. 53-54.

4. Кожоков М. К., Алабов А. М. Рекомендации по применению кондуктометрического счетчика микрочастиц Picoscale (Psl-4) для количественного и качественного анализа эритроцитов при гельминтозах птиц // Москва-Нальчик: 2002. - 24 с.

5. Кожоков М.К., Алабов A.M. Иммуннобиохимические показатели крови при ассоциативных болезнях птиц // Матер. докл. Всеросс. на-учн. конф., посвящ. 125-летию со дня рождения К. И. Скрябина. Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями.- Вып. 4.- Москва, 2003. -С. 191-194.

6. Кожоков М.К., Тисленко В.М., Тутуков Р.Х., Алабов A.M., Ca-банчиев З.Х. К вопросу гельминтофауны домашних птиц Центрального Кавказа // Матер. докл. Всеросс. научн. конф., посвящ. 125-летию со дня рождения К.И. Скрябина. Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. - Вып. 4.- Москва, 2003. - С. 195-197.

7. Кожоков М. К., Алабов А. М. Сравнительная характеристика популяции эритроцитов птиц разных пород и при различных условиях содержания // Материалы Всероссийской науч.- практ. конференции «Проблемы и перспективные направления прикладной биологической науки в начале XXI века».- Ч.П.- Москва-Нальчик, 2003. - С. 98-101.

8. Кожоков М. К., Арамисов А. М., Алабов А. М., Сабанчиев 3. X. Проблемы изучения симбиоценозов птиц в современных условиях // Сб. науч. трудов уч., асп. и соискат. «Аграрные реформы: этап четвертый (опыт, проблемы и перспективы)» - Нальчик. Вып. 4-03 (агробиологич науки). - 2003.-С.49-51.

9. Кожоков М. К., Алабов А. М. Особенности эритроцитарного звена крови при смешанных (ассоциативных) полипаразитозах // Сб. за-

вершенных научных работ в области АПК, рекомендуемых для внедрения в производство - Нальчик, 2004. - С. 345-349

10. Алабов А. М. Об осмотической резистентности эритроцитов у бройлерных цыплят // Сб. завершенных научных работ в области АПК, рекомендуемых для внедрения в производство - Нальчик, 2004. - С. 350353.

11. Кожоков М. К., Алабов А. М. Методика сочетанного исследования популяции клеток эритроидного ряда с определением их осмотической резистентности при смешанных инвазиях птиц (рекомендации). -Нальчик, 2004. - 20 с.

Сдано в набор 4.04.2005г. Подписано в печать 5.04.2005г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная № 1. Гарнитура «Таймс». Тираж 100 экз. Издательско-полиграфический центр ДГПУ. г.Махачкала, ул. Ярагского,57.

' t- • •

( ;■-.

V * \ч

22 ДПг ¿:C5

f

t

2495