Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфо-физиологическая характеристика бактериальных клеток и колоний при тепловых воздействиях

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Морфо-физиологическая характеристика бактериальных клеток и колоний при тепловых воздействиях"

Санкт-Петербургский Технологический институт

На правах рукописи

ИаЕ'ЛЬЧЕНКО Оксана Владшнросна

жК'~шшошттт жштсвт.

ЕШТРМШШХ МЕТОК И КЮЮНИй ПРИ ТЕШЮЕНХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ

03.00.23 - йиогехнологкя

АВТОРЕФЕРАТ

диссзртаирш на соисненке ученой степени кандидата бнолопгсесгшх наук

Санкт-Петербург, 1992

Работа выполнена в лаборатории электронной микроскопии Всесоюзного научко-иссяедозательского института особс чистых биопрепаратов.

Начны е ру ко в о ди т е ли:

доктор медицинских науд,

профессор ТЕЦ Виктор Вениаминович

кандидат химических наук ПЕТРОВ Леонид Николаевич

Официальные оппоненты:.

член-корреспондент.Российской АН, доктор биологических наук,

профессор ГРОМОВ Борис Васильевич

\ доктор ыедицинских наук,

профессор ГРАНСТРЕ1.1 Константин Олегович

Ведущее учреждение: Ленинградский научно-исследова-гельский институт вакцин и сывороток.

Защита состоится иб&л- 1992 г. в часов в аудитории с/т. щ, на заседании специализированного совета Д 063.25.09 при Санкт-Петербургском технологическом инстнтуге.

С диссертацие" можно ознакомиться в библиотеке института.

Замечания и отзывы по работе, заверенные гербовой печатью, в одноы экземпляре просим направлять по адресу: 198013, Санкт-Петербург, Загородный пр., 4-9, Санкт-Петер бургский технологический институт, Ученый сове";.

Автореферат разослан с?^ афиг,_ 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат технических наук Т.Б.Лисашчая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тега. Степень гетерогенгости микробных популяций при культивировании является одним из ва::не:иих . показателей, определяющих уровень биоснитетическоя активности микроорганизмов. Для контроля за физиологическим состоянием бактери;; в процессе биотехнологичесного производства необходимо создание комплексной спстеш адекватной оценки их морфо-функционалыгай активности в норме и в условиях стрессовых воздействий. Однако, характер и специфичность иорфо-ензиологичес.-шх изменений в клетках при действии экстремальных факторов остаются практически неизученными. В настоящее время интенсивно'исследуются ин-дуцибельные систеиы изменчивости - тепловой шок и sos-ропаративныИ ответ, контролирующие активность генов, участвующих в адаптации- бактерий к постоянно изменяющийся условиям окрузавдей спеды. 3 то ■за чремя, cíe; зния о морфология бактерии и архитектоника колоний в условиях активации стрессовых систем практически отсутствуют. Сравнительный анализ дорфо-фнзиологических характеристик бактерии в норыо и в условиях стрессовых воздействий соответствует современным направлениям микробиологической не-уки и может быть использован для оптимизации о'иотехнологичео-кого производства.

Работа выполнена в соответствии с темами ИЧП-0681, МП-0383, ИЧП-0786 и СПГ-0181.

Цели и задачи работы. Целью настоящей работы было изучение морфо-физиологичзской гетерогенности шшробшх популяций, выращенных в жидкой и на плотной питательных средах, а также оценка изменений морфологических признаков микроорганизмов в условиях теплового воздействия и участие ь регуляции их жизнедеятельности системы белков теплового шока. Для достижения ьтей цели в работе были поставлены следующие задачи: ' i 1

- выявить ультраструктурные особенности бактерий, находящихся в нптактном состоянии;

-- проследить джнймику монологических изменений в бактериальных клетках в процессе развития микробных популяций в жидкой питательной среде; ^

- ксследс .зать ультратонкуп организацию колоний;

- гзедедовать структуру микробных популяций при чей-лог-ж воздействиях;

- огределить специфичность ультрасгруктурних иакс-ио-t;i¡ñ в клетках при тепловых воздействиях;

- выявить участие htpR -гена б ишененш морфологиис—

признаков знтеробактерий при «тепловых воздействия;:.

Научная новизна- Проведено комплексное олехтронно-

шгсроскопигеское исследование па клеточном и популяцион-иоы урошях микроорганизмов, отличавшихся' строением юге» точной стенки it температурным оптюфгом роста. Выявлена особенности морфологической гетерогенности популяций гргл:-отрицательных .и гра?едодс«1гаеяьнык о'акогерий, развиваиярхсп в кидкой и ка плотной питатолышх средах, а такле показаны общие закономерности изменений на разню: сроках выращивания. Прочавздел анализ ультратолкой организации колонн;! широкого /¿руга микроорганизмов. Впериге покеаанг, тао ico— лонии покрыты полержогткой пленкой, в основе, которой находится элементарная мембрана; колонии рладелеш па оок», содержащие опраделе^шй морфологически» тик клеток; нелду ¡слетками п колониях выявлено два типа контактов Сплотпоз слипание и цитоплазыатическиз мостккк), благодаря которьм они оброоуаг слошуз, трехмерную систему.

Установлена специфичность ультрасгруптухяшх 'преобразований б цитоплазме бактерий при тепловых воздействиях (некристаллические гранулы), при втом шяглоки морфологические комзненкя, коррелирующие со свойствами их шеклеточ кой ерэдп.

Бпглвлсг-ь- морйолох'исгзеккз К8МСН61Ш»" о икеткех п колонки: еятеробактариР,, дз$вк&шк no htpR -гену система белков теплового шока (полегая поверхностная пленка на ранних стадиях развитая колоний; фгламеитация клеток- в результате нарутштя процесса септообразоваиия). Установле-

но, что грануляция цктошшзш при сублегальном тепловом воздеПстЕШ обусловлена изменением регуляции метаболизма htpR -геном.

Практстеск&я значимость. Разработанные метода и приемы перспективны для апалиаа мор^га-физколсгглесксго состояния микробных популяций на рааных этапах бкотехнологн-ческого производство (посевной материал, ферментация, получение готовых форм препаратов). Результаты исследований морфо-физиологкческой гетерогенности микробных популяций позволяют оптимизировать резни биотехнояогических процессов и урогонь бпосшиетячееной активности бактериадьшгс геультур. В частности, комплекс рсяработашшх методик ;;п-робкроваи при исследования механизма действия синтоите-cíui:í углешдов при производстве »ш, tico позволило по-виск-гь sraío:íTHU'5íon?'b. тйхяояогтесиого процесса.

Рооудьтаст кськедоришп удлтрпюшгого сгроеч;;;т ко.ю» iroiJ (поверхностная плен,:'» на itoioínfírs; ooitu в колонтгс, содсрдсгр»« опрздехгенгадй щзфо^оычогтоакяР. чип ллоточ, хсоитскти хлэ'Гка^п в тгалок!№Г. ^еянлеточкин i«a*p'«c}

необходимо ушъгсать при рапробслсо ' ноеуг уоходоп ясае-ния ц дгпгкосттт яг'^ящчогсйос заболеваний.

ЯЬлдгсеюгае гла'герйрлм К новые данные сб ультрастру;с~ турной организации «леток, колоний а микробных популяций, а 'гагс.о 'шгострвдиштй матсркал) используются в курсах лекций и практических занятий по общей и медицинской робпологий для студентов СПбШ км. И.П.Павлова н слушателей СПбГИДУЬа.

Апробация работа. Матормэли работы долоаены на Международной научной конференции ".Multicellular Behavior of Bacteria in nature, Industry, and the Laboratory (Woods itou.0, Massachusetts, 1990); на Всесоюзных научных конференция::: "Регуляция микроб: ого метаболизма" (Пущино, 1989); "дшитирояанпе и ингибирование микроорганнвмов" {Пущине, IS89), "Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии" (Махачкала, IS90 ), "Биотехнология и биофизика микробных популяций" (Алма-Ата, 1991),

"Сенсорные системы" (Москва, 19-2).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 статей.

Структуре, и объем диссертации. Диссертация написала на 24^ с.'раницах машинописного текста и состоит из введений (7. страниц), обзора литературы (26 страниц), методик исследова.шя (14 страниц), главы с изложением полученных фактов (116 страниц), обсуждения результатов исследования (34 страницы), заключения ( 1 страниц), выводов (2 страна ци), списка литературы (26 страниц) и приложений (3 страницы) . Библиография включает в себя 233 литературнше источника, в том числе 151 работа иностранных авторов. Работа иллюстрирована 104 олектронограш&ми, -9 рисунками и II таблицами.

ООдайАНИЕ РАБОТУ

Материалы и методы исследования. Объектами исследования служили 15 штаммов микроорганиемов, относящихся к 7 различным видам мезо- и термофильных бактерий: Escherichia coli.., Shigella flexnori, Salmonella typhimurimu, ßtaphylococcuo aureua, Erevibactcriun flavua, Bacilluo thormononliquefaciena, Bacillus toatus, полученных из музеев культур СПбЖ им, И.П.Павлова, НИЭЛ им. Пастера, ГИСН им. Л.А.Тараеевича, ЖЯ5 ш.Б.П.Константинова.

Микроорганизмы культивировали в стандартных условиях, рост оценивали по оптической плотности и количеству колоний на плотной питательном среде.

Изучение ответных реакций бактерий на стрессовые воздействия проводили на клетках, выращенных до логарифмической фааы роста, отделенных от нулмурольной среда и ресуспендированных в физиологическом растворе.

Тепловое боьдсЙстеко осуществляли двумя способами: одноразовое - инкубация бактерий nja-s необходимой температуре в течение 15 мин и постепенное повышение температуры с шагом 2-4,°С, после чего проводили отбор проб для электронно-микроскопического анализа и определения 2ri-

юглощэщих продуктов во внеклеточной среде. Число жизне-зпособных клеток после стрессовых воздействий определяли нуте!.' высева ни полные и селективные питательных среда. Высушивание бактериальных суспензий проводили в тонком слое жидкости в эксикаторе с пятиокисью фосфора при комнатной температуре в течение суток. Кислотный и щелочной шоки создавали, инкубируя бактериальные суспензии в цитрат-фосфатном буфере рН-4 и 9 соответственно, в течение 15 минут.

Спектры поглощения в ультрафиолетовой (240-В50 ни) и ближней инфракрасной (2200-1800 юл) области получены на двухлучевом спектрофотометре Acta WII (веокл-.ал, США ).

Ориентацяонно-кондуктометрические'измерения проводили на установке (Войтылов В.В., IS86 .).

Электронно-шкрсскопические методы; I) Позитивное окрашивание (Brenner 3., Hörne R., 1259 ); модификация метода позитивного окрашивания состояла в мгновенной обработке препаратов контрастером меньшей концентрации (0,1% -ный водный раствор уранилацетата), не более чем через 30 сек после извлечения бактериальных клеток из установки: время обработки не должно превышать 30 сек; 3) метод ультратонких срезов СHayat М., 1970); элект-ронно-цитохшичесное выявление полисахаридов (Kobayasl Т, 1971 ); 5)сканирующая электронная микроскопия (Black J., 1974); 6)методы исследования ультратонкой организации колоний: а - отпечатки с колоний окрашивали уранмлацетатом; б - ультратонкие срезы целых колоний получали вводя фикс-саторы в основание колоний на агаре и увеличивая продол-»ительность фиксации, обезвоживания и заливки в смолу; ' в - скан..рунцая электронная микроскопия отпечатков с колоний и целых колоний. Препаратч просматривали в просвечивающем электронном микроскопе JEM -ЮОС и в сканирующем электронном микроскопе JSU -35С.

Морфометркческий анализ осуществляли на анализаторе изображения IBAS-I ( Германия ), при этом число клеток

подвергавшихся статистической обр?ботке составляло не менее трехсот в каждом отдельном случае.

Результаты и обсуждение.

I. Морфологические типы клеток

В условиях периодического культивирования в жидкой питательной среде и при формировании колоний выявлена гетерогенность клеток E.coli Ы-17 , b.flavum E-53I по таким морфологическим признакам как: форла, размеры, ультратонкое строение клеточных органелл. Методом ультратонких сре зов в структуре микробных популяций, выделено не менее 5 основных морфологических типов: I - морфологически интакт ные (делящиеся и к-¡делящиеся) клетки; 2 - бактерии с начальными деструктивными изменениями в клеточной стенке и цитоплазме; 3 - инволюционные формы; 4 - частично или полностью автолизированные клетки; 5 - покоящиеся, неспоровые формы. «¡орфометрический анализ показал, что развитие любой микробной популяции сопровождается изменением соотношения различных морфологических типов клеток, входя щих в ее состав.

Для оценки степени гетерогенности микробной популяции был применен модифицированный метод позитивного окрашивания уранилацетатозл, позволяющий в качестве одного из критериев использовать интенсивность электронной плотности цитоплазмы. С помощью этого метода во всех исследованных микробных популяциях, независимо от строения клеточной стенки бактерий и температурного оптимума среды обитания, выделено два класса клеток: I - электроню-проз-рачные, 2 - электронно-плотные. Морфометричзские исследования бактерий, проведенные на анализаторе изображения ibas-i (Германия), подтвердили корректность разделения микробной пс ^уляции на два отдельных класса, поскольку линейные размера электронно-прозрачных и электронно-плотных клеток E.coli ы-17 различались на 39%, а объемные на 290% ( таблица I ).

Данные морфологического анализа совпадают с резуль-

Таблица I.

Линейные и объемные размеры электронно-прозрачных и электронно-плотных клеток E.coli M-I7

клеточные параметры

электронно-

прозрачные

клетки

элекгронно-

шютние

клетки

периметр

площадь

объем

4,67 + 0,05 мкм 29,6 + 0,6 шсм2 378+8 игл3

3,50 + 0,04 мкм. 12,9 + 0,2 мкм2 97 +2 мкм3

гатами, полученными методом ориентационной кондуктсмет-рии ( таблица 2 ).

Таблига 2. ■

Значения средн&1'0 радиуса клеток E.coli il-I7, порченные с помощью иорфометрического анализа электронно-микроскопических препаратов (Э.'Л) и метода ориентационной кснруктометрии (0К)

Электронно-прозрачные Электронно-плотные клетки клетки

Ж 0К ЭМ 0К

(мкм)

т 0,59 + 0,04 0,57 + 0,05 0,39 + 0,02 0,35 + 0,04

т - радиус сферы эквивалентной по объе!.^у измеряемой клетке.

Правомерность выделения электронно-прозрачных и электронно-плотных клеток в отдельные классы подтверждается данными по ультраструктурной организации их клеточ- . них органелл (таблица 3 ).

На основании анализа размеров клеток, интенсивности

Таблица 3.

Ультраструктурная организация электронно-прозрачных и электронно-плотных клеток В.coli ц-17 °

Морфологические типы Пор- клеток фоло-гические признаки Электронно-прозрачные Электронно-плотные

формы клеток палочки правильной формы с закругленными концами более узкие и мелкие палочки правильной формы с закругленными концами

наружная мембрана контур ровный с незначительными изгибами контур извилистый 1

периплазматиче-ское пространство не выражено расширено, заполнено электронно-плотным веществом

цитоплазма диффузно заполнена белковс-рибосо-мельным комплексом компактно заполнена белково-рибосомальным комплексом

рибосомы контуры четко очерчены рибосомы плотно прилегают друг к другу, контуры плохо различи.®

нуклеоид зона ярко выражена, сконцентрирована в центральной части цитоплазмы или диффузно распределена в ее толще зона редко выявляется, так как сильно сокращена

нити в различной морфологической форме в конденсированном состоянии

электронной плотности цитоплазмы, ультраструктурной организации клеточных органелл получена комплексная характеристика олектронно-г тотных клеток.

Морфологическая интактность структурных компонентов электронно-прозрачных клеток соответствует представлению об активном характере их метаболизма, в то время как изменение ультраструктуры электронно-плотных клеток свидетельствует о снижении уровня метаболической активности. Аналогичные изменения морфологических признаков покоящихся клеток описаны у широкого круга эукариотических организмов (Епифанова О.й. с соавт., 1963 ), В пользу того, что выделенные нами электронно-плотные клетки относятся к покоящимся формам свидетельствуют результаты электронно-микроскопических наблюдений за ними в ходе культивирования и действия экстремальных факторов. В первом случае алектронно-плотные клетки выявляются в посевном материале, их численность падает в логарифмической фазе роста и возрастает к концу выращивания (рис. I).

Во втором случае их могчо обнаружить при постепенном понижении и повышении температуры инкубационной среды, а также в хранящихся культурах и регидратированных препаратах.

Таким образом, результаты изучения морфологии бак-

1 посевной материал (0 мин),

2 - начало логарифмической

фазы роста (45 мин), 3 - серединёГ логарифмической

1фазы роста ( 90 мин ), 4 - начало стационарной фазы

роста (240 мйя ). Рис. I. Содержание электронно-плотных клеток в микробных популяциях В.coli И—17 на разных этапах культивирования

терий, выращенных в жидкой и на плотной питательных средах, позволяют считать, что образование покоящихся (электронно-плотных) клеток является универсальным свойством, присущим различным прокариоткческим организмам, независимо от строения их клеточных стенок и температурного оптимума среда обитания.

2. Ультраструктурнеч организация колоний

Особого внимания заслуживают данные, полученные при изучении ультратонкой организации колоний. Разработанные в настоящей работе методы приготовления электронно-микроскопических препаратов из отпечатков с колоний и ультратонких срезов целых колоний позволили выявить некоторые особенности их строения и уровень сложности их о р г а -к и з а ц и и.

Гетерогенность клеток в колонии. На основании анализа серии ультратонких срезов колоний разного Бозраста в.coli м-17 установлено, что приблизительно с 36 часа выращивания, в 'их толще происходит .дифференциация на участки,.в которых.содержатся клетки, отличающиеся по ряду морфологических признаков. Так например, л центральной части колонии образуется незначительная по'размерам зона, содержащая бактерки с деструктивными изменениями в клеточной стенке и цитоплазме, а-такте практически полностью . автолизированные.микроорганизмы - "клеточные тени". С течением времени дифференциация колоний усиливалась. Через 72 часа роста колонии представляли собой сложную по своей орггчизации структуру., в состав которой наряду с увеличиваемся в размерах центральной зоной автолиза, входили участки, находящиеся р основании и на поверхности колонии, вк цочавщие значительное число покоящихся электрснно-плот-нызс клеток (рис.2 ).

Поверхностная пленка колоний. Методом сканирующей элзктронноГт микроскопии на поверхности колоний всех исследованных в работе бактериальных штаммов обнаружена пленка. Ренее, сходные образования наблюдали на поверх-

Таблица 4.

Структура (соотношение морфологт-гпоскях типов клеток в '¡икробиьп: иоцу/гяциях Л.coli i:-X7 при рас;«гс температур й" Сп % )

Темпорь гуро гк-Мор» кубоцнешюй

фо;хогк- среды,

^тйстоле о«

сипя ктгегок '

3£-'Л • <ÜM5 G^-CG 60-75

Морфологически тчзктпыа 01 ,Деструкция в клеточной стопке !>

Деструкция в tyrroroiRSuo К,~еиш с И0!ср1!стг.г,л;1':еск!!-ми грпнулямя п щпоатоя'о Лвзчшюировшпи? к;гспги <*-

71

•1

40

6 4

стпллпческтге гранул. Во втором - «ропехедг^ acconin-rpocs-п.чз бяктсрпп в киого'пмо огрсглк.ч

Регуляция v.ay^пя-ьегс проиессон' со сторона о'сягоп сиетс:г: гепяопого «гогл б;аа исследовала на кодслп ¡ш' htpa-rcny mm-

МО53 - П.coll EC4I00 JitpRT.5 !I «„fl'j-r.ori ViPXSIO; Известно, что htpR~rc:i ясжкяся o.n?n.,t гс» оопоя^?;- регуляторов cmvcim Сспкоп теплovovo two, а иутгтпко no огону гену клетки уграчлпэт:? сшеобаг-счь р? тг: npi тсыпора-турэ шве 42°С. Ihnsn Судо по?с?-".:;и,, \::о ¡уЛжтхъ по htpR -гепу ejwjoci щоу^ущю psO;j-*«:t • г-тя0ке.1ксаг.с'3г-гчю8. Последнее шрюгяотся.в cur.nr.'.nn-.-.'fi wit

пленки большой ш^п по cporii''и •-> а доггщ В

1ЯТкробш.с: шпуляцпя?: г^гл-яглс« о -^..ао оиггова-

гшб больного 'тела п?г;>'с?лт/с:;.' " (¡ffifi, г.г'.зг.г >" пг<> р •jty;«-.'чп-см сшгеза п^рогоро/пг;,

Исследомп'з уях зрпуоогей bpv< iwnvpn rr.^roz полоний с дефеггапп iitpn~rcHo« поп-тало. пга :::с

2

при першюсизних температурах (50 и 37°С) приводит к образованию некристаллических гранул в,цитоплазме, появляющихся в клетках диких штаююв при суСлоталъпих тепловых воздействиях.

Анализ ультратонких срезов колоний, образованных бактериями с дефектным htpR-генои, вылил неописанные ранее признаки их быстрого старения, Дифференциация колоний на участки, содержащие определенный морфологический тип кле-трк, как было указано на рис. I наблюдается у путантных по htpR-гену штампов у;::е к концу 1-х суток роста, в то время как. у диких итанмов эти изменения проявляются -на третьи сутки роста.

Таким образом, данные, полученные с помощью сравнительного электронно-микроскопического анализа исходных и дефектных по htpR-гену клеток и колонии указывает на участие итого гена 2 регуляции целого ряда ыорфо-$изио-яогическял' признаков бактерий к служит доказательством того, час-специфическая реакция ка тепловое воздействие, 'ЕЫраяащаяся в образовании искри стаяли ческих гранул в цитоплазме, является оледопшеу аэаенешш регуляции этих процессов со сторош оисгеш теплового цока., ■ .Б Н В О Д Н .

1. КошшжошШ злектроинс-^ишсг'оскопический анализ 15 станмов» отпосяцихся к 7 видам шкроорганизиов, выявил большое, разнообразие морфологических випов клеток! инта-ктчыо, иивс пецпонкые» частично деструкгурировашше, авто-mччрованнм и покоящиеся. Степень гетерогенности иикроб-шг;: популяций проявляется в изиеьениа сооанояения иорфо-л( гичес'ких типов клеток и зависит от фазы роста культуры.

2. Разработана модификация метода позитивного окра-ш''ваяия, о помощью которой бактериальные клетки всех исследованных в работе видов микроорганизмов могут быть разделены на два класса: электронно-прозрачные - активно ме-таболизирующие и электронно-плотние, с меньшими -.»шейными и обменными размерами и пониженной пзтаболическоп актив-

ностью - вегетативные покоящиеся формы.

2. Никробные колонии исследованных видов микроорганизмов имеют сходное строение п цредстачлтот собой сложные кооперативные системы, отграничивавшиеся от внешней среды со стороны воздуха поверхностной пленкой. Клетки, входящие в сс-тов 343 пограничных слоев колонии, как со стороны воздуха, так и со стороны агора, округеньг капсу-лоподобной оболочкой, что подтверждает существование специальных структур, способствующих сохранений целостности микробных популяций.

4. Мекду клетками в колониях обнаружено два типс. 'контактов: первый - плотнее слипание клеточшк стенок отмечен у грамотр:щательн!л: и у грамположитолышх бактерий; второй - вдтгоплаоматкчэск'лз мостики (пере:етгки) встречается только у грелготргщагельньк гпшрооргшизиоп.

5. Тепловое воздействие вызывает в ультраструктуртгой организации бактерий, незавиешо от строения их клеточных стенок и температурного опп:мума среда обитания, неспеци-фпческю (деструкция клеточной стенки) н сшцг^кчюскне (образование некрисгаллическцх гранул в цитоплазме)изменения.

6. Грануляция цитоплазм в клетка£ диких (при сублетальных температурах 6I-55°C) '.и дефекгных по btpR -гену ('при пермиссивинх температурах Е0,37°С) штаммов оширихкй и шпгелл зависит от изменения регуляции метаболизма htpR-геном. ► .

7. В результате комплекте: исследований (электронная микроскопия, морфометрия, КС-, УХ'-спектроскопил,орн-ентационная конлуктометрия). устслотжап взаимосвязь хлек-ду функциональным состоящим микроорганизмов, структурой популяции и свойства.,ni среди обптат'л.

Список работ, опублгасовзтгс по reus рнгс.ерттш:

I. Андреев О.Л., Гнбатьтепка O.D., ¡Гслпсса О.Н. .Исакова Н.П., Кабоев O.K., Тош^пи II.K. Характеристика термофильных бактерий, ендслсшшх из гертшх исготашков Кил-

чатки ff Микробиология. - IS83. - Т.52, № 3. - С.496-504.

2. Амосов Ф.Г., Андреев O.A., Рыбальченко О.В. Влияние полиамидов на термоустойчивость клеток Escherichia со li м-17 при тепловом шоке Ц Микробиология. - 1988. - Т. 67. - Вып. 3. - С. 499-502.

3. Климов H.A., Батарин В.И., Рыбальченко О.В., Андреев O.A., Образование внеклеточной прот^азы клетками термофильных оактешй // Микробиолог!л. - 1968.' - Т.57. -Выл.4. - С. 579-585.

4. Амосов (1'.Г., Рыбальченко О.В. Влияние, полиаминов на морфологию и жизнеспособность клеток микроорганизмов //В сб.: Передов, и производств, о it-it в мед. и микроби-ол. промьглл,, рекомендуемый для внедрения. - ВШИСЭЯГИ.

- М. - I9G5, - Вып. 4. - С. 32.

5. Рыбальченко О.В., Савкова Г,А. Олектронно-микро-скопическое изучение микробных популяций грамотрицатель-ных бактерий, развивающихся на плотных и в жидких средах // В сб.: Передов, и производств, опыт в мед. и микроби-ол. промьют., рекомендуемый для внедрения. - ВНЩСЗЙТИ.

- М. - 1989. - Был. 4. - CV 32-34.

6. Тец В„В. Рыбальченко О.В., Савкова Г.А. Кооперация и■специализация глсуой и микробных колониях // В im.: Остр, юшечте инфекц,-Л,- ISS0. - Вып. 23. - С.54-62.

7. Тец В.В., Рыбальченко О.В., Савкова Г.Л. Контек-.т изагу клетшти в юнфобтк колониях // Микробиология.

- I9M*- » 2, г С. 7-13.

3. Ровное Н.В., Петров H. s Лисщтл Т.В., Рыбальченко О.В», Сорван Д.В., Добро лея: О.В. Регуляция функционального езцодпдо бактеритныг популяций и шекле-яочкая ерзрд // В eö.s Передоь. -и производств. ошт в ыед. г лииговшв» прсмагл.. рйкоманяуемцй дяя внедрения,

- ьдасанш.. - к. J um. г. - с. sä.

9. Рыбальченко О.В., Савкова Г.А., Лисицкая В.К. &лекзгрошю-41ккроскохшаесков коучениз взаимодействия кле-ioit и в.лдакробшх хожишля // В сб.: Передов, и производ. опь'г в ыед 1- микробиолог. прошил., рексмещгуешй*для внедрения. - ВШ&СОЖШ. - М. - 19SÖ. - ВшЛ - С. 15.

10. Шукоеский А.П., Петров jl.H., Сотзвкн С.В,, Ров-ног Н.В., Рыбальчетсо О.В. Температурное!"изменение сос-

ния внеклеточной среды бактериальной суспензии // Biuфланка. - №1. - Т. 36. - Вып. 2. - <?. 303-307.

11. Кшшрян С.А., Ровзюв Н.В., Рыбальченко О.В., Со.•вин С.В., 'Грусов A.A. Структура бактериальной суспензии Escherichia coli /у Биофизика. - 1991. - Т.36.

- Вып. 6. - С. 1043-1047.

12. Tötz V.V:,Hybalchenko O.V., bavkova G.A. Ultrastructure features of microbial colonea organization if J. Baoic Microbiology, 1990.- V.4CL -Ш.-?ч597-б07.

24.04.92г. Зак. 170 -80 РТП ЛТИ, Московский пр., 26