Морфо-анатомический и генетический анализ криптических видов морских гастропод рода Littorina комплекса "saxatilis"

Грачева, Юлия Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфо-анатомический и генетический анализ криптических видов морских гастропод рода Littorina комплекса "saxatilis"
ВАК РФ 03.02.04, Зоология

Автореферат диссертации по теме "Морфо-анатомический и генетический анализ криптических видов морских гастропод рода Littorina комплекса "saxatilis""

На правах рукописи

ГРАЧЕВА Юлия Александровна

Морфо-анатомический и генетический анализ криптических видов морских гастропод рода ЬШоппа комплекса «вахаННв» (1ЛИопш(1ае: Саи^аэ^ороск)

03.02.04 - зоология 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

0034Э4017

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2010

2 5 МЛ? 2010

003494017

Работа выполнена на кафедре зоологии беспозвоночных Санкт-Петербургского государственного университета и в Отделе клеточных культур Института цитологии Российской Академии Наук

Научные руководители:

кандидат биологических наук, доцент Наталья Аркадьевна Михайлова доктор биологических наук, доцент Андрей Игоревич Гранович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Владимир Александрович Лухтанов доктор биологических наук, профессор Евгений Иванович Чумасов

Ведущее учреждение:

Российский государственный педагогический университет им. А.И.Герцена

Защита диссертации состоится 22 апреля 2010 года в 17 часов 30 минут на заседании совета Д 212.232.08 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9, ауд. 133

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке СПбГУ.

Автореферат разослан марта 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук e-mail: s_sukhareva@mail.ru

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема вида до сих пор остается одной из центральных в биологии (Shlutter, 2001; Hey, 2001; Hoekstra, Coyne, 2007; Mallet, 2008; Saikia et al., 2008 и др.). Наиболее распространенная, биологическая концепция, рассматривает виды как генетически замкнутые системы (Майр, 1968). С этой точки зрения, степень морфологических различий перестает считаться решающим критерием, а основная роль в определении видов отводится репродуктивной изоляции. Значимость репродуктивной изоляции особенно важна при определении критических видов (видов-двойников) (Майр, 1968). Комплексы сим-патричных популяций видов-двойников представляют собой модель для исследования микроэволюционных процессов. С одной стороны их можно рассматривать как популяции «молодых» видов, недавно достигших репродуктивной изоляции в условиях симпатрии, с другой стороны - широкое распространение таких симпатричных популяций по ареалу видов свидетельствует о возможном вторичном контакте после аллопатрического видообразования.

Моллюски рода Littorina - перспективная модель для исследования как структуры вида, так и микроэволюционных процессов, поскольку представлены несколькими группами критических видов. Моллюски относительно хорошо исследованы. Среди представителей рода Littorina наибольший интерес с точки зрения анализа микроэволюционных процессов вызывает комплекс видов «saxatilis». Это - три чрезвычайно пластичных критических вида - Littorina saxatilis (Olivi, 1792), L.arcana Hannaford Ellis, 1978 и L.compressa Jeffreys, 1865. Несмотря на широкое распространение видов комплекса «saxatilis» на литорали морей Северной Атлантики, имеющиеся данные по их межвидовому сравнению весьма противоречивы, что связано со сложностью их видовой диагностики. С точки зрения формулировки гипотезы о микроэволюционных процессах внутри данной группы видов необходимо проведение комплексного исследования, включающего морфо-анатомический и молекулярно-генетический анализ особей из совместных и раздельных поселений. Исходя из этого формулируется цель предлагаемой работы.

Цель и задачи исследования.

Цель работы: сопоставление степени морфо-анатомических различий, экологической подразделенности и генетической дивергенции криптических видов на примере совместно обитающих видов морских гастропод рода Littorina комплекса «saxatilis». Задачи:

1. Описать видовой состав моллюсков рода Littorina комплекса «saxatilis» в районах исследований (Белое, Баренцево и Норвежское моря).

2. Провести анализ видоспецифичных признаков строения раковины и репродуктивной системы самцов и самок видов комплекса «saxatilis».

3. Оценить распределение на литорали популяций трех видов комплекса «saxatilis» - L. saxatilis, L.arcana, L.compressa.

4. Провести поиск видоспецифичных ДНК фрагментов для диагностики критических видов.

5. Оценить возможность межвидовой гибридизации видов комплекса «saxatilis» при помощи анализа копулирующих пар и амплификации видо-специфичных ДНК фрагментов.

6. Оценить генетическую близость криптических видов литгорин комплекса «saxatilis» по результатам амплификации со случайными и специфическими для L.arcana праймерами и по результатам микросателлитного анализа.

Научная новизна работы. Впервые сделано детальное описание видов Littorina arcana и L.compressa фауны гастропод Баренцева моря. Впервые получены видоспецифичные RAPD паттерны для пяти видов литгорин, и показана статистическая значимость межвидовых генетических различий. Для Littorina arcana клонированы и секвенированы видоспецифичные RAPD-фрагменты. Синтезированные к фрагменту А2.8 праймеры использованы в качестве инструмента для идентификации L. arcana. Для критических видов комплекса «saxatilis» получены новые, уточненные данные о структуре симпатричных популяций, морфо-анатомических особенностях самцов и самок. На основании морфо-генетического анализа партнеров из копулирующих пар показана возможность спаривания представителей разных критических видов в природных

популяциях, проведена его количественная оценка и выдвинута обоснованная гипотеза о возможности межвидовой гибридизации.

Теоретическое и практическое значение работы. В работе сделано описание трех видов литгорин группы «saxatilis» на побережье Баренцева моря, ранее считавшихся одним видом - Littorina saxatilis. Практическая значимость исследования состоит в том, что получены данные, уточняющие фауну гастропод Баренцева моря, и разработан методический подход, использованный для диагностики видов-двойников. Этот подход можно считать универсальным и применимым для решения аналогичных проблем на криптических видах из любых других таксономических групп животных. Полученные в работе молекулярно-генетические данные, в сочетании с морфологическими, расширяют и углубляют представления о критических видах и «виде» в целом и важны для решения теоретических проблем эволюционной биологии. Результаты исследования могут быть использованы в курсах лекций по зоологии, популяционной биологии, теории эволюции.

Апробация работы и публикации. Основные положения доложены и обсуждены на следующих конференциях: 2nd Leonard Euler Workshop "Molecular Approaches to Cell Function and Differentiation" (Санкт-Петербург, 2003), Вторая Всероссийская школа по морской биологии (Мурманск, 2003), V Научная сессия МБС СПбГУ (С.-Петербург, 2004)., международная конференция «Сохранение генетических ресурсов» (Санкт-Петербург, 2004), IX Научная сессия МБС СПбГУ (С.-Петербург, 2008), IX International Symposium on Littorinind Biology and Evolution (Oia, Spain, 2008), а также на научном семинаре кафедры Зоологии беспозвоночных СПбГУ (С.-Петербург, 2008,2010). По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, в том числе 6 статей в изданиях, рекомендованных ВАК.

Финансовая поддержка работы. Работа была поддержана грантами РФФИ (07-04-01376-а), РФФИ (07-04-10164-к), РФФИ (08-04-08433-з), РФФИ (08-04-10090-к), РФФИ (09-04-01728-а), грантом DAAD (Leonard Euler Fellowship Program), грантами Научной Программы Президиума Санкт-Петербургского Научного центра РАН (2007, 2008).

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты», «Обсуждение», выводов и списка цитируемой литературы, включающего 212 источников. Работа изложена на 194 страницах машинописного текста и иллюстрирована 22 таблицами и 41 рисунком.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение.

Обосновывается актуальность темы и выбор моллюсков рода Littorina в качестве модельных объектов исследования. Сформулированы цель и задачи исследования.

Глава 1. Обзор литературы

На основании анализа литературных источников обсуждается проблема криптических видов в контексте концепции «биологического вида». Критические виды широко распространены в различных таксономических группах, что указывает на общебиологическое значение этого феномена. Исследования сим-патрических популяций критических видов позволяют анализировать механизмы микроэволюции. С этой точки зрения проведен обзор данных, иллюстрирующих различные аспекты дивергенции таких видов (морфо-анатомические, экологические, кариотипические, биохимические и молекулярные различия). Подробно рассматривается становление представлений о видах комплекса «saxatilis», учитывая высокую степень их внутривидовой пластичности. Детально обсуждаются работы, посвященные филогенетическим отношениям видов комплекса «saxatilis» и выполненные с использованием молекулярных методов.

Глава 2. Материал и методы

Материал собран на побережье Баренцева моря (район пос. Дальние Зеленцы) и Кандалакшского залива Белого моря. Всего собрано 5 видов моллюсков -Littorina saxatilis, L. arcana, L. compressa, L. obtusata и L. fabalis из 7 популяций. Дополнительно использованы сборы из Тюва-губы (Кольский залив), о. Вайгач, г.Тромсе (Норвегия), пролива Каттегат, Ховс Халлар (Швеция), предоставленные Е.В.Козминским, М.В.Фокиным, Н.А.Михайловой, А.И. Грановичем,

М.В.Пановой и Kerstin Johannesson. Всего проанализировано более 5000 моллюсков, молекулярная часть работы выполнена с использованием 606 особей. Определение видов проводили на основании морфологических особенностей строения половой системы в соответствии с описанием Д. Рида (Reid, 1996). Для оценки фенотипического состава использовали ранее разработанную систему фенотипов (Сергиевский и др., 1995). Оценку распределения особей на литорали проводили методами гидробиологического разреза и сбора со стандартной площади 1/20 м2.

Половозрелых особей (диаметр раковины 8-12 мм), использовали для выделения ДНК. Экстракцию ДНК проводили индивидуально из тканей головы и ноги каждой особи, фиксированной в 70% этаноле методом СТАВ (Mikhailova, Johannesson, 1998). Полученные образцы ДНК растворяли, доводя концентрацию ДНК до Юнгхмкл'1. RAPD анализ проводили методом амплификации ДНК со случайными праймерами. Протестировано 18 праймеров (Operon Tech. Inc.), один из них - OPG-17 (5'-ACGACCGACA-3') использован для анализа видос-пецифичных RAPD паттернов (Mikhailova et al., 2009). Для статистической обработки RAPD паттернов использовали кластерный анализ (Statistica 6.0). Ви-доспецифичные RAPD фрагменты использовали для клонирования.

Фрагменты выделяли из геля с использованием Chelex 100 (Sigma), реам-плифицировали и лигировали в вектор (pGEM-T Easy Vector, Promega Systems). Плазмиды трансформировали в компетентные клетки E.coli методом электро-порации. Секвенирование фрагментов проводили с использованием набора (Pharmacia-Biotech Т7 sequencing kit). К концевым последовательностям фрагментов синтезированы праймеры (MWG Oligo Synthese). Полученную, специфическую для L.arcana, пару праймеров А2.8, использовали для тестовых ам-плификаций.

Реакцию амплификации ДНК со специфическими праймерами (А2.8) проводили, используя 20 нг геномной ДНК особи (Mikhailova et al., 2009). Продукты амплификации разделяли в 1.5% агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, а также в 6% и 12% полиакриламидных гелях (ПААГ), окрашенных серебром.

Для микросателлитного анализа использовали праймеры к шести микроса-теллитным локусам - Lsub8, Lsubl6, Lsub32, Lsub62, Lsax6 и Lsax20 (Tie et al, 2000; Sokolov et al, 2001). Реакции амплификации проводили по протоколу: 20 нг ДНК, по 0.125 мкМ каждого праймера (F+R), 800 мкМ смеси нуклеотидов (dNTP, по 200 мкМ каждого), 1.3, 1.5 или 2.0 мМ MgCl2, 0,5 ед Taq-полимеразы (MBI Pharmacia), 1х ПЦР-буфер (10 мМ Tris-HCl, рН 8.0; 50 мМ КС1) с использованием программы: начальная денатурация 95°С - 5 мин, затем 30 циклов -95°С - 30 сек; 57°С - 30 сек; 72°С - 45 сек; конечная элонгация 72°С - 5 мин. Образцы анализировали методом капиллярного гель-электрофореза (Beckman Coulter CEQ800 Genetic Analysis; программное обеспечение CEQ Fragment Analysis).

Расчет степени генетических различий между популяциями, соответствия распределению Харди-Вайнберга, коэффициента инбридинга популяции (Fst), наличия нулевых аллелей, а также расчет и визуализация филогенетической гипотезы выполнены при помощи программных пакетов (Genepop, Microchecker, FreeNA, PHYLIP (Felsenstein, 1997), Geneclass 2 version 2.0, Seqboot, Gendist).

Глава 3. Результаты

Морфо-анатомический анализ видов лиггорин показал, что на побережье Восточного Мурмана (Баренцево море) и Норвежского моря обитают 6 видов -Littorina littorea, L. saxatilis, L. arcana, L. compressa, L. obtusata и L. fabalis. В этих районах 3 вида моллюсков комплекса «saxatilis» встречаются в совместно обитающих популяциях. В сборах из популяций Белого моря, пролива Каттегат, а также из популяций Тюва губы и о. Вайгач Баренцева моря обнаружен только один вид комплекса - L. saxatilis.

Половозрелые самки литторин комплекса «saxatilis» хорошо различаются по строению половой системы: L. arcana характеризуются копулятивной бурсой, достигающей более половины длины хорошо развитой слизистой железы (яйцекладущий вид) (Рис.1). Слизистая железа самок L. saxatilis преобразована в выводковую сумку с развивающимися эмбрионами (яйцеживородящий вид). Самки L.compressa характеризуются наличием слизистой железы и особым соотношением размера желез паллиальной части яйцевода (яйцекладущий вид).

Указанные видовые признаки четко воспроизводятся в разных популяциях лит-торин и, таким образом, служат хорошим анатомическим видовым «маркером». Соответствующий анатомический набор признаков у самцов обнаружен только для L.compressa: небольшое число крупных пениальных желез, расположенных дистально, строго в один ряд. Анализ главных компонент не выявил разделения признаков в строении копулятивного органа самцов L. saxatilis - L. arcana на две группы, которые можно было бы трактовать как видовые .

Это касается как исследования меристических (число пениальных желез, рядность их расположения), так и размерных признаков. Важно отметить, что в тех точках, где обитает только L. saxatilis, 99% самцов характеризуется однорядным расположением пениальных желез; в местах совместного обитания L. saxatilis - L. arcana таких особей оказалось 60%. В совместных поселениях L. saxatilis - L. arcana обнаружено большое количество самцов с резекцией (автотомия) пениса после периода размножения. Поскольку в одновидовых популяциях L. saxatilis такие самцы не обнаружены, сделано предположение об их принадлежности к L. arcana. Анализ размерных распределений раковины с учетом межпопуляционной изменчивости показал, что средний размер раковины L. compressa меньше, чем у L. saxatilis и L. arcana и не различается у последних. Оценка распределения фенотипических вариантов окраски раковины в популяциях свидетельствует об отсутствии различий между L. saxatilis и L. arcana по

Рис.1. Раковины половозрелых особей (верхний ряд), строение паллиальной части половой системы самок (средний ряд) и строение копулятивного органа самцов представителей комплекса «saxatilis»: L. arcana (A), L. compressa (S), L. saxatilis (В).

кб - копулятивная бурса, сж — слизистая железа, кж - капсульная железа, бж - белковая железа, ф - филамент, пж - пениальные железы. По материалам сборов из бухты Оскара и губы Ярныш-ной, Восточный Мурман.

набору и частотам цветовых морф, в то время как L. compressa характеризуется иными частотами фенотипов при сходном их наборе.

Популяции L. saxatilis как в одновидовых, так и в совместных поселениях трех видов комплекса «saxatilis», занимают всю ширину литоральной зоны (от верхней части сублиторали до зоны заплеска). Популяции L. агсапа приурочены к верхней части литоральной зоны (от верхней границы пояса макрофитов до зоны заплеска). L.compressa обитает лишь в пределах пояса макрофитов. Таким образом, обнаружены видоспецифичные особенности в пространственном распределении видовых популяций но, в то же время, широкое перекрывание занимаемых биотопов в местах совместного обитания.

Амплификация геномной ДНК пяти видов литторин со случайными праймерами (метод RAPD) использована для молекулярно-генетического анализа видов. При помощи одного из 18 протестированных праймеров (OPG-17) выявлены видоспецифичные RAPD паттерны (Рис. 2).

¡■»»illttïi.ii'f'S

W tai >•!•. и, ¡N¡ m Uji m w* m

Мяч

L. fabalis

L. obtusata

5 h!

-Шй!

..¡H-г

feHMHWrj

gel

a» t>

L. saxatilis

L. arcana

L. compressa

250 ПН

Рис. 2. Результаты RAPD-анализа для 5 видов литторин из бухты Оскара (Баренцево море) с использованием случайного праймера OPG-17. Отмеченный стрелками фрагмент был в дальнейшем клонирован и секвенирован.

Амплификация геномной ДНК с праймерами к фрагменту А2.8. Для L.

агсапа выбраны предположительно 3 видоспецифичных фрагмента, они были клонированы и секвенированы, к их концевым последовательностям были синтезированы праймеры. Видоспецифичность праймеров протестирована на ДНК L. агсапа, L. compressa и L. saxatilis . Пара праймеров А2.8 к фрагменту размером около 280 п.н. специфично аплифицировала ДНК L. агсапа и не амплифи-цировала ДНК L. saxatilis и L. compressa (пример см. Рис.3).

Рис. 3. Продукты амплификации ДНК моллюсков с использованием пары прай-меров А2.8 у 5 особей L. агсапа (дорожки 1,3,5,7,9) и 5 особей L. saxatilis (дорожки 2,4,6,8,10). M - маркер 50 п.и.

Нуклеотидная последовательность фрагмента А2.8 (271 п.н.): - 5' — acgacgacaaagaatgactggtgttttaacaaacaatcaggacgattcagagtaaaacaacatcagcttgactaaatatact atagatatacgtaaatacaacttttcttactcagaagacaaatgaacaaaagctgtttctgatcactggaaatctttttcgacga cacaaattagttgttttggcaagtgcattcattttgctgactgcaaacccatgccaataaataaatttaatcgtgctgtgaatca tgttgtgtcggtcgt-З'. Тестирование пары праймеров к фрагменту А2.8 - A2.8F (5'-ggtgttttaacaaacaatcaggac-З') и A2.8R (5'-caacatgattcacagcacgatta-3') выполнено на препаратах ДНК, выделенных из самок трех видов моллюсков (L. saxatilis, L. агсапа, L. compressa), идентифицированных морфологически.

Использование данной пары праймеров в реакции амплификации с ДНК литторинид из симпатричных популяций показало следующий результат: из 171 проанализированных моллюсков L. агсапа 147 (около 86%) показывали положительный результат амплификации, а ДНК оставшихся особей не амплифи-цировалась. В то же время, среди 151 особи L. saxatilis у 132 особей (около 87%) не наблюдалось амплификации фрагмента А2.8, в то время как ДНК оставшихся моллюсков амплифицировала данный фрагмент. Фрагмент А2.8. не амплифицировался ни у одной особи L. compressa. ДНК особей L. saxatilis из аллопатричных популяций разных географических регионов (Тюва-губа и о. Вайгач (Баренцево море), Белое море и Ховс Халлар, Каттегат, Северное море) не амплифицировала специфичный для L. агсапа фрагмент в 100% случаев (Табл.1).

Таблица 1. Результаты тестирования пары праймеров А2.8 (F+R).

месторасположение вид пол Всего проверено, шт. ПЦР + ПЦР-

Баренцево море (р-н пос. Дальние Зеленцы - б. Оскара, б. Плохие Чевры) Сборы 2002,2003,2007 г.г. L. arcana F Ill 95 16

Норвежское море (р-н г. Тромсе) Сборы 2003,2007 г. г.) 60 52 8

Всего в смешанных популяциях 171 147 24

Суммарно для L. arcana в % 85.9 14.0

Баренцево море (р-н пос. Дальние Зеленцы - б. Оскара, б. Плохие Чевры) Сборы 2002,2003, 2007 г.г. L. saxatilis Femb 95 18 77

Норвежское море (р-н г. Тромсе) Сборы 2003,2007 г. г.) 56 1 55

Всего в смешанных популяциях 151 19 132

Суммарно для L. saxatilis в % 12.6 87.4

Белое море (Кандалакшский з-в) Сбор 2003 г. 42 0 42

Баренцево море (Тюва-губа, Кольский залив - сбор 2003 г.; арх. Новая Земля - сбор 2008 г.) L. saxatilis F, M 30 0 30

Северное море (Ховс Халлар, Каттегат, Швеция) Сбор 2008 г. 30 0 30

Всего в однородных популяциях 102 0 102

Суммарно для L. saxatilis (однородные популяции) в % 0% 100%

Баренцево море (р-н пос. Дальние Зеленцы, б. Оскара). Сбор 2002 г. L. compressa F, M 39 0 39

Северное море (р-н г. Тромсе). Сбор 2007 г. 15 0 15

Суммарно для L. compressa в % 54 0% 100%

Анализ видовых признаков самцов L. saxatilis и L. arcana с использованием молекулярного маркера А2.8. Морфометрический анализ копулятив-ного органа самцов L. saxatilis - L. arcana проведен для представителей совместно обитающих популяций двух видов с использованием полученного молекулярного маркера. Показано, что самцы ПЦР+ и ПЦР- не характеризуются какими-либо качественными или существенными количественными различиями (Рис. 4). Имеется лишь статистически выявляемая связь наличия фрагмента (ПЦР+) с признаками «оттянутость пениального филамента» и «рядность рас-

положения пениальных желез». По-видимому, эти признаки в большей степени характеризуют самцов L. arcana в совместных с L. saxatilis поселениях. Тестирование ДНК самцов, характеризующихся резекцией пениса, показало, что они амплифицируют А2.8 ДНК фрагмент (ПЦР+). Это подтверждает наше предположение об их принадлежности к L. arcana.

Factor Jt 1

•1

Рисунок 4. Ординация признаков особей в пространстве главных компонент: ® - самцы ПЦР-; ^ - самцы ПЦР+; ^ - самцы Littorina compressa.

-es 1.5 «.s

Рот* I

Анализ частоты межвидовых копуляций. Для оценки возможности межвидовой гибридизации между видами комплекса «saxatilis» проанализирован состав 64 копулирующих пар, в которых партнеры были идентифицированы морфологически (самки) и молекулярно-генетически (самки и самцы). Обнаружено 14 межвидовых спариваний: 5 пар L. агсапа (ПЦР+) х L. saxatilis (ПЦР-) и 9 пар L. saxatilis (ПЦР+) * L. агсапа (ПЦР-). Это - 21.8% от общего числа изученных пар. Ни одного случая спаривания L.compressa с особями других видов комплекса не зафиксировано.

Микросателлитный анализ популяций видов комплекса «saxatilis». Исследование проведено с использованием 6 микросателлитных локусов (Lsub8, Lsubl6, Lsub32, Lsub62, Lsax6 и Lsax20). Показан дефицит гетерозигот в ряде популяций всех трех видов (по двум локусам для L. saxatilis и L. агсапа и по трем локусам для ¿.compressa). Специальный анализ выявил специфичное для отдельных популяций всех трех видов наличие «нулевых» аллелей. Расчет генетического расстояния (Fst) свидетельствует о большей степени дифферен-цировки L. compressa от двух других видов комплекса (средние Fst = 0,253 и

0,231 для L. агсапа и L. saxatilis соответственно). Напротив, L. saxatilis и L.

arcana очень близки (среднее Fst — 0,085). меньше (среднее Fst не превышает 0,048). дованных видов приведено на Рис. 5.

Внутивидовые различия существенно Позиционирование популяций иссле-

Рисунок 5. Дендрограмма попарных генетических расстояний по Нею, полученная методом «ближайшего соседа», для видов L. arcana, L. compressa and L. saxatilis в трех местообитаниях.

а - L. arcana, Тромсе, Норвегия; с - L. compressa, Тромсе, Норвегия; s - L. Saxatilis, Тромсе, Норвегия; АС - L. arcana, б. Плохие Чевры, Россия; АО - L. arcana, б. Оскара, Россия; СС - L. compressa, б. Плохие Чевры, Россия; СО - L. compressa, б. Оскара, Россия; SC - L. saxatilis, б. Плохие Чевры, Россия; SO -L. saxatilis, б. Оскара, Россия.

Глава 4. Обсуждение

Морфо-анатомические исследования подтвердили наличие трех криптиче-ских видов литорин комплекса «saxatilis» на побережье Баренцева моря. Пара видов-двойников L. saxatilis и L. arcana характеризуется минимальными генетическими отличиями, отсутствием выраженных конхологических и анатомических различий. Значительное сходство в строении копулятивного органа видов-двойников косвенно свидетельствует о возможности межвидовых спариваний, и экспериментальные данные по скрещиванию (Warwick et al., 1990) подтверждают этот факт. Мы предполагаем, что L. saxatilis и L. arcana - эволюци-онно молодые, относительно недавно дивергировавшие виды, сохранившие способность к межвидовой гибридизации. В пользу такого объяснения говорит характер распределения в геномной ДНК особей критических видов (симпат-рических и аллопатрических популяций) молекулярного маркера А2.8: амплификация специфичного для L. arcana фрагмента наблюдалась у L. saxatilis в популяциях, совместно обитающих с L. arcana, и не обнаружена в аллопатрических популяциях L. saxatilis. Выдвинуты и обсуждаются две гипотезы для объяснения феномена: 1. Популяции L. saxatilis и L. arcana до сих пор сохранили

предковый полиморфизм по фрагменту А2.8. После эволюционного разделения двух видов частота встречаемости маркера А2.8 дивергировала, оставаясь неизменной у L. агсапа и снижаясь у L. saxatilis. 2. Фрагмент ДНК А2.8 является видоспецифичным для L. агсапа, а присутствие его в геномной ДНК особей L. saxatilis объясняется межвидовой гибридизацией в природных популяциях. Полученные нами данные по наличию в природе межвидовых копулирующих пар L. saxatilis - L. агсапа свидетельствуют в пользу второй гипотезы. Если гибридизация двух видов будет окончательно доказана, можно будет говорить об уникальной ситуации: системе из двух видов-двойников, характеризующихся интенсивным генетическим обменом и обладающих различными репродуктивными стратегиями.

Выводы

1. На литорали Восточного Мурмана (Баренцево море, Россия) и г. Тромсе (Норвежское море, Норвегия) обитает 6 видов моллюсков рода Littorina: L. littorea, два вида комплекса «obtusata» - L. obtusata, L. fabalis и три вида комплекса «saxatilis» -L. saxatilis, L. агсапа, L. compressa.

2. Сравнение конхологических признаков y представителей видового комплекса «saxatilis» свидетельствует о высокой степени их внутри- и межпопуляци-онной изменчивости. L. compressa отличается меньшими размерами раковины, в паре критических видов L. saxatilis — L. агсапа конхологических видовых различий не выявлено.

3. Для самок видового комплекса «saxatilis» обнаружены хорошо выраженные различия строения половой системы, связанные с размером копулятивной бурсы и соотношением размеров добавочных желез паллиальной части яйцевода. Самцы L. compressa характеризуются выраженными отличиями в строении копулятивного органа. Различия в строении копулятивного органа самцов L. saxatilis и L. агсапа проявляются лишь на количественном, статистическом уровне.

4. Анализ популяционной структуры видов (на основании морфо-анатомических характеристик) показал неравномерное распределение видо-

вых популяций по горизонтам приливно-отливной зоны: L. compressa приурочена к зоне макрофитов, L.arcana населяет верхние горизонты литорали, L. saxatïlis распространена по всей ширине литоральной зоны. При этом наблюдается значительное перекрывание популяционных ареалов (симпатрия).

5. Генетические различия видов обнаружены методом амплификации геномной ДНК со случайными праймерами (метод RAPD). Получены идентичные ви-доспецифичные ДНК паттерны для морфологически типированных самок L.saxatilis, L.arcana и L.compressa из разных географических популяций.

6. При помощи молекулярного маркера А2.8 (клонированный видоспецифич-ный для L.arcana ДНК-RAPD фрагмент) показано, что в симпатричных поселениях моллюсков 86% особей L.arcana амплифицирует фрагмент А2.8, однако 100% особей L.compressa и 87% особей L.saxatilis фрагмент А2.8 не амплифицирует. Ни одного случая амплификации фрагмента А.2.8 у особей L.saxatilis из аллопатричных популяций не обнаружено.

7. Показана возможность межвидового спаривания видов-двойников L.saxatilis и L.arcana в результате анализа партнеров в копулирующих парах при помощи морфологического описания партнеров и амплификации ДНК с праймерами к фрагменту А2.8. L.compressa в составе копулирующих пар не обнаружена.

8. Микросателлитный анализ выявил четкие генетические различия между близкими видами литторинид группы «saxatilis» и показал, что виды L.arcana и L. saxatilis генетически более близки друг другу, чем виды L. аг-сапа и L. compressa.

9. Криптические виды L. агсапа и L. saxatilis - эволюционно молодые виды, характеризующиеся неполной генетической изоляцией, что, по-видимому, определяет их морфологическое сходство.

Список работ, опубликованных по теме диссертации в изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Mikhailova N.A., Petrova (Gracheva) Y.A. 2004. Molecular markers for identification of the sibling species of marine gastropods of the genus Littorina II Материалы международной конференции «Сохранение генетических ресурсов», Санкт-Петербург, Цитология: Т.46, №9, с. 823-824.

2. Гранович А.И., Михайлова Н.А., Знаменская О., Петрова (Грачева) Ю.А. 2004. Видовой состав моллюсков рода Littorina (Gastropoda, Prosobranchia) Восточного Мурмана// Зоологический журнал. Т.83. № И. С.1305-1317.

3. Ганжа Е.В., Гранович А.И., Петрова (Грачева) Ю.А., Михайлова Н.А. 2006. Анализ гистологических особенностей строения пениальных желез моллюсков рода Littorina Северной Атлантики // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер.З. Вып.4. С. 40-46.

4. Гранович А.И., Лоскутова З.И., Грачева Ю.А., Михайлова Н.А. 2008. Морфо-метрический анализ копулятивного органа моллюсков видового комплекса «saxatilis» (Gastropoda: Coenogastropoda, Littorinidae): проблемы идентификации и статуса видов // Зоологический журнал. Т.87, вып.12, С.1425-1436.

5. Михайлова Н.А., Грачева Ю.А., Гранович А.И. 2008. Анализ частоты межвидовых спариваний в копулирующих парах морских гастропод рода Littorina комплекса «saxatilis» // Вестник С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. Вып. 4. С. 5-9.

6. Mikhailova N.A., Gracheva Y.A., Backeljau Т., Granovitch A.I. 2009. A potential species-specific molecular marker suggests interspecific hybridization between sibling species Littorina arcana and L.saxatilis (Mollusca, Caenogastropoda) in natural populations // Genetica. V.137. N3. P.333-340.

в других изданиях:

7. Гранович А.И, Михайлова Н.А., Знаменская О.С., Петрова (Грачева) Ю.А. 2003. Многолетняя динамика зараженности трематодами совместно-обитающих популяций литторин: опыт двадцатилетнего анализа в модельной точке губы Чупа Белого моря // Тез. докл. IV науч. сессия МБС СПбГУ. СПб. С. 53 - 54.

8. Петрова (Грачева) Ю.А., А.И. Гранович, Н.А.Михайлова. 2004. Молекулярные маркеры для идентификации близких видов литторинид Баренцева моря. // В кн.: «Морская флора и фауна северных широт. Механизмы адаптации и регуляции роста организмов» Апатиты: Изд. КНЦ РАН. С. 149-156.

9. (Petrova (Gracheva) Yu.A., Granovitch A.I., Mikhailova N.A. 2004. Molecular markers for the identification of close Barents Sea littorinid species // In: Marine flora and fauna of the Nordic latitudes: mechanisms of adaptation and growth regulation of organisms. Apatity: Print. Kola Science Centre RAS. P. 326-333).

Ю.Петрова (Грачева) Ю.А., Михайлова H.A., Гранович А.И. 2005. Морфологические особенности и изменчивость копулятивного аппарата самцов беломорских моллюсков Littorina saxatilis (Olivi) // Тез. докл. VI науч. сессии МБС СПбГУ. СПб. С. 55 - 56.

П.Петрова (Грачева) Ю.А., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 2007. Идентификация кладок литорального моллюска Littorina arcana с использованием молеку-лярно-генетических методов // Материалы 2 Международной конференции «Экологические исследования беломорских организмов» СПб. ЗИН РАН. 1822.07.2007. с.92.

12. Грачева Ю.А., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 2008. Анализ частоты межвидовых спариваний в копулирующих парах морских гастропод рода Littorina комплекса «saxatilis» // IX Научная сессия МБС СПбГУ. 2008. С. 47-48.

13.Loskutova Z.I., Mikhailova N.A., Granovitch A.I., Gracheva Y.A. 2008. Mor-phometrical analysis of three rough periwinkles copulatory organ // Abstracts of 9 Int.Symp. on Littorinid Biol. 2-7 Sept.2008. Oia, Spain. P.29.

14. Gracheva Yu. A., A.I. Granovitch & N.A. Mikhailova. 2008. Analysis of the interspecific crosses frequency in copulating pairs of littorinids of «saxatilis» species-complex // Abstracts of the IX International symposium on Littorinind Biology and Evolution. 2-7 Aug, Oia, Spain. P. 20.

Подписано в печать 12.03.2010. Формат 60x90/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,25 Тираж 100 экз. Заказ 107

Отпечатано в типографии ООО «Адмирал»

199048, Санкт-Петербург, В. О., 6-я линия, д. 59 корп. 1, оф. 40Н

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Грачева, Юлия Александровна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Критические виды в свете биологической концепции вида. Общая характеристика.

1.2.Проявление различий у особей криптических видов.

1.3. Критические виды рода Littorina.

1.4. История исследования комплекса видов рода Littorina группы «saxatilis». Видовой состав и филогенетические отношения.

1.5. Морфо-анатомические особенности представителей видов рода Littorina комплекса «saxatilis».

1.6. Ареалы, распределение на литорали и экологические особенности представителей комплекса «saxatilis».

1.7. Генетическая характеристика представителей комплекса видов «saxatilis» и вопрос о возможной межвидовой гибридизации.

1.7.1 Исследования полиморфизма белков методом аллозимного анализа.

1.7.2 Молекулярно-генетические методы.

1.7.2.1 Изменчивость по длине фрагментов (мини- и микросателлитный анализ)

1.7.2.2 Изменчивость пространственной ориентации молекул (88СР-анализ).

1.7.2.3 Изменчивость случайных фрагментов ДНК (RAPD - анализ).

1.7.3 Исследования митохондриального генома представителей видового комплекса «saxatilis».

1.7.4 Исследования ядерного генома представителей видового комплекса «saxatilis».

1.7.5 Преимущества и проблемы применения молекулярных методов исследования криптических видов комплекса «saxatilis».

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Морфо-экологическая характеристика видов литторин.

2.2. Морфологический анализ самцов L. saxatilis из популяций Белого моря.

2.3. Результаты поиска видоспецифического молекулярного маркера для видов-двойников.

2.3.1 Экстракция тотальной ДНК.

2.3.2 Амплификация ДНК со случайными праймерами.

2.3.3 Клонирование и секвенирование видоспецифичных фрагментов.

2.3.4 Результаты тестирования пары праймеров А2.8 (F+R).

2.4. Характеристика морфологических признаков самцов L. arcana и L. saxatilis с учетом молекулярно-генетических данных.

2.5. Анализ копулирующих пар.

2.6. Микросателлитный анализ.!.

2.6.1 Сбор материала и амплификация микросателлитов.

2.6.2 Статистическая обработка полученных в результате микросателлитного анализа данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1 Представители рода Littorina Белого и Баренцева морей России: комплексы криптических видов.

3.2 Морфо-анатомическая и экологическая характеристика видов комплекса saxatilis».

3.2.1. Конхологические признаки.

3.2.2 Цветовой полиморфизм раковины представителей комплекса «saxatilis».

3.2.3 Размерная структура популяций L.saxatilis, L.arcana, L.compressa.

3.2.4 Морфо-анатомические особенности строения половой системы.

3.2.4.1. Строение копулятивного органа представителей криптических видов группы «saxatilis».

3.2.4.2 Строение паллиальной части яйцевода самок представителей видового комплекса «saxatilis».

3.2.5 Анализ распределения видовых популяций представителей комплекса saxatilis» на литорали.

3.3 Результаты поиска видоспецифического молекулярного маркера для видов-двойников.

3.3.1 Амплификация ДНК литторин со случайными праймерами.

3.3.2 Клонирование и секвенирование видоспецифичных фрагментов.

3.3.3 Результаты тестирования пары праймеров А2.8 (F+R).

3.3.4 Характеристика морфологических признаков самцов L. arcana и L. saxatilis с учетом молекулярно-генетических данных.

3.3.5 Анализ копулирующих пар.

3.3.6 Микросателлитный анализ.

3.3.6.1 Равновесие Харди-Вайнберга.

3.3.6.2 Нулевые аллели: анализ с помощью программ Microchecker и j FreeNA.

3.3.6.3 Популяционные различия.

3.3.6.4 Анализ генетических различий между популяциями и видами (расчет коэффициента FST).

3.3.6.5 Оценка принадлежности индивидуумов к каждому из трех видов.

3.3.6.6 Кластерный анализ.

3.3.6.7 Многомерное шкалирование (MDS-анализ).

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфо-анатомический и генетический анализ криптических видов морских гастропод рода Littorina комплекса "saxatilis""

Проблема вида до сих пор остается одной из центральных и широко обсуждаемых тем в биологии (Schluter, 2001; Hey, 2001; Hoekstra, Coyne, 2007; Mallet, 2008; Saikia et al., 2008 и др.). Наиболее распространенная, биологическая концепция, рассматривает виды как генетически замкнутые системы (Майр, 1968). С этой точки зрения, степень морфологических различий перестает считаться решающим критерием, а основная роль в определении границ видов отводится репродуктивной изоляции. Значимость репродуктивной изоляции представляется особенно важной при определении «криптических видов» (видов-двойников) (Майр, 1968). Комплексы симпатричных популяций видов-двойников — это своеобразная модель для исследования микроэволюционных процессов. С одной стороны, их можно рассматривать как популяции «молодых» видов, недавно достигших репродуктивной изоляции. Более того, именно такие популяции можно эффективно использовать для исследования возможности симпатрического видообразования в природе, реальность которого до сих пор активно дискутируется (см. например, Hendrixon, Bond, 2005; Morse, Farrel, 2005; Mallet, 2006; Etges et al., 2007; Xie et al., 2007). С другой стороны - широкое распространение таких симпатричных популяций по ареалу видов ставит вопрос о возможности их вторичного контакта после единичного акта (вероятно аллопатрического) видообразования. И тогда встает другой вопрос — почему одни близкие виды быстро формируют комплекс видоспецифических свойств, а другие оказываются столь консервативными по большинству морфо-анатомических признаков? Плодотворное обсуждение этих вопросов возможно только при проведении комплексных исследований криптических видов с применением как морфо-анатомических, так и молекулярно-генетических методов.

Моллюски рода Littorina - перспективная модель для исследования как структуры вида, так и микроэволюционных процессов, происходящих в группе криптических видов (Mikhailova et al., 2009; Johannesson et al., 2010).

Эти моллюски относительно хорошо исследованы с точки зрения их популяционной биологии, физиологии, генетики, паразитологии, морфо-анатомических особенностей (см. например, Reid, 1996; Johannesson, 2003; Granovitch et al., 2000; Johannesson, Mikhailova, 2004; Rolan-Alvarez, 2007 и др.). Эти моллюски характеризуются высокой плотностью поселения и относительно низкой подвижностью. Для моллюсков рода Littorina показана высокая степень внутривидовой пластичности (Reid, 1996) и внутривидовой морфо-функциональной дифференцировки особей в масштабе одного поселения. Эти данные рассматриваются как хорошие модели микроэволюционных событий (Johanesson, 2003; Rolan-Alvarez, 2007). Еще одним показателем пластичности литторин является географическая и экологическая изменчивость их конхологических, анатомических и физиологических признаков (Reid, 1996). Неудивительно, что в связи с этим в настоящее время ведется активная работа над созданием геномной библиотеки некоторых видов рода Littorina (Galindo, Butlin, 2008).

Среди представителей рода Littorina наибольший интерес с точки зрения анализа микроэволюционных процессов всегда вызывал комплекс видов «saxatilis». Это - три чрезвычайно пластичных вида Littorina saxatilis (Olivi, 1792), L. compressa Jeffreys 1865, L. arcana Hannaford Ellis, 1978. В связи с широким географическим распространением и изменчивостью конхологических признаков систематика комплекса характеризовалась ранее описанием десятков форм видового и подвидового ранга. Однако сейчас ее можно назвать вполне устоявшейся: все многообразие экологических форм и географических подвидов сведено на основании морфо-анатомических критериев в три упомянутых вида (Reid, 1996). Отметим также, что последующие работы, оценивающие видовой состав комплекса с точки зрения генетической структуры — подтвердили предложенный статус трех видов как отдельных генетических совокупностей (Wilding et al., 2000а,b; Small, Gosling, 2000a,b; Small, Gosling, 2001; Panova et al., 2008).

Три вида комплекса «saxatilis», безусловно, являются криптическими с точки зрения конхологических признаков и большей части других морфо-анатомических особенностей строения. Из представителей комплекса «saxatilis» только L. compressa характеризуется четкими морфо-анатомическими отличительными признаками строения половой системы (Reid, 1996). Виды-двойники L. saxatilis и L. arcana практически неотличимы как по конхологическим признакам, так и по . строению репродуктивной системы самцов (Гранович и др. 2004). Определить видовую принадлежность можно только на основании строения женской половой системы (Reid, 1996; Granovitch, Sokolova, 2001). Важно отметить, что этот, последний признак, весьма существенен и характеризуется двумя дискретными состояниями. У самок L. saxatilis дистальная часть паллиального яйцевода представляет собой яйцевую сумку, в которой развиваются эмбрионы. У самок L.arcana эта часть половой системы представляет собой одну из добавочных желез (jelly gland) женской половой системы. Соответственно, самки L. saxatilis характеризуются яйцеживорождением и отрождают полностью сформированных молодых моллюсков, а самки L.arcana откладывают кладки, в которых проходит развитие эмбрионов до вылупления молодых моллюсков. Налицо различие двух криптических видов по репродуктивным стратегиям.

Несмотря на широкое распространение видов комплекса «saxatilis» на литорали морей Северной Атлантики, надежных данных по их межвидовому сравнению чрезвычайно мало в связи со сложностью видовой диагностики. С точки зрения формулировки гипотезы о микроэволюционных процессах внутри этой группы видов необходимо проведение комплексного исследования, включающего морфо-анатомический и молекулярно-генетический анализ рассматриваемых видов в условиях совместного и раздельного поселения. Исходя из этого формулируется цель предлагаемой работы.

Задачи:

3. Оценить распределение на литорали популяций трех видов комплекса «saxatilis» - L. saxatilis, L.arcana, L.compressa.

4. Провести поиск видоспецифичных ДНК фрагментов для диагностики криптических видов.

6. Оценить генетическую близость криптических видов литторин комплекса «saxatilis» по результатам амплификации со случайными и специфическими для L.arcana праймерами и по результатам микросателлитного анализа.

Заключение Диссертация по теме "Зоология", Грачева, Юлия Александровна

ВЫВОДЫ

2. Сравнение конхологических признаков у представителей видового комплекса «saxatilis» свидетельствует о высокой степени их внутри- и межпопуляционной изменчивости. L. compressa отличается меньшими размерами раковины, в паре криптических видов L. saxatilis — L. arcana конхологических видовых различий не выявлено.

3. Для самок видового комплекса «saxatilis» обнаружены хорошо выраженные различия строения половой системы, связанные с размером копулятивной бурсы и соотношением размеров добавочных желез паллиальной части яйцевода. Самцы L. compressa характеризуются выраженными отличиями в строении копулятивного органа. Различия в строении копулятивного органа самцов L. saxatilis и L. arcana проявляются лишь на количественном, статистическом уровне.

4. Анализ популяционной структуры видов (на основании морфо-анатомических характеристик) показал неравномерное распределение видовых популяций по горизонтам приливно-отливной зоны: L. compressa приурочена к зоне макрофитов, L. arcana населяет верхние горизонты литорали, L. saxatilis распространена по всей ширине литоральной зоны. При этом наблюдается значительное перекрывание популяционных ареалов (симпатрия).

5. Генетические различия видов обнаружены методом амплификации геномной ДНК со случайными праймерами (метод RAPD). Получены идентичные видоспецифичные ДНК паттерны для морфологически типированных самок L.saxatilis, L.arcana и L.compressa из разных географических популяций.

6. При помощи молекулярного маркера А2.8 (клонированный видоспецифичный для L.arcana ДНК-RAPD фрагмент) показано, что в симпатричных поселениях моллюсков 86% особей L.arcana амплифицирует фрагмент А2.8, однако 100% особей L.compressa и 87% особей L.saxatilis фрагмент А2.8 не амплифицирует. Ни одного случая амплификации фрагмента А.2.8 у особей L.saxatilis из аллопатричных популяций не обнаружено.

9. Криптические виды L. arcana и L. saxatilis - эволюционно молодые виды, характеризующиеся неполной генетической изоляцией, что, по-видимому, определяет их морфологическое сходство.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает искреннюю благодарность научным руководителям Н.А. 1

Михайловой и А.И. Грановичу за общее руководство, всестороннюю поддержку, понимание, заботу; рецензентам за ценные замечания по диссертационной работе; глубокая благодарность сотрудникам и аспирантам кафедры зоологии беспозвоночных СПбГУ и сотрудникам Отдела клеточных культур Института Цитологии РАН за помощь в проведении лабораторных экспериментальных исследований; сотрудникам Мурманской Морской Биологической Станции ММБИ (пос. Дальние Зеленцы) Воскобойникову Г.М. и Макарову М.В. за помощь в организации экспедиции на Баренцево море; сотрудникам морской биологической станции СПбГУ за помощь в организации сборов материала и лабораторных работ на Белом море; Казакову В.И. и О. Знаменской за помощь в проведении полевых исследований на Баренцевом море; сотрудникам морской станции в Чарно (Tjarno, Швеция) Шерстин Йоханессон и Марине Пановой за помощь в организации работы по микросателлитному анализу ДНК и предоставленные образцы ДИК моллюсков из Швеции; сотруднику ББС ЗИН РАН Е. Козминскому за предоставленную ДНК моллюсков о. Вайгач; сотруднику ЗИН РАН М. Фокину за предоставленных моллюсков из Тювы-губы (Баренцево море); ученому секретарю диссертационного совета С.И. Сухаревой за помощь и содействие, оказанные при подготовке к защите диссертационной работы.

Глубокая благодарность моей семье за терпение, настойчивость, моральную и материальную поддержку.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Грачева, Юлия Александровна, Санкт-Петербург

1. Абрамсон, Н.И. Филогеография: Итоги, проблемы, перспективы // Вестник ВОГиС. 2007. Том 11, №2. С. 307-331.

2. Алтухов Ю. П., Рынков Ю. Г. Популяционные Системы и их структурные компоненты. Генетическая стабильность и изменчивость // Журн. общ. биологии. 1970. Т. 31, №5. С. 507.

3. Банникова А.А. Молекулярные маркеры и современная филогенетика Млекопитающих // Журнал Общей биологии. 2004. Т. 65, №4. С.278-305

4. Богданов А.С. Хромосомная дифференциация популяций малой лесной мыши, Sylvaemus uralensis в восточной части ареала вида // Зоол. журн. 2001. Т. 80,№3. С. 331-342.

5. Голиков А.Н. Класс Gastropoda // Моллюски Белого моря. Л.: Наука, 1987.-С. 41-205.

6. Голиков А.Н., Кусакин О.Г. Раковинные брюхоногие моллюски литорали морей СССР. Л.: Наука, 1978. 257 с.

7. Гохман В.Е. Хромосомы наездников семейства Braconidae (Hymenoptera) // Тр. Русск. энтом. об-ва. 2004. Т. 75. Вып. 1. С. 96-101.

8. Гранович А.И., Михайлова Н.А., Знаменская О., Петрова Ю.А. Видовой состав моллюсков рода Littorina (Gastropoda, Prosobranchia) Восточного Мурмана//Зоол. журн. 2004. Т.83, № 11. С. 1305-1317.

9. Гранович А. И., Сергиевский С.О. Оценка репродуктивной структуры популяций моллюска Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda: Prosobranchia) в Белом море // Зоологический журнал. 1990. Т.69. С. 32-41.

10. Гранович А.И., Сергиевский С.О. Микрораспределение особей темно- и светлоокрашенных фенотипов в популяции Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda: Prosobranchia) // Популяционные исследования беломорских моллюсков. Тр. ЗИН РАН. 1995. С. 61-77.

11. Гундерина JI. И., Кикнадзе И. И., Голыгина В. В. Внутривидовая дифференциация цитогенетической структуры природных популяций Chironomus plumosus L. — центрального вида группы видов-двойников // Генетика. 1999. Т.35 (2). С. 93—202.

12. Гуцевич А. В., Мончадский А. С., Штакельберг А. А. Фауна СССР. Насекомые двукрылые. Т. 3. Вып. 4. М.: Наука, 1970. 384 с.

13. Кабанова В. М., Карташева Н. Н. Кариотипы кровососущих комаров рода Aedes (Diptera, Culicidae) // Генетика. 1972. Т. 8, №23. С. 47.

14. Коробицина К.В., Якименко JI.B. Роль и место wagneri-подобных форм домовой мыши (Rodentia, Muridae) фауне России и сопредельных стран // Зоол. журн. 2004. Т. 83, вып. 9. С. 1018 1030.

15. Корочкин JI. И. Взаимодействие генов в развитии. М.: Наука, 1977. 280 с.

16. Майр Э. Зоологический вид и эволюция. М.: Мир, 1968. 597 с.

17. Майр Э. Популяции, виды и эволюция. М.: Мир, 1974. 460 с.

18. Майр Э. Принципы зоологической систематики. М.: Мир, 1971. 454 с.

19. Матвеева Т.А. Экология и жизненные циклы массовых видов брюхоногих моллюсков Баренцева и Белого морей // Сезонные явления вжизни Белого и Баренцева морей. Исследования фауны морей. Т.13(21). Л.: Наука., 1974. С. 65-190.

20. Мейер М.Н., Орлов В.Н., Схолль Е.Д., Использование данных кариологического, физиологического и цитофизиологического анализов для выделения нового вида у грызунов (Rodentia, Mammalia) // Докл. АН СССР. 1969. Т. 188. № 6. С. 1411-1414.

21. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. Возрастная структура популяций брюхоногих моллюсков Littorina saxatilis и L. obtusata в Белом море // Труды ЗИН РАН СССР. 1991. Т. 233. С. 79-124.

22. Соколов В.Е., Ковальская Ю.М., Баскевич М.И. О видовой самостоятельности мышовки Штранда Sicista strandi (Rodentia, Dipodoidea) // Зоол. журн. 1989. Т. 68, вып. 10. С. 95 106.

23. Стегний В. Н. Генетические основы эволюции малярийных комаров. I. Хромосомные филогенетические связи // Зоол. журн. 1981. Т. 60, вып. 1. С. 69.

24. Стегний В. Н. Репродуктивные взаимоотношения малярийных комаров Anopheles комплекса maculipennis // Зоол. журн. 1980. Т. 59, вып. 10. С. 1469.

25. Стегний В.Н. Архитектоника генома, системные мутации и эволюция. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1993. 111 с.

26. Филатова З.А., Зацепин В.И. Класс Gastropoda брюхоногие моллюски. -В кн.: Определитель фауны и флоры северных морей СССР. М., «Сов. Наука», 1948.

27. Чубарева Л. А., Петрова Н. А. Основные характеристики кариотипов мошек (Diptera, Similidae) мировой фауны // Кариосистематика беспозвоночных животных / Зоол. ин-т АН СССР. JL, 1979. С. 58.

28. Ященко В.В., Гранович А.И., 2002. Littorina fabalis (Turton, 1825): еще один вид литоральных гастропод Белого моря // Вестн. С.-Петерб. унив., Сер.З. Вып.4 (№ 27). С.34-45.

29. Atkinson, W. D. & Warwick, Т. The role of selection in the colour polymorphism of Littorina rudis (Maton) and Littorina arcana Hannaford Ellis (Prosobranchia: Littorinindae) // Biological Journal of the Linnean Society. 1983. Vol. 20. P. 137-151.

30. Avise J. C., Molecular markers, Natural History, and Evolution. Chapman and Hall, New York. 1994. 511 p.

31. Avise, J. C. Systematic value of electropho- retic data // Syst. Zool. 1975. Vol. 23. P. 465-481.

32. Ayala, F. J., Genetic differentiation during the speciation // Evol. Biol. 1975. Vol. 8. P. 79-113.

33. Backeljau Т., De Brayn, L., De Wolf, H., Jordaens, K., Van Dongen, S., Verhagen, R and Winnepenninckx, B. Random Amplified polymorphic DNA (RAPD) and parsimony method // Cladistics. 1995. Vol., 11. P. 119-130.

34. Backeljau Т., Warmoes, T. The phylogenetic relationships of ten Athlantic littorinids assessed by allozyme electrophoresis // Proceedings of the third International Symposium on Littorinid Biology, Malacological society of London. 1992.

35. Backeljau Т., Wolf H. de, Dongen S. van, Brito C. The phylogenetic relationships of Littorina striata as deduced from allozyme data // Cah. Biol, mar. 1994. Vol. 35. P. 239-240.

36. Barber, H. S. North American fireflies of the genus Photuris // Smithsonian Misc. Col. 1951. Vol. 117. P. 1-58.

37. Barbieri M, Bavestrello G, Sara M. Morphological and ecological differences in two electrophoretically detected species of Cliona (Porifera, Demospongiae) // Biol J Linn Soc. 1995. Vol. 54. P. 193-200.

38. Bateman P.W. Mate preference for novel partners in the cricket Gryllus bimaculatus II Ecol Entom. 1998. Vol. 23. P. 473-475.

39. Bavestrello, G. and M. Sara. Morphological and genetic differences in ecologically distinct populations of Petrosia (Porifera, Demospongiae) // Biol. J. Linn. Soc. 1992. Vol. 47. P. 49-60.

40. Bickford D., Lohman D. J., Sodhi N. S., Ng P. K., Meier R., Winker K., Ingram К. K., Das I. Cryptic species as a window on diversity and conservation // Trends Ecol Evol. 2006. Vol. 22. P. 149-155.

41. Bowditch В. M., Albright D. G., Williams J. G. K., Braun M. J. The use of RAPD markers in comparative genome studies // Meth. Enzymol. 1993. Vol. 224. P. 294-309.

42. Boyes J. W., Wilkes A. Chromosomes of Tabanidae (Diptera) // Can. J. Genet. Cytol. 1972. Vol. 14. P. 95.

43. Brockhouse, C.L., Vajime, C.G., Marin, R., and Tanguay, R.M. Molecular identification of onchocerciasis vector sibling species in black flies (Diptera: Simuliidae) // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. Vol. 194. P. 628-634.

44. Bruford M.W., Wayne R.K. Microsatellites and their application to population genetics studies. // Curr. Opin. Genet. Devel. 1993. Vol. 3. P. 939-943.

45. Caugant D., Bergerard J. The sexual cycle and reproductive modality in Littorina saxatilis Olivi (Mollusca: Gastropoda) // Veliger. 1980. Vol. 23. P. 107-111.

46. Clauton P. E., Carson H. L., Sato J. E. Polytene chromosome relationships in Hawaiian species of Drosophila. VI. Supplementary data on methaphases and gene sequences // Univ. Texas Publ. 1972. № 7213. P. 163.

47. Cohen S., Faugeron S., Martinez E.A. et al. Molecular identification of two sibling species under the name Gracilaria chilensis (Rhodophyta, Gracilariales) // Journal of Phycology. 2004. Vol. 40. P. 742-747.

48. Colluzzi M. Sibling species in Anopheles and their importance in malariology // Miscellaneous Publ. Entomol. Soc. Amer. 1970. Vol. 7, № 1. P. 62.

49. Coluzzi M., Sabatini A., Petrarca V., Di Deco M. A. Cromosomal differentiation and adaptation to human environments in the Anopheles ganibiae complex // Royal Soc. Tropical Med. Hygiene. 1979. Vol. 73, № 5. P. 483.

50. Coyne, J. A. and Kreitman, M. Evolutionary genetics of two sibling species, Drosophila simulans and D. secheliia II Evolution. 1986. Vol. 40. P. 673-691.

51. Crossland S., Coates D., Grahame J. Use of random amplified polymorphic DNAs (RAPDs) in separating two sibling species of Littorina II Mar. Ecol. Prog. Ser. 1993. Vol. 96. P. 301-305.

52. Crossland S., Coates D., Grahame. J. et al. The Littorina saxatilis species complex interpretation using random amplified polymorphic DNAs // Origin and Evolutionary radiation of the Mollusca. 1996. P. 205-209.

53. Dautzenberg, P. and Fischer, H. Mollusques provenant des campagnes de l'Hirondelle et de la Princesse-Alice dans les Mers du Nord. Monaco // Imprimerie de Monaco. 1912. In 4to. 629 p.

54. Degnan S.M. The perils of single gene trees-mitochondrial versus single-copy nuclear DNA variation in white-eyes (Aves: Zosteropidae) // Mol. Ecol. 1993. Vol. 2. P. 219-225.

55. Dobzhansky Th. Genetics of evolutionary process. New-York; Lond.: Columbia Univ. Press, 1971. 520 p.

56. Dytham C., Grahame J. and P.J. Mill. Synchronous penis shedding in the rough periwinkle, Littorina arcana II Journal of the Marine Biological Association of the United Kingdom. 1996. Vol. 76. P. 539-542.

57. Dytham, C., Grahame, J. and Mill, P.J. Esterase variation in Littorina arcana and L. saxatilis at Robin Hood's Bay, Yorkshire. Proceedings of the Third Int. Symposium on Littorinid Biology. 1992. P. 39-44.

58. Dytham, C., Mill, P.J., and Grahame, J. Distribution, abundance and shell morphology of Littorina saxatilis (Olivi) and Littorina arcana Hannaford Ellis at Robin Hood's Bay, North Yorkshire II Hydrobiologia. 1990. Vol. 193. P. 233-240.

59. Edwards M., Davies M.S. Functional and ecological aspects of the mucus trails of the intertidal prosobranch gastropod Littorina littorea // Mar. Ecol. Prog. Ser. 2002. Vol. 239. P. 129-137.

60. Erlandsson, J., Kostylev, V. Trail following, speed and fractal dimension of movement in a marine prosobranch, Littorina littorea, during a mating and nonmating season // Marine Biology. 1995. Vol.122. P. 87-94.

61. Felsenstein, J. An alternating least squares approach to inferring phylogenies from pairwise distances // Syst. Biol. 1997. Vol. 46. P. 101-111.

62. Feng, A., Gerhardt, H.C.& Capranica, R.R. Sound localization behaviour of the green treefrog {Hyla cinerea) and the barking treefrog (H. gratiosa) // J. Сотр. Physiol. Rev. 1976. Vol. 107. P. 241-252.

63. Flavell R.B. Chromosomal DNA sequences and their organization, in Nucleic acids and proteins in plants, eds. Parthier В., Boulter D., Springer, Berlin, Germany. 1982. P. 46-74.

64. Fokin S. I., Przybo E., Chivilev M. Nuclear reorganization variety in Paramecium (Ciliophora: Peniculida) and its possible evolution // Acta Protozool. 2001. Vol. 40. P. 249-261.

65. Freeman Т. H., MacKay M. R., Campbell I. M. et al. On coniferophagous species of Choristoneura (Lepidoptera, Tortricidae) in north America // I-IV, Can. Enthomol. 1967. Vol. 99. P. 449-506.

66. Fretter, V. and A. Graham. The prosobranch mollusks of Britain and Denmark. Part V Marine LittorinacQa II J. moll. Stud. 1980. suppl. 7.

67. Fretter, V., and A. Graham. British prosobranch molluscs: their functional anatomy and ecology, revised and updated edition. Ray Society Monographs. 1994. 755 pp.

68. Frizzi G. Salivary gland chromosomes of Anopheles //Nature. 1947. Vol. 160. P. 226.

69. Frizzi G., Bianchi V., Mameli M. Cylogenetics, biochemistry and cytochemistry as applied to microtaxonomy of Anopheles II R. C. Semin. Sci. Cagliari, Suppl. 1969. Vol. 38. P. 115.

70. Frizzi G., De Carii L. Studio preliminare comparative genetics e citogenetico fra aluune specio nordamericane di Anopheles maculipennis e l'Anopiieles maculipennis atroparvus Italiano // Symp. genet. 1954. Vol. 2. P. 184.

71. Funk D.J., Omland K.E. Species-level paraphyly and polyphyly: frequency, causes, and consequences, with insights from animal mitochondrial DNA // Annu. Rev. Ecol. Syst. 2003. Vol. 34. P. 397-423.

72. Gabelli, F.M.; GJ. Fernandez; V. Ferretti; G. Posse; E. Coconier et al. Range contraction in the pampas meadowlark Sturnella defilippii in the southern pampas grasslands of Argentina// Oryx. 2004. Vol. 38. P. 164-170.

73. Galindo J., Butlin R.K. Transcriptome sequencing of Littorina saxatilis using 454 Life Sciences technology: Welcome to the "wild genomics". Abstracts of 9 Int.Symp. on Littorinid Biol. 2-7 Sept. 2008. Oia, Spain. 2008. P.29.

74. Gokhman V.E. Chromosomes of Chrysidoidea (Hymenoptera) // Melika G., Thuroczy C. (Eds). Parasitic wasps: evolution, systematics, biodiversity and biological control. Budapest: Agroinform, 2002. P. 249-252.

75. Grahame J., Mill P. J, Brown, A. C. Adaptive and non-adaptive variation in two species of rough periwinkle {Littorina) on British shores // Hydrobiologia. 1990. Vol. 193. P. 223-231.

76. Grahame J., Mill P. J. Shell shape variation in Littorina s axatilis and L. arcana: a case of character displacement// J. Mar. Biol. Ass. U. K. 1989. Vol. 69. P. 837-855.

77. Grahame J., Mill P .J. Relative size of the foot of two species of Littorina on a rocky shore in Wales // Journal of Zoology. 1986. Vol. 208. P. 229-236.

78. Grahame, J., Shedding of the penis in Littorina littorea. Nature,. London, 1969. 221. P. 976.

79. Granovitch A. I., Sokolova I. M. Littorina arcana Hannaford Ellis, 1978 — a new record from the eastern Barents Sea // Sarsia. 2001. Vol. 86. P. 241-243.

80. Hadrys. H., Balick, M. and Schierwater, В., Applications of random amplified polymorphic DNA (RAPD) in molecular ecology // Molecular Ecology. 1992. Vol. l.P. 55-63.

81. Hannaford Ellis C. Morphology of the oviparous rough winkle, Littorina arcana Hannaford Ellis, 1978, with notes on the taxonomy of the L. saxatilis species-complex (Prosobranchia: Littorinidae) // J. Conch. 1979. Vol. 30. P. 43-56.

82. Hannaford Ellis С. The breeding migration of Littorina a rcana Hanaford Ellis, 1978 (Prosobranchia: Littorinidae) // Zool. J. Linn. Soc. 1985. Vol. 84. P. 91-96.

83. Hannaford Ellis, C. J. Littorina arcana sp. nov.: a new species of winkle (Gastropoda. Prosobranchia: Littorinidae) // J. Conchol. 1978. Vol. 29. P. 304.

84. Heller, J. The taxonomy of some British Littorina species, with notes on their reproduction (Mollusca: Prosobranchia) // Zool J Linn Soc. 1975. Vol. 56. P. 131-151.

85. Hendrixson, В. E., Bond J. E. Testing species boundaries in the Antrodiaetus unicolor species complex (Araneae: Mygalomorphae: Antrodiaetidae): "Paraphyly and cryptic diversity. Molecular Phylogenetics and Evolution 2005. Vol.36. P. 405-416.

86. Hey J. Genes, Categories and Species, The Evolutionary and Cognitive Causes of the Species Problem. Oxford University Press. 2001. 217 p.

87. Hoekstra, H. E. and Coyne, J. A. The locus of evolution: evo devo and the genetics of adaptation // Evolution. 2007. Vol. 65. P. 995-1016.

88. Hohenlone P. A., Boulding E. G. A molecular assay identifies morphological characters useful for distinguishing the sibling species Littorina scutulata and L. plena 11 J. Shellfish Res. 2001.-Vol. 20(1). P. 453-457.

89. Hubby J., Throckmorton L. Protein difference in Drosophila. IV. A study of sibling species // Amer. Nat. 1968. Vol. 925. P. 193.

90. Hudson R.R., Turelli M. Stochasticity overrules the «three-times rule»: genetic drift, genetic draft, and coalescence times for nuclear loci versus mitochondrial DNA // Evolution. 2003. Vol. 57. P. 182-190

91. Hughes C., Queller D. Detection of highly polymorphic microsatellite loci in a species with little allozyme polymorphism. // Mol. Ecol. 1993. Vol. 2. P. 131138.

92. Hughes, R. N. and D. J. Roberts. Comparative demography of Littorina rudis, L. nigrolineata and L. neritoides on three contrasted shores in North Wales // J. anim. Ecol. 1981. Vol. 50. P. 251-268.

93. Ito A., Wada S. Intrasexual copulation and mate discrimination in a population of Nodilittorina radiate (Gastropoda: Littorinidae) // J.Ethol. 2006. Vol.24. P. 45-49.

94. James, B.L. The characters and distribution of the subspecies and varieties of Littorina saxatilis (Olivi, 1872) in Britain. Cah. Biol. Mar. 1968. Vol. 9. P. 143-165.

95. Janson K. Selection and migration in two distinct phenotypes of Littorina saxatilis in Sweden // Oecologia. 1983. Vol. 59. P. 58-61.

96. Janson K. Phenotypic differentiation in Littorina saxatilis Olivi (Mollusca, Prosobranchia) in a small area on the Swedish west coast // J. Moll. Stud. 1982. Vol. 48. P. 167-173.

97. Janson, K. and Ward R. D. The taxonomic status of Littorina tenebrosa Montagu as assessed by morphological and genetic analysis // J. Conch. 1985. Vol. 32. P. 9-15.

98. Janson, K. and Ward, R. D. Microgeographic variation in allozyme and shell characters in L. saxatilis Olivi (Prosobranchia: Littorinidae) // Biological Journal of the Linnean Society. 1984. Vol. 22. P. 289-307.

99. Jaslow, A. P. and Vogt R. C. Identification and distribution ofHyla versicolor and Hyla chrysoscelis in Wisconsin // Herpetologica. 1977. Vol.33. P. 201205.

100. Johanesson K., Johanesson В., Rolan-Alvarez E. Morphological differentiation and genetic cohesiveness over a microenvironmental gradient in the marine snail Littorina saxatilis II Evolution. 1993. Vol. 47. P. 17701787.

101. Johanesson K., Rolan-Alvarez E., Ekendahl A. Incipient reproductive isolation between two sympatric morphs of the intertidal snail Littorina saxatilis //Evolution. 1995. Vol. 49. P. 1180-1190.

102. Johannesson et al., 2010 in press

103. Johannesson К and Johannesson B. The taxonomic status of Littorina neglecta a comment to Grahame, Mill, Double and Hull // J. mar. biol. Ass. U.K. 1993. Vol. 73. P. 249 .

104. Johannesson K, Ekendahl A. Selective predation favouring cryptic individuals of marine snails (Littorina) // Biological Journal of the Linnean Society. 2002. Vol. 76(1). P. 137-144.

105. Johannesson K., Mikhailova N. Habitat-related genetic substructuring in a marine snail (Littorina fabalis) involving a tight link between an allozyme and a DNA locus // Biological Journal of the Linnean Society. 2004. Vol. 81. P. 301-306.

106. Johannesson, В and Johannesson, K. Littorina neglecta Bean, a morphological form within the variable species Littorina saxatilis (Olivi)? // Hydrobiologia. 1990a. Vol. 193. P. 89-87.

107. Johannesson, К and Johannesson, B. Genetic variation within Littorina saxatilis (Olivi) and Littorina neglecta Bean: is L. neglecta a good species? // Hydrobiologia. 1990b. Vol. 193. P. 89-97.

108. Johannesson, К and Johannesson, B. Differences in allele frequencies of Aat between high- and mid- rocky shore populations of Littorina saxatilis (Olivi) suggest selection in this enzyme locus // Genetical Research Cambridge. 1989. Vol. 54. P. 7-11.

109. Johannesson, K. Evolution in Littorina: ecology matters // J. Sea Res. 2003. Vol. 49. P. 107-117.

110. Keyl H. G. Chromosomenevolution bei Chironomus. II. Chromosomenumbauter und phylogenetische Beziehungen der Arten // Chromosoma (Beri.). 1962. Bd 13. S. 464.

111. Keyl H. G., Keyl J. Die cytologische Diagnostik der Chironomiden // Arch. Hydrobiol. 1959. Vol. 56. P. 43.

112. Kitzmiller J. B. Genetics, cytogenetics and evolution of mosquitoes // Adv. Genetics. New York, 1976. Vol. 18. P. 315.

113. Knight A. J., Ward, R. D. The genetic relationships of three taxa in the Littorina saxatilis species complex (Prosobranchia: Littorinidae) // J. Moll. Stud. 1991. Vol. 57. P. 81-91.

114. Knight. A. J , Hughes, R. N. Ward, R. D. A striking example of the founder effect In the mollusc Littorina saxatilis II Biol J Linn. Soc. 1987. Vol. 32. P. 417-426.

115. Knowlton N. Thresholds and Multiple Stable States in Coral Reef Community Dynamics//American Zoology. 1992. Vol. 32. P. 674-682.

116. Knowlton, N. Sibling species in the sea // Annu. Rev. Ecol. Syst. 1993. Vol. 24. P. 189-216.

117. Koreth J., Jhon L. and James M. Microsatellites and PCR genomic analysis // Journal of Pathology. 1996. Vol. 178. P. 239-248.

118. Kroodsma, D. E. Songs of the Alder flycatcher (Empidonax alnorum) and Willow Flycatcher {Empidonax traillii) are innate // Auk 1984. Vol. 101. P. 13-24.

119. Lukhtanov V.A., Kandul N.P., Plotkin J.B., Dantchenko A.V., Haig D., Pierce N.E. Reinforcement of pre-zygotic isolation and karyotype evolution in Agrodiaetus butterflies //Nature. 2005. Vol. 436, issue 7049. P. 385-389.

120. Maciejewska A. Sibling species within Paramecium jenningsi revealed by PCR-RFLP // Acta Protozool. 2006. Vol. 45. P. 387-393.

121. Mallet J. What does Drosophila genetics tell us about speciation? // Trends in Ecology Evolution. 2006. Vol. 21. № 7. P. 386-393 .

122. Mallet, J. Hybridization, ecological races, and the nature of species: empirical evidence for the ease of speciation // Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 2008. Vol. 363. P. 2971-2986.

123. Marinucci M., Romi R., Mancini P., Di Luca M., Severini C. Phylogenetic relationships of seven Palearctic members of the An. maculipennis complex inferred from ITS2 sequence analysis // Insect Mol. Biol. 1999. Vol. 8. № 4. P.469-480

124. Marquez, R., Moreira, C., do Amaral, J.P.S., Pargana, J.M., Crespo, E.G., Sound pressure level of advertisement calls of Hyla meridionalis and Hyla arborea //Amphibia-Reptilia. 2005. Vol. 26. P. 391-395.

125. Mathews L. M., Schubart C. D., Neigel J. E. et al. Genetic, ecological and behavioural divergence between two sibling snapping shrimp species (Crustacea: Decapoda: Alpheus) И Mol. Ecol. 2002. Vol. 11. P. 1427-1437.

126. Medeiros, R., Serpa, L., Brito, C., De Wolf, H., Jordaens, K., Winnepenninckx, B. and Backeljau, T. Radular myoglobin and protein variation within and among some littorinid species (Mollusca: Gastropoda) // Hydrobiologia. 1998. Vol. 378. P. 43-51.

127. Mikhailova N., Johanesson K. A comparison of different protocols for RAPD analysis of Littorina И Hydrobiologia. 1998. Vol. 378. P. 33-42.

128. Mill, P. J. and Grahame, J. Distribution of the rough periwinkle {Littorina) in Great Britain //Hydrobiologia. 1990. Vol. 193. P. 21-27.

129. Morse, G. E., and B. D. Farrell. Interspecific phylogeography of the Stator limbatus species complex: The geographic context of speciation and specialization // Molecular Phylogenetics and Evolution. 2005. Vol. 36. P. 201-213.

130. Nagl S., Tichy H., Mayer W.E., Takahata N. and Klein J. Persistence of neutral polymorphisms in Lake Victoria cichlid fish // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. Vol. 95: 14238-14243.

131. Nei, M. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals // Genetics. 1978. Vol. 89. P. 583-590.

132. Paetkau, D., W. Calvert, I. Stirling, and C. Strobek. Variation in genetic diversity across the range of North American brown bears // Conserv. Biol. 1995. Vol. 12. P. 418-429.

133. Panova, M. Makinen, T. Fokin, M. Andre, C. Johannesson, K. Microsatellite cross-species amplification in the genus Littorina and detection of null alleles in Littorina saxatilis II Journal of Molluscan Studies. 2008. Vol. 74; Part 2, P. 111-118.

134. Paterson I. G., Partridge V., Buckland-Nicks J. Multiple Paternity in Littorina obtusata (Gastropoda, Littorinidae) Revealed by Microsatellite Analyses // Biol. Bull. 2001. Vol. 200. P. 261-267.

135. Pierce G. W. The songs of insects, Harvard Univ. Press, Cambridge, 1948. 329 p.

136. Poinar, G. 0., Jr., and E. M. Kozodoi. Neoaplectana glaseri and N. anomali: sibling species or parallelism? // Revue de Nematologie. 1988. Vol. 11. P. 1319.

137. Queller D., Strassmann J., Hudges C. Microsatellites and kinship. // Trends Ecol. Evol. 1993. Vol. 8. P. 285-288.

138. Rafaelli, D. G. The taxonomy of the Littorina saxatilis species complex, with particular reference to the systematic status of Littorina patula Jeffreys // Zoological Journal of the Linnean Society. 1979. Vol.65. P. 219-232.

139. Raffaelli, D. G. The determinants of zonation of Littorina neritoides and the Littorina saxatilis species-complex. Ph.D. Thesis. University of Wales. 1976.

140. Raffaelli, D. G. Observations on the copulatory behavior of Littorina rudis (Maton) and Littorina nigrolineata Gray // Veliger. 1977. Vol. 20. P. 75-77.

141. Ramshaw, J. A. M., J. A. Coyne, and R. C. Lewontin. The sensitivity of gel electrophoresis as a detector of genetic variation // Genetics. 1979. Vol. 93. P. 1019- 1037.

142. Rau P. The nests and the adults of colonies of Polistes wasps // Ann. Enthomol. Soc. Amer. 1946. Vol. 39. P. 11-27.

143. Reid D. G. A cladistic phylogeny of the genus Littorina (Gastropoda): implications for evolution of reproductive strategies and for classification // Hydrobiologia. 1990a. Vol. 193. P. 1-119.

144. Reid D. G. Systematics and evolution of Littorina. London: London Ray Society, 1996.

145. Reid D. G. The comparative morphology, phylogeny and evolution of the gastropod family Littorinidae. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 1989. Vol. 324. P. 1-110.

146. Reid D. G. Trans-Arctic migration and speciation induced by climatic change: the biogeography of Littorina (Mollusca: Gastropoda) // Bull. Mar. Sci. 1990b. Vol. 47. P. 35-39.

147. Reid D. G., Rumbak E., Thomas, R. H. DNA, morphology and fossils: phylogeny and evolutionary rates of the gastropod genus Littorina И Phil. Trans. Soc. Lond. B. 1996. Vol. 351. P. 877-895.

148. Rolan-Alvarez E., Erlandsson J., Johannesson K., Cruz R. Mechanisms of incomplete prezygotic reproductive isolation in an intertidal snail: testing behavioural models in wild population // J. Evol. Biol. 1999. Vol.12. P. 879890.

149. Rolan-Alvarez, E. Genetic Structure and Sexual Selection in Natural Populations of Two Sibling Species of the Genus Littorina. Ph.D. Thesis, University of Santiago de Compostela, Spain (in Spanish). 1993.

150. Rolan-Alvarez, E. Sympatric speciation as a by-product of ecological adaptation in the Galicia Littorina saxatilis hybrid zone // Journal of Molluscan Studies. 2007. Vol. 73. P. 1-10.

151. Roy M., Geffen E., Smith D. et al. Patterns of differentiation and hybridization in North American wolf-like canids revealed by analysis of microsatellite loci. // Mol. Biol. Evol. 1994. Vol. 11. P. 553-570.

152. Rumbak E., Reid D. G., Thomas R. H. Reconstruction of phylogeny of 11 species of Littorina (Gastropoda: Littorinidae) using mitochondrial DNA sequence data //Nautilus. 1994. Vol. 2. P. 91-97.

153. Sacchi, C.F., Testard, P., Voltolina, D., Recherches sur le spectre trophique compare de Littorina saxatilis (Olivi) et de L.nigrolineata (Gray) (Gastropoda, Prosobranchia) sur la greve de Roscoff // Cah. Biol. Mar. 1977. Vol. 28. P. 99-505.

154. Saez, A. G., and E. Lozano. Cryptic species: as we discover more examples of species that are morphologically indistinguishable, we need to ask why and how they exist // Nature. 2005. Vol. 433. P. 111.

155. Saikia XJ., Sharma N., Das A. What is a Species? An endless debate // Resonance. 2008. Vol. 13:11. P. 1049-1064.

156. Saur M. Mate discrimination in Littorina littorea (L.) and L. saxatilis (Olivi) (Mollusca:Prosobranchia) // Hydrobiologia. 1990. Vol.193. P. 261-270.

157. Schluter D. Ecology and the origin of species // Trends in ecology and evolution. 2001. Vol. 16. N. 7. P. 372-380.

158. Scott J. A., Brogdon W. G. and Collins F. H. Identification of single specimens of the Anopheles gambiae complex by the polymerase chain reaction //Amer. J. Tropical Med. Hyg. 1993. Vol. 49. P. 520-529.

159. Sharma S., Raina S.N. Organization and evolution of highly repeated satellite DNA sequences in plant chromosomes // Cytogenet. Genome Res. 2005. Vol. 109. № 1-3. P. 15-26.

160. Smith, D.C., P.J. Mill, and J. Grahame, Environmentally-induced variation in uric acid concentration and xanthine dehydrogenase activity in Littorinasaxatilis (Olivi) and L. arcana Hannaford Ellis // Hydrobiologia, 1995. Vol. 309(1-3). P. 111-116.

161. Smith, S. M., A review of the genus Littorina in British and Atlantic waters (Gastropoda: Prosobranchia; //Malacologia. 1982. Vol. 22. P. 535-539.

162. Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R. Numerical Taxonomy. W.H. Freeman and Co., San Francisco, CA, USA. 1973.

163. Sokolov E. P., Sokolova I. M., Portner H.-O. et al. Composition and relative abundance of microsatellite repeats in genome of Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda: Littorinidae). // J. Moll.Stud. 2001. Vol. 67. P. 499-510.

164. Sokolov E. P., Sokolova I. M., Portner H.-O. Polymorphic microsatellite DNA markers from the marine gastropod Littorina saxatilis. II Mol. Ecol. Notes. 2002. Vol. 2.

165. Spitzenberger F., Strelkov P.P., Winkler H., Haring E. A preliminary revision of the genus Plecotus (Chiroptera, Vespertilionidae) based on genetic and morphological results // Zoologica Scripta. 2006. Vol. 35. P. 187-230.

166. Stebbins G. L. A brief summary of my ideas on evolution // American Journal of Botany. 1999. Vol. 86. P. 1207-1208.

167. Stebbins G.L. Variation and Evolution in plants. N.Y.: Columbia Univ. Press, 1950. 226 p.

168. Stone W. S., Guest W. C., Wilson F. D. The evolutionary implications of the virtlis group of Drosophila II Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1960. Vol. 46. P. 350.

169. Sturtevant A. H., Dobzhansky Th. Inversions in the third chromosome of wild races of Drosophila pseudoobscwa, and their use in the study of the history of the species // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1936. Vol. 22. P. 448.

170. Sundberg P., Knight A. J., Ward R. D. et al. Estimating the phylogeny of the mollusk Littorina saxatilis (Olivi) from enzyme data: methodological considerations //Hydrobiologia. 1990. Vol. 193. P. 29-40.

171. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers. // Nucleic Acids Res. 1989. Vol. 17. P. 64636471

172. Taylor A., Sherwin W., Wayne R. Genetic variation of microsatellite loci in a bottle-necked species: The northern hairy-nosed wombat Lasiorhinus krefftii. И Mol. Ecol. 1994. Vol. 3. P. 277-290.

173. Tie A., Boulding E., Naish K. Polymorphic microsatellite DNA markers for the marine gastropod Littorina subrotundata. II Mol. Ecol. 2000. Vol. 9(1). P. 108.

174. Ward R. D. Biochemical genetic variation in the genus Littorina (Prosobranchia: Mollusca) // Hydrobiologia. 1990. Vol. 193. P. 53-69.

175. Ward R. D., Janson K. A genetic analysis of sympatric subpopulations of the sibling species Littorina saxatilis Olivi and Littorina arcana Hannaford Ellis I I J. Moll. Stud. 1985. Vol. 51. P. 94-96.

176. Ward R. D., Warwick T. Genetic differentiation in the molluscan species Littorina rudis and Littorina arcana (Prosobranchia: Littorinindae) // Biol. J. Linn. Soc. 1980. Vol. 14. P. 417-428.

177. Warwick T. , Knight, A J , Ward, R . D. Hybridisdation In the Littorina saxatilis species complex (Prosobranchia Mollusca) // Hydrobiologia. 1990. Vol. 193. P. 109-116.

178. Wasserman M. Cytology and phytogeny of Drosophila II Amer. Nat. 1963. Vol. 97, №896. P. 333.

179. White M. J. D. Animal cytology and evolution, 2nd ed. Cambridge: Cambridge Univ. Press, 1954. 454 p. . White M. J. Models of speciatlon // Science. 1968. Vol. 159. P. 1065.

180. Wilding С. S., Grahame J., Mill P. J. Mitochondrial DNA Col haplotype variation in sibling species of rough periwinkles // Heredity. 2000a. Vol. 85. P. 62-74.

181. Wilding C. S., Grahame J., Mill P. J. Nuclear DNA restriction site polymorphisms and the phylogeny and population structure of an intertidal snail species complex // Hereditas. 2000b. Vol. 133. P. 9-18.

182. Wilding C.S., Mill P.J., Grahame J. Partial sequence of the mitochondrial genome of Littorina saxatilis: relevance to gastropod phylogenetics // J Mol Evol. 1999. Vol. 48. P. 348-359.

183. Williams J. G. K., Kubelik A. R., Livak К. I. et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucleic Acids Research. 1990. Vol. 18. P. 6531-6535.

184. Williams. G.A. Variation in populations of Littorina obtusata and L. mariae (Gastropoda) in the Severn Estuary // Biol. J. linn. Soc. 1994. Vol. 51. P. 189198.

185. Winker, K. Bird collections: Development and use of a scientifi с resource // Auk. 2005. Vol. 122. P. 966-971.

186. Winnepenninckx В., Backeljau T. Isolation and characterization of microsatellite markers in the periwinkle Littorina striata King & Broderip, 1832 (Mollusca, Gastropoda, Prosobranchia). // Mol. Ecol. 1998. Vol. 7. P. 1253-1254.

187. Yoon J. S., Richardson R. H. Evolution of Hawaiian Drosophilidae. II. Patterns and rates of chromosome evolution in the Awtopocerus phytogeny // Genetics. 1976. Vol. 83, № 4. P. 827.

188. Zaslavskaya N. I., Sergievsky S. O., Tatarenkov A. N. Allozyme similarity of athlantic and pacific species of Littorina (Gastropoda: Littorinidae) // J. Moll. Stud. 1992. Vol. 58. P. 377-384.

189. Zhao, X. and M.W. Ganal. Applications of repetitive DNA sequences in plant genome analysis. In: A.H. Paterson (ed) Genome Mapping in Plants, Academic Press, San Diego, 1996. P. 111-125.

Информация о работе

Грачева, Юлия Александровна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2010
ВАК 03.02.04

Диссертация

Морфо-анатомический и генетический анализ криптических видов морских гастропод рода Littorina комплекса "saxatilis" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы