Комплекс криптических видов литоральных гастропод подрода Neritrema (Littorinidae: Littorina) Северной Атлантики

Михайлова, Наталья Аркадьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Комплекс криптических видов литоральных гастропод подрода Neritrema (Littorinidae: Littorina) Северной Атлантики
ВАК РФ 03.02.04, Зоология

Автореферат диссертации по теме "Комплекс криптических видов литоральных гастропод подрода Neritrema (Littorinidae: Littorina) Северной Атлантики"

На правах рукописи

МИХАЙЛОВА Наталья Аркадьевна

Комплекс криптических видов литоральных гастропод подрода N.егИгета (ЬіКогіпісІае: ЬШогіпа) Северной Атлантики: сравнительная морфология, филогения, эволюция

03.02.04 - зоология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

00505-да» 1 , ОКТ2012

Санкт-Петербург 2012

005053201

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте цитологии РАН (Санкт-Петербург)

Официальные оппоненты:

Захаров-Гезехус Илья Артемьевич,

д.б.н., профессор, чл.-корр. РАН

Институт общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН

Сиренко Борис Иванович, д.б.н. Зоологический институт РАН

Борхсениус Сергей Николаевич,

д.б.н., профессор Институт цитологии РАН

Ведущее учреждение: Российский государственный педагогический

университет им. А.И.Герцена

Защита диссертации состоится "10" октября 2012 года в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д 002.223.02 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Зоологическом институте РАН по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 1. Факс (812) 328-2941.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Зоологического института РАН.

Автореферат разослан « 3 » сентября 2012 года. Ученый секретарь Диссертационного совета,

/у

доктор биологических наук Ш —' В.Г. Сиделева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Проблемы видообразования, микроэволюции, филогеографии и структуры вида всегда остаются в ряду наиболее дискутируемых вопросов общей биологии, поскольку касаются основных принципов становления биологического разнообразия (Dobzhansky, 1937; Майр, 1968; Тимофеев-Ресовский и др., 1977; Захаров, 2003; Coyne, Orr, 2004; Smadja, Butlin, 2011). В последнее время интерес к этой проблематике еще более возрос, в связи с возможностями применения новых методических подходов. Вслед за развитием базовых молекулярных методов, в исследования зоологов и эволюционистов, широко вовлекаются быстро совершенствующиеся методы молекулярно-генетического анализа геномов, что существенно расширяет наши представления о структуре биологических видов, их происхождении, путях географического расселения и эволюции в целом. Кроме того, динамично развивается математический аппарат для обработки больших массивов разнообразных молекулярных данных (Hudson, Coyne, 2002; Butlin, 2010; Galindo et al., 2010).

Успех в получении новых знаний связан не только с применением арсенала современных методов, но, также, с выбором адекватных моделей для исследований. Не случаен, в этом смысле, повышенный интерес к комплексам близкородственных видов, формирующих симпатрические поселения и характеризующиеся, как правило, недавней эволюционной историей (Coyne et al., 2004; Лухтанов, 2010). Именно на примере таких комплексов близких, часто критических видов, можно продуктивно тестировать гипотезы о модусах микроэволюционных процессов, обсуждать механизмы видообразования. С использованием этих модельных систем могут быть получены сведения о характере и роли межвидовых барьеров, включая механизмы экологической и репродуктивной изоляции близких видов. В макрогеографическом масштабе такие модели позволяют исследовать проблемы внутривидовой структуры и изменчивости, а также анализировать филогеографическую историю видов, в связи с их расселением и микроэволюционными событиями.

был представлен двумя видами - L. saxatilis и L. obtiisata и только в 2006 году появилось первое упоминание о видах L. arcana и L. compressa (Кантор, 2006). В действительности, подрод состоит из комплекса пяти, морфологически сходных, криптических видов (Гранович и др., 2004). Наиболее интригующими, в изучении видов подрода Neñtrema, являются противоречивые данные молекулярно-генетического анализа криптических видов группы "saxatilis" (Ward, Warwick, 1980; Knight, Ward, 1991; Crossland et al, 1993, 1996; Rumbak et al., 1994; Reid et al., 1996; Grahame et al, 1997; Small, Gosling, 2000; Wilding et al, 1999; Wilding et al, 2000 и др.). Филогенетические отношения в этой группе из трёх видов окончательно не могут быть определены на протяжении более чем 30 лет. Полученные ранее данные по анализу аллозимов, митохондриальных и ядерных генов противоречивы и комбинируют все возможные варианты филогенетической близости двух видов по отношению к третьему.

Комплекс североатлантических видов подрода Neritrema эволюционно самый молодой, из всех ныне живущих литторинид (Reid et al., 2012), их изучение крайне актуально для понимания эволюции рода Littorina в целом, учитывая, что детальный анализ видов подрода Neritrema в российских северных морях ранее не проводился. Важно отметить, что существование популяций видов подрода Neritrema на северном краю ареала подчеркивает основные аспекты разделения экологических ниш, дает дополнительные сведения относительно эволюционной пластичности видов. Всё перечисленное выше определяет актуальность работы.

Цель работы: оценить пути эволюционного формирования комплекса криптических видов литоральных гастропод подрода Neritrema в морях Северной Атлантики на основе морфологических, экологических и молекулярно-генетических данных.

Задачи исследования:

1. Провести морфологическую ревизию видов рода Littorina подрода Neritrema на побережьях Баренцева и Белого морей, дать описание диагностических морфологических признаков.

2. Провести экологический анализ распределения видов на литорали в аллопатрических и симпатрических популяциях.

3. Использовать геномную ДНК литторин для поиска видоспецифичных генетических маркеров криптических видов группы "saxatilis".

4. Провести тестирование молекулярных маркеров, используя массовой материал моллюсков группы "saxatilis" из разных географических популяций, и выявить видоспецифичные маркеры, пригодные для диагностики криптических видов группы.

5. Провести генетический анализ криптических видов литторин, на основе сравнения частот гаплотипов микросателлитной ДНК.

6. Провести генетический анализ видов литторин из разных географических популяций, на основе сравнения частот гаплотипов митохондриального гена цитохрома оксидазы b (cyt b) и ядерной ДНК.

7. Оценить эволюционный статус криптических видов на основе их морфо-биологических характеристик и сравнительного анализа геномной ДНК.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Моллюски рода Littoriiia подрода Neritrema на северо-восточной границе обитания представлены двумя группами криптических видов, а именно: группой "saxatilis" (Littorina saxatilis (Olivi 1792), L. compressa Jeffreys 1865, L. arcana Hannaford Ellis 1978) и группой "obtusata" (L. obtiisata (Linnaeus 1758), L.fabalis (W.Turton 1825)).

2. Список видов подрода Neritrema для побережья Баренцева моря, включает пять видов: L. saxatilis, L. compressa, L. arcana, L. obtusata, L. fabalis; для побережий Белого моря - только три вида - L. saxatilis, L. obtusata, L.fabalis.

3. Видовой статус самок L. saxatilis и L. arcana подтвержден морфологическим описанием, анализом митохондриалыюго и ядерного геномов и наличием фрагмента некодирующей ДНК А2.8 (клонированный нами RAPD фрагмент).

4. Самцы пары видов-двойннков L. saxatilis и L. arcana характеризуются отсутствием морфологически дискретных признаков. Их видовая принадлежность определена амплификацией геномной ДНК, с праймерами к клонированному видоспецифнческому RAPD фрагменту А2.8 самок L. arcana.

5. Существует межвидовое спаривание L. saxatilis и L. arcana в симпатрических природных популяциях, что показано на основе анализа партнеров в копулирующих парах видов группы "saxatilis". Особи L. compressa в межвидовых спариваниях не участвуют.

6. Имеется межвидовая гибридизация видов-двойннков L. saxatilis и L. arcana в симпатрических популяциях Баренцева и Норвежского морей. Частота распределения гибридных особей прямо пропорциональна частоте распределения родительских видов на литорали. В аллопатрических популяциях L. saxatilis межвидовые гибриды отсутствуют.

7. Среди криптических видов подрода Neritrema Северной Атлантики, виды группы "saxatilis" (L. saxatilis, L. compressa и L. arcana) представляют собой комплекс эволюционно молодых видов, L. saxatilis и L. arcana - виды с неполной репродуктивной изоляцией.

Научная новнзна:

Впервые сделано детальное морфологическое описание самцов криптических видов L. saxatilis, L. compressa и L. arcana из симпатрических популяций Баренцева моря и самцов L. saxatilis из аллопатрических популяций Белого моря.

Впервые описаны понуляционная структура и микропространственное распределение на литорали пяти симпатрических видов подрода Neritrema, показана приуроченность видов к разным горизонтам литорали, что может снижать конкуренцию видов за места обитания и пищевые ресурсы.

Впервые обнаружен видоспецифичный для L. arcana ДНК-маркер в составе геномной ДНК, пригодный для идентификации вида.

Впервые, на основе молекулярно-генетического анализа и морфологической идентификации видов, доказана возможность межвидовой гибридизации в паре видов-двойников L. saxatilis и L. arcana и наличие потока генов между ними. Новые данные объясняют противоречия в опубликованных ранее результатах молекулярно-генетических исследований этих видов.

Впервые получены данные по филогеографии криптических видов L. saxatilis, L. compressa и L. arcana из северо-восточных краевых популяций; прослежены филогенетические связи видов на основе ядерного и митохондриалыюго геномов.

Теоретическая и практическая значимость. Научно-практическое значение полученных результатов состоит в ревизии видового состава моллюсков рода Littorina Белого и Баренцева морей, представители которого являются одним из наиболее массовых компонентов литоральной фауны. Проведенная работа закладывает надежный фундамент для практически ориентированных исследований, связанных с оценкой состояния окружающей среды, основанной на анализе литоральных сообществ; для проведения паразитологических исследований по изучению путей циркуляции паразитов морских птиц в сообществах арктических морей; для проведения мониторинговых исследований, направленных на выявление климатических флуктуаций в арктическом регионе. Описание комплекса из пяти видов подрода Neritrema имеет важное методическое значение, поскольку позволит активно использовать эти виды как модельные объекты для фундаментальных популяционных, паразитологических,

физиологических и экологических исследований. Полученные результаты открывают перспективу для уточнения определения "биологического вида" в целом, а также углубляют знания о механизмах видообразования и являются перспективными для исследования механизмов эволюции геномов. Филогеографические данные могут быть использованы для реконструкции представлений об истории формирования фауны северных морей России.

Полученные результаты используются в курсах лекций для бакалавров и магистров Санкт-Петербургского государственного университета и при проведении практических занятий в курсе «Молекулярные методы в зоологии».

Апробация работы. Результаты работы были представлены и обсуждены на следующих научных мероприятиях: конференции "Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря" (Архангельск, 1985), III Всесоюзном совещании "Фенетика популяций" (Москва, 1985), IV Всесоюзный симпозиум "Паразиты и болезни водных беспозвоночных" (Москва, 1986), Firth International Symposium on Littorinid Biology (Cork, Ireland, 1996), на семинарах Royal Belgian Institute of Natural Sciences (Brussels, Belgium, 1998, 2002), International Symposium on "Ecological Genetics" (Antwerp, Belgium, 2001),

Второй Всероссийской школе по морской биологии "Морская флора и фауна северных широт: механизмы адаптации и регуляции роста организмов" (Мурманск, 2003), заседании Ученого Совета Института цитологии РАН (С.Петербург, 2004), международной конференции «Сохранение генетических ресурсов» (Санкт-Петербург, 2004), научных сессиях Морской биологической станции СПбГУ (Санкт-Петербург, 2003, 2004, 2005, 2008,

2010), World Congress of Malacology "Mollucan Megadiversity: Sea, Land and Freshwater" (Perth, Australia, 2004), Eighth International meeting on Littorinid biology (Slapton, UK, 2005), Малакологическом совещании "Моллюски: морфология, таксономия, филогения, биогеография и экология" (Санкт-Петербург, 2006), Establishment of Russian-Norwegian Benthos Net-Work (Tromso, Norway, 2007), Ninth International Symposium on Littorinid Biology (Oia, Spain, 2008), Workshop in Conservation Genetics of Baltic Sea organisms (приглашенная лекция "Hybridization and Introgression" (Tjarno, Sweden, 2008), Международной российско-норвежской конференции "Taxonomic research and biodiversity assessment of zoobenthos in the seas of European sector of the Arctic (the Barents and the White Seas): results and perspectives of Russian Norwegian collaboration" (St.Petersburg, 2008), "Arctic biology/Ecology -network creation" Meeting (Tromso, Norway, 2009), (Tjarno, Sweden, 2010), CONOR Symposium "Coordination and Integration of Norwegian, Polish and Russian research activities on Svalbard" (Svalbard, Norway, 2011), Tenth International Symposium on Littorinid Biology and Evolution (St.Petersburg,

2011), 57 Чтения, посвященные памяти В.А.Догеля (Зоологический институт РАН, С.-Петербург, 2012).

Благодарности. В работе, на разных ее этапах, принимали участие студенты и аспиранты Санкт-Петербургского государственного университета, за что автор выражает им самую искреннюю благодарность: Юлии Грачевой (Петровой), Зинаиде Старуновой (Лоскутовой), Алексею Максимовичу, Антонине Чернецкой, Елене Ганже, Владиславу Грабовому, Ольге Котенко. Особую благодарность я хочу выразить Юлии Грачевой -вместе мы получали первые трудоемкие данные по молекулярно-генетической идентификации видов-двойников, а также заведующему кафедрой зоологии беспозвоночных СПбГУ, д.б.н. Андрею Грановичу, моему коллеге и соавтору, вместе с которым мы начинали работать с видами литторин, будучи еще студентами и продолжаем работать по настоящее время. Я искренне признательна моему первому научному руководителю Сергиевскому Сергею Олеговичу, благодаря которому я познакомилась с объектом исследований и, который открыл для меня мир их удивительного полиморфизма. Выражаю большую благодарность Дэвиду Риду (Dr. David Reid, Museum of Natural History, London, UK), Тьерри Беккелью (Prof. Thierry Backeljau, Royal Belgian Institute of Natural Sciences, Brussels, Belgium); шведским коллегам Шештин Йоханнессон (Prof. Kerstin Johannesson) и Марине Пановой (Dr. Marina Panova) (University of Gothenburg, Sweden) - за неизменный интерес к работе, плодотворное обсуждение результатов и всестороннюю помощь. Марине я особенно благодарна за методическую

помощь при выполнении микросателлитного анализа в лаборатории на морской станции Tjarno (Sweden). Искреннюю благодарность за поддержку на всех этапах работы выражаю заведующему Отделом клеточных культур, д.б.н., профессору Пинаеву Георгию Петровичу, директору Института цитологии РАН, чл.-корр. РАН, профессору [Парфенову Владимиру и всем сотрудникам института.

поддержана грантами РФФИ (02-04-48725-а., 05-04-58892-3, 07-04-01376-а, 07-04-10164-к, 08-04-08427-3, 08-04-10090-к, 09-04-01728-а, грантами Научной Программы Президиума Санкт-Петербургского Научного центра РАН (2007, 2008), грантами РФФИ 10-04-10039-к, 11-04-06047-г, 11-04-10040-к, 12-04-00312-а.

Публикации: по теме диссертации опубликована 41 работа, из них 17 в рецензируемых международных и отечественных периодических изданиях, рекомендованных ВАК, 5 статей в коллективных монографиях и сборниках трудов.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 8 глав, выводов, списка литературы и приложения. Диссертация изложена на 26.5 страницах, включающих j'b таблиц и 3& рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. МОЛЛЮСКИ РОДА LITTORINA - МОДЕЛЬ ДЛЯ ЭВОЛЮЦИОННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

В главе приведены и обобщены литературные данные по морфологии, биологии и распространению видов рода Littorina. Проведен анализ опубликованных данных, особое внимание уделено морфологии и филогении видов, в частности результатам, полученных с использованием различных молекулярно-генетических методов и генетических маркеров (аллозимы, митохондриальные и ядерные гены, рестриктный анализ геномной ДНК и др.) для идентификации и характеристики видов. В главе обсуждены проблемы, возникающие при изучении эволюционно близких видов, и представлены преимущества комплекса криптических видов Littorina подрода Neritrema, позволяющие использовать его в качестве модели для изучения механизмов видообразования в природных популяциях.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Общая характеристика материала.

В работе использованы моллюски подрода Neritrema из 24 популяций побережий морей пяти европейских стран — России, Норвегии, Франции, Швеции и Англии. Многолетние сборы и анализ данных проведен для 19 популяций литторинид Баренцева, Белого и Норвежского морей, для 5 популяций (Швеция, Англия, Россия) использованы одноразовые сборы моллюсков. Для морфологического описания криптических видов и описания их популяционной структуры в работе использовано около 20 тысяч моллюсков; в молекулярно-генетическом анализе использована ДНК более 3 тысяч особей, проведено около 8 тысяч амплификаций ДНК с

Николаевичу Работа

праймерами для различных молекулярных маркеров (см. ниже) и получено около 4 тысяч сиквенсов ДНК фрагментов.

2.1 Места сбора материала.

Материал для работы был собран в четырёх географических районах Северной Атлантики. Основные исследования проведены на побережье Баренцева моря (пос. Дальние Зеленцы, Мурманская область), побережье Норвежского моря (г. Тромсё, Норвегия) и побережье Белого моря (МБС СПбГУ, о. Средний, Кандалакшский залив) (Рис.1). Кроме того, в работе использован материал, дополнительно собранный непосредственно автором, либо представленный коллегами, из разных географических мест: сотрудником кафедры ЗБП СПбГУ Ольгой Котенко (морская станция в Роскоффе, Франция), сотрудниками ЗИН РАН к.б.н. Евгением Козминским (побережье о. Новая Земля) и Михаилом Фокиным (Тюва губа, Восточный Мурман), сотрудниками Гётеборгского Университета - профессором Kerstin Johannesson и к.б.н. Мариной Пановой (западное побережье Швеции), сотрудником Университета г. Лидс Dr. John Grahame (побережье Англии). Всем коллегам, предоставившим материал, автор выражает самую искреннюю благодарность.

Варенцево море A s ]

В; ¿ fromm г- 1 Норвегия; в 2 : : •:.. « 6 :• := I ' 7l

! б........Т 2 |

I |:;|| Россия

5 Швеция Финляндия ¡¡¡¡р&с:'"!" "Ulliltlli j , :, н .:,•# ..... .4 8 . Бэ/iOö море X

Балтийское маре ■ |

Ä-i £

Рис. 1. Места сбора материала: морская станция Роскофф, Франция (слева); 1 - г. Тромсе, Норвегия (Telegraphen Bukta, литораль у Akvaplan Niva, остров Somaroe); 2 - Тюва-губа, Кольский залив; 3-7- популяции в районе пос. Дальние Зеленцы, Мурманская область: 3 -губа Ярнышпая; 4 - мыс Дернистый; 5 - мыс Аварийный; 6 - бухта Оскара; 7 - бухта Плохие Чевры; 8 - о. Средний, Кандалакшкий залив. Белое море (справа).

2.2 Методы полевых сборов материала.

Для сбора материала использовали качественные и количественные методы, в зависимости от поставленных задач. Качественные сборы моллюсков были сделаны на побережье морей четырёх европейских стран (Россия, Норвегия, Франция и Англия). Этот материал был необходим для проведения морфологического описания криптических видов и их

молекулярно-генетического типирования. Количественные сборы

моллюсков были выполнены на четырех участках литорали: трёх - в районе морской станции Мурманского морского биологического института КНЦ РАН (пос. Дальние Зеленцы) - в бухте Оскара и губе Ярнышная; а также на участке литорали бухты Телеграфная (Telegraphen Bukta) в городе Тромсё, Норвегия. Количественные сборы проводили по стандартной методике гидробиологического разреза, с площадками 1/40 м2, вдоль проложенных трансект, которые располагались от нижней части (ноль глубин) до верхней (зона заплеска) литорали. Для каждой площадки учитывали количество собранных моллюсков и фиксировали биоценотические показатели. Площадки располагались вдоль трансекты, от нуля глубин, через пояс макрофитов, до верхней зоны литорали (зоны заплеска). Метод позволяет количественно оценить зональное распределение разных видов литторин и соотношение плотности их поселения. Применение количественной системы сборов материала невозможно на прибойных участках литорали, основная площадь которых представляет собой нагромождение крупных валунов, в нижней и средней литорали покрытых макрофитами (Fuchs vesiculosiis, Ascophyllum nodosum, реже F. serratus, F. distichus). В таких местах проводили качественные сборы литторин с поверхности и толщи талломов конкретного вида бурых водорослей и поверхности валунов в нижнем, среднем и верхнем горизонтах литорали.

2.3 Морфологический анализ самок и самцов криптических видов. Для каждого моллюска штангенциркулем измеряли высоту и ширину раковины, определяли фенотип особи. Моллюсков вскрывали под бинокулярным микроскопом, определяли пол, зараженность трематодами. Самок определяли по строению паллиалыюго комплекса желез яйцевода и расположению копулятивной бурсы (Reid, 1996). Морфометрию копулятивного органа проводили по разработанной нами стандартной методике: препарат копулятивного органа измеряли в капле дистиллированной воды между препаровальными стеклами под бинокуляром, с использованием окуляр-микрометра. Для каждого самца отмечали характер расположения пениальных желез, их число, отмечали самцов с утраченным копулятивным органом (потеря пениса после сезона размножения) по небольшому фрагменту его базалыюй части в основании головы моллюска и состоянию семенников, предстательной железы и другим деталям строения половой системы. После измерения особи и определения вида, ткани половозрелых незараженных особей фиксировали в 70% этаноле, каждого в индивидуальной пробирке Эппендорф. Фиксированные ткани хранили при +4°С до момента выделения геномной ДНК.

2.4 Методы амплификацип геномной ДНК и анализ видоспецифических молекулярных маркеров.

2.4.1 Экстракция тотальной ДНК. Экстракцию ДНК проводили индивидуально из каждой особи, фиксированной в 70% этаноле. Использовали ткани головы и ноги моллюсков, чтобы исключить попадание в образцы ДНК ранних стадий паразитов, преимущественно локализованных

в печени и половой системе моллюсков. Экстракцию ДНК проводили методом СТАВ (Mikhailova, Johannesson, 1998).

2.4.2 Амплификация ДНК со случайными праймерами методом RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA). RAPD анализ проводили методом амплификации геномной ДНК моллюсков всех пяти видов со случайными праймерами. Всего протестировано 18 коммерческих 10-ти нуклеотидных случайных праймеров (Operon Tech. Inc.). Продукты амплификации разделяли в 12% вертикальном или 15% горизонтальном полиакриламидном геле (CleanGel, ETC-Electrophorese Technik). Гели импрегнировали серебром. Статистическая обработка RAPD паттернов базировалась па подсчете общего числа амплифицированных фрагментов и числа видоспецифических фрагментов. Обработка данных проведена при помощи программы Статистика 6.0. Результирующие дендрограммы построены методом кластерного анализа. Фрагменты ДНК, характерные для конкретного вида литторшт использовали для дальнейшего клонирования и секвенирования.

2.4.3 Клоннрование и секвенирование видоспецифичных ДНК фрагментов. Видоспецифичные фрагменты вырезали из геля, ДНК выделяли, используя смолу Chelex 100 (Sigma). Выделенные фрагменты реамплифнцировали, убедиться, что размер реамплифицированных фрагментов соответствует размерам фрагментов, вырезанных из геля. Фрагменты лигировали в вектор pGEM-T Easy Vector (Promega Systems). Плазмиды трансформировали в электрокомпетентные клетки Е. со/г (линия XL 1-blue) методом электропорации. Для определения размера лигированных фрагментов была проведена серия ПЦР-тестов с праймерами SP6 и Т7. Выделение плазмид проводили, используя набор High Pure Plasmid Isolation Kit (Roche). Секвенирование полученных клонов проводили с использованием набора для секвенирования (Pharmacia-Biotech Т7 sequencing kit). К концевым последовательностям секвепированных фрагментов были синтезированы праймеры (MWG Oligo Synthese). Секвенирование видоспецифичных фрагментов проводили на базе центра коллективного пользования (ЦКП) "ВНИИСБ" «Синтол» (Syntol Co., Москва), на модели капиллярного секвенатора ABIPrizm3130x1 (AppliedBiosystems, USA).

2.4.4 Амплификация видоспецифичных для L. arcana фрагментов А2.8 на матрице геномной ДНК криптических видов. Тестирование видоспецифичных для L. arcana праймеров А2.8 (F+R) проводили методом полимерзной цепной реакции (ПЦР), используя в качестве матрицы индивидуальную геномную ДНК особей трёх видов моллюсков группы "saxatilis". Амплификацию проводили с использованием следующей программы: начальная денатурация ДНК 95ПС - 5 мин, далее 30 циклов -денатурация при 95ПС - 30 сек; отжиг при 57ПС - 30 сек; элонгация при 72°С - 45 сек; конечная элонгация 72°С - 5 мин. Продукты амплификации разделяли в 1.5% агарозпом геле, окрашенном бромистым этидием, а также в 6% и 12% полиакриламидных гелях, окрашенных серебром.

2.4.5 Микросателлитный анализ криптическнх видов группы "saxatilis". Микросателлитный анализ был проведен для трех видов литторин из популяций Баренцева и Норвежского морей, всего в анализе использовано 390 моллюсков, по 130 особей каждого вида - L. arcana, L. saxatilis, L. compressa. Моллюски были определены морфологически и типированы при помощи амплификации с праймерами к фрагменту А2.8.

Для анализа моллюсков из популяций Баренцева моря были использованы микросателлитные маркеры пяти локусов Lsub8, Lsubl6, Lsub32, Lsub62, Lsax6, для моллюсков из норвежских популяций - шесть локусов (включая Lsax20). ДНК амплифицировали методом ПЦР, используя праймеры, разработанные для указанных локусов для видов L. saxatilis или L. subrotimdata (Tie et al., 2000; Sokolov et al., 2002; Panova et al., 2008). Были использованы три протокола амплификации, в зависимости от используемого микросателлитного локуса. Анализ микросателлитных ДНК фрагментов проведен при помощи Beckman Coulter CEQ800 Genetic Analysis, используя программное обеспечение CEQ Fragment Analysis. Анализ проводился методом капиллярного гель—электрофореза.

Статистическую обработку данных микросателлитного анализа проводили как для каждого географического региона, так и для суммарных данным. В совокупном статистическом анализе были использованы результаты по пяти микросателлитным локусам.

Тестирование распределения генотипов на равновесие Харди-Вайнберга проводили с помощью программы Genepop. В случае неравновесной популяции, отклонение от равновесного распределения Харди-Вайнберга измеряли методом вычисления значения коэффициента инбридинга особей относительно популяции Fis.

Степень генетических различий между популяциями рассчитывали при помощи программы Genepop, для проверки различий между популяциями применяли непараметрический статистический тест рандомизации. Для оценки вероятности соответствия каждого моллюска конкретному виду был проведен тест соответствия, исходя из видоспецифичных частот аллелей (Paetkau et al. 1995). Была использована программа Geneclass 2 version 2.0. При помощи данного теста оценивали правильность морфологического определения вида особей, а также наличие в популяции гибридов.

Наличие нулевых аллелей в популяциях проверяли при помощи программы Microchecker, программу FreeNA использовали для корректировки значений Fst при условии вероятности существования нулевых аллелей в популяциях.

Взаимоотношения между видами проиллюстрировано в виде иерархического дерева, полученного кластерным анализом данных по популяциям и отдельным видам. Итоговое иерархическое дерево, с оценкой бутстреп поддержки узлов ветвления, построено при помощи пакета программ PHYLIP (Felsenstein, 1997). Для оценки достоверности построенных деревьев проводили бутстреп анализ для 100 повторностей, с помощью программы Seqboot.

Программу Gendist использовали для определения генетических расстояний для каждой пары образцов по Нею (Nei, 1978). Генетические расстояния были рассчитаны между сравниваемыми видами и популяциями, исходя из частот аллелей всех проанализированных локусов для 100 повторностей. Полученные матрицы попарных расстояний были использованы в программе Neighbor для построения 100 деревьев (реконструкция деревьев по матрице расстояний), которые, в свою очередь, были обработаны в программе Cánsense (сравнение деревьев). Конечный результат был выражен в усредненном иерархическом дереве. Графическое изображение дерева получили при помощи программы Treeview. В данном исследовании генетические расстояния были использованы в двух различных эвристических алгоритмах кластеризации - Neighbor-joining (метод объединения соседних пар, не предполагает молекулярных часов и не укореняет деревья) и UPGMA (Метод попарного невзвешениого кластирования с арифметическим усреднением - расстояние между кластерами вычисляется как среднее арифметическое расстояний между всеми парами объектов в них; полученное укорененное ультраметрическое дерево, предполагает молекулярные часы) (Sneath, Sokal, 1973).

Проведен MDS-анализ (многомерное шкалирование), для которого использовали матрицы значений различий между популяциями Fst, полученные как при помощи программы Genepop, так и при помощи программы FreeNA).

2.4.6 Филогеографический анализ видов на основе частот гаплотипов митохондриалыюго гена цитохром b (cyt b). Для филогеографического анализа гаплотипов трех видов литторин группы "saxatilis" были использованы моллюски из трех географических мест -популяций Баренцева, Норвежского морей и побережья Англии. Суммарное число особей составило 213 штук, из них: L. saxatilis, n=71, L. arcana, п=71, L. compressa, п=71. Моллюски были определены морфологически, затем типированы при помощи амплификации с праймерами к фрагменту А2.8. Геномная ДНК этих же особей была использована для амплификации фрагмента митохондриалыюго гена cyt b (праймеры cyt b FOR - 5'- ttc ccg cac ctt caa ate tt -3' и cyt b Small 4R - 5'- gga eta ggg ccg aaa gta taa ata -3' (Small, Gosling, 2000). Для очистки амплифицированных фрагментов использовали колонки с мембранами HiBind® ДНК Minicolumns (Omega Bio-tek). Секвенирование фрагментов генов проводили на базе центра коллективного пользования (ЦКП) "ВНИИСБ" «Синтол» (Syntol Co., Москва), на модели капиллярного секвенатора ABIPrizm3130x1 (AppliedBiosystems, USA).

Чтение и выравнивание секвенированных последовательностей проводили при помощи программы CodoneCode Aligner V.3.0.3 и BioEdit V.7.0.3 (Hall, 1999), анализ нуклеотидного состава-с использованием пакета программ Mega 4.1 (Tamura et al., 2007). Для реконструкции филогеографии использованы методы объединения ближайших соседей (Neighbor Joining, NJ), минимальной эволюции (Minimum Evolution, ME), максимального

правдоподобия (Maximum Likelihood, ML), кластерного анализа (UPGMA). Филогенетические деревья построены в программе Mega 4.1. Для филогеографического анализа методом NJ и ME использовали двухпараметрическую модель молекулярной эволюции Кнмуры, кластерный анализ проводили в сочетании с методом максимального правдоподобия (ML). Анализ гаплотипов проводили с использованием Haplotype network -software TCS. Филогенетическое древо гаплотипов (Bayesian tree) построено с использованием software MrBayes (вид L.obtusata использован в качестве outgroup).

2.5 Морфометрический и молекулярный метод определения самцов видов-двойников L. saxatilis и L. arcana.

Для анализа использовали половозрелых самцов, не зараженных трематодами. Морфометрию копулятивного органа проводили по разработанной методике (см. выше), схема измерений включала 4 линейных параметра - длина, ширина пениса, ширина ряда пениальных желез, длина филамента. Рядность расположения пениальных желез оценивали по бальной шкале (от 1 до 3-х рядов). Для всех анонимных самцов L. saxatilis-L. arcana, получены данные морфометрического анализа копулятивного органа и амплификации фрагмента ДНК А2.8 (Mikhailova et al., 2009).

При проведении статистических сравнений использовали линейные параметры и их отношения. Для комплексного сравнения морфометрических данных использовали анализ главных компонент. Для L. saxatilis — L. arcana проведен дисперсионный анализ, в котором в качестве переменных выступали значения факторных нагрузок компонентного анализа, а фактором служило наличие или отсутствие амплификации молекулярного маркера. Для исследования межпопуляционных различий по числу пениальных желез использовали однофакторный дисперсионный анализ. Размерно-возрастные особенности распределения количества пениальных желез исследовали с помощью регрессионного анализа. Всю статистическую обработку проводили с использованием пакета Statistica 6.0.

2.6 Морфометрический и молекулярный анализ партнеров в копулирующих парах криптических видов группы "saxatilis". Копулирующие пары литторинид группы «saxatilis» были собраны в сезон размножения (июль 2007 г.) на побережье Баренцева моря (бухта Плохие Чевры). Всего собрано 149 копулирующих пар. Каждую пару содержали отдельно, при вскрытии определяли вид моллюска по морфологическим признакам партнеров (самок в случае видов-двойников L. saxatilis и L. arcana) и анализировали их индивидуальную геномную ДНК. ДНК всех особей амплифицировали со специфическими для L. arcana праймерами А2.8, по наличию амплифицированного фрагмента А2.8, определяли видовую принадлежность самок и самцов - партнеров видов-двойников.

2.7 Анализ микрораспределения криптических видов подрода Neritrema иа литорали.

В местах многолетнего мониторинга популяций литторин Баренцева и Белого морей, моллюсков собирали количественным методом, со

стандартных площадок 1/40 м2, используя серию площадок в пределах гидробиологических разрезов (см. раздел 2.2). Количественный метод сбора позволяет оценить плотность поселения видов лиггорин в симпатрических популяциях, а также приуроченность видов к микробиотопам и горизонтам литорали. На Белом море многолетние наблюдения проводились в популяциях литторин на корге у Левин-наволока и о. Ряжков (Кандалакшский залив) (более 300 площадок). На Баренцевом море гидробиологические разрезы были сделаны в бухте Оскара (60 площадок) и на двух, удаленных друг от друга, участках литорали губы Ярнышная (23 и 52 площадки соответственно). Все половозрелые, не зараженные трематодами, особи литторин группы "saxatilis" из количественных сборов были генотипированы по наличию/отсутствию фрагмента А2.8 (амплификация геномной ДНК с праймерами к фрагменту А2.8).

2.8 Анализ микрораспределения гибридных особей L. saxatilis и L. arcana по горизонтам литорали.

Моллюски были собраны на сходных по структуре участках пологой литорали побережий Баренцева (Дальние Зеленцы) и Норвежского (Тромсё) морей. В каждом из двух мест, в направлении от зоны заплеска (HWNT) до уровня нуля глубин (LWST), был сделан гидробиологический разрез, длиной 28 м и шириной 3 м. Этот участок литорали был разделен на 7 уровней (4 м каждый), и, в каждом из уровней, сделаны количественные сборы моллюсков, с общей площади 0.2 м2. Все моллюски были определены морфологически и генотипированы, при помощи амплификации фрагмента А2.8. Для самцов оценивали характер расположение пениальных желез. Общее число моллюсков, использованных в анализе, составило 529 особей.

При помощи корреляционного анализа проведена оценка корреляции между количеством гибридов в выборках и наилучших предсказаний, тестированные в трех моделях: а) модель, основанная на морфологическом определении самок; б) модель, основанная на генетически маркированных самках; в) модель, основанная на генетически маркированных самках и самцах. Фракция гибридных особей во всех случаях рассчитывалась следующим образом: (Ы_самки_Ь.агс_ПЦР- + N_caMKH_L.sax_ ПЦР+) / N_caMKH_total, где N - число, самки_Ь.агс_ ПЦР- - самки L. arcana (ПЦР-), f_sax_ ПЦР+ - самки L. saxatilis (ПЦР+), caMKu total - общее число половозрелых самок в выборке.

Рассчитаны коэффициенты корреляции Спирмена и их доверительные интервалы с использованием z-преобразования Фишера. Корреляции были оценены как отдельно для Баренцева и Норвежского морей, так и для объединенных данных из обоих мест.

Для оценки соответствия распределения частот особей родительских видов L. saxatilis и L. arcana и частоты распределения гибридных особей были построены логистические модели. Логистические модели оценивали соответствия наблюдаемого и ожидаемого частотного распределения гибридных особей. В качестве наблюдаемого значения принималось зональное распределение частоты гибридных особей по уровням литорали. В

качестве ожидаемого значения - частота гибридов, рассчитанная в различных вариантах логистических моделей, комбинирующих родительские пары на основе молекулярного А2.8 типирования особей.

Глава 3. РЕВИЗИЯ ВИДОВОГО СОСТАВА МОЛЛЮСКОВ РОДА LITTORINA ПОДРОДА NERITREMA НА ПОБЕРЕЖЬЕ БАРЕНЦЕВА И БЕЛОГО МОРЕЙ.

Ревизия видового состава литоральных моллюсков рода Littorina на побережье Баренцева моря (Восточный Мурмана) показала, что на литорали обитают пять видов гастропод подрода Neritrema. Определение видов было сделано на основе качественных сборов моллюсков, используя морфо-анатомические признаки репродуктивной системы особей (Reid, 1996). Обнаружено две группы критических видов: три вида группы "saxatilis" - L. saxatilis, L. arcana, L. compressa и два вида группы "obtusata" - L. obtusata и L. fabalis (Рис. 2). На побережье Баренцева моря моллюски обитают совместно в симпатрических популяциях. На побережье Белого моря (Кандалакшский залив) обнаружено всего три вида литторин подрода Neritrema - L. saxatilis, L. obtusata и L. fabalis, также, обитающих симпатрично.

L. saxatilis ■4-

L. arcana

группа "saxatilis"

L. compressa -►

L. fabalis

L. obtusata

группа "obtusata"

Рис. 2. Форма раковины типовых образцов половозрелых особей видов литторин подрода Neritrema (губа Ярнышная, Дальние Зеленцы, Баренцево море).

Форма раковины видов литторин подрода Neritrema чрезвычайно изменчива и для представителей двух групп криптических видов различается средними пропорциями. Виды группы "saxatilis" характеризуются овально-конической раковиной, группы "obtusata" - шаровидно-овальной (Рис. 2). Эти различия характеризуются индексом раковины, средние значения которого приближаются к «1» (более «округлая» раковина с низким завитком) у L. fabalis и L. obtusata и значением меньше единицы (более «вытянутая» раковина, с более высоким завитком) у L. saxatilis, L. arcana и L. compressa. Несмотря на различие средних значений индекса раковины, крайние значения вариационного ряда у видов групп "saxatilis" и "obtusata" перекрываются. Размеры раковины моллюсков также не могут быть использованы в качестве диагностического признака, поскольку средние значения высоты и ширины раковины существенно не различаются для видов групп "saxatilis" и "obtusata", наблюдается значительная дисперсия анализируемых показателей.

Для L. obtusata и L. fabalis характерна мелкая продольная складчатость периостракума, которая выглядит как тонкая параллельная «волосовидная» исчерченность поверхности раковины. На большей части раковины старых моллюсков слой периостракума зачастую отсутствует, что создает сложности для идентификации видов. У L. saxatilis, L. arcana и L. compressa тонкая исчерченность не наблюдается, поверхность раковины либо гладкая, либо имеет скульптуру из продольных ребер. Ребристость раковины видов группы "saxatilis" разнообразна и варьирует как по количеству ребер, степени их выраженности, так и по форме в поперечном сечении.

В паре видов L. obtusata - L. fabalis крупные моллюски L. fabalis имеют более низкий завиток и округлое (в отличие от округло-овального у L. obtusata) устье. Среди видов группы "saxatilis", пожалуй лишь L. compressa отличается по конхологическим параметрам - раковины этого вида характеризуются острой вершиной и, как правило, сильно выраженной ребристостью. Нам не удалось выявить никаких коихологических видовых различий в паре видов L. saxatilis - L. arcana.

3.1 Морфологические признаки строения репродуктивной системы самок и самцов криптических видов.

Все виды подрода Neritrema характеризуются прямым развитием и не имеют планктонной личинки в жизненном цикле. Четыре вида литторин (!,. arcana, L. compressa, L. obtusata и L. fabalis) откладывают бентические кладки на талломах водорослей и поверхности твердых субстратов, и только один из видов - L.saxatilis характеризуется яйцеживорождением. Половозрелые самки литторин подрода Neritrema отличаются по строению паллиального комплекса желез яйцевода и строению копулятивной бурсы (Рис. 3).

Рнс.З. Строение паллиального комплекса половой системы самок литторин: А - L. агсаші; Б - L. compressa; В - L. saxatilis; Г - L. obtusata; Д - L. fabalis (вид с вентральной стороны); кб - копулнтивная бурса, сж -слизистая железа, кж - капсульная железа, б.ис — белковая железа.

По материалам сборов из бухты Оскара и губы Ярнышной, Восточный Мурман.

Самки L. avcana характеризуются копулятивной бурсой, дистальный край которой достигает половины длины хорошо развитой слизистой железы, в то время как слизистая железа самок L. saxatilis преобразована в выводковую сумку, с развивающимися внутри эмбрионами. Самки L. compressa характеризуются особым соотношением размеров желез паллиального комплекса и небольшой копулятивной бурсой, что отличает их от самок двух других критических видов группы. Самки L. obtusata и L. fabalis хорошо отличаются по строению паллиального комплекса и размеру копулятивной бурсы. Указанные видовые признаки воспроизводятся в популяциях литторин из разных географических мест, параметры их варьируют незначительно и, таким образом, служат надёжными анатомическими определительными признаками.

Определительный признак для идентификации самцов критических видов подрода Neritrema - морфология копулятивного органа (Reid, 1996). Самцы двух видов группы "obtusata" имеют копулятивный орган разного строения, что позволяет безошибочно проводить их видовую идентификацию (Рис. 4 Г,Д). Пениальные железы самцов L. obtusata мелкие, многочисленные и расположены в несколько рядов, в то время как пениальные железы L. fabalis крупные, немногочисленны (5-7 штук), конец пениса вытянут, представляя собой пениальный филамент или «бич».

Среди самцов критических видов группы "saxatilis" можно достоверно определить только самцов L. compressa. Копулятивный орган самцов L. compressa (Рис. 4 Б) характеризуется небольшим числом крупных пепиальных желез, расположенных локально в один ряд, близко к его дисталыюму концу. Копулятивный орган L. saxatilis и L. агсапа (Рис. 4, В и А) имеет сходное строение, что затрудняет их идентификацию.

Рис. 4. Строение копулятивного органа литторин:

A-L. агсапа, Ъ-L.. compressa, В - L. saxatilis, Г- L. obtusata, Д- L. fabalis; ф - филамент, пж- пениальные железы. По материалам сборов из бухты Оскара и губы Ярнышной, Восточный Мурман.

В процессе вскрытия моллюсков, при использовании только мягких тканей особи, проблематично определить вид моллюска, поскольку самки

двух пар видов L. arcana, L. obtusata и L. compressa, L. fabalis сходны по размеру и расположению копулятивной бурсы и характеристикам желез паллиального комплекса яйцевода. В этом случае, очень важно предварительно определить принадлежность особи к группе видов по морфологии раковины.

Основные итоги главы. Определен видовой состав гастропод подрода Neritrema приливно-отливной зоны российских северных морей. Состав рода представлен двумя группами криптических видов, а именно: группы "saxatilis" (Littorina sœcaîilis (Olivi 1792), L. compressa Jeffreys 1865, L. arcana Hannaford Ellis 1978) и группы "obtusata" {L. obtusata (Linnaeus 1758), L. fabalis (W.Turton 1825)). Для популяций побережья Баренцева моря обнаружены все пять видов: L. saxatilis, L. compressa, L. arcana, L. obtusata, L. fabalis, для популяций Белого моря только три - L. saxatilis, L. obtusata, L. fabalis. Наличие перекрывающихся морфологических признаков криптических видов группы "saxatilis" создаёт трудности при их определении, проведении популяционно-генетических исследований и требует поиска и использования дополнительных определительных видоспецифичных маркеров. Основные трудности связаны с идентификацией самцов видов-двойников L. saxatilis и L. arcana, для которых диагностические признаки не обнаружены, самцы морфологически идентичны.

Глава 4. ПОИСК МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КРИПТИЧЕСКИХ ВИДОВ

4.1 Амплификация геномной ДНК пяти видов литгорин со случайными праймерами (RAPD). Метод RAPD использован для молекулярно-генетического анализа пяти видов литторин (L. saxatilis, L. arcana, L. compressa, L. obtusata и L. fabalis) из четырёх популяций Баренцева моря. Для RAPD генотипирования использованы только самки L. saxatilis и L. arcana, в связи с невозможностью морфологической идентификации самцов этих видов-двойников. В анализе использовано 200 моллюсков, по 40 особей каждого вида. Проведено тестирование 18 случайных праймеров (Operon Tech. Inc.), из которых, только при помощи одного (OPG-17), получены видоспецифичные RAPD паттерны. Восемь видоспецифичных для L. arcana и L. saxatilis RAPD фрагментов были клонированы и секвенированы, к их концевым последовательностям синтезированы праймеры: А2.8 F 5'-ggt gtt tta аса aac aat cag gac-3' и A2.8 R 5'- caa cat gat tca cag cac gat t - 3'. Видоспецифичность фрагментов была протестирована на геномной ДНК видов L. arcana, L. compressa и L. saxatilis амплификацией с праймерами А2.8 (F+R). Обнаружено, что RAPD фрагмент А2.8 -видоспецифичен для L. arcana. Пара праймеров к фрагменту А2.8 специфично аплифицировала искомый ДНК фрагмент L. arcana и не амплифицировала его на матрице геномной ДНК L. saxatilis (Рис.5) и L. compressa. Фрагмент А2.8, размером 271 п.н., видоспецифичный для L.

arcana, в дальнейшей работе использован для идентификации самцов видов-двойников и типирования самок L. arcana.

Нуклеотидная последовательность фрагмента А2.8 (271 п.н.): - 5' — acgacgacaaagaatgactggtgttttaacaaacaatcaggacgattcagagtaaaacaacatcagcttgactaaatat actatagatatacgtaaatacaacttttcttactcagaagacaaatgaacaaaagctgtttctgatcactggaaatctttttc gacgacacaaattagttgttttggcaagtgcattcattttgctgactgcaaacccatgccaataaataaatttaatcgtgct gtgaatca tgttgtgtcggtcgt-3'. Результат поиска в GenBank последовательностей, гомологичных фрагменту А2.8, не обнаружил гомологии в составе известных функциональных генов. По-видимому, фрагмент представляет собой некодирующую ДНК.

123 45 67 89 ЮМ

250 п.н.

Рис. 5. Продукты амплификации индивидуальной геномной ДНК особей литторин, с использованием пары праймеров к фрагменту А2.8: L. агсапа (дорожки 1,3,5,7,9) и L. saxatilis (дорожки 2,4,6,8,10). M - маркер 50 п.н.

Основные итоги главы. Впервые, в составе геномной ДНК L. агсапа, обнаружен видоспецифичный маркер. Это - клонированный RAPD фрагмент, получивший название А2.8. Праймеры к фрагменту А2.8 можно использовать в качестве инструмента для диагностики самцов и неполовозрелых самок видов-двойников L. saxatilis и L. агсапа, морфологическая идентификация которых в симпатрических популяциях моллюсков, невозможна. Применение молекулярного маркера А2.8 позволяет генотипировать особей и проводить популяционный анализ криптических видов.

Показано, что фрагмент А2.8. не амплифицируется на матрице геномной ДНК L. compressa.

Глава 5. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА КРИПТИЧЕСКИХ ВИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК МАРКЕРОВ

5.1 Идентификация самцов криптических видов группы "saxatilis" методами морфометрии и амплификации фрагмента А2.8. Проведено морфологическое описание самцов L. saxatilis (n= 197) из аллопатрических популяций Белого моря. Копулятивный орган 99% особей самцов характеризуется однорядным расположением пениальных желез, число желез варьирует от 3 до 16. Показано, что закладка числа пениальных желез происходит у самцов в возрасте 1-2 года, к моменту достижения половой зрелости (возраст 2-3 года), железы характеризуются дефинитивным размером; рост моллюска с возрастом сопровождается увеличением линейных размеров копулятивного органа, но не изменением величины и количества пениальных желез.

Рис. 6. Схема промеров копулятивного органа

литторин, выполненных для L. saxatilis - L. arcana (а) и L. compressa (б) и варианты рядности вент-рального расположения пениальных желез (в).

Для а,б: ПД-длина пениса, БД - длина бича, РШ -ширина ряда пениальных желез, ПШ1 - ширина пениса на уровне границы передней железы, ПШ2

- в середине ряда пениальных желез, ПШЗ

- на уровне задней границы последней железы;

для в: 1.0 - однорядное расположение желез, 1.5 -железы расположены не строго по одной оси, 2.0 -двурядное расположение, 3.0 - железы расположены в 3-м ряду).

Выполнен морфометрический анализ (Рис. 6а) копулятивного органа самцов (L. saxatilis-L. arcana) и L. compressa из шести популяций побережий Белого и Баренцева морей (п=257), ДНК всех особей была амплифицирована со специфическими для L. arcana А2.8 праймерами. Схема морфометрических промеров представлена на Рис. 6а, для каждого самца отмечен характер расположения пениальных желез (Рис. 66). Самцов из группы (L. saxatilis-L. arcana), амплифицировавших искомый фрагмент А2.8 (ПЦР+) относили в виду L. arcana, не амплифицировавших фрагмент (ПЦР-) - к виду L. saxatilis.

Компонентным анализом подтверждены видоспецифичные особенности строения пениса L. compressa (Рис. 7). С использованием праймеров к видоспецифичному для L. arcana фрагменту ДНК А2.8 проведен поиск различий морфометрических характеристик самцов видов-двойников L. saxatilis и L. arcana. В симпатрических популяциях L. arcana и L. saxatilis Баренцева моря 40% самцов характеризуется «многорядным» (1.5, 2 и более рядов) расположением пениальных желез. Однако, молекулярное маркирование самцов (L. arcana-L. saxatilis) не позволило выявить дополнительные определительные морфологические признаки в строении копулятивного органа видов-двойников (Рис. 7).

Factor 2 1

-1

-1,5

-0,5

Factor 1

1,5

0,5

Рис. 7. Данные анализа главных компонент, выполненного по промерам морфологических параметров копулятивного органа литторин группы «saxatilis» в популяции бухты Плохие Чевры Баренцева моря: ординация признаков особей в пространстве главных компонент -

О - моллюски ПЦР-; • - моллюски ПЦР+; треугольники - L. compressa).

5.2 Анализ межвидовых спариваний на основе морфологической и молекулярно-генетической идентификации партнеров в копулирующих парах видов группы "saxatilis". Для оценки межвидовой гибридизации видов комплекса «saxatilis» проведен анализ состава партнеров в 149 копулирующих парах. Среди них обнаружено 49 пар, в которых обоими партнерами выступали самцы (24.5% от общего числа спариваний), такие пары были исключены из анализа. В 36 парах один или оба партнера были заражены трематодами, такие пары также не анализировались, поскольку паразитирование трематод может вызывать изменение репродуктивного поведения особей. Партнеры в 64 гетеросексуальных, не зараженных трематодами копулирующих парах, были идентифицированы морфологически (самки) и молекулярно-генетически (самки и самцы). Обнаружено 14 межвидовых спариваний: 5 пар L. агсапа (ПЦР+) х L. saxatilis (ПЦР-) и 9 пар L. saxatilis (ПЦР-) х L. агсапа (ПЦР+). Это - 21.8% от общего числа проанализированных пар. Ни одного случая спаривания L. compressa с особями других видов комплекса "saxatilis" не обнаружено.

5.3 Микросателлитный анализ популяций видов группы «saxatilis».

Филогенетические взаимоотношения видов литторинид группы "saxatilis" проведено с использованием микросателлитных маркеров, а именно 6 микросателлитных локусов (Lsub8, Lsublô, Lsub32, Lsub62, Lsax6 и Lsax20). Для анализа использованы морфологически идентифицированные самки трёх критических видов, типированные при помощи амплификации фрагмента А2.8. Показан дефицит гетерозигот в ряде популяций всех трех видов (по двум локусам для L. saxatilis и L. агсапа и по трем

compressa). Анализ выявил наличие «нулевых» аллелей, специфичное для отдельных популяций всех трех видов. Расчет генетического расстояния (Fst) свидетельствует о большей степени дифференцировки L. compressa от двух других видов комплекса (средние Fs( = 0,253 и 0,231 для L. агсапа и L. saxatilis соответственно). Напротив, L. saxatilis и L. агсапа очень близки (среднее Fst = 0,085). Внутивидовые различия существенно меньше (среднее FstHe превышает 0,048).

Результаты оценки принадлежности индивидуумов к каждому из трех видов группы "saxatilis", полученные на основании частот аллелей по шести микросателлитным локусам, показали наличие «неустойчивых» индивидуумов L. агсапа и L. saxatilis как в норвежской, так и в двух баренцевоморских популяциях.

Дендрограмма, построенная с помощью алгоритма UPGMA (Рис. 8), обладает наибольшей поддержкой, наблюдается кластеризация видов, за исключением популяции АС (L. агсапа), которая расположена между видами L. агсапа и L. saxatilis. В этой же популяции наблюдается значительное

Рис. 8. UPGMA дендрограмма невзвешенных генетических расстояний (Nei, 1978) для популяций L.saxatilis, L.arcana и L.compressa из трех популяций: а - L.arcana, Тромсе, Норвегия; с - L.compressa, Тромсе, Норвегия; s - L.saxatilis, Тромсе, Норвегия; АС - L. агсапа, Плохие Чевры, Россия; АО -L. агсапа, бухта Оскара, Россия; СС - L. compressa, Плохие Чевры, Россия; СО -L. compressa, бухта Оскара, Россия; SC - L. saxatilis, Плохие Чевры, Россия; SO - L. saxatilis бухта Оскара, Россия.

В дендрограмме, полученной методом объединения соседних пар (Рис. 9), не все ветви имеют значительную поддержку, и, в соответствии с данными, две популяции - АС и SC, имеют промежуточное расположение, в то время как остальные популяции образуют единый видовой кластер. При этом, популяция SC характеризуется большим числом «неустойчивых» индивидуумов, поэтому именно дендрограмма, полученная методом объединения соседних пар, отражает наиболее реалистичную картину кластеризации.

количество «неустойчивых» индивидуумов.

Рис. 9. Дендрограмма попарных генетических расстояний по Нею, полученная методом «ближайшего соседа» (Neighbor-joining), для L. arcana, L. compressa и L. saxatilis в трех местообитаниях.

а - L. arcana, Тромсе, Норвегия; с - L. compressa, Тромсе, Норвегия; s - L. Saxatilis, Тромсе, Норвегия; АС - L. arcana, бухта Плохие Чевры, Россия; АО - L. arcana, бухта Оскара, Россия; СС - L. compressa, бухта Плохие Чевры, Россия; СО - L. compressa, бухта Оскара, Россия; SC - L. saxatilis, бухта Плохие Чевры, Россия; SO - L. saxatilis, бухта Оскара, Россия.

MDS диаграмма, построенная на основе анализа многомерного шкалирования (MDS-анализ) (Рис. 10) показывает, что особи L. saxatilis из трех популяций близки друг к другу. Популяции L. arcana из Норвегии и бухты Оскара (Россия) также очень близки, в то время как L. arcana из бухты Плохие Чевры (Россия) занимает промежуточное положение, между всеми популяциями L. saxatilis и оставшимися популяциями L. arcana. Из диаграммы следует, что L. saxatilis и L. arcana более близки друг другу, чем каждый из них к L. compressa. Популяции L. compressa из России ближе между собой, чем каждая из них к популяции L. compressa из Норвегии.

Диаграммы со значениями FSt. полученными при помощи программы Genepop (величина стресса = 0.00009978; 0.009978%) или программы FreeNa, учитывающей наличие потенциальных нулевых аллелей (величина стресса = 0.00009649; 0.009649%) показывают сходное распределение. Различие двух вариантов диаграмм в том, что диаграмма, полученная с учетом наличия потенциальных нулевых аллелей, является более компактной. Такой эффект наблюдается потому, что скорректированные значения FST уменьшаются. L. compressa находится на втором варианте диаграммы ближе к L. saxatilis и L. arcana, чем на первом (где наличие нулевых аллелей не учитывалось), но даже в этом случае можно видеть, что L. saxatilis гораздо ближе к L. arcana, чем к L. compressa (Рис. 10).

Основные итоги главы. Впервые, с использованием молекулярного диагностического маркера (клонированного RAPD фрагмента А2.8), проведена идентификация самцов криптических видов L. saxatilis, L. arcana и L. compressa из симпатрических популяций Баренцева моря и самцов L. saxatilis из аллопатрических популяций Белого моря. Методом морфометрического и генетического анализа показано, что самцы L. compressa надежно диагностируются; для самцов видов-двойников L.

saxatilis (ПЦР-) и L. arcana (ПЦР+) видоспецифичных морфологических признаков не обнаружено.

Рис. 10. MDS диаграмма результатов многомерного шкалирования. Значения Fst получены при обработке данных в программе FreeNa и MDS анализе. Величина стресс а= 0.00009649 а - L. arcana, Тромсе, Норвегия; с - L. compressa, Тромсе, Норвегия; s - L. saxatilis, Тромсе, Норвегия; АС -L. arcana, Плохие Чевры, Россия; АО - L. arcana, б. Оскара, Россия; СС - L. compressa, Плохие Чевры, Россия; СО - L.compressa, б. Оскара, Россия; SC - L. saxatilis, Плохие Чевры, Россия; SO - L. saxatilis, б. Оскара, Россия.

Морфологическая идентичность копулятивного органа самцов видов-двойников не препятствует межвидовым спариваниям моллюсков. Использование молекулярного маркера А2.8 для идентификации партнёров в копулирующих парах криптических видов группы "saxatilis" позволило подтвердить наличие межвидовых спариваний видов-двойников L. saxatilis и L. arcana. L. compressa в межвидовых спариваниях не обнаружена. Результаты объясняют наличие около 30% гибридных особей L. saxatilis (ПЦР+) и L. arcana (ПЦР-) в симпатрических, географически удаленных друг от друга, популяциях Баренцева моря, побережий Норвегии и Франции (процент гибридных особей в популяциях разных стран одинаков), что демонстрирует универсальный характер поведения моллюсков.

Микросателлитный анализ показал четкие генетические различия между тремя видами группы "saxatilis". Значения показателя Fst при попарном сравнении видов показывают, что L. arcana и L. saxatilis являются генетически более близкими друг к другу видами, в то время как L. arcana и L. compressa генетически наиболее удалены друг от друга. Генетические различия между российскими и норвежскими популяциями одного и того же вида всегда меньше, чем различия между видами. Тест оценки принадлежности индивидуумов к каждому из трех видов показал наличие «неустойчивых» индивидуумов - индивидуумы, определенные на основании морфологических и молекулярно-генетических (А2.8 маркер) признаков как L. arcana, по данным микросателлитного анализа, скорее относились к L. saxatilis, и наоборот. Это, наряду с фрагментом А2.8, второе доказательство наличия гибридных особей в двух разных географических популяциях

MDS FSi FreeNA

"0,5 -0,3 -0,1 0,1 0,3

0,03

а, АО ♦ 0,02

АС ♦ 0,01

s, SC,SO± 0 ♦ дгсапа

-0,01 ■ compressa

■ сс,со ASA Î.INIK

■ с ■0,02

-0,03

-0,04 _Л ПС

видов-двойников. Для L. compressa «неустойчивых» индивидуумов не обнаружено.

Глава 6. ЗОНАЛЬНОЕ И МИКРОБИОТОПИЧЕСКОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДОВ РОДА LITTORINA ПОДРОДА NERITREMA НА ЛИТОРАЛИ.

6.1 Распределение видовых популяций подрода Neritrema по горизонтам литорали.

Зональное распределение видов комплексов "saxatilis" и "obtusata" свидетельствует, с одной стороны, о значительном перекрывании областей обитания популяций разных видов, с другой - о видоспецифичном характере зонального распространения (Рис. 11). Так, виды комплекса "obtusata" приурочены к поясу макрофитов в среднем и нижнем горизонтах литорали; L. fabalis проявляет четкую приуроченность к нижнему горизонту и верхней сублиторали. Виды комплекса "saxatilis" распределены по всем зонам литорали. Однако, L. compressa приурочена к зоне макрофитов, в среднем горизонте литорали, L. агсапа населяет среднюю литораль, на границе гравия и пояса фукоидов и не обнаружена в нижней части литорали в районе нуля глубин. Среди видов комплекса "saxatilis" наиболее широко распространен L. saxatilis. Особи этого вида обнаружены как в пределах пояса фукоидов, так и выше макрофитов на камнях, гравии и гальке.

1234 5 12345 12345

А Б В

Рнс.11 Зональное распределение видов литторин (%) на литорали: А - бухта Оскара, Б - губа Ярнышной (Восточный Мурман, Баренцево море), В - корга у Левин-наволока (губа Чупа, Белое море). По осям абсцисс - зоны литорали: 1 - район нуля глубин, 2 - нижняя часть пояса макрофитов, 3 - средняя часть пояса макрофитов, 4 - верхняя граница пояса макрофитов, 5 - верхняя часть литоральной зоны выше пояса макрофитов. В зонах 2-5 - количественные сборы моллюсков, в зоне 1 -

качественный сбор. I-1 - L. fabalis, - L. obtusata, - L.saxatilis, '-' - L.

compressa, ■■ - L. агсапа.

6.2. Распределение гибридных особей L. saxatilis и L. агсапа в зависимости от плотности поселения родительских видов.

Количественные данные получены для двух популяций Баренцева и Норвежского морей (см. Материалы и методы). Для обоих мест показано, что плотность поселения самок L. saxatilis и L. arcana (определены морфологически) зависит от горизонта литорали. Максимальная плотность поселения L. arcana приурочена к средней части литорали (уровни 3-4, верхняя граница зоны макрофитов, приблизительно соответствует уровню HWNT) (Рис. 12а), L. saxatilis равномерно распределена по всем уровням литорали. Все особи из количественных сборов были генетически типированы амплификацией фрагмента А2.8 (п=529).

Соотношение фракций гибридных особей и потенциальных родительских видов была рассчитана корреляционным анализом, с использованием трёх вариантов предсказаний на основе данных конкретных количественных площадок: 1. на основе долей морфологически определенных самок L. saxatilis и L. arcana-, 2. на основе долей генетически определенных самок, независимо от их морфологических признаков; 3. на основе долей генетически определенных самок и самцов, независимо от их морфологических признаков. Результаты корреляционного анализа (Табл. 1) показали наличие значительной положительной связи между количеством гибридов и всеми перечисленными вариантами предсказаний для двух популяций (кроме одного, с использованием самцов из норвежской популяции). Отметим, что полученные корреляции аналогичны в обоих исследованных районах, что подтверждается общим корреляционным анализом материала (см. Табл. 1, строка "суммарно").

Таблица 1. Корреляция количества гибридных особей для двух географических мест со следующими параметрами: пропорции морфологически определенных самок L.suxatilis и L.arcana (столбец 1); пропорции генетически тинированных самок (ПЦР- и ПЦР+) (столбец 2); пропорции генетически типированнмх самок и самцов (ПЦР- и ПЦР+) (столбец 3). Статистически значимые значения (р<0,05) выделены серым

Место сбора количественных проб hybrids vs. N f sax*N f arc/ (N f total)"2 1 hybrids vs. N f min*N f piu/ (N f tota!)A2 2 hybrids vs. (N_f_min+N m min)* (N f plu+N m plu)/ (N total)A2 3

Баренцево море 0.643 f 0.170; 0.875} 0.613 f 0.123; 0.863] 0.750 [0.364; 0.9161 0.885 [0.667; 0.963] 0.750 L 0 364; 0.916]

Норвежское море 0.449 [-0.107; 0.7911

суммарно 0.726(0.317; 0.907] j 0.795 [ 0.457; 0.932] 0 748 I 0.360

Более детальная количественная оценка потенциальной гибридизации выполнена с использованием модели логистической регрессии. Материалом послужили только сборы в популяциях Баренцева моря, поскольку слишком низкая плотность поселения L. arcana не позволяет использовать в построении моделей данные по Норвежскому морю. Выбор модели логистической регрессии обоснован необходимостью моделировать бинарный результат с помощью непрерывных регрессоров. События моделировали, исходя из допущения, является ли моллюск гибридом или нет (смоделирована вероятность в каком случае моллюск будет гибридным).

Естественный способ оценить ожидаемую частоту гибридов состоит в умножении частоты родительских особей. Эти предсказания были использованы в качестве независимых переменных. Scaled девиантности и квадрат Пирсона использованы для оценки качества соответствия. Оба эти показателя применимы для оценки степени совпадения. Поскольку результаты совпадают, представляем только Scaled девиантности.

Модели соответствуют тому, что частота гибридных особей (наблюдаемое распределение) значимо соответствует частоте распределения в данном горизонте литорали вероятных родительских видов (исходя из частоты которых, и рассчитывается ожидаемая частота гибридов) (Рис. 126).

"'v.*'.'

500% 80% 60% ; 40% 20% 0%

1 2 3 4 5 6 7

б)

Рис. 12. Распределение гибридных особей по горизонтам литорали.

а) Диаграмма стандартной трансекты, показывающая уровни литорали от 1 (HWNT - уровень сизигийного прилива, верх литорали) до 8 (LWST - верхняя граница сублиторали)

б) Ожидаемая (треугольники) и наблюдаемая (точки) частоты встречаемости гибридных особей L. saxatilis и L. arcana, полученные в соответствии с логистической моделью.

В работе проанализировано семь различных моделей, в которых использованы различные сочетания потенциальных комбинаций родительских особей L. saxatilis и L. arcana. Наиболее точное соответствие наблюдаемой и ожидаемой частот основано на сочетании следующих групп в качестве потенциальных родительских особей. Среди самцов имеет значение частота самцов L. arcana (ПЦР+), среди самок - L. saxatilis (ПЦР-) и L. arcana, не имеющие соответствующего молекулярного маркера (ПЦР-). Самки L. arcana (ПЦР+), также как и самцы L. saxatilis (ПЦР-), в соответствии с моделью, не имеют существенного значения для межвидовой гибридизации.

Основные итоги главы. Показана приуроченность видов рода Littorina к конкретным микробиотопам и горизонтам приливно-отливной зоны.

Плотность поселения L. arcana максимальна в средних горизонтах литорали, на границе пояса макрофитов и гравия, L. compressa - в средних горизонтах в поясе фукоидов, L. saxatilis - равномерно распределена по всем горизонтам литорали. Места обитания видов группы "obtusata" разделены границей верхней сублиторали - L. fabalis обитает ниже нуля глубин, L. obtusata - на литорали.

При помощи количественных популяционных методов анализа доказана положительная корреляция между числом родительских видов L. saxatilis и L. arcana и числом гибридных особей при изучении микропространственного распределения видов на литорали. Все особи были определены морфологически и типированы амплификацией А2.8 ДНК маркера. Данные свидетельствуют о межвидовом скрещивании видов-двойников, учитывая невысокий уровень индивидуальной активности особей и отсутствие плавающей расселительной личинки в жизненном цикле видов подрода Neritrema.

Глава 7. ФИЛОГЕОГРАФИЯ ВИДОВ ЛИТТОРИНИД ГРУППЫ "SAXATILIS"

4.1 Гаплотипы митохондриального гена цитохрома оксидазы b (cyt b)

Проведен анализ 213 фрагментов гена cyt b трёх видов литторин группы "saxatilis": L. saxatilis (n=71), L. arcana (n=71) и L.compressa (n=71). Размер секвенированного фрагмента митохондриального гена cyt b составил около 700 пн, для аллаймента использовали общий участок, размером 625 пн.

Анализ секвенированных последовательностей выявил значительный полиморфизм по фрагменту гена cyt b. Выявлено 33 вариабельных позиции, из них 22 парсимониально информативных. Для трёх видов литторин группы "saxatilis" обнаружено 22 гаплотипа (Табл. 2). Необходимо учесть, что материал из Англии, использованный в работе, был прислан в виде замороженных тканей моллюсков, и проверка морфологического определения видов для этих образцов была затруднительна. Нельзя исключить вероятные ошибки в морфологическом определении критических видов. Таким образом, делать окончательные филогеографические выводы по данным из трех регионов было бы поспешным. По выборкам литторин из России и Норвегии, определение видов которых мы проводили лично и, в достоверности определения которых мы уверены, получены следующие данные: для L. saxatilis обнаружено 8 гаплотипов, 4 из которых являются видоспецифичными; для L. compressa - 4 гаплотипа, 3 - видоспецифичных; для L. arcana - 7 гаплотипов, 3 из которых - видоспецифичные. Один гаплотип (Е4) - общий для всех трёх видов группы "saxatilis", три гаплотипа (ЕЮ, Вгб и El) оказались общими для L. saxatilis и L. arcana. Для каждого из трёх видов обнаружены гаплотипы, маркирующие конкретные географические популяции.

Таблица 2. Гаплотипы фрагмента митохондриалыюго гена су1 Ь для трех видов литорин. В ячейках указано число особей с соответствующим гаплотипом. Ш| -Баренцево море, Россия; ГЧог-Тромсё, Норвегия; 11К- Уэльс, Великобритания.

вид y- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22

u Ы * a ы NS6 NS10 SC9 й Z SW4 i (Л ? U CW11 CW7 CCI О U «5 С z CW20 AC16 AW1 ilAVV < г 1 NA9

L. saxatilis RU 7 » 8

Nor II J 4 2 2 1 1

UK 5 11 2 2 1 2

L. compressa RU 12 u 1

Nor 1 21

UK 3 10 S 1 4 1

L.arcana RU 12 2 1 4 5

Nor 2 20 1

UK 6 3 12 3

| N | | 48 | 25 | 18 | 8 | 2 | 1 | 8 | 1 | 1 | Z | 10 | 5 | 1 | 39 1 1 | 1 | 1 | 5 | 12 | 3 | 20 | 1

Основные итоги главы. Из трёх видов группы "saxatilis", вид L. compressa наименее полиморфный - 96% моллюсков из России и Норвегии представлены двумя гаплотипами фрагмента митохондриального гена cyt b. Самый полиморфный вид - L. saxatilis представлен 8 гаплотипами, 25% особей имеет, специфичные только для этого вида, гаплотипы. 55% особей L. агсапа имеет гаплотипы, свойственные только L. агсапа. Наличие общего для всех трёх видов гаплотипа Е4 свидетельствует об общем происхождении трёх видов группы "saxatilis"; наличие 3 общих гаплотипов у L. saxatilis и L. агсапа - об их близкой эволюционной истории. L. compressa (по материалу из популяций России и Норвегии) не имеет общих гаплотипов с L. saxatilis и L. агсапа.

Глава 8. ЭВОЛЮЦИЯ КОМПЛЕКСА КРИПТИЧЕСКИХ ВИДОВ ПОДРОДА NERITREMA НА ОСНОВАНИИ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ ДАННЫХ

Морфологическое описание видовых признаков для всех 19 ныне живущих видов рода Littorina было сделано Дэвидом Ридом в монографии 1996 года (Reid, 1996). Нами показано, что подрод Neritrema в российских морях Северной Атлантики представлен пятью криптическими видами литторин, входящих в состав двух групп - "obtusata" (Littorina obtusata, L. fabalis) и "saxatilis" (L. saxatilis, L. arcana, L. compressa).

Вид L. obtusatci в Белом и Баренцевом морях представлен северным вариететом geog. var. palliata, раковина которого характеризуется относительно более высоким завитком, в отличие от формы geog. var. retusa, населяющей южную часть ареала обитания вида. Вид L. fabalis (=L. mariae) в Белом море и на побережье Восточного Мурмана представлен вариететом geog.var.limata. В отличие от южного вариетета (geog.var.typica), обладающего почти шаровидной раковиной, моллюски морей Северной Атлантики характеризуются более выраженным завитком и тонкостенной раковиной. Тонкие морфологические детали строения раковины усложняют идентификацию видов внутри комплекса "obtusata" по конхологическим особенностям. В то же время признаки строения половой системы позволяют надежно различать указанные виды между собой (но не между видами групп "obtusata" и "saxatilis").

Беломорская фауна литторинид включает лишь одного представителя видового комплекса "saxatilis". Это яйцеживородящий вид Littorina saxatilis (Olivi 1792). В некоторых работах для этого вида употребляются более поздние синонимичные названия - "Littorina rudis" (Maton 1797) (Галактионов, Добровольский, 1984) или "L. tenebrosa" (Montagu 1803) (Middendorff, 1849). L. saxatilis проявляет значительную внутривидовую пластичность. Как более южные представители (geog.var.typica), так и представители северной части ареала вида (в частности, популяции Белого и Баренцева морей - geog.var.groenlandica) характеризуются существенной изменчивостью. Это, а также способность вида осваивать разнообразные условия обитания привело к выделению внутри L. saxatilis форм, якобы имеющих видовой статус. Наиболее яркий пример - обитающие среди раковин балянусов мелкие "Z. neglecta". Лишь широкое применение методов генетического анализа и детальное морфо-анатомическое описание позволило подтвердить единство вида L. saxatilis и рассматривать "L neglecta" в качестве внутривидовой экологической морфы (Johannesson, Johannesson, 1990, 1993; Reid, 1996).

Помимо яйцеживородящих L. saxatilis, на баренцевоморском побережье обитают также два вида из группы "saxatilis", которые могут быть охарактеризованы как виды с прямым развитием, откладывающие бентические кладки в литоральной зоне, на поверхности камней и талломах макрофитов, это - L. compressa и L. агсапа. Характер их размножения и тип развития аналогичны таковым для обоих представителей группы "obtusata" -L. fabalis и L. obtusata. Лишь в начале 80-х годов появляются первые данные о сложном составе вида "I. saxatilis" на побережье Восточного Мурмана. В частности, отмечалось что, помимо L. saxatilis, обнаружен вид L. nigrolineata (Галактионов, Русанов, 1983, Галактионов, Марасаев, 1986). Позже, по-видимому этот же вид, упоминается под названием Littorinovaga jugosa (определение А.Н.Голикова, цит. по: Галактионов, 1993). Ревизия рода Lit toi 'ina, проведенная в 1996 г. Д. Ридом, установила название L. compressa, основываясь на наиболее надежной ранней идентификации моллюсков этого вида (L. saxatilis var. compressa Jeffreys 1865) (Reid, 1996). В цитируемой

монографии приведены данные по единичным особям L. compressa из района пос. Дальние Зеленцы, широкое присутствие вида подтвердилось позже, в результате анализа массового материала (Гранович и др., 2004).

В 2001 г. на побережье Восточного Мурмана был обнаружен еще один представитель комплекса видов "saxatilis" - L. arcana (Granovitch, Sokolova, 2001), обозначив самое восточное место нахождения вида. Вероятно, что L. arcana и L. compressa распространены и далее на восток по побережью Кольского полуострова, однако этот вопрос требует дополнительного исследования. Первое детальное описание всех видов подрода Neriîrema на Восточном Мурмане, включая анализ популяционной структуры видов, было сделано в 2004 году (Гранович и др., 2004).

Систематика и эволюция моллюсков семейства Littorinidae (включая род Littorina) изучается на протяжении последних сорока лет. В самом начале, систематика литторинид базировалась, главным образом, на характеристике раковины моллюсков (Rosewater 1970; 1981), однако, раковины видов сходны по форме и характеризуются как генетической, так и широкой экологической изменчивостью и высокой степенью полиморфизма. В дальнейшем, систематики обратились к анатомическим признакам видов (Heller, 1975; Bandel, Kadolsky, 1982; Reid, 1986) и использовали их в кладистическом анализе, для построения моделей филогенетических отношений внутри видов литторинид (Reid, 1989; 1990; 2002). Первый морфологический филогенетический анализ 18 современных видов рода Littorina был проведен Д. Ридом (Reid, 1986; 1990). Для всех видов рода было использовано 13 морфологических признаков, с присвоенными им градациями, которые и послужили основой для кладистического анализа, а именно: 1. раковина - форма раковины и характер ее минерализации; 2. копулятивный орган - 4 категории, учитывающие расположение пениальных желез; 3. сперма - отсутствие "стержня" в парасперматозоидах у Littorina (в отличие от видов родов Nodilittorina и Littoraria); 4. паллиальный овидукт - 3 категории строения спиральных петель на белковой и капсульной железах; 5. тип развития - пять типов яйцевых капсул; радула и строение передней кишки. В этой работе Д. Рид сделал описание двух синапоморфий рода Littorina'. организация последовательных спиральных петель яичных желобов через белковую и капсульную железы паллиалыюго комплекса яйцевода самок и отсутствие "стержня" в сперматозоидах. По наличию этих двух синапоморфий, род Littorina был определен как монофилетическая клада, в которой пять североатлантических видов подрода Neritrema сформировали отдельную кладу, внутри которой L. obtusata и L. fabalis значимо различались от видов группы "saxatilis".

Виды рода Littorina представляют собой уникальную модель для изучения разных эволюционных проблем. Одним из интересных и важных эволюционных вопросов, касающихся рода, является вопрос о происхождении прямого развития в группе видов подрода Neritrema. Большинство литторинид (более 140 видов) размножаются с помощью пелагических яиц, из которых выходят свободноплавающие личинки,

способные к широкому распространению. В противоположность этому, все 10 видов подрода Neri trema (5 нз них - североатлантические виды) характеризуются прямым развитием: девять видов откладывают бентические кладки (яйцекладущие) и один вид (L.saxatilis) является яйцеживородящим. В связи с наличием прямого развития и относительно низкой локомоторной активностью, распространение особей и поток генов в популяциях видов, у которых отсутствует планктонная личинка, ограничены, что имеет важное значение для внутривидовой генетической дифференциации и видообразования в целом (Reid, 1996). Именно с этими особенностями генетической структуры видов может быть связана высокая пластичность и формирование разнообразных географических вариететов, экологических морф, локальных межпопуляционных различий, которые характерны для структуры всех видов рассматриваемой группы.

Наличие у видов подрода Neritrema бентических кладок и прямого развития интерпретировались как адаптация к умеренно-холодному климату северной части Атлантического и Тихого океанов i> признаны синапоморфией, которая определяет монофилию подрода (Reid, 1996). До снх пор не было получено независимых подтверждений уникального происхождения этих черт развития, как молекулярными данными, так и наличием иных морфологических признаков. Одновременное происхождение прямого развития у видов подрода Neritrema может быть признано достоверным, если будут получены молекулярные данные, по которым все 10 видов подрода смогут образовать общую кладу в молекулярном анализе. Полученные в последнее время молекулярные данные неоднозначны, однако в анализе, проведенном по пяти генам (28S рРНК, 12S рРНК, 16S rRNA, COI и cyt b) только для видов одного рода Littorina, виды подрода Neritrema образует единую кладу, но с низкой поддержкой ветвей (РР = 0,71) (Reid et al., 2012). Таким образом, вопрос об эволюционном происхождении прямого развития у Littorina близок к разрешению, но все еще требует проведения дополнительных исследований.

Очень важной характеристикой североатлантических литторин являются ареалы распространения криптическнх видов. Так, вид L. saxatilis широко распространен в Северной Атлантике: от побережий Северной Америки, Канады, Гренландии на западе, до побережий восточной Европы. Вид обитает почти во всех морях Северной Атлантики, встречается по всему европейскому побережью от Гибралтара до Нордкапа и далее на восток до островов Вайгач и Новая Земля (Reid, 1996). Иная ситуация наблюдается в распространении двух других видов группы "saxatilis". Области современного распространения L. arcana и L. compressa совпадают, виды характеризуются сходными узкими ареалами и встречаются только на побережье Великобритании, Франции, Норвегии и Баренцева моря (Reid 1996). Полное перекрывание областей распространения криптических видов может свидетельствовать о симпатрическом видообразовании, поскольку аллопатрнческое видообразование связано с географическим разделением ареалов видов. В концепциях эволюции возможность симпатрического

видообразования до сих пор остается одним из наиболее дискуссионных моментов. Некоторыми авторами его возможность отрицается или оно признается как очень редкое явление (Мауг, 1963). Доказать существование симпатрического видообразования сложно, однако, на некоторые косвенные доказательства, полученные с использованием модели критических видов подрода Neritrema следует обратить внимание. Так, например, L. saxatilis характеризуется широким диапазоном распространения, способны населять экологически контрастные биотопы и формировать экотипы, демонстрируя значительную изменчивость вида. Как уже было отмечено ранее, такое удивительное морфологическое варьирование может быть результатом адаптаций вида к локальным условиям обитания, чему дополнительно способствует наличие прямого развития (яйцеживорождение) и ограничение в распространении вида (небольшой радиус индивидуальной активности особей в течение жизни). На трех побережьях Северной Атлантики (Испания, Англия, Швеция) обнаружены, обитающие в симпатрии, морфологически различные экотипы. Их формирование связано с адаптациями к жизни в условиях присутствия или отсутствия хищничества со стороны крабов. Еще более существенные различия симпатричных «экотипов» наблюдаются в связи с зональностью литоральной зоны в прибойных местообитаниях. Такие случаи «внутривидовой дивергенции» представляет собой хорошую модель для изучения микроэволюционных процессов и экологического видообразования (Butlin et al., 2008; Johannesson et al., 2010). Эти данные, a также соотношение ареалов видов комплекса "saxatilis" заставляет еще раз задуматься о реальности симпатрического видообразования.

Прогресс в изучении филогенетических отношений в группе видов рода Littorina был связан с анализом, проводимом на основе частот аллозимов. Филогенетический анализ на основе частот аллозимов измеряет генетические расстояния между видами, используемые в построениях кластерных моделей. Этот метод базируется на предположении о том, что дифференциация белков пропорциональна времени, прошедшему с момента дивергенции видов. Такой метод был использован для анализа от 16 до 25 локусов у 6 атлантических видов Littorina (Ward, 1990), показавший их близкое родство. Среди членов подрода Neritrema виды группы "obtusata" и "saxatilis" существенно различались. По данным Варда, виды L. saxatilis и L. arcana оказались ближе друг другу, чем к виду L. compressa. Сходные результаты получены по 22 локусам для трех видов группы "saxatilis", где L. saxatilis и L. arcana показывают более тесную связь друг с другом, чем с L. compressa (Knight, Ward, 1991). В другой работе (Backeljau, Warmoes, 1992) показано, что семь видов литторин представляют собой не монофилетическую группу, a L. compressa и L. arcana кластеризуются как сестринские виды. В более поздней работе (Backeljau et al., 1994), использовано три разных подхода к измерению генетических дистанций и кластерных методов анализа. Большинство кластерных методов подтвердило обособленность видов группы "saxatilis" и показана кластеризация видов L.

saxatilis и L. arcana. Однако, данные, полученные по частотам аллозимов, необходимо интерпретировать с осторожностью, поскольку на разных видах литторин доказано, что некоторые локусы ферментов подвержены отбору (Janson, Ward, 1984; Johannesson, Johannesson, 1989; 1990; 1993; Grahame et al., 1992; Tatarenkov, Johannesson, 1994; Johannesson et al., 1995).

Дальнейший прогресс в изучении филогенетических отношений в группе видов рода Litíorina был связан с применением молекулярных методов анализа геномной ДНК. Так, применение метода амплификации ДНК со случайными праймерами (метод RAPD) показал большее генетическое сходство двух видов L. saxatilis и L. arcana по сравнению с L. compressa (Crossland et al., 1993). Поскольку RAPD методом обнаруживается полиморфизм по фрагментам ДНК неизвестного происхождения, то более широкое применение получили методы прямого секвенирования фрагментов известных митохондриальных и ядерных генов. Так, митохондриальные гены являются очень перспективными для изучения филогенетических отношений видов (Avise, 1994), а каждая мутация в составе ДНК последовательности этих генов несет потенциальную филогенетическую информацию. Впервые, данные по митохондриальному геному Litíorina (12S rRNA) были опубликованы в 1994 году (Rumbak, et al., 1994), с использованием ДНК 11 видов литторин. Полученные данные показали монофилетическое происхождение рода Litíorina. В дальнейшем эта работа была расширена и опубликованы данные анализа по фрагментам трёх митохондриальных генов (12S, 16S rRNA и cyt b) для всех 19 существующих современных видов литторин (Reid et al., 1996). При проведении анализа на основе каждого из трех генов, показано, что поддержка ветвей слабая, но топология деревьев, в каждом случае, почти полностью соответствует друг другу. Что касается филогенетических отношений внутри рода Litíorina, то на основании сиквенса трёх митохондриальных генов была показана монофилия видов группы "saxatilis", однако, филогенетические связи среди трёх близких критических видов достоверно разрешить не удавалось (Reid, 1996). В случае трех видов группы "saxatilis" не обнаружено морфологических синапоморфий, которые бы определяли их филогенетическую связь. Хотя L. arcana и L. compressa по ДНК анализу разрешаются как сестринские виды (bootstrap поддержка 62%), поддержка L. arcana и L. saxatilis в качестве сестринских видов оказалась еще меньше (Reid, 1996).

Если виды обитают в симпатрии, то существование значимо разных частот аллелей используется как доказательство их репродуктивной изоляции и поддерживает их статус в качестве самостоятельных видов. Это, например, показано для L. compressa и L. saxatilis (Knight, Ward, 1986; 1991). В случае этих двух видов репродуктивная изоляция дополнительно подтверждается различиями по строению репродуктивной системы самцов и самок. Генетические различия между аллопатрическими популяциями видов трудно интерпретировать, поскольку поток генов может быть ограничен географической изоляцией и различиями, связанными с отбором или

дрейфом генов, что может оказаться значительней, чем морфологические различия близких видов.

L. saxatilis и L. arcana - морфологически сходные виды, генетические дистанции между которыми небольшие и, до настоящего времени, не было обнаружено аллелей, которые можно признать диагностическими. Интересно, что в лабораторных условиях были получены межвидовые гибриды этих двух видов (Warwick et al., 1990), однако, гибридные особи не были обнаружены в природных популяциях. Нам удалось обнаружить видоспецифичные для L. arcana RAPD фрагменты, доказать наличие в природе межвидовых копулирующих пар, неравномерное распределение видов-двойников по горизонтам литорали и прямую зависимость числа гибридных особей в разных микробиотопах от частоты встречаемости родительских видов L. saxatilis и L. arcana. Анализ микросателлитной ДНК криптических видов подтвердил наличие гибридных особей в географически удаленных популяциях (Россия и Норвегия), что придает полученным данным универсальный характер. Более поздняя эволюция видов подрода Neritrema подтверждена хронограммой, построенной с учетом возраста ископаемых остатков литторинид: североатлантические виды располагаются на самых коротких ветвях филогенетического древа, полученного для 147 видов подсемейства Littorininae (Reid et al., 2012).

Результаты представленных в работе многолетних исследований позволяют сделать заключение, что критические виды группы "saxatilis" -эволюционно молодые виды, среди которых виды-двойники L. saxatilis и L. arcana находятся в процессе эволюционного становления, характеризуясь неполной репродуктивной изоляцией и, как следствие, потоком генов между ними. Молекулярно-генетические данные показали участие некодирующей ДНК (RAPD маркер А2.8 и шесть локусов микросателлитной ДНК) в молекулярной эволюции видов-двойников. Интересно отметить, что не обнаружено различий по функциональным генам критических видов. Филогеографические данные (митохондриальный ген cyt b) подтверждают генетическую близость L. saxatilis и L. arcana из северных краевых популяций Баренцева и Норвежского морей, по сравнению с L. compressa, по наличию общих гаплотипов.

Моллюски подрода Neritrema представляют собой очень перспективную модель для дальнейшей проверки эволюционных гипотез видообразования и, по-видимому, прогресс в ближайшем времени будет связан с получением новых данных по структуре геномов видов, в сочетании с новыми знаниями о морфологии, биологии, филогеографии и распространению этих видов.

ВЫВОДЫ

(W.Turton 1825). Три вида литтории подрода Neritrema обитают на побережье Белого моря - I. saxatilis, L. obtusata, L.fabalis.

2. Виды рода Litíorina подрода Neritrema входят в состав двух групп криптических видов: группа "saxatilis" - L. saxatilis, L. compressa, L. arcana и группа "obtusata" - L. obtusata, L.fabalis.

3. Зональное распределение популяций рода Littorina на литорали видоспецифично. Плотность поселения L. arcana максимальна в средних горизонтах, на границе пояса макрофитов и гравия, L. compressa - в средних горизонтах в поясе фукондов, L. saxatilis - равномерно распределена по всем горизонтам литорали. Места обитания видов группы "obtusata" разделены границей верхней сублиторали - L. fabalis обитает ниже нуля глубин, L. obtusata - на литорали.

4. Два вида литтории группы "saxatilis" - L. saxatilis и L. arcana определены как виды-двойники: самцы видов не имеют диагностических признаков, самки отличаются строением паллиалыюго комплекса яйцевода и размером копулятивной бурсы.

5. Клонированный RAPD фрагмент А2.8, видоспецифичен для L. arcana и использован для диагностики вида в симпатрических популяциях моллюсков группы "saxatilis". RAPD фрагмент А2.8 отсутствует в геноме L. compressa.

6. Анализ микросателлитной ДНК криптических видов группы "saxatilis" из разных географических популяций, подтвердил видовой статус моллюсков и выявил видоспецифичные маркеры, пригодные для их диагностики. На основе сравнения частот гаплотипов микросателлитной ДНК показана большая филогенетическая близость L. saxatilis и L. arcana по сравнению с L. compressa.

7. В симпатрических популяцих L. saxatilis и L. arcana Баренцева, Норвежского морей и пролива Ла-Манш обнаружены гибридные особи (маркированы ДНК фрагментом А2.8.), что свидетельствует о гибридизации двух видов. В аллопатрических популяциях L. saxatilis различных географических районов гибридные особи не обнаружены.

8. Виды-двойники L. saxatilis и L. arcana способны к межвидовому спариванию, что показано анализом партнёров в копулирующих парах.

9. Доказана положительная корреляция между числом родительских видов L. saxatilis и L. arcana и числом гибридных особей при изучении микропространственного распределения видов на литорали. Данные свидетельствуют о межвидовом скрещивании видов, однако конкретные механизмы постзиготической репродуктивной изоляции неизвестны.

10. Сравнение частот гаплотипов митохондриального гена цитохром оксидазы b (cyt b) видов комплекса "saxatilis" из разных географических популяций подтвердил большую филогенетическую близость L. saxatilis и I. arcana по сравнению с L. compressa.

11. Виды рода Littorina подрода Neritrema образуют две группы криптических видов, из которых виды группы "obtusata" эволюционно отстоят от видов группы "saxatilis". Среди криптических видов группы

"saxatilis" два вида - L. saxatilis и L. arcana представлены парой видов-двойников, между которыми существует поток генов, что свидетельствует об эволюционном становлении видов.

12. Виды рода Littorina подрода Neritrema - группа видов, эволюционно самая молодая из 152 видов подсемейства Littorininae, что подтверждается нашими данными и хронограммами, построенными с использованием ископаемых находок (Reid et al., 2012).

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

В рецензируемых международных и отечественных изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. Неравномерное распределение на литорали моллюсков Littorina obtasata и L.saxatilis (Gastropoda: Prosobranchia), зараженных партенитами трематод. Зоол. журнал. 1984. T.63. Вып.6. С.929-931.

2. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. Влияние трематодной инвазии на выживаемость моллюсков Littorina obtusata (L.) и L.saxatilis (Olivi) в условиях экстремально низкой солености среды. Паразитология. 1986. T.20. Вып.З. С.202-207.

3. Гранович А.И., Михайлова Н.А., Сергиевский С.О. Возрастные особенности зараженности популяций литоральных моллюсков Littorina obtusata и L.saxatilis партенитами трематод. Паразитология. 1987. T.21. Вып.6. С.721-729.

4. Михайлова Н.А., Гранович А.И., Сергиевский С.О. Влияние трематодной инвазии на микробиотопическое распределение моллюсков Littorina obtusata и L.saxatilis. Паразитология. 1988. T.22. Вып.5. С.398-407.

5. Михайлова Н.А., Наумов А.Д. Структура раковины и полиморфизм окраски брюхоногого моллюска Littorina obtusata (Gastropoda: Prosobranchia). Зоологический журнал. 1990. T.69. Вып.4. С. 131-134.

6. Birstein V.Ja., Mikhailova N.A. On the karyology of trematodes of the genus Microphallus and their trematode gastropod hosts, Littorina saxatilis. I. Chromosome analysis of three Microphallus species. Genetica. 1990. 80: 159-165

7. Birstein V.Ja., Mikhailova N.A. On the karyology of trematodes of the genus Microphallus and their trematode gastropod hosts, Littorina saxatilis. II. Karyological study of Littorina saxatilis (Gastropoda:Prosobranchia). Genetica. 1990. 80: 167-170

8. Mikhailova N.A., Johannesson K. A comparison of different protocols for RAPD analysis of Littorina. Hydrobiology. 1998. Vol. 387. P. 33-42

9. Johannesson K., Mikhailova N.A. Habitat-related genetic substructuring in a marine snails (Littorina fabalis) involving a tight link between allozyme and a DNA locus. Biol.J.Linn.Soc. 2004. Vol.81. P. 301-306

10. Mikhailova N.A., Petrova Y.A. Molecular markers for identification of the sibling species of marine gastropods of the genus Littorina. Цитология. 2004. T.46. №9. С. 823-824

11. Гранович А.И., Михайлова Н.А., Знаменская О., Петрова Ю.А. Видовой состав моллюсков рода Littorina (Gastropoda, Prosobranchia) Восточного Мурмана. Зоологический журнал. 2004. T.83. № 11. С. 1305-1317.

12. Fokin M.V., Mikhailova N.A. 2004. Characterization of three microsatellite loci in the White Sea periwinkles Littorina obtusata (L.) and L. fabalis Turton. Proc.Zool.Inst.Russ.Acad.Sci. 300:63-68.

13.Ганжа E.B., Гранович А.И., Петрова Ю.А., Михайлова Н.А. 2006. Анализ гистологических особенностей строения гениальных желез моллюсков рода Littorina Северной Атлантики. Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер.З. Вып.4. С. 40-46.

14. Гранович А.И., Лоскутова З.И., Грачева Ю.А., Михайлова Н.А. 2008. Морфометрический анализ копулятивного органа моллюсков видового комплекса «saxatilis» (Caenogastropoda, Littorinidae): проблемы идентификации и статуса видов. Зоологический журнал. Т.87, вып. 12, С. 1425-1436.

15. Михайлова Н.А., Грачева Ю.А., Гранович А.И. 2008. Анализ частоты межвидовых спариваний в копулирующих парах морских гастропод рода Littorina комплекса «saxatilis». Вестник СПбГУ. Сер. 3. вып. 4. С.5-9.

16. Mikhailova Natalia A., Yulia A. Gracheva, Thierry Backeljau, Andrey I. Granovitch 2009. A potential species-specific molecular marker suggests interspecific hybridization between sibling species Littorina arcana and L. saxatilis (Mollusca, Caenogastropoda) in natural populations. Genetica. V. 137. № 3. P. 333-340.

17. Старунова З.И., Михайлова H.A., Гранович А.И. 2010 Анализ межпопуляционных и внутрипопуляционных различий формы раковины у представителей видового комплекса «saxatilis» (Mollusca: Caenogastropoda) методами геометрической морфометрии. Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер.З. Вып.4. С. 23-34.

Статьи, опубликованные в других изданиях:

18. Галактионов К.В., Михайлова Н.А. Популяции литорального моллюска Littorina saxatilis Olivi на северо-восточной границе ареала (о-ва Новая Земля и Вайгач). В кн.: Моллюски. Результаты и перспективы их исследований. Ленинград. 1987. С.436-437.

19. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. Возрастная структура популяций брюхоногих моллюсков Littorina saxatilis и L.obtusata в Белом море// Бентос Белого моря. Популяции, биоценозы, фауна. Тр.ЗИН РАН СССР. 1991. Т.233. С.79-126

20. Petrova Yu.A., Granovitch А.1., Mikhailova N.A. Molecular markers for the identification of close Barents Sea littorinid species. In: Marine flora and fauna of the Nordic latitudes: mechanisms of adaptation and growth regulation of organisms. Apatity: Print. Kola Science Centre RAS. 2004. P. 326-333.

21. Петрова Ю.А., Гранович А.И., Михайлова Н.А. Молекулярные маркеры для идентификации близких видов литторинид Баренцева моря. В кн.: «Морская флора и фауна северных широт. Механизмы адаптации и регуляции роста организмов» Апатиты: Изд. КНЦ РАН. 2004. С. 149-156.

22. Старунова З.И., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 2011. Использование методов геометрической морфометрии для анализа форм биологических объектов. В кн. Современные проблемы эволюционной морфологии животных (Материалы школы для молодых специалистов и студентов к 105-летию со дня рождения академика А.В.Иванова). СПб. с. 134-136.

Работы, опубликованные в материалах конференций:

23. Гранович А.И, Михайлова Н.А., Сергиевский С.О. Влияние трематодной инвазии на пространственную структуру популяций моллюсков Littorina obtusata и L.saxatilis. Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря. Архангельск. 1985. С.102-103.

24. Михайлова II.A. Нарушение ритма приливно-отливных миграций у моллюсков Littorina obtusata и L. saxatilis, зараженных иартенитами трематод. Тез.докл. 4-го Всес. симпоз. Паразиты и болезни водных беспозвоночных. Москва. 1986. С.106-108.

25. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. Популяционный анализ динамики взаимодействий в системе "партениты трематод - литторины". Тез.докл. 4-го Всес. симпоз. Паразиты и болезни водных беспозвоночных. Москва. 1986. С. 129-131.

26. Mikhailova N., Khalturin К. Restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) of DNA two Littorina species. 5th Intern.Symp. on Littorinid Biology. Cork, Ireland. 1996. P.26

27. Mikhailova N.A., Khalturin K.V. Backeljau T. 2001. Population genetic structure of two species of marine mollusks with planktonic larvae. International Symposium on "Ecological Genetics", Antwerp, 2001. P.41-42

28. Грановмч А.И, Михайлова Н.Л., Знаменская О.С., Петрова Ю.А. Многолетняя динамика зараженности трематодами совместно-обитающих популяций литторин: опыт двадцатилетнего анализа в модельной точке губы Чупа Белого моря. Тез. докл. IV науч. сессия МБС СПбГУ. СПб. 2003. С. 53 - 54.

29. Фокин М.В., Михайлова Н.А. Использование микросателлитных маркеров для анализа популяционной структуры двух видов моллюсков рода Littorina Белого моря. Тез.докл. V научной сессии МБС СПбГУ. 2004. С. 61-62.

30. Van Riel, P., Breugelmans, К., De Wolf, П., Mikhailova, N., Backeljau, T. Van Goethem, J. 2004. Analysis of mitochondrial DNA variation via PCR-SSCP reveals micro- and macrogeographic genetic heterogeneity in the planctonic developing periwinkle, Melarhaphe neritoides (Caenogastropoda, Littorinidae). World Congress of Malacology "Mollucan Megadiversity: Sea, Land and Freshwater", Perth, Australia, 11-16 July 2004, Abstract book p.153. (In: Mees, J. & Seys, J. (Eds) VLIZ young scientists' day, Brugge, Belgium, 5 March 2004: VLIZ Special Publication 17, Oostende, p. 76)

31. Петрова Ю.А., Михайлова H.A., Гранович А.И. Морфологические особенности и изменчивость копулятивного аппарата самцов беломорских моллюсков Littorina saxatilis (Olivi). Тез. докл. VI науч. сессии МБС СПбГУ. СПб. 2005. С. 55 - 56.

32. Михайлова Н.А., Петрова Ю.А., Гранович А.И., 2006. Молекулярно-генетические методы идентификации видов-двойников морских гастропод Littorina saxatilis -L.arcana. Малакологическое совещание «Моллюски:морфология, таксономия, филогения, биогеография и Экология. 13-17 ноября 2006 г. ЗИН РАН.

33. Петрова Ю.А., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 2007. Идентификация кладок литорального моллюска Littorina arcana с использованием молекулярно-генетических методов. Тез. Докл. конф., посвящ. 50-летию ББС ЗИН РАН «Картеш». СПб, С. 92.

34. Грачева Ю.А., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 2008. Анализ частоты межвидовых спариваний в копулирующих парах морских гастропод рода Littorina комплекса "saxatilis". IX Научная сессия МБС СПбГУ. 8 февраля 2008 г. С. 47-48.

35. Gracheva Y.A., Granovitch A.I., Mikhailova N.A. 2008. Analysis of the interspecific crosses frequency in copulating pairs of littorinids of «saxatilis» species-complex. Abstracts of 9 Int.Symp. on Littorinid Biol. 2-7 Sept.2008. Oia, Spain. P.20.

36. Loskutova Z.I., Mikhailova N.A., Granovitch A.I., Gracheva Y.A. 2008. Morphometrical analysis of three rough periwinkles copulatory organ. Abstracts of 9 Int.Symp. on Littorinid Biol. 2-7 Sept.2008. Oia, Spain. P.29.

37. Mikhailova N. Morpho-anatomical and molecular complex analysis of the rough periwinkles from the North Atlantic: pro et contra of accepted meaning. Abstracts of 9 Int.Symp. on Littorinid Biol. 2-7 Sept.2008. Oia, Spain. P.30.

38. Лоскутова З.И., Михайлова H.A., Гранович А.И. 2010. Анализ межпопуляционных и внутрипопуляционных различий формы раковины у представителей видового комплекса «saxatilis» (Mollusca: Caenogastropoda) методами геометрической морфометрии. Тез. докл. XI науч. сессии МБС СПбГУ. СПб. С. 41-43.

39. Starunova Z., Granovitch A., Mikhailova N. 2011. The detection of shell shape differences in "saxatilis" species complex by geometric morphomentric methods. Proceedings of 10 Int.Symp.on Littorinid Biol, and Evol. St.Petersburg, 24-29 July 2011. Polytechnical University Publishing House. P.53.

40. Grabovoi V., Granovitch A., Mikhailova N. 2011. Zonal patterns of five Littorina species distribution in habitats with different salinity (the Barents Sea, Russia). Proceedings of 10 Int.Symp.on Littorinid Biol, and Evol. St.Petersburg, 24-29 July 2011. Polytechnical University Publishing House. P.34.

41. Mikhailova N. 2011. Microspatial distribution of Littorina saxatilis and L. arcana sibling species: arguments for interspecies hybridization. Proceedings of 10 Int.Symp.on Littorinid Biol, and Evol. St.Petersburg, 24-29 July 2011. Polytechnical University Publishing House. P.45.

Подписано в печать 05.09.2012. Формат 60x84/16. Печать цифровая. Усл. печ. л. 2,0. Тираж 100. Заказ 9612Ь.

Отпечатано с готового оригинал-макета, предоставленного автором, в типографии Издательства Политехнического университета. 195251, Санкт-Петербург, Политехническая ул., 29. Тел.:(812)550-40-14 Тел./факс: (812) 297-57-76

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Михайлова, Наталья Аркадьевна

ВВЕДЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

Глава 1. МОЛЛЮСКИ РОДА LITTORINA - МОДЕЛЬ ДЛЯ ЭВОЛЮЦИОННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Общая характеристика материала.

2.1 Места сбора материала.

2.2 Методы полевых сборов материала.

2.3 Морфологический анализ самок и самцов криптических видов.

2.4 Методы амплификация геномной ДНК и анализ видоспецифичных молекулярных маркеров.

2.4.1 Экстракция тотальной ДНК.

2.4.2 Амплификация ДНК со случайными праймерами методом RAPD.

2.4.3 Клонирование и секвенирование видоспецифичных ДНК фрагментов.

2.4.4 Амплификация видоспецифичных для L. arcana фрагментов А2.8 на матрице геномной ДНК криптических видов.

2.4.5 Микросателлитный анализ криптических видов группы "saxatilis".

2.4.6 Филогеографический анализ видов на основе частот гстлотипов митохондриального гена цитохром Ъ (cyt Ъ).

2.5 Морфометрический и молекулярный метод определения самцов видов-двойников L. saxatilis и L. arcana.

2.6 Морфометрический и молекулярный анализ партнеров в копулирующих парах криптических видов группы "saxatilis".

2.7 Анализ микрораспределения криптических видов подрода Neritrema на литорали.

2.8 Анализ микрораспределения гибридных особей/,, saxatilis и L. arcana по горизонтам литорали.

Глава 3. РЕВИЗИЯ ВИДОВОГО СОСТАВА МОЛЛЮСКОВ РОДА LITTORINA ПОДРОДА NERITREMA НА ПОБЕРЕЖЬЕ БАРЕНЦЕВА И БЕЛОГО МОРЕЙ.

3.1 Конхологические признаки видов подрода Neritrema.

3.2 Цветовой полиморфизм раковины видов подрода Neritrema.

3.3 Размерная структура популяций.

3.4 Морфологические признаки строения репродуктивной системы самок криптических видов.

3.5 Морфологические признаки строения репродуктивной системы самцов криптических видов.

Глава 4. ПОИСК МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КРИПТИЧЕСКИХ ВИДОВ.

4.1 Амплификация ДНК литторин со случайными праймерами.

4.2 Клонирование и секвенирование видоспецифичных фрагментов.

Обсуждение.

Глава 5. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА КРИПТИЧЕСКИХ ВИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК МАРКЕРОВ.

5.1 Идентификация самцов критических видов группы "saxatilis" методами морфометрии и амплификации фрагмента А2.8.

5.2 Частота межвидовых спариваний на основе морфологической и молекулярно-генетической идентификации партнеров в копулирующих парах видов группы "saxatilis".

5.3 Микросателлитный анализ популяций видов группы «saxatilis».

5.3.1 Равновесие Харди-Вайнберга.

5.3.2 Нулевые аллели: анализ с помощью программ Microchecker и FreeNA.

5.3.3 Популяционные различия.

5.3.4 Анализ генетических различий между популяциями и видами (расчет коэффициента Fst).

5.3.5 Оценка принадлежности индивидуумов к каждому из трех видов.

5.3.6 Кластерный анализ.

5.3.7 Многомерное шкалирование (MDS-анстиз).

Обсуждение.

Глава 6. ЗОНАЛЬНОЕ И МИКРОБИОТОПИЧЕСКОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДОВ РОДА LITTORINA ПОДРОДА NERITREMA НА ЛИТОРАЛИ.

6.1 Распределение видовых популяций подрода Neritrema по горизонтам литорали.

6.2 Видовой состав моллюсков подрода Neritrema в эстуарии.

6.3. Распределение гибридных особей L.saxatilis и L.arcana в зависимости от плотности поселения родительских видов.

Обсуждение.

Глава 7. ФИЛОГЕОГРАФИЯ ВИДОВ ЛИТТОРИНИД ГРУППЫ "SAXATILS" НА ОСНОВЕ АНАЛИЗА МИТОХОНДРИАЛЬНОГО

ГЕНА ЦИТОХРОМ ОКСИДАЗЫ b (cyt b).

7.1. Отработка методов амплификации ДНК со специфическими праймерами к фрагменту митохондриального гена cyt b.

7.2. Амплификация ДНК со специфическими праймерами к фрагментам гена cyt b на массовом материале.

7.3. Результаты секвенирования фрагментов.

7.4 Результаты филогеографических построений.

7.5. Обсуждение.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Комплекс криптических видов литоральных гастропод подрода Neritrema (Littorinidae: Littorina) Северной Атлантики"

Проблемы видообразования, микроэволюции, филогеографии и структуры вида всегда остаются в ряду наиболее дискутируемых вопросов общей биологии, поскольку касаются основных принципов становления биологического разнообразия (Dobzhansky, 1937; Майр, 1968; Тимофеев-Ресовский и др., 1977; Захаров, 2003; Coyne, Orr, 2004; Smadja, Butlin, 2011). В последнее время интерес к этой проблематике еще более возрос, в связи с возможностями применения новых методических подходов. Вслед за развитием базовых молекулярных методов, в исследования зоологов и эволюционистов, широко вовлекаются быстро совершенствующиеся методы молекулярно-генетического анализа геномов, что существенно расширяет наши представления о структуре биологических видов, их происхождении, путях географического расселения и эволюции в целом. Кроме того, динамично развивается математический аппарат для обработки больших массивов разнообразных молекулярных данных (Hudson, Coyne, 2002; Butlin, 2010; Galindo et al., 2010).

Морские брюхоногие моллюски рода Littorina - массовый и хорошо известный компонент литоральных сообществ побережий мирового океана. Два основных качества - широкое географическое распространение и высокая плотность поселений - позволили использовать виды рода в качестве объектов и моделей для проведения самых разнообразных биологических исследований (обзоры: McQuaid, 1996; Reid, 1996; Johannesson, 2003; Rolân-Alvarez, 2007). Наличие в составе рода Littorina сестринских таксонов стало причиной для детального изучения морфологических особенностей, систематики видов и проведению филогенетических исследований (Williams et al., 2003; Reid et al. 2010, 2012; Krug, 2011). Виды подрода Neritrema российских северных морей остаются наименее изученными представителями рода Littorina. Вплоть до последнего времени, в сводках по фауне литорали российских северных морей, подрод был представлен двумя видами - L. saxatilis и L. obtusata и только в 2006 году появилось первое упоминание о видах L. arcana и L. compressa (Кантор, 2006). В действительности, подрод состоит из комплекса пяти, морфологически сходных, криптических видов (Гранович и др., 2004). Наиболее интригующими, в изучении видов подрода Neritrema, являются противоречивые данные молекулярно-генетического анализа критических видов группы "saxatilis" (Ward, Warwick, 1980; Knight, Ward, 1991; Crossland et al, 1993, 1996; Rumbak et al., 1994; Reid et al., 1996; Grahame et al, 1997; Small, Gosling, 2000a; Wilding et al, 1999; Wilding et al, 2000b и др.). Филогенетические отношения в этой группе из трёх видов окончательно не могут быть определены на протяжении более чем 30 лет. Полученные ранее данные по анализу аллозимов, митохондриальных и ядерных генов противоречивы и комбинируют все возможные варианты филогенетической близости двух видов по отношению к третьему.

Комплекс северо атлантических видов подрода ИегИгета эволюционно самый молодой, из всех ныне живущих литторинид (11е1<1 е! а1., 2012), их изучение крайне актуально для понимания эволюции рода ЬШогта в целом, учитывая, что детальный анализ видов подрода ИегНгета в российских северных морях ранее не проводился. Важно отметить, что существование популяций видов подрода ИегИгета на северном краю ареала подчеркивает основные аспекты разделения экологических ниш, дает дополнительные сведения относительно эволюционной пластичности видов. Всё перечисленное выше определяет актуальность работы.

Цель работы: оценить пути эволюционного формирования комплекса криптических видов литоральных гастропод подрода 1ЯегИгета в морях Северной Атлантики на основе морфологических, экологических и молекулярно-генетических данных.

Задачи исследования:

1. Провести морфологическую ревизию видов рода ЬШоппа подрода ИегИгета на побережьях Баренцева и Белого морей, дать описание диагностических морфологических признаков.

3. Использовать геномную ДНК литторин для поиска видоспецифичных генетических маркеров криптических видов группы "БахаШз".

4. Провести тестирование молекулярных маркеров, используя массовой материал моллюсков группы "захайПз" из разных географических популяций, и выявить видоспецифичные маркеры, пригодные для диагностики криптических видов группы.

6. Провести генетический анализ видов литторин из разных географических популяций, на основе сравнения частот гаплотипов митохондриального гена цитохрома оксидазы Ь (су1 Ь) и ядерной ДНК.

7. Оценить эволюционный статус критических видов на основе их морфо-биологических характеристик и сравнительного анализа геномной ДНК.

В соответствии с поставленными в работе целью и задачами, прежде всего, было необходимо обобщить литературные данные и получить представление о североатлантических видах моллюсков подрода АтегИгета, а также охарактеризовать криптические виды (Глава 1). Сведения, полученные в процессе анализа литературных данных, оказались хорошим заделом для поэтапного планирования работ, применения соответствующих поставленным задачам методов исследования (Глава 2) и обсуждения новых оригинальных данных (Главы 3-8).

Список используемых сокращений

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

МНШ - многомерное шкалирование (MDS - Multidimensional Scaling). мтДНК - митхондриальная ДНК ПААГ - полиакриламидный гель

ПДРФ - полиморфизм длины рестриктных фрагментов ДНК

ПЦР - полимеразная цепная реакция (PCR - Polymerase Chain Reaction). рРНК - рибосомальная рибонуклеиновая кислота

СВА - северо-восточная Атлантика

СЗА - северо-западная Атлантика

СТЭ - синтетическая теория эволюции

AMOVA - Analysis of molecular variance (Анализ молекулярной дисперсии) COI - субъединица 1 гена цитохром оксидазы СОИ - субъединица 2 гена цитохром оксидазы СТАВ - cetyltrimethylammoniumbromide

HWST (high water spring tide) - высокий уровень воды в море во время прилива

IGS (Intergenic Spacers) - межгенные участки ДНК.

LWST (low water spring tide) - низкий уровень воды в море во время отлива

RAPDs (Randomly Amplified Polymorphic DNAs) - случайно амплифицированные полиморфные фрагменты ДНК.

RFLPs - Restriction Fragment Length Polymorphisms

SSCPs (Single-Strand Conformation Polymorphisms) - однонитевой конформационный полиморфизм участков молекул ДНК.

UPGMA - Unweighted Pair Group Method with Arithmetic mean (Метод попарного невзвешенного кластирования с арифметическим усреднением)

Заключение Диссертация по теме "Зоология", Михайлова, Наталья Аркадьевна

ВЫВОДЫ

1. Состав рода Littorina подрода Neritrema на побереже Баренцева моря включает пять видов - Littorina saxatilis (Olivi 1792), L. compressa Jeffreys 1865, L. arcana (Hannaford Ellis 1978), L. obtusata (Linnaeus 1758), L. fabalis (W.Turton 1825). Три вида литторин подрода Neritrema обитают на побережье Белого моря - L. saxatilis, L. obtusata, L. fabalis.

2. Виды рода Littorina подрода Neritrema входят в состав двух групп криптических видов: группа "saxatilis" - L. saxatilis, L. compressa, L. arcana и группа "obtusata" - L. obtusata, L. fabalis.

3. Зональное распределение популяций рода Littorina на литорали видоспецифично. Плотность поселения L. arcana максимальна в средних горизонтах, на границе пояса макрофитов и гравия, L. compressa - в средних горизонтах в поясе фукоидов, L. saxatilis - равномерно распределена по всем горизонтам литорали. Места обитания видов группы "obtusata" разделены границей верхней сублиторали - L. fabalis обитает ниже нуля глубин, L. obtusata - на литорали.

4. Два вида литторин группы "saxatilis" - L. saxatilis и L. arcana определены как виды-двойники: самцы видов не имеют диагностических признаков, самки отличаются строением паллиального комплекса яйцевода и размером копулятивной бурсы.

6. Анализ микросателлитной ДНК критических видов группы "saxatilis" из разных географических популяций, подтвердил видовой статус моллюсков и выявил видоспецифичные маркеры, пригодные для их диагностики. На основе сравнения частот гаплотипов микросателлитной ДНК показана большая филогенетическая близость L. saxatilis и L. arcana по сравнению с L. compressa.

11. Виды рода Littorina подрода Neritrema образуют две группы критических видов, из которых виды группы "obtusata" эволюционно отстоят от видов группы "saxatilis". Среди критических видов группы "saxatilis" два вида - L. saxatilis и L. arcana представлены парой видовдвойников, между которыми существует поток генов, что свидетельствует об эволюционном становлении видов.

12. Виды рода ЬШогта подрода ЫегПгета - группа видов, эволюционно самая молодая из 152 видов подсемейства ЫИопптае, что подтверждается нашими данными и хронограммами, построенными с использованием ископаемых находок (Яе1ё е1 а1., 2012).

БЛАГОДАРНОСТИ

В работе, на разных ее этапах, принимали участие студенты и аспиранты Санкт-Петербургского государственного университета, за что автор выражает им самую искреннюю благодарность: Юлии Грачевой (Петровой), Зинаиде Старуновой (Лоскутовой), Алексею Максимовичу, Антонине Чернецкой, Елене Ганже, Владиславу Грабовому, Ольге Котенко. Особую благодарность я хочу выразить Юлии Грачевой - вместе мы получали первые трудоемкие данные по молекулярно-генетической идентификации видов-двойников, а также заведующему кафедрой зоологии беспозвоночных СПбГУ, д.б.н. Андрею Грановичу, моему коллеге и соавтору, вместе с которым мы начинали работать с видами литторин, будучи еще студентами и продолжаем работать по настоящее время. Я искренне признательна моему первому научному руководителю Сергиевскому Сергею Олеговичу, благодаря которому я познакомилась с объектом исследований и, который открыл для меня мир их удивительного полиморфизма. Выражаю большую благодарность Дэвиду Риду (Dr. David Reid, Museum of Natural History, London, UK), Тьерри Беккелью (Prof. Thierry Backeljau, Royal Belgian Institute of Natural Sciences, Brussels, Belgium); шведским коллегам Шештин Йоханнессон (Prof. Kerstin Johannesson) и Марине Пановой (Dr. Marina Panova) (University of Gothenburg, Sweden) - за неизменный интерес к работе, плодотворное обсуждение результатов и всестороннюю помощь. Марине я особенно благодарна за методическую помощь при выполнении микросателлитного анализа в лаборатории на морской станции Tjarno (Sweden). Искреннюю благодарность за поддержку на всех этапах работы выражаю заведующему Отделом клеточных культур, д.б.н., профессору Пинаеву Георгию Петровичу, директору Института цитологии РАН, чл.-корр. РАН, профессору [Парфенову Владимиру

Николаевичу! и всем сотрудникам института.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Михайлова, Наталья Аркадьевна, Санкт-Петербург

1. Абрамсон Н.И. 2007. Филогеография: итоги, проблемы, перспективы. Вестник ВОГиС. Том 11. № 2. С. 307-331.

2. Алтухов Ю.П., Рычков Ю.Г. 1970. Популяционные системы и их структурные компоненты. Генетическая стабильность и изменчивость. Журн. общ. биологии. Т. 31. № 5. С. 507.

3. Банникова A.A. 2004. Молекулярные маркеры и современная филогенетика млекопитающих. Журнал Общей биологии. Т. 65. № 4. С. 278-305

4. Бергер В .Я., Богданов Д.В., Сергиевский С.О. 1995. Роль полиморфизма окраски раковины в температурных адаптациях брюхоногого моллюска Littorina saxatiüs (Olivi). Тр. Зоол. ин-та РАН 264: 46-60.

5. Богданов A.C. 2001. Хромосомная дифференциация популяций малой лесной мыши, Sylvaemus uralensis в восточной части ареала вида. Зоол. журн. Т. 80, № з. с. 331 342.

6. Боркин Л.Я., Литвинчук С.Н., Розанов Ю.М., Скоринов Д.В. 2004. О криптическом видообразовании (на примере амфибий). Зоол. журн. Т. 83. № 8. С. 936-960.

7. Галактионов К.В., Михайлова H.A. 1987. Популяции литорального моллюска Littorina saxatilis Olivi на северо-восточной границе ареала (о-ва Новая Земля и Вайгач). В кн.: Моллюски. Результаты и перспективы их исследований. Ленинград. С.436-437.

8. Галактионов К.В., Михайлова H.A. 1990. Распределение трематодной инвазии в популяциях литоральных моллюсков рода Littorina Онежского залива Белого моря. В кн.: Морфология и экология паразитов морских животных. Апатиты. С. 61-75.

9. Ю.Ганжа Е.В., Гранович А.И., Петрова Ю.А., Михайлова H.A. 2006. Анализ гистологических особенностей строения пениальных желез моллюсков рода Littorina Северной Атлантики. Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер.З. Вып.4. С. 40-46.

10. Герценштейн С., 1885 Материалы к фауне Мурманского берега и Белого моря. 1. Моллюски// Труды СПб. о-ва естествоиспыт. Т. 16. Вып.2. С. 635-814.

11. Голиков А.Н. 1987. Класс Gastropoda. Моллюски Белого моря. JL: Наука. С. 41-205.

12. Голиков А.Н., Кусакин О.Г. 1978. Раковинные брюхоногие моллюски литорали морей СССР. JL: Наука. 257 с.

13. Гохман В.Е. 2004. Хромосомы наездников семейства Braconidae (Hymenoptera). Тр. Русск. энтом. об-ва. Т. 75. Вып. 1. С. 96-101.

14. Гранович А.И., Михайлова H.A., Знаменская О., Петрова Ю.А. 2004. Видовой состав моллюсков рода Littorina (Gastropoda, Prosobranchia) Восточного Мурмана. Зоол. журн. Т.83, № 11. С. 1305-1317.

15. Гранович А. П., Сергиевский С.О. 1990. Оценка репродуктивной структуры популяций моллюска Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda: Prosobranchia) в Белом море. Зоологический журнал. Т. 69. С. 32-41.

16. Гранович А.И., Сергиевский С.О. 1995. Микрораспределение особей темно- и светлоокрашенных фенотипов в популяции Littorina saxatilis

17. Olivi) (Gastropoda: Prosobranchia). Популяционные исследования беломорских моллюсков. Тр. ЗИН РАН. С. 61-77.

18. Гранович А.И., Михайлова H.A., Сергиевский С.О. 1987. Возрастные особенности зараженности популяций литоральных моллюсков Littorinci obtusata и L.saxatilis партенитами трематод. Паразитология. Т.21. Вып.6. С.721-729.

19. Гундерина Л.И., Кикнадзе И.И., Голыгина В.В. 1999. Внутривидовая дифференциация цитогенетической структуры природных популяций Chironomus plumosas L. — центрального вида группы видов-двойников. Генетика. 35 (2): 93—202.

20. Гурьянова Е.Ф., Закс И.Г., Ушаков П.В. 1925. Сравнительный обзор литорали русских северных морей. Раб. Мурм. биол.ст. Т.1. С. 110-130.

21. Гурьянова Е.Ф., Ушаков П.В. 1929. Литораль Восточного Мурмана. Иссл. морей СССР. Т. 10. С.5-40.

22. Гуцевич A.B., Мончадский A.C., Штакельберг A.A. 1970. Фауна СССР. Насекомые двукрылые. Т. 3. Вып. 4. М.: Наука. 384 с.

23. Дерюгин K.M. 1915. Фауна Кольского залива и условия ее существования. Зап. Акад. Наук. T.XXXIV. 929с.

24. Захаров И.А. 2003. Генетика в XX веке. Очерки по истории генетики.

25. Изд-во «Наука», Москва. 77 с. 27.Зенкевич Л.А. 1951. Фауна и биологическая продуктивность моря. Изд.

26. Сов. наука. Т. 1, Т. 2. 506 с. 28.Кабанова В.М., Карташева H.H. 1972. Кариотипы кровососущих комаров рода Aedes (Diptera, Culicidae). Генетика. 8 (23): 47.

27. Кантор Ю.И., Сысоев А.В. 2006. Морские и солоноватоводные брюхоногие моллюски России и сопредельных стран: иллюстрированный каталог. — Товарищество научных изданий КМК: 371 е., 140 цв. табл.

28. Козминский Е.В. 2011. Изучение наследования продольных полос на раковине у моллюсков Littorina obtusata и Littorina saxatilis (Gastropoda, Prosobranchia). Генетика. Т. 47. № 8. С. 1112-1119

29. Козминский Е.В., Лезин П. 2007. Распределение пигментов в раковине брюхоногого моллюска Littorina obtusata (Linnaeus, 1758). Биология моря, Т. 33, № 4. с. 284-290

30. Козминский Е.В., Лезин П.А. Фокин М.В. 2010. Изучение наследования рисунка из белых пятен на раковине у Littorina obtusata (Gastropoda, Prosobranchia). Генетика. 46(12): 1652-1659.

31. Коробицина К.В., Якименко Л.В. 2004. Роль и место wagneri-подобных форм домовой мыши (Rodentia, Muridae) фауне России и сопредельных стран. Зоол. журн. Т. 83, вып. 9. С. 1018 1030.

32. Корочкин Л. И. 1977. Взаимодействие генов в развитии. М.: Наука, 280 с.

33. Кузнецов В.В. 1960. Белое море и биологические особенности его флоры и фауны. Изд. АН СССР. 322 с.

34. Лухтанов В.А. 2010. Правило Добжанского и видообразование путем усиления презиготической репродуктивной изоляции в зоне вторичного контакта популяций. Журнал общей биологии. 2010. Т. 71, № 5, с. 372385.

35. Лухтанов В.А., Шаповал Н.А. 2008. Выявление симпатрично обитающих видов-двойников бабочек из комплекса Agrodiaetus kendevani (Lepidoptera, Lycaenidae) с помощью популяционного анализа несцепленных генетических маркеров. ДАН. Т. 423, вып.З. С. 421-426.

36. Майр Э. 1968. Зоологический вид и эволюция. М.: Мир, 597 с.

37. Майр Э. 1974. Популяции, виды и эволюция. М.: Мир, 460 с.

38. Майр Э. 1971. Принципы зоологической систематики. М.: Мир, 454 с.

39. Матвеева Т.А. 1974. Экология и жизненные циклы массовых видов брюхоногих моллюсков Баренцева и Белого морей. Сезонные явления в жизни Белого и Баренцева морей. Исследования фауны морей. Т. 13(21). Л.: Наука. С. 65-190.

40. Мейер М.Н., Орлов В.Н., Схолль Е.Д. 1969. Использование данных кариологического, физиологического и цитофизиологического анализов для выделения нового вида у грызунов (Rodentia, Mammalia). Докл. АН СССР. Т. 188. № 6. С. 1411-1414.

41. Михайлова H.A., Гранович А.И., Сергиевский С.О. 1988. Влияние трематодной инвазии на микробиотопическое распределение моллюсков Littorina obtusata и L.saxatilis. Паразитология. T.22. Вып.5. С. 398-407.

42. Михайлова H.A., Грачева Ю.А., Гранович А.И. 2008. Анализ частоты межвидовых спариваний в копулирующих парах морских гастропод рода Littorina комплекса «saxatilis». Вестник СПбГУ. Сер. 3 (4). С. 5-9.

43. Михайлова H.A., Наумов А. Д. 1990. Структура раковины и полиморфизм окраски брюхоногого моллюска Littorina obtusata (Gastropoda: Prosobranchia). Зоол. журнал. Т.69. Вып.4. С. 131-134.

44. Наумов А.Д., Оленев A.B. 1981. Зоологические экскурсии на Белом море. Изд-во Ленингр. ун-та. 176 с.

45. Орлов В.Н., Козловский А.И., Наджафова P.C., Булатова Н.Ш. 1996. Хромосомные диагнозы и место генетических таксонов в эволюционной классификации лесных мышей подрода Sylvaemus Европы (Apodemus, Muridae, Rodentia). Зоол. журн. Т. 75, вып. 1. С. 88 102.

46. Панова М.В., Сергиевский С.О., Гранович А.И. 1999. Изменение формы раковины литоральных моллюсков Littorina saxatilis и L. obtusata при зараженности партенитами трематод. Паразитол. Т.33. № 1. С. 13-25.

47. Петрова Ю.А., А.И. Гранович, Н.А.Михайлова. 2004. Молекулярные маркеры для идентификации близких видов литторинид Баренцева моря.

48. В кн.: «Морская флора и фауна северных широт. Механизмы адаптации и регуляции роста организмов» Апатиты: Изд. КНЦ РАН. С. 149-156.

49. Сергиевский С.О., Гранович А.И. 1990. Мозаичность фенотипической структуры популяций беломорского моллюска Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda: Prosobranchia). Зоологический журнал. Т.69. Вып.9. С.5-16.

50. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Козминский Е.В. 1995. Полиморфизм окраски раковины Littorina saxatilis (Olivi): принципы классификации. Тр. ЗИН РАН. Т. 264. С. 3-18.

51. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 1984. Неравномерное распределение на литорали моллюсков Littorina obtusata и L.saxatilis (Gastropoda: Prosobranchia), зараженных партенитами трематод. Зоол. журнал. Т.63. Вып.6. С.929-931.

52. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 1986. Влияние трематодной инвазии на выживаемость моллюсков Littorina obtusata (L.) и L.saxatilis (Olivi) в условиях экстремально низкой солености среды. Паразитология. Т.20. Вып.З. С. 202-207.

53. Сергиевский С.О., Гранович А.И., Михайлова Н.А. 1991. Возрастная структура популяций брюхоногих моллюсков Littorina saxatilis и L. obtusata в Белом море. Труды ЗИН РАН СССР. 1991. Т. 233. С. 79-124.

54. Соколов В.Е., Баскевич М.И., Ковальская Ю.М. 1986. Изменчивость кариотипа степной мышовки, Sicista subtilis Pallas (1778) и обоснование видовой самостоятельности S. Severtzovi Ognev, 1935 (Rodentia, Zapodidae). Зоол. журн. Т. 65, вып. 2. С. 1684 1692.

55. Соколов В.Е., Ковальская Ю.М., Баскевич М.И. 1989. О видовой самостоятельности мышовки Штранда Sic is ta strandi (Rodentia, Dipodoidea). Зоол. журн. Т. 68, вып. 10. С. 95 106.

56. Соколова М.Н. 1963. Условия существования и биоценотические связи массовых видов беспозвоночных эпифауны литорали Кандалакшского залива. Тр. Кандалакшск. Гос. Запов. Т. IV, с. 69-113.

57. Стегний В.Н. 1980. Репродуктивные взаимоотношения малярийных комаров Anopheles комплекса maculipennis. Зоол. журн. 1980. Т. 59, вып. 10. С. 1469-1475.

58. Стегний В.Н. 1981. Генетические основы эволюции малярийных комаров. I. Хромосомные филогенетические связи. Зоол. журн. Т. 60, вып. 1. С. 69-77.

59. Стегний В.Н. 1993. Архитектоника генома, системные мутации и эволюция. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та. 111с.

60. Тимофеев-Ресовский Н. В., Воронцов Н. Н., Яблоков А. В. 1977. Краткий очерк теории эволюции. М.: Наука, 407 с.

61. Ященко В.В., Гранович А.И. 2002. Littorina fabalis (Turton, 1825): еще один вид литоральных гастропод Белого моря. Вестн. С.-Петерб. унив., Сер.З. Вып.4 (№ 27). С.34-45.

62. Atkinson W.D., Warwick Т. 1983. The role of selection in the colour polymorphism of Littorina rudis (Maton) and Littorina arcana Hannaford Ellis (Prosobranchia: Littorinindae). Biological Journal of the Linnean Society. 20: 137-151.

63. Avise J.C. 1994. Molecular markers, Natural History, and Evolution. Chapman and Hall, New York. 511 p.

64. Avise J.C. 1975. Systematic value of electrophoretic data. Syst. Zool. 23: 465-481.

65. Avise J.C. 1989. Gene trees and organismal histories: A phylogenetic approach to population biology. Evolution. 43:1192-1208.

66. Avise J.C. 2000. Phylogeography: the history and formation of species. Cambridge: Harvard University Press. 447 p.

67. Avise J.C., Arnold J., Ball R.M., Bermingham E., Lamb T. et al. 1987. Intraspecific phylogeography: The mitochondrial bridge between population genetics and systematics. Annu. Rev. Ecol. Syst. 18: 489-522.

68. Ayala F. J. 1975. Genetic differentiation during the speciation. Evol. Biol. Vol. 8. P. 79-113.

69. Backeljau Т., De Bruyn, L., De Wolf, H., Jordaens, K., Van Dongen, S., Verhagen, R and Winnepenninckx, B. 1995. Random Amplified polymorphic DNA (RAPD) and parsimony method. Cladistics. Vol. 11. P. 119-130.

70. Backeljau Т., Warmoes T. 1992. The phylogenetic relationships of ten Athlantic littorinids assessed by allozyme electrophoresis. Proceedings of the third International Symposium on Littorinid Biology, Malacological society of London.

71. Backeljau Т., De Wolf H., Dongen S.Van, Brito C. 1994. The phylogenetic relationships of Littorina striata as deduced from allozyme data. Cah. Biol, mar. 35: 239-240.

72. Bakker K. 1959. Feeding habits and zonation in some intertidal snails. Arch. Neerl. Zool. 13: 230-257.

73. Barbieri M, Bavestrello G, Sara M. 1995. Morphological and ecological differences in two electrophoretically detected species of Cliona (Porifera, Demospongiae). Biol J Linn Soc. 54: 193-200.

74. Bateman P.W. 1998. Mate preference for novel partners in the cricket Gryllus bimaculatus. Ecol Entom. 23: 473-475.

75. Bavestrello G., M. Sara. 1992. Morphological and genetic differences in ecologically distinct populations of Petrosia (Porifera, Demospongiae). Biol. J. Linn. Soc. 47: 49-60.

76. Bickford D., Lohman D.J., Sodhi N.S., Ng P.K., Meier R., Winker K., Ingram K.K., Das I. 2006. Cryptic species as a window on diversity and conservation. Trends Ecol Evol. 22: 149-155.

77. Birstein V.Ja., Mikhailova N.A. 1990. On the karyology of trematodes of the genus Microphallus and their trematode gastropod hosts, Littorina saxatilis. I. Chromosome analysis of three Microphallus species. Genetica. 80: 159-165

78. Birstein V.Ja., Mikhailova N.A. 1990. On the karyology of trematodes of the genus Microphallus and their trematode gastropod hosts, Littorina saxatilis. II. Karyological study of Littorina saxatilis (Gastropoda:Prosobranchia). Genetica. 80: 167-170

79. Blakeslee A.M.H., Byers J.E., Lesser M.P. 2008. Solving cryptogenic histories using host and parasite molecular genetics: the resolution of Littorina littorea's North American origin. Mol Ecol 17: 3684-3696.

80. Boulding E.G., Van Alstyne K.L. 1993. Mechanisms of differential survival and growth of two species of Littorina on wave-exposed and on protected shores. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 169: 139-166

81. Bowditch B. M„ Albright D. G., Williams J. G. K„ Braun M. J. 1993. The use of RAPD markers in comparative genome studies. Meth. Enzymol. Vol. 224. P. 294-309.

82. Bowen D.Q., Phillips P.M., McCabe A.M., Knutz P.C., Sykes G.A. 2002. New data for the Last Glacial Maximum in Great Britain and Ireland. Quat. Sci. Rev. 21: 89-101.

83. Boyes J.W., Wilkes A. 1972. Chromosomes of Tabanidae (Diptera). Can. J. Genet. Cytol. 14: 95.

84. Brockhouse C.L., Vajime C.G., Marin R., Tanguay R.M. 1993. Molecular identification of onchocerciasis vector sibling species in black flies (Diptera: Simuliidae). Biochem. Biophys. Res. Commun. 194: 628-634.

85. Bruford M.W., Wayne R.K. 1993. Microsatellites and their application to population genetics studies. Curr. Opin. Genet. Devel. Vol. 3. P. 939-943.

86. Butlin R.K. 2010. Population genomics and speciation. Genetica. 138: 409418.

87. Butlin R.K., Galindo J., Grahame J.W. 2008. Sympatric, parapatric or allopatric: the most important way to classify speciation? Phil Trans R Soc B 363: 2997-3007.

88. Campo D., Molares J., Garcia L., Fernandez-Rueda P., Garcia-Gonzalez C., et al. 2010. Phylogeography of the European stalked barnacle (Pollicipes pollicipes): identification of glacial refugia. Mar. Biol. 157: 147-156.

89. Carlton J. 1992. Introduced marine and estuarine mollusks of North America: an end-of-the- 20th-century perspective. J. Shellfish Research. 11: 489-505.

90. Carlton J.T., Cohen A.N. 1998. Periwinkle's progress: the Atlantic snail Littorina saxatilis (Mollusca: Gastropoda) establishes a colony on Pacific shores. Veliger. 41: 333-338.

91. Caugant D., Bergerard J. 1980.The sexual cycle and reproductive modality in Littorina saxatilis Olivi (Mollusca: Gastropoda). Veliger. 23: 107-111.

92. Clauton P.E., Carson H.L., Sato J.E. 1972. Polytene chromosome relationships in Hawaiian species of Drosophila. VI. Supplementary data on methaphases and gene sequences. Univ. Texas Publ. 7213: 163.

93. Cohen S., Faugeron S., Martinez E.A. et al. 2004. Molecular identification of two sibling species under the name Gracilaria chilensis (Rhodophyta, Gracilariales). Journal of Phycology. 40: 742-747.

94. Colluzzi M. 1970. Sibling species in Anopheles and their importance in malariology. Miscellaneous Publ. Entomol. Soc. Amer. 7 (1): 62.

95. Coluzzi M., Sabatini A., Petrarca V., Di Deco M.A. 1979. Cromosomal differentiation and adaptation to human environments in the Anopheles ganibiae complex. Royal Soc. Tropical Med. Hygiene. 73 (5): 483.

96. Coyne, J. A., Kreitman, M. 1986. Evolutionary genetics of two sibling species, Drosophila simulans and D. secheliia. Evolution. Vol. 40. P. 673691.

97. Coyne, J.A., OrrH.A. 2004. Speciation. Sinauer Associates, Sunderland, MA.

98. Coyne J.A. Elwyn S., KJM S.Y., Llopart A. 2004. Genetic studies of two sister species in the Drosophila melanogaster subgroup, D. yakuba and D. santomea. Genet. Res., Camb. (2004), 84, pp. 11-26.

99. Cranford P.J. 1988. Behaviour and ecological importance of a mud snail (Ilyanassa obsoleta) population in a temperate macrotidal estuary. Can. J. Zool. 66: 459-466.

100. Crossland S., Coates D., Grahame J., Mill P.J. 1993. Use of random amplified polymorphic DNAs (RAPDs) in separating two sibling species of Littorina. Mar. Ecol. Prog. Ser. Vol. 96. P. 301-305.

101. Crossland S., Coates D., Grahame. J. et al. 1996. The Littorina saxatilis species complex interpretation using random amplified polymorphic DNAs. Origin and Evolutionary radiation of the Mollusca. P. 205-209.

102. Degnan S.M. 1993. The perils of single gene trees-mitochondrial versus single-copy nuclear DNA variation in white-eyes (Aves: Zosteropidae). Mol. Ecol. Vol. 2. P. 219-225.

103. Dobzhansky Th. 1937. Genetics and the Origin of Species. Columbia University Press, New York.

104. Dobzhansky Th. 1971. Genetics of evolutionary process. New-York; Lond.: Columbia Univ. Press, 520 p.

105. Doellman M.M., Trussell G.C., Grahame J.W, Vollmer S.V. 2011. Phylogeographic analysis reveals a deep lineage split within North Atlantic Littorina saxatilis. Proc. R. Soc. B. 278: 3175-3183.

106. Dytham C., Grahame J., P.J. Mill. 1996. Synchronous penis shedding in the rough periwinkle, Littorina arcana. Journal of the Marine Biological Association of the United Kingdom. Vol. 76. P. 539-542.

107. Dytham, C., Grahame J., Mill P.J. 1992. Esterase variation in Littorina arcana and L. saxatilis at Robin Hood's Bay, Yorkshire. Proceedings of the Third Int. Symposium on Littorinid Biology. 1992. P. 39-44.

108. Dytham C., Mill P.J., Grahame J. 1990. Distribution, abundance and shell morphology of Littorina saxatilis (Olivi) and Littorina arcana Hannaford Ellis at Robin Hood's Bay, North Yorkshire. Hydrobiologia. 193: 233-240.

109. Edwards M., Davies M.S. 2002. Functional and ecological aspects of the mucus trails of the intertidal prosobranch gastropod Littorina littorea. Mar. Ecol. Prog. Ser. Vol. 239. P. 129-137.

110. Erlandsson, J., Kostylev, V. 1995. Trail following, speed and fractal dimension of movement in a marine prosobranch, Littorina littorea, during a mating and nonmating season. Marine Biology. Vol.122. P. 87-94.

111. Felsenstein J. 1997. An alternating least squares approach to inferring phylogenies from pairwise distances. Syst. Biol. Vol. 46. P. 101-111.

112. Feng A., Gerhardt H.C., Capranica R.R. 1976. Sound localization behaviour of the green treefrog (Hyla cinerea) and the barking treefrog (H. gratiosa). J. Comp. Physiol. Rev. 107: 241-252.

113. Flavell R.B. 1982. Chromosomal DNA sequences and their organization, in Nucleic acids and proteins in plants, eds. Parthier B., Boulter D., Springer, Berlin, Germany. P. 46-74.

114. Fokin M.V., Mikhailova N.A. 2004. Characterization of three microsatellite loci in the White Sea periwinkles Littorina obtusata (L.) and L. fabalis Turton. Proc.Zool.Inst.Russ.Acad.Sci. 300: 63-68.

115. Fokin S.I., Przybo E., Chivilev M. 2001. Nuclear reorganization variety in Paramecium (Ciliophora: Peniculida) and its possible evolution. Acta Protozool. 40: 249-261.

116. Foley D.H., J.H. Bryan, R.C. Wilkerson. 2007. Species-richness of the Anopheles annulipes complex (Diptera: Culicidae) revealed by tree and model-based allozyme clustering analyses. Biol. J Linneaen Soc. 91:523-239.

117. Freeman T.H., MacKay M.R., Campbell l.M. et al. 1967. On coniferophagous species of Choristoneura (Lepidoptera, Tortricidae) in north America. Can. Enthomol. 99: 449-506.

118. Fretter V., Graham A. 1980. The prosobranch mollusks of Britain and Denmark. Part V Marine Littorinacea. J. moll. Stud. Suppl. 7: 1-44.

119. Fretter V., Graham A. 1994. British Prosobranch Molluscs. L.: The Ray Society. 820 p.

120. Fretter V., Graham A. 1994. British prosobranch molluscs: their functional anatomy and ecology, revised and updated edition. Ray Society Monographs. 755 pp.

121. Frizzi G. 1947. Salivary gland chromosomes of Anopheles. Nature. 160: 226.

122. Frizzi G., Bianchi V., Mameli M. 1969. Cylogenetics, biochemistry and cytochemistry as applied to microtaxonomy of Anopheles. R. C. Semin. Sei. Cagliari, Suppl. Vol. 38. P. 115.

123. Frizzi G., De Carii L. 1954. Studio preliminare comparative genetics e citogenetico fra aluune specio nordamericane di Anopheles maculipennis e lAnopiieles maculipennis atroparvus Italiano. Symp. genet. 2: 184.

124. Funk D.J., Omland K.E. 2003. Species-level paraphyly and polyphyly: frequency, causes, and consequences, with insights from animal mitochondrial DNA. Annu. Rev. Ecol. Syst. Vol. 34. P. 397^123.

125. Gabelli, F.M., G.J. Fernandez, V. Ferretti, G. Posse, E. Coconier et al. 2004. Range contraction in the pampas meadowlark Stnrnella defilippii in the southern pampas grasslands of Argentina. Oryx. 38: 164-170.

126. Galindo J., Butlin R.K. 2008. Transcriptome sequencing of Littorina saxatilis using 454 Life Sciences technology: Welcome to the "wild genomics". In: 9 Int.Symp. on Littorinid Biol. 2-7 Sept. Oia, Spain. 2008. P.29.

127. Galindo J., Grahame, J.W., Butlin, R.K. 2010. An EST-based genome scan using 454 sequencing in the marine snail Littorina saxatilis. Journal of Evolutionary Biology, 23:2004-2016

128. Gokhman V.E. 2002. Chromosomes of Chrysidoidea (Hymenoptera). Melika G., Thuroczy C. (Eds). Parasitic wasps: evolution, systematics, biodiversity and biological control. Budapest: Agroinform. P. 249-252.

129. Golikov A.N., Dolgolenko M.A., Maximovich N.V., Scarlato O.A., 1990. Theoretical approaches to marine biogeography. Mar. Ecol. Prog. Ser. 63: 289-301.

130. Golikov A.N., Tzvetkova N.L. 1972. The ecological principle of evolutionary reconstruction as illustrated by marine animals. Marine biology. 14: 1-9.

131. Grahame J. 1969. Shedding of the penis in Littorina littorea. Nature. London, 22l.P. 976.

132. Grahame J., Mill P.J. 1986. Relative size of the foot of two species of Littorina on a rocky shore in Wales. Journal of Zoology. 208: 229-236.

133. Grahame J., Mill P.J. 1989. Shell shape variation in Littorina saxatilis and L. arcana: a case of character displacement. J. Mar. Biol. Ass. U. K. 69: 837855.

134. Grahame J., Mill P.J, Brown, A.C. 1990. Adaptive and non-adaptive variation in two species of rough periwinkle (Littorina) on British shores. Hydrobiologia. 193:223-231.

135. Granovitch A.L, Sokolova l.M. 2001. Littorina arcana Hannaford Ellis, 1978 a new record from the eastern Barents Sea. Sarsia. 86: 241-243.

136. Hadrys H. Balick, M., Schierwater B. 1992. Applications of random amplified polymorphic DNA (RAPD) in molecular ecology. Molecular Ecology. Vol. 1. P. 55-63.

137. Hannaford Ellis C.J. 1978. Littorina arcana sp. nov.: a new species of winkle (Gastropoda. Prosobranchla: Littorinidae). J. Conchol. 29: 304.

138. Hannaford Ellis C. 1979. Morphology of the oviparous rough winkle, Littorina arcana Hannaford Ellis, 1978, with notes on the taxonomy of the L. saxatilis species-complex (Prosobranchia: Littorinidae). J. Conch. 30: 43-56.

139. Hannaford Ellis C. 1985. The breeding migration of Littorina arcana Hanaford Ellis, 1978 (Prosobranchia: Littorinidae). Zool. J. Linn. Soc. 84: 9196.

140. Heller J. 1975. The taxonomy of some British Littorina species, with notes on their reproduction (Mollusca: Prosobranchia). Zool J Linn Soc. 56: 131— 151.

141. Hendrixson B.E., Bond J.E. 2005. Testing species boundaries in the Antrodiaetus unicolor species complex (Araneae: Mygalomorphae: Antrodiaetidae): "Paraphyly and cryptic diversity. Molecular Phylogenetics and Evolution. Vol. 36. P. 405-416.

142. Hewitt G.M. 2004. Genetic consequences of climatic oscillations in the Quaternary. Phil. Trans. R. Soc. B. 359: 183-195.

143. Hey J. 2001. Genes, Categories and Species, The Evolutionary and Cognitive Causes of the Species Problem. Oxford University Press. 217 p.

144. Hoarau G., Coyer J.A., Veldsink H., Stam W.T., Olsen J.L. 2007. Glacial refugia and recolonization pathways in the brown seaweed Fuciis serratus. Mol. Ecol. 16: 3606-3616.

145. Hoekstra, H.E., Coyne, J.A. 2007. The locus of evolution: evo devo and the genetics of adaptation. Evolution. 65: 995-1016.

146. Hohenlone P.A., Boulding E.G. 2001. A molecular assay identifies morphological characters useful for distinguishing the sibling species Littorina scutulata and L. plena. J. Shellfish Res. 20 (1): 453-457.

147. Hubby J., Throckmorton L. 1968. Protein difference in Drosophila. IV. A study of sibling species. Amer. Nat. 102: 193-205.

148. Hudson R.R., Coyne J. 2002. Mathematical consequences of the genealogical species concept. Evolution 56: 1557-1565.

149. Hudson R.R., Turelli M. 2003. Stochasticity overrules the «three-times rule»: genetic drift, genetic draft, and coalescence times for nuclear loci versus mitochondrial DNA. Evolution. Vol. 57. P. 182-190.

150. Hughes C., Queller D. 1993. Detection of highly polymorphic microsatellite loci in a species with little allozyme polymorphism. Mol. Ecol. Vol. 2. P. 131138.

151. Hughes R.N., Roberts D.J. 1981. Comparative demography of Littorina rudis, L. nigrolineata and L. neritoides on three contrasted shores in North Wales. J. Anim. Ecol. 50: 251-268.

152. Hyman L.H. 1967. The Invertebrates. Vol. IV. Mollusca I. Mebraw-Hill.

153. Ingolfsson A. 2009. A marine refugium on Iceland during the last glacial maximum: fact or fiction? Zool. Scripta. 38: 663-665.

154. Ito A., Wada S. 2006. Intrasexual copulation and mate discrimination in a population of Nodilittorina radiate (Gastropoda: Littorinidae). J. Ethol. Vol.24. P. 45-49.

155. James B.L. 1968. The characters and distribution of the subspecies and varieties of Littorina saxatilis (Olivi, 1872) in Britain. Cah. Biol. Mar. 9: 143165.

156. Janson K. 1982. Phenotypic differentiation in Littorina saxatilis Olivi (Mollusca, Prosobranchia) in a small area on the Swedish west coast. J. Moll. Stud. 48: 167-173.

157. Janson K. 1983. Chromosome number in two phenotypically distinct populations of Littorina saxatilis olivi, and in specimens of the Littorina obtusata (L.) species-complex J. Mollus. Stud. 49(3): 224-227.

158. Janson K. 1983. Selection and migration in two distinct phenotypes of Littorina saxatilis in Sweden. Oecologia. 59: 58-61.

159. Janson K. 1985. A morphologic and genetic analysis of Littorina saxatilis (Prosobranchia) from Venice, and on the problem of saxatilis-radis nomenclature. Biol. J. Linn. Soc. 24: 51-59.

160. Janson K., Ward R.D. 1984. Microgeographic variation in allozyme and shell characters in L. saxatilis Olivi (Prosobranchia: Littorinidae). Biological Journal of the Linnean Society. 22: 289-307.

161. Janson K., Ward R.D. 1985. The taxonomic status of Littorina tenebrosa Montagu as assessed by morphological and genetic analysis. J. Conch. 32: 915.

162. Jaslow A.P.,Vogt R.C. 1977. Identification and distribution of Hyla versicolor and Hyla chrysoscelis in Wisconsin. Herpetologica. 33: 201-205.

163. Jesus F.F., Wilkins J.F., Solferini V.N., Wakeley J. 2006. Expected coalescence times and segregating sites in a model of glacial cycles. Genet. Mol. Res. 5: 466^474.

164. Johannesson K. 1988. The paradox of Rockall: why is a brooding gastropod (.Littorina saxatilis) more widespread than one having a planktonic larval dispersal stage (L. littorea)? Mar. Biol. 99: 507-513.

165. Johannesson K. 2003. Evolution in Littorina: ecology matters. J. Sea Res. 49: 107-117.

166. Johannesson K. Ekendahl A. 2002. Selective predation favouring cryptic individuals of marine snails {Littorina). Biological Journal of the Linnean Society. 76 (1): 137-144.

167. Johannesson B., Johannesson K. 1990a. Littorina neglecta Bean, a morphological form within the variable species Littorina saxatilis (Olivi)? Hydrobiologia. 193: 89-87.

168. Johannes son, K., Johannesson, B. 1990b. Genetic variation within Littorina saxatilis (Olivi) and Littorina neglecta Bean: is L. neglecta a good species? Hydrobiologia. 193: 89-97.

169. Johannesson, K., Johannesson, B. 1989. Differences in allele frequencies of Aat between high- and mid- rocky shore populations of Littorina saxatilis (Olivi) suggest selection in this enzyme locus. Genetical Research Cambridge. 54: 7-11.

170. Johannesson K., Johannesson B. 1993. The taxonomic status of Littorina neglecta a comment to Grahame, Mill, Double and Hull. J. Mar. Biol. Ass. U.K. 73: 249.

171. Johanesson K., Johanesson B., Rolan-Alvarez E. 1993. Morphological differentiation and genetic cohesiveness over a microenvironmental gradient in the marine snail Littorina saxatilis. Evolution. 47: 1770-1787.

172. Johannesson K., Mikhailova N. 2004. Habitat-related genetic substructuring in a marine snail {Littorina fabalis) involving a tight link between an allozyme and a DNA locus. Biological Journal of the Linnean Society. 81: 301-306.

173. Johanesson K., Rafaelli D. G., Hannaford Ellis C. J. (eds) 1990. Progress in littorinid and muricid biology. Proceedings of the second European meeting on littorinid biology, Tjarno Marine Biological Laboratory, Sweden. Hydrobiologia. 193: 1-285.

174. Johanesson K., Rolan-Alvarez E., Ekendahl A. 1995. Incipient reproductive isolation between two sympatric morphs of the intertidal snail Littorina saxatilis. Evolution. 49: 1180-1190.

175. Jolly M.T., Jollivet D., Gentil F., Thiebaut E., Viard F. 2005. Sharp genetic break between Atlantic and English Channel populations of the polychaete Pectinaria koreni, along the north coast of France. Heredity. 94: 23-32.

176. Keyl H.G. 1962. Chromosomen evolution bei Chironomus. II. Chromosomenumbauter und phylogenetische Beziehungen der Arten. Chromosoma (Beri.). 13: 464.

177. Keyl H.G., Keyl J. 1959. Die cytologische Diagnostik der Chironomiden. Arch. Hydrobiol. 56: 43.

178. Kitzmiller J.B. 1976. Genetics, cytogenetics and evolution of mosquitoes. Adv. Genetics. 18: 315.

179. Knight A.J., Ward, R.D. 1991. The genetic relationships of three taxa in the Littorina saxatilis species complex (Prosobranchia: Littorinidae). J. Moll. Stud. Vol. 57. P. 81-91.

180. Knight A.J., Hughes, R. N. Ward, R. D. 1987. A striking example of the founder effect in the mollusc Littorina saxatilis. Biol J Linn. Soc. Vol. 32. P. 417-426.

181. Knowlton N. 1992. Thresholds and Multiple Stable States in Coral Reef Community Dynamics. American Zoology. 32: 674-682.

182. Knowlton N. 1993. Sibling species in the sea. Annu. Rev. Ecol. Syst. 24: 189216.

183. Knowlton N. 2000. Molecular genetic analyses of species boundaries in the sea. Hydrobiologia. 420(1): 73-90.

184. Kocher T.D., Thomas W.K., Meyer A., Edwards S.V., Paabo S., Villablanca F.X., Wilson A.C. 1989. Dynamics of mitochondrial DNA evolution in animals: amplification and sequencing with conserved primers. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 6196-6200.

185. Koreth J., Jhon L., James M. 1996. Microsatellites and PCR genomic analysis. Journal of Pathology. Vol. 178. P. 239-248.

186. Kroodsma D.E. 1984. Songs of the Alder flycatcher {Empidonax alnorum) and Willow Flycatcher (Empidonax traillii) are innate. Auk. 101: 13-24.

187. Krug, P. J. 2011. Patterns of speciation in marine gastropods: A review of the phylogenetic evidence for localized radiations in the sea. American Malacological Bulletin. 29: 169-186.

188. Losse G., Greven H. 1993. Structure, composition and permeability of the egg covering in the viviparous prosobranch gastropod Littorina saxatilis. Invertebr. Reprod. Dev. 24:225-236.

189. Lukhtanov V.A., Kandul N.P., Plotkin J.B., Dantchenko A.V., Haig D., Pierce N.E. 2005. Reinforcement of pre-zygotic isolation and karyotype evolution in Agrodiaetus butterflies. Nature. 436, Issue 7049. P. 385-389.

190. Luttikhuizen P.C., Drent J., Baker A.J. 2003. Disjunct distribution of highly diverged mitochondrial lineage clade and population subdivision in a marine bivalve with pelagic larval dispersal. Mol. Ecol. 12: 2215-2229.

191. Maciejewska A. 2006. Sibling species within Paramecium jenningsi revealed by PCR-RFLP. Acta Protozool. 45: 387-393.

192. Maggs C.A., Castilho R., Foltz D., Henzler C., Jolly M.T. et al. 2008. Evaluating signatures of glacial refugia for North Atlantic benthic marine taxa. Ecology. 89: S108-S122.

193. Mallet J. 2006. What does Drosophila genetics tell us about speciation? Trends in Ecology Evolution. Vol. 21. № 7. P. 386-393 .

194. Mallet J. 2008. Hybridization, ecological races, and the nature of species: empirical evidence for the ease of speciation. Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. Vol. 363. P. 2971-2986.

195. Marinucci M., Romi R., Mancini P., Di Luca M., Severini C. 1999. Phylogenetic relationships of seven Palearctic members of the An. maculipennis complex inferred from ITS2 sequence analysis. Insect Mol. Biol. 8 (4): 469-480

196. Márquez R., Moreira C., do Amaral J.P.S., Pargana J.M., Crespo E.G. 2005. Sound pressure level of advertisement calls of Hyla meridionalis and Hyla arbórea. Amphibia-Reptilia. 26: 391-395.

197. Mathews L.M., Schubart C.D., Neigel J.E. et al. 2002. Genetic, ecological and behavioural divergence between two sibling snapping shrimp species (Crustacea: Decapoda: Alpheus). Mol. Ecol. 11: 1427-1437.

198. McKaye K.R., J.A. Howard, J.R. Stauffer, Jr., R.P. Morgan, F. Shonhiwa. 1993. Sexual selection and genetic relationships of a sibling species complex of bower building cichlids in Lake Malawi, Africa. Japan J. Ichthyology. 40: 15-21.

199. McMahon R.F., Russell-Hunter W. D., Aldridge D.W. 1995. Lack of metabolic temperature compensation in the intertidal gastropods, Littorina saxatilis (Olivi) andL. obtusata (L.). Hydrobiologia. V. 309. № 1-36: 89-100.

200. McQuaid C.D. 1996. Biology of the gastropod family Littorinidae. I. Evolutionary aspects. Oceanogr Mar BiolAnnu Rev. 34:233-262

201. Medeiros R., Serpa L., Brito C., De Wolf H., Jordaens K., Winnepenninckx В., Backeljau T. 1998. Radular myoglobin and protein variation within and among some littorinid species (Mollusca: Gastropoda). Hydrobiologia. Vol. 378. P. 43-51.

202. Mikhailova N., Johanesson K. 1998. A comparison of different protocols for RAPD analysis of Littorina. Hydrobiologia. 378: 33-42.

203. Mikhailova N.A., Petrova Y.A. 2004. Molecular markers for identification of the sibling species of marine gastropods of the genus Littorina. Цитология. Т.46. №9. С. 823-824

204. Mill P.J., Grahame J. 1988. Esterase variability in the gastropods Littorina saxatilis (Olivi) and L arcana Ellis. Journal of Molluscan Studies. 54: 347353.

205. Mill P.J., Grahame J. 1992. Clinal changes in esterase variability in Littorina saxatilis (Olivi) and L. arcana Hannaford Ellis in southern Britain. Proceedings of the 3rd International Symposium on Littorinid Biology. , P.J.

206. Mill and D. Reid, Editors. The Malacological Society of London: London . P. 31-37.

207. Mill P.J., Grahame J. 1990. Distribution of the rough periwinkle (Littorina) in Great Britain. Hydrobiologia. Vol. 193. P. 21-27.

208. Morse, G. E., B. D. Farrell. Interspecific phylogeography of the Stator limbatus species complex: The geographic context of speciation and specialization. Molecular Phylogenetics and Evolution. 2005. Vol. 36. P. 201213.

209. Moyse J., Nelson-Smith A. 1963. Zonation of animals and plants on rocky shores around Dale, Pembrokeshire. Field Studies. 1 (5): 1-31.

210. Nagl S., Tichy H, Mayer W.E., Takahata N., Klein J. 1998. Persistence of neutral polymorphisms in Lake Victoria cichlid fish. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 95: 14238-14243.

211. Nei M. 1978. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals. Genetics. Vol. 89. P. 583-590.

212. Paetkau, D., W. Calvert, I. Stirling, C. Strobek. 1995. Variation in genetic diversity across the range of North American brown bears. Conserv. Biol. Vol. 12. P. 418-429.

213. Panova M., A.M.H. Blakeslee, A.W. Miller, T. Makinen, G.M. Ruiz, K. Johannesson, C. Andre. 2011. Survival of a North Atlantic marine snail in multiple glacial refugia—implications for phylogeographic patterns. PLOS One. 6(3): el7511.

214. Panova M. Makinen T. Fokin M. Andre C. Johannesson K. 2008. Microsatellite cross-species amplification in the genus Littorina and detection of null alleles in Littorina saxatilis. J. Moll. Studies. 74: 111-118.

215. Paterson I. G., Partridge V., Buckland-Nicks J. 2001. Multiple Paternity in Littorina obtusata (Gastropoda, Littorinidae) revealed by microsatellite analyses. Biol. Bull. Vol. 200. P. 261-267.

216. Pérez-Losada M., Nolte M.J., Crandall K.A., Shaw P.W. 2007. Testing hypotheses of population structuring in the Northeast Atlantic Ocean and Mediterranean Sea using the common cuttlefish Sepia officinalis. Mol. Ecol. 16: 2667-2679.

217. Petit R.J., Aguinagalde I., de Beaulieu J.L., Bittkau C., Brewer S. et al. 2003. Glacial refugia: hotspots but not melting pots of genetic diversity. Science. 300:1563-1565.

218. Petit R.J., Csaiklb U.M., Bordács S., Burg K., Coart E. et al. 2002. Chloroplast DNA variation in European white oaks. Phylogeography and patterns of diversity based on data from over 2600 populations. Forest. Ecol. Manag. 156: 5-26.

219. Pfenninger M., Schwenk K. 2007. Cryptic animal species are homogeneously distributed among taxa and biogeographical regions. Evolutionary Biology. 7:121

220. Poinar G.O.Jr., E. M. Kozodoi. 1988. Neoaplectana glaseri and N. anomali: sibling species or parallelism? Revue de Nematologie. 11: 13-19.

221. Provan J., Bennett K.D. 2008. Phylogeographic insights into cryptic glacial refugia. Trends Ecol. Evol. 23: 564-571.

222. Provan J., Wattier R.A., Maggs C.A. 2005. Phylogeographic analysis of the red seaweed Palmaria palmata reveals a Pleistocene marine glacial refugium in the English Channel. Mol. Ecol. 14: 793-803.

223. Queller D., Strassmann J., Hudges C. 1993. Microsatellites and kinship. Trends Ecol. Evol. Vol. 8. P. 285-288.

224. Raffaelli D.G. 1976. The determinants of zonation of Littorina neritoides and the Littorina saxatilis species-complex. Ph.D. Thesis. University of Wales.

225. Raffaelli D.G. 1977. Observations on the copulatory behavior of Littorina rudis (Maton) and Littorina nigrolineata Gray.Veliger. 20: 75-77.

226. Rafaelli D.G. 1979. The taxonomy of the Littorina saxatilis species complex, with particular reference to the systematic status of Littorina patu/a Jeffreys. Zoological Journal of the Linnean Society. 65: 219-232.

227. Ramschaw J. A. M., J. A. Coyne, R. C. Lewontin. 1979. The sensitivity of gel electrophoresis as a detector of genetic variation. Genetics. Vol. 93. P. 1019 -1037.

228. Rasmussen E. 1973. Systematics and ecology of the Iseijord marine fauna (Denmark) with a Survey of the Eelgrass (Zostera) vegetation and its communities. Ophelia. 11: 1-495.

229. Rau P. The nests and the adults of colonies of Polistes wasps. Ann. Enthomol. Soc. Amer. 1946. Vol. 39. P. 11-27.

230. Reid, D.G. 1986a. The Littorinid Molluscs of Mangrove Forests in the Indo-Pacific Region: The Genus Littoraria. London: British Museum (Natural History).

231. Reid, D.G. 1986b. Mainwaringia Nevill, 1885, a littorinid genus from Asiatic mangrove forests, and a case of protandrous hermaphroditism. Journal of Molluscan Studies. 52: 225-242.

232. Reid D.G. 1989.The comparative morphology, phylogeny and evolution of the gastropod family Littorinidae. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 324: 1-110.

233. Reid D.G. 1990a. A cladistic phylogeny of the genus Littorina (Gastropoda): implications for evolution of reproductive strategies and for classification. Hydrobiologia. 193: 1-119.

234. Reid D.G. 1990b. Trans-Arctic migration and speciation induced by climatic change: the biogeography of Littorina (Mollusca: Gastropoda). Bull. Mar. Sci. 47: 35-39.

235. Reid D.G. 1996. Systematics and evolution of Littorina. London: London Ray Society.

236. Reid, D.G. 2001. New data on the taxonomy and distribution of the genus Littoraria Griffith and Pidgeon, 1834 (Gastropoda: Littorinidae) in Indo-West Pacific mangrove forests. Nautilus. 115: 115-139.

237. Reid, D.G., Dyal, P., Williams, S.T. 2010. Global diversification of mangrove fauna: a molecular phylogeny of Littoraria (Gastropoda: Littorinidae). Molecular Phylogenetics and Evolution. 55: 185-201.

238. Reid, D.G., Dyal, P., Williams, S.T. 2012. A global molecular phylogeny of 147 periwinkle species (Gastropoda, Littorininae). Zoologica Scripta. 41: 125-136.

239. Reid D.G., Rumbak E., Thomas, R.H. 1996. DNA, morphology and fossils: phylogeny and evolutionary rates of the gastropod genus Littorina. Phil. Trans. Soc. Lond. B. 351: 877-895.

240. Remerie T., Vierstraete A., Weekers P.H.H., Vanfleteren J.R., Vanreusel A. 2009. Phylogeography of an estuarine mysid, Neomysis integer (Crustacea, Mysida), along the north-east Atlantic coasts. J. Biogeogr. 36: 39-54.

241. Roberts D.J., Hughes R.N. 1980. Growth and reproductive rates of Littorina rudis from three contrasted shores in North Wales, UK. Marine Biology. 58: 47-54.

242. Rolan-Alvarez, E., Buno, I. and Gosalvez, J. 1996. Sex is determined by sex chromosomes in Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda, Prosobranchia). Hereditas. 124: 261-268.

243. Rolan-Alvarez E., Erlandsson J., Johannesson K., Cruz R. 1999. Mechanisms of incomplete prezygotic reproductive isolation in an intertidal snail: testing behavioural models in wild population. J. Evol. Biol. Vol.12. P. 879-890.

244. Rolan-Alvarez E. 1993. Genetic Structure and Sexual Selection in Natural Populations of Two Sibling Species of the Genus Littorina. Ph.D. Thesis, University of Santiago de Compostela, Spain.

245. Rolân-Alvarez, E. Sympatric speciation as a by-product of ecological adaptation in the Galicia Littorina saxatilis hybrid zone // Journal of Molluscan Studies. 2007. Vol. 73. P. 1-10.

246. Roman J., Palumbi S.R. 2004. A global invader at home: population structure of the green crab, Carcinus maenas, in Europe. Mol. Ecol. 13: 2891-2898.

247. Roy M., Geffen E., Smith D. et al. 1994. Patterns of differentiation and hybridization in North American wolf-like canids revealed by analysis of microsatellite loci. Mol. Biol. Evol. Vol. 11. P. 553-570.

248. Rumbak E., Reid D.G., Thomas R.H. 1994. Reconstruction of phylogeny of 11 species of Littorina (Gastropoda: Littorinidae) using mitochondrial DNA sequence data. Nautilus. 2: 91-97.

249. Sacchi C.F. 1969. Recherches sur l'ecologie comparée de Littorina obtusata et de L.mariae en Galice et en Bretagne. Invest. Pesq. 33: 381 414.

250. Sacchi C. F., Rastelli M. 1966. Littorina mariae nov. sp.: les differences et écologiques entre "nains" et "normaux" ches l'"espece" L.obtusata (L.) et leur signification adaptive et evolutive. Atti.Soc. Ital. Sci. Nat. 105: 351-369.

251. Sacchi, C.F., Testard, P., Voltolina, D. 1977. Recherches sur le spectre trophique comparé de Littorina saxatilis (Olivi) et de L.nigrolineata (Gray) (Gastropoda, Prosobranchia) sur la grève de Roscoff II Cah. Biol. Mar. Vol. 28. P. 99-505.

252. Saez A.G., E. Lozano. 2005. Cryptic species: as we discover more examples of species that are morphologically indistinguishable, we need to ask why and how they exist. Nature. 433: 111.

253. Saikia U., Sharma N., Das A. What is a Species? An endless debate // Resonance. 2008. Vol. 13:11. P. 1049-1064.

254. Sato H, Yumoto T, Murakami N. 2007. Cryptic species and host specificity in the ectomycorrhizal genus Strobilomyces (Strobilomycetaceae). Am. J. Bot. 94:1630-1641

255. Saur M. 1990. Mate discrimination in Littorina littorea (L.) and L. saxatilis (Olivi) (Mollusca:Prosobranchia). Hydrobiologia. Vol.193. P. 261-270.

256. Schluter D. 2001. Ecology and the origin of species. Trends in ecology and evolution. Vol. 16. N. 7. P. 372-380.

257. Scott J.A., Brogdon W.G., Collins F.H. 1993. Identification of single specimens of the Anopheles gambiae complex by the polymerase chain reaction. Amer. J. Tropical Med. Hyg. 49: 520-529.

258. Sejrup H.P., Hjelstuen B.O., Dahlgren K.I.T., Haflidason H., Kuijpers A. et al. 2005. Pleistocene glacial history of the NW European margin. Mar. Petroleum. Geol. 22: 1111-1129.

259. Sergievsky S.O., Granovitch A.I., Sokolova I.M. 1997. Long-term studies of Littorina obtusata and Littorina saxatilis populations in the White Sea. Oceanologica Acta. V.20. N.l. P.259-265.

260. Sharma S., Raina S.N. 2005. Organization and evolution of highly repeated satellite DNA sequences in plant chromosomes. Cytogenet. Genome Res. Vol. 109. № 1-3. P. 15-26.

261. Smadja C.M., Butlin R.K. 2011. A framework for comparing processes of speciation in the presence of gene flow. Molecular Ecology 20(24):5123.

262. Smith D.C., P.J. Mill J. Grahame. 1995. Environmentally-induced variation in uric acid concentration and xanthine dehydrogenase activity in Littorina saxatilis (Olivi) and L. arcana Hannaford Ellis. Hydrobiologia. Vol. 309 (13). P. 111-116.

263. Smith S.M. 1982. A review of the genus Littorina in British and Atlantic waters ("Gastropoda: Prosobranchia). Malacologia. 22: 535-539.

264. Sneath, P.H.A., Sokal, R.R. 1973. Numerical Taxonomy. W.H. Freeman and Co., San Francisco, CA, USA.

265. Sokolov E. P., Sokolova I. M., Portner H.-O. et al. 2001. Composition and relative abundance of microsatellite repeats in genome of Littorina saxatilis (Olivi) (Gastropoda: Littorinidae). J. Moll.Stud. Vol. 67. P. 499-510.

266. Sokolov E. P., Sokolova I. M., Portner H.-O. 2002. Polymorphic microsatellite DNA markers from the marine gastropod Littorina saxatilis. Mol. Ecol. Notes. Vol. 2.

267. Sokolova I.M. 1995. Influence of trematodes on the demography of Littorina saxatilis (Gastropoda: Prosobranchia: Littorinidae) in the White Sea. Diseases of Aquatic Organisms. 21: 91-101.

268. Sokolova I.M., Berger V.Ja. 2000. Physiological variation related to shell colour polymorphism in White Sea Littorina saxatilis. J.Exp.Mar.Biol.Ecol. 245: 123.

269. Sokolova I.M., Granovitch A.I., Berger V.Ya., Johannesson K. 2000. Intraspecific physiological variability of the gastropod Littorina saxatilis related to the vertical gradient in the White and North Seas. Marine Biology. V.137. P.297-308.

270. Spitzenberger F., Strelkov P.P., Winkler H., Haring E. 2006. A preliminary revision of the genus Plecotus (Chiroptera, Vespertilionidae) based on genetic and morphological results. Zoologica Scripta. Vol. 35. P. 187-230.

271. Stebbins G.L. 1950. Variation and Evolution in plants. N.Y.: Columbia Univ. Press. 226 p.

272. Stebbins G.L. 1999. A brief summary of my ideas on evolution. American Journal of Botany. 86: 1207-1208.

273. Stone W.S., Guest W.C., Wilson F.D. 1960. The evolutionary implications of the virtlis group of Drosophila. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 46: 350.

274. Sturtevant A.H., Dobzhansky Th. 1936. Inversions in the third chromosome of wild races of Drosophila pseudoobscwa, and their use in the study of the history of the species. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 22: 448.

275. Sundberg P., 1988. Microgeographic variation in shell characters of Littorina saxatilis Olivi—a question mainly of size? Biol. J. Linn. Soc. 35: 169-184.

276. Sundberg P., Knight A.J., Ward R.D. et al. 1990. Estimating the phylogeny of the mollusk Littorina saxatilis (Olivi) from enzyme data: methodological considerations. Hydrobiologia. 193: 29-40.

277. Taberlet P., Fumagalli L., Wust-Saucy A.-G., Cosson J.-F. 1998. Comparative phylogeography and postglacial colonization routes in Europe. Mol. Ecol. 7: 453-464.

278. Tautz D. 1989. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers. Nucleic Acids Res. Vol. 17. P. 6463-6471

279. Taylor A., Sherwin W., Wayne R. 1994. Genetic variation of microsatellite loci in a bottle-necked species: The northern hairy-nosed wombat Lasiorhinus krefftii. Мої. Ecol. Vol. 3. P. 277-290.

280. Tie A., Boulding E., Naish K. 2000. Polymorphic microsatellite DNA markers for the marine gastropod Littorina subrotundata. Мої. Ecol. Vol. 9(1). P. 108.

281. Ward R.D. 1990. Biochemical genetic variation in the genus Littorinci (Prosobranchia: Mollusca). Hydrobiologia. 193: 53-69.

282. Ward R.D., Janson K. 1985. A genetic analysis of sympatric subpopulations of the sibling species Littorina saxatilis Olivi and Littorina arcana Hannaford Ellis. J. Moll. Stud. 51: 94-96.

283. Ward R.D., Warwick T. 1980. Genetic differentiation in the molluscan species Littorina rudis and Littorina arcana (Prosobranchia: Littorinindae). Biol. J. Linn. Soc. 14: 417-428.

284. Wares J.P., Cunningham C.W. 2001. Phylogeography and historical ecology of the North Atlantic intertidal. Evolution. 55: 2455-2469.

285. Warmoes T., Backeljau T., De Bruyn L. 1988. The littorinid fauna of the Belgian coast. Biologie. Vol. 58. P. 51-57.

286. Warwick T., Knight A.J., Ward R.D. 1990. Hybridisdation In the Littorina saxatilis species complex (Prosobranchia Mollusca) // Hydrobiologia. Vol. 193. P. 109-116.

287. Wasserman M. 1963. Cytology and phytogeny of Drosophila. Amer. Nat. 97 (896): 333.

288. White M.J.D. 1954. Animal cytology and evolution, 2nd ed. Cambridge: Cambridge Univ. Press. 454 p.

289. White M. J. 1968. Models of speciation. Science. 159: 1065-1070.

290. Wilding C.S., Grahame J., Mill P. J. 2000a. Mitochondrial DNA Col haplotype variation in sibling species of rough periwinkles. Heredity. Vol. 85. P. 62-74.

291. Wilding C.S., Grahame J., Mill P. J. 2000b. Nuclear DNA restriction site polymorphisms and the phylogeny and population structure of an intertidal snail species complex. Hereditas. Vol. 133. P. 9-18.

292. Wilding C.S., Mill P.J., Grahame J. 1999. Partial sequence of the mitochondrial genome of Littorina saxatilis: relevance to gastropod phylogenetics. J Mol Evol. Vol. 48. P. 348-359.

293. Williams. G.A. 1994. Variation in populations of Littorina obtusata and L. mariae (Gastropoda) in the Severn Estuary. Biol. J. linn. Soc. 51: 189-198.

294. Williams G. A. 1995. Maintenance of zonation patterns in two species of flat periwinkle, Littorina obtusata and L. mariae. Hydrobiologia. Vol. 309. P. 143-150.

295. Williams S.T. 2007. Origins and diversification of Indo-West Pacific marine fauna: evolutionary history and biogeography of turban shells (Gastropoda, Turbinidae). Biological Journal of the Linnean Society. 92: 573-592.

296. Williams P.H., An J., Brown M.J.F., Carolan J.C., Goulson D., Huang J., Ito M. 2012. Cryptic Bumblebee Species: Consequences for Conservation and the Trade in Greenhouse Pollinators. PLoS ONE 7(3): e32992. doi: 10.1371 /journal.pone.0032992.

297. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.I. et al. 1990. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Research. Vol. 18. P. 6531-6535.

298. Winker K. 2005. Bird collections: Development and use of a scientific resource. Auk. 122: 966-971.

299. Winnepenninckx B., Backeljau T. 1998. Isolation and characterization of microsatellite markers in the periwinkle Littorina striata King & Broderip, 1832 (Mollusca, Gastropoda, Prosobranchia). Mol. Ecol. Vol. 7. P. 12531254.

300. Yeates D.K., Lambkin C.L. 1998. Cryptic species diversity and character congruence: review of the tribe Anthracini (Diptera: Bombyliidae) in Australia. Invertebrate Taxonomy. 12: 977-1078.

301. Yoon J.S., Richardson R.H. 1976. Evolution of Hawaiian Drosophilidae. II. Patterns and rates of chromosome evolution in the Awtopocerus phytogeny. Genetics. 83 (4): 827.

302. Zaslavskaya N.I., Sergievsky S.O., Tatarenkov A.N. 1992. Allozyme similarity of athlantic and pacific species of Littorina (Gastropoda: Littorinidae). J. Moll. Stud. 58: 377-384.

Информация о работе

Михайлова, Наталья Аркадьевна
доктора биологических наук
Санкт-Петербург, 2012
ВАК 03.02.04

Диссертация

Комплекс криптических видов литоральных гастропод подрода Neritrema (Littorinidae: Littorina) Северной Атлантики - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы