Мониторинг популяций возбудителя рака картофеля и выявление источников устойчивости

Хютти, Александр Валерьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Мониторинг популяций возбудителя рака картофеля и выявление источников устойчивости
ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Мониторинг популяций возбудителя рака картофеля и выявление источников устойчивости"

0034449 1 1

На правах рукописи

равах ру[

ХЮТТИ Александр Валерьевич

МОНИТОРИНГ ПОПУЛЯЦИЙ ВОЗБУДИТЕЛЯ РАКА КАРТОФЕЛЯ И ВЫЯВЛЕНИЕ ИСТОЧНИКОВ УСТОЙЧИВОСТИ

Специальность 06 01 11 - зашита растений

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г А шп да

Санкт-Петербург 2008

003444911

Диссертационная работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор Афанасенко Ольга Сильвестровна

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор Иващеико Владимир Гаврилович

доктор биологических наук Трускинов Эрнст Валентинович

Ведущая организация Московский Государственный Университет

Защита диссертации состоится 11 июля 2008 г в 12 часов на заседанш диссертационного совета Д 006 015 01 во Всероссийском научно исследовательском институте защиты растений по адресу 196608, Санкт Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, д 3

Факс (812) 470-51-10, E-mail vizrspb/nriail333 com

С диссертацией можно ознакомиться в бибпиотеке Всероссийского НИ зашиты растений

Автореферат разослан (О июня 2008 г

Ученый секретарь /'

диссертационного совета кандидат биотог ическич на\ к

Наседкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы Возбудитель рака картофеля Synchytrwm endobioticum (Sclulb) Perc - является карантинным объектом, включенным в перечень карантинных видов 55 государств (Распространение по странам мира , 1987) Широкая географическая распространенность, способность длительное время сохраняться в почве, трудность искоренения и образование новых, приспособившихся к местным условиям агрессивных патотипов, свидетельствуют о высокой пластичности и большой опасности возбудителя рака картофеля

Потери урожая в очагах рака картофеля могут составлять 50-100% (Hampson, 1993, Melnik, 1998) Например, в 1967 году в Ленинградской области на отдельных зараженных приусадебных участках потери урожая картофеля составили 45-96% (Тарасова, 1978)

На территории Российской Федерации первые очаги заболевания были зарегистрированы в Ленинградской области в 1940 году общей площадью заражения 1,4 га (Галанова, 1964) В Ленинградской области основное количество очагов рака находится на приусадебных участках, где выращивались восприимчивые к заболеванию сорта картофеля (Справочник , 2001, 2003, 2006) На 2006 год в Ленинградской области возбудитель рака картофеля зарегистрирован в 9-ти районах общей площадью заражения 8,75 га (Справочник , 2006)

В настоящее время в районах, где имеются очаги рака, должны выращиваться только высокоустойчивые к S endobioticum сорта картофеля, которые способствуют очищению почвы от патогена Российское законодательство в сфере карантина растений разрешает выращивание в очагах S endobioticum вне зависимости от степени инфекционной нагрузки любые устойчивые сорта картофеля и любые сельскохозяйственные культуры (Тарасова, 1978, Инструкция , 1988) Стоит отметить, что вывоз выращиваемой сельскохозяйственной продукции, а также картофеля из очагов рака, должным образом не контролируется и, более того, не известно, какие сорта (по степени устойчивости) выращиваются на карантинных участках

В настоящее время необходимо проведение комплексного мониторинга карантинных очагов S endobioticum, расположенных на территории Ленинградской области Выявление возбудителя рака картофеля в зарегистрированных очагах, особенно при малой зараженности почвы, представляет определенную трудность, т к стандартная процедура отбора почвенных проб, а также стандартные методы ракодиагностики не дают 100% экстрагируемости зооспорангиев из почвы (Ефременко и др, 1985, Зеля и др, 2005, van Leeuwen et al, 2005)

шего СССР было зарегистрировано 22 вида из рода Эупскугпит, причем 13 из них были распространены в Российской Федерации, главным образом, в Ленинградской и Московской областях (Кирюхина и др , 1977)

Таким образом, очевидно, что в настоящее время остро стоит проблема по созданию эффективного метода диагностики единичных зимних (покоящихся) зооспорангиев 5 епйоЪюНсит

Современная селекция картофеля ориентирована на получение сортов, сочетающих высокую продуктивность с устойчивостью к наиболее опасным патогенам Обязательным требованием для включения в реестр селекционных достижений новых сортов картофеля является устойчивость к возбудителю рака Создание сортов с групповой устойчивостью, в том числе и к раку, крайне важно в системе защиты картофеля

Помимо этого, для создания высокоустойчивых сортов картофеля к 5 епс1оЬюисит, необходимо четко представлять внутривидовой состав популяции патогена, даже в пределах обычного (01) патотипа, географически отдаленные популяции возбудителя рака картофеля отличаются по агрессивности к восприимчивым сорта картофеля (Воловик и др, 1968, 1975, Федотова, 1959, Федотова и др, 1969, Бондарь, 1989, Данченко, 1983, 1989, Ламеко и др, 1991) Молекулярно-генетические исследования, которые могли бы служить основой для изучения микроэволюционных процессов в популяциях патогена, до настоящего времени не проводились

Цель и задачи исследований Целью исследований являлось выявление возбудителя рака картофеля в зарегистрированных карантинных очагах Ленинградской области, характеристика географических популяций $ епйоЫоПсит по вирулентности, агрессивности, ДНК-маркерам, а также выявление источников устойчивости картофеля

Для достижения данной цели предстояло решить следующие задачи

1 Провести мониторинг зарегистрированных карантинных очагов 5 епйоЬюПсит в Ленинградской области.

2 Разработать метод молекулярной диагностики возбудителя рака картофеля в почвенных образцах

3 Провести идентификацию патотипного состава географических популяций 5 епйоЪюисит и охарактеризовать их агрессивность по отношению к восприимчивым сортам картофеля

4 Провести сравнительный анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров

5 Оценить устойчивость к 5 епйоЫоПсит сложных межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ РФ ВНИИР

Научная новизна исследований

1 Впервые проведено молекулярное генотипирование 4-х образцов популяций 5 епйоЫоНсит из Московской и Ленинградской областей, а также из Белоруссии и Украины методами ЯАРО и УП-ПЦР Выявлены генетические

различия между индивидуумами паразита внутри популяции, а также различия между популяциями

2 Разработан метод молекулярной диагностики возбудителя S endobioticum в почвенных образцах, который отличается от известных тем, что ДНК паразита экстрагировалась, во время денатурации в первом цикле ПЦР из целых зооспорангиев, помещенных до этого непосредственно в реакционную смесь

3 Выявлена донорская способность клона Solanum chacoense 19759 в передаче признака устойчивости к S endobioticum потомству

Практическая значимость работы На основании мониторинга популяций возбудителя рака картофеля в Ленинградской области определена степень жизнеспособности S endobioticum в зарегистрированных очагах рака Эти сведения необходимы для вывода карантинных очагов из-под регламента контроля РОССЕЛЬХОЗНАДЗОРа Предложен метод молекулярной диагностики возбудителя S endobioticum в почвенных образцах

Данные по агрессивности московской, белорусской и украинской популяций S endobioticum могут быть использованы при подборе инокулюма для оценки сортов и гибридов картофеля и выборе универсально восприимчивого контроля

Для практической селекции выявлены устойчивые к раку сложные гибриды картофеля, обладающие также устойчивостью к нематоде, фитофторозу и Y вирусу (Хютти и др , 2007)

Апробация работы и публикации результатов исследования Результаты исследований были представлены на втором симпозиуме по агробиотехноло-гии "Взаимоотношения почвенных микроорганизмов и растений" (Гамбург, 2006), на совещании "Исследование эволюции взаимоотношений растений и микроорганизмов" (Санкт-Петербург, 2007), на международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы иммунитета и защиты сельскохозяйственных культур от болезней и вредителей" (Одесса, 2007), на II Вавиловской международной конференции "Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке Состояние, проблемы, перспективы" (Санкт-Петербург, 2007), на годичной отчетной сессии ГНУ ВИЗР (Санкт-Петербург, 2008), на II съезде микологов России "Современная микология России" (Москва, 2008)

Материалы исследований опубликованы в 6 печатных работах, из них 1 опубликована в рецензируемом журнале из перечня ВАК РФ

Работа поддержана грантом РФФИ № 08-04-00447

Структура и объем диссертации Диссертационная работа изложена на 225 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, выводов и списка литературы Работа иллюстрирована 32 рисунками и 23 таблицами Библиография включает 338 источников, из них 190 на иностранном языке

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Обзор литературы

Приведены сведения по распространенности, вредоносности и биологическим особенностям возбудителя рака картофеля Обобщены сведения по структуре популяции патогена, устойчивости картофеля к возбудителю и методы диагностики и определения жизнеспособности S endobioticum

Глава 2. Материалы и методы

Растительный и инфекционный материал Для определения патотипного состава различных географических популяций S endobioticum (московской, белорусской и украинской) была создана и размножена коллекция сортов-дифференциаторов картофеля из известных шести наборов (Салтыкова, 1988, Мельник и др , 1999, Potocek et al, 1991, Stachewicz et al, 1998, OEPP/EPPO, 2004) К сожалению, мы не смогли найти некоторые сорта, вследствие чего объединили в один набор имеющиеся Альма, JIopx, Полесский розовый, Свитанок киевский, Львовский белый, Пролисок, Луговской, Антарес, Opa (Мира), Аполло, Гиевонт, Фонтана, Кардула, Воловецкий, Незабудка, Спад-щина, Барбара, Ресурс, Темп и Божедар С использованием этого набора сортов-дифференциаторов возможно выявить патотипы, распространенные в бывшем СССР и Украине (1 (D1), 11 (М1), 13 (R2), 16 (S1), 18 (I), 20, 21, 22), а также частично идентифицировать патотипы, распространенные в Германии (2 (G1), 4 (Р1), 5 (К1), 6 (01), 7 (S1), 8 (F1), 9 (R1), 10 (El), 18 (TI)), Норвегии (2(G1),6(01), 18 (TI)) и Чехии (15 (Р2), 16 (N1), 17 (М2))

При создании объединенного набора, состоящего из 20 сортов-дифференциаторов, были использованы образцы мировой коллекции ВИР, а также сорта, полученные из Украинской научно-исследовательской станции карантина растений УААН

Для изучения агрессивности популяций S endobioticum использовались следующие восприимчивые сорта картофеля Лиза, Лорх, Полесский розовый, Тулунский, Альма и Свитанок киевский

Для оценки на устойчивость к первому патотипу (D1) 5 endobioticum (московской популяции) были испытаны 84 сложных межвидовых гибрида картофеля, любезно предоставленные к б н ЕВ Рогозиной из отдела генетических ресурсов картофеля ГНЦ РФ ВНИИР

В качестве инфекционного материала для инокуляции растений в лабораторных условиях использовали образцы четырех географических популяций возбудителя рака картофеля московской (Россия, Московская обл , Люберецкий р-н, п Коренево), ленинградской (Россия, Ленинградская область, Кировский р-н, п Старая Малукса), белорусской (Белоруссия, Минская обл , Минский р-н, п Самохваловичи) и украинской (Украина, Черновицкая обл, Но-воселицкий р-н, с Бояны)

Для размножения образцов популяций 5 endobioticum, а также в качестве контроля, использовали высоковосприимчивый сорт Лиза

Методика отбора почвенных проб из зарегистрированных очагов рака

картофеля в Ленинградской области Для отбора почвенных проб в очагах рака картофеля в Ленинградской области использовали метод, предложенный Научно-исследовательским институтом картофельного хозяйства (Воловик и др, 1966) Данная методика предусматривает отбор почвенных проб по линиям, параллельным одной иэ сторон участка, с интервалом перехода меду линиями и местами взятия выемок по линии перехода 1,0 м

Образцы почвенных проб из трех районов Ленинградской области (Бокси-тогорского, Подпорожского и Всеволожского) были предоставлены Пограничной Государственной инспекцией по карантину растений по Санкт-Петербургу и Ленинградской области в 2003-2005 гг Из остальных 6 районов Ленинградской области образцы почвенных проб отбирали совместно с государственным инспектором Федеральной службы по ветеринарному и фитоса-нитарному надзору (РОССЕЛЬХОЗНАДЗОР) Е В Феклистовой в 2007 году

Микроанализ почвы на выявление зимних (покоящихся) зооспорангиев возбудителя рака картофеля При определении зараженности почвы возбудителем рака картофеля, необходим разрыв адсорбционных связей между зооспо-рангиями и частицами почвы Мы использовали наиболее эффективный экспресс-метод выявления возбудителя рака картофеля, предложенный Украинской научно-исследовательской станцией карантина растений УААН, который позволяет проводить микроанализ почв с различным механическим составом и одновременно определять жизнеспособность зооспорангиев (Мельник, 2000, 2005)

Лабораторный метод биологической проверки почвы на наличие возбудителя рака картофеля Для получения наиболее точных результатов, применялись два типа биопроверок разработанной сотрудниками ВИЗР (Лабора-торно-вегетационный метод , 1983, Инструкция , 1988) и рекомендованной Европейской и Средиземноморской организацией по защите растений (ЕОЗР) (ОЕРР/ЕРРО, 1999)

Методы лабораторной диагностики устойчивости картофеля к 5 епсЬЬюИсит Оценку картофеля на устойчивость к 5 епйоЫоПсит осуществляли согласно методическим указаниям, разработанным сотрудниками ВИЗР В И Яковлевой, Л П Салтыковой (Лабораторная диагностика , 1979) и Л П Салтыковой, В П Тарасовой (Методические указания , 1982), с небольшими модификациями Данные методические указания удовлетворяют всем международным нормам и требованиям, предъявляемым к оценке картофеля на ра-коустойчивость Лабораторная диагностика ракоустойчивости проводилась двумя методами методом заражения ростков картофеля в "компосте", содержащем зимние зооспорангии 5 епйоЪюПсит, и методом заражения ростков картофеля от свежих раковых наростов, содержащих быстропрорастающие летние зооспорангии патогена По окончании лабораторных опытов учитывали количество пораженных клубней и вес наростов (при заражении растений картофеля в "компосте") или степень заражения (при заражении картофеля от свежих раковых наростов) по унифицированной шкале с подразделением образцов на группы группа 1 - устойчивые Защитный некроз охватывает от-

дельные эпидермальные клетки или участки ткани Могут встречаться единичные (до 5) зрелые зооспорангии без некроза, группа 2 - относительно устойчивые (полевая устойчивость) Зрелые зооспорангии расположены на ростках локально или рассеяны по ростку Могут некротизироваться клетки или отдельные участки ткани Защитный некроз появляется поздно, группа 3 -восприимчивые Плотное заражение Некроз отсутствует или незначительный Образуются наросты или деформируются ростки Результаты испытания ракоустойчивости считались достоверными, если поражение контрольных растений восприимчивого сорта составляло не менее 75%

Методика выделения ДНК из растения-хозяина и раковых наростов различных географических популяций S endobioticum и условия проведения ПЦР Для выделения ДНК использовали, как здоровые листья сорта Лиза, так и раковые наросты (20-30-ти суточного возраста), полученные от этого же сорта Для выделения ДНК из раковых наростов четырех образцов популяций (московской, ленинградской, белорусской и украинской) использовали известный метод с небольшими модификациями (Bulat et al, 1998) Геноспеци-фичную ПЦР с праймерами F49 и R502 проводили по протоколу van den Boogert et al (2005) Условия проведения ПЦР со случайными и универсальными праймерами подбирали экспериментальным путем Праймеры, использованные в работе, приведены в таблице 2 1

Таблица 2 1 Праймеры использованные при амплификации ДНК S endobioticum

Наименование праймера Последовательность Ссылка

Случайные праймеры

OPA-OI 5'- CAggCC СТТ С-3'

ОРА-08 5'-gTgACgTAgg-3'

ОРА-09 5'- ggg TAA CgC С-3' Operon Technologies, Inc (Alameda, CA)

OPA-10 5'- gTg АТС gCA g-3'

ОРВ-11 5'- gTT TCg CTCC-3'

OPI-9 5'- Tgg AgA gCA g-3'

OPI-10 5'- ACAACg CgA g-3'

Универсальные праймеры

AS4 5'- TgT ggg CgC TCg АСА C-3' Lübeck et al, 1999

AS15inv 5'- CAT TgC Tgg CgA АТС gg-3' Bulat et al, 2000

Специфичные праймеры

F49 5' - CAA CAC CAT gTg AAC Tg - 3' van den Boogert et al,

R502 5' - ACA TAC АСА ATT CgA gTT T - 3' 2005

Глава 3. Распространение возбудителя рака картофеля в Ленинградской области Российской Федерации

Результаты микроанализа образцов почвенных проб из Бокситогорского, Подпорожского и Всеволожского районов Ленинградской области представлены в таблице 3 1 Полученные данные показывают, что в Подпорожском районе Ленинградской области девять очагов рака (г Подпорожье, очаги № 1, 4, 5 и 6, п Важины и д Ярославичи, очаги № 1, 2, 4, 5, 6 и 7) содержат от 31 до 116 жизнеспособных зооспорангиев в 1 г почвы Во Всеволожском районе

(и Приковка) при микроанализе почвенных обра шов было выявлено не менее 45 жизнеспособных зооспорашпев в 1 I почвы По чанным Л Г1 Салтыковой и пр (Методические укамния 1982) и 11 Р Ваа\спе1а1 (2005) наличие 30-40 жизнеспособных зооспорангиев в 1 г почвы является оптимальной ин-фекционнои нагрузкой для заражения возбудителем рака картофеля В выявленных очагах не следует возделывать даже устойчивые сорта картофеля, так как высокая инфекционная нагрузка представляет потенциальную опасность дня появления ботее агрессивных патотипов

Габтица 3 1 Наличие покоящихся зооспораш иен 5 епс1оЬюисшп в почвенных образцах отобранных из карантинных очагов рака картофеля в Ленинградском области

Общая Среднее котичсство зооспорангиев в 1 г почвы

№ очага п гошадь зараже- Жизнеспособные Деформированные Не жизнеспособные Год регистрации очага

ния га

Подпорожский р-и I Подпорожье

1 0 19 100 31 13 37 20 62 1947-1997

2 2 8 64 7 11 0 00

3 3 6,51 5 30 0 00

4 4 100 80 4 53 96 34

5 > 80 33 47 91 8 28

6 6 65 60 37 ЗЯ 3 36

Подпорожский р-н п Важины и д Ярославичи

1 0 70 37 81 67 60 9 50 1980-1998

2 2 34 93 5 82 0 00

3 3 2 42 1 00 0 00

4 4 116 30 8 26 40 35

5 59 66 2 32 1040

6 6 31 64 9 43 11 61

7 7 59 38 2 82 10 03

Бокситогорскин р-н п Ьфнмовсмш

1 0 22 6 23 0 00 0 00 1985

Всевотожский р-и п Ириновка

1 0 06 45 00 13 01 18 68 1990

Итого проанализировано

Районов Птощадыо зтралеипя га Очагов Проб ил Нтвесок шт

3 1 17 15 15 60

В Бокситогорском (п Ефимовский) и Подпорожском (г Подпорожье, очаги № 2 и 3) районах Ленинградской обчасти при микроанализе почвы, отобранной из карантинных очагов, было выявлено от 6 до 8 жизнеспособных зооспорангиев в 1 I почвы По многотетним данным Голландской №РО 50% восприимчивых сортов картофеля образовывали наросты при наличии 1 зоо-спорангия в 1 г почвы, а при 5 зооспорангиях в 1 г почвы поражалось чо 90% растений (ОЕРР/ЕРРО, 2004) Поэтому, в вышеуказанных карантинных очагах можно возделывать только высокоустойчивые сорта картофеля, способствующие очищению почвы от патогена

Результаты микроанализа почвенных проб отобранных из Кировского,

Киришского, Всеволожского (г Всеволожск), Гатчинского, Лужского и При-озерского районов Ленинградской области, представлены в таблице 3 2

Из полученных данных видно, что в этих районах, среднее количество жизнеспособных зооспорангиев в 1 г почвы составляет не более 5 Так, наибольшее количество очагов, в которых инфекционная нагрузка составляет от 3 до 5 жизнеспособных зооспорангиев, было выявлено в п Старая Малукса (карантинные очаги № 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 и 11) и п Новая Малукса (очаг № 2) Кировского района Важно отметить, что из отобранных почвенных проб в очагах № 2, 3 и 6, п Старая Малукса, было экстрагировано в среднем 3 жизнеспособных зооспорангия на 1 г почвы, но в некоторых навесках 'содержалось от 5 до 15 жизнеспособных зооспорангиев S endobioticum. Кроме этого, в очагах № 5, 8 и 9, где проведенный микроанализ показал наличие в среднем не менее 5 жизнеспособных зооспорангиев патогена в 1 г зараженной почвы, было выявлено большое содержание деформированных зооспорангиев (частично жизнеспособных), в среднем не менее 8 в 1 г почвы В данных карантинных очагах следует возделывать только высокоустойчивые сорта картофеля и ни в коем случае не допускать наличия примеси слабоустойчивых или, тем более, восприимчивых сортов, т к известно немало случаев, когда при небольшой инфекционной нагрузке наличие слабоустойчивых сортов картофеля в последующем приводило к образованию высокоагрессивных патоти-пов с измененной вирулентностью (Braun, 1942, Langerfeld et al, 1994) Данные требования также относятся и к очагу, расположенному в г Всеволожске Всеволожского района (наличие в среднем 4 жизнеспособных и 5 деформированных зооспорангиев в 1 г почвы)

В д Гремячево (очаги № 1, 2 и 4) Киришского и п Старая Малукса (очаги № 1 и 7) Кировского районов в 1 г почвы, в среднем, содержится от 1 до 2 жизнеспособных зооспорангиев возбудителя рака картофеля Поэтому, в вышеуказанных очагах, необходимо строгое соблюдение комплекса карантинных правил, предотвращающих распространение S endobioticum

Очаги, расположенные в Гатчинском, Кировском (п Старая Малукса, очаг № 12) и Приозерском районах содержат менее одного жизнеспособного зооспорангия в 1 г почвы Однако, наличие в 1 г почвы, в среднем, 1, 3 и 12 деформированных зооспорангиев, для перечисленных очагов, соответственно, определяют необходимость в продолжении карантинного надсмотра

В Киришском (п Будогощь, д Гремячево, очаг № 3), а также Кировском (п Новая Малукса, очаг № 1) районах, при микроанализе почвы, не было обнаружено жизнеспособных зооспорангиев возбудителя рака картофеля Кроме этого, было выявлено незначительное количество деформированных зооспорангиев (табл 3 2) В образцах почвенных проб, отобранных из очага, расположенного в Лужском районе Ленинградской области, не было обнаружено жизнеспособных и деформированных зооспорангиев В дальнейшем, при проведении биологической проверки почвы, подтверждающей отсутствие S endobioticum, данный очаг может быть выведен из-под регламента контроля

Таблица 3 2 Результаты молекулярной диагностики, микроанализа и биологической проверки почвы на наличие возбудителя рака картофеля

Микроанализ Биопроверка* по методам

§ 3 т о Среднее количество юоспорангисв в 1 г почвы Молекутярная диагностика** Год регистрации очага

т о .с йЕ 3 о £ Жюнеспо-собше Деформированные Не жизнеспособные ВИЗР ЕОЗР

Кировский р-н, п Старая Малукса

1 0,12 1 57 11,78 120,14 - - + 2003

2 0,05 4,31 7,50 46,12 - - + 1986

3 0,09 4,50 1,50 15,08 - + 2000

4 0,09 3,50 5,00 15 00 - - + 1982

5 006 5,12 862 31,62 - - + -«-

6 0,10 3,10 9,80 116,00 - - + -«-

7 0,09 2,68 17,25 173,60 - - + -«-

8 0,08 5,06 9,75 46,50 - - + -«-

9 0,07 5,25 8,25 79,75 - - +

10 0,07 4,50 9,50 24,50 - - + -«-

11 0,07 3,25 5,00 42,50 - - + -«-

12 0,05 0,91 3,75 52,25 - - + 1986

Кировский р-н, п Новая малукса

1 ] 0,08 0,00 1,12 28,37 - - - -«-

2 0,08 3,12 6,25 26,37 - - + ч<-

Киришский р-н, п Будогощь

I 0,01 0,00 8,75 82,37 - - - 1999

Киришский р-н, д Гремячсво (коллективный огород)

1 0,15 2,54 2,58 13,45 - - + 1981-1982

2 ОДО 1,54 1,25 8,29 - - + -«-

3 0,10 0,00 0,25 0,00 - - -

4 0,10 1,76 1,25 8,66 - 1 - -

Всеволожский р-н, г Всеволожск

1 0,02 4,25 5,00 36,00 - + 1986

Гатчинский р-н, п Дивенский

1 0,05 031 1,06 16,18 - - + 1958

Лужский р-н, д. Низовская

1 0,05 0,00 0,00 0,00 - - 1987

Приозерский р-н, п Ларионово

1 0,06 | 0,62 12,87 19,50 - + 1997

Итого проанализировано

Районов Площадью заражения, га Очагов почвенных проб, шт Навесок, цгг биопроверок по методике ВИЗР биопроверок по методике ЕОЗР

6 1,84 23 74 296 92 69

Примечание * "-" - результат отрицательный, ** "+" - наличие и "-" отсутствие фрагмента 472 п о

Таким образом, в результате мониторинга большинства зарегистрированных очагов рака в Ленинградской области, они были ранжированы по степени опасности распространения болезни и, соответственно, необходимости ка-

рантинных мероприятий

По Российскому законодательству (Инструкция , 1988) независимо от того, выявлены или нет покоящиеся зооспорангии 5 епйоЪюПсит при проведении микроанализа почвенных образцов, в любом случае необходима биологическая проверка почвы на наличие возбудителя рака картофеля Биологическая проверка почвы проводилась для очагов рака картофеля указанных в таблице 3 2

Для всех почвенных образцов биопроверка показала отрицательный результат По данным ] РоЮсек (1982) и Европейской и Средиземноморской организации по защите растений (ЕОЗР) (ОЕРР/ЕРРО, 1999), если в 1 г почвы содержится не более 5 жизнеспособных зооспорангиев епйоЬюПсит, то биологическая проверка почвы показывает отрицательный результат Во всех вышеуказанных районах среднее количество жизнеспособных зооспорангиев в 1 г почвы составляло не более 5, следовательно, полученный результат был ожидаемым

Глава 4. Разработка метода ПЦР диагностики покоящихся зооспорангиев Л епйоЫоЛсит, экстрагированных из почвенных образцов

Для выделения ДНК 51 епйоЫоисит требуется минимум 50-100 зооспорангиев, при этом большая часть ДНК теряется при ее очистке В связи с этим были проведены исследования по выявлению возможности молекулярной диагностики возбудителя 5 епАоЫоисит в почвенных образцах путем экстрагирования ДНК из целых зооспорангиев, помещенных непосредственно в реакционную смесь для ПЦР Для этой цели использовали единичные покоящиеся зооспорангии, предварительно выделенные из раковых наростов

Зооспорангии по 1, 2, 5, 10 и 20 штук добавляли в пробирки объемом 0,2 мл, содержащие 25 мкл реакционной смеси, и проводили ПЦР с видоспеци-фичными праймерами Пробирки с реакционной смесью для ПЦР при добавлении в них единичных зооспорангиев патогена стояли на специальной ледяной платформе и к моменту непосредственного проведения ПЦР содержимое пробирок было замороженным Начальная температура ПЦР составляла 95° С, а температура замороженной реакционной смеси с зооспорангиями менее -3° С, из-за резкого перепада температур происходило механическое разрушение оболочек зооспорангиев

В образцах, содержащих 1, 2 и 5 зооспорангиев, диагностический фрагмент 472 п о успешно амплифицировался В образцах, которые содержали по 10 и 20 зооспорангиев, ДНК не амплифицировалась Скорее всего, это связано с тем, что амплификация ДНК 5 епйоЪюисит ингибируется примесями белков, полисахаридов и других веществ, находящихся в оболочках зооспорангиев и микрочастицах почвенной биоты

Наиболее достоверным и надежным методом экстрагирования зооспорангиев из почвы является экспресс-метод, предложенный Украинской научно-исследовательской станцией карантина растений УААН (Мельник, 2000, 2005) Данный метод успешно применялся нами для мониторинга зарегист-

рированных карантинных очагов S endobioticum в Ленинградской области Поэтому дальнейшая разработка метода ПЦР диагностики зимних зооспоран-гиев S endobioticum осуществлялась с использованием вышеуказанного метода Поскольку в экспресс-методе для экстрагирования зооспорангиев применяется Nal, то первой нашей задачей было определить влияние этого вещества на ПЦР

Для этого в каждую пробирку "эппендорф" (0,2 мл), в 25 мкл реакционной смеси добавляли по 1, 2 и 5 зооспорангиев без обработки Nal и такое же количество зооспорангиев, обработанных Nal (зооспорангии заранее были внесены в почву, а затем экстрагированы экспресс-методом) В агарозном геле после электрофореза, образовавшиеся продукты амплификации в образцах без обработки Nal имели более яркое свечение, чем в тех образцах, где применялся Nal, однако это влияние было не существенным В дальнейшем, для усиления интенсивности сигнала, были подобраны экспериментальным путем оптимальные условия ПЦР Для осуществления более сильного механического воздействия на оболочки зооспорангиев в результате перепада температур мы проводили денатурацию ДНК при 94° С в течение 10 мин и отжиг прай-меров при 57° С - 50 с Число циклов увеличили до 40

Для молекулярной диагностики вида 5 endobioticum использовали зимние зооспорангии патогена, экстрагированные экспресс-методом из почвенных проб, отобранных в карантинных очагах Ленинградской области в 2007 году (табл 3 2)

В ПЦР смесь для последующего анализа вносили 1-2 жизнеспособных зооспорангиев, у которых четко просматривалась зернистая структура, а также было видно, что содержимое имеет равномерный желтый цвет из-за окрашивания Nal

Согласно результатам молекулярной диагностики вида S endobioticum, практически для всех образцов, где по морфологическим признакам был определен вид S endobioticum, ПЦР анализ подтвердил наличие возбудителя Однако у образцов из Кировского р-на (п Старая Малукса, очаг № 12) диагностический фрагмент амплифицировался не во всех случаях, только в одном образце из четырех Возможно, это связано с тем, что в том месте, где находится карантинный очаг, в настоящее время выращивается клевер, на котором паразитирует вид Synchytrmm trifolu Passer. Покоящиеся зооспорангии S trifolu напоминают зимние зооспорангии S endobioticum и, кроме того, имеют практически сходные размеры (Инструкция , 1988) У образцов из Кириш-ского р-на (п Будогощь, очаг № 1, д Гремячево, очаг № 4) и Кировского р-на (п Новая Малукса, очаг № 1) во всех повторностях не амплифицировался диагностический фрагмент 472 п о Скорее всего, это связано с тем, что на данных очагах произрастает большое количество сорняков разных видов (бодяк, сныть, лебеда и тд), на которых паразитирует Synchytrmm aureum Schrot Данный вид распространен достаточно широко в Ленинградской области и встречается на 134 видах цветковых растений (Кирюхина, 1977, Инструкция , 1988) Покоящиеся зооспорангии S aureum округлые, янтарно-

коричневые, с крупнозернистым содержимым и имеют размер от 50 до 200 мкм в диаметре, из-за чего существует высокая вероятность их неправильной диагностики

У некоторых образцов, содержащих нетипичные зооспорангии, которые можно было бы отнести к другим видам рода Synchytrium, амплифмцировался диагностический фрагмент 472 п о Из этого следует, что стандартные методы микроанализа не всегда позволяют правильно диагностировать вид S endobioticum, особенно основываясь только на морфологических особенностях объекта

Практически во всех районах Ленинградской области (кроме Гатчинского р-на), где расположены карантинные очаги, были выявлены зооспорангии сходных видов, которые не диагностировались молекулярным методом, что позволяет предполагать наличие не вида S endobioticum, а сходных видов из рода Synchytrium

Таким образом, применение экспресс-метода экстрагирования зимних зооспорангиев возбудителя рака картофеля в сочетании с разработанным молекулярным методом диагностики позволяют с большой точностью судить о состоянии карантинных очагов

В таблице 3 2 представлены результаты молекулярной диаг ностики, микроанализа и биологической проверки почвы на наличие возбудителя рака картофеля В сравнительном аспекте видно, что в карантинных очагах, где методом микроанализа было доказано наличие жизнеспособных зимних зооспорангиев S endobioticum, проведенная молекулярная диагностика вида S endobioticum, подтвердила данные микроанализа. Полученные данные указывают на то, что при получении отрицательных результатов биологической проверки почвы не существует 100% гарантии, что S endobioticum отсутствует в почве

Глава 5. Изменчивость географических популяций возбудителя рака картофеля

В задачу наших исследований входило изучение патотипного состава трех географических популяций S endobioticum (московской, белорусской и украинской) Для этого был использован объединенный тест-набор, состоящий из сортов-дифференциаторов различного происхождения, на котором было возможно определить большинство известных патотипов S endobioticum При заражении ростков тест-сортов в "компосте", было установлено, что все тест-сорта устойчивые к первому (D1) патотипу возбудителя рака картофеля (Львовский белый, Прописок, Луговской, Антарес, Opa (Мира), Аполло, Гие-вонт, Фонтана, Кардула, Воловецкий, Незабудка, Спадщина, Барбара, Ресурс, Темп и Божедар) не были поражены ни одной популяцией Однако реакция на заражение различными популяциями восприимчивых сортов была неодинаковой Так, все три популяции поразили восприимчивые сорта Лорх, Полесский розовый и Альма Количество пораженных клубней сорта Альма для белорусской и украинской популяций составляло 10 и 50%, соответственно, в

го время как для московской популяции - 80% Восприимчивый сорт Свита-нок киевский оказался восприимчивым только к московской и украинской популяциям (80 и 60%, соответственно) Сорт Львовский белый, обладающий полевой устойчивостью, не поразила ни одна популяция

Таким образом, белорусская популяция обладает самой слабой агрессивностью, так как может успешно развиваться и образовывать наросты только на сортах Лорх и Полесский розовый

При заражении ростков сортов-дифференциаторов от свежих раковых наростов все три географические популяции 5 епйоЬюисит поразили восприимчивые сорта (Лорх, Полесский розовый, Альма и Свитанок киевский),' но не поразили ни один из устойчивых тест-сортов Важно отметить, что обладающий полевой устойчивостью сорт Львовский белый был поражен всеми исследованными популяциями Однако, при микроанализе ростков данного сорта, зараженного московской и украинской популяциями, на срезе пораженной ткани наблюдали многочисленные зрелые зооспорангии, рассеянные по всему ростку, а некротизация наблюдалась только у отдельных клеток, в то время как у клубней, зараженных белорусской популяцией, на ростках развивались единичные, в основном не зрелые зооспорангии, и защитный некроз охватывал целые участки ткани В обоих случаях защитный некроз проявлялся поздно (не раньше, чем на 21 сутки)

В заключение стоит отметить, что сорт Свитанок киевский, не поразившийся в "компосте", при инокуляции от свежих раковых наростов белорусской популяцией, поразился на 30% В то время как московская и украинская популяции поразили тот же сорт на 80 и 90%, соответственно

Таким образом, все протестированные географические популяции возбудителя рака картофеля принадлежат к первому (01) патотипу, но отличаются по агрессивности к восприимчивым сортам картофеля Из всех популяций 5 епйоЬюисит, только московская популяция поражала все восприимчивые сорта не менее чем на 80%

В связи с этим была продолжена экспериментальная работа по изучению агрессивности исследуемых популяций на расширенном наборе восприимчивых сортов картофеля Лиза, Лорх, Полесский розовый, Тулунский, Альма и Свитанок киевский

При заражении любой популяцией патогена ростков восприимчивых сортов картофеля в "компосте" достоверно меньшее количество пораженных клубней было у сортов Альма и Свитанок киевский Важно отметить, что количество пораженных клубней для данных сортов у украинской популяции составляло 44,3 и 63,7%, а у белорусской 12,6 и 0%, соответственно Сорта Лиза, Лорх, Полесский розовый и Тулунский хорошо поразились всеми популяциями, однако процент пораженных клубней белорусской популяцией у сорта Тулунский был наименьший - 79,5% (рис 5.1)

При заражении ростков восприимчивых сортов картофеля от свежих раковых наростов агрессивность белорусской и украинской популяций по сравнению с московской была достоверно ниже к восприимчивым сортам картофеля

Альма и Свитанок Киевский. Однако стоит отметить, ч то украинская популяция поразила восприимчивый сор! Альма только на 63.5%. Сорта Лиза. Лорх. Полесский розовый и Тулунский хорошо поразились (не менее 85%) всеми популяциями (рис. 5.2).

При использовании метода заражения ростков картофеля в "компосте" было установлено, что сорт Лиза поражается в меньшей степени, чем сорт Лорх. Однако при использовании метода заражения ростков картофеля от свежих раковых наростов было установлено, что количество пораженных образцов у сорта Лиза больше, чем у сорта Лорх (рис. 5.1, 5.2).

московская белорусская украинская

И Лии И Лорх Н Полесский розовый И Тулунский 0 Альма (Я Свитанок киевский

Рис. 5.1. Количество пораженных клубней (%) при заражении ростков картофеля в "компосте" популяциями епгЗоЬ/оИсит.

московская белорусская украинская

0 Ли$а СЗЛорч В Полесский розовый Е2 Тулунский Е Альма О Свитанок киевский

Рис. 5.2. Количество пораженных клубней (%) при заражении ростков картофеля от свежих раковых наростов популяциями 5. епсЬЫоИсит.

Таким образом, количество пораженных клубней находится в прямой зависимости от используемого метода заражения Так, в сравнительном аспекте видно, что количество пораженных клубней больше при использовании в качестве инокулюма свежих раковых наростов не зависимо от популяции Однако такие сорта как Альма и Свитанок киевский одинаково плохо поражаются украинской (кроме заражения от свежих раковых наростов сорта Свитанок киевский) и в особенности белорусской популяциями не зависимо от метода оценки

Средняя масса наростов, полученная при заражении клубней различными географическими популяциями, была неодинаковой Так, наибольшая масса наростов была получена на высоковосприимчивых сортах Лиза и Лорх, вне зависимости от популяции Кроме того, средняя масса наростов при заражении ростков картофеля в "компосте" была больше, чем при заражении от свежих раковых наростов, вне зависимости от сорта картофеля и популяции S endobioticum Несмотря на то, что средняя масса наростов для каждой конкретной популяции сильно варьирует, проведенный анализ данных позволяет утверждать, что наилучшие результаты при инокуляции всех шести восприимчивых сортов достигались при использовании московской популяции возбудителя рака картофеля

Таким образом, московская, белорусская и украинская популяции возбудителя рака картофеля различаются по агрессивности. Это необходимо учитывать при составлении инокулюма для создания инфекционного фона при сортоиспытании картофеля на ракоустойчивость

Сравнительный анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров.

Возбудитель рака картофеля является сложным объектом для популяци-онных исследований Молекулярно-гснетические исследования этого важного карантинного объекта касались только разработки молекулярной диагностики S endobioticum в почве и растении (Levesque et al, 2005, Niepold & Stachewicz, 2004, van den Boogert et al, 2005, Abdullahi et al, 2005) Молеку-лярно-генетические исследования, которые могли бы служить основой для изучения микроэволюционных процессов в популяциях патогена, отсутствуют

С образцами ДНК, выделенной из раковых наростов сорта Лиза четырех образцов популяций (московской, ленинградской, белорусской и украинской), а также из здоровых листьев этого же сорта, был проведен RAPD и УП-ПЦР анализ

Для проведения ПЦР со случайными и универсальными праймерами были подобраны экспериментальным путем оптимальные условия Условия ПЦР со случайными праймерами денатурация ДНК при 93° С - 45 с (в первом цикле денатурация при 95° С - 4 мин), отжиг праймеров 37,5 0 С - 45 с, синтез ДНК при 72 0 С - 90 с (в последнем цикле синтез совершается при 720 С - 10 мин) Всего 35 циклов Условия ПЦР с универсальными праймерами денатурация ДНК при 93° С - 50 с (в первом цикле денатурация при 95° С - 4 мин), отжиг

праймеров 500 С 70 с, синтез ДНК при 720 С - 60 с (в последнем цикле синтез совершается при 72° С - 3 мин). Всего 35 циклов.

ДНК из раковых наростов является смесью ДНК паразита и растения-хозяина. Наличие ДНК паразита в смешанных образцах ДНК было доказано методом ПЦР с видоепецифичными для S. endobioticum праймерами (van den Boogert et al, 2005), с помощью которой диагностические для паразита продукты амплификации размером 472 и.о. были обнаружены только в образцах ДНК раковых наростов, но отсутствовали в здоровом растении (рис. 5.3).

Ряд праймеров был тестирован на способность давать продукты амплификации геномной ДНК паразита. В результате были отобраны три случайных (ОРА-09, ОРА-Ю, ОР1-10) и один универсальный праймер А84, которые в дальнейшем использовали в работе. На рисунке 5.4 представлены продукты амплификации ДНК из листьев картофеля сорта Лиза и раковых наростов, полученных при инокуляции того же сорта. Продукты амплификации раковых наростов, отсутствующие в "контрольных" спектрах ДНК здорового растения, можно считать результатом амплификации ДНК паразита. При анализе 4-х популяций патогена с 4 отобранными праймерами было получено всего 6 полиморфных продуктов амплификации, наличие (или отсутствие) которых характеризует генотип паразита, доминирующий в анализируемом наросте.

На рис. 5.4 приведен пример выявления полиморфного продукта амплификации с помощью случайного праймера ОР1-Ю у образцов из раковых наростов, который отсутствовал в ДНК спектре растения (обозначен стрелкой).

В таблице 5 представлены данные по "генотипированию" раковых наростов 4-х образцов популяций патогена. Всего среди 38 взятых в анализ раковых наростов выявлено 19 генотипов, которые неравномерно распределились между популяциями.

1 2 3 4 5 6 7

Рис. 5.3. Молекулярная диагностика вида 5. епс1оЫоИсит в образцах ДНК раковых наростов (смешанных образцах ДНК паразита и растения-хозяина). Дор. 1 и 2 -маркеры молекулярных масс. Продукты амплификации с видоепецифичными праймерами: дор. 3 -лист здорового растения картофеля, 4, 5, 6 и 7 - раковые наросты украинской, московской, ленинградской и белорусской популяций, соответственно. Стрелкой обозначен диагностический фрагмент размером 472 п.о.

Рис. 5.3. Молекулярная диагностика вида 51. епс1оЬюНсит в образцах ДНК раковых наростов (смешанных образцах ДНК паразита и растения-хозяина). Дор. 1 и 2 -маркеры молекулярных масс. Продукты амплификации с видоспе-цифичными праймерами: дор. 3 -лист здорового растения картофеля, 4, 5, 6 и 7 - раковые наросты украинской, московской, ленинградской и белорусской популяций, соответственно. Стрелкой обозначен диагностический фрагмент размером 472 п.о.

Рис. 5.4. Пример генотипирования украинской популяции епЛоЫоНсит методом ЯАРО с праймером ОР1-Ю. Дор. 1 и 10 - растение, 2-9 - раковые наросты. Боковая дорожка - маркер молекулярных масс (1 кЬ). Стрелкой обозначен полиморфный ДНК фрагмент размером 0,62 п.о

1 2 3 4 /5 6 7 8 9 10

Рис. 5.4. Пример генотипирования украинской популяций 5. епйоЫоЧсит методом ИАРО с праймером ОРЫО. Дор. 1 и 10 - растение, 2-9 - раковые наросты. Боковая дорожка - маркер молекулярных масс (1 кЬ). Стрелкой обозначен полиморфный ДНК фрагмент размером 0,62 п.о

Таблица 5. Распределение генотипов (КАР Б праймеры ОРА-09, ОРА-Ю, ОРМО и универсальный праймер А84) в популяциях 5. епйоЫойсит из Белоруссии (Б), _ Украины (У), Московской (М) и Ленинградской (Л) областей_

Генотип Генотипы по 6 ДНК маркерам Число генотипов в популяции

ОРА-10 ОРА-09 ОРА-09 ОР1-10 А84 АЪ4 Б У М Л

Наличие (1) или отсутствие (0) продукта амплификации с молекулярной массой (кЬ)

0,75 0.70 0,73 0,62 0,6 0,5

1 С 0 0 0 0 0 1 2 2

2С 1 0 0 0 0 3 1 3 1

30 0 0 0 0 1 1 1

4 0 1 1 0 0 0 3 1

5 0 1 1 1 1 1 1 1

60 •1 0 0 0 1 0 1

70 0 0 0 1 1 0 1

0 0 0 0 1 0 1

90 1 1 1 0 1 0 1

100 1 1 0 0 1 I 1

11 0 1 0 1 0 0 0 5

120 1 0 1 0 0 1 2

13 0 1 0 1 1 0 1 1

14 0 . 0 0 0 1 1 1 1

150 0 1 1 0 1 1 1

160 1 1 1 0 1 1 1

170 0 0 1 0 1 1 1

180 1 1 0 0 0 1 1

190 0 1 0 0 0 1 I

Глава 6. Оценка межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ РФ ВНИИР на устойчивость кЛг. endobwticum

При оценке 84 клонов сложных межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ РФ ВНИИР на устойчивость к возбудителю рака картофеля выделено 7 высокоустойчивых к 5 endobiottcum образцов Высокой устойчивостью отличалось потомство, полученное от скрещивания Solanum okadae х S chacoense 19759 (8-1-2004 (137), 8-8-2004 (137), 135-5, 8-5-2004 (138) и 135-32005) и Bobr х S chacoense 19759 (94-5 и 99-10-1) Вероятно, что признак устойчивости унаследован от образца S chacoense 19759, так как известно, что большинство образцов вида S chacoense устойчиво к обычному и агрессивным патотипам рака (Камераз, 1973, Салтыкова и др, 1973, Горбатенко, 2006)

Кроме этого, полученные результаты позволяют выделить 4 клона сложных межвидовых гибридов картофеля, обладающих групповой устойчивостью к ряду патогенов Это устойчивые к раку образцы 97-159-3, которые также отличаются устойчивостью к фитофторозу листьев и клубней, Y вирусу и 99-10-1, 88-2, 94-5, которые также отличаются устойчивостью к нематоде, Y вирусу (Хютти и др , 2007) Такие образцы с групповой устойчивостью к патогенам и комплексом агрономически значимых признаков являются ценным исходным материалом для селекции

ВЫВОДЫ

1 Микроанализ почвы из 38 зарегистрированных карантинных очагов S endobioticum в Ленинградской области показал, что в Подпорожском и Всеволожском районах Ленинградской области 11 очагов содержат от 31 до 116 жизнеспособных зимних зооспорангиев патогена в 1 г почвы, что является оптимальным для заражения возбудителем рака картофеля В этих очагах не следует возделывать даже устойчивые сорта картофеля, так как высокая инфекционная нагрузка представляет потенциальную опасность для появления более агрессивных рас В Бокситогорском, Подпорожском и Кировоском районах Ленинградской области при микроанализе зараженной почвы, отобранной из 13 карантинных очагов, было выявлено от 3 до 8 жизнеспособных зооспорангиев в 1 г почвы Для вышеуказанных очагов необходимо строгое соблюдение комплекса карантинных правил, предотвращающих распространение S endobiottcum Возбудитель рака картофеля не выявлен в д Низовская Лужского района Данный очаг можно считать свободным от S endobiottcum и согласно Российскому законодательству он может быть выведен из-под регламента контроля

2 Разработан метод молекулярной диагностики возбудителя S endobiottcum в почвенных образцах, который отличается от известных тем, что ДНК паразита экстрагировалась, во время денатурации в первом цикле ПЦР из целых зооспорангиев, помещенных до этого непосредственно в реакционную смесь

3 Молекулярная диагностика вида S endobwticum с использованием спе-

цифических праимеров в основном подтвердила данные микроанализа почвы Показано, что ДНК зооспорангиев морфологически сходных с видом S endobioticum из четырех карантинных очагов, расположенных в Киришском и Кировском районах Ленинградской области, не амплифицировалась с видос-пецифичными праймерами, что'позволяет отнести их к другим видам р Syn-chitnum

4 При внутривидовой идентификации патотипного состава трех географически отдаленных популяций (московской, белорусской и украинской) возбудителя рака картофеля на объединенном наборе из 20 сортов-дифференциаторов было установлено, что все популяции принадлежат к первому (D1) патотипу Несмотря на это, выявлена их различная агрессивность по отношению к восприимчивым сортам картофеля Только московская популяция поражала все восприимчивые сорта (Лиза, Лорх, Полесский розовый, Тулунский, Альма и Свитанок киевский) не менее, чем на 80% Агрессивность белорусской и украинской популяций была достоверно ниже к восприимчивым сортам картофеля Альма и Свитанок Киевский

5 Показано, что ДНК, выделенная из раковых наростов состоит из ДНК патогена и растения-хозяина, что затрудняет генотипирование ДНК S endobioticum Увеличение доли ДНК патогена было достигнуто использованием в процессе ее выделения отдельных зооспорангиев, полученных из раковых наростов Подобраны оптимальные условия получения ДНК и ее очистки, с использованием абразивных керамических сфер для механического разрушения оболочек зооспорангиев на приборе Fast-Prep 24

6 Выявлено генетическое разнообразие изолятов, принадлежащих к первому патотипу С помощью молекулярных методов генотипирования (RAPD и УП-ПЦР) выявлены существенные генетические различия как между индивидуумами паразита внутри популяций, так и между популяциями

7 При оценке 84 клонов сложных межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ РФ ВНИИР на устойчивость к возбудителю рака картофеля выделено семь высокоустойчивых к S endobioticum образцов, полученных от скрещивания клона Solanum chacoense 19759 с образцами S okadae и сортом Bobr, что свидетельствует о донорской способности данного клона в передаче признака устойчивости

8 Выделены 4 клона сложных межвидовых гибридов картофеля, обладающих групповой устойчивостью к ряду патогенов Образец 97-159-3 отличался устойчивостью к раку, фитофторозу листьев и клубней и Y вирусу, образцы 99-10-1, 88-2, 94-5 были устойчивы к раку, нематоде, Y вирусу

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для инспекции по карантину растений даны рекомендации по регистрации очагов рака картофеля в Ленинградской обл Количество инокулюма в 11 очагах рака в Подпорожском и Всеволожском районах является оптимальным для заражения возбудителем рака картофеля В этих очагах не следует возделывать даже устойчивые сорта картофеля, так как высокая инфекционная

нагрузка представляет потенциальную опасность для появления более агрессивных рас В Бокситогорском, Подпорожском и Кировоском районах Ленинградской области, в 13 карантинных очагах, необходимо строгое соблюдение комплекса карантинных правил, предотвращающих распространение S endobioticum Очаг в д Низовская Лужского района может быть выведен из-под регламента контроля

Для карантинных лабораторий и научно-исследовательских учреждений предложен метод молекулярной диагностики возбудителя S endobioticum в почвенных образцах Данные по агрессивности московской, белорусской и украинской популяций S endobioticum могут быть использованы при подборе инокулюма для оценки сортов и гибридов картофеля и выборе универсально восприимчивого контроля

Для практической селекции могут быть рекомендованы образцы картофеля с групповой устойчивостью к раку, нематоде, Y вирусу 99-10-1, 88-2, 94-5, к раку, фитофторозу листьев и клубней, Y вирусу - образец 9-159-3 Клон 5 chacoense 19759 может служить донором устойчивости к S endobioticum

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Хютти А В Рак картофеля снова требует внимания / А В Хютти, Н М Коваленко // Защита и карантин растений - 2008 - № 5. - С 43

2 Khyutti А V Distribution of potato wart m Leningrad region of Russia / A V Khyutti // Root soil microbe interaction Second symposium of the AgroBiotec Network - Hamburg, 2006 - P 33

3 Khyutti A V Virulence of population samples of Synchytrium endobioticum (Schilb) Perc from Moscow Region, Ukraine and Belarus to the set of potato differentials / A V Khyutti // Evolution of plant-microbe interactions Meeting of the research consortium - Samt-Petersburg, 2007 - P 86

4 Хютти А В Анализ популяций возбудителя рака картофеля с использованием молекулярных маркеров / А В Хютти, Н В Мироненко, О С. Афана-сенко // Актуальные проблемы иммунитета и защиты сельскохозяйственных культур от болезней и вредителей Тез междунар. науч -практич конференции - Одесса, 2007 - С 33

5 Хютти А В Исходный материал для селекции картофеля на групповую устойчивость к патогенам / А В Хютти, Л А Гуськова, М В Патрикеева, Л П Козлов, Е В Рогозина // Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке Состояние, проблемы, перспективы Тез докладов - СПб, 2007 - С 625-626

6 Мироненко Н В Структура популяций возбудителя рака картофеля по ДНК маркерам и вирулентности / Н В Мироненко, A.B. Хютти, О С Афана-сенко // Современная микология России Тез докладов 2-го съезда микологов России - М, 2008 - Т 2 - С 195-196

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Хютти, Александр Валерьевич

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Распространение и вредоносность возбудителя рака картофеля

1.2. Биологические особенности возбудителя рака картофеля

1.2.1. Таксономия возбудителя

1.2.2. Морфология возбудителя

1.2.3. Симптоматика болезни

1.2.4. Цикл развития возбудителя рака картофеля

1.2.5. Биологическая специализация возбудителя

1.2.6. Эпидемиология возбудителя

1.3. Методы выявления, диагностики и определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля

1.3.1. Сравнительный анализ методов выявления БупсЬуЫит епйоЫойсит из почвы

1.3.2. Сравнительный анализ методов определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля

1.3.3. Молекулярная диагностика возбудителя рака картофеля

1.3.3.1. ПЦР диагностика возбудителя рака картофеля в почве

1.3.3.2. Метод ПЦР диагностики возбудителя рака картофеля в ростках восприимчивых сортов картофеля

1.4. Структура популяции БупскуМит епс1оЫойсит

1.4.1. Сорта-дифференциаторы, используемые для внутривидовой дифференциации патотипов возбудителя рака картофеля

1.4.2. Гетерогенность популяции возбудителя рака картофеля

1.5. Устойчивость картофеля к ЗупсЬуЬгшт епйоЫойсит

1.5.1. Источники и доноры устойчивости к возбудителю рака картофеля

1.5.2. Методы лабораторной диагностики устойчивости картофеля к БупскуМит епйоЫоИсит

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Растительный и инфекционный материал, использованный в экспериментальной работе

2.2. Методы выявления возбудителя рака картофеля

2.2.1. Законодательство

2.2.2. Методика отбора почвенных проб из зарегистрированных очагов рака картофеля в Ленинградской области

2.2.3. Микроанализ почвы на выявление зимних (покоящихся) зооспорангиев возбудителя рака картофеля

2.2.4. Лабораторный метод биологической проверки почвы на наличие возбудителя рака картофеля

2.3. Методы лабораторной диагностики устойчивости картофеля к Synchytrium endobioticum

2.3.1. Законодательство •

2.3.2. Заражение ростков картофеля в "компосте", содержащем зимние (покоящиеся) зооспорангии Synchytrium endobioticum

2.3.3. Заражение ростков картофеля от свежих раковых наростов, содержащих быстропрорастающие летние зооспорангии

2.4. Методика выделения ДНК из растения-хозяина и раковых наростов различных географических популяций Synchytrium endobioticum для последующего молекулярно-генетического анализа

Глава 3. Распространение возбудителя рака картофеля в Ленинградской области Российской Федерации

3.1. Выявление возбудителя рака картофеля в почвенных образцах, отобранных из зарегистрированных карантинных очагов, экспресс-методом

3.2. Биологическая проверка почвы, отобранной из зарегистрированных карантинных очагов в Ленинградской области, на наличие возбудителя рака картофеля

Глава 4. Разработка метода ПЦР диагностики зимних (покоящихся) зооспорангиев Synchytrium endobioticum, экстрагированных из почвенных образцов экспресс-методом

4.1. Отработка методических приемов проведения видоспецифичной ПЦР с единичными зимними зооспорангиями S. endobioticum

4.2. Проведение видоспецифичной ПЦР с зимними зооспорангиями S. endobioticum, экстрагированными из почвенных образцов экспресс-методом

Глава 5. Изменчивость географических популяций возбудителя рака картофеля

5.1. Идентификация патотипного состава географических популяций Synchytrium endobioticum на объединенном наборе сортов-дифференциаторов

5.2. Сравнительный анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров

5.2.1. Сравнительный молекулярно-генетический анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров

5.2.2. Отработка методических приемов получения ДНК из зимних зооспорангиев S. endobioticum для последующего молекулярно-генетического анализа

Глава 6. Оценка межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ

РФ ВНИИР на устойчивость к Synchytrium endobioticum

Выводы

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Мониторинг популяций возбудителя рака картофеля и выявление источников устойчивости"

Возбудитель рака картофеля ЗупскуМит епйоЫоИсит (БскИЬ.) Регс. — является карантинным объектом, включенным в перечень карантинных видов 55 государств (Распространение по странам мира., 1987). Широкая географическая распространенность, способность длительное время сохраняться в почве, трудность искоренения и образование новых, приспособившихся к местным условиям агрессивных патотипов, свидетельствуют о высокой пластичности и большой опасности возбудителя рака картофеля.

Потери урожая в очагах рака картофеля могут составлять 50-100% (НашрБОП, 1993; Ме1шк, 1998). Например, в 1967 году в Ленинградской области на отдельных зараженных приусадебных участках потери урожая картофеля составили 45-96% (Тарасова, 1978).

На территории Российской Федерации первые очаги заболевания были зарегистрированы в Ленинградской области в 1940 году общей площадью заражения 1,4 га (Галанова, 1964). В Ленинградской области основное количество очагов рака находится на приусадебных участках, где выращивались восприимчивые к заболеванию сорта картофеля (Справочник., 2001, 2003, 2006). На 2006 год в Ленинградской области возбудитель рака картофеля зарегистрирован в 9-ти районах общей площадью заражения 8,75 га (Справочник., 2006).

В настоящее время в районах, где имеются очаги рака, должны выращиваться только высокоустойчивые к епйоЫойсит сорта картофеля, которые способствуют очищению почвы от патогена. Российское законодательство в сфере карантина растений разрешает выращивание в очагах & епйоЫойсит вне зависимости от степени инфекционной нагрузки любые устойчивые сорта картофеля и любые сельскохозяйственные культуры (Тарасова, 1978; Инструкция., 1988). Стоит отметить, что вывоз выращиваемой сельскохозяйственной продукции, а также картофеля из очагов рака, должным образом не контролируется и, более того, не известно, какие сорта (по степени устойчивости) выращиваются на карантинных участках.

В настоящее время необходимо проведение комплексного мониторинга карантинных очагов S. endobioticum, расположенных на территории Ленинградской области. Выявление возбудителя рака картофеля в зарегистрированных очагах, особенно при малой зараженности почвы, представляет определенную трудность, т.к. стандартная процедура отбора почвенных проб, а также стандартные методы ракодиагностики не дают 100% экстрагируемости зооспорангиев из почвы (Ефременко и др., 1985; Зеля и др., 2005; van Leeuwen et al., 2005).

Помимо этого, определенную трудность представляет анализ почвы на выявление зооспарангиев возбудителя рака картофеля, потому что необходимо отличать покоящиеся зооспорангии S. endobioticum от покоящихся зооспорангиев сходных видов рода Synchytrium. В 1977 году на территории бывшего СССР было зарегистрировано 22 вида из рода Synchytrium, причем 13 из них были распространены в Российской Федерации, главным образом, в Ленинградской и Московской областях (Кирюхина и др., 1977).

Таким образом, очевидно, что в настоящее время остро стоит проблема по созданию эффективного метода диагностики единичных зимних (покоящихся) зооспорангиев S. endobioticum.

Современная селекция картофеля ориентирована на получение сортов, сочетающих высокую продуктивность с устойчивостью к наиболее опасным патогенам. Обязательным требованием для включения в реестр селекционных достижений новых сортов картофеля является устойчивость к возбудителю рака. Создание сортов с групповой устойчивостью, в том числе и к раку, крайне важно в системе защиты картофеля.

Помимо этого, для создания высокоустойчивых сортов картофеля к S. endobioticum, необходимо четко представлять внутривидовой состав популяции патогена, даже в пределах обычного (01) патотипа, географически отдаленные популяции возбудителя рака картофеля отличаются по агрессивности к восприимчивым сорта картофеля (Воловик и др., 1968, 1975; Федотова, 1959; Федотова и др., 1969; Бондарь, 1989; Данченко, 1983, 1989; Ламеко и др., 1991). Молекулярно-генетические исследования, которые могли бы служить основой для изучения микроэволюционных процессов в популяциях патогена, до настоящего времени не проводились.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось выявление возбудителя рака картофеля в зарегистрированных карантинных очагах Ленинградской области, характеристика географических популяций Я. епс1оЫоисит по вирулентности, агрессивности, ДНК-маркерам, а также выявление источников устойчивости картофеля.

Для достижения данной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Провести мониторинг зарегистрированных карантинных очагов Я. епс1оЫоисит в Ленинградской области.

2. Разработать метод молекулярной диагностики возбудителя рака картофеля в почвенных образцах.

3. Провести идентификацию патотипного состава географических популяций епйоЫойсит и охарактеризовать их агрессивность по отношению к восприимчивым сортам картофеля.

4. Провести сравнительный анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров.

5. Оценить устойчивость к & епс1оЫоисит сложных межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ РФ ВНИИР.

Научная новизна исследований.

1. Впервые проведено молекулярное генотипирование 4-х образцов популяций & епЛоЫоИсит из Московской и Ленинградской областей, а также из Белоруссии и Украины методами RAPD и УП-ПЦР. Выявлены генетические различия между индивидуумами паразита внутри популяции, а также различия между популяциями.

2. Разработан метод молекулярной диагностики возбудителя S. endobioticum в почвенных образцах, который отличается от известных тем, что ДНК паразита экстрагировалась, во время денатурации в первом цикле ПЦР из целых зооспорангиев, помещенных до этого непосредственно в реакционную смесь.

3. Выявлена донорская способность клона Solanum chacoense 19759 в передаче признака устойчивости к S. endobioticum потомству.

Практическая значимость работы. На основании мониторинга популяций возбудителя рака картофеля в Ленинградской области определена степень жизнеспособности S. endobioticum в зарегистрированных очагах рака. Эти сведения необходимы для вывода карантинных очагов из-под регламента контроля РОССЕЛЬХОЗНАДЗОРа. Предложен метод молекулярной диагностики возбудителя S. endobioticum в почвенных образцах.

Данные по агрессивности московской, белорусской и украинской популяций S. endobioticum могут быть использованы при подборе инокулюма для оценки сортов и гибридов картофеля и выборе универсально восприимчивого контроля.

Для практической селекции выявлены устойчивые к раку сложные гибриды картофеля, обладающие также устойчивостью к нематоде, фитофторозу и Y вирусу (Хютти и др., 2007).

Апробация работы и публикации результатов исследования. Результаты исследований были представлены на втором симпозиуме по агробиотехнологии: "Взаимоотношения почвенных микроорганизмов и растений" (Гамбург, 2006); на совещании: "Исследование эволюции взаимоотношений растений и микроорганизмов" (Санкт-Петербург, 2007); на международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы иммунитета и защиты сельскохозяйственных культур от болезней и вредителей" (Одесса, 2007); на II Вавиловской международной конференции "Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке. Состояние, проблемы, перспективы" (Санкт-Петербург, 2007); на годичной отчетной сессии ГНУ ВИЗР (Санкт-Петербург, 2008); на II съезде микологов России "Современная микология России" (Москва, 2008).

Материалы исследований опубликованы в 6 печатных работах, из них 1 опубликована в рецензируемом журнале из перечня ВАК РФ.

Работа поддержана грантом РФФИ № 08-04-00447

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 225 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 32 рисунками и 23 таблицами. Библиография включает 338 источников, из них 190 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Хютти, Александр Валерьевич

ВЫВОДЫ

1. Микроанализ почвы из 38 зарегистрированных карантинных очагов S. endobioticum в Ленинградской области показал, что в Подпорожском и Всеволожском районах Ленинградской области 11 очагов содержат от 31 до 116 жизнеспособных зимних зооспорангиев патогена в 1 г почвы, что является оптимальным для заражения возбудителем рака картофеля. В этих очагах не следует возделывать даже устойчивые сорта картофеля, так как высокая инфекционная нагрузка представляет потенциальную опасность для появления более агрессивных рас. В Бокситогорском, Подпорожском и Кировоском районах Ленинградской области при микроанализе зараженной почвы, отобранной из 13 карантинных очагов, было выявлено от 3 до 8 жизнеспособных зооспорангиев в 1 г почвы. Для вышеуказанных очагов необходимо строгое соблюдение комплекса карантинных правил, предотвращающих распространение S. endobioticum. Возбудитель рака картофеля не выявлен в д. Низовская Лужского района. Данный очаг можно считать свободным от S. endobioticum и согласно Российскому законодательству он может быть выведен из-под регламента контроля.

3. Молекулярная диагностика вида S. endobioticum с использованием специфических праймеров в основном подтвердила данные микроанализа почвы. Показано, что ДНК зооспорангиев морфологически сходных с видом S. endobioticum из четырех карантинных очагов, расположенных в Киришском и Кировском районах Ленинградской области, не амплифицировалась с видоспецифичными праймерами, что позволяет отнести их к другим видам р. Synchitrium.

4. При внутривидовой идентификации патотипного состава трех географически отдаленных популяций (московской, белорусской и украинской) возбудителя рака картофеля на объединенном наборе из 20 сортов-дифференциаторов было установлено, что все популяции принадлежат к первому (D1) патотипу. Несмотря на это, выявлена их различная агрессивность по отношению к восприимчивым сортам картофеля. Только московская популяция поражала все восприимчивые сорта (Лиза, Лорх, Полесский розовый, Тулунский, Альма и Свитанок киевский) не менее, чем на 80%. Агрессивность белорусской и украинской популяций была достоверно ниже к восприимчивым сортам картофеля Альма и Свитанок Киевский.

5. Показано, что ДНК, выделенная из раковых наростов состоит из ДНК патогена и растения-хозяина, что затрудняет генотипирование ДНК S. endobioticum. Увеличение доли ДНК патогена было достигнуто использованием в процессе ее выделения отдельных зооспорангиев, полученных из раковых наростов. Подобраны оптимальные условия получения ДНК и ее очистки, с использованием абразивных керамических сфер для механического разрушения оболочек зооспорангиев на приборе Fast-Prep 24.

6. Выявлено генетическое разнообразие изолятов, принадлежащих к первому патотипу. С помощью молекулярных методов генотипирования (RAPD и УП-ПЦР) выявлены существенные генетические различия как между индивидуумами паразита внутри популяций, так и между популяциями.

7. При оценке 84 клонов сложных межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ РФ ВНИИР на устойчивость к возбудителю рака картофеля выделено семь высокоустойчивых к S. endobioticum образцов, полученных от скрещивания клона Solanum chacoense 19759 с образцами S. okadae и сортом Bobr, что свидетельствует о донорской способности данного клона в передаче признака устойчивости.

8. Выделены 4 клона сложных межвидовых гибридов картофеля, обладающих групповой устойчивостью к ряду патогенов. Образец 97-159-3 отличался устойчивостью к раку, фитофторозу листьев и клубней и У вирусу; образцы 99-10-1, 88-2, 94-5 были устойчивы к раку, нематоде, У вирусу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для инспекции по карантину растений даны рекомендации по регистрации очагов рака картофеля в Ленинградской обл. Количество инокулюма в 11 очагах рака в Подпорожском и Всеволожском районах является оптимальным для заражения возбудителем рака картофеля. В этих очагах не следует возделывать даже устойчивые сорта картофеля, так как высокая инфекционная нагрузка представляет потенциальную опасность для появления более агрессивных рас. В Бокситогорском, Подпорожском и Кировоском районах Ленинградской области, в 13 карантинных очагах, необходимо строгое соблюдение комплекса карантинных правил, предотвращающих распространение 8. епсЬЫойсшп. Очаг в д. Низовская Лужского района может быть выведен из-под регламента контроля.

Для карантинных лабораторий и научно-исследовательских учреждений предложен метод молекулярной диагностики возбудителя & егкЗоЫоИсит в почвенных образцах. Данные по агрессивности московской, белорусской и украинской популяций епЛоЫоИсит могут быть использованы при подборе инокулюма для оценки сортов и гибридов картофеля и выборе универсально восприимчивого контроля.

Для практической селекции могут быть рекомендованы образцы картофеля с групповой устойчивостью к раку, нематоде, У вирусу: 99-10-1, 88-2, 94-5; к раку, фитофторозу листьев и клубней, У вирусу - образец 9-1593. Клон & скасоете 19759 может служить донором устойчивости к епс1оЬюИсит.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Хютти, Александр Валерьевич, Санкт-Петербург, Пушкин

1. Анисимов Б.В. Сортовые ресурсы и передовой опыт семеноводства картофеля / Б.В. Анисимов. М.: Росинформагротех, 2000. - 150 с.

2. Анисимов Б.В. Сортовые ресурсы и качество семенного картофеля / Б.В. Анисимов. М.: Наука, 2001.

3. Бирюкова В.А. ДНК-диагностика устойчивости к раку картофеля (возбудитель Synchytrium endobioticum) / В.А. Бирюкова, B.C. Зайцев, Э.Е. Хавкин, Л.М. Хромова // Доклады Российской академиисельскохозяйственных наук. 2005. № 1. - С. 19-21.

4. Бондаренко Э.Е. Результаты изучения степени устойчивости картофеля к возбудителю рака Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / Э.Е. Бондаренко // Труды ВИЗР. 1973. - Вып. 36. - С. 95-97.

5. Бондаренко Э.Е. Об источниках групповой устойчивости к раку / Э.Е. Бондаренко, Л.П. Салтыкова // Генетика, селекция и исходный материал картофеля (сборник научных трудов по прикладной ботанике, генетике и селекции). 1987. - Том 115. - С. 92-94.

6. Бондарь A.C. Внутривидовая неоднородность возбудителя рака картофеля / A.C. Бондарь // Защита растений. 1989. - № 9. - С. 36-37.

7. Бордукова М.В. Болезни и вредители картофеля / М.В. Бордукова. М.: Московский рабочий, 1950. - 131 с.

8. Булат С.А. ДНК-полиморфизм фитопатогенных грибов Pyrenophora teres Drechsler, и Pyrenophora gramínea Ito and Kurib. / С.А. Булат, H.B. Мироненко // Генетика. 1989. - Т. 25. - С. 838-850.

9. Владимирская H.H. Пленочный метод определения зараженности супесчаных почв возбудителем рака картофеля Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / H.H. Владимирская. Л., 1952. - 7 с.

10. Владимирская H.H. Определение возбудителя рака картофеля / H.H. Владимирская. Л.: Сельхозгиз, 1954. - 16 с.

11. Воловик A.C. Метод выявления покоящихся зооспорангиев возбудителя рака картофеля / A.C. Воловик, Т.А. Милославова // Инструктивные указания по карантину растений. М.: Колос, 1966. - С. 1-7.

12. Воловик A.C. Как обнаружить возбудителя рака картофеля / A.C. Воловик, Т.А. Милославова // Картофель и овощи. 1967. № 7. - С. 40-42.

13. Воловик A.C. О паразитической активности возбудителя рака картофеля / A.C. Воловик, Т.А. Милославова // Труды НИИКХ. М: ВНИЭСХ, 1968. - Вып. 5. - С. 173-176.

14. Воловик A.C. Изучение паразитической активности возбудителя рака картофеля в РСФСР / A.C. Воловик, А.И. Никитина // Селекция и семеноводство картофеля. М, 1975. - Вып. XXI. - С. 140-144.

15. Галанова Ц.С. Распространение и вредоносность возбудителя рака картофеля / Ц.С. Галанова // Рак картофеля и меры борьбы с ним. JL: Колос, 1964. - С. 5-22.

16. Голик И.В. Методика выделения и фракционирования зооспорангиев возбудителя рака картофеля Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / И.В. Голик // Труды ВИЗР. 1973. - Вып. 36. - С. 112-116.

17. Голик И.В. Методы анализа почвенных проб на выявление возбудителя рака картофеля / И.В. Голик // Методы диагностики карантинных болезней. -М., 1985.-С. 65-68.

18. Голик И.В. Способ определения зараженности почвы возбудителем рака картофеля / И.В. Голик, Б.Б. Громова. Авторское свидетельство № 533633. 1976.

19. Голик И.В. Методы определения зараженности почвы возбудителем рака картофеля / И.В. Голик, Б.Б. Громова // Карантин растений (Методические материалы). 1979. - Вып. 28. - С. 39-40.

20. Голик И.В. Способ определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля / И.В. Голик, В.Ф. Кузьмич. Авторское свидетельство № 571515. -1977.

21. Горбатенко JI.E. Виды картофеля Южной Америки / JI.E. Горбатенко // Экология, география, интродукция, систематика, селекционная значимость. -СПб: ВИР, 2006.-С. 215.

22. Горленко C.B. Биология возбудителя рака картофеля / C.B. Горленко, H.A. Дорожкин // Рак картофеля. Киев: Издательство Академии наук Украинской ССР, 1957. - С. 17-26.

23. Данченко М.И. Изучение изменчивости гриба Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / М.И. Данченко // Защита растений. Минск: Ураджай, 1983. -Вып. 8. - С. 74-78.

24. Данченко М.И. Биологические особенности обычной расы возбудителя рака картофеля различного географического происхождения / М.И. Данченко II Защита растений. Минск: Ураджай, 1989. - Вып. XIV. - С. 32-35.

25. Дмитращук В.Е. Методы ракодиагностики / В.Е. Дмитращук, О.П. Романюк // Защита растений. 1999. - № 10.-С.39.

26. Долягин А.Н. Кинетические исследования величины сигнала ЭПР у гриба Synchytrium endobioticum при его инактивации / А.Н. Долягин, А.И. Никитина, В.М. Капустина, A.C. Воловик // Труды НИИКХ. 1980а. - Вып. 36. - С. 79-84

27. Долягин А.Н. К оценке жизнеспособности возбудителя рака картофеля / А.Н. Долягин, Г.Г. Симонян, А.И. Никитина, Э.К. Решетова, A.C. Воловик // Культура картофеля в различных почвенно-климатических зонах (научные труды). 19806. - Вып. 35. - С. 93-100.

28. Дорожкин H.A. Методика определения жизнеспособности зимних зооспорангиев возбудителя рака картофеля Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) / H.A. Дорожкин, C.B. Горленко. Минск: Типография издательства АН БССР, 1951а. - Юс.

29. Дорожкин H.A. Определение жизнеспособности зимних зооспорангиев возбудителя рака картофеля / H.A. Дорожкин, C.B. Горленко // Известия Академии наук Белорусской ССР. 19516. - № 6. - С. 57-60.

30. Дорожкин H.A. Определение жизнеспособности зимних зооспорангиев возбудителя рака картофеля Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) / H.A.

31. Дорожкин, C.B. Горленко // Доклады АН СССР. 1952. - Том 82. - № 3. - С. 489-492.

32. Дорожкин H.A. Инструкция по определению зараженности почвы раком картофеля (Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) / H.A. Дорожкин, К.Е. Шариков. Минск, 1950. - 8 с.

33. Дорожкин H.A. Инструкция по анализу почвы для выявления очагов картофельного рака / H.A. Дорожкин, К.Е. Шариков. Минск, 1951. - 19 с.

34. Ефременко Т.С. Изменчивость паразитических свойств Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. под влиянием растения-хозяина / Т.С. Ефременко // Труды V Всесоюзного совещания по иммунитету растений. Киев, 1969а. -Вып. 9. - С. 43-47.

35. Ефременко Т.С. Агрессивные расы возбудителя рака картофеля / Т.С. Ефременко // Защита растений. 1982. - № 1. - С. 40.

36. Ефременко Т.С. Методы определения жизнеспособности зооспорангиев рака картофеля / Т.С. Ефременко, В.А. Яковлева // Защита растений. 1983. - № 2. - С. 39.

37. Ефременко Т.С. Методы выявления из почвы возбудителя рака картофеля / Т.С. Ефременко, В.А. Яковлева // Методы диагностики карантинных болезней. М., 1985. - С. 30-40.

38. Зеля А.Г. Декларацшний патент на винахщ № 34865А, МКВ А 01 НЗ/00. Cnoci6 видшення зооспоранги'в збудника раку картоши Synchytrium endobioticum з грунту № 99074027/8218. Заявл. 13.07.1999, опубл. 15.03.2001 /

39. A.Г. Зеля, П.О. Мельник // Офщшний бюлетень. Промислова власшсть, 2001а. № 2. - Частина 2. - С. 14.

40. Зеля А.Г. Cnoci6 виявлення збудника раку картоши / А.Г. Зеля, П.О. Мельник // Аграрна наука. 20016. - Вып. 4. - С. 17.

41. Зеля А.Г. Селекционный отбор к раку сортов картофеля / А.Г. Зеля, О.П. Романюк, П.А. Мельник // Первая Всероссийская конференция по иммунитету растений к болезням и вредителям. С-Пб.: RIZO-печать, 2002. -С. 189-190.

42. Иванюк В.Г. Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков /

43. B.Г. Иванюк, С.А. Банадысев, Г.К. Журомский. Минск: Марлит, 2003. - 526 с.

44. Иванюк В.Г. Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков / В.Г. Иванюк, С.А. Банадысев, Г.К. Журомский. Минск: Белпринт, 2005. -714 с.

45. Инструкция по выявлению рака картофеля и мерам борьбы с ним / Сост. Т.П. Петропавловская, Т.С. Ефременко, В.П. Тарасова, Л.П. Салтыкова. М.: Агропромиздат, 1988. - 56 с.

46. Камераз А.Я. Выведение сортов картофеля, устойчивых к раку / А.Я. Камераз // Основы селекции картофеля. М.: Госиздат, 1959.

47. Камераз А.Я. Межвидовая и межсортовая гибридизация картофеля / А.Я. Камераз // Генетика картофеля. М.: Наука, 1973. С. 104-121.

48. Камераз А.Я. Генетика устойчивости картофеля к патогенам / А.Я. Камераз, И.М. Яшина, Н.П. Склярова // Генетика картофеля. -М.: Наука, 1973.- С. 175-233.

49. Карантинное фитосанитарное состояние Российской Федерации на 01. 01. 95 г. / Под ред. Б.И. Юдина, Н.В. Ганзина, A.M. Косенко, В.Е. Бадаева, Я.Б. Мордковича и др. М., 1995. - 90 с.

50. Касперович З.С. К биологии возбудителя рака картофеля Synchytrium endobioticum / З.С. Касперович // Научная конференция по защите растений. Тезисы докладов. Таллин. - 1960. - С. 88-98.

51. Каталог районированных сортов картофеля, овощных и бахчевых культур / Под ред. Н.П. Ковалева. М.: Главполиграфпром, 1965. - 238 с.

52. Каталог районированных сортов картофеля, овощных и бахчевых культур / Под ред. Н.П. Ковалева. М.: Главполиграфпром, 1966. - 261 с.

53. Каталог сортов, впервые предлагаемых к районированию с 1991 года, сортов и гибридов сельскохозяйственных культур. М.,1990. - Часть II. - 221 с.

54. Каталог сортов и гибридов картофеля, устойчивых к раку и фитофторозу (Отечественная селекция с 1979 по 1982 гг.). / Под ред. В.П. Тарасовой, М.В. Патрикеевой, Л.П. Салтыковой, В.Н. Неофитовой. Л.: ВИЗР, 1983. - 58 с.

55. Каталог сортов сельскохозяйственных культур, впервые районированных с 1973 года / Под ред. Р.Х. Резника. М.: Малоярославецкая городская типография, 1972. - 112 с.

56. Кирюхина Р.И. Диагностика видов рода ЗупсЬуШит распространенных на территории СССР / Р.И. Кирюхина, Л.П. Кузьмина, А.Г. Васильченко // Карантин растений. М.: Колос, 1977. - Вып. 3. - С. 16-21.

57. Костицин В.В. Карантинные болезни растений / В.В. Костицин, А.А. Тюрин. С.-Пб., 2002. - 88 с.

58. Кузьмина Л.П. Сравнительная оценка методов отбора и анализа почвенных проб К.Е. Шарикова и НИИКХ - на выявление рака картофеля / Л.П. Кузьмина // Карантин растений (Методические материалы). - 1972. -Вып. 4. - С. 24-29.

59. Лабораторная диагностика ракоустойчивости картофеля методом заражения ростков от свежих раковых наростов (методические указания) / Сост. В.И. Яковлева, Л.П. Салтыкова. М.: Тип. ВАСХНИЛ, 1979. - 8 с.

60. Лабораторно-вегетационный метод биологического контроля (биопроверки) зараженности почвы возбудителем рака картофеля (методические указания) / Сост. Е.Ф. Карасева. М: Тип. ВАСХНИЛ, 1983. -Юс.

61. Ламеко С.И. Усовершенствованная методика оценки картофеля на устойчивость к раку / С.И. Ламеко, Б.С. Толкачев // IX Всесоюзное совещание по иммунитету растений к болезням и вредителям. Минск: БелНИИНТИ, 1991. - Т. 2. - С. 229-230.

62. Мельник П.А. Экспресс-метод выявления возбудителя рака картофеля / П.А. Мельник, А.Г. Зеля // Защита растений. 1998а. - № 11. - С. 37.

63. Мельник П.А. Методика выявления очагов рака картофеля / П.А. Мельник, А.Г. Зеля // Защита растений. 2000а. - № 2. - С. 34

64. Мельник П.А. Перспективные ракоустойчивые сорта картофеля / П.А. Мельник, Е.Л. Малахова, В.Е. Дмитращук, О.П. Романюк // Защита растений. 1999а. -№3.- С. 37-38.

65. Мельник П.А. Дополнение к международному тест сортименту / П.А. Мельник, Е.Л. Малахова, H.A. Мовчан // Защита растений. - 19996. - № 5. - С. 24-25.

66. Мельник П.О. Етюлопя раку картош, бюеколопчне обгрунтування заход1в його профшактики та обмеження розвитку / Мельник П.О. Автореф. дисертацип на здобуття наукового ступеня доктора бюлопчних наук. Киев: Прут, 2005. - 36 с.

67. Мельник П. О. Швиддкий безпечний метод виявлення зооспорангй'в збудника раку картопл1 / П.О. Мельник, А.Г. Зеля // Аграрна наука. 19986. -Вып. 5. - С. 56-57.

68. Мельник П.О. Виявлення збудника раку картоши в агроценозах та вантажах (методичш рекомендацп) / П.О. Мельник, А.Г. Зеля, T.I. Мацьюв, М.О. Мовчан. Чершвщ, 20006. - 13 с.

69. Методические указания по испытанию картофеля на ракоустойчивость / Сост. Л.П. Салтыкова, В.П. Тарасова. Л.: Тип. ВИР, 1982. - 52 с.

70. Милославова Т.А. К методике определения зараженности почвы возбудителем рака картофеля и картофельной нематодой / Т.А. Милославова, A.C. Воловик, А.Б. Долягин // Труды НИИКХ. 1971. - Выпуск IX. - С. 135140.

71. Мурадян Л.А. Исходный материал для селекции картофеля на ракоустойчивость / Л.А. Мурадян // Технология возделывания, селекция и семеноводство полевых культур (Сборник научных трудов). 1981. - № 16. -С. 119-121.

72. Николаев А.Г. Руководство по досмотру и экспертизе растительных и других подкарантинных материалов А.Г. Николаев. М., 1972. - С. 248-250.

73. Обзор распространения карантинных вредителей, болезней и сорных растений в СССР на 1 января 1963 года / Под ред. И.А. Голубева. М.: Издат. сельскохозяйственной литер., журн. и плакатов, 1963. - 288 с.

74. Оценка сортов и гибридов картофеля на устойчивость к раку и глободерозу на совмещенном и раздельном фонах / Под ред. Д.Е. Портянкина, Б.С. Толкачева. Минск: ИВЦ Минфина, 2001. - С. 24.

75. Пидопличко Н.М. О раке картофеля и мерах борьбы с ним / Н.М. Пидопличко // Материалы объединенной научной сессии секции земледелия и секции защиты растений ВАСХНИЛ. Киев: Партиздат, 1957.

76. Пидопличко Н.М. Рак картофеля в Украинской ССР и борьба с ним / Н.М. Пидопличко // Rostlinnâ Vyroba. 1959. - Roc. 5. - С. 6. - С. 47-58.

77. Положение о порядке испытания сортов и гибридов картофеля на устойчивость к возбудителю рака картофеля (патотип I) и золотистой картофельной нематоде (патотип Ro I) / Под ред. В.А. Яковлевой, А.Б. Долягина. М.5 1993. - 10 с.

78. Ракович М.И. Наследование ракоустойчивости в потомстве при межсортовых и межвидовых скрещиваниях картофеля / М.И. Ракович // Материалы научно-технического совещания по картофелю. Минск: Звязда, 1958.-С. 71-76.

79. Распространение по странам мира карантинных для СССР вредителей, болезней растений и сорняков. М.: Госагропром, 1987. - 38 с.

80. Росс X. Селекция картофеля проблемы и перспективы / X. Росс - М.: Агропромиздат, 1989. - 184 с.

81. Садовникова В.И. Наследование ракоустойчивости / В.И. Садовникова // Картофель. 1956.- № 5. - С. 44-46

82. Салтыкова Л.П. обоснование подбора исходных форм для создания ракоустойчивых сортов картофеля / Л.П. Салтыкова // Рак картофеля и меры борьбы с ним. Л.: Колос, 1964а. - С. 50-61.

83. Салтыкова Л.П. О сортовых различиях картофеля по устойчивости к обычной и агрессивным расам возбудителя рака / Л.П. Салтыкова // Труды Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений. 1973. - Вып. 36. - С. 43-62.

84. Салтыкова Л.П. Ракоустойчивость картофеля и новые аспекты селекционно-генетического метода / Л.П. Салтыкова // VIII Международный конгресс по защите растений. 19756. - Том III. - С. 209-214.

85. Салтыкова Л.П. Об особенностях ракоустойчивости районированных в СССР сортов картофеля / Л.П. Салтыкова // Карантинные и другие опасные болезни растений. 1981. - Вып. 5. - С. 85-90.

86. Салтыкова Л.П. Дифференциация патотипов возбудителя рака картофеля / Л.П. Салтыкова // Защита растений. 1988. - № 11. - С. 37-38.

87. Салтыкова Л.П. Расы возбудителя рака картофеля и ракоустойчивость растений / Л.П. Салтыкова, A.C. Деревенко, В.И. Яковлева // Патологические новообразования у растений. Черноголовка: ОИКФ АН СССР, 1983. - С. 5768.

88. Салтыкова Л.П. Использование в селекции ракоустойчивого картофеля диких и культурных видов / Л.П. Салтыкова, В.И. Яковлева // Труды ВИЗР. -1973.-Вып. 36.-С. 63-71.

89. Салтыкова Л.П. Расы возбудителя рака картофеля Synchytrium endobioticum (Schilb.) Регс., выявленные в СССР и ЧССР / Л.П. Салтыкова, В.И. Яковлева // Микология и фитопатология. 1976. - Т. 10. - Вып. 6. - С. 503-507.

90. Середа Г.М. Потенциальная опасность рака картофеля Synchytrium endobioticum (Schilb.) Регс. / Г.М. Середа, М.И. Жукова // Защита растений. -2005.-Вып. 29.-С. 154-159.

91. Симаков Е.А. Сорта картофеля возделываемые в России / Е.А. Симаков, Б.В. Анисимов, Н.П. Склярова, И.М. Яшина, С.Н. Еланский // Ежегодное приложение к газете "Картофелевод". М.: "Знак почета", 2005. -112 с.

92. Сологуб О.С. Новий cnoci6 виявлення збудника раку картопл1 / О.С. Сологуб, П.А. Мельник // Аграрна наука. 2001. - Вып. 3. - С. 6.

93. Справочник по карантинному фитосанитарному состоянию Российской Федерации. 1999 г. / Под общей редакцией A.C. Васютина. М.: "Полтекс", 2000. - 120 с.

94. Справочник по карантинному фитосанитарному состоянию Российской Федерации на 1 января 2001 г. / Под общей редакцией A.C. Васютина. М.: "Северный Кавказ", - 2001. - 102 с.

95. Справочник по карантинному фитосанитарному состоянию Российской Федерации на 1 января 2003 г. / Под общей редакцией A.C. Васютина. М.: Репроцентр, 2003. - 104 с.

96. Справочник по карантинному фитосанитарному состоянию Российской Федерации на 1 января 2006 г. / Под редакцией М.И. Маслова. М., 2006.

97. Сурнакова Н.Е. Выделение нативных зооспорангиев Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / Н.Е. Сурнакова // Микология и фитопатология. -1982. Том 16. - Вып.4. - С. 313-314.

98. Сурнакова Н.Е. Определение жизнеспособности зооспорангиев возбудителя рака картофеля по их морфологическим, биохимическим и биофизическим особенностям / Н.Е. Сурнакова. Автореф. дис. на соиск. учен, степ. канд. биол. наук. М., 1984. - 23 с.

99. Сурнакова Н.Е. Фиксация зооспорангиев липкой лентой / Н.Е. Сурнакова, А.Б. Долягин, Т.А. Милославова // Защита растений. 1983. - № 3. - С. 36.

100. Сущинская E.H. Устойчивость к раку / E.H. Сущинская // Труды ДОТКЗНИИСХ. 1977. - T. XXIII. - С. 38-40.

101. Федотова Т.И. О биологии Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. и устойчивости сортов картофеля к раку / Т.И. Федотова // Rostlinnâ Vyroba.1959. Roc. 5. - С. 6. - С. 165-174.

102. Федотова Т.И. Определение жизнеспособности возбудителя рака картофеля / Т.И. Федотова // Защита растений от вредителей и болезней.1960.-№8.-С. 49.

103. Федотова Т.И. О зонах возможного распространения возбудителя рака картофеля / Т.И. Федотова // Бюллетень ВИЗР. 1970. - № 15. - С. 15-17.

104. Федотова Т.И. Роль сорта картофеля в изменении популяции Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / Т.И. Федотова, Ц.С. Галанова, И.А. Дорожкина // Труды V Всесоюзного совещания по иммунитету растений. -Киев, 1969. Вып. 9. - С. 19-22.

105. Федотова Т.И. Характеристика биотипов возбудителя рака картофеля в горно-карпатской зоне СССР / Т.И. Федотова, В.И. Яковлева // Рак картофеля и меры борьбы с ним. Д.: Колос, 1964. - С. 78-97.

106. Характеристики сортов растений, впервые включенных в 1995 году в государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию / Под редакцией В.Н. Алексашева. М.: Малоярославецкая городская типография, 1995. - 211 с.

107. Харитонова З.М., Тарасова В.П. Рак картофеля / З.М. Харитонова, В.П. Тарасова. Д.: Колос, 1971. - 48 с.

108. Хижняк П.А. К вопросу об изменчивости паразитизма возбудителя рака картофеля / П.А. Хижняк // Тезисы II совещания по раку картофеля и разработке мер борьбы с ним. Киев. 1957. - С. 41-44

109. Хижняк П.А. К вопросу об изменчивости паразитизма возбудителя рака картофеля картофеля / П.А. Хижняк // Рак картофеля. Киев: Издательство академии наук Украинской ССР, 1959. - С. 25-29

110. Хижняк П.А. Об агрессивных расах возбудителя рака картофеля / П.А. Хижняк, В.И. Яковлева // Защита растений от вредителей и болезней. М.: Сельхозиздат, 1962. - № 7. - С. 51.

111. Шариков К.Е. Методика определения зараженности почвы раком картофеля (Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) / К.Е. Шариков // Сборник научных трудов Института биологии Академии наук БССР. 1950. -Вып. 1.-С. 147-154.

112. Шариков К.Е. Как распознать живые и мертвые зооспорангии возбудителя рака картофеля / К.Е. Шариков. Минск, 1951а.

113. Шариков К.Е. Метод распознавания живых и мертвых зооспорангиев возбудителя картофельного рака / К.Е. Шариков // Сад и огород.- 19516. № 12. - С. 57-60.

114. Шариков К.Е. Выявление картофельного рака микроанализом (Методические указания) / К.Е. Шариков. Минск, 1954. - 24 с.

115. Шариков К.Е. О строении покоящихся спорангиев возбудителя рака картофеля и методах определения их жизнеспособности / К.Е. Шариков // Совещание по вопросам изучения рака картофеля и разработки мер борьбы с ним. Киев, 1955.

116. Шариков К.Е. Некоторые особенности покоящихся зооспорангиев Synchytrium endobioticum и методы определения их жизнеспособности / К.Е. Шариков // Рак картофеля. Киев: издательство академии наук Украинской ССР, 1957. - С. 42-50.

117. Яковлева В.А. Изучение жизнеспособности рака картофеля / В.А. Яковлева // Методы диагностики карантинных болезней. М., 1985. - С. 4158.

118. Яковлева В.А. Определение жизнеспособности, прогноз распространения, рака картофеля в СССР и разработка элементов комплексной системы борьбы с заболеванием / В.А. Яковлева. Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. М., 1986. - 22 с.

119. Яковлева В.И. О ракоустойчивости диких и культурных видов и форм картофеля / В.И. Яковлева // Второе совещание по раку картофеля и разработке мер борьбы с ним. Киев: Издат. Академ, наук Украинской ССР, 1957.-С. 64-67.

120. Яковлева В.И. Ракоустойчивость диких и культурных видов и форм картофеля / В.И. Яковлева // Рак картофеля. Киев: Издательство Академии наук Украинской ССР, 1959. - С. 108-117.

121. Яковлева В.И. Изменчивость возбудителя рака картофеля / В.И. Яковлева // Вестник сельскохозяйственной науки. М.: Сельхозиздат, 1961. -№ 12. - С. 72-75.

122. Яковлева В.И. Использование диких и культурных форм в селекции на ракоустойчивость / В.И. Яковлева // Сборник материалов Всесоюзного совещания по координации научных исследований в области картофелеводства. М.: МСХ СССР, 1963а. - С. 83-90.

123. Яковлева В.И. Изменчивость паразитической активности Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. при развитии на устойчиывых сортах / В.И. Яковлева // Рак картофеля и меры борьбы с ним. Л.: Колос, 1964а. - С. 98108.

124. Яковлева В.И. Использование диких и культурных видов при выведении ракоустойчивых сортов картофеля / В.И. Яковлева // Рак картофеля и меры борьбы с ним. JL: Колос, 19646. - С. 62-77.

125. Яковлева В.И. Агрессивные расы возбудителя рака картофеля, Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc., в СССР / В.И. Яковлева // Карантин растений (Методические указания). М.: Колос, 1972. - Вып. 4. - С. 29-32.

126. Яковлева В.И. Расовый состав возбудителя рака картофеля в СССР / В.И. Яковлева // Труды Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений. 1973. - Вып. 36. - С. 78-86.

127. Яковлева В.И. Расы возбудителя рака картофеля в СССР, их вирулентность и ареал / В.И. Яковлева // Проблемы онкологии и тератологии растений. Л.: Наука, 1975. - С. 384-387.

128. Яковлева В.И. Об агрессивности возбудителя рака картофеля / В.И. Яковлева, Л.П. Салтыкова // Защита растений. 1966. - № 7. - С.51.

129. Яковлева Н.Н. Об устойчивости сортов картофеля к заражению возбудителем рака / Н.Н. Яковлева // Тезисы докладов IV Всесоюзного совещания по иммунитету растений сельскохозяйственных растений. -Кишинев, 1965. С. 56-58.

130. Baayen R.P. New pathotypes of the potato wart fungus Synchytrium endobioticum threaten Dutch potato production / R.P. Baayen, G. Cochius, H.

131. Hendriks, G.C.M. van Leeuwen, J.P. Meffert, F.J.A. Janssen // Gewasbescherming. 2004a. - Vol. 35. - P. 160-167.

132. Baayen R.P. Diagnostic protocols for regulated pests, Synchytrium endobioticum / R.P. Baayen, H. Stachewicz. // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. -2004b.-Vol. 34.-P. 213-218.

133. Bai A.K. Ultrastructure and chemical analysis of the resting sporangium wall of Synchytrium endobioticum / A.K. Bal, A.M. Murphy, M.C. Hamposon // Can. J. Plant Pathol. 1981. - Vol.3. - P. 86-89.

134. Black W. Studies on the inheritance of resistance to wart disease {Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) in potatoes / W. Black // J. Genet. -1935.-Vol. 30. -P. 127.

135. Blattny C. Vorläufige Mitteilung über die Rassen des Kartoffelkrebses, Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / C. Blattny // Sbornik Ceske Akademie Zemedelske. 1942. - № 17. - S. 40-46.

136. Blattny C. Prispevek k poznäni a hodnoceni biotypu rakoviny brambor Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. a dalsi podnety k poznani teto choroby / C. Blattny // Rostlinnä Vyroba. 1959. - Roc. 5. - C. 6. - S. 117-120.

137. Bojnansky V. Sücasnä situacia vyskytov rakoviny zemiakov {Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) v Europe a ich analyza z hl'adiska ekologickeho / V. Bojnansky // Rostlinnä Vyroba. 1959. - Roc. 5. - C. 6. S. 13-30.

138. Bojnansky V. Prognöza vyskytov rozvoja a skodlivosti rakoviny zemiakovV

139. Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) v Ceskoslovensky / V. Bojnansky // Pol'nohospodarstvo. Bratislava. 1960a. - Roc. 7. - C. 2. - S. 129-140.

140. Bojnansky V. Rozvoy rakoviny zemiakov (<Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) v roznych podnych. typoch. / V. Bojnansky // Biologia. 1960b. -Vol. 25.-№3.-P. 211-217.

141. Bojnansky V. Potato Wart Pathotypes in Europe from the Ecological Point of View / V. Bojnansky // EPPO Bulletin. 1984. - Vol. 14. - № 2. - P.141-146.

142. Braun H. Biologische Spezialisierung bei Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / H. Braun // Zeitschr. Pflanzenkrank, u. Pflanzenschutz. 1942. -Bd. 52.-№ 11.-S. 481-486.

143. Braun H. Ressenbildung des Kartoffelkrebses {Synchytrium endobioticum) / H. Braun // Kartoffelbau. 1959a. - Bd. 10. - № 11. - S. 234-237.

144. Braun H. Die biologische Spezialisierung von Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / H. Braun // Rostlinnä Vyroba. 1959b. - Roc. 5. - C. 6. - S. 121130.

145. Browning I.A. A comparison of laboratory and field reactions of a range of potato cultivars to infection with Synchytrium endobioticum / I.A. Browning // Potato Research. 2005. - Vol. 38. - P. 281-289.

146. Browning I.A. The effect of inoculation on the reaction of potato cultivars to Synchytrium endobioticum / I.A. Browning, M. Darling // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 2005. - Vol. 35. - P. 483-487.

147. Bulat S. UP-PCR analysis and ITS1 ribotyping of strains of Trichoderma and Gliocladium /S. Bulat, M. Lübeck, N. Mironenko, D.F. Jensen, P.S. Lübeck// My col. Res. 1998. - Vol. 102. - P. 933-943.

148. Cakir E. First report of potato wart disease in Turkey / E. Cakir // Plant Pathology. 2005a. - Vol. 54. - № 4. - P. 584.

149. Cakir E. Potato wart disease survey in Turkey / E. Cakir // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 2005. - Vol. 35. - № 3. - P. 489-490.

150. Chen W. Restriction fragment length polymorphisms in enzymatically amplified ribosomal DNAs of three heterothallic Pythium species / W. Chen // Phytopathology. 1992. - Vol. 118. - P. 9-20.

151. Cotton A.D. Hosts plants of Synchytrium endobioticum / A.D. Cotton // R. Bot. Gardens. 1916. - P. 272-275.

152. Cullen D.W. Conventional PCR and real-time quantitative PCR detection of Helminthosporium solani in soils and on potato tubers / D.W. Cullen, A.K. Lees, I.K. Toth, J.M. Duncan // Europ. J. Plant Pathol. 2001. - Vol. 107. - P. 387-398.

153. Cullen D.W. Detection of Colletotrichum coccoides from soils and potato tubers by conventional PCR and quantitative real-time PCR / D.W. Cullen, A.K. Lees, I.K. Toth, J.M. Duncan // Plant Pathology. 2002. - Vol. 51. - P. 281-292.

154. Day J.P. Aggressiveness and other factors relating to displacement of populations of Phytophthora infestans in England and Wales / J.P. Day, R.C. Shattock // Europ. J. Plant Pathol. 1997. - Vol. 103. - P. 379-391.

155. Down G.J. Development of a PCR-based diagnostic test for Spongospora subterránea f. sp. nasturtii, the causal agent of crook root of watercress (Rorippa nasturtium-aquaticum) / G.J. Down, J.M. Clarkson // Plant Pathology. 2002. -Vol. 51.-P. 275-280.

156. EPPO. Report of the 2nd meeting of the EPPO Panel on potato wart disease // EPPO document no. 5205. 1982.

157. EPPO. Pest Quarantine Database, version 4.4. EPPO, Paris, 2005.

158. EPPO/CABI. Synchytrium endobioticum II 2nd edn. CAB International. -Wallingford, 1996.

159. EPPO/CABI. Quarantine Pests for Europe // 2nd edn. CAB International. -Wallingford, 1997.

160. Esmarch F. Nachtschattengewächse als Wirtspflanzen des Kartoffelkrebspilzes {Synchytrium endobioticum) / F. Esmarch II Angew. Bot. -1925.-Bd. 7.-S. 108-120.

161. Excoffier L. Analysis of molecular variance inferred from metric distances among DNA haplotypes: application to human mitochondrial DNA restriction sites / L. Excoffier, P. E. Smouse, J. M. Quattro // Genetics. 1992. - Vol. 131. - P. 479491

162. Felsenstein J. 'PHYLIP' phylogeny inference package version 3.6. -Cladistics, 1993.

163. Frandsen N.O. Züchtung auf Resistenz gegen Kartoffelkrebs / N.O. Frandsen // Handbuch der Pflanzenzüchtung. Barlin, Verlag Parey. 1958. - Bd. 3. - S. 83-88.

164. Frank G.D. Potato wart / G.D. Frank // APSnet Feature (The IR-4 Project Supplying Pest Management Tools for Specialty Crops for Over 40 Years). June 2007.

165. Frey F. Screening for resistance against the wart fungus Synchytrium endobioticum in potato seedlings with a modified Spickermann method / F. Frey // Pot. Res. 1980. - Vol. 23. - P. 303-310.

166. Ganguly A. Wart disease of potatos in India / A. Ganguly, D.K. Paul // Sci. and Cult. 1953. - Vol. 18. - № 12. - P. 605-606.

167. Glunne M.D. Infection experiments with wart disease of potatoes Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / M.D. Glunne // Annals of Applied Biology. 1925. - Vol. 12. - P. 34-60.

168. Glynne M.D. The viability of the winter sporangium of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc., the organism causing wart disease in potato / M.D. Glynne // Annals of Applied Biology. 1926. - № 13. - P. 19-36.

169. Gottschling W. Verbreitung der von der Rasse Dl, abweichenden Krebsrassen in DDR / W. Gottschling // Nachrichtenbl. Dtsch. Pflanzenschutzdienst (Berlin). 1961. - Bd. 15. - № 12. - S. 261.

170. Hampson M.C. Induction of secondary fluorescence on the resting sporangium of the potato wart disease fungus Synchytrium endobioticum (European race 2) / M.C. Hampson // Phytopathology. 1975. - Vol. 65. - P. 374379.

171. Hampson M.C. Wart / M.C. Hampson // Compendium of Potato Disease. -Minnesota, 1981. P. 36-37.

172. Hampson M.C. Sequence of events in the germination of the resting spore of Synchytrium endobioticum, European pathotype 2, the causal agent of potato wart disease / M.C. Hampson // Can. J. Plant Pathol. 1986. - Vol.64. - P. 2144-2150.

173. Hampson M.C. A bioassay for Synchytrium endobioticum using micropropagated potato plantlets / M.C. Hampson // Can. J. Plant Pathol. 1992. -Vol.14.-P. 289-292.

174. Hampson M.C. History, biology and control of potato wart disease in Canada / M.C. Hampson // Can. J. Plant Pathol. 1993. - Vol.15. - P. 223-244.

175. Hampson M.C. Pathogenesis of Synchytrium endobioticum: VIII. Effect of temperature and resting spore density (pathotype 2) on incidence of potato wart disease / M.C. Hampson, J.W. Coombers, K.B. McRae // Can. J. Plant Pathol. -1994a.-Vol.16.-P. 195-198.

176. Hampson M.C. Spatial distribution of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc., the cause of potato wart, in field soil / M.C. Hampson, J.W. Coombers // Plant Disease. 1996. - № 80. - P. 1006-1010.

177. Hampson M.C. Pathogenesis of Synchytrium endobioticum: Infecton responses in potato and tomato / M.C. Hampson, N.F. Haard // Can. J. Plant Pathol. 1980. - Vol.2. - P. 143-147.

178. Hampson M.C. Potato wart disease, its introduction to North America, distribution and control problems in Newfoundland / M.C. Hampson, K.G. Proudfoot // FAO Plant Protection Bulletin. 1974. - Vol. 22. - P. 53-64.

179. Hampson M.C. Distribution of fungal spores and fractal diversity of quadrats on membrane filters / M.C. Hampson, A. Robertson // Journal of Food Protection. 1995. - № 58. - P. 1038-1041.

180. Hampson M.C. A quantitative method to examine large numbers of soil samples for Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc., the causing of potato / M.C. Hampson, P.R. Thompson // Plant and soil. 1977. - № 46. - P. 659-664.

181. Hampson M.C. Ultrastructure of Synchytrium endobioticum resting spores and enhancement of germination using snails / M.C. Hampson, A.F. Yang, A.K. Bal //Mycologia. 1994b. - Vol.86. - № 6. - P. 733-739.

182. Hehl R. TMV resistance gene N homologues are linked to Synchytrium endobioticum resistance in potato / R. Hehl, E. Faurie, J. Hesselbach, F. Salamini, S. Witham // Theor. Appl. Genet. 1999. - Vol. 98. - P. 379-386.

183. Hendrickx G. An automatic apparatus for extracting free-living nematode stages from soils / G. Hendrickx // Nematologica. 1995. - № 41. - P. 308.

184. Hey A. Die Biotypenforschung beim Erreger des Kartoffelkrebses Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in Deutschland / A. Hey // Nachrichtenbl. Dtsch. Pflanzenschutzdienst (Berlin). 1948. - Bd. 2. - S. 1-3.

185. Hey A. Über die Verbreitung des Kartoffelkrebserregers Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. In den Landern der Demokratischen Republik / A. Hey // Nachrichtenbl. Dtsch. Pflanzenschutzdienst. 1950. - Bd. 4. - S. 93-96.

186. Hey A. Zur Biotypenfrage des Kartoffelkrebses. Mitt. / A. Hey // Biol. Zentralanst. f. Land- u. Forstwirtschaft (Berlin-Dahlem). 1953. - Bd. 75. - S. 173175.

187. Hey A. Stand und Aussichten der Pflanzenquarantäne im Kartoffelbau / A. Hey // Sitzungsber. Deutsch. Akad. Landwirtschaftswiss. 1954. - Bd. 3. - Heft 11.

188. Hey A. Zur Rassenanalyse des Kartoffelkrebses Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. Zeitschr. / A. Hey // Pflanzenkrankh. u. Pflanzenschutz. 1957. -Bd. 64. - S. 452-457.

189. Hey A. Die Kartoffelkrebsforschung in der Deutschen Demokratischen Republik und ihre praktische Auswertung / A. Hey // Sb. CSAZV Rostlinna vyroba, Prague. 1959. - Roc. 5. - С 6. - S. 59-68.

190. Hille M. Prüfung der zugelassen deutschen Kartoffelsorten auf ihre Resistenz gegen Krebs {Synchytrium endobioticum) / M. Hille // Biol. Bundesanst. f Land- u. Forstwirtschaft, Braunschweig. Jahresberichte. A-31. - 1963.

191. Hille M. Die Beurteilung von Kartoffelsorten hinsichtlich ihres Verhaltens gegenüber Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. dem Erreger des Kartoffelkrebses / M. Hille // Nachrichtenbl. des Deutsch. Pflanzenschutzdienst. -1965.-Bd. 17.-S. 137-142.

192. Hille M. Оценка сортов картофеля на устойчивость к раку / М. Hille // Растениеводство. 1966. - № 7. - С. 42-46.

193. Jahresberichte der Pflanzenschutzämter 1954 // Biol. Bundesanst. f Land- u. Forstwirtschaft, Braunschweig. 1955. - 145 s.

194. Jahresberichte der Pflanzenschutzämter 1955 // Biol. Bundesanst. f. Land- u. Forstwirtschaft, Braunschweig. 1956. - 63 s.

195. Jahresberichte der Pflanzenschutzämter 1956 // Biol. Bundesanst. f. Land- u. Forstwirtschaft, Braunschweig. 1958. - 110 s.

196. Jahresberichte der Pflanzenschutzämter 1958 // Biol. Bundesanst. f. Land- u. Forstwirtschaft, Braunschweig. 1960. - 118 s.

197. Karling J.S. Synchytrium / J.S. Karling New York. Academic Press, 1964.470 s.

198. Klassen G.R. Subrepeat of the intergenic region in the ribosomal DNA of the oomycetous fungus Phythium ultimum / G.R. Klassen, J. Buchko II Curr. Genet. 1990. - Vol. 17. - P. 125-127.

199. Köhler E. Methodische Bemerkungen zum Infektionsverfahren nach Spieckermann / E. Köhler // Fortschritte der Landwirtschaft. 1927. - Bd. 2. - S. 115-118.

200. Köhler E. Der Kartoffelkrebs und sein Erreger Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / E. Köhler // Z. Wiss. Landwirtschaftliche. 1931a. - Bd. 5. - S. 729-806.

201. Köhler E. Über das Verhalten von Synchytrium endobioticum auf anfalligen und widerstandsfähigen Kartoffelsorten / E. Köhler // Arbeiten aus der Biologischen Reuchsanstalt. 1931b. - Bd. 19. - S. 263-284.

202. Malakhanova E.L. Differential cultivars for aggressive pathotypes of Synchytrium endobioticum in Ukraine / E.L. Malakhanova, P.A. Melnik // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 1998. - Vol. 28. - P.579-583.

203. Malec K. Z badan nad wirulencja raka ziemniaczanego {Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) / K. Malec // Biul. Inst. Hodowli I Aklimat. roslin. -1959.-№ 6.-S. 75.

204. Malec K. Investigations on the occurrence of new, highly virulent biotypes of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / K. Malec // Biuletyn Instytutu Ziemniaka. 1974. - №. 14. - S. 131-135.

205. Manzanares-Dauleux M.J. Assessment of biological and molecular variability between and within field isolates of Plasmodiophora brassicae / M.J. Manzanares-Dauleux, I. Divaret, F. Baron, G. Thomas // Plant pathology. 2001. -Vol. 50.-P. 165-173.

206. Marcus O. Untersuchungen zur Auszählung von Dauersporangien des Kartoffelkrebserregers Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in Bodenproben / O. Marcus // Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes. 1969. - Bd. 21.-S. 153-157.

207. Maris B. Races of the potato wart causing fungus Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. and some data on the inheritance of resistance to race 6 / B. Maris // Euphytica. 1961. - Vol. 10. - P. 269-276.

208. Maris B. Studies with potato dihaploids on the inheritance of resistence to wart disease / B. Maris // Potato res. 1973. - Vol. 16. - P. 324.

209. Mazzola M. Virulence of Rhizoctonia orizae and R. solani AG-8 on wheat and detection of R. orizae in plant tissue by PCR / M. Mazzola, O.T. Wong, R.G. Cook//Phytopathology. 1996. - Vol. 86. - P. 354-360.

210. Moukhamedov R. Use of polymerase chain reaction-amplified ribosomal intergenic sequences for the diagnosis of Verticillium tricorpus / R. Moukhamedov, X. Hu, R.N. Nazar, J. Robb // Phytopathology. 1994. - Vol. 84. -P. 256-259.

211. Mygind H. Methods for the detection of resting sporangia of potato wart {Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) in infested soil / H. Mygind // Acta Agriculture Scandinavica. 1954. - № 4. - P. 317-343.

212. Mygind H. Examination of soil samples for potato wart sporangia / H. Mygind // Acta Agriculture Scandinavica. 1961. - № 11. - P. 114-120.

213. Melnik P.A. Wart disease of potato, Synchytrium endobioticum (Schilbersky) Percival / P.A. Melnik // EPPO Technical documents № 1032. -Paris, 1998.

214. Melnik P.A. Variability of Synchytrium endobioticum in the Carpathian region of Ukraine / P.A. Melnik, E.L. Malakhanova // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 1998. - Vol. 28. - P. 533-537.

215. Moore W.G. The breakdown of immunity from potato wart disease / W.G. Moore // outlook of agriculture. 1957. - Vol. 1. - № 6. - P. 240-243.

216. Müller W.A. Die Rassenanalyse bei Synchytrium endobioticum / W.A. Müller // Art und Rassenproblem Pilzen. Berlin. - 1967. - S. 291-296.

217. Nazar R.N. Potencial use of PCR-amplifled ribosomal intergenic sequences in the detection and differentiation of Verticillium wilt pathogens / R.N. Nazar, X. Hu, J. Schmidt, D. Culham, J. Robb // Physiol. Mol. Plant Pathol. 1991. - Vol. 39. -P. 1-11.

218. Nelson G. A. Methods for estimating numbers of resting sporangia of Synchytrium endobioticum in soil / G. A. Nelson, O.A. Olsen // Phytopathology. -1964.-Vol. 54.-P. 185-186.

219. Nelson G. A. Staining reactions of resting sporangia of Synchytrium endobioticum with a Tetrazolium compound / G. A. Nelson, O.A. Olsen // Phytopathology. 1967. - Vol. 57. - P. 965-968.

220. New Zealand Fungi. Taxonomic details of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. // Internet Database. 2008.

221. Niepold F. PCR-detection of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / F. Niepold, H. Stachewicz // Journal of Plant Disease and Protection. 2004. - Vol. 111.-P. 313-321.

222. Noble M. Wart disease of potatoes / M. Noble, M.D. Glynne // FAO Plant Protection Bulletin. 1970. - Vol. 18. - № 2. - P. 125-135.

223. Ochoa C. Algunos estudios so bre papas peruanas comobase para un programa de mejoramiento en el pais / C. Ochoa // Agronomia. 1951. - Vol. 15. -№65.-P. 31-38.

224. OEPP/EPPO. Synchytrium endobioticum (Schilb.) Percival (Data sheets on quarantine organisms) / OEPP/EPPO // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 1982. -Vol. 12.-№12. P. 1-6.

225. OEPP/EPPO. EPPO Standerds PM 3/59 Synchytrium endobioticum: soil tests and descheduling of previously infested plots / OEPP/EPPO // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 1999. - Vol. 29. - P. 225-231.

226. OEPP/EPPO. EPPO Standerds PM 7/28. Diagnostic protocols for regulated pests: Synchytrium endpbioticum / OEPP/EPPO // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. -2004.-Vol. 34.-P. 213-218.

227. O'Gorman D. Detection of Leptosphaeria korrae with the polymerase chain reaction and primers from the ribosomal internal transcribed spacers / D. O'Gorman, B. Xue, T. Hsiang, P.H. Goodwin // Can. J. Bot. 1994. - Vol. 72. - P. 342-346.

228. Olsen O.A. potato wart investigations in Newfounland / O.A. Olsen // Can. Plant Dis. Surv. 1961.-Vol. 41.-P. 148-155.

229. Olsen O.A., Nelson G.A. Biotypes of potato wart in Newfoundland / O.A. Olsen // Nature. 1964. - Vol. 204. - P. 406.

230. Percival J. Potato "wart" disease: the life history and cytology of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. / J. Percival // Cent. Bakteriol. 1910. -Vol. 25. - P. 440-447.

231. Potocek J. Studium moznosti existence odlisnych ras rakoviny brambor, Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. v ruznych oblastech CSSR / J. Potocek // Ochrana Rostlin. 1973. - Roc. 9. - C. 4. - S. 235-246.

232. Potocek J. Rakovina brambor a moznosti ochrany proti ni / J. Potocek // Stud. Zpräva. Praha. - ÜVTIZ, 1974. - 98 s.

233. Potocek J. Kvantitativni zjistovani trvalych zoospoangii püvodce rakoviny brambor ve vzorcich zeminy / J. Potocek // Sbornik ÜVTIZ Ochrana rostlin. -1977a. - Roc. 13. - C. 3-4. - S. 251-256.

234. Potocek J. Results of a study of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. races in Czechoslovakia / J. Potocek // EPPO Publications. 1977b. - Series C. - № 50.-P. 29-54.

235. Potocek J. Vyuziti mocoviny k asanaci pozemkü zamorenych rakovinoubrambor / J. Potocek. Praha: IJKZUZ-odKOR, 1982. -lis.

236. Potocek J. Soucasny stav testovani a identifikace patotypu püvodce rakovinyf /brambor / J. Potocek // Zprävy UKZUZ -odbor karanteny a ochrany rostlin v Brne. 1984. - Roc. 25. - C. 5. - S. 33-38.

237. Potocek J. Identification of new Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. pathotypes in Czech Republic / J. Potocek, K. Krajickovä, S. Klabzubovä, Z. Krejcar, M. Hnizdil, F. Noväk, V. Perlovä // Ochrana Rostlin. 1991. - Roc. 27. -S. 191-205.

238. Potocek J., Kriz M. Rasy Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. v CSSR / J. Potocek, M. Kriz // Ohrana Rostlin. 1978. - Roc. 14. - C. 4. - S. 249-258.

239. Pratt M.A. Studies on the effect of biotic and abiotic factors on survival of in soil / M.A. Pratt // M. I. Biol. Thesis, CSL. Sand Hutton, York (GB). 1974.

240. Pratt M.A. A wet-sieving and flotation technique for the detection of resting sporangia of Synchytrium endobioticum in soil / M.A. Pratt // Annals of Applied Biology. 1976a. - Vol. 82. - P. 21-29.

241. Pratt M.A The longevity of resting sporangia of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in soil / M.A. Pratt // EPPO Bull. 1976b. Vol. 6. - № 2. - P. 107108.

242. Pratt M.A. EPPO working party of potato wart disease / M.A. Pratt // EPPO Publications, series C. № 50. - Paris, 1977. - 22 p.

243. Proudfoot K.G. The present status of breeding varieties resistant to potato wart and golden nematode in New Foundland / K.G. Proudfoot // Proc. 4th trienn. Conf. EAPR. 1970. - P. 139-140.

244. Proudfoot K.G. Further observations on races of potato wart in Newfoundland / K.G. Proudfoot // Potato Research. 1971. - Vol. 14. - P. 232-233.

245. Proudfoot K.G. Potato wart disease in Newfoundland / K.G. Proudfoot // EPPO Bulletin. 1976. - Vol. 6. - P. 225-229.

246. Proudfoot K.G. Working Doc. 2885. Working party on potato wart disease / K.G. Proudfoot // EPPO Publications. 1977. - Series C. - № 50. - P. 55-56.

247. Putnam M.L. Eradication of potato wart disease from Maryland / M.L. Putnam, A.B. Sindermann // American Potato Journal. 1994. - № 71. - P. 743747.

248. Ross H. Ausgangsmaterial fur die Zuchtung / H. Ross // Handbuch der Pflanzenzüchtung. Barlin-Hamburg, Verlag Parey. 1958a. - Bd. 3. - S. 43-59.

249. Ross H. Resistenzzuchtung gegen die Mosaik- und andere Viren der Kartoffel / H. Ross // Handbuch der Pflanzenzüchtung. Barlin-Hamburg, Verlag Parey. 1958b. - Bd. 3. - S. 106-125.

250. Rothacker D. Arbeiten zur Züchtung krebsresistenter Kartoffeln Wild-und Primitivekartoffeln als Ausgangsmaterial für die Züchtung auf Krebsbiotypenresistenz / D. Rothacker // Vorläuf. Mitt Zuchter. 1957a. - Bd. 27. -S. 181-183.

251. Rothacker D. Beiträge zur Resistenzzüchtung gegen Kartoffelnematoden / D. Rothacker // Prüfung von Primitive- und Wild-Kartofeln auf das Verhalten gegenüber den Kartoffelnematoden. 1957b. - № 3. - S. 124.

252. Rothacker D. Die wilden und kultivierten mittel-und südamerikanishen Kartoffelspecies einschliesslich de rim Süden der USA vorkommenden Arte / D. Rothacker // Die Kartoffel. Handbuch. - 1961. - Bd. 1.

253. Rothacker D. Arbeiten zur Züchtung krebsresistenter Kartoffeln / D. Rothacker, W. Müller // Untersuchung der kultivierten südamerikanishen Kartoffelspecies auf ihr Verhalten gegenüber dem Krebsbiotyp Gl der Züchter. -1960. Bd. 30. - № 8. - S. 340-343.

254. Rudorf W. The significance of wild species for potato breeding / W. Rudorf // Eur. Potato Journ. 1958. - № 1. - p. 10-20.

255. Salaman R.N. Genet studies in potatoes; the inheritance of immunity to wart disease / R.N. Salaman, J.W. Lesley // J. Genet. 1923. - Vol. 13. - P. 177.

256. Schander H. / H. Schander, H. Richter // Zeutrbl. Bakt, Parasirkde. Abt. -1923. Bd. 2. - Heft 58. - S. 454-461.

257. Scheidt M. Vererbung der Resistenz gegen die Pathotypen 2 und 6 des Kartoffelkrebses (Synchytrium endobioticum) / M. Scheidt, W. Hunnius // Zeitschrift für Pflanzenzüchtung. 1981. - Bd. 86. - S. 158-173.

258. Schick R. Die Züchtung der Kartoffel / R. Schick, A. Hopfe // Die Kartoffel. 1962.-Bd. 2.-S. 1462-1583.

259. Schilbersky K. Ein neuer Schorfparasit der Kartoffelknollen / K. Schilbersky // Ber. Deut. Bot. Gesellsch. 1896. - № 14. - S. 36-37.

260. Schneider S. Arlequin ver.1.1: a software for population genetic data analysis / S. Schneider, J.-M. Kueffer, D. Roessli, L. Excoffier // Distributed by the authors. Genetics and biometry laboratory, University of Geneva, Switzerland. -1997.

261. Spieckermann A. Die Prüfung von Kartoffeln auf Krebsfestigkeit / A. Spieckermarm, P. Kothoff// Deutsche landw. Presse. 1924. - № 51. - S. 114-115.

262. Stachewicz H. Nachweis eines neuen Biotypen des Kartoffelkrebserregers Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in der DDR / H. Stachewicz // Nachrichtenblatt für den Pflanzenschutz in der DDR. 1978. - Bd. 32. - S. 215.

263. Stachewicz H. Identifizierung von Pathotypen des Kartoffelkrebserregers — Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. — mit Hilfe von Testsorten / H.

264. Stachewicz // Arch. Phytopathol. u. Pflanzenschutz. 1980. - Bd. 16. - № 1. - S. 111.

265. Stachewicz H. In-vitro-Kultur als Grundlage zur Identifizierung von Pathotypen Kartoffel krebserregers Synchytrium endobioticum / H. Stachewicz // Arch. Phytopath. n. Pflanzensch. 1983. - Bd. 19. - S. 351-352.

266. Stachewicz H. Die Krebsresistenzprüfung von Kartoffelzuchtstämmen und -Sorten in der Bundesrepublik Deutschland / H. Stachewicz // Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes. 1996. - Bd. 48. - S. 181-186.

267. Stachewicz H. Auftreten und Bekämpfung des Kartoffelkrebses in Deutschland / H. Stachewicz // Kartoffelbau. 1999. - Bd. 50. - № 11. - S. 426430.

268. Stachewicz H. Pathotyp 6 des Kartoffelkrebserregers in den Niederlanden / H. Stachewicz, R.P. Baayen, H. Hendriks // Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes. 2002. - Bd. 54. - S. 132.

269. Stachewicz H. Bestimmung eines neuen Pathotypen des Kartoffelkrebserregers Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in den Niederlanden / H. Stachewicz, R.P. Baayen // Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes. 2003. - Bd . 55. - S. 6-9.

270. Stenz G. Beiträge zur Ökologie des Kartoffelkrebserregers / G. Stenz // Nachricht Deutsch. Pflanzenschutz. 1963. - Bd. 17. - S. 116-123.

271. Tisserat N.A. Selective amplification of rDNA internal transcribed spacer regions to detect Ophiosphaerella korrae and O. herpotricha / N.A. Tisserat, S.H. Hulbert, K.M. Sauer//Phytopathology. 1994. - Vol. 84. - P. 478-482.

272. Ullrich J. Physiologic Specialisacion of Synchytrium endobioticum / J. Ullrich // FAO Plant Protection Bull. 1957. - Vol. 5. - № 12. - P. 181-187.

273. Ullrich J. Die physiologische Specialisierung von Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in der Bundesrepublik / J. Ullrich // Phytopathologische Zeitschrift. 1958.-Bd. 31.-S. 273-278.

274. Ullrich J. Die physiologische Spezialisierung von Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. in der Bundesrepublik / J. Ullrich // Rostlinná Vyroba. 1959a. -Roc. 5.-C. 6.-P. 111-116.

275. Vilgalys R. Rapid genetic identifications and mapping of enzymatically amplified ribosomal DNA from Cryptococcus species / R. Vilgalys, M. Hester // J. Bacteriol. 1990. - Vol. 172. - P. 4238-4246.

276. Winkelmann A. Biotypen des Kartoffelkrebserregers in Westdeutschland / A. Winkelmann // Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes. 1952. - Bd . 4. - S. 140.

277. Winkelmann A. Weitere Fundstellen von Biotypen des Kartoffelkrebserregers in West-Deutschland / A. Winkelmann // Nachrichtenbl. Dtsch. Pflanzenschutzdienst. 1953. - Bd. 5. - S. 173-175.

278. Yano S. Variations of random amplified polymorphic DNA, (RAPD) patterns among field populations of Plasmodiophora brassicae / S.Yano, S. Tanaka, S. Ito, M. Kameya-Iwaki // Ann. Phytopathol. Soc. Jpn. 1997.,- Vol. 63. -P. 179-182.

279. Zadina J. Current situation in regard to biotypes of potato wart disease {Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) / J. Zadina // Rostlinnä Vyroba. 1963. -Roc. 9.-C. 2.-S. 187-193.

280. Zadina J. Genetics of potato resistence to wart disease {Synchytrium endobioticum) and its use in potato breeding / J. Zadina, R. Findejs // Vedecke Prace Vyzkumny a Schlechtitelsky Ustav Bramborarsky v Havlickove Brode. -1988.-№ 11.-S. 41-46.

281. Zakopal J. A contribution to the question of races, otherwise biotypes of the potato cancer {Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.) in Czechoslovakia / J. Zakopal, B. Spitzova // Rostlinnä Vyroba. 1958. - Roc. 4. - C. 9. - S. 999-1018.

282. Zelya A.G. Detection methods for Synchytrium endobioticum / A.G. Zelya, P.A. Melnik // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin. 1998. - Vol. 28. - P. 543-544.

Информация о работе

Хютти, Александр Валерьевич
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, Пушкин, 2008
ВАК 06.01.11

Диссертация

Мониторинг популяций возбудителя рака картофеля и выявление источников устойчивости - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы