Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетическое изучение миотонической дистрофии в Башкортостане

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фатхлисламова, Рита Игоревна

Глава 1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность проблемы.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Научная новизна.

1.4. Практическая значимость.

1.5. Положения, выносимые на защипу.

Глава II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

П.1. Динамические мутации

П.2. Клинические и патологические особенности миотонической дистрофии.

П.З. Молекулярная основа миотонической дистрофии.

П.4. Молекулярные и клеточные последствия СТО экспансии.

П.5 Полиморфизм СТО повторов в популяциях и в семьях МД больных.

П. 5. Геномный инпринтинг и феномен антиципации при миотонической дистрофии.

Глава III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Ш. 1. Материал для исследования.

III. 2. Методы исследования.

Ш.2.1. Выделение геномной ДНК.

III.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК.

Щ.2.3. Реакция минирования.

III.2.4. Проведение денатурирующего электрофореза в Г1ААГ.

Ш.2.5.Проведение блот-гибридизации по Саузерну.

Ш.З. Статистическая обработка результатов.

Глава IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

IV.¡.Анализ полиморфизма CTG повторов гена миотонической дистрофии в популяциях Волго-Уральского региона.

VI. .2. Изучение экспансии CTG повторов у больных миотонической дистрофией.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетическое изучение миотонической дистрофии в Башкортостане"

Миотоническая дистрофия (МД) - наиболее распространенная форма мышечных дистрофий у взрослых, ее частота встречаемости составляет 12,5 на 100 тыс. населения в среднем по миру (Harper P.S., 1989), и - от 1,05 до 17,7 на 100 тыс населения - в Башкортостане. МД наследуется по аутосомно-доминантному типу и представляет собой мультисистемное поражение с исключительной вариабельностью клинических проявлений, среди которых миотония , прогрессирующая мышечная слабость, поражения сердца, катаракта (Harper P.S., 1989). В настоящее время не известны эффективные методы терапии МД. Поэтому актуальным является проведение пресимптоматической и пренатальной диагностики, способствующей предотвращению рождения больных детей в семьях высокого риска, что представляется возможным только молекулярно-генетическими методами исследования. Генетический дефект заболевания относится к классу динамических мутаций и заключается в увеличении CTG- повторов в З'нетранслируемой области гена МД, локализованного на хромосоме 19 в области q 13.2- 13.3 (Mahadevan М. et а!., 1992, Shelbourne P. et al., 1992), кодирующего белок миотонинпротеинкиназу (МК) с серинтреонинкиназной ферментативной активностью (Dunnel et al., 1994). До сих пор не известно, является ли миотоническая дистрофия результатом изменения экспрессии гена или функции его белка, или она является результатом изменения экспрессии генов, непосредственно примыкающих к гену МД. У здоровых людей число CTG- триплетов варьирует от 5 до 35, тогда как у больных МД оно может достигать нескольких тысяч. Причем, между числом CTG-повторов и началом проявления, а также степенью тяжести заболевания наблюдается положительная корреляция (Harris S. et al., 1996). При этом для МД характерно явление антиципации, т.е. уменьшение возраста начала заболевания и усиление клинических признаков в ряду поколений (Harley Н. G.et al., 1992а, Hunter A. et al., 1992. Ashizawa Т. et al., 1992a, б). При определении размеров микросателлитных локусов стандартными методами ПЦР и электрофореза в неденатурирующих условиях существует высокая вероятность искажения результатов из-за образования аномально мигрирующих гетеродуплексов, затрудняющих определение высоких аллелей, что приводит к искусственному завышению уровня гомозигот. Для точного определения размеров СТО повторов необходимо оптимизировать эти методы с применением меченых праймеров и электрофореза в секвенирующих условиях.

До сих пор открытыми остаются вопросы как о причинах экспансии CTG- повторов, так и о верхней границе их нормального числа. В связи с этим значительный интерес представляют популяционные исследования распределения нормальных вариантов числа СTG-триплетов в гене МД. В настоящее время такие данные уже получены для некоторых популяций мира , в том числе для ряда этнических групп России и бывшего СССР (Davies J. D. et al., 1992. Goldman A. et al., 1994, Иващенко Т. Э. с соавт., 1997,, Zerylnick С. et al., 1995, Watkins W. S. et al., 1995, Yamagata M., et al., 1997), показано существование популяционных различий как по числу CTG- повторов в норме и патологии, так и по частоте и характеру проявления самого заболевания. Волго-Уральский регион, отличающийся сложным этническим составом, включающим, в основном, финно-угорские и тюркские народы, в этом плане ранее не был изучен. В Башкортостане же распространенность МД несколько выше, чем в среднем по России (1,7 на 100 тыс.), установлено 5 фокусов локального накопления пораженных семей (Магжанов Р.В., 1986). Поэтому молекулярно-генетический анализ МД в этом регионе является актуальной проблемой, разработка которой способствовала бы как разрешению ряда важных вопросов, связанных с механизмами возникновения и распространения

МД-мутации вообще, так и оптимизации алгоритма комплексной диагностики МД в Башкортостане.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Фатхлисламова, Рита Игоревна

ВЫВОДЫ

1. Оптимальным дня определения нормальных размеров CTG повторов в гене миотонинпротеинкиназы является метод полимеразной цепной реакции лл синтеза ДНК (ПЦР) с Р-меченым праймером, с последующим электрофорезом в секвенирующем ГТААГ; для идентификации аллелей данного гена с увеличенным числом CTG повторов у больных, в случае невыявления их вышеуказанным методом, необходимо проведение ПЦР с немеченым праймером, с последующей гибридизацией получаемых фрагментов с олигонуклеотидным зондом (CTG)9.

2. В популяциях Волго-Уральского региона обнаружено 24 варианта аллелей CTG-локуса гена миотонической дистрофии с бимодальным распределением их частот, что соответствует таковому в большинстве изученных популяциях мира. В целом, по распределению частот аллелей CTG локуса гена МД Волго-Уральский регион занимает промежуточное положение между популяциями Европы и Азии.

3. Между исследованными популяциями Волго-Уральского региона по распределению частот аллелей числа CTG повторов гена МД установлены достоверные популяционные различия, что подтверждает существование генетической подразделенности популяций человека по данной полиморфной системе ДНК. На основании этого, а также учитывая высокий показатель гетерозиготности (81 %), можно считать локус гена МД, содержащий CTG повторы, высокоинформативным генетическим маркером популяций.

4. Проведен анализ ДНК 62 больных с клиническим диагнозом миотоническая дистрофия и 54 членов их семей. Экспансия CTG повторов в гене МД выявлена у 57 больных (92 %) и у их 12 родственников, не имеющих клинических проявлений заболевания. У 5 больных (8 %) с диагнозом миотоническая дистрофия классической взрослой формы экспансия в гене МД не обнаружена, что говорит о гетерогенности заболевания. На основании этих результатов можно считать, что анализ CTG повторов в гене МД является высокоинформативным и надежным методом диагностики миотонической дистрофии, в том числе пресимптоматической и пренатальной в семьях, отягощенных МД, а также для дифференциальной диагностики от спорадических форм заболевания, имеющих иную генетическую природу.

5. Анализ гено-фенотипической корреляции показал, что при экспансии CTG повторов гена миотонической дистрофии в пределах 50-1000 копий закономерностей между их числом и конкретной формой заболевания или степенью выраженности клинических симптомов не наблюдается. При возрастании экспансии до более 1000 CTG повторов происходит резкое снижение возраста начала заболевания, в среднем до 15 лет и усиление церебральных и экстраневральных проявлений, парезов, по сравнению с миотоническими симптомами.

6. Результаты сравнительного анализа экспансии CTG повторов гена МД в парах родители-дети соответствует положению о существующем явлении антиципации при передаче МД из поколения в поколение. При этом сокращение у потомков числа CTG повторов в семьях больных МД из Башкортостана установлено в 17,6 % случаев, что несколько выше такового, описанного в литературе. Сравнительный анализ в парах сибсов больных МД показал отсутствие зависимости уровня экспансии CTG повторов гена МД от порядкового номера потомка в семье.

7. В результате проведенного анализа передачи CTG повторов гена миотонической дистрофии из поколения в поколение в семьях здоровых доноров установлена частота спонтанного возникновения мутации данного локуса, составившая 4x10"2, что на 3-4 порядка выше чем в структурных

86 локусах человека и на 1 порядок выше, чем в микросателлитных STR- сайтах; показано, что нестабильными являются CTG повторы гена МД с числом копий >19.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В десяти популяциях Волго-Уральского региона, представляющих тюркские и финно-угорские группы народностей, проведено изучение нормального полиморфизма числа CTG повторов в гене миотонической дистрофии. В исследованных популяциях обнаружено 24 варианта аллелей данного локуса с бимодальным распределением их частот, с числом повторов 5 и от 11 до 14, что соответствует таковому в большинстве изученных популяций мира. Коэффициент гетерозиготности области CTG повторов гена МД в популяциях Волго-Уральского региона составил 81 %. В целом, по распределению частот аллелей CTG локуса гена МД Волго-Уральский регион занимает промежуточное положение между популяциями Европы и Азии. При этом, между исследованными популяциями установлены достоверные различия, что подтверждает существование генетической подразделенности популяций человека по данной полиморфной системе ДНК и показывает возможность ее использования в качестве высокоинформативного генетического маркера в популяционных исследованиях.

Результаты сопоставления частот различных аллельных вариантов CTG повторов гена МД в изученных популяциях не подтверждают гипотезу о нестабильности аллельного варианта гена МД, содержащего 5 CTG повторов. Анализ передачи CTG повторов гена миотонической дистрофии из поколения в поколение в семьях здоровых доноров позволил установить, что нестабильными являются CTG повторы гена МД с числом копий > 19. Частота спонтанного возникновения мутации данного локуса, составляет л

4x10", что на 3-4 порядка выше чем в структурных локусах человека и на 1 порядок выше, чем в микросателлитных STR- сайтах.

В результате проведенного анализа ДНК 62 больных с клиническим диагнозом миотоническая дистрофия и 54 членов их семей экспансия CTG повторов выявлена у 57 больных и у их 12 родственников, не имеющих клинических проявлений заболевания. У 5 больных с выраженными клиническими симптомами миотонической дистрофии экспансия в гене МД не обнаружена, что говорит о гетерогенности заболевания. Не исключено, что обнаруженное отсутствие экспансии у этих больных может быть обусловлено поражением другого локуса, картированного на 3 хромосоме, и приводящего к развитию недавно открытого доминантного заболевания со сходными с МД клиническими симптомами, названного проксимальной миотонической миопатией (PROMM). На основании этих данных, можно считать, что анализ CTG повторов в гене МД является высокоинформативным и надежным методом диагностики миотонической дистрофии, в том числе пресимптоматической и пренатальной в семьях, отягощенных МД, а также для дифференциальной диагностики от спорадических форм заболевания, имеющих иную генетическую природу.

Минимальный размер экспансии CTG повторов в гене МД среди обследованных больных составил 400 п. н. (около 130 повторов), максимальный- 5000 п.н. ( 1500-1600 повторов). При этом, в результате анализа гено-фенотипической корреляции установлено, что только при возрастании экспансии до более 1000 CTG повторов происходит резкое снижение возраста начала заболевания, в среднем до 15 лет и усиление церебральных и экстраневральных проявлений, парезов, по сравнению с миотоническими симптомами. Известное положение о существующем явлении антиципации при передаче МД из поколения в поколение подтверждено результатами сравнительного анализа экспансии CTG повторов гена МД в парах родители- дети, больных МД. Не установлено зависимости уровня экспансии CTG повторов гена МД от порядкового номера потомка в семье.

83

Таким образом, результаты анализа полиморфизма CTG повторов гена МД, экспансия которых приводит к развитию миотонической дистрофии, имеют значение как для популяционной генетики - показывают возможность использования данной полиморфной системы в популяционно-генетических исследованиях и представляют новую информацию о генофонде народов Волго-Уральского региона, так и для медицины - позволяют оптимизировать методы диагностики тяжелого наследственного заболевания - миотонической дистрофии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фатхлисламова, Рита Игоревна, Уфа

1. Борисова И.А. Сборник научных трудов. Эпидемиология заболеваний нервной системы в Башкирской АССР. Уфа.- 1989.- издательство МЗ РСФСР - 121 стр.

2. Вяткина С.Я. Эпидемиология наследственных заболеваний нервной системы в Куйбышевской области // Вопросы эпидемиологии: Роль соматогенных и личностных факторов в этиопатогенезе нервно-психических заболеваний. Уфа.- 1972 С. 23-26.

3. Животовский Л. А. Популяционная биометрия. М.: Наука.- 1991,- С. 105.

4. Иллариошкин СЛ., Иванова-Смоленская И.А., Маркова Е.Д. Новый механизм мутации у человека: экспансия тринуклеотид-ных повторов.// Генетика. 1995.- Т. 31. № 11.- С.1478-1489.

5. Иващенко Т. Э., Глазов П.Б., Хромов Борисов H.H., Баранов В. С. Популяцнонный анализ тринуклеотидных CTG- повторов в гене миотонической протеинкиназы I. // Генетика.- 1997.-Т. 33. № 9. С.- 12871290.

6. Ключиков В.Н., Копшицер И.З. Генетическая гетерогенность миотонической дистрофии // Журнал невропатол. и психиатр.- 1983. Вып. 11,-С. 1641-1645.

7. Коротов М.Н., Кузьмина З.М. К вопросу о распространении семейно-наследственных заболеваний нервной системы в Республике Саха (Якутия) // Тез. докл. 1-го Рос. съезда мед. генетиков.- 4.1. М. 1994.- С. 108.

8. Кузеев Р.Г. Волго-Уральский регион этнокультурного взаимодействия финно-угорских и тюркских этносов // В сб.: Антропология и популяционная генетика башкир.- Уфа. 1987.- С.6-17.

9. Магжанов Р.В. Клинико-генети ческий анализ наследственных заболеваний нервной системы в популяции Башкирской АССР: Дис.доктора мед. наук.- Уфа 1987.- 470 с.

10. Магжанов Р.В. Наследственные заболевания нервной системы // В сб.: Эпидемиология заболеваний нервной системы в Башкирской АССР.-Уфа.-1989,- 121 с.

11. Насыров Э.М. Атрофическая миотония в Астраханской области // Мат. VII Всерос. Съезда неврологов.- г. Новгород, 10-12 окт. 1995.- Н. Новгород.- 1995.- №354.

12. Хуснутдинова Э.К. молекулярно-генетическая характеристика популяции башкир и других народов Волго-Уральского региона. Дис.доктора биол. наук.-Москва.-1997.- 343 с.

13. Abbruzzese С., Krähe R., Liguori М. et al. Myotonie dystrophy phenotype without expansion off (CTG)„ repeat: an entity distinct from proximal myotonic myopathy (PROMM) // J. Neurol.-1996.-V. 243,- P.715-721.

14. Abe K., Fujimura H., Toyooka K. et al. Involvement of the central nervous system in myotonic dystrophy // J. Neurol. Sei. -1994.- V. 127- 179-185.

15. Abeliovich D., Lerer I., Pashut- Lavon I. et al. Negative expansion of the myotonic dystrophy unstable seqúense // Am. J. Hum. Genet.- 1993 V.-52.-1175-1181.

16. Achiron A., Magal N., Shem-Tov N. et al. Myotonic dystrophy gene analysis in affected Israeli families //Est. J. Med. Sei.- 1994,- V. 30,- 622-625.

17. Adié W. And Greenfield J. Dystrophia myotonica ( myotonica atrophica) // Brainn. 1923 -46.-73-127.

18. Ambrosini P. Hurnberg H. Psychopathology? A primary feature of myotonic dystrophy//Psychosomatics. 1979.-20.-393-399.

19. AnvretM., Ahlberg G., Crandell U. et al. Larger expansions of the CTG repeat in muscle compared to lymphocytes from patients with myotonic dystrophy // Hum. Mol. Genet.-1993.- V. 2,-1397-1400.

20. Ashizawa T., Dunne C., Dubel J. et al. Anticipation in myotonic dystrophy. I. Statistical verification based on clinical and haplotype findings // Neurology. -1992a.- V. 42,- 1871-1877.

21. Ashizawa T., Dubel J . Dunne P., et al. Anticipation in myotonic dystrophy. II. Complex relationships between clinical findings and structure of the GCT repeat //Neurology. 1992b.-V. 42,- 1877-1883.

22. Ashizawa T., Dsubel J.R. and Harati Y. Somatic instability of CTG repeat in myotonic dy.strophy //Neurology .- 19893,- V. 43,- 2674-2678.

23. Ashizawa T., Anvret M., Baiget M. et al. Characteristics of intergenerational contractions of the CTG repeat in myotonic dystrophy // Am. j. Hum. Genet.-1994a.- V.54.- 414-423.

24. Ashizawa T., Dunne P.W., Ward P.A. et al. Effects of the sex of myotonic dystrophy patients on the unstable triplet repeat in their affected offspring // Neurology.- 1994b.- V 44.- 120-122.

25. Ashizawa T., Monekton D.G., Vaishnav S. et al. Instability of the expanded (CTG)n repeats in the myotonin protein kinase gene in cultured lymphoblastoidcell lines from patients with myotonic dystrophy // Genomics.- 1996.- V. 36.47-53.

26. Aslanidis C., Jansen G., Amemiya C. et al. Cloning of the essential myotonic dystrophy region and mapping of the putative defect // Nature.- 1992.- V. 355.548-551.

27. Bachmann G., Damian M.S., Koch M. et al. The clinical and genetic correlates of MRI findings in myotonic dystrophy // Neuroradiology 1996,- V. 38.-629-635.

28. Barcelo J.M., Mahadevan M.S., Tsilfidis C. et al. Intergenerational stability of the myotonic dystrophy protomutation. Hum // Mol. Genet.- 1993.- V. 2,- 705709.

29. Batten F. E. and Gibb H. P. Myotoma atrophica // Brain.- 1909.-V. 32.-187-205.

30. Behrens M. I., Jalil P., Serani A. et al. Possible role of apamin-sensitive K+channels in myotonic dystrophy // Muscle Nerve.-1994.- V. 17.-1264-1270.

31. Benders A. G. M., Groenen P. J. T. A., Oerlemans F. T. J. J. et al. Myotonic dystrophy protein kinase is involved in the modulation of the Ca2' homeostasis in skeletal muscle cells //J. Clin. Invest.-1997.- CV. 100.-1440-1447.

32. Bergoffen J., Kant J., Sladky J. et al. Paternal transmission of congenital myotonic dystrophy//J. Med. Genet.-1994.- V. 31.- 518-520.

33. Bird T.D., Foflett C. and Griep E. Cognitive and personality function in myotonic muscular dystrophy // Neural. Neurosurg. Psycliialry.- 1983.- V. 46,971-980.

34. Boucher C.M., King S.K., Carey N. et al. A novel homeodomain-encoding gene is associated with a large CpG island interrupted by the myotonic dystrophy unstable (CTG)n repeat // Hum. Mol. Genet- 1995.- V. 4,- 1919-1925.

35. Bramwell E. and Addis W.R. Mvotonia atrophica // Edinburgh Med. J.-1913.-V. 11.-21-44.

36. Brook 3.D., Shaw DJ., Meredith A.L. et al. Localising the gene for myotonic dystrophy on chromosome 19 // J. Med. Genet.- 1985.- V. 22.- P. 396.

37. Brook J.D., McCurrach M.E., Harley H.G. et al. Molecular basis of myotonic dystrophy: expansion of a trinucleotide (CTG) repeat at the 3! end of a transcript encoding a protein kinase family member // Cell.-1992.-V. 68.- 799-808.

38. Brunner H.G. Genetic studies in myotonic dystrophy // Thesis, University of Nijmegen.-1993.

39. Brunner H.G., Nillesen W., van Oost, B.A. et al. Presymptomatic diagnosis of myotonic dystrophy // J. Med. Genet.-1992.- V. 29,- 780-784.

40. Brunner H.G., Briiggenwirth H.T., Nillesen W. et al. Influence of sex of the transmitting parent as well as of parental allele size on the CTG expansion in myotonic dystrophy (DM) //Am. j. Hum. Genet.- 1993a.- V. 53,- 1016-1023.

41. Brunner H.G., Jansen G., Nillesen W. et al. Brief report: reverse mutation in myotonic dystrophy // N. Engl. J. Med.-l993b.- V. 328.- 476-480.

42. Bundey S. Clinical evidence for heterogeneity in myotonic dystrophy // J. Med. Genet.- 1982.- V. 19,- 341-348.

43. Bush E.W., Fait C.S., Meixcll G.E. and Perryman M.B. Overexpression of myotonic dystrophy kinase in BC3H1 cells induces the skeletal muscle phenotype // Biol. Chem.- 1996,- V. 271,- 548-552.

44. Buxton J., Shelbourne P., Davies J. et al. Detection of an unstable fragment of DNA specific to individuals with myotonic dystrophy // Nature.- 1992,- V. 355,547-548.

45. Cheng S., Barcelo J. M. and Korneluk,R. G. Characterization of large CTG repeat expansions in myotonic dystrophy alleles using PCR // Hum. Mutat.-1996,- V. 7.-304-310.

46. Church S. C. The heart in myotonia atrophica // Arch. Intern. Med.- 1967,- V. 119.-176-181.

47. Cobo A. M., Baiget M., Lopez de Munain A. et al. Sex-related difference in intergenerational expansion of myotonic dystrophy gene // Lancet.- 1993.- V. 341.-1159-1160.

48. Costantini M., Zanintotto G., Ansemino M. et al. Esophageal motor function in patients with myotonic dystrophy // Digest. Dis. Sci.- 1996.- V. 41.- 2032-2038.

49. Damian M.S., Bachmann G., Koch M.C. et al. Brain disease and molecuar analysis in myotonic dystrophy//NeuroReports.- 1994,- V. 5,- 2549-2552.

50. Damiani E., Angelini C., Pelosi M. et al. Skeletal muscle sarcoplasmic reticulum phenotype in myotonic dystrophy // Neuromusc. Disord.- 1996,- V. 6,33-47.

51. Darlow J.M., Leach D.F. The effects of trinucleotide repeats found in human inherited disorders on palindrome inviability in Escherichia coli suggest hairpin folding preferences in vivo // Genetics.- 1995.- Y. 141. № 3,- 825- 832.

52. Davies J., Yamagata H., Shelboume P. et al. Comparison of the myotonic dystrophy associated CTG repeat in European and Japanese populations // Med. Genet.- 1992.- V. 29,- 766-769.

53. Djian P. Evolution of simple repeats in DNA and their relation to human disease. Cell, 1998, V. 94, P. 155-160.

54. Dunne P. W., Walch E. T. and Epstein H. F. Phosphorylation reactions of recombinant human myotonic dystrophy protein kinase and their inhibition // Biochemistry.- 1994.- V. 33,- 10809-10814.

55. Dunne P.W., Ma L., Casey D.L. et al. Localisation of myotonic dvstrophy protein kinase in skeletal muscle and its alteration with disease // Cell. Motil. Cytoskel.- 1996,- V. 33.- 52-63.

56. Dyken P.R. The changing syndromes of dystrophia myotonica // Neurology.-1969,-V. 19.-292.

57. Etongue-Mayer P., Faure R., Bouchard J. P. et al. The myotonin-protein kinase phosphorylates tyrosine residues in normal skeletal muscle // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1994,- V. 199.- 89-92.

58. Franke Ch., Hatt H., Laizzo P. A. and Lehmann-Horn F. Characteristics of Na+ channels and CI" conductance in resealed muscle fibre segments from patients with myotonic dystrophy // J. Physiol.- 1990 V. 425.- 391-405.

59. Fu Y. H., Kuhl D. P. A., Puzzuti A., et al. Variation of the CGG repeat at the fragile X site results in genetic instability: resolution of the Sherman paradox // Cell.- 1991.- V. 67.- 1047- 1058.

60. Fu Y. H., Pizzuti A., Fenwick R.G. et al. An unstable triplet repeat in a gene related to myotonic muscular dystrophy // Science.- 1992.- V. 255.- 1256-1258.

61. Fu Y. H., Friedman D. L., Richards S. et al. Decreased expression of myotonin-protein kinase messenger RNA and protein in adult form of myotonic dystrophy // Science.- 1993.- V. 260.- 235-238.

62. Godde J. S. and Wolffe A. P. Nucleosome assembly on CTG triplet repeats H J. Biol. Chem.- 1996.-V. 271.- 15222-15229.

63. Gacy A.M., Goellner G., Juranic N. et al. Trinucleotide repeats that expand in human disease form hairpin structures in vitro // Cell- 1995 V. 81. № 4.- 533540.

64. Goldman A., Ramsay M. and Jenkins T. Absence of myotonic dystrophy in southern African Negroids is associated with a significantly lower number of CTG trinucleotide repeats // Med. Genet.-1994 V. 31.- 37-40.

65. Goldman A., Krause A., Ramsay M. and Jenkins T. Founder effect and the prevalence of myotonic dystrophy in South Africans: molecular studies // Am. J. Hum. Genet-1996.- V. 59,- 445-452.

66. Goldstein D.B., Ruiz Linaris A, Cavalli-Sforza L. and Feldman M. An evaluation of genetic distances for use in microsatellite loci // Genetics. V.- 139.463-471.

67. Hansen R.S„ Canfield T.K., Lamb M M. et al. Association of fragile X syndrome with delayed replication of the FMR1 gene // Cell.- 1993.- V. 73.1403-1409.

68. Harley H.G., Brook J.D., Floyd, J. et al. Detection of linkage disequilibrium between the myotonic dystrophy locus and a new polymorphic DNA marker // Am. J. Hum. Genet-1991.- V. 49.- 68-75.

69. Harley H.G., Brook D.J., Rundle S.A. et al. Expansion of an unstable DNA region and phenotypic variation in myotonic dystrophy // Nature.- 1992a.- V. 355.- 545-546.

70. Harley H.G., Rundle S.A., Reardon W. et al. Unstable DNA sequence in myotonic dystrophy // Lancet- 1992b.- V. 339,- 1125-1128.

71. Harley H.G., Rundle S.A., MacMillan J.C. et al. Size of the unstable CTG repeat sequence in relation to phenotype and parental transmission in myotonic dystrophy // Am. J. Hum. Genet- 1993.- V. 52.- 1164-1174.

72. Harper P.S. Myotonic Dystrophy // W.B. Saunders Comp., London.- 1989384.

73. Harper P.S. and Dyken P.R. Early onset dystrophia myotonica evidence supporting a maternal environmental factor // Lancet-1972.- V. 2,- 53-55.

74. Harper P.S., Harley H.G., Reardon W. and Shaw D.J. Anticipation in myotonic dystrophy: new light on an old problem // Am. J. Hum. Genet- 1992,- V. 51.10-16.

75. Harris S., Moncrieff C. and Johnson K. Myotonic dystrophy: will the real gene please step forward //Hum. Mol. Genet.- 1996,- V. 5,- 1417-1423.

76. Hofmann-Radvanyi H., Lavedan C., Rabes J.-P. et al. Myotonic dystrophy: absence of CTG enlarged transcript in congenital forms, and low expression of the normal allele//Hum. Mol. Genet- 1993- V. 2.- 1263-1266.

77. Howeler C J. A clinical and genetic study in myotonic dystrophy // Thesis -University of Rotterdam.-1986.81. oweler C J., Busch H.F.M., Geraedts J.P.M. et al. Anticipation in myotonic dystrophy: fact or fiction // Brain.-1989 V. 112.- 779-797.

78. Huber S. J., Kissel K.T., Shuttleworth E.C. ct al. Magnetic resonance imaging and clinical correlates of intellectual impairment in myotonic dystrophy // Arch. Neural.- 1989,- V. 46.- 536-540.

79. Hunter A., Tsilfidis C., Mettler G. et al. The correlation of age of onset with CTG trinucleotide repeat amplification in myotonic dystrophy // Med. Genet.-1992,- V. 29.- 774-779.

80. Imbert G., Kretz C., Johnson K. and Mandel J. Origin of the expansion mutation in myotonic dystrophy // Nat. Genet.- 1993. V. 4,- 72-76.

81. Ishii S., Nishio T., Sunohara N. et al. Small increase in triplet repeat length of cerebellum from patients with myotonic dystrophy // Hum. Genet.- 1996,- V. 98.-138- 140.

82. Jansen G. The molecular basis of myotonic dystrophy // Thesis. University of Nijmegen.-1995.

83. Jansen G., Mahadevan M., Amemiya C. et al. Characterization of the myotonic dystrophy region predicts multiple protein isoform-encoding mRNA's // Nat. Genet.- 1992.- V. 1.- 261 -266.

84. Jansen G., Willems P., Coerwinkel M. et al. Gonosomal mosaicism in myotonic dystrophy patients: involvement of mitotic events in (CTG)n repeat variation and selection against extreme expansion in sperm // Am. J. Hum. Genet.- 1994.- V. 54.- 575-585.

85. Jansen G., Bachner D., Coerwinkel M. et al. Structural organization and developmental expression pattern of the mouse WD-repeat gene DMR-N9 immediately upstream of the myolonic dystrophy locus // Hum. Mol. Genet.-1995,- V. 4.- 843-852.

86. Jansen G., Groenen P.J.T.A., Bachner D. et al. Abnormal myotonic dystrophy protein kinase levels produce only mild myopathy in mice // Nat.Genet.- 1996,-V. 13.- 316-324.

87. Jaspert A., Fahsold R., Grehl H. and Claus D. Myotonic dystrophy: correlation of clinical symptoms with the size of the CTG trinucleotide repeat // J. Neurol1995.- V. 242.- 99-104.

88. Johnson E.R., Abresch R.T., Carter G. et al. Profiles of neuromuscular diseases: myotonic dystrophy // Am. J. Phys. Med. Rehabil.- 1995.- V. 74(suppl.).-104-l 16.

89. Kawakami K., Ohto H., Ikeda K. and Roe'der R.G. Structure, function and expression of a murine homeobox protein AREC3, a homologue of Drosophila sine oculis gene product and implication in development // Nucleic Acid Res1996.- V. 24.- 303-310.

90. Kidd A., Turnpenny P., Kelly K. et al. Ascertainment of myotonic dystrophy through cataract by selective screening // Med. Genet.- 1995,- V. 32.- 519-523.

91. Klesert T.R., Otten A.D., Bird T.D. and Tapscott S.J. CTG-repeat expansion in myotonic dystrophy suppresses transcription of the DMAHP gene // Nat. Genet1997.-V. 16.-402-406.

92. Knight S., Flanneiy A., Hirst M. Trinucleotide repeat amplification of a CpG island in FRAXE mental retardation. Cell, 1993, V. 74, P. 127-34.

93. Koch M.C.,Grimm T., Harley H.G. and Harper P.S. Genetic risks for children of women with myotonic dystrophy // Am. J. Hum. Genet- 1991,- V. 48,- 10841091.

94. Koch M.C., Grimm T., Harley H.G. and Harper P.S. Reply to Poulton // Am. J. Hum. Genet.-1992,- V. 50.- 651- 652.

95. Koga R., Nakao Y., Kurano Y. et al. Decreased myotonin-protein kinases in the skeletal and cardiac muscles in myotonic dystrophy // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1994.- V. 202.- 577-585.

96. Koide R., Ikeuchi T., Onodera O., et al. Unstable expansion of CAG repeat in hereditary dentatorubral- pallidolusysian atrophy (DRPLA) // Nature Genet.-1994,-V. 6,-9-13.

97. Krahe R., Ashizawa T., Abbruzzese C. et al. Effect of myotonic dystrophy trinucleotide repeat expansion on DMPK transcription and processing // Genomics.- 1995,- V. 28.-1-14.

98. Kremer E. J., Pritchard M., Lynch M., et al. Mapping of DNA instability at the fragile X to a trinucleotide repeat sequence p(CCG)n // Science 1991,- V. 252.- 1711- 1714.

99. La Spada A.R., Wilson E.M., Lubahn D.B., et.al. Androgen receptor gene mutations in X-linked spinal and bulbar muscular atrophy. Nature, 1991, V. 352, P. 77-79.

100. La Spada A. R., Roling D. B., Harding A. E., et al. Meiotic stability and genotype- phenotype correlation of the trinucleotide repead in X- linced spinal and bulbar muscular atrophy // Nature Genet.- 1992.- V. 2.- 301- 304.

101. Lavedan C., Hofinann-Radvanyi H., Rabes J.P. et al. Different sex dependent constraints in CTG length variation as explanation for congenital myotonic dystrophy // Lancet.- 1993a.- V. 341.- 237.

102. Lavedan C., Hofinann-Radvanyi H., Shelbonrne P. et al. Myotonic dystrophy: size- and sex-dependent dynamics of CTG meiotic instability and somatic mosaicism//Am. J. Hum. Genet.- 1993b.- V. 52,- 875-883.

103. Lopez de Munain A., Cobo A.M., Saenz A. et al. Frequency of intergenerational contractions of the CTG repeats in myotonic dystrophy // Genet. Epidemiol.- 1996,- V. 13,- 483-487.

104. Maeda M., Taft C.S., Bush E.W. et al. Identification, tissue-specific expression and subcellular localisation of the 80- and 71-kDa forms of myotonic dystrophy kinase protein // Biol. Chem.- 1995,- V. 270,- 20246-20249.

105. Mahadevan M., Tsiîfidis C., Sabourin L. et al. Myotonic dystrophy mutation: an unstable CTG repeat in the 3' untranslated region of the gene // Science.1992.- V. 255.- 1253-1255.

106. Mahadevan M.S., Amemiya C., Jansen G. et al. Structure and genomic sequence of the myotonic dystrophy (DM kinase) gene if Hum. Mol. Genet.1993.-V. 2.-299-304.

107. Mandel J. L. Questions of expansion // Nature Genet.- 1994.- V. 4.- 8- 9.

108. Martorell L., Martinez J.M., Carey N. et al. Comparison of CTG repeat length expansion and clinical progression of myotonic dystrophy over a five year period // Med. Genet-1995,- V. 32,- 593-596.

109. Mastrogiacomo I., Pagani E., Novelli G. et al. Male hypogonadism in myotonic dystrophy is related to (CTG)n triplet mutation // Endocrinol. Invest.1994.- V. 17.-381-383.

110. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biolodgy. Human Press, 1984. V.2. P. 31-34.

111. Menegazzo E., Mastrogiacomo I., Bonanni G. et al. Correlation between muscle atrophy, male hypogonadism and DNA expansion in myotonic dystrophy //Acta. Cardiomiol.-1995.- V. VH.- 25-33.

112. Monckton D. G., Wong L-J. C., Ashizawa T. and Caskey C. T. Somatic mosaicism, germline expansions, germline reversions and intergenerational reductions in myotonic dystrophy males: small pool PCR analyses // Hum. Mol. Genet-1995.- V. 4.- 1-8.

113. Morgenlander J. C. and Massey J. M. Myotonic dystrophy // Semin. Neural.-1991.-V. 11.-236-243.

114. Mounsey J. P., Xu P., John in J. E. et al. Modulation of skeletal muscle sodium channels by human myotonin protein kinase // Clin. Invest.- 1995.- V. 95,- 2379-2384.

115. Moxley R. T. Proximal myotonic dystrophy: mini review of a recently delineated clinical disorder//Neuromusc. Disord.- 1996.- V. 6,- 87-93.

116. Mulley J.C., Staples A., Donnelly A. et al. Explanation for exclusive maternal origin for congenital form of myotonic dystrophy // Lancet.-1993,- V. 341236237.

117. Nakagawa M., Yamada H., Higuchi I. et al. A case of paternally inherited congenital myotonic dystrophy//Med. Genet-1994.- V. 31,- 397-400.

118. Nakamoto M., Takebayashi H., Kawaguchi Y., et. al. A CAG/CTG expansion in the normal population. Nat. Genet., 1997, V. 17, P. 385-386.

119. Nei M. Molecular Population Genetic and Evolution. Amsterdam: North-Holland, 1975,-P.278.

120. Nelson D. L., Warren S. T. Trinucleotide repeat instability: when and where? //Nature Genet- 1994,- V. 4,-107- 108.

121. Nestor P., Dennet X., Day B. Proximal myotonic myopathy: a report of a kindred. J. Clin. Neuroscience, V. 5, P. 218-220.

122. Novelli G., Gennarelli M., Menegazzo E. et al. (CTG)n triplet mutation: and phenotype manifestations in myotonic dystrophy patients // Biochem. Med. Metab. Biol.- 1993a.- V. 50.- 85-92.

123. Ohya K., Tachi N. Chiba S. et al. Congenital myotonic dystrophy transmitted from an asymptomatic father with a DM-speeific gene // Neurology.- 1994,- V. 44,-1958-1960.

124. Duo S., Kanda F., Takahashi K. et al. Neuronal cell loss in the dorsal raphe nucleus aid the superior central nucleus in myotonic dystrophy: a clinico-pathological correlation //Acta Neuropathol.- 1995.- V. 89.-122-125.

125. Orr H. T., Chung M. Y., Banfi S., et al. Expansion of an unstable trinucleotide CAG repeat in spinocerebellar ataxia type 1 //Nature Genet- 1993.- V. 4.- 221226.

126. Otten D. and Tapscott S. J. Triplet repeat expansion in myotonic dystrophy alters the adjacent chromatin structure // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1995.- V. 92.- 5465-5469.

127. Pencic-Popovic B., Nagulic S., Cebasek R. et al. Arrhythmias and conduc tion defects in myotonic dystrophy // (Ambulatory Electrocardiographic Monitoring Study). Acta Cardiomiol.-1992,- V. VI(2).- 119-126.

128. Perron M., Veillette S. and Mathieu J. La dystrophy myotonique: I. characteristiques socio-economiques et résidentielles des malades. Can. J. Neurol. Sei.-1989,- V. 16.-109-113.

129. Philips M.F. and Harper P.S. Cardiac disease in myotonic dystrophy // Cardiovasc. Res.- 1997.- V. 33.- 13-22.

130. Popova S., Shadrina M., Slominsky P. et al. Trinucleotide repeat polymorphism at the myotonic dystrophy locus: population genetics and expansion in russian population. Abstr. 9th Intern. Congr. of Human Genetics. Rio de Janeiro. Brasil. 1996.

131. Poulton. J. Congenital myotonic flystrophy and mtDNA // Am. J. Hum. Cenet.-1992.-V. 50.-651.

132. Ranum L.P.W., Rasmusen P.F., Benzow K.A et al. Genetic mapping of a second myotonic dystrophy locus. Nat. Genet, 1998, V. 19, P. 196-198.

133. Rastinejad F. and Blau H.M. Genetic complementation reveals a novel regulatory role for the 3' untranslated regions in growth and differentiation // Cell.- 1993.- V. 72,- 903-917.

134. Rastinejad F., Conboy M. J., Rando T. A. and Blau H. M. Tumor suppression by RNA from the 3' untranslated region of alpha-tropomyosin // Cell.- 1993,- V. 75.-1107-1117.

135. Redman J. B., Fenwick R. G., Fu Y. H. et al. Relationship between parental trinucleotide GCT repeat length and severity of myotonic dystrophy in offspring // JAMA.- 1993.- V. 269.- 1960-1965.

136. Richards R. I., Sutherland G. R. Heritable unstable DNA sequenses // Nature Genet.-1992,- V. 1.- 7- 9.

137. Riggins G. J., Lokey L. K., Chastain J. L. et al. Human genes containing polimorphic trinucleotide repeats //Nature Genet.- 1992.- V. 2 186- 191.

138. Ronnblom A., Forsberg H. and Danielsson A. Gastrointestinal symptoms ,in myotonic dystrophy // Scand. J. Gastroenterol.- 1996.- V. 31.- 654-657.

139. Roses A. D. Muscle biochemistry and a genetic study of myotonic dystrophy // Science.-1994.- V. 264,- 587.

140. Rousseau F., Heitz D., Biancalana V., et al. Direct diagnosis by DNA analysis of the fragile X syndrome of mental retardation // New Engl. J. Med.- 1991.-V.325.-1673-1681.

141. Ruidel R. and Lehmnnn-Horn F. Membrane changes in cells from myotonia patients // Physiol. Rev.- 1985.- V. 65.- 310-356.

142. Runne U., Chilf G. N. and Zentner J. (Multiple pilomatixoma als symptom der myotonia dystrophia Curshmann-Steinert // Hautartz.-1982,- V. 33.- 271 -275.

143. Sabourin L, A., Mahadevan M. S., Narang M. et al. Effect of the myotonic dystrophy: (DM) mutation on mRNA levels of the DM gene // Nat. Genet.-1993.- V. 4,- 233-238.

144. Sahashi K., Tanaka M., Tashiro M. et al. Increased mitochondrial DNA deletions in the skeletal muscle of myotonic dystrophy // Gerontology.-1992,- V. 38,-18-29.

145. Salvatori S., Biral D., Furlan S. and Mnrin O. Identification and localization of the myotonic dystrophy gene product in skeletal and cardiac muscles // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1994.- V. 203.- 1365-1370.

146. Sander H., Tavourareas G. P., Quinto C. M. et al. The exercise test distinguishes proximal myotonic myopathy from myotonic dystrophy // Muscle Nerve.-1997.- V. 20.- 235-237.

147. Sasagawa N., Sorimachi H., Maruyama K. et al. Expression of a novel human myotonin protein kinase (MtPK) cDNA clone which encodes a protein with a thymopoietin-like domain in COS cells // FEBS Lett.-1994.- V. 351,- 22-26.

148. Shaw D. J., McCurrach M., Rundle S. A. et al. Genomic organization and transcriptional units at the myotonic dvstrophy locus // Gcnoimics.- 1993.- V. 18.-673-679.

149. Shelbourne P., Winqvist R., Kunert E. et al. Unstable DNA may be responsible for the incomplete penetrance of the myotonic dystrophy phenotype // Hum. Mol. Genet.-1992.- V. 1.- 467-473.

150. Shelbourne P., Davies J., Buxton J. et al. Direct diagnosis of myotonic dystrophy with a disease-specific DNA marker // N. Engl. J. Med- 1993.- V. 328.-471-475.

151. Simola K., De la Chapelle A., Pirkola A. et al. Human Gene Mapping 6.-1982,-P. 317.

152. Southern E.M. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis // J. Mol. Biol. 1975. V. 98. P. 503.

153. Swift T. R., Ignacio O. J. and Dyken P. R. Neonatal dystrophia myotonica: electrophysiologic studies // Am. J. Dis. Child.- 1975 V. 29.- 734-737.

154. Taneja K. L., McCurrach M., Schalling M. et al. Foci of trinucleotide repeat, transcripts in nuclei of myotonic dystrophy cells and tissues // J. Cell. Biol.-1995.- V. 128,- 995-1002.

155. The Huntington's Disease Collaborative Research Group. A novel gene containing a trinucleotide repeat that is expanded and anstable on Huntington's disease chromosomes // Cell.-1993.- V. 72.- 971- 983.

156. Thornton C .A., Johnson K. and Moxley R. T. Myotonic dystrophy patients have larger CTG expansions in skeletal muscle than in leukocytes // Ann. Neural.-1994,- V. 35,-104-107.

157. Thornton C. A., Wymer J. P., Simmons Z. et al. Repression of the homeobox gene DMAHP in cis by the myotonic dystrophy CTG repeat expansion //' Nat. Genet.-1997,- V. 16,- 407-409.

158. Thyagarajan D., Byrne E., Noer A. S. et al. MtDNA in congenital mvotonie dystrophy // Am. J. Hum. Genet.- 1997.- V. 52,- 207-209.

159. Timchenko L., Nastainczyk W., Schneider T. et al. Full-length myotonin protein kinase (72kDa) displays serine kinase activity // Proc. Natl Acad. Sci. USA.- 1995,- V. 92.- 5366-5370.

160. Timchenko L., Timchenko N.A., Caskey C.T. and Roberts R. Novel proteins with binding specificity for DNA CTG repeats and RNA CUG repeats: implications for myotonic dystrophy // Hum. Mol. Genet.- 1996.- V. 5,- 115-121.

161. Thibault M.C., Brook J.D., Korneluk R.G. et al. Molecular homogeneity for myotonic dystrophy among Quebec French Canadians // Cytogenet. And Cell Genet.- 1991. V. 58. № 3. C.2026.

162. Verkerk A. J. M. H., Pieretti M., Sutcliife J. S. et at. Identification of a gene (FMR- 1) containing a CGG repeat coincident with a breakpoint cluster region axibiting length variation in fragil X syndrome // Cell.- 1991V. 65,- 905- 914.

163. Wang J., Pegoraro E., Menegazzo E. et al. Myotonic dystrophy: evidence for a possible dominant-negative ENA mutation // Hum. Mol. Genet.- 1995.- V. 4.599- 606.

164. Wang Y.-H., Amirhaeri S., Kang S. et al. Preferential nuclfosome assembly at DNA triplet repeats from the myotonic dystrophy gene // Science.- 1994,- V. 265.-669-671.

165. Waring J. D., Haq R., Tamai K. et al. Investigation of myotonic dystrophy kinase isoform translocation and membrane association // J. Biol. Chem.- 1996.-V. 271.-15187-15193.

166. Watkins W.S., Bamshad M., Jorde L.B. Population genetiks of trinuldeotide repeat polymorphisms //Hum. Mol. Genet.- 1995.-V. 4.-№ 9.- 1485-1491.

167. Wells R. D. Molecular basis of genetic instability of triplet repeats // J. Biol. Chem.-1996,- V. 271.- 2875-2878.

168. Whiting E.J., Waring J. D., Tamai K. et al. Characterization of myotonic dystrophy kinase (DMK) protein in human and rodent muscle and central nervous tissue // Hum. Mol. Cenet- 1995a.- V. 4. 1063-1072.

169. Whiting E.J., Tsilfidis C., Surh,I. et al. Convergent myotonic dvstrophy (DM) haplotypes: potential inconsistencies in human disease gene localisation // Eur. J. Hum. Genet.- 1995b.- V. 3.-195-202.

170. Wieringa B. Myotonic dystrophy reviewed: back to the future? // Hum. Mol. Genet.-1994.- V. 3.-1-7.

171. Willems P.J. Dynamic mutations hit double figures // Nature Genet.- 1994.-V. 8.-P. 213-215.

172. Wong L.-J. C., Ashizawa Т., Monckton D. G. et al. Somatic heterogeneity of the CTG repeat in myotonic dystrophy is age and size dependent // Am. J. Hum. Genet-1995.- V. 56.-114-122.

173. Woodward J. В., Heaton R. K., Simon D. B; and Ringel S. P. Neuropsychological findings in myotonic dystrophy // J. Clin. Nenropsychol.-1982.-V. 4,-335-342.

174. Yamagata H., Miki Т., Sakoda S. I. et al. Detection of a premutation in Japanese myotonic dystrophy // Hum. Mol. Genet.-1994,- V. 3.- 819-820.

175. Zatz M., Passos- Bueno M. R., Cerqueira A. et al. Analysis of the CTG repeat in skeletal muscle of young and adult myotonic dystrophy patients: when does the expansion occur? // Hum. Mol. Genet.- 1995.- V. 4,- 401- 406.

176. Zerylnick C., Torroni A., Sherman S. L. And Warren S. T. Normal variation at the myotonic dystrophy locus in global human populations // Am. J. Hum. Genet-1995.- V. 56.- 123-130.