Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетические особенности клинических изолятов Chlamydia trachomatis, in vitro устойчивых к фторхинолонам или макролидам

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мисюрина, Ольга Юрьевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Общая характеристика класса Chlamydiaceae.

1.2. Антигены.

1.3. Особенности жизненного цикла Clamydiaceae.

1.4. Геномика хламидий.

1.5. Клиническое значение.

1.6. Персистенция.

1.7. Использование антибактериальных препаратов для лечения хламидиозов.

1.8. Механизм действия макролидов.

1.9. Механизм действия фторхинолонов.

1.10. Антибиотикорезистентность хламидий.

1.11. Механизмы устойчивости микроорганизмов к антибактериальным агентам.

1.12. Устойчивость к антибактериальным препаратом, обусловленная изменениями в бактериальной клеточной стенке.

1.13. Механизмы, обеспечивающие резистентность бактерий к фторхино лонам.

1.14. Механизмы, обеспечивающие устойчивость бактерий к макролидам.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты.

3.1. Определение чувствительности клинических изолятов С. trachomatis к антибактериальным агентам.

3.2. Определение нуклеотидной последовательности Quinolone-Resistance

Determining- Region gyrA и parC клинических изолятов Chlamydia trachomatis.

3.3. Анализ вторичной структуры белка YgeD С. trachomatis.

3.4. Определение нуклеотидной последовательности 3' -области генаygeD клинических изолятов С. trachomatis.

3.5. Определение нуклеотидной последовательности пептидилтрансферазной петли гена 23 S рРНК клинических изолятов С. trachomatis, устойчивых к макролидам.

Глава 4. Обсуждение.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетические особенности клинических изолятов Chlamydia trachomatis, in vitro устойчивых к фторхинолонам или макролидам"

По данным Всемирной Организации Здравоохранения, в развитых странах Chlamydia trachomatis в настоящее время является самым распространенным бактериальным агентом, передающимся половым путем. Хламидии обнаруживаются у 5% здоровых людей и более чем у 20% пациентов кожно-венерологических клиник. Наибольшая инфицированность наблюдается среди населения в возрасте 17-25 лет.

Хламидии особенно опасны для репродуктивного здоровья женщин, так как принимают участие в формировании хронических воспалительных заболеваний органов малого таза. С хламидиями ассоциировано более половины случаев хронического сальпингита, который нередко заканчивается трубной непроходимостью, эктопической беременностью и бесплодием.

Современные схемы лечения бактериальных инфекций, в том числе хламидиозов, включают использование антибактериальных препаратов. Широкое использование в клинике антибиотиков приводит к появлению резистентных к ним штаммов микроорганизмов. Препаратами выбора для лечения хламидиозов являются тетрациклины и макролиды. Эффективными также являются некоторые препараты фторхинолонового ряда. Потенциал защитных свойств микроорганизмов очень высок: разнообразие фенотипов резистентности и систем горизонтального генного транспорта, стабильное поддержание генов резистентности за счет ко-селекции, т.е. селективного давления не только антибиотиков, но и других, еще мало изученных факторов [Salyers 1997]. Резистентность бактерий к макролидам часто бывает обусловлена модификацией пептидилтрасферазной области 23 S рРНК -метилированием или точечными мутациями в ней [Arthur 1987, Sor 1982].

Гораздо реже встречаются случаи резистентности к макролидам, обусловленные ферментативной модификацией препарата или его активным выбросом [Ross 1990, Jenkins 1991].

Фторхинолоны - синтетические антибиотики широкого спектра действия, производные налидиксовой кислоты. Мишенями для действия фторхинолонов являются бактериальные топоизомеразы: ДНК гираза и топоизомераза IV. К настоящему моменту известно два основных механизма, обеспечивающих формирование резистентности бактерий к фторхинолонам. Первый - это мутации в так называемых районах, определяющих резистентность к хинолонам (QRDR) генов, кодирующих субъединицы ферментов-мишеней топоизомеразы II (ДНК-гиразы) - gyrA и (или) топоизомеразы IV- рагС. Второй - снижение уровня накопления препаратов в клетках за счет уменьшения проницаемости клеточной мембраны или увеличения обратного выброса препарата из клетки.

Применение новых препаратов должно сопровождаться теоретическими и эпидемиологическими исследованиями: определением ингибирующих и бактерицидных концентраций, изучением механизмов формирования резистентности, выявлением частот встречаемости резистентных клинических изолятов и перекрестной резистентности. Хламидии относятся к числу инфекций со стертой клинической картиной. Неадекватное использование антибиотиков может, с одной стороны, представлять угрозу для нормальной микрофлоры человека, а с другой стороны - способствовать появлению антибиотикорезистентных штаммов. Отмечены случаи рецидивирующих заболеваний, обусловленных С. trachomatis, устойчивой к доксициклину, азитромицину и офлоксацину [Somani 2000]. Однако механизмы устойчивости

С. trachomatis к различным антибиотикам практически не изучены. Недавно была определена полная нуклеотидная последовательность генома С trachomatis. Полученные данные открывают новые возможности для исследования молекулярных механизмов устойчивости С. trachomatis к антибиотикам.

Целью данной работы являлось исследование молекулярных изменений в генах мишеней фторхинолонов (гиразы и топоизомеразы IV) и макролидов (23 S рРНК), а также в гене предполагаемого белка активного выброса лекарств (YgeD) у клинических изолятов С. trachomatis и изучение связи между наличием точечных мутаций в этих генах и резистентностью к некоторым препаратам ряда фторхинолонов и макролидов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать систему на основе метода обратной транскрипции -полимеразной цепной реакции для оценки минимальных ингибирующих концентраций антибактериальных агентов.

2. С использованием методов прямой иммунофлуоресценции и обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции выявить клинические изоляты С. trachomatis, устойчивые к фторхинолонам и макролидам.

3. В устойчивых к фторхинолонам клинических изолятах С. trachomatis исследовать молекулярные изменения в генах гиразы, топоизомеразы IV и предполагаемого белка активного выброса лекарств.

4. В устойчивых к макролидам клинических изолятах С. trachomatis исследовать молекулярные изменения в гене 23 S рРНК.