Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетические и клинико-генотипические особенности муковисцидоза в российских популяциях

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетические и клинико-генотипические особенности муковисцидоза в российских популяциях"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи

Петрова Ника Валентиновна

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И КЛИНИКО-ГЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МУКОВИСЦИДОЗА В РОССИЙСКИХ ПОПУЛЯЦИЯХ

03.00Л 5 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва-2009

003459374

003459374

Работа выполнена в лаборатории генетической эпидемиологии Государственного учреждения Медико-генетического научного центра РАМН, Москва

Научный консультант: академик РАМН, доктор биологических

наук, профессор

Евгений Константинович Гинтер

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Наталья Николаевна Вейко

доктор биологических наук, профессор Светлана Андреевна Лимборская

доктор биологических наук, профессор Валерий Вячеславович Носиков

Ведущее научное учреждение: Государственное образовательное

учреждение высшего профессионального образования Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита диссертации состоится « 02 » февраля 2009 г. в 1 ' часов на заседании Диссертационного совета Д 001.016.01 при ГУ Медико-генетическом научном центре РАМН (ГУ МГНЦ РАМН) по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Медико-генетического научного центра РАМН.

Автореферат разослан «_»_2008 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 001.016.01,

доктор медицинских наук ' P.A. Зинченко

Актуальность исследования.

Муковисцидоз (MB, CF; OMIM #219700) наиболее частое наследственное аутосомно-рецессивное заболевание среди европеоидов. Муковисцидоз обусловлен мутациями в гене CFTR, муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости. Белок CFTR, функционируя как цАМФ-зависимый хлорный канал, регулирует работу других хлорных и натриевых каналов и выполняет ряд иных важных функций (Riordan J.M. et al., 1989). При муковисцидозе в патологический процесс вовлекаются экзокринные железы разных систем организма: органов дыхания, системы пищеварения (поджелудочная железа, печень, желчные пути, пищеварительный тракт), а также потовые железы и урогенитальный тракт (Капранов Н.И. и др., 2004; Witt H., 2003).

В настоящий момент описаны более 1500 мутаций и 250 полиморфизмов в гене CFTR (CFTR mutation database, http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/), частоты которых широко варьируют в разных этнических группах. Спектры различных мутаций и полиморфизмов гена CFTR обладают выраженной популяционной специфичностью, являясь отражением генетических процессов, формирующих популяции. Частота MB варьирует в разных популяциях мира в весьма широких пределах (например, в Европе от 1:1800 новорожденных в Ирландии до 1:26000 новорожденных в Финляндии) (WHO, 2004). Оценки частоты MB в разных популяциях Российской Федерации (РФ) также весьма различны (от 1:4900 до 1:12000 живорождённых) (Петрова Н.В., Гинтер Е.К., 1997; Капранов Н.И., 2001; Капранов Н.И., 2006; Радионович A.M. и др., 2005; Воронин C.B. и др., 2007; Матулевич С.А., 2007; Михальчук В.В. и др., 2007; Одинокова О.Н. и др., 2007). Значительное различие спектров CFTR мутаций и частоты заболевания вносит объективные сложности в разработку протоколов проведения ДНК-диагностики MB и проведения генетического консультирования среди населения, относящегося к разным этническим группам и проживающего в разных регионах.

Клиническая картина при MB весьма разнообразна: продолжительность жизни, спектр и тяжесть клинических проявлений значительно варьируют среди больных MB. И хотя вариабельность клинического течения MB несомненно обусловлена многочисленностью CFTR мутаций, а следовательно, и CFTR генотипов, но различие в течении MB, наблюдающееся у больных, имеющих одинаковые мутации в гене CFTR, в частности, у сибсов, позволяет предполагать влияние на клиническую картину MB других генетических факторов, отличных от гена CFTR (Ferrari M., Cremonesi L., 1996; Parad R.B. et al., 1999; McKone E.F. et al., 2006; Mekus F. et al., 2000; Vanscoy L.L. et al., 2007). В настоящее время во всем мире ведется активный поиск генов, оказывающих влияние на клинические проявления MB. Изучается ряд генов, белковые продукты которых могут быть вовлечены в патогенетические механизмы MB. Особое внимание уделяется генам, продукты которых вовлечены в иммунную защиту организма (Drumm M.L. et al., 2005; Salvatore F. et al., 2002; Witt H., 2003; Yarden J. et al., 2005; Garred P.et al., 2003; Thio C.L. et al., 2005; Wiertsema

S.P. et al., 2006; Иващенко Т.Э., Баранов B.C., 2000; Келембет H.A. и др., 2005; Корытина Г.Ф.и др., 2004)..

Несмотря на то, что муковисцидоз интенсивно изучается на протяжении нескольких десятков лет специалистами разных направлений, в том числе и в России, интерес к проблемам этого заболевания не ослабевает. Вопросы распространенности MB в разных популяциях и этнических группах, выявления гено-фенотипических корреляций, определения факторов, лежащих в основе вариабельности клинических проявлений, особенностей консультирования в связи с введением пресимптоматической диагностики в России не решены до конца.

Цель исследования:

Получение оценки частоты муковисцидоза, изучение молекулярно-генетического разнообразия гена CFTR в российских популяциях, выявление гено-фенотипических корреляций у российских больных и разработка на основе полученных результатов принципов медико-генетического консультирования.

Задачи исследования:

1. Оценить частоту MB в популяциях европейской части России;

2. Изучить спектр и относительные частоты диагностически значимых мутаций в гене CFTR в обширной выборке российских больных MB;

3. Оценить распространенность некоторых мутаций гена CFTR в разных этнических группах коренного населения России;

4. Изучить генетическую изменчивость локуса гена CFTR по внутригенным и внегенным полиморфизмам в семьях с MB; оценить возможность использования этих полиморфизмов для косвенной ДНК-диагностики в семьях с частичной информативностью;

5. Изучить клинические особенности MB у больных в зависимости от CFTR генотипа;

6. Изучить возможное модифицирующее влияние ряда генов на клинические проявления муковисцидоза у больных, гомозиготных по мутации F508del;

7. Разработать принципы медико-генетического консультирования для российских семей, отягощенных MB. Провести расчеты генетического риска MB при наличии двух независимых факторов риска (положительный тест на ИРТ и ДНК-тестирование; гиперэхогенный кишечник и ДНК-тестирование).

Научная новизна:

1. Впервые на основе определенных прямыми методами популяционной и

относительной частот мутации F508del дана оценка частоты муковисцидоза

в популяциях русских европейской части России.

2. Впервые определен спектр частых мутаций в гене СРТЯ, составляющих до 75,7% мутантных аллелей у российских больных МВ, на основе которого разработаны наборы для ДНК-диагностики.

3. Впервые изучена распространенность семи СРТЯ мутаций в популяциях европейской части России в пяти этнических группах (русские Ростовской, Тверской, Псковской, Кировской областей, марийцы, чуваши, удмурты, башкиры). Выявлены различия в частоте встречаемости мутации Р508с1е1 среди изученных этносов.

4. Впервые изучена молекулярно-генетическая изменчивость промоторной и 5' регуляторной областей гена СРТЯ у российских больных МВ, у которых при предварительном тестировании не идентифицированы одна или обе мутации.

5. Выявлены мутации 3944с1еПХ}, 3667ёе1ТСАА и Ы38тзА, ранее не обнаруженные у российских больных МВ. Впервые идентифицированы мутации 604тзА и К598тз. Мутации Ь1381т и 604тзА можно отнести к относительно частым у российских пациентов с МВ.

6. Впервые в семьях российских больных МВ проанализированы частоты аллелей внутригенного полиморфизма ГУБЮА и частоты гаплотипов четырех внутригенных полиморфизмов 1У81СА-1У86аОАТТ-1У88СА-1У817ЬСА. Показаны различия в частотах и наборах гаплотипов изученных полиморфизмов, ассоциированных с нормальными и мутантными аллелями гена СРТЯ.

7. Выявлены три группы мутаций, ассоциированные с определенными гаплотипами четырех внутригенных полиморфизмов 1У81СА-1У86аОАТТ-1У88СА-1УБ17ЬСА: мутации Р5(Ше1, ШЗОЗК, 0542Х, 2143с3с1 и 394сЗе1ТТ -с гаплотипом 21-6-23-13; мутации СРТ11с1е1е2,3(21кЬ), 1677с1е1ТА, 1Л38ик -с гаплотипом 22-7-16-13; мутации W1282X, R334W - с гаплотипом 26-7-1717.

8. Впервые у российских больных МВ изучена взаимосвязь клинической картины и СРТЯ генотипа (с учетом классификации мутаций в зависимости от степени дефекта хлорного канала).

9. Впервые на выборке российских больных МВ, гомозиготных по мутации Р5(Ше1, изучено модифицирующее влияние шести генов на клинические проявления заболевания и показано, что гены еЫОБ, МВЬ2 и ЯРЕ можно рассматривать в качестве модификаторов клинической картины заболевания.

10. Впервые для российских семей проведены расчеты генетического риска при наличии двух независимых факторов риска МВ: положительного результата первого теста на ИРТ у новорожденного или обнаружения гиперэхогенности кишечника у плода при ультразвуковом исследовании и положительного или отрицательного результата ДНК-диагностики.

11. Впервые для российских семей показан высокий риск МВ (приближающийся к 0,25) у плода, имеющего гиперэхогенный кишечник во 2-м триместре, при выявлении носительства СРТЯ мутации одним из родителей.

Научно-практическая значимость работы:

1. Определение спектра и долей частых СРТЯ мутаций и изучение генетической изменчивости локуса гена СРТЯ по внутригенным и внегенным полиморфизмам позволило разработать алгоритм молекулярно-генетической диагностики МВ, в том числе пренатальной, в российских семьях, отягощенных муковисцидозом.

2. Обнаружение новых для российских больных МВ СПИ мутаций расширило спектр мутаций, которые можно рекомендовать для рутинного анализа в диагностических лабораториях.

3. Введение полиморфизма 1У81СА в протокол анализа повышает эффективность косвенной диагностики в семьях с неполной информативностью. Использование методов прямой (анализ частых СПЯ мутаций) и косвенной (анализ четырех внутригенных и пяти внегенных полиморфизмов) ДНК-диагностики позволяет обеспечить проведение пренатальной диагностики для 99,5% семей, отягощенных муковисцидозом.

4. Изучение взаимосвязи между фенотипом и СРТЯ генотипом позволяет выявить ассоциации между СРТЯ мутациями и тяжестью поражения как органов пищеварительной, так и бронхолегочной системы и дать более точный прогноз течения заболевания у больных МВ.

5. Изучение полиморфизмов некоторых генов позволяет выявить возможные механизмы, лежащие в основе клинического разнообразия у пациентов с одинаковым СРТЯ генотипом.

6. Расчеты риска МВ в случаях положительного результата первого теста на ИРТ у новорожденного или обнаружения гиперэхогенности кишечника у плода при ультразвуковом исследовании с учетом результата ДНК-диагностики могут дать более точный прогноз для потомства при медико-генетическом консультировании.

7. Результаты по выявлению частых, диагностически значимых для российских больных МВ мутаций в гене СПИ и контрольные образцы ДНК с известными мутациями использованы при разработке наборов для ДНК-диагностики МВ (в лаборатории ДНК-диагностики ГУ МГНЦ РАМН).

Положения, выносимые на защиту:

1. Изучение спектра и относительных частот мутаций в гене СРТЯ в обширной выборке российских больных МВ (776 индивидов) из разных регионов РФ выявило, что к диагностически значимым можно отнести мутации Р508<3е1 (54,2%), СРТ1Ше2,3(21кЬ) (7,2%), 2143с1е1Т (2,1%), \V1282X (2,0%), МЗОЗК (1,9%), 3849+10кЬС>Т (1,9%), 2184тзА (1,7%), С542Х (1,3%), 1677с1е1ТА (0,8%), 382Ые1Т (0,8%), Ю34\У (0,7%), ЬШтэ (0,6%) и 394с1е1ТТ (0,5%). Доля не охарактеризованных мутантных аллелей составила 23%.

2. В результате изучения частоты семи СРТЯ мутаций (СРТ11с1е1е2,3 (21 кЬ), Р508с1е1, 1677с1е1ТА, 2143с1е1Т, 2184тзА, 394с1е1ТТ и 3821с1е1Т) в выборках здоровых индивидов, относящихся к 5 этническим группам РФ: русских из европейской части России, марийцев, удмуртов, чувашей и башкир,

¡?

показано, что частота мутации F508del среди русских европейской части России значимо выше (0,00518), чем у изученного коренного населения Волго-Уральского региона (<0,002).

3. Частота муковисцидоза, рассчитанная из популяционной и относительной частот мутации F508del для популяций русских европейской части России, составляет 1:10935.

4. Анализ четырех внутригенных маркеров гена CFTR (IVS1CA, IVS6aGATT, IVS8CA и IVS17BCA) выявляет неравновесие по сцеплению аллелей и гаплотипов в выборках мутантных и нормальных хромосом. Мутация F508del сцеплена с гаплотипами 21-6-17-13 и 21-6-23-17 в 91,8% случаев. Мутации G542X, N1303K, 394delTT и 2143delT ассоциированы с гаплотипом 21-6-23-13. С гаплотипом 22-7-16-13 сцеплены мутации CFTRdele2,3(21kb), 1677delTA и L138insA; с гаплотипом 26-7-17-17 - мутации W1282X и R334W. Самым частым в выборке нормальных хромосом родителей больных MB (23,5%) является гаплотип 22-7-16-13. Анализ четырех внутригенных маркеров (IVS1CA, IVS6aGATT, IVS8CA и IVS17BCA) и пяти внегенных маркеров (XV-2c; КМ19; CS7; J3.ll; W30) позволяет проводить пренатальную диагностику MB практически во всех семьях (99,5%).

5. У российских больных MB выявлена ассоциация между CFTR генотипом и тяжестью поражения как органов пищеварительной, так и бронхолегочной системы. У больных с двумя мутациями I и/или II классов дебютом заболевания чаще является кишечный синдром, манифестирующий в более раннем возрасте; колонизация легких P.aeruginosa начинается в более раннем возрасте, что приводит к более быстрому прогрессированию заболевания по сравнению с больными, имеющими, по крайней мере, одну мутацию IV или V класса.

6. Гены eNOS, MBL2 и HFE можно рассматривать как модификаторы клинических проявлений MB у российских больных. Установлена ассоциация полиморфного аллеля A VNTR eNOS4 со снижением показателей функции внешнего дыхания (ФЖЕЛ и ОФВ1; р<0,05) и со снижением частоты цирроза печени (р<0,05). Выявлена ассоциация аллелей G54D, G57E, R52C и -221G>C гена MBL2 со снижением показателей ОФВ, у детей дошкольного возраста (р<0,05), более ранним поражением P.aeruginosa (р=0,017) и ассоциация мутации G54D с более частым поражением А1. xylosoxidans (р=0,037) и St. maltophilia (р=0,049). Обнаружена ассоциация мутации H63D гена HFE с более тяжелым поражением пищеварительной системы и ранней манифестацией кишечного синдрома (р<0,05).

7. Параметрами, которые необходимо учитывать при медико-генетическом консультировании в семьях с MB и расчетах апостериорного риска, являются частота MB (1:10965), частота гетерозиготного носительства мутантных аллелей MB (0,019), доля выявляемых при ДНК-диагностике мутаций (75,5%) и относительные частоты MB мутаций, если оба родителя происходят из популяций европейской части России. Риск MB у новорожденного, положительно тестированного на ИРТ, составляет 0,0541

при обнаружении у него одной СПЯ мутации и 0,0005, если ни одна из частых СРТЯ мутаций не обнаружена. Риск МВ у плода с эхогенностью кишечника, диагностированной при УЗИ во втором триместре беременности, при обнаружении СПЯ мутации у одного из родителей составляет 0,1733, если ни одна из частых СРТЯ мутаций не обнаружена -0,0017.

Личное участие автора в получении научных результатов.

Представляемая диссертационная работа является обобщением результатов многолетних комплексных исследований. Работа выполнена на базе лаборатории генетической эпидемиологии ГУ МГНЦ РАМН. Планирование эксперимента, обработка, анализ и обобщение материалов исследования выполнены лично автором. Автор участвовала в сборе популяционных образцов крови совместно с сотрудниками лаборатории генетической эпидемиологии и лаборатории экологической генетики ГУ МГНЦ РАМН, в сборе клинических данных о больных МВ совместно с сотрудником лаборатории генетической эпидемиологии Тимковской Е.Е. и сотрудниками научно-клинического отделения муковисцидоза д.м.н. Н.Ю. Каширской, к.м.н. Радионович А.М., к.м.н. Воронковой А.Ю. Автором создана коллекция ДНК больных МВ и их родственников. Выделение ДНК из образцов крови и ворсин хориона плодов, анализ частых мутаций в гене СРТЯ у 776 больных МВ, 1082 родителей, в популяционных выборках (3739 индивидов); анализ внугригенных и внегенных полиморфизмов в семьях с МВ (344 больных и 488 родителей); проведение 109 пренатальных диагностик МВ выполнены лично автором. Анализ кодирующей последовательности гена СРТЯ в выборке 50 пациентов методом денатурирующего гель-электрофореза проведен в Институте биогенетики (Брест, Франция); анализ полиморфизма генов-модификаторов клинической картины МВ (148 больных, гомозиготных по мутации Р508<1е1) проведен совместно с сотрудником лаборатории Тимковской Е.Е.; анализ последовательности 5' регуляторной и промоторной области гена СБТЯ у 83 больных МВ и 50 здоровых индивидов методом анализа конформационного полиморфизма однонитевых фрагментов ДНК проведен совместно с сотрудниками лаборатории к.б.н. М.Ю. Скобловым и О.Н. Нурутдиновой, что оговорено в соответствующих местах текста. Статистический анализ: расчет относительных частот мутаций, расчет популяционной частоты мутации Р508ёе1, оценка частоты МВ в популяциях европейской части России, анализ гено-фенотипических корреляций у российских больных МВ, оценка возможного влияния генов-модификаторов на клиническую картину МВ у больных с одинаковым СРТЯ генотипом, расчет генетических рисков при наличии двух независимых факторов риска МВ в разных регионах России выполнены лично автором.

Апробация работы.

Результаты исследования были представлены на Европейских конференциях по муковисцидозу (в 1991, 1996, 1999, 2006, 2008 годах); на

Европейских международных симпозиумах по муковисцидозу (в 1997, 2000, 2001, 2002, 2003 годах); на Европейской конференции по генетике человека (2008 г.); на 2 (4) Российском съезде медицинских генетиков (Курск, 2000 г.); на 5-ом Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург - Гастро-2003» (С.-Петербург, 2003 г.); на Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической генетики» (Москва, 2003 г.); на Третьем съезде генетиков и селекционеров России "Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития" (Москва, 2004 г.); на Третьих антропологических чтениях к 75-летию со дня рождения академика В.П.Алексеева «Экология и демография человека в прошлом и настоящем» (Москва, 2004 г.); на V Съезде Медицинских генетиков (Уфа, 2005 г.); на VII национальном конгрессе по муковисцидозу (Воронеж, 2005 г.); на Российском Медицинском Форуме «Фундаментальная наука и практика» (Москва, 2006 г.); на VIII Национальном конгрессе «Муковисцидоз у детей и взрослых» (Ярославль, 2007 г.); на межлабораторном семинаре ГУ МГНЦ РАМН (25 июня 2008 г.).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 74 работы из них 38 в журналах, рекомендуемых ВАК МОН РФ.

Структура и объем работы.

Работа изложена на 305 листах машинописного текста; состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 5 глав собственных исследований и обсуждений результатов, заключения, выводов, списка цитированной литературы (401 источник, в том числе 45 отечественных и 356 зарубежных) и приложения. Иллюстративный материал содержит 68 таблиц, 43 рисунка, 33 таблицы Приложений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы.

Характеристика выборок. Больные МБ, их родители и сибсы для проведения молекулярно-генетического исследования направлялись из научно-клинического отделения муковисцидоза и научно-консультативного отдела ГУ МГНЦ РАМН, Детской Республиканской клинической больницы, Научного центра здоровья детей РАМН, региональных клинических детских больниц. Родственники больных МВ направлялись также из региональных медико-генетических консультаций. Выборка больных МВ и их родственников формировалась по мере обращения в период с 1990г. по 2007г. Объем выборки больных МВ составил 776 пациентов из 766 семей в возрасте от 0 до 39 лет. Объем выборки родителей и сибсов - 1082 человека. Более 87,4% семей проживали в европейской части России, около 12,6% - в Сибири и на Дальнем Востоке.

Анализ сцепления с полиморфными маркерами гена CFTR проведен у 344 больных муковисцидозом из неродственных семей и 488 их родителей.

Для изучения гено-фенотипических корреляций и модифицирующего влияния ряда генов на клиническую картину МВ проанализированы истории болезни 460 детей из 776 больных МВ, находившихся на постоянном амбулаторном учете в научно-клиническом отделении муковисцидоза ГУ МГНЦ РАМН с 1991 по 2006 год, из них 122 истории болезни пациентов, проживающих в Москве. У всех больных, включенных в исследование, диагноз муковисцидоза был установлен клинически врачами научно-клинического отделения муковисцидоза ГУ МГНЦ РАМН (руководитель д.м.н., профессор Капранов Н.И.) Подтверждался диагноз потовым тестом (концентрация хлоридов более 60 ммоль/л), измерением разности электрических потенциалов на эпителии носа. Возраст обследованных больных колебался от 3 месяцев жизни до 21 года. Средний возраст составил 9,79±0,26 лет. Распределение больных по полу показало практически равное соотношение мальчиков и девочек (239 : 221; 52% : 48%). Данные для расчета массо-ростового индекса (МРИ) были доступны для 358 МВ больных. У 51,4% пациентов наблюдается отставание физического развития (МРИ<90% от должного). Измерения для оценки показателей функции внешнего дыхания (ФВД) были проведены у 307 больных. Данные микробиологического исследования мокроты были доступны у 424 больных. Данные о состоянии гепатобилиарной системы имелись по 455 больным. Цирроз печени отмечен у 15,4% пациентов, диффузный фиброз - у 9,7%. Гепатит - у 6,8%, в том числе вирусный - у 3,9% в анамнезе. Мекониальный илеус (МИ) отмечен у 4,9%, а синдром дистальной интестинальной обструкции (СДИО) - у 8,5% в анамнезе (данные по 409 пациентам). В большинстве наблюдений имела место смешанная форма МВ -93,5%, кишечная форма в обследуемой выборке составила лишь 1,1% (5 больных), а легочная форма - 5,4 % (23 пациента). Данные доступны для 447 больных. Течение заболевания оценивалось как тяжелое у 59,4%, средне-тяжелое - у 40,4% и легкое - у 0,2% пациентов (всего оценка была возможна у 451 больного).

Для анализа частот СТУЙ мутаций в популяциях европейской части России использован материал, собранный в ходе медико-эпидемиологических экспедиций сотрудниками лаборатории генетической эпидемиологии и лаборатории экологической генетики ГУ МГНЦ РАМН в период 1993-2007 годов. Образцы крови башкир собраны сотрудниками Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН (г. Уфа, Башкирия) в 2006-2007 годах. Материал собирался у здоровых неродственных индивидов, принадлежащих к коренному этносу вплоть до третьего поколения и являющихся уроженцами обследуемых населенных пунктов. При сборе материала были получены письменные информированные согласия. При этом заполнялась анкета с указанием мест рождения и этнической принадлежности обследуемых и их предков до третьего поколения (бабушки-дедушки). Всего исследовано 3739 здоровых индивидов.

Образцы пятен крови новорожденных г. Москвы 1990 г.р. и 1995 г.р. для анализа частоты мутации Р508йе1 были любезно предоставлены

Г;

А.Д.Байковым (Московский центр неонатального скрининга, ДПБ №6 г.Москвы).

Экспериментальные методы. Материалом исследования являлась ДНК, выделенная из различных источников (лейкоцитов цельной крови, пятен высушенной крови, ворсин хориона). ДНК выделяли методом ферментативного гидролиза протеиназой К с последующей очисткой высаливанием, хлороформной экстракцией и осаждением охлажденным этанолом (96%), а также с использованием наборов реактивов для выделения ДНК «Wizard Genomic DNA Purification Kit» (фирма «Promega», (USA) и Diatom™ DNA Prop (ООО «Изоген», Россия) в соответствии с рекомендациями производителя.

Анализ частых мутаций и полиморфизмов гена CFTR проводили методами ПЦР и мультиплексной ПЦР, рестрикционного анализа, гель-электрофореза, используя олигонуклеотиды, последовательности которых были опубликованы в статьях (Kerem B.-S. et al., 1989; Zielenski J. et al., 1991; Ng I.S.I, et al., 1991; Highsmith W.E. et al., 1994; Dork T. et al., 2000; Chehab F.F. et al., 1991; Rosenbloom C.L. et al., 1989; Feldman G.L. et al., 1988; Williams C. et al., 1988; Northrup H. et al., 1989; Dean M. et al., 1990). Для анализа мутаций F508del, I506del, 1677delTA, CFTRdele2,3(21kb), 2143delT, 2184insA, 394delTT, 3821delT методом мультиплексной ПЦР использовали набор прайм еров, разработанный д.б.н., проф. А.В. Поляковым (лаборатория ДНК-диагностики ГУ МГНЦ РАМН). Скрининг CFTR мутаций методом электрофореза в денатурирующем градиентном геле (DGGE) и последующее секвенирование фрагментов ДНК с аномальной подвижностью проводили в лаборатории биогенетики Центра биогенетики (Брест, Франция), согласно разработанной в этой лаборатории методике (Verlingue С. et al., 1995). Поиск мутаций в промоторной и 5' регуляторных регионах гена CFTR проводили методом конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов ДНК (SSCP). Автоматическое секвенирование фрагментов ДНК с аномальной подвижностью проводили в ООО «Хеликон», Россия. Анализ мутаций и полиморфизмов генов eNOS, MBL2, TNFA, LTA, GSTM1, HFE1 проводили методами ПЦР, мультиплексной ПЦР, рестрикционного анализа и гель-электрофореза, используя праймеры, описанные в литературе (Monti L.D. et al., 2003; Zang D.L. et al., 2003; Madsen H.O. et al., 1998; Beutler E. et al., 1996; Пай Г.В. и др., 2003) . Общеклинические методы. Анализируемые параметры включали: пол, возраст, место проживания, проводимую терапию, время манифестации кишечного и респираторного синдрома, возраст постановки диагноза, форму заболевания, тяжесть течения, показатели ФВД (ФЖЕЛ и ОФВ]), результаты посева мокроты (наличие высева, его периодичность, существование мукоидной или гладкой формы P.aeruginosa, наличие высева St.aureus, MRSA, Al.xylosoxidans, В.cepacia, St.maltophilia), массу и рост, поражение гепатобилиарной системы и наличие в анамнезе мекониального илеуса. Для оценки массы и роста использовался массо-ростовой индекс (МРИ) определяемый по формуле: (фактическая масса/идеальная масса по росту и полу) 100%, для чего использовали перцентильные графические стандарты, полученные Национальным Центром по Статистике здоровья (National Centre

for Health Statistics - NCHS), и рекомендованные Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ), в тех странах, где нет своих национальных стандартов (Zhang Z. et al., 2004). Снижение МРИ ниже 90% от возрастной нормы считалось отставанием в физическом развитии. Для оценки функции легких использовались такие основные показатели ФВД, как Форсированная Жизненная Емкость Легких (ФЖЕЛ) и Объем Форсированного Выдоха в 1 секунду (ОФВ|). Оценка степени тяжести легочной патологии проводилась с учетом показателей ФВД, данных микробиологического исследования мокроты, состояния питания и физического развития (оценивался массо-ростовой индекс), врачебной оценки тяжести течения, которая, в свою очередь, опиралась на шкалу Швахмана-Брасфильда, в модификации C.B. Рачинского и Н.И. Капранова и на оценку рентгенологической картины по шкале Криспина-Нормана. Выделялись три степени тяжести течения - тяжелое, средне-тяжелое и легкое течение. Под поражением печени подразумевалось наличие врачебного заключения об имевшемся диффузном фиброзе, холестатическом гепатите и циррозе печени. Врачебный диагноз заболеваний печени базировался на клинической картине, результатах УЗИ, данных биохимического анализа крови. Имевшееся у ряда больных вирусное поражение печени учитывали отдельно. Данную часть работы проводили совместно с сотрудниками научно-клинического отделения муковисцидоза ГУ МГНЦ РАМН (руководитель д.м.н., проф. Н.И. Капранов). Статистическая обработка результатов исследований. Статистическая оценка различий частот аллелей и гаплотипов ДНК-маркеров, а также частоты качественных признаков проводилась с использованием критериев yj, модифицированного х2> теста Фишера (Животовский Л.А., 1991). Расчет осуществляли с использованием пакета программ, составленного сотрудниками лаборатории генетической эпидемиологии д.б.н. Ельчиновой Г.И., д.б.н. Нурбаевым С.Д. Для анализа ассоциаций между мутациями и полиморфными вариантами изучаемых генов и клиническими характеристиками заболевания использован непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Оценка функции выживания в группах пациентов с разными генотипами проведена методом множительных оценок Каплана-Мейера. Для сравнения показателей выживаемости использовали критерий Вилкоксона, модифицированный по Гехану. При расчетах использовали пакет компьютерных программ Statistica 6.0. Для расчетов апостериорных вероятностей поражения новорожденного или плода MB использовали вероятностный метод Байеса.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Одной из важных задач в изучении наследственных заболеваний является определение его частоты. Оценки частоты муковисцидоза в России разнятся в весьма широких пределах. Расчет частоты MB в популяциях европейской части России проведен с использованием двух показателей: относительной доли распространенных CFTR мутаций у больных MB и популяционной частоты данных мутаций.

Анализ относительных частот CFTR мутаций у больных MB.

Молекулярно-генетические исследования по муковисцидозу проводятся в лаборатории генетической эпидемиологии ГУ МГНЦ РАМН на протяжении длительного периода, начиная с 1989 года. Спектр частых мутаций гена CFTR, характерный для больных из России, был определен в результате совместного с Институтом Биогенетики (Брест, Франция) исследования всей кодирующей последовательности гена CFTR в выборке 50 пациентов в 1993-1995 годах (Verlingue С. et al., 1995), межъевропейского коллаборативного исследования распространения мутации CFTRdele2,3(21kb) (Dork Т. et al., 2000), самостоятельных работ (Петрова Н.В. и др., 1994, 1997, 2001; Петрова Н.В., 2005) с учетом данных других отечественных исследователей, анализирующих независимые от нас выборки больных (Иващенко Т.Э„ 2000; Корытина Г.Ф. и др., 2002; Голубцов В.И. и др., 2007).

Для определения относительных долей частых CFTR мутаций были проанализированы 1532 мутантные хромосомы (766 неродственных больных MB). В спектр рутинно анализируемых мутаций вошли мутации F508del, CFTRdele2,3(2 lkb), I507de!, 1677delTA, 2143delT, 2184insA, 394delTT, 3821delT, G542X, G551D, R553X, W1282X, N1303K, E85Q, 621+1G>T, R117H, 1717-1G>A, 3849+10kbC>T, R334W, R347P, S1196X. В ряде случаев были обнаружены образцы, имеющие измененную подвижность амплифицированных фрагментов ДНК в 4, 20, 19 и 13 экзонах. При секвенировании амплифицированных фрагментов с аномальной подвижностью были идентифицированы мутации 3667insTCAA (вставка четырех нуклеотидов ТСАА после положения 3667, 19 экзон) и K598ins (13 экзон, вставка трех нуклеотидов AAA после положения 1923, что приводит к вставке аминокислоты лизин после позиции 598) (каждая у одного больного в компаунде с мутацией F508del), 3944delGT (вставка двух нуклеотидов после положения 3944, 20 экзон; у двух неродственных больных, у одного в компаунде с мутацией F508del, у другого - с 3849+10kbC>T), 604insA (4 экзон, вставка нуклеотида А после положения 604; у трех неродственных больных: у двух в компаунде с мутацией F508del, у третьего - с мутацией G542X) и L138ins (4 экзон, вставка трех нуклеотидов СТА после положения 546, что приводит к вставке аминокислоты лейцин после позиции 138; у шести неродственных больных: у двух в компаунде с мутацией F508del, у двух - с мутацией CFTRdele2,3(21kb), у одного - с мутацией 2184insA, а у одного вторая мутация осталась не идентифицированной). Мутации 3667insTCAA, 3944delGT и L138ins ранее не были отмечены другими отечественными исследователями. Мутации 604insA и K598ins обнаружены впервые. Мутации L138ins и 604insA включены нами в рутинный анализ частых CFTR мутаций у российских больных MB.

На рис. 1 приведена схема распределения относительных долей обнаруженных CFTR мутаций в проанализированной выборке мутантных хромосом.

И Р508йе! - 54,2 ¡1Ш/1282Х - 2,0 § 21841пзА -1,7 В 3821йе!Т - 0,8 ЕЭ394с1е1ТТ - 0,5 Е621-Не>Т-0,2

ШСРТРс!е!е2,3(21кЬ! - 7,2 Ш2143йе1Т - 2,1

амзозк-1,э

Шв542Х -1,3 Ш R334W - 0,7 ЕЭ 31196Х - 0,3 Ш! 3944(1еЮТ - 0,2 ИК5Э8тз - 0,1

@3849-<-10кЬС>Т-1,9

ЕЗ 1877с!е1ТА - 0,8 0 ИЗвтэА - 0,6 Ш604|П8А - 0,3

Ш3667тзТСАА-0,1

ЯК347Р - 0,1 □ не идект. - 23,0

Рис.1. Распределение относительных частот СРШ мутаций (в %) у российских больных МВ.

Анализ мутаций, встречающихся у больных МВ в разных регионах России, подтверждает тенденции, прослеживающиеся в распределении СРТЯ мутаций в Европе: снижение относительной доли мутации Р508(3е! с северо-запада на юго-восток - у российских больных МВ относительная частота мутации Б508с1е1 в среднем составляет 54,2% и колеблется от 59% на северо-западе до 47% на юге европейской части России. Второй по частоте, после мутации Р508с1е1, среди российских больных является мутация СРТ11<!е1е2,3(21кЬ), в среднем составляя 7,2%. Данное значение относительной частоты, самое высокое в Европе, согласуется с гипотезой о происхождении мутации СРТ11ае1е2,3(21кЬ) на территории Восточной Европы среди славянских племен и проникновением ее в Западную Европу с востока. Следует отметить, что среди обследованных нами пациентов мутация СРТЯс1е1е2,3(21кЬ) обнаружена не только у русских, но и у пациентов с другой этнической принадлежностью: у армян, грузин, чеченцев и татар. Такие частые в мире мутации, как 0542Х и Ы1303К, обнаружены и в обследованной нами выборке, с частотами от 0,5% до 2-4% в разных регионах, что соответствует снижению встречаемости данных мутаций с удалением от средиземноморского региона. Мутации в 13 экзоне гена СТТЛ, 2143<1е1Т и 2184тзА, являются относительно частыми мутациями среди изученных российских больных МВ, что согласуется с данными других отечественных авторов, проанализировавших независимые выборки больных МВ (Иващенко Т.Э., 2000; Корытина Г.Ф. и др., 2002; Одинокова О.Н. и др., 2006; Рукавичкин Д.В., 2007). Мутации в55Ш и Я553Х, распространенные во многих популяциях Европы, не | были обнаружены ни у одного из обследованных нами больных МВ. По-

видимому, эти мутации у пациентов из России являются крайне редкими, что согласуется с данными других авторов (Корытина Г.Ф. и др., 2002; Одинокова О.Н. и др., 2006; Рукавичкин Д.В., 2007), в исследованиях которых данные мутации также не были выявлены. Только в исследовании Т.Э. Иващенко мутации G551D и R553X были обнаружены у двух и одного из 815 больных, соответственно (Иващенко Т.Э., 2000).

Тринадцать мутаций являются наиболее часто встречающимися у российских больных MB (относительные частоты каждой из них превышают 0,005): F508del - 0,542, CFTRdele2,3(21kb) - 0,072, 2143delT - 0,021, W1282X -0,020, N1303K - 0,019, 3849+10kbC>T - 0,019,2184insA - 0,017, G542X - 0,013, 1677delTA - 0,008, 3821delT - 0,008, R334W - 0,007, L138ins - 0,006, 394delTT - 0,005, будучи диагностируемыми практически во всех изученных регионах России и суммарно составляя 75,7% от всех мутантных аллелей. Общая доля всех идентифицированных мутаций равна 77%.

Поиск мутаций в 5' -днстальной и промоторной области гена CFTR.

Даже в результате изучения нуклеотидной последовательности всей кодирующей области гена CFTR доля не идентифицированных мутаций у российских больных MB составляет не менее 20% (Verlingue С. et al., 1995). Поскольку известно, что несбалансированная экспрессия аллелей, возникающая вследствие полиморфного состояния регуляторных элементов характерна для 27% генов человека (Pastinen T. et al, 2006), а исследование этих регионов гена CFTR у российских пациентов с MB ранее не проводилось, был осуществлен поиск возможных мутаций в 5' -дистальной и промоторной области гена CFTR. Изучено семь регуляторных элементов, участие которых в определении уровня экспрессии гена CFTR было экспериментально доказано: сайты связывания транскрипционного фактора SP1, находящиеся в положениях -194 и -273 от точки инициации транскрипции гена (Chou J.L. et al., 1991); DHS-элемент (сайт, чувствительный к ДНКазе I) с позицией -20,9 тыс.п.н. от точки инициации транскрипции гена (Nuthall H.N. et al., 1999); CRE-элемент в положении 115 п.н. от ATG-кодона (Yoshimura К. et al., 1991; Pastinen T. et al., 2006); ССААТ-элемент в положении (-132) - (-119) н. от начала транслирующего кодона (Nuthall H.N. et al., 1999; Li et al., 1999; Pittman N. et al., 1995); сайты связывания с транскрипционным фактором Nf-kB в положениях (1103) - (-1093) п.н. от начала инициации транскрипции гена (Brouillard F. et al., 2001) и SRE-элемент, находящийся в положении -108 нуклеотидов от сайта инициации транскрипции (René С. et al., 2005). Поиск мутаций в регуляторных элементах, участвующих в транскрипции гена CFTR, был осуществлен на выборках 83 образцов ДНК больных муковисцидозом, у которых не были найдены частые CFTR мутации (22 человека), либо была найдена только одна мутация в гене CFTR (61 пациент) (всего 105 хромосом с неизвестными мутациями), и 50 образцов ДНК здоровых индивидов. В результате проведенного SSCP-анализа в исследованных регуляторных элементах гена CFTR не было выявлено изменений подвижности фрагментов ДНК ни в одном образце. Можно предположить, что мутации в 5' регуляторной и промоторной

областях гена СГТЯ у российских больных, как и у пациентов в других популяциях мира, достаточно редки.

Анализ частоты некоторых мутаций в гене СГ77? в ряде популяций

России.

Для определения популяционных частот СПЯ мутаций проанализированы выборки здоровых индивидов, проживающих в европейских регионах России и относящихся к пяти этносам: русские, марийцы, удмурты, чуваши, башкиры. Для каждого этноса проскринировано не менее 1000 хромосом. Методом мультиплексной ПЦР проанализированы семь СПЯ мутаций: Р508(1е1, СРТ11с1е1е2,3(21кЬ), 1677с1е1ТА, 2143ёе1Т, 2184шзА, 394с1е1ТТ, 382Ые1Т, суммарная доля которых у российских больных МВ составляет 67,3%. Регионы происхождения индивидов, размеры выборок и результаты исследования представлены в табл. 1.

Таблица 1.

CFTR мутации, обнаруженные в популяционных выборках._

Этнос Регион Объем выборки (чел.) Мутации

Русские Кировская область 354 4 - Р508ёе1

Тверская область 182 1 - Р508ёе1 1 - СРТЯае!е2,3(21кЬ)

Псковская область 140 1 -Р508с1е1

Ростовская область 648 9-Р508с1е1 1 - 1677(1е1ТА

Чуваши Чувашия 780 3 - Б508с1е1 1 -СРТ1Ше2,3(21кЬ)

Удмурты Удмуртия 613 2 - Б508ае1

Марийцы Марий Эл 505 не обнаружены

Башкиры Башкирия 517 1 -СРТ11с1е1е2,3(21кЬ)

В выборках русских из четырех регионов были обнаружены три разные мутации в гене №77?: Р508с1е1, СРТ11с1е1е2,3(21кЬ) и 1677с1с1ТА, но только мутация Р508ёе1 встретилась во всех регионах, поэтому у русских европейской части России возможно было оценить популяционную частоту только мутации Р508с1е1.

Частоты мутации Р508<1е1 в выборках русских представлены в табл. 2. При попарном сравнении частот мутации Б508с1е1 во всех выборках, а также в выборках из г. Санкт-Петербурга (8/1000 хромосом) (Потапова, 1994) и г. Москвы (22/5046 хромосом) (Петрова Н.В., Гинтер Е.К., 1997) достоверные различия не выявлены. Отсутствие различий в частотах мутации Р508с1е1 позволило объединить все выборки для получения более точного значения частоты мутации Р508с!е1 у русских европейской части России, составившего 0,00518 (0,00398-Ю,00663, при 95%-ом доверительном интервале) (табл. 2), что достоверно ниже, чем в ряде европейских популяций. Так, наибольшие

значения частоты мутации F508del наблюдаются на северо-западе Западной Европы, достигая в Шотландии (Brock DJ. et al., 1998) и Дании (Brandt N.J. et al., 1994) 0,015 и 0,013, соответственно; в странах средиземноморского бассейна частота мутации F508del снижается, составляя, например, в Италии -0,010 (Gasparini Р. et al., 1999), а в Израиле (среди евреев-ашкенази) - 0,0089 (Kaiman Y.M. et al., 1994). В Эстонии частота мутации F508del составила 0,0059 (Teder М. et al., 2001), это значение достоверно не отличается от полученного нами для русских европейской части России. Согласно данным Международного консорциума по муковисцидозу в Европе относительная частота мутации F508del снижается в направлении с севера-запада на юго-восток (WHO, 2004). По-видимому, так же изменяется и популяционная частота мутации F508del. Этому соответствует и значение частоты мутации F508del, полученное для коренного населения Индии (0,00209), что достоверно ниже, чем для обследованных русских популяций.

Частота мутации F508del в выборках русских.

Таблица 2.

Регион Частота мутации F508del Границы значения частоты F508del (min -ипах) при 95%-ом доверительном интервале

Ростовская область 0,00694 0,00363<...<0,01209

Кировская область 0,00565 0,00193<...<0,01288

Тверская область 0,00275 0,00014<...<0,01296

Псковская область 0,00357 0,00012<...<0,01683

С.-Петербург 0,00800 0,00398<...<0,01439

Москва 0,00436 0,00295<...<0,00622

Всего (русские) 0,00518 0,00398<...<0,00663

В табл. 3 представлены значения частоты мутации F508del у четырех народов Волго-Уральского региона (марийцы, чуваши, удмурты, башкиры) в

сравнении с русскими европейской части России.

Таблица 3.

Различие в частоте мутации F508del между пятью этническими группами.

Этническая группа Частота мутации F508del (min+max при 95%-ом д.и.) Р (уровень значимости - %)

марийцы ...<0,00296 Рр.м=96,15 (5%)

чуваши 0,00192 (0,000524-0,00496) Рр.ч=94,98 (5%)

удмурты 0,00112 (0,00006+0,00530) Рр_у=94,37 (10%)

башкиры <0,00458 Рр.5=96,49 (5%)

русские 0,00518 (0,00398+0,00663)

Примечания: р - русские; м - марийцы; ч - чуваши; у - удмурты; б - башкиры

Частота мутации F508del в выборках удмуртов, чувашей, башкир и марийцев не должна превышать 0,00530, 0,00496, 0,00458 и 0,00296, соответственно (при 95% доверительном интервале). Различия в частоте этой мутации между выборками русских и марийцев, русских и чувашей, русских и башкир достоверны (р=0,05), а русских и удмуртов достоверны только на 10%-ом уровне значимости. Таким образом, популяционная частота мутации F508del у народов Волго-Уральского региона ниже, чем у русских европейской части России и в ряде западноевропейских популяций (Brandt N.J. et al., 1994; Brock DJ. et al., 1998; Gasparini P. et al., 1999; Kaiman Y.M. et al., 1994). Это может быть связано как с более низкой частотой муковисцидоза, так и различием в спектрах приводящих к муковисцидозу мутаций у автохтонного населения Волго-Уральского региона и русских европейской части России. Косвенным свидетельством в пользу этого может служить тот факт, что в работе Г.Ф. Корытиной с соавторами при обследовании больных MB у 4 башкир, 1 чуваша и 1 удмурта мутация F508del не была обнаружена (Корытина Г.Ф. и др., 2002).

Поскольку частоты выявленных мутаций в выборках Волго-Уральского региона малы, дальнейший расчет частоты MB проведен только для популяций русских европейской части России.

Расчет частоты муковисцидоза в популяциях русских европейской части

России.

Впервые оценка частоты муковисцидоза была получена нами в 1997 году в результате скрининга 2523 новорожденных г. Москвы на мутацию F508del и составила 1:12300 (Петрова Н.В., Гинтер Е.К., 1997). Для получения более точной оценки MB данные по частоте мутации F508del в Ростовской, Кировской, Тверской и Псковской областях, г. Москве и г. С.-Петербурге (Потапова О.Ю., 1994) были объединены: в выборке 4347 человек (8694 хромосомы) обнаружено 45 носителей мутации F508del. Частота мутации F508del составила 0,00518 (0,00398-0,00663, при 95%-ом доверительном интервале) (табл. 2). Относительная доля мутации F508del среди больных MB из европейской части России равна 54,4% (0,544=708/1302). Таким образом, число всех мутантных аллелей гена CFTR в изученной выборке 8694 хромосом должно быть 83 (45/0,544), а частота всех мутантных аллелей гена CFTR (q) -0,00955 (0,00789-0,01145, при 95%-ом доверительном интервале; 83/8694). Тогда частота MB (q2) в популяциях русских в Европейской части России составит 0,0000912, или 1:10965.

Полученная нами оценка согласуется с предварительными результатами скрининга новорожденных на MB в Российской Федерации, проведенного с января 2007 года по июль 2008 года (Tolstova V.D. et al, 2008): частота MB в европейских регионах России составляет 0,0000966 (0,0000819-0,0001145), или 1:10352 новорожденного.

По-видимому, частота MB в популяциях европейской части России ниже, чем во многих популяциях Западной Европы (1:2500-4500), но сравнима с частотами MB в некоторых популяциях северо-восточной Европы (например, в

Швеции и Финляндии, 1:7000 и 1:26000, соответственно) и в Турции (1 : 10000 новорожденных).

Молекулярно-генетическая диагностика в российских семьях с муковисцидозом

Следующим этапом работы явилась разработка протокола комплексной ДНК-диагностики МВ в российских семьях на основе полученных результатов по анализу частых мутаций и анализу полиморфизма внутригенных и внегенных маркеров гена 67*77?. Он заключается в использовании методов прямой и косвенной идентификации мутантных аллелей у больных, родителей и других членов семей (рис. 2). При прямой диагностике частых мутаций идентифицируют 77% мутантных аллелей. При этом в 58% семей с МВ идентифицированы обе мутации, в 33% - одна мутация, в 9% - на обеих хромосомах мутация не определена. В двух последних ситуациях проводим косвенную диагностику с использованием внутригенных и внегенных полиморфизмов, позволяющую повысить число информативных семей не менее, чем до 95%.

Рис. 2. Схема проведения комплексной ДНК-диагностики в семьях с МВ.

А). Анализ частот аллелей и гаплотипов внутригенных полиморфизмов в выборках нормальных и мутантных хромосом.

С целью выяснения эффективности использования внутригенных полиморфизмов для диагностики MB в семьях, где один или оба мутантных аллеля неизвестны, проведен анализ сцепления аллелей четырех внутригенных полиморфизмов IVS1CA, IVS8CA, IVSóaGATT, IVS17bCA в семьях с MB (344 больных и 488 их родителей). Выявлено достоверное различие частот аллелей в выборках нормальных и мутантных хромосом и неравновесие по сцеплению для определенных аллелей для всех изученных внутригенных маркеров.

Анализ гаплотипов также выявил достоверное различие частот гаплотипов в выборках нормальных и мутантных хромосом и неравновесие по сцеплению для определенных гаплотипов внутригенных маркеров. Наиболее частым в выборке нормальных хромосом является гаплотип 22-7-16-13 (22,5%), в выборке мутантных хромосом самыми частыми являются 21-6-17-13 (29,5%) и 21-6-23-13 (27,5%), среди нормальных хромосом обнаруженные менее чем в 3%; и гаплотип 22-7-16-13 (15,2%).

В результате анализа сцепления CFTR мутаций с гаплотипами четырех внутригенных маркеров выявлены три группы мутаций, ассоциированные с определенными гаплотипами: мутации F508del, N1303K, G542X, 2143del и 394delTT - с гаплотипом 21-6-23-13; мутации CFTRdele2,3(21kb), 1677delTA, L138ins - с гаплотипом 22-7-16-13 и мутации W1282X, R334W - с гаплотипом 26-7-17-17. Мутацию F508del считают самой древней мутацией в гене CFTR: в зависимости от используемых для расчетов ДНК-маркеров ее возраст оценивают от 6000 до 35000-52000 лет назад. Большинство хромосом с мутацией F508del ассоциированы с двумя группами гаплотипов, имеющих аллели 23 и 17 маркера IVS8CA в своем составе. В исследованной нами выборке это гаплотипы 21-6-23-13 и 21-6-17-13. Предполагают, что гаплотип, ассоциированный с аллелем 23, является более древним по сравнению с гаплотипом с аллелем 17 и, возможно, исходным, на котором произошла мутация F508del. Вероятно, что появление гаплотипа, ассоциированного с аллелем 17, произошло вследствие неравного кроссинговера (Morral N. et al., 1994; Kaplan N.L. et al., 1994). Мутации N1303K и G542X также считают древними в истории человечества и произошедшими в той же исходной популяции с одинаковым генетическим составом, что и мутация F508dei (Claustres М. et al., 1996; Mateu E. et al., 2002). Об этом свидетельствует и их ассоциация с древним гаплотипом 21-6-23-13. С этим гаплотипом сцеплены мутации 2143del и 394delTT, о времени происхождения которых данные в литературе отсутствуют. Но их сцепление с древним гаплотипом 21-6-23-13 может указывать на то, что источником проникновения этих мутаций на территорию Восточной Европы могла быть та же исходная популяция, с которой связано и распространение мутации F508del. Появление мутации W1282X произошло на территории Ближнего Востока относительно недавно, а проникновение и распространение ее на территорию Европы связано с миграцией популяции евреев-ашкенази (Claustres М. et al., 1996; Bobadilla J.L. et la., 2002). В большем числе случаев мутация W1282X у российских больных

МВ сцеплена с гаплотипом 26-7-17-17, относительно редким как среди мутантных, так и среди нормальных хромосом. С этим же гаплотипом сцеплена и мутация К334"\У, что может говорить о ее проникновении на территорию России одновременно с мутацией \V1282X и из одной исходной популяции. Мутация 3849+10кЬС>Т ассоциирована с двумя гаплотипами, различающимися по аллелям всех четырех полиморфизмов 21-6-23-13 и 26-7-17-17, что может говорить о неоднократности ее происхождения и возможном проникновении ее на территорию России из разных исходных популяций. Ассоциация мутаций СРТЯае1е2,3(21кЬ), 1677с1е1ТА, ЫЗвтв - с гаплотипом 22-7-16-13, наиболее частым среди нормальных хромосом, возможно, свидетельствует об относительно недавнем происхождении данных мутаций. Мутация 21841пбА сцеплена с гаплотипом 21-7-16-17, редким и на мутантных, и на нормальных хромосомах.

Определение гаплотипа, сцепленного с конкретной мутацией, позволяет прояснить источник происхождения и распространения мутации в популяции, что важно при изучении спектров мутаций в разных этнических группах больных МВ, а также является дополнительным контролем при проведении ДНК-диагностики, что особенно важно для пренатальной диагностики.

Б). Эффективность комплексной ДНК-диагностики МВ.

Гетерозиготность среди носителей мутантных МВ аллелей и число информативных семей определяют эффективность полиморфизма, используемого при косвенной Д НК-диагностики в семьях с МВ (табл. 4).

4.

Таблица

Гетерозиготность облигатных носителей СРТЯ мутаций и информативность семей, отягощенных муковисцидозом, по внутригенным и внегенным ДНК-

Я а, и а 1У81СА 1 1У88СА < О XI КМ19

£ чо ¡Л > йО > ХУ2с г- ХЛ О 13.11

н 0,79 0,625 0,68 0,46 0,62 0,59 0,73 0,42 0,42

N 387 632 389 369 225 330 63 128 74

100%-I 0,47 0,44 0,40 0,23 0,24 0,27 0,31 0,10 0,33

50%-I 0,51 0,46 0,52 0,60 0,67 0,58 0,61 0,65 0,44

п 148 219 156 119 79 117 26 48 30

примечание: и - гетерозиготность; гч - число оо< информативность; п - число обследованных семей.

ей; I

В результате анализа гетерозиготности облигатных носителей мутантных аллелей (родителей) и информативности семей по четырем внутригенным 1У81СА, 1У88СА, ГУБбаОАТТ, 1УБ17ЬСА и пяти внегенным ХУ-2с, КМ19, С87, 13.11, W30 полиморфным ДНК-маркерам показано, что наиболее эффективным для косвенной диагностики МВ является полиморфизм динуклеотидных С А повторов в 1 интроне гена СРТЯ (ГУБ 1С А): Для этой системы характерна максимальная гетерозиготность облигатных носителей мутантных МВ аллелей (0,79) и самое высокое число полностью информативных семей (47%) по сравнению с другими ДНК-маркерами как внутригенными, так и внегенными (табл. 4).

Использование всех изученных маркерных систем наряду с типированием частых мутаций (комплексная диагностика) позволяет достигнуть полной информативности практически во всех семьях, которым необходима пренатальная диагностика МВ (табл. 5). Так при прямой ДНК-диагностике в 237 полных семьях полностью информативными оказались 151 (64%), частично информативными - 66 (28%), а неинформативными - 20 (8%) семей. Анализ полиморфных маркеров позволил достичь полной информативности во всех семьях с двумя не идентифицированными мутациями, и лишь в одной семье с одним не идентифицированным аллелем не удалось подобрать информативную систему. Т.е. в результате использованного нами протокола комплексной ДНК-диагностики полностью информативными оказались 99,5% семей.

Таблица 5.

Результат комплексной ДНК-диагностики в семьях с МВ._

прямая косвенная комплексная

I п I п I п

100% 151 100% 107 100% 151

50% 33

0% И

50% 66 100% 51 100% 51

50% 15 100% 14

50% 1

0% 20 100% 20 100% 20

Примечание: I - информативность; п- число семей

Взаимосвязь СПЯ генотипа и фенотипа у российских больных МВ.

Одним из вопросов, возникающих при консультировании семей, выявленных при пресимптоматической диагностике, либо при диагностике МВ у плода является прогноз течения заболевания, в связи с этим исследование гено-фенотипических корреляций у российских больных МВ представляет значительный интерес. Большое число мутаций в гене СРТД, а, следовательно, и широкое разнообразие генотипов предопределяет трудности в выявлении гено-фенотипических корреляций. Многочисленными исследованиями показана четкая зависимость между тяжестью поражения функции поджелудочной железы и СТТЛ генотипом больного МВ. Мутации I, II, III

классов, при которых функция хлорного канала CFTR полностью нарушена, ассоциируют с панкреатической недостаточностью, их относят к «тяжелым». Наличие в генотипе больного, хотя бы одной мутации IV, V, VI классов, при которых частично сохраняется функция белка CFTR, ассоциировано с сохранением остаточной функции поджелудочной железы, их называют «мягкими». «Мягкие» мутации доминируют над «тяжелыми» в отношении функции поджелудочной железы. Взаимосвязь же CFTR мутаций с другими клиническими симптомами МВ не столь очевидна (Zielenski J., 2000; Parad R.B. et al., 1999; Mekus F. et al., 2000).

У 280 российских пациентов с двумя идентифицированными CFTR аллелями определены 22 разные мутации (две из них: 1898+1 G>A и R668C выявлены в совместном исследовании (Verlingue С. et al., 1995)): 16 из них относятся к «тяжелым»; 6 - к «мягким» в соответствии с тяжестью поражения поджелудочной железы. Группу больных МВ с «тяжелыми» генотипами составили 257 пациентов с двумя «тяжелыми» мутациями - мутациями I и/или II классов; в группе с «мягкими» генотипами - 23 пациента, имеющих, по крайней мере, одну «мягкую» мутацию - мутации IV или V классов. В этих группах проведена оценка ряда клинических параметров и симптомов, характеризующих степень вовлеченности органов системы пищеварения и органов дыхания в патологический процесс.

Заболевание начинается достоверно раньше у больных с «тяжелыми» генотипами (0,18±0,03 года против 1,87±0,98 года; р=0,000), и начало кишечного синдрома отмечается у этих пациентов также в более раннем возрасте (0,30±0,07 года против 3,20±1,66 года; р=0,029).

Моносимптоматический дебют заболевания отмечен у 79% пациентов в группе с «тяжелыми» генотипами и у 71% больных в группе с «мягкими» генотипами (р=0,52). Но у больных с тяжелыми генотипами заболевание достоверно чаще дебютирует кишечным синдромом (66% в группе «тяжелые» против 29% в группе «мягкие»; р=0,008), тогда как у больных с «мягкими» генотипами достоверно чаще дебютом являются поражения бронхолегочной системы (42% в группе «мягкие» против 13% в группе «тяжелые»; р=0,0095).

Показано, что легочные симптомы преобладают в клинической картине больных с «мягкими» генотипами: так частота больных с изолированной легочной формой заболевания достоверно выше в этой группе (24% против 1,6%; р=0,0002), тогда как такие осложнения органов пищеварения, как мекониальный илеус и синдром дистальной интестинальной обструкции (синдром непроходимости дистального отдела кишечника) наблюдаются только в группе с «тяжелыми» генотипами (6,5% и 7,4%, соответственно), а поражения печени являются более частыми у больных с «тяжелыми» генотипами по сравнению с пациентами с «мягкими» генотипами (30,8% против 9,1%; р=0,056).

Бронхолегочные нарушения, приводящие к снижению показателей функции внешнего дыхания (ФВД), начинаются раньше у больных с «тяжелыми» генотипами в связи с более ранней колонизацией органов дыхания патогенной микрофлорой (P.aeruginosa), что в свою очередь обусловливает

значительно более раннее ухудшение нутритивного статуса по сравнению с больными, имеющими, по крайней мере, одну мягкую мутацию (табл. 6).

Таблица 6.

Средний возраст клинических проявлений МВ у больных с «тяжелыми» и «мягкими» генотипами.

Средний возраст Группа

(в годах) «тяжелые» «мягкие»

при первом высеве Ps.aeruginosa 5,95±0,31 (0,50-18,00) 10,96±0,73 (6,0-14,00) z=-4,06; р=0,000048

183 13

9,50±0,44 14,26±1,05 z=-2,95;p=0,003

с тяжелым течением (0,16-18,00) (3,25-18,66)

150 13

с отставанием 10,29±0,50 15,86±0,72 z=-2,73;p=0,006

физического развития (0,16-17,92) (14,10-18,66)

(МРИ<90% от д.) 106 6

со снижением ФВД (<70% от д.) 11,78±0,49 (5,16-18,00) 15,59±0,94 (11,50-18,83) z=-2,35;p=0,019

66 7

со снижением ФВД (<90% от д.) 12,33±0,36 (5,16-18,00) 14,79±0,81 (7,16-18,83) z=-2,24;p=0,025

113 13

наличие мукоидной P.aeruginosa 11,34±0,49 (0,58-18,00) 14,09±0,99 (7,16-18,00) z =-1,72; p=0,084

95 10

Примечание: В скобках представлен диапазон значений, целыми числами -

объем выборок.

Показана корреляция между СРГЛ генотипом и продолжительностью жизни, рассчитанной как функция выживания методом множительных оценок Каплана-Мейера: в течение всего периода наблюдения в группе с «мягкими» генотипами оценка выживаемости выше, чем в группе с «тяжелыми» генотипами (согласно тесту Вилкоксона, обобщенному Геханом, г=-2,38, р=0,017). К концу периода наблюдения (35 лет) кумулятивная доля выживших составляет 44,4% в группе с «мягкими» генотипами и около 11% в группе с «тяжелыми» генотипами.

Наблюдаемые различия клинической картины у больных из разных групп согласуются с гипотезой о разной чувствительности разных тканей к нарушениям проводимости хлорного канала СПИ. Легочная ткань более чувствительна к степени потери функции белка СИИ по сравнению с тканями органов пищеварительной системы, по крайней мере, поджелудочной железы. Поэтому у больных, имеющих, по крайней мере, одну «мягкую» мутацию, в первую очередь наблюдаются поражения со стороны бронхолегочной системы, а поражения органов пищеварения начинаются позже и отмечаются реже и,

возможно, протекают в более мягкой форме, чем у больных с «тяжелыми» генотипами.

Итак, анализ гено-фенотипических корреляций при делении генотипов на «тяжелые» и «мягкие» в соответствии со степенью дефекта хлорного канала, зависящего от молекулярных последствий CFTR мутаций, позволил выявить ряд закономерностей в исследованной выборке российских больных MB, свидетельствующих о более мягком течении и благоприятном прогнозе заболевания у больных, имеющих, по крайней мере, одну мутацию IV и/или V класса по сравнению с больными, имеющими две мутации I и/или II классов.

Анализ ряда генов как возможных модификаторов клинических проявлений муковпсцидоза.

Следующим этапом исследования явилось изучение возможных генов-модификаторов клинической картины MB, т.к. на практике известно, что даже у больных с одинаковыми генотипами наблюдаются различия в течении заболевания. В настоящее время для не менее 20 разных генов предполагается участие в модуляции выраженности тех или иных симптомов при MB. Для анализа были выбраны 5 генов (eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1), продукты которых задействованы в процессах иммуномодуляции, воспалительной реакции и детоксикации ксенобиотиков, а также ген HFEI (гемохроматоза), для которого в ряде исследований показана ассоциация с частотой мекониального илеуса (табл. 7).

Таблица 7.

Изученные полиморфизмы генов возможных модификаторов клинических __проявлений муковисцкдоза._

Ген Продукт гена Полиморфизмы и мутации аллели

дикий тип мутантный

eNOS Эндотелиальная синтаза окиси азота VNTR27 п.н. в 4 интроне В (5 повторов) А (4 повтора)

TNFA Фактор некроза опухоли а -3080А в промоторе 1 (-308G) 2 (-308А)

LTA Лимфотоксин а +252A>G в 1 интроне В2 (+252А) B1 (+252G)

MBL2 Маннозо- связывающий лекгин G54D, G57E, R52C в 1 экзоне; A (G54, G57, R52) О (D54, Е57 или С52)

-221G>C в промоторе Y(-221G) X (-221С)

GSTM1 Глутатион-8-трансфераза М1 Делеционный полиморфизм 10 тыс.п.н. N О

HFE НЬА1-подобный белок C282Y в 4 экзоне H63D во 2 экзоне С282 Н63 Y282 D63

Исследование ассоциаций бронхолегочных проявлений и проявлений со стороны пищеварительной системы при МВ с генотипом по шести генам проводили на выборке 148 больных МВ, гомозиготных по мутации Р5(Ше1, для унификации влияния СПЯ генотипа на характер течения заболевания.

Анализ ассоциаций полиморфизмов шести генов с функцией легких выявил ассоциацию аллеля А УШИ в 4 экзоне гена еЫОБ со снижением функции внешнего дыхания (ФВД) (р=0,032) и ассоциацию мутаций 0540, ¿57Е, Я52С и полиморфизма -22Ш>С гена МВЬ2 со снижением функции внешнего дыхания у детей дошкольного возраста (р=0,038), ранней колонизацией легких Р.аеги&поза (р=0,017), ассоциацию мутации 054Э с более частым высевом других патогенных микроорганизмов А1.ху1о$ох1с1а№ (р=0,037), БшаПорЫИа (р=0,049).

Оксид азота (N0) является важным биологическим медиатором многих физиологических процессов в организме. Он задействован в регуляции тонуса и структуры легочных сосудов, способствует мукоцилиарному клиренсу в легких, участвует в процессах воспаления и иммунной защите и, следовательно, его недостаточная выработка должна неблагоприятно отражаться на ФВД из-за снижения уровня бронходилятации и мукоцилиарного транспорта. Согласно данным литературы уровень синтеза N0 у обладателей аллеля А снижен (Пай Г.В. и др., 2006; Тэикаёа Т. е! а1., 1998; Нойтапп 1.Б. & а1., 2005; Богщ I е! а1., 2003). Поэтому недостаточность легочной функции будет в большей мере выражена у больных МВ, гетерозиготных или гомозиготных по аллелю А, нежели у пациентов, гомозиготных по аллею дикого типа В, как это и наблюдается в обследованной нами группе больных.

Выявленная ассоциация мутаций 054Б, 057Е, Я52С и полиморфизма -22Ш>С гена МВ1.2 со снижением функции внешнего дыхания только у детей дошкольного возраста возможно объясняется тем, что функция иммуномодулятора, которую выполняет МВЬ, наиболее, важна в раннем детском возрасте, когда система специфического иммунитета сформирована неполно. В более взрослом возрасте высокий уровень МВЬ может уже не иметь протективного значения и, напротив, оказывая провоспалительный эффект, усугублять развитие заболевания. Более раннее и частое поражение бронхолегочной системы больных МВ патогенной микрофлорой (например, P.aeruginosa) может являться следствием нарушения опсонной функции МВЬ у носителей мутантных аллелей гена МВЬ2, обусловливающих снижение уровня белка в крови.

Анализ ассоциаций полимофизмов шести генов с поражением органов пищеварения выявил ассоциацию аллеля А УШИ в 4 экзоне гена еЫОБ со снижением частоты цирроза печени (р=0,044) и ассоциацию мутации НбЗБ гена НЕЕ с ранним началом кишечного синдрома (р=0,04) и более высокой частотой мекониального илеуса и СДИО (р=0,034).

Для подтверждения диагноза билиарного цирроза, развивающегося при МВ, необходимо гистологическое заключение, однако больным МВ пункция печени не показана и у этого контингента больных диагноз ставится косвенно, по совокупности клинических, лабораторных показателей и данных УЗИ.

Определяющим в постановке диагноза цирроза является наличие у больного портальной гипертензии и таких ее признаков, как наличие расширенной и извитой воротной вены, расширенных портокавальных анастомозов, увеличения кровенаполнения органов брюшной полости, в частности, увеличения размеров селезенки. В развитии этих признаков принимает участие eNOS: у больных с циррозами печени регистрируется увеличение экспрессии гена eNOS эндотелиоцитами сосудов в печени, что можно рассматривать как адаптацию эндотелиальных клеток к стойкому повышению давления в системе портальной вены (Goh BJ. et al., 2006; Mohammed N.A. et al., 2003). Повышенная продукция NO этим ферментом способствует дилятации портальной вены и ее притоков и реваскуляризации сосудистых коллатералей. Кроме того, N0 увеличивает проницаемость сосудистой стенки, способствуя развитию асцита у больных MB. Таким образом, N0 содействует развитию осложнений цирроза печени, способствующих его выявлению, и низкая регистрация этого диагноза среди больных, несущих аллель А, укладывается в предположение о низкой активности eNOS у больных с генотипами А/А и А/В.

Обнаружение ассоциации между желудочно-кишечными осложнениями при MB, обусловленными нарушением внешнесекреторной функции поджелудочной железы, и мутациями в гене HFE1 не является неожиданным, поскольку, как отмечает ряд авторов, прослеживается схожесть некоторых симптомов при наследственном гемохроматозе (НГ) и MB: для клинической картины НГ, вызываемого мутациями в гене HFE1, также характерно нарушение экзокринной функции поджелудочной железы. Действительно, отмечена связь мутаций гена гемохроматоза (HFE1) с развитием мекониального илеуса и поражением печени у больных MB, по крайней мере, для мутации C282Y (Rohlfs Е.М. et al., 1998; Devaney J. et al., 2003; Salvatore F. et al., 2002). В нашем исследовании аллель D, при котором нарушена нормальная функция белка, кодируемого геном HFE1, ассоциирован с более ранним началом кишечного синдрома и более частыми осложнениями со стороны желудочно-кишечного тракта. Связи частоты и характера поражения гепатобилиарной системы с мутациями в гене HFE1 в исследованной выборке пациентов не выявлено.

У больных MB, гомозиготных по мутации F508del, провели оценку и сравнение функции выживаемости в группах пациентов, имеющих разные генотипы по генам eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1. Для сравнения выживаемости использовали критерий Вилкоксона, модифицированный по Гехану. Достоверные различия оценки выживаемости выявлены между группами пациентов с разными генотипами по гену HFE1. В группе больных с генотипом H/D по гену HFE1 кумулятивная выживаемость выше, чем в группе пациентов, имеющих генотип Н/Н, и к концу наблюдений, 18,64 годам, составляет 60% у пациентов с генотипом H/D против 41% у пациентов с генотипом H/H (t=-2,39; р=0,016), что согласуется с более высокими показателями ФВД у носителей аллеля D по сравнению с пациентами, имеющими оба аллеля дикого типа, как в среднем, так и в каждой возрастной

группе, хотя при делении по возрастам различия достоверны только для пациентов среднего школьного возраста.

Таким образом, изученные полиморфизмы и мутации генов еМ08, МВЬ2 и НРЕ1 ассоциированы с тяжестью патологического процесса при МВ как со стороны бронхолегочной системы, так и со стороны системы пищеварения, по крайней мере, у российских больных, гомозиготных по мутации Р508с1е1, а в гене НРЕ1 - и с более высокой выживаемостью. Следовательно, вариабельность клинических проявлений при МВ определяется не только степенью нарушения хлорного канала, обусловленной мутациями в гене СР77?, но и модифицирующим действием других генов.

Медико-генетическое консультирование у российских семей с МВ

Основная задача медико-генетического консультирования с медицинской точки зрения заключается в составлении медико-генетического прогноза для обратившейся за консультацией семьи. Существенным компонентом генетического консультирования и тестирования является оценка генетического риска.

Для определения априорных и условных вероятностей необходимо учитывать частоту МВ, частоту гетерозиготного носительства мутантных аллелей МВ, долю выявляемых при ДНК-диагностике мутаций и относительные частоты МВ мутаций в регионах, а, по возможности, и этнических группах, к которым принадлежат консультируемые, поскольку известно, что данные показатели широко варьируют у разных этносов и в разных популяциях, а рассчитанные на их основе вероятности могут повлиять на репродуктивное поведение консультируемых.

В табл. 8 приведены частоты МВ, частоты носительства мутантных аллелей гена СРТЯ, доли анализируемых мутаций и относительные доли наиболее распространенных мутаций в разных регионах России. Расчет частоты носителей МВ в европейской части России проведен в соответствии с данными, полученными в настоящей работе. Расчет частоты мутантных аллелей и частоты носителей МВ для Федеральных Округов России проведен с учетом данных по результатам неонатального скрининга, представленным в работе В.Д. Толстовой с соавторами (ТоЫоуа \Ш. е1 а1., 2008).

А). Расчеты риска МВ при неонатальном скрининге

В связи с введением в практику здравоохранения пресимптоматической диагностики МВ на каждом из этапов такой диагностики может возникнуть необходимость консультации врача-генетика, а, следовательно, и расчета риска МВ для положительно тестированного младенца. В основе неонатального скрининга на МВ лежит определение в сыворотке крови концентрации иммунореактивного трипсиногена (ИРТ), предшественника панкреатического фермента трипсина, уровень которого у пораженных младенцев повышен. Тест на ИРТ обладает почти 100% сензитивностью (чувствительностью), т.е. практически все больные МВ будут иметь положительный тест (условная вероятность - 1); но достаточно низкой специфичностью, т.е. помимо больных

MB положительно тестированными могут быть и здоровые индивиды, как носители, так и неносители мутаций. Вероятность таких индивидов быть положительно тестированными при первом определении ИРТ необходимо учитывать при расчетах риска: эти вероятности были определены в работе S. Ogino с соавторами и равны 0,041 для носителя одного мутантного аллеля и 0,011 для индивида, не являющегося носителем CFTR мутаций (Ogino S. et al., 2005).

Таблица 8.

Частота муковисцидоза и относительные частоты распространенных СРТЯ _ мутаций в разных регионах России.____

Европ. ЦФО СЗФО ЮФО ПФО УФО СФО ДФО

часть

Частота МВ 1/10965 9,МО'5 1/8879 1,1-10'4 1/17173 5,5-Ю'5 1/10269 9,7-Ю'5 1/10724 9,3-10'5 1/10140 9,9-Ю"5 1/8504, 1,2'10'4 1/8105, 1,2-Ю"4

Частота

мутантных 0,0095 0,0105 0,0076 0,0098 0,0096 0,0099 0,0110 0,0110

аллелей

Частота носителей 1/53, 1/48, 1/66, 1/52, 1/66, 1/51, 1/46, 1 /46,

МВ 0,019 0,0208 0,0151 0,0194 0,0190 0,0196 0,0217 0,0217

Доля выявленных

мутаций среди всех мутантных С/ТЙ аллелей 0,755 0,739 0,78 0,66 0,673 0,72 0,60 0,73

Относительные

частоты частых

СРТК мутаций: Р508<1е1 0,544 0,550 0,59 0,47 0,550 0,62 0,43 0,50

СРПШе2,3(21кЬ) 0,066 0,055 0,08 0,05 0,050 0,01 0,09 0,08

2143<1е1Т 0,023 0,034 0,01 - 0,008 0,01 0,01 0,02

2184и«А 0,021 0,017 0,04 0,01 - 0,02 0,01 -

\V1282X 0,019 0,008 0,01 0,04 0,008 0,02 0,02

3 849+10кЬС-+Т 0,019 0,013 - 0,03 0,015 0,01 - -

Ш03К 0,016 0,017 0,04 0,02 0,004 0,01 - 0,05

в542Х 0,015 0,021 0,01 - 0,015 0,02 0,01 0,02

3821<1е1Т 0,002 - - - 0,004 0,01 0,01 -

1677(1е1ТА 0,008 0,004 - 0,03 - - - 0,02

394<1е1ТТ 0,005 - - - 0,011 0,01 - -

Я334\У 0,007 0,004 - 0,01 0,004 - - -

1Л38цв 0,004 0,004 - - - - 0,01 -

Примечание: ЦФО, СЗФО, ЮФО, ПФО, УФО, СФО, ДФО - Центральный, Северо-Западный, Южный, Поволжский, Уральский, Сибирский, Дальневосточный Федеральные округа России, соответственно; Европ.часть -европейская часть России.

До проведения ДНК-тестирования риск МВ для положительно тестированного младенца, если оба родителя происходят из европейской части

России, относительно невелик (0,0078), хотя и превышает средне популяционный (0,000091) в 85 раз (табл. 9).

Таблица 9.

Расчет вероятностей для новорожденного с положительным ИРТ тестом до _проведения ДНК-тестирования.__

Гипотеза для новорожденного поражен носитель неноситель

Априорная вероятность 0,000091 0,019 0,981

Условная вероятность положительного результата теста на ИРТ =1 0,041 0,011

Совместная вероятность (0,011661) 0,000091 0,000779 0,010791

Апостериорная вероятность 0,0078 0,0668 0,9254

В зависимости от результата ДНК-тестирования возможны три ситуации, при которых риск MB при положительном результате первого теста на ИРТ у младенца будет следующим:

1). Обнаружение двух CFTR мутаций является подтверждением диагноза MB, т.к. согласно CFTR mutation database (http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/) все анализируемые мутации относятся к числу, обусловливающих классические симптомы при MB. Но следует рекомендовать проведение ДНК-диагностики у родителей для подтверждения того, что они носители мутаций, обнаруженных у ребенка.

2). При обнаружении одной CFTR мутации риск MB становится высоким (0,0541): в 7 раз выше, чем до проведения ДНК-анализа (0,0078), даже в популяции с относительно низкой частотой MB (0,000091) и невысокой долей идентифицируемых CFTR мутаций (75,5%), как, например, если оба родителя происходят из европейской части России (табл. 10).

Таблица 10.

Расчет вероятностей новорожденного с положительным ИРТ тестом и одной _идентифицированной CFTR мутацией. _

Гипотеза для новорожденного поражен носитель неноситель

Априорная вероятность 0,000091 0,019 0,981

Условная вероятность обнаружения одной анализируемой мутации 0,544-0,245+ 0,544-0,245 = 0,26656 0,544-1 0

Условная вероятность положительного результата теста на ИРТ »1 0,041 0,011

Совместная вероятность 0,000448033 0,000024257 0,000423776 0

Апостериорная вероятность 0,0541 0,9459 0

Для дальнейшего уточнения можно рекомендовать проведение ДНК-диагностики у родителей. Обнаружение мутаций у обоих родителей будет подтверждением того, что ребенок является носителем одной мутации.

3). При не обнаружении анализируемых мутаций риск МВ снижается на порядок (0,0005), чем до проведения ДНК-тестирования (0,0078) (табл. 11).

Таблица 11.

Анализ вероятностей для новорожденного с положительным ИРТ тестом и не _идентифицированными СГТЯ мутациями _

Гипотеза для новорожденного поражен носитель неноситель

Априорная вероятность 0,000091 0,019 0,981

Условная вероятность отсутствия проанализированных мутаций 0,245-0,245 = 0,060025 0,245-1 1

Условная вероятность положительного результата теста на ИРТ =1 0,041 0,011

Совместная вероятность 0,01098731 0,00000546 0,00019085 0,010791

Апостериорная вероятность 0,000497 = 0,0005 0,0174 0,9821

Следует отметить, что различие между вероятностями до и после проведения ДНК-диагностики тем выше, чем большую долю составляют проанализированные мутации среди всех мутантных аллелей в регионе. В Сибирском к Дальневосточном федеральных округах частоты MB практически одинаковы (1,18Т0'4 и 1,23-1 О*4, соответственно), но доля идентифицируемых мутаций в Сибирском округе существенно ниже, чем в Дальневосточном (0,60 и 0,73, соответственно) (табл. 8). Апостериорная вероятность поражения MB для положительно тестированного на ИРТ новорожденного при отрицательном результате ДНК-типирования в Дальневосточном округе в 17,5 раза выше, чем до проведения молекулярно-генетического анализа (0,01019 и 0,00058, соответственно), тогда как в Сибирском округе это соотношение составляет 5,9 раза (0,01019 и 0,00172, соответственно).

Б). Расчет риска MB при обнаружении гиперэхогснности кишечника у плода во II-III триместре внутриутробного развития

Одним из факторов риска MB является гиперэхогенность кишечника, выявляемая при ультразвуковом обследовании плода во II-III триместре внутриутробного развития. Согласно данным литературы аномалии кишечника у плода являются фактором высокого риска MB с тяжелым течением, и в таком случае рекомендован скрининг на CFTR мутации семьям, у плодов которых при рутинном скрининге обнаружена эхогенность кишечника (Muller F. et al., 2002; Scotet V. et al., 2002; Simon-Bouy B. et al., 2003). При расчетах риска MB следует учитывать не только разную популяционную частоту MB, но и разные

вероятности быть пораженным, носителем или неносителем при положительном УЗИ-тесте, определенные в работе S. Ogino с соавторами и равные 0,11, 0,00089 и 0,00035, соответственно (Ogino S. et al., 2004).

Если оба родителя происходят из европейской части России, риск MB для плода составляет 0,0270, т.е. почти в 300 раз выше, чем среднепопуляционный (0,000091). Поэтому рекомендуется проведение ДНК-тестирования у родителей. Возможны три результата ДНК-тестирования.

А). Если у обоих родителей обнаружены CFTR мутации, риск MB у плода с гиперэхогенностью кишечника составляет 0,99, т.е. практически равен 1.

Б). Если один из родителей является носителем CFTR мутации, риск MB у плода с гиперэхогенностью кишечника 0,1733 (табл. 12). Достаточно высокий риск, сравнимый с риском у семей, отягощенных MB. Если в регионе, откуда происходят родители, частота MB более высокая, а доля идентифицируемых мутаций относительно невелика, то вероятность поражения плода может быть еще выше (например, если оба родителя из Сибирского Федерального округа, она равна 0,2808).

Таблица 12.

Расчет вероятности для плода с положительным УЗИ тестом быть пораженным

МВ, если один из родителей является носителем CFTR мутации, а у второго _частые мутации не обнаружены._

Родитель 1 носитель неноситель

Априорная вероятность 0,019 0,981

Условная вероятность отрицательного скрининга на носительство мутаций 0,245 1

Условная вероятность плода (если родитель 2 -носитель мутации) поражен носит. неносит. носит. неносит.

0,25 0,5 0,25 0,5 0,5

Условная вероятность положительного УЗИ плода 0,11 0,00089 0,00035 0,00089 0,00035

Совместная вероятность (7,3868-Ю-4) 1,28-Ю"4 2,07-10"6 4Д-10"7 4,365-104 1,717-10" 4

Апостериорная вероятность 0,1733 0,0028 0,0006 0,5909 0,2324

Итак, вероятность МВ у плода с гиперэхогенностью кишечника при обнаружении СРШ мутации у одного из родителей достаточно высока (более 0,05) для того, чтобы рекомендовать проведение пренатальной диагностики МВ.

В). Если ни у одного из родителей CFTR мутации не обнаружены, апостериорная вероятность плода быть пораженным МВ равна 0,0017 (если родители происходят из европейской части России), т.е. весьма невелика, менее 0,01. Даже если родители происходят из региона с более высокой частотой МВ,

вероятность поражения плода останется низкой (например, если родители из Сибирского Федерального округа она составит 0,006). Следовательно, проведение пренатальной диагностики МВ в данном случае нецелесообразно.

Итак, проведение ДНК-диагностики родителям, если у плода при УЗИ выявлены аномалии желудочно-кишечного тракта, может существенно повысить при обнаружении СГТЯ мутаций или понизить при их не обнаружении апостериорный риск плода быть пораженным МВ.

ВЫВОДЫ

1. Оценка частоты МВ в европейской части России, рассчитанная из популяционной частоты мутации Р508(1е1 (0,00518 (0,00398-0,00663, при 95%-ом доверительном интервале)) и относительной доли мутации Р508с1е1 среди всех мутантных аллелей гена СРТЯ (54,4%), составила 0,0000912, или 1:10965.

2. На выборке 776 российских больных МВ из разных регионов России определен спектр и относительные частоты мутаций в гене СРГЯ. Для спектра СРТТ? мутаций характерно: относительно невысокая частота мутации Б508с1е1 (54,2%), достаточно большое число диагностически значимых мутаций (частота >0,5%) - СРТ1Ше2,3(21кЬ), 2143ёе1Т, \V1282X, N1303К, 3849+10кЬС>Т, 2184тзА, 0542Х, 1677с1е1ТА, 382ШТ, Ю34\У, ЫЗвнв и 394с!е1ТТ, суммарно составляющих 21,5%.

3. Анализ частоты семи частых СРГЯ мутаций (СРТ11с1е1е2,3(21кЬ), Р508<3е1, 1677ёе1ТА, 2143йе1Т, 2184тзА, 394с1еПТ и 3821ёе1Т) среди здоровых индивидов 5 этнических групп: русских из европейской части России и четырех народов Волго-Уральского региона (марийцы, удмурты, чуваши и башкиры), показал значимо меньшую частоту мутации Р508с1е1 у изученного коренного населения Волго-Уральского региона (0,001120,00192), чем у русских (0,00518).

4. Выявлено неравновесие по сцеплению аллелей и гаплотипов четырех внутригенных маркеров гена СРТЯ (1У81СА, 1У86аОАТТ, Г/88СА и 1У817ВСА) в выборках мутантных и нормальных хромосом. Определены три группы мутаций, ассоциированные с определенными гаплотипами: мутации Р508<1е1, ШЗОЗК, 0542Х, 2143с1е1 и 394с1е1ТТ - с гаплотипом 216-23-13; мутации СРТКёе1е2,3(21кЬ), 1677(5е1ТА, Ы38тз - с гаплотипом 22-7-16-13; мутации \V1282X, Ю34\У - с гаплотипом 26-7-17-17. Самым частым в выборке нормальных хромосом родителей больных муковисцидозом является гаплотип 22-7-16-13 (23,5%).

5. Анализ четырех внутригенных маркеров (ГУБЮА, Г/БбавАТТ, 1УБ8СА и 1У817ВСА) и пяти внегенных маркеров (ХУ-2с; КМ19; СБ7; J3.ll; W30) позволяет проводить пренатальную диагностику МВ практически в 100% семей. Наиболее эффективным для косвенной пренатальной диагностики МВ в российских семьях является использование полиморфизма динуклеотидных СА повторов в 1 интроне гена СРТЯ (1У81СА). Для этой системы характерна максимальная гетерозиготность

облигатных носителей мутантных MB аллелей (0,79) и самое высокое число полностью информативных семей (47%) по сравнению с другими маркерами.

6. Выявлена зависимость между тяжестью поражения как желудочно-кишечного тракта, так и бронхолегочной системы и CFTR генотипом у российских больных MB. Для больных с двумя мутациями I и/или II классов характерен более ранний возраст начала клинических нарушений со стороны пищеварительной системы (р=0,029), более частым является дебют в форме кишечного синдрома (р=0,008), более ранней -колонизация легких P.aeruginosa (р=0,000058), что приводит к более быстрому прогрессированию заболевания (р=0,003) по сравнению с больными, имеющими, по крайней мере, одну мутацию IV или V класса.

7. Гены eNOS, MBL2 и HFE можно рассматривать как модификаторы клинических проявлений MB у российских больных. Установлена ассоциация аллеля A VNTR eNOS4 с менее благоприятным развитием бронхолегочного процесса при MB (р=0,032) и со снижением частоты цирроза печени (р=0,044). Обнаружена ассоциация аллелей гена MBL2 (G54D, G57E, R52C, -221G>C) с более тяжелым течением бронхолегочного процесса у детей дошкольного возраста (р=0,038), более ранним поражением P. aeruginosa (р=0,017) и более частым поражением AI. xylosoxidans (р=0,037) и St. maltophilia (р=0,049). Выявлена ассоциация мутации H63D гена HFE с более тяжелым поражением желудочно-кишечного тракта и ранней манифестацией кишечного синдрома (р=0,034).

8. При проведении медико-генетического консультирования в семьях, выявленных на скрининге MB, и расчетах апостериорного риска необходимо учитывать частоту MB (1:10965), частоту гетерозиготного носительства мутантных аллелей MB (0,019), долю выявляемых при ДНК-диагностике мутаций (75,5%) и относительные частоты MB мутаций в российской популяции. Показано, что риск MB у новорожденного, положительно тестированного на ИРТ, составляет 0,0541 при обнаружении у него одной CFTR мутации и 0,0005, если ни одна из частых CFTR мутаций не обнаружена. Риск MB у плода с эхогенным кишечником, диагностированном при УЗИ во втором триместре беременности, и при обнаружении частой CFTR мутации у одного из родителей достаточно высок (0,1733).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ельчинова, Г.И. О частотном критерии выбора фамилий для изучения генетической структуры популяций / Г.И. Ельчинова, М.Ю. Кадошникова, P.A. Мамедова (Зинченко), А.М. Букина, Н.В. Петрова, Е.А. Старцева // Генетика. - 1991. - Т. 27, № 2. - С. 358-360.

2. Капранов, Н.И. Современные достижения и актуальные вопросы в проблеме муковисцидоза / Н.И. Капранов, Н.Ю. Каширская, Д.М. Моин,

Н.В. Петрова, О.И. Симонова, З.А. Хафизова, J1.A. Шабалова // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. - 1992. - № 4. - С.34-39.

3. Hafizova, Z.A. Sweat electrolytes of CF patients with respect to the type of the CF mutations; preliminary results / Z.A. Hafizova, N.V. Petrova, I.S. Troobnikova, A.K. Uglizkih // The Xl-th International Cystic Fibrosis Congress, Dublin. - Ireland. - 1992. - TP. 122.

4. Гинтер, E.K. Отягощенность аутосомно-рецессивной патологией популяций Кировской области и ее связь с инбридингом / Е.К. Гинтер, Р.А. Мамедова (Зинченко), Г.И. Ельчинова, О.В. Брусинцева, М.Ю. Кадошникова, Н.В. Петрова, A.M. Букина, A.M. Алалыкин // Генетика. - 1993. - Т.29, N6. - С. 1042-1046.

5. Воронина, О.В. Ассоциация внутригенного (ГАТТ)-полиморфизма с различными мутациями в гене муковисцидоза / О.В. Воронина, О.Ю. Потапова, B.C. Гайцхоки, Е.В. Богачева, Е.И. Шварц, Ю.А. Берлин, Т.Е. Гембицкая, Н.В. Петрова, Н.И. Капранов // Тезисы Национального Пульмонологического Конгресса. - Москва. - 1993. - С. 103.

6. Воронина, О.В. Идентификация мутаций в гене КФ / О.В. Воронина, О.Ю. Потапова, B.C. Гайцхоки, Е.В. Богачева, Е.И. Шварц, Ю.А. Берлин, Т.Е. Гембицкая, Н.В. Петрова, Н.И. Капранов // Тезисы конференции ГНТПР «Приоритетные направления генетики». - Москва. - 1993. - С. 108.

7. Gaitskhoki, V.S. Linkage disequilibrium between cystic fibrosis mutations and polymorphic 4-bp repeat within CFTR gene / V.S. Gaitskhoki, O.V. Voronina, O.Y. Potapova, L.V. Kiryukhina, Z.A. Khafizova, N.V. Petrova, N.I. Kapranov, Т.Е. Gembitskaya, E.I. Schwarts // Biochemical Medicine and Metabolic Biology. - 1993. - V. 5 0. - P. 186-189.

8. Петрова, H.B. Доля некоторых мутаций гена муковисцидоза и неравновесие по сцеплению между локусами CFTR-тенг. и двумя ДНК-маркерными локусами в популяциях России / Н.В. Петрова, Е.К. Гинтер, Н.И. Капранов, Г.И. Ельчинова // Генетика. - 1994. - Т. 30, № 7. - С. 974-977.

9. Гинтер, Е.К. Генетика муковисцидоза / Е.К. Гинтер, Н.В. Петрова // Пульмонология. - 1994. - № 3. - С. 33-37.

Ю.Зубрицкая, С.П. Клинико-генетические параллели муковисцидоза в Саратовской области / С.П. Зубрицкая, Е.А. Сироткин, Н.В. Петрова, Е.М. Нестерова, А.И. Базин, Н.А. Осипова // Первый (третий) Российский съезд медицинских генетиков. Тезисы докладов. Москва. - 1994. - С. 2324.

11.Ельчинова, Г.И. Популяционная структура Горномарийского района республики Марий Эл / Г.И. Ельчинова, Е.А. Старцева, Р.А. Мамедова, О.И. Кравчук, М.Ю. Кадошникова, Н.В. Петрова, А.М. Букина, В.П. Рассанов, И.С. Мошкина, Е.К. Гинтер // Генетика. - 1995. - Т. 31, № 10. -С. 1425-1432.

12.Verlingue, С. Complete screening of mutations in the coding sequence of the CFTR gene in a sample of CF patients from Pussia: Identification of three

novel alleles / С. Verlingue, N.I. Kapranov, B. Merrier, E.K. Ginter, N.V. Petrova, M.P. Audrezet, C. Ferec. // Human Mutation.-1995.-V. 5,- P. 205209

13.Хафизова, З.А. Клинический полиморфизм и генетическая гетерогенность муковисцидоза / З.А. Хафизова, Н.И. Капранов, Н.В. Петрова, Г.И. Ельчинова, С. Ferec, В. Mersier, М. Anderset // Молекулярная диагностика наследственных болезней и медико-генетическое консультирование. - Респ. сб. научн. трудов МОНИКИ. -1995. -Т.1. - С. 53-63.

М.Ельчинова, Г.И. Популяционная структура Горномарийского района республики Марий Эл / Г.И. Ельчинова, Е.А. Старцева, Р.А. Мамедова (Зинченко), О.И. Кравчук, М.Ю. Кадошникова, Н.В. Петрова, A.M. Букина, В.П. Рассанов, И.С. Мошкина, Е.. Гинтер Н Генетика. - 1995. -Т. 31,№10.-С.1425-1432.

15.Petrova, N.V. The CF incidence and the spectrum of common CF mutation in Russian populations / N.V. Petrova, N.I. Kapranov // Xllth International Cystic Fibrosis Congress. - Jerusalem, Israel, June 16-21, 1996.

16.Кадошникова, М.Ю. Генетико-демографические особенности населения трех районов Брянской области / М.Ю. Кадошникова, О.В. Брусинцева, Е.А. Старцева, Г.И. Ельчинова, Н.В. Петрова, A.M. Букина, Р.А. Мамедова (Зинченко), Е.К. Гинтер // Генетика. - 1996. - Т. 32, № 8. - С. 1142-1147.

17.Петрова, Н.В. Определение частоты мутации AF508 среди новорожденных города Москвы и оценка частоты муковисцидоза в Европейской части России / Н.В. Петрова, Е.К. Гинтер // Генетика. -1997. - Т. 33, № 9. - С.1326-1328.

18.Амосенко, Ф.А. Полиморфизм TUB9 в гене ТРЕМ больных муковисцидозом, носителей и здоровых доноров московского региона: SSPC анализ и рестрикционный анализ / Ф.А. Амосенко, И.С. Трубникова, В.М. Захарьев, В.М. Банников, М.А. Сазонова, Н.В. Петрова, Н.И. Капранов, В.Н. Калинин // Генетика. - 1997. - Т. 33, № 2. -С. 257-261.

19.Петрова, Н.В. Определение частых мутаций гена CFTR у больных муковисцидозом из Центральной России / Н.В. Петрова, Н.И. Капранов, Е.К. Гинтер // Генетика. - 1997. - Т. 33, № 1. - С. 10-14.

20.Petrova, N.V. Analysis of common CF mutations in Russia 1 N.V. Petrova, A.M. Boukina // INCO-BIOMED Workshop for Central and Eastern European countries, Abstracts. - Prague, Sept.13-16, 1997. -P.6-7.

21.Petrova, N.V. Screening for CF mutations in Russian population / N.V. Petrova, E.K.Ginter II Nether. J. Med. -1999. - V. 54. - Suppl. 1. - S28. -19.

22.Dork, T. Characterization of a novel 21-kb deletion, CFTRdeIe2,3(21kb), in the CFTR gene: a cystic fibrosis mutation of Slavic origin common in Central and East Europe / T. Dork. M. Macek Jr.. F. Mekus. B. Tiimmler, J. Tzountzouris, T. Casals. A. Krebsova. M. Koudova. I. Sakmaryova. M. Macek Sr., V. Vavrova. D. Zemkova, E. Ginter. N.V. Petrova. T. Ivaschenko, V.

Baranov, M. Witt, A. Pogorzelski. J. Bal, C. Zekanowsky. K. Wagner, M. Stuhrmann. I. Bauer. H. H. Sevdewitz. T. Neumann. S. Jakubiczka // Hum.Genet. - 2000. - No. 106. - P.259-268.

23.Петрова, H.B. Анализ относительно частых мутаций муковисцидоза у больных из России / Н.В. Петрова // Тезисы. 2 (4) Российский съезд медицинских генетиков Курск, 2000 : Бюллетень Российского общества медицинских генетиков № 1 (11). -М., 2000. - С. 129.

24.Petrova, N.V. Molecular genetic diagnosis of cystic fibrosis of Russian patients / N.V. Petrova // 4lh International Symposium for Cystic Fibrosis. -Budapest, 2-3 December 2000. -N. 17.

25.Петрова, H.B. Десятилетний опыт молекулярной диагностики муковисцидоза в МГНЦ РАМН / Н.В. Петрова, Е.К. Гинтер // Пульмонология.- 2001. - Т. 11, №3. - С. 17-20.

26.Petrova, N.V. Detection of cystic fibrosis mutations in Russian patients / N.V. Petrova, A.V. Polyakov, E.K. Ginter // 5th European International Symposium for Cystic Fibrosis. - Tallin, Estonia. - 9-10 November 2001. - N. 17.

27.Наследственные болезни в популяциях человека. / Под ред. Е. К.Гиптера. - Е.К. Гинтер, Е.В. Балановская, A.M. Букина, В.А. Галкина, Г.И. Ельчинова, Р.А. Зинченко, М.Ю. Кадошникова, О.И. Кравчук, И.С. Мошкина, С.Д.Нурбаев, Н.В. Петрова, Г.Е. Руденская, В.А. Спицын, О.В. Хлебникова - М.: Медицина, 2002. - 304 е.: ил. - ISBN 5-225-041728

28.Пай, Г.В. Генетические маркеры бронхолегочных заболеваний профессионального генеза на примере анализа полиморфных генов глутатион S-трансферазы Ml и цитохрома Р-450 А1 / Г.В. Пай, Л.П. Кузмина, О.В. Ковчан, Н.В. Петрова, В.А. Спицин // Медицинская генетика. - 2003. - Т. 2. - С. 223-226.

29.Петрова, Н.В. Анализ частых мутаций и гаплотипов внутригенных маркеров у больных муковисцидозом и в норме / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская // 5-й Славяно-Балтийский научный форум «Санкт-Петербург -Гастро-2003», 10-12 сентября 2003г. -2003. - С. 80.

30. Petrova, N.V. Analysis of common mutations and intragenic marker haplotypes in CF and normal samples from Russia / N.V. Petrova, E.E. Timkovskaya, E.K. Ginter // 7th International Symposium for Cystic Fibrosis, Slovakia.-2003.-P.12-N. 23.

31. Петрова, H.B. Анализ гаплотипов внутригенных маркеров у больных муковисцидозом и в норме / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская // Всероссийская научно-практическая конференция «Современные достижения клинической генетики», ноябрь 2003, Москва. Медицинская генетика. - Т. 2, № 10. - С. 436.

32. Петрова, Н.В. Анализ частоты встречаемости некоторых мутаций в гене CFTR в популяциях европейской части России / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Р.А. Зинченко // Всероссийская научно-практическая конференция «Современные достижения клинической генетики»,

Москва, 25-27 ноября 2003. - Медицинская генетика. - 2003. - т. 2, №10. - С. 436.

33.Хуснутдинова, Э.К. Популяционно-генетическая структура чувашей (по данным о восьми ДНК-локусах ядерного генома) // Э.К. Хуснутдинова, Т.В. Викторова, В.Л. Ахметова, O.E. Мустафина, Р.И. Фатхлисламова, Е.В. Балановская, Н.В. Петрова, C.B. Макаров, О.И. Кравчук, Г.В. Пай, Е.К. Гинтер // Генетика. - 2003. - Т. 39, № 11. - С. 1550-1563.

34.Петрова, Н.В. Анализ частот мутаций в гене CFTR в норме и у больных муковисцидозом в российских популяциях / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Н.Ю. Каширская, P.A. Зинченко // Третий съезд генетиков и селекционеров России "Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития", Москва, 6-12 июня 2004. - 2004. - Т. 2. - С. 16.

35.Тимковская, Е.Е. Частоты мутаций C282Y и H63D в гене HFE1 в выборках больных муковисцидозом и здоровых доноров в России / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Н.Ю. Каширская, P.A. Зинченко // Третий съезд генетиков и селекционеров России "Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития", Москва, 6-12 июня 2004. - 2004. - Т. 2.-С.100.

36.Петрова, Н.В. Анализ частот мутаций в гене CFTR в российских популяциях / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, P.A. Зинченко // Третьи антропологические чтения к 75-летию со дня рождения академика В.П.Алексеева «Экология и демография человека в прошлом и настоящем», тезисы. - 2004. - С. 287-288.

37.Тимковская, Е.Е. Анализ частот мутаций C282Y И H63D в гене HFE1 в некоторых популяциях России / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, P.A. Зинченко // Третьи антропологические чтения к 75-летию со дня рождения академика В.П.Алексеева «Экология и демография человека в прошлом и настоящем», Тезисы. - 2004,- С. 273-274.

38.Капранов, Н.И. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе / Н.И. Капранов, Н.Ю. Каширская, Н.В. Петрова // Медицинская генетика. - 2004. - №9. - С. 398-412.

39.Тимковская, Е.Е. Анализ некоторых мутаций генов частых наследственных болезней в популяциях России / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, P.A. Зинченко // V Съезд Медицинских генетиков, Уфа, май 2005. - Медицинская генетика. - 2005. - Т. 4, № 6. - С. 275.

40.Петрова, Н.В. Полиморфизмы генов TNF A, LTA, MBL2 и HFE у больных муковисцидозом / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Н.Ю. Каширская // V Съезд Медицинских генетиков, Уфа, май 2005. - Медицинская генетика. -2005.-Т. 4, №6. -С. 250.

41.Кокаровцева, С.Н. Распределение частот мутаций фактора V LEIDEN G1691A (FVL), протромбина G20210A, и полиморфизм гена метиленгетрагидрофолатредуктазы С677Т (МТГФР) в популяции здоровых лиц русской национальности московского региона и Тверской области / С.Н. Кокаровцева, Е.А. Калашникова, В.В. Науменко, Н.В.

Петрова, P.A. Зинченко // V Съезд Медицинских генетиков, Уфа, май

2005. - Медицинская генетика. - 2005. - Т.4, №5. - С.206. 42.3инченко, P.A. Дифференциация этнических групп России по генам

наследственных болезней /' P.A. Зинченко, Г.И. Ельчинова, Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, P.A. Шокарев, Е.А. Близнец, С.М. Тверская, A.B. Поляков // V Съезд Медицинских генетиков, Уфа, май 2005. -Медицинская генетика. - 2005. - Т.4, №4. - С. 190.

43.Петрова, Н.В. Анализ полиморфизма генов TNFA, LTA, MBL2 И HFE1 у больных муковисцидозом / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Н.Ю. Каширская // VII национальный конгресс по муковисцидозу. - Сборник статей и тезисов. - М. - 2005. - С. 78-79.

44. Капранов, Н.И. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе / Н.И. Капранов, Н.Ю. Каширская, Н.В. Петрова // VII национальный конгресс по муковисцидозу. - Сборник статей и тезисов. -М.-2005.-С. 3-19.

45.Shmarina, G.V. Tumor necrosis factor-a polymorphism and inflammatory process in cystic fibrosis patients / G.V. Shmarina, A.L. Pukhalsky, N.V. Petrova, D.A. Pukhalskaya, N.J. Kashirskaya // Eur. Resp. J. - 2005. - V. 26. -P. 403s.-P2575.

46.Radionovitch, A. L138ins mutation of CFTR gene in CF patients from Russia / A. Radionovitch, N. Petrova, N. Kashirskaya, N. Kapranov // J. Cyst. Fibr. -

2006.-V. 5. - Suppl. 1. - SI.

47.Петрова, Н.В. Анализ частоты некоторых мутаций в гене CFTR в разных популяциях России / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, P.A. Зинченко, Е.К. Гинтер // Медицинская генетика. - 2006. - Т. 5, № 2. - С.32-39.

48.Тимковская, Е.Е. Анализ частот мутаций C282Y и H63D в гене HFE1 в некоторых популяциях России /' Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Г.И. Ельчинова, С.Д. Нурбаев, С.С. Амелина, P.A. Зинченко, Е.К. Гинтер Н Медицинская генетика. - 2006. - Т. 5. - № 5. - С. 32-37.

49.3инченко, P.A. Анализ частых мутаций в генах распространенных наследственных болезней в различных популяциях России / P.A. Зинченко, Н.В. Петрова, A.B. Поляков // Российский Медицинский Форум- 2006, 18-20 окт. «Фундаментальная наука и практика». - 2006. -С. 56.

50.Петрова, Н.В. Анализ четырех полиморфизмов в гене CFTR в семьях больных муковисцидозом / Н.В. Петрова // Медицинская генетика. -2006. - Т.5. - №12(54). - С.27-32.

51.Петрова, Н.В. Молекулярно-генетические особенности муковисцидоза в российских популяциях / Н.В. Петрова // в «Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике» / Под ред. А.Б.Масленникова. -Вып.9. - Новосибирск: Альфа Виста, 2006. - С. 109-115.

52.Генетическая структура и наследственные болезни чувашской популяции. / Под редакцией Е.К.Гинтера, Р.А.Зинченко. - (коллектив авторов: Е.К. Гинтер, P.A. Зинченко, A.B. Абрукова, В.Л. Ахметова, Е.А. Близнец, H.H. Вассерман, Г.И. Ельчинова, Н.К. Ефимова, А.Г. Кириллов, С.Д. Нурбаев,

Г.П. Павлова, Н.В. Петрова, A.B. Поляков, Н.С.Сметанина, С.М. Тверская, Р.И. Хусаинова, Э.К. Хуснутдинова) - Чебоксары: Издательский дом «Пегас». - 2006 г. 232с. с ил. - ISBN 5-91225-004-0.

53.Петрова, Н.В. Молекулярно-генетические особенности муковисцидоза в российских популяциях / Н.В. Петрова // Медицинская генетика. -2006. - Т.5. - Приложение 1. - С.19-24.

54.Ахметова, B.JI. Анализ полиморфизма девяти ДНК-локусов ядерного генома в популяции марийцев / B.JI. Ахметова, Р.И. Хусаинова, Е.Б. Юрьев, И.А. Туктарова, Н.В. Петрова, C.B. Макаров, О.И. Кравчук, Г.В. Пай, Е.В. Балановская, Е.К. Гинтер, Э.К. Хуснутдинова // Генетика. -

2006. - Т.42. - №2. - С.256-273.

55.Нурутдинова, О.С. Поиск мутаций в промоторной и 5'-дистальной областях гена муковисцидоза человека / О.С. Нурутдинова, Н.В. Петрова, A.B. Баранова, Е.К. Гинтер, М.Ю. Скоблов II Медицинская генетика. - 2007. - Т.6. - №3(57). - С.23-26.

56.Тимковская, Е.Е. Полиморфизм генов TNFA и LT А у больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Н.Ю. Каширская, И.Г. Тереховская, Е.И. Шаронова, А.Ю. Воронкова, A.M. Радионович, Н.И. Капранов, JI.B. Передерко, С.Ю. Семыкин, P.A. Зинченко // Медицинская генетика. - 2007. - Т. 6. - № 3 (57).-С. 27-32.

57.Петрова, Н.В. Полиморфизм гена маннозосвязывающего лектина-2 у больных муковисцидозом, гомозиготных по мутации F508del / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Е.И. Шаронова, Н.Ю. Каширская, И.Г. Тереховская, А.Ю. Воронкова, A.M. Радионович, Н.И. Капранов, JI.B. Передерко, С.Ю. Семыкин, P.A. Зинченко // Медицинская генетика. -

2007.-Т. 6.-№6(60).-С. 31-38.

58.Петрова, Н.В. Расчет частоты муковисцидоза § г. Москва / Петрова Н.В. // VIII Национальный конгресс «Муковисцидоз у детей и взрослых». -Сборник статей и тезисов. - Ярославль, 2007. - С. 119.

59.Радионович, А.М. Результаты ДНК-диагностики мутаций в гене трансмембранного регулятора проводимости муковисцидоза у больных Московского региона / A.M. Радионович, Н.В. Петрова, Н.Ю. Каширская, Н.И. Капранов, В.Д. Толстова // VIII Национальный конгресс «Муковисцидоз у детей и взрослых». - Сборник статей и тезисов. Ярославль, 2007. - С. 131.

60.Тимковская, Е.Е. Анализ полиморфизма генов TNF A, LTA, eNOS, GTTM1 у больных муковисцидозом / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Н.Ю. Каширская // VIII Национальный конгресс «Муковисцидоз у детей и взрослых». - Сборник статей и тезисов. Ярославль, 2007. - С. 151-152.

61.Петрова, Н.В. Изучение взаимосвязи С/ТЛ-генотипа и фенотипа у российских больных муковисцидозом / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Н.Ю. Каширская, А.Ю. Воронкова, A.M. Радионович, Н.И. Капранов, JI.B. Передерко, С.Ю. Семыкин, P.A. Зинченко. // Медицинская генетика. - 2007. - Т. 6. - № 12 - С. 22-29.

62.Петрова, H.B. Расчет риска у новорожденных, выявленных при неонатальном скрининге на муковисцидоз / Н.В. Петрова, P.A. Зинченко, Е.К. Гинтер // Медицинская генетика. - 2007. - Т. 6. - № 11 (65). - С. 1623.

63.Петрова, Н.В. Расчет риска муковисцидоза у плода с эхогенным кишечником / Н.В. Петрова, P.A. Зинченко, Е.К. Гинтер // Меднципская генетика.-2007.-Т. 6.-№ 12 (66).-С. 11-14.

64.Тимковская, Е.Е. Анализ полиморфизма генов eNOS, TNFA, LTA, GSTM1, MBL2, HFE у больных муковисцидозом / Е.Е.Тимковская, Н.В.Петрова, Н.Ю. Каширская, P.A. Зинченко // «Генетика человека и патология». Сб. научн. трудов. - Томск, Выпуск.8. -2007.-С. 194-195.

65.Бермишева, М.А. Популяционно-генетическос исследование популяции удмуртов (анализ десяти полиморфных ДНК-локусов ядерного генома) / М.А. Бермишева, Н.В. Петрова, P.A. Зинченко, Е.Е. Тимковская, П.Ю. Малышев, С.Г. Гаврилина, Е.К. Гинтер, Э.К. Хуснутдинова // Генетика. -2007. - Т.43. - №5. - С.688-705.

66.Зинченко, P.A. Дифференциация этнических групп России по генам наследственных болезней / P.A. Зинченко, Г.И. Ельчинова, В.А. Галкина, А.Г. Кириллов, A.B. Абрукова, Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, С.П. Зинченко, P.A. Шокарев, A.A. Морозова, Е.А. Близнец, H.H. Вассерман, A.A. Степанова, A.B. Поляков, Е.К. Гинтер // Медицинская генетика. -2007. - Т. 6, №2 (56). - С. 29-37.

67.Зинченко, P.A. Генетическая структура Удмуртской популяции / P.A. Зинченко, Г.И. Ельчинова, Н.В. Петрова, Е.В. Осипова, П.Ю. Малышев, A.B. Поляков, Е.К. Гинтер // Генетика. - 2007. - Т. 43, № 8. - С. 11071119.

68.Тимковская, Е.Е. Анализ полиморфизма генов eNOS, TNFA, LTA, GSTM1, MBL2, HFE у больных муковисцидозом / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Н.Ю. Каширская, P.A. Зинченко // «Генетика человека и патология». Сб.научн.трудов. - Томск, Выпуск.8. -2007.-С. 194-195

69.Тимковская, Е.Е. Исследование взаимосвязи CFTR генотипа и клинических проявлений у больных муковисцидозом / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Н.Ю. Каширская, А.Ю. Воронкова, A.M. Радионович, Н.И. Капранов, JI.B. Передерко, С.Ю. Семыкин, Р. А. Зинченко // Детская больница. - 2008. - № 8. - С. 8-11.

70.Timkovskaya, Е.Е. Analysis of eNOS, TNFA, LTA, GSTM1, MBL2, HFE genes as modifier genes in Russian cystic fibrosis patients / E.E. Timkovskaya, N.V. Petrova, N.J. Kashirskaya, R.A. Zinchenko // 31st European Cystic Fibrosis Conference, Prague. - J. Cyst. Fibr. - V. 7. - Suppl. 2. - P. S2. - No. 7.

71.Petrova, N.V. Genotype-phenotype correlation in Russian CF patients / N.V. Petrova, E.E. Timkovskaya, N.J. Kashirskaya, R.A. Zinchenko // 31st European Cystic Fibrosis Conference, Prague. - J. Cyst. Fibr. - V. 7. - Suppl. 2.-P. S6.-No.22.

72.Stepanova, A. A. The molecular genetic study CFTR gene in the group of Russia CF-patients / A. A. Stepanova, N.V. Petrova, A.V. Polyakov //

European Human Genetics Conference 2008. - Eur. J. Hum. Genet. - 2008. -V. 16. - Suppl. 2.-P. 44.-P01.030.

73.Timkovskaya, E.E. Association of polymorphism in the endothelial nitric oxide syntase gene and clinical features in Russian CF patients homozygous for F508del mutation / E.E. Timkovskaya, N.V. Petrova, N.J. Kashirskaya, R.A. Zinchenko H European Human Genetics Conference 2008. - Eur. J. Hum. Genet. - 2008. - V. 16. - Suppl. 2. - P. 44. - P01.033.

74.Petrova, N.V. The analysis of CFTR mutations frequencies in different populations of Russia / N. V. Petrova, E. E.Timkovskaya, R. A.Zinchenko // European Human Genetics Conference 2008. - Eur. J. Hum. Genet. - 2008. -V. 16. - Suppl. 2. - P. 387. - P07.103.

Список условных сокращений:

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИРТ - иммунореактивный трипсиноген MB - муковисцидоз ИРТ - иммунореактивный трипсин МИ - мекониальный илеус МРИ - массо-ростовой индекс ОФВ) — объем форсированного выдоха в 1 секунду ПЦР - полимеразная цепная реакция СДИО - синдром дистальной интестинальной обструкции УЗИ — ультрозвуковое обследование ФВД - функция внешнего дыхания ФЖЕЛ - форсированная жизненная емкость легких цАМФ - циклический аденозиндезоксирибонулеотидмонофосфат CFTR - муковисциозный трансмембранный регулятор проводимости (от англ. cystic fibrosis transmembrane conductance regulator; MRSA - метициллин-резистентный золотисный стафиллококк VNTR - вариабельное число тандемных повторов (от англ. variable number of

Подписано в печать:

03.12.2008

Заказ № 1358 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Петрова, Ника Валентиновна

Список сокращений и условных обозначений.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность исследования.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Научная новизна и практическая значимость работы.

1.3.1. Научная новизна работы.

1.3.2. Практическая значимость работы.

1.4. Положения, выносимые на защиту.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Муковисцидозный трансмембранный регулятор проводимости.

2.1.1. Ген CFTR, его продукт и функция.

2.1.2. CFTR мутации.

2.1.2.1. Классификации CFTR мутаций в зависимости от первичного повреждающего эффекта.

2.1.2.2. Разработка новых методов терапии в зависимости от типа CFTR мутаций.

2.1.3. Частота муковисцидоза и распределение CFTR мутаций в различных регионах мира.

2.1.4. Источники происхождения и распространения некоторых CFTR мутаций в европейских популяциях.

2.1.5. Преимущество гетерозиготных носителей CFTR мутаций - вероятная причина высокой частоты муковисцидоза в Европе?.

2.2. Причины клинического разнообразия муковисцидоза.

2.2.1. Корреляции CFTR генотипа и фенотипа при MB.

2.2.2. Комплексные аллели.

2.2.3. Регуляция сплайсинга. Механизмы регуляции уровня CFTR.

2.2.4. Возможные гены модификаторы течения муковисцидоза.

2.2.4.1. Ген эндотелиальной синтазы оксида азота.

2.2.4.2. Гены фактора некроза опухоли а и лимфотоксина а.

2.2.4.3. Ген глутатион-Б-трансферазы Ml.

2.2.3.4. Ген маннозо-связывающего лектина.

2.2.3.5. Ген гемохроматоза.

2.3. Диагностика и классификация MB.

2.4. Популяционный скрининг на муковисцидоз.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Реактивы, ферменты, биопрепараты.

3.2. Материалы исследования.

3.2.1. Характеристика выборки больных.

3.2.2. Популяционные выборки.

3.2.3. Характеристика контрольной группы.

3.2.4. Характеристика материала исследования.

3.3. Методы исследования.

3.3.1. Молекулярно-генетические методы.

3.3.1.1. Выделение геномной ДНК.

3.3.1.2. Идентификация мутаций в гене CFTR.

3.3.1.3. Анализ внутригенных и внегенных полиморфизмов гена CFTR.

3.3.1.4. Анализ полиморфизмов в генах eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE

3.3.2. Общеклинические методы.

3.3.3. Статистическая обработка результатов исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Расчет частоты муковисцидоза, изучение спектра и частот CFTR мутаций у больных муковисцидозом и в популяциях Российской Федерации

4.1.1. Анализ относительных частот CFTR мутаций у больных MB.

4.1.2. Поиск мутаций в 5'дистальной и промоторной области гена CFTR.

4.1.3. Распределение CFTR мутаций у российских больных MB в разных регионов и этнических групп.

4.1.4. Протокол проведения прямой ДНК-диагностики у российских больных MB.Ill

4.1.4. Анализ частоты некоторых мутаций в гене CFTR в ряде популяций России.

4.1.5. Расчет частоты муковисцидоза в популяциях русских европейской части России.

4.2. Молекулярно-генетическая диагностика в российских семьях с муковисцидозом.

4.2.1. Ассоциация гаплотипов внегенных ДНК-маркеров с мутантными и нормальными хромосомами.

4.2.2. Анализ частот аллелей и гаплотипов внутригенных полиморфизмов в выборках нормальных и мутантных хромосом.

4.2.2.1. Анализ частот аллелей внутригенных полиморфизмов на нормальных и мутантных хромосомах.

4.2.2.2. Анализ частот гаплотипов внутригенных полиморфизмов на нормальных и мутантных хромосомах.

4.2.3. Эффективность комплексной ДНК-диагностики MB.

4.3. Взаимосвязь CFTR генотипа и фенотипа у российских больных MB.

4.3.1. Особенности клинической картины у пациентов с «тяжелыми» и «мягкими» генотипами.

4.3.2. Вариабельность клинической картины внутри групп больных MB с «тяжелыми» и «мягкими» генотипами.

4.4. Анализ ряда генов как возможных модификаторов клинических проявлений муковисцидоза.

4.4.1. Анализ частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов eNOS,

TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1 у больных MB и здоровых индивидов.

4.4.2. Анализ ассоциаций полиморфизмов генов eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1 с поражением дыхательной системы у больных MB.

4.4.3. Анализ ассоциаций полиморфизмов генов eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1 с поражением пищеварительной системы у больных MB.

4.4.4. Оценка функции выживаемости у больных MB с разными генотипами по генам eNOS, TNFA, LTA, MBL2, GSTM1 и HFE1.

4.5. Медико-генетическое консультирование у российских семей с MB.

4.5.1. Расчет риска у новорожденных, выявленных при неонатальном скрининге на муковисцидоз.

4.5.2. Расчет риска муковисцидоза у плода с эхогенным кишечником.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетические и клинико-генотипические особенности муковисцидоза в российских популяциях"

Муковисцидоз (MB, CF; OMIM #219700) наиболее частое наследственное аутосомно-рецессивное заболевание среди европеоидов. Муковисцидоз обусловлен мутациями в гене CFTR, муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости [OMIM #602421]. Белок CFTR, функционируя как цАМФ-зависимый хлорный канал, регулирует работу других хлорных и натриевых каналов, участвует в транспорте воды, является сенсором внутриклеточного уровня АТФ и медиатором транспорта эндоплазматических пузырьков [Riordan J.M. et al., 1989], в период внутриутробного развития организма играет роль в клеточной дифференциации [Cohen J. С., Larsen J. Е., 2005]. При этом заболевании в той или иной степени в патологический процесс вовлекаются экзокринные железы разных систем организма, но в большей степени страдают органы дыхания, поджелудочная железа, печень, желчные пути, пищеварительный тракт, потовые железы и урогенитальный тракт [Иващенко Т.Э., Баранов B.C., 2002; Капранов Н.И. и др., 2004; Witt Н., 2003].

В настоящий момент описаны более 1500 мутаций и 250 полиморфизмов в гене CFTR, частоты которых широко варьируют в разных этнических группах [CFTR mutation database, http://www.genet.sickkids.on.ca/cfitr/]. Спектры различных мутаций и полиморфизмов гена CFTR обладают выраженной популяционной специфичностью, являясь отражением генетических процессов, формирующих популяции. Это вносит объективные сложности в разработку протоколов проведения ДНК-диагностики MB среди населения, относящегося к разным этническим группам и проживающего в разных регионах.

MB наиболее распространен среди европеоидов (1:2500 до 1:4500 новорожденных). Частота MB варьирует в разных популяциях в весьма широких пределах (например, в Европе от 1 : 1800 новорожденных в Ирландии до 1 :26000 новорожденных в Финляндии) [WHO, 2004]. Оценки частоты MB в разных популяциях Российской Федерации (РФ) также весьма различны (от 1:4900 до 1:12000 живорождённых) [Петрова Н.В.,.Гинтер Е.К, 1997; Капранов Н.И., 2001, 2006, Радионович A.M. и др., 2005; Воронин С.В. и др., 2007; Матулевич С.А., 2007; Михальчук В.В. и др., 2007; Одинокова О.Н и др., 2007].

Определение спектра мутаций в гене CFTR, характерных для больных MB из разных регионов и этнических групп, является важным условием разработки рациональной стратегии пренатальной и постнатальной диагностики этого заболевания и одним из аспектов популяционно-эпидемиологических исследований наследственной патологии человека, в том числе и в России.

В странах с высокой распространенностью MB разработаны программы скрининга новорожденных, направленные на раннее и возможно более полное выявление больных, а также программы скрининга беременных женщин для выявления гетерозиготных носителей MB. Начиная с 2006 года, MB включен в список наследственных заболеваний, подлежащих обязательному неонатальному скринингу в Российской Федерации, наряду с фенилкетонурией, гипотериозом, галактоземией и адреногенитальным синдромом. Значительный прогресс в области ранней диагностики и терапии MB способствует трансформации MB из безусловно фатального заболевания детского возраста в хроническую патологию взрослых. В развитых странах отмечается рост числа больных MB подросткового, юношеского возраста и взрослых [Амелина E.JI, 2001; WHO, 2004]. Медиана продолжительности жизни больных MB, родившихся в 2000 году, составит более 50 лет [Dodge J., 2007; Warwick W.J., Braverman J., 2007].

Однако продолжительность жизни, спектр и тяжесть клинических проявлений значительно варьируют среди больных MB. Взаимосвязь между вариабельностью клинического течения и CFTR генотипом неоднозначна. С одной стороны, установлена четкая зависимость между мутациями в гене CFTR и недостаточностью внешнесекреторной функции поджелудочной железы [Kerem Е. et al., 1990; Kerem В. S., Kerem E., 1996]. Выделена группа мутаций, ассоциирующих обычно с сохранностью функции поджелудочной железы, и эти, так называемые, «мягкие» мутации обладают доминантным эффектом, т.к. остаточная экзокринная функция поджелудочной железы отмечается даже у пациентов, несущих «тяжелую» мутацию во втором CFTR аллеле. Однако, с другой стороны, связь между CFTR генотипом и другими проявлениями MB не столь очевидна. В частности, течение бронхолегочного процесса, определяющее качество и продолжительность жизни больных MB, по мнению ряда авторов [Ferrari М., Cremonesi L. , 1996; Parad R.B. et al., 1999; McKone E.F. et al., 2006], впрямую не зависит от CFTR генотипа, а в значительной степени обусловлено факторами окружающей среды. Кроме того, различие в течении MB наблюдается у больных, проживающих в равных социальных условиях, наблюдаемых в одних медицинских центрах и имеющих одинаковые мутации в гене CFTR, в частности, у сибсов, причем конкордантность по тяжести заболевания у монозиготных близнецов, достоверно выше, чем у дизиготных [Mekus F. et al., 2000; Vanscoy L.L. et al., 2007], что позволяет предполагать влияние на клиническую картину MB других генетических факторов, отличных от гена CFTR.

В настоящее время во всем мире ведется активный поиск генов, оказывающих влияние на клинические проявления MB. Изучается ряд генов, белковые продукты которых могут быть вовлечены в патогенетические механизмы MB. Особое внимание уделяется генам, продукты которых вовлечены в иммунную защиту организма [Drumm M.L. et al., 2005; Salvatore F. et al., 2002; Witt H., 2003].

По-видимому, вариабельность клинических проявлений MB является следствием взаимодействия нескольких факторов: CFTR мутаций, модифицирующих факторов в гене CFTR и/или других генах и влияния окружающей среды [Loubieres Y., et al., 2002]. В связи с широкой вариабельностью клинической картины выявление факторов, вовлеченных в патогенез отдельных симптомов MB является важной медико-генетической задачей во всем мире, решение которой позволит не только выявить генетические факторы риска определенных осложнений, но может способствовать созданию новых этиопатогенетических подходов к терапии заболевания, что будет способствовать дальнейшему увеличению продолжительности и повышению качества жизни больных.

Несмотря на интенсивное изучение муковисцидоза специалистами разных направлений, в том числе и в России, интерес к проблемам этого заболевания не ослабевает. Решение вопросов, связанных с изучением распространенности MB в разных популяциях и этнических группах, выявления гено-фенотипических корреляций, определения факторов, лежащих в основе вариабельности клинических проявлений, особенностей консультирования в связи с введением пресимптоматической диагностики в России представляется актуальным.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Петрова, Ника Валентиновна

выводы

1. Оценка частоты MB в европейской части России, рассчитанная из популяционной частоты мутации F508del (0,00518 (0,00398-Ю,00663, при 95%-ом доверительном интервале)) и относительной доли мутации F508del среди всех мутантных аллелей гена CFTR (54,4%), составила 0,0000912, или 1:10965.

2. На выборке 776 российских больных MB из разных регионов России определен спектр и относительные частоты мутаций в гене CFTR. Для спектра CFTR мутаций характерно: относительно невысокая частота мутации F508del (54,2%), достаточно большое число диагностически значимых мутаций (частота >0,5%) - CFTRdele2,3(21kb), 2143delT, W1282X, N1303K, 3849+1 OkbOT, 2184insA, G542X, 1677delTA, 3821delT, R334W, L138ins и 394delTT, суммарно составляющих 21,5%.

3. Анализ частоты семи частых CFTR мутаций (CFTRdele2,3(21kb), F508del, 1677delTA, 2143delT, 2184insA, 394delTT и 3821delT) среди здоровых индивидов 5 этнических групп: русских из европейской части России и четырех народов Волго-Уральского региона (марийцы, удмурты, чуваши и башкиры), показал значимо меньшую частоту мутации F508del у изученного коренного населения Волго-Уральского региона (0,00112-0,00192), чем у русских (0,00518).

4. Выявлено неравновесие по сцеплению аллелей и гаплотипов четырех внутригенных маркеров гена CFTR (IVS1CA, IVS6aGATT, IVS8CA и IVS17BCA) в выборках мутантных и нормальных хромосом. Определены три группы мутаций, ассоциированные с определенными гаплотипами: мутации F508del, N1303K, G542X, 2143del и 394delTT - с гаплотипом 21-623-13; мутации CFTRdele2,3(21kb), 1677delTA, L138ins - с гаплотипом 22-716-13; мутации W1282X, R334W - с гаплотипом 26-7-17-17. Самым частым в выборке нормальных хромосом родителей больных муковисцидозом является гаплотип 22-7-16-13 (23,5%).

5. Анализ четырех внутригенных маркеров (IVS1CA, IVS6aGATT, IVS8CA и IVS17BCA) и пяти внегенных маркеров (XV-2c; КМ19; CS7; J3.ll; W30) позволяет проводить пренатальную диагностику MB практически в 100% семей. Наиболее эффективным для косвенной пренатальной диагностики MB в российских семьях является использование полиморфизма динуклеотидных С А повторов в 1 интроне гена CFTR (IVS1CA). Для этой системы характерна максимальная гетерозиготность облигатных носителей мутантных MB аллелей (0,79) и самое высокое число полностью информативных семей (47%) по сравнению с другими маркерами.

6. Выявлена зависимость между тяжестью поражения как желудочно-кишечного тракта, так и бронхолегочной системы и CFTR генотипом у российских больных MB. Для больных с двумя мутациями I и/или II классов характерен более ранний возраст начала клинических нарушений со стороны пищеварительной системы (р=0,029), более частым является дебют в форме кишечного синдрома (р=0,008), более ранней - колонизация легких P.aeruginosa (р=0,000058), что приводит к более быстрому прогрессированию заболевания (р^ООЗ) по сравнению с больными, имеющими, по крайней мере, одну мутацию IV или V класса.

7. Гены eNOS, MBL2 и HFE можно рассматривать как модификаторы клинических проявлений MB у российских больных. Установлена ассоциация аллеля A VNTR eNOS4 с менее благоприятным развитием бронхолегочного процесса при MB (р=0,032) и со снижением частоты цирроза печени (р=0,044). Обнаружена ассоциация аллелей гена MBL2 (G54D, G57E, R52C, -221G>C) с более тяжелым течением бронхолегочного процесса у детей дошкольного возраста (р=0,038), более ранним поражением P. aeruginosa (р=0,017) и более частым поражением Al. xylosoxidans (р=0,037) и St. maltophilia (р=0,049). Выявлена ассоциация мутации H63D гена HFE с более тяжелым поражением желудочно-кишечного тракта и ранней манифестацией кишечного синдрома (р=0,034).

8. При проведении медико-генетического консультирования в семьях, выявленных на скрининге MB, и расчетах апостериорного риска необходимо учитывать частоту MB (1:10965), частоту гетерозиготного носительства мутантных аллелей MB (0,019), долю выявляемых при ДНК-диагностике мутаций (75,5%) и относительные частоты MB мутаций в российской популяции. Показано, что риск MB у новорожденного, положительно тестированного на ИРТ, составляет 0,0541 при обнаружении у него одной CFTR мутации и 0,0005, если ни одна из частых CFTR мутаций не обнаружена. Риск MB у плода с эхогенным кишечником, диагностированном при УЗИ во втором триместре беременности, и при обнаружении частой CFTR мутации у одного из родителей достаточно высок (0,1733).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Муковисцидоз может служить ярким примером достижений современной молекулярной биологии в изучении наследственной патологии: клонирование гена CFTR, выявление первичного дефекта на генном уровне, изучение влияния мутации на функцию белка позволило приблизиться к пониманию патогенеза этого сложного мультиорганного заболевания. Полученные достижения важны для первичной профилактики заболевания, т.е. предупреждения рождения больного MB в отягощенных и информативных семьях, что в настоящее время может быть гарантировано практически в 100% случаев. Кроме того, ДНК-обследование помогает в дифференциальной диагностике нетипичных форм MB, определении характера течения болезни и, наконец, возможности новых этиопатогенетических подходов к ее лечению.

За последние двадцать лет развитие разнообразных техник молекулярных исследований привело к обнаружению более 1500 мутаций в гене CFTR, и к настоящему моменту для многих популяций и этнических групп определены специфичные панели мутаций. Работы по изучению спектра CFTR мутаций у российских больных MB велись разными группами исследователей нашей страны. Объединение этих данных позволяет сделать выводы о разнообразии и особенностях спектров мутаций в разных регионах и этнических группах. К диагностически значимым у российских больных MB мутациям можно отнести мутации F508del, CFTRdele2,3(21kb), 2143delT, W1282X, N1303K, 3849+10kbC-T, 2184insA, G542X, 1677delTA, 3821delT, R334W, L138ins и 394delTT, общая доля которых составляет не менее 60-75% в разных регионах. Но частоты и спектры как частых, так и более редких мутаций значительно варьируют в разных регионах, что следует учитывать при разработке протоколов ДНК-диагностики. Поскольку большая часть обследованных нами больных русские, то и указанный спектр частых CFTR мутаций характерен в первую очередь для русских пациентов. Число больных с известной этнической принадлежностью было немногочисленно, но удалось выявить некоторые этнические особенности распределения CFTR мутаций. У пациентов с русской этнической проинадлежностью самой частой является мутация F508del (54,4%»), второй по частоте - CFTRdele2,3(21kb) (6,6%). Мутация F508del у больных, относящихся к другим этническим группам, встречается реже, чем у русских: у татар - 44%, чеченцев - 30%, у грузин - 17%. Мутация W1282X наиболее часто встречается у больных, происходящих из еврейских или смешанных браков между евреями и представителями других этнических групп (что соответствует данным литературы), мутация 1677delTA часто обнаруживается у коренных жителей Кавказа и Закавказья (грузин, чеченцев), а мутация G542X - у обследованных армянских больных.

Значительная доля мутантных аллелей у российских больных MB остается неидентифицированной (в настоящем исследовании 23%), даже при интенсивном анализе всей кодирующей области гена CFTR [Verlingue С. et al, 1995]. Проведенный впервые у российских больных MB поиск мутаций в 5'-дистальной и промоторной областях гена CFTR не выявил каких-либо изменений нуклеотидной последовательности изученных фрагментов ДНК [Нурутдинова О.С. и др, 2007]. Возможно, что мутации в этой области гена CFTR у российских больных, как и у пациентов в других популяциях мира, достаточно редки, а дальнейший поиск мутаций следует проводить в других областях гена CFTR, например, в интронах, либо не идентифицированные мутации представляют собой так называемые комплексные вариации, или являются обширными перестройками (делециями или инсерциями), охватывающими значительные по протяженности области гена CFTR. Возможно, что необнаружение мутаций связано с недостаточной чувствительностью методов, использованных при скрининге (денатурирующий гель-электрофорез, конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК), в таком случаях при дальнейшем анализе следует использовать другие техники, например, количественную ПЦР.

В семьях с точно установленным диагнозом «муковисцидоз», в которых одна или обе CFTR мутации не определены, рекомендовано проведение сегрегационного анализа полиморфных непатогенных ДНК-маркеров для идентификации мутантных хромосом. В настоящий момент доступны как внутригенные, так и внегенные фланкирующие локус CFTR маркеры. При проведении пренатальной диагностики предпочтительно одновременное использование нескольких внутригенных и внегенных маркеров, чтобы с большей вероятностью избежать неидентифицированную рекомбинацию между маркером и мутацией. Использование четырех внутригенных полиморфизмов тандемных повторов и пяти внегенных маркеров позволяет достичь полной информативности практически во всех российских семьях, отягощенных MB.

Одной из важных эпидемиологических характеристик наследственного заболевания, необходимых для расчета генетического риска при проведении консультирования, планирования профилактических медицинских мероприятий, является оценка его частоты. Полученная в настоящей работе оценка частоты MB у русских европейской части России, рассчитанная на основе популяционной частоты мутации F508del (0,00518) и относительной доле этой мутации среди российских больных MB (54,4%), составившая 0,0000912, или 1 : 10965 новорожденных, согласуется с трендом частоты MB, наблюдающимся в Евразии с максимальным значением на западе Европы и постепенным снижением к востоку. Результаты недавно начатого скрининга новорожденных на MB свидетельствуют в пользу того, что частота MB в России, по-видимому, ниже, чем в популяциях Западной Европы, и совпадают с нашими данными.

Многочисленные исследования последних лет посвящены выявлению и взаимодействию факторов, лежащих в основе клинической вариабельности MB. Хотя муковисцидоз, по-прежнему, рассматривают как моногенное заболевание, при котором в патологический процесс вовлекаются различные системы органов, становится очевидным, что клинический полиморфизм MB является следствием взаимодействия многих генетических факторов: CFTR мутаций, модифицирующих вариантов как в гене CFTR, так и в других генах, также велико и влияние факторов окружающей среды, включая последствия получаемой терапии [Loubieres Y. et al, 2002; Mishra A. et al, 2005; Rowntree R.K, Harris A, 2003; Castellani C. et al, 2008]. В связи с введением пресимгггоматической диагностики MB через неонатальный скрининг или скрининг носителей актуальными являются вопросы прогноза течения заболевания у конкретных пациентов с целью планирования более адекватного лечения. Возникает необходимость использования результатов молекулярного анализа и правильной их интерпретации в диагностическом процессе и клинической практике.

При проведении анализа ассоциаций между CFTR генотипом и клиническим фенотипом у российских больных MB, полученные результаты согласуются с данными зарубежных исследователей. В целом, для больных, имеющих две мутации I и/или II классов, характерны более ранний возраст начала клинических нарушений со стороны органов пищеварения и поражения легких P.aeruginosa, заболевание чаще дебютирует кишечным синдромом, отмечается более быстрое прогрессирование патологического бронхолегочного процесса и меньшая продолжительность жизни по сравнению с больными, имеющими, по крайней мере, одну мутацию IV или V класса. Т.е. для больных, имеющих две мутации I и/или II классов, характерны более тяжелое течение заболевания и худший прогноз, хотя вариабельность течения отмечена как внутри групп, так и у больных с одинаковыми генотипами, даже и у сибсов. По-видимому, гено-фенотипические корреляции можно использовать только в самом общем плане (определяя преимущественную форму заболевания - кишечную, легочную), но не при составлении точного прогноза заболевания у конкретного больного.

Некоторые клинические симптомы строго обусловлены CFTR генотипом (например, внешнесекреторная функция поджелудочной железы), другие, и в первую очередь степень поражения бронхолегочной системы, - влиянием модифицирующих генетических факторов и факторов окружающей среды, действующих как независимо друг от друга, так и совместно. Исследование этих сложных взаимодействий у пациентов с одинаковыми CFTR генотипами является важной задачей, разрешение которой может способствовать лучшему пониманию патофизиологических процессов лежащих в основе MB и прогнозу течения заболевания. Поиск модифицирующих генов при MB сродни поиску генов, обусловливающих сложнонаследуемые заболевания, т.е. у разных групп пациентов за развитие одних и тех же симптомов могут отвечать разные гены, а вклад каждого гена может быть минимален. Следовательно, для выявления модифицирующего влияния, а также для корректного расчета риска конкретного осложнения необходимо обследование большого числа больных и объединение данных нескольких независимых исследований. В настоящем исследовании было показано, что гены eNOS, MBL2 и HFE можно рассматривать как модификаторы клинических проявлений MB у российских больных, как со стороны бронхолегочной системы, так и со стороны органов пищеварения. С нашей точки зрения, генотипирование больных MB по изученным генам может быть полезно для более объективного прогноза течения заболевания и выработки более рациональной тактики лечения. Так пациенты-носители определенных аллелей, обусловливающих недостаточность MBL2 и/или eNOS и являющихся факторами предрасположенности к раннему поражению P.aeruginosa и менее благоприятному развитию бронхолегочного процесса, могут находиться под более интенсивным наблюдением врача, и им может быть предписано профилактическое лечение, препятствующее бактериальному инфицированию. При ведении регистров больных MB в Центрах муковисцидоза следовало бы учитывать не только CFTR генотип, но и результаты тестирования по другим генам, задействованным в патогенезе отдельных симптомов заболевания. В дальнейшем, это позволило бы оценить вклад разных генов как модификаторов клинической картины заболевания у российских больных MB.

На основе изучения молекулярных и клинических последствий CFTR мутаций разрабатываются новые подходы в лечении больных MB, например, так называемая мутационно-специфическая терапия, в основе которой лежит способность некоторых препаратов частично восстанавливать функцию дефектного гена или белка CFTR. Выявление же генов, участвующих в патогенезе определенных симптомов заболевания, также может способствовать развитию новых методов лечения и профилактики различных осложнений, например, заместительная терапия при недостаточности MBL2 может применяться для профилактики бактериальной инфекции.

К настоящему времени возрос интерес в мире к выявлению фенотипических особенностей редких CFTR генотипов, для решения данной задачи необходимо объединение как можно большего материала на мировом уровне, в том числе и в России. НКО муковисцидоза ГУ МГНЦ РАМН, а также и лаборатория генетической эпидемиологии, участвуют в осуществлении этого проекта. Более полное изучение спектра CFTR мутаций и генотипов у российских больных с MB позволит оптимизировать диагностику заболевания и проведение медико-генетического консультирования в семьях с MB, будет способствовать более интенсивному исследованию гено-фенотипических корреляций у российских больных MB, и может быть, разработке принципов лечения.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Петрова, Ника Валентиновна, Москва

1. Амелина, E.JI. Муковисцидоз: определение продолжительности жизни / E.JI. Амелина, А.В.Черняк, А.Л. Черняев // Пульмонология. 2001. - № 3.- С. 61-64.

2. Бермишева, М.А. Популяционно-генетическое исследование популяции удмуртов (анализ десяти полиморфных ДНК-локусов ядерного генома) / М.А. Бермишева, Н.В. Петрова, Р.А. Зинченко и др. // Генетика. 2007. - Т. 43,-№5.-С. 688-705.

3. Ванин, А.Ф. Оксид азота регулятор клеточного метаболизма / А.Ф. Ванин // Соросовский образовательный журнал. - 2001. - № 11. - С. 7-12.

4. Вознесенский, Н.А. Окись азота и легкие / Н.А. Вознесенский, А.Г. Чучалин, Н.С. Антонов // Пульмонология. 1998. - Т. 8, № 2. - С. 6-10.

5. Воронкова, А.Ю. Клинические эффекты применения пульмозима / А.Ю. Воронкова // VII Национальный конгресс «Муковисцидоз 2005». - Сборник статей и тезисов: Воронеж, 2005. - С. 40-41.

6. Воронкова, А.Ю. Дорназа альфа: клинические и лабораторные эффекты / А.Ю.Воронкова, Г.В. Шмарина, Л.Г. Дубовиц и др. // Пульмонология. -2006. Приложение по муковисцидозу. - С. 25-29.

7. Гинтер Е.К. Медицинская генетика : Учебник / Е.К. Гинтер М.: Медицина, 2003. - 448 е.: ил. (Учеб. лит. для студентов мед. вузов). - ISBN 5-225-043275.

8. Голубцов, В.И. Редкие мутации гена CFTR у больных муковисцидозом в Краснодарском крае / В.И. Голубцов, Д.В. Рукавичкин, С.В. Морданов, С.И. Куцев // Медицинская генетика. 2007. - Т. 6. - № 9. - С. 15-19.

9. Гуськова, А.А. Жизнь и смерть белка CFTR / А.А. Гуськова, М.Ю. Скоблов, А.В. Баранова // Медицинская генетика. 2007. - Т. 6. - № 2 (56). - С. 3-9.

10. Жеребцова, A.JI. Изучение полиморфных маркеров ДНК в кандидатных генах болезни двигательного нейрона : дисс. . канд. мед. наук / Жеребцова А.Л.-М., 2006.-165 с.

11. Животовский, Л. А. Популяционная биометрия / Л. А. Животовский // М.: Наука. 1991. - 271с. - ISBN 5-02-005869-6.

12. Иващенко, Т.Э. Муковисцидоз: молекулярно-генетический анализ гена, разработка новых подходов диагностики и генотерапии : автореф. дис. . д-ра биол. наук : 03.00.15 / Иващенко Татьяна Эдуардовна. М., 2000. - 46 с.

13. Иващенко, Т.Э. Биохимические и молекулярно-генетические основы патогенеза муковисцидоза / Т.Э. Иващенко, B.C. Баранов // Спб.: Интермедика. 2002. - 256 с. - ISBN 5-89720-043-2.

14. Капранов, Н.И. Муковисцидоз (современные достижения и проблемы)ю Методоческие рекомендации / Н.И. Капранов, Л.А. Шабалова, Н.Ю. Каширская и др. // М.: Медпраьсгика. 2001. - С. 32-46.

15. Капранов, Н.И. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе / Н.И. Капранов, Н.Ю. Каширская, Н.В. Петрова // Клиническая генетика. 2004. - № 9. - С. 398-412.

16. Капранов, Н.И. Муковисцидоз современное состояние проблемы / Н.И. Капранов // Пульмонология. - 2006. - Приложение. - С. 5-11.

17. Каширская, Н.Ю. Состояние желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы и гепатобилиарной системы у больных муковисцидозом : Автореф. дисс. . докт. мед. наук : 14.00.09 / Каширская Наталья Юрьевна М., 2001. -45 с.

18. Корытина, Г.Ф. Анализ спектра мутаций и полиморфных локусов гена трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза в Башкортостане / Г.Ф. Корытина, Т.В. Викторова, Г.В. Байкова, Э.К. Хуснутдинова // Генетика. 2002. - Т. 38, № 9. - С. 1270-1275.

19. Корытина, Г.Ф. Полимофизм генов глутатион-Б-трансфераз Ml и PI у больных с муковисцидозом и хроничсескими заболеваниями дыхательной системы / Г.Ф. Корытина, Д.Г. Янбаева, Т.В. Викторова // Генетика. 20046. -Т. 3, № 3. - С. 401-408.

20. Кулинский, В.И. Обезвреживание ксенобиотиков / В.И. Кулинский // Соросовский образовательный журнал. 1999. - № 1. - С.8-12.

21. Налбандян, Н.Г. Выявление спектра мутаций у пациентов с предполагаемым диагнозом муковисцидоз в Армянской популяцию / Н.Г.

22. Налбандян, А.В. Аракелян // VIII Национальный конгресс «Муковисцидоз у детей и взрослых». Сборник статей и тезисов. - Ярославль, 2007. - С. 107.

23. Наследственные болезни в популяциях человека / Под ред. Е.К. Гинтера. -М.: Медицина, 2002. 304 с. : ил. - ISBN 5-225-04172-8.

24. Насонов, Е.Л. Фактор некроза опухоли новая мишень для противовоспалительной терапии ревматоидного артрита / Е.Л. Насонов // Клиническая фармакология и терапия. - 2001. - №1. - С. 64-70.

25. Нурутдинова, О.С. Поиск мутаций в промоторной и 5'-дистальной областях гена муковисцидоза человека / О.С. Нурутдинова, Н.В. Петрова, А.В. Баранова и др. // Медицинская генетика. 2007. - Т. 6, № 3 (57). - С. 23-26.

26. Пай, Г.В. Роль генетического полиморфизма эндотелиальной синтазы окиси азота (eNOS) в патогенезе некоторых профессиональных заболеваний / Г.В. Пай, Л.П. Кузьмина, Н.А. Лазарашвили и др. // Медицинская генетика. -2006.-Т. 5, №7.-С. 47-50.

27. Петрова, Н.В. Определение частоты мутации AF508 среди новорожденных города Москвы и оценка частоты муковисцидоза в Европейской части России / Н.В. Петрова, Е.К. Гинтер // Генетика. 1997. - Т. 33, № 9. - С. 1326-1328.

28. Петрова, Н.В. Анализ частоты некоторых мутаций в гене CFTR в разных популяциях России / Н.В. Петрова, Е.Е. Тимковская, Р.А. Зинченко, Е.К. Гинтер // Медицинская генетика. 2006. - № 2. - С. 28-31.

29. Потапова, О.Ю. Молекулярно-генетический анализ кистозного фиброза в России : автореф. дисс. . канд. биол. наук : 03.00.15 / Потапова Ольга Юрьевна / С.-Петербург: НИИЭМ РАМН. 1994. - 21 с.

30. Руковичкин, Д.В. Клинико-генотипический полиморфизм муковисцмдоза среди населения Краснодарского края : дисс. канд. . мед. наук : 03.00.15 / Руковичкин Дмитрий Васильевич. Краснодар, 2007. - 27 с.

31. Стекольников, А.А. Геногеографическая изменчивость Montivagum dihumerale и видообразование у клещей-краснотелок / А.А. Стекольников // Паразитология. 2006. - Т. 40, № 1. - С. 26-46.

32. Тимковская, Е.Е. Анализ частот мутаций C282Y и H63D в гене HFE1 в некоторых популяциях европейской части России / Е.Е. Тимковская, Н.В. Петрова, Г.И. Ельчинова и др. // Медицинская генетика. -2006. Т. 5, № 5 (47). - С. 32-38.

33. Хусаинова, Р.И. Скрининг Cys282Tyr и His63Asp в гене гемохроматоза у народов Волго-Уральского региона и Республики Саха (Якутия) / Р.И. Хусаинова, С.А. Федорова, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. -2003.-Т. 2,№5.-С. 207-211.

34. Хуснутдинова, Э.К. Популяционно-генетическая структура чуваешй (по данным о восьми ДНК-локусах ядерного генома) / Э.К. Хуснутдинова, Т.В. Викторова, B.JI. Ахметова и др. // Генетика. 2003. - Т. 39, № 11. - С. 15501563.

35. Abdul Wahab, A. Heterogeneity of the cystic fibrosis phenotype in a large kindred family in Qatar with cystic fibrosis mutation (11234V) / A. Abdul Wahab, G. Al Thani, S.T. Dawod et al. // J. Trop. Paediatr. 2001. - V. 47. - P. 110-112.

36. Abramowicz, M.J. Fetal bowel hyperechogenicity may indicate mild atypical cystic fibrosis: a case associated with a complex CFTR allele / M.J. Abramowicz, B. Dessars, C. Sevevs et al. // J. Ved. Genet. 2000. - V. 37. - E. 15.

37. Ahmed, N. Molecular consequences of cystic fibrosis transmembrane regulator (CFTR) gene mutations in the exocrine pancreas / N. Ahmed, M. Corey, G. Forstner et al. // Gut. 2003. - V. 52. - P. 1152-1164.

38. Akar, N. Endothelial nitric oxide synthase intron 4, 27-bp repeat polymorphism in Turkish patients with deep vein thrombosis and cerebrovascular accidents / N. Akar, E. Akar, S. Cin et al. // Thrombosis Res. 1999. - V. 94. - P. 63-64.

39. Alper, O.M. Detection of the novel CFTR mutations in Taiwanese cystic fibrosis patients / O.M. Alper, S.C. Shu, M.H. Lee et al. // J. Formos Med. Assoc. 2003. -V. 102, No. 5.-P. 287-291.

40. Amaral, M.D. Processing of CFTR: Traversing the cellular maze- how much CFTR needs to go through to avoid cystic fibrosis? / M.D. Amaral // Pediatr. Pulmonol. 2005. - V. 39. - P. 479-491.

41. Andersen, D.H. Cystic fibrosis of the pancreas / D.H. Andersen // J. Chron. Dis. -1958.-No. 7.-P. 58.

42. Ashavaid, T.F. Molecular diagnosis of cystic fibrosis in Indian patients a preliminary report / T.F. Ashavaid, A.J. Dherai, A.A. Kondkar et al. // J. Assoc. Physicians India. -2003. -V. 51. - P. 345-348.

43. Ashavaid, T.F. Application of multiplex ARMS and SSCP/HD analysis in molecular diagnosis of cystic fibrosis in Indian patients / T.F. Ashavaid, A.A. Kondkar, A.J. Dherai et al. // Mol. Diagn. 2005. - V. 9, No. 2. - P. 59-66.

44. Assael, B.M. Epidemiology and survival analysis of cystic fibrosis in an area of intense neonatal screening over 30 years / B.M. Assael, C. Castellani, M. Barao Ocampo et al. // Am. J. Epidemiol. 2002. - V. 156. - P. 397-401.

45. Banjar, H. Geographic distribution of cystic fibrosis transmembrane regulator gene mutations in Saudi Arabia / H. Banjar, M. Kambouris, B.F. Meyer et al. // Ann. Trap. Paediatr. 1999. - V.l 9. - P. 69-73.

46. Bernig ,T. Sequence analysis of the mannose-binding lectin (MBL2) gene reveals a high degree of heterozygosity with evidence of selection / T. Bernig, J.G. Taylor, C.B. Foster et al. // Genes Immun. 2004. - V. 5, No. 6. - P. 461-476.

47. Bernig, T. An analysis variation across the MBL2 locus in Dutch Caucasians indicates that 3' haplotypes could modify circulating levels of mannose-binding lectin / T. Bernig, W. Breunis, N. Brouwer et al. // Hum.Genet. 2005. - V. 118 (3-4).-P. 404-415.

48. Beutler, E. Mutation analysis in hereditary hemochromatosis / E. Beutler, T. Gelbart, C. West et al. // Blood Cells, Molecules, and Diseases. 1996. - V. 31. -P. 187-194.

49. Blackman, S.M. Relative contribution of genetic and nongenetic modifiers to intestinal obstruction in cystic finrosis / S.M. Blackman, R. Deering-Brose, R. McWilliams et al. // Gastroenterology. 2006. - V. 131, No. 4. - P. 1030-1039.

50. Bobadilla, J.L. Cystic fibrosis: a worldwide analysis of CFTR mutations -correlation with incidence data and application to screening / J.L. Bobadilla , M. Macek Jr., J.P. Fine, P.M. Farrell // Hum. Mutat. 2002. - V. 19. - P. 575-606.

51. Boldt, A.B. Diversity of the MBL2 gene in various Brasilian populations and the case of selection at the mannose-binding lectin locus / A.B. Boldt, L. Culpi, L.T. Tsuneto et al. // Hum. Immunol. 2006. - V. 67, No. 9. - P. 722-734.

52. Bombieri, С. Frequency of large CFTR gene rearrangements in Italian CF patients / C. Bombieri, A. Bonizzato, C.Castellani et al. // Eur. J. Hum. Genet. -2005. V. 13, No. 5. - P. 687-689.

53. Boyle, M.P. Strategies for identifying modifier genes in cystic fibrosis / M.P. Boyle // Proc. Am. Thorac. Soc. 2007. - V. 4. - P. 52-57.

54. Brandt, N.J. Screening for carriers of cystic fibrosis. Result of a pilot study among pregnant women / N J. Brandt, M. Schwartz, F. Skovby // Ugeskr. Laeger. Article in Danish. 1994. - V. 156, (25). - P. 3751-3757.

55. Brissot, P. Intestinal absorption of iron in HFE-1 hemochromatosis: local or systemic process? Review / P. Brissot, M.B. Troadec, O. Loreal // Journal of Hepatology. 2004. -V. 4. - P. 702-709.

56. Brock, D.J. The incidence of cystic fibrosis in Scotland calculated from heterozygote frequencies / D.J. Brock, A. Gilfillan, S. Holloway // Clin. Genet. -1998.- V. 53, No. 1.- P. 47-49.

57. Bronsfeld, I. Chloride conducdance and genetic background modulate the cystic fibrosis phenotype of AF508 homozygous twins and siblings / I. Bronsfeld, F. Mekus, J. Bijman et al. // J. Clin. Invest. -2001.-V. 108, No. 11.-P. 1705-1715.

58. Brouillard, F. NF-kappa В mediates up-regulation of CFTR gene expression in Calu-3 cells by interleukin-lbeta / F. Brouillard, M. Bouthier, T. Leclerc et al. // J. Biol. Chem.- 2001. V. 276, No. 12. - P. 9486-9491.

59. Brown, R. K. Pulmonary dysfunction in cystic fibrosis is associated with oxidative stress / R.K. Brown, H. Wyatt, J.F. Price, F.J. Kelly // Eur. Respir. J. -1996.-V. 9.-P. 334-339.

60. Bucci, M. Endothelial nitric oxide synthase activation is critical for vascular leakage during acute inflammation in vivo / M. Bucci, F. Roviezzo, I. Posadas et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - V. 102, No. 3. - P. 904-8.

61. Buranawuti, К. Variants in mannose-binding lectin and tumor necrosis factor {alpha} affect survival in cystic fibrosis / K. Buranawuti, M.P. Boyle, S. Cheng et al. // J. Med .Genet. 2007. - V. 44, No. 3. - P. 209-214.

62. Burke, W. Variable severity of pulmonary disease in adults with identical cystic fibrosis mutations / W. Burke, M.L. Aitken, S.H. Chen et al. // Chest. 1992. - V. 102.-P. 506-509.

63. Burt, M.J. The significance of haemochromatosis gene mutations in the general population: implications for screening / M.J. Burt, P.M. George, J.D. Upton et al. // Gut. 1998. - V. 43, No. 6. - P. 830-836.

64. Cabello, G.M. The 3120+1G—>A splicing mutation in CFTR in common in Brazilian cystic fibrosis patients / G.M. Cabello, E.H.Jr.J.L. Cabello, O. Fernande, A. Harris // Hum. Biol. 2001. - V. 73, No. 3. - P. 403-409.

65. Cantlay, A.M. Heterogeneous expression and polymorphic genotype of glutathione S-transferases in human lung / A.M. Cantlay, C.A. Smith, W.A. Wallace, et al. // Thorax. 1994. - V. 49, No. 10. - P. 1010-1014.

66. Cardoso, C.S. Co-selection of the H63D mutation and the HLA-A29 allele: a new paradigm of linkage disequilibrium? / C.S. Cardoso, H. Alves, M. Mascarenhas et al. // Immunogenetics. 2002. - V. 53, No. 12. - P. 1002-8.

67. Castellani, C. Cystic fibrosis carriers have higher neonatal immunoreactive trypsinogen values than non-carriers / C. Castellani, L. Picci, M. Scarpa et al. // Am. J. Med. Genet. A.-2005.-V. 135, No. 2.-P. 142-144.

68. Castellani, C. Consensus on the use and interpretation of cystic fibrosis mutation analysis in clinical practice / C. Castellani, H. Cuppens, M. Macek Jr. et al. // J. Cyst. Fibr. 2008. - V. 8. - P. 179-196.

69. Chen, H.J. Cystic fibrosis with homozygous R553X mutation in a Taiwanese child / H.J. Chen, S.P. Lin, H.C. Lee et al. // J. Hum. Genet. 2005. - V.50, No. 12.-P. 674-678.

70. Chevalier-Porst, F. Identification and characterization of three large deletions and a deletion/polymorphism in the CFTR gene / F. Chevalier-Porst, G. Souche, D. Bozon // Hum. Genet. 2005. - V. 25. - P. 504.

71. Chiba-Falek, O. The molecular basis of disease variability among cystic fibrosis patients carrying the 3849+10kbC>T mutation / O. Chiba-Falek, E. Kerem, T. Shoshani et al. // Genomics. 1998. -V. 53. - P. 276-283.

72. Chiba-Falek, O. Variable levels of normal RNA in different organs carrying the slicing mutation 3849+10kbC>T / O. Chiba-Falek, R.B. Parad, E. Kerm, B. Kerem //Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999. -V. 159. - P. 1998-2002.

73. Chillon, M. Mutations in the cystic fibrosis gene in patients with congenital absence of the vas deferens / M. Chillon, T. Casals, B. Mercier, et al. // N. Engl. J. Med. 1995. - V. 332. - P. 1475-1480.

74. Chmiel, J.F. State of art: why do the lungs of patients with cystic fibrosis become infected and why can't they clear the infection? / J.F. Chmiel, P.B. Davis // Respir. Res.-2003.-V. 4.-P. 8.

75. Chou, J.L. Characterization of the promoter region of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene / J.L. Chou, R. Rozmahel, L.C. Tsui // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266, No. 36. - P. 24471-24476.

76. Chu, C.S. Variable deletion of exon 9 coding sequences in cystic fibrosis transmembrane conductance regulator mRNA transcripts in normal bronchialepithelium / C.S. Chu, B.S. Trapnell, JJJr. Murtagh et al. // EMBO J. 1991. -V. 10.-P. 1355-1363.

77. Chu, C.S. Genetic basis of variable exon 9 skipping in cystic fibrosis transmembrane conductance regulator mRNA / C.S. Chu, B.S. Trapnell,

78. Curristin et al. // Nature Genet. 1993. - V. 3. - P. 151 -156.

79. Clancy, J.P. Evidence that systemic gentamicin suppresses premature stop mutations in patients with cystic fibrosis / J.P. Clancy, Z. Bebok, F. Ruiz et al. // Am. J. Respir. Crit. Care. 2001. -V. 163. - P. 1683-1692.

80. Claustres, M. CFTR haplotypic variability for normal and mutants genes in cystic fibrosis families from southern France / M. Claustres, M. Desgeorges, Ph. Moine et al. //Hum. Genet. 1996. -V. 98. - P. 336-344.

81. Clausters, M. Spectrum of CFTR mutations in cystic fibrosis and in congenital absence of the vas deferens in France / M. Clausters, C. Guittard, D. Bozon et al. // Hum. Mutat. 2000. - V. 16. - P. 143-156.

82. Cohen, J.C. Pathophysiologic consequences following inhibition of a CFTR-dependent development cascade in the lung / J.C. Cohen, J.E. Larson // BMC Developmental Biology. 2005. - V. 5, No.2. - doi:10.1186/1471-213X-5-2.

83. CoIIazo, T. Frequency of delta-F508 mutation and XV2C/KM19 haplotypes in Cuban cystic fibrosis families / T. Collazo, C. Magarino, R. Chavez et al. // Hum. Hered. 1995. - V. 45. - P. 55-57.

84. Connelly, L. Macrophage endothelial nitric-oxide synthase autoregulates cellular activation and pro-inflammatory protein expression / L. Connelly, A.T.

85. Jacobs, M. Palacios-Callender et al. // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278, No. 29. - P. 26480-26487.

86. Correlation between genotype and phenotype in patients with cystic fibrosis / Cystic fibrosis genotype-phenotype consortium (CFGPC) // N. Engl. J. Med. -1993.-Vol. 329.-P. 1308.

87. Crossley, J. R. Dried-blood spot screening for cystic fibrosis in the newborn / J. R. Crossley, R. B. Elliott, P. A. Smith // Lancet. 1979. - i : 472.

88. Cuthbert, A.W. The genetic advantage hypothesis in cystic fibrosis heterozygotes: a murine study / A.W. Cuthbert, J. Halstead, R. Ratcliff et al. // J. Physiol. 1995. - V.482, Pt2. - P. 449-454.

89. Dankert-Roelse, J.E. Long term prognosis of patients with cystic fibrosis in relation to early detection by neonatal screening and treatment in a cystic fibrosis centre / J.E. Dankert-Roelse, G.J. te Meerman // Thorax. 1995. - V. 50. - P. 712-8.

90. Dankert-Roelse, J.E. Review of outcomes of neonatal screening for cystic fibrosis versus non-screening in Europe / J.E. Dankert-Roelse, M.E. Merelle // J. Pediatr. 2005. - V. 147 (3 Suppl.). - S15-20.

91. Davies, M.H. GSTM1 null polymorphism at the glutathione S-transferase Ml locus: phenotype and genotype studies in patients with primary biliary cirrhosis /

92. M.H. Davies, Е. Elias, S. Acharya et al. // Gut. 1993. - V. 34, No. 4. - P. 549553.

93. Davies, J. Differential binding of mannose-binding lectin to respiratory pathogens in cystic fibrosis / J. Davies, O. Neth, E. Alton et al. // Lancet. 2000. -V. 355 (9218).-P. 1885-1886.

94. Davies, J. Impaired pulmonary status in cystic fibrosis adults with two mutated MBL-2 alleles / J. Davies, M.W. Turner, N. Klein et al. // Eur. Respir. J. 2004. -V. 24.-P. 798-804.

95. Davis, P.B. Cystic fibrosis: state of the art / P.B. Davis, M. Drumm, W. Konstan // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996. - V. 154. - P. 1229-1256.

96. Dean, M. Approaches to localizing disease genes as applied cystic fibrosis / M. Dean, M.L. Drumm, C. Stewart et al. // Nuc. Ac. Res. 1990. - V. 18. - No. 2. -P. 345-350.

97. Demko, C.A. Stenotrophomonas maltophilia in cystic fibrosis: incidence and prevalence / C.A. Demko, R.C. Stern, C.F. Doershuk // Pediatr. Pulmonol. -1998. V. 25, No. 5. - P. 304-308.

98. Devaney, J. HFE Alleles in an Irish Cystic Fibrosis Population / J. Devaney, M. Maher, T. Smith et al. // Genetic Testing. 2003. - V. 7. - No. 2. - P. 155-158.

99. Dodge, J. Cystic fibrosis mortality and survival in the United Kingdom, 1947 to 2003 / J. Dodge, P.A. Lewis, M. Stanton et al. // Eur. Respir. J. 2007. - V. 29, No. 3.-P. 522-526.

100. Dorfman, R. Complex two-gene modulation of lung disease severity in children with cystic fibrosis / R. Dorfan, A. Sandford, C. Taylor et al. // J. Clin. Invest. -2008.-V. 118, No. 3.-P. 1040-1048.

101. Doring, G. Early Intervention and Prevention of Lung Disease in Cystic Fibrosis / G. Doring, N. Hoiby // Cyst. Fibros. 2004. - V. 3, No. 2. - P. 67-91.

102. Dork, T. Cystic fibrosis with three mutations in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene / T. Dork, U. Wulbrand, T. Richter et al. // Hum. Genet. 1991. - V. 87. - P. 441-446.

103. Dork, T. Characterization of a novel 21-kb deletion, CFTRdele2,3(21kb), in the CFTR gene: a cystic fibrosis mutation of Slavic origin common in Central and

104. East Europe / Т. Dork, M. Maeek Jr., F. Mekus et al. // Hum. Genet. 2000. - V. 106.-P. 259-268.

105. Dotsch, J. Airway nitric oxide in asthmatic children and patients with cystic fibrosis / J. Dotsch, S. Demirakca, H.G. Terbrack et al. // Eur. Respir. J. 1996. -V. 9, No. 12.-P. 2537-40.

106. Doull, I.J.M. Cystic fibrosis-related deaths in infancy and the effect of newborn screening / I.J.M. Doull, H.C. Ryley, P. Weller et al. // Pediatr. Pulmonol. 2001. -V. 31.-P. 363-366.

107. Drumm, M.L. Genetic modifiers of lung disease in cystic fibrosis / M.L. Drumm, M.W. Konstan, M.D. Schluchter et al. // N. Engl. J. Med. 2005. - V.6, 353(14).-P. 1443-53.

108. Dudding, T. Neonatal screening for cystic fibrosis / T. Dudding, B. Wilcken, B. Burgess, G. Turner // Lancet. 2000. - V. 356. - P. 1930.

109. Enattah, N.S. Evidence of still-ongoing convergence evolution of the lactase persistence T-13910 alleles in humans / N.S. Enattah, A. Trudeau, V. Pimenoff et al. // Am. J. Hum. Genet. 2007. - V. 81, No. 3. - P. 615-626.

110. Engracia, V. Expression of Class m Glutathione-S-Transferase in human liver and its association with hepatopathies / V. Engracia, M.M.B.S. Leite, R.C. Pagotto et al. //Am. J. of Med. Gen. -2003. V. 123 A. - P. 257-260.

111. Epaud, R. Mild cystic fibrosis revealed by persistent hyponatremia during the Freeh heat wave, associated with the S1455X C-terminus CFTR mutation / R. Epaud, E. Girodon, H. Corvol et al. // Clin. Genet. 2005. - V. 68, No. 6. - P. 552-553.

112. Eskandarani, H.A. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene mutations in Bahrain / H.A. Eskandarani // J. Trop. Haediatr. 2002. - V. 48. - P. 348-350.

113. Estivill, X. Geographic distribution and regional origin of 272 cystic fibrosis mutations in European populations. The Biomed CF Mutation Analysis Consortium / X. Estivill, C. Bancells, C. Ramos // Hum. Mutat. 1997. - V.10, No. 2.-P. 135-154.

114. Farber S. The relation of pancreatic achylato meconium ileus / S. Farber // J. Pediat. 1946. - No. 24. - P. 387-392.

115. Farinha, C.M. Most F508del-CFTR is targeted to degradation at an early folding checkpoint and independently of calnexin / C.M. Farinha, M. D. Amaral // Mol. Cell. Biol.-2005.- V.25.-No. 12.-P. 5242-5252.

116. Farrell, P.M. Sweat chloride concentrations in infants homozygous of heterozygous for F508del cystic fibrosis / P.M. Farrell, R.E. Koscik // Pediatrics. -1996.-V. 97.-P. 524-528.

117. Farrell, P.M. Prenatal screening for cystic fibrosis: Where are we now? / P.M. Farrell,N. Fost //J. Pediatr. -2002. V. 141.-P. 758-63.

118. Farrell, P.M. Evidence on improved outcomes with early diagnosis of cystic fibrosis through neonatal screening: enough is enough! / P.M. Farrell, FL . Lai, Z. Li et al. // J. Pediatr. 2005. - V. 147 (3 Suppl.). - S. 30-36.

119. Feldman, G.L. Prenatal diagnosis of cystic fibrosis by DNA amplification,detection of KM-19 polymorphism / G.L. Feldman, R. Williamson, A.L.'Beaudet, W.E. O'Brien // Lancet. 1988. - July 9. - V. 2 (8602) - P. 102.

120. Ferrari, M. Genotype phenotype correlation in cystic fibrosis patients / M. Ferrari, L. Cremonesi // Ann. Biol. Clin. (Paris). -1996. - V. 54, No. 6. - P. 235241.

121. Field, M. Toxigenic diarrheas, congenital diarrheas, and cystic fibrosis: disorders of intestinal ion transport / M. Field, C.E. Semrad // Annu. Rev. Phisiol. 1993. — V. 55.-P. 631-655.

122. Flamant, C. Glutathione-S-transferase Ml, M3, PI and T1 polymorphisms and severity of lung disease in children with cystic fibrosis / C. Flamant, A. Henrion-Caude, P. Y. Boelle et al. // Pharmacogenetics. 2004. - V. 14. - P. 295-301.

123. Fodinger, M. Low clinical penetrance of homozygosity for HFE C282Y: implications for genetic testing? / M. Fodinger, G. Sunder-Plassmann // Eur. J. Clin. Invest. 2003. -V. 33, No. 9. - P. 737-739.

124. Freedman, S.D. A membrane lipid imbalance plays a role in the phenotypic expression of cystic fibrosis in cftr(-/-) mice / S.D. Freedman, M.N. Katz, E.M. Parker et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999. - V. 96, No. 24. - P. 1399514000.

125. Friedman, K.J. Complex multigenic inheritance influences the development of severe liver disease in CF / K.J. Friedman, S.C. Ling, M. Macek Jr. et al. // In: Proceedings of the 15th North American Cystic Fibrosis Conference. Orlando, Fl.- 2001.

126. Frossard, P.M. Identification of cystic fibrosis mutations in Oman / P.M. Frossard, K.P. Dawson, S.J. Das et al. // Clin. Genet. 2000. - V. 57. - P. 235236.

127. Gabold, M. Association of variant alleles of mannose binding lectin with severity of pulmonary disease in cystic fibrosis: cohort study / M. Gabold, M. Guilloud-Bataille, J. Feingold et al. // В. M. J. 1999. -V. 319. - P. 1166-1167.

128. Gabold, M. The mannose binding lectin gene influences the severity of chronic liver disease in cystic fibrosis / M. Gabold, D. Hubert, M. Guilloud-Bataille et al. // J. Med. Genet. 2001. - V. 38. - P. 310-311.

129. Gabriel, S.E. Cystic fibrosis heterozygote resistance to holera toxin in the cystic fibrosis mouse model / S.E. Gabriel, K.N. Brigman, B.H. Koller et al. // Science. -1994.-V. 266.-P. 107-109.

130. Gaitskhoki, V.S. Linkage disequilibrium between cystic fibrosis mutations and polymorphic 4-bp repeat within CFTR gene / V.S. Gaitskhoki, O.V. Voronina, O.Y. Potapova et al. // Biochemical Medicine and Metabolic Biology. 1993. - V. 50.-P. 186-189.

131. Gan, K.H. A cystic fibrosis mutation associated with mild lung disease / K.H. Gan, HJ. Veeze, M.W. Van Den Ouweland et al. // N. Engl. J. Med. 1995. - V. 333.-P. 95-99.

132. Garred, P. Association of mannose-binding lectin gene heterogeneity with severity of lung disease and survival in cystic fibrosis / P. Garred, T. Pressler, H.

133. Madsen et al. // J. Clin. Invest. 1999. - V. 104, No. 4. - P. 431-437.

134. Garred, P. Mannose-binding lectin deficiency-revisited / P. Garred, F. Larsen, H.O. Madsen, C. Koch // Mol. Immunol. 2003. - V. 40. - P. 73-84.

135. Georges des, M. Cystic fibrosis in Lebanon: distribution of CFTR mutations among Arab communities / M. des Georges, A. Megarbane, C. Guittard et al. // Hum. Genet. 1997. - V. 100, No. 2. - P. 279-283.

136. Georges des, M. High heterogeneity of CFTR mutations and unexpected low incidence of cystic fibrosis in the Mediterranean France / M. des Georges, C. Guittard, J. Altieri et al. // J. Cyst. Fibros. 2004. - V. 3, No. 4. - P. 265-272.

137. Ghobadloo, S.M. GSTP1, GSTM1, and GSTT1 genetic polymorphisms in patients with cryptogenic liver cirrhosis / S.M. Ghobadloo, B. Yaghmaei, V. Bakayev et al. // J. Gastrointest. Surg. 2004. -V. 8, No. 4. - P. 423-427.

138. Ghobadloo, S.M. Polymorphisms of glutathione S-transferase Ml, Tl, and PI in patients with HBV-related liver cirrhosis, chronic hepatitis, and normal carriers / S.M.Ghobadloo, B. Yaghmaei, A. Allameh et al. // Clin. Biochem. 2006. - V.1.P. 46-49.

139. Girardet, A. Negative genetic neonatal screening for cystic fibrosis caused by compound heterozygosity for two large CFTR rearrangements / A. Girardet, C. Guittard, J.-P. Altieri et al. // Clin. Genet. 2007. - V. 72. - P. 374-377.

140. Glanzmann, R. Disporia entero-broncho-pancreatita, familaris / R. Glanzmann // Ann. Paediat. (Basel). 1946. -N. 169. - P. 289-337.

141. Goh, B.J. Nitric oxide synthase and heme oxygenase expressions in human liver cirrhosis / B.J. Goh, B.T. Tan, W.M. Hon et al. // World J. Gastroenterol. 2006. -V. 12,No. 4.-P. 588-594.

142. Goldman, A. The molecular basis of cystic fibrosis in South Africa / A. Goldman, R. Labrum, M. Claustres et al. // Clin. Genet. 2001. - V. 59. - P. 3741.

143. Gong, M.N. -308GA and TNFB polymorphisms in acute respiratory distress syndrome / M.N. Gong, W. Zhou, P.L. Williams et al. // Eur. Respir. J. 2005. -V.26.-P. 382-389.

144. Gracia de, J. Genotype-phenotype correlation for pulmonary function in cystic fibrosis / J. de Gracia, F. Mata, A. Alvarez et al. // Thorax 2005. - V.60. - P. 558-563.

145. Grasemann, H. Endothelial nitric oxide synthase variants in cystic fibrosis lung disease / H. Grasemann, K.S. Gravesande, R. Buscher et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2003. - V. 167. - P. 390-394.

146. Green, M.R. Early and late outcome of cystic fibrosis screening / M.R. Green, L.T. Weaver // Journal of the Royal Society of Medicine. 1994. - Suppl. - No. 21.-V. 87.-P. 5-10.

147. Gregg, R. Cystic fibrosis carrier frequency determined by newborn screening and by dF508 analysis of the general population / R. Gregg, B. Wilfond, A. Laxova et al. //Pediatric. Pulm. 1991. - V. 238, No. 55. - P. 189-202.

148. Gregg, R.G. Newborn screening for cystic fibrosis in Wisconsin: comparison of biochemical and molecular methods / R.G. Gregg, A. Simantel, P.M. Farrell et al. // Pediatrics. 1997. - V. 99, No. 6. - P. 819-824.

149. Grubb, B.R. Intestinal physiology and pathology in gene-targeted mouse-models of cystic fibrosis / B.R. Grubb, S.L. Gabriel // Am. J. Physiol. 1997. - V.273. G258-G266.

150. Hamosh, A. Comparison of the clinical manifestation of cystic fibrosis black and white patients / A. Hamosh, S.C. Fitz-Simmons, M. Macek, Jr. et al. // J. Pediatr.- 1998.-V. 132.-P. 255-259.

151. Hanson, E. HFE gene and hereditary hemochromatosis: a Huge review. Human Genome Epidemiology / E. Hanson, G. Imperatore, W. Burke // Am. J. Epidemiol. -2001.-V. 154, No. 3. P. 193-206.

152. Hardin, D.S. Mechanisms of insulin resistance in cystic fibrosis / D.S. Hardin, A. Leblanc, G. Marshall, D.K. Seilheimer // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. -2001.-V. 281, No. 5.-E. 1022-1028.

153. Hendry, J. Cystic fibrosis: inflammatory response to infection with Burkholderia cepacia and Pseudomonas aeruginosa / J. Hendry, J.S. Elborn, L. Nixon, et al. // Eur. respir. J. 1999. - V. 14. - P. 435-438.

154. Henrion-Caude, A. Liver disease in pediatric patients with cystic fibrosis is associated with glutathione S-transferase PI polymorphism / A. Henrion-Caude, C. Flamant, M. Roussey et al. // Hepatology. 2002. - V. 36, No. 4. - P. 913-917.

155. Highsmith, W.E. A novel mutation in the cystic fibrosis gene in patients with pulmonary disease but normal sweat chloride concentrations / W.E. Highsmith, L.H. Burch, Z. Zhou et al. //N. Engl. J. Med. 1994. - V. 331. - P. 974-980.

156. Hodson, M.E. Cystic Fibrosis / M.E. Hodson, M.G. Duncan // Arnold, a •; member of the Hodder Headline Group. London, UK. - 2000. - 477p.

157. Hollox, E.J. Lactase haplotype diversity in the Old World / E.J. Hollox, M. Poulter, M. Zvarik et al. // Am. J. Hum. Genet. 2001. - V. 68. - P. 160-172.

158. Huang, S.L. Tumor necrosis factor-alpha gene polymorphism in chronic bronchitis / S.L. Huang, C.H. Su, S.C. Chang // Am. J. Respir. Crit. Care Med. -1997.-V.156.-P. 1436-1439.

159. Hull, J. Contribution of genetic factors other than CFTR to disease severity in cystic fibrosis / J. Hull, A. H. Thomson // Thorax. 1998. - V. 53. - P. 10181021.

160. Hytonen, M. Cystic fibrosis gene mutations deltaF508 and 394delTT in patients with chronic sinusitis in Finland / M. Hytonen, M. Patjas, S.I. Vento et al. // Acta Otolaryngol.-2001.-V. 121,No. 8,- P. 945-947.

161. Imaizumi, Y. Incidence and mortality rates of cystic fibrosis in Japan // Y. Imaizumi // Am. J. Med. Genet. 1995. - V. 28; 58 (2). - P. 161-168.

162. Jenkins, R.G. Pulmonary gene therapy. Realistic hope for the future, or false dawn in the promised land? / R.G. Jenkins, R.J. McAnulty, S.L. Hart, G.J. Laurent // Monaldi. Arch. Chest. Dis. 2003. - V. 59, No. 1. - P. 17-24.

163. Jentsch, T.J. Chloride channel diseases resulting from impaired transepithelial transport or vesicular function / T.J. Jentsch, T. Maritzen, A.A. Zdebik // J. Clin. Invest. 2005. - V. 115. - P. 2039-2046.

164. Jorde, L.B. A test of the heterozygote-advantage hypothesis in cystic fibrosis carriers / L.B. Jorde, G.M. Lathrop // Am. J. Hum. Genet. 1988. - V. 42, No. 6. -P. 808-815.

165. Kabra, S.K. Clinical profile and frequency of delta F508 mutation in Indian children with cystic fibrosis / S.K. Kabra, M. Kabra, R. Lodha et al. // Indian Pediatr. 2003. - V. 40. - P. 612-619.

166. Kallianpur, A.R. Increased prevalence of the HFE C282Y hemochromatosis allele in women with breast cancer / A.R. Kallianpur, L.D. Hall, M. Yadav et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2004. - V. 13, No. 2. - P. 205-212.

167. Kalman, Y.M. Difference in frequencies of the cystic fibrosis alleles, delta F508 and W1282X, between carriers and patients / Y.M. Kalman, E. Kerem, A. Darvasi et al. // Eur. J. Hum. Genet. 1994. - V. 2, No. 2. - P. 77-82.

168. Kaplan, N.L. Age of the AF508 cystic fibrosis mutation / N. L. Kaplan, P. O. Lewis, B. S. Weir//Nat. Genet. 1994. -V. 8. - P. 216-218.

169. Kapoor, V. Carrier frequency of F508del mutation of cystic fibrosis in Indian population / V. Kapoor, S.S. Shastri, M. Kabra et al. // J. Cyst. Fibros. 2006. -V. 5, No. l.-P. 46-49.

170. Kerem, B.S. Identification of the cystic fibrosis gene: Genetic analysis / B.S. Kerem, J.M. Rommens, J.A. Buchanan et al. // Science. 1989. - V. 245. - P. 1073-1080.

171. Kerem, B.S. The molecular basis for disease variability in cystic fibrosis / B.S. Kerem, E. Kerem // Eur. J. Hum. Genet. 1996. - V. 4. - P. 65-73.

172. Kerem, E. The relation between genotype and phenotype in cystic fibrosis -analysis of the most common mutation (delta F508) / E. Kerem, M. Corey, B.S. Kerem et al. //N. Engl. J. Med. 1990. - V. 323. - P. 1517-1522.

173. Kerem, E. Pharmacologic therapy for stop mutations: how much CFTR activity is enough? / E. Kerem // Curr. Opin. Pulm. Med. 2004. - V. 10. - P. 547-552.

174. Kerem, E. Pharmacological induction of CFTR function in patients with cystic fibrosis: mutation specific therapy / E. Kerem // Pediatr. Pulmonol. 2005. - V. 40, No. 3.-P. 183-196.

175. Kerem, E. Mutation specific therapy in CF / E. Kerem // Paediatr. Respir. Rev. 2006. - V. 7. - Suppl.l. - S. 166-169.

176. Kiesewetter, S. A mutation in CFTR produces different phenotypes depending on chromosomal background / S. Kiesewetter, M. Macek Jr., C. Davis et al. // Nat. Genet. 1993. - V. 5. - P. 274-278.

177. Kim, Y.J. Association of TNF-alpha promoter polymorphisms with the clearance of hepatitis В virus infection / Y.J. Kim, H.-S. Lee, J.-H. Yoon et al. // Hum. Molec. Genet. 2003. - V. 12. - P. 2541-2546.

178. Kinnunen, S. Spectrum of mutations in CFTR in Finland: 18 years follow-up study and identification of two novel mutations / S. Kinnunen, S. Bonache, T. Casals et al. // J. Cyst. Fibr. 2005. - V. 4, No. 4. - P. 233-237.

179. Koch, C. Early Infection and Progression of Cystic Fibrosis Lung Disease / C. Koch // Pediatric. Pulmonology. 2002. - V. 34. - P. 232-236.

180. Kogan, I. CFTR directly mediates nucleotide-regulated glutathione flux / I. Kogan, M. Ramjeesingh, C. Li et al. // The EMBO J. 2003. - V. 22, No. 9. - P. 1981-1989.

181. Koh, J. Characterization of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator promoter region / J. Koh, T.J. Sferra, F.S. Collins // J. Biol. Chem. -1993. V. 268, No. 21. - P. 15912-15921.

182. Krawczak, M. Allelic association of the cystic fibrosis locus and DNA markers, XV-2c and KM19, in 55 German families / M. Krawczak, D.S. Konecki, J. Schmidtke et al.//- 1988.-V. 80, No. l.-P. 78-80.

183. Kristidis, P. Genetic determination of exocrine pancreatic function in cystic fibrosis / P. Kristidis, D. Bozon, M. Corey et al.// Am. J. Hum. Genet. 1992. - V. 50.-P. 1178-1184.

184. Kusemko, J. A. Screening, early neonatal diagnosis and prenatal diagnosis / J.A. Kusemko // Journal of the Royal Society of Medicine. 1986. - Suppl. -No. 12.-V. 79.-P. 2-5.

185. Lao, O. Spatial patterns of cystic fibrosis mutations spectra in European populations / O. Lao, A.M. Andres, E. Mateu et al. // Eur. J. Hum. Genet. 2003. -V. 11.-P. 385-394.

186. Larriba, S. Testicular CFTR splice variants in patients with congenital absence of vas deferens / S. Larriba, L. Bassas, J. Gimenez et al. // Hum. Mol. Genet. -1998.-V. 7.-P. 1739-1743.

187. Lee, J.H. A haplotype-based molecular analysis of CFTR mutations associated with respiratory and pancreatic diseases / J.H. Lee, J.H. Choi, W. Namkung et al. //Hum. Mol. Genet -2003. -V. 12. P. 2321-2332.

188. Lee, S.G. Analysis of mannose-lectin 2 (MBL2) genotype and the serum protein levels in the Korean population / S.G. Lee, J.S. Yum, H.M. Moon et al. // Mol. Immunol. 2005. - V. 42, No. 8. - P. 969-977.

189. Lee, Y.H. Meta-analysis of TNF-alpha promoter -308A/G polymorphism and SLE susceptibility / Y.H. Lee, J. . Harley, S. K. Nath // Europ. J. Hum. Genet. -2006.- V. 14.-P. 364-371.

190. Li, C. Lysophosphatic acid inhibits cholera toxin-induced secretory diarrhea through CFTR-dependent protein interactions / C. Li, K.S. Dandridge, A. Di et al. // J. Exp. Med. 2005. - V. 202, No. 7. - P. 975-986.

191. Loubieres, Y. Association between genetically determined pancreatic status and lung disease in adult cystic fibrosis patients / Y. Loubieres, D. Grenet, B. Simon-Bouyet al.//CHEST. 2002. - V. 121, No. l.-P. 73-80.

192. Lucotte, G. Geographic and ethnic distribution of the more frequent cystic fibrosis mutations in Europe show that a founder effect is apparent for several mutant alleles / G. Lucotte, S. Hazout // Hum. Biol. 1995. - V. 67. - No. 4. - P. 561-576.

193. Ma, Т. Thiazolidinone CFTR inhibitor identified by high-throughput screening blocks cholera toxin-induced intestinal fluid secretion / T. Ma, J.R. Thiagarajah, H. Yang et al.//J. Clin. Invest. 2002. - V. 110, No. 11.-P. 1651-1658.

194. Madsen, H.O. Different molecular events result in low protein levels of mannan-binding lectin on populations from Southeast Africa and South America / H.O. Madsen, M.L. Satz, B. Hogh et al. // J. Immunol. 1998. - V. 161. - P. 3169-3175.

195. Magnani, C. Informativity of intragenic microsatellites for carrier detection and prenatal diagnosis of cystic fibrosis in the Italian population / Magnani C, Cremonesi L., Belloni E. et al.// Clin.Genet. 1994. - V.45. -N.3. - P.135-139.

196. Mahadeva, R. Clinical outcome in relation to care in centres specialising in cystic fibrosis: cross sectional study / R. Mahadeva, K. Webb, R.C. Westerbeek et al. // B.M.J. 1998. - V. 316. - P. 1771-1775.

197. Мак, V. Higher proportion of intact exon 9 mRNA in nasal epithelium* compared with vas deferens / V. Мак, K.A. Jarvi, J. Zielenski et al. // Hum. Mol. Genet. 1997. - V. 6. - P. 2099-2107.

198. Martin, A.M. Population frequencies of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in immuno-modulatory genes / A.M. Martin, G. Athanasiadis, J.D. Greshok et al. // Hum. Hered. 2003. - V. 55, No. 4. - P. 171-178.

199. Martin, P.M. Expression and polarized localization of the hemochromatosis gene product HFE in retinal pigment epithelium / P.M. Martin, J.P. Gnana-Prakasam, P. Roon et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2006. - V. 47, No. 10. -P. 4238-4244.

200. Maselli, J.H. Risk factors for initial acquisition of Pseudomonas aeruginosa in children with cystic fibrosis identified by newborn screening / J.H. Maselli, M.K. Sontag, J.M. Norris et al. // Pediatr. Pulmonol. 2003, - V. 35. - P. 257-262.

201. Masotti, С. A functional SNP in the promoter region of TCOF1 is associated with reduced gene expression and YY1 DNA-protein interaction / C. Masotti, L.M. Armelin-Correa, A. Splendore et al. // Gene. 2005. - V. 359. - P. 44-52.

202. Massie, R.J. Newborn screening for cystic fibrosis in Victoria: 10 years' experience (1989-1998). / R.J. Massie, M. Olsen, J. Glazner et al. // Med. J. Aust. 2000. - V. 172. - P. 584-587.

203. Mastella, G. Neonatal screening for cystic fibrosis: long-term clinical balance / G. Mastella, L. Zanolla, C. Castellani et al. // Pancreatology. 2001. - V. 1, No. 5. -P. 531-537.

204. Mateu, E. Allele frequencies is a worldwild survey of a CA repeat in the first intron of the CFTR gene / E. Mateu, F. Calafell, B. Bonne-Tamir et al. // Hum. Hered. 1999. - V. 49. - P. 15-20.

205. Mateu, E. Worldwide genetic analysis of the CFTR region / E. Mateu, F. Calafell, O. Lao et al. // Am. J. Hum. Genet. 2001. - V. 68. - P. 103-117.

206. Mateu, E. Can a place of origin of the main cystic fibrosis mutations be identified? / E. Mateu, F. Calafell, M.D. Ramos et al. // Am. J. Hum. Genet. -2002.-V. 70.-P. 257-264.

207. Matthay, M.A. Alveolar epithelium. Role in lung fluid balance and acute lung injury / M.A. Matthay, L.Robriquet, X. Fang // Proc. Am. Thorac. Soc. 2005. -V.2.-P. 206-213.

208. Matthews, R.P. Characterization of the cAMP response element of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene promoter / R.P. Matthews, G.S. McKnight// J. Biol .Chem. 1996. -V. 271, No. 50. - P. 31869-31877.

209. McKay, K.O. The influence of newborn screening for cystic fibrosis on pulmonary outcomes in New South Wales / K.O. McKay, D.L. Waters, K.J. Gaskin // J. Pedatr. 2005. - V. 147 (3 Suppl.). - S. 47-50.

210. McKone, E.F. Effect of genotype on phenotype and mortality in cystic fibrosis: a retrospective cohort study / E.F. McKone, S.S. Emerson, K.L. Edwards, M.L. Aitken//Lancet.-2003.-V. 361 (9370).-P. 1671-1676.

211. Mehta, G. Confidential anonymous audit shows that neonatal CF screening saves lives in severe genotype CF / G. Mehta, M. Green, A. Mehta // J. Cystic. Fibrosis. 2001. - Suppl. - WS2.

212. Meindl, R.S. Hypothesis: a selective advantage for cystic fibrosis heterozygotes / R.S. Meindl // Am. J. Phys. Anthropol. 1987. - V. 74. - P. 39-45.

213. Mei-Zahav, M. The prevalence and clinical characteristic of cystic fibrosis in South Asian Canadian immigrants / M. Mei-Zahav, P. Durie, J. Ziellenski et al. // Arch. Dis. Child. 2005. - V. 90, No. 7. - P. 675-679.

214. Mekus, F. Categories of deltaF508 homozygous cystic fibrosis twin and sibling pairs with distinct phenotypic characteristics / F. Mekus, M. Ballmann, I. Bronsveld et al. // Twin Res. 2000. - V. 3, No. 4. - P. 277-293.

215. Mekus, F. Genes in the vicinity of CFTR modulate the cystic fibrosis phenotype in highly concordant or discordant F508del homozygous sib pairs / F. Mekus, U. Laabs, H. Veeze, B. Tummler // Hum. Genet. 2003. - V. 112, No. 1. - P. 1-11.

216. Merelle, M.E. Influence of neonatal screening and centralized treatment on long-term clinical outcome and survival of CF patients / M.E. Merelle, J.P. Schouten, J. Gerritsen, J.E. Dankert-Roelse // Eur. Respir. J. 2001. - V. 18. - P. 306-315.

217. Merelle, M.E. Early versus late diagnosis: psychological impact on parents of children with cystic fibrosis / M.E. Merelle, J. Huisman, A.A. van der Vecht et al.// Pediatrics. 2003. - V. 111. - P. 346-350.

218. Mira, J.-P. Association of TNF2, a TNF-alpha promoter polymorphism, with septic shock susceptibility and mortality: a multicenter study / J.-P. Mira, A. Cariou, F. Grail et al. // J.A.M.A. 1999. - V. 282. - P. 561-568.

219. Mishra, A. The relevance of sweat testing for the diagnosis of cystic fibrosis in the genomic era / A. Mishra, R. Greaves, J. Massie // Clin. Biochem.Rev. 2005. -V. 26. — P. 135-153.

220. Miyahara, K. Cloning and structural characterization of the human endothelial nitric-oxide-synthase gene / K. Miyahara, T. Kawamoto, K. Sase et al. // Eur. J. Biochem. 1994. - V. 223, No. 3. - P. 719-26.

221. Modiano, G. Cystic fibrosis and lactase persistence: a possible correlation / G. Modiano, B.M. Ciminelli, P. F. Pignatti // Eur. J. Hum. Genet. 2007. - V. 15 - P. 255-259.

222. Moffatt, M.F. Tumour necrosis factor haplotypes and asthma / M.F. Moffatt, W.O. Cookson // Hum. Mol. Genet. 1997. - V. 6, No. 4. - P. 551-554.

223. Moffett, S.P. Tumor necrosis factor-alpha polymorphism, born strength, and the risk of fracture in older women / S.P. Moffett, J.M. Zmuda, J.I. Oakley et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005. - V. 90, No. 6. - P. 3491-3497.

224. Mohammed, N.A. Expression of nitric oxide synthase isoforms in human liver cirrhosis / N.A. Mohammed, S. Abd El-Aleem, I. Appleton et al. // J. Pathol. -2003. V. 200, No. 5. - P. 647-655.

225. Moller-Kristensen, M. Deficiency of mannan-binding lectin greatly increases susceptibility to postburn infection with Pseudomonas aeruginosa / M. Moller-Kristensen, W.K. Eddie Ip, L. Shi et al. // J. Immunol. 2006. - V. 176. - P. 1769-1775.

226. Monti, L.D. Endothelial nitric oxide synthase polymorphisms are associated with type 2 diabetes and the insulin resistance syndrome / L.D. Monti, C.Barlassina, L. Citterio et al. // Diabetes. 2003. - V. 52, No. 5.- P. 1270-1275.

227. Morral, N. CA/GT microsatellite alleles within the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene are not generated by unequal crossingover / N. Morral, V. Nunes, T. Casals, X. Estivill // Genomics. 1991. -V. 10.-P. 692-698.

228. Morral, N. Dinucleotide (CA/GT) repeat polymorphism in intron 17B of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene / N. Morral, E. Girbau, J. Zielenski et al. // Hum. Genet. 1992. - V. 88. - P. 356.

229. Morral, N. Microsatellite haplotypes for cystic fibrosis: mutation frameworks and evolutionary tracers / N. Morral, V. Nunes, T. Casals et al. // Hum. Mol. Genet. 1993. - V. 2. -N. 7. -P.l 015-1022.

230. Morral, N. The origin of the major cystic fibrosis mutation (AF508) in European populations / N. Morral, J. Bertranpetit, X. Estivill et al. // Nat. Genet. -1994a.-V. 7.-P. 169-175.

231. Morral, N. Independent origins of cystic fibrosis mutations R334W, R347P, R1162X, and 3849+lOkbC—>T provide evidence of mutation recurrencein the CFTR gene / N. Morral, R. Llevadot, T. Casals et al. // Am. J. Hum. Genet. -1994b.-V. 55.-P. 890-898.

232. Moulin, D.S. A CA repeat in the first intron of the CFTR gene / D.S. Moulin, A.N. Smith, A. Harris // Hum. Hered. 1997. - V. 47. - P. 295-297.

233. Mukhopadhyay, S. Role of TNFalpha in pulmonary pathophysiology / S. Mukhopadhyay, J.R. Hoidal, Т.К. Mukherjee // Respir. Res. 2006. - V. 11., No. 7.-P. 125.

234. Murray, J. Screening for cystic fibrosis / J. Murray, H. Cuckle, G. Taylor et al. // Health Technol. Assess. 1999. - V. 3. - P. 1-104.

235. Nataraj, A.J. Single-strand conformation polymorphism and heteroduplex analysis for gel-based mutation detection / A.J. Nataraj, I. Olivos-Glander, N. Kusukawa et al. // Electrophoresis. 1999. - V. 20 - P. 1177-1185.

236. Nedwin, G.E. Human lymphotoxin and tumor necrosis factor genes: structure, homology and chromosomal localization / G.E. Nedwin, S.L. Naylor, A.Y. Sakaguchi et al. // Nuc. Ac. Res. 1985. - V. 13. - P. 6361-6373.

237. Neuman, M. Tumor necrosis factor-alpha and transforming growth factor-beta reflect severity of liver damage in primary biliary cirrhosis / M. Neuman, P.

238. Angulo, I. Malkiewicz et al. // J. Gastroenterol. Hepatol. 2002. - V. 17, No. 2. -P. 196-202.

239. Nicolae, D. Fine mapping and positional candidate studies identify HLA-G as an asthma susceptibility gene on chromosome 6p21 / D. Nicolae, N.J. Cox, L.A. Lester et al. // Am. J. Hum. Genet. 2005. - V. 76, No. 2. - P. 349-357.

240. Nissim-Rafinia, M. Cellular and viral splicing factors can modify the splicing pattern of CFTR transcripts carrying splicing mutations / M. Nissim-Rafinia, O. Chiba-Falek, G. Sharon et al. // Hum. Mol. Genet. 2000. - V. 9. - P. 1771-1778.

241. Nissim-Rafinia, M. Splicing regulation as a potential genetic modifier / M. Nissim-Rafinia, B. Kerem // Trends in Genet. 2002. - V. 18. - No. 3 - P. 123127.

242. Niwa, Y. Lymph otoxin-a polymorphisms and the risk of endometrial cancer in Japanese subjects / Y. Niwa, H. Ito, K. Matsuo et al. // Gynecol.Oncol. 2006. -V. 104, No. 3.-P. 586-590.

243. Ng, I.S.I. Methods for analysis of multiple cystic fibrosis mutations / I.S.I. Ng, R. Pace, M.V. Richard et al. // Hum. Genet. 1991. - V. 87, No. 5. - P. 613-617.

244. Norek, A. Genetic markers in the pathogenesis of osteopenia and osteoporosis in cystic fibrosis. / A. Norek, B. Romanowska-Pietrasiak, J. Bal // Med. Wieku Rozwoj. 2006. - V. 10, (1 Pt 2). - P. 275-287.

245. Northrup, H. Additional polymorphism for D7S8 linked to cystic fibrosis including detection by DNA amplification / H. Northrup, C. Rosenbloom, W.E. O'Brien, A.Z. Beaudet // Nuc. Ac. Res. 1989. - V. 17. - No. 4. - P. 1717.

246. Nuthall, H.N. A. Analysis of a DNase I hypersensitive site located -20.9 kb upstream of the CFTR gene / H.N. Nuthall, G. Vassaux, C. Huxley, A. Harris // Eur. J. Biochem.-1999a.-V. 266, No. 2. P. 431-43.

247. Nuthall, H.N. Analysis of DNase-I-hypersensitive sites at the 3' end of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene (CFTR) / H.N. Nuthall, D. S. Moulin, C. Huxley, A. Harris // Biochem. J. 1999b. - V. 341, (Pt3). - P. 601-11.

248. Ogino, S. Bayesian analysis and risk assessment in genetic counseling and testing / S. Ogino, R.B. Wilson // J. Mol. Diag. 2004a. - V. 6, No. 1. - P. 1-9.

249. Ogino, S. Bayesian analysis for cystic fibrosis risks in prenatal and carrier screening / S. Ogino, R.B. Wilson, B. Gold et al. // Genet. Med. 2004b. - V. 6, No. 5.-P. 439-449.

250. Ogino, S. Risk calculations for cystic fibrosis in neonatal screening by immunoreactive trypsinogen and CFTR mutation tests / S. Ogino, P. Flodman, R.B. Wilson et al. // Genet. Med. 2005. - V. 7, No. 5. - P. 317-327.

251. Olds, L.C. Lactase persistence DNA variant enhances lactase promoter activity in vitro: functional role as a cis regulatory element / L.C. Olds, E. Sibley // Hum. Mol. Genet. -2003. -V. 12. P. 2333-2340.

252. Ozaki, K. Functional SNPs in the lymphotoxin-alpha gene that are associated with susceptibility to myocardial infarction / K. Ozaki, Y. Ohnishi, A. Iida et al.// Nature Genet. 2002. - V. 32. - P. 650-654.

253. Padoan, R. Genetic and clinical features of false-negative infants in a neonatal screening programme for cystic fibrosis / R. Padoan, S. Genoni, E. Moretti et al. // Acta Paediatr. 2002. - V.91, No. 1. - P. 82-87.

254. Parad, R.B. Diagnostic dilemmas resulting from the immunoreactive trypsinogen/DNA cystic fibrosis newborn screening algorithm / R.B. Parad, A.M. Comeau // J. Pediatr. 2005. - V. 147, (3 Suppl.). - S. 78-82.

255. Park, K.S. Ncol restriction fragment length polymorphism at -308 of the tumor necrosis factor alpha (TNFA) promoter region in Korean / K.S.Park, M.Y. Kim, J.W. Мок // Jpn. J. Hum. Genet. 1997. - V. 42, No. 1. - P. 241-247.

256. Pastinen, T. Influence of human genome polymorphism on gene expression / T. Pastinen , B. Ge , T.J. Hudson // Hum. Mol. Genet. 2006. - V. 15, Spec. No 1. -R 9-16.

257. Patuzzo, C. Tumor Necrosis Factor Gene Complex in COPD and Disseminated. Bronchiectasis / C. Patuzzo, L.S. Gile, M. Zorzetto et al. // Chest. 2000. - V. 5, No. 117.-P. 1353-1358.

258. Peterlin, B. A hemochromatosis-causing mutation C282Y is a risk factor for proliferative diabetic retinopathy in Caucasians with type 2 diabetes / B. Peterlin, M. Globocnik Petrovic, J. Makuc et al. // J. Hum. Genet. 2003 - V. 48, No. 12. -P. 646-649.

259. Pier, G.B. Salmonella typhi uses CFTR to enter intestinal epithelial cells / G.B. Pier, M. Grout, T. Zaidi et al. // Nature. 1998. - V. 393. - P. 79-82.

260. Pirzada, O. Modifier genes and cystic fibrosis liver disease / O. Pirzada, C. Taylor // Hepatology. 2003. - V. 37, No.3. - P. 714.

261. Prokunina, L. A regulatory polymorphism in PDCD1 is associated with susceptibility to systemic lupus erythematosus in humans / L. Prokunina, C. Castillejo-Lopez, F. Oberg et al. // Nat. Genet. 2002. - V. 32, No. 4. - P. 666669.

262. Quinton, P.M. Human Genetics. What is good about cystic fibrosis? / P.M. Quinton // Curr. Biol. 1994. - V. 4. - P. 742-743.

263. Ratjen, F. Cystic Fibrosis / F. Ratjen, G. Doring // Lancet. 2003. - V. 361. -P. 681-689.

264. Rave-Harel, N. The molecular basis of splicing mutations in cystic fibrosis / N. Rave-Harel, E. Kerem, M. Nissim-Rafinia et al. // Am. J. Hum. Genet. 1997. -V. 60.-P. 87-94.

265. Reiss, J. Discrimination between recurrent mutation and identity by descent: application to point mutations in exon 11 of the cystic fibrosis (CFTR) gene / J. Reiss, D. N. Cooper, J. Bal et al. // Hum. Genet. 1990. - V. 47, No. 4. - P. 457461.

266. Riordan, J.R. Identification of the cystic fibrosis gene: Cloning and the characterization of complementary DNA / J.R. Riordan, J.M. Rommens, B. S. Kerem et al. // Science. 1989. - V. 245. - P. 1066-1073.

267. Rock, M.J. Newborn screening for cystic fibrosis in Wisconsin: nine-year experience with routine trypsinogen/DNA testing / M.J. Rock, G. Hoffman, R.H. Laessig et al. // J. Pediatr. 2005. - V. 147. (3 Suppl.). - S. 73-77.

268. Rohlfs, E.M. Is the hemochromatosis gene a modifier locus for cystic fibrosis? / E.M. Rohlfs, N.J. Shaheen, L.M. Silverman // Genet. Test. 1998. - V. 2, No. 1. -P. 85-88.

269. Roque, M. Population screening of F508del (DeltaF508), the most frequent mutation in the CFTR gene associated with cystic fibrosis in Argentina / M. Roque, C.P. Godoy, M. Castellanos et al. // Hum. Mutat. 2001. - V. 18. - P. 167.

270. Rosenbloom, C.L. DNA amplification for detection of the XV-2c polymorphism to cystic fibrosis / C.L. Rosenbloom, B.S. Kerem, J.M. Rommens et al. //Nuc. Ac. Res. 1989.-V. 17.-No. 17.-P. 7117.

271. Rosenfeld, M. Overview of published evidence on outcomes with early diagnosis from large US observational studies / M. Rosenfeld // J. Pediatr. 2005. -V. 147, (3 Suppl.). - S. 11-14.

272. Rosenstein, B.J. The diagnosis of cystic fibrosis: a consensus statement. Cystic Fibrosis Foundation Consensus Panel / B.J.Rosenstein, G.R. Cutting // J. Pediatr. -1998.-V. 132.-P. 589-595.

273. Rosenstein, B.J. Cystic fibrosis / B.J. Rosenstein, P.L. Zeitlin // Lancet. 1998. -V. 351.-P. 277-82.

274. Rowntree, R.K. The phenotypic consequences of CFTR mutations / R.K. Rowntree, A. Harris // Ann. Hum. Genet. 2003. - V. 67. - P. 471-485.

275. Russo, M.P. Analysis of linkage disequilibrium between different cystic fibrosis mutations and three intragenic microsatellites in the Italian population / M.P. Russo, G. Romeo, M. Devoto et al. // Flum. Mutat. 1995. - V. 5. - P. 23-27.

276. Ryley, H.C. Assay of serum immunoreactive trypsin in dried blood spots and the early detection of cystic fibrosis / H.C. Ryley, P.G. Robinson // J. Clin. Pathol. 1981. - V. 34, No. 8. - P. 906-910.

277. Sabeti, P.C. Detecting recent positive selection in the human genome from haplotype structure / P.C. Sabeti, D.E. Reich, J.M. Higgins et al. // Nature. 2002. -V.419.-P. 832-837.

278. Salvatore, F. Genotype-phenotype correlation in cystic fibrosis: The role of modifier genes / F. Salvatore, O. Scudiero, G. Castaldo // Am. J. Med. Genet.2002.-V. 111.-P. 88-95.

279. Sampietro, M. High prevalence of the His63Asp HFE mutation in Italian patients with porphyria cutanea tarda / M. Sampietro, A. Piperno, L. Lupica et al. // Hepatology. 1998. - V. 27. - No. 1. - P. 181-184.

280. Sanchez, M. Population screening for hemochromatosis: a study in 5370 Spanish blood donors / M. Sanchez, M. Villa, M. Ingelmo et al. // J. Hepatol.2003.-V. 38, (6)-P. 745-750.

281. Sant'Agnese di, P.A. Abnormal electrolyted composition of sweat in cystic fibrosis of the pancreas / P.A. di Sant'Agnese, R. Darling, G. Perera, E. Shea // Pediatrics.- 1953.-N. 12.-P. 549-551.

282. Schmidtke, J. Linkage relationships and allelic associations of the cystic fibrosis locus and four marker loci / J. Schmidtke, M. Krawczak, M. Schwartz et al. // Hum. Genet. 1987. -V. 76. - No. 4. - P. 337-343.

283. Schmitt-Grohe, S. TNF-alpha promoter polymorphism in relation to TNF-alpha production and clinical status in cystic fibrosis / S. Schmitt-Grohe, F. Stuber, M. Book et al. // Lung. 2006 - V. 184, No. 2. - P. 99-104.

284. Schroeder, S.A. Protection against bronchial asthma by CFTR delta F508 mutation: a heterozygote advantage in cystic fibrosis / S.A. Schroeder, D.M. Gaugham, M. Swift // Nat. Med. 1995. - V. 1. - P. 703-705.

285. Scotet, V. Neonatal screening for cystic fibrosis in Brittany, France: assessment of 10 years' experience and impact on prenatal diagnosis / V. Scotet, M. de Braekeleer, M. Roussey et al. // Lancet. 2000. - V. 356. - P. 789-94.

286. Scotet, V. Prevalence of CFTR mutations in hypertyisimaemia detected through neonetal screening for cystic fibrosis / V. Scotet, M. de Braekeleer, M.P. Audrezet et al. // Clin. Genet. 2001. - V. 59, No. 1. - P. 42-47.

287. Scotet, V. Prenatal detection of cystic fibrosis by ultrasonograthy: a retrospective study of more than 346000 pregnancies / V. Scotet, M. de Braekeleer, M.P. Audrezet et al. // J. Med. Genet. 2002. - V. 39. - P. 443-448.

288. Scotet, V. Impact of public health strategies on the birth prevalence of cystic fibrosis in Brittany, France / V. Scotet, M.P. Audrezet, M. Roussey et al. // Hum. Genet. 2003. - V. 113. - P. 280-285.

289. Sekut, L. AntiTNF-alpha agents in the treatment of inflammation / L. Sekut, K. Connolly // Expert. Opin. Investig. Drugs. 1998. -V. 7, No. 11. - P. 1825-1839.

290. Sereth, H. Extented haplotype analysis of cystic fibrosis mutations and its implications for the selective advantage hypothesis / H. Sereth, T. Shoshni, N. Bashan, B. S. Kerem // Hum. Genet. 1993. - V. 92, No. 3. - P. 289-295.

291. Sermet-Gaudelus, I. In vitro prediction of stop-codon suppression by intravenous gentamicin in patients with cystic fibrosis: a pilot study / I. Sermet-Gaudelus, M. Renouil, A. Fajac et al. // B.M.C. Med. 2007. - V.5. P. 5.

292. Shin, H.D. Association of tumor necrosis factor polymorphisms with asthma and serum total IgE / H.D. Shin, B.L. Park, L.H. Kim et al. // Hum.Molec.Genet. -2004.-V.13: 397-403.

293. Simon-Bouy, B. Hyperechonenic fetal bowel: a large French collaborative study of 682 cases / B. Simon-Bouy, V. Satre, C. Ferec et al. // Am. J. Med. Genet. -2003. V. 121, No. 3. - P. 209-213.

294. Sims, E.J. Newborn screening for cystic fibrosis is associated with reduced treatment intensity / E.J. Sims, J. McCormick, G. Mehta et al. // J. Pediatr. 2005. -V. 147, No. 3.-P. 306-11.

295. Slatkin, M. The use of intraallelic variability for testing neutrality and estimating population growth rate / M. Slatkin, G. Bertorello // Genetics. 2001. -V. 158.-P. 865-874.

296. Sontag, M.K. Two-tiered immunoreactive trypsinogen-based newborn screening for cystic fibrosis in Colorado: screening efficacy and diagnostic outcomes / M.K. Sontag, K.B. Hammond, J. Zeilenski et al. // J. Pediatr. 2005. -V. 147, 3 Suppl. - S. 83-88.

297. Southern, K.W. Neonatal cystic fibrosis screening worldwide / K.W. Southern, J. M. Littlewood // Paediatric Respiratory Reviews. 2003. - V. 4, No. 4. - P. 299-305.

298. Southern, K.W. A survey of newborn screening of cystic fibrosis in Europe / K.W. Southern, A. Munck, R. Pollitt et al, on behalf of the ECFS CF Neonatal Screening Working Group // J. Cyst. Fibros. 2007. - V. 6, No. 1. - P. 57-65.

299. Strange, R.C. The human glutathione S-transferases: studies on the tissue distribution and genetic variation of the GST1, GST2 and GST3 isozymes / R.C. Strange, C.G. Faulder, В .A. Davis et al. // Ann. Hum. Genet. 1984. - V. 48. - P. 11-20.

300. Streit, C. CFTR gene: molecular analysis in patients from South Brazil / C. Streit, A.C. Burlamaque-Neto, F. de Abreu e Silva et al. // Mol. Genet. Metab. -2003. V. 78, No. 4. - P. 259-264.

301. Suwanjutha, S. Case report of a Thai male cystic fibrosis patient with the 1898+1G—>T splicing mutation in the CFTR gene: A review of East Asian cases / S. Suwanjutha, N.N. Huang, D. Wattanasirichaigoon et al. // Hum. Genet. 1998. -V. 12. - P. 361.

302. Tanus-Santos, J.E. Effects of ethnicity on the distribution of clinically relevant endothelial nitric oxide variants / J.E. Tanus-Santos, M. Desai, D.A. Flockhart // Pharmacogenetics. -2001. V. 11, No. 8. - P. 719-25.

303. The molecular genetic epidemiology of cystic fibrosis. Report of a Joint Meeting of WHOACF(M)A/ECFTN / World Health Organization (WHO) // Stockholm, Sweden, 3 June 2000. Human Genetics Programme. - Geneva, 2001. - 7 p.

304. The molecular genetic epidemiology of cystic fibrosis. Report of a Joint Meeting of WHO/ECFTN/ICF(M)/ECFS / World Health Organization (WHO) // Genoa, Italy, 19 June 2002. Human Genetics Programme. - 2004. - 24 p.

305. Thiagarajah, J.R. Prevention of toxin-induced intestinal ion and fluid secretion by a small-molecule CFTR inhibitor / J. R. Thiagarajah, T. Broadbent, E. Hsieh, A. S. Verkman // Gastroenterology. 2004. - V. 126, No. 2. - P. 511-519.

306. Thio, C.L. Mannose binding lectin genotypes influence recovery from hepatitis В virus infection / C.L. Thio, T. Mosbruger, J. Astemborski et al. // J. Virol. -2005.-V. 79,No.l 4.-P. 9192-9196.

307. Tolstova, V.D. First results of Newborn screening program for CF in Russia / V.D. Tolstova, N.Y. Kashirskaya, N.I. Kapranov, A.A. Khodunova, E.V. Denisenkova, E.V. Smazhil // J. Cyst. Fibr. 2008. - |ГТз.

308. Tomatsu, S. Contribution of the H63D mutation in HFE to murine hereditary hemochromatosis / S. Tomatsu, K.O. Orii, R.E. Fleming et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2003. V. 100, No. 26. - P. 15788-93.

309. Tsui, L.C. The spectrum of cystic fibrosis mutation / L.C. Tsui // Trends Genet. 1992. - V. 8.-P. 392-8.

310. Tsukada, T. Evidence of association of the eNOS gene polymorphism with plasma NO metabolite levels in humans / T. Tsukada, K. Yokoyama, T. Arai et al. //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V. 245, No. 1. - P. 190-193.

311. Turner, M.W. Mannose-binding lectin (MBL) in health and disease / M.W. Turner//Immunobiology. 1998. -V. 199. - P. 327-339.

312. Vankeerberghen, A. Charaterization of mutations located in exon 18 of the CFTR gene / A. Vankeerberghen, L. Wei, H. Teng et al. // FEBS Lett. 1998b. -V. 437.-P. 1-4.

313. Vanscoy, L.L. Heritability of lung disease severity in cystic flbfosis / L.L. Vanscoy, S.M. Blackman, J.M. Collaco et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. -2007. doi:10.1164/rccm.200608-l 1640C.

314. Verdu, P. Evolutionary insights into the high worldwide prevalence of MBL2 deficiency alleles / P. Verdu, L. B. Barreiro, E. Patin et al. // Hum. Mol. Genet. -2006.-V. 15, No, 17.-P. 2650-2658.

315. Verlingue, C. Complete screening of the coding sequence of the CFTR gene in a sample of CF patients from Russia: Identification of three novel mutations / C. Verlingue, N.I. Kapranov, B. Mercier et al. // Hum. Genet. 1995. - V. 5. - P. 205-209.

316. Vosse van de, E. Susceptibility to typhoid fever is associated with a polymorphism in the cystic fibrosis trans membrane conductance regulator (CFTR) / E. van de Vosse, S. Ali, A. W. Visser et al. // Hum. Genet. 2005. - V. 118,No. 1.- P. 138-140.

317. Wang, S.S. The impact of early cystic fibrosis diagnosis on pulmonary function in children / S.S. Wang, L.A. O'Leary, S.C. FitzSimmons, M.J. Khoury // J. Pediatr. 2002. - V. 141.-P. 804-810.

318. Warwick, W.J. Letter to the Editor / W.J. Warwick, J. Braverman // Chronic Respiratory Diseases.-2007. V. 4.-P. 51-51.

319. Wei, L. Suppressive interactions between mutations located in the two nucleotide binding domains of CFTR / L. Wei, A. Vankeerberghen, M. Jaspers et al. // FEBS. 2000. - V. 473. - P. 149-153.

320. Wei, S. Cystic fibrosis testing among Arab-Americans / S. Wei, G. L. Feldman, K. G. Monaghan // Genet. Med. 2006. - V. 8, No. 4. - P. 255-258.

321. Weijers-Poppelaars, F.A. Preconception cystic fibrosis screening: costs and consequences / F.A. Weijers-Poppelaars, M.F. Wildhagen, L. Henneman et al. // Genet. Test. 2005. - V.9, No. 2. - P. 158-166.

322. Welsh, M.J. Molecular mechanisms of CFTR chloride channel dysfunction in cystic fibrosis / M.J. Welsh, A.E. Smith // Cell. 1993. - V.73. - P.1252-1254.

323. Westwood, T. Diagnosing cystic fibrosis in South Africa / T. Westwood, B. Henderson, M. Ramsay // S. Afr. Med. J. 2006b. - V. 96, No. 4. - P. 304-306.

324. Wiertsema, S.P. Functional polymorphisms in the mamman-binding lectin 2 gene: effect on MBL levels and otitis media / S.P. Wiertsema, B.L. Herpers, R. H. Veenhoven et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 2006. - V. 117, No. 6. - P. 13441350.

325. Wilcken, B. Evaluating outcomes of newborn screening programs / B. Wilcken // Southeast Asian J. Trop. Med. Public. Health. 2003. - V. 34. - Suppl. 3. - P. 13-18.

326. Wilfond, B. S. Policy issues for expanding newborn screening programs: The cystic fibrosis newborn screening on cystic fibrosis testing in Victoria, Australia / B.S. Wilfond, S.E. Gollust // J. Pediatr. 2005. - V. 146. - P. 668-674.

327. Williams, С. Same-day, first-trimester antenatal diagnosis for cystic fibrosis by gene amplification / C. Williams, B. Williamson, C. Coutelle // Lancet. 1988. -July 9; 2(8602) -P.102-103.

328. Wilson, A.G. Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation / A.G. Wilson, J.A. Symons, T.L. McDowell et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1997. V.l. - No. 94 (7). - P. 3195-3199.

329. Witt, H. Chronic pancreatitis and cystic fibrosis / H. Witt // Gut. 2003. - Suppl. 2. - P. 1131-1141.

330. Witte, J.S. Relation between tumour necrosis factor polymorphism TNF-alpha-308 and risk of asthma / J.S. Witte, L.J. Palmer, R.D. O'Connor et al. // Europ. J. Hum. Genet. 2002. - V. 10. - P. 82-85.

331. Wiuf, C. Do delta F508 heterozygotes have a selective advantage? / C. Wiuf // Genet. Res. 2001. - V. 78, No. 1. - P. 41-47.

332. Wright S.W. Genetic studies on cystic fibrosis in Hawaii / S.W. Wright, N.E. Morton // Am. J. Hum. Genet. 1968. - V. 20. - P. 157-169.

333. Yanamandra, K. Novel allele of the endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism in Caucasian asthmatics / K. Yanamandra, P.B. Boggs, T.F. Thurmon et al. // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2005. - V. 335. - P. 545 -549.

334. Yarden, J. Polymorphism in the mannose binding lectin gene affects the cystic fibrosis pulmonary phenotype / J. Yarden, D. Radojkovic, K. de Boeck et al. // J. Med. Genet. 2004. - V. 41. - P. 629-633.

335. Yarden, J. Association of tumour necrosis factor alpha variants with the CF pulmonary phenotype / J. Yarden, D. Radojkovic, K. de Boeck et al. // Thorax. -2005. V. 60, No. 4. - P. 320-325.

336. Yoshimura, K. The cystic fibrosis gene has a "housekeeping"-type promoter and is expressed at low levels in cells of epithelial origin / K. Yoshimura, H. Nakamura, B.C. Trapnell et al. // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266, No. 14. - P. 9140-9144.

337. Zhana, X. Expression of endothelial nitric oxide synthase in ciliated epithelia of rats / X. Zhana, D. Lia, R. A. Johnsa // J. Histochem. Cytochem. 2003. - V. 51. -P. 81-87.

338. Zhang, D.L. Association of two polymorphisms of tumor necrosis factor gene with biliary pancreatitis / D.L. Zhang, J.S. Li, Z.W. Jiang et al. // World J. Gastroenterol. 2003. - V. 4. - P. 824-828.

339. Zhang, Z. Comparison of the use of body mass index percentiles and percentage of ideal body weight to screen for malnutrition in children with cystic fibrosis / Z. Zhang, H. Lay // Am. J. Clin. Nutr. 2004. - V. 80. - P. 982-91.

340. Zhao, Q. Association study of the endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms with essential hypertension in northern Han Chinese / Q. Zhao, S.Y. Su, S.F. Chen et al. // Chin. Med. J. (Engl). 2006. - V. 119, No. 13. - P. 1065-1071.

341. Zielenski, J. Genomic DNA sequence of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene / J. Zielenski, R. Roozmahel, D. Bozon et al. // Genomics. 1991b.-No. 10. - P. 214-228.

342. Zielenski, J. Cystic fibrosis: genotypic and phenotypic variations / J. Zielenski, L.C. Tsui // Annu. Rev. Genet. 1995. - V. 29. - P. 777-807.

343. Zielenski, J. Genotype and phenotype in cystic fibrosis / J. Zielenski // Respiration. 2000. - V. 67, No. 2. - P. 117-133.