Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярная и функциональная гетерогенность фракции АТФ-6 Т-активина

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Санина, Ирина Васильевна

Стр.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Обзор литературы.

1. Методы выделения и очистки тимических пептидных факторов.

2. Физико-химическая характеристика тимических факторов.

3. Биологическая активность тимических факторов и механизм действия

4. Количество и взаимосвязь тимических факторов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярная и функциональная гетерогенность фракции АТФ-6 Т-активина"

Актуальность темы определяется тем, что в последние годы интенсивно развиваются биохимические исследования низкомолекулярных белков и пептидов в связи с обнаружением их исключительной роли в регуляции биологических процессов [10, 49]. Среди пептидов важное место занимают гормоны и гуморальные факторы, многие из которых являются медиаторами реакций, играющих ключевую роль в функционировании организма и согласовании функций клеточных популяций на разных уровнях интеграции []52, 54, 56, 67]]. К группе биологически активных низкомолекулярных белков относятся и тимические гуморальные факторы [3, 10, 52, 95, 122, 157, 191, 212]. Они представляют собой регуляторные пептиды первой ступени, так как непосредственно влияют на иммунную систему [1С)].

Тимус играет центральную роль в развитии, становлении и функционировании лимфоидной системы и поддержании иммунного гомеостаза [122, 169, 191] . Доказано, что свое влияние он осуществляет посредством низкамолекулярных пептидных факторов, контролирующих диффе-ренцировку предшественников Т-клеток и регулирующих работу зрелой популяции клеток иммунной системы. Важную роль пептидов тимуса подтвердили результаты экспериментов на животных, лишенных тимуса, а также наблюдения, сделанные на людях, страдающих первичными и вторичными иммунодефицитными состояниями, у которых синтез этих веществ нарушен [41, 42, 191]. Необходимость лечения таких заболеваний поставила на повестку дня вопрос об изыскании средств и способов целенаправленной компенсации нарушенных функций [53, 165].

В связи с этим одной из основных задач современной биохимии и молекулярной иммунологии является поиск иммунологически активных веществ, в том числе и пептидов тимуса, участвующих в контроле функций иммунной системы. Выделение иммунорегуляторных пептидных факторов, всестороннее исследование их физико-химических и биологических свойств имеет большое значение как с теоретической, так и с практической точки зрения с целью использования их в качестве имму-номодулирующих соединений.

В области изучения пептидных тимических факторов имеется много нерешенных проблем, в том числе и вопрос о количестве синтезируемых тимусом факторов. Согласно одной точке зрения тимус синтезирует только один пептид или моногормон, который обусловливает биологическую активность всех известных тимических факторов и входит в состав каждого из них р-8, III]. Другая группа исследователей во главе с Ж.-Ф.Бахом, А.Гольдштейном, Г.Гольдштейном, считает, что в связи со сложностью и многообразием функций тимуса существует целый спектр пептидных гормоноподобных тимических факторов [[83, 139, 175]. От правильного подхода к решению этого вопроса зависит' подбор методов выделения пептидных факторов (фактора) и изучение их (его) биологических свойств. В теоретическом плане, решение вопроса о количестве и степени гетерогенности тимических факторов, дает возможность исследовать молекулярные механизмы становления иммунокомпе-тентных клеток, в практическом плане - позволяет вести целенаправленный поиск высокоспецифичных иммунорегуляторов для иммунокоррек-ции и дифференциальной диагностики иммунодефицитных состояний.

Наибольшую трудность в изучении пептидов тимуса составляет подбор методов их выделения, которые позволяют получить недеградированные, нативные молекулы факторов (фактора). В настоящее время имеется богатый арсенал биохимических методов выделения пептидов и от их подбора и сочетания зависит характер получаемого вещества. В том случае, если в процессе выделения тимических факторов (фактора) получено несколько различных веществ, следует провести сравнительный анализ их физико-химических и биологических свойств. Это позволяет уже на промежуточных этапах выделения факторов выявить биологически активные компоненты и в дальнейшем сосредоточить внимание на их исследовании. После получения иммунологически активных пептидоб тимуса в чистом виде становится возможным изучение их структуры.

Для выяснения физиологического действия выделенных пептидных тимических факторов разрабатываются методы тестирования их биологической активности. Характеристика биологических свойств фактора -один из наиболее ответственных этапов его изучения, так как без него нельзя решить вопрос о механизме действия и роли данного вещества в регуляции иммунных процессов, что в конечном счете отражается на его правильном клиническом использовании. Известны примеры выделения, очистки и структурной характеристики пептидов тимуса, которые после проверки биологических свойств в разных тест-системах оказались неактивными и были отнесены к разряду балластных. Это касается ряда пептидов тимозина, в частности^-тимозина [134, 175].

Работы по выделению и характеристике пептидных тимических факторов ведутся в СССР, США, Франции, ФРГ, Италии и других странах. Возможность применения пептидных тимических факторов с целью коррекции нарушений Т-клеточного звена иммунитета, сопровождающих им-мунодефицитные состояния и опухолевые заболевания, уже подтверждена некоторыми исследователями, начавшими их клиническое испытание [38, 70, 75, 76, 112, 165, 218].

В лаборатории молекулярной иммунологии НИИ ФХМ при 2 МОЛГМИ им.Н.И.Пирогова из тимуса телят выделен тимический фактор пептидной природы Т-активин [7, 40, 167]. Наиболее изученной является фракция АФТ-6 (активный фактор тимуса-6) Т-активина, которая в настоящее время проходит успешное клиническое испытание [б, 38, 39, 45]. Этот фактор гетерогенен по составу и обладает широким спектром биологических свойств [3, 4, 40]. До сих пор не выяснено, обусловлено ли биологическое действие фактора наличием одной молекулы, или оно обеспечивается разными молекулярными структурами в составе Т-активина. Также неизвестно, с чем связана молекулярная гетерогенность фракции АФТ-6 Т-активина: с функциональной неоднородностью, разнообразием свойств компонентов фактора, или же с другими причинами, например, с деградацией молекул в процессе выделения. Выяснение этих вопросов необходимо для понимания механизмов иммунорегулятор-ного действия Т-активина, а также для более широкого и целенаправленного использования этого препарата или отдельных его компонентов при иммунокоррекции.

Цель исследования заключалась в решении вопроса: существует ли взаимосвязь между молекулярной гетерогенностью фракции АФТ-б Т-активина и функциональным разнообразием пептидов, входящих в ее состав.

Для этого необходимо было решить следующие задачи.

Задачи исследования

1. Изучить степень молекулярной и функциональной гетерогенности фракции АФТ-б Т-активина.

2. Разработать подходы к выделению отдельных субфракций Т-активина .

3. Изучить некоторые физико-химические параметры фракции АФТ-б и субфракций Т-активина.

4. Исследовать биологическое действие фракции АФТ-6 и субфракций Т-активина в разных биологических, тестах.

Научная новизна результатов исследования заключается в том, что в работе впервые осуществлено фракционирование гетерогенного тимического пептидного фактора Т-активина и выделено 16 компонентов, входящих в состав фракции АФТ-6. Разработан способ выделения отдельных пептидных субфракций Т-активина, основанный на различии молекул по электрическому заряду и молекулярным массам. Получены новые данные о физико-химических свойствах Т-активина: определены изоэлектрические точки для шести и молекулярные массы для шестнадцати субфракций; подтверждена пептидная природа Т-активина и уточнена нижняя граница молекулярных масс фракции АФТ-6 Т-активина.

Впервые в трех биологических тестах, выявляющих разные уровни развития Т-клеток, показана функциональная гетерогенность фракции АФТ-6 Т-активина. Выяснено, что для осуществления определенных этапов созревания Т-лимфоцитов необходимы различные субфракции Т-активина, а для "запуска" самого раннего этапа, выявляемого в тесте индукции тьу-1 антигена, необходимо одновременное действие всего комплекса пептидных компонентов фракции АФТ-б.■

Выделено несколько субфракций Т-активина, превосходящих по эффективности исходную фракцию АФТ-б в 400-2000 раз. В составе АФТ-6 наряду с полифункциональными субфракциями (например А.1, С.1, Е.1) обнаружены компоненты, проявляющие активность только в одном тесте (например, В.2, С.З, Р.1) и неактивные субфракции (А.2, А.З).

Сделано заключение о том, что молекулярная гетерогенность фракции АФТ-6 Т-активина отражается в функциональном разнообразии пептидных компонентов, входящих в ее состав и различающихся по физико-химическим свойствам.

Практическое значение работы Работа направлена на изучение физико-химических и биологических свойств отдельных пептидных компонентов тимического фактора Т-активина.

Впервые показана возможность и разработан способ выделения из фракции АФТ-б Т-активина пептидов с определенными физико-химическими параметрами и биологическим действием. Этот подход может быть использован для выделения любых низкомолекулярных белков, близких по молекулярным массам и изоэлектрическим точкам.

Разработан способ получения двух субфракций Т-активина - В.З и С.2, превышающих эффективность исходной фракции АФТ-6 более чем в 400 и 2000 раз, соответственно. Биологическое тестирование в разных тест-системах показало их высокую иммунологическую активность. Эти субфракции могут быть использованы при изучении отдельных этапов созревания Т-клеток, а также, после дополнительного исследования, в целях иммунокоррекции.

Проведен сравнительный анализ биологических моделей оценки эффективности тимичес.ких пептидных факторов. Предложен комплекс биологических тестов для выявления влияния тимических факторов на разные этапы развития Т-клеток.

Полученные в работе данные о структурной и функциональной гетерогенности Т-активина вносят вклад в изучение природы и механизма действия этого иммунорегуляторного тимического фактора, а также подтверждают гипотезу о том, что для регуляции процессов развития Т-звена иммунитета необходим ряд регуляторных факторов тимуса.

Работа является фрагментом научно-технической проблемы 0.69.07 ГКНТ СССР и выполнена в соответствии с решением конкретной задачи 02.05.Н2: "Разработать способы дальнейшей очистки препарата Т-активина (АФТ-6) с целью получения индивидуальных пептидов и исследовать их биологическое действие".

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Санина, Ирина Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Разработаны условия выделения пептидных субфракций Т-акти-вина в препаративных целях, заключающиеся в последовательной ионообменной хроматографии, гель-хроматографии и обессоливании.

2. Из фракции АФТ-б Т-активина выделено 16 субфракций, отличающихся по физико-химическим параметрам. 30,6% всех пептидов находится в диапазоне молекулярных масс от 1200 до 2000 д, 23,8% - от 2000 до 3000 Д, 45,6% - от 3000 до 6000 д. Изоэлектрические точки субфракций В.1, С.2, Б.2 и Е.З лежат в диапазоне рН от 4,5 до 6,7; Р.1 имеет 2 компонента, р1 4,2 и 4,0; А.1 имеет один компонент в щелочной области, р1 8,5.

3. Показано, что биологическая активность Т-активина обусловлена молекулами пептидной природы.

4. Впервые доказана функциональная гетерогенность фракции АФТ-6 Т-активина, заключающаяся в том, что разные субфракции проявляют неодинаковое действие на Т-клетки, находящиеся на различных этапах развития. Так, для раннего этапа созревания предшественников Т-клеток, выявляемого в тесте индукции тиу-1 антигена, требуется комплекс пептидов, входящих во фракцию АФТ-6, а на более поздних стадиях достаточно влияние отдельных субфракций Т-активина.

5. Выделены субфракции Т-активина В.З и С.2, которые превышают активность АФТ-6 в двух разных тестах в 400 и 2000 раз, соответственно.

6. Доказано, что фракция АФТ-6 из тимуса теленка и фракция ФС-6, выделенная по аналогичному методу из селезенки теленка, существенно различаются по биологической активности.

Заключение

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Санина, Ирина Васильевна, Москва

1. Алейникова H.B., Кирзон С.С., Чередеев А.Н., Арион В.Я. Регулирующее влияние активной фракции тимуоа на иммунокомпетентные клетки in vitro и in vivo . В кн.: Регуляция иммунного гоме-остаза. Л., 1982, о.122-123.

2. Арион В.Я. Иммунологически активные факторы тимуса. В кн.: Итоги науки и техники, серия иммунология. М., ВИНИТИ, 1981, т.9, с.10-49.

3. Арион В.Я., Лопухин. Ю.М. Биология и практическое применение Т-активина. В кн.: Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике. Горький, 1983, с.П-12.

4. Арион В.Я., Лопухин Ю.М., Гладышева Т.В., Казакова С.М., Неме-чек И.Б., Бреусов Ю.Н., Лебедев В.В. Способ получения иммунологически активного вещества. Изобретение, авт.свид, СССР №784052, с приоритетом от 6 июля 1979 г.

5. Арион В.Я., Санина И.В., Бреусов Ю.Н., Кротова С.Б., Катков Е. Г., Портнова А.П. Молекулярная и функциональная гетерогенность иммунологически активного фактора тимуса Т-активина. В кн.: У

6. Всесоюзный симпозиум по целенаправленному изысканию физиологически активных веществ. Рига, 1983, с.6-7.

7. Арион В.Я., Санина И.В., Катков Е.Г., Бреусов Ю.Н., Москвина С. Н., Барышков Ю.А. Сравнительные физико-химические свойства и биологическая активность субфракций Т-активина. В кн.: Регуляция иммунного гомеостаза. Л., 1982, с.124-125.

8. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды, происхождение и иерархия. Ж. эволюц. биохимии и физиол., 1982, т.18, Щ, с.3-10.

9. Бабушкина В.А., Кротова С.Б., Портнова А.П. Обоснование курсового лечения Т-активином больных с хроническими неспецифическими заболеваниями легких (ХНЗЛ). В кн.: Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике. Горький, 1983, с.15-16.

10. Бекман Э.М., Короткова М.Н., Санина И.В., Арион В.Я. Влияние Т~ активина на биосинтез РНК и розеткообразующую способность Т-ли-мфоцитов в системе in vitro • В кн.: Сорбционные методы детокси-кации и иммунокоррекции в медицине. Харьков, 1982, с.219-220.

11. Белова О.В., Каргина И.Б., Москвина С.Н., Санина И.В., Молдога-зиева Н.Т. Влияние различных субфракций Т-активина на миграционную способность лейкоцитов. В кн.: Коррекция нарушений иммунологической реактивности. Киев, 1983, с.21-22.

12. Белокрылов Г.А., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Софронов Б.Н. Низкомолекулярная гомогенная фракция тимуса, стимулирующая иммуногенез. Бюл. эксперим. биол. и мед., 1977, т.84, F7, с.56-58.

13. Борисова A.M., Москвина С.Н. Иммунокоррекция Т-активином в комплексном лечении больных ревматизмом. В кн.: Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике. Горький, 1983, с.26-27.

14. J7. Бэйли Дж. Методы химии белков. Дерев, с англ. М., Мир, 1965.

15. Гюллинг Э.В., Самбур М.Б., Гафурова Н.Д., Коротаев Г.К. Влияние кальцитонина на клетки лимфоидного ряда in vitro . Проблемы эн-докринол., 1981, т.27, №2, с.70-74.

16. Детерман Г. Гель-хроматография. Дерев, с англ. М., Мир, 1970.

17. Дэвэни Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды, белки. Дерев, с англ. М., Мир, 1976.

18. Жегулевцёва А.Д., Чередеев А.Д., Алейникова Д.В., Арион В.Я., Алиханов Х.А. Коррекция нарушений иммунитета у больных с острой хирургической инфекцией. Там же, с.271.

19. Иванов-Смоленский A.A., Фриденштейн А.Я. Активность тимозинав культуральных средах фибробластов тимуса. Бюлл. эксперим. би-ол. и мед., 1980, т.90, №10, с.487-489.

20. Иванушкин Е.Ф. Некоторые клинические формы иммунодефицитных состояний и возможность их иммунокоррекции. В кн.: Сорбцион-ные методы детоксикации и иммунокоррекции в медицине. Харьков, 1982, с.234-235.

21. Каргина И.Б., Иванушкин Е.Ф., Москвина С.Е., Арион В.Я. Т-ак-тивин и иммунореактивность организма в норме и патологии. В кн.:Регуляция иммунного гомеостаза. Л., 1982, с.56-57.

22. Кирзон С.С., Кротова С.Б., Санина И.В., Арион В.Я. Оценка in vitro влияния иммуностимулирующего фактора тимуса при лимфогранулематозе и лимфосаркоме. В кн.: Иммунодиагностика и иммунотерапия в онкологии и хирургии. Томск, 1981, с.49-50.

23. Кирзон С.С., Чередеев А.Н., Арион В.Я., Кротова С.Б., Иванушкин Е.Ф., Барышков Ю.А. Действие Т-активина in vitro на лим-фоидные клетки больных лимфопролиферативными заболеваниями. Иммунология, 1982, №5, с.61-65.

24. Ковальчук Л.В., Алейникова Н.В., Черменева I.M., Арион В.Я., Дишкант И.П. Нарушение регуляторной функции тимуса в иммунных процессах и подходы к ее коррекции. Ж. общей биол., 1981, т. 42, №5, с.751-761.

25. Ковальчук Л.В., Цайтлер Б.В., Павлюк A.C., Вельтищева Е.Ю., Мартынова М.И., Иванушкин ЕЖ, Арион В.Я., Санина И.В.,; Бре-усов Ю.Н. Количество Т-лимфоцитов с £с-рецепторами дляд;^ и

26. G и их регуляторная активность в норме и при некоторых патологических состояниях. Иммунология, 1981, №5, с.56-60,

27. Кожевников B.C., Коненков В.И., Арион В.Я. Индукция дифферен-цировки субпопуляций Т-лимфоцитов человека активной фракцией тимуса (АФТ-6). В кн.: Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике. Горький, 1983, с.70-72,

28. Короткова М.Н., Арион В.Я., Ковальская Н.И. Влияние Т-активина на восстановление кортизончувствительных клеток в тимусе. В кн.: Регуляция иммунного гомеостаза. Л., 1982, с.62-63.

29. Кудрин А.Н., Пономарев Г.Т. Применение математики в экспериментальной и клинической медицине. М., Медицина, 1967, с.202-209.

30. Линднер Д.П., Арион В.Я., Алейникова Н.В., Барышков Ю.А., Кро-това С.Б. Влияние Т-активина на регуляцию и миграцию тимоци-тов. Бюл. эксперим. биол. и мед., 1983, т.95, М, с.86-88.

31. Лопухин Ю.М. Клинический опыт коррекции иммунной системы активным фактором тимуса (Т-активином). В кн.: Итоги науки и техники, серия иммунология, М., ВИНИТИ, 1982, т.10, с.30-44.

32. Лопухин Ю.М., Петров Р.В., Арион В.Я., Бреусов Ю.Н., Гладышева Т.В., Санина И.В., Лебедев В.В., Кирзон С.С., Иванушкин Е.Ф. Способ получения полипептидов. Изобретение, авт. свид. СССР №997298, с приоритетом от 6 июля 1979 г.

33. Лопухин Ю.М., Петров Р.В., Ковальчук Л.В.¡.Первичные иммуноде-фицитные заболевания человека. Архив патологии, 1977, т.39, №6, с.3-13.

34. Мирошниченко И.В., Шарова Н.И., Кочергина Н.И., Сапожников А. М., Ярилин A.A. Действие тималина на некоторые свойства поверхности предшественников Т-клеток. Там же, с.103-104.

35. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Влияние экстракта из тимуса на процессы заживления ожоговых ран в эксперименте. Экспер. хир. и анестезиол., 1974, №2, с.49-51.

36. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Характеристика и изучение механизма действия фактора тимуса (тимарина). Докл. АН СССР, 1978, т. 240, М, с. 1004-1007.

37. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Выделение, очистка и идентификация иммуномодулирующего полипептида, содержащегося в тимусе телят и человека. Биохимия, 1981, т.46, вып.9, с.1652-1658.

38. Морозов В.Г., Хавиноон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины. Успехи современной биол., 1983, т.96, ЖЗ (6), с.339-352.

39. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Ильин Н.В. Влияние низкомолекулярного фактора тимуса на Т-клетки крови человека. Ж. микроби-ол., эпидемиол. и иммунобиол., 1978, №7, с.61-65.

40. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Писарев O.A. Выделение из тимуса и изучение природы фактора, стимулирующего иммуногенез. Докл. АН СССР, 1977, т.233, №3, с.491-494.

41. Петров Р.В. Роль гормонов и медиаторов в функционировании иммунной системы. Вестник АМН СССР, 1980, №7, с.З-П.

42. Петров Р.В. Иммунология. М., Медицина, 1982.

43. Петров Р.В., Вартанян М.Е., Зозуля A.A., Пацакова Э., Кост Н. В., Захарова Л.А., Михайлова A.A. Опиатная активность гуморального фактора костного мозга, стимулирующего продукцию антител. Бюл. эксперим. биол. и мед., 1983, т.95, №5, с.46-48.

44. Петров Р.В., Ковальчук Л.В., Сотникова Н.Ю., Арион В.Я., Санина И.В. Роль тимуса и селезенки в регуляции выработки фактора, ингибирующего миграцию макрофагов. Иммунология, 1981, №4, с. 57-61.

45. Петров Р.В., Михайлова A.A., Захарова JI.A. Биологическая и физико-химическая характеристика гуморального фактора костного мозга, стимулирующего продукцию антител. Иммунология, 1980, М, с.48-50.

46. Плохинекий H.A. Алгоритмы биометрии. М., МГУ, 1980.

47. Санина И.В., Арион В.Я., Кротова С.Б., Бреусов Ю.Н., Барышков Ю.А., Катков Е.Г. Влияние Т-активина на созревание и дифферен-цировку Т-клеток. В кн.: Сорбционные методы детоксикации и иммунокоррекции в медицине. Харьков, 1982, с.255-256.

48. Семенков В.Ф., Бреусов Ю.Н., Кривов Л.И. Коррекция дефицитности Т-клеточных реакций гиперчувствительности замедленного типа клеточными и гуморальными факторами межорганного уровня регуляции. Там же, с.256-257.

49. Уильяме Б., Уилсон К., ред. Методы практической биохимии. Пе-рев. с англ. М., Мир, 1978, с.87-92.

50. Фриденштейн А.Я., Лурия Е.А. Клеточные основы кроветворного микроокружения. М., Медицина, 1980.

51. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Иммуномодулирующее действие фактора тимуса в патологии. Иммунология, 1981, №5, с.28-31,

52. Чеботарев В.Ф. Эндокринная регуляция иммуногенеза. Киев,Здоров »я, 1979, с.158-159.

53. Черменева Л.М., Арион В.Я., Гладышева Т.В., Петров Р.В., Хаитов P.M. Активация тимозином предшественников Т-киллеров кроветворных стволовых клеток. Бюл. эксперим. биол. и мед., 1978, т.35, №5, с.602-605.

54. Чучалин А.Г., Бабушкина В.А. Клинические аспекты применения Т-активина у больных хроническим бронхитом и бронхиальной астмой. В кн.: Коррекция нарушений иммунологической реактивности. Киев, 1983, с.231.

55. Эллиот Б. Метод тонкого разделения розеткообразующих клеток. В кн.: Методы исследований в иммунологии. Перев. с англ. М., Мир, 1981, с.251-272.

56. Ahmed A., Smith А.Н., Sell K.W. Maturation of tbymus-derived cells under the influence of thymosin. In: Immune modulation and control of neoplasia by adjuvant therapy. Ed. by Chirigos M.A. Raven Press, N.Y., 1978, p.293-304.

57. Aita M., Ammirati P., Falchetti R., Pezzella M. Immunologicaland immunohistological properties of an anti-thymostimulin (TP-1) serum. Cell, and Mol. Biol., 1981, v.27, N 4, p.369-375.

58. Aiuti P., Ammirati P., Fiorilli M., D'Amalio R., Pranchi P., Calvani M., Businco L. Immunologic and clinical investigation on a bovine thymic extract. Therapeutical applications in primary immunodeficiencies. Pediatr. Res., 1979, v.13, N 7, p. 797-802.

59. Aiuti P., D'Amelio R., Guinchi G. Thymic hormones and their clinical use in immunodeficiencies. In: Thymus, thymic hormones and T lymphocytes. London, e.a., 1980, p.375-389.

60. Astaldi A. Thymocyte maturation induced by a thymus-dependent serum factor. Haematol., 1980, v.13, N 1-4, p.203-211.

61. Astaldi A., Astaldi G.C.B., Shellekens P.Th.A., Eisvoogel V.P. Thymic factor in human sera demonstrable by a cyclic AMP assay. Nature, 1976, v.260, N 5553, p.713-715.

62. Astaldi A., Astaldi G.C.B., Wijermans P., Dagua-Bricarelli P., Kater L., Stoop J.M. Experience with thymosin in primary immunodeficiency disease. Cancer Treat. Reports, 1978, v.62, N 11, p.1611-1678.

63. Astaldi A., Astaldi G.CtB., Wijermans P., Groenewoud M.,Schellekens P.Th.A., Eijsvoögel V.P. Thymus-dependent factor in human serum. J. Reticuloendothel. Soc., 1977, v.22, N 5, p.43a.

64. Bach J.-P. One or several thymic hormones? In:Cancer chemo-and immunopharmacology. Ed. by Mathe G., Muggia P.N. N.Y., 1980, p.106-109.

65. Bach J.-P., Bach M.-A., Blanot D., Bricas E., Charreire J., Dardenne M., Pournier C., Pleau J.-M. Thymic serum factor (PTS). Bull, de l'institut Pasteur, 1978, v.76, N 4, p.325-398.85» Bach J.-P., Bach M.-A., Carnaud C., Dardenne M., Monier J.C.

66. Thymic hormones and autoimmunity. In: Autoimmunity. N.Y., e.a., 1977, p.207-229.

67. Bach J.-P., Bach M.-A., Charreire J., Dardenne M., Pleau J.-M. The mode of action of thymic hormones. Ann. N.Y. Acad. Sei., 1979, v. 332, p.23-32.

68. Bach J.-P., Carnaud C. Thymic factors. Progress in allergy, 1976, v.21, p.342-408.

69. Bach J.-P., Charreire J. Role of a circulating thymic factor in self-recognition and self-tolerance. Ann. N.Y. Acad. Sei., 1979, v.332, p.55-63.

70. Bach J.-P., Dardenne M., Pournier C. In vitro evaluation of im-munosupressive grugs. Nature, 1969, v.222, N 5197, p.998-999.

71. Bach J.-P., Dardenne M. Activities of immunosupressive agents in vitro. I.Rosette inhibition by azathioprine. Rev. Europ. etudes clin, et biol., 1971, v.16, N 8, p.770-777.

72. Boyse E.A., Old L.J., Chouroulincov I. Cytotoxic test for demonstration of mouse antibody. Methods Med. Res., 1964, v.10, N 1, p.39-52.

73. Brelinska R., Warchhol J.B. Receptors for thymosin fraction Y on rat thymic lymphocytes. Experientia, 1982, v.38, N 11, p. 1317-1318.

74. Gharreire J., Bach J.-P. Binding of autologous erythrocytes to immature T-cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v.72, N 8, p.3201-3205.

75. Cohen J.J., Pairchild S.S, Thymic control of proliferation of T cell precursors in bone marrow. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, N 12, p.6587-6590.

76. Cohen J.J., Patterson G.K. Induction of theta-positive lymphocytes and lymphoblasts in mouse bone marrow by mitogens. J. Immunol., 1975, v.114, N 1, p.374-376.

77. Comsa J. Action of the purified thymus hormone in thymecto-mized guinea pigs. Amer. J. Med. Sci.,1965, v.250,N 1, p.79-85.

78. Constanzi J., Daniels J., Thurman G., Goldstein A., Hikanson J. Clinical trials with thymosin. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1979, v.332, p.148-159.

79. Dardenne M., Pleau J.-M., Blomquit J.Y., Bach J.-F. Characterization of facteur thymique serique (FTS) in the thymus. II. Direct demonstration of the presence of FTS in thymosin fraction Y. Clin. Exper. Immunol., 1980, v.42, N 3, p.477-482.

80. Diezel W., Sonnichsen N., Forner K. Thumushormone: nomenclatur, biologische Wirkung, therapeutische Anwendung. Dt. Gesundheitswesen Zeitschrift fur Klinische Medizin, 1982, v.37, N 52, p.2193-2196.

81. Dokhelar M.-C., Tursz T., Dardenne M., Bach J.-P. Effect of a synthetic thymic factor (facteur thymique serique) on natural killer cell activity in humans. Int. J. Immunopharmacol., 1983, v.5, N 4, p.277-282.

82. Piorilli M., Ammirati P., Sirianni M.C., D'Amelio R., Quinti I., Yoci M.C., Aiuti P. Present knowledge of thymic hormones with particular reference to thymostimulin. In: Thymus, thymic hormones and T-lymphocytes. L., e.a., 1980, p.323-337«

83. Polkers K., Kubiac T., Stepien H., Sacura N. Isolation, partial chemical and biological characterization of thymone-B. Bi-oahem. and Biophys. Res.Commun., 1980, v.97, N 2, p.601-606.

84. Goldstein A.L., Low T.L.K., Rossio J.L., Ulrich J.T., Naylor

85. P.H., Thurman G.B. Recent developments in the chemistry andbiology of thymosin. In: Immune modulation and control ofneoplasia by adjuvant therapy. Ed. by Chirigos M.A. N.Y., 1978, p.281-291.

86. Goldstein G. Isolation of bovine thymin: a polypeptide hormone of the thymus. Nature, 1974, v.247, N 5435, p.11-14.137» Goldstein G. Ubiquitous immunopoietic polypeptide (UBIP) and methods. United States Patent, 1977, N 4002602.

87. Goldstein G., Hofmann W.W. Endocrine function of the thymus affecting neuromuscular transmission. Glin. Exper. Immunol., 1969, v.4, N 2, p.181-189.

88. Goldstein G., Lau G.Y. Immunoregulation by thymopoietin. J.Su-pramolec. Struct., 1980, v.14, N 3, p.397-403.

89. Hannappel E., Xu Gen-Jun, Morgan J., Hempstead J., Horecker

90. B.L. Thymosin a ubiquitous peptide in rat and mouse tissues. Proc, Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, H 7, p.2172-2175.

91. Hooper J.A., McDaniel M.C., Thurman G.B., Cohen G.H., Schu-lof R.S., Goldstein A.L. Purification and properties of bovine thymosin. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1975, v.249, p.125-144.

92. Horowitz S.D., Goldstein A.L. The in vitro induction of differentiation of putative human stem cells by thymosin and agents that affect cyclic AMP. Clinical Immunol, and Immunopatho-logy, 1978, v.9, N 4, p.408-418.

93. Hu Shu-Kuang, Low T.L.K., Goldstein A.L. Modulation of terminal deoxynucleotidyl transferase activity by thymosin. Mol. and Cell. Biochem., 1981, v.41, p.49-58.

94. Imaizumi A., Gyotoko J., Ierada S., Kimoto C. Structural requirements for the biological activity of serum thymic factor. FEBS Letters, 1981, v.128, N 1, p.108-110.

95. Karlsson C., Davies A., Ohman G., Andersson U.B. LKB 2117 multifor-analytical thin-layer gel electric focusing in po-lyacrilamid gel. Application note LKB, 1973, v.75, p.1-35.

96. Komuro K., Boyse E.A. In vitro demonstration of thymic hormone in the mouse by conversion of precursor cells into lymphocytes. Lancet, 1973, v.1, N 7806, p.740-743.1

97. Konopinska D., Kubik A., Lange A. Synthesis of the Gin -facteur thymique serique and its evaluation with human E-roset-te bioassay. Molec. Immunol.,1980, v.17, N 10, p.1213-1218.

98. Kook A., Yakir Y., Trainin N. Isolation and partial characterization of THF, a thymus hormone involved in immune maturation of lymphoid cells. Cell. Immunol., 1975, v.19, N 1, p. 151-157.

99. Kruisbeek A.M. Effect of factors in thymic epithelial culture supernatants (TES) on in vitro maturation of thymocytes.

100. Lonai P., Mogilner B., Rotter V., Trainin N. Studies on the effect of a thymic humoral factor on differentiation of thy-mus-derived lymphocytes. Europ. J. Immunol.,1973, v.3, N 1, p.21-26.

101. Lopukhin Yu.M., Petrov R.V., Arion V.Ya., Breusov Yu.N., Gla-dysheva T.V., Sanina I.V., Lebedev V.V., Kirson S.S., Ivanush-kin E.P. Preparation for control of T-system of immunity and method for producing same. Patent USA, 1983, N 4377511.

102. Low T.L.K., Goldstein A.L. The chemistry and biology of thymosin. I. Isolation, characterization and biological activities of thymosin oC 1 and polypeptide ^ from calf thymus. J. Biol. Chemistry, 1979, v.254, N 3, p.981-986.

103. Low T.L.K., Goldstein A.L. The chemistry and biology of thymosin. II. Amino acid sequence analysis of thymosin * andpolypeptide J& y J. Biol. Chemistry, 1979, v.254, N 3, p. 987-995.

104. Low T.L.K., McClure J.E., Naylor P.H., Spangelo B.L., Goldstein A.L. Isolation of thymosin ^ from thymosin fraction 5 of "different species by high-performance liquid chromatography. J. Chromatography, 1983, v.266, p.533-544.

105. Lowry O.H., Rosenbrough J., Parr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Polin phenol reagent. J. Biol. Chemistry, 1951, v.193, N 1, p.265-275.177» Luckey T.D. Thymic hormones. Baltimore, 1973, p.1-8.

106. Marshall G.D., Low T.L.K., Thurman G.B., Hu Shu-Kuang, Rossio J.L., drivers G., Goldstein A.L. Overview of thymosin activity. Cancer Treat. Repts., 1978, v.62, N 11, p.1731-1737.

107. McClure J.E., Lameris N., Wara D.W., Goldstein A.L. Immunochemical studies on thymosin: radioimmunoassay of thymosin^

108. J. Immunol., 1982, v.128, N 1, p.368-375.

109. Morikawa A., Suzuki S., Kuroume T. Disrepancy between biological activity of thymosin and its cyclic nucleotide-modulating activity. Int. Arch. Allergy and Appl. Immunol., 1982, v.67,1. N 4, p.351-355.

110. Mutchnick M.G., Keren D.F., Weller F.E., McClure J.E., Goldstein A.L. Measurement of thymosin ^ by dissociation micro-ELISA. J. Immunol.,Methods, 1983, v.60, N 1-2, p.53-60.

111. Mutchnick M.G., Prieto J.A., Schaffner J.A., Weller F.E. Thymosin modulation of regulatory T-cell function. Clin. Immunol, and Immunopathol., 1982, v.23, N 5, p.626-633.

112. Nash L., Good R.A., Hatzfeld A., Goldstein G., Incefy G.S. In vitro differentiation of two surface markers for immature T-cells by the synthetic pentapeptide, thymopoietin^.,^ • J.Immunol. , 1981, v.126, N 1, p.150-153.

113. Naylor P.H., Sheppard H., Thurman G.B., Goldstein A.L. Increase of cyclic GMP induced in murine thymocytes by thymosin fraction 5. Biochem and Biophys. Res. Commun., 1976, v.73, N 4, p.843-849.

114. Ohga K., Incefy G.S., Fok Kam-Fook, Erickson B.W., Good R.A. Radioimmunoassay for the thymic hormone serum thymic factor (FTS). J. Immunol. Methods, 1983, v.57, N 1-3, p.171-184.

115. Ohta Y., Kazuo S., Yoneyama Y., Tesuka E., Yagi Y. Immunomo-dulating activity of thymosin fraction 5 and thymosin cC ^ in immunosupressed mice. Cancer Immunol. Immunopathol., 1983, v.15, N 2, p.108-113.

116. Osoba D. The effects of thymus and other lymphoid organs enclosed in millipore diffusion chambers on neonatally thymec-tomized mice. J.Exper.Med., 1965, v.122, N 3, p.633-650.

117. Owen J.T., Raff M.C. Studies on the differentiation of thymus-derived lymphocytes. J.Exper.Med., 1970, v.132, N 6, p.1216-1232.

118. Pahwa R., Ikehara S., Pahwa S.G., Good R.A. Thymic function in man. Thymus, 1979, v.1, N 1, p.27-58.

119. Pierschbacher M.D., Luckey T.D., Kalden J.R. Biological activity of the pure thymus protein LSHr. Ann. N.Y. Acad. Sci.,1979, v.332, p.49-54.

120. Platsoucas C.D., Kapoor N., Beck J.-D., Good R.A., Gupta S. T-cell differentiation in human bone marrow. In vitro induction by thymopoietin pentapeptide and ubiquitin. Clin. Res.,1980, v.28, N 2, p.358 A.

121. Pleau J.-M., Dardenne M., Bach J.-P. The serum thymic factor (FTS). Chemical and biological aspects. Mol. and Cell. Bio-chem., 1981, v.41, p.67-72.

122. Pleau J.-M., Fuentes V., Morgat J.-L., Bach J.-F. Specific receptors for the serum thymic factor (FTS) in lymphoblastoid cultured cell lines. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77,1. N 5, p.2861-2865.

123. Pontiggia P., Ogier C., Folloni G.D. Effect of treatment with thymostimulin (Tp-1) on T and B cells in lymphoproliferative disorders. Blut, 1983, v.47, N 3, p.153-156.

124. Poulter L.W., Bradley N.J., Turk J.L. Differential effect ofazathioprin on ©-antigenicity of mouse lymphocytes. Immunol., 1977, v.26, N 4, p.777-785,

125. Raff M.G. T and. B lymphocytes in mice studied by using antisera against surface antigenic markers. Amer. J. Pathol., 1971, v.65, N 2, p.467-478.

126. Rebar R.W., Akira M., Low T.L.K., Goldstein A.L. Thymosin stimulates secretion of luteinizing hormone-releasing factor. Science, 1981, v.214, N 4521, p.669-671.

127. Reif A.L., Allen J.M. Mouse thymic iso-antigens. Nature,1966, v.209, N 5022, p.521-523.

128. Schield M.P., Goldstein G., Boyse E.A. Differentiation of T cells in nude mice. Science,1975, v.190, N4220, p.1211-1213.

129. Schield M.P., Goldstein G., Boyse E.A. The generation and regulation of lymphocyte populations. Evidence from differentiation system in vitro. J. Exper. Med., 1978, v.147, N 6, p. 1727-1743.

130. Schield M.P., Hoffmann M.K., Komuro K., Hammerling U., Abbot

131. J., Boyse E.A., Cohen G.H., Hooper J.A., Schulof R.S., Goldstein A.L. Differentiation of T cells induced by preparations from thymus and nonthymic agents. J.Exper. Med., 1973, v.138, N 4, p.1027-1032.

132. Schmitt D., Monier J.C., Dardenne M., Pleau J.M., Deschaux P., Bach J.-P. Cytoplasmic localization of PTS (facteur thy-mique serique) in thymic epithelial cells. An immunoelectron-microscopical study. Thymus, 1980, v.2, N 3, p.177-186.

133. Schoham J., Eshel I., Aboud M., Salzberg S, Thymic hormonal activity on human peripheral blood lymphocytes in vitro. II. Enchancement of the production of immune interferon by activated cells. J. Immunol., 1980, v.125, N 1, p.54-58.

134. Small M., Trainin N. Control of autoreactivity by humoral factor of thymus (THP). Cell. Immunol.,1975, v.20, N 1, p.1-11.

135. Strachan R.G., Peleveda W.J., Bergstrand S.J., Nutt R.P., Holly P.W., Veber D.P. Synthesis of a proposed thymic factor.

136. J. Med. Chemistry, 1979, v.22, N 5, p.586-588.

137. Stutman 0. Cellular and humoral requirement for T-cell development. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1979, v.332, p.123-127.

138. Touraine J.L., Touraine P. Thymic inducers of human T lymphocyte differentiation in vitro and in vivo. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1979, v.332, p.64-69.

139. Trainin N., Kook A.I., Umiel T., Albala M. The nature and mechanism of stimulation of immune responsiveness by thymus extracts. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1975, v.249, p.349-361.

140. Trainin N., Umiel T., Klein B., Kleir I. Role of thymus humoral factor, a thymic hormone, in the physiology of thymus. In: Miles International symposium series.Polypeptide hormones. N.Y., 1980, v.12, p.467-488.

141. Trainin N., Zaizov R., Yakir Y., Rotter V. Thymic hormones: characterization and perspectives.In: The immune system: function and therapy of disfunction. Proc# Serono Symposia. Ed. by Doria G., Eshkol A. L., 1980, v.27, p.159-169.

142. Trainin N., Zipori D., Umiel T. Recent studies on the role of the thymus in early stages of lymphopoiesis and immune differentiation. Estratto dal Boll. 1st. Steroter. Milanes, 1975, v.54, N 3, p.210-218.

143. Turowski G., Gybulski L., Politowski M., Turaszwili T., Zu-bel M. First trials of immunopotentiation by thymus extract (TFX) in surgical patients with malignant disease. Acta Med. Pol., 1976, v.17, N 1, p.19-39.

144. Xu Gen-Jun, Hannappel E., Morgan J., Hempstead J., Horecker B.L. Synthesis of thymosin ^ by peritoneal macrophages and adherent spleen cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 72, N 3, p.4006-4009.

145. Yakir Y., Kook A.J., Trainin N. Enrichment of in vitro and in vivo immunologic activity of purified fraction of calf thymic hormone (THF). J. Exper. Med., 1978, v.148, N 1, p.71-83.

146. Yanaichara N. Synthetic thymic factor. Infect. Inflamn. and Immun. (Japan), 1980, v.10, N6, p.329-336.

147. Zaizov R., Vogel R., Cohen I., Varsano I., Shohat B., Rotter V., Trainin N. Thymic hormone (THF) therapy in immunosupressed children with lymphoproliferative neoplasia and generalized varicella. Biomed. Express, 1977, v.27, N 3, p.988-992.