Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярная диагностика наследственной предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям: варианты генов параоксоназы I и кассетного транспортера АВС А1 как факторы риска

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Молекулярная диагностика наследственной предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям: варианты генов параоксоназы I и кассетного транспортера АВС А1 как факторы риска"

На правах рукописи

РОДЫГИНА Татьяна Ивановна

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ: ВАРИАНТЫ ГЕНОВ НАРАОКСОНАЗЫ 1 И КАССЕТНОГО ТРАНСПОРТЕРА ABC Al КАК ФАКТОРЫ РИСКА

03 00 04 - биохимия 14 00 46 - клиническая лабораюрная диагност пса

АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

UUJU61577

Санкт — Петербург 2007

003061577

Работа выполнена в Отделе молекулярной и радиационной

биофизики Петербургского института ядерной физики имени Б П Константинова Российской академии наук

Научные руководители

доктор ■медицинских наук профессор Евгений Иосифович 111 пари

доктор биолен ических наук Александр Львович Шварнман

Официальные оппоненты Шавловскнй Михаил Михайлович,

заведующий кафедрой медицинской гене гики Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования, доктор медицинских наук Вавилова Татьяна Владимировна, заведующая курсом клинической лабораторной диагностики, профессор кафедры госпитальной терапии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии имени И И Мечникова, доктор медицинских наук

Ведущее научное учреждение Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Всероссийский центр экстренной и радиационной медшшны" МЧС России

Затцига диссертации состоится 20 сентября 2007 года в 13 час На заседании Диссертационно! о совета Д001 022 03 при ГУ Шучно-нссчедоваюльский ипеппл 1 экспериментальном медицины РАМН в конференц-зале ГУ НШН1ЭМ РАМН по адресу ! 97376 Сашсг-Петербург, Каменноосгровсмт пр , д 69/71

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ГУ Научно-исслечовагельскии ирсштугэксперименталтнон медицины по адресу 197376 Санкт-Петербург, уч Академика Павлова, д 12

Автореферат разостаи (р Ц^ С /7г 007 г

.ссрргаиионнок

Д01 022 03 дбн, проф

Ученый секретарь Диссергаиионною совета-ч*--

'ТЖ&С- В Пучкова

а

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заболевания сердечно-сосудистой системы, обусловленные атеросклерозом, занимают первое место среди причин, приводящих к смерти, во многих странах мира, в том числе в России По данным Министерства здравоохранения России, смертность от заболеваний, вызванных атеросклерозом, составляет более 50% от всех причин, приводящих к смерти Поэтому разработка программ ранней диагностики, профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний - одна из важнейших задач здравоохранения В зависимости от локализации артерий, пораженных атеросклерозом, может развиваться ишемическая болезнь сердца (ИБС), в том числе инфаркт миокарда (ИМ), нарушение кровообращения головного мозга, в том числе ишемический инсульг (ИИ), облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей (Алмазов В А , и др , 1997) Одним из основных методов, используемых для дифференциальной диагностики атеросклероза, является рентгеновская ангиография На сегодняшний день это единственный объективный метод оценки состояния артерий (Данилов Н М и др, 2006) Проблема, однако, заключается в том, что ангиография сосудов проводится, как правило, при клинически выраженных признаках атеросклероза, является инвазивным методом диагностики с высоким процентом осложнений и рядом противопоказании (Данилов Н М и др , 2006, Чернявский А М и др , 2006) и не может заменить методы ранней диагностики, необходимой для профилактики заболевания

Ключевое место в современной концепции патогенеза атеросклероза занимает понятие "фактор риска", обозначающее любое состояние, между наличием которого и повышенной встречаемостью заболевания существует причинно-следственная связь (Фогель Ф, Матульский Л, 1989) Установлен целый ряд традиционных факторов риска атеросклероза, к которым относятся возраст, мужской пол, курение, нарушения липидного обмена, артериальная гипертензия, диабет (Липовецкий Б М, 2000, \Vierzbicki А 8 е1 а1, 2003) Однако подход, основанный на анализе общеизвестных факторов риска, не всегда позволяет точно рассчитать относительный риск развития атеросклероза и выявить ранние стадии этого заболевания у конкретного пациента Вместе с тем современные исследования показывают, что наряду с традиционными факторами риска существенную роль играет наследственная предрасположенность к развитию атеросклероза, позволяющая проводить раннюю диагностику и профилактику заболевания В этой связи, особый интерес уделяется явлению аллелыюго полиморфизма, которое присуще большинству генов человека и может лежать в основе генетических и биохимических методов, составляющих основу как эпидемиологических исследований, так и конкретной лабораторной диагностики На сегодняшний день стандартизированная шкала риска развития сердечно-сосудистых заболеваний не учитывает наследственные факторы и популяционно-зависимый характер факторов риска Необходимость выявления вариантов генов, которые могут вносить вклад в развитие атеросклероза и его осложнений - ИМ и ИИ и использоваться в клинических лабораториях Санкт-Петербурга

для молекулярной диагностики наследственной предрасположенности к этим заботеваниям, послужила основанием для проведения настоящего исследования

Исходя из механизмов этиопатогенеза, лежащих в основе развития атеросклероза, ИМ и ИИ, для настоящего исследования были выбраны детерминанты, определяющие процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и обратного транспорта холестерина (ОТХ) (Климов АН, и др 2001, Mackness MI, et al, 2004, Escoia-Gil J С et al, 2006) ПОЛ является инициирующим этапом атерогенеза (Климов А Н, Никульчева Н Г, 1999) Одним из сновных белков, регулирующих степень ПОЛ, является параоксоназа 1 (PONI), антиокислительная функция которой имеет существенное значение в обмене ЛП (Himbergen TM, et al, 2006) Пониженная каталитическая активность PONI, обусловленная как генетическими факторами, так и токсическими воздействиями среды, может приводить к усиленному ПОЛ и ускоренному развитию атеросклероза (Mackness М Т, et al, 2004, Himbergen TM, et al, 2006) Ключевым белком ОТХ является аденозин-трифосфат связывающий кассетный транспортер класса Al (АВСА1), регулирующий перенос холестерина (ХС) из периферических клеток на частицы антиатерогенных липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) Нарушения функционирования белка АВСА1 или изменение экспрессии гена АВСА1 приводят к ускоренному темпу атерогенеза и раннему развитию атеросклероза (Oram J F , Heinecke J W , 2005)

Основываясь на этих данных, было сделано предположение, что варианты генов АВСА1 и PONI могут вносить вклад в развитие атеросклероза и его осложнений - ИМ и ИИ Эта гипотеза послужила предпосылкой для проведения настоящего исследования

Цель исследования. Изучение вклада вариантов генов ABC Al и PONI в развитие атеросклероза и его осложнений - инфаркта миокарда и ишемического инсульта у жителей Санкт-Петербурга Задачи исследования:

1 Определить частоту вариантов генов PONI (Q191R, L54M, (-108)С<Т и АВСА1 (R219K, 3I9ins<G, (-17)C<G) в группах пациентов с атеросклерозом, подтвержденным ангиографическим методом, мужчин, перенесших инфаркт миокарда в возрасте до 45 лет, пациентов, перенесших ишемический инсульт, в контрольных группах

2 Оценить вклад вышеперечисленных вариантов генов PONI и ЛВСА1 в риск развития атеросклероза, в том числе до 45 лет, инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет и ишемического инсульта, в том числе до 45 лег, у жителей Санкт-Петербурга

3 Провести корреляционный анализ вышеперечисленных вариантов генов PONI и АБСА I со степенью тяжести атеросклероза, подтвержденного ангиографическим методом

4 Провести многофакторный анализ относительною риска развития атеросклероза, в том числе до 45 лет, инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет, с учетом следующих факторов курение, концентрация холестерина

липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови,

варианты генов PONI и АВСА1

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Частота генотипа RR191 по гену PONI выше в группах пациентов с атеросклерозом, подтвержденным ангиографическим методом, в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте (до 45 лет), и в группе пациентов, перенесших ишемический инсульт, чем в контрольных группах По сравнению с носителями генотипов OR191 и QQ191 риск развития атеросклероза, инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 45 лет и ишемического инсульта у носителей генотипа RR191 по гену PONI повышен Генотип RR191 по хену PONI является фактором риска развития атеросклероза и ишемического инсульта до 45 лет

2 Частота аллеля G319 гена АВСА1 ниже в группе пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой Носительство аллеля G319 гена АВСА1 понижает относительный риск развития атеросклероза и ассоциировано с уменьшением средней степени артериально! о стеноза

3 Частота генотипа СС(-Ю8) по гену PONI ниже в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, по сравнению с контрольной группой Носительство генотипа СС(-108) по гену PONI уменьшает риск развития инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет

4 Среди таких факторов, как курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, генотип RRI91 по гену PONI является третьим по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет и вторым по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза до 45 лет среди жителей Санкт-Петербурга

Научная новизна полученных результатов

1 Впервые дана оценка частоты вариантов генов PONI (Q191R, L54M, (-108)С<Ти АВСЛ1 ((-17)C<G, 319ins<G, R219K) у жителей Санкт-Петербурга, а также среди пациентов с атеросклерозом, подтвержденным ангиографическим методом, мужчин, перенесших инфаркт миокарда в возрасте до 45 лет, пациентов, перенесших ишемический инсульт, живущих в Санкт-Петербурге

2 Впервые показано, что генотип RR191 по гену PONI является фактором риска развития атеросклероза, инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 45 лет, ишемического инсульта среди жителей Санкт-Петербурга Впервые показано, чго генотип RR191 rio гену PONI является фактором риска развития атеросклероза ti ишемического инсульта в возрасте до 45 лет

3 Впервые показано, что генотип СС(-108) по гену PONI снижает риск развития инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет, живущих в Санкт-Петербурге

4 Впервые показано, что носительство аллеля G319 гена АВСА1 понижает относительный риск развития атеросклероза и ассоциировано с уменьшением средней степени артериального стеноза у жителей Санкт-Петербурга

5 Впервые показано, что среди таких факторов, как курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, генотип RR191 по гену PONI является третьим по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет и вторым по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза до 45 лет среди жителей Санкт-Петербурга

Практическое значение работы. Показана целесообразность типирования в лабораториях и клиниках Санкт-Петербурга варианта Q191R гена PONI для выявления лиц, являющихся носителями генотипа RR191, повышающего относительный риск развития атеросклероза и его осложнений -инфаркта миокарда, ишемического инсульта Выявление носителей генотипа RR191, в первую очередь среди курильщиков до 45 лет, диктуется необходимостью учитывать вариант Q191R гена PONI при подсчете индивидуального риска развития атеросклероза, инфаркта миокарда, с целью профилактики этих заболеваний у жителей Санкг-Петербурга Вариант Q191R гена PONÍ, наряду с такими широко известными лабораторными показателями, как концентрация общего холестерина и холестерина липопротеинов высокой плотности в плазме крови, может учитываться при формировании групп риска развития сердечно-сосудистых заболеваний среди жителей Санкт-Петербурга Для профилактики инфаркта миокарда у мужчин в молодом возрасте (до 45 лет) рекомендуется раннее выявление лиц мужского пола, являющихся носителями аллеля (-108)Т гена PONI В группах пациентов с атеросклерозом необходимо типирование варианта 3!9ms<G гена ABCAI для оценки прогноза и возможной дополнительной терапевтической коррекции заболевания

Личный вклад автора в получение результатов: проведен анализ литературы по изучаемой проблеме, создан банк геномной ДНК больных с атеросклерозом, мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, пациентов, перенесших ишемический инсульт, и контрольных групп, с помощью методов энзиматической амплификации и рестрикционпого анализа проведено типирование вариантов генов PONI (Q191R, L54M, (-108)С<Т и АВСА1 ((-17)C<G, 319im<G, R219K) в исследуемых группах, проанализирован вклад изученных детерминант в развитие атеросклероза, инфаркта миокарда и ишемического инсульта

Апробация работы. Результаты работы были доложены на конгрессе ассоциации кардиологов стран СНГ «Фундаментальные исследования и прогресс в кардиологии», Москва, 2003г, на Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической генетики», Москва, 2003г, на ежегодном конгрессе Медицинских генетиков, Уфа, 2005, на международном конгрессе «Гипертензия - от Короткова до наших дней», Санкт - Петербург, 2005, на Всероссийском конгрессе кардиологов, Москва, 2005, на Всероссийском конгрессе кардиологов, Москва, 2006, на конференции политехнического симпозиума «Молодые ученые - промышленности СевероЗападного региона», Санкт-Петербург, 2006, на Европейской конференции по генетике человека, Ницца, 2007

По теме диссертации опубликовано 16 работ, из них 2

статьи

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, иллюстрирована 24 рисунками и состоит из следующих разделов введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 148 научных источника (16 - на русском языке и 132 - на иностранном)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика обследованных групп. Для оценки вклада вариантов генов PONI и ЛВСА1 в развитие атеросклероза, ИМ и ИИ были выбраны следующие группы пациенты с атеросклерозом, диагностированном на основании ангиографического исследования, мужчины, перенесшие ИМ в молодом возрасте (до 45 лет), пациенты, перенесшие ИИ, и соответствующие контрольные группы

Группу пациентов с атеросклерозом составило 119 человек (79 0% мужчин и 21 0% женщин) с артериальным стенозом различной степени и локализации, обусловленным атеросклерозом Ангиографическая диагностика атеросклероза проводились на кафедре факультетской хирургии в Санкт-Петербургском Государственном Медицинском Университете им академика И П Павлова Первые клинические проявления атеросклероза у пациентов наблюдались в возрасте 47 87+7 05 лет, средний возраст пациентов на момент обследования составил 51,41±6,21 лет Локализация атеросклероза у каждого пациента была как минимум в одной артерии одного из трех артериальных бассейнов (церебральный, коронарный, бассейн артерий нижних конечностей) Группу больных, перенесших ИМ, составили мужчины (206 человек), перенесшие ИМ в возрасте до 45 лет (средний возраст возникновения первого ИМ 40,43=4,51 лет, средний возраст пациентов на момент обследования составил 45,72±6,39 лет) Все пациенты наблюдались на кафедре факультетской терапии Санкт-Петербургского Государственного Медицинского Университета им академика И П Павлова ИМ был диагностирован на основании клинических симптомов, данных биохимической и функциональной диагностик, включая эхокардиографию и электрокардиографию Контрольную группу для больных, перенесших ИМ, составили 195 человек без сердечнососудистых заболеваний в анамнезе Группа соответствовала группе пациентов по полу и возрасту (средний возраст 40,10 ± 5,19 лет) Для исключения ИБС всем мужчинам, вошедшим в контрольную группу, были выполнены электрокардиография, велоэргомстрия и эхокардиография на кафедре военно-морской и общей терапии Военно-медицинской академии им С М Кирова Группу пациентов, перенесших ИИ головного мозга, составило 134 человека (56% и 44% мужчин и женщин соответственно) (средний возраст возникновения первого ИИ - 42,79±9,94 лет, средний возраст пациентов на момент обследования составил 44,28±8,50 лет) Больные наблюдались на базе невролотичсского отделения Центральной медико-санитарной части №122 и ТТ неврологического отделения Мариинской больницы г Санкт-Петербурга

Диагноз ставился на основании углублснно1о неврологического

обследования с использованием компьютерной и магнитно-резонансной томографии, магнитно-резонансной ангиографии Территориальный инфаркт головного мозга был подтвержден при томографическом исследовании Контрольную группу для пациентов, перенесших ИИ, и для пациентов с атеросклерозом составило 305 человек (63% мужчин и 37% женщин, средний возраст 45,6±6,3 лет) без сердечно-сосудистых заболеваний в анамнезе Лица, вошедшие в контрольную группу, были проконсультированы врачом -кардиологом и обследованы была выполнена электрокардиография, велоэргометрия, ЭХО-кардиография Все пациенты и лица, вошедшие в контрольные группы, были жителями Санкт-Петербурга и не были связаны узами родства У всех пациентов, а также у лиц конгрольных групп определена частота вариантов генов PON1 0191R, L54M, (-108) С<Т и АБСА! R219K, Ins<G319, (-17) C<G

Методы исследования. Выделение ДНК из периферических лейкоцитов венозной крови выполнялось фенол-хлороформным методом (Маниатис Т и соавт , 1984) Лизис клеток крови проводили по методу Канкеля (Lahiri D К et al, 1992) В исследовании использовали реактивы следующих фирм "Fisherbiotech Laboratories", США (акриламид, бисакриламид), "Serva", Германия (Tris-OH, ЭДТА, персульфат аммония, бромистый этидий), "Reanal Laboratories", Венгрия (TEMED), "Вектон", Санкт-Петербург, Россия (борная кислота), "Fermentas", Литва (смесь трифосфатов, рестрикционные ферменты и буферы для них) Идентификацию вариантов генов PONI и АБСА I проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и последующего рестрикционпого анализа Условия энзиматической амплификации и рестрикционного анализа амплифицированных фрагментов генов PON1 и АВСА1 приведены в таблицах 1 и 2 соответственно Праймеры были синтезированы в фирме «Synthol» (Москва) Продукты ПЦР и рестрикционного анализа подвергали электрофоретическому разделению при ЗОмА (150В) в полиакриламидном геле (ПААГ) соответствующей концентрации в трис-боратном буфере (0 9М Tris-OH, 0 9М борная кислота, 20мМ ЭДТА), результаты визуализировали в ультрафиолете после окрашивания бромистым этидием (Маниатис Т и соавт, 1984) Амплификацию проводили на амплификаторе «Терцик» (ТП4-ПЦР-01 - «Терцпк» ТУ 9452-001-46482062-98) с использованием термостабильной высокопроцессивной рекомбинантной Taq ДНК полимеразы фирмы ' Fermentas" (Литва) Для амплификации необходимых фрагментов были выбраны пары праймеров соответствующих нуклеотидных последовательностей ПЦР проводили с 0,5-1 мкг геномной ДНК в объеме 15 мкл Амплификационная смесь состояла из 16,6 мМ (NH^SC^, 67 мМ Tris-IICI, рН 8,8, 1,5 мМ MgCl2, 0,01% Tween 20, 0,2 мМ каждого dNTP, 1,5 мкМ каждого праймера и 1 ед Taq-полимеразы Сверху наносилих 25 мкл вазелинового масла для предотвращения испарения раствора

Таблица 1

Условия энзиматической амплификации и рестрикционного анализа амплифицированных фрагментов гена PONI

Последовательность праймеров (-108) С<Т 5'-CGCCTTCTGTGCACCTGGTCGGCCC-3' прямой, 5'-GGCAGCGCCGATTGGCCCGCCGC-3' - обратный

Q191R 5' -TATTGTTGCTGTGGGACCTGAG-3' - прямой, 5' -CACGCTAAACCCAAAT АС АТСТС-3' обратный

L54M 5'- TGACAAGTCTGTGCAATGGA -3' прямой, 5'-GGCTTAAACTCAGCCACACC -3' обратный

Температура отжш а праймеров (-108) С<Т 6ТС

0191R 68°С

L54M 52 С

Длина ПЦР- фрагмента, пн (-108) С<Т 77

Q191R 99

L54M 128

Эндонуклеаза, буфер, температура (-108) С<Т Ilinól, Tango (yellow), +37°С

Q191R Mb о I, R (red), +37°C

L54M Ncol, Tango (yellow), +37°C

Длины фрагментов (п н ), % ПААГ для их идентификации (-108)С<Т аллель (-108)C 53 и 24, аллель (-108)T 77 12%

Q191R аллель 191Q 40 и 59, аллель 191R 40, 31 и 28 12%

L54M аллель М54 99 п н и 29 п н, аллель L54 128 10%

После первоначальной денатурации при 95"С в течение 5 мин 35 циклов амплификации проводили в следующем темпера гурно-временном режиме плавление 92°С - 1мпн, отжиг при соответствующей для каждого варианта температуре— 1мин, синтез 72°С - 1мин После завершения 35 циклов амплификации проводили заключительный синтез при 72°С в течение 7мин В результате амплификации получали ПЦР продукты определенных размеров -пар нуклеотидов (п н ) Для проведения рестрикционного анализа ПЦР продукт,

инкубировали с 1 ед эндонуклеаз (фирма «Fermentas», Литва) в соответствующих буферах (фирма «Fermentas», Литва) при оптимальной для каждой эндонуклеазы температуре в течение ночи

Таблица 2

Условия энзиматической амплификации и рестрикционного анализа амплифицированных фра! ментов гена АВСА1

Последовательность праймеров 1пч<0319 5'- ССС СТС CTG С TT TAT СТТ ТС A GTT A AT GAC CAG ССС CG 3'-прямой, 5'-АТС ССС ААС ТС A AAA CCA СА-3' - обратный

(-17) С<С 5'- CTG CTG AGT GAC TGA АС Г АСА ТАА АСА GAG GCC GGG TA -3' - прямой, 5'-CCA CTC ACT CTC GTC CGC AAT TAC-3' - обратный

Я219К 5'- TGACAAGTCTGTGCAATGGA -3' прямой, 5'-GGCTTAAACTCAGCCACACC -3' обратный

Температура отжига праймеров 1пч<С319 55 °C

(-17) С<в 60 °C

К219К 52 °C

Длина ПЦР- фрагмента, пн 1п&<С119 246

(-17) С<в 161

К219К 177

Эндонуклеаза, буфер, температура 1т<0519 Sma T, Tango (yellow), 25°C

(-17) С<в Rsa I, R (red), 37°C

Я219К Hag I, R (red), 37°C

Длины фрагментов (п и ), % ПААГ для их идентификации 1пх<СтЗ 19 при отсутствии вставки нуклеотида G - 246, G ms аллель-210 и 37, 6%

(-17) С<в С аллель - 161, G аллель -124 и 37 6%

Я219К Аллель R219 177.К219 107 и 70

Уровень общего холестерина (ОХС) и холестерина ЛПВП (Х-ЛПВП) был измерен в группе пациентов с атеросклерозом, в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, и в соответствующих контрольных группах в отделе биохимии Государственного учреждения «Научно-исследовательский институт

экспериментальной медицины Российской академии медицинских

наук» С a ¡ i кт- П стер 5} р га на автоанализаторе AA-II фирмы «Techmcon» (США) Результаты обрабатывали с использованием программ Statistic» 6 О, SPSS 10 5

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Анализ вклада вариантов генов PONI (Q191R, L54M, (-108) С<Т) и АВСА1 (R219K, Ins<G319, (-17)C<G) в развитие атеросклероза. Клиническая характеристика группы пациентов с атеросклерозом, подтвержденным методом ангиографии и контрольной группы, приведена в таблице 3

У большинства больных, составивших группу пациентов с атеросклерозом, были традиционные факторы риска развития атеросклероза -курение и пониженный уровень Х-ЛПВП (у больных уровень Х-ЛПВП был ниже, чем у представителей контрольной группы, среднее значение индекса пачек/лет было выше в группе пациентов по сравнению с контрольной группой) Для объективной оценки фактора курения среди больных и лиц контрольной группы был подсчитан индекс курения пачек/лет по формуле (количество сигарет, выкуриваемых в день / 2 0)хдлительность курения в годах У больных при подсчете этого индекса учитывался только период до начала заболевания, что позволяет более объективно оцепить вклад фактора курения в риск развития атеросклероза

Таблица 3

Характеристика группы пациентов с атеросклерозом, подтвержденным _методом ангиографии и контрольной группы__

Параметр Группа пациентов с атеросклерозом Контрольная группа Р

ОХС, ммоль/л±БВ 5 82±0 53 5 44±0 39 >0 05

Х-ЛПВП, ммоль/л^Б 0 93±0 11 1 17±0 09 <0 004

Курение, % 57 1 43 5 <0 02

Индекс курения пачек/лст±50 19 36±17 33 6 55±5 79 <0 0001

Коронарный атеросклероз, % 39 5

Церебральный атеросклероз, % 28 5

атеросклероз нижних конечностей, % 45 2

Средняя степепь стеноза артерий, баллы=80 3 42 ±0 97

Среднее число пораженных атеросклерозом артсрпй±йО 4 75 ±3 43

Сокращения ОХС - общии холестерин, Х-ЛПВП - холестерин липопротеинов высокой плотности

Однако средние уровни ОХС в плазме крови достоверно не различались между исследуемыми группами, хотя средний уровень ОХС был выше в группе больных

Таким образом, полученные результаты подтверждают, что курение, и пониженный уровень Х-ЛПВП в плазме крови являются факторами риска развития атеросклероза

Частота генотипа RR191 по гену PONI в группе пациентов с атеросклерозом, подтвержденным методом ангиографии, была выше по сравнению с контрольной группой (11 8% и 3 3% соответственно, р= 0 001, df=l) Относительный риск развития атеросклероза у носителей генотипа RRI9I выше в 3 б раза по сравнению с носителями генотипов QRI9I и QQI91 (95%CI 1 88-6 78) Частота аллеля G319 гена АВСА1 в группе пациентов с атеросклерозом ниже по сравнению с контрольной группой (15 1% и 25 4% соответственно, 0 03, df~l) Относительный риск развития атеросклероза у носителей аллеля G319 гена АБСА! ниже по сравнению с лицами, у которых вставка нуклеотида G в 319 положении отсутствует (OR = 0 55 (95%С1 0 860 35) Таким образом, носительство аллеля G319 гена АБСА] понижает риск развития атеросклероза у жителей Санкт-Петербурга

В группе больных с атеросклерозом была исследована корреляция всех изученных вариантов генов ABC Al и PONI с тяжестью атеросклероза Степень тяжести диффузного атеросклероза оценивалась по количеству пораженных атеросклерозом артерий Степень тяжести локального атеросклероза оценивалась в баллах по средней степени окклюзии просвета артерии атерогенной бляшкой Соответствие степени артериального стеноза в процентах и баллах 1 степень - 1 -49%, 2 степень - 50-74%, 3 степень - 7589%, 4 степень - 90-99%, 5 степень (полная окклюзия артерии бляшкой) -100% Выявлена ассоциация аллеля G319 гена АВСА1 с меньшей степенью артериального стеноза (р = 0 017, средняя степень С1еноза при отсутствии и наличии аллеля G319 3 47±0 98 и 2 75±0 68 балла, соответственно) Следует отметить, что в настоящем исследовании была также выявлена ассоциация этого аллеля с пониженным относительным риском развития атеросклероза Ранее в работе, выполненной Zwartz и соавт , было показано, что носительство аллеля G319, расположенного в 5'-нетранслируемой области - во втором экзоне гена АБСА/, ассоциировано с уменьшением локального и диффузного атеросклероза по сравнению с отсутствием аллеля G в положении 319 (Zwartz К Y et al, 2002) Механизмы, объясняющие функциональный эффект этого варианта на развитие и прогрессирование атеросклероза, остаются в настоящее время не изученными Поскольку вариант Ins<G319 расположен в 5'-нетранслируемой области гена АВСА1, можно предположить, что вставка нуклеотида G в 319 положении гена АВСА1, вероятно, изменяет участки связывания факторов трансляции или затрагивает регуляторные элементы, отвечающие за стабильность мРНК гена /1ВСА1 Это, в свою очередь, может обусловливать измененную экспрессию АВСА1 и, соответственно, более эффективный ОТХ и замедление темпов атерогенеза

Анализ вклада вариантов генов PONI (Q191R, L54M, (-108) С<Т) и ABC Al (R219K, Ins<G319, (-17)C<G) в развитие инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет. Клиническая характеристика группы мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, и контрольной группы приведена в таблице 4

Таблица 4

Характеристика группы мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 ____лет, и контрольной группы__

Параметр Группа пациентов, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет Контрольная группа Р

ОХС, ммоль/л 6 04±0 71 5 47+0 27 <0 01

Х-ЛПВП, ммоль/л 0 97±0 09 1 12±0 11

Курение(%) 81 6 46 9

Индекс курения пачек/лет 15 11±8 44 8 44±7 64 <0 0001

Сокращения ОХС - общин холестерин, Х-ЛПВП — холестерин липоиротеинов высокой плотности

У большинства пациентов были традиционные факторы риска развития ИБС, такие, как курение (среднее значение индекса пачек/лет было выше в группе пациентов по сравнению с контрольной труппой) и днелнпопротеинемия (уровень ОХС в плазме крови у больных был выше, а уровень Х-ЛПВП - ниже, чем у представителей контрольной группы)

Частота генотипа RR191 по гену PONI в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, была выше по сравнению с контрольной группой (10 7% и 4 1% соответственно, р= 0 01,) Относительный риск развития ИМ у носителей генотипа RR выше в 2 8 раза по сравнению с носителями генотипов QR191 и QQ19I (df=l, (95%СТ 1 26-5 38) Частота генотипа СС(-108) по гену PONI в контрольной группе была выше по сравнению с группой мужчин, перенесших ИМ до 45 лет (30 6% и 20 0% соответственно, р=0 02) Относительный риск развития ИМ у носителей генотипа СС(-108) по гену PONI ниже по сравнению с носителями генотипов СТ(-108) и ТТ(-108) (OR (СС vs СТ+ТТ) = 0 57 , df=l, (95%С1 0 36-0 17) Таким образом, в группе пациентов выявлено увеличение частоты генотипа RR191 по гену PONI, ассоциированного с пониженной аптиокислителыюй активностью энзима параоксоназы 1 Частота генотипа СС(-108), ассоциированного с повышенным уровнем экспрессии гена PONI, в группе больных, напротив, оказалась уменьшенной

Не было обнаружено статистически значимых различий в частотах вариантов гена ABC Al (.R219K, Ins<G319, (-17) C<G) и L54M гена PONI между группой мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, и контрольной группой

Анализ вклада вариантов генов PONI (Q19ÍR, L54M, (-108)С<Т) и АВСА1 (R219K, Im<G319, (-17)C<G) в развитие ншемнческого инсульта. Частота генотипа RR191 по гену PONI в группе пациентов, перенесших ИИ, была выше по сравнению с контрольной группой (9 0% и 3 3% соответственно,

р= 0.02, df=]). Относительный риск развития И1! у носителей генотипа RR191 Bbimt в 2,6 раза по сравнению с носителями генотипов OR191 и QQ191 (95%С1: 1.26-5.38), Носигельстао генотипа RR 191 по гену PONI является фактором риска развития ИИ у жителей Санкт-Петербурга.

Не было обнаружено статистически значимых различий в частотах вариантов L54M и (~108) С< Т гена PONI и всех исследованных вариантов гена АВСА1 между группой пациентов, перенесших ИИ. и контрольной группой.

Следует oí'мстить, что во всех исследуемых группах пациентов частота генотипа RR191 по гену PONI была выше по сравнению с частотой этого генотипа в соответствующих контрольных группах. Относительный риск развития атеросклероза и его осложнений - ИМ и ИИ у носителей генотипа RR191 был повышен по сравнению с носителями генотипов QR191 и QQ191 (Рисунок I). Шсительство генотипа RR191 по гону PONÍ можно рассматривать как фактор риска развития атеросклероза, ИМ у мужчин до 45 лег, ИИ среди жителей Санкт-I (етсрбурга.

Ассоциация генотипа RR191 по гену PONI с повышенным риском развития этих заболеваний объясняется скорее всего тем, что аллель R191 ассоциирован с низкой эффективностью защиты липидов от Перекисного окисления (Mackness M.J., et al, 1997: Bub A, et al, 2005). Несколько мета-анализов полученных данных выявили достоверную ассоциацию аллеля R191 гена PONI с повышенным риском развития атеросклероза (Durrington P.N.. et al, 2002; Tomas M„ et al, 2004; Wheeler J.G. et al, 2004),

or

Рисунок 1. Относительный риски развития атеросклероза, и ш ем и ческою инсульта и инфаркта миокарда у носителей генотипа RR191 по гену PONI. Сокращения: OR относительный риск

На сегодняшний день не установлен как природный субстрат фермента PONI, так и механизм, обусловливающий ферментативную активность PONI в отношения окисленных липидов. Однако известна способность PONI щцролизовать фосфоргап и чес к и с соединения, гс частности парзоксон (Mazur А-. 1946). Следует отметить, что параоксон быстрее и эффективнее гидролизуется К191 -нзоформой этого энзима, чем QÍ9¡-изоформой (Humbert R. et а), 1993). Рент теноструктурный анализ белка PONI показал возможный механизм, объясняющий различную степень ферментативной активности этих изоформ PONI по отношению к иараоксону (Втук В. et al, 2005).

□ Контроль

РЯ И ш ем ически й

инсульт Я Инфаркт м о карда ЕВ Атеросклероз

Предполагается, что положительно заряженная молекула аргинина (R), расположенная в непосредственной близости от активного сайта фермента PONI, эффективно взаимодействует с отрицательно заряженной ХО-групной параоксона, что способствует быстрому гидролизу параоксона. В случае незаряженной молекулы [лугамина (Q) в 191 позиции PONI такой механизм взаимодействия между ферментом и субстратом невозможен (Bryk В. et al, 2005), Таким образом, есть все основания полагать, что в зависимости от того, какая аминокислота (аргинин или глутамин) находится в 191 позиции PONI, может меняться степень и антиОкисйительной активности этого фермента.

Анализ вклада вариантов генов PON/ и ARCA í п риск развития атеросклероза н ишемического инсульта до 45 лет. При оценке вклада любого фактора в развитие какого-либо заболевания наиболее информативной является группа больных с его ранней клинической -манифестацией. Поскольку группы пациентов с атеросклерозом и пациентов, перенесших ИИ, были гетерогенными по возрасту первых клинических проявлений заболеваний, из этих групп пациентов были выделены йкуцруппы больных с клиническим дебютом атеросклероза и ИИ до 45 лет. Частота генотипа RRI9I по гену PONI в подгруппах пациентов с ранней манифестацией атеросклероза и ИИ возрастала до 22.2° о и 12.7% соответственно и была выше в группах больных по сравнению с контрольными группами (р<0.0001 и р<0.002 соответственно). Относительный риск развития атеросклероза и ИИ до 45 лет у носителей генотипа IiR¡91 выше в 8.6 и 4.2 раза соответственно по сравнению с носителями генотипов QR191 и QQ191 ((95%СГ: 4.46-16.66} и <95%С1: 1.7110.46), соответственно) (Рисунок 2).

Рисунок 2. Относительный риск развития атеросклероза и ишемического инсульта у носителей генотипа RR191 по гену PONÍ в общих группах и в подгруппах с дебютом заболеваний до 45 лет. Сокращения: OR -относительный риск

Не установлено различий в частотах других исследованных вариантов генов PON! и ЛВС (/ между подгруппами пациентов с атеросклерозом и ИИ до 45 лет и контрольной группой. Следует отметить, что при анализе вклада некоторых вариантов генов PONI (L54M) и А ВС А1 (R219K. (-17)C<G¡ в развитие атеросклероза, ИМ и ИИ, не удалось установить ассоциации этих вариантов ни с риском развития атеросклероза, ИМ и ИИ, ни со степенью атерос кле р оти ческнх повреждений сосудов. Полученные результаты

свидетельствуют о том, что эти варианты не вносят вклад в развитие атеросклероза, ИМ и ИИ у жителей Санкт-Петербурга

В контрольных группах частоты вариантов генов PONI (Q191R, L54M, (-108)С<Т) и ARCA] (R219K, Im<G319, (-17)C<G) были близки к значениям в европеоидных популяциях (Clee S М et al, 2000, Tomas М et al, 2004, Zwartz К Y et al, 2002)

Многофакторный анализ относительного риска развития инфаркта миокарда до 45 лет у мужчин и атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и молодом (до 45 лет) возрасте. Поскольку атеросклероз и ИМ являются многофакторными заболеваниями, в настоящем исследовании был проведен анализ еочетанного вклада различных факторов в риск развития этих заболеваний Анализ проводился методом логистической регрессии Этот метод позволяет проводить анализ одновременного влияния на риск развития заболевания как количественных (в данном случае - экзогенных факторов риска), так и качественных переменных (вариантов генов) В ходе анализа были учтены традиционные экзогенные факторы риска развития атеросклероза и ИМ (курение, концентрация ОХС и Х-ЛПВП в плазме крови) и наследственные факторы (варианты генов PONI и АВСА1) Выбор каждой переменной для анализа был обусловлен тем, что эта переменная отличалась в группах пациентов и в соответствующих контрольных группах Средние величины индекса курения и концентрации ОХС в плазме крови были выше в группе больных с атеросклерозом и ИМ по сравнению с соответствующими контрольными группами Средняя концентрация холестерина антиатерогенных ЛПВП, напротив, была ниже в группах больных, чем в контрольных группах Частота генотипа RR191 по гену PONI была выше, в группах пациентов по сравнению с контрольными группами Частота аллеля G3I9 гена АБСА] была ниже в группе пациентов с подтвержденным методом ангиографии атеросклерозом, а генотипа СС(-108) по гену PONI - в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, чем в контрольных группах При анализе была построена пошаговая модель На каждом последующем шаге в модель включался менее значимый фактор, влияющий на относительный риск развития атеросклероза и ИМ Незначимые в отношении риска развития заболевания независимые переменные не были включены ни в один из шагов построенной модели Результаты многофакторного анализа приведены в таблице 5 Следует отметить, что курение - наиболее значимый из всех проанализированных в настоящем исследовании факторов риска развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и до 45 лет, и ИМ у мужчин до 45 лет Вариант QI9IR гена PONI является вторым по значимости из пяти проанализированных факторов, вносящих вклад в риск развития атеросклероза до 45 лет Необходимо подчеркнуть, что вариант Q191R гена PONI влияет на относительный риск развития атеросклероза до 45 лет в большей степени, чем концентрация Х-ЛПВП и ОХС в плазме крови Вероятно, на риск развития атеросклероза в молодом возрасте показатели липидного обмена оказывают менее существенное влияние, чем другие факторы, в частности - курение и детерминанты, определяющие ПОЛ При многофакторном анализе во всех

группах больных носитсльство генотипа RR191 по гену PONI значимо увеличивало риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и в возрасте до 45 лет, ИМ у мужчин до 45 лет Следует отметить, что уровень ОХС в плазме крови хотя и влиял независимо на относительный риск развития ИМ у мужчин до 45 лет, но менее значимо, чем индекс курения пачек/лег, концентрация Х-ЛПВП в плазме крови и вариант Q19IR гена PONI

Таблица 5

Результаты многофакторного анализа в группе пациентов с атеросклерозом в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и до 45 лет,

Значимость фактора Группа мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет Группа пациентов с атеросклерозом в возрасте от 32 до 69 лет Группа пациентов с атеро склерозом до 45 лет

1 Индекс курения пачек/лет (р<0 0001) ÓR=Í 1 : OR=l 11 ; ÖR=1 i 2 (95%CI 1 04- ■ (95%CI 1 08- ■ (95%CI 1 091 09) , 1 15) . 1 17)

2 Х-ЛПВП в плазме крови (p<0 0001) OR=0 20 OR=0 18 (95%CI 0 09- ' (95%CI 0 030 43) 0 09) RR191PONI, р<0 001, OR=5 56 (95%СТ 1 7311 49)

3 RR191PON1 P=0 002, OR = : p<0 03, OR=5 57 5 15 (95%CI 1 28-(95%CI 1 80- : 13 15) 13 10) ! Х-ЛПВП в плазме крови, р<0 001, OR=0.16 (95%С1 0 030 11)

4 ОХС в плазме крови, р=0 002, OR-1 3 (95%С1 1 101 55) < £

Сокращения ОХС - общий холестерин в плазме крови, Х-ЛПВП - холестерин липопротеинов высокой плотности

На риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и до 45 лет концентрация ОХС в плазме крови не оказывала значимого независимого влияния Это явилось неожиданным результатом, поскольку концентрация ОХС в плазме крови всегда учитывается при подсчете индивидуального риска развития ИБС, атеросклероза (Wierzbicki AS et al, 2003) Несмотря на то, что частота аллеля G319 теш АБСА 1 была ниже в группе пациентов с атеросклерозом, а частота 1енотипа СС(-108) по 1ену PONI - в

группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, по сравнению с

соответствующими контрольными группами, в сочетании с другими рассмотренными факторами, эти варианты не влияют на относительный риск развития атеросклероза и ИМ у мужчин до 45 лет соответственно

Таким образом, у жителей Санкт- Петербурга носительство генотипа RR191 по гену PONI значимо и независимо повышает риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и до 45 лет, ИМ у мужчин до 45 лет

выводы

1 В контрольных группах лиц, живущих в Санкт-Петербурге, определены частоты вариантов генов PONI Q191R (QQ - 62 \ %, QR - 34 6%, RR - 3 3%), L54M(LL - 44 1%, LM-44.9%, ММ- 11 0%), (-108)С<Т(СС - 29 5%, СТ- 46 2%, 77 27 9%) и АВСА1 R219K(RR - 50 2%, RK - 43 3%, КК 6 5%), Ins<G319 (GG -25 4%, NG - 74 6%), (-17)C<G (СС - 51 9%,CG - 43 8%, GG - 4 4%)

2 Установлено, что у пациентов всех исследованных групп в группе пациентов с атеросклерозом, подтвержденным методом ангиографии, в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, и в группе больных, перенесших ишемический инсульт, повышена частота генотипа RR191 по гену PONI по сравнению с контрольными группами (11 8%, 10 7% и 9 0%, соответственно, р=0 001, р=0 01, р=0 02, соответственно) Носительство генотипа RR191 по гену PONI повышает риск развития атеросклероза в 3 6 раз, инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет - в 2 8 раз, ишемического инсульта - в 2 6 раза (95%CI 1 886 78, 95%CI 1 26-5 38, 95%CI 1 26-5 38, соответственно) Риск развития атеросклероза и ишемического инсульта в возрасте до 45 лет при носительстве генотипа RR19I по гену PONI повышен в 8 6 и 4 2 раза соответственно (95%СТ 1 71-10 46, 95%С1 4 46-16 66, соответствешю)

3 Установлено, что частота аллеля G319 гена ÁBCA1 в группе пациентов с атеросклерозом ниже по сравнению с контрольной группой (15 1% и 25 4% соответственно, р=0 03) Носительство аллеля G319 гена АВСА1 понижает относительный риск развития атеросклероза (OR = 0 55, df=l, (95%С1 0 860 35) и ассоциировано с меньшей степенью артериального стеноза (средняя степень стеноза при отсутствии и наличии аллеля G3I9 3 47±0 98 и 2 75±0 68 балла, соответственно, р=0 017)

4 Установлено повышение частоты генотипа СС(-108) по гену PONI в контрольной группе по сравнению с группой мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет (30 6% и 20 0% соответственно, р=0 02) Относительный риск развития инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет понижен у носителей генотипа СС(-108) по гену PONI (OR (СС vs СТ+ТТ) = 0 57 , df=l, (95%CI 0 36-0 17))

5 Установлено, что среди таких факторов, как курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, генотип RR191 по гену PONI является третьим по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) (р<0 03, OR = 5 57 (95%CI 1 28-13 50)) и инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет (р = 0 002, OR = 5 15 (95%CI 1 80-13 1)) и вторым по

значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза до 45 лет (р <0.001, OR = 5 56 (95%CI 1 73-11 49)) среди жителей Санкт-Петербурга ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Для профилактики атеросклероза, инфаркта миокарда и ишемического инсульта рекомендуется типирование варианта Q191R гена PON1, в первую очередь среди курильщиков до 45 лет, для выявления носителей генотипа RR191, повышающего риск развития этих заболеваний

2 При профилактике инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет рекомендуется типирование варианта (-108)С<Т гена PON1 для выявления лиц мужского пола, являющихся носителями аллеля (-108)7, повышающего риск развития инфаркта миокарда

3 У пациентов с атеросклерозом рекомендуется типирование варианта 319ms<G гена АВСА1 для оценки прогноза и возможной дополнительной терапевтической коррекции заболевания

Список публикаций автора по теме диссертации

1 Шейдина А М , Пчелина С Н , Демидова Д В , Родыгина Т И , Тараскина А Е , Топерверг О Б , Беркович О А , Демина Е В , Шварц Е И , Погода Т В , Генерозов Э В , Говорун В М , Лопухин Ю М , Шевченко Ю А Анализ частоты выявления четырех структурных полиморфизмов ДНК в промоторной и 5'-нетранслируемых областях гена АВСА1 у мужчин, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте Кардиоло1 ия, 2004, 8 40-45

2 Шейдина А М , Пчелина СП, Родыгина Т И, Сироткина О В , Тараскина А Е , Ходжаянц Н Е , Шварцман А Л , ¡Шварц Е И [ Аллельные варианты генов PON1 и АВСА1 как факторы риска развития ишемического инсульта Медицинская генетика, 2006,2 40-44

3 Шейдина А М , Тараскина А Е , Родыгина Т И , Демина Е П , Пчелина С Н , Беркович О А , Шляхто Е В , Шварц Е И Молекулярные дефекты обратного транспорта холестерина как фактор риска инфаркта миокарда (ИМ) Материалы конгресса ассоциации кардиологов стран СНГ «Фундаментальные исследования и прогресс в кардиологии», Москва, 11 — 13 октября, 2003 Кардиология СНГ (приложение), 2003, (1)1 322

4 Тараскина А Е , Шейдшт А М., Родыгина Т И , Демина Е П , Пчелина С.Н , Шварц ЕИ Аллельные полиморфизмы гена АВСА1 у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической генетики» Москва, 2527 ноября 2003 Медицинская генетика (приложение), 2003, (1)1 297

5 Родыгина Т И , Демина Е П , Ходжаянц Н Е , Шейдина А М , Пчелина С Н Вклад аллельных вариантов генов АТФ-связывающего кассетного транспортера А1 (АВСА1) и параоксопазы (PON1) в формирование предрасположенности к развитию ишемического инсульта Медицинская генетика (приложение), 2005, (4)6 259

6 Pchelina S, Sheydina A, Rodygma Т, Taraskina A, Schwarzman А АВСА1 Transporter And Paraoxonase Gene Polymorphisms In Myocardial Infarction And

Stroke XX ISTH Congress, Australia, August 6-12, 2005 J Thrombosis & Haemobtasis, 2005, (1)3 2318

7 Sheydina A, Pchelina S„ Démina E, Rodygina T, Sehwarzman A The study of genetics risk factors predisposing to myocardial infarction in young man XX ISTH Congress, Austialia, August 6-12, 2005 // J Thrombosis & Haemostasis, 2005, (1)3 1126

8 Pchelina S, Sheydina A, Rodygina, T, Schwaizman, A Paraoxonase gene polymorphisms and cardiovascular diseases International Congress "Hypertension -from Korotkov to present days", S Petersburg, Russia, 2005 // Abstract book, p 104

9 Rodygina, T, Sheydina, A, Démina E, Pchelina, S, Sehwarzman A The genetic risk factors of ischemic stroke International Congress "Hypertension - from Korotkov to present days", S Petersburg, Russia, 2005, Abstract book, 115

10 Sheydina A , Pchelina S , Rodygina T , Démina E , Sehwarzman A Genes of lipid metabolisms and myocardial infarction. International Congress "Hypertension - fiom Korotkov to present days", S Petersburg, Russia, 2005, Abstract book, 121

11 Родыгина T И Генетические факторы риска развития атеросклероза Материалы Всероссийского конгресса кардиологов, Москва, 15-18 октября, 2005 Кардиоваскулярная терапия и профилактика (приложение), 2005, (4) 296

12 Шейдина AM , Пчелина С H , Родыгина Т И , Демина Е П , Шварцман A JT Гены липидного обмена и инфаркт миокарда у мужчин молодого возраста Материалы Всероссийского конгресса кардиологов, Москва, 15-18 октября, 2005 Кардиоваскулярная терапия и профилактика (приложение), 2005, (4) 317

13 Демина Е И , Родыгина Т И , Шейдина A M , Курьянов П С , Вавилов В H , Пчелина СН, Шварцман АЛ Новый аллельный вариант Т(-4661)С в 5'-фланкирующей области гена АБСА] Материалы Всероссийского конгресса кардиологов, Москва, 16-19 октября, 2005 Кардиоваскулярная терапия и профилактика (приложение), 2006, (5) 117

14 Родыгина Т И , Демина Е П, Шейдина A M, Курьянов П С , Вавилов В П., Пчелина С H, Шварцман А Л Вклад аллельных вариантов генов АВСА1 и PON1 в развитие атеросклероза артерий Материалы Всероссийского конгресса кардиологов, Москва, 16-19 октября, 2005 Кардиоваскулярная терапия и профилактика (приложение), 2006, (5) 313

15 Зверева В В , Демина Е П , Родыг ина Т И , Курьянов П С , Шейдина A M Разработка метода измерения уровня экспрессии гена АВСА1 в лейкоцитах крови Материалы конференций политехнического симпозиума, Санкт-Петербург, 2006 Молодые ученые - промышленности Северо-Западного региона 2006, 5(1) 191

16 Rodygina T, Démina E , Sheydina А , Zvereva V , Denisenko А , Shvarcman А АВСА1 transporter m atherosclerosis development European Human Genetics Conference, France, June 16-19,2007 European J of Human Genetics, 1(15) 180-81

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Родыгина, Татьяна Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Патогенез атеросклероза. Роль липопротеинов.

1.1.1 Факторы риска развития атеросклероза.

1.1.2 Патоморфология атеросклероза.

1.1.3 Система транспорта липидов в плазме крови. Роль липопротеинов

1.1.4 Антиатерогенные функции липопротеинов высокой плотности

1.1.5 Роль перекисного окисления липидов в патогенезе атеросклероза

1.1.6 Антиокислительные свойства липопротеинов высокой плотности

1.2 Роль параоксоназы 1 в развитии атеросклероза.

1.2.1 Семейство параоксоназы.

1.2.2 Структура и свойства белка-фермента параоксоназы 1.

1.2.3 Субстраты параоксоназы 1.

1.2.4 Антиокислительные и другие антиатерогенные свойства параоксоназы 1.

1.2.5 Концентрация и активность параоксоназы 1.

1.2.6 Варианты гена PON1.

1.2.6.1 Варианты в кодирующей области гена PON1 и их влияние на активность параоксоназы 1.

1.2.6.2 Роль вариантов Q191R и L54Mгена PON1 в развитии атеросклероза.

1.2.7 Варианты в регуляторных областях гена PON1.

1.3 Обратный транспорт холестерина.

1.3.1 Этапы обратного транспорта холестерина.

1.3.2 Роль АВСА1 транспортера в первом этапе обратного транспорта холестерина.

1.3.3 Транспорт холестерина липопротеинами высокой плотности.

1.4 Роль АВСА1 в развитии атеросклероза.

1.4.1 Открытие гена АВСА1, дефектного при болезни острова Танжер .:.

1.4.2 Структура и функции белка АВСА1 транспортера.

1.4.3 Регуляция экспрессии гена АВСА1.

1.4.4 Исследования, доказывающие роль АВСА1 транспортера в развитии атеросклероза.

1.4.5 Варианты теяаАВСА!.

1.4.5.1 Варианты |з регуляторных областях гена АВСА1.

1.4.5.2 Варианты в кодирующей области гена АВСА1.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Характеристика обследуемых групп.

2.2 Измерение концентрации липидов в плазме крови.

2.3 Выделение геномной ДНК из лейкоцитов периферической крови человека.

2.4 Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ.

2.4.1 Идентификация варианта (-108)С<Тгена PON1.

2.4.2 Идентификация варианта Q191R гена PON1.

2.4.3 Идентификация варианта L54Mгена PON1.

2.4.4 Идентификация варианта 319ins<G гена АВСА1.

2.4.5 Идентификация варианта (~17)C<G гена АВСА1.

2.4.6 Идентификация варианта R219K гена АБСА 1.

2.5 Статистическая обработка результатов.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Анализ вклада вариантов генов PON1 (Q191R, L54M, (-108)С<Т) и АВСА1 (R219K, 319ins<G, (-17)C<G) в развитие атеросклероза.

3.1.1 Анализ вклада вариантов гена PON1 (Q191R, L54M, (~108)С<Т) в развитие атеросклероза.

3.1.2 Анализ вклада вариантов гена АВСА1 (.R219K, 319ins<G,

-17)C<G) в развитие атеросклероза.

3.1.3 Анализ корреляции вариантов генов PON1 (Q191R, L54M,

-108)С<Т и АВСА1 (R219K, (-17)C<G, 319ins<G) с концентрацией липидов в плазме крови в группе пациентов с атеросклерозом, подтвержденным методом ангиографии.

3.1.4 Анализ корреляции вариантов генов PON1 (Q191R, L54M, (~108)С<Т) и АВСА1 СR219K, 319ins<G, (-17)C<G ) с тяжестью атеросклеротических повреждений сосудов в группе пациентов с атеросклерозом, подтвержденным методом ангиографии.

3.1.5 Анализ корреляции между длительностью атеросклероза и степенью атеросклеротических повреждений сосудов.

3.2 Анализ вклада вариантов генов PON1 (Q191R, L54M, (-108)С<Т) и АВСА1 (.R219K, 319ins<G, (-17)C<G) в развитие инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет.

3.2.1 Анализ вклада вариантов гена PON1 {Q191R, L54M, (-108)С<Т) в развитие инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет.

3.2.2 Анализ вклада вариантов гена АВСА1 (R219K, Ins<G319, (~17)C<G) в развитие инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет.

3.2.3 Анализ корреляции вариантов генов PON1 (Q191R, L54M,

-108)С<Т) и АВСА1 (R219K, 319ins<G, (~17)C<G) с концентрацией липидов в плазме крови в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет.

3.3 Анализ вклада вариантов генов PON1 (QJ9JR, L54M, (-108)С<Т) и АВСА1 (R219K, (~17)C<G, 319ins<G) в развитие ишемического инсульта

3.3.1 Анализ вклада вариантов гена PON1 (Q191R, L54M, С(-108)Т) в развитие ишемического инсульта.

3.3.2 Анализ вклада вариантов гена АВСА1 (R219K, 319ins<G,

-17)C<G) в развитие ишемического инсульта.

3.4 Анализ вклада вариантов генов PON1 {Q191R, L54M, (~108)С<Т) и АВСА1 {R219K, 319ins<G, (-17)C<G) в риск развития атеросклероза и ишемического инсульта до 45 лет.

3.5 Многофакторный анализ относительного риска развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и до 45 лет и инфаркта миокарда до 45 лет у мужчин.

3.5.1 Многофакторный анализ относительного риска развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет).

3.5.2 Многофакторный анализ относительного риска развития атеросклероза в возрасте до 45 лет.

3.5.3 Многофакторный анализ относительного риска развития инфаркта миокарда до 45 лет у мужчин.

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярная диагностика наследственной предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям: варианты генов параоксоназы I и кассетного транспортера АВС А1 как факторы риска"

Заболевания сердечно-сосудистой системы, обусловленные атеросклерозом, занимают первое место среди причин, приводящих к смерти, во многих странах мира, в том числе в России. По данным Министерства здравоохранения России, смертность от заболеваний, вызванных атеросклерозом, составляет более 50% от всех причин, приводящих к смерти. Поэтому разработка программ ранней диагностики, профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний - одна из важнейших задач здравоохранения. В зависимости от локализации артерий, пораженных атеросклерозом, может развиваться ишемическая болезнь сердца (ИБС), в том числе инфаркт миокарда (ИМ), нарушение кровообращения головного мозга, в том числе ишемический инсульт (ИИ), облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей (Алмазов В.А. и др., 1997). Одним из основных методов, используемых для дифференциальной диагностики атеросклероза, является рентгеновская ангиография. На сегодняшний день это единственный объективный метод оценки состояния артерий (Данилов Н.М. и др., 2006). Проблема, однако, заключается в том, что ангиография сосудов проводится, как правило, при клинически выраженных признаках атеросклероза, является инвазивным методом диагностики с высоким процентом осложнений и рядом противопоказаний (Данилов Н.М. и др., 2006; Чернявский A.M. и др., 2006) и не может заменить методы ранней диагностики, необходимой для профилактики заболевания.

Ключевое место в современной концепции патогенеза атеросклероза занимает понятие «фактор риска», обозначающее любое состояние, между наличием которого и повышенной встречаемостью заболевания существует причинно-следственная связь (Фогель Ф., Матульский А., 1989). Установлен целый ряд традиционных факторов риска атеросклероза, к которым относятся: возраст, мужской пол, курение, нарушения липидного обмена, артериальная гипертензия, диабет (Липовецкий Б.М., 2000; Wierzbicki A.S. et al, 2003). Однако подход, основанный на анализе общеизвестных факторов риска, не всегда позволяет точно рассчитать относительный риск развития атеросклероза и выявить ранние стадии этого заболевания у конкретного пациента. Вместе с тем современные исследования показывают, что наряду с традиционными факторами риска существенную роль играет наследственная предрасположенность к развитию атеросклероза, позволяющая проводить раннюю диагностику и профилактику заболевания. В этой связи, особый интерес уделяется явлению аллельного полиморфизма, которое присуще большинству генов человека и может лежать в основе генетических и биохимических методов, составляющих основу как эпидемиологических исследований, так и конкретной лабораторной диагностики. Современная стандартизированная шкала риска развития сердечно-сосудистых заболеваний не учитывает наследственные факторы и популяционно-зависимый характер факторов риска. Необходимость выявления вариантов генов, которые могут вносить вклад в развитие атеросклероза, ИМ и ИИ и использоваться в клинических лабораториях Санкт-Петербурга для молекулярной диагностики наследственной предрасположенности к этим заболеваниям, послужила основанием для проведения настоящего исследования.

Исходя из механизмов этиопатогенеза, лежащих в основе развития атеросклероза, ИМ и ИИ, для настоящего исследования были выбраны детерминанты, определяющие процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и обратного транспорта холестерина (ОТХ) (Климов А.Н. и др., 2001; Escola-Gil J.C. et al, 2006; Mackness M.I. et al., 2004). ПОЛ является инициирующим этапом атерогенеза (Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1999). Одним из сновных белков, регулирующих степень ПОЛ, является параоксоназа 1 (PON1), антиокислительная функция которой имеет существенное значение в обмене ЛП (Himbergen Т.М., et al, 2006).

Пониженная каталитическая активность PON1, обусловленная как генетическими факторами, так и токсическими воздействиями среды, может приводить к усиленному ПОЛ и ускоренному развитию атеросклероза (Himbergen Т.М. et al, 2006; Mackness M.I. et al., 2004). Ключевым белком ОТХ является аденозин-трифосфат связывающий кассетный транспортер класса Al (АВСА1), регулирующий перенос холестерина (ХС) из периферических клеток на частицы антиатерогенных липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). Нарушения функционирования белка АВСА1 или изменение экспрессии гена АВСА1 приводят к ускоренному темпу атерогенеза и раннему развитию атеросклероза (Oram J.F., Heinecke J.W., 2005).

Основываясь на этих данных, было сделано предположение, что варианты генов АВСА1 и PON1 могут вносить вклад в развитие атеросклероза, ИМ и ИИ. Эта гипотеза послужила предпосылкой для проведения настоящего исследования.

Цель исследования

Изучение вклада вариантов генов АВСА1 и PON1 в развитие атеросклероза и его осложнений - инфаркта миокарда и ишемического инсульта у жителей Санкт-Петербурга.

Задачи исследования

1 Определить частоту вариантов генов PON1 (Q191R, L54M, (~108)С<Т и АВСА1 (R219K, 319ins<G, (~17)C<G) в группах: пациентов с атеросклерозом, подтвержденным ангиографическим методом; мужчин, перенесших инфаркт миокарда в возрасте до 45 лет; пациентов, перенесших ишемический инсульт; в контрольных группах.

2 Оценить вклад вышеперечисленных вариантов генов PON1 и АВСА1 в риск развития атеросклероза, в том числе до 45 лет, инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 45 лет; и ишемического инсульта, в том числе до 45 лет, у жителей Санкт-Петербурга.

3 Провести корреляционный анализ вышеперечисленных вариантов генов PON1 и АВСА1 со степенью тяжести атеросклероза, подтвержденного ангиографическим методом.

4 Провести многофакторный анализ относительного риска развития атеросклероза, в том числе до 45 лет, инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет, с учетом следующих факторов: курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, варианты генов PON1 и АВСА1.

Научная новизна полученных результатов

1 Впервые дана оценка частоты вариантов генов PON1 (Q191R, L54M, (~108)С<Т и АБСА1 ((-17)C<G, 319ins<G, R219K) у жителей Санкт-Петербурга, а также среди пациентов с атеросклерозом, подтвержденным ангиографическим методом, мужчин, перенесших инфаркт миокарда в возрасте до 45 лет, пациентов, перенесших ишемический инсульт, живущих в Санкт-Петербурге.

2 Впервые показано, что генотип RR191 по гену PON1 является фактором риска развития атеросклероза, инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 45 лет, ишемического инсульта среди жителей Санкт-Петербурга. Впервые показано, что генотип RR191 по гену PON1 является фактором риска развития атеросклероза и ишемического инсульта в возрасте до 45 лет.

3 Впервые показано, что генотип СС(-108) по гену PON1 снижает риск развития инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет, живущих в Санкт-Петербурге.

4 Впервые показано, что носительство аллеля G319 гена АВСА1 понижает относительный риск развития атеросклероза и ассоциировано с уменьшением средней степени артериального стеноза у жителей Санкт-Петербурга.

5 Впервые показано, что среди таких факторов, как: курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, генотип RR191 по гену PON1 является третьим по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет и вторым по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза до 45 лет среди жителей Санкт-Петербурга.

Практическое значение работы

Показана целесообразность типирования в лабораториях и клиниках Санкт-Петербурга варианта Q191R гена PON1 для выявления лиц, являющихся носителями генотипа RR191, повышающего относительный риск развития атеросклероза и его осложнений - инфаркта миокарда, ишемического инсульта. Выявление носителей генотипа RR191, в первую очередь среди курильщиков до 45 лет, диктуется необходимостью учитывать вариант Q191R гена PON1 при подсчете индивидуального риска развития атеросклероза, инфаркта миокарда, с целью профилактики этих заболеваний у жителей Санкт-Петербурга. Вариант Q191R гена PON1, наряду с такими широко известными лабораторными показателями, как концентрация общего холестерина и холестерина липопротеинов высокой плотности в плазме крови, может учитываться при формировании групп риска развития сердечно-сосудистых заболеваний среди жителей Санкт-Петербурга.

Для профилактики инфаркта миокарда у мужчин в молодом возрасте (до 45 лет) рекомендуется раннее выявление лиц мужского пола, являющихся носителями аллеля (~108)Т тепо. PON1. В группах пациентов с атеросклерозом необходимо типирование варианта 319ins<G гена АВСА1 для оценки прогноза и возможной дополнительной терапевтической коррекции заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Частота генотипа RR191 по гену PON1 выше в группах пациентов с атеросклерозом, подтвержденным ангиографическим методом, в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте (до 45 лет), и в группе пациентов, перенесших ишемический инсульт, чем в контрольных группах. По сравнению с носителями генотипов QR191 и QQ191 риск развития атеросклероза, инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 45 лет и ишемического инсульта у носителей генотипа RR191 по гену PON1 повышен. Генотип RR191 по гену PON1 является фактором риска развития атеросклероза и ишемического инсульта до 45 лет.

2 Частота аллеля G319 гена АВСА1 ниже в группе пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой. Носительство аллеля G319 гена АВСА1 понижает относительный риск развития атеросклероза и ассоциировано с уменьшением средней степени артериального стеноза.

3 Частота генотипа СС(-108) по гену PON1 ниже в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, по сравнению с контрольной группой. Носительство генотипа СС(-108) по гену PON1 уменьшает риск развития инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет.

4 Среди таких факторов, как: курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, генотип RR191 по гену PON1 является третьим по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) и инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет и вторым по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза до 45 лет среди жителей Санкт-Петербурга.

Апробация работы

Результаты работы были доложены на конгрессе ассоциации кардиологов стран СНГ «Фундаментальные исследования и прогресс в кардиологии», Москва, 2003г; на Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической генетики», Москва, 2003г; на ежегодном конгрессе Медицинских генетиков, Уфа, 2005; на международном конгрессе «Гипертензия - от Короткова до наших дней», Санкт-Петербург, 2005; на Всероссийском конгрессе кардиологов, Москва, 2005; на Всероссийском конгрессе кардиологов, Москва, 2006; на конференции политехнического симпозиума «Молодые ученые -промышленности Северо-Западного региона», Санкт-Петербург, 2006; на Европейской конференции по генетике человека, Ницца, 2007.

По теме диссертации опубликовано 16 работ, из них 2 статьи.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, иллюстрирована 24 рисунками и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 148 научных источника (16 -на русском языке и 132 - на иностранном).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Родыгина, Татьяна Ивановна

ВЫВОДЫ

1 В контрольных группах лиц, живущих в Санкт-Петербурге, определены частоты вариантов генов PON1: Q191R (OQ - 62.1%, QR - 34.6%, RR -3.3%), L54M (.LL - 44.1% , LM - 44.9%, ММ - 11.0%), (~108)С<Т {СС -29.5%, СТ-46.2%, ТГ-27.9%) и АВСА1: R219K (RR - 50.2%, Ж- 43.3%, КК - 6.5%); 319ins<G {GG - 25.4%, NG - 74.6%), (-17)C<G {СС - 51.9%, CG-43.8%, GG-4.4%).

2 Установлено, что у пациентов всех исследованных групп: в группе пациентов с атеросклерозом, подтвержденным методом ангиографии, в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, и в группе больных, перенесших ишемический инсульт, повышена частота генотипа RR191 по гену PON1 по сравнению с контрольными группами (11.8%, 10.7% и 9.0%, соответственно; р=0.001, р=0.01, р=0.02, соответственно). Носительство генотипа RR191 по гену РОЮ повышает риск развития атеросклероза в 3.6 раз, инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет - в 2.8 раз, ишемического инсульта - в 2.6 раза (95%С1: 1.88-6.78; 95%С1: 1.26-5.38; 95%С1: 1.26-5.38, соответственно). Риск развития атеросклероза и ишемического инсульта в возрасте до 45 лет при носительстве генотипа RR191 по гену РОЮ повышен в 8.6 и 4.2 раза соответственно (95%С1: 1.71-10.46; 95%С1: 4.46-16.66, соответственно).

3 Установлено, что частота аллеля G319 гена АВСА1 в группе пациентов с атеросклерозом ниже по сравнению с контрольной группой (15.1% и 25.4% соответственно; р=0.03). Носительство аллеля G319 гена АВСА1 понижает относительный риск развития атеросклероза (OR = 0.55, df=l, (95%CI: 0.86-0.35) и ассоциировано с меньшей степенью артериального стеноза (средняя степень стеноза при отсутствии и наличии аллеля G319 3.47±0.98 и 2.75±0.68 балла, соответственно; р=0.017).

4 Установлено повышение частоты генотипа СС(-108) по гену PON1 в контрольной группе по сравнению с группой мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет (30.6% и 20.0% соответственно; р=0.02). Относительный риск развития инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет понижен у носителей генотипа СС(-108) по гену PON1 (OR (СС vs СТ+ТТ) = 0.57 , df=l, (95%С1: 0.36-0.17)).

5 Установлено, что среди таких факторов, как курение, концентрация холестерина липопротеинов высокой плотности и общего холестерина в плазме крови, генотип RR191 по гену PON1 является третьим по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза в широком возрастном диапазоне (от 32 до 69 лет) (р<0.03; OR = 5.57 (95%CI: 1.28-13.50)) и инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет (р = 0.002; OR = 5.15 (95%С1:1.80-13.1)) и вторым по значимости фактором, повышающим риск развития атеросклероза до 45 лет (р <0.001; OR = 5.56 (95%С1:1.73-11.49)) среди жителей Санкт-Петербурга.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Для профилактики атеросклероза, инфаркта миокарда и ишемического инсульта рекомендуется типирование варианта Q191R гена PON1, в первую очередь среди курильщиков до 45 лет, для выявления носителей генотипа RR191, повышающего риск развития этих заболеваний.

2 При профилактике инфаркта миокарда у мужчин до 45 лет рекомендуется типирование варианта (~108)С<Т гена PON1 для выявления лиц мужского пола, являющихся носителями аллеля (~108)Т, повышающего риск развития инфаркта миокарда.

3 У пациентов с атеросклерозом рекомендуется типирование варианта 319ins<G гена АВСА1 для оценки прогноза и возможной дополнительной терапевтической коррекции заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Родыгина, Татьяна Ивановна, Санкт-Петербург

1. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2. Алмазов В.А., Атыков О.Ю., Беленков Ю.Н. и др. Болезни органовкровообращения. Руководство по внутренним болезням. Под ред. Чазова Е.И. М.: Медицина. 1997, стр. 230-233, 693-694

3. Аничков Н.Н. Новые данные по вопросу о патологии и этиологии атеросклероза (артериосклероза). Русский врач 1915; 14(8): 184-186; 14(9): 207-211

4. Арутюнов Г.П. Принципы первичной профилактики коронарной болезни сердца. РМЖ 2002; 10(17): 758-762

5. Данилов Н.М., Матчин Ю.Г., Горгадзе Т.Т. и др. Рентгеновская коронарная ангиография: показания к применению. Справочник поликлинического врача 2006; 4(8)

6. Климов А.Н., Кожевникова К.А., Кузьмин А.А., Кузнецов А.С., Белова Е.В. О способности липопротеинов высокой плотности удалять продукты перекисного окисления фосфолипидов из эритроцитарных мембран. Биохимия 2001; 66: 371-377

7. Климов А.Н., Кожемякин П.А., Плесков В.М. и др. Антиоксидантный эффект липоротеидов высокой плотности при перекисном окислении липопротеидов низкой плотности. Бюл. экспер. биол. 1987; 5: 550-552

8. Культурная инициатива 2002. стр. 251 Ю.Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. СПб.: Питер. 1999. стр. 432

9. Липовецкий Б.М. Клиническая липидология. СПб.: Наука. 2000. стр. 119

10. Маниатис Т. и др. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. М.:Мир. 1984. стр. 480

11. Рагино Ю. И., Малютина С. К., Каштанова Е. В., и др. Окисленные липопротеины низкой плотности и их ассоциации с некоторыми факторами риска атеросклероза в популяции мужчин Новосибирска. Кардиология 2005; 10: 39-44

12. Фогель Ф., Матульский А. Генетика человека, М. 1989. стр. 1271б.Чернявский А.М, Караськов A.M., Мироненко С.П., Ковляков В.А. Хирургическое лечение мультифокального атеросклероза. Бюллетень СО РАМН 2006; 2: 120-125

13. Aiello R.J., Brees D., Bourassa P.A. et al. Increased atherosclerosis in hyperlipidemic mice with inactivation of ABCA1 in macrophages. Arterioscler Thromb Vase Biol 2002; 22: 630-637

14. Aldridge W.N. Serum esterases. An enzyme hydrolyzing diethyl nitrophenyl phosphate and its identity with A-esterase of mammalian sera. Biochem 1953; 53: 117-124

15. Aldridge W.N. Serum esterases. Two types of esterase (A and B) hydrolyzing nitrophenyl acetate, propionate and butirate, and a method for their determination. Biochem 1953; 53: 110-117

16. Andricovics H., Pongracz E., Kalina E. et al. Deacreased frequencies of ABCA1 polymorphisms R219K and V771M in Hungarian patients with cerebrovascular and cardiovascular diseases. Cerebrovasc Dis 2006; 21(4): 254-259

17. Anticainen M., Murtomaki S., Syvanne M. et al. The Gln-Argl91 polymorphism of the human paraoxonase gene is not associated with the risk of coronary arteiy diseases in Finns. J Clin Invest 1996; 98(4): 883885

18. Attie A.D., Kastelein J.P., Hayden M.R. Pivotal role of ABCA1 in reverse cholesterol transport influencing HDL levels and susceptibility to atherosclerosis. Journal of Lipid Research 2001; 42: 1717-1726

19. Aviram M., Rosenblat M. Paraoxonases 1, 2, and 3, oxidative stress, and macrophage foam cell formation during atherosclerosis development. Free Radic Biol Med 2004; 37: 1304-1316

20. Aviram M., Rosenblat M. Paraoxonases and cardiovascular disease: pharmacological and nutritional influences. Curr Opin Lipidol 2005; 16(4): 393-399

21. Aviram M., Rosenblat M., Bisgaier C.L. et al. Paraoxonase inhibits high density lipoprotein oxidation and preserves its functions. A possible peroxidative role for paraoxonase. J Clin Invest 1998; 101: 1581-1590

22. Aviram M., Rosenblat M., Gaitini D., et al. Pomegranate juice consumption for 3 years by patients with carotid arteiy stenosis reduces common carotid intima-media thickness, blood pressure and LDL oxidation. Clin Nutr 2004; 23: 423-433

23. Aydin M., Gencer M., Cetinkaya Y. et al. PONl 55/192 polymorphism, oxidative stress, type, prognosis and severity of stroke. IUBMB Life 2006; 58(3): 165-172

24. Ayub A., Mackness M.I., Arrol S. et al. Serum paraoxonase after myocardial infarction. Arterioscler Throbm Vase Biol 1999; 19: 330-335

25. Baum L., Ng H.K., Woo K.S. et al. Paraoxonase 1 gene Q192R polymorphism affects stroke and myocardial infarction risk. Clin Biochem 2006; 39(3): 191-195

26. Benton J.L., Ding J., Tsai M.Y. et al. Associations between two common polymorphisms in ABCA1 gene and subclinical atherosclerosis: MultiEthnic Study of Atherosclerosis. Atherosclerosis; in press

27. Blatter Garin M.C., James R.W., Dussoix P. et al. Paraoxonase polymorphism Met-Leu54 is associated with modified serum concentrations of the enzyme. J Clin Invest 1997; 99: 62-66

28. Bodzioch M., Orso E., Klucken J. et al. The gene encoding ATP-binding cassette transporter 1 is mutated in Tangier disease. Nat Genet 1999; 22(4): 347-351

29. Brophy V.H., Hastings M.D., Clendenning J.B. et al. Polymorphisms in the human paraoxonase (PONl) promoter. Pharmacogenetics 2001; 11: 77-84

30. Brousseau M.E., Bodzioch M., Schaefer E.J. et al. Common variants in the gene encoding ATP-binding cassette transporter 1 in men with low HDL cholesterol levels and coronary heart disease. Atherosclerosis 2001; 154: 607-611

31. Brunham L.R., Singaraja R.R., Terry D.P. et al. Accurate prediction of the functional significance of single nucleotide polymorphisms and mutations in the ABCA1 gene. PloS Genetics 2005; 1(6): 739-747

32. Вгук В., Moyal-Segal L.B., Podoly E. et al. Inherited and acquired interactions between ACHE and PONl polymorphisms modulate plasmaacetylcholinesterase and paraoxonase activities. J of Neurochemistry 2005; 92: 1216-1227

33. Bub A., Barth S.W., Watzl В., et al. Paraoxonase 1 Q192R (PONl-192) polymorphism is associated with reduced lipid peroxidation in healthy young men on a low-carotenoid diet supplemented with tomato juice. Br J Nutr 2005; 93(3): 291-297

34. Campo S., Sardo M.A, Trimarchi G. et al. Association between serum paraoxonase (PONl) gene promoter T(-107)C polymorphism, PONl activity and HDL levels in healthy Sicilian octogenarians. Exp Gerontol 2004; 39: 1089-1094

35. Carlson C.S., Heagerty Patrik J. et al. TaqSNP analyses of the PONl gene cluster: effects on PONl activity, LDL oxidative susceptibility and vascular disease. J of Lipid Res 2006; 47: 1014-1024

36. Catano H.C., Cueva J.L., Cardenans A.M. et al. Distribution of paraoxonase 1 gene polymorphisms and enzyme activity in a Peruvian population. Environ Mol Mutagen 2006; 47(9): 699-706

37. Cenarro A., Artieda M., Castillo S. et al. A common variant in the ABCA1 gene is associated with a lower risk for premature coronary heart disease in familial hypercholesterolaemia. J Med Genet 2003; 40: 163-168

38. Chi D.S., Ling W.H., Ma J. et al. Relationship between paraoxonase 1 55M/L, paraoxonase 2 148 Ala/Gly genetic polymorphisms and coronary artery disease. Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi 2006; 23(3): 289-293

39. Claudel Т., Leibowitz M.D., Fievet С. et al. Reduction of atherosclerosis in apolipoprotein E knockout mice by activation of the retinoid X receptor. Proc Natl Acad Sci U S A 2001; 98(5): 2610-2615

40. Clee S.M., Kastelein J.J., van Dam M.J. et al. Age and residual cholesterol efflux affect cholesterol levels and coronary artery disease in ABCA1 heterozygotes. Clin Invest 2000; 106(10): 1263-1270

41. Costa L.G., Cole T.B., Jarvik G.P., Furlong C.E. Functional genomic of the paraoxonase (PON1) polymorphisms: effects on pesticide sensitivity, cardiovascular disease, and drug metabolism. Annu Rev Med 2003; 54: 371-392

42. Draganov D.I., La Du B.N. Pharmacogenetics of paraoxonases: a breif review. Naunyn-Schiedeberg's Arch Pharmacol 2004; 369: 78-88

43. Draganov D.I., Teiber J.F., Speelman A. et al. Human paraoxonases (PON1, PON2, PON3) are lactonases with overlapping and distinct substrate specificities. J Lipid Res 2005; 46: 1239-1247

44. Durrington P.N., Mackness В., Mackness M.I. Paraoxonase and Atherosclerosis. Stroke 2002; 33: 1459-1464

45. Escola-Gil J.C., Cample-Berdiel L., Palomer X. et al. Antiatherogenic role of high-density lipoproteins: insights from genetically engineered-mice. Frontiers in Bioscience 2006; 11: 1328-1348

46. Evans D., Beil F.U. The association of R219K polymorphism in the ATP-binding cassette transporter 1 (ABCA1) gene with coronary heart disease and hyperlipidaemia. Mol Med 2003; 81(4): 264-270

47. Ferre N., Tous M., Paul A., et al. Paraoxonase Gln-Arg(192) and Leu-Met(55) gene polymorphisms and enzyme activity in a population with a low rate of coronary heart disease. Clin Biochem 2002; 35(3): 197-203

48. Fortunato G., Rubba P., Panico S. et al. Paraoxonase gene polymorphism, PON1 (55), is an independent risk factor for increased carotid intima-media thikness in middle-aged women. Atherosclerosis 2003; 167(1): 141-148

49. Frikke-Schmidt R., Nordestgaard B.G., Jensen G.B., Tybjaerg-Hansen A. Genetic variation in ABC transporter Al contributes to HDL cholesterol in the general population. J Clin Invest 2004; 114(9): 1244-1247

50. Jarvik G.P., Tsai N.T., McKinstry L.A. et al. Vitamin С and E Intake Is Associated With Increased Paraoxonase Activity. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2002; 22: 1329-1333

51. Gordon D.J., Probstfield J.L., Garrison R.J. et al. High-density lipoprotein cholesterol and cardiovascular disease. Four prospective American studies. Circulation 1989; 79(1): 8-15

52. Graner M., James R.W., Kahri J. et al. Association of paraoxonase 1 activity and concentration with angiographic severity and extent of coronary artery disease. J Am Coll Cardiol 2006; 47(12): 2429-2435

53. Haghpassand M., Bourassa P.A., Francone O.L., Aiello R.J. Monocyte/macrophage expression of ABCA1 has minimal contribution to plasma HDL levels. J Clin Invest 2001; 108: 1315-1320

54. Harel M., Aharoni A., Gaidukov L. et al. Structura and evolution of the serum paraoxonase family of detoxifying and anti-atherosclerotic enzymes. Nat Struc Mol Biol 2004; 11: 412-419

55. Himbergen T.M., Tits L.J.H., Roest M., Stalenhoef A.F.N. The story of PON1: how an organophosphate-hydrolysing enzyme is becoming a player in cardiovascular medicine. Netherlands J of Medicine 2006; 64(2): 34-38

56. Hofer S.E., Bennetts В., Chan A.K. et al. Association between PON 1 polymorphisms, PON activity and diabetes complications. J Diabetes Complications 2006; 20(5): 322-328

57. Hovingh G.K., de Groot E., van der Steeg W. et al. Inherited disorders of HDL metabolism and atherosclerosis. Curr Opin Lipidol 2005; 16(2): 139-145

58. Jakubovski H. Calcium-dependent human serum homocystein thiolactone hydrolase. A protective mechanism against protein N-homocysteinylation. J Biol Chem 2000; 275: 3957-3962

59. Jakubovski H. Anti-N-homocystainilated protein antibodies and cardiovascular disease. Clin Chem Lab Med 2005; 43: 1011-1014

60. Jarvik G.P., Hatsukami T.S., Carlson C. et al. Paraoxonase activity, but not haplotype utilizing the linkage disequilibrium structure, predicts vascular disease. Arterioscler Thromb Vase Biol 2003; 23: 1465-1471

61. Jensen M.K., Pai J.K., Mukamal K.J. et al. Common genetic variation in ATP-binding cassette transporter Al, plasma lipids, and risk of coronary heart disease. Atherosclerosis 2007; in press

62. Kakko S., Kelloniemi J. ATPbinding cassette transporter Al locus is not a major determinant of HDL-C levels in a population at high risk for coronary heart disease. Atherosclerosis 2003; 166: 285-290

63. Khersonslcy О., Tawfik D.S. Structure-reactivity studies of serum paraoxonase PONl suggest that its native activity is lactonase. Biochemistry 2005; 44: 6371-6382

64. Ко Y-L., Ко Y-S., Wang S-M. et al. The Gln-Arg 191 polymorphism of the human paraoxonase gene is not associated with the risk of coronary artery disease among Chinese in Taiwan. Atherosclerosis 1998; 141: 259-264

65. Kotur-Stevuljevic J., Spasic S., Stefanovic A. et al. Paraoxonase 1 (PONl) activity, but not PONl (Q192R) phenotype is a predictor of coronary artery disease in a middle aged Serbian population. Clin Chem Lab Med 2006; 44(10): 1206-1213

66. Kunitake S.T., Jarvis M.R., Hamilton R.L., Kane J.P. Binding of transition metals by apolipoprotein A-l-containing plasma lipoproteins: Inhibition of oxidation of low density lipoproteins. Proc Natl Acad Sci USA 1992; 89: 6993-6997

67. Lahiri D.K., Bye S., Nurnberger J.I., Hodes M.E., Crisp M. A nonorganic and non-enzymatic extraction method gives higher yeilds of genomic DNA from whole-blood samples then do nine other methods tested. J Biochem Biophys Methods 1992; 25: 193-205

68. Leviev I., James R.W. Promoter polymorphisms of human paraoxonase PONl gene and serum paraoxonase activities and concentrations. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2000; 20: 516-521

69. Leviev I., Poirier O., Nicaud V. et al. High expressor paraoxonase PONl gene promoter polymorphisms are associated with reduced risk of vascular disease in younger coronary patients. Atherosclerosis 2002; 161:463-467

70. Leviev I., Righetti A., James R.W. Paraoxonase promoter polymorphism T(-107)C and relative paraoxonase deficiency as determinants of risk of coronary artery disease. J Mol Med 2001; 79: 457-463

71. Li H.L., Liu D.P., Liang C.C. Paraoxonase gene polymorphisms, oxidative stress, and diseases. J Mol Med 2003; 81: 766-779

72. Li Y., Zhang S.Z., Ma Y.X. et al. Relationship between the R219K polymorphisms of ATP-binding cassette transporter-1 gene and coronary heart disease. Yi Chuan 2005; 27(4): 549-552

73. Liu L., Guo Z.G., Wang Q.G. et al. Significance of -191G/C polymorphisms in the promoter region of ATP-binding cassette transporter gene in coronary artery disease. Di Yi Jun Yi Da Xue Bao 2005; 25(6): 660-666

74. Mackness M.I., Arrol S., Durrington P.N. Paraoxonase prevents accumulation of lipoperoxides in low density lipoprotein. FEBS Lett 1991; 286: 152-154

75. Mackness M.I., Arrol S., Mackness В., Durrington P.N. Alloenzymes of paraoxonase and effectiveness of high-density lipoproteins in protecting low-density lipoprotein against lipid peroxidation. Lancet 1997; 349: 851-852

76. Mackness В., Davies G.K., Turkie W. et al. Paraoxonase status in coronary heart disease: are activity and concentration more important than genotype? Arterioscler Thromb Vase Biol 2001; 21: 1451-1457

77. Mackness M.I., Durrington P.N., Mackness B. The role of paraoxonase 1 activity in cardiovascular disease: potential for therapeutic intervention. Am J Cardiovasc Drugs 2004; 4(4): 211-217

78. Mackness В., Durrington P.N., Mackness M.I. The paraoxonase gene family and coronary heart Disease. Curr Opin Lipidol 2002; 13: 357-362

79. Mackness M.I., Hallam S.D., Peard T. et al. The separation of sheep and human serum A-esterase activity into the lipoprotein fraction by ultracentrifugation. Comp Biochem Physiol В 1985; 82: 675-677

80. Mackness M., Mackness B. Paraoxonase 1 and atherosclerosis: is the gene or the protein more important? Free Rad Biol 2004; 37: 1317-1323

81. Manresa J.M., Zamora A., Tomas M. et al. Relationship of classical and non-classical risk factors with genetic variants releavant to coronary heart disease. Eur J Cardiovasc Prev Rehabil 2006; 13(5): 738-744

82. Mantaring M., Rhyne J., Ho Hong S., Miller M. Genotypic variation in ATP-binding cassette transporter-1 as contributors to the high and low HDL-C phenotype. Transl Res 2007; 149(4): 205-210

83. Martineli N., Girelli D., Olivieri O. et al. Interaction between metabolic syndrome and PON1 polymorphisms as a determinant of the risk of coronary artery disease. Clin Exp Med 2005; 5(1): 20-30

84. Mazur A. An enzyme in animal tissues capable of hydrolyzing the phosphorus-fluorine bond of alkyl fluorophosphates. J Biol Chem 1946; 164:271-289

85. Miller G.J., Miller N.E. Plasma-high-density-lipoprotein concentration and development of ischaemic heart-disease. Lancet 1975; 1(7897): 1619

86. Miller M., Rhyne J., Hamlette S. et al. Genetics of HDL regulation in humans. Curr Opin Lipidol 2003; 14(3): 273-279

87. Miller M., Rhyne J., Hong S.H. et al. Do mutations causing low HDL-C promote increased carotid intima-media thickness? Clin Chim Acta 2007; 377(1-2): 273-275

88. Mochizuki H., Scherrer S.W., Xi T. et al. Human PON2 gene at q21.3: cloning, multiply mRNA forms, and missense polymorphisms in the coding sequence. Gene 1998; 213: 149-157

89. Nofer J.R., von Eskardstein A., Assmann G. High density lipoproteins and arteriosclerosis. Role of cholesterol efflux and reverse cholesterol transport. Arterioscler Thromb Vase Biol 2001; 21(1): 13-27

90. Oda M.N., Bielicki J.K., et al. Paraoxonase 1 overexpression in mice and its effect on high-density lipoproteins. Biochem Biophys Res Commun 2002; 290: 921-927

91. Oin Q., Li Y.L., Zhao F.M. et al. Association of paraoxonase polymorphisms and serum homocysteine thiolactone complex with coronary heart disease. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi 2006; 34(9): 803-807

92. Olivera S.A., MansurA.P., Ribeiro C.C. et al. PON1 M/L55 mutation protects high-risk patients against coronary artery disease. Int J Cardiol 2004; 94(1): 73-77

93. Ombers D., Pannitteri G., Mantali A. et al. The Gln-Arg 192 polymorphism of human paraoxonase gene is not associated with coronary artery disease in Italian patients. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 1998; 18: 1611-1616

94. Oram J.F., Heinecke J.W. ATP-binding cassette transporter Al: a cell cholesterol exporter that protects against cardiovascular disease. Physiol. Rev. 2005; 85: 1343-1372

95. Osaki F., Ikeda Y., Suehiro T. et al. Roles of Spl and protein kinase С in regulation of human serum paraoxonase 1 (PON1) gene transcription in HepG2 cells. Atherosclerosis 2004; 176: 279-287

96. Pasdar A., Ross-Adams H., Cumming A. et al. Paraoxonase gene polymorphisms and haplotype analysis in a stroke population. BMC Med Genet 2006; 7: 27-28

97. Pfohl M., Koch M., Enderle M.D. et al. Paraoxonase 192 Gln/Arg gene polymorphism, coronary artery disease, myocardial infarction in type 2 diabetes. Diabetes 1999; 48: 623-627

98. Porchay I., Pean F., Bellili N. et al. ABCA1 single nucleotide polymorphism on high density lipoprotein cholesterol and overweit: the DESIR study. Obesity 2006; 14(11): 1874-1879

99. Primo-Parmo S.L., Sorenson R.C., Teiber J., La Du B.N. The human serum paraoxonase/arylesterase gene (PON1) is one member of a multigene family. Genomics 1996; 33: 498-507

100. Probst M.C., Thumann H., Aslanidis C., et al. Screening for functional sequence variations and mutations in ABCA1. Atherosclerosis 2004; 175(2): 269-279

101. Ranade K., Kirchgessner T.G., Iakoubova O.A. et al. Evaluation of the paraoxonases as candidate genes for stroke: Glnl92Arg polymorphism in the paraoxonase 1 gene is associated with increased risk of stroke. Stroke 2005; 36(11): 2346-2350

102. Rozenberg O., Rosenblat M., Coleman R. et al. Paraoxonase deficiency is associated with increased macrophage oxidative stress: studies in PONl-knokout mice. Free Rad Biol Med 2003; 34: 774-784

103. Ruiz J., Blanche H., James R.W. et al. Gln-Argl92 polymorphism of paraoxonase and coronary heart disease in type 2 diabetes. Lancet 1995; 346: 869-872

104. Rust S., Rosier M., Funke H. et al. Tangier disease is caused by mutations in the gene encoding ATP-binding cassette transporter 1. Nat Genet 1999; 22(4): 352-355

105. Saeed M., Perwaiz Iqbal M., Yousuf F. et al. Interactions and associations of paraoxonase gene cluster polymorphisms with myocardial infarction in a Pakistan population. Clin Genet 2007; 71(3): 238-244

106. Saleheen D., Khanum S., Haider S.R. et al. A novel haplotype in ACA1 gene effects plasma HDL-C concentration. Int J Cardiol 2007; 115(1): 7-13

107. Sanghera D.K., Saha N., Kamboh M.I. The codon 55 polymorphism in the paraoxonase 1 gene is not associated with the risk of coronary heart disease in Asian Indians and Chinese. Atherosclerosis 1998; 136(2): 217-223

108. Sen-Banerjee S., Siles X., Campos H. Tobacco smoking modifies association between Gin Arg polymorphism of human paraoxonase gene and risk of myocardial infarction. Arterioscler Thromb Vase Biol 2000; 20(9): 2120-2126

109. Serfaty-Lacrosniere C., Civeira F., Lanzberg A. et al. Homozygous Tangier disease and cardiovascular disease. Atherosclerosis 1994; 107: 85-98

110. Serrato M., Marian A.J. A variant of human paraoxonase/arylesterase (HUMPONA) gene is a risk factor for coronary artery disease. Clin invest 1995; 96: 3005-3008

111. Shih D.M., Gu L., Xia Y.R. et al. Mice lacking serum paraoxonase are susceptible to organophosphate toxicity and atherosclerosis. Nature 1998; 394(6690): 284-287

112. Shioji К., Nishioka J., Naraba H. et al. A promoter variant of the ATP-binding cassette transporter Al alters the HDL cholesterol level in the general Japanese population. J Human Genet 2004; 49(3): 141-147

113. Singaraja R., Brunham L., Visscher H. et al. Efflux and Atherosclerosis: The Clinical and Biochemical Impact of Variations in the ABCA1 Gene. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2003; 23: 1322-1332

114. Suehiro Т., Nakamura Т., Inoue M. et al. A polymorphism upstream from the human paraoxonase (PONl) gene and its association with PONl expression. Atherosclerosis 2000; 150: 295-298

115. Sun P., Во X.P., Guo D.P. et al. Study of the association of ABCA1 common variants with the risk of coronary atherosclerotic heart disease. Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi 2005; 33(7): 627-630

116. Takagi S., Iwai N., Miyazaki S. et al. Relationship between ABCA1 genetic variation and HDL cholesterol level in subjects with ischemic heart diseases in Japanese. Thromb Haemost 2002; 88: 369-370

117. Tan J.H., Low P.S., Tan Y.S. et al. ABCA1 polymorphisms and their association with coronary artery disease and plasma lipids in males from three ethnic populations in Singapore. Hum Genet 2003; 113(2): 106-119

118. Tomas M., Latorre G., Senti M., Marrugat J. The antioxidant function of high density lipoproteins: a new paradigm in atherosclerosis. Rev Esp Cardiol 2004; 57(6): 557-569

119. Topcuoglu A., Uzun H., Aydin S. et al. The effect of hormone replacement therapy on oxidized low density lipoprotein levels and paraoxonase activity in postmenopausal women. Tohoku J Exp Med 2005; 205: 79-86

120. Tregouet D.A., Ricard S., Nicaud V. et al. In-deph haplotype analysis of ABCA1 gene polymorphisms in relation to plasma apoAl levels and myocardial infarction. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2004; 24(4): 775-778

121. Tward A., Xia Y.R., Wang X.P. et al. Decreased atherosclerotic lesion formation in human serum paraoxonase transgenic mice. Circulation 2002; 106: 484-490

122. Wang O.G., Guo Z.G., Lai W.Y. et al. Detection of single nucleotide polymorphism of all coding region in ABCA1 gene in patients with coronary heart disease. Nan Fang Yi Ke Da Xue Bao 2006; 26(1): 42-45

123. Watson A.D., Berliner J.А., Наша S.Y. et al. Protective effect of high density lipoprotein associated paraoxonase: inhibition of the biological activity of minimally oxidized low-density lipoprotein. J Clin Invest 1995; 96: 2882-2891

124. Watzinger N., Schmidt H., Schumarker M. et al. Human paraoxonase 1 gene polymorphism and the risk of coronary heart disease: a community based study. Cardiology 2002; 98(3): 116-122

125. Wheeler J.G., Keavney B.D., Watkins H. et al. Four paraoxonase gene polymorphisms in 11212 cases of coronary heart disease and 12786 controls: meta-analysis of 43 studies. Lancet 2004; 363(9410): 689-695

126. Wierzbicki A.S., Twomey P.J., Reynolds T.M. Screening for cardiovascular disease. Eur Heart J 2003; 24(21): 1903-1911

127. Zwarts K.Y., Clee S.M., Zwinderman A.H. et al. ABCA1 regulatory variants influence coronary artery disease independent of effects on plasma lipid levels. Clin Genet 2002; 61(2): 115-125