Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца

Пардо, Пералес Георгина

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца"

0034В3981

На правах рукописи

Пардо Пералес Георгина

Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца

Специальность: 03.00.04 - биохимия 03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 2 ИХ? 20СЗ

Санкт-Петербург 2009 год

003463981

Работа выполнена на кафедре биохимии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в лаборатории молекулярной диагностики с расширенной группой экогенетики Научно-исследовательского центра Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская педиатрическая медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Кириллова Надежда Васильевна доктор медицинских наук Ларионова Валентина Ильинична

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Дубинина Елена Ефимовна доктор медицинских наук, профессор Конради Александра Олеговна

Ведущее научное учреждение: Федеральное государственное учреждение здравоохранения «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени A.M. Никифорова» МЧС России

Автореферат разослан « 2009 года

Защита диссертации состоится « 26 » марта 2009 года в «/.)» часов на заседании диссертационного совета Д 001.022.03 при Санкт-Петербургском государственном институте экспериментальной медицины, по адресу 197376 Санкт- Петербург, Каменноостровский пр. 69/71.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Санкт-Петербургского государственного института экспериментальной медицины по адресу: 197376 Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Л.В. Пучкова

Актуальность темы. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ), такие как ишемическая болезнь сердца (ИБС), инфаркт миокарда (ИМ), ишемический инсульт и венозная тромбоэмболия, являются основной причиной смертности в странах Восточной Европы, в том числе и в России (Оганов Р.Г., 2004). Поэтому разработка программ ранней диагностики, профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний - одна из важнейших задач кардиологии.

Наряду с традиционными факторами риска в литературе широко обсуждается роль метаболических факторов риска в развитии ИБС. Так, одним из таких факторов является снижение антиоксидантной защиты у пациентов (Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1999; Escola-Gil et al., 2006). Однако оценка активности основных ферментов-антиоксидантов у пациентов с ИБС в настоящее время недостаточно используется в клинической практике. По-видимому, это объясняется тем, что к настоящему времени практически не проводится исследований, посвященных комплексной оценке активности основных ферментов - антиоксидантов в сопоставлении со структурными особенностями кодирующих их генов, липидными и липопротеиновыми показателями крови и показателями окислительной модификации белков у больных ИБС различного возраста.

Поскольку процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) является инициирующим этапом атерогенеза, изучение активности таких ферментов-антиоксидантов как каталаза, параоксоназа 1 (PON 1), супероксидцисмутаза у больных ИБС разного пола и возраста является актуальной задачей. Выявление биохимических и молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с формированием низкой антиоксидантной активности крови необходимо для оптимизации лечения больных с ИБС и профилактики у них повторных ИМ.

Цель исследования: Выявить биохимические и молекулярно-генетические маркеры снижения антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца разного пола и возраста.

Задачи исследования:

1. Изучить окислительную модификацию белков крови и ПОЛ сыворотки крови в группах обследованных мужчин.

2. Определить активность основных ферментов-антиоксидантов каталазы, параоксоназы и супероксидисмутаз в крови у мужчин, перенесших инфаркт миокарда, и в контрольной группе и сопоставить с уровнями липидных показателей сыворотки крови и малонового диальдегида.

3. Выполнить молекулярно-генетическое тестирование и проанализировать распределение аллелей и генотипов PONI (Q192R и L55M), САТ (С-262Т) и SOD2 (A16V) и их сочетаний в обследованных группах с учетом пола и возраста.

4. Сопоставить показатели активности ферментов-антиоксидантов каталазы, параоксоназы и митохондриальной супероксидцисмутазы с

результатами молекулярно-генетического тестирования генов PONI (Q192R и L55M), САТ (С-262Т) и SOD2 (A16V).

5. Сопоставить результаты молекулярно-генетического тестирования генов PONI (Q192R и L55M), САТ (С-262Т) и SOD2 (A16V) с уровнями липидных показателей сыворотки крови у больных ИБС с учетом пола.

Научная новизна

Были изучены в сравнительном аспекте показатели белкового и липидного обменов и антиоксидантной системы крови больных ИБС, перенесших ИМ, разного пола и возраста. В работе получены новые результаты, подтверждающие и дополняющие данные о взаимосвязи уровней липидных и липопротеиновых показателей сыворотки крови больных ИБС с показателями системы ПОЛ. В данной работе представлен анализ интенсивности окислительной деструкции белков в сыворотке больных, перенесших ИМ как в молодом возрасте, так и в возрасте после 60 лет. Выявлена определенная взаимосвязь между уровнем окислительной модификации белков тканей и активностью ферментов антиоксидантной системы крови. Впервые в работе изучены и проанализированы данные о частотах аллелей и распределении генотипов PONI (Q192R и L55M), САТ{С-262Т) и SOD2 (A16V) и их сочетаний у больных ИБС - жителей Санкт-Петербурга, разного пола и возраста. Установлены достоверные различия в частотах аллелей 192R и Q192 гена PON] у мужчин старше 60 лет, перенесших ИМ, по сравнению с их частотами у здоровых мужчин и женщин с ИБС. Впервые показано, что носители аллеля 16V гена SOD2 встречаются достоверно чаще среди мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, чем среди здоровых мужчин. Впервые в работе изучена взаимосвязь аллелей и генотипов PONI (Q192R и L55M), САТ (С-262Т) и SOD2 (A16V) с липидными и липопротеиновыми показателями сыворотки крови у больных ИБС разного пола и возраста. Впервые изучена связь активности ферментов-антиоксидантов у мужчин, больных ИБС, с носительством определенных аллелей и генотипов PONI (Q192R и L55M), САГ (С-262Т) и SOD2 (A16V).

Научно-практическая значимость работы

Результаты исследования расширяют и углубляют наши представления о молекулярно-генетической и метаболической основе сердечно-сосудистых заболеваний и необходимы для понимания роли генетических и биохимических факторов в развитии ИБС.

Полученные результаты характеризуются своей практической направленностью для медицины и являются полезными для выявления окислительного повреждения белков, которое, как правило, сопровождается необратимыми повреждениями тканей при ряде заболеваний, в том числе и ИБС. Использование биохимических и молекулярно-генетических методов для оценки состояния прооксидантной и антиоксидантной систем у больных с ИБС в практическом здравоохранении позволит оптимизировать патогенетическую терапию с целью предотвращения развития повторных ИМ у пациентов. А у лиц, имеющих предрасположенность к развитию

сердечно-сосудистых заболеваний, своевременное выявление низкой антиоксидантной активности крови позволит оптимизировать лечение и проводить первичную профилактику ИБС.

Внедрение результатов исследования

Полученные результаты использовались в лекционных курсах и лабораторном практикуме на кафедре биохимии для студентов Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии. Результаты исследования внедрены в практику подготовки и усовершенствования специалистов в области кардиологии на кафедре ФПК и ПП им. профессора И.М. Воронцова ФПК ГОУ ВПО СПбГПМА Росздрава. Результаты исследования используются в курсах подготовки врачей общей практики, а также в лаборатории молекулярной диагностики с расширенной группой экогенетики НИЦ ГОУ ВПО СПбГПМА Росздрава для усовершенствования специалистов в области медицинской и лабораторной генетики.

Личный вклад соискателя

Автором самостоятельно проведен аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по изучаемой проблеме. Биохимические исследования, молекулярно-генетическое тестирование, анализ, интерпретация, изложение полученных данных, формулирование выводов и практических рекомендаций в основном выполнены автором лично.

Апробация работы

Материалы, использованные в диссертационной работе, докладывались и представлялись на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006), межрегиональной конференции «Актуальные проблемы фармации» (Рязань, 2006), на III съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции «Фармация XXI века: достижения, проблемы и пути их решения» (Санкт-Петербург, 2008), XX International Congress of Genetics (Berlin 2008), European Human Genetics Conference (Barcelona, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Уровень окислительной модификации белков и показатели активности ферментов антиоксидантной системы крови, каталазы, параоксоназы и супероксидцисмутаз могут использоваться для оценки степени окислительного стресса у больных, перенесших ИМ как в молодом, так и в старшем возрасте.

2. Группы больных ИБС разного пола и возраста различаются по частотам аллелей и генотипов PONI (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) и их сочетаний.

3. Выявлена ассоциация низкой активности параоксоназы с генотипом RR по гену PONI (Q192R) у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет.

4. Генотип ТТ по гену CAT (С-262Т) и сочетание аллелей 192R, 55М гена PONI, -262Т гена CAT и 16Y гена SOD2 ассоциированы с изменениями липидного спектра крови у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, и женщин с ИБС.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 149 машинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований), обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы) (273 источника). Материал диссертации проиллюстрирован 15 рисунками, содержит 20 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Характеристика обследованных групп

Всего обследованы 597 человек - жители Санкт-Петербурга (437 мужчин и 159 женщин). Были сформированы следующие группы больных ИБС: 227 мужчин больных ИБС, перенесших ИМ в возрасте до 45 лет; 96 мужчин больных ИБС, перенесших ИМ в возрасте после 60 лет; 75 женщин в возрасте от 56 до 70 лет, наличие ИБС у которых доказано данными коронароангиографии. 114 здоровых мужчин в возрасте от 28 до 56 лет без признаков патологии сердечно-сосудистой системы составили первую группу сравнения. Вторую группу сравнения составили 84 женщины в возрасте от 82 до 90 лет, не имеющих клинических и инструментальных данных, свидетельствующих о наличии ИБС. Женщины этой группы не имели в анамнезе ИМ, ишемического или геморрагического инсульта. При обследовании у них была исключена сердечная недостаточность, сахарный диабет и другая тяжелая сопутствующая патология. Они имели нормальное артериальное давление или мягкую/умеренную форму артериальной гипертензии. Третью группу сравнения составили 20 человек здоровых доноров, не имеющих ИБС, в возрасте старше 60 лет (для изучения окислительной модификации белков в плазме крови).

Методы исследования

Забор крови из локтевой вены у пациентов осуществляли в утреннее время натощак. В качестве антикоагулянтов использовали раствор гепарина. Эритроциты отделяли от плазмы центрифугированием в течение 15 мин при 4000 g. Осадок отмывали 3 раза изотоническим раствором NaCl. Отмытые эритроциты крови гемолизировали 0,05 М раствором трис-HCl, рН=7,4, ("Sigma" USA) в соотношении 1:10.

Прооксидантную систему организма исследовали на примере спонтанного окисления белков в нативной плазме крови по известному методу (Levine et al., 1990), с некоторыми модификациями (Дубинина и соавт., 1993; Smith et al., 1991). Метод основан на реакции взаимодействия

окисленных аминокислотных остатков белков с 2,4-ДНФГ с образованием окрашенных гидразонов. Интенсивность металл-катализируемого окисления белков определяли по результатам степени окисления их тирозиновых и триптофановых остатков (Davies et al., 1987; Арутюнян и соавт., 2000). Оценку ПОЛ проводили по содержанию конечного продукта ПОЛ -малонового диальдегида по известному методу (Тугушева и соавт., 1993).

Активность антиоксидантной системы крови отражали следующие показатели: арилэстеразную активность PONI сыворотки крови определяли с использованием в качестве субстрата фенилацетата, скорость гидролиза субстрата измеряли спектрофотометрически при длине волны 270 нм. (Eckerson et al., 1983; Kujiraoka et al., 2000). Определение активности каталазы эритроцитов проводили по методу Бютлера (Butler Е., 1975). Активность СОД эритроцитов и плазмы крови, а также митохондрий лейкоцитов определяли по скорости аутоокисления кверцетина в аэробных условиях (Bielski B.H.J., 1990; Dubinina et al., 1992).

Определение концентрации общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП), триглицеридов (ТГ) и фосфолипидов в сыворотке крови производилось в автоматическом режиме на анализаторе Hitachi 902 Automatic Analyzer (Япония). Содержание ХС ЛПОНП определяли расчетным методом по формуле ХС ЛПОНП = ТГ/2,2 (ммоль/л) и ХС ЛПНП по формуле Friedewald: ХС ЛПНП = общий ХС - (ХС ЛПВП + ТГ/2,2), а коэффициент атерогенности (КА) по формуле: КА= (ОХС - ХС ЛПВП) /ХС ЛПВП) (Климов А.Н., 1989). Все липидные показатели крови были пересчитаны в мг/дл.

Для выделения ДНК из лимфоцитов периферической крови использовали фенол-хлороформный метод (Blin N., Stafford D.W., 1976). Полимеразная цепная реакция (ПЦР) проводилась на автоматических термоциклерах MJ Research (MJ Research Inc.) и Biometra (Biometra, Germany) с использованием термостабильной рекомбинантной Taq-полимеразы фирмы «Сибэнзим» (Россия).

Аллели Q192 и 192R гена PONI был определены методом длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Для проведения ПЦР были использованы праймеры: F5 'TATTGTTGCTGTGGGACCTGAG3' и R5'CACGCTAAACCCAAATACATCTC3' (ЗАО «Синтол», Россия). Рестрикция проводилась с помощью эндонуклеазы Kzo9I («Сибензим», Россия). Электрофоретическое разделение рестрикционных фрагментов производилось в 10% полиакриламидном геле. (Oliveira et al., 2004)

Аллели L55 и 55М гена PONI определялись методом ПДРФ. Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) были использованы праймеры: F5 'GAAGAGTGATGTATAGCCCCAG3' и

R5'TTTAATCCAGAGCTAATGAAAGCC3'(3AO «Синтол», Россия). Рестрикция проводилась с помощью эндонуклеазы Fael («Сибензим», Россия). Электрофоретическое разделение рестрикционных фрагментов производилось в 10% полиакриламидном геле (Oliveira et al., 2004).

Аллели С-262 и -262 Т гена CAT были определены методом ПДРФ. Для проведения ПЦР были использованы праймеры: F-5'- ААТ CAG AAG GCA GTC СТС СС-3' и R-5'- TCG GGG AGC АСА GAG TGT АС-3'(ЗАО «Синтол», Россия). Рестрикция проводилась с помощью эндонуклеазы Hinfl («Сибензим», Россия). Электрофоретическое разделение рестрикционных фрагментов производилось в 10% полиакриламидном rene.(Uccola et al., 2001)

Аллели Ala 16 и 16Val гена SOD2 были определены методом ПДРФ. Для проведения ПЦР были использованы праймеры F-5'-ACCAGCAGGCAGCTGGCGCCGG-3' и R-5'-GCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3'(ЗАО «Синтол», Россия). Рестрикция проводилась с помощью эндонуклеазы MroNl («Сибензим», Россия). Электрофоретическое разделение рестрикционных фрагментов производилось в 10% полиакриламидном геле.(Gottlieb М., 2005)

Статистический анализ проводили с помощью пакета статистических программ SPSS ver. 12 (Флетчер Р., 1998). В работе приведены средние величины со стандартным отклонением среднего значения (М±т) и медианы (Me) с 90% доверительным интервалом (ДИ). Для сравнения центральных параметров распределений (средних, медиан) количественных показателей в различных группах использовали непараметрические методы - U-тест Манна-Уитни и тест Крускала-Уилиса. Для определения корреляции между количественными показателями пользовались методом корреляции по Спирману. Для сравнения качественных показателей использовали критерий точный критерий Фишера и отношение шансов или относительный риск (ОР) с определением 95% доверительного интервала. За значимый принимали уровень достоверности р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Окислительная модификация белков. Исследования последних лет установили непосредственную связь между процессами окислительной модификации белков и многими заболеваниями человека. Кроме того, некоторые исследователи, на основании полученных данных, предположили, что окислительная модификация белков может являться пусковым механизмом в развитии ряда патологий (Caraceni et al., 1997; Panntke et al., 1999). Все существующие в настоящее время методы оценки окислительной модификации белков связаны или с оценкой общего пула окисленных белков по содержанию карбонильных групп, или с определением достаточно стойких продуктов окисления отдельных аминокислотных остатков, главньм образом тирозина и триптофана (Stadtman et al., 1990, 1992, Levine et al., 1996; Янковский О.Ю., 2000; Дубинина Е.Б., 2006).

Анализ полученных нами данных показал (табл. 1), что у здоровых мужчин старше 60 лет уровень карбонильных групп в белках крови значительно выше, чем в группе здоровых мужчин до 45 лет. Это свидетельствует о возрастании окислительного повреждения белков при

старении и согласуется с результатами, полученными другими авторами (Smith et al., 1991; Дубинина Е.Е., 2006).

Таблица 1. Окислительная модификация белков в плазме крови (М+т)

Индексы Мужчины до 45 лет Мужчины после 60 лет

Здоровые ИМ Здоровые ИМ

п=90 п=150 п=20 п=80

Содержание 2,97 15,38 7,83 25,57

карбонильных + + + +

групп, 0,45 2,67 2,35 2,98

нмоль/мг

белка р<0,05 р<0,05

Показано, что у мужчин, перенесших ИМ как в возрасте до 45 лет, так и после 60 лет, происходит достоверное повышение реакционноспособных карбонильных групп в молекулах белков, по сравнению с мужчинами сопоставимого возраста, не имеющими ИБС. Сходные результаты были получены и другими исследователями (Liu et al., 1993; Panntke et al., 1999; Бабак О.Я., Топчий И.И., 2004).

Для более полной оценки степени окислительного повреждения белков оценивали окисление отдельных аминокислотных остатков белков крови. Из-

Таблица 2. Зависимость степени окисления тирозина и триптофана __белков плазмы в системе Фентоц (М+т)_

Группа мужчин Через 1 час Через 2 часа Через 24 часа

% % %

Содержание битирозина

Здоровые п=20 9,87+1,34 22,32 + 3,45 173,75 ±1,78

Больные, >60 лет п=80 31,23 + 0,61 р<0,05 74,54 + 5,65 р<0,05 227,54+ 1,24 р<0,05

Содержание триптофана

Здоровые п=20 35,00+ 1,56 27,7+1,21 21,05 + 3,37

Больные, >60 лет п=80 37,60 + 0,99 р>0,05 31,23 +_0,68 р<0,05 14,23 ± 1,21 р<0,05

вестно, что триптофановые и тирозиновые остатки являются одними из наиболее чувствительных к окислительной модификации в процессе радиолиза белков, а также в условиях окислительного стресса в организме (Арутюнян и соавт., 2000; Морозова М.Г., 2000; Дубинина Е.Е., 2006).

Определение степени окисления триптофановых и тирозиновых остатков показало интенсивное образование битирозиновых остатков и увеличение степени окисления триптофана в белках плазмы крови обследованных больных в возрасте после 60 лет, по сравнению со здоровыми мужчинами сопоставимого возраста (табл. 2).

Ранее было установлено, что окисление белков митохондрий сердечной мышцы, в первую очередь, связано с окислением триптофановых остатков и образованием N-формилкинуренина (Taylor et al., 2003). По-видимому, полученные нами результаты по окислительной модификации триптофановых и тирозиновых остатков в белках плазмы крови могут быть с большой долей вероятности экстраполированы на процессы, происходящие в сердечной мышце при развитии ИМ.

Изучение перекисного окисления липидов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что уровни малонового диальдегида (МДА), конечного метаболита ПОЛ, как в плазме крови, так и в эритроцитах больных обеих возрастных групп, перенесших ИМ, были достоверно выше, чем уровни аналогичного показателя у здоровых мужчин разного возраста (табл.

3).

Таблица 3. Содержание малонового диальдегида в крови мужчин (М+т)

Плазма крови, нмоль/мл Эритроциты, нмоль/мг гемоглобина

Здоровые п=80 Больные, п=102 Здоровые п=80 Больные, п=102

2,06+0,31 8,46+0,63 10,30+0,84 25,8+2,42

р<0,05 р<0,05

Таким образом, у больных перенесших ИМ, наблюдается усиление прооксидантной активности, о чем свидетельствуют результаты изучения окислительной модификации белков и ПОЛ.

Определение активности основных ферментов-антиоксидантов: каталазы, параоксоназы и супероксиддисмутаз. Установлено, что уровень активности каталазы эритроцитов был снижен в 6 раз, а активности СОД1 - в 1,8 раза, в эритроцитах крови мужчин обеих групп, перенесших ИМ, по сравнению с этими показателями у здоровых мужчин. Уровень активности СОД2 в митохондриях лейкоцитов и СОДЗ в плазме крови у больных были ниже, соответственно, в 3 и 2 раза по сравнению с аналогичными показателями в группе здоровых мужчин (табл. 4).

Анализ уровня активности фермента параоксоназы сыворотки крови показал достоверное снижение активности фермента у больных, перенесших ИМ как до 45 лет, так и после 60 лет, по сравнению с этим показателем в группе здоровых мужчин (табл. 4).

Таблица 4. Активность основных фермснтов-антиоксидантов __при инфаркте миокарда (М+га)_

Здоровые Больные мужчины обеих групп

Каталаза в эритроцитариой взвеси, усл.ед/мг НЬ

6,18+0,87 п=20 1,26+0,06 п=24 р<0,05

СОД1 (эритроцитарная), усл.ед. (%)

52,40+4,46 п=37 32,89+3,36 п=46 р<0,05

СОДЗ (плазмы крови), усл.ед (%)

4,27+0,23 п=37 2,30+0,79 п=46 р<0,05

СОД2 (митохондрий лейкоцитов), усл. ед. (%)

13,10+2,23 п=37 4,64+0,87 п=46 р<0,05

Параоксоназа сыворотки крови, мкмоль/мл' мин

22,67+2,96 п=25 до 45 лет п=71 старше 60 лет п=56

8,30+2,78 р<0,05 10,30+1,18 р<0,05

Установленное снижение активности ферментов-антиоксидантов может быть вызвано избытком активных форм кислорода (АФК), так как известно, что перекись водорода является сильным ингибитором всех видов супероксиддисмутаз, а супероксидный радикал - каталазы (Fridovich I., 1995; Escobar et al., 1996).

Известно, что повышение соотношения активностей СОД/каталаза in vivo является одним из признаков окислительного стресса, так как дисбаланс активностей между этими ферментами приводит к интенсивному накоплению АФК (Halliwell В., 1994). Результаты настоящего исследования установили, что у здоровых мужчин соотношение активностей СОД/каталаза в крови равнялся 6,4, а у больных, перенесших ИМ, этот показатель был равен 24,3. Полученные результаты указывают на интенсивное развитие окислительного стресса у пациентов, имеющих ИБС.

Некоторые исследователи считают, что низкая активность антиоксидантного фермента параоксоназы плазмы крови является независимым фактором риска развития ИБС у мужчин (Беггайо й а1., 1995). Анализ уровня активности параоксоназы сыворотки крови больных, перенесших инфаркт миокарда, показал резкое достоверное падение активности фермента у больных мужчин обеих групп по сравнению с группой здоровых мужчин (табл. 4).

Таким образом, в нашей работе было установлено, что у мужчин с ИБС, независимо от возраста, имеется низкий уровень активности основных ферментов-антиоксидантов. В связи с этим, целесообразно оценивать уровни активности этих показателей в группе мужчин, имеющих конституциональные факторы риска ИБС. Снижение их активности следует оценивать как независимый дополнительный фактор риска развития сердечно-сосудистой патологии, в частности ИБС.

Активность ферментов-антиоксидантов, уровень МДА и липидные показатели сыворотки крови. Корреляционный анализ активности ферментов-антиоксидантов с уровнями липидных и липопротеиновых показателей сыворотки крови (ОХС, ТГ, ХС ЛПВП, ХС ЛПОНП, ХС ЛПНП) и значениями КА позволил установить, что не выявлено взаимосвязей между активностью каталазы и вышеперечисленными показателями в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет. В то же самое время, в группе здоровых мужчин была выявлена прямая корреляция между активностью каталазы и уровнем ХС ЛПНП (г=0,48; р=0,03).

Выявлена корреляция низкой активности СОД2 с более высокими уровнями ТГ у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет (г= - 0,42; р=0,01) и более высокими ОХС в группе мужчин, перенесших ИМ после 60 лет (г= - 0,78; р=0,04). В то же время не выявлено никаких корреляционных связей активности этого фермента с липидными и липопротеиновыми показателями сыворотки крови и значениями КА в группе здоровых мужчин.

Выявлена корреляция низкой активности параоксоназы с низкими уровнями ХС ЛПВП в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет (г= 0,24; р=0,05) и низкими уровнями ТГ и ХС ЛПОНП в группе мужчин, перенесших ИМ после 60 лет (г= 0,55; р=0,07; г= 0,58; р=0,05, соответственно). В то же время не выявлено никаких корреляционных связей активности этого фермента с липидными и липопротеиновыми показателями сыворотки крови и значениями КА в группе здоровых мужчин.

Была выявлена прямая корреляция между уровнем МДА и уровнями ОХС (г= 0,26; р=0,01), ТГ (г= 0,42; р=0,001) и ХС ЛПОНП (г= 0,39; р=0,001) в группе мужчин, перенесших ИМ в молодом возрасте. Обращает внимание, что в группе здоровых мужчин были выявлены такие же корреляционные связи для уровней МДА и уровней ОХС (г= 0,26; р=0,02), ТГ (г= 0,24; р=0,04), ХС ЛПОНП (г= 0,25; р=0,03).

Не выявлено корреляционных связей между уровнями активности ферментов-антиоксидантов и уровнем МДА в обследованных группах мужчин.

Таким образом, у мужчин с ИБС для выявления окислительного стресса важно оценивать не только уровень МДА, но и уровень активности основных ферментов - антиоксидантов.

Молекулярно-генетическое тестирование и сравнительный анализ распределения генотипов и аллелей генов PONI (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) у пациентов обследованных групп.

Частоты аллелей Q192 и 192R гена PONI в исследуемой выборке достоверно не отличались от теоретически ожидаемых в соответствии с законом Харди-Вайнберга (табл. 5).

Анализ распределения частот аллелей Q192 и 192R в исследованных группах мужчин показал, что в группе мужчин, перенесших ИМ после 60 лет, носители аллеля 192R встречались достоверно чаще, чем в группе здоровых мужчин (х2=5,288; р=0,021).

Носители генотипа QR по гену PONI в группе женщин, больных ИБС, встречались достоверно реже, по сравнению с таковыми в группе женщин старше 80 лет, не страдающих ИБС (тест Фишера, р=0,031). Носители генотипа QR по гену PONI достоверно чаще встречались в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, чем в группе женщин с ИБС (%2=8,966; р=0,003; тест Фишера; р=0,001). Различия в частотах аллелей Q192 и 192R гена PONI и распределении генотипов между мужчинами, перенесшими ИМ после 60 лет, и женщинами, страдающими ИБС, были более разнообразными. Так, в группе женщин с ИБС достоверно чаще встречались носители аллеля Q192 и генотипа QQ PON1 (%2=5,Ш; р=0,016 и -/2=6,749, р=0,009, соответственно).

Таблица 5. Частоты аллелей и генотипов Q192R по гену PONI _в исследуемых группах мужчин и женщин_

Полиморфизм Q192R Мужчины Женщины

ИМ до 45 лет ИМ после 60 лет Здоровые ИБС Без ИБС

п=227(%) п=96(%) п=114(%) п=75(%) п=84(%)

Q192 338 (74) 136(71) 186 (81) 124 (83) 137 (82)

192R 116(26) 56 (29) 44 (19) 26(17) 31(18)

QQ 129 (57) 52 (54) 76 (66) 56 (75) 56 (67)

OR 80 (35) 32 (33) 34 (30) 12(16) 25 (29)

RR 18(8) 12(13) 5(4) 7(9) 3(4)

Частоты аллелей L55 и 55М гена PONI в исследуемой выборке достоверно не отличались от теоретически ожидаемых в соответствии с законом Харди-Вайнберга (табл. 6).

В исследованных группах мужчин достоверных различий встречаемости аллелей L55 и 55М гена PONI не выявлено. Однако при сравнении их частот в двух исследованных группах женщин различия были найдены. Так в группе женщин, страдающих ИБС, носители аллеля 55М и генотипа ММ РОМвстречались достоверно чаще, по сравнению с таковыми в группе женщин старше 80 лет без ИБС (х2=4,744; р=0,021; тест Фишера; р=0,043, соответственно). Кроме того, в группе женщин с ИБС носители генотипа ММ по гену PONI встречались в 2 раза чаще, чем в группе мужчин с ранним ИМ (ОР=2,13 для 95% ДИ 1,14-3,98). Генетические различия между мужчинами и женщинами могут иметь существенное значение в проведении дальнейших исследований факторов риска ИБС.

Таблица 6. Частоты аллелей и генотипов L55M по гену PONI

в исследуемых группах мужчин и женщин.

Полиморфизм L55M Мужчины Женщины

ИМ до 45 лет Здоровые ИБС Без ИБС

п=220(%) п=81(%) п—61(%) п=83(%)

L55 295 (67) 111 (68) 70 (58) 117(70)

55М 145 (33) 51(32) 52 (42) 49 (30)

LL 97 (45) 39 (48) 22 (36) 42 (51)

LM 101 (45) 33 (41) 26 (43) 33 (40)

ММ 22 (10) 9(11) 13(21) 8(10)

Мы изучили частоты генотипов L55M/Q192R в группах женщин с ИБС, здоровых женщин, мужчин, перенесших ИМ до 45 лет и здоровых мужчин. Сравнительный анализ распределения генотипов показал, что у женщин с ИБС генотип MM/QQ встречался примерно в 2 раза чаще, чем у здоровых женщин (21% и 8% соответственно, р=0,05; ОР=2,5 для 95% ДИ 1,1-5,9), и в 3 раза чаще, чем у мужчин с ИМ до 45 лет (21% и 6% соответственно, р=0,001; ОР=3,4 для 95% ДИ 1,3-8,4).

Частоты аллелей С-262 и -262Т гена CAT в исследуемой выборке достоверно не отличались от теоретически ожидаемых в соответствии с законом Харди-Вайнберга (табл. 7). Анализ частот вариантов и генотипов С-262Т CAT в исследованных группах пациентов не выявил достоверных различий.

Частоты аллелей А16 и 16V гена SOD2 в исследуемой выборке достоверно не отличались от теоретически ожидаемых в соответствии с законом Харди-Вайнберга (табл. 8).

Анализ встречаемости аллелей А16 и 16V SOD2 выявил, что в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, частота аллеля V16 была достоверно выше таковой в группе здоровых мужчин (х2=5,286, р=0,021).

Полиморфизм С-262Т Мужчины Женщины

ИМ до 45 лет ИМ после 60 лет Здоровые ИБС Без ИБС

п=227(%) п=96(%) п=114(%) п=75(%) п=84(%)

С-262 202 (44) 96 (50) 116(50) 70 (47) 88 (52)

-262Т 252 (55) 96 (50) 114(50) 80 (53) 80 (48)

СС 26(11) 16(17) 19(17) 11(15) 13(16)

СТ 150 (66) 64 (67) 78 (68) 48 (64) 62 (74)

тт 51 (22) 16(17) 18(16) 16(21) 9(11)

А носители генотипов У N+А/V в этой же группе мужчин выявлялись достоверно чаще, чем в группе здоровых мужчин (-/2=6,192, р=0,013 соответственно). У женщин такие различия выявлены не были.

Таблица 8. Частоты аллелей и генотипов A16V по гену SOD2 __в исследуемых группах _

Полиморфизм A16V Мужчины Женщины

ИМ до 45 лет ИМ после 60 лет Здоровые ИБС Без ИБС

п=227(%) п=96(%) п=114(%) п=75(%) п=84(%)

А16 219(48) 104 (54) 132 (58) 76 (51) 96 (57)

16V 235 (52) 88 (46) 96 (42) 74 (49) 72 (43)

АА 45 (20) 24 (25) 31 (27) 16(21) 24 (29)

AV 129 (57) 56 (58) 70 (61) 44 (59) 48 (57)

W 53 (23) 16(17) 13(12) 15 (20) 12(14)

Таким образом, в обследованных группах пациентов частоты аллелей PONI (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) не отличались от теоретически ожидаемых в соответствии с законом Харди-Вайнберга, что говорит о репрезентативности выборок. Анализ распределения аллелей и генотипов С-262Т по гену CAT в исследованных группах пациентов не выявил достоверных различий. Анализ частот аллелей и генотипов Q192R и L55M PONI и A16V SOD2 выявил некоторые различия. В группе женщин с ИБС аллель Q192 и генотип QQ по гену PONI выявлялись достоверно чаще, чем в группе мужчин, перенесших ИМ после 60 лет. В то же время, у мужчин, перенесших ИМ после 60 лет, носители аллеля 192R встречались достоверно чаще, чем в группе здоровых мужчин. Среди женщин с ИБС носители аллеля 55М и генотипа ММ по гену PONI встречались чаще, чем в группе женщин старше 80 лет, не страдающих ИБС. Кроме того, в группе женщин с ИБС носители генотипа ММ гена PONI встречались в 2 раза чаще, чем в группе мужчин с ранним ИМ.

В группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, носители аллеля V16 гена SOD2 встречались достоверно чаще, чем в группе здоровых мужчин.

Был проведен анализ сочетаний аллелей 16V SOD2, -262Т CAT, 192R и 55М PONI, встречающихся у пациентов в гомозиготном и гетерозиготном состоянии. При этом были составлены группы: «0/1» - пациенты, не имеющие ни одного из вышеуказанных аллелей или 1 аллель, «2» - носители двух аллелей, «3» - носители трех аллелей, и «4» - носители всех четырех из вышеуказанных аллелей, находящихся в гомозиготном и гетерозиготном состоянии (табл. 9). В группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, лица с сочетанием всех четырех аллелей 16V SOD2, -262Т CAT, 192R и 55М PONI, находящихся как в гомозиготном, так и в гетерозиготном состоянии, встречались достоверно чаще, а лица с сочетанием любых двух из перечисленных аллелей - достоверно реже, по сравнению с таковым в группе здоровых мужчин (ОР=2,5 для 95% ДИ 1,1-5,8; ОР=0,7 для 95% ДИ 0,5-0,9; соответственно). В то же время, анализ распределения генотипов в зависимости от количества данных аллелей в группах женщин не выявил значимых различий (%2=3,095; р=0,511).

Таблица 9. Встречаемость сочетаний аллелей 192R, 55М PONI, _-262Т CAT, 16V SOD2 в исследуемых группах_

Количество аллелей у пациентов в любых сочетаниях, как в гетерозиготном, так и в гомозиготном состоянии Мужчины Женщины

ИМ до 45 лет Здоровые ИБС Без ИБС

п=227(%) п=107(%) п=71(%) п=84(%)

«4" 32 (14) 6(6) 3(4) 6(7)

"3" 102(45) 38 (35) 33 (46) 31 (37)

"2" 79 (35) 51 (48) 31 (44) 37 (44)

12(5) 12(11) 4(6) 9(11)

"0" 2(1) 0(0) 0(0) 1(1)

Таким образом, сочетание аллелей 16V SOD2, -262Т CAT, 192R и 55М PONI ассоциируется с высоким риском ИМ у мужчин в молодом возрасте.

Сопоставление активности ферментов-антпоксидантов с полиморфизмом кодирующих их генов. Анализ активности параоксоназы при различных генотипах PONI Q192R не показал значимых различий в группе здоровых мужчин (р=0,141). В то же время, выявлены статистически достоверные различия в активности параоксоназы в группе больных мужчин, перенесших ИМ до 45, между носителями генотипов QQ и RR, Активность параоксоназы у носителей генотипа RR была значимо ниже, чем у носителей генотипа QQ (3,69±1,21 vs. 9,93±1,26 мкмоль/мл, р=0,012). У носителей генотипа QR были промежуточные значения активности параоксоназы (5,92±1,13 мкмоль/мл), которые не значимо отличались от значений активности параоксоназы гомозигот QQ и RR (р=0,062; р=0,507, соответственно).

Анализ активности параоксоназы в зависимости от полиморфизма PONI L55M в группе здоровых мужчин и больных мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, не выявил различий между разными генотипами (р=0,817; р=0,841, соответственно).

Активность каталазы эритроцитов крови достоверно не отличалась при различных генотипах С-262Т по гену CAT.

У здоровых мужчин активность митохондриальной супероксиддисмутазы была достоверно выше, чем у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, но различия в активности фермента между вариантами гена SOD2 A16V были недостоверны (р=0,483; р=0,679, соответственно).

Таким образом, в группе здоровых мужчин не выявлены значимые различия в показателях активности параоксоназы, каталазы, супероксиддисмутазы при различных генотипах L55M гена PONI, С-262Т CAT и A16V SOD2. В группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, выявлены различия в активности параоксоназы в зависимости от полиморфизма PONI Q192R. Активность этого фермента была ниже при генотипе RR, по сравнению с носителями аллеля 192Q, как в гетерозиготном, так и в гомозиготном состоянии.

Липидныс показатели и молекулярно-генетические маркеры PONI (Q192R и L55M), С4Г(С-262Т) и SOD2 (A16V) у обследованных здоровых и больных мужчин и женщин.

Уровни липидных показателей достоверно не различались у мужчин, имеющих различные генотипы Q192R гена PONI во всех обследованных группах и в группе женщин, страдающих ИБС. Однако в группе женщин, доживших до старческого возраста без признаков ИБС, были выявлены следующие различия. Уровень ОХС в сыворотке крови был достоверно выше у женщин с гетерозиготным генотипом QR PON], по сравнению с гомозиготными вариантами QQ и RR (228,6±8.9 vs. 208,3±5.2 и 205,1±17.7 мг/дл; р=0,026, соответственно).

В нашем исследовании, при анализе уровня липидных показателей в группах пациентов с ИБС разного пола и возраста и пациентов без ИБС, в зависимости от вариантов С-262Т гена CAT, были получены следующие результаты: в группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, уровень ХС ЛПВП в сыворотке крови у пациентов с генотипом ТТ по гену СА Т был достоверно ниже, чем у носителей генотипов СС и СТ (34,2±1,9 vs. 41,9±3,1 и 38,9±1,2 мг/дл; р=0,027, соответственно). В других группах мужчин таких различий липидных показателей при различных генотипах С-262Т гена CAT выявлено не было. В обеих группах женщин, как больных ИБС (4,9±0,5 vs. 3,4±0,9 и 3,3±0,2), так и доживших до старческого возраста без признаков ИБС (5,2±0,4 vs. 3,7±0,2 и 4,0±0,2), носители генотипа ТТ по гену CAT имели достоверно более высокие значения КА по сравнению со значениями этого показателя у носителей генотипов СС и СТ (р=0,003; р=0,005, соответственно). Кроме этого, было выявлено, что носители генотипа ТТ по гену CAT в группе женщин, страдающих ИБС, имели достоверно более низкий уровень ХС

ЛПВП в сыворотке крови, чем носители генотипов СС и СТ (46,8±3,5 vs. 57,4±8,6 и 56,7±2,3 мг/дл; р=0,005, соответственно).

Анализ уровня липидных показателей в изученных группах мужчин и женщин при различных генотипах SOD2 A16V выявил следующие различия. В группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, уровень ХС ЛПНП в сыворотке крови у пациентов с генотипом W по гену SOD2 был значимо ниже, чем у носителей генотипов АА и AV (135,4±8,0 vs. 144,3±9,5 и 159,2±5,3 мг/дл; р=0,004, соответственно). В других группах не было выявлено различий в уровнях липидных показателях в зависимости от генотипа по гену SOD2.

Был проведен анализ липидных показателей крови в различных группах обследованных в зависимости от сочетания аллелей 16V SOD2, -262Т CAT, 192R и 55М PON1, встречающихся в гомозиготном или гетерозиготном состоянии. При этом были составлены группы: «0/1» -пациенты, не имеющие ни одного или 1 из вышеуказанных аллелей , «2» -носители двух аллелей, и «3/4» - носители трех или четырех из вышеуказанных аллелей, как в гомозиготном, так и в гетерозиготном состоянии.

В группе здоровых мужчин и женщин, доживших до старческого возраста без признаков ИБС, отсутствовали значимые различия в средних уровнях ТГ, ОХС, ХС ЛПНП, ХС ЛПОНП, ХС ЛПВП и значений КА в зависимости от количества встречающихся у них вышеуказанных аллелей.

В группах пациентов, больных ИБС, как у мужчин, так и у женщин уровни ХС ЛПНП достоверно не различались в зависимости от количества встречающихся у них вышеуказанных аллелей.

В группе мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, уровни ТГ, ХС ЛПОНП были выше у носителей 3/4 вышеуказанных аллелей, чем у носителей 2 аллелей (р=0,005; р=0,032, соответственно). При этом значения КА у носителей 3/4 аллелей были выше, чем у носителей 2 аллелей (р=0,014).

В группе женщин с ИБС уровень ТГ у носителей 3/4 аллелей был выше, чем уровень ТГ у носителей 2 аллелей, но незначимо. В то же время, носители 3/4 аллелей имели более высокие уровни ОХС и ХС ЛПВП, по сравнению с уровнями аналогичных показателей у носителей 2 аллелей, хотя и недостоверно (р=0,283 и р=0,089, соответственно). При этом значения КА у женщин с ИБС не различались значимо в зависимости от количества встречающихся у них вышеуказанных аллелей, но у носителей 3/4 аллелей они были выше, чем у носителей 2 аллелей.

Таким образом, у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, сочетание аллелей 16Val SOD2, С-262Т CAT, 192R и 55М PON1 ассоциируется с увеличением КА, а у женщин с ИБС с увеличением ОХС, увеличением ХС ЛПВП и снижением КА.

выводы

1. Установлено достоверное увеличение окислительной модификации белков крови у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет и после 60 лет. Уровень карбонильных групп - основных маркеров окислительной модификации белков - в белках плазмы крови у больных был достоверно увеличен, по сравнению со здоровыми мужчинами. Кроме того, установлено увеличение степени окисления остатков триптофана и тирозина в белках плазмы крови больных мужчин старше 60 лет по сравнению со здоровыми мужчинами.

2. Выявлена определенная взаимосвязь между уровнем окислительной модификации белков и показателями ферментативной антиоксидантной системы крови у мужчин, перенесших инфаркт миокарда. При этом повышение окислительной деструкции белков происходило на фоне достоверного снижения активности каталазы эритроцитов, супероксиддисмутаз (эритроцитарной, внеклеточной и митохондрий лейкоцитов) и параоксоназы сыворотки крови.

3. Аллель 192R полиморфизма Q192R гена PONI встречался достоверно чаще в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда после 60 лет, по сравнению с частотой этого аллеля в группе здоровых мужчин.

Аллель 55М и генотип ММ по гену PONI достоверно чаще встречался в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, по сравнению с женщинами с ишемической болезнью сердца.

Носители аллеля VI6 гена SOD2 встречались достоверно чаще в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, чем в группе здоровых мужчин.

Сочетания аллелей 16V SOD2, -262Т CAT, 192R PONI, 55М PONI встречались достоверно чаще в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, чем в группе здоровых мужчин, что ассоциируется с развитием заболевания в молодом возрасте.

4. Активность параоксоназы была достоверно ниже при генотипе RR, по сравнению с этим показателем у носителей аллеля 192Q, как в гетерозиготном, так и в гомозиготном состоянии, у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет.

5. Генотип TT по гену CAT (С-262Т) ассоциирован с достоверно более низким уровнем ХС ЛПВП у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, и у женщин с ишемической болезнью сердца.

Сочетание аллелей 16V SOD2, С-262Т CAT, 192R PONI, 55М PONI ассоциируется с увеличением уровня триглицеридов, ХС ЛПОНП и значения коэффициента атерогенности в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет и увеличением уровня ОХС и ХС ЛПВП у женщин с ишемической болезнью сердца.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Обследование больных, перенесших инфаркт миокарда, независимо от возраста следует проводить с использованием большего количества биохимических маркеров, позволяющих оценивать уровень окислительной модификации белков тканей, показатели активности основных ферментов антиоксидантной системы крови СОД, каталазы и параоксоназы 1. Это необходимо для выявления окислительного стресса у этих больных с целью оптимизации лечения и предотвращения повторных ИМ у этих больных.

2. Результаты молекулярно-генетического тестирования генов PONI (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) для оценки риска развития ИБС следует использовать с учетом возраста и пола пациентов.

3. При выявлении биохимических маркеров, ассоциированных с формированием низкой антиоксидантной активности крови у пациентов с сердечно-сосудистой патологией, следует рекомендовать проведение молекулярно-генетического тестирования генов PONI (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) для прогнозирования течения ИБС.

4. Молекулярно-генетического тестирования генов PONI (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) следует рекомендовать больным ИБС для оценки динамики выявленных атерогенных нарушений в сыворотке крови.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследование состояния белков и липидов плазмы крови у больных инфарктом миокарда // Материалы XIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2006, - с. 244 (в соавторстве).

2. Антиоксидантный статус плазмы крови мужчин, перенесших инфаркт миокарда // Материалы Ш съезда фармакологов России «Фармакология -практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 2007. - Т. 7 спец. выпуск, часть 2. - с. 1890 (в соавторстве).

3. Q192 Rand L55M polymorphisms of PON1 in patients with coronary heart disease (CHD) of different age and sex // Eur. J. of Human Genetics. - 2008. V. 16. Suppl. 2 - Molecular and biochemical basis of disease. - p. 342 (в соавторстве).

4. Polymorphisms in antiocidative enzimes genes in patients with coronary artery disease//Genetics - Understanding Living Systems XX International Congress of Genetics. Berlin, Germany, 2008. - p. 162 (в соавторстве).

5. Изучение актвиности маркерных ферментов в крови больных инфарктом миокарда // Труды научно-практической конф. «Фармация из века в век». 2008. Часть IY. Биохимические, микробиологические, биотехнологические исследования. - с. 46-50 (в соавторстве).

6. Прооксидантный и антиоксидантный статус крови мужчин, перенесших инфаркт миокарда // «Вестник Санкт - Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова». - 2008. - №4. - с. 134-138 (в соавторстве).

7. Полиморфизм L55M и Q192R в гене параоксоназы 1 у больных ишемической болезнью сердца разного пола и возраста // Артериальная гипертензия. -2009.-Т.15. - № 1.- С. 1-6.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АФК - активные формы кислорода ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания ИБС - ишемическая болезнь сердца ИМ - инфаркт миокарда ПОЛ - перекисное окисление липидов PONI - параоксоназа

МпСОД/СОД2 - супероксиддисмутаза митохондриальная

МДА - малоновый диальдегид

ХС ЛПВП - липопротеины высокой плотности

ХС ЛПНП - липопротеины низкой плотности

ХС ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

ТГ - триацилглицериды

ОХС - общий холестерин

СОД1 - Zn,Cu- СОД, супероксиддисмутаза

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пардо, Пералес Георгина

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Активные формы кислорода.

1.2. Роль параоксоназы 1 в развитии ИБС.

1.2.1 Семейство параоксоназы.

1.2.2 Структура и свойства белка-фермента параоксоназы 1.

1.2.3 Субстраты параоксоназы 1.

1.2.4 Содержание и активность параоксоназы 1 в организме.

1.2.5 Варианты гена PON1 и их влияние на активность параоксоназы

1.2.6 Роль вариантов Q192R и L55M гена PON1 в развитии ишемической болезни сердца.

1.2.7. Варианты в регуляторных областях гена PON1.

1.3. Роль супероксиддисмутаза в развитии ИБС.'.

1.3.1. Семейство супероксиддисмутазы.

1.3.2 Супероксиддисмутаза 2 (СОД2).

1.3.3 Полиморфизм супероксиддисмутаза 2 (SOD2).

1.4 Роль каталазы в развитии ИБС.

1.4.1 Полиморфизм гена каталазы {CAT).

1.5 Ишемическая болезнь сердца и свободнорадикальное окисление липидов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования.

2.2. Клиническая характеристика обследуемых групп:.

2.3. Биохимические методы исследования.

2.3.1. Определение окислительной модификации белков плазмы крови.

2.3.2. Электрофоретические методы.

2.3.3. Определение содержания малонового альдегида в сыворотке и эритроцитах крови.

2.3.4. Определение активности параоксоназы сыворотки крови.

2.3.5. Определение активности эритроцитарной каталазы.

2.3.6. Определение активности супероксиддисмутазы.

2.3.7. Определение липидных и липопротеиновых показателей сыворотки крови.

2.4. Методы генетического исследования.-.

2.4.1. Q192R полиморфизм гена параоксоназьй (PON1).

2.4.2. L55M полиморфизм гена параоксоназы 1 (PON1).

2.4.3. С-262Т полиморфизм гена каталазы (CAT).

2.4.4. Ala 16 Val полиморфизм гена супероксиддисмутазы2 (SOD2).

2.5. Методы статистики, использованные в работе.

2.5.1 Номинальные случайные переменные.

2.5.2 Порядковые случайные величины.

2.5.3 Непрерывные случайные величины.

2.5.4 Относительные случайные переменные.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

3.1. Оценка проксидантной активности крови.

3.1.1. Исследование состояния белков в крови больных при инфаркте миокардом.

3.1.2. Перекисное окисление липидов.

3.2. Активность антиоксидантной системы.

3.2.1. Активность ферментов-антиоксидантов, уровень МДА и липидных показателей сыворотки крови.

3.3. Молекулярно-генетическое тестирование и сравнительный анализ распределения аллелей генов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) у мужчин и женщин, здоровых и больных

3.3.1. Анализ частот аллелей и генотипов Q192R гена PON1 в исследуемых группах мужчин и женщин.

3.3.2. Анализ встречаемости аллелей и генотипов CAT в исследуемых группах мужчин и женщин.

3.3.3. Анализ частот аллелей и генотипов SOD2 в исследуемых группах мужчин и женщин.

3.4. Анализ встречаемости сочетания аллелей 16Val гена SOD2, -262Т гена CAT, 192R гена PON1 и 55М гена PON1 у пациентов исследованных групп мужчин и женщин.

3.5. Изучение прооксидантных и антиоксидантных факторов и молекулярно-генетических маркеров генов PON1 (Q192R и L55M), С/471 (С-262Т) и SOD2 (A16V) у пациентов, перенесших инфаркт миокарда, и в контрольной группе.

3.5.1. Анализ активности ферментов антиоксидантной системы у больных с ИМ до 45 лет и здоровых мужчин.

3.5.2. Изучение уровня малонового альдегида в сыворотке крови в обследованных группах мужчин при различных генотипах PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V).

3.6. Анализ липидного спектра в группах мужчин и женщин, носителей разных аллелей гена PON1 Q192R и L55M.

3.6.1. Анализа липидного спектра в группах мужчин и женщих, носителей разных аллелей гена CAT.

3.6.2 Анализ липидного спектра у носителей различных вариантов гена

SOD2.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца"

Поскольку процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) является инициирующим этапом атерогенеза, изучение активности таких ферментов-антиоксидантов как каталаза, параоксоназа 1 (PON 1), супероксиддисмутаза у больных ИБС разного пола и возраста является актуальной задачей. Выявление биохимических и молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с формированием низкой антиоксидантной активности крови необходимо для оптимизации лечения больных с ИБС и профилактики у них повторных ИМ.

Задачи исследования:

1. Изучить окислительную модификацию белков крови и ПОЛ сыворотки крови в группах обследованных мужчин.

3. Выполнить молекулярно-генетическое тестирование и проанализировать распределение аллелей и генотипов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) и их сочетаний в обследованных группах с учетом пола и возраста.

4. Сопоставить показатели активности ферментов-антиоксидантов каталазы, параоксоназы и митохондриальной супероксиддисмутазы с результатами молекулярно-генетического тестирования генов PON1 (Q192R и L55M), САТ(С-262Т) и SOD2 (A16V).

5. Сопоставить результаты молекулярно-генетического тестирования генов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) с уровнями липидных показателей сыворотки крови у больных ИБС с учетом пола.

Научная новизна

Были изучены в сравнительном аспекте показатели белкового и липидного обменов и антиоксидантной системы крови больных ИБС, перенесших ИМ, разного пола и возраста. В работе получены новые результаты, подтверждающие и дополняющие данные о взаимосвязи уровней липидных и липопротеиновых показателей сыворотки крови больных ИБС с показателями системы ПОЛ. В данной работе представлен анализ интенсивности окислительной деструкции белков в сыворотке больных, перенесших ИМ как в молодом возрасте, так и в возрасте после 60 лет. Выявлена определенная взаимосвязь между уровнем окислительной модификации белков и активностью ферментов антиоксидантной системы крови. Впервые в работе изучены и проанализированы данные о частотах аллелей и распределении генотипов PON1 (Q192R и L55M), CAT {С-262Т) и SOD2 (A16V) и их сочетаний у больных ИБС - жителей Санкт-Петербурга, разного пола и возраста. Установлены достоверные различия в частотах аллелей 192R и Q192 гена PON1 у мужчин старше 60 лет, перенесших ИМ, по сравнению с их частотами у здоровых мужчин и женщин с ИБС. Впервые показано, что носители аллеля 16V гена SOD2 встречаются достоверно чаще среди мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, чем среди здоровых мужчин. Впервые в работе изучена взаимосвязь аллелей и генотипов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) с липидными и липопротеиновыми показателями сыворотки крови у больных ИБС разного пола и возраста. Впервые изучена связь активности ферментов-антиоксидантов у мужчин, больных ИБС, с носительством определенных аллелей и генотипов PON1 (Q192R и L55M), САТ{С-262Т) и SOD2 (A16V).

Научно-практическая значимость работы

Внедрение результатов исследования

Полученные результаты использовались в лекционных курсах и лабораторном практикуме на кафедре биохимии для студентов Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии. Результаты исследования внедрены в практику подготовки и усовершенствования специалистов в области кардиологии на кафедре Ф1Ж и ПП им. профессора И.М. Воронцова ФПК ГОУ ВПО СПбГПМА Росздрава. Результаты исследования используются в курсах подготовки врачей общей практики, а также в лаборатории молекулярной диагностики с расширенной группой экогенетики НИЦ ГОУ ВПО СПбГПМА Росздрава для усовершенствования специалистов в области медицинской и лабораторной генетики.

Личный вклад соискателя

Апробация работы

Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции «Фармация XXI века: достижения, проблемы и пути их решения» (Санкт-Петербург, 2008), XX International Congress of Genetics (Berlin 2008), European Human Genetics Conference (Barcelona, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Уровень окислительной модификации белков и показатели активности ферментов антиоксидантной системы крови, каталазы, параоксоназы и супероксиддисмутаз могут использоваться для оценки степени окислительного стресса у больных, перенесших ИМ как в молодом, так и в старшем возрасте.

2. Группы больных ИБС разного пола и возраста различаются по частотам аллелей и генотипов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) и их сочетаний.

3. Выявлена ассоциация низкой активности параоксоназы с генотипом RR по гену PON1 (Q192R) у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет.

4. Генотип ТТ по гену CAT (С-262Т) и сочетание аллелей 192R, 55М гена PON1, -262Т гена CAT и 16V гена SOD2 ассоциированы с изменениями липидного спектра крови у мужчин, перенесших ИМ до 45 лет, и женщин с ИБС.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 2 статьи.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 148 машинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований), обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы) (273 источника). Материал диссертации проиллюстрирован 15 рисунками, содержит 20 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Пардо, Пералес Георгина

выводы

1. Установлено достоверное увеличение окислительной модификации белков крови у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет и после 60 лет. Уровень карбонильных групп - основных маркеров окислительной модификации белков - в белках плазмы крови у больных был достоверно увеличен по сравнению со здоровыми мужчинами. Кроме того, установлено увеличение степени окисления остатков триптофана и тирозина в белках плазмы крови больных мужчин старше 60 лет по сравнению со здоровыми мужчинами.

2. Выявлена определенная взаимосвязь между уровнем окислительной модификации белков с показателями ферментативной антиоксидантной системы крови у мужчин, перенесших инфаркт миокарда. При этом повышение окислительной деструкции белков происходило на фоне достоверного снижения активности каталазы эритроцитов, супероксиддисмутаз (эритроцитарной, внеклеточной и митохондрий лейкоцитов) и параоксоназы сыворотки крови.

3. Аллель 192R полиморфизма Q192R гена PON1 встречался достоверно чаще в группе мужчин, перенесших ИМ после 60 лет по сравнению с частотой этого аллеля в группе здоровых мужчин.

Аллель 55М и ММ генотип PON1 достоверно чаще встречается в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет по сравнению с женщинами с ишемической болезнью сердца.

Сочетания вариантов 16Val SOD2, -262Т CAT, 192R PONl, 55М PONl встречались достоверно чаще в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет, чем в группе здоровых мужчин, что ассоциируется с развитием заболевания в молодом возрасте.

4. Активность параоксоназы была достоверно ниже при генотипе RR по сравнению с этим показателем у носителей аллеля 192Q, как в гетерозиготном, так и в гомозиготном состоянии у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет.

5. Генотип ТТ по гену СА Т (С-262Т) ассоциирован с достоверно более низким уровнем ХС ЛПВП у мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет и у женщин с ишемической болезнью сердца.

Сочетание аллелей 16Val SOD2, С-262Т CAT, 192R PON1, 55М PON1 ассоциируется с увеличением уровня триглицеридов, ХС ЛПОНП и значения коэффициента атерогенности в группе мужчин, перенесших инфаркт миокарда до 45 лет и увеличением уровня ОХС и ХС ЛПВП у женщин с ишемической болезнью сердца.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Обследование больных, перенесших ИМ, независимо от возраста следует проводить с использованием большего количества биохимических маркеров, позволяющих оценивать уровень окислительной модификации белков тканей, показатели активности основных ферментов антиоксидантной системы крови СОД, каталазы и PON1. Это необходимо для выявления окислительного стресса у этих больных с целью оптимизации лечения и предотвращения повторных ИМ у этих больных.

2. Результаты молекулярно-генетического тестирования генов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) для оценки риска развития ИБС следует использовать с учетом возраста и пола пациентов.

3. При выявлении биохимических маркеров, ассоциированных с формированием низкой антиоксидантной активности крови, у пациентов с сердечно-сосудистой патологией, следует рекомендовать проведение молекулярно-генетического тестирования генов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) для прогнозирования течения ИБС.

4. Молекулярно-генетического тестирования генов PON1 (Q192R и L55M), CAT (С-262Т) и SOD2 (A16V) следует рекомендовать больным ИБС независимо от пола для оценки динамики выявленных атерогенных нарушений в сыворотке крови. I

114

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пардо, Пералес Георгина, Санкт-Петербург

1. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценкиевободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. Методические рекомендации. СПб.:Фолиант, 2000. -104 с.

2. Бабак О.Я., Топчий И.И. Окислительный стресс, воспаление иэндотелиальная дисфункция ключевые звенья патогенеза сердечнососудистой патологии при прогрессирующих заболеваниях почек // Укр. тер. журнал. -2004. -№ 4. -С. 10-17.

3. Баранов B.C., Хавинсон В.Х. Определение генетической предрасположенности к некоторым мультифакторным заболеваниям. Генетический паспорт // Ред. Хавинсон В.Х. СПб.: ИКФ-«Фолиант», 2001.-48 с.

4. Барсель В. А., Щедрина И. С., Вахляев В. Д. и др., Состояние системыперекисного окисления липидов у больных ишемической болезнью сердца // Кардиология. 1998. - №5. - С. 18-20.

5. Бобырев В.Н., Воскресенский О.Н. биоантиоксиданты // Тер. Архив.1989. -№3. -С. 122-125.

6. Болдырев А.А. Двойственная роль свободно-радикальных формкислорода в ишемическом мозге // Нейрохимия. -1995. -Т. 12. -№ 3. -С. 3-13.

7. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн.

8. РАМН. -1998. -№ 7. -С. 43-46.

9. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалыв живых системах // Итоги науки и техники. Серия Биофизика. М.: ВИНИТИ. -1991. -Т. 29. -252 с.

10. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов вбиомембранах. М.: Наука, 1972. -272 с. Ю.Воронько О.Е., Якунина Н.Ю., Минушкина Л.О., Затейщиков Д.А., Носиков В.В. Ассоциация полиморфных маркеров Argl92Gln гена

11. P0N1 и CYS311SER гена PON2 с развитием ишемической болезни сердца у русских г. Москвы // Медицинская генетика. -2005. -Т. 4. -№4.

12. Данилов Н.М., Матчин Ю.Г., Горгадзе Т.Т., Чазова И.Е., Савченко

13. А.П. Показания к проведению коронарной артериографии// Российский кардиологический научно-производственный комплекс Росздрава, Москва Том 01/N 1/2006

14. Дзидзинский А.А., Гомазков О.А. Кинины в физиологии и патологиисердечно- сосудистой системы. Новосибирск, 1986. -206 с

15. Донченко Г.В. Биохимия убихинона (Q). Киев: Наук, думка, 1988. -240с.

16. Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анионрадикала исуперок -. сиддисмутазы в тканях организма // Успехи современной биологии 1989. Т. 108, №1 (4). - С. 3 - 8.

17. Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в фуекциональнойактивности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты. -СПб.: Изд-во Медицинская пресса, 2006. -400 с.

18. Дубинина Е.Е., Гавровская С.В., Кузьмич Е.В., Леонова Н.В.,

19. Морозова М.Г., Ковругина С.В., Смирнова Т.А. Окислительная модификация белков: окисление триптофана и образование битирозона в очищенных белках с использованием системы Фентона //Биохимия. -2002. -Т. 67. -№ 3. -С. 413-421.

20. Дубинина Е.Е., Коновалов П.В., Солитернова И.Б. и др. Окислительнаямодификация белков плазмы крови у пожилых людей с сосудистой деменцией// Укр. биохим. журн. -1999. -Т. 71. -№ 6. -С. 41-47

21. Дубинина Е.Е., Шугалей И.В. Окислительная модификация белков // Успехи совер. Биологии. -1993. -Т.113. -Вып. 1. -С. 71-81.

22. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. // Руководство для врачей. -СПб.,1999.-С.262.

23. Климов А.Н., Перова Н.В., Трюфанов В.Ф. и др.Липиды илипопротеиды плазмы крови в популяциях мужчин и женщин в возрастном аспекте // Эпидемиология и факторы риска ишемической болезни сердца Под ред. А.Н. Климова.-Л.,1989.-С.36-57.

24. Коган А.Х.,СыркинА.Л., Дриницина С.В. и др. Кислородные свободнорадикальные процессы в патогенезе ишемической болезни сердца и перспективы применения антиоксиданта Q10 (убихинона) для их коррекции // Кардиол 1997 №12 - с. 62.

25. Кодин А.В. Реолоческие свойства крови и свободнорадикальные процессы у больных стенокардией, коррекциях нарушений // Авт. дисс.канд. мед. наук. Иваново: 2008. -23 с.

26. Ланкин В.З, Тихазе А.К., Комелевцева Н.В, Е.Б. Минковский

27. Ферментативное перекисное окисление фосфолипидов в биомембранах печени при экспериментальном атеросклерозе // Современные проблемы патогенезы терапии артериальнойгипертонии и атеросклероза. М.: Медицина, 1978. -144 с.

28. Ланкин В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981. -С. 75-95.

29. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra. // Пособие для врачей. Москва: 2006. 123 с.

30. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Кардиология. 2000. - № 7. - С. 48- 61.

31. Липовецкий Б.М, Шестов Д.Б. и др. Эпидемилогические аспекты ишемической болезни сердца, артериальной гипертонии и атерогенных изменений липидного состава крови у мужчин и женщин Ленинграда 20-69 лет// Тер. арх. 1984,- С. 44-48.

32. Лукьянова Л.Д., Балмуханов Б.С., Уголев А.Т. Кислородзависимые процессы в клетке и её функциональное состояние. М.: Наука, 1982. -с. 304

33. Лущак В.И. Свободнорадикальное окисление белков и его связь сфункциональным состоянием организма // Биохимия. -2007. -Т. 72. -№8. С. 995-1017.

34. Мамлеева, Н.А.Влияние правастатина и его комбинации с аевитом на показатели перекисного окисления липидов, антиоксидантной системы плазмы крови и эндотелиальной функции у больных ишемической болезнью сердца // Дисс. работа, 2004.

35. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланктн В.З., Бондарь И.А., Труфакин

36. В.А. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания. Новосибирск: изд-во «Арта», 2008. -284 с.

37. Пескин А.В. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия. -1997. -Т.62. -Вып. 12. -С. 1571-1578.

38. Поберезкина Н. Б., Осинская JI. Ф. Биологическая роль супероксиддисмутазы // Украинский биохимический журнал, 1989, т. 61, №2, с. 14 — 27.

39. Рагино Ю.И., Баум В.А., Полонский Я.В., Воевода М.И., Никитин Ю.П. Атеросклероз и окислительные процессы. Новые способы оценки окислительной модификации белков // Бюллетень СО РАМН. 2006. -№4(122). -С. 67-73.

40. Родыгина Т.И. Молекулярная диагностика наследственной предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям варианты генов параоксоназы 1 и кассетного транспортера ABC Al как факторы риска// Автореф.дисс. СПб:СПГМА, 2007. 25 с.

41. Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло // Природа. -1997. -№11. -С. 26-35.

42. Смирнова Г.В., Музыка Н.Г., Глуховенко М.Н., Октябрьский О.Н. Устойчивость к окислительному стрессу у штаммов Е. coli, дефицитных по синтезу глутатиона//Биохимия. -1999. -Т. 64. -№ 10. -С. 1318-1324.

43. Соколовский В. В. В кн. Антиоксиданты и адаптация. Л., 1984. -С. 5-19

44. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярныхмеханизмах неспецифической реакции организма на экстремальные воздействия // Вопр. мед. химии. -1998. -Т. 34. -Вып. 6. -С. 2 11.

45. Титов В.Н. Атеросклероз как патология полиеновых жирных кислот. // Биологические основы патогенеза атерогенеза. М.: Алтус, 2004. С. 175.

46. Тугушева Ф.А., Куликова А.И., Зубина И.М. Особенности перекислоного окисления липидов крови больных хроническим гломерулонефритом в стадии нарушения функции почек на фоне нефротического синдрома // Вопр. мед. химии. -1993. -Т.39. -№ 2. -С.18-21.

47. Фогель Ф., Матульский А. Генетика человека: в 3 т. М.:Мир, 19891990г.

48. Формазюк В.Е, Огис Ю.Г. Деев А.И. и др. Изменение белок липидных взаимодействий при перекисном окислении липопротедов сыворотки крови // Докл. АН СССР. -1982. - Т. 263. - № 2. -С. 497-500.

49. Хавинсон В.Х., Баринов В.А., Арутюнян А.В., Малинин В.В. Сободнорадикальное окисление и старение // СПб.: Наука, 2003. -С 327

50. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (эволюционные, экологические и медико-биологические аспекты) // -СПб.: Игра, 2000.-С 294 .

51. Ambrosio G., Flaherty J.T. Effect of the superoxide radical scavengersupperoxide dismutase, and of the hydroxyl radical scavenger mannitol, on reperfusion injury in isolated rabbit hearts // Cardiovasc. -1992. -V. 6. -P. 623-632.

52. Adkins S, Gan KN, Mody M, La Du B. Molecular basis for the polymorphic forms of human serum paraoxonase/arylesterase: glutamine for arginine at position 191, for the respective A or В allozymes. // Am J Hum Genet. -1993. -V.52. -P. 598-608.

53. Ahsan H, Chen Y, Kibriya MG, Islam MN, Slavkovich VN, Graziano JH, Santella RM. Susceptibility to arsenic-induced hyperkeratosis and oxidative stress genes myeloperoxidase and catalase // Cancer Lett. -2003. -V.201.-N1.-P. 57-65.

54. Aldridge WN. Serum esterases. I. Two types of esterase (A and B) hydrolysing p-nitrophenyl acetate, propionate and butyrate, and a method for their determination. //Biochem J. 1953. -V.53. -P.LlO-117.

55. Ambrosone CB, Ahn J, Singh KK, Rezaishiraz H, Furberg H, Sweeney C, Coles B, Trovato A.Polymorphisms in genes related to oxidative stress

56. MPO, MnSOD, CAT) and survival after treatment for breast cancer.// Cancer Res. -2005. -V.65. -№ 3. -P.1105-1111.

57. Aviram M, Rosenblat M. Paraoxonases 1, 2, and 3, oxidative stress, and macrophage foam cell formation during atherosclerosis development.// Free Radic Biol Med. -2004. -V. 37. -№ 9. -P.1304-1316.

58. Aviram M, Rosenblat M. Paraoxonases and cardiovascular diseases: pharmacological and nutritional influences // Curr Opin Lipidol. -2005 -V. 16. -№4. -P. 393-399.

59. Aydin M, Gencer M, Cetinkaya Y, Ozkok E, Ozbek Z, Kilic G, Orken C, Tireli H, Kara I. PON1 55/192 polymorphism, oxidative stress, type, prognosis and severity of stroke. // IUBMB Life. -2006. -V. 58 -№ 3. -P. 165-172.

60. Ayub Aamir, Michael I. Mackness, Sharon Arrol, Bharti Mackness, Jeetesh Patel, Paul N. Durrington Serum Paraoxonase After Myocardial Infarction , 1999 //Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. -1999. -V.19. -P.330-335

61. Ballinger SW, Patterson C, Knight-Lozano CA, Burow DL, Conklin CA, Hu Z, Reuf J, Horaist C, Lebovitz R, Hunter GC, Mclntyre K, Runge MS. Mitochondrial integrity and function in atherogenesis. // Circulation. -2002. -V. 106. -P. 544-549.

62. Basaga H.S. // Biochemical aspects of free radical. -1990. -V. 68. -P. 989998.

63. Beckman JS, Koppenol WH. Nitric oxide, superoxide, and peroxynitrite: the good, the bad, and the ugly. // Am J Physiol. -1996. -V.271. -P. 1424-C1437.

64. Berliner J.A., Navab M., Fogelman A.M., Frank J.S., Demer L.L., Edwards

65. P.A. et al. Atherosclerosis: basic mechanisms. Oxidation, inflammation, and genetics // Circulation. -1995. -V. 91. -P. 2488-2496.

66. Bielski B.H.J. Generation f Iron (IY) and Iron (Y) Comp;exes in Aqueous Solutions //Methos in Enzymology. -1990. -V. 186. -P. 108-113.

67. Blanc A, Pandey NR, Srivastava AK. Synchronous activation of ERK 1/2, p38mapk and PKB/Akt signaling by H202 in vascular smooth muscle cells: potential involvement in vascular disease. // International J Molec Med. -2003. -V.ll.-P. 229-234.

68. Boushey C.J., Beresford S.A., Omenn G.S., Motulsky A.G. A quantitative assessment of plasma homocysteinne as risk factor for vascular disease. Probable benefits of increasing folic acid intakes. // JAMA. -1995. -V. 274. -P. 1049-1057.

69. Brandes RP, Koddenberg G, Gwinner W, Kim D, Kruse HJ, Busse R, Mugge A. Role of increased production of superoxide anions by NAD(P)H oxidase and xanthine oxidase in prolonged endotoxemia. Hypertension.1999.-V. 33.-P. 1243-1249.

70. Brophy VH, Hastings MD, Clendenning JB, Richter RJ, Jarvik GP, Furlong CE Polymorphisms in the human paraoxonase (PONl) promoter. // Pharmacogenetics. -2001. -V. 11 №l-P. 7-84.

71. Butler E. Red cell metabolism // New York; London, 1975. -P. 89-90.

72. Cantin В., Gagnon F., Moorjani S., Despres J.p., Lamarche В., Lupien P.J. et al. Is lipoprotein (a) an independent risk factor for ischemic heart disease in men? The Quebec Cardiovascular Study // J. Am. Coll. Cardiol. -1998. -V. 31. -P. 519-525.

73. Casp CB, She JX, McCormack WT. Genetic association of the catalase gene

74. CAT) with vitiligo susceptibility // Pigment Cell Res. -2002. -V. 15 №1 -P.62-66.

75. Catano HC, Cueva JL, Cardenas AM, Izaguirre V, Zavaleta Al, Carranza E, Hernandez AF. Distribution of paraoxonase-1 gene polymorphisms and enzyme activity in a Peruvian population. // Environ Mol Mutagen. -2006. -V. 47 №9 -P.699-706.

76. Chambers SJ, Lambert N, Williamson G /Purification of a cytosolic enzyme from human liver with phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase activity. Chambers SJ, Lambert N, Williamson G // Int J Biochem. -1994. -V. 26-№10-11.-P. 1279-1286.

77. Cherki M, Berrougui H, Isabelle M, Cloutier M, Koumbadinga GA, Khalil

78. A./ Effect of PON1 polymorphism on HDL antioxidant potential is blunted with aging // Exp Gerontol. -2007. -V. 42 №8. -P. 815-824.

79. Christiansen L, Petersen HC, Bathum L, Frederiksen H, McGue M,

80. Christensen K. The catalase -262C/T promoter polymorphism and aging phenotypes. // J Gerontol A Biol Sci Med Sci. -2004. -V. 59 №9. B.886-889.

81. Condell RA, Tappel Al L Evidence for suitability of. Glutation peroxidase as a protective enzyme: Studies of oxidative damage, renaturation and proteolysis // Arsh Biochen Biophys. -1983. -V. 223. -№ 2. -P 407-416.

82. Cooke CL, Davidge ST. Peroxynitrite increases iNOS through NF-B anddecreases prostacyclin synthase in endothelial cells. // Am J Physiol. -2002. -V. 282. -Р.395^Ю2.

83. Costa LG, Richter RJ, Li WF, Cole T, Guizzetti M, Furlong CE. Paraoxonase (PON 1) as a biomarker of susceptibility for organophosphate toxicity. //Biomarkers. -2003. -V. 8 №1. P. 1-12.

84. Darley-Usmar V, Wiseman H, Halliwell B. Nitric oxide and oxygen radicals: a question of balance. // FEBS Letters. -1995. -V. 369. -P. 131— 135.

85. Davies K.J.A., Delsignore M.E., Lin S.W. Protein damage and degradation by oxygen radicals. I. General aspects // J. Biol. Chem. -1987. -V. 262. -№ 20. -P. 9902-9907.

86. Davies K.J.A. Protein oxidation and proteolytic degradation. Generalaspects and relationship to cataract formation // Adv. Exp. Med. Biol. -1990. -V. 264.-P. 503-511.

87. Dean R.T., Fu S., Stoker R., Davies M.J. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation // Biochem. J. -1997. -V. 324. № l. P. 1-19.

88. Draganov DI, La Du BN. Pharmacogenetics of paraoxonases: a brief review.Naunyn Schmiedebergs // Arch Pharmacol. -2004 V.369 -№1:78-88.

89. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function.// Physiol Rev. -2002. -V. 82. -P. 47-95.

90. Dubinina E.E., Babenko G.A., Scherbak I.G. Molecular heterogenety of plasma superoxide dismutase // Free Rad. Biol. And Med.-1992.-V.13. № 1.-P.1-7.

91. Durrington P.N; Mackness B; Mackness M.I The Hunt for Nutritional and Pharmacological Modulators of Paraoxonase // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. -2002. -V.22. -P. 1248.

92. Eckerson H.W., Romson J., Wyte C., La Du B.N. The human serum paraoxonase polymorphism: identification of phenotypes by their response to salts //Am. J. Hum. Genet. -1983. -V. 35. -P. 214-227.

93. Eny KM, El-Sohemy A, Cornelis MC, Sung YK, Bae SC. Catalase and PPARgamma2 genotype and risk of systemic lupus erythematosus in Koreans. //Lupus. -2005. -V. 14 №5. -P. 351-355.

94. Ernst E., Resch K.L. Fibrinogen as a cardiovascular risk factor: a metaanalysis and review of the literature // Ann. Inter. Med. -1993. -V. 118. -P. 956-963.

95. Escobar J.A., Rubio M.A., Lissi E.A. SOD and catalase inactivation by singlet oxygen and peroxyl radicals // Free Radical Biol, and med. -1996. -V. 20.-№3.-P. 285-290.

96. Escola-Gil JC, Calpe-Berdiel L, Palomer X, Ribas V, Ordonez-Llanos J, Blanco-Vaca F. Antiatherogenic role of high-density lipoproteins: insights from genetically engineered-mice. // Front Biosci. -2006. -V. 11. -P. 1328-1348.

97. Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults, Circulation. 2002.

98. Faraci FM, Didion SP Vascular protection: superoxide dismutase isoforms in the vessel wall. // Arterioscler Thromb Vase Biol. -2004. -V. 24 №8. -P. 1367-1373.

99. Faraci FM. Hyperhomocysteinemia: a million ways to lose control. // Arterioscler Thromb Vase Biol. -2003. -V. 23. -P. 371-373.

100. Finkel T.Oxidant signals and oxidative stress. // Current Opinion Cell Biol. -2003. -V. 15. -P. 247-254.

101. Flaherty J.T. Myocardial injury mediated by oxygen free radicals // Am. J. Med. -1991- V. 91. -P. 427-432.

102. Floche L. Glutathione peroxidase brought into focus // Free radicls in Biol. -1982. V.5.-P. 223-254.

103. Forsberg L, de Faire U, Morgenstern R. Low yield of polymorphisms from EST blast searching: analysis of genes related to oxidative stress and verification of the P197L polymorphism in GPX1. // Hum Mutat. -1999.1. V. 13 №4. -P. 294-300.

104. Fridovich I. Superoxide radical and Superoxide dismutase Annu. Rev. Biochem// -1995. -V. 64. -P. 97-112.

105. Fridovich I. Superoxide dismutase anion radical, Superoxide dismutases, and Related Matters//J. Biol. Chem. -1997. -V.272. -P. 18515-18517.

106. Gaidukov Leonid, Mira Rosenblat,Michael Aviram, and Dan S/Tawfik The 192R/Q polymorphs of serum paraoxonase PON1 differ in HDL binding, lipolactonase stimulation, and cholesterol efflux // Journal of Lipid Research. -2006. -V. 47.

107. Garland D. Role of site-specific, metal-catalyzed oxidation in lens-aging and cataract: a hypothesis // Exp. Eye Res. -1990 -V. 50. -№ 6. P. 677-682.

108. Goth L, Vitai M, Rass P, Sukei E, Pay A. Detection of a novel familial catalase mutation (Hungarian type D) and the possible risk of inherited catalase deficiency for diabetes mellitus. // Electrophoresis. -2005. -V. 26 -№9. -P. 1646-1649.

109. Goulas A, Fidani L, Kotsis A, Mirtsou V, Petersen RC, Tangalos E, Hardy J.An association study of a functional catalase gene polymorphism, -262C-->T, and patients with Alzheimer's disease. // Neurosci Lett. -2002. V. 330 - №2. -P.210-213.

110. Graner M, James RW, Kahri J, Nieminen MS, Syvanne M, Taskinen MR. Association of paraoxonase-1 activity and concentration with angiographic severity and extent of coronary artery disease. // J Am Coll Cardiol. -2006. -V. 47 №12. P. 2429-2435.

111. Gunnett CA, Heistad DD, Faraci FM. Gene-targeted mice reveal a critical role for inducible nitric oxide synthase in vascular dysfunction during diabetes. // Stroke. -2003. -V.34. P. 2970-2974.

112. Guo W, Adachi T, Matsui R, Xu S, Jiang B, Zou MH, Kirber M, Lieberthal W, Cohen RA. Quantitative assessment of tyrosine nitration of manganese superoxide dismutase in angiotensin Il-infused rat kidney. // Am J Physiol. -2003. -V. 285. -P.1396-1403.

113. Halliwell B. Free radicals, antioxidants and human disease: curiosity,cause, or consequence // Lancet. -1994. -V. 344. -P. 721-724.

114. Hofer SE, Bennetts B, Chan AK, Holloway B, Karschimkus C, Jenkins AJ, Silink M, Donaghue КС. Association between PON 1 polymorphisms, PON activity and diabetes complications. // J Diabetes Complications. -2006. -V. 20 №5. -P. 322-328.

115. Hong YC, Lee K, Yi CH, Ha EH, Christiani DC. Genetic susceptibility of term pregnant women to oxidative damage. // Toxicol Lett -2002. -V.129. -P. 255-262

116. Huggins T.G., Wells-Knecht M.C., Detorie N.A. et all. Formation of ortyrosine and dityrosine in proteins radiolysis and metal-catalyzed oxidation // J.Biol.Chem.-1993.-Vol.268.-P. 12341-12347.

117. Humbert R, Adler DA, Disteche CM, Hassett C, Omiecinski CJ, Furlong CE. The molecular basis of the human serum paraoxonase activity polymorphism. //Nat Genet. -1993. -V.3 №1. -P. 73-76.

118. Jakubowski H. Anti-N-homocysteinylated protein autoantibodies and cardiovascular disease. // Clin Chem Lab Med. -2005. -V.43 №10. -P.1011-1014.

119. Jakubowski Hieronim, Li Zhang, Arlene Bardeguez, Abram Aviv Homocysteine Thiolactone and Protein Homocysteinylation in Human Endothelial Cells // Circulation Research. -2000. -V.87. -P. 45.

120. James RW, Leviev I, Ruiz J, Passa P, Froguel P, Garin MC Promoter polymorphism T(-107)C of the paraoxonase PON1 gene is a risk factor for coronary heart disease in type 2 diabetic patients. // Diabetes. -2000. -V. 49- №8. -P. 1390-1393.

121. Jeppesen J., Hein H.O., Suadicani P., Holl L.G., Sacks F.M., et al. A prospective study of triglyceride level, low-density lipoprotein particle diameter, and risk of myocardial infarction // JAMA. -1996. -V. 276. P. 882-888.

122. Jiang Z, Akey JM, Shi J, Xiong M, Wang Y, Shen Y, Xu X, Chen H, Wu H, Xiao J, Lu D, Huang W, Jin L. A polymorphism in the promoter region of catalase is associated with blood pressure levels. // Hum Genet. -2001.1. V. 109-№1.-P. 95-98.

123. Какко S, Paivansalo M, Koistinen P, Kesaniemi YA, Kinnula VL, Savolainen MJ.The signal sequence polymorphism of the MnSOD gene is associated with the degree of carotid atherosclerosis. // Atherosclerosis. -2003. -V. 168 -№1. -P. 147-152.

124. Khersonsky O, Tawfik DS. Structure-reactivity studies of serum paraoxonase PON1 suggest that its native activity is lactonase.// Biochemistry. -2005. -V. 44 -№16. -P.6371-6382.

125. Kinnula VL. Focus on antioxidant enzymes and antioxidant strategies in . smoking related airway diseases. // Thorax. -2005. -V. 60 №8. -P. 693700.

126. Knekt P, Reunanen A, Jarvinen R, Seppanen R, Heliovaara M, Aromaa Antioxidant vitamin intake and coronary mortality in a longitudinal population study. // Am J Epidemiol. -1994. -V. 139 №12. - P. 11801189.

127. Korneluk RG, Quan F, Lewis WH, Guise KS, Willard HF, Holmes MT, Gravel RA. Isolation of human fibroblast catalase cDNA clones. Sequence of clones derived from spliced and unspliced mRNA. // J Biol Chem. -1984. -V. 259 №22 -P. 13819-13823.

128. Serbian population. // Clin Chem Lab Med. -2006. -V. 44 №10 -P. 12061213.

129. Kujiraoka Т., Oka Т., Ishihara I., Egashira Т., Fujioka Т., Saito E., Saito S., Miller N.E., Hattori H. A sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for human serum paraoxonase concentration // J. Lipid* Research. -2000.-V. 41.-P. 1358-1363.

130. La Du В., Aviram M., Billecke S . et al. On the physiological role(s) of the paraoxonases. // Chemico- Biological Interactions.-1999.Vol 199, P 379388.

131. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. -1970. -V. 227. -P. 680-685. .

132. Laughlin MH, Welshons WV, Sturek M, Rush JWE, Turk JR, Taylor JA, Judy BM, Henderson KK, Ganjam VK. Gender, exercise training, and eNOS expression in porcine skeletal muscle arteries. // J Appl Phyiol. -2003.-V. 95. -P. 250-264.

133. Leviev I, Deakin S, James RW. Decreased stability of the M54 isoform of paraoxonase as a contributory factor to variations in human serum paraoxonase concentrations. // J Lipid Res. -2001'. -V. 42 №4 -P.528-535.

134. Leviev I, James RW. Promoter polymorphisms of human paraoxonase PON1 gene and serum paraoxonase activities and concentrations. //

135. Arterioscler Thromb Vase Biol. -2000. -V. 20 №2 -P. 516-521.

136. Levine R.L., Garland D., Oliver C.N. et al. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins // Methods Enzymol. -1990. -V. 186.-P. 464-478.

137. Lushchak V.I., Gospodaryov D.V. // Cell. Biol. Intern. -2005. -V. 29. -P. 187-192.

138. Li HL, Liu DP, Liang CC. Paraoxonase gene polymorphisms, oxidative stress, and diseases. // J Mol Med. -2003. -V. 81 №12 - P. 66-79.

139. Li L, Fink GD, Watts SW, Northcott CA, Galligan JJ, Pagano PJ, Chen AF. Endothelin-1 increases vascular superoxide via endothelin(A)-NADPH oxidase pathway in low-renin hypertension. // Circulation. -2003. -V.107.-P. 1053-1058.

140. Liu Y., Rosenthal R.E., Starke-Reed P., Fiskum G. Inhibition of postcardiac arrest brain protein oxidation by acetyl-carnitine // Free Radic. Biol. Med. -1993. -V. 15. -№ 6. -P. 667-670.

141. Lowry O.H., Rosenhrough J., Farr A., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. -1951. -V.193. №1. -P.268-275.

142. Mackness B, Durrington PN, Mackness MI. The paraoxonase gene familyand coronary heart disease. // Curr Opin Lipidol. -2002. -V.13 №4 -P. 357-362.

143. Mackness B, Hine D, Liu Y, Mastorikou M, Mackness M. Paraoxonase-1 inhibits oxidised LDL-induced MCP-1 production by endothelial cells. // Biochem Biophys Res Commun. -2004. -V. 318 №3 -P. 680-683.

144. Mackness В., mackness M., Arrol S. et al. Effect of the human serum paraoxonase 55 and 192 genetic polymorphisms on the protection by high density lipoprotein against low lipoprotein oxidative modification. // FEBS.Lett.-1998. Vol.423 P 57-60.

145. Mackness M, Mackness B. Paraoxonase 1 and atherosclerosis: is the gene or the protein more important? // Free Radic Biol Med. -2004. -V. 37 №9 -P. 1317-1323.

146. Mackness MI, Arrol S, Durrington PN. Substrate specificity of human serum paraoxonase.//Biochem Soc Trans. -1991. -V. 19 №3 -P.304.

147. Mackness MI, Arrol S, Mackness B, Durrington PN. Alloenzymes of paraoxonase and effectiveness of high-density lipoproteins in protecting low-density lipoprotein against lipid peroxidation. // Lancet. -1997. -V. 349 -№9055-P. 851-852.

148. Mackness MI, Hallam SD, Peard T, Warner S, Walker CH. The separation of sheep and human serum "A"-esterase activity into the lipoprotein fraction by ultracentrifugation. // Comp Biochem Physiol. -1985. -V. 82. -P.675-677.

149. Mackness, M.I."HDL, its enzymes and its potential to influence lipid peroxidation". //Atherosclerosis. -1995. -V. 115. -P. 243-253.

150. MacMillan-Crow LA, Cruthirds DL.Manganese superoxide dismutase in disease. // Free Radical Res. -2001. -V. 34. -P. 325-336.

151. Manresa JM, Zamora A, Tomas M, Sent! M, Fito M, Covas MI, Alcantara

152. M, Latorre G, Escurriol V, Domingues S, Marrugat J. Relationship oficlassical and non-classical risk factors with genetic variants relevant to coronary heart disease. // Eur J Cardiovasc Prev Rehabil. -2006. -V. 13 №5 -P. 738-744.

153. Mazur A. An enzyme in animal tissues capable of hydrolyzing the phosphorus-fluorine bond of alkyl fluorophospates. // J Biol Chem. -1946. -V. 164.-P. 271-289.

154. Michelakis ED, Hampl V, Nsair A, Wu XC, Harry G, Haromy A, Gurtu R, Archer SL. Diversity in mitochondrial function explains differences in vascular oxygen sensing. // Circulation Res. -2002. -V. 90. -P. 1307-1315.

155. Mitrunen K, Silanpaa P, Kataja V, et al. Association between manganese superoxide dismutase (MnSOD) gene polymorphism and breast cancer risk. // Carcinogenesis -2001. -V. 22. -P. 827-829.

156. Miyamoto Т., Takahashi Y., Oohashi Т., Sato K., Oikawa S. Bovine Paraoxonase 1 Activities in Serum and Distribution in Lipoproteins // J. Vet. Med. Sci. -2005. -V.67. -№ 3. -P. 243-248.

157. Mochizuki H, Scherer SW, Xi T, et al.Human PON2 gene at 7q21.3: cloning, multiple mRNA forms, and missense polymorphisms in the coding sequence. // Gene -1998. -V.213. -P.149-157.

158. Mollsten A, Marklund SL, Wessman M, Svensson M, Forsblom C, Parkkonen M, Brismar K, Groop PH, Dahlquist G. A functionalpolymorphism in the manganese superoxide dismutase gene and diabetic nephropathy. // Diabetes. -2007. -V. 56 №1. -P. 265-269.

159. Murarakami K., Jahngen J.H., Lin S.W., Davies K.J.A., Taylor A. Lens • proteasome shows enhanced rates of degradation of hydroxyl radicalmodified alpha-crystallin // Free Radic. Biol. Med. -1990. V. 8. -№ 3. -P. 217-222.

160. Nathan С Specificity of a third kind: reactive oxygen and nitrogen intermediates in cell signaling. // J Clin Invest. -2003. -V.lll. -P. 769778.

161. Oda MN, Bielicki Ж, Ho TT, Berger T, Rubin EM, Forte TM. Paraoxonase 1 overexpression in mice and its effect on high-density lipoproteins. Biochem Biophys Res Commun. -2002. -V. 290 -№3. -P.921-927.

162. Omar В A; Gad N M; Jordan M C; Striplin S P; Russell W J; Downey J M; McCord J M Cardioprotection by Cu,Zn-superoxide dismutase is lost at high doses in the reoxygenated heart.// Free radical biology & medicine -1990. -V. 9 -№6 -P. 465-471.

163. Ookawara T, Eguchi H, Nishimura M, Kizaki T, Takayama E, Saitoh D, Ohno H, Suzuki K. Effects of oxidative stress on the nuclear translocation of extracellular superoxide dismutase. Biochem Biophys Res Comm. -2003.-V. 303.-P. 914-919.

164. Osaki F, Ikeda Y, Suehiro T, Ota K, Tsuzura S, Arii K, Kumon Y, Hashimoto K. Roles of Spl and protein kinase С in regulation of human serum paraoxonase 1 (PON1) gene transcription in HepG2 cells. // Atherosclerosis. -2004. -V. 176 -№2. -P.279-287.

165. Packer L, Ed. // Methods in Enzymology, Volume 349. San Diego, Calif: Academic Press, 2002. 123 p.

166. Panntke U., Volk Т., Schmutzler M., Kox W.J., Sitte N., Grune T. Oxidized proteins as a Marker of oxidative stress during coronary heart surgery//Free Radical. Biol. Med. -1999. -V. 27. -№9/10. -P. 1080-1086.

167. Park J.W., Floyd R.A. Lipid peroxidation products mediate the formation of 8-hydroxydeoxyguanosine in DNA // Free Radical. Biol. Med. -1992. -V. 12. -P. 245-250.

168. Parker L., Prilipko L., Christen Y. Free Radicals in the Brain Aging //

169. Neurologiacal and Mental Disorders. -Berlin; New York; Springer-Verlag, 1992.-V. 41.-P. 213-221.

170. Pasdar Alireza, Helen Ross-Adams, Alastair Cumming, John Cheung, Lawrence Whalley, David St Clair, and Mary-Joan MacLeod Paraoxonase gene polymorphisms and haplotype analysis in a stroke population // BMC Med Genet. -2006. -V. 7. -P. 28.

171. Pfohl M, Koch M, Enderle MD, Ktihn R, Fullhase J, Karsch KR, Haring HU./Paraoxonase 192 Gln/Arg gene polymorphism, coronary artery disease, and myocardial infarction in type 2 diabetes. // Diabetes. -1999. -V.48 №3 -P. 623-627.

172. Playfer JR, Eze LC, Bullen MF, Evans DAP. Genetic polymorphism and interethnic variability of plasma paraoxonase activity. // J Med Genet. -1976.-V. 13.-P. 337-342.

173. Primo-Parmo SL, Sorenson RC, Teiber J, La Du BN. The human serum paraoxonase/arylesterase gene (PONl) is one member of a multigene family. // Genomics -1996. -V. 33. -P. 498-507.

174. Quan F, Korneluk RG, Tropak MB, Gravel RA. Isolation and characterization of the human catalase gene. //Nucleic Acids Res. -1986. -V. 14-№13 -P. 5321-5335.

175. Rahman I, Biswas SK, Kode A. Oxidant and antioxidant balance in the airways and airway diseases. // Eur J Pharmacol. -2006. -V. 533 -№1-3. -P. 222-239.

176. Reddy ST, Devarajan A, Bourquard N, Shih D, Fogelman AM. Is it just paraoxonase 1 or are other members of the paraoxonase gene family implicated in atherosclerosis? // Curr Opin Lipidol. -2008. -V. 19 -№4. -P.405-408.

177. Roest M, van Himbergen TM, Barendrecht AB, Peeters PH, van der Schouw YT, Voorbij HA. Genetic and environmental determinants of the PON-1 phenotype. //Eur J Clin Invest. -2007. -V. 37-№3. -P. 187-196.

178. Rosenblum JS, Gilula N, Lerner RA. /On signal sequence polymorphisms and diseases of distribution. // Proc Natl Acad Sci. -1996. -V. 93. -P.4471-4473.

179. Ross R. Atherosclerosis an inflammatory disease // N. Engl. J. Med. -1999. -V. 340.-P. 115-126.

180. Rozenberg O, Shih DM, Aviram M. Paraoxonase 1 (PON1) attenuates macrophage oxidative status: studies in PON1 transfected cells and in PON1 transgenic mice. //Atherosclerosis. -2005. -V. 181 -№1. -P.9-18.

181. Rubin E., Farber J.L. Mechanism of the killing of cultured hepatocytes by hydrogen peroxide // Arch.Biochem.Biophys. -1984. -V.228. -P. 450-459.

182. Saeed M, Perwaiz Iqbal M, Yousuf FA, Perveen S, Shafiq M, Sajid J, Frossard PM Interactions and associations of paraoxonase gene cluster polymorphisms with myocardial infarction in a Pakistani population. // Clin Genet. -2007. -V. 71 -№3. -P.238-244.

183. Saha N, Roy AC, Teo SH, Tay JSH, Ratnam SS. Influence of serum paraoxonase polymorphism in serum lipids and apolipoproteins.// Clin Genet. -1991. -V. 40. -P. 277-282

184. Salo D.C., Pacific R.E., Lin S.W., Giulivi., Davies K.J.A. Superoxide dismutase undergoes proteolysis and fragmentation following oxidative modification and inactivation // J. Biol. Chem. -1990. -V. 265. -№ 20. -P.11919-11927.

185. Sanghera DK, Aston CE, Saha N, Kamboh MI. DNA polymorphisms in two paraoxonase genes (PON1 and PON2) are associated with the risk of coronary heart disease. // Am J Hum Genet. -1998. -V. 62 -№1. -P. 36-44.

186. Scacchi R, Corbo RM, Rickards O, De Stefano GF / New data on the world distribution of paraoxonase (PON1 Gin 192 Arg) gene frequencies. //HumBiol. -2004. -V. 75 -№3. -P. 365-373.

187. Senti V., Tomas M., Marrugat J., Elosua R. Paraoxonasel-192 Polymorphism modulates the nonfatal myocardial risk associated with decreased HDLs // Atherosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. -2001. -V. 21. -P.415-424.

188. Serrato M, Marian AJ. A variant of human paraoxonase/arylesterase (HUMPONA) gene is a risk factor for coronary artery disease.// J Clin Invest. -1995. -V. 96 -№6. -P.3005-3008.

189. Smith C.D., Carney J.M., Starke-Reed P.E., Oliver C.N., Stadtman E.R., Markesbery N.R. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1991. -V. 88. -№ 1-2. -P. 58-65.

190. Soriano FG, Virag L, Jagtap P, Szabo E, Mabley JG, Liaudet L, Marton A, Hoyt DG, Murphy KGK, Salzman AL, Southan GJ, Szabo C. Diabetic endothelial dysfunction: the role of poIy(ADP-ribose) polymeraseactivation. //Nature Med. -2001. -V. 7.-P. 108-113.

191. Sohal R.S., Weindriuch R. Oxidative stress, caloric restriction, and aging // Science. -1996. -V. 273. № 5271. -P. 59-63.

192. Stadtman E.R. Covalent modification reaction are marking step in protein turnover//Biochemistry. -1990. -V. 29. -No 27. -P. 6323-6331.

193. Stadtman E.R. Metal ion-catalysed oxidation of proteins: mechanism and conseguences // Free Radical Biol, and Med. -1990a. -V.9. -P. 315-325.

194. Stadtman E.R., Starke-Reed P.E., Oliver C.N., Carney J.M; Floyd R.A. Protein modification in aging. In: Free radicals and aging. I. Emerit, B. Chance. Eds. Basel, Boston, Berlin: Birkhduser, 1992. -P. 64-72.

195. Stoker R., J.F. Keaney. Role of oxidations in atherosclerosis // Physiol. Rev. -2004. -V. 84. -P. 1381-1478.

196. Strehlow K, Rotter S, Wassman S, Adam O, Grohe C, Laufs K, Bohm M, Nickenig G. Modulation of antioxidant enzyme expression and function by estrogen. // Circulation Res. -2003. -V. 93. -P. 170-177.

197. Sutton A, Khoury H, Prip-Buus С, Cepanec C, Pessayre D, Degoul F. The Alal6Val genetic dimorphism modulates the import of human manganese superoxide dismutase into rat liver mitochondria. // Pharmacogenetics. -2003. -V. 13 -№3. -P. 145-157

198. Suzuki K, Tatsumi H, Satoh S, Senda T, Nakata T, Fujii J, Taniguchi N.

199. Manganese-superoxide dismutase in endothelial cells: localization and mechanism of induction. // Am J Physiol. -1993.-V. 265. -P. 1173-1178.

200. Taylor S.W., Fahy E., Murray J., Capaldi R.A., Grosh S.S. Oxidative post-translational modification of tryptophan residuce in cardiac mitochondrial proteins //J. Biol. Chem. -2003. -V. 278. 22. -P. 19587-19590.

201. Taylor F.W.J. Ultraviolet fluorescence of proteins in neutral solution // Biochem. J. -1960. -V.76. -№ 2. -P. 381-388.

202. Tomas M, Latorre G, Senti M, Marrugat J. The antioxidant function of high density lipoproteins: a new paradigm in atherosclerosis // Rev Esp Cardiol. -2004. -V. 57 -№6. -P. 557-569.

203. Uchida K., Stadtman E.R. Modification of histidine residues in proteins by reaction with 4-hydroxynonenal // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1992. -V. 89. -P. 4544-4548.

204. Uddin M, Yang H, Shi M, Polley-Mandal M, Guo Z. Elevation of oxidative stress in the aorta of genetically hypertensive mice. // Mech Ageing Dev. -2003. -V. 124. -P. 811-817.

205. Visner GA, Chesrown SE, Monnier J, Ryan US, Nick HS. Regulation of manganese superoxide dismutase: IL-1 and TNF induction in pulmonary artery and microvascular endothelial cells. // Biochem Biophys Res Commun. -1992. -V. 188. -P. 453-462.

206. Wallace S.S. Oxidative stress and the Molecular Biology of Antioxidant defenses (Scandalios J.G., ed.). CSHL Press, 1997. -P. 49-90.

207. Watzinger N, Schmidt H, Schumacher M, Schmidt R, Eber B, Fruhwald FM, Zweiker R, Kostner GM, Klein W. Human paraoxonase 1 gene polymorphisms and the risk of coronary heart disease: a community-based study. // Cardiology. -2002. -V. 98 №3. -P. 116-122.

208. Wei EP, Kontos HA, Christman CW, DeWitt DS. Superoxide generation and reversal of acetylcholine-induced cerebral arteriolar dilation after acute hypertension.// Circ Res. -1985. -V. 57. -P." 781-787.

209. Wheeler JG, Keavney BD, Watkins H, Collins R, Danesh J. Four paraoxonase gene polymorphisms in 11212 cases of coronary heart disease and 12786 controls: meta-analysis of 43 studies. // Lancet. -2004. -V. 364. № 9434. P. 579-80.

210. Wierzbicki AS. New lipid-lowering agents. //Expert Opin Emerg Drugs.2003.-V. 8. № 2.-P. 365-376.

211. Williams K.J., Fisher E.A. Oxidation? Lipoproteins and atherosclerosis // Curr. Opin. Clin. Nutr. Card. -2005. -V. 8. -P. 139-146.

212. Yamamoto, Y., Nagata, Y, Niki, E., Watanabe, K., and Yoshimura, S Plasma glutathione peroxidase reduces phosphatidylcholine hydroperoxide .// Biochem. Biophys. Res. Commun. -1993. V. 193. -P. 133-138.

213. Zou M-H, Shi C, Cohen RA. Oxidation of the zinc-thiolate complex and uncoupling of endothelial nitric oxide synthase by peroxynitrite. // J Clin1.vest. -2002. -V.109. -P. 817-826.

Информация о работе

Пардо, Пералес Георгина
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы