Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Модификация низкомолекулярными азотистыми катаболитами мутагенного эффекта окислительного стресса и их влияние на антиоксидантный статус клеток и тканей

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Покудина, Инна Олеговна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Генотоксические эффекты свободно-радикальных процессов.

1.2.Влияние активных форм кислорода на клеточный метаболизм.

1.3.Клеточные механизмы защиты от токсического действия кислорода и его активных форм.

1 ААнтиоксиданты как антимутагены.

ГЛАВА2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Постановка эксперимента

2.1.1 Исследование антиоксид антных свойств аллантоина, парааминбензойной кислоты и их смеси в опытах in vivo.

2.1.2. Исследование генотоксичности плазмы крови, эритроцитов и тканей животных.

2.1.3 Изучение влияния плазмы, эритроцитов крови крыс и препарата гемоглобина на частоту индукции точковых мутаций.

2.1.4 Изучение антиоксидантных свойств аллантоина, парааминобензойной кислоты и их смеси в экспериментах in vitro.

2.2. Получение биологического материала.

2.1.1. Приготовление гомогенатов тканей.

2.2.2 Получение плазмы крови и суспензии эритроцитов.

2.3. Генетические методы исследования.

2.3.1.Тест Эймса (Salmonella/микросомы).

2.3.2.Биолюминесцентный анализ SOS-ответа клеток Echerichia coli.

2.3.3. Определение частоты точковых мутаций у Echerichia.coli.

2.4. Биохимические методы исследования.

2.4.1. Определение содержания шиффовых оснований.

2.4.2. Определение содержания малонового диальдегида.

2.4.3.Экстракция липидов.

2.4.4 Определение активности супероксиддисмутазы.

2.4.5. Определение активности каталазы.

2.4.6. Определение количества гемоглобина.

2.4.7. Определение количества белка.

2.4.8.0пределение оксидазной активности церулоплазмина.

2.4.9. Определение суммарной пероксидазной активности (СПА).

2.5. Биофизические методы исследования.

2.5.1 .Хемилюминесцентный анализ.

2.6.Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ЗЛ.Биохимические и генетические последствия окислительного стресса в тканях животных.

3.1.1. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях животных после окислительного стресса.

3.1.2. Антиоксидантный статус тканей животных, подвергавшихся действию повышенного давления кислорода.

3.1.3. Исследование генотоксичности тканей животных.

3.1.4 Изучение влияния различных режимов ГБО на уровень ДНК-репарационного SOS-ответа E.coli.

3.2. Роль железосодержащих белков в усилении мутационного процесса при окислительном стрессе.

3.2.1.Содержание ВЭГ и свободнорадикальные процессы в плазме крови крыс, подвергшихся действию повышенного давления кислорода.

3.2.2. Влияние плазмы, эритроцитов крови крыс и гемоглобина на частоту индукции точковых мутаций.

3.2.3. Влияние плазмы, эритроцитов крови крыс и гемоглобина на уровень SOS -ответа клеток E.coli.

3.3.Исследование антиоксидантных свойств аллантоина и парааминобензойной кислоты в тканях животных при окислительном стрессе.

3.3.1. Влияние аллантоина и парааминобензойной кислоты на интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях животных после окислительного стресса.

3.3.2. Влияние аллантоина и парааминобензойной кислоты на состояние антиоксидантного статуса тканей животных после окислительного стресса.

3.4. Исследование антимутагенных свойств аллантоина и парааминобензойной кислоты при окислительном стрессе.

3.4.1. Исследование влияния аллантоина и ПАБК на накопление генотоксичных продуктов в тканях животных после действия повышенного давления кислорода.

3.4.2 . Исследование влияния аллантоина на индуцированный мутагенез у E.coli.

3.4.3. Влияние аллантоина и ПАБК на репарационные процессы при окислительном стрессе в SOS-lux тесте.

ГЛАВА 4. Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Модификация низкомолекулярными азотистыми катаболитами мутагенного эффекта окислительного стресса и их влияние на антиоксидантный статус клеток и тканей"

В живых организмах постоянно происходит образование активных форм шслорода (АФК), высокотоксичных для биологических систем на всех уровнях зрганизации - от молекулярно-клеточного до организменного. Окислительное повреждение ДНК является наиболее распространенным типом повреждения зэробных клеток и играет важную роль в патологических процессах, таких как мутагенез, канцерогенез, кластогенез, апоптоз и старение (Jaruga ,1996). 1роблема окислительного стресса является высокоактуальной в связи с тем, ito АФК занимают ведущее место в патогенезе радиационного поражения, юспалительных реакций, бронхо-легочных, сердечно-сосудистых и диетически обусловленных заболеваний (Halliwell, 1984, Baud, Ardaillou, 1994, le Groot, 1994, Chiu, Liu, 1997, Bauer, 1999, Toyokuni, 1999).

Жизнедеятельность биологических объектов возможна только благодаря уществованию защитных систем, звеньями которых являются ферментативные I неферментативные антиоксиданты. Нарушение динамического гомеостаза (нутриклеточных окислительно-восстановительных процессов приводит к >азвитию окислительного стресса и, как следствие, возникновению и [акоплению окислительных повреждений (Ames, 1983, Gutteridge, 1994).

АФК играют ведущую роль в генезе токсического эффекта повышенного ;авления кислорода (Frank, Massaro,1980, Sies, 1985, Мс Cord, Fridovich, 1988, lalliwell, Gutteridge, 1990), использованного нами в работе в качестве модели числительного стресса. Выбор гипербарической оксигенации обусловлен акже возрастанием масштабов практического применения кислорода под авлением в различных областях промышленности, в том числе при изучении одводных погружений (Зальцман, 1984, Ефуни, 1986). Кроме того, широкое спользование метода оксигенобаротерапии в медицине требует генетико-иохимического нормирования для предотвращения патологических эффектов ипербарооксигенации.

Исследования мутагенного эффекта физических и химических агентов и механизма их действия, как правило, идут параллельно с работами, задачей которых являются поиски соединений, способных защитить организм от неблагоприятных воздействий. В последние годы предложена гипотеза тротекторного катаболизма, постулирующая защитное действие шзкомолекулярных азотсодержащих катаболитов, образующихся в результате ибели неустойчивых к гипероксии клеток (Гуськов, 1989). Эффективность шзкомолекулярных антиоксидантов, ингибирующих свободнорадикальные 1роцессы, связана с их способностью проникать через мембраны и тканевые карьеры. Антиоксидантные свойства продуктов азотистого катаболизма -лочевины, мочевой кислоты были показаны как в экспериментах in vivo, так и n vitro (Лукаш, 1974, Кения, 1991). Продукты катаболизма азотистых )снований по данным литературы являются эффективными ловушками ;вободных радикалов (Cohen et. al., 1984, Lissi et.al., 1988). В то же время, роль 1екоторых промежуточных продуктов катаболизма нуклеиновых кислот, в [астности аллантоина, как тушителя свободных радикалов, практически не 1зучена.

В связи с этим целью настоящей работы явилось исследование [ротекторных свойств низкомолекулярных азотистых метаболитов природного [роисхождения аллантоина и парааминобензойной кислоты при жислительном стрессе с помощью биохимических и генетических тест-систем.

Исходя из поставленной цели, были сформулированы следующие задачи: .Сопоставить характеристики оценки окислительного стресса, полученные при [спользовании биохимических методов и SOS-lux теста;

Выделить эндогенные факторы, отвечающие за усиление мутагенного ффекта окислительного стресса;

Оценить протекторный эффект аллантоина и парааминобензойной кислоты ри окислительном стрессе для про- и эукариот.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Покудина, Инна Олеговна

ВЫВОДЫ:

1.Действие ГБО 0,5 МПа 02 2ч на крыс вызывает значительную ктивацию ПОЛ в эритроцитах, мозге, легких, печени и почках, при этом ровень МДА повышается в среднем на 43-90%, ШО- на 50-103%. Гарушение синергизма функционирования компонентов антиоксидантной >ерментативной системы выражается в ингибировании активности СОД в ритроцитах и тканях животных в среднем на 53-60%, повышении ктивности каталазы в тканях в среднем на 24-77% и снижением в ритроцитах на 38%.

2.После окислительного стресса, индуцированного (ГБО 0,5 МПа 02 ч и 0,7 МПа 02 до судорог) в тканях животных регистрируется акопление метаболитов, изменяющих по сравнению с контролем ровень биолюминенсценции в SOS-lux тесте. После пребывания :ивотных в условиях ГБО 0,5 МПа 02 2ч максимальное количество шотоксических продуктов зарегистрировано в мозге и почках, после БО 0,7 МПа 02 (до судорог) - в печени и легких.

3.В модельных экспериментах обнаружено, что эритроциты и пеэритроцитарный гемоглобин при ГБО (0,7МПа02 2ч) увеличивают астоту индукции точковых мутаций типа замены пар оснований у S. phimurium ТА98. Обработанные ГБО (0,7 МПа 02 2ч) эритроциты и :моглобин повышают выход точковых мутаций типа сдвига рамки штывания у S. typhimurium 100.

4. Введение животным аллантоина, ПАБК и их смеси троекратно il,12 и 24ч перед ГБО (0,5МПа 02 2ч) ингибирует ПОЛ, нормализует щержание МДА и ШО в эритроцитах и тканях животных. Аллантоин, АБК и их смесь восстанавливают активность внутриклеточной

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Покудина, Инна Олеговна, Ростов-на-Дону

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. Л., Наука.-1985

2. Акберова С.И., Мусаев П.И., Магомедов Н.М., Бабаев Х.Ф., Гахраманов Х.М., Строева О.Г. Парааминбензойная кислота как антиоксидант // Докл. Академии наук, 1998.- Т.361 № 3.- С.419-421.

3. Алекперов У.К. Антимутагены и проблема защиты генетического аппарата. Баку, ЭЛМ.- 1979.-114с.

4. Алекперов У. К. Антимутагенез :Теортические и прикладные аспекты.- М., 1984

5. Артамонова Е.Ю., Синельщикова Т.А., Засухина Г.Д. Различия в антимутагенной активности витаминных препаратов в клетках человека при воздействии мутагенов различной природы.// Генетика -1994.- Т.ЗО.-№11.- С.1556-1557

6. Арчаков А.И. Микросомальное окисление//М.,Наука.-1975.-327 с.

7. Афанасьев Ю.И., Боронихина Т.В. Витамин Е: значение и роль в организме // Успехи современной биологиии-1987.- Т.104.-С.400-411

8. Ахундова Д. Изучение цитогенетической активности некоторых витаминов, как возможных элементов естественной системы антимутагенов // Автореф. дис. канд. биол. наук Баку, Гос. ун-т, 1974.-С.20.

9. Белевский В.Н. Химия высоких энергий.// М.-1981.-В.15.-№1.-С.25

10. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. -М.Медицина.- 1989.

11. Брусков В.И., Масалимов Ж.К., Усачева A.M. Определение 8-оксогуанина в ДНК методом хемилюминисцентного иммуноферментного анализа.// Биохимия.-1999.- Т.64, вып.7.- С958-964

12. Бурмистров С.О., Дубинина Е.Е., Арутюнян А.В. Перекисное окисление липидов, белков и активность антиоксидантной системы сыворотки крови новорожденных и взрослых. М. 1997.-С.36-40

13. Васильева С.В. Автореферат докторской диссертации.// 1984.- М.

14. Васильева С.В., Давниченко Л.С., Рапопорт И.А. Усиление парааминбензойной кислотой процессов репарации ДНК в E.coli К-12 // Генетика.- 1982.- Т.18, № 3.- С.381-391.

15. Васильева С. В., Жижина Г.П., Рапопорт И.А. Взаимодействие парааминобензойной кислоты с ДНК in vitro // ДАН- 1980,- С.755-757.

16. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисноеокисление липидов в биологических мембранах.-М.,-Наука-1972.-С.252

17. Владимирский Б.М. Математические методы в биологии.- Ростов-на Дону, 1983

18. Внуков В.В. Железосодержащие белки и протеолитическая активность в сыворотке крови при гипероксии и защитном действии мочевины: Дисс. канд. биол.наук.-Харьков,1979

19. Гончарова Р.И. Антимутагенез как генетический процесс // Вест. РАМН, 1993.-№ 1.-С 26-32.

20. Гончарова Р.И., Кужир Т.Д., Дубур Г.Я, Улдрикис Я. Р. Сравнительное изучение антиоксидантного действия соединений дигидропиридинового ряда в связи с их антиоксидантной активностью// Доклады АН СССР, 1990,- Т.255.- №6.- С. 1483-1486.

21. Гуськов Е.П., Дворкина P.M., Беличенко Н.И. Модификация цитогенетического действия ГБО С-фенил-третбутил нитроном // Цитология и генетика, 1986.-Т.20, №4.-С.257-261

22. Гуськов Е.П., Шкурат Т.П., Шиманская Е.И., Янушевич С.В. Цитогенетические последствия оксигенобаротерапии// Космическая биология и авиакосмическая медицина. -1990.-№4.-С.48-50.

23. Гуськов Е.П., Шкурат Т.П. Цитологические последствия гипербарической оксигенации в ряду клеточных циклов лимфоцитов периферической крови человека // Генетика, 1985.—Т.21,№8—С.1361— 1367.

24. Гуськов Е. П., Шкурат Т. П., Камынина М. В. Цитогенетические последствия гипербарической оксигенации фракционированного и пролонгированного воздействия//Генетика, 1985.—21, № 10—С. 1693— 1699.

25. Гуськов Е.П., Шкурат Т.П. . Нестабильность генома соматических клеток человека как адаптивная норма//Успехи современной биологии, 1989.—№108, вып. 2(5).— С. 163—172.

26. Гуськов Е. П., Гуськова С. И., Шиманская Е. И., Шкурат Т. П. Влияние гипербарической оксигенации на соматические и генеративные клетки крыс.// Цитология и генетика.— 1990.—24, № 2— С. 25—30.

27. Демченко И.Т. Физиология экстремальных состояний //Успехи физиол. Наук.-1997.-Т.25.-№ 2.-С.97-102.

28. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеидов. М., Наука- 1989.-277с.

29. Дорожко А.И., Бродский А.В., Афанасьев И.Б. Хелатирующее иантирадикальное действие рутина в процессе перикисного окисления липидов микросом и липосом// Биохимия, 1988/- Т.53, вып. 53.- С.1660-1665.

30. Дудкин С.И. Металлосодержащие белки плазмы крови при гипероксии: Дисс. канд. биол.наук.-Харьков,1984.-226с.

31. Дурнев А.Д., Середенин С.Б. Фармакологические проблемы поиска и применения антимутагенов // Вестник РАМН.-№ 1.-1993.-С. 19-26.

32. Ефуни С.Н. (под ред.). Руководство по гипербарической оксигенации (теория и практика клинического применения).-М.: Медицина, 1986.-416с.

33. Зальцман Г.Л. Гипербарическая физиология ( состояние и перспектива)//Физиология человека.-1985.-Т.10,№4.-С.659-673

34. Засухина Г.Д., Синелыцикова Т.А. Мутагенез, антимутагенез, репарация ДНК// Вестник РАМН.-1993.- №3.-С. 17-29

35. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах.// Успехи современной биологии.-1993 .-Т. 113 .-вып.З .-С.286—297

36. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б., Вольский Н.Н., Козлов В.А. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз.// Успехи современной биологии.- 1999.-Т.119.- №5.- С.440-450

37. Иванов И.Ф. О роли а-токоферола в поражающем эффекте пострадиационной гипероксии //Радиобиология. 1976.- Т. 15. № 5. -С.737-776.

38. Каган В. Е., Орлов О.Н., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов.// Итоги науки и техники. -Биофизика. -1986.-№18.-С.133

39. Капитанов А.Б. Биологические проблемы старения и увеличения продолжительности жизни М. Наука.-1988.-С.52

40. Капитанов А.Б., Пименов A.M. Каротиноиды как антиоксиданты.// Успехи современной биологии, 1996.-Т.116.-вып.2.- С.179-193

41. Каракашов А.В., Вичев Н.К. Гемоглобин в сыворотке крови // Микрометоды в клинической лаборатории . София: Медицина и физкультура.- 1973.- С. 114-115.

42. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи современной биологии.-1993.-Т.113.-вып.4.-С.456-470

43. Кения М.В., Шкурат Т.П., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Изменение уровня мочевой кислоты в тканях крыс как системная реакция на гипероксию// Авиакосмическая и экологическая медицина.-1993.-Т.27,-№3.-С.37-43.

44. Кларк Д.М. Токсическое действие кислорода // Медицинские проблемы побводных погружений. Под ред. П.Б.Беннета и Д.Г. Эллиота.-М.: Медицина, 1988.-С. 190-246.

45. Кокунин В.А. Статистическая обработка данных при малом числе опытов//Укр. Биохимический журнал.-1975.-Т.4,№6.-С.776

46. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии. Минск, Беларусь.- 1976.- 367с.

47. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело.- 1988. №1.- С.16-19.

48. Кричевская А.А., Лукаш А.И., Внуков В.В., Дудкин С.И. Железосодержащие белки и протеолотеческая активность в сыворотке крови при гипербарической оксигенации и защитном действии мочевины// Биол. науки.- 1983-№9.-С.30-35

49. Кричевская А.А., Лукаш А.И., Броновицкая З.Г. Биохимические механизмы кислородной интоксикации//Ростов-на-Дону: РГУ, 1980. -116 с.

50. Кричевская А.А., Лукаш А.И. Современные аспекты биохимии отравления кислородом // Организм в условиях гипербарии. Под. Ред. Черниговского В.Н., СаповаИ.А.- Л.: Наука, 1983.-С.46-53.

51. Кулинский В.И., Колесниченко Л. С. Биологическая роль глутатиона.//Успехи современной биологии.-1990.-Т.110.вып.1(4)-С. 20-27

52. Ленинджер А. Основы биохимии. М. «Мир».-1985.-Т.2.-С.672-673

53. Лукаш А.И. Роль взаимодействия мочевины с белками мозга в механизмах ее защитного эффекта при гипероксии: Автореф. Дисс. д-ра биол. наук.-Ростов-на-Дону, 1974.-31 с.

54. Могильницкая Л.В., Прокофьев В.Н., Моргулис Г.Л. //Свободно-радикальные процессы в крови крыс при гипербароксигенации и в постгипероксический период. Украинский биохимический журнал-1996-т.78- N1-C123-127.

55. Мауэр Г. Диск-электрофорез.-М.: Мир.- 1971.-247с.

56. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К.// Успехи современной биологии.-1997.-Т.117, вып.4-С. 155-171.

57. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов.// Успехи современной биологии.-1993.-Т.113, вып.4-С.442-455.

58. Орлов О.Н., Прилипко Л.Л., Родионов В.В., Демуров Е.А., Каган В.Е., Меерсон Ф.З., Ефуни С.Н. Оценка интенсивности эндогенногоперекисного окисления липидов у людей при гипербарической оксигенации// Доклады АН СССР.-1985.- №2.- С.493-496

59. Пескин А.В. Роль кислородных радикалов, образующихся при функционировании мембранных редокс-цепей, в повреждении ядерной ДНК //Биохимия .-1996.- Т.61.- вып. 1.-С.65-72.

60. Пескин А.В. Взаимодействие активного кислорода с ДНК// Биохимия.- 1997.- Т.62.- вып.12,- С.1571-1578.

61. Петровский Б.В., Ефуни С.Н., Демуров Е.А., Родионов В.В. Гипербарическая оксигенация и сердесно-сосудистая система.-М., Наука, 1987.-328 с.

62. Птицын JI.P. Биолюминесцентный анализ SOS- ответа клеток Escherichia coli //Генетика.-1996.- Т.32.- N3.-C.354-358.

63. Прилипко JI.JL, Орлов О.Н., Иванова С.М., Меерсон Ф.З., Ушаков А.С. Активация перекисного окисления липидов при стрессе у человека, оцениваемая по содержанию пентана в выдыхаемом воздухе// Доклады АН СССР.-1982.-№4.-С. 1010-1012

64. Рапопорт И.А. Роль ПАБК в репарации повреждений, индуцированных ультрафиолетовым облучением и гамма-лучами // Докл. АН СССР.-1979.-Т.247.-№ 1.-С.231-234.

65. Саенко E.JI. Скоробогатько О.В., Ярополов А.И. Защитное действие церулоплазмина при лизисе эритроцитов человека, индуцированном ионами железа//Биохимия.-1990.-Т.55,№9,-С. 1563-1569

66. Селивра А.И. Функции центральной нервной системы в условиях гипербарической оксигенации //Физиология человека и животных.-М.: ВИНИТИ, 1974.-Т.14.-С.63-140

67. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома.//М. .-ВИНИТИ, 1992.-С.162.

68. Смирнова Г.В., Музыка Н.Г., Глуховченко М.Н., Красных Т.А., Октябрьский О.Н.// Биохимия.- 1999.-Т.64.-вып. 10.-С. 1318-1324.

69. Строева О.Г., Панова И.Г., Мельникова И.И. Исследование защитных свойств парааминобензойной кислоты на роговице взрослых крыс при рентгеновском облучении // Доклады Академии Наук, 1997, Т.355, № 4, С.564-566.

70. Стальная И.Д., Горишвили Т.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты //Современные методы в биохимии.-М:Медицина.-1977.-С.66-68

71. Ташенова А.А., Кулумбетова С.К., Синелыцикова Т.А., Ахматуллина Н.Б., Засухина Г.Д., Рапопорт И.А. Обработка клеток парааминбензойной кислотой снижает число индуцированных химическими мутагенами разрывов ДНК //Генетика, 1990.- С.977-979.

72. Тронов В.А., Константинов Е.М. Репарация ДНК и гибель покоящихся лимфоцитов крови человека, индуцированные перекисью водорода.-Биохимия.-2000.-Т.65 .-вып. 11 .-С. 1516-1524.

73. Фонштейн Л.М., Абилев С.К., Бобринев Е.В., Облапенко Н.Г., Подольная М.А.// Методические рекомендации по применению теста Эймса SalmonellaVMHKpocoMbi.- Москва- 1983.

74. Храпова Н.Г. О взаимодействии природных и синтетических антиоксидантов. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и потологии,- М. Наука.-1982.-С.59-73

75. Худолей В.В., Мизгирев И.В., Майорова И.Г., Филов В.А. Современные представления о направленном поиске ингибиторов канцерогенеза// Успехи современной биологии ,1996.- Т.116, Вып 3.-С.332-345.

76. Шестаков В.А., Бойчевская Н.О., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция плазмы крови в присутствии перекиси водорода//Вопр. мед. химии.-1979.-№2.-С.132-137

77. Agarwal S., Sohal R. DNA oxidative damage and life expectancy in houseflies // Proceedings of the National academy of sciences of the United States of America.- 1994.-V.91.-N 25.-P.12332-12335

78. Ames B.N., Cathart R., Schwiers E., Hochstein P. Uric acid provides as antioxidant defence in humens against oxidant- and radical-caused aging and cancer.// Proc. Natl. Acad. Sci USA.-1981.-V.78(11).- P.6858-6862/

79. Ames B.N., J. McCann and E.Yamasaki . Metods for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonella\microsome test// Mutation Res.-1975-V. 31-P 347-364

80. Ames BN, Shigenaga MK, Hagen TM. Oxidants, antioxidants and the degenerative disease of aging.// Pore Natl Acad Sci USA.-1993-V.90.- P.7915-7922.

81. Ames B. Which are the signification environmental mutagenes and antimutagens? // Mutat. Res. 1983.- V. 113.,№ 3-4.- P. 223-224.

82. Archibald R. Determination of citrulline and allantoin and demonstration of citrulline in blood plasma// Biol. Chem.,1944.- V.156.- P. 121-142.

83. Ayres S Jr Darier's disease responds to the synergism of vitamins A and E.//Int J Dermatol. 1985.- Jan-Feb24(l).-P.65

84. Bauer V., Bauer F. Reactive oxigen species as mediators of tissue protection and injury.// Gen. Physiol. Biophys.-1999.-№18.-P.7-14

85. Baud L, Ardaillou R. Involvement of reactive oxigen species in kidney damage.// Br.Med. Bull.-1993.-№49.-P-621-629.

86. Bates,C.J., Vitamin A.// Lancet.l995-V 345.-P.31-35.

87. Bidlack W.R., Tappel A.L. Fluoresent products of phospolipids during lipids peroxidation // Lipids. 1973.- V.8.- N4.- P.911-917.

88. Bligh E., Dyer W.J. Rapid metod of total exctraction and urification // Can. J.Biochem. and Physiol. 1959. V.37. N.8. P. 893-896.

89. Boiteux S, Laval J Imidazole open ring 7-methylguanine: an inhibitor of DNA synthesis.//Biochem Biophys Res Commun. 1983.-V. 27.-№110(2).-P552-558

90. Cadenas E. Biochmistry of oxygen toxicity// Annual Rev. Biochem.-1989.-V.58.-P.79-100

91. Cathcart R., Schwierse E., Saul RL., Amrs BN. Thimine glycol and thimidine glycol in humen and rat urine; A possible assay for oxidative DNA damage.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA .1984-V.81.-P.5633-5637.

92. Chen X.B., Kyle D.J., Orskov E.R. High perfoemance liquid chromatograpgic method for the determination of plasma allantoin.// Chromatogr. 1983 .-V.277.-P. 165-172

93. Cheng K., Cahill d., Kasai H., Nishimura S., Loeb L. 8-Hydroxyguanine, an abundant form of oxidative DNA damage, causes G-T and A-C substitutions // J. Biol. Chem.- 1992.- V.267.-P.166-172.

94. Chiu DTI, Lubin B, Shohet SB. Peroxidative reactions in red cell biologi. In: Pryor WA, ed. Free Radikals in Biology. New York, Academic Press, 1982.-P.115-160.

95. Chiu DTY, Liu TZ. Free radical and oxidative damage in human blood cells.// Biomedical Sci, 1997.- N4.- P-256-259.

96. Cohen G., Hochstein P Glutatione peroxidase: The primary agent for the elimination of hydrogen peroxide in erythrocytes // Biochemistry, 1963.-V.2.-P.1420-1426.

97. Cohen A.M., Aberdroth R. E., Hochstein P. Inhibition of free radical -induce DNA damage by uric acids.// Febs. Lett 1984.-V. 174.- P. 147-150.

98. De Groot H. Reactive oxygen species in tissue injury.// Hepatogasrtoenterology. 1994.-№41(4).- Р.328-332/

99. Di Guisoppi E., Fridovich I. The toxicology of molecular oxygen// CPC Crit. Rev. Toxycol.-1984.-Nll.- P. 1406-1414

100. Dennog C., Hartmann A., Frey G., Speit G. Detection of DNA damage after hyperbaric oxygen (HBO) therapy // Mutagenesis. 1996.- V. 11.- N 6.-P.605-609.

101. De Flora S, Ramel C.Mechanisms of inhibitors of mutagenesis and carcinogenesis. Classification and overview.//Mutat Res. -1988.- V.202(2).-P285-306.

102. De Olivera RC., Ribeiro DT. Singlet oxygen induced mutation spectrum in mamalian cells //Nucl. acids Res.- 1992.- V.20. N 16.-P.4319-4323.

103. Dimascio P, Murphy ME, Sies H. Antioxidant defense systems- the role of carotenoids, tocoferols and thiols.// American journal of clinical nutrition. Jan.-1991.-p. 194-200.

104. Dizdaroglu M. Chemical determination of free radical-induced damage to DNA.// Free Radic. Biol. Med. -1991.-N 10.-P.225-242

105. Doelman CJ, Bast A. Oxigen radicals in lung pathology.// Free Radic Biol Med.-1991 .-№9(5) .-P.3 81-400.

106. Durnett C. -"J. Amer. Stat. Assoc. 1975.- V.50.

107. Eguchi Y, Shimizu S, Tsujimoto Y. Intracellular ATP levels determine cell death fate by apoptosis or necrosis.//Cancer Res. 1997.-V.15.-№57(10).-P1835-1840.

108. Emerit I., Keck ML, Levy A., Feingold J., Michelson A. Activated oxygen species at the origin of chromosome breakage and sister-chromatid exchanges // Mutation Res. 1982.-V. 103.-P.165-172.

109. Ере B. Genotoxicity of singlet oxygen // Chemico-biological interaction.-1991.-V.80.-N 3.-P.239-260.

110. Evans PH. Free radicals in brain metabolism and pathology.// Br. Med. Bull. -1993.-№49(3).-P-577-587.

111. Felley-Bosco E. Role of nitric oxide in genotoxicity: implication for carcinogenesis // Cancer and Metastasis Reviews .1998.-V.17. N 1.-P.25-37.

112. Floyd R. The role of 8-hydroxyguanine in carcinogenesis // Carcinogenesis., 1990.-V.11.-P.1447-1450.

113. Fraga CG, Shigenaga MK, Park JW , Degan P and Ames BN. Oxidative damage to DNA during aging: 8-hydroxy-2-deoxyguanjsine in rat organ DNA and urine.// Proc.Natl.Acad.Sci.-1990.-V. 87.-P-4533-4537

114. Frank L., MassardoD. Oxygen toxicity// Amer. J. Med.-1980.-V.69,№l.-P.l 17-126.

115. Fried R. Enzymatic and nonenzymatic assay of superoxide dismutase // Biochemistry. 1975. V.57. N.4. P.657-660.

116. Frei B. Natural antioxidant in humen helth and disease.-Boston.-Academic press.-1994

117. Gebhart E., Wagner K., Grziwok K., Behnsen H. The action of anticlastogens in human lymphosyte culture and their modification by rat-liver S9 mix. 11. Studies with vitamin С and E.// Mutat. Res. 1985 -V.149.-P.83-94

118. Gentile JM, Rahimi S, Zwiesler J,Gentile GJ, Ferguson LR. Effekt of selected antimutagenes on the genotoxisity of antitumor agents.// Mutation research-fundamental and molecular mechanisms of mutagenesis.-1998.-V.-18.-P.-289-298.

119. Girault I, Fort S, Molko D, Cadet J. Ozonolysis of 2'-deoxycytidine: isolation and identification of the main oxidation products.//Free Radic Res.-1997.- V.26(3).-P257-266.

120. Goldstein P, Modric T.Transgenerational, ultrastructural analysis on the antioxidative effects of tocopherol on early gametogenesis in Caenorhabditis elegans grown in 100% oxygen//Toxicol Appl Pharmacol.- 1994.-V124(2).-P212-220.

121. Gotz C, Montenarh M. DNA damage, DNA repair, and apoptosis.//

122. Rev Physiol Biochem Pharmacol.- 1996.-№127.-P.65-95.

123. Gutteridge JMC. Biological origin of free-radicals, and mechanism of antioxidant protection// Chemico-biological interactions.-1994.-V.91.-P.-133-140.

124. Gutterdge JMC., Halliwell B. The dexyribose assay: an assay both for «free» hydroxil radical and for site specific hydroxyl radicals production // Biochem., 1988.- V.253.-P.932-933.

125. Hall AN., Eatnes RZ., Waymack PP. Acute effects of a superoxide radical-generting system on DNA double-strand stability in Chinese hamster ovary cells // Mutat. Res., 1988.- V.198.-P.161-168.

126. Halliwell B, Gutteridge JMS The Antioxidants of Human Extracellular Fluids// Archives of Biochem. And Biophys.-1990.-V.280, Nl.-P.l-8

127. Halliwell B, Gutteridge JMS, Cross CE. Free radicals, antioxidants and human disease: where are we now? //Lab.Clin Med.,1992- V.119.-P.598-620.

128. Halliwell В., Cutteridge G.// Free radicals in biology and medicine.— Oxford: Clarendon press.- 1985.— P369.

129. Halliwell В Can oxidative DNA damage be used as a biomarker of cancer risk in humans? Problems, resolutions and preliminary results from nutritional supplementation Studies //Free radical research-1998.-V.29.-N 6.-P.469-486.

130. Hartman PE, Shankel DM. Antimutagens and anticarcinogens: a survey of putative interceptor molecules.//Environ Mol Mutagen. 1990.-V.15(3).-P 145-82

131. Hasegawa T, Kuroda M. A new role of uric acid as an antioxidant in human plasma.//Rinsho Byori. 1989.-V.37.-P 1020-1027.

132. Henle ES, Luo Y, Gassmann W, Linn S.Oxidative damage to DNA constituents by iron-mediated fenton reactions. The deoxyguanosine family.// Biol Chem. 1996 ,-V.30.-№271(35).-P21177-21186.

133. Hicks M., Wong L.S., Day R.O. Identification of products from oxidation of uric acid induced by hydroxyl radicals.// Free Rad. Res. Comm, 1993.-V18.-P.337-351

134. Hirota K., Kawase M., Ohmore S., Kishie T. High-perfomens liquid chromotographic method for the determination ofn plasma allantoin// Chromotogr. 1983 .-V. 156.-P. 121 -142

135. Ishidata M, Harnois M.C., Sofuni T. A comparative analysis of data on the clastogenisity of 951 chemical substances tested in mammalian cultures.// Mutation Research.-1988.-№ 195.-P. 151-213.

136. Jarolim P, Lahav M, Liu SC and Palek J. Effekt of hemoglobin oxidation products on the stability of red cell membrane skeletons and the associations of skeletal proteins: corelations with a release of gemin. //Blood -1990- V.76- P 2125-2131.

137. Jaruga P, Dizdaroglu M. Repair of products of oxidative DNA base damage in human cells.// Nucleic Acids Res.- 1996.-V. 15.-P1389-1394.

138. Jotterand-Bellomo M. Des sites fragiles autosomiques // J. Genet. Hum. 1984. Vol. 32.-N3.-P. 155-166.

139. Kaur H, Halliwell В Action of biologically-relevant oxidizing species upon uric acid. Identification of uric acid oxidation products.//Chem Biol Interact. 1990.-V.73 .-P23 5-247.

140. Kawaguchi T, Shimode M, Matsushita H, Nagase S. Sex differences in the effect of uric acid on the survival of analbuminemic rats exposed to cold: effects of gonadal hormones and urric acid.//Jpn J Physiol. 1987.-V.37.-№5.-P.941-945.

141. Kennedy AR, Krinsky N1. Effects of retinoids, beta-carotene, and canthaxanthin on UV- and X-ray-induced transformation of C3H10T1/2 cells in vitro.//Nutr Cancer.- 1994.-V.22.-№3.-P219-232

142. Ketterer B.Protective role of glutathione and glutathione transferases in mutagenesis and carcinogenesis.//Mutat Res. 1988.-V.202(2).-P343-361.

143. Kim H., Friedman S., Asakura Т., Schwartz E. Inclusions in red blood cells containing Hb S or Hb С // Br. J. Haematol.- 1980.-V. 44.-P.547-554.

144. Kozmin SG, Pavlov YI, Dunn RL, Schaaper RM. Hypersensitivity of Escherichia coli Delta(uvrB-bio) mutants to 6-hydroxylaminopurine and other base analogs is due to a defect in molybdenum cofactor biosynthesis.//Bacteriol. 2000.-V.182,№12.-P3361-3367.

145. Kuross S., Hebbel R. Nonheme iron in sickle erythrocyte membranes: Association with phospholipids and potential role in lipid peroxidation // Blood.-1988.-V.72.-P 1278-1285

146. Kuchino Y., Mori F., Kasai H., Inoue H., Iwai S., Miura K., Ohtsuka E., Nishimura S. Misreading of DNA templates containing 8-hydroxydeoxyguanosine at the modified base and at adjacent residues // Nature.-1987.- V.327.-P.77-79.

147. Lagendijk J, Ubbink JB, Vermaak WJ.The determination of allantoin, a possible indicator of oxidant status, in human plasma.//Chromatogr Sci.- 1995.-V3,№4.-P186-193.

148. L' Abbe, M.R.,Fisher P.W. Automated assay of superoxide dismutase in blood.//Methods Enzymol. 1990.-V.233-P.380-385.

149. Li, David Wan-Cheng; Spector, Abraham. Hydrogen peroxide-induced expression of the protooncogenes, c-jun, c-fos and c-myc in rabbit lens epithelial cells.// Molecular and cellular biochemistry.-1997.-V. 173.- P59-69

150. Lissi EA, Caceres T, Videla LA. Visible chemiluminescence from rat brain homogenates undergoing autoxidation. II.Kinetics of the luminescence decay//.Free Radic Biol Med. -1988.-V4(2).-P93-97.

151. Loft S, Deng XS, Tuo J, Wellejus A, Sorensen M, Poulsen HE. Experimental study of oxidative DNA damage.//Free Radic Res.- 1998.-№29(6).—P525-539.

152. Loft S, Poulsen HE. Markers of oxidative damage to DNA: Antioxidants and molecular damage //Oxidants and antioxidants., 1999.-V.300.-P.166-184.

153. Lovstad R.A. Fatty acid induced hemolises. Protective action of ceruloplasmin, albumins, thiols and vitamin C// Biochem.-1986.-V.18,№9.-P.771-775.

154. Mc Cord I.M., Fridovich I. Superoxide dismutase: the first twenty years (1968-1988)//Free radic. Biol. And Med.-1988.-V.5,№5.-P.363-369.

155. Martens M.E., Storey B.T., Lee C. Generation of allantoin from the oxidation of urate by cytochrome с and its possible role in Reyes syndrome// Arch. Biochem. Biophus., 1987.-V. 252.-P.91-96

156. Matsushita S., Ibuki F., Aoki A. Chemical reactivity of the nucleic acid basis. Antioxidative ability of the nucleic acids and their related substances on the oxidation of unsaturated fatti acids. //Arch. Biochem.Biophys.1963.-V. 102 P.446-451.

157. McCall MR., Frei B. Can antioxidant vitamins materially reduce oxidative damage in humans? // Free radical biology and medicine., 1999.- V.26, № 7-8.-P.1034-1053.

158. Meuvissen J. A., Heirwegh K. Transport by protein.// Berlin,1988.-P.3 87-401.

159. Meister A, Anderson ME. Glutathione //Annu Rev Biochem. -1983.-V 52.-P-711-760.

160. Meneghini R.Iron homeostasis, oxidative stress, and DNA damage.//Free Radic Biol Med. -1997.-V.23.-№5.~P783-792.

161. Mengel C. The effects of HBO on red cells as related to tocopherol deficiency // Am. N.Y. Acad. Sci., 1972.- V. 203. -P. 163-171.

162. Menzies R., Crossen P., Fitzgerald P., Gunz F. Cytogenetic and cytochemical studies in marrow cell in В12 and folate deficiency // Blood. 1966. V.- 28.-N4.- P. 581-594.

163. Mireles LC, Lum MA, Dennery PA. Antioxidant and cytotoxic effects of bilirubin on neonatal erythrocytes. // Pediatr Res.- 1999.- V.-45(3).- P.355-362

164. Nishino H, Tsushima M, Matsuno T, Tanaka Y, Okuzumi J, Murakoshi M, Satomi Y, Takayasu J, Tokuda H, Nishino A. Anti-neoplastic effect of halocynthiaxanthin, a metabolite of fucoxanthin.//Anticancer Drugs.- 1992.-V.3(5).-P493-497.

165. Nordenson I, Beckman G, Beckman L. The effect of superoxide dismutase and catalase on radiation-induced chromosome breaks //Hereditas.-1976.-V82(1).-P125

166. Odin A. P. Vitamins as antimutagenes: advantages and some possible mechanisms of antimutagenic action.//Mutation research reviews in mutation research.-1997.-V.1.-P.3967

167. Ogihara T, Kim HS, Hirano K, Imanishi M, Ogihara H, Tamai H, Okamoto R, Mino M. Oxidation products of uric acid and ascorbic acid in preterm infants with chronic lung disease.//Biol Neonate. 1998.-V.73.-P.24-33.

168. Palozza P, Krinsky NI.Beta-Carotene and alpha-tocopherol are synergistic antioxidants.//Arch Biochem Biophys.- 1992.-V 15.-P184-187.

169. Phillips В., James Т., Anderson D. Genetic damage to CHO cells exposed to enzymically generated active oxygen species // Mutation Res., 1984.- V. 126.-P. 265-271.

170. Pry or W.A. The formation of free radicals and the consequences of their reaction in vivo//Photochem. and Photobiol.-1978.- V.28, N45.-P.787-801

171. Pryor W.A. Vitamin E and heart disease: basic sciense to clinical intervention trials.// Free Radical Biologi and Medicine.2000.-V.28.-P.141-164.

172. Reidy J., Thou X., Chen A. Chromosome breakage in human lymphocyte culture in influenced by medium manipulation//Human Genet., 1982.- V. 34, №6,-P. 139.

173. Reidy J., Thou X., Chen A. Influence of culture media on spontaneous chromosome breakage: effects of folic acid and methionine // Environ. Mutagenes, 1984. -V. 6. -N.3. -P. 405-406.

174. Rise-Evans C, Burdon R. Free radicals-lipid interaction and their pathological consequenses.//Prog. Lipid Res.l993-V.32.-P.71-110.

175. Rondanelli E., Corini P., Magliulo E., Flori G. Differences in proliferative activity between normoblasts and pernicious anemia megaloblasts // Blood. 1964. -V. 24.-N5.-P. 542-552.

176. Rovere F.D., Granata A., Broccio M., Zirilli A., Broccio G. Hemoglobin oxidative stress in cancer. //Anticancer Research-1995- V-15, P-345-356.

177. Saran M., Bors W., Radical reaction in vivo// Radiat. and Environ. Biophys./-1990/-V.29, N4.-P.249-262.

178. Senga Y, Kanno H, Kumagai H, Satomi Y, Kishida K, Fukuda M, Nakahashi M, Hosaka M, Tanaka Y, Misugi K. Study of satellite tumor nodulesin renal cell carcinoma.//Nippon Hinyokika Gakkai Zasshi.- 1991.- V.82(6).-P940-946.

179. Sevanian A, Davies KJ, Hochstein P. Conservation of vitamin С by uric acid in blood.// Free Radic Biol Med. -1985.-№1(2).-P-117-124

180. Schacterle J. R., Pollack R. J. A simplified method for the quontitative assay of small amount of protein in biological materials // Analyt.Biocbem. 1973.-V.51, №2.-P.654

181. Schroeder Т., Kurth R. Spontaneous chromosomal breakage and high incidence of leukemia in inherited disease // Blood. 1971.- V. 37, N 1. P.96-112.

182. Shigenaga M., Ames B. Assays for 8-hydroxy-2-deoxyguanosine: A biomarker of in vivo oxidative DNA damage // Free Radic. Biol. Med., 1991.-N Ю.-Р.211-216.

183. Shubutani S., Takeshita M., Grollman A. Insertion of specific bases during DNA synthesis past the oxidation damaged base 8-oxodG // Nature.1991.- V.349.-P.431-434.

184. Sies H. Oxidative stress introductory remarcss// Academic. Press, 1985.-P.l-7

185. Smalls S., Patterson R. Reduction of benzo(a)pyrene induced chromosomal aberrations by DL-alpha-tocopherol // Biology, 1982.- V. 28.- P. 92-97.

186. Stahl W, Sies H Uptake of lycopene and its geometrical isomers is greater from heat-processed than from unprocessed tomato juice in humans.// Nutr.1992.-V.122.-№11.-P2161-2166.

187. Stalmer J.S. Redox signaling: nytrosilation and related target interactions of nitric oxide // Cell-1994.-V.79.-P.931-936.

188. Toyokuni S. Reactive oxygen species-induced molecular damage and its application in pathology// Pathology International. 1999.-V.49.-P.91-102.

189. Vaca C.E., Wilhelm J., Harms-Ringdahl M. Interactions of lipid peroxidation products with DNA // Mutat. Res. Rev. Genet. Toxicol., 1988.-V.195.-P.137-139.

190. VanPoppel G., VandenBerg H. Vitamins and cancer // Cancer Letters., 1997.-V.114.-N 1-2.-P. 195-202.

191. Whiting R., Weilan Т., Stich W. Chromosome-damaging activity of ferritin and its relation to chelation and reduction of iron.// Cancer Res.-1984.-41.-P.1628-1636.

192. Weisburger J H Carcinogenesis in our food and cancer prevention.// Adv Exp Med Biol. -1991 .-№289.-P 137-151.

193. Winrow VR, Winyard PG, Morris CJ, Blake Free radicals in inflammation: second messengers and mediators of tissue destruction.//Br Med Bull.- 1993.-V49(3).-P506-522.

194. Weitberg AB. Antioxidants inhibit the effect of vitamin С on oxygen radical-induced sister-chromatid exchanges.//Mutat Res. -1987.-V.191(1).-P53-56.

195. Wellejus A, Poulson HE, Loft S. Iron-induse oxidative DNA damage in rat sperm cells in vivo and in vitro// Free Radic Res.-2000.- V.32(l).- P.75-83

196. Wu XW., Lee CC., Muzny DM., Caskey CT. Urat oxidase: primary structure and evolutionary implications// Proc. Natl. Acad. Sci USA.-1989.-V.86,№23 .-P.9412-9416134

197. Yakes F., van Houten B. Mitochondrial DNA damage is more extensive and persists longer than nuclear DNA damage in human cells following oxidative stress.// Proc Natl Acad Sci U S A.- 1997.-V.21;94(2).--P514-519.

198. Yau-Huei Wei, Cheng-Yoong Pang, Hsin-Chen Lee, Ching-You Lu. Roles of mitochondrial DNA mutation and oxidative damage in human aging // Current Science., 1998.- V. 74.-N 10.- P.887-893.

199. Zwart L., Meerman J., Commandeur J., Vermeulen N. Boimarkers of free radical damage applications in experimental animals and in humans // Free radical Biol. Med., 1999.- V. 26.- N 1-2.- P.202-226.