Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей

Михайлова, Елена Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей"

На правах рукописи

МИХАЙЛОВА ЕЛЕНА СЕРГЕЕВНА

Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей

(03.00.07 - микробиология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 8 2009

МОСКВА-2009

003471003

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ»

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, Вячеслав Михайлович Червинец

профессор

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, Евгений Петрович Пашков

профессор

Доктор медицинских наук, Павел Вячеславович Калуцкий

профессор

Ведущая организация - ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет

Защита состоится «1Ь» 2009 года в 1400 часов на заседа-

нии диссертационного совета Д. 208.040.08 в Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, Трубецкая ул., 8, строение 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан « (?» >)иДХ 2009 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д. 208.040.08 доктор медицинских наук, профессор

Андрей Юрьевич Миронов

Общая характеристика работы

Актуальность исследования

Желчнокаменная болезнь (ЖКБ) и хронический холецистит (XX) в настоящее время относятся к числу наиболее распространенных заболеваний, которые считают «болезнью века» или «болезнью цивилизации». По данным различных авторов, желчнокаменная болезнь выявляется у 15-36% людей старше 40 лет и имеет неуклонную тенденцию к росту (Григорьев ПЛ., 2002; Bellows C.F. et al., 2005; Ильченко A.A., 2006).

Холелитогенез представляет собой длительный многостадийный процесс, в котором периоду камнеобразования предшествуют изменения физико-химического состава желчи, происходящие под воздействием различных факторов (Binette J.P., 2000; Schinner B.D., 2005). Важную роль в развитии заболевания и в образовании конкрементов играют микроорганизмы (Зубарева H.A., 1999; Ljungh А., 2002; Черкасов В.А., 2003). Многочисленными исследованиями установлено, что среди микроорганизмов, выделяемых из желчного пузыря больных холециститом и ЖКБ, ведущее место занимают условно-патогенные энтеробак-терии (Ohdan H., 1993; Petakovic G., 2002; Кудря E.B., 2002; Hao W.L., 2004; Mu-kaiya M., 2005;).

По данным ряда авторов условно-патогенные энтеробактерии колонизируют желчевыводящие пути вследствие транслокации из толстого кишечника на фоне дисбиотических нарушений (Валышев A.B.,1997, Sartor R.B., 1998; Van Erpecum K.J., 2003; Скворцова Т. Э., 2007). В.М. Бовдаренко (2003) считает, что широкое распространение дисбиозов является одним из важнейших факторов, определяющих наблюдаемое в настоящее время увеличение частоты и тяжести острых и хронических заболеваний, в частности пищеварительного тракта.

Достоверных сведений о составе и количестве микроорганизмов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) у больных XX, ЖКБ и перенесших холецистэк-

томию по поводу ЖКБ в литературе не найдено. Отсутствуют данные о признаках, ассоциируемых с датогенностью и персистенцией условно-патогенных микроорганизмов, а также сведения об их антибкотикочувствительности.

В связи с вышеизложенным возникает необходимость проведения дальнейшего детального изучения состояния мукозной микрофлоры верхних отделов ЖКТ при указанной патологии, что определило цель и задачи нашего исследования.

Цель работы:

Изучить характер микробиоценозов слизистой оболочки эзофагогастро-доуденальной зоны у здоровых и у больных с хроническим бескаменным холециститом, желчнокаменной болезнью, а также с постхолецистэктомическим синдромом, выявить факторы патогенности и персистенции выделенных микроорганизмов и разработать микробиологические критерии выбора эффективных антибактериальных препаратов для подавления условно-патогенной микрофлоры.

Задачи исследования:

1. Выявить качественный и количественный состав мукозной микрофлоры пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у здоровых людей и больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с постхолецистэктомическим синдромом.

2. Оценить выраженность дисбиотических нарушений верхних отделов желудочно-кишечного тракта при исследуемой патологии и сравнить ее со степенью дисбактериоза кишечника.

3. Установить у выделенных микроорганизмов наличие признаков патогенности и персистенции.

4. Оценить способность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных, к формированию биопленок.

5. Определить чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к антибактериальным препаратам и пробиотикам для разработки критериев возможного их применения в схемах профилактики и лечения заболеваний желчевыводящих путей.

Новизна исследования

1. Впервые при изучении микробиоценозов пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки (ДПК) и кишечника у больных с хроническим бескаменным холециститом и желчнокаменной болезнью, а также перенесших холеци-стэктомию выявлено увеличении спектра условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) и их количества.

2. Установлено, что условно-патогенные бактерии, выделенные из слизистой оболочки верхних отделов ЖКТ у больных, характеризуются наличием цитотоксической, протеолитической, гемолитической, лецитовителазной, РНК-азной, ДНК-азной активностью, что свидетельствует об их потенциальном участии в поддержании воспалительного процесса.

3. Частота встречаемости и степень выраженности дисбиотических нарушений мукозной микрофлоры пищевода, желудка и ДПК у больных людей сопровождается дисбактериозом кишечника разной степени выраженности.

4. Впервые установлено, что условно-патогенная мукозная микрофлора, выделенная от больных, обладает высокой способностью к аутоагрегации, коаг-регации, поверхностной гидрофобностью и образованию биопленок.

5. Впервые изучена чувствительность всей выделенной из эзофагогаст-родуоденальной зоны условно-патогенной микрофлоры, доминирующей в этиологии хронического холецистита и ЖКБ, к антибактериальным препаратам, хитозану и к пробиотическим штаммам лактобацилл.

Практическая значимость исследования

1. Полученные данные о чувствительности выделенной из пищевода, желудка и 12-перстной кишки микрофлоры к антибактериальным препаратам, позволяют ориентировать клиницистов при выборе эффективных антимикробных препаратов и пробиотиков для лечения заболеваний ЖВП.

2. Показана перспективность использования хитозана в комплексной терапии XX, ЖКБ и у больных перенесших холецистэктомию.

3. Выявлено, что проводимая при XX, ЖКБ и ПХЭС антимикробная терапия усугубляет дисбаланс микробиоценоза верхнего отдела пищеваритель-

ного тракта, что требует проведения дополнительной коррекции нарушенной нормальной микрофлоры пробиотическими препаратами.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. У больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с постхолецистэктомическим синдромом мукозная микрофлора пищевода, желудка и ДПК изменяется как по спектру, так по количеству и факторам патоген-ности, что соответствует определению дисбактериоз.

2. Условно-патогенная микрофлора, выделенная от больных XX, ЖКБ и ПХЭС, обладающая факторами патогенности, проявляет высокую поверхностную гидрофобность, высокую степень аутоагрегации, коагрегации с грам+, грам-микроорганизмами и дрожжеподобными грибами и выраженную способность к образованию биопленок.

3. Микроорганизмы, выделенные из слизистой оболочки ЭГДЗ, проявляют разную степень чувствительности к лактосодержащим пробиотикам и высокую чувствительность к пищевому хотозану и к антибактериальным препаратам: ампициллин, гентамицин, кларитромицин, офлоксацин, норфлоксацин, ци-профлоксацин и оксациллин.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследований внедрены в практическую деятельность микробиологической лаборатории кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО ТГМА. Материалы используются в научно-исследовательской и учебной работе кафедры.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на V конференции молодых ученых России с международным участием (19-22 мая 2008 г.), где была получена золотая медаль РАМН за лучшую научную работу; на совместном заседании Тверских региональных обществ микробиологов, эпидемиологов, паразитологов с инфекционистами и иммунологами 11 февраля 2009 года; на расширенном заседании кафедр факультетской терапии, внутренних болезней стоматологического и педиатрического факультетов, фундаментальной и клинической фармакологии, биологии, гистологии с эмбриологией 1 апреля 2009 года.

Публикации

По теме исследования опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации.

Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и ютодов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения результа-ов, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на 177 страницах щшинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками и 16 таблицами. Библио-рафический указатель включает 246 наименований из них 126 отечественных и 120 зарубежных источников литературы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

В основу настоящей работы положен анализ собственных данных, полученных в результате комплексного исследования 30 биоптатов СО пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки взятых у 10 здоровых добровольцев, 114 биоптатов - полученных из этих же отделов ЖКТ у 38 больных, страдающих хроническим бескаменным холециститом, 135 биоптатов - у 45 с желчнокаменной болезнью и 111 биоптатов у - 37 больных постхолецистэктомическим синдромом.

Микробная обсемененность слизистой оболочки эзофагогастродуоде-нальной зоны определялась в биоптатах, взятых при эзофагогастродуоденоско-пии. Материал брали из визуально неизмененных участков слизистой оболочки нижней трети пищевода, из антрального отдела желудка и луковицы двенадцатиперстной кишки. Биопсийный материал был предоставлен ассистентом кафедры факультетской терапии ТГМА к.м.н. С.Н. Базловым, врачом-эндоскопистом г.б. №4 г.Твери А.П. Барашковым.

Также микроорганизмы выделялись из фекалий больных. После забора материала проводили определение казеинолитической активности супернатанта фекалий исследуемых лиц с использованием экспресс-метода диагностики дис-биоза кишечника (Червинец В.М. с соавт., 2004, патент на изобретение № 2235324). Микрофлора выделялась с использованием классических бактериологических методик. Выделение чистой культуры и идентификация проводились а

аэробных, анаэробных и микроаэрофильных условиях в термостате при темпера туре 37 °С в течение 24-48 часов.

Для комплексного изучения аэробной и анаэробной микрофлоры посевы производили как на отечественные питательные среды, так и на среды американ ской фирмы BBL®, включающие желточно-солевой агар (ЖСА) для выделения стафилококков, среду Эндо для энтеробактерий, Sabouraud Dextrose Agar (BBL®) для культивирования дрожжеподобных грибов, Schaedler Agar (BBL®) с кровью и среду MRS Agar (BBL®) для выделения анаэробных бактерий, модернизированный Columbia Agar (BBLb) с кровью для культивирования H.pylori.

Идентификацию энтеробактерий осуществляли с помощью идентификационных систем Enterotube II и Oxi/Ferm Tube (BBL), грибов - Mycotube (BBL). Определение вида анаэробов проводили на API системах французской фирмы bioMirieux (API 20 А), стрептококков - (API 20 Strept), стафилококков - (API 20 Staph).

Лецитиназа микроорганизмов определялась на желточной среде по характерным зонам опалесценции вокруг колоний. Гемолитическую активность -по наличию вокруг колоний зоны гемолиза на кровяном агаре. Оксидазный тест проводили, используя стандартные индикаторные диски Oxidase test (bioM6rieux). Для определения каталазной активности микроорганизмов использовали метод раздавленной капли на предметном стекле (В.М.Никитин, 1986). Определение продукции микроорганизмами уреазы проводили, используя стандартный Urease Test Broth (BBL°, USA). Желатиназную активность исследуемых культур изучали ускоренным методом (В.М.Никитин, 1986). Дезоксирибонукле-азную активность исследуемых культур определяли методом Джеффериса (1957) и рибонуклеазную - по В.М. Никитину (1986). Степень адгезии микроорганизмов определяли пользуясь средним показателем адгезии (СПА) по методу В.И. Бри-лис (1986) на эритроцитах человека О (I) группы Rh+. Антилизоцимная активность микроорганизмов определялась по методу отсроченного антагонизма (О.В. Бухарин с соавт., 1984). Антагонистическую способность микроорганизмов выявляли методом отсроченного антагонизма (Блинкова Л.П., 2003).

Цитотоксичность микроорганизмов определяли путем внесения стерильных ультразвуковых фильтратов тестируемых штаммов микробов в пробирку с культурой клеток НЕр-2 и инкубации в термостате при 37°С. Тестирование штаммов на способность формировать биопленки проводили по методике Ю.М. Романовой (2006). Способность к агрегации, коагрегации и поверхностной гидро-фобности проводили по методикам Andreu et al., 1999.

Чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам, и хи-тозану. препаратам определялась методом диффузии в агар на среде Muller-Hinton с помощью стандартных дисков фирмы BBL.

Данные экспериментов обрабатывались с помощью прикладной программы "BIOSTAT" (Version 4.03).

Результаты собственных исследований

Исследованиями, проведенными у 10 практически здоровых добровольцев, установлено, что микрофлора эндоскопически интактной СО эзофагогаст-родуоденальной зоны (ЭГДЗ) немногочисленна как в качественном, так и в количественном отношении. Микроорганизмы из биоптатов СО пищевода, ан-трального отделов желудка и луковицы ДПК были выделены у 95% лиц.

Из СО ЭГДЗ наиболее часто выделялись стафилококки, стрептококки, лактобациллы, несколько реже, в 10-30% - бактероиды, стоматококки, энтеро-бактерии, коринебактерии, нейссерии, вейлонеллы, H.pylori. Количество микроорганизмов, как правило, не превышало 4 lg КОЕ/г, и колебалось в средних пределах 3,46-3,64 lg КОЕ/г.

Выделенные из СО эзофагогастродуоденальной зоны здоровых людей микроорганизмы имели узкий спектр ферментативной активности (уреаза, гемолизин), а частота ее выявления была невысокой. Цитотоксичность эти бактерии не проявляли. Антагонистических взаимоотношений в микробиоценозе не отмечалось. Средний показатель адгезии на эритроцитах в среднем составил 2,63 ± 1,12.

Исследованиями, проведенными нами, установлено, что в СО ЭГДЗ больных XX, Ж КБ и перенесших холецистэктомию наблюдается увеличение как

спектра, так и количественного состава микрофлоры, особенно это касается ан-трального отдела желудка и ДПК.

При исследовании биоптатов слизистой оболочки пищевода у больных хроническим холециститом (рис. 1) чаще выявлялись бактерии родов Streptococcus (у 92% больных), Staphylococcus (87%), Lactobacillus (53%), бактерий семейства Enterobacteriaceae (от 51% больных). Менее чем у половины обследованных выделялись микроорганизмы родов Corynebacterium и Bacteroides (42%), Entero-coccus (37%), Bacillus и грибов рода Candida (от 24% больных), Veillonella, Neisseria, Pseudomonas (от 16-18% обследованных), Klebsiella, H.pylori, Stomatococcus | (от 8-13% пациентов). Микрофлора выделялась в среднем количестве 4,51 ± 0,62 lg КОЕ/г.

Enterococcus spp. Candida spp. Bacillus spp. Klebsiella spp. Pseudomonas spp. Neisseria spp. H.pyIori E.coli Bacteroides spp. Corynebacterium spp. Lactobacillus spp. Veillonella spp. Stomatococcus spp. Streptococcus spp. Staphylococcus spp.

Рис. 1. Частота выделения микроорганизмов из биоптатов СО пищевода

больных XX, ЖКБ и ПХЭС Из биоптатов видимо неизмененного участка слизистой оболочки пищевода у больных ЖКБ микроорганизмы выявлялись существенно чаще, чем у здоровых (р<0,05), хотя несколько в другом количественном и качественном соста-

ве. Чаще высевались стрептококки (100% случаев), стафилококки (84%), энтеро-бактерии (59%) кандиды (53%) и бактероиды (47%). В 33-42% случаев выделялись золотистые стафилококки, вейлонеллы, лактобациллы и бациллы. В незначительном количестве (11-13%) обнаруживали энтерококки, коринебакгерии, псевдомонады. Количество микроорганизмов колебалось от 3,85 до 5,46 lg КОЕ/г.

Из видимо неизмененного участка СО пищевода у больных ПХЭС микроорганизмы выделялись реже, чем у здоровых людей, но в больших количествах. Так, в 46% из биоптатов изолировали бактерии семейства Enterobacteriaceae и рода Streptococcus, в 41% - Bacteroides, в 32% - Staphylococcus и грибы рода Candida. В 27% - Bacillus, в 19% - Lactobacillus, остальные микроорганизмы выделялись в 8 -16%. Количество микроорганизмов колебалось от 2,89 lg КОЕ/г у Enterococcus spp. до 5,38 lg КОЕ/г у Stomatococcus spp. и в среднем составляло 4,46 ± 0,73 lg КОЕ/г.

При исследовании биоптатов из СО желудка больных хроническим холециститом, установили (рис. 2), что чаще выявлялись стафилококки, стрептококки и бактерии семейства Enterobacteriaceae, соответственно в 95%, 71% и 58% случаев. В 42% - бактероиды, в 39% - грибы рода Candida и бациллы, в 34% -лактобактерии, в 26% - энтерококки, в 24% - Serratia spp. и в 16% - H.pylori, в 13% - коринебакгерии, в 11% - актиномицеты и нейссерии, в 5 - 8% клебсиел-лы, протеи, вейлонеллы и Aerococcus viridans. Количество микроорганизмов в среднем составляло 4,31 ± 0,61 lg КОЕ/г.

Из биоптатов СО желудка больных ЖКБ (рис. 2) высевались бактерии 18 родов: Staphylococcus spp. у 87% больных, у 62% - бактерии семейства Enterobacteriaceae, Streptococcus spp. - у 60%, дрожжеподобные грибы рода Candida у 45%, Bacteroides spp.- у 37%, Corynebacterium spp. у 36%. У 33% Enterococcus spp., у 29% - Lactobacillus spp. и Serratia spp., у 27% - Peptococcus spp. В 20% случаев выделялись Veillonella spp и Peptostreptococcus spp., в 18% - Enterobacter spp. и Bacillus spp., у 16% - Actinomyces spp. Helicobacter pylori выявлялся у 13% больных, Neisseria spp. и Klebsiella spp. у 11% больных. Количество микроорга-

низмов, как правило, превышало 4 lg КОЕ/г и в среднем составляло 4,87 ± 0,73 lg КОЕ/г.

Микробный пейзаж слизистой оболочки желудка изменяется у больных перенесших холецистэктомию (рис.2). Так, на 7-26% меньше, чем у здоровых, выделяются стафилококки, стрептококки, лактобациллы, а на 50% больше энте-робактерии (р<0,05). В количественном отношении превышают 4 lg КОЕ/г бактерии родов Streptococcus, Staphylococcus, Bacteroides, Neiseria, Bacillus, семейства Enterobacteriaceae, грибов рода Candida. Появляются в количестве также более 4 lg КОЕ/г микроорганизмы родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Pseudomonas, Klebsiella, Acinetobacter, Enterobacter.

□ ПХЭС ®ЖКБ

@хх

□ здоровые

Prevotella spp. Pseudomonas spp. Acinetobacter spp. Peptostreptococcus Enterobacter spp. Peptococcus spp. Aerococcus spp. Proteus spp. Serratia spp. Enterococcus spp. Veillonella spp. Klebsiella spp. Neisseria spp. Actinomyces spp. Bacillus spp. H.pylori E.coli

Lactobacillus spp. Bacteroides spp. Candida spp. Corynebacterium spp. Streptococcus spp. Staphylococcus spp.

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Рис 2. Спектр и частота выделения микроорганизмов из СО желудка у больных XX, ЖКБ и ПХЭС

Из биоптатов, взятых в области видимо здорового участка слизистой оболочки (рис. 3) двенадцатиперстной кишки у больных с хроническим холециститом в основном (19 - 53%) выявлялись стафилококки, стрептококки, энтеробак-терии, лактобациллы, бактероиды, грибы рода Candida, бациллы, вейлонеллы. Остальные 10 родов микроорганизмов изолировали от 5- 16% обследованных больных. Количество выделенных микроорганизмов в среднем составляло 4,62 ± 0,45.

Porphyr omonas spp. Aerococcus Acuietobacter spp. Citrobacter spp. Klebsiella spp. Enterobacter spp. Bifidobacterium spp. Eubacterium spp. Neisseria spp Veillonella spp. Enterococcus spp.

Prevotella spp. Pseudomonas spp.

Peptostreptococcus spp.

Peptococcus spp. Actinomyces spp. Bacillus spp. Coryneöacterium spp.

H.pylori Candida spp. E. coli

Lactobacillus spp. Streptococcus spp. Staphylococcus spp.

Рис. 3. Спектр и частота выделения микроорганизмов из СО ДПК больных XX, ЖКБ и ПХЭС Из биоптатов слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки при ЖКБ

выделены представители 28 различных родов микроорганизмов (рис. 3). У 73100% больных доминировали стрептококки и стафилококки. Часто встречались гемолитические стафилококки (у 53% больных), бактерии семейства Enterobacte-riaceae (у 69%), дрожжеподобные грибы рода Candida (у 49%), бактероиды (у 47%), энтерококки (у 38%), пептококки (у 33%), лактобациллы и пептострепто-

коккои у 29%. Коринебактерии (у 27%), вейлонеллы (у 22%), псевдомонады и актиномицеты (у 18%) и другие микроорганизмы, но у меньшего числа обследованных от 16 до 2%.

Доминирующими в количественном отношении (4,57-5,23 lg КОЕ/г) были бактерии родов Streptococcus, Staphylococcus, Peptostreptococcus, Peptococcus, Bacteroides, бактерии семейства Enterobacteriaceae, грибы рода Candida. В меньших количествах (3,26-4,56 lg КОЕ/г) выявлялись бактерии родов Neisseria spp., Enterobacter spp., H.pylori, Veillonella, Pseudomonas, Lactobacillus, Corynebacte-rium, Enterococcus spp., Citrobacter spp., Bifidobacterium, Porphyromonas, Actinomyces, Prevotella и др.

В CO ДПК больных после холецисгэктомии (рис. 3) наблюдается сходная картина, по сравнению со здоровой слизистой, появляются пептококки (30% выделений), пептострептококки (27%), псевдомонады (19%), нейссерии и энте-робакгеры (16%), вейлонеллы и клебсиеллы (11%), превотеллы (8%). На 19% уменьшается выделение стрептококков, на 13% - лактобацилл, на 29% увеличивается выделение энтеробактерии. Практически все микроорганизмы выделяются в количестве больше 4 lg КОЕ/г.

Полученные данные могут свидетельствовать о том, что в визуально неизмененных участках СО пищевода, желудка и ДПК больных ЖКБ имеется микробный дисбаланс, который выражается в увеличении спектра и количественного состава микрофлоры, появлении нетипичных для данного эпитопа бактерий и может оказывать влияние на особенности течения заболевания.

Дисбиоз кишечника у больных XX определялся в 68% случаев. Нарушения, соответствующие 1-й степени дисбиотических расстройств, обнаружены у 40%, дисбиоз 2-й степени - у 20% обследованных (табл.1). При оценке количественного состава микрофлоры кала констатированы снижение общего количества бифидобакгерий, лактобактерий, повышение количества энтерококков. Других представителей условно-патогенной микрофлоры (гемолитические штаммы E.coJi, клостридии) наблюдали несколько чаще, чем у практически здоровых лиц, но различие частоты их выявления было недостоверным.

Исследование кала на дисбиоз при ЖКБ позволило достоверно чаще, чем у пациентов с XX (у 92% пациентов, р<0,05), выявить изменение кишечного биоценоза: 1-я степень дисбиоза отмечена у 28%, 2-я степень - у 52%, 3-я -у 12% пациентов. Результаты количественного анализа кишечной микрофлоры больных XX свидетельствуют о существенном снижении содержания кишечной палочки, бифидобактерий, лактобакгерий, пролиферации энтерококков и клостри-дии по сравнению с аналогичными показателями при XX. Другие представители микробного биоценоза (гемолитические штаммы кишечной палочки, протей, клебсиелла), хотя и имели тенденцию к повышению частоты встречаемости, однако их различие с показателями у здоровых лиц и больных XX было недостоверным.

Таблица 1

Частота встречаемости дисбактериоза кишечника у пациентов с XX,

ЖКБиПХЭС

Биоценоз кишечника Практически здоровые лица, п = 10 Пациенты с XX, п = 25 Пациенты с ЖКБ, п = 25 Пациенты после холецистэкто-мии, п = 20

Нормальный биоценоз 8 (80%) 8 (32%)* 2 (8%)* 0

I степень дисбиоза 1 (10%) 10(40%)* 7 (28%) 2 (10%)

И степень дисбиоза 1 (10%) 5 (20%) 13 (52%)* 13 (65%)*

III степень дисбиоза 0 2 (8%) 3 (12%) 5 (25%)*

Примечание: *- показатели имеют достоверные различия со значениями в группе практически здоровых лиц (р<0,05);

У пациентов, перенесших холецистэктомию, при микробиологическом исследовании кала установлено, что после удаления желчного пузыря по поводу холелитиаза у 100% пациентов наблюдаются глубокие нарушения кишечного биоценоза (I степень - 10%, II степень - 65% пациентов, III степень - у 25%), избыточный бактериальный рост в кишечнике.

Изучение биохимических свойств выделенной микрофлоры СО эзофаго-гастродуоденальной зоны показало, что они имеют высокие показатели признаков, коррелирующих с патогенностью. Так, по сравнению с бактериями, выделенными из слизистой оболочки здоровых людей, в большем числе случаев обнаруживаются гемолитические стафилококки и стрептококки (р<0,01). Появляются штаммы бактерий с гемолитической активностью представители родов:

Neisseria, Enterobacter, Pseudomonas, Veillonella, Bacillus, Citrobacter, Serratia, Pep-tococcus, E.coli, которые у здоровых лиц не определялись.

Выделяются бактерии, обладающие лецитиназной активностью: стафилококки, стрептококки, бациллы, коринебактерии, псевдомонады и энтеробакте-рии.

Выявляются также штаммы, обладающие РНК-азной активностью: псевдомонады, стафилококки, стрептококки, энтеробактерии и даже лактобациллы. Казеинолитическая активность отмечалась у псевдомонад, стрептококков, стафилококков и бактероидов. Фермент уреаза кроме H.pylori продуцировался пеп-тококками, микрококками стрептококками, стафилококками, псевдомонадами и грибами рода Candida.

Цитотоксическими свойствами обладали большинство выделенных микроорганизмов из СО больных людей: H.pylori, стафилококки, стрептококки, пеп-тококки, микрококки, лактобактерии, актиномицеты, псевдомонады, энтеробактерии (цитробактеры, энтеробактеры, серрации, ацинетобактеры, кишечная палочка) и грибы рода Candida.

Грамположительная кокковая микрофлора, выделенная из СО пищевода, желудка и 12-перстной кишки у больных XX, ЖКБ и ПХЭС в 85 - 95% случаев не обладала антилизоцимной активностью (АЛА). У грамположительных аэробных палочек рода Corynebacterium отсутствие антилизоцимной активности отмечалось в 60% случаев.

Однако в 15-30% случаев выделяются стафилококки и стрептококки, продуцирующие фермент лизоцим, что позволяет отнести этот признак к факторам, определяющим селективные преимущества бактериям при выживании в микробиоценозе.

У 50% грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae анти-лизоцимная активность отсутствовала. В 25% случаев у бактерий рода Enterobacter АЛА определялась на уровне 3,5 мкг/мл, и в таком же проценте 6 мкг/мл. У бактерий рода Pseudomonas в 10% АЛА составила 0,8 мкг/мл, в 15% - 1 мкг/мл, в 30% - 3 мкг/мл, что в среднем по грамотрицательным бактериям составило 2,56 ± 1,40 мкг/мл.

Помимо указанных признаков, адгезивные свойства выявлялись практически у всех исследуемых бактерий. Средний показатель адгезии на эритроцитах в среднем был 3,89 ± 2,04. В большей степени средний показатель адгезии 3-5 бактерий на клетке обнаружены у представителей родов Serratia, Enterobacter, Escherichia, Acinetobacter, Pseudomonas, Staphylococcus.

В результате проведенных исследований установлено, что способность к формированию биопленки у исследованных штаммов оказалась различной. Из 150 изученных изолятов у 98 штаммов (65,3%) наблюдали хорошую способность к формированию биопленки, у 37 (24,6%) отмечалась умеренная способность к образованию биопленки. А у остальных 15 штаммов (10,1%) уровень абсорбции кристалвиолета этанолом, измеренный при длине волны 540 нм на спектрофотометре в единицах оптической плотности, соответствовал фону или отрицательному контролю.

Высокая способность к образованию биопленок отмечается у 100% штаммов E.coli, Staphylococcus spp., Lactobacillus spp., у 90% Bacillus spp., у 80% Candida spp. Streptococcus spp., у 70% Serratia spp. Enterobacter spp. Pseudomonas spp., остальные штаммы обладали высокой способностью к образованию биопленки в 20- 60%.

Штаммы с гемолитической активностью составляли около 1/3 выборки (33,3%) среди штаммов с высокой способность к образованию биопленок, а среди штаммов, не обладающих способностью образовывать биопленки, их оказалось только 11,3%. Из штаммов с высокой способностью формировать биопленки 14,6% обладали лецитиназной активностью, тогда как среди штаммов с умеренной способностью — только 6,7%, а среди штаммов, не способных образовывать биопленку, такие культуры не были выявлены.

Аутоагрегация отмечалась у всех исследуемых штаммов микроорганизмов, но разной степени выраженности. У 70 % наблюдалась ярко выраженная аутоагрегация, к этой группе относятся Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Enterobacter spp., Corynebacterium spp., Pseudomonas spp., Citrobacter spp., Serratia spp., E.coli., Lactobacillus spp., Candida spp. У 30% штаммов аутоагрегация была средней степени выраженности.

Высокой поверхностой гидрофобностью обладали 100% штаммов Lactobacillus spp. и E.coli, 90% - Staphylococcus spp., Bacillus spp., Enterobacter spp., 80% - Candida spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., 70% - Streptococcus spp., Cory-nebacterium spp., 60% - Actinomyces spp, Enterococcus spp. Средней поверхностной гидрофобностью обладали 70% Entercoccus spp., 60% - H.pylori, Neisseria spp., Acinetobacter spp., 40% - Veillonella spp., Citrobacter spp.

Гидрофильными оказались 50% - Veillonella spp., 30% - Neisseria spp.,20% H.pylori, Entercoccus spp., 10%Actinomyces spp.

При изучении коагрегации выявлено, что все исследуемые штаммы Candida spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., E.coli в 100% случаев давали положительный результат со всеми тестовыми культурами. Также отмечено, что тестовые культуры S. aureus и В. subtilis коагрегировали со всеми исследуемыми штаммами микроорганизмов.

Изучение нами чувствительности выделенной микрофлоры из СО пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки при XX, ЖКБ и ПХЭС к применяемым антимикробным препаратам показало, что наиболее широким спектром подавления роста всей микрофлоры СО по отношению к большинству микроорганизмов обладает офлоксацин, и несколько меньшим - норфлоксацин, ампициллин, гентамицин, кларитромицин, ципрофлоксацин и оксациллин. Проведенные нами поиски новых антимикробных форм показали, что к таким препаратам относится биологически активная добавка хитозан.

При определении методом диффузии в агар чувствительности пристеночной микрофлоры, выделенной от больных XX, ЖКБ и ПХЭС к хитозану с разной молекулярной массой установлено, что пищевой хитозан с молекулярной массой 310-350 kDa (степень дезацетилирования 75-85%) показал более выраженное антимикробное действие по сравнению с хитозаном других ММ. К 1% раствору хитозана на 0,2% водной HCl были чувствительны 81,7-85% исследуемых штаммов микроорганизмов.

В связи с тем, что в клинической практике находят применение пробиоти-ки на основе разных видов лакгобацилл, было проведено сравнительное исследование антагонистической активности L. acidophilus 317/402 и L. plantarum 8А-РЗ.

Полученные результаты показывают, что пробнотикн из различных видов лакто-бацилл обладают собственным индивидуальным спектром антагонистической активности в отношении одних и тех же микроорганизмов. Так, пробиотик на основе L. plantarum 8А-РЗ ингибировал рост 69,8% исследуемых бактерий, а штамм L. acidophilus 317/402 проявлял антагонизм в отношении 72,9% тестируемых микроорганизмов. Следует отметить, что пробиотические штаммы L. acidophilus 317/402 и L. plantarum 8А-РЗ обладали одинаковой высокой антагонистической активностью в отношении Candida spp, Proteus mirabihs, Enterobacter spp. и Bacillus cereus.

Однако и тестируемые УПМ проявляли антагонизм в отношении пробио-тиков L. acidophilus 317/402 и L. plantarum 8А-РЗ (15,6% и 12,5 %, соответственно). Так, 18,5 % штаммов Е. coli, 9,1 % штаммов Pseudomonas aeruginosa и 25,8% штаммов Staphylococcus spp. препятствовали развитию пробиогических лакгоба-цилл. Наибольшей устойчивостью к L. acidophilus 317/402 обладали 48,4% изученных штаммов Staphylococcus spp., причем 25,8% штаммов стафилококков подавляли рост указанного пробиотика. В отношении штаммов Е. coli (р<0,05) наибольшую антагонистическую активность проявлял пробиотический штамм L. acidophilus 317/402 (70,4% по сравнению с 51,6%), а в отношении Staphylococcus spp. - L. plantarum 8A-P3(64,5% по сравнению с 48,1%).

Эти данные подтверждают сообщения о различиях в пггаммовой и видовой чувствительности возбудителей инфекционных заболеваний к пробиотиче-ским препаратам. Поэтому, для восстановления нормальной микрофлоры необходимо включение в комплекс лечения пробиотика на основе лактобактерий с предварительным определением индивидуальной к ним чувствительности УПМ.

Выводы

1. При хроническом холецистите, желчнокаменной болезни и у больных с постхолецистэктомическим синдромом регистрируется изменение качественного и количественного состава мукозной микрофлоры эзофагогастродуоде-нальной зоны, выражающееся в преобладании условно-патогенных микроорга-

низмов с выраженными факторами патогенности, что соответствует определению дисбактериоз.

2. Микробиоценозы слизистой пищевода, желудка и 12-перстной кишки у здоровых людей были представлены 12 родами микроорганизмов. Из слизистой оболочки эзофагогастродуоденальной зоны наиболее часто выделялись стафилококки, стрептококки, лактобациллы. Количество микроорганизмов колебалось в пределах 3,52 - 3,94 lg КОЕ/г и сочетание выделенных культур в среднем составило 3,39 ± 2,3. У больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и постхолецистэктомическим синдромом из биоптатов слизистой оболочки эзофагогастродуоденальной зоны изолировали штаммы микроорганизмов, относящиеся к 28 родам. Среди выделенных культур доминируют стафилококки, стрептококки, энтеробактерии, грибы рода Candida и неспорооб-разующие анаэробы родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Bacteroides. Количество выделенных микроорганизмов в среднем составляло 4,75± 0,83 lg КОЕ/г и сочетание выделенных культур в среднем составило 4,57 ± 2,2, что достоверно больше по сравнению с группой здоровых людей (р<0,05).

3. Штаммы условно-патогенных микроорганизмов, выделенные из слизистой оболочки пищевода, желудка и 12-перстной кишки у больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и постхолецистэктомическим синдромом в отличие от культур, изолированных у здоровых, характеризовались наличием цитотоксической (58,6% штаммов), уреазной (31,3%), гемолитической (22,7%), каталазной (16,7%), лецитиназной (9,3%), РНК-азной (5,3%) казеиноли-тической (4,6%) активностями, что свидетельствует о возможном их участии в поддержании воспалительных процессов в этих органах.

4. Изменение состава микробиоценозов СО пищевода, желудка и ДПК сопровождается дисбактериозом кишечника разной степени выраженности у 92% больных.

оболочки ЖКТ. 64,2% штаммов наблюдали хорошую способность к формированию биопленки, 21,5% отмечалась умеренная способность к образованию биопленки, а остальные 14,3% не образовывали пленку. Микроорганизмы, не способные к образованию биопленок не проявляли факторов патогенности, в то время как условно-патогенные микроорганизмы, обладающие гемолитической и лецитиназной активностью обладали высокой и средней способностью пленкообразования.

6. Клинические штаммы условно-патогенных микроорганизмов, изолируемые из слизистой оболочки при данных заболеваниях, были чувствительны к таким антибактериальным препаратам как офлоксацин, норфлоксацин, ампициллин, гентамицин, кларитромицин, ципрофлоксацин и оксациллин, а также к биологически активной добавке хитозану мол.массы 320-350 ГОа, что необходимо учитывать при включении этих средств в схемы лечения. Пробиотические штаммы лакгобацилл обладают разным спектром антагонистической активности в отношении одних и тех же условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных, что необходимо учитывать при их применении.

Практические рекомендации

1. У больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и постхолецистэктомическим синдромом рекомендуется выделять микрофлору не только из слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки, но и из желудка и пищевода с целью определения чувствительности к антимикробным препаратам и пробиотикам.

2. Рекомендуется включать пищевой хитозан с мол. массой 320-360 кДа в состав пищевых добавок, применяемых для профилактики и лечения дис-бактериозов желудочно-кишечного тракта в качестве антимикробного средства.

3. При назначении антибиотиков при лечении хронического холецистита, желчнокаменной болезни и постхолецистэктомического синдрома следует учитывать высокую чувствительность УПМ к таким антибактериальбным препаратам как офлоксацин, норфлоксацин, ампициллин, гентамицин, кларитромицин, ципрофлоксацин и оксациллин.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Михайлова Е.С. Мукозная микрофлора пищевода и желудка у больных хроническим холециститом / Материалы V конференции молодых ученых России с международным участием 19-22 мая 2008 года, приложение к журналу «Вестник РАМН» №6. 2008 г. с.300.

2.Михайлова Е.С. Червинец В.М., Червинец Ю.В., Виноградов В.Ф., Смирнова Л.Е., Сидоров ЛИ.. Дисбиозы желудочно-кишечного тракта у больных пожилого возраста с хроническим бескаменным холециститом и желчнокаменной болезнью / Материалы российской научно-практической конференции 22-24 октября 2008г., «Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова», №3/1(28) 2008г. с. 158-163.

3.Михайлова Е.С. Червинец В.М., Червинец Ю.В., Барашков А.П., Секарева Е.В. Микрофлора желудочно-кишечного тракта у больных хроническим холецистите / Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2008. №4. с. 103-105.

4.Михайлова Е.С. Червинец В.М., Червинец Ю.В., Самоукина А.М. Дисбиозы эзо-фагогастродуоденальной зоны у больных хроническим бескаменным холециститом и желчнокаменной болезнью / "Успехи современного ествествознания". №2.2009 с. 51.

5.Михайлова Е.С., Червинец В.М., Червинец Ю.В., Джулай Г.С., Самоукина А.М. Особенности микробиоценозов эзофагогастродуоденальной зоны у больных хроническим бескаменным холециститом и желчнокаменной болезнью (тезисы). Материалы IX съезда Научного общества гастроэнтерологов России, II совместной школы последипломного образования AGA и НОГР, XXXV сессии ЦНИИГ, 2-5 марта Москва, 2009 г. Приложение X® 1 к журналу. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология № 2. 2009.С. 164165.

6.Михайлова Е.С., Червинец В.М., Червинец Ю.В., Джулай Г.С., Львова М.А. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны и дуоденальный рефлюкс у больных желчнокаменной болезнью (тезисы). Материалы IX съезда Научного общества гастроэнтерологов России, II совместной школы последипломного образования AGA и НОГР, XXXV сессии ЦНИИГ, 2-5 марта Москва, 2009 г. Приложение № 1 к журналу. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология № 2.2009. с. 165-166

Список сокращений:

АЛА - ангилизоцимная активность

ДПК - двенадцатиперстная кишка

ЖВП - желчевыводящие пути

ЖКБ - желчнокаменная болезнь

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ПХЭС - постхолецистэкгомический синдром

СО - слизистая оболочка

УПМ - условно-патогенные микроорганизмы

XX - хронический холецистит

ЭГДЗ - эзофагогасггродуоденальная зона

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Михайлова, Елена Сергеевна

Список сокращений 6 Введение

ГЛАВА 1. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны и кишечника у больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с 12 постхолецистэктомическим синдромом. {Обзор литературы)

1.1. Микрофлора пищевода, желудка и кишечника у здоровых лго

1.1.1. Микрофлора пищевода

1.1.2. Микрофлора желудка

1.1.3. Микрофлора двенадцатиперстной кишки

1.1.4. Микрофлора кишечника

1.1.5. Дисбиоз как токсико-инфекционный процесс 19 1J2. Микрофлора ЭГДЗ больных с патологией ЖВП

1.2.1. Микрофлора пищевода, желудка и двенадцатиперстной 23 кишки у больных хроническим холециститом

1.2.2. Особенности микрофлоры пищевода, желудка и двена- 29 дцатиперстной кишки у больных ЖКБ

1.2.3. Особенности микрофлоры пищевода, желудка и двена- 33 дцатиперстной кишки у больных ПХЭС

1.2.4. Микроэкология кишечника при хроническом холецисти- 34 те, ЖКБ и после холецистэктомии

1.3. Пути коррекции дисбиотических нарушений

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика исследуемого материала

2.2. Выделение и идентификация микроорганизмов

2.3. Методы идентификации выделенных микроорганизмов

2.4. Методики определения факторов патогенности микроорганизмов

2.4.1. Методика определения лецитиназной и гемолитической 53 активности

2.4.2 Методика определения оксидоредуктазной активности

2.4.3 Методика определения уреазной активности микроорга- 54 низмов

2.4.4 Методика определения микробных протеаз

2.4.5 Методика определения нуклеазной активности микроорга- 55 низмов

2.4.6. Определение цитотоксичности микроорганизмов

2.5. Определение антагонистической способности микроорганизмов

2.6. Определение антилизоцимной активности микроорганизмов

2.7. Методика определения адгезивной способности микроорганизмов

2.8. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

2.9. Методика определения способности микроорганизмов к образова- 61 нию биопленок

2.10. Методика определения чувствительности микроорганизмов к со- 62 ляной кислоте и желчи

2.10.1. Определение чувствительности к соляной кислоте

2.10.2. Определение чувствительности к желчи

2.11. Методика определения аутоагрегации микроорганизмов.

2.12. Методика определения поверхностной гидрофобности микроор- 63 ганизмов.

2. 13. Методика определения способности микроорганизмов к коагре- 63 гации.

2.14. Методика бактериологического исследования кала на дисбакте- 64 риоз кишечника

2.15. Статистическая обработка материала

ГЛАВА 3. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны и кишечни- 68 ка здоровых и больных людей

3.1. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны здоровых лю- 68 дей

3.1.1. Микробиоценозы пищевода здоровых людей

3.1.2. Микробиоценозы желудка здоровых людей

3.1.3. Микробиоценозы 12-перстной кишки здоровых людей

3.2. Микробный пейзаж слизистой оболочки пищевода у больных 74 хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и перенесших холецистэктомии

3.3. Микрофлора слизистой оболочки желудка при хроническом холе- 78 цистите, желчнокаменной болезни и после холецистэктомии

3.4. Микробиоценозы слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки 83 у больных с хроническим холециститом, ЖКБ и ГТХЭС

3.5. Микрофлора кишечника у больных XX, ЖКБ и ПХЭС

ГЛАВА 4. Факторы патогенности микроорганизмов эзофагогастродуоде- 93 нальной зоны у здоровых и больных хроническим холециститом, ЖКБ и перенесших холецистэктомию

4.1. Спектр ферментативной активности микрофлоры слизистой обо- 93 лочки пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у здоровых

4.2. Спектр ферментативной активности микрофлоры слизистой обо- 96 лочки пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у больных хроническим холециститом, ЖКБ и ПХЭС

4.3. Взаимоотношения микроорганизмов ЭГДЗ между собой

4.4. Адгезивная способность микроорганизмов

4.5. Способность к формированию биопленок

4.6. Чувствительность микроорганизмов к желчи и соляной кислоте

4.7. Аутоагрегация микроорганизмов

4.8. Поверхностная гидрофобность микроорганизмов

4.9. Коагрегация микроорганизмов

ГЛАВА 5. Чувствительность микроорганизмов, выделенных из СО эзофа- 118 гогастродуоденальной зоны больных XX, ЖКБ и ПХЭС

5.1. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам

5.2. Антимикробная активность хитозана

5.3. Чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к 125 пробиотическим штаммам лактобактерий

Обсуждение результатов

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей"

Актуальность проблемы

Желчнокаменная болезнь (ЖКБ) и ее начальная стадия хронический холецистит (XX) в настоящее время относятся к числу наиболее распространенных заболеваний, которые считают «болезнью века» или «болезнью цивилизации». По данным различных авторов, желчнокаменная болезнь выявляется у 15-36% людей старше 40 лет и имеет неуклонную тенденцию к росту (Григорьев П.Я., 2002; Bellows C.F. et al., 2005; Ильченко А.А., 2006). В нашей стране частота выявления ЖКБ в зависимости от региона колеблется от 5 до 20%. По распространенности она занимает 3-е место после сердечнососудистых заболеваний и сахарного диабета (Дадвани С.А., 2000; Лейшнер У., 2001). По данным Департамента здравоохранения Москвы распространенность ЖКБ составляет 3000, а число холецистэктомий 7000 в год на 100000 населения (Ильченко А. А., 2002; Лазебник Л.Б., 2003). В России ежегодно выполняемые холецистэктомии занимают второе место среди всех операций, проводимых населению, уступая лишь числу аппендэктомий. ЖКБ нередко приводит к временной, а может быть даже к стойкой утрате трудоспособности, в связи с чем эта проблема приобрела важное социально-экономическое значение (Ильченко А.А., 2006).

Холелитогенез представляет собой длительный многостадийный процесс, в котором периоду камнеобразования предшествуют изменения физико-химического состава желчи, происходящие под воздействием различных факторов (Binette J.P., 2000; Schirmer B.D., 2005). Важную роль в развитии заболевания и в образовании конкрементов играют микроорганизмы (Зубарева Н.А., 1999; Черкасов В.А., 2003; Ljungh А., 2002). Многочисленными исследованиями установлено, что среди микроорганизмов, выделяемых из желчного пузыря больных холециститом и ЖКБ, ведущее место занимают условно-патогенные энтеробактерии (Tejero А., 1990; Ohdan Н., 1993; Petakovic G., 2002; Нао W.L., 2004; Mukaiya М., 2005). В литературе имеются данные о роли Helicobacter pylori в развитии данной патологии (Blaser М. J., 1998; Silva СР., 2003; Fallone С. А., 2003). Есть сведения о проведенных микробиологических и гистологических исследованиях стенки желчного пузыря у больных ЖКБ (Кудря Е.В., 2002).

Известно, что в литогенезе, наряду с метаболическими нарушениями в гепатоцитах, важное место занимают внепеченочные факторы и, в первую очередь, функциональные и структурные изменения кишечника. Изменения в билиарной системе, в свою очередь, усугубляют и поддерживают кишечную дисфункцию. По данным ряда авторов условно-патогенные энтеробактерии колонизируют желчевыводящие пути вследствие транслокации из толстого кишечника на фоне дисбиотических нарушений (Валышев А.В.,1997; Sartor R.B., 1998; Van Erpecum К.J., 2003; Скворцова Т.Э., 2007). В.М. Бондаренко (2003) считает широкое распространение дисбиозов одним из важнейших факторов, определяющих наблюдаемое в настоящее время увеличение частоты и тяжести острых и хронических заболеваний, в частности пищеварительного тракта.

Однако при дуоденогастральном рефлюксе, наличие которого отмечается у 73% больных с патологией желчного пузыря, происходит заброс желчи в желудок и даже в пищевод, что может влиять на состав их микрофлоры (Бабак О.Я., 2000). Достоверных сведений о составе и количестве микроорганизмов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) у больных XX, ЖКБ и перенесших холецистэктомию по поводу ЖКБ в литературе не найдено, и в связи с этим возникает необходимость проведения дальнейшего детального изучения состояния мукозной микрофлоры верхних отделов ЖКТ при указанной патологии.

Изучение микробиоценозов желудочно-кишечного тракта при данной патологии способствует познанию этиопатогенеза и разработке новых терапевтических схем лечения, т.к. на фоне широкого применения антибиотиков возникает проблема резистентности микрофлоры к антибактериальным препаратам, что осложняет дальнейшую терапию. Не выяснена причастность

H.pylori и ассоциаций микроорганизмов мукозной микрофлоры в развитии дисбиотических нарушений ЖКТ при хроническом холецистите, желчнокаменной болезни и после холецистэктомии.

Отсутствуют данные о признаках, ассоциируемых с патогенностью и персистенцией условно-патогенных микроорганизмов, а также сведения об их антибиотикочувствительности. В связи с этим представляет интерес структура микробного пейзажа и необходимость коррекции дисбиотических расстройств у этой категории пациентов, что определило цель и задачи нашего исследования.

Цель исследования:

На основе комплексного многомерного подхода изучить характер микробиоценозов слизистой оболочки эзофагогастродуоденальной зоны у здоровых и у больных с хроническим бескаменным холециститом, желчнокаменной болезнью, а также перенесших холецистэктомию, выявить факторы па-тогенности и персистенции выделенных микроорганизмов и определить чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к антибактериальным препаратам и лактосодержащим пробиотикам.

Задачи исследования:

1. Выявить качественный и количественный состав мукозной микрофлоры пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у здоровых людей, больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с по-стхолецистэктомическим синдромом.

2. Оценить выраженность дисбиотических нарушений верхних отделов ЖКТ при исследуемой патологии и сравнить ее со степенью дисбакте-риоза кишечника.

3. Установить у выделенных микроорганизмов наличие признаков патогенности и персистенции.

4. Оценить способность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных, к формированию биопленок.

5. Определить чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к антибактериальным препаратам и пробиотическим штаммам лактобацилл для разработки критериев возможного применения в схемах профилактики и лечения у больных с патологией желчевыводящих путей.

Научная новизна исследования

1. Впервые при изучении микробиоценозов пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки и кишечника у больных с хроническим некалькулез-ным холециститом и желчнокаменной болезнью, а также с постхолецистэк-томическим синдромом выявлено увеличении спектра УПМ и их количества.

2. Установлено, что условно-патогенные бактерии, выделенные из слизистой оболочки верхних отделов ЖКТ у больных, характеризуются наличием цитотоксической, протеолитической, гемолитической, лецитовителазной, РНК-азной, ДНК-азной и антилизоцимной активностью, что свидетельствует об их потенциальном участии в поддержании воспалительного процесса.

4. Впервые изучена чувствительность всей выделенной из эзофагогастродуоденальной зоны условно-патогенной микрофлоры, доминирующей в этиологии хронического холецистита и ЖКБ, к антибактериальным препаратам, хитозану и к пробиотическим штаммам лактобацилл.

Практическая значимость исследования

1. Полученные данные о чувствительности выделенной из пищевода, желудка и 12-перстной кишки микрофлоры к антибактериальным препаратам, позволяют ориентировать клиницистов при выборе эффективного антимикробного средства для антимикробной терапии.

2. Показана перспективность использования хитозана в комплексной терапии XX, ЖКБ и ПХЭС.

3. Выявлено, что проводимая при данной патологии антимикробная терапия усугубляет дисбаланс микробиоценоза верхнего отдела пищеварительного тракта, что требует проведения дополнительной коррекции нарушенной нормальной микрофлоры.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на V конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 19-22 мая 2008 г.), где была получена золотая медаль РАМН за лучшую научную работу, на совместном заседании Тверских региональных обществ микробиологов, эпидемиологов, паразитологов с инфекционистами и иммунологами 11 февраля 2009 года, на расширенном заседании кафедр факультетской терапии, внутренних болезней педиатрического факультета, фундаментальной и клинической фармакологии, инфекционных болезней, гистологии с эмбриологией, биологии 1 апреля 2009 года.

Автором самостоятельно проведены все бактериологические исследования. Биопсийный материал был предоставлен ассистентом кафедры факультетской терапии ТГМА ic.m.h. С.Н. Базловым, врачом-эндоскопистом г.б. №4 г.Твери А.П. Барашковым.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. У больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с постхолецистэктомическим синдромом мукозная микрофлора пищевода, желудка и ДПК изменяется как по спектру, так и по количеству и факторам патогенности, что соответствует определению дисбактериоз.

2. Условно-патогенная микрофлора, выделенная от больных XX, ЖКБ и ПХЭС, обладающая факторами патогенности, проявляет высокую поверхностную гидрофобность, высокую степень аутоагрегации, коагрегации с грам+, грам- микроорганизмами и дрожжеподобными грибами и выраженную способность к образованию биопленок.

3. Микроорганизмы, выделенные из слизистой оболочки ЭГДЗ, проявляют разную степень чувствительности к лактосодержащим пробиотикам и высокую чувтвительность к пищевому хотозану и к антибактериальным препаратам: ампициллин, гентамицин, кларитромицин, офлоксацин, норфлокса-цин, ципрофлоксацин и оксациллин.

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов, методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Работа изложена на 177 стр. машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками, 16 таблицами. Библиографический указатель включает 246 наименований из них 126 отечественных и 120 зарубежных источников литературы.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Михайлова, Елена Сергеевна

выводы

1. При хроническом холецистите, желчнокаменной болезни и у больных с постхолецистэктомическими расстройствами регистрируется изменение качественного и количественного состава мукозной микрофлоры эзофагогастродуоденальной зоны, выражающееся в преобладании условно-патогенных микроорганизмов с выраженными факторами патогенности, что соответствует определению дисбактериоз.

2. Микробиоценозы слизистой пищевода, желудка и 12-перстной кишки у здоровых людей были представлены 12 родами микроорганизмов. Из СО ЭГДЗ наиболее часто выделялись стафилококки, стрептококки, лак-тобациллы. Количество микроорганизмов колебалось в пределах 3,52 - 3,94 lg КОЕ/г и сочетание выделенных культур в среднем составило 3,39 ± 2,3. У больных XX, ЖКБ и ПХЭС из биоптатов СО ЭГДЗ изолировали штаммы микроорганизмов, относящиеся к 28 родам. Среди выделенных культур доминируют стафилококки, стрептококки, энтеробактерии, грибы рода Candida и неклостридиальные анаэробы родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Bacteroides. Количество выделенных микроорганизмов в среднем составляло 4,75± 0,83 lg КОЕ/г и сочетание выделенных культур в среднем составило 4,57 ± 2,2, что достоверно больше по сравнению с группой здоровых людей (р<0,05).

3. Изменение состава микробиоценозов СО пищевода, желудка и ДПК сопровождается дисбактериозом кишечника разной степени выраженности у 92% больных.

4. Штаммы условно-патогенных микроорганизмов, выделенные из слизистой оболочки пищевода, желудка и 12-перстной кишки у больных XX, ЖКБ и ПХЭС в отличие от культур, изолированных у здоровых, характеризовались наличием цитотоксической (58,6% штаммов), уреазной (31,3%), гемолитической (22,7%), каталазной (16,7%), лецитиназной (9,3%), РНК-азной (5,3%) казеинолитической (4,6%) активностями, что свидетельствует о возможном их участии в поддержании воспалительных процессов в этих органах.

5. Высокая и средняя степень агрегации, коагрегации с тестовыми культурами грам+, грам- и дрожжеподобными грибами рода Candida и высокая гидрофобность указывает на потенциальную способность выделенных от больных людей микроорганизмов образовывать биопленки на поверхности слизистой оболочки ЖКТ. 64,2% штаммов наблюдали хорошую способность к формированию биопленки, 21,5% отмечалась умеренная способность к образованию биопленки, а остальные 14,3% не образовывали пленку. Микроорганизмы, не способные к образованию биопленок не проявляли факторов патогенности, т.е. представители нормальной микрофлоры не включались в образование биопленок, в то время как УПМ, обладающие гемолитической и лецитиназной активностью обладали высокой и средней способностью пленкообразования.

6. Клинические штаммы условно-патогенных микроорганизмов, изолируемые из слизистой оболочки при данных заболеваниях, были чувствительны к таким антибиотикам как офлоксацин, норфлоксацин, ампициллин, гентамицин, кларитромицин, ципрофлоксацин и оксациллин, а также к хитозану мол.массы 320-350 kDa, что необходимо учитывать при включении этих средств в схемы лечения. Пробиотические штаммы лакгобацилл обладают разным спектром антагонистической активности в отношении одних и тех же условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных, что необходимо учитывать при их применении.

Практические рекомендации

1. У больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с постхолецистэктомическими расстройствами рекомендуется выделять микрофлору не только из слизистой оболочки ДПК, но и из желудка и пищевода с целью определения чувствительности к антимикробным препаратам и пробиотикам, т.к. мукозная УПМ обладает к ним разной степенью чуствительности.

2. Рекомендуется включать пищевой хитозан с мол. массой 320-360 кДа в состав пищевых добавок, применяемых для профилактики и лечения дисбактериозов желудочно-кишечного тракта в качестве антимикробного, сорбирующего и иммуномодулирующего средства.

3. При назначении антибиотиков при лечении XX, ЖКБ и после холецистэктомии следует учитывать высокую чувствительность УПМ к таким антибиотикам как офлоксацин, норфлоксацин, ампициллин, гентамицин, кларитромицин, ципрофлоксацин и оксациллин.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Михайлова, Елена Сергеевна, Москва

1. Агапова, О.В. Ферменты патогенности клинических штаммов Klebsiella pneumoniae Текст. / О.В. Агапова,.В.М. Бондаренко, Н.А. Поликарпов [и др.]. // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 1999. № 2. - С. 5-8.

2. Агафонова, Н.А. Синдром диспепсии после холецистэктомии Текст. / Н.А. Агафонова, Э.П. Яковенко, П.Я. Григорьев [и др.]. // Материалы V съезда научного общества гастроэнтерологов России. — М., 3-6 февраля 2005.-С. 325-326.

3. Алиев, М.А. Дуоденит при хирургических заболеваниях органов гепатопанкреатодуоденальной зоны Текст. / М.А. Алиев [и др.]. // — Клиническая хирургия. 1990. - № 9. - С. 31-32.

4. Антончик, Г.М. Актуальные вопросы клинической микробиологии Текст. / Г.М. Антончик, Г.В. Плаксина // М., - 1985. - С. 132-134.

5. Ардатская, М.Д. Клиническое значение короткоцепочечных жирных кислот при патологии желудочно-кишечного тракта Текст.: дис. . д-ра мед. наук. /М.Д. Ардатская // 2003. - 320 с.

6. Арикъянц, М.С. Роль неклостридиальной анаэробной микрофлоры в этиологии и патогенезе желчнокаменной болезни Текст. / М.С. Арикъянц, А.Г. Тышко // Хирургия. 1988. - № 9. - С.70-72.

7. Арикьянц, М.С. Анаэробная инфекция в хирургии печени и жел-чевыводящих путей Текст. / М.С. Арикьянц, А.Г. Тышко, М.П. Захараш // -Киев.-1991.-112 с.

8. Ахаладзе, Г.Г Гнойный холангит (вопросы патофизиологии и лечения) Текст. / Г.Г. Ахаладзе // «50 лекций по хирургии» М: «Медиа Медика», - 2003 - С. 215-221.

9. Бабак, О.Я. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь Текст. / О.Я. Бабак, Г.Д. Фадеенко // К.: Интерфарма, 2000. 175 с.

10. Бажукова, Т.А. Этиологическая значимость грибов рода Candida при гнойно-септических заболеваниях Текст. / Т.А. Бажукова // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 1997. - № 3. — С. 101-102.

11. И. Бебуришвили, А.Г. Желчная гипертензия и острый холецистит Текст. / А.Г. Бебуришвили // «50 лекций по хирургии» М: «Медиа Медика», - 2003.-С. 204-215.

12. Белобородова, Н.В. Метаболиты анаэробных бактерий (летучие жирные кислоты) и реактивность макроорганизма Текст. / Н.В. Белобородова, С.М. Белобородое // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т.45, - № 2. -С. 18-36.

13. Белоголовцев, В. А. Анализ распространенности инфекции Helicobacter pylori при проведении профилактических медицинских осмотров Текст. / В.А Белоголовцев [и др.] // Гастроэнтерология, гепатология, коло-проктология. 2001, - Т. XI. - № 2. - С. 25.

14. Билич, И.Л. О сочетанной патологии верхнего отдела пищеварительной системы и толстой кишки Текст. / И.Л. Билич, Р.А. Абдулхаков, Л.А. Мартынова //Хронические болезни кишечника. — М., 1987. — С. 122.

15. Блинкова, Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, свойства, методы выявления Текст. / Л.П. Блинкова, // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2003.- № 3. - С. 109-113.

16. Богомолова, Н.С. Анаэробная инфекция в абдоминальной хирургии Текст. / Н.С. Богомолова, Л.В. Большакова // Вестник Российской Академии медицинских наук.'— 1996. — № 2, С. 30-33.

17. Бондаренко, В.М. "Острова" патогенности бактерий Текст. / В.М. Бондаренко // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. -2001.-№4.-С. 67-74.

18. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта (диагностика, профилактика и терапия) Текст. / В.М. Бондаренко [и др.] // Гастроэнтерология, гепатология, колопроктология. — 1998. — № 1. — С. 66-70.

19. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых Текст. / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. - 2003. — С. 87-89.

20. Бондаренко, В.М. Дисбиотические состояния и лечебные мероприятия при них Текст. / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2005. — № 12. - С. 24-29.

21. Бондаренко, В.М. Метаболитные пробиотики: механизмы терапевтического эффекта при микроэкологических нарушениях Текст. / В.М. Бондаренко // Consilium Medicum, 2005. - № 7. - С. 437-443.

22. Бондаренко, В.М. Микроэкологические изменения кишечника и их коррекция с помощью лечебно-профилактических препаратов Текст. / В.М. Бондаренко [и др.] // Российский журнал гастроэнтерология, гепатология, колопроктология. 2003- № 4 (20). - С. 66-75.

23. Бондаренко, В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры Текст. / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская // Вестник Российской Академии медицинских наук. 1997. — № 3. — С. 7-10.

24. Бондаренко, В.М. Роль персистенции условно патогенных бактерий в патогенезе язв желудка и двенадцатиперстной кишки Текст. / В.М.t

25. Бондаренко, В.М. Червинец А.А. Воробьёв // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 2003. — № 4. С. 11-17.

26. Бондаренко, В.М. Синдром избыточного бактериального роста в тонкой кишке в аспекте дисбактериоза кишечника Текст. / В.М. Бондаренко, Е.А. Лыкова, Т.В. Мацулевич // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2006. - № 5. - С. 50-56.

27. Брилис, В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов Текст. / В.И. Брилис [и др.] // Лабораторное дело. 1986. — № 4. -С. 210-212.

28. Бурков, С.Г. О последствиях холецистэктомии или постхоле-цист-эктомическом синдроме. Consilium Medicum Текст. / С.Г. Бурков // прил. Гастроэнтерология. — 2004. — № 1. — С. 24-28.

29. Бухарин, О.В. Видовой спектр и антибиотикорезистентность эн~ теробактерий, выделенных из желчи больных холангитом Текст. / О.В. Бухарин [и др.] // Антибиотики и химиотерапия. — 2006. Т.51. - № 3-4. - С. 7-12.

30. Бухарин, О.В. Место внутривидового фенотипического разнообразия в экологии Escherichia coli и Staphylococcus aureus Текст. / О.В. Бухарин [и др.] // Вестник Российской Академии медицинских наук. 1997. - № З.-С. 34-40.

31. Бухарин, О.В. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов Текст. / О.В. Бухарин [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 1984. — № 2. - С. 27-28.

32. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий Текст. / О.В. Бухарин // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 1999. -С. 112- 124.

33. Бухарин, О.В. Экологическая детерминированность внутривидового разнообразия патогенных бактерий Текст. / О.В. Бухарин [и др.] //

34. Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2000. - № 1. — С. 103106.

35. Валышев, А.В. Роль персистирующей условно-патогенной микрофлоры кишечника при дисбиозе в возникновении заболеваний гепатобили-арной системы Текст. / А.В. Валышев [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 1997. — № 4. — С. 87-88.

36. Вахитов, ТЛ. Концепция создания новых пробиотических препаратов Текст. / Т.Я. Вахитов, Л.П. Петров, В.М. Бондаренко // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 2005. — № 5. — С. 103-109.

37. Веселов, АЛ. Микрофлора желчи при некоторых неинфекционных заболеваниях органов пищеварения и её чувствительность к антибиотикам Текст. / А.Я. Веселов [и др.] // Антибиотики. — 1981. -Т.26. — № 1. — С. 65-69.

38. Воеводин, Д.А. Роль дисбактериоза в формировании хронической неинфекционной патологии у детей Текст. / Д.А. Воеводин [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2001. — № 6. — С. 88-93.

39. Волков, С.В. Микроэкология и структурные особенности толстой кишки при хроническом холецистите Текст. / С.В. Волков, И.В. Козлова // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. — 2001. — №.1-2. — С. 27-31.

40. Воробьев, А. А. Исследование пристеночной микрофлоры желудочно-кишечного тракта у человека в норме и при патологии Текст. / А.А. Воробьев [и др.] // Вестник Российской Академии Медицинских наук. — 2004.-№2.-С. 43-47.

41. Воробьев, А.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции Текст. / А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 1999. - № 6. - С. 102 -105.

42. Воробьев, А.А. Состояние проблемы инфекций, вызываемых не-спорообразующими анаэробными бактериями Текст. / А.А. Воробьев [и др.] // Вестник Российской Академии Медицинских наук. 1996. - № 2. - С. 3-8.

43. Воробьев, А.А. Сравнительное изучение пристеночной и про-светной микрофлоры толстой кишки в эксперименте на мышах Текст. / А.А. Воробьев [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 2001-№1.-С. 62-67.

44. Гальперин, Э.И. Заболевания желчных путей после холецистэк-томии Текст. / Э.И. Гальперин, Н.В. Волкова // — М.: Медицина. 1983. -272 с.

45. Гальперин, Э.И. Недостаточность печени Текст. / Э.И. Гальперин, М.И. Семендяева, Е.А. Некмодова // М., Медицина, —1978. — 240 с.

46. Гатауллин, А.Г. Свойства выделенных штаммов Bacillus subtilis и их влияние на интестинальную микрофлору экспериментальных мышей Текст. / А.Г. Гатауллин [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2004 - № 2. - С. 91-94.

47. Гильмутдинова, Ф.Г. Актуальные вопросы военной и практической медицины Текст. / Ф.Г. Гильмутдинова, Е.А. Трещева // Труды II научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа. Оренбург. - 2001. - С. 91-96.

48. Григорьев, ПЛ. Желчнокаменная болезнь и последствия холеци-стэктомии: диагностика, лечение и профилактика Текст. / ПЛ. Григорьев [и др.] // Лечащий врач. 2002. - № 6. - С. 26-32.

49. Григорьев, ПЛ. Лечение обострений хронических заболеваний органов пищеварения Текст. / ПЛ. Григорьев [и др.] //Лечащий врач. -2000.-№5-6.-С. 44-49.

50. Дадвани, С.А. Желчнокаменная болезнь Текст. / С.А. Дадвани [и др.] // — М.: Издательский Дом Видар-М. -2000. — 180 с.

51. Дедерер, Ю.М. О возникновении желчных камней Текст. / Ю.М. Дедерер Ю, Г.Г. Устинов, И.Б. Лузгина // Клиническая медицина. 1983. - № 10.-С. 19-22.

52. Джалашев, Я.Х. Клинико-микробиологическая диагностика не-кло-стридиальной анаэробной инфекции при заболеваниях желчных путей и абсцессе печени Текст. / Я.Х. Джалашев, В.И. Кочеровец, В.А. Тарасов // Вестник хирургии. 1986. - № 8. - С. 27-30.

53. Егорова, ЕЛ. Микробная флора и лизоцим слизистой оболочки гастродуоденальной зоны при язвенной болезни и возможности их коррекции Текст.: автореф. дис. .канд. мед .наук. / Е.НЕгорова. 1999. - 25 с.

54. Жарская, С.Л. Состояние факторов общего и местного иммунитета и микрофлора желчи у больных острым и хроническим холециститом Текст.: автореф. дис. . .канд. мед .наук. / С.Л. Жарская. — 1994. 24с.

55. Жулев, С.А. Инфицированность протоковой желчи у больных острым и хроническим холангитом Текст. / С.А. Жулев // Анналы хирургической гепатологии. 1999. - Т. 4. - № 2. — С. 100.

56. Зубарева, Н. А. Инфекция в патологии и хирургии билиарной системы при желчнокаменной болезни Текст.: дис. . д-ра мед.наук / Н.А. Зубарева. 1999. - 311 с.

57. Ильченко, А. А. Состояние проблемы желчнокаменной болезни в Москве: распространенность, диагностика, лечение и профилактика Текст. / А. А. Ильченко // материалы 1 Московской ассамблеи «Здоровье столицы». -М.,-2002. -С. 23-24.

58. Ильченко, А.А. Заболевания желчного пузыря и желчных путей Текст. / А. А. Ильченко // — М., «Анахарсис». — 2006. — 226 с.

59. Калинин, А.В. Роль Campylobacter pylori в клиническом течении хронического антрального гастрита и язвенной болезни 12-перстной кишки Текст. / А.В. Калинин [и др.] // Клиническая медицина. — 1989. — Т. 67. № 10. - С. 64-66.

60. Каспаров, Э.В. Helicobacter pylori и язвенная болезнь у населения Красноярска Текст. / Э. В. Каспаров, И.Г. Буряк, В.В. Цуканов // Российский гастроэнтерологический журнал. — 1998. — № 2. — С. 62-63.

61. Коваль, Ю.В. Медико-биологические аспекты использования хитина, хитозана и их производных. Текст. / Ю.В. Коваль [и др.] // М., 1992. -136 с.

62. Корнева, Т.К. Дисбактериоз кишечника у проктологиче-ских больных: микробиологические аспекты Текст. / Т.К. Корнева //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. -1999.- С.55-60.

63. Коршунов, В.М. Качественный состав нормальной микрофлоры кишечника у лиц различных возрастных групп Текст. / В.М. Коршунов [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2001. - № 2. -С. 57-62.

64. Кочкина, З.М. Влияние хитозана на фаговые инфекции Текст. / З.М. Кочкина, С.Н. Чирков // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. Москва-Щелково, 25-27 мая. — 1999. -С. 151-153.

65. Кудря, Е.В. Биологические свойства микроорганизмов, колонизирующих желчный пузырь при остром и хроническом калькулезном холецистите Текст.: дисс. канд. мед. наук / Е.В. Кудря. — Ростов-на-Дону, 2002. -180 с.

66. Лейшнер, У. Практическое руководство по заболеваниям желчных путей Текст. / У. Лейшнер // М., Издат. Дом ГЭОТАР-МЕД, 2001. -264 с.

67. Лобзин, Ю. Оценка состояния желудка, двенадцатиперстной кишки и желчевыводящих путей у больных с хроническим гепатитом С Текст. / Ю.В. Лобзин [и др.] // Терапевтический архив. 2005. — Т.77. - №2. -С. 66-69.

68. Лыкова, Е.А. Дисбиозы тонкой кишки у детей и их коррекция Текст. / Е.А. Лыкова [и др.] // сб.: Основы и принципы лечения воспалительных заболеваний кишечника. Международный Workshop Фалька. — С-Пб, -1996.-С. 55.

69. Лыкова, Е.А. Нарушения микрофлоры кишечника и иммунитета у детей с аллергическими дерматитами и их коррекция Текст. / Е.А. Лыкова [и др.] // Российский педиатрический журнал. — 2000. — № 2. — С. 20-24.

70. Малафеева, Э.В. Микробиология и иммунология гнойной хирургической инфекции, вызванной неспорообразующими анаэробами Текст. /

71. В. Малафеева и др. // Вестник Российской Академии Медицинских наук. — 1996. —№ 2. — С. 44-45.

72. Малов, В.А. Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта: со-времен-ное состояние проблемы Текст. / В.А. Малов, Н.М. Гюлазян // Лечащий Врач . 2007. - № 2. - С. 16-18.

73. Муццарелли, Р.А. Хитозан per os: от пищевой добавки — к лекарственному средству Текст. / Р.А. Муццарелли // Н. Новгород, Изд-во Вектор-ТиС, 2001.-372с.

74. Накамура, Тэруо. Желудочная бактериальная флора у больных с диабетическим парезом желудка. Текст. / Тэруо Накамура [и др.] // Клиническая медицина. -1992. -Т. 70.-№9-10.-С. 50-51.

75. Никитенко, В.И. Взаимоотношения макроорганизма и бактерий в ране и тканях человека и животных Текст. / В.И. Никитенко // Хирургия, — 1990.-№9.-С. 94-99.

76. Никитенко, В.И. Роль транслокации бактерий в патогенезе хи-рурги-ческой инфекции Текст. / В.И. Никитенко, В.В. Захаров // Хирургия. -2001.-№2.-С. 63-66.

77. Никитенко, В.Й. Явление естественного защитного бактериального механизма при повреждениях. Текст. / В.И. Никитенко, О.В. Бухарин, И.К. Никитенко // Заявка на открытие. ВНИИГПЭ. 1986. - № от 11353.

78. Никитин, В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов Текст. / В.М. Никитин // Кишинев, 1986. - 294 с.

79. Ногаллер, A.M. Аллергический синдром при хронических заболеваниях органов пищеварения Текст. / A.M. Ногаллер // Клиническая медицина. 2001. - №11. - С. 65-71.

80. Онищенко, Г.Г. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии Текст. / Г.Г. Онищенко [и др.] // М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. 608 с.

81. Ордуян, C.JI. Бактериохолия в генезе холециститов и ее значение в выборе методов лечения Текст.: автореф. дис. . д-ра мед. наук / C.JI. Ордуян. -М., 1989.-44 с.

82. Павлина, С.Ю. Микрофлора слизистой оболочки культи желудка. В сб.: Современные проблемы медицины и биологии Текст. / С.Ю. Павлина, А.Я. Веселов // материалы XXIX областной научно-практической конференции. Курган, 1997. - С. 71-72.

83. Панов, В.А. Хирургическое лечение бактероидного гнойного хо-лангита Текст. / В.А. Панов [и др.] / /Клиническая хирургия. — 1991. — №9. -С. 50-52.

84. Парфенов, А.И. Дисбактериоз кишечника (в помощь практическому врачу) Текст. / А.И. Парфенов [и др.] // Укра'шський медичний ча-сопис. 1998. - Т. 1. - №3(5). - С. 65-70.

85. Парфенов, А.И. Дисбактериоз кишечника (в помощь практическому врачу) Текст. / А.И. Парфенов [и др.] // Укра'шський медичний ча-сопис. 1998. - У/У 1. - №3(5). - С. 65-70.

86. Петровская, В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии Текст. / В.Г. Петровская, О.Н. Марко // М., 1976. - 232 е.

87. Петровский, Б.В. Роль неклостридиальной анаэробной инфекции при гнойном холангите Текст. / В.Г. Петровский, К.Н. Цацаниди, Н.С. Богомолова // Хирургия. 1984. - №12. - С. 3-7.

88. Поришков, В.В. Бактериология желчи и антибактериальная терапия механической желтухи Текст. / В.В. Поришков // Анналы хирургической гепатологии. 1999. - Т.4. -№ 2. - С. 123-124.

89. Протасевич, А.И. Микрофлора пузырной желчи при остром каль-кулезным холецистите Текст. / АЛ. Протасевич [и др.] // Актуальные вопросы гепато-панкреато-билиарной хирургии: сб. тр. Минск, 2002, - С. 122-124.

90. Романова, Ю.М. Способность к формированию биопленок в искусственных системах у различных штаммов Salmonella tiphimurium Текст. / Ю.М. Романова [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2006. - № 4. - С. 38-42.

91. Савицкая, К.И. Оценка микроэкологии содержимого толстой кишки у больных хроническим панкреатитом Текст. / К.И. Савицкая [и др.] // // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2002. - №4. - С. 2023.

92. Сивец, Н.Ф. Калькулезный холецистит: послеоперационные осложнения, микробиологический мониторинг Текст. / Н.Ф. Сивец [и др.] // Медицинские новости. 2004. - №11. - С. 98-101.

93. Скворцова, Т. Э. Клинико-патогенетические особенности диагностики и лечения желчнокаменной болезни у больных с нарушениями двигательной функции и микробиоценоза кишечника Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук / Т.Э. Скворцова. СПб., 2007. — 24 с.

94. Скуя, Н.А. Пролиферация кишечных бактерий в верхнем отделе кишечника при наличии синдрома правого подреберья Текст. / Н.А. Скуя, С.Э. Межецка // Терапевтический архив. — 1988. Т.60. - №2. - С. 86-88.

95. Слизень, В.В. Биологические свойства и роль бактероидов в этиологии острых парапроктитов и других хирургических инфекций Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук/В.В. Слизень. — Мн., 2004. — 22 с.

96. Созинов, А.С. Кишечная микрофлора и сопутствующие заболевания желудочно-кишечного тракта у больных хроническими вирусными гепатитами В и С Текст. / А.С. Созинов [и др.] // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 2002. — № 1. — С. 61-64.

97. Титов, Л.П. Анаэробная инфекция: этиология, патогенез, антибактериальная терапия Текст. / Л.П. Титов // Методические рекомендации МЗ РБ. Минск, 1998. - 48 с.

98. Уланова, В.И. Применение антифунгальных средств при лечении больных с гастродуоденальными язвами, инвазированными грибами рода Кандида Текст. / В.И. Уланова // Материалы II Международного симпозиума: Микозы и иммунодефициты. — Л., 1991. С.56-60.

99. Филин, В.А., Салмова B.C., Вартапетова Е.Е. Современные аспекты этиологии и патогенеза неспецифического язвенного колита Текст. /В.А. Филин, B.C. Салмова, Е.Е. Вартапетова //Педиатрия. — 2000. — № 6. -С. 95-99.

100. Циммерман, Я.С. Helicobacter pylori и их роль в развитии хронического гастрита и язвенной болезни Текст. / Я.С. Циммерман, М.Р. Зинна-туллин // Клиническая медицина. — 1997. — № 4. — С. 8-13.

101. Червинец, В.М. Изменение микробиоценоза при воспалительных и эрозивно-язвенных поражениях пищевода, желудка и 12-перстной кишки и пути его коррекции Текст. : автореф. дис. . докт. мед. наук / В.М. Червинец. 2002. - 40 с.

102. Червинец, В.М. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения Текст. / В.М. Червинец [и др.] // Тверь, 2004 - 124 с,

103. Червинец, В.М. Изменение микробиоценоза при воспалительных и эрозивно-язвенных поражениях пищевода, желудка и 12-перстной кишки ипути его коррекции Текст.: автореф. дис. . докт. мед. наук/В.М. Червинец. -Тверь, 2002.-40 с.

104. Червинец, В.М. Способ культивирования Helicobacter pylori. Патент на изобретение № 2145975 Текст. / В.М. Червинец, Л.Ф. Червинец // — 27.02.-2000.

105. Черкасов, В.А. Антибиотики в хирургии желчных путей Текст. / В.А. Черкасов, И.А. Зубарева, Э. С. Горовиц // Вестник хирургии. 2002. -Т. 161. —№ 2. - С. 111-115.

106. Черкасов, В.А. Микробиологические аспекты хирургической патологии билиарной системы Текст. / В.А. Черкасов [и др.] // Вести хирургии им. Грекова. 2003 - Т. 162. -№ 2. - С. 109-113.

107. Чернин, В.В. Язвенная болезнь, хронический гастрит и эзофагит в аспекте дисбактериоза эзофагогастродуоденальной зоны Текст. / В.В. Чернин [и др.] // М., "Триада", 2004. - 200 с.

108. Чернин, В.В. Язвенная болезнь, хронический гастрит и эзофагит в аспекте дисбактериоза эзофагогастродуоденальной зоны Текст. / В.В. Чернин [и др.] // -М.: "Триада", 2001.-100 с.

109. Чеснокова, М.Г. Дисбактериоз у больных полипозом толстой кишки Текст. / М.Г. Чеснокова // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 2001. № 5. - С. 65-68.

110. Швецов, С.А. Клиническое значение персистентных характеристик аэробной условно-патогенной микрофлоры у больных холециститом Текст.: автореф. дис. канд. мед. наук / С.А. Швецов —Пермь, 1994. — 31 с.

111. Шендеров, Б.А. Медицинска микробная экология и функциональное питание. Том 3: Пробиотики и функциональное питание Текст. / Б.А. Шендеров // М.: Грант, 2001. С. 151-159.

112. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание Текст. / Б.А. Шендеров // Пробиотики и функциональное питание. — М.: Грант, 2001. Т. 3. - 240 с.

113. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание Текст. / Б.А. Шендеров // — М., 1998. — Т. 1. 288 с.

114. Шлегель, Г. Общая микробиология: перевод с немецкого Текст. / Г. Шлегель // М.: Мир, 1987. - 567 с.

115. Ягмур, В. Состояние пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у больных после холецистэктомии Текст. / В. Ягмур [и др.] // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2004. — Т. 5. №14.-С. 101.

116. Яковенко, Э.П. Хронические заболевания внепеченочных желче-выводящих путей (Диагностика и лечение) Текст. / Э.П. Яковенко, П.Я. Григорьев // Методическое пособие для врачей. — М.: Медпрактика. — 2000. — 136 с.

117. Яскович, ГА. Изучение гидрофобности поверхности штаммов клеток бактерий Текст. / Г.А. Яскович, Е.П. Яковлева // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. —1996. 65, № 4. - С. 565-571.

118. Adawi, D. Inhibition of nitric oxide production and the effects of arginine and Lactobacillus administration in an acute liver injury model Tekst. / D. Adawi, G/ Molin, B. Jeppsson // Ann. Surg. 1998. - Dec. - № 228(6). - P. 748-755.

119. Al Harbi, M. Tract microflora in Saudi patients with cholelithiasis / Tekst. M. Al Harbi [et al.] // Trap Med Int Health. 2001. -Jul. - № 6(7). - P. 570-574.

120. Andreu, A. Hemmaglutination, adherence and surface properties of vaginal Lactobacillus species Tekst. / A. Andreu [et al.] // J. Infect. Dis. - 1995. -№171.-P. 1237-1243.

121. Belicova, A. Synergic activity of selenium and probiotic bacterium Enterococcus faecium M-74 against selected mutagens in Salmonella assay Tekst. / A. Belicova [et al.] // Folia Microbiol. 2004. - № 49(3). - P. 301-305.

122. Bellows, C.F. Management of gallstones Tekst. / C.F. Bellows, D.H. Berger, R.A. Crass // Am Fam Physician. 2005. - Vol. 72(4). - P. 637 - 642.

123. Berg, R.D. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract Tekst. / R.D. Berg // Trends Microbiol. 1995. - №.3. - P. 149-54.

124. Berg, R.D. Bacterial translocation from the intestines Tekst. / R.D. Berg // Jikken Dobutsu. 1985. - Jan. - № 34(1). - P. 1-16.

125. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 2. Williams & Wilkins.-1986.-1599 P.

126. Bernhardt, H. Recent studies on the microbial ecology of the upper gastrointestinal tract Tekst. / H. Bernhardt, M. Knoke // Infection. 1989. - № 17 (4).-P. 259-263.

127. Bertok, L. Bile acids in physico-chemical host defence Tekst. / L. Bertok // Pathophysiology. 2004. - Vol. 11(3). - P. 139 - 145.

128. Bianchi, M.A. A fluorescence-based method for the detection of adhesive properties of lactic acid bacteria to Caco-2 cells Tekst. / M.A. Bianchi [et al.] // Lett. Appl. Microbiol. 2004. - № 39(3). - P. 301-305.

129. Binette, J.P. The proteins and the formation of gallstones Tekst. / J.P. Binette, M.B. Binette // Clin. Chim. Acta. 2000. - Vol. 296. -№ 1-2. - P. 59 -69.

130. Blaser, M. Hypothesis: the changing relationships of Helicobacter pylori and humans: implications for health and disease Tekst. / M. Blaser // J. bfect.Dis.-1999.-Vol. 179(6). -P. 1523-1530.

131. Blaser, M. J. Helicobacter pylori and gastric disease Tekst. / M.J. Blaser// Br. Med. J. — 1998. — Vol. 316. — P. 1507-1510.

132. Bourgault, A.M. Clinical characteristics of anaerobic bactibilia Tekst. / A. M. Bourgault [et al.] // Arch Intern Med. 1979. - Vol. 139(12). - P. 13461349.

133. Browning, G.G. The effect of vagotomy and drainage on the small bowel flora Tekst. / G. G. Browning [et al.] // Gut, 1974. - № 15. - P. 139-142.

134. Buckley, M.J. A community-based study of the epidemiology of Helicobacter pylori infection and associated asymptomatic gastroduodenal pathology Tekst. / M.J. Buckley [et al.] // Eur-J-Gastroenterol-Hepatol. -1998. -May. № 10(5). - P. 375-379.

135. Cainzos, M. Septic complications after biliary tract stone surgery: a review and report of the European prospective study Tekst. / M. Cainzos [et al.] // Hepatogastroenterol. 1997. - Vol. 44, №16. - P. 959-967.

136. Caygill, C.P. Cancer mortality in chronic typhoid and paratyphoid carriers Tekst. / C.P. Caygill [et al.] // Lancet. 1994. - №8. - P. 83-84.

137. Chan, F.K. Aeromonas infection in acute suppurative cholangitis: review of 30 cases Tekst. / F.K. Chan [et al.] // J. Infect. 2000. - Vol. 40, № 1. -P. 69-73.

138. Chandy, G. An analysis of the relationship between bile duct stones and periampullary duodenal diverticula Tekst. / G. Chandy [et al.] // J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. - Vol. 12, №1. - P. 29-33.

139. Chang, W.T. Bacteriology and antimicrobial susceptibility in biliary tract disease: an audit of 10-year's experience Tekst. / W.T. Chang [et al.] // Kaohsiung J. Med Sci. 2002.- May. - Vol. 18, №5. - P. 221-228.

140. Claesson, B. Biliary microflora in acute cholecystitis and the clinical implications Tekst. /В. Claesson, D. Holmlund, T. Matzsch // Acta Chir. Scand. -1984. Vol. 150(3). - P. 229-237.

141. Claesson, B.E. Microflora of the gallbladder related to duration of acute cholecystitis Tekst. /В.Е. Claesson, D.E. Holmlund // Surg Gynecol Obstet. 1986.-Vol. 162(6).-P. 531-535.

142. Cruz, N. Bacterial translocation across enterocytes: results of a study of bacterial-enterocyte interactions utilizing Caco-2 cells Tekst. / N. Cruz [et al.] Shock. 1994. - Jan. - Vol. 1(1). - P. 67-72.

143. De Baere, T. Isolations of leclercia adecarboxylata from a patient with a chronically inflamed gallbladder and from a patient with sepsis without focus Tekst. / T. De Baere [et al.] // J. Clin. Microbiol. 2001. -Vol. 39, № 4. -P. 1674-1675.

144. De Jesus, M.C. Acid and bile-salt stress of enteropathogenic Escherichia coli enhances adhesion to epithelial cells and alters glicolipid receptor binding specificity Tekst. / M.C. De Jesus [et al.] // J Infect Dis. 2005. - Vol. 192(8).-P. 1430-1440.

145. De Souza, L. Bacterial translocation in acute pancreatitis. Experimental study in rats Tekst. / L. De Souza [et al.] // Rev. Hosp. Clin. Fac. Med. San Paulo. 1996. - Jul.-Aug. - Vol. 51(4) - P. 116-120.

146. Deitch, E.A. Bacterial translocation: the influence of dietary variables Tekst. / E.A. Deitch // J.Gut., 1994. - Jan., - Vol. 35(1 Suppl). - P. 23-27.

147. Diebel, L.N. Gallbladder and biliary tract candidiasis Tekst. / L.N. Diebel [et al.] // Surgery -1996. Vol. 120, №4. - P. 760-764.

148. Dong, Ki Lee. Bacterial DNA in mixed cholesterol gallstones Tekst. / Ki Lee. Dong [et al.] // American Journal of Gastroenterology. 1999. — Vol. 94, N12.-P. 3502-3506.

149. Donlan, R.M. Tekst. / R.M. Donlan // Emerg. Infect. Dis. -2002. -Vol. 8 (9)-P. 881 -890.

150. Donlan, R.M.,Costerton J.W. Tekst. / R.M. Donlan, J.W. Costerton // Clin. Microbiol. Rev. -2002. -№ 15. -P. 167- 193.

151. Dooley, C.P. The clinical significance of Campylobacter pylori Tekst. / C.P. Dooley, H.C. Cohen // Ann. intern. Med. 1988 - Vol.108 (1). ~ P. 70-79.

152. Drasar, B.S. The bacterial flora of the stomach. Campylobacter pylori and gastroduodenal disease Tekst. / B.S. Drasar, B.J. Rathbone, R.V. Heatley // Gasrtoenterol. Oxford London. 1990. - P. 5-10.

153. Drisko, J.A. Probiotics in health maintenance and disease prevention Tekst. / J.A. Drisko [et al.] // Altera. Med. Rev.-2003.-№ 8(2).-P. 143-155.

154. Eida, T. Tekst. / T. Eida, Ch. Chidaka // Jap.Fudo Saiensu. 1988 -V.27.-P. 56.

155. Erbil, Y. The effect of intestinal transit time on bacterial translocation Tekst. / Y. Erbil [et al.] // Acta Chir. Belg. 1998. - Dec. - Vol. 98(6). - P. 245249.

156. Fallone, C. A. Helicobacter DNA in bile: Correlation with hepatobiliary disease Tekst. / C.A. Fallone [et al.] //Aliment. Pharmacol. Ther. -2003.-№ 17.-P. 453-458.

157. Farell, R.J. Microbial factors in inflammatory bowel desease Tekst. / R.J. Farell, J.T. LaMont // Gastroenterol. Clin. North. Am. 2002. - № 31(1). - P. 41-62.

158. Farinon, AM. Multivariative analysis for predicting the presence of bacteria in the bile in patients with acute cholecystitis Tekst. / A.M. Farinon [et al.] //Europ. J. Surg. 1993. - Vol. 159, № 10. - P. 531-534.

159. Farthing, M. J. G. Bacterial overgrowth of the small intestine Tekst. / MJ.G. Farthing // Gasrtoenterol. New York. - 1993. - Vol. 2. - P. 45.

160. Fedorak, R.N. Probiotics and the management of inflammatory bowel disease Tekst. / R.N. Fedorak, K.L. Madsen // Inflamm. Bowel. Dis. 2004. - № 10(3).-P. 286-299.

161. Franclin, M. Steadies of natural gastric flora: survival of bacteria in fasting human subjects Tekst. / M. Franclin // Can. med. assoc. J. — 1971. — Vol. 105 (8).-P. 380-386.

162. Fukushima, R. The primary site of bacterial translocation Tekst. / R. Fukushima, L. Gianotti, J.M. Alexander // Arch. Surg. — 1994. — Jan. — Vol. 129(1).-P. 53-58.

163. Garcia-Urkia, N. Beneficial effects of Bifidobacterium lactis in the prevention of bacterial translocation in experimental short bowel syndrome Tekst. / N. Garcia-Urkia [et al.] // Cir. Pediatr. 2002. - № 15(4). - P. 162-165.

164. Gill, H.S. Probiotics and human health: a clinical perspective Tekst. /H.S. Gill, F. Guarner // Postgrad. Med. J. 2004. - № 80(947). - P. 516-526.

165. Grotz, M.R. Intestinal cytokine response after gut ischemia: role of gut barrier failure Tekst. / M.R. Grotz [et al.] // Ann. Surg. 1999. - Apr. - Vol. 229(4).-P. 478-486.

166. Hanau, L.H. Acute (ascending) cholangitis Tekst. / L.H. Hanau, N.H. Steigbigel // Infect. Dis. Clin. North. Amer. 2000. - Vol. 14, №3. - P. 521546.

167. Hancke, E. Experimental gallstone formation. Etiological significance of beta -glucuronidase producing bacteria and biliary obstruction Tekst. / E. Hancke, G. Marklein // Langenbeck's Archives of Surgery. 1983. - Vol. 359, N 4.-P. 257-264.

168. Hao, W.L. Microflora of the gastrointestinal tract: a review. Tekst. / W.L. Hao, Y.K. Lee // Methods Mol Biol. 2004. - № 268. - P. 491-502.

169. Harada, K. Frequent molecular indication of Campylobacter but not Helicobacter genus in biliary epithelium in hepatolithiasis Tekst. / K. Harada [et al.] // J. Pathol. 2001, - Vol. 193, №2. - P. 218-223.

170. Hentges, D.J. Intestinal microflora in Health and Disease Tekst. /

171. D.J. Hentges // Gasrtoenterol. New York. - 1983. - Vol. 2. - P.66-69.

172. Hill, M.G. Microbial Metabolism in the Digestive Tract Tekst. / M.G. Hill // Gasrtoenterol. New York. - 1983. - Vol. 4. - P. 42-45.

173. Hill, M.J. Normal and pathological microbial flora of the upper gastrointestinal tract Tekst. / M.J. Hill // Scand. J. Gastroenterol. 1985. - 20 (Suppl. III). — P.l-5.

174. Husebye, E. The pathogenesis of gastrointestinal bacterial overgrowth Tekst. / E. Husebye // Chemotherapy. 2005. - Vol. 51(10). - P.22.

175. Isolauri, E. Probiotics in the management of atopic eczema Tekst. /

176. E. Isolauri et al. // Clin. Exp. Allergy. 2000. - № 30. - P. 1605-1610.

177. Kaneko, K. Bile infection contributes to intrahepatic calculi formation after excision of choledochal cysts Tekst. / K. Kaneko, H. Ando, T. Seo // Pediatr Surg Int. 2005. - Vol. 21(1). - P. 8-11.

178. Kawai, Manabu. Gram-positive cocci are associated with the formation of completely pure cholesterol stones Tekst. / Manabu Kawai [et al.] // American Journal of Gastroenterology. 2002. - Vol. 97 N 1. - P. 83 - 88.

179. Kirchgatterer, A. Natural therapy instead of chemistry? Probiotics in gastroenterology Tekst. / A. Kirchgatterer, P. Knoflach //Acta Med. Austriaca. — 2004.-№31(1).-P. 13-17.

180. Knoke, M. Mikroflora des oberen gastrointestinal traktes bei und Kranken Tekst. / M. Knoke, H. Bernhardt // Wiss. L.E.M. Arndt. Univ. Greifs wold. Med. R. 1976. - Vol.25 (4). - P. 231 -234.

181. Korner, P.J. The isofatior Plesiomonas shigelloides in polymicrobial septicaemia origi ing from the biliary tree Tekst. / P.J. Korner, A.P. MacGowan, B. Warner // Int. J. Med. Microbiol. Virol Para; Infect. Dis. -1992. Vol. 277, № 3.-P. 334-339.

182. Krisk, E. Microorganisms of the gastric antrum in Helicobacter pylori infection Tekst. / E. Krisk [et al.] // Microecol. Therapy. -1995. Vol. 25. - P. 225-228.

183. Kruis, W. Antibiotics and probiotics in inflammatory bowel disease Tekst. / W. Kruis // Aliment. Pharmacol. Ther. 2004. - № 20. - Suppl. 4. - P. 75-78.

184. Lee, A. Campylobacter pylori in Health and disease: An Ecological Perspective Tekst. / A. Lee, S.L. Hallel [et al.] // Microbial Ecology Health and Disease.-1988. -Vol.l.-№ l.-P. 176-179.

185. Lemaire, L.C. Bacterial translocation in multiple organ failure: cause or epiphenomenon still unproven Tekst. / L.C. Lemaire [et al.] // Br. J. Surg. -1997. Oct.- Vol. 84.(10). - P. 1340-1350.

186. Leung, J.W. Bacteriologic analyse bile and brown pigment stones in patients with acute cholctis Tekst. / J.W. Leung [et al.] // Gastrointest. Endosc -2001. Vol. 54.(7). -P.340-345.

187. Leung, J.W. Expression of bacterial beta-glucuronidase in human bile: an in vitro study Tekst. / J.W. Leung [et al.] // Ibid. 2001. - Vol. 54, №3. -P. 346-350.

188. Linhares, M.M. Study of prerative risk factors for bactibilia in patients with calculosis cholecystitis Tekst. / M.M. Linhares [et al.] // Rev. Assoc. Med. Bras. — 2001. — Vol. №1. — P. 70-77.

189. Ljungh, A. The role of microorganisms in biliary tract disease Tekst. / A.Ljungh, T. Wadstrom // Curr Gastroenterol Rep. 2002. - Apr. - Vol. 4(2) -P. 167-71.

190. Loffeld, R.L.F. Fundal colonization of gastric ulcers Tekst. / R.L.F. Loffeld [et al.] // Am. J. Gastroenterol. 1988. - Vol. 83.(7) - P. 730-733.

191. Madan, E. Campylobacter pylori. Evaluation of staining methods for identifying Campylobacter pylori Tekst. / E. Madan, J. Kemp, T. Westblum // Amer. J. clin.pathol. 1988. - Vol. 90 (4). - P. 450-453.

192. Maejima, K. Bacterial translocation from the gastrointestinal tracts of rats receiving thermal injury Tekst. / K. Maejima, E.A. Deitch, R.D. Berg // Infect. Immun. -1984. Jan., - Vol. 43(1). - P.6-10.

193. Marteau, P. Survival of I acid bacteria in a dynamic model of the stomach and intestine: validation and the effects of bile Tekst. / P. Marteau [et al.] // J. Dairy. S. 1997. - Vol. 80. - № 6. - P. 1031-1037.

194. Marteoli, P. Survival of lactic acid bacteria in a dynamic model of the stomach and small intestine: validation and the effects of bile Tekst. / P. Marteoli [et al.] //J. Dairy Sci.-1997.-Vol. 45-№6.-P. 1031-1037.

195. Meyer, B. Helicobacter pylori infection in healthy people: a dynamic process Tekst. / B. Meyer [et al.] // Gut. 1991. - Apr. - Vol. 32. - № 4. - P. 347-350.

196. Minter, R.M. Altered Kupffer cell function in biliary obstruction Tekst. / R.M. Minter [et al.] // Surgery. 2005. - Vol. 138(2). - P. 236 - 245.

197. Mukaiya, M. Isolated bacteria and susceptibilities to antimicrobial agents in biliary infections Tekst. / M. Mukaiya [et al.] //. Hepatogastroenterology. 2005. - May-Jun. - Vol.52(63).- P. 686-90.

198. Muny, P. Ed. Manuel of clinical microbiology Tekst. / P.Ed. Murry [et al.] // Wash. Amer. Soc. Microbiol. 1999. - №7. - P. 1778.

199. Ohdan, H. Bacteriological investigation of bile in patients with cholelithiasis Tekst. / H. Ohdan [et al.] //. Surg. Today. 1993. - №23. - P.390-395.

200. Ohta, T. Proliferative bile duct epithelium after bacterial infection in dogs Tekst. / T. Ohta [et al.] // Sea Gastroenterol. 1992. -Vol. 27. - № 10. - P. 845-851.

201. Osnes, T. Beta-glucuronidase in common duct bile, methodological aspects, variations of pH optima and relation to gallstones Tekst. / T. Osnes [et al.] // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1997. - Vol. 57, № 4. - P. 307-315.

202. O'Toole, G.A. Tekst. / G.A. O'Toole [et al.] // Annu. Rev. Microbiol. -2000.-№54.-P. 49-79.

203. Panek, M. Adherence of bileisolated bacteria to the bile ducts mucosa as a pathogenic factor in the development of inflammatory lesions Tekst. / M. Panek [et al.] // Med. Sci. Monit. 2000. - Vol. 6, N 2. - P. 291 - 299.

204. Petakovic, G. Bacteriologic examination of gallbladder contents Tekst. / G. Petakovic, M. Korica, S. Gavrilovic // Med. Pregl. 2002. -May-Jun. - Vol. 55(5-6). - P. 225-228.

205. Pimentel, M. Eradication of small intestinal bacterial overgrowth reduces symptoms of irritable bowel syndrome Tekst. / M. Pimentel, E.J. Chow, H.C. Lin // Am. J. Gastroenterol. 2000. - № 95(12). - P. 3503-3506.

206. Reid, G. The scientific bases for probiotic stains of Lactobacillus Tekst. / G. Reid // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - № 65. - P. 3763- 3766.

207. Ridlon, J. M. Bile salt biotransformation by human intestinal bacteria Tekst. / J.M. Ridlon, D.J. Kang, P.B. Hylemon // J. Lipd. Res. 2006. - Vol. 47(2).-P. 241-59.

208. Sakurai, S. Bacterial adherence to human gallbladder epithelium Tekst. / S. Sakurai [et al.] // Surgery Today. 1992. - Vol. 22, N 6. - P. 504 -507.

209. Sandstad, O. Structure and comp' of common bile duct stones in relation to duodenal divei gastric resection, cholecystectomy and infectic Digestion Tekst. / O. Sandstad [et al.] // Gasrtoenterol. New York. 2000. -Vol. 61, №3.-P. 181-188.

210. Sartor, R.B. Hepatic injury and biliary tract diseases associated with small intestinal bacterial overgrowth Tekst. / R.B. Sartor, S.N. Lichtman // Proceeding of the Falk Symposium 100. Kluwer Academic Publishers. -1998. P. 241-250.

211. Savage, D.C. Interactions between the host and its microbes Tekst. / D.C. Savage // Microbial Ecology of the Gut (Clark RT J, Bishop T eds.), Academic Press, San Diego. 1977. -P. 277-310.

212. Schirmer, B.D. Cholelithiasis and cholecystitis Tekst. / B.D. Schirmer, K.L. Winters, R.F. Edlich // J. Long Term EffMed Implants. 2005. -Vol. 15(3).-P. 329-338.

213. Schlech, W.F. An animal model of foodborne Listeria monocytogenes virulence: effect of alterations in local and systemic immunity on invasive infection Tekst. / W.F. Schlech // Clin. Invest. Med. 1993. - Vol. 16, №3. - P. 219-225.

214. Sheen-Chen, S. Bacteriology and antimicrobial choice in hepatolithiasis Tekst. / S. Sheen-Chen [et al.] // Amer. J. Infect. Control. -2000. Vol. 28, №4. - P. 298-301.

215. Shepherd, R. Chitosan functional properties Tekst. / R. Shepherd, S. Render, A. Falshaw // Glycoconj J. 1997. - Vol. 14 (4) - P. 535-542.

216. Shinagawa, N. Infection in patients with malignant disease Tekst. / N. Shinagawa // Nippon. Rinsho. 1994. - Vol. 52, № 2. - P. 415-421.

217. Shoda, J. Alterations of bile acid composition in gallstones, bile and life of patients with hepatilithiasis, and their etiological significance Tekst. / J. Shoda [et al J //Dig. Dis. Sci.-1993.-Vol. 38, №11.-P. 2130-2141.

218. Silva, C.P. Association of the presence of Helicobacter in gallbladder tissue with cholelithiasis and cholecystitis. Tekst. / C.P. Silva [et al.] J. Clin. Microbiol. -2003. Dec. - Vol.41(12). - P. 5615-5618.

219. Slocum, M.M. Absence of intestinal bile promotes bacterial translocation Tekst. / M.M. Slocum, R.D. Sittig, E.A. Deitch // Ann. Surg. -1992. May. - Vol.58(5). - P. 305-310.

220. Steffen, E.K. Relationship between cecal population levels of indigenous bacteria and translocation to the mesenteric lymph nodes Tekst. / E.K. Steffen, R.D. Berg // Infect. Immun. 1983. - Mar. - Vol.39(3). - P. 1252-1259.

221. Stewart, L. Spectrum of gallstone disease in the veterans population Tekst. / L. Stewart, J.M. Griffiss, L.W. Way // J. Surg. 2005. - Vol. 190(5). - P. 746-751.

222. Stewart, L. Pigment gallstone pathogenesis: slime production bybiliary bacteria is more important than beta-glucuronidase production Tekst. / L. Stewart [et al.] // J. Gastrointest. Surg. 2000. - Vol. 4, № 5. -P. 547-553.

223. Sung, J.Y. Defense system in the biliary tract against bacterial infection Tekst. / J.Y. Sung, J.W. Costerton // Digestive Diseases and Sciences. — 1992. Vol. 37, N 5. - P. 689-696.

224. Sung, J.Y. Ascending infection of the biliary tract after surgical sphincterotomy and biliary stenting Tekst. / J.Y. Sung [et al.] // J. Gastroenterol Hepatol. 1992. - Vol. 7, № 3. - P. 240-245.

225. Tannock, G.W. Molecular assessment of intestinal microflora Tekst. /G.W. Tannock//J. Clin.Nutr.-2001.-Vol.73.-P. 410-414.

226. Tejero, A. Bacteriological study of bile from the gallbladder and bile ducts of patients surgically treated for biliary pathology Tekst. / A. Tejero [et al.] Enferm Infecc Microbiol Clin. 1990. -Nov.- Vol. 8(9) - P. 565-567.

227. Tsai, G.J. Antimicrobial activity of shrimp chitin and chitosan from different treatments Tekst. / G.J. Tsai [et al.] // Fisheries Science. 2002. —V.68. -P. 170-177.

228. Tseng, L.J. Palliative percutaneous transhepatic gallbladder drainage of gallbladder empyema before laparoscopic cholecystectomy Tekst. / L.J. Tseng [et al.] // Hepatogastroenterology. 2000. - Vol. 47, N 34. - P. 932 - 936.

229. Vitetta, L. Single and multiple cholesterol gall stones and the influence of bacteria Tekst. / L. Vitetta, S.P. Best, A. Sali // Med. Hypotheses. -2000. Vol. 55, №6. - P. 502-506.

230. Wan-Steenbergen, W. Percutaneous transhepatic cholecystostomy for acute complicated calculous cholecystitis in elderly patients Tekst. / W. Wan-Steenbergen [et al.] // J. Amer. Geriatr. Surg. 1993- Vol. 41, № 2. -P. 157-162.

231. Wells, C.L. Relationship between intestinal microecology and the translocation of intestinal bacteria Tekst. / C.L. Wells // Antonie Van Leeuwenhoek. 1990. - Aug. - Vol. 58(2) - P. 87-93.

232. White, J. S. Patterns of bacterial translocation in experimental biliary obstruction Tekst. / J.S. White [et al.] // J. Hepato-biliary-pancreatic Surgery. -2001. Vol.8 (Supp 1). -P. 46-47.

233. Whyte, W. The relative importance of routes and sources of wound contamination during general surgery. 1. Nonairborne Tekst. / W. Whyte [et al.] // J. Hosp. Infect. 1991. - Vol. 18, №2. -P. 93-107.

Информация о работе

Михайлова, Елена Сергеевна
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.07

Диссертация

Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы