Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиоценоз различных биотопов кишечника при интоксикации суми-альфа

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиоценоз различных биотопов кишечника при интоксикации суми-альфа"

УДК 616.423:616-036.882 На правах рукописи

РР5И)Д

ГАТАУОВА МАДИНА РАФХАТОВНА

МИКРОБИОЦЕНОЗ РАЗЛИЧНЫХ БИОТОПОВ КИШЕЧНИКА ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ СУМИ-АЛЬФА 03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН АСТАНА

2000

Работа выполнена в Акмолинской государственной медицинской академии.

Научный руководитель Научный консультант

- доктор медицинских наук, профессор Алмагамбетов К.Х.

- доктор химических наук, профессор Сейтембетов Т.С.

Официальные оппоненты

■ доктор медицинских наук, профессор СнопковаВ.А.

-кандидат медицинских наук, доцент Уразалин М.М.

Ведущая организация

Научный Центр гигиены и эпидемиологии РК

Защита состоится декабря 2000 г. в 10.00 часов на заседай диссертационного совета ОД 09.06.02 при Акмолинской государственнс медицинской академии по адресу: 473000 г. Астана, ул. Сары Арка, 95.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Акмолинске государственной медицинской академии по адресу: 473000 г. Астана, ул. Сар Арка, 95.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор

2000 г.

Мухамбетов Д.Д.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ уальность проблемы

3 связи с нарастающей проблемой нарушающегося экологического ювесия, обусловленного техногенными, экономическими и социальными горами неуклонно ухудшаются показатели состояния здоровья населения, ювой список значимых антропогенных загрязнителей среды состоит из 19 ленований, который включает и пестициды. По данным ВОЗ ежегодно в е происходит до 500 тысяч отравлений ядохимикатами. Продукты питания ;дко содержат в 3-4 раза предельно допустимые концентрации химикатов, нитратов. По данным Н.Ю. Караевой (1988); ,Нарзиева(1995), С.К.Бисимбаевой (1998) показано изменение тогических свойств микроорганизмов под воздействием пестицидов. Трименяемые для обработки полей удобрения, пестициды и другие, [огически вредные соединения, порой хранятся с нарушением санитарных шл, загрязняют воздух, воду и почву (Н.И. Ананьев 1994; Л.Г. Додина 1998; Хамитова, P.M. Шиганов 1999).

Гак, по данным Шек Д.Б. (1987) , Г.Ч.Кунчаевой (2000) широкое ленение пестицидов дитиокарбаматной группы в рисоводстве и ухудшение цения привели за последние 10 лет к росту заболеваемости органов ;еварения, почти в 3 раза среди работающих в данных условиях людей. 1!толь же серьезную опасность для здоровья человека представляет гтроид суми-альфа, который получил распространение в сельском йстве Казахстана как средство борьбы с саранчовыми. 1ериментальными исследованиями К.Б.Манекеновой (1999) показаны морфологические изменения печени крыс, получавших данный пиретроид. э полагать, что нарушение дезинтоксикационной функции печени может гственно отразиться и на морфофункциональных показателях кишечника; более, что пиретроид поступает в организм перорально. 3 распространенности внутрибольничной инфекции, гнойно-[алительных процессов чрезвычайно актуальна проблема дисбактериоза. горы, приводящие к угнетению колонизационной резистентности низма с последующим нарушением микробиоценоза разнообразны. Количественные и качественные изменения тонкой и толстой кишки, в )стном и пристеночном биотопах имеют место при терминальных ояниях (К.Х.Алмагамбетов,1992; С.С Искаков,1997; Б.Д.Бекибаева,1998); фоне применения цитостатиков (В.М. Кемайкин,1999) и других :обиотиков, нерациональной антибиотикотерапии (В.Г.Гончарова,1989; ,Бевз,1990; А.Маянский, 2000).

Но в отношении пиретроида суми-альфа пока остается не изученным его влияние на микробную экологию, колонизационную резистентность организма. Развернутое микробиологическое исследование различных биотопов кишечника дало бы возможность более детально оценить состояние микробиоценоза при кратеовременной и длительной интоксикации пестицидом.

Не менее важно в оценке колонизационной резистентности знать, не обладает ли суми-альфа прооксидантным эффектом, каково его влияние на морфоструктуру слизистой кишечника.

Цель работы

Исследование влияния пиретроида суми-альфа на состояние микробиоценоза различных биотопов кишечника.

Задачи исследования

1 Изучить качественный и количественный состав микрофлоры толстой и тонкой кишки при кратковременной интоксикации различными дозами суми-альфа.

2 Изучить количественный и качественный состав микрофлоры различных биотопов кишечника при длительном воздействии пиретроида.

3 Оценить морфологические изменения слизистой оболочки тонкой и толстой кишки при воздействии пиретроидом суми-альфа.

4 Исследовать влияние суми-альфа на процессы свободнорадикальногс окисления in vitro и in vivo.

Научная новизна

Впервые в эксперименте на лабораторных животных исследовань особенности изменения микробиоценоза кишечника при кратковременно! (7суток) и длительной (60 суток) интоксикации суми-альфа.

При введении пиретроида в дозе 0,375 мг/кг уже на 3-7 сутки в содержимое толстой кишки достоверно уменьшается численность бифидо- i лактобактерий,: нарастает высеваемость и количество гемолитически: лактозонегативных ,со слабой активностью эшерихий, высевается S. aureus. Н< в слизистой кишечника популяционный уровень резидентной микрофлор! изменяется малозначительно. При повышении дозы пестицида такж прослеживается большая лабильность популяции бифидобактерий- они почт полностью исчезают в пристеночном слое толстой кишки:, условно-патогенны бактерии высеваются из кишечника через сутки после введения суми-альф; Независимо от дозы пиретроида наибольшая изменчивость удельного вес! высеваемости, характерны для стафйло- и энтерококков.

При длительной интоксикации суми-альфа показан нарастающий дефивд в дистальном и проксимальном отделах кишечника резидентной микрофлор! особенно бифидобактерий. В исследованных биотопах нарастает во времен

севаемость наряду с условно-патогенными энтеробактериями и грибов рода ndida. Элиминируется из тонкой кишки не только бифидо-, но и <тобактерии.

Показано, что одной из причин угнетения колонизационной резистентности, иведшей к нарушению кишечного микробиоценоза, явились гоморфологические изменения слизистой тонкой и толстой кишки, которые [ели дозозависимый характер. Альтеративные и деструктивные изменения в де десквамации и некроза слизистой оболочки были более характерны при здействии 3,75 и 7,5мг/кг. Воспалительные изменения, характеризовавшиеся геренным отеком стромы слизистой оболочки, признаками нарушения овообращения с преимущественно лимфоцитарно-плазмоцитарной [фильтрацией имели стабильный характер.

Установлено, что в основе морфологических изменений слизистой шечника лежит выраженное прооксидантное и цитотоксическое действие ми-альфа.

Эксперименты in vivo выявили резкое усиление хемилюминесценции могенатов печени, мозговой ткани в присутствии пиретроида.

In vitro выявлен умеренный антибактериальный эффект суми-альфа в ношении E.coli и S.aureus.

Практическая значимость результатов

Пиретроид суми-альфа, даже в минимальных концентрациях (0,375 мг/кг) ке на 3-7 сутки воздействия приводит к нарушению микробиоценоза шечника.

Поэтому с целью профилактики кишечного дисбиоза рекомендуется значение препаратов, восстанавливающих микробиоценоз, колонизационную ¡зистентность кишечника.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-следовательской работы Акмол -ГМА и является фрагментом программы У[икроэкология организма, разработка способов его коррекции итопрепаратами и эубиотиками № 0199 РК 00124».

Результаты диссертационного исследования используются при реподавании курса микробиологии.

Основные положения, выносимые на защиту

Интоксикация суми-альфа приводит к нарушению кишечного икробиоценоза в зависимости от дозы и длительности введения пиретроида:

- при кратковременной интоксикации, . в течение первых 7 суток исбиотические изменения проявляются достоверным уменьшением оличества и частоты высеваемости резидентной микрофлоры, особенно ифидобактерий на фоне обсеменения кишечника лактозонегативными нтеробактериями;

- при длительной интоксикации, на протяжении 60 суток дисбиотические нарушения значительно нарастают, резко уменьшается количество и высеваемость бифидо- и лактобактерий как в полости, так и в пристеночном биотопе кишечника на фоне увеличения лактозонегативных энтеробактерий и грибов рода Кандида и изменений удельного веса кокковой флоры;

- в основе дисбиотического действия суми-альфа лежит не прямое антибактериальное действие, а обусловленные ею патоморфологические изменения слизистой кишечника вследствие сильного прооксидантного и цитотоксического эффекта пиретроида.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на заседаниях кафедры микробиологии (1998-2000), итоговой научно-практической конференции Акмолинской медицинской академии (1999), на международной конференции «Medicinal Raw Material and Phytopreparations for Medicine and Agriculture -Karaganda -1999 « , на 4 съезде физиологов Казахстана « Физиологические основы здорового образа жизни» г. Астана-Караганда -1999, на заседании научного семинара по медико-биологическим специальностям Акмолинской государственной медицинской академии (2000).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, оформлено 1 рац.предложение (удостоверение на рационализаторское предложение № 399/99 от 20.12.99).

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на 94 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, Библиографический указатель литературы содержит 220 литературных источников, из них-48-иностранных. Диссертация документирована 28 таблицами и 20 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1 Общая характеристика материала

Работа выполнена на 288 нелинейных половозрелых крыс-самцах массо: 180-220 г. Все животные содержались на одинаковом пищевом рацион вивария. В связи с тем, что ежедневное внутрижелудочное введение зонд может травмировать слизистую оболочку и снижать таким образом чистот опыта, суми-альфа вводили натощак за 4 часа до кормления чере автоматический дозатор, снабженный металлическим наконечникоь

юрально в дозах 0,375 иг/кг; 3,75мг/кг и 7.5 мг/кг в течение 60 дней, сектицид суми-альфа представляет собой желто-коричневую маслянистую дкость со специфическим запахом. Выпускается в виде 5% концентрата /льсии. Для крыс среднелетальная оральная доза составляет 75 мг/кг.

Распределение животных по группам представлено в таблице 1. Таблица 1

Объект исследования

Группы Коли- Бактериоло Биохими Морфологи

сивотных чество -гическое ческое -ческое

животных исследова- исследова- исследова-

ние ние ние

Контроль 51 1 3

ая группа 1 2 3 4 1 3 5 6

потные, 75 + + + + + + + + + +

лучавшие

ретроид в зе 0,375

/кг

ивотны.по 76 + + + + + + + + + +

чавшие

ртероид в

зе

7 5 мг/кг

ивотные, 86 + + + + + + + + + +

лучавшие

[ртероид в 1зе 7,5мгкг

Всего 288 + + +

Примечание. 1-пристеночный слой тонкой кишки,2-содержимое тонкой шиш, 3- пристеночный слой с толстой кишки, 4-фекалии, 5-головной мозг, 6-:чень.

Количественное и качественное бактериологическое исследование )НКОЙ н толстой кишки

В стерильных условиях из брюшной полости умерщвленных декапитацией ивотных извлекали отрезки тонкой и толстой кишок с их содержимым.

Навески тканей и содержимое кишечника гомогенизировали в десятикратном объеме стерильного физиологического раствора. Для последующих разведений использовали 0,7% агар Дифко. Затем из разведений 10"3, 10'5, 10"7 (для содержимого толстой кишки при посеве на среду МРС-4 использовали разведение 10'9, высевали по 0,1 мл на элективные и плотные дифференциально-диагностические питательные среды

Применялись такие среды, как кровяной агар с полимиксином - 200 мг/мл для определения гемолитических свойств стафилококков; желточно-солевой агар для определения лецитиназной активности , среда Эндо и Плоскирева для выделения энтеробактерий; МРС-4 с сорбиновой кислотой, содержащейся в концентрации 0,4% -для лактобактерий; среда Сабуро - для дрожжеподобных грибов рода Candida, среда Блаурокка для определения бифидобактерий Лактобациллы инкубировали в течение 3-4 суток в атмосфере углекислого газа. Результаты посева на среду Сабуро оценивали на 5-6 сутки. Во всех остальных случаях оценку результатов проводили через сутки.

Видовую принадлежность энтеробактерий оценивали по общепринятым методикам (В.А.Покровский,1985). Лактобациллы наряду с микроскопией, проверяли на негативную реакцию с каталазой и отсутствие роста на МПА. Дрожжеподобные грибы рода Candida растут на специальной среде Сабуро, в виде несливающихся крупных кремово-белых гладких блестящих колоний выпуклой формы с ровными краями, имеют характерную морфологию при микроскопии, грамположительны (А.Л. Котова, A.B. Божко,1990).

Морфологическое исследование*

Для проведения морфологического исследования органов у экспериментальных животных извлекались двенадцатиперстная, тощая, подвздошная кишка и проксимальный отдел толстой кишки длиной 3 см. Фрагменты толстой и тонкой кишки разрезали в продольном направлении, промывали их в проточной воде и растягивали на плотной бумаге таким образом, чтобы слизистая оболочка была обращена кнаружи. Растянутые фрагменты кишки на бумаге фиксировали в 10 % растворе нейтрализованного мелом формалина.

Из фиксированных фрагментов кишки вырезали поперечные полоски шириной 0.3 см и длиной 1 см, обезвоживали их в спиртах восходящей концентрации, в смеси равных количеств хлороформа и парафина, в двух порциях чистого парафина в термостате при температуре 56° С и заливали i парафин с примесью пчелиного воска для изготовления парафиновых блоков которые насаживали на деревянные колодки. Из приготовленных такт« образом парафиновых блоков изготавливали микротомные срезы толщиной 710 микрон.

После депарафинизации и обезжиривания парафиновых срезов производили рашивание гематоксилин-эозином.

Микроскопию гистологических препаратов осуществляли на микроскопе 1иолам» с бинокулярной насадкой. Микрофотосъемку гистологических юпаратов производили на микроскопе «МБИ-15» при увеличении объективов 6, х40 и окуляра х10 на цветную пленку Кодак.

* Морфологическая часть работы выполнена совместно с д.м.н. Манекеновой К.Б.

Биохемилюмннесцентный метод оценки уровня перекисного сисления липидов

В термостатируемую кювету « Биостата» медицинского хемилюминометра <ЛМ 1Ц-01» при 25°С помещали 0.1 мл 10%-ного гомогената ткани ¡следуемых органов, разведенного в 2 мл фосфатного буфера ( рН 7,62) и при пенсивном перемешивании полученной смеси вводили с помощью гспенсера 1мл ЗшМ раствора РеБО^НгО для инициации ;милюминесценции.

Сразу после добавления РеБ04 х 7Н2О возникает быстрая вспышка ;милюминесценции (Ь), которая длится несколько секунд, длительность и тгенсивность этого параметра соответствует концентрации гидроперекисей шидов. Далее наступает латентный период (т), продолжительность которого шисит от соотношения про- и антиоксидантов. По длительности этого периода /дили об антиоксидантном фоне: чем больше- в исследуемой пробе различных ггиоксидантов, тем больше значение латентного периода.

По окончании латентного периода начинается фаза медленной вспышки (Н). Интенсивность этой вспышки нарастает постепенно, достигая своего аксимума, затем постепенно уменьшается до величины стационарного уровня вечения. Высота медленной вспышки отражает способность липидов к кислению, т.е. максимально возможную интенсивность перекисного кисления липидов, инициированного ионами двухвалентного железа.

Данные хемилюминограммы позволяют также определить скорость арастания медленного свечения. Этот показатель адекватно отражает tga, еличина которого прямо пропорциональна появлению стационарного свечения

Ч).

Результаты, полученные в работе, подвергали статистической обработке И.П.Ашмарин, А. А.,Воробьев, 1962) Нами определялись средняя рифметическая КОЕ, квадратичное отклонение средней, ошибка средней, оэффициент I по Стьюденту, уровень вероятности доверительного интервала

Результат считали достоверным, если вероятность ноль-гипотезы не [ревышала 0,05 (р<0,05).

Для малых величин с целью определения коэффициента t и уровн. вероятности доверительного интервала Р использовались непараметрически методы статистики ( Критерий Спирмена).

Корреляционный анализ получерных показателей проводился с помощьь коэффициента ранговой корреляции (р) и его ошибки (шр). Результат! сравниваются с табличными критериями (по Н.А.Плохинскому).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При оценке результатов использовали такие критерии как количественны состав в КОЕ lg/r, далее по их абсолютным величинам исчисляли удельный ве микроорганизмов в общем количестве микробов, т.е в сумме аэробов анаэробов в % и частоту встречаемости (%),(М.Э. Микельсаар ,1988).

Нами исследовалась как «полостная микрофлора», обитающая в просвет кишки крыс , так и «мукозная», связанная со слизистым слоем. Микрофлор пристеночного слоя - это звено наиболее интимного контакта в цеп взаимоотношений макроорганизма с кишечным биоценозом, наимене изученным в плане как микробного состава, так и процессов, определяющи связь микроорганизмов со слизистой.

Определение антибактериальной активности пиретроида суми-альф in vitro

Антибактериальную активность инсектицида суми-альфа определяли штаммам Е coli, S.aureus, Candida spp и Citrobacter spp.

В стерильные пробирки помещали 0,05мл 5% раствора суми-альфа концентрациях 0.375 мг/кг, 3.75 мг/кг, 7.5 мг/кг, туда же добавляли 0,05\ бактериальной взвеси, приготовленной из тест -культуры суточного рост выращенной в течение (21±3ч) при температуре (37°С). Суспензи микроорганизмов готовили в стерильном 0,85% растворе хлорида натрия (р 6.0± 0,05). Густота суспензии составляла до 10 единиц по отраслевол стандартному образцу для визуального определения мутности бактериальнь взвесей.

Рабочая взвесь готовилась из миллиардной взвеси микроорганизмов иутс добавления 0,1мл взвеси к (13 мл- для палочек, 9 мл- для кокков) 0,85% Na( Пробирки со смесью инкубировали в термостате при температуре 37° С течение 2 часов. Одновременно туда же помещали контрольную пробирк содержащую смесь из 0,05 мл растительного масла и 0,05мл бактериальн< взвеси тест-культуры.

По окончании инкубации содержимое пробирки высевали дифференциальные среды - Эндо, МПА, ЖСА и Сабуро. Для это бактериологической петлей диаметром 2 мм забирали 0.005мл смеси

носили на поверхность среды. Затем стерильным шпателем Дригальского :севали смесь по всей поверхности среды. Чашки с посевами культивировали термостате при t 37° С. Учет выросших колоний производили через 24 и 48 сов. Индекс бактерицидности рассчитывали по формуле ИБ=1-Но/, Нк, где Но-количество колоний, выросших в опыте,

Нк-количество колоний, выросших в контроле (среднеарифметическое ело колоний, выросших на 3 чашках с контрольным высевом), 1-константа перерасчета (таблица2). Таблица 2

Антибактериальные свойства суми-альфа in vitro

икроорга 0.375мг/кг 3.75мг/кг 7.5мг/кг Контроль

измы

E.coli 28,2+16.3 22,3±9,6 7.0±1.5 120±11,5

0,77 0,81 0,94

p<0, 01 p<0,01 p<0,001

S.aureus 43,3±3,3 10.3+0.8 8.3+ 0.5 376±53,6

0,9 0,97 0,99

p<0,01 p<0,01 p<0,01

Candida 61±15,9 10.7±4;8 5.7± 3.2 383±116,7

'Р 0,84 0,97 0,99

p<0,l p<0,05 p<0,05

Citrobac Сплошн. 766.6+82 176.7± 64,9 283,3±16,7 '

er spp рост -1,7 0,4

p<0,01 p<0,2

Примечание. В числителе - число выживших клеток, в знаменателе—индекс актерицидности.

Анализируя полученные данные мы отмечаем наибольшее подавление роста икроорганизмов при воздействии в дозе 7,5мг/кг с высокой степенью остоверности, с вероятностью 95%.

У выживших бактериальных клеток, особенно S.aureus , изменились тдельные биологические свойства: существенно затормаживалось умножение бактерий - на 3-4сутки, микробы теряли способность ферментировать маннит, но сохраняли при этом гемолитические свойства. , Количество выживших E.coli практически не отличалось в дозах 3,75мг/кг и ),375мг/кг, но в 3-4раза меньше, чем в контроле.

Неожиданный результат мы получили в отношении Citrobacter spp. С увеличением разведения обнаруживалось усиление пролиферации этих микроорганизмов.

Таким образом, выявлен определенный антимикробный эффект суми-альфа , установлена прямая зависимость выживших микроорганизмов от введенной дозы.

Подавление роста микроорганизмов in vitro .связано по-видимому с прооксидантными и цитотоксическими свойствами суми-альфа,

Микробиоценоз кишечника экспериментальных животных при кратковременном воздействии суми-альфа в различных дозах

При воздействии пиретроида в возрастающих дозах (0,375 мг/кг, 3,75мг/кг и 7,5мг/кг) имеет место нарастающее изменение количественного и качественного состава микрофлоры кишечника

Так, оказалось, что при воздействии в дозе 0,375 мг/кг наблюдается снижение численности лактобактерий и бифидобактерий к 7 суткам. Наиболее изменчивыми оказались такие микроорганизмы, как лактобактерии, стафилококки, энтерококки (таблицаЗ).

Таблица 3

Изменчивость некоторых микроорганизмов в различных биотопах кишечника при воздействии суми-альфа в дозе 0,375 мг/кг (Nx)

Микроорганизмы Содержи мое тонкой кишки Пристеночн ый слой тонкой кишки Фекалии Пристеночный слой толстой кишки

Бифидо-бактерии -0,32 0,27 -0,07 0,03

Лактобактерии -0,03 0,97 -0,16 0,94

Энтеро-бактерии 0,08 -0,03 0,2 -0,06

Стафилококки 1,2 0,53 0,08 0,27

Энтерококки 0,57 1,23 0 0,18

Примечание. Ых =п1/п2-1, где п1-популяционный уровень бактерий в опытной группе, п2-популяционный уровень в интактной группе. Чем больше отклонение показателя от"0" как в сторону увеличения,так и снижения(-), тем больше изменения популяционных уровней в данном биотопе.

В тонкокишечном биотопе возрастает численность кишечной палочки со сниженной ферментативной и гемолитической активностью .

При воздействии пиретроида в дозе 3,75мг/кг стабильно сохраняются показатели резидентной микрофлоры в фекалиях, но зато пристеночная зона реагирует более активно на введение суми-альфа- из стенки толстой кишки элиминируются к 7 суткам бифидобактерии, более устойчивыми оказались лактобактерии. При введении максимальной концентрации 7,5мг/кг уже в первые сутки наблюдается угнетение индигенной микрофлоры, в большей степени лактобацилл в толстокишечном биотопе, с 8.8 ±0,2 1§ КОЕ/г до 3.7±0,7 1§ КОЕ/г и контаминация тонкокишечного биотопа условно-патогенной микрофлорой (таблицы 4,5) Таблица 4

Количественный (КОЕ /г) и качественный (%) состав микрофлоры фекалий

Микрофлора 1сутки 3сутки 7 сутки

Bifidobacteri um spp 8.5±1.9 90,9+7,9 7,02±0,5 69,2± 11,9 6.0710.2 66,0+13,1

Lactobacte-. rium spp 8,810,2 100,0 7,2+0,4* 91,7±7,96 3,7±0,7 50,0115

E.coli lac+ 5.34+0,02 100 4,1810,2* 50,0±12,9 4дЗ±0,8 33,3112,2гем

E.coli lac- 0 0 3,9±0,9гем 16,611,6

S.epidermi-dis 5,2±0,1 40,0+5,3 5,8+0,4 60,0±10,5 5,2+0,1 75,0+12,9

S.aureus 0 0 3,9±0,8 16,619,6

i.faccalis 6.07+0.3 5,25±0,4 4,210.6

48,8±12,9 66,6±12,2 66,6112,2

Candida spp 0 0 3.1 +1.1 16,619,6

ШЭБ 5,95+1,5 33.3±12.9 6.811.6 66.6110.5 6.611.7 66.6+12.2

римечание. В числителе - количественный состав микрофлоры в 'ОЕ/г, в знаменателе - частота высеваемости -в %. *Р<0,02

Таблица 5

Частота встречаемости условно-патогенных микроорганизмов в фекалиях и __пристеночном слое тонкой кишки (%)_

Дни Е.соИ 1ас- Сй-о- К1еЬз1е11а РкЛеиэ НГОБ Е.Ьа£-

обследова Ьайег Брр ЙРР ша

ния

1 0/0 20,0/0 0 33,3/0 0 0/0

3 0/0 0/16,6 0 0/0 0/25,0 0/33,3

7 16,6/16,6 16,6/33,3 16,6/25,0 0/16,6 33,3/67 0/33,3

Примечание. В числителе-частота высеваемости (%) в фекалиях, в знаменателе-частота высеваемости (%) в пристеночном слое тонкой кишки. НГОБ - неферментирующие грамотрицательные бактерии.

Микробиоценоз кишечника экспериментальных животных при длительном воздействии суми-альфа в различных дозах При длительном воздействии 0.375 мг/кг количество бифидо- и лактобацилл снижается до ^ 5.1±0.9 и постепенно к концу эксперимента их уровень в толстой кишке составил: лактобацилл- ^ 5Д±1,4, а у бифидобактерий - 3,1 ±0,7. В пристеночном слое толстой кишки мы наблюдаем дефицит в большей степени лактобацилл уже на 14-е сутки (таблица 6). Таблица 6 ■

Количественный состав микрофлоры фекалий при длительном воздействии пиретроида суми-альфа в дозе 0,375 мг/кг

Микрофло ра 14 сутки 20сутки 40 сутки 60 сутки контроль

В1МоЬасге пит Брр 5,11±0,9 р <0,01 5,1±0,3 3,9±0,9 р< 0,01 ЗД±0,7 р< 0,01 9,83+0,4

ЬаЛоЬайе пит Брр 6,8±0,6 р< 0,01 6,6±0,3 р< 0,01 6,3±0,09 р< 0,01 5,1±1,4 8,88±0,3

Е.соИ 1ас+ 5,06±1,2 5,11±1,3 5,15±1,3 5,35±0,6 6,33±0,6

Е.соН 1ас- 5,74±1,8 5,45±1,1 5,52±1,1 5,34±0,8 5,23±0,6

8.ер1с1егт. 4,96±0,4 4,91±0,6 4,1±0,5 5,8±1,63 5,01±0,4

Б.аигеш 3,6±1,2 3,9±1,8 4,9+1,6 4,5±1,6 3,01±0,6

Б^аесаНБ 7,35+0,7 7,96±0,3 5,3+0,1 р< 0,01 5,7±0,8 6,8±0,4

Candida Брр 3,5±0,7 4,0±1,2 6,1 ±0,8 7,5±1,2 3,5±1,1

УПЭБ 3,43+1,1 3,5+1,8 5,24±1,6 5,27±0,4 3,1±1,5

оздействие дозы 3.75 мг/кг.

При воздействии субтоксической дозы изменения носят следующий ip актер. К 20 суткам бифидобактерии полностью элиминируются из адержимого толстой кишки, но лактобациллы выделяются до конца ссперимента из толстой кишки, причем сохраняется достаточно высокий цельный вес этих микроорганизмов. Оказалось, что более устойчивыми в шном случае к воздействию препарата явились эти микроорганизмы. В янамике снижается количество стафилококков, а на 14-е сутки имеет место эатковременное появление в пределах 6.3 lg патогенных стафилококков.

В тонкой кишке появляются дрожжеподобные грибы рода Кандида с лсокой частотой высеваемости, где пик наибольшей встречаемости удельного гса по сравнению с другими микроорганизмами приходится на конец ссперимента, несмотря на невысокие показатели. (Рисунок 1,2).

Условно-патогенные бактерии имеют тенденцию к увеличению ясленности, причем микроорганизмы выделены как в монокультуре, так и в ;социации.

Так, на 14-е сутки - Citrobacter spp- в 33%., на 20-е сутки- в ассоциации-itrobacter spp и Е. Aerogenes, на 40-60-е сутки- чаще энтеробактерии рода roteus spp и Citrobacter spp.

Рисунок 1

Удельный вес (%) дрожжеподобных грибов рода Кандида в содержимом тонкой кишки и в фекалиях

Рисунок 2

контроль

В фекалии ■ содержимое тонкой кишки!

Количество дрожжеподобных грибов рода Кандида в содержимом тонкой кишки и в фекалиях (КОЕ/г)

Снижение колонизационной резистентности слизистой тонкой кишки-здесь проявилось сдвигом микробного биоценоза в сторону увеличения остаточной флоры и снижения облигатной анаэробной и аэробной флоры (таблица 7). Таблица 7

Количественный состав микрофлоры фекалий при длительном воздействии пиретроида суми-альфа в дозе 3,75мг/кг (КОЕ/г)

Микрофло ра 14 сутки 20сутки 40 сутки 60 сутки

ЬМАёоЬайе пит 7,5+0,3 р<0,01 5,08±0,2 0 0

ЬайоЬайе пит 5,1 ±0,4 3,5±0,1 р< 002 3,2±0,3 р< 0,02 3,1+0,3

Е.соП 1ас+ 0 4,98±0,3 4,92±0,5 0

Е.соП 1ас- 4,69+1,1 5,48±1,3 4,92+0,8 6,75±0,3 р<0,01

8.ер1с1егт. 4,33±0,6 4,09±0,3 5,75±0,4 5,04±0,3

Б.аигеш 6,3±0,7 0 3,8+0,1 р<0,01 0

Candida 5,3±0,4р< 0,02 5,52±0,3 * р<0,01 6,55±0,7 5,5±0,3 р<0,01

УПЭБ 3,48±0,4 3,48+0,4 5,06±0,5р0,01 5,1±0,4

Микробиоценоз кишечника при воздействии в дозе 7.5 иг/кг Наиболее подвержеными воздействию пиретроида оказались представители >блигатной флоры-бифидобактерии и лактозоположительная кишечная галочка- они достаточно быстро по сравнению с другими микроорганизмами юкинул содержимое толстой кишки, и как оказалось, если на 14-е сутки мы :ще выделяли бифидобактерии, то в эти же сроки кишечная палочка уже не [ысевалась. Также отмечается дефицит фекальных стрептококков, несмотря на 1ариабельные значения качественного состава. Удельный вес составляет 20.8%-[ максимальных значений достигает к 40-суткам-32.4% (Таблица 8)

Таблица 8

Количественный состав микрофлоры фекалий при длительном воздействии пиретроида суми-альфа в дозе 7,5мг/кг (КОЕ/г)

1икрофло а 14 сутки 20сутки 40 сутки 60 сутки

^МоЬайе 5,1±0,4 0 0 0

иш эрр

■айоЬайе- 4,6+0,6 р<0,01 3,62±0,2 0 0

иш Брр

.соН 1ас+ 0 0 0 0

.соН 1ас- 5,62±0,9 0 0 0

,ер1с!епш 4,97±0,6 5,48+0,1 6,12±0,5 6,34±0,1

1Б р<0,01

.аигеиБ 4,01+0,9 3,96±0,8 0 0

.ГаесаИБ 3,06±0,5 3,11±0,6гем 3,84±0,5гем 4,2±0,9гем

апсНёа эр 4,31 ±0,5 5,96±1,8 5,32±2,32 5,6±0,1р<0,01

ТТЭБ 7,1 ±0,9 4,9±0,6 4,3±0,5 5,06±0,8

аким образом к 20-60 суткам микробный пейзаж выглядит следующим бразом: на фоне дефицита бифидобактерий имеется тенденция к осстановлению до исходного уровня лактобацилл и уменьшение бсемененности кишечника условно-патогенными микроорганизмами, в ольшей степени дрожжеподобными грибами рода Кандида.

А в тонкой кишке на фоне полной элиминации облигатных микроорганизмов аблюдается контаминация ее кокковой флорой и также в ней присутствуют 'андида, чего не наблюдается в контроле.

Состояние колонизационной резистентности кишечника экспериментальных животных при интоксикации различными дозами

суми-альфа

Мы попытались установить состояние колонизационной резистентности (К1 по абсолютному количеству лактобацилл и энтеробактерий, а также п коэффициенту соотношения их абсолютных значений (таблица 9)

Таблица 9

Определение соотношения количества лактобактерий и энтеробактерий. фекальной флоре(Л/Э)

Дни обследования 0,375 мг/кг 3,75мг/кг 7,5мг/кг

1 2 3 1 2 3 1 2 3

1 8,3 6,2 1,4 8,9 5,33 1,7 8,8 5,3 1,7

3 5,8 5,2 1,2 7,2 3,9 1,8 7,2 4,2 1,7

7 6,0 5,1 1,2 6,5 4,7 1,8 3,7 3,2 1,2

14 6,8 5,1 1,3 3,8 0 0 4,6 0 0

20 6,6 5,1 1,3 3,6 0 0 3,8 0 0

40 6,3 5,2 1,2 3,5 0 0 3,6 0 0

60 5,1 5,4 0,94 3,0 0 0 3,4 0 0

контроль 8,9 6,3 1,4 8,9 6,3 1,4 8,9 6,3 1,4

Примечание. 1-численность ■лактобактерий (КОЕ/г), 2-численност энтеробактерий (КОЕ/г), 3-соотношение количества лактобактерий энтеробактерий в фекальной флоре.

Анализ вышеизложенных цифровых сведений позволяет отметш следующее:

При определении колонизационной резистентности по абсолютному чис! лактобацилл в фекалиях, имеет место нерезко выраженная недостаточность К при воздействии в дозе 7.5 мг/кг и 3,75мг/кг со 2-ой недели и в последующ* дни и 0,375 мг/кг - в более отдаленные сроки.

Если определять колонизационную резистентность по абсолютное количеству энтеробактерий в фекалиях, то сразу бросается в глаза явь выраженное нарушение КР при воздействии суми-альфа на кишечта экспериментальных животных.

Вычисление коэффициента соотношения абсолютных количест лактобацилл и энтеробактерий свидетельствует о максимально выражение недостаточности КР при воздействии 7,5мг/кг; 3,75мг/кг и менее выражение при 0,375 мг/кг.

Известно, что повышенное содержание грам-отрицательных условно-пгогенных бактерий в фекальном содержимом является показателем [иженной колонизационной резистентности кишечника.(Алмагамбетов Х.,1996)

ар яду с традиционной оценкой количественного и качественного анализа исрофлоры использовали системный подход - метод корреляционного [ализа, позволяющий оценить характер взаимосвязи и взаимозависимости ученных параметров.

Этот метод позволяет оценивать микробиоценоз кишечника не с позиции ¡наружений изменений по отдельным показателям, а с точки зрения менений функционирования тонкокищечного и толстокишечного биотопов в лом, в зависимости от введенной дозировки препарата.

Таблица 10

Показатели коэффициента ранговой корреляции между численностью ктерий в толстой и тонкой кишке

)ЗЫ В1Мо Ьаае-пит ЬасЮ ЬаЛе-пит Е.со1 11ас+ Е.соН 1ас- 8.ер1-сЗепт чНэ Б.аигеш Б^ае -саПв Сап-dida УП ЭБ

75 /кг -0,07 0,14 0,4 0,2 0,15 - 0,92* -0,39 0,61 0,19

5 /кг 0,57 0,49 0,9* 1,6* 0,36 #* 0,85* 1* 1* 0,45

575 /кг 0,41 0,54 ** -0,8* 0,1 -0,5 0,49* 0,71* 0,97* 0,33

Примечание * - Р < 99%, ** - Р< 95% блица 11

Показатели коэффициента ранговой корреляции между количественным и чественным составом микрофлоры фекалий

>зы В1Мо Ьасго Е.соИ Е.соН 8.ерь З.аигеив 8.Гае Сап- УП

Ьас1е- Ьа^е- 1ас+ 1ас- •• deImi -саНэ dida ЭБ

пит пиш -dis

'5 0,8 0,4 -0,2 0,5 0,3 0,86 0,36 0,9 -0,8

/кг

> 1 0,5 1 0,9 0,88 0,5 0,37 0,83 0,5

/кг

(75 0,036 0,6 0,1 0,39 -0,4 1 0,6 1 0,1

/кг

Примечание * -Р<99% **-Р< 95%

Этот метод позволяет оценивать микробиоценоз кишечника не с позищ обнаружения изменений по отдельным показателям, а с точки зрей изменений функционирования тонкокишечного и толстокишечного биотопов целом, в зависимости от введенной дозировки препарата.

Анализ корреляционных связей микроорганизмов при введении 7.5 мг/ суми-альфа характеризуется однонаправленностью количественных изменен! у выделенных микроорганизмов.

Выявлена отрицательная корреляционная связь в отношении стафилококк« - с уменьшением рангового показателя в толстой кишке наблюдает! возрастание коэффициента ранговой корреляции в тонкой кишке при введен* 0,375 мг/кг пиретроида и прямая сильная связь с фекальным стрептококко] дрожжеподобными грибами рода Кандида.

Сильная корреляционная связь обнаружена при анализе количественного качественного состава микрофлоры содержимого толстой кишки, особенности лактобацилл, стафилококков, дрожжеподобных грибов Кандида.

Появление множества дискоординированных связей в толстой и тонкс кишке позволяет судить о нарушении стабильности в микробном пейзаж недостаточности колонизационной резистентности и создании условий д; контаминации условно-патогенной флорой в тонкой кишке.

Морфологически было выявлено, что в ранние сроки наблюдений ( на сутки), более выраженные структурные изменения наблюдаются в слизистс оболочке тонкой кишки подопытных крыс. Отмечались некроз и десквамащ покровно-ямочного эпителия, в строме слизистой оболочки были выявлен признаки расстройства кровообращения: отек и полнокровие сосудо периваскулярные диапедезные кровоизлияния. Отек стромы был неравномерн выражен и сопровождался нарушением компактного расположения железисты структур. В эпителии желез определялись признаки дистрофии.

На 14 и 20 сутки эксперимента обнаруживались морфологические признак катарального воспаления, как в тонкой, так й в толстой кишке подопытны крыс. На фоне отека и полнокровия сосудов в слизистой оболочке был выражена диффузная, преимущественно, лимфоцитарно-лейкоцитарна клеточная инфильтрация. В эпителии железистых структур определялис признаки секреторной активности, выражавшиеся в гипертрофии гиперхромии ядер, в выраженной'вакуолизаций цитоплазмы эпителиальны клеток. В межжелезистой строме встречались мелкие круглоклеточны инфильтраты. Отмечали умеренное полнокровие сосудов и отек подслизисты

оев стенки тонкой и толстой кишки. Кроме того, обращали внимание менения лимфоидного аппарата слизистой оболочки кишечника: мфоидные фолликулы уменьшались в размерах, не имели четких контуров и гтлых центров, были представлены в основном мелкими лимфоидными етками. В мезентериальных лимфатических узлах отмечали частичную струкцию единичных лимфоидных фолликулов. Количество бластных и азматических клеток в лимфоидных фолликулах было незначительным.

В слизистой оболочке толстой кишки, на фоне описываемых признаков спаления, отмечали деформацию кишечных ворсинок. В одних участках рсинки были вытянуты, сближены между собой, а в других-укорочены и иьцевидно утолщены.

Через 40 суток от начала наблюдения в динамике морфологических неений отмечали, что в воспалительной инфильтрации слизистой оболочки шечника подопытных крыс наряду с лимфоцитами и единичными дкоцитами принимали участие большое количество плазматических клеток, а еже эозинофильные лейкоциты. Наблюдали очаговую пролиферацию тгелиоцитов в криптах и в железистых структурах слизистой оболочки шечника. В лимфоидных образованиях кишечника и в мезентериальных мфатических узлах обнаруживали умеренную гиперплазию лимфоидных лликулов с образованием светлых центров, в которых определялось яительное содержание бластных и плазматических клеток.

концу экспериментальных наблюдений, на 60 сутки, плазмоцитарно-:точная инфильтрация сохранялась лишь в слизистой оболочке тонкой нки. В толстой кишке-клеточные инфильтраты в строме слизистого и ^слизистого слоев были представлены преимущественно, лимфоцитарно-¡тиоцитарными клеточными элементами с примесью единичных макрофагов. ;ветлых центрах лимфоидных фолликулов слизистой оболочки кишечника и мезентериальных лимфоузлах определяли макрофагальную и выраженные 1усные реакции: расширение синусов, десквамацию и отторжение береговых ;ток, явления фагоцитоза.

ультаты проведенных морфологических исследований свидетельствуют о 1, что с уменьшением воздействующей дозы пиретроида суми-альфа 1жаются альтеративно-деструктивные изменеия слизистой оболочки печника. Однако следует отметить, что длительное воздействие малой дозы эетроида приводит к угнетению экссудативной воспалительной реакции с ¡обладанием компенсаторно-приспособительных процессов: пролиферации тезистого эпителия, атрофии и деформации ворсин. Морфогенетической ювой приспособительных реакций, по-видимому, служат реактивные [ерпластичесике изменения лимфоидной ткани, свидетельствующие об ивизации клеточного иммунного ответа.

Синтетический пиретроид суми-альфа- инициатор перекисных процессов.

Как известно, уровень свободно-радикальных процессов является одним из адекватных показателей степени острых патологических явлений в организме. Поэтому проведены эксперименты по изучению влияния 5%-концентрата эмульсии суми-альфа на инициированную хемилюминесценцию липидов ткани мозга лабораторных крыс. Модельной системой служил 10%-ный гомогенат ткани мозга беспородных крыс.

В контрольной пробе, содержавшей не суми-альфа, а 0.02 мл этанола, имеет место S-образная кривая хемилюминесценции, обусловленная липидами ткани мозга, на которой быстрая вспышка отражает исходное состояние гидроперекисей и возникает в момент добавления Fe 2+ .В дальнейшем имеет место гашение свечения за счет эндогенных антиоксидантов. Через определенное время, называемое латентным периодом, когда антиоксидантная система «истощена», наступает медленное свечение, которое устанавливается стационарно.

Если в контрольной пробе величина быстрой вспышки составляет 3.3+ 0.05 у.е.(п=6), то добавление суми-альфа увеличивает быстрое свечение в сотни раз, соответственно исчезает медленное свечение ,хотя в контроле латентный период составлял 1,8±0,02 минуты. '•Причем выраженный прооксидантный эффект вещества проявляется в усилении спонтанного свечения уже с титром равным 4.7*10"4 мг/мл. И даже при снижении чувствительности прибора в 2.5 и 5 раз величина быстрой вспышки составила 18,5±0,2 у.е и 10.4±0,09 у.е соответственно.

Поэтому следует заключить, что пиртероид суми-альфа влияет на уровень свободнорадикальных процессов, проявляя выраженный прооксидантный эффект, проявляющийся в инициировании свободнорадикального окисления.

Биохемилюминесценция гомогенатов ткани органов in vivo при воздействии пиретроида суми-альфа.

При исследовании инициированной хемилюминесценции ткани толстой и тонкой кишки крыс мы не выявили характерного свечения

Очевидно это объясняется как структурным, морфологическими особенностями строения кишки, особенностями ферментативных процессов, характером мембранного и пристеночного пищеварения.

Далее была исследована динамика инициированной хемилюминесценции (XJI) гомогената печени лабораторных крыс при инициировании ионами железа 10%-го гомогената ткани печени лабораторных крыс контрольной группы наблюдается только быстрое свечение, что аналогично действию 3%-го Н202, установленному ранее.

и интоксикации животных пиретроидом суми-альфа имеет место резкое «ние кривой свечения, т.е она подобна хемилюминограмме свечения в ie липидов ткани мозга

(тот факт указывает на усиление свободнорадикального окисления, в ьтате чего появляется избыток ненасьпценных жирных кислот и липидов, буславливает характерную кривую свечения, которая имеет место в случае цов ткани мозга.

жим образом, как при кратковременном, так и при длительном воздействии эетроида суми-альфа нарушается микробиоценоз кишечника. Изменяется 1уляционный уровень, частота высеваемости исследованной микрофлоры : в полостном, так и пристеночном биотопах тонкой и толстой кишки, токсикация пестицидом приводит к элиминации лакто-, и особенно [>идобактерий, обсеменению тонкой кишки условно-патогенными кроорганизмами. Анализ морфоструктуры слизистой оболочки крыс, гучавших суми-альфа позволил выявить его деструктивный, готоксичесикй эффект. Выявлена выраженная прооксидантная активность тицида. Надо полагать, что цитотоксическое и прооксидантное действие >етроида суми-альфа явилось основой угнетения колонизационной истентности кишечника, повлекшей за собой нарушение микробиоценоза.

[ВОДЫ

1 При кратковременной интоксикации суми-альфа имеет место товерное снижение резидентной микрофлоры в полости кишечника, бенно бифидобактерий на фоне обсеменения тонкой кишки условно-огенными микроорганизмами.

2 При длительной интоксикации резко снижается популяция не только зидобактерий, но и лактобактерий , как в полости, так и в пристеночном (топах кишечника. Наряду с УПЭБ нарастает высеваемость и численность >жжеподобных грибов рода Candida.

3 При интоксикации суми-альфа наблюдаются деструктивные изменения зистой оболочки кишечника; более выражены патоморфологичесике ушения при длительном воздействии пиретроида.

4 Пиретр'оид суми-альфа обладает сильной прооксидантной активностью, ливает процессы свободнорадикального окисления.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Алмагамбетов К.Х., Кушугулова А.Р., Гатауова М.Р. Кишечный дисбактериоз при терминальных состояниях и его коррекция. //Медико-биологические проблемы Западного Казахстана. Межвузовский сборник НИР. Актюбинск. - 1997. -С. 54 - 57.

2. Гатауова М,Р„ Алмагамбетов К.Х. Микробиоценоз кишечника при интоксикации СХОК.// Экология и заболеваемость в регионе Северного Казахстана. Сборник научных трудов. Астана-99 С.119-120

3 Гатауова М,Р„ Алмагамбетов К.Х . Изменение микробиоценоза кишечника крыс при острой интоксикации инсектицидом суми-альфа./Физиологические основы здорового образа жизни. / Материалы 4 съезда физиологов Казахстана.- Астана-Караганда 2000.-С.346

4 Seitembetov T.S., Gatauova М. R , Adekenov., Almagambetov К.Н. , Shaidarov M.Z. Pro-oxydant activity "of synthetic compound sumi-alpha.// Book of Abstracts of the international Conference «Medicinal Raw Material and Phytopreparations for Medicine and Agricalture «September29- October 1, 1999. Karaganda P.349

5 Влияние пиретроида суми-альфа на процессы свободнорадикального окисления в эксперименте.// Акмола медициналык журналы .-2000.-№1,-С.100-102.

6 Гатауова М.Р., Манекенова К.Б., Алмагамбетов К.Х.

Патоморфология слизистой оболочки ■ кишечника при длительном воздействии пиретроида суми- альфа.// Акмола медициналык журналы .-2000.-№1.- С.110-111.

7 Гатауова М.Р., Сейтембетова А.Ж., Алмагамбетов К.Х., Сейтембетов Т.С. Жасанды жолмен алынган суми-альфа пиретроидтыц иницияцияланган хемилюминесценциясы.// Акмола медицинальщ журналы .-2000.- .-№2.-126-127

8 Гатауова М.Р. Влияние пиретроида суми-альфа на микробиоценоз кишечника в эксперименте .// Акмола медициналык журналы .-2000.- .-№2.-С.131-133

Гатауова Мадина Рафхаткызы

Суми-альфадан уланганнан жагдайда шект'щ эртурл1 биотоптарынан микробиоценозы

медицина гылымдарыныц кандидаты гылыми атагын алуга усыналган диссертация 03.00.07 - Микробиология

Тркырым

Таж1р1бил1 материалда 0,375мг/кг, 3,75мг/кг жэне 7,5мг/кг лолшерде суми-альфа енпзгенде шектщ ортурл1 биотопыньщ .шкробиоценозыныц езгеру сипаты керсетщщ .

Жщшке шект'щ шартты-патогещц микроорганизмдермен, :оньшен катар Candida туыстыгына жататын ашыкты тэр1зд ;ацыраукулактармен контаминациялануы жэне лактозонегативтт энетробактериялардыц aктивтeлyi жагцайында.

Суми-альфаден узак уак,ыт уланудан тур акты флораньщ ocipece Зифидобактериялар, айкын азаюы немесе толык жойылуы эайкалады. Пиретроидты 0,375 мг/кг мелшер1нде енпзгенде 3-7 гэулкке Караганда ток, шектщ балтнде бифидо-1актобактериялардыц саны анык. азаяды, гемолитикалык 1актозонегативп, белсендшп алаз эшерехиялардьщ санынн есуы когарлайды, S.aureusriH ecyi байкалады. BipaK, ¡шектщ шырышты сабыгында тур акты микрофлораныц популяциялык децгейшц 03repyi намалы. Стафило-жэне энтерококтардьщ салыстырмалы салмагыеьщ гц жогары езгергштп, ecyi пиретроидтщ мелшерше тэуелд1 емес. Корреляциялык, аныктау ток; iuieKTin белкендеп микрофлораныц :андык жене сапалык курымыныц аралыгында ere tík байланыстыц эарлыгын Kepcerri. Пиретроидтыц 7,5 мг/кг мелшершен ¡шекке эсер ;ткенде микроорганизмдердщ толык, шыгуымен катар, олардыц топуляциялык; ец жогары тeжeлyi байкалды:

Колонизациялык резистентжтщ бузылуы суми-альфаньщ трооксидантты жэне цитотоксикалык, эсерше байланысты.

Ток; жэне жпцшке шектщ зерттелген багпмипц шырышты сабатыныц морфологиялык; 03repicTepi мелшерге байланысты, tfffiiuicpi, ягни 7,5 жэне 3,75 мг/кг жогарлаганда альтернатива жэне jecTpyKTHBTi 03repicTep жэне 0,375 мг/кг эсереткенде орташа хдбынган езгерктер байкалады.

.In vitro жэне in vivo тэж1рибелерде суми-альфанын эсер етушен лартты патогещц микроорганизмдердщ активтелу} корсетшген. Еч шгашкы рет vitro тэжipибeci бойынша суми-альфаньщ пиретроидыныц прооксиданнты куш1, сонымен катар оньщ аскын готыгу процесш иницияциялау, ол торша мембранасыньщ гурак,тылыгыныц бузылуыеа экелешп дэлелденда.

Summary

Gatauova Madina Rafchatovna Microbiocenosis of different biotopes of intestines in sumi-alpha intoxicaton.

The dissertation on the searching of the scientific degree of the candidate of Medicine 03.00.07 - Microbiology

Character of changes of microbiocenosis of different biotopes of intestines in sumi-alpha introduction in the dosage of 0.375 mg/kg., 3.75 mg/kg, 7.5 mg/kg, was shown on the experimental materials. During prolonged intoxication sumi- alpha is decreased untill full elimination of resistantflora, especially of bifidobacteria on the background of small intestine's contamination by conditional-pathogenic microorganisms, in particular, by yeast-like fungi Candidiadis and activation of lactosonegative enterobacteria.

Changes of colonizatiuonal resistence depend on prooxidant and cytotoxic effects of sumi- alpha . The most depression of proliferation of microorganisms population up to full their elimination, appears due to. perithroids action to intestine in the dosage of 7.5 mg/kg. In experiments , both in vitrio and in vivo activation of conditional-pathogenic microorganisms in sumi-alpha influence was shown.

In perithroids introducing in the dosage of 0.375 mg/kg jn the third, seventh day, the quantity of hemolitic, lactose-negative with slight activation of epirichea. Populative level of resident microflora changes little in the intestines mucous. Independantly from peritroids dose, big changeability of specific gravity, inoculation, is characteristic for staphylo-enterococci Correlative analyses showed direct connection very much between qualtitative of microflora structure of large intestines contains.

Morphological changes of mucous membrane or small and large intestines examinade parts had dose-dependant character, wherease alternative and destructive changes were more characteristic in perithroid influence in the dosage of 7.5 and 3.75 mg/kg and moderate-inflammatori changes of sumi-alpha influence in the dosage of 0.375 mg/kg.

Prooxydant effect of sumi-alpha perithroid was determined and also it's initiation of oxidant process wich leads to the damage of cells membrane stability.