Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиологические и молекулярно-биологические особенности госпитальных штаммов сальмонелл тифимуриум и их использование в эпидемиологическом анализе

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиологические и молекулярно-биологические особенности госпитальных штаммов сальмонелл тифимуриум и их использование в эпидемиологическом анализе"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР РОСТОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи ЛЫСОВ Павел Сергеевич

МШРаШОЛОШЧНШЕ И ИОЛЬК7ЛНРНО-ЙГОЛОП1ЧЕСКЙЕ ОСОБКННОСШ ГОСПИТАЛЬНЫХ ШТАММОВ САЛЬМОНЕЛЛ Ш0ШУШМ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЙ В ЭПИДЙЖОЛОШЧЕСКОГД АНАЛИЗЕ

03.00.07 - Микробиология

0%

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ростов-на-Дону 1991

Работа выполнена в Ростовском научно-исследовательском институте микробиологии и паразитологии научно-производственного объединения "Биопрепарат".

Научный руководитель: академик АМН ССС^ и АЕп РСФС^

Домарадский и.В.

инициальные оппоненты:

доктор медицинских наук

Карницкая п.В., доктор медицинских наук, профессор

Гамлеппсо Х.П.

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт

эпидемиологии и микробиологии им. Пастера.

Залита состоится "21" января 1992 года в 1-4-00 часов на заседании специализированного совета Д 084.53.01. при Ростовском ордена Дружбы народов медицинском институте 344718 г. Ростов-на-Дону, Нахичеванский переулок,'¿9.

О диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского ордена Друябы народов медицинского института.

Автореферат разослан "¿¿^^¿И-*. 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

КОРГАНОВ Н.Я.

' i - 1 -

UEi'lH ХАРАКТЕРИСТИКА РАБО'Ш

Актуальность проблешх: Эпидемиологическая ситуация по саль-ыонеллезу в последнее /p<,erw€ характеризуется ростом заболеваемости населения шюгиэс страи uipa, одной из причин которого явчлось возникновешю полирезиогеитшк к антибиотикам сальмонелл. В СССР рост заболеваемости садьконеллезса вызван появлением по-лирезиетиггиого к антибиотикам ¡тгаина. <33/у>?оле//з typAi/nunwp. обусловивший подъси гсспигалыск сальыонеллезов в I970-IG90 гг

(Килессо В.А. с соавт. 1985, Я>}аев Р.Х. с соавт 1989,Поноса Л.О. с соавт. I9SQ) .

несиогря на большое число исследований, посвщеннш; этой проблеме, причгашг роста заболеваемости сальмонеллезама и их связь с появлением госпитального клона возбудителя пса еще не подучили рационального объяснения.

Установлено, что госпитальше иташш сальмонелл, как правило, в условиях закрытого коллектива формирую? необычный для зооноэ» по ft инфекции вш1доиичесш5й процесс по антропонозному типу, что связывается рядом авторов с изченежсем биологии возбудителя сальмонеллезов (килессо В.А. с соавт, 1976, Рачковская D.K. с соавт. I9B6) .

• В. настоящее время: в розультате многочисленных исследований установлено, что для госпитальных птаииов сальмонелл, циркулирующих в ССС1', характерно наличие, трансмиссивной плазммди in с ft , дстершширующвЯ резистентность к нескольким антибио икан, пош-х жешшй уровень вирулентности для белых №шзй,отсутствие лиаиеа фагами по схема Феликса и Келлоу, прикадлояность к 20 н 2Ь Ш по схеме Чнракадзе, сишенная активность .гизиндекарбоксилазы (Арбузова В.А., 1983,Бруснипша П.®. 1985,Покровский В.И. с соавт. 1986) .

Диагностика и профилактика острых кишечных инфекций, вызванных сальмонеллами, затруднена из-за отсутствия данных о процессе формирования госпитальных штаммов в условиях стационаров.

п& современном этапе диагностика внутриболшкщмх сальио-неллязов проводится комплексно с применением методов как текущего, так и ретроспективного анализа, различных бактериологических негодов диагностики, оценки санэлидреяиш стационара и клинических проявлений заболевания. Отсутствие четких критериев лабораторной диагностики госпитальных штаммов на позволяет осуществить своевременную диагностику и профилактику внутриболышщшх сальмонеллезов.

Цель работ». Выявить биологические и молиг/лярно-биологи-чсские особенности госпитальных штаммов В. Ь^р^чмипип) ( определить возможность юс формирования в стационара и макро-оргаиизме.

Задачи исследования. Основными зод&чаыи исследования являются:

- определить биологические особенности госпитальных штам-ыон, позволяющие дифференцировать их от внеболыштав;

- изучить диапазон плазмвдиых пробил зй £ ¿ирЬ^тиАит различного происхождения, выделенных за последние 15 лет в Ростовской области и дать характеристику ллаомидного состава госпитальных штаммов сальмонелл;

- определить резистентность <£ ^рАипигси/п , к действию различных антибиотиков и дезинфектантов в макроорганиэ-т и в окружающей среде;

- смоделировать возможннй механизм формирования госпиталь-

- 3 -

них штаммов in. vivo к ¿n vilro ;

- определить возможность использования детершиант плаэмид сальмонелл в эпидемиологической надзоре за сальмс-неллезани.

Настоящая работа явллетея фрагментом основного плана договора 03/ 119 / 18 "Совершенствование методов диагностики, эпиднадзора, профилактики и лечения сальионеллеза" н выполнялась в соответствии с общесоюзной отраслевой научной ' программой С-23 "Разработать и внедрить в практику здравоохранения эффективные мерц профилактики виутрибодьничных инфекций" регистрационный Р 01.88.00. II650

Научная новизна исследований: Впервые выявлены следущие биологические особенности госпитальных штаыыов сальмонелл:

- повышенная резистентность к ыетациду, ацидин-пепсину, низким значениям рН среда, действию У®-лучей и ряду антибиотиков; 4 ;

- повышенная ДИ-азнал активность, высокая чувствительность к действию хлоргексидина;

- наличие позднего фактора сосудистой проницаемости;

- повышенная способность к размножению в легочной ткани белых мышей;

- характерный для гоелиташшх штамаов £>, typhirmirium плазмидный профиль 70,5,4,3 Md ;

- лиэируемость 12,20,29 фагами по схеме Чиракадзе.

Показана возможность размножения сальмонелл, в тем числе и госпитальных клонов, на различных тест-объектах в условиях, аналогич1шх условиям стационара при воздействии различных неблагоприятных факторов. Впервые разработаны модели и по-

казана возможность формирования в эксперименте госпитальных ' втамчов сальмонелл in vivo и in vitro под действием селективных факгороь. • •

.Установлено, что госпитальные штаммы йогу? длительно сохранять и наследовать Я- плазмиды.

Практическая значимость работы, практическому здравоохранению предложен комплекс экспресс-методов дифференциации госпитальных штампов сальмонелл тифимуриум, применении которых в течение 1-2 дней-с момента выделения чистой культуру позволяет провести четкую дифференциацию госпитальных шгашоа сальмонелл от внебольничкых и обеспечить своевременную диагностику и профилактику внутрибольюгешх сальмоие-ллеэов и улучшить эпидемиологический надзор за заболеваемостью сальмон&ллезамй. Выявлена болыгал чувствительность госпитальных штаммов к малым концентрациям хлоргексидина, что позволяет рекомендовать этот препарат в качестве средства профилактики внутрибольчичного сальмонеллеза.

но материалам исследований подготовлены и направлены в ЛНЦ-Э методические рекомендации "использование биологичэ-ских характерютик госпительинх штаммов сальмонелл в эпидемиологическом анализ е.Экспресс-методы индикации госпитальных штаммов сальмонелл тифимуриуы?Фрагмент исследования признан изобретением "Способ дифференциаций госпитальных штаммов сальмонелл серотипа тифимуриум? решение.юсударствен-ной научно-технической экспертизы изобретений Р 47S4906/I3-I4S4II от 29Л0.9Г «Задепонированы штаммы: & typhimurium 467-Ртж - для генетических исследований

g. typhimu rtum. Bü4 - как продуцент термолабильного

токсина. • .

Магериали диссертационной работу были использованы при подготовке приказов по Ростовской области №'28 от 1и.1и88г. "13опроси профилактики салъионеллеза в Ростовской области на совреме»шои зтапе" исполкома Ростовского Облсовета народник депутатов, приказ № 1и7 от ?.12,1989г. "иб усилении санитарного контроля за предприятиями иясоперерабативяпцей проыда-ленностн города по профилактике сальмоноллеза.

Бнедрешш .в практику. Методические рекомендации апробирова ни в ОЭО г. Таганрога и Г£.хт ростовской области и г. Сйердпов ске. но результатам исследований получено 14 рационализаторских предложения местного уровня, одно рацпредложение отраоле вого значения за № 03493 от 12.12,89г., 3 рацпредложения направлены на утверждение как отраслевые. подготовлены и иэдаш приказ» по профилактике. сальмонеллеза в 1988 п. по гостоеской .области и в 1989 г. по г. Ростову-на-Дону.

Апробация работн. Диссертация апробирована на ученой сове та НПО "гсстзпидкомплекс" I3.Uo.I99I г. и заседании гостов-ской секции ШО 5.12.1991 г. Отделыше фрагменты работ» доложены на двух Всесоюзных конференциях г,'Алма-Ата 1988т и г. Юр.юяа 1990 г , на УШ съезде микробиологов г.Москва , на рвгиональ!Шх конференциях, 2-х областных, 4-х конференциях ко л одах специалистов Москва,' Ленинград, Ростов-на-Дону ,

Публикация материалов исследования. Основные положения , диссертации опубликованы в 19' работах. '

Структура и об'ьем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста содержит таблиц и /6 рисуш:ов, Работа состоит из введения, обзора литературы, двух глав собственных исследований, заключения и выводов, а также указателя литературы, включающего рабог.

- 6 -

отечественных и зарубежных авторов.

Материалы и методы исследования. Биолошческие свойства изучали у 3.545 штаммов, выделенных на территор!^и Ростовской области и Северного Кавказа за период с 1971 по 1988 гг, а

также ¿о(Х) клонов сальмонелл, полученных: в эксперименте. У «

этих кульгур определяли ферментативную активность, культура-лыше и антигенные свойства, чувствительность к антибиотикам и поливалентным фагам.

Культур« сальмонелл Ы8и были выделены ст больных внутри больничным сальмонеллеэои, 1634 - от больных при пищевых то» сикоинфекциях, 249 - из проб воздуха боксов и смывов с предмо тов детских стационаров, 482 - из пищевых продуктов и смывов с оборудования предприятий пищевой промышленности, воды р.Дон и от животных.

В эксперименте были получены клоны сальмонелл: II5U - после действия на культуры "физических и химических дезинфектан-тов, 700 - транско1Гь»ганты, ЗЬО - "излеченные" от плазмид госпитальгагх штаммов и 300 - пассированных через, организм животных.

Для более детального изучения биологических свойств было отсбрано Ъ9& t гаымов сальмонелл различного происхождения. У этих культур была изучена проекция термолабильного энтеро-токсина, фактора сосудистой проницаемости, вирулентность для белых мышей, адгезивность, резистентность к дезинфеКтантам-совместно с синтетическими моющими средствами и без них, устойчивость к УФ лучам, низким значениям pij среда и ацидин-лепсину. изучение плазиидных профилей и определение групп несовместимости плазмид проводили у 876 штаммов сальмонелл.

- ? -

наделений: в течение IQ лет.

Изучение эксгрзссии план» дник ге!гов у ультур сальмонелл про поди ли у трансконьюгантов и ¡угонов Тюлеченгадс" от плазмид. Для изучения возможности формирования салы.(оио;чами признаков госпиталыгости на модели ¡л vivo было отобрано 20 штаммов 5. typhimurium и 21 гатш« семи других серсвароа сальмонелл; на модели in vitro - 8 татя в S.typhitnurium

Метода. Вццеленче возбудителя из проб, его идентификации, определение антигенной структура, чувствительность к полива-лентам фагам и октибнетикэк я изучение ферментативной актив* кости проводили по общепринята» методикам, изложениям в монографиях В. К. ГЬкровского 1935 , И.В. Щура 1970 , A.C. Лабип-ской 1968 , И. Г. Калика IS7I .

на основании данных эпидемиологического анализа и клшшче-ских проявлений змТолоейния были отэбракн шташш сальмонелл о типичными счойсгвами. Из них 254 - госпитальные, 342 -вне

болытчдое. .

Для изучения биологических свойств сальмонелл определяли

продукцию торколабилымго энтеротоксина по В.Г. Клэганову 1981 продукцию фактора сосудистой проницаемости по В.М.Бо-цдаренко 1979, вирулентность на легочной и энтеральной моделях разработанных в Ленинградском НИИЗЙ им. Наотера 1980 . Чувствительность к фагам шташов сальмонелл изучали используя коллекцию И.г. Чиракадзе, любезно предоставленную нам автором, по методике разработанной в Тбилисском ИИИВС 1974, а ДНКазную активность определяли по ф. 1'ерхардту 1983, выделение плаз-мидной ДНК проводили по Кадо и Льюи 1981, разгонку препаратов ДНК осуществляли в агарозном геле по Дтс, Маниатису 1984 .

Конъюгациондай перенос и определение групп несовместимости плазнзд проводили по Датта 1971 , элиминацию ппазмид из клеток возбудителя осуществляли додецилсульфатом натрия по методике Дж. Миллера 1976 , устойчивость сальмонелл к раз личным физическим и химическим дезннфектантем определяли по В.И. Ваикову 1977 , определение чувствительности культур к ецидин-пепснну и низким значениям рй срада проводили по О.Гер хардту 1983.

Вам» бшш разработаны метода изучения шханиэма форш!ро-вашя госпитальных штаммов ¡л vivo с использованием селективного давления антибиотиками на кульаури при лечении кроликов с экспериментальной сальмонеллезиой инфекцией й in vitro - изучение передачи с помощью плазмид генети» ческвй информации от госпитальных штаммов в бесплазиидный вариант сальмонелл через систему трансконъюгации в прясутст вии различных дезиифектаитов, низких значений pH среды и ацидин-пепсина, совместно с синтетическими нощими средствами и без них в кидкой, на плотной сред» и на тест-объектах. •

Эпидемиологический анализ и отбор типичных штаммов саль-согласмо

ыонелл прово/вдли'разработаниыы JD.K. Рачкисской с соавторами 198*/ методическим рекомендациям. Статистическую об работ:, ку «олучеюшх результатов проводили по И.П. Лшарину о соавторами и D.S. Кабатову с соавторами I97I- >

основные РЕШЬТШ PAEÛÎU

' При изучении биохимической активности сальмонелл бил выявлен ряд особенностей характерна для госпитальных итаиыав. Полирезистеитнйэ к антибиотикам госпиталыше штаммы в 95,85а случаев ферментировали арабинозу, ракнозу, ксилозу, в то время как внеболышчвде лишь в 47,Чувствительность к изучаемым 12 антибиотикам у внобольншпшх шташсв была в средней в 1,3-1,5 раза вше, чел у госпитальных, в том чис-да к тетрациклину - в 1,6 раз, к пенициллину - в 1,4 раза, хлорам^ениколу в 1,7 раза, пояимиксину в 2,8 раз и канами- . цину в 3,2 раза. Но учитывая нарастание циркуляции полире-зистентннх к антибиотикам внйболышчнызс штаммов сальмонелл тифиму'рнуи, виделяешх в последние года в Ростовской области, значение признака полирезиетентнооти к антибиотикам как ' паркера госпиталыюсти бактерий утрачивается. При типировашш культур фагами по схеме Чнракядзе было выявлено, что госпиталыше штаммы сальмонелл тифимуриуы принадлежат в УЗ, случаев к 12,20,29 Ф'Г, а внеболытчше лийь в 18,случаев. При изучении вирулентности сальмонелл 'на' эптеральной модели выявлена более внеокая вирулентность шеоолышчных штаммов по сравнению с госпитальными штаммами. Tait доза заражения в ó млрд микробных клеток вызывала а Ь9,5'Л - II, Sí случаев гибель кивопшх в случае внеболыгачнше культур, в то время -как заражение такой же дозой госпитальных штаммов не вызывало летального исхода у мыией.Продукция позднего фактора сосудистой проницаемости у госпитальных штаммов в среднем была в 3,2 раза шв, чей у внебольничннх. Дяя Енеболышчнцх штаммов была характерна продукция раннего фактора сосудистой про-

ницаемости в 67,3$ случаев, а у госпитьлышх шташов, встречалась лишь в 13,39» случаев. ДНК-азиая активность госпитальных штаммов была выше в 2,3 - 0,12 раза, чем у внебольнич-ных. Ускдовлена строгая корреляционная зависимость, при которой / был равен 0,8, между наличием Й-плаэмнд у сальмонелл и наличием позднего фактора сосудистой проницаемости и высокой ДИК-азной активность». «а легочной модели экспериментальной сальионеляезной инфекции било выявлено, что госпитальные шташш интенсивнее обсеменяют легкие белых шией, чем внеболышчные. Коэффициент разиножешш был вше в 42 раза у госпитальных штаыов к концу первых суток по сравнению с внебольничншя культурами.

При изучении продукции териояабилыюго токсина (Т1) и степени адгезивцости штаммов сальмонелл различного происхождения ие обнаружено существенна* различий среди культур различного происхождения. Определено, что ДнК-азная активность и анте-ротоксигенность сальмонелл увеличивается на ои-12и?6 при воздействии на них деаинфектантов и снижается в 0,4-0,8 раза при длительном хранении ку льтур при 4°0.

Анализ плазаидаого состава у шташов сальмонелл, выделенных на территория области за период с 1971-1988 гг показал, что госпитальные штаммы в 85-90% случаев имеют следущий плазмидный профиль - 70,5,4,3 М</, который встречался у вне-болышчних шташов лишь в 2-24?« случаев. Плазииды с высоким молекулярным весом у госпитальных штаммов сальмонелл в 101$ случаев принадлежали к группе несовместимости ¿«с , тогда как у внебольничных шташов они были обнаружены только у 9,35» из них, Фенотипические проявления й-плазмид госпиталь-

низе шташов с их бесплазыидными дериватами, полученными после элиминации пдазмид, а также со свойствами бесплазиидных культур внебольшшиого происхождзния и их производных, получивших при ко!гьюгации Я - плазнидц от госпиталыад штаммов сальмонелл ибнарузсешшэ у пташов плазыиды иол. весом 65 Л1с/ кодирую? ус-тойчнвость к Ст., Тс , г РЬа ч я Сп/с., * и отвечают

за продукцию позднего фактора сосудистой протщаеиости, что подтверждено утратой этих признаков в 1005* случаев после элиминации укаэашой плазыиды. Приобретение или утрата плаз-ыид у штаммов сальмонелл всегда связана с увеличением шщ уменьшением продукции ДШС-аэ В 2,8-3,1 раза, соответственно; снижением или повышением устойчивости к ультрафиолетовому об-лучонию (У®0)в 10-11 раз. Плазиида ингибируют продукцию тер-иолабилыюго токсина, что доказано снижением продукции токсина у внебольничиис штаммов с 72,3*1,4 мг до 45,5 - 6,3 иг , при приобретении ими плазмид от госпитальных штаммов сальмонелл. алазмиды этих.штаммов,участвуют з ингибировании и адгезивных свойств сальмонелл. Так внебольничныв' культуры. снижали адгезивность в 1,5-1,6 раз при приобретет«! ими-Р плазмид госпитальных штаммов. Нами также установлено, что эти плазмяды способны длительно сохраняться в клетках возбудителя до 15 лет (срок наблюдения) и,соответственно,сохранять характерные особенности госпитальных штаымов.

Установлена возможность использования молекулярно-биоло-гических свойств, в частное 1и, плазмидных профилей в текущем и ретроспективном эпидемиологическом анализе заболеваемости сальмончллезом.Например, исследование налитая тех или иных плазмид у сальмонелл и их принадлежность к определенной групг. пе несовместимости позволило решить спор?шо вопросы пронсхож

деиия шташов во время вспшек острых гашечгшх инфекций в' . г. Таганроге, г, Оальске, стацице Веаеиокой и ст. Тимешеяской а также решить вопрос об общности происхождения культур, гю-вавиих яти вспышки.

Но степени резистентности шташы сальионэлл различного происхождения били одинаково чувствительны к неблагоприятна! факторам окружающей среды, к широко употребляешь дезнн-фектантам - хлорамшау, хлорной извести и перекиси водорода. Более чувствительными были госпитальные гатамми к действие хлоргексидина. Они выживали при концентрациях отого дезин-фектанта 6.10"^- вЛО-7*' а внейоль1»1Ч1Шо при концентрации

А Ц

6,7.10+ 2,и.1и а го:г.е время резистентность к УФ лучш у госпитальных шгашоа была в 14-17 раз вше, чем у внаболь-кичных, к ацидин-пепсину в 1,5-18 раз, к мотациду - в 25 раз. Госпитальные штаммы выживали при значениях ри среды 4,0, а внеболышчные - 5,0. .

I

Таким образом, в результате проведенных исследавашШ бия впервые .установлен ряд биологических свойств присущих госпитальным штаммам:

I. Высокая- бнохшкческая активность 11 прпнгдаежность к хе-мовару - арабиноза+, ксилоза'", рашоза4*;

' 2. Полиреэистенгность к антибиотикам, кодируемая тране-мнссившши плазшдеми ыол. веса 65 и 70 М<1 , принадлежало« к ¿ас П |

3. Большая устойчивость 1? УФ лучам, метациду, шзнш значениям рИ среда и действию ацидин-пепсина. ■

Ьшшлено, что пяаздада госпитальных штаимиа пришагает . участие в ингибнроватги патогенных свойств возбудителя и детерминирует их резистентность к неблагоприятным факторам окружа щей среда.

. - 13 -

О патогешосги госпиг&шввс вшшыоз пигшт изученной

о прмениияем рашичзпх цемдоя нельзя суди.'ь однозначно. С одт»й стороны гас более низкая, одгезивность не коррелирует с высокой инвазивностьо. Одновременно сниженная вирулентность ^ для белых лшей на разных ыодэтях не иолет свидетельствовать о кепыпей патогешости госпитальных штаммов дяя людей, что свидетельствует о приобретении новые свойств в процессе эволюции.

Повышенная ДнК-азная активность, продукция преимущественно позднего фактора сосудисто!! П{зодацаемости и высокий коэффициент размножения в легочной ткани белых мышей - эти признаки, наряду с вышеперечисленными могут служить маркерами госпиталь кости сальмонелл. Патогенность возбудителя может изменяться при действии на него неблагоприятных факторов окружающей среды. Так действие сублеталышх концентраций и доз Ш лучей, хлорамина, перекиси водорода, хлорной извести приводит к увеличению патогенного потешдоала микроорганизма, в частности, продукции термалабильного энтеротоксина в 1,8-4,и раз, ДпК-аэной активности в 1,4-2,7 раз, вирулентности для белых мышей в" 12-65 раз. и условиях стационара при формировании вне-болыатошх штаммов в госпиталыше при действии неблагоприятны факторов окружающей среда, вероятно, происходит естественный отбор болео патогенных клонов сальмонелл, способных вызывать за1олеванио сальмоноялезом большей тяжести, чем вызываемое внебольничными культурами сальмонелл.

Следующим этапом исследования было изучение возможности фо риирования признаков госпитальноетя у штаммов других видов са льмонелл ¿7 хлю и «>> под действием неблагоприятных

факторов окружающей среды. Для этого были разработаны экспе/-рименталыше модели образования госпитальных штаммов из внс-больничннх in. trivo при лечении антибиотиками больных сальцс— неллеэои животных, зарахенных в опыте, и in -vitro - изучение влияния на генетический обмен осуществляемый конъюгацией Я пдазиид. На модели ¿a viva »зараженных внебольничными штаммами сальмонелл, кроллков-сосушов лечили антибиотиками: ,

, Ргп , СЬ в концентрациях подобных тем, ко тори с применяются при лечении больных сальмонеллезои детей первого года ииз-1ш. Штаммы поело трехкратного пассажа через организм яибот-ных в этих условиях приобретая« £ плазмида подобные тем, которые характерны для госпитальных штаммов, а с ними и типичные для них свойства, Внеболышчдао культуры после пасса-кей приобретали слецушре признаки госпитальноега: '

- полирезистентность к 5 и более антибиотикам,кодируемая И плазющой ¿ac.FI i •

- способность проявлять поздний фактор сосудистой ПрОШ!-. цаемостн;

- повышенную резистентность к УФ лучам, ацидин-пепсину, рН среда и метациду;

- повышенную активность ДНК- аз.

У них отмечалась в 35-42Й случаев повышение продукции JL и повышение иа 1-2 порядка вирулентности для белых мышей. Вероятно, такая изменчивость внебольничнкх культур &, typ A itm и пит связана, как с экспрессией плазииднак генов, так и мутациями происходящими в хромосоме возбудителя. Необходимо отметить, что штаммы S.hüifb ,£ceiterimid¿¿ , £ Mantis'

¿■virchow не проявляли способность приобретать плазмида в

- 15 -

опытах in vivo , а с ними и маркерц госпитальности культур, "Излсче.аше" от плазшдяой ДМ госпитальнь ъ штаммы S.iyphi-marium утрачивали реципиентную способность. Эта штаммы не зависимо от наличии плазмид, увеличивали вируле .тность для белых мышей в 1,5-2 раза и продукцию TL на 2u-2t$ от исходного уровня.

¡Птамш S.tt/pbi'snurtujn внебольнпшого происхождегат обладали болев выраггепно? способностью к воспрштию чуяеродной генетической информации, чем другие виды сальмонелл. Частота передачи Я плазмид в процессе конъюгации в итаимы S.tt/phi -Murium ,. была на 3-4 порядка пше по сравнению с друг ими видами сальмонелл. Способность/»¡гпцгш/* к генетическому обмену объясняет возможность колонизации именно ими стационара и в определенных эпидемических ситуациях вызывать вспшшш Бнутрнболыптчлого зальмонеллеза.

С помощью размотанной налш модели формирования госпиталь mix штаммов in -vivo , можно определить доминирования того или иного вида сальмонелл в конкретной-эпидситуации и споообность возбудителя формироваться по госпитальному типу. Подтверждена значимость экспрессии генов & плазмид, как одного из суие-ствстп« маркеров госпитальности у сальмонелл.

Учитывая естественную циркучяцию Л плазмид в окружающей среде стационаров в присутствии различных дезинфектантов было изучена возможность осуществления конъюгационного переноса R- плазмид госпитальных штаммов при действии на культуру раз личных неблагоприятных факторов в разных дозах и экспозициях облучения на модели in -vitro , как в жидкой и плотной пи тате . льной среде, так и на тест-объектах. Конъюгацию осуществляли

■_'б -

в этапа. Первый - передача Лпдазыид в ExoliC600 и второй - передача от £.coù внебояьничиоыу Сесплазмидному отаАслу $. typ/iimurwm 4.07 Р/пх . па втором этапе скреррпзакия культур проводили в присутствии 25 различных концентраций хлорамина, перекиси водорода, ацидин-пепсина, разных значеш-ях рН среды и облучешя У® лучами при разних экспозициях и Я сочетании с синтетическими мощтш средствам;! и без шх. Контролем было скрещивание бактерий общепринятым методом. Реверсий по маркерам, передачи плазыид выявлено не было.

И результате исследований установлено, чго сублетальше концентрации хлорамина, перекиси водорода и облучение оказывают стимулирупдее действие на эффективность переноса £ плазмид, увеличивая его частоту на I - 3 порядка, К полному, прерывании процесса конъюгации приводит использование сочетай-пого воздействия дезикфектантов с мощими средствами или добавление ацидин-пепсина или низкие значения р!Г среды . К эксперименте внебодышчкые культуры сальмонелл, приобретая . цлазиида, проявляли свойства тшшшше для госмытолыгдс сгшсз мов сальмонелл, т.е.. продуцировали поздний фактор сосудистой проницаемости, увеличивали продукцию ДШС-аз в 1,8-2,4 раза, били устойчивы к 5 антибиотикам и проявляли повышшшур усто-чзшость к УФО и другим деаинфектантаи по сравнений с исход-шши внеболышчныш культурами.

Изучение возможности формирования госпитальных штаммов &. iyphimuriut*} при действии на бактерия неблагоприятных факторов имеет как практическое, так и теоретическое значение, т.к. позволяет расшифровать вероятность возшкновения госпитальных штаммов в окружающей среде и своевременно разра-

ботпть мгри по прерыванию их появления в условиях стационара. Вероятно, процесс фортровеии.1 госпиталышх штаммов происходит в два этапа: I - под действием неблагоприятных факторов в условиях стационара среди резистентных внебольничн х штаммов сальмонелл происходит селектлв«шн отбор более патогенных клок нов, которые способны длительно циркулировать по внешей срэ-дв и определенной опидситуации вызывать внутр1больничную за. болеваеиость сальаонеллезом больных в стационаре; второй 'в условиях иакроорганиэий,.где завершается процесс формирова-1й!л госпиталышх признаков у патогенных клонов сальмонелл.

'ШВОДО

1. Выявлен ряд свойств госпитальных штаммов сальмонелл: высокая устойчивость к У§ лучам, низким значениям рН среды и ацидин-пепсина, повышенная активность ДНКаэ и чувствительность к действию хлоргексидина, которые могут быть использованы для экспресс-диагностики атих культур.

2. Госпитальные штаммы обладает такими особенностями как

- •

продукция позднего фактора сосудистой проницаемости и большая интенсивность размножения в легочной ткани, хотя они менее вирулентны для белых милей и отличаются меньшей способностью к адгезии.

3. Важной чертой госпиталышх штаммов является множественная лекарственная устойчивость, обусловленная А ллазмпдами 1псР£, и наличие двух плазыидннх профилей -70,5,4,3 МЫ или 65,5,4,3 МЫ .

4. Обмен генетической информацией посредством Я- плазмид от госпитальных штаммов внебольничным может осуществляться

- 18 -

как в кишечнике, так и окружающей среде под действием различных антибактериальных средств в субдетальных для микроба' дозах, стимулирущих этот обмен.

&. Разработанные нами два модели формирования госпитальных шташов ¡л члих» и г/Иго позволяют выявить пути возникновения внутрибольиичшх инфекций и определить маркери гос-питальности у культур, ьвделяемых непосредственно от больных или из окружающей среды неблагополучных по эпидситуации стационаров.

б. Показана возможность использования в текущем и ретроспак ТИ8К0М эпидемиологическом надзоре заболеваемости сальмонел-лезом плазыидного анализа и ряда признаков, детерминируемых

плазыидаыи.

ШОК

работ, опубликованных по тема диссертации

1. Частота выявления фактора сосудистой проницаемости среди £ЛурЫтцг1ит, выделенных при различных эпидемиологических сиоуация1Й1.Д.Содянок, ЮД. Рачковская/.//ШЭИ,-198б-«95 - С. Юо-ЮЬ.

2. Чувствительность к УФ облучению некоторых штаммов сальмонелл тифиыуриуы-// Ыгй - 1988- разд.Ш.-Ш - опубл. 3049.

3. Фактор сосудистой'проницаемости как генетический маркер госпитальных штаммов сальмонелл / Л.Д. Солянок, Ю.К. Рач-ковская/.-//'1'езисы докладов Ш съезда "Генетика и генная инженерия",- Алма-Ата - 1986,- С, 70 .

4. К вопросу о циркуляции Я плазмид в детском стационаре в условиях сальмонеллезной инфекции/ Ю.К. Рачковская/.-//Материалы. X Всесоюзной конференции "Гигиенические аспекты изучения

биологического загрязнения окружающей ср<ды? Алма-Ата. М.,-1988,- C.ttG-W.

b. Элиминация плазмидной у госпитальных ггаммов -S'.typhi* murium /D.K. Рапповская', Л.Н. Корнилов/.-//Тезисы докладов областной конференции "Проблемы медицинской и санитарной микробиология? - Ростов-на-Дону,- IS87. - Ü.19.

G. Йзучениа связи пнтибиотикорезистептности и адгезивно-ст» штаммов ЭПКП /0.11. Каминская, H.A. Конгчово/.-//Сборник "Проблемы медицинской и санитарной микробиологии? - Роетов-на Дону. - 1987. - С.31.

7. Плазмидн госпитальных штаммов сальмонелл тяфимуряум, кодирующие ДШС-азную активность / ЮЛС. Рачковская/,-//Тезисы док ладов У всесоюзной конференции "Бактериальные токсина? -Юрмала, М.,- 1509. - С.68.

8. Клшпшо-эпидешологическая характеристика вспышки острой хлебсиеллёэиой инфекции у новороздешшх / Э.Н. Симовсниян, Р.Г, Ловердо, Л.Д. Мартшенко, Крюкчиева И,Г./.- //Сборник Вопросы перинатальной диагностик!! и лечетл. - Налытк.-19в9,-G. 64-65. ■ .

9. Голь Xlebiîelùi pneumoniae в развитии острой кишечной rai фекции у новорожденных / Э.Н. Симовоньян, Ловердо Р.Г.,Л.Д. яа-ртнненко, И. Г. Крюкчиева/.-// Сборшш 'Вопросы материнства и детства? - M., 1990.- %Ъ. - С.15-18.

II). Изучение стабильности наследования йплазмид у онтеробак-терий / Л.К. Лысова, Л.Д. Мартыненку, C.B. Головина/.- //Тезисы докладов научно-практической конференции,- Ростов-на-Дону.-' "Экология человека, механизмы интеграции биологических систем. - Проблемы ; адаптации?- Ростов-на-Дону.- ISSu.-U.IbS-Iiyl.

Ц.Ьдищ; ie акосистеьш стационара на коныогацношшй перенос Р.пдаз-Ш1Д в бактерии рода сальмонелла / A.B. Алашушша/.-// Тая sa.. С.148-149.

12. Плазыида резистентности как основной фактор адаптации прл внутриболышиои сальмонеллезо / ЮЛ'. Рачковская/.-// Региональная научно-практическая конференция молодых ученых.-"йехашш-ш интеграции биологических систем. проблемы адаптации?- Ставрополь.-, 1989,- С.Ш.

, 13. Связь обсемененносги пиковых продуктов сальмонеллами с заболеваемостью сальмонеллезаыи в г. ростове-на-Дону / В.f. Яцен ко/.- // Тезисы докладов областной конференции молодых ученых. "Эпидемиология, микробиология иммунология бактериальных и вируо-шх инфекций".- Ростов-на-Дону.- 1989,- C.I8I.

14. Тест-система для ускоренно;! индикации энтеробактернй при острых кишечных инфекциях. / A.B. Алешукина, H.A. Рсмааюк/.-

//Тезисы Всесоюзной конференции "Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии'.'- Махачкала.-1950.'-С,9й

15. Ускоре1шая идентификация госпиталышх штампов сальмонелл по степени резистентности к деэиифектантоы - // Там ке.~С.91.

Iö. Экспресс-диагностика госпиталышх шташоз сальмонелл ш-шиного тифа /Ю.К. Рачковская/.-//Тезисы докладов У1 всероссийского съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов.-к., I99I.-C.99.

17. Биологические свойства' сальмонелл, выделенных из иатаяо-гоанатомичаского материала /Ю.К. Рачковская,JI.В. Солдатова/.-//Там же. - СЛЕЗ.

- 21 -

18. ДНК-азная активность, метод дифференциации госпитальных штаммов сальмонелл / В.К, Рачковекая /.-// Лабораторное дело.-MI.-1991,- U. 60-63.

19. Результаты внедрения мероприятий по профилактике саль-монеллеза в г. Ростове-на-Дону /Г.А. Родионова,В.Г. Яценко, Л.А. Лукьянчук, З.К. Долгмурзиева, Г.М. Невзорова,А.В. Куда-нова/.-// Тезисы докладов Уц Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей.- Ж, 1991, - U 445-44?.

Подписано к печати 91 г.

Формат бумаги 60 х 84. 1/16* Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. лист - /

Заказ -399 ' тирза - -/ао Тип. РОДНШ