Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Методы создания исходного материала для селекции лилий

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Методы создания исходного материала для селекции лилий"



С(^угалгсА-На правах рукописи

ПУГАЧЕВА Галина Михайловна

МЕТОДЫ СОЗДАНИЯ ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ ЛИЛИЙ

Специальность 06.01.05 - селекция и семеноводство

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Мичуринск - 2005

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт садоводства им И.В. Мичурина

Научный руководитель: кандидат сельскохозяйственных наук старший научный сотрудник Киреева Маргарита Филипповна

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук,

профессор

Усова Галина Северьяновна; кандидат биологических наук Соловых Наталья Владимировна

Ведущее учреждение - ФГОУ ВПО Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки

Защита диссертации состоится 26 мая 2005 г. в 13м на заседании диссертационного совета Д220.041.01 при Мичуринском государственном аграрном университете по адресу: 393760, Тамбовская обл., г. Мичуринск,

ул. Интернациональная, 101.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мичуринского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан "М'" (К К ^ (А Я 2005г.

Отзывы на автореферат в двух экземплярах, заверенные и скрепленные гербовой печатью, просим направлять ученому секретарю совета.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д220.041.01, кандидат сельскохозяйственных наук

Н.М. Соломаггин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Лилии (род 1л!шт Ь.) - многолетние луковичные декоративные растения. Среди цветочных культур им принадлежит одно из ведущих мест. В настоящее время число сортов Трубчатых лилий по количеству уступает лишь сортам Азиатских гибридов. Ряд декоративных качеств - чистота окраски, красота форм цветков, а также их аромат неизменно привлекают внимание, а потенциальные генетические возможности делают виды, разновидности и гибриды ценным материалом для селекции.

За последние годы интерес к этой культуре вырос за рубежом и в России. Селекционерами Голландии, США и Австралии получены перспективные высскодекоративные отдаленные гибриды между Трубчатыми, Восточными, Длинноцветковыми и Азиатскими гибридами, которые начали завоевывать рынок.

Условия России, в частности обширной ее центральной зоны, существенно отличаются от более благоприятных условий западных стран, поэтому необходимы собственные исследования и свои новые сорта.

Значительный интерес для селекции лилий представляет отдаленная гибридизация, которая является одним из главных методов изменения наследственной природы растительных организмов. При межвидовых скрещиваниях на пути селекционера часто становится проблема несовместимости. Метод выращивания гибридных зародышей на искусственных питательных средах позволяет преодолеть постгамную несовместимость и создать исходный материал для селекции.

Решающее значение в создании новых сортов отводится также экспериментальной алло и аутополиплоидии, так как это эффективный метод получения новых форм с измененным геномным составом.

Семенное размножение - один из основных способов получения массового посадочного материала, приспособленного к условиям местного климата, и является самым простым и экономичным способом размножения Трубчатых гибридов. При этом происходит не только ускорение воспроизводства, но и оздоровление растений, так как при семенном размножении вирусные заболевания потомству практически не передаются.

Цель исследований:

С использованием методов отдаленной гибридизации, эмбриокультуры и полиплоидии создать исходный материал Трубчатых гибридов лилий и подобрать родительские пары для получения однородного семенного потомства.

В связи с этим решались следующие задачи:

1. Определить степень совместимости ряда сортов и видов лилий.

2. Разработать способы преодоления постгамной несовместимости при отдаленных скрещиваниях ЗД^ЭД^уЩЯЗ^ЭДЛАюкультурь!.

3. Изучить эффективность колхицинирования.

4. Подобрать исходные формы для получения однородного семенного потомства.

Научная новизна и практическая значимость.

В результате проведенных исследований получен и изучен гибридный фонд из 5700 сеянцев, из них отобрано около 100 перспективных для селекции.

Разработаны способы преодоления постгамной несовместимости при отдаленных скрещиваниях лилий с помощью методов культуры in vitro, в том числе через культуру каллуса получены полноценные растения от аномальных проростков.

Разработан метод создания амфидиплоидных форм лилий в условиях in vitro.

Впервые в России начата работа по получению сортов-линий Трубчатых гибридов.

Апробация работы

Результаты исследований докладывались на заседаниях Ученого совета, на Всероссийской научно-практической конференции «Повышение эффективности садоводства в современных условиях» (Мичуринск, 2003), были представлены на Международной конференции <'Гснетические ресурсы растениеводства Дальнего Востока» (Владивосток, 2004).

Публикация результатов исследований

По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста, состоит из введения, 5 глав, выводов, практических рекомендаций, содержит 18 таблиц и 58 рисунков. Список использованной литературы включает 166 наименование, в том числе 63 на иностранных языках.

Методика и условия проведения исследований

Экспериментальная работа проведена на базе отдела декоративного садоводства и лаборапории биотехнологии ВНИИС им. И.В.Мичурина в течение 1988 - 1992 и 1998 - 2004 гг. Исследования выполнены на гибридном фонде, созданном М.Ф. Киреевой, Н.Г. Коршиковой.

Работа выполнена в Мичуринском районе Тамбовской области, на территории опытно-производственного хозяйства Всероссийского научно-исследовательского института им. И.В.Мичурина. Участок, на котором

посажены лилии, расположен на пологом юго-восточном склоне террасы реки Лесной Воронеж. Почва участка - мощный глубоковыщелоченный чернозем, сформированный на лессовидной песчаной глине, по механическому составу суглинистый. По ресурсам тепла, влагообеспеченности и климатическим особенностям Тамбовская область благоприятна для возделывания цветочно-декоративных культур, в частности лилий.

Материал исследований:

Вид: L. henryi Baker, 1888 - л. Генри - 9 раздел Международной классификации гибридных лилий.

Сорта: Black Beauty (Блэк Бьюти), Rodeo (Родео), Royal Grace (Роял Грейс) - 8 раздел

Утренняя Звезда - раздел 1.

Star Gazer (Стар Гейзер) -раздел 7.

Lerupe (JTepyne) и 58 гибридов - 6 раздел.

Методика исследований.

Полевые опыты проводили согласно "Программе и методике отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур"(1972 г.) с небольшими изменениями применительно к культуре лилий.

Для преодоления нескрещиваемости использовали укорачивание пестика, постгамной несовместимое!и - культивирование зародышей in vitro, по общепринятой методике культивирования растительных тканей (Бутен-ко,1964 г.). Культивирование изолированных зародышей в условиях in vitro включало несколько этапов:

1. введение в культуру in vitro, получение проростков,

2. размножение гибридов методом чешуевания и через культуру каллуса.

Обработку проростков колхицином и подсчет хромосом в клетках (в меристеме корешков) проводили по методике Н.П. Чувашиной (Программе и методике отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур, 1972 г.)

Для получения полиплоидов в условиях in vitro использовали каллус и чешуйки микролуковичек, которые обрабатывали водными растворами колхицина. Предварительную идентификацию полиплоидов проводили измерением величины устьиц по методике Бреславец (1963).

При изучении отборных сеянцев была использована "Методика первичного сортоизучения цветочных культур" (Болгов, 1998).

Статистическую обработку полученных данных проводили методом дисперсионного анализа (Доспехов, Б.А., 1979) с использованием компьютерной программы Microsoft Excel.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Степень совместимости ряда сортов и видов лилий.

По данном)' разделу исследований ставилась цель выявить границы скрещиваемости ряда сортов и видов лилий и сгруппировать их по степени совместимости. Эксперимент проводился в полевых условиях в период с 1998 по 2002 год В гибридизации использовали: Трубчатые, Восточные, Азиатские и ЛА (Лонгифлорум х Азиатские) гибриды Ежегодно опылялось 150 - 200 цветков в 25 29 скрещиваниях. Гибридизацию проводили с укорачиванием пестика и без Семена с зародышами были получены только в варианте с укорачиванием пестика. За все годы осуществили 125 скрещиваний, из них семена были получены в 19 (табл. 1).

1 Выход гибридных сеянцев в результате отдаленной гибридизации

(1998-2002гг.)

№ Комбинация скрещивания Гибридных семян Сеянцев

всего, шт. с зародышем шт. %

шт. %

1 153-52 х Сгар Гейзер 249 37 14,9 7 18,9

2 153-52 х Стар Гейзер 330 44 13,3 0 0

3 156-68- 1 х Сгар Гейзер 318 33 10,4 15 45,5

4 156-68- 1 х Стар I ейзер 760 245 32,2 31 12,6

5 153 118 - 3 х Стар Гейзер 286 21 7,3 1 4,7

6 114 х Стар Гейзер 648 1 0,15 0 0

7 "8 114 х Стар Гейзер 244 4 1,6 0 0

162 - 175 -1х Утренняя Звезда 382 2 0,5 1 0 0

9 161-114-1 хРоял Грейс 29 5 17,2 0 0

10 161-131-1 хРоял Грейс 190 13 6,8 0 0

11 153-126-2 хРоял! рейс 123 6 4,9 2 33,3

12 Блэк Бьюти х Генри 505 5 1,0 0 0

13 Родео (ЛА) х Азиатские (смесь пыльцы) 386 14 3,6 0 0

14 153 - 40 х Генри 892 5 0,6 0 0

15 153-40 х Генри 148 22 14,9 2 9,1

16 190 х Генри 321 110 34,3 13 11,8

17 Т 10 х Генри 321 27 8,4 1 3,7

18 Т 10 х Генри 619 230 37,2 32 13,9

19 153 - 40 х Блэк Бьюти 493 13 2,6 0 0

Таким образом, проводя отдаленные скрещивания, разделили изученные сорта и виды на две группы: несовместимые и частично совместимые.

К первой группе относятся комбинации скрещивания: Трубчатые х Азиатские, Генри х Восточные, Генри х Азиатские, при использовании Восточных гибридов в качестве материнского растения.

Ко второй группе относятся комбинации скрещивания- Трубчатые х Восточные, Трубчатые х Генри, Трубчатые х ЛА, ЛА х Азиатские, Восточные х Генри, в которых удалось получить гибридные семена. Несовместимость проявилась на уровне потомства. В этой группе перспективно использование метода искусственного выращивания зародышей на питательных средах.

В результате экспериментов установлено, что данные сорта и виды по степени скрещиваемости между собой, в полевых условиях, являются практически несовместимыми.

Для определения выхода жизнеспособных растений в зависимости от условий выращивания (при посеве в почву, проращивании в чашках Петри, выращивании в условиях in vitro) использовали семена первого и второго поколения отдаленных скрещиваний:

• Fj - 156 — 68 — 1 х Стар Гейзер - (Трубчатый х Восточный)

• Fz - 161-103-4 х (Генри х Олимпик) - (Трубчатый х (Генри х Трубчатый))

Установлено, что первое поколение отдаленных скрещиваний можно получить с помощью эмбриокультуры. При посеве в почву семена не проросли, в чашках Петри выход жизнеспособных растений составил 0,9 % . Однако, проращенные семена, высаженные в почву, погибли. Второе поколение более жизнеспособно, и даже при посеве в почву вырастает незначительное количество сеянцев.

Культивирование незрелых гибридных зародышей на искусственной питательной среде.

Изучением вопросов эмбриокультуры начали заниматься в 2000 году. Зародыши извлекали из семян через 40 - 60 дней после опыления, при первых признаках засыхания коробочек. В исследованиях были использованы зародыши от отдаленных и близкородственных (в пределах одной семьи) скрещиваний. Вырезанные зародыши с частью эндосперма, высаженные на питательную среду, через 14-30 дней начинали развитие.

В наших исследованиях для стерилизации использовали 0,04% раствор нитрата ртути и 96 % этиловый спирт. Стерилизация растительных объектов 96% этиловым спиртом, в который погружалась коробочка, а затем обжигалась над пламенем спиртовки, дала лучшие результаты. Это дешёвый, нетоксичный и доступный антисептик, который обеспечивает достаточно качественную стерилизацию объекта и не повреждает зародыши.

Последовательность выращивания гибридных растений из зародышей с образованием проростка и луковички, а также через культуру каллуса и последующую регенерацию растений представлены на рисунке 1.

Развитие зародышей шло двумя путями:

1). образование проростка и луковички:

2), возникновение различных отклонений в процессе развития, образование каллусной ткани.

Аномалии при формировании растений выражаются в отсутствии или резком ослаблении ростовых процессов, отсутствии роста корня или роста корня без развития семядольного листочка, нарушении полярности, образовании этиолированных или спирально скрученных листочков, возникновении некротических участков тканей и последующем усыхании, образовании каллуса. В среднем 56,6 % проростков имели нормальное развитие, 43,4 - с отклонениями. Проценты эти сильно менялись в зависимости от скрещивания.

Высокий процент регенерации был отмечен в скрещиваниях:

• в первом поколении отдаленных скрещиваний (156-68-1 х Стар Гейзер) - 38,5;

• во втором поколении отдаленных скрещиваний (161-103-4 х (Генри х Олимпик) и 153-17-11 х (Генри х Олимпик) - 41,5 и 66,6;

• при близкородственных скрещиваниях (156-28-6 х 156-27-1 и 15627-2 х 151-19-1)-66.6 и 34,8.

Для сохранения отдаленных гибридов брали участки ткани без признаков некроза от аномальных, отмирающих гибридных проростков, высаживали на улучшенную среду Мурасиге и Скуга и индуцировали рост каллусной ткани с последующей регенерацией побегов.

За годы исследований нам удалось получить 106 сеянцев от различных скрещиваний (табл. 2). Это составило 28,7% от введенных в культуру зародышей.

Этап размножения лилий.

Главная задача этого этапа - добиться максимально быстрого размножения гибридов, полученных с помощью эмбриокультуры.

Каллусогенез и органогенез

Каллусные клетки при определенных условиях могут перейти к организованному росту и формированию побегов, но при этом часто возникают явления, нежелательные при микроразмножении растений, а именно изменение плоидности культивируемых клеток; структурные перестройки хромосом; потеря морфогенетического потенциала культивируемыми клетками.

Изменения, происходящие при культивировании каллусов, позволит получить дополнительный исходный материал для селекции.

В наших исследованиях для получения каллуса использовали в качестве эксплантов семядольный и первый настоящий лист. Высаживали на среду Мурасиге и Скуга, дополненную регуляторами роста: 6-БАП - I мг/л, ИМК -0,3 мг/л. Образование каллуса наблюдали через 20 - 30 дней после посадки.

Возможная реакция изолированного экспланта: некроз, отсутствие изменений, образование каллуса и в некоторых случаях наблюдали органогенез. В наших исследованиях каллус не удалось получить в скрещивании 153-40 х Генри.

Для индукции морфогенеза каллусы пересаживали на среду Мурасиге и Скуга, обогащенную витаминами, сахарозой и регуляторами роста. Культуры содержали при I 22 - 25 0 С, освещенности 1000 лк и 16- часовом фотоперио-

де. Спустя 14-20 дней наблюдалось образование хлорофиллоносных зон, а через пять-шесть недель - образование луковичек или чешуек луковичек.

гибридные семена

прорстки

доращивание

микроразмножение и укоренение

каллус или проростки с аномальным развитием

нарастание каллуса

регенерация побегов

обработка колхицином

и

регенерация побегов

адаптация

микроразмножение и укоренение

\\\\\\\\ пересадка в открытый грунт

Рис. 1. Способ преодоления постгамной несовместимости и стерильности межвидовых гибридов лилий

2. Результаты эмбриокультуры

Введено в куль- Процент регене- Развитие зародышей

Комбинация скрещивания нормальное с отклонениями

туру рации шт. % шт. %

156-68-1 х Стар Гейзер 120 38,5 19 41,4 27 58,6

162-175-1 х Утренняя Звезда 2 0 - - - -

153-52 х Стар Гейзер 27 18,9 3 42,8 4 57,2

153-118-3 х Стар Гейзер 17 5,9 0 0 1 100

Т10 х Генри 257 12,8 21 63,6 12 36,4

153-40 х Генри 21 9,1 1 50 1 50

161—103—4х (Генри х Олимпик) 77 41,5 16 50 16 50

153-17-11 х (Генри х Олимпик) 3 66,6 2 100 0 0

153-126-2 хРоял Грейс 6 33,3 0 0 2 100

161-114-1 хРоял Грейс 3 0 - - - -

161-131-1 хРоял Грейс 8 0 - - - -

162-173-4 х Лерупе 12 8,3 0 0 1 100

153-75-5 х Лерупе 7 0 - - - -

Родео х смесь азиатских 14 0 - - - -

156-28-6 х 156-27-1 6 66,6 4 100 0 0

156-27-2 х 151-19-1 23 34,8 6 75 2 25

153-40 х Блэк Бьюти 13 0 - - - -

Всего: 369 28,7 60 56,6 46 43,4

Влияние углеводного питания на процесс роста.

Размер луковичек, полученных с помощью калдусогенеза, колебался от нитевидных (0,05см) до 0,5см в диаметре. Мелкие луковицы не подходят для дальнейшего размножения и адаптации. Необходимо добиться регенерации максимально крупных луковичек. Так как рост практически всех изолированных культур обеспечивается за счет углеводов среды, был поставлен опыт, целью которого было подобрать концентрацию сахарозы, оптимальную для роста микролуковичек.

Для эксперимента использовали гибриды:

6(5) - 153-52 х Стар Гейзер - (Трубчатый х Восточный)

6(1) - 153-52 х Стар Гейзер - (Трубчатый х Восточный)

2(1) - 153-17-11 х (Генри х Олимпик) - (Трубчатый х (Генри х Трубчатый)).

Рост луковиц оказался прямопропорционален концентрации сахарозы в среде для гибридов 6(5) и 6(1). При концентрации 30 г/л размер луковичек составил 0,18 и 0,2 см, 90 г/л - 0,41 и 0,36. У гибрида 2(1) от скрещивания 153-17-11 х (Генри х Олимпик), при увеличении концентрации сахарозы до 90 г/л, размер луковиц уменьшился, и был на уровне контроля. При концентрации 60 г/л - размер луковичек существенно отличался от контроля и составил 0,32см.

Однако повышение концентрации сахарозы в среде неблагоприятно влияло на регенерацию луковичек, и при содержании сахарозы в среде 90 г/л, наблюдали самый низкий его процент. Оптимальным для роста и развития является концентрация сахарозы - 60 г/л, при этом происходит незначительное уменьшение процента регенерации и значительное увеличение размера луковичек.

Влияние периода покоя на органогенез.

Для увеличения коэффициента размножения при длительном культивировании в условиях in vitro провели подбор оптимальной концентрации 6-бензиламинопурина (6-БАП) и выяснили роль периода покоя. Для постановки этого опыта, часть пробирок содержали при t 22 - 25 0 С, освещенности 2000 лк и длине дня 16 часов, другую - в течение 8 недель при t (-4 0 С, в бытовом холодильнике.

Проведенные нами исследования показали, что развитие адвентивных луковичек идет более активно после периода покоя. Образование луковиц шло на безгормональной среде. Повышение концентрации БАП до 2- 3 мг/л. подавляло образование луковичек. Содержание БАП в среде также влияло на размер образовавшихся луковичек. Максимальный размер луковичек наблюдали на среде с БАП 0,5 - 1,0 мг/л.

Укоренение и адаптация растений.

Пересадка растений - регенерантов в субстрат является ответственным этапом, завершающим процесс микроклональнош размножения. На этом этапе наблюдался значительный выпад растительного материала. Для снижения потерь в период адаптации были поставлены опыты по влиянию периода покоя, субстрата на адаптацию, с учетом состояния растения на этот период.

Наиболее благоприятное время для пересадки растений март-апрель. Луковички, посаженные в этот период, к августу достигают размеров 0,8-1,2 см в диаметре и вполне благополучно переносят пересадку в полевые условия. При более поздних сроках луковички не успевают вырасти, и пересадка переносится на май-июнь следующего года.

Укоренение микролуковичек проводили на среде Мурасиге - Скуга, с добавлением ИМК- 0,1-0,3 мг/л. При этих концентрациях ИМК процесс ризо-генеза проходил успешно.

Период стратификации необходим почти для всех групп лилий. Азиатским гибридам достаточно 8-10 недель, Восточным - 10-12, а Трубчатым-4-6. Проведенные нами исследования показали, что рост луковичек возможен и без периода стратификации, однако рост и развитие растений были лучше после охлаждения.

Для линий даны следующие рекомендации почвенных субстратов: В.В. Францу зенок (1997) - смесь торфа с песком или перлитом (1:1) для лилий Азиатской группы; 1 Zhola и др, (1993), A. Evans (1995) - указывают просто удобренный субстрат, не уточняя какой именно; D. Egger (1988) -почву, торф и вермикулит в различных сочетаниях.

Трубчатые гибриды плохо переносят кислую реакцию почвы, наиболее подходящим для них является нейтральная или даже слабощелочная. Поэтому в качестве субстрага использовали перегной, песок и дерновую землю (1:1:1) (контроль), а в опыте использовали тот же субстрат с добавлением измельченного сфагнового мха.

Проведенные исследования показали, что размер луковичек и субстрат существенно влияют на их приживаемость в нестерильных условиях. Адаптация значительно лучше прошла при использовании мха. Сфагновый мох, обладая антибиотическими свойствами (Жизнь растений, 1978), помогает выжить луковичкам. При высадке крупных (0,3-0,6 см) луковичек в опыте приживаемость составила 82- 85, а в контроле - 20-26%.

Использование мелких луковичек для адаптации нецелесообразно, так как потери при высадке значительные: в контроле -81-83 %, в опыте- 36-49 от высаженных растений. Использование мха немного смягчает эту неприглядную картину, однако, работая с отдаленными гибридами, жалко терять уникальный генофонд.

Экспериментальное получение полиплоидов лилий.

Для получения полиплоидных форм использовали 30-дневные проростки от скрещиваний: гибрид 112 х гибрид 109 и 153-17-1 х гибрид Т 28.

Сеянцы обрабатывали 0,5 и 1% водными растворами колхицина в течение 15, 20, 24, 48 и 72 часов, по 60 штук в каждом варианте. Во время обработки размер луковичек у всех сеянцев был приблизительно одинаковым - 0,2 см.

После обработки колхицином растения около месяца находились в угнетенном состоянии Гибель исходного материала составила от 20 до 95% в зависимости от варианта обработки и генотипа. В контроле растения через 1014 дней после посадки пошли в рост. Приживаемость их составила 100% (табл 3).

3. Действие колхицина на сеянцы лилий (1999 - 2000 гг.)_

Режим обработки Процент Средний размер луковичек, см.

экспозиция, час концентрация колхицина, % выживших растений измененных от числа

обработанных выживших

112 х109

15 контроль 100 0 0 0,86

0,5 66,6 5,0 7,5 0,54

1,0 53,3 з,з 6,2 0,64

24 контроль 100 0 0 0,74

0,5 56,6 8,3 14,7 0.53

1,0 51,6 3,3 6,5 0,50

48 контроль 100 0 0 0,91

0,5 10 1,6 16,6 0,58

1,0 8,3 0 0 0,56

72 контроль 100 0 0 1,27

0,5 8,3 0 0 0,6

1,0 5,0 0 0 0,58

НСРО5=0,17

153-17-1 хТ 28

15 Контроль 100 0 0 1,0

0,5 73,3 5,0 6,8 1.0

1,0 80 3,3 4,2 0,84

20 Контроль 100 0 0 1,32

0,5 66,6 6,6 10 0,99

1,0 65 3,3 5,1 0,98

24 Контроль 100 0 0 1,38

0,5 75 10 13,3 0,87

1,0 68,3 1,6 2,4 0,83

48 Контроль 100 0 0 1,4

0,5 48,3 1,6 3,4 0,75

1,0 1 25 0 0 0,78

НСР05 = 0,22

Учет размера луковиц проводили при высадке растений в почву, через год после обработки. Луковицы, обработанных колхицином растений, были намного меньше и существенно отличались от контрольных растений.

В контроле этот показатель был напрямую связан с экспозицией: чем дольше растения находились в воде и эксикаторе вместе с обрабатываемыми растениями, тем крупнее были луковички. Можно предположить, что пары алкалоида колхицина стимулировали рост растений. Как отмечает Бреславец

(1963), существует много фактов, свидетельствующих о стимуляции ростовых процессов под влиянием колхицина. Изменения, которые происходят при действии колхицина в молодых растущих частях, сходны с изменениями, вызываемыми некоторыми ростовыми веществами группы ауксина или гетероа-уксина.

Плоидность определяли подсчетом хромосом в клетках (в меристеме корешков). Фиксацию материала проводили через год после обработки. Опытные и контрольные луковицы сильно отличались не только размером, но и внешним видом. При обработке 0,5% колхицином при экспозиции 24, 48 и 72 часа встречались растения без точек роста и без корней. Луковичка была измененной, и напоминала чешуйку, на которой образовалась другая чешуйка. Проверить плоидность таких растений не было возможности.

Установлено, что лучшие результаты получены при 24-часовой экспозиции в 0,5 % растворе. В скрещивании 112x109 обнаружили 5 полиплоидных растений, 153-17-1 х Т 28 - 6, что составило 14,7 и 13,3 % измененных от числа выживших Использование 1% раствора колхицина нецелесообразно из-за низкого выхода полиплоидных растений.

Всего было обработано 1440 сеянцев и получено 32 полиплоидных растения. В 2004 году наблюдали первое цветение. Зацвело 56% диплоидных форм, из полиплоидных только 1 растение.

Гибридный сеянец № 26. Тетраплоидная форма гибрида, полученного от скрещивания 153-17-1 х Т 28. Окраска околоцветника розовато-белая, с зелеными пыльцевыми нитями, пыльники - желтые. По высоте растения разницы между полиплоидной формой и диплоидной замечено не было. Длина замыкающих клеток устьиц диплоидных форм Трубчатых гибридов составляет 90 - 110 мкм (в среднем- 98), у полиплоидных форм - 105 - 125 мкм (средний показатель- 118), т.е. в 1,2 раза больше, чем диплоидных. Примерно на такую же величину различается размер пыльцевых зерен. Варьирование данного признака у диплоидных форм - 80 - 100, тетраплоидной - 95- 120 мкм. Было отмечено различие между диплоидными и тетраплоидными формами по срокам цветения. Тетраплоидная форма зацвела на 10 дней позже, когда диплоидные лилии уже отцвели.

Скрещивание тетраплоидов и диплоидов является одним из самых эффективных способов получения триплоидов. Для получения мейотических полиплоидов провели 15 скрещиваний между диплоидными формами и тет-раплоидным сеянцем Несмотря на то, что 2004 год был благоприятным для завязывания семян, в данных скрещиваниях семян с зародышами было очень мало.

Получение полиплоидных форм у сеянцев неперспективно по следующим причинам:

1. Гибель исходного материала составляет от 20 до 95 %.

2 Выход ценных сеянцев в гибридных семьях обычно низок, поэтому слишком мала вероятность получения ценных гибридных форм при колхи-цинировании.

Однако не исключается возможность использования данного метода при обработке проростков видовых лилий или уже апробированных скрещиваний.

Получение полиплоидов в условиях in vitro.

Для межвидовых гибридов лилий характерно проявление стерильности, что в значительной мере ограничивает использование их в селекции. Для ускорения селекционного процесса и преодоления стерильности межвидовых гибридов проводили полиплоизацию тканей гибрида в условиях in vitro с последующей регенерацией растений (рис. 1). В научной литературе вопросы колхицинирований в условиях in vitro практически не обсуждаются. И.В. Титова (1989), для преодоления стерильности гибридов Fi А.сера х A.nutans использовала методику, разработанную Полумордвиновой и Марьяхиной. Основой их метода является полиплоидизация ткани гибрида in vitro, на питательной среде, содержащей колхицин. Отличиями в нашей работе было исключение колхицина из среды и использование большей концентрации колхицина при небольшой экспозиции.

Для эксперимента использовали гибриды:

• 6(5) - 153-52 х Стар Гейзер - (Трубчатый х Восточный)

• Белый 1 - Трубчатый.

Обработку проводили 0,05, 0,1 и 0,2% растворами колхицина с экспозицией 1, 2 и 3 часа. В стерильных условиях луковички, размер которых был не менее 0,5 см в диаметре, извлекали из пробирок, снимали 3-4 чешуи. Чешуйки и каллус помещали в стерильный водный раствор колхицина, с последующей промывкой в стерильной воде. В контроле обрабатываемые ткани на такое же время помещали в воду. Регенерацию тканей проводили на среде Мурасиге и Скуга, содержащей ИМК - 0,1 мг/л и БАП- 0,5 мг/л.

Реакция тканей на обработку была различной.

Самым чувствительным оказался каллус. После обработки в течение 2 и 3 часов каллус оставался без изменений 7-10 дней, затем потемнел и погиб. Гибель составила 100%. В контроле из каллуса были получены растения нормальной морфологии.

Выживаемость эксплантов в контроле составила 59-63%, при колхи-плоидии - 13-25%. Повышение концентрации колхицина было обратно пропорционально проценту регенерации. Коэффициент размножения во всех вариантах, кроме одного, существенно не отличался и составил 3,5-4 луковички на эксплант. При концентрации колхицина 0,2% и экспозиции 1 час, данный показатель был равен 0,25 штук на эксплант. Повышение концентрации колхицина привело к уменьшению количества регенерировавших луковичек. Образовавшиеся луковички были небольших размеров (0,1 - 0,2 см) и были пересажены на новую среду для доращивания.

Длину замыкающих клеток устьиц измеряли при пересадке луковичек в стерильную почвенную смесь. П. Шенк (Schenk, 1987) рекомендует использовать данный косвенный признак для ранней диагностики полиплоидных растений.

Для измерения брали листья одинакового размера. Эпидермис снимали с нижней стороны средней части листа. Было отмечено, что этот признак почти во всех вариантах не изменяется и средний размер устьиц равен 59,3 - 60,5 мкм. При режиме обработки 0,05% колхицином в течение 1 часа этот показатель составил 64,2 мкм. В этом варианте были растения с более крупными устьицами, однако количество их было незначительно.

Использование каллуса для получения полиплоидов нецелесообразно из-за большой гибели исходного материала и низкого выхода тетраплоидных растений.

Эксперименты по обработке чешуй микролуковиц показали, что даже незначительное повышение концентрации колхицина и длительности экспозиции приводит к полному угнетению регенерационных способностей чешуй и развитие идет только через культуру каллуса.

Регенерационные способности во многом зависят от генотипа растений: Трубчатый гибрид Белый 1 перенес отравляющее действие колхицина легче, чем межвидовой гибрид. При экспозиции 1 час процент регенерации гибрида Белый 1 в опытных вариантах был достаточно высоким и существенно не отличался от контроля, гибрида 6(5) - при концентрации колхицина 0,1% выживаемость эксплантов составила 54%. В контроле процент регенерации обоих гибридов был достаточно высоким. Адвентивные луковички развивались нормально с коэффициентом размножения 2,75 - 3,75 у гибрида Белый 1 и 2,0 - 3,5 у гибрида 6 (5).

Графики (Рис.2-4) показывают варьирование длины замыкающих клеток устьиц при различных экспозициях. В контроле размер устьиц варьирует от 48 до 72 мкм. По сравнению с контролем в опытных вариантах встречаются растения с размерами устьиц от 48 до 88 мкм.

Измерение величины устьиц показало, что если использовать только один критерий: длину замыкающих клеток устьиц, то разница между контролем и опытом существенна в трех вариантах. Однако если брать в расчет длину и ширину устьиц и вычислить их площадь, то разница существенна во всех вариантах по сравнению с контролем. По мнению Бреславец (1963), многие замыкающие клетки устьиц межвидовых гибридов и полиплоидов развиваются больше в ширину, чем в длину и вычисление площади дает несравненно более чувствительный показатель.

Критерием полиплоидного состояния при предварительном отборе кол-хицинированных растений является комплекс морфо-анатомических признаков - больший в сравнении с диплоидами размер устьиц, листья с плотной текстурой или с волнистой поверхностью листовых пластинок.

Распознавание полиплоидов на ранних стадиях развития играет большую роль, так как позволяет расширить опыты за счет браковки диплоидов. Однако окончательный вывод о плоидности того или иного растения можно сделать только на основании подсчета хромосом.

контроль 0,05 % колхицин 0,1 % колхицин 0,2 % колхицин

56 60 64 68 72 76 Размер устьиц, мкм

Рис. 2. Варьирование размера устьиц гибрида Белый 1 при экспозиции 1 час

>х

г

о п

а § *

ш к

и ф

т

е; о

48 52 56 60 64 68 72 76 80 84 88 Размер устьиц,мкм

Рис. 3. Варьирование размера устьиц гибрида Белый 1 при экспозиции 2 часа

контроль 0,05 % колхицин 0,1 % колхицин 0,2 % колхицин

48 52 56 60 64 68 72 76 80 84 88 Размер устьиц, мкм

Рис. 4. Варьирование размера устьиц гибрида Белый I при экспозиции 1 час

Изучение самосовместимости Трубчатых гибридов.

Изучение самоопыления у лилий представляет интерес в связи с разработкой линейной селекции этой культуры, поскольку первое требование метода инбридинга, при котором используют самоопыление внутри перекрестноопыляющихся форм, - наличие индивидуумов с определенной способностью к самофертильности.

Проведенные исследования в течение 1989-1992 и 1998-2002гг. показали, что некоторые сорта и гибриды Трубчатых лилий способны образовывать семена при принудительном самоопылении. Завязываемость семян очень низкая СО,84 - 15,7%), в зависимости от гибридной формы. Все изученные гибриды лилий можно разделить на две группы: самостерильные и с низкой степенью самофертильности. Большинство гибридов, кроме 13-196-5 и 15340 показали себя самофертильными один раз за все годы.

При перекрестном опылении во всех случаях получены более высокие результаты, чем при самоопылении. Семена от само- и перекрестного опыления ничем не отличались. Зародыш хорошо просматривался. Однако при посеве в почву всхожесть их была различной. От самоопыления был получен только один сеянец, который так и не удалось довести до цветения.

Растения склонные к самофертильности у Трубчатых лилий встречаются редко. Для этой культуры, как перекрестника, наиболее типична самостерильность растений, служащая основным препятствием на пути создания гомозиготных линий Поэтому для создания инбредных линий наиболее подходящим способом являются сестринские скрещивания.

Подбор исходных пар для получения стрейнов - один из самых ответственных моментов гибридизации. На первом этапе работы одним из основных условий, которых мы придерживались, было фенотипическое сходство родителей. Для гибридизации использовали формы, отобранные по комплексу признаков: декоративности, устойчивости к болезням и неблагоприятным условиям среды.

Расщепление по окраске околоцветника было отмечено во всех скрещиваниях Родительские формы, которые дали достаточно выровненное потомство и гибридные формы от этих скрещиваний использовали для получения второго поколения.

При внутрисемейных скрещиваниях процент жизнеспособных семян и сеянцев, был не ниже, чем в межсортовых скрещиваниях. В первом поколении от близкородственных скрещиваний признаков дегенерации не наблюдалось.

Депрессия при самоопылении и сестринских скрещиваниях наступает не в одно время. При самоопылении уже в первом поколении не удалось получить нормальных сеянцев. При сибс скрещиваниях всхожесть сеянцев была такой же, как при межсортовых. Этому явлению можно дать следующее объяснение. Инбридинг в форме сестринских скрещиваниях является не столь резкой формой как самоопыление, а так как для скрещиваний отбирались лучшие растения, то угнетающее действие инбридинга не было заметно.

Опенка экономической эффективности размножения лилий

В условиях рыночных отношений экономическая эффективность возделывания сельскохозяйственных культур является первостепенным фактором, определяющим целесообразность закладки промышленных насаждений.

Цветоводство - одна из наиболее развитых и высокодоходных отраслей сельского хозяйства в большинстве стран мира. При этом она продолжает развиваться очень высокими темпами, особенно в европейских странах. К сожалению, в России почти нет хозяйств, занимающихся размножением лилий. Продуктивность цветочных культур определяется сортовыми особенностями, природно-климатическими условиями произрастания, уровнем агротехники и другими факторами.

Расчет экономической эффективности выращивания посадочного материала выполнен на основе технологической карты, учитывающей агротехнические требования культуры. Нами учитывались нормы посадки на 1 га площади, комплекс материально-денежных затрат, выход стандартного посадочного материала.

При закладке участка луковичками, полученными методом чешуевания, большие затраты приходятся на содержание маточника.

Семенное размножение не только ускоряет производство посадочного материала Трубчатых гибридов, но при этом происходит оздоровление посадочного материала.

При вырашивании луковиц из семян себестоимость одной луковицы составила 6,60, вегетативном - 10,60 рублей (табл. 4). Спрос на луковицы Трубчатых лилий высокий и это определяет цены (средняя цена реализации -25 рублей). При этом рентабельность производства луковиц из семян в два раза выше, чем при вегетативном. Прибыль на 1 га насаждений при семенном размножении- 1470 тыс. руб.

4. Экономическая эффективность выращивания Трубчатых лилий

Показатели Способ размножения

вегетативный семенной

Выход стандартных луковиц с 1 га, тыс. шт. 80 80

Прямые затраты на 1 га насаждений, тыс. руб. 850 530

Себестоимость 1 луковицы, руб. 10,6 6,60

Средняя цена реализации луковиц, руб. 25 25

Чистый доход с 1 га, тыс. руб. 1150 1470

Уровень рентабельности, % 135 277

выводы

1 Применение межвидовой гибридизации, культивирования гибридных зародышей и экспериментальной полиплоидии перспективно для получения исходного селекционного материала, необходимого для создания высокодекоративных, зимостойких и устойчивых сортов лилий.

2 Скрещивания между Трубчатыми, Восточными, Азиатскими и Лон-гифлорум- Азиатскими гибридами, проведенные в полевых условиях, являются, как правило, несовместимыми.

3. Для преодоления постгамной несовместимости при отдаленных скрещиваниях, повышения фертильности полученных межвидовых гибридов следует использовать метод культуры in vitro.

4. Получение жизнеспособных растений от аномальных проростков возможно посредством культуры каллуса и последующей регенерации растений.

5. При длительном культивировании в условиях in vitro на формирование адвентивных луковичек на чешуях лилий стимулирующее действие оказывает охлаждение растений в течение восьми недель при температуре +40 С.

6. Повышение концентрации сахарозы до 60 г/л на этапе доращивания луковиц при культивировании лилий способствует значительному увеличению размера луковичек.

7. Выявлено, что высокая приживаемость расгений в условиях in vivo достигается при высадке луковичек размером не менее 0,3 см и при использовании в качестве субстрата дерновой земли, перегноя, песка в соотношении (1:1:1) с добавлением сфагнового мха.

8 Экспериментальное получение полиплоидов возможно всеми изученными способами колхицинирования. Наиболее эффективным методом получения полиплоидных форм является обработка чешуй луковиц 0,05 % водным раствором колхицина в течение одного часа.

9 Использование каллуса для получения полиплоидов и обработка сеянцев лилий 0,5 и 1% водными растворами колхицина с экспозицией 48 и 72 часа нецелесообразно из-за большой гибели исходного материала и низкого выхода тетраплоидных растений.

10. По степени самосовместимости Трубчатых гибридов выделено две группы: самостерильные и с низкой степенью самофертильности.

11 Трубчатые гибриды гетерозиготны по признаку окраски венчика.

12. Установлено, что семьи: 116 х 117,123 х 124, 124 х 123, 126 х 127, 127 х 126, ТЗ х Т4, Т4 х ТЗ, 142 х 141, 152 х 151, 132 х нежно-розовый, Т34хТ28, 144 х роз.1 имеют довольно выровненное потомство. Исходные формы и гибриды, полученные в результате этих скрещиваний, рекомендуются для использования в селекционной работе.

13. Исходные формы 104, 105, 119, 118, Т 7, Т 8, Т 1, Т 2, Т 39,Т 24 нецелесообразно использовать для получения сортов - линий, поскольку в их потомстве наблюдается значительное расщепление по окраске околоцветника и срокам цветения.

14. Выявлена высокая рентабельность выращивания луковиц Трубчатых гибридов из семян.

15. В процессе работы выделены формы с оригинальной окраской околоцветника, слабым ароматом, с направленными вверх цветками, устойчивые к заболеваниям.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Для получения исходного селекционного материала лилий с помощью ' межвидовой гибридизации и эмбриок>льтуры отдаленных гибридов реко-

мендуется следующая последовательность операций:

1. Коробочки перед вычленением из них зародышей промываются в мыльном растворе и прополаскиваются в проточной водопроводной воде. Для стерилизации используется 96% этиловый спирт, в который погружается коробочка, а затем обжигается над пламенем спиртовки

2. Изоляция и культивирование зародышей, вырезанных с кусочком эндосперма, проводится на среде Мурасиге и Скуга.

3. Культивирование изолированных зародышей целесообразно проводить в пять этапов:

1 этап - введение в культуру и получение проростков или каллуса, при I 22 - 25 0С, в темноте, в течение 3-4 недель.

2 этап - доращивание луковиц до размеров 5-10 мм при I 22 - 25 0 С, освещенности 1 ООО лк и 16- часовом фотопериоде

3 этап - размножение гибридов методом чешуевания луковичек и использования листовых эксплантов. Дорашивание луковиц до размеров 5-10 мм при 122 - 25 0 С, освещенности 1000 лк и 16- часовом фотопериоде.

4 этап - укоренение луковичек на среде Мурасиге и Скуга, ИМК -0,10,3 мг/л, при I 22 - 25 0 С, освещенности 1000 лк и 16- часовом фотопериоде, прохождение периода покоя в бытовом холодильнике - в течение восьми недель при 1+4° С.

5 этап - для адаптации растений лучше использовать перегной, песок и » дерновую землю в соотношении (1:1:1) с добавлением измельченного сфагнового мха.

Луковички высаживаются в пластмассовые контейнеры или ящики и прикрываются полиэтиленовой пленкой на 2-3 недели.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Иванова, Н.В. Микроклональное размножение азиатских гибридов лилий/ Н.В Иванова, Г М. Пугачева// Основные итоги и перспективы научных исследований ВНИИс им.И.В.Мичурина: Сб. науч. тр., / Тамбов: издательство ТТТУ, 2001. -Т. 1 -С. 199-203.

2. Пугачева, Г М. Межвидовая совместимость при скрещивании в роде Lilium./ Г.M. Пугачева, M Ф.Киреева.// Повышение эффективности садоводства в современных условиях: Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Мичуринск, 22- 24 декабря 2003. 1 МичГАУ.-Мичуринск, 2003.-T.3. - С. 255- 259.

3. Пугачева, Г.М. Эмбриокультура отдаленных гибридов лилий./ Г.М. Пугачева // Повышение эффективности садоводства в современных условиях: Материалы Всероссийской научно-практической конференции, 22- 24 декабря 2003/ МичГАУ.- Мичуринск, 2003.-T.3 - С. 260- 265.

4 Пугачева, Г.М. Клональное микроразмножение отдаленных гибридов лилий / Г.М Пугачева // Генетические ресурсы растениеводства Дальнего Востока- Международная конференция. Владивосток: Дальнаука, 25-27 августа 2004,- С. 393-397.

5. Пугачева, Г.М. Лилии Трубчатые Гибриды / Г.М. Пугачева // Цветоводство №2, 2005. -С. 24.

Отпечатано в типографии ФГОУ ВПО МичГАУ Подписано в печать 12.04.05. г. Формат 60x84 '/16, Бумага офсетная № 1. Усл.печл. 1,27 Тираж 100 экз. Ризограф Заказ № 11522

Мичуринский государственный аграрный университет 393760, Тамбовская обл., г.Мичуринск, ул. Интернациональная, 101, тел. +7 (07545) 5-26-35 E-mail: vvdem@mgau.ru

1-7548

РНБ Русский фонд

2006-4 5013

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Пугачева, Галина Михайловна

Страницы

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ДОСТИЖЕНИЙ МИРОВОЙ И ОТЕЧЕСТВЕННОЙ СЕЛЕКЦИИ ТРУБЧАТЫХ И ОРЛЕАНСКИХ ГИБРИДОВ ЛИЛИЙ

1.1. Классификация рода Lilium L

1.2. Селекция Трубчатых и Орлеанских гибридов (Trumpet and Aurelian hybrids), история и современность

1.3. Отдаленная гибридизация лилий

1.4. Эмбриокультура и микроразмножение межвидовых гибридов

1.5. Полиплоидия в селекции лилий

1.6. Использование инбридинга в создании сортов-линий (стрейнов)

2. ЦЕЛЬ, ЗАДАЧИ, УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.Цель и задачи исследований

2.2. Агроклиматическая характеристика района

2.3. Краткое описание сортов, видов и гибридных форм лилий, использованных в исследованиях

2.4. Методика исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Степень совместимости ряда сортов и видов лилий

3.2. Культивирование незрелых гибридных зародышей на искусственной питательной среде

3.2.1. Особенности развития зародышей на начальном этапе культивирования

3.2.2. Этап микроразмножения лилий

3.2.2.1.Каллусогенез и органогенез

3.2.2.2. Влияние углеводного питания на процесс роста

3.2.2.3.Влияние периода покоя на органогенез

3.2.3. Укоренение и адаптация растений

3.3. Экспериментальное получение полиплоидов лилий

3.4. Получение сортов-линий

3.4.1. Изучение самосовместимости Трубчатых гибридов

3.4.2. Подбор пар для скрещивания и изучение потомства для получения сортов-линий

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ. ОПИСАНИЕ

ОТБОРНЫХ СЕЯНЦЕВ

5.ОЦЕНКА ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ

ВЫРАЩИВАНИЯ ЛИЛИЙ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Методы создания исходного материала для селекции лилий"

Лилии (род Lilium L.) - многолетние луковичные декоративные растения. Среди цветочных культур им принадлежит одно из ведущих мест. Большое разнообразие видов, разновидностей, гибридных форм позволяет использовать их для украшения садов и парков, для выгонки в зимне-весенний период и для срезки в открытом грунте. Лилии издавна использовали как лечебное средство в народной медицине, а также в косметике и парфюмерии, в Восточной Азии культивировали луковицы белоснежной лилии для питания и лечения (Былов В.Н., Зайцева E.H., 1990; Журавлева Э.А., 1989; Мордак Е.В., 1982).

Трубчатые гибриды являются одной из самых ценных групп лилий. В настоящее время число сортов Трубчатых лилий по количеству уступает лишь сортам Азиатских гибридов. Ряд декоративных качеств - чистота окраски, красота форм цветков, а также их аромат неизменно привлекают внимание, а потенциальные генетические возможности делают виды, разновидности и гибриды ценным материалом для селекции.

За последние годы интерес к этой культуре вырос за рубежом и в России. Селекционерами Голландии, США и Австралии получены перспективные высокодекоративные отдаленные гибриды между Трубчатыми, Восточными, Длинноцветковыми и Азиатскими гибридами, которые начали ?явое-вывать рынок.

Условия России, в частности, обширной ее центральной зоны, существенно отличаются от более благоприятных условий западных стран, поэтому необходимы собственные исследования и свои новые сорта.

Основными направлениями работы с Трубчатыми и Орлеанскими гибридами является создание высокодекоративных сортов с ослабленным ароматом, устойчивых к заболеваниям, повышение их зимостойкости и коэффициента размножения.

Значительный интерес для селекции лилий представляет отдаленная гибридизация, которая является одним из главных методов изменения наследственной природы растительных организмов. При межвидовых скрещиваниях на пути селекционера часто становится проблема несовместимости. Метод выращивания гибридных зародышей на искусственных питательных средах позволяет преодолеть постгамную несовместимость и создать исходный материал для селекции.

Решающее значение в создании новых сортов отводится также экспериментальной алло-и аутополиплоидии, так как это эффективный метод получения новых форм с измененным геномным составом.

Семенное размножение - один из основных способов получения массового посадочного материала, приспособленного к условиям местного климата, и является самым простым и экономичным способом размножения Трубчатых гибридов. При этом происходит не только ускорение воспроизводства, но и оздоровление растений, так как при семенном размножении вирусные заболевания потомству практически не передаются (Hoffman М., 1997).

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Пугачева, Галина Михайловна

выводы

1. Применение межвидовой гибридизации, культивирования гибридных зародышей и экспериментальной полиплоидии перспективно для получения исходного селекционного материала, необходимого для создания высокодекоративных, зимостойких и устойчивых сортов лилий.

2. Скрещивания между Трубчатыми, Восточными, Азиатскими и Лон-гифлорум-Азиатскими гибридами, проведенные в полевых условиях, являются, как правило, несовместимыми.

3. Для преодоления постгамной несовместимости при отдаленных скрещиваниях, повышения фертильности полученных межвидовых гибридов следует использовать метод культуры in vitro.

4. Получение жизнеспособных растений от аномальных проростков возможно посредством культуры каллуса и последующей регенерации растений.

5. При длительном культивировании в условиях in vitro на формирование адвентивных луковичек на чешуях лилий стимулирующее действие оказывает охлаждение растений в течение восьми недель при температуре +4° С.

6. Повышение концентрации сахарозы до 60 г/л на этапе доращивания при культивировании лилий способствует значительному увеличению размера луковичек.

7. Выявлено, что высокая приживаемость растений в условиях in vivo достигается при высадке луковичек размером не менее 0,3 см и при использовании в качестве субстрата дерновой земли, перегноя, песка в соотношении (1:1:1) с добавлением сфагнового мха.

8. Экспериментальное получение полиплоидов возможно всеми изученными способами колхицинирования. Наиболее эффективным методом получения полиплоидных форм является обработка чешуй луковиц 0,05 % водным раствором колхицина в течение одного часа.

9. Использование каллуса для получения полиплоидов и обработка сеянцев лилий 0,5 и 1% водными растворами колхицина с экспозицией 48 и 72 часа нецелесообразно из-за большой гибели исходного материала и низкого выхода тетраплоидных растений.

10. По степени самосовместимости Трубчатых гибридов выделено две группы: самостерильные и с низкой степенью самофертильности.

11. Трубчатые гибриды гетерозиготны по признаку окраски венчика.

12. Установлено, что семьи: 116 х 117,123 х 124, 124 х 123, 126 х 127, 127 х 126, ТЗ х Т4, Т4 х ТЗ, 142 х 141, 152 х 151, 132 х нежно-розовый, Т34 х Т28, 144 х роз.1 имеют довольно выровненное потомство. Исходные формы и гибриды, полученные в результате этих скрещиваний, рекомендуются для использования в селекционной работе.

13. Исходные формы: 104, 105, 119, 118, Т 7, Т 8, Т 1, Т 2, Т 39,Т 24 нецелесообразно использовать для получения сортов - линий, поскольку в их потомстве наблюдается значительное расщепление по окраске околоцветника и срокам цветения.

14. Выявлена высокая рентабельность выращивания луковиц Трубчатых гибридов из семян.

15. В процессе работы выделены формы с оригинальной окраской околоцветника, слабым ароматом, с направленными вверх цветками, устойчивые к заболеваниям.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Для получения исходного селекционного материала лилий с помощью межвидовой гибридизации и эмбриокультуры отдаленных гибридов рекомендуется следующая последовательность операций:

1. Коробочки перед вычленением из них зародышей промывают в мыльном растворе и прополаскивают в проточной водопроводной воде. Для стерилизации используют 96% этиловый спирт, в который погружают коробочку, а затем обжигают над пламенем спиртовки.

2. Изоляция и культивирование зародышей, вырезанных с кусочком эндосперма, проводится на среде Мурасиге и Скуга, модифицированной для введения в культуру, регенерации и укоренения побегов.

3. Культивирование изолированных зародышей целесообразно проводить в 5 этапов.

1 этап - введение в культуру и получение проростков или каллуса, при 1 22 - 25 0 С, в темноте, в течение 3-4 недель.

2 этап - доращивание луковиц до размеров 5-10 мм при I 22 - 25 0 С, освещенности 1000 лк и 16- часовом фотопериоде.

3 этап - размножение гибридов методом чешуевания луковичек и использования листовых эксплантов. Доращивание луковиц до размеров 5-10 мм при 1 22 - 25 0 С, освещенности 1000 лк и 16- часовом фотопериоде.

4 этап - Укоренение луковичек н? среде Мурасиге и Скуга, ИМК -0,10,3 мг/л, при I 22 - 25 0 С, освещенности 1000 лк и 16- часовом фотопериоде, прохождение периода покоя в бытовом холодильнике - в течение 8 недель при I +4 0 С.

5 этап - Использование в качестве субстрата для адаптации растений смесь перегной, песок и дерновая земля (1:1:1) с добавлением измельченного сфагнового мха. Луковички высаживают в пластмассовые контейнеры или ящики и прикрывают полиэтиленовой пленкой на 2-3 недели.

134

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Пугачева, Галина Михайловна, Мичуринск

1. Баранова, M.B. Лилии / М.В.Баранова. - Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1990. - 384 с.

2. Баранова, М.В. Луковичные растения семейства Лилейных (география, биоморфологический анализ, выращивание). / М.В.Баранова.- Санкт-Петербург: Наука, 1999. 229 с.

3. Баранова, М.В. Трубчатые лилии./ М.В.Баранова. // В мире растений, 2001. № 11.- С.28 - 33.

4. Болгов, В.И. Методика первичного сортоизучения цветочных культур/ В.И. Болгов, Т.В. Евсюкова, В.В. Козина, М.А. Пустынников//Москва, 1998. -40 с.

5. Бородина, H.A. Полиплоидия в интродукции древесных растений / Н.А.Бородина. М.: Наука, 1982.- 177 с.

6. Бреславец, Л.П. Полиплоидия в природе и опыте/ Л.П. Бреславец. -М.: Академии наук СССР, 1963. 364с.

7. Бриггс, Ф. Научные основы селекции растений / Ф. Бриггс, П. Ноулз. М.: Колос, 1972.-399 с.

8. Брюбейкер, Д.Л. Сельскохозяйственная генетика/ Д.Л. Брюбейкер. -М.Колос, 1966. -223с.

9. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений/ Р.Г.Бутенко.- М.: Наука, 1964. 272с.

10. Былов, В.Н. Выгонка цветочных луковичных растений: (Биологические основы) / В.Н. Былов, E.H. Зайцева. М.: Наука, 1990. - 240 с.

11. Вавилов, Н.И. Значение межвидовой и межродовой гибридизации в селекции и эволюции/ Н.И. Вавилов. // Изв. АН СССР, сер. биол.- 1938 3. -С. 543.

12. Грот, В.А. Лилии и их культура/ В.А. Грот. М.: Изд. МГУ, 1966.91с.

13. Диксон, P.A. Изолирование и поддержание каллусных и суспензионных культур клеток. / P.A. Диксон // Биотехнология растений: культура кле-ток./Пер.с англ. В.И. Негрука-М.: Агропромиздат, 1989. С.8-51.

14. Долматов, Е.А. Великолепные ЛА/ Е.А.Долматов// Приусадебное хозяйство, 2003. № .- С. 12-15.

15. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта: Учебник/ Б.А.Доспехов.-М.:Колос, 1979.-416с.

16. Дрягина, И.В. Селекция и цветоводство цветочных культур/ И.В. Дрягина, Д.Б. Кудрявец . М.: Агропромиздат, 1986.- 256с.

17. Еникеев, Х.К. Развитие зародышей вишни и черешни в культуре in vitro, изолированных на ранних фазах эмбриогенеза/ Х.К.Еникеев, В.А.Высоцкий, Г.А. Плотникова.// С.-х. биология, -1984 № 11- С. 46 - 48.

18. Жданов, В.В. Самоплодность сортов черной смородины и наследование ее в гибридном потомстве/ В.В. Жданов// Автореф. дис. канд. сельскохоз. Наук. Мичуринск, 1970 - 24 с.

19. Железное, A.B. Некоторые экспериментальные данные по самоопылению у гречихи/А.В. Железное// Цитология и генетика культурных растений. -Новосибирск. Наука, 1967-д-С. 101-112.

20. Железнов, A.B. Сравнительное изучение сестринских и самоопыленных линий гречихи /A.B. Железнов// Цитология и генетика культурных растений. Новосибирск: Наука, 1967. - С. 113-125.

21. Железное, A.B. Генетическая коллекция инбредных линий гречихи. /A.B. Железное// Цитология и генетика культурных растений. Новосибирск; Наука, 1972.-С. 201-207.

22. Жизнь растений. В 6-ти т. Т 4 Мхи. Плауны. Хвощи. Папоротники. Голосеменные растения. //Под ред. И.В. Грушвицкого и С.Г. Жилина.-М.: Просвещение, 1978. С.55.

23. Жужжалова, Т.П. Особенности оплодотворения и развития семян у самоопыленных линий сахарной свеклы/Т.П. Жужжалова, И.Я.Балков// Гене-тико-физиологическая природа опыления у растений. Киев: Наукова Думка, 1978.-С. 12-14.

24. Журавлева, Э.А. Лилии в вашем саду / Э.А. Журавлева М.,1989.33с.

25. Завадская, Л.В. Оценка сортов лилий в условиях Белоруссии/ Л.В.Завадская.// Селекция, сортоизучение, размножение и экономика декоративных растений: Сб. науч. Тр./ ВНИИс им. И.В.Мичурина -Мичуринск, 1988. вып. 52,- С.33 - 37.

26. Завадская, Л.В. Лилии /Л.В.Завадская М.: Издательский дом МСП, 2003.-64 с.

27. Здруйковская-Рихтер, А.И. Культура зародышей in vitro как метод селекции/ А.И. Здруйковская-Рихтер. // Цитогенетические и цитоэмбриоло-гические методы в селекции плодовых и ягодных культур. Научные труды. -М.: Колос, 1973,-С. 34-39.

28. Здруйковская-Рихтер, А.И. Культура незрелых зародышей миндаля от межвидовой гибридизации и свободного опыления/ А.И. Здруйковская-Рихтер// Бюл. ГБС, вып. 115. М.:Наука, 1980 - С. 85 - 90.

29. Здруйковская-Рихтер, А.И. Культура зародышей in vitro и получение новых форм растений / А.И. Здруйковская-Рихтер// Автореф. дис. докт. биол. наук -М.,1981,- 33с.

30. Здруйковская-Рихтер, А.И. Морфогенетические процессы в тканях изолированных зародышей ранних стадий развития плодовых растений /

31. А.И. Здруйковская-Рихтер. // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991,- С. 124 - 128.

32. Иванова, Н.В. Применение культуры изолированной ткани для размножения лилий / Н.В.Иванова, Ю.Н.Козицкий// Бюл. ГБС. М.:Наука, 1981. -вып. 121. - С. 87-92.

33. Иванова, Н.В. Влияние сроков отделения луковичных чешуй на коэффициент размножения лилий / Н.В.Иванова// Бюл. ГБС. М.:Наука, 1983. -вып. 129.-С. 72-76.

34. Калинин, Ф.Л. Технология микроклонального размножения растений/ Ф.Л. Калинин, Г.П. Кушнир, В.В. Сарнацкая //Киев: Наук.думка, 1992 -232 с.

35. Киреева, М.Ф. Селекция лилий в Центрально-Чернозёмной зоне / М. Ф. Киреева.// Доклады советских ученых к 19 Международному конгрессу по садоводству. М.,1974. - С. 528-530.

36. Киреева, М.Ф. Сортоизучение и селекция в Мичуринске/ М.Ф. Киреева.// Вопросы интенсификации декоративного садоводства. М., 1975,-С.28-29.

37. Киреева, М.Ф. Лилии/ М.Ф. Киреева. М.: Россельхозиздат, 1984. -206 с.

38. Киреева, М.Ф. Итоги и перспективы селекции лилий./ М.Ф. Кирее-ва.:Сб. науч. Тр./ ВНИИс им. И.В.Мичурина,- Мичуринск, 1988. вып. 52,-С. 3-6.

39. Киреева, М.Ф. Лилии/ М.Ф.Киреева. М.: ЗАО Фитон +,2000,-160 с.

40. Киреева, М.Ф. Селекция зимостойких лилий./ М.Ф. Киреева,

41. Н.В. Иванова, В.В. Мартынова.// Основные итоги и перспективы научных исследований ВНИИс им. И.В.Мичурина (1931-2001 г.). Тамбов, 2001. -60-171.

42. Киреева, М.Ф. Селекция лилий в Мичуринске / М.Ф. Киреева, Н.Г. Коршикова// Развитие научного наследия И. В. Мичурина (Краткие тезисы докладов областной науч. конф.): ЦГЛ им. И. В. Мичурина. Мичуринск, 1981.-С. 32-34.

43. Киселева, Н.С. Использование новых методов с целью создания исходного материала для селекции чая в Краснодарском Крае/ Н.С. Киселева.// Автореферат дис. канд. Биол. Наук. Краснодар, 2000. - 24 с.

44. Климов, И. Орлеанская лилия/ И.Климов//Вестник цветовода. 2003. -№8(13).-С. 16-17.

45. Коломиец, Т.М. Культура изолированных зародышей в создании новых селекционных форм тюльпанов/ Т.М.Коломиец // Автореф. дис. канд. сельскохоз. Наук. Москва, 1997 - 24 с.

46. Коршикова, Н.Г. Получение отдаленных гибридов лилий методом культуры зародышей на искусственной среде/ Н.Г. Коршикова //Бюл. ГБС. -М.:Наука, 1981 вып. 120- С. 77 - 80.

47. Коршикова, Н.Г. Межвидовая несовместимость лилий и пути её преодоления / Н.Г.Коршикова.// Проблемы повышения эффективности современного садоводства (октябрь, 1982). Мичуринск, 1982-а - С. 206 - 207.

48. Коршикова, Н.Г. Цитоэмбриологическое изучение межвидовой несовместимости лилий и способы её преодоления /Н.Г. Коршикова //Дис. канд. биол. наук. Мичуринск, 1982-6 - 216 с.

49. Коршикова, Н.Г. Преодоление межвидовой несовместимости у лилий/ Н.Г.Коршикова //Декоративное садоводство в центральной черноземной зоне РСФСР : Сб. науч. Тр., вып. 41. Мичуринск, 1984 - С. 12 - 18.

50. Коршикова, Н.Г. Изучение межвидовой несовместимости и способов её преодоления при отдалённой гибридизации лилий/ Н.Г. Коршикова //Наука сельскому хозяйству : Краткие тезисы докладов. - Мичуринск, 1985 -С. 41-42.

51. Коршикова, Н.Г.,. Цитоэмбриология межвидовой несовместимости лилий/ Н.Г. Коршикова., Л.В Коробова-Семенченко //Декоративное садоводство в центральной черноземной зоне РСФСР : Сб. науч. Тр., вып. 41 Мичуринск, 1984-С. 19-27.

52. Курсаков, Г.А. Отдаленная гибридизация плодовых растений/ Г.А Курсаков М.: Агропромиздат, 1986 - 112с.

53. Кутас, E.H. Введение в стерильную культуру интродуцированных видов рододендронов / E.H. Кутас//Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия: Материалы междунар. Конф., Минск, 1-2 июня 2000г. -Минск, 2000.-С. 176- 177.

54. Лайке, X. Использование культуры тканей и органов в селекции растений и производстве посадочного материала/ X Лайке, Р. Лабес, К. Ертель, М. Петерсдорф/Юбзор. Берлин, 1978. -95с.

55. Левенко, Б.А. Культура клеток и тканей в исследованиях по полиплоидии/ Б.А. Левенко// Теоретические и практические проблемы полиплоидии М: Наука,1974. С. 115-123.

56. Мазур, A.M. Клональное микроразмножение ценных гибридов лилий./ A.M. Мазур, Е.А. Калашникова//Сельскохозяйственная биотехнология. Избранные работы. М.: Воскресенье, 2000. - С. 99-105.

57. Макрей, Ю. Генетика для лилиеводов ЛО. Макрей//НАЛС, 1980. -С. 98-110.

58. Матвеева, Т.С. Полиплоидные декоративные растения. Однодольные/ Т.С. Матвеева.- Л.: Наука, 1980. 300с.

59. Мартынова, В В. Некоторые аспекты селекции бульбоносных лилий/ В.В. Мартынова//Дис. канд. с-х. наук. Мичуринск, 2001 - 148 с.

60. Мерзлякова, Н.В. Итоги сортоиспытания лилий в условиях СевероЗападной зоны РСФСР/ Н.В. Мерзлякова //Селекция, сортоизучение, размножение и экономика декоративных растений. Сб. науч. Тр./ ВНИИс им. И.В.Мичурина.- Мичуринск, 1988,- вып. 52,- С.29 32.

61. Мичурин, И.В. Половая гибридизация и воспитание гибридных сеянцев./ И.В. Мичурин//- Избр. Соч. М., 1948,- С. 52 - 274.

62. Мордак, Е.В. Семейство лилейные (Liliaceae) /Жизнь растений./ Е В. Мордак,- М.: Просвещение, 1982. Т. 6. С. 72-90.

63. Муратова, С.А. Индукция морфогенеза в культуре соматических тканей сливы домашней (Prunus domestica L.) / С.А. Муратова //Дис. канд. биол. наук. Мичуринск, 2002. - 186с.

64. Назаренко, Б.П. Полиплоидия в растениеводстве. /Б.П. Назаренко-М, 1975.- 56 с.

65. Огольцова, Т.П. Получение полиплоидов красной малины / Т.П. Огольцова// Автореф. дис. канд. сельскохоз. наук,- М.,1973,- 22 с.

66. Огольцова, Т.П. Селекция черной смородины прошлое. Настоящее, будущее / Т.П. Огольцова/Тула: Приокское книжное издательство, 1992. -384 с.

67. Петров, Д.Ф. Генетика с основами селекции: Учебник/ Д.Ф.Петров. -М.: Высшая школа, 1971. 411 с.

68. Петрова Т.Ф. Цитоэмбриология лилейных. Подсемейство Lilioideae. М.: Наука, 1977,214 с.

69. Поддубная-Арнольди, В.А. Цитоэмбриология покрытосеменных растений./ В.А. Поддубная-Арнольди М.:Наука, 1976,- 507 с.

70. Программа и методика отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур./Мичуринск, 1972, 141 с.

71. Рубинина, А. Лилии в саду и в теплице /А.Рубинина, Л.Казанкова, А.Фетисов. М.: ООО Периодика - ТС, 2001,- 47с.

72. Санкин, Л.С. Линейная селекция дыни/ Л.С. Санкин, // Цитология и генетика культурных растений. Новосибирск: Наука, 1972. - С. 235 - 242.

73. Санкин, Л.С. Экспериментальные полиплоиды черной смородины и крыжевника /Л.С. Санкин, Ю.Н. Юрчиков// Цитология и генетика культурных растений. Новосибирск: Наука, 1972. - С. 131 - 139.

74. Седова, Е.А. Прорастание семян лилий: эволюция представлений о температурной реакции надземно и подземно прорастающих видов. /Е.А. Седова// Вестник Московского университета. Серия 16. Биология, 2003. № 4. - С. 43-48.

75. Смирнова, Г.С. Совершенствование методов селекции сливы на основе отдаленной гибридизации, цитогенетики и искусственной культуры./ Г.С. Смирнова// Дис. канд. с/х наук. - Мичуринск, 2000,- 196с.

76. Сорокопудова, O.A. Биологические особенности видов и сортов рода LILIUM L. при интродукции в лесостепь Западной Сибири. /O.A. Сорокопудова// Дис. канд. биол. Наук. - Новосибирск, 1999. - 161с.

77. Терновский, М.Ф. Применение культуры ткани для преодоления барьера несовместимости видов и бесплодия межвидовых гибридов./ Терновский М.Ф., Бутенко Р.Г., Моисеева И.Е. // Генетика. 1972.- Т. 8.-№ 1.-С. 38 -45.

78. Титова, И.В. Межвидовая гибридизация лука с использованием культуры in vitro/ И.В.Титова.// Автореф. дис. канд. сельскохоз. наук -М.,1989,- 23 с.

79. Трунин,Л.Л. Исследование биологических и цитогенетических особенностей индуцированных полиплоидных форм черной смородины и крыжовника/ JT.JT. Трунин.// Автореф. дис. канд. сельскохоз. наук,- М.,1984 -26 с.

80. Французенок, В.В. Совершенствование методов микроклонального размножения лилий. /В.В. Французенок// Автореф. дис. канд. сельскохоз. Наук. - Горки, 1997. - 20 с.

81. Хватова, М.Н. Использование апомиктических гаплоидов для получения гомозиготных линий у кукурузы/ М.Н. Хватова// Цитология и генетика культурных растений/ Новосибирск: Наука, 1967. - С. 25-33.

82. Холодова, В.П. Рост и метаболизм углеводов в культуре ткани растений./ В.П. Холодова// Культура клеток растений. М.: Наука, 1981, С.17 -37.

83. Цицин, Н.В. Пути создания культурных растений. (Отдаленная гибридизация)./ Н.В. Цицин- М.: Правда, 1948,- 23 с.

84. Цицин Н.В. О формо-и видообразовании. / Н.В. Цицин / Гибриды отдаленных скрещиваний и полиплоиды,- М.:ГБС, 1963,- С. 5-24.

85. Цицин H.B. Отдаленная гибридизация (растений) важнейший метод селекции /Н.В. Цицин//Итоги и перспективы развития с.-х. науки в СССР. -М., 1969.-С. 110-114.

86. Цицин Н.В. Отдаленная гибридизация как фактор эволюции и важнейший метод создания новых видов, форм и сортов растений./ Н.В. Цицин // Генетические основы селекции растений. М.,1971.- С. 89.

87. Цицин Н.В. Проблемы отдаленной гибридизации./ Н.В. Цицин // Проблемы отдаленной гибридизации. М.: Наука, 1979.- С. 5 20.

88. Чучин, В.М. Лилии: ОТ гибриды./ В.М. Чучин // Цветоводство. -2003. -№ 6. - С. 7-12.

89. Чучин, В.М. Лилии: новые гибридные группы / В.М. Чучин // Цветоводство. 2004. - № 6. - С. 22-23.

90. Шевелуха, B.C. Сельскохозяйственная биотехнология: Учебник/ B.C. Шевелуха, Е.А.Калашникова, C.B. Дегтярев и др. М.: Высш. шк., 1998.-416 с.

91. Шиповская, Е.И. Лилии Зинаиды Цветаевой /Е.И. Шиповская// Цветоводство, 2000. № 3. - С. 19.

92. Шиповская, Е.И. О некоторых гибридах лилий Сибири и Дальнего Востока./ Е.И. Шиповская, В.И. Колокольникова //Вестник Московского университета, Биол., почвовед., 1969,- № 3,- С. 117 118.

93. Шиповская, Е.И. Лилии (Виды, разновидности и гибридные формы) /Е.И.Шиповская, В.И. Колокольникова, Г.В. Матросова. М.: МГУ, 1972. -156 с.

94. Элиот, Ф. Селекция растений и цитогенетика. / Ф.Элиот.- М.: Иностранная литература, 1961,- 447 с.

95. Эмсвеллер, С. Использование искусственной полиплоидии в селекции восточной лилии/ С. Эмсвеллер// Полиплоидия/ М.: Иностранная литература, 1956.-С.257-262.

96. Asano, J. Studies on crosses between distantly related species of Lilies. 2. The culture of immature hybrid embrios. / J. Asano, H. Myodo J. Japan. Soc. Hort. Sci., 1977,- vol. 46 (2). - P. 267 - 273.

97. Ascher, P. D. Preliminary report of hybrids from the cross Lilium x Damson x L. longiflorum. / P. D. Aschsr// YB North Amer. Lily Soc., 1973. -vol. 26,-P. 73.

98. Baburaj, S. In vitro adventitious shoot formation from leaf cultures of Clerodendrum inerme (L.) Gaertn./ S. Baburaj, P. Ravichandran, M. Selvapan-dian// Indian J. Exp. Biol. 2000. - 38. №12. - P. 1274 - 1276.

99. Brown, D.H. Tissue Cultture withoum Intimidation./ D.H. Brown// Lily YB North Amer. Lily Soc., 1981. № 34. - P. 28 - 33.

100. Craig, T.W. Hybridizing Goals. / T.W Craig // QB. NALS, 1990.-vol 44. № 4. - P.4 - 6.

101. Darby, G.W. Lilium hybrid 'Black Beauty' / G.W. Darby// Yearbook NALS, 1965,- P. 116.

102. Dierpen, H. Lilienvermehrung in Reagenglas / H. Dierpen // Staudengarten. 1996. -47, №1.- P. 104.

103. Dierpen, H. Orienthybriden x Asiatisch Hybriden ЮА Hybriden / H. Dierpen //Staudengarten. - 2000. - 51, №2,- P. 10.

104. Egger, D. Lily Tissue Culture./ D. Egger // The Lily YB North Amer. Lily Soc., 1998. № 51. - P. 71 - 87.

105. Emsweller, S.L. A method for making tetraploid lilies./ S.L. Emsweller //Amer.Lili Year-Book, 1946. P. 16-18.

106. Emsweller, S.L. Lilium speciosum x L. auratum./S.L. Emsweller, S. Asen, J. Uhring // Lily YB North Amer. Lily Soc., 1962. vol. 15. - P. 7 - 15.

107. Emsweller, S.L. Origin of Lilium T.A. Havemeyer / S.L.Emsweller, H. Barrell // Yearbook NALS, 1948. P. 21 - 26.

108. Emsweller, S.L. The origin of x Lilium testaceum./ S.L. Emsweller, M.B. Stewart //J. Heredity, 1944, 35. - P. 301 - 308.

109. Emsweller S.L. Endosperm embrio incompatibility in Lilium species hybrids./ S.L. Emsweller, J. Uhring // Proc. 15 Intern. Hort. Congr. Nice, 1958. -vol. 2.-P. 360-367.

110. Eremin, V.P. Lilies in the Soviet Union of Socialist Republics. / V.P. Eremin // Lily YB North Amer. Lily Soc., 1970. vol. 33. - P. 71 - 82.

111. Evans A. Polyploid Possibilities./ A. Evans // QB.NALS, 1988. vol. 42. - № 3. - P.11-12.

112. Evans, A. Fan With Polyploid Asiatics / A. Evans// QB. NALS, 1990. -vol. 44,- № 4,- P.7 9.

113. Evans, A. Cooking Up Tetraploids in the Kitchen/ A. Evans// QB. NALS, 1995.- vol 49,-№ 1.-P.4-6.

114. Evans, A. EC is Easy./ A. Evans //QB. NALS, 1995. vol. 49. - № 1. -P. 7 - 9.

115. Evans, W.D. Selection of lily breeding stocks./ W.D. Evans// QB. NALS, 1983. vol 37,- № 1.-P.27.

116. Ewald, F. Lilien 2000 /F.Ewald// Staudengarten. 2000. - 51, №2,- P.7173.

117. Foxwell, D. The Development of the Aurelianse Hybrids./ D. Foxwell // The Lily YB, London, 1967. P. 4-10.

118. Freimann, L.V. Catch The Tetraploid Wave/ L.V. Freimann, D.L. Knowlton // QB. NALS, 1988. vol 42,- № 3,- P.19 - 21.

119. Halinar, C.J. The Future of Garden Lilies / C.J. Halinar // QB. NALS, 1985. vol. 39. -№4. -P.18 -21.

120. Helsley, C. Lily classification/ C. Helsley// QB. NALS, 1988,- vol 42.-№4 P. 15 - 19.

121. Hoell, J. Orienpet Breeding In 1989 90/ J.Hoell, G. Town // QB. NALS, 1990.- vol 44,- № 4,- P.13-15.

122. Hoffman, M. Ed Mc Rae, Hybridizer Extraordinaire. /M. Hoffman // QB. NALS, 1990,- vol. 44. № 4. - P.19 - 21.

123. Hoffman, M. Cover story: CEBECO hybrids stunning./ M. Hoffman // QB. NALS, 1997.-vol. 51. -№ 1. p.4.

124. Jefferson-Brown, M.J. Modern Lilies/ M.J. Jefferson-Brown/ London: Faber & Faber, 1965. - 137p.

125. Jost, V. Lilies in Eastern Europe./ V. Jost // Yearbook NALS, 1987. -P. 45 -49.

126. Kroell,C. Summary of Polyploid Survey / C. Kroell// QB. NALS, 1992,- vol 46,- № 4,- P. 12 19

127. McRae, E.A. A Time To Reflect. / E.A. McRae // Yearbook NALS, 1987. P. 27-31

128. McRae, E.A. A Review of Fifty Years of Commercial Lily Hybridizing in North America. / E.A. McRae // QB. NALS, 1989. vol. 43. - № 2. - P. 4 -8.

129. McRae, E.A Looking to the Future. /E.A. McRae // QB. NALS, 1995. -vol. 49. № 3. - P.7- 9.

130. McRae, E.A A Trip to Now Zealand and Australia. /McRae E.A.// QB. NALS, 1997.-vol. 51. № 4. - P. 8 - 11.

131. McRae, E.A. Lilies. /McRae E.A. Timber Press, Portland, Oregon, 1998. - 392 p.

132. McRae, Y.F. Notes on Tissue Culture of Lilies./ Y.F. McRae // The Lily YB North Amer. Lily Soc., 1987. № 40. - P. 15 - 18.

133. McRae, Y.F. Stomate size and pollen characteristics as an indication of chromosome number in lilies/ Y.F.McRae// The Lily YB North Amer. Lily Soc., 1987. -№40. P. 19-26.

134. Mitchell, R. Lily hybridizing: something for everyone/ R. Mitchell// QB. NALS, 1995,-vol 37,-№ 1 P.10-14.

135. Myodo, H. Successful Setting and Culture of Hybrid Embryos between Remote Species of the Genus Lilium/ H.Myodo// YB of NALS, 1975,- P. 13 -17.

136. Nakayima, Y. On the utility of the stored Lilium pollen and abnormal seed in crosses of L. speciosum x L. auratum, speciosum x L. Makinoi./ Y. Nakayima// Bot.Mag., 1940. - vol. 54. - P. 473 - 483.

137. Неделчева, С. Влиянието на някои ауксини и цитокинини върху ор-ганогенезиса при калусни култури от кайсиеви кръстоски. 2. Органогенезис/ С. Неделчева//Растениевъд. Науки, 1998. 35,№8. - С.626 - 628.

138. Неделчева, С. Влиянието на някои ауксини и цитокинини върху ор-ганогенезиса при калусни култури от кайсиеви кръстоски. 1. Калусогенезис / С.Неделчева, Е. Цонева// Растениевъд. Науки, 1998. 35,№7. - С.540 -542.

139. North, С. New Lily Hybrids with the aid of embryo culture/ C. North // Yearbook NALS, 1970. № 33. - P. 171 -173.

140. Robinson, C. Lilies: The Garden Aristocrats. /Robinson C.//QB. NALS, 1993. -vol. 47. № 1. - P. 16 - 20.

141. Schenk, P.C. New Directions with Polyploids in Asiatic and Oriental Lilies /Schenk P.C. // The Lily YB of NALS, 1987. № 40. - P. 7-12.

142. Schmitzer, E. Breeding with Triploid and Tetraploid Lilies./E. Schmitzer // Yearbook NALS, 1981. P. 75 -77.

143. Schmitzer, E. On The Possibility To Use Unreduced Gametes From 'Connecticut King' Hybrids. / E. Schmitzer //QB. NALS, 1990. - vol 44. - № 4. -P. 10-12.

144. Schmitzer, E. Some Recent Results from Chromosome Counting on Lilies. / E.Schmitzer//QB. NALS, 1991. vol 45. -№ l.-P. 11 - 13.

145. Seifert, A. Lilien und ihre Gesellen/A. Seifert // Staudengarten. 2000. -51, №2.- P.94 - 95.

146. Simoni, N. The Harold F. Comber Award (And the man for whom it is named)/N. Simoni // QB. NALS, 1983,- vol 37,- № 4.- P. 32-33.

147. Stern, F. More Notes on Aurelianense Hybrid Lilies./ F. Stern -// The Lily YB, London, 1953. №16, P. 22-25.

148. Spaans, J. Lilium nepalense x Jriental Hybrid: My First interspecific Hybrid./ J. Spaans // QB. NALS, 1995,- vol 49,- № 2,- P. 4 5.

149. Takayama, S. A scheme for mass propagation of Lilium / S. Takayama, M. Misawa//Scientia Hort., 1983,- 18. №4. - P. 353-362.

150. Tarlton, F. Aurelian and Trumpet Hybrids./ F. Tarlton //QB. NALS, 1991,-vol 45,-№4,-P. 33 -34.

151. Tuyl, J.V. Research on Breeding Polyploid Lilies at IVT Wageningen./ J.V.Tuyl // QB. NALS, 1989,-vol 43,- № 2.- P. 23 28.

152. Uhring, J. Vegetative propagation of amphidiploid Lilium "Black Beauty" in vitro/ J. Uhring// The Lily YB, 1981. 14. - P. 110-115.

153. Vainola, A. Polyploidization and early screening of Rhododendron hybrids / A. Vainola// Euphytica, 2000. 112.-№3. - P.239 - 244.

154. Wadekamper, J. The Trumpet Lilies of Latvia./J.Wadekamper //QB. NALS, 1995.-vol 49.- № 2,- P. 17-21.

155. Witomska, M. Effect of sucrose consentration on regeneration in vitro from different explants of Fritillaria imperialis L./ M. Witomska, A. Lukaszewska// Ann. Warsaw Agr. Univ. SGGW. Hort. - 2000,- №21. - P. 21 - 28.

156. Yerex, C. The story of the Aurelian Hybrids./ C.Yerex, F.L. Kline // The Lily YB of the NALS, 1961.-№ 14.- P. 23-29.

157. Yumi, O. Interspecific hybrids between Lilium nobilissimum x L.regale produced via ovules-with-placentaltissue culture / O. Yumi, N. Yoshiji, N. Ma-saru, O. Keiichi, M. Ichiro// Sei. Hort.-2000.- 84.-№ 1-2,- P. 191-204.

158. Zhola, I. Propagation of healthy Latvian-Bred Lily Cultivars by means of flower buds/ I. Zhola, A. Ushkaura, J. Ignash// The Lily YB of the NALS, 1993. -P. 39-43.