Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Метаболизм предшественников нуклеиновых кислот при псориазе

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Метаболизм предшественников нуклеиновых кислот при псориазе"

л На правах рукописи

* V

с^О^4 Маркушева Людмила Игоревна

Л «V

МЕТАБОЛИЗМ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ ПСОРИАЗЕ

03.00.04 -биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой стейёнй доктора биологических наук

Москва-1998

Работа выполнена в отделении биохимии Центрального кожпо венерологического научно-исследовательского института

Научные консультанты -

доктор биологических на; профессор Тогузов Р.Т.

доктор медицинских наук профессор Самсонов В.А

Официальные оппоненты -

член-корреспондент РАМ! доктор медицинских наук, профессор Панченко Л.Ф.

доктор биологических нау профессор Яровая Г. А.

доктор биологических нау профессор Малахов В.Н.

Ведущая организация -

Научно- исследовательски! институт питания РАМН

Зашита состоится " 1998г. в .....час.

на заседании диссертационного совета Д 053.22.02 в Российском Университете дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д,8, медицински! факультет

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского Университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6

Автореферат разослан" " 1998г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

В.Э. Торб<

Актуальность проблемы. На пролиферацию эпидермиса влияют разнообразные факторы, одним из которых являются циклические нуклеотиды [Asahina et.al.,1995; Evain-Brion,1994; Heng et.al., 1994].Важное место в цепи регуляции пролиферативной активности клеток отводится гистонам-основным белкам, составляющим большую часть хроматина и выполняющим структурную функцию в его организации, конформационные изменения гистонов могут регулировать уровень конденсации хроматина и т.о. деятельность генома [Спирин, 1990]. Для процесса пролиферации необходимо наличие определенного сбалансированного пула предшественников нуклеиновых кислот (ПНК). Пуриновые соединения являются непосредственными и незаменимыми участниками в реакциях репликации, транскрипции и трансляции, в гликолизе, цикле Кребса и окислительного фос-форилированйя, в окислении жирных, кислот, при биосинтезе липидов. [Ленинджер, 1985]. Таким образом, различные нуклеотиды и их производные, выполняя в клетках самые разнообразные функции во всех звеньях обмена, играют интегративную роль в сети метаболических реакций.

При псориазе происходит нарушение иммунных механизмов, в которые вовлекаются Т-лимфоциты и их субпопуляции, взаимодействуя с сератиноцитами путем экспрессии адгезивных молекул, ростовых факто-юв и хемокинов [Nickoloff, et.al., 1993¡Tagami et al.,1994; Heng et al.,1994; /oorhees, 1996]. Установлено, что нарушение метаболизма пуриновых [ую/еотидов тесно связано с иммунными расстройствами организма Giblett,1972]. При иммунодефицитных состояниях, обусловленных полым или частичным отсутствием аденозиндезаминазы (АДА) и пуриннук-еозидфосфорилазы (ПНФ), в лимфоцитах, в сыворотке крови или в моче акапливаются повышенные количества аденозина, а также и соответст-ующие основания,- гуанин, гипоксантин и ксантин, т.е. продукты неза-фшенного катаболизма пуринов [ Simmonds et al., 1978]. В свою очередь,

1

выход в кровоток ядерного материала может способствовать формированию аутоиммунны^ процессов [Задорожный, 1983]. Определение аутоан-тител к ДНК, поверхностным антигенам фибробластов кожи человека, может быть необходимым звеном в изучении аутоиммунных механизмов в пато^имии псориаза, а также послужить теоретическим обоснованием для разра^ртки рациональных схем лечения.

Изучение активности ключевых ферментов пуринового обмена в сочетание с оценкой их реального субстратного окружения, лимитирующего скорость метаболизма пуриновых производных в нормальных и патологически измененных тканях, представляет не только теоретический, но и существенный практический интерес в качестве основы рационального поиска препаратов для коррекции данной патологии. , Цель работы. Выявление биохимическихмеханизмов патогенеза псориаза на основе изучения особенностей метаболизма предшественников нуклеиновых кислот, ядерных белков.хроматина в эпидермисе и кррви и аутоиммунных нарушений при псориазе. . ■ и Основные задачи исследования. ,

1. Выяснить особенности появления аутоантит;ел к нативной и денатурированной ДНК, к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека, к микросомальной фракции тиреоцитов и тиреоглобулину в зависимости от формы, тяжести и длительности заболевания.

2. Оценить уровень фактора некроза опухолей-а (ФНО-а) в зависимости от формы и тяжести заболевания и в качестве критерия эффективности проводимой терапии.

3. Определить уровень пролиферативной активности лимфоцитов и сопоставить с уровнем циклических нуклеотидов в эпидермисе и крови.

4.Изучить особенности распределения различных фракций гистонов, нук леиновых кислот и их предшественников (по показателям кислотораство

римой фракции) в лимфоцитах и плазме крови, сравнить уровни гистоно-вых белков с распределением' субпопуляцйй лимфоцитов при псориазе. -

5. Исследовать метаболизм свободных пуриновых соединений и активность ключевых ферментов пуринового обмена В эпидермисе, в лимфоцитах, в эритроцитах и плазме кр/овй.

6. Сопоставить биохимические изменения в лимфоцита^ с' распределеле-нием субпопуляций лимфоцитов и уровнем пролиферативной активности клеток.

7. Провести анализ эффективности комплексного способа терапии псориаза препаратом нуклеотидной природы.

8. На основе изучения особенностей метаболизма предшественников нуклеиновых кислот, циклических нуклеотидов и гистоновых белков, в эпидермисе и крови при сопоставлении с иммунологическими и аутоиммунными изменениями предложить схему патохимических нарушений при псориазе.

Научная новизна. Впервые предпринято систематическое исследование закономерностей обмена пуриновых оснований, нуклеозидов и нуклео-зидмонофосфатов и ключевых ферментов их метаболизма в условиях реально существующих соотношений субстратов и активности ферментов в различных тканях организма.

Впервые даны качественные и количественные характеристики пуда свободных пуриновых соединений и активности ферментов пуринов-го обмена в эпидермисе, являющемся местом поражения, лимфоцитах, отвечающих за иммунные механизмы развития псориаза, эритроцитах, являющихся транспортной системой свободных предшественников нуклеиновых кислот и плазме крови, среде поддерживающей гомеостаз в организме. ' -

г

В работе впервые обнаружена активация катаболизма пуринов в эпидермисе и эритроцитах больных псориазом, которая сопровождается накоплением конечных продуктов обмена: гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты и увеличением активности пуриннуклеозидфосфорилазы и аденозиндезаминазы, что свидетельствует об однонаправленном изменении пуринового обмена в кератиноцитах и эритроцитах. Отмечен механизм ускоренной утилизации пурйновых соединений, образующихся при распаде кератиноцитов с помощью энергетически выгодного "запасного" пути. Получены новые данные о роли эритроцитов в качестве транспортной системы переноса предшественников нуклеиновых кислот между тканями организма; отмеченные изменения в метаболизме пуринов в эритроцитах являются отражением процессов, происходящих в псориатическом эпидермисе. 1

Впервые установлено, что изменение иммунного статуса при псориазе сопряжено со специфическими нарушениями активности ключевых ферментов пуринового обмена, с изменением уровней содержания промежуточных метаболитов в лимфоцитах, изменением пролиферативной активности лимфоцитов и перераспределением гистонов, которое зависит от распределения субпопуляций лимфоцитов. > .

Получены новые данные об относительном содержании гистонопо-добных белков в плазме крови. Снижение содержания фракции Н1 гистонов в плазме крови связано с активацией ядерных структур кератиноцитов при псориазе. '

В работе получены новые данные о наличии аутоиммунных нарушений: повышенное содержание антител к ДНК с преобладанием аутоан-тител к нативной ДНК, антител к поверхностным антигенам фибробла-стов кожи человека, зависящие от длительности и тяжести заболевания.

Отмечена гиперпродукция ФНО-а в сыворотке крови, зависящая от формы и стадии заболевания.

Научно-практическое значение работы. Разработано новое направление,в изучении патохимии обмена предшественников нуклеиновых' кислот в коже, а также в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных псориазом. Полученные данные раскрывают ряд метаболических нарушений и могут быть использованы для разработки новых принципов терапии данного заболевания с помощью метаболитов пуринового ряда, направленных на регуляцию и коррекцию ферментных систем обмена предшественников нуклеиновых кислот в различных тканях, а также направленных на коррекцию иммунологических нарушений. Показано, что наиболее информативным показателем, отражающим изменения пуринового обмена в эпидермисе, эритроцитах и плазме кровк является определение активности пуриннуклеозидфосфорилазы, а в качестве контроля за эффективностью проводимой терапии соотношение активностей аденозиндезаминазы к пу-риннуклеозидфосфорилазе. Проведенные исследования позволили разработать ряд положений, имеющих практическое значение для оценки тяжести заболевания и решения вопроса об индивидуальной терапии - целесообразно использовать определение антител к ДНК и поверхностным антигенам фибробластов кожи! человека, а также уровень ФНО-а.' На основе изучения свободных пурйновых соединений, активности, ферментов их обмена, распределения различных фракций ги стонов и аутоиммнунных нарушений была предложена схема патохимических нарушений при псориазе. С помощью изученных биохимических и иммунологических показателей была проведена оценка эффективности комбинированной терапии с применением препарата нуклеотидной природы. • <-. Положения, выносимые на защиту.

1.Пахрхимия псориаза непосредственно затрагивает систему обмене предшественников нуклеиновых кислот, включая изменение активности ферментов и их субстратов.

2. Особенности метаболизма пуриновых производных в эпидермисе при псориазе заключаются в активации катаболизма с одновременным усилением реутилизации пуринов по "Salvage" - пути.

3. Эритроциты в качестве транспортной системы для предшественников нуклеиновых кислот осуществляют функцию сопряжения путей синтеза И распада ПНК в клетках кожи и иммунокомпетентных клетках.

4. Пролиферативные и функциональные изменения в лимфоцитах периферической крови сопровождаются значительными изменениями внутри^е-точного метаболизма пуринов, а также активацией генома на уровне ядерных структур клетки.

5. Аутоиммунные нарушения осложняют тяжесть течения псориаза. Апробация работы и публикации . Материалы диссертации докладывались и обсуждались на 7 Всероссийском симпозиуме, по молекулярной жидкостной хроматографии ( Москва, 1996 ); 7 Всероссийском съезде дерматологов и венерологов ( Москва, 1996 ); 1 конгрессе дерматовенерологов Казахстана (Алматы, 1996); Научно-практической конференции, посвященной 75-летию ЦНИКВИ ( Москва, 1996 ); научно-практических конференциях ЦНИКВИ совместно с РГМУ ( Москва,1996,1997 ) ; Симпозиуме" Лабораторная медицина - тенденции и перспективы " (Москва, 1997); Научно-практической конференции " Новое в диагностике и лечении заболеваний передающихся половым путем и болезней кожи"( Москва, 1997); 5 Международной конференции "Спид, рак и родственные проблемы ( С.Петербург, 1997 ); 12 th IFCC, Europen Congress of Clinical Chemistri (Basel, 1997).

По материалам диссертации опубликовано 28 работ.

6

рбъем и структура . Диссертация состоит из введения, 8 глав, выводов и Списка литературы. Собственные исследования заключены в 5 главах работы. Объем диссертации £73страниц в том числе 27 таблиц и 18 рисунков, Библиография '- 306 источников ( 82 - отечественных, 224 - иностранных).

Материал и методы исследования. Больные псориазом. С помощью различных биохимических методов изучался биологический материал от 286 рольных псориазом в возрасте от 17 до 60 лет, из них - 153 мужчин и 133 Женщин, fi период обострения заболевания и в момент поступления в клинику ЦНИКВИ и 95 практически здоровых лиц. У 105 больных распространенный псориазом проводили определение ФНО-а, содержание антител К поверхностным антигенам фибробластов кожи человека (АФ) оценивали у 155 больных распространенным псориазом на разных стадиях течения заболевания, с различной степенью тяжести и продолжительностью болезни. Больным проводилось комплексное лечение - фототерапия и пре-Иарйт Энкад; он регулирует обмен нуклеотидов в тканях, обладает имму-номодулирующими свойствами, способствует улучшению функции мембран.

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЮО Изократическое разделение пуриновых оснований, нуклеозидов и нукзео-зидмонофосфатов эпидермиса, лимфоцитов и эритроцитов выполнялось в градиентной методике[ Pimenov et al., 1986 ] с использованием модульной хроматогрк'фической системы "Beckrrian" (США), колонки: Ultraspbere ODS-XL картридж - колонка (4,6 х 70 mm), подвижная фаза:40 мМ КН2Р04.1тетрабутиламмонийфосфата, рН 5,0; детектирование:254Д80 НМ (0,05 еЦ, абсорбции на всю шкалу ), проводилось совместно с Д.6.Н., Ю.В. Тихоновым в отделе биохимии НИЧ РГМУ ( рук. проф. Р.Т. Тоху-зов).

Активность пуриннуклеозидфосфорияазы и аденозиндезамина?ц определяли в сыворотке крови, во фракции цитозоля лимфоцитов, эритроцитов, и гомогенатов эпидермиса. [ Lewis, Giants, [976 j.

Активность мембранной 5''-нуклеотидазы AMP (5-НК) изучал^ в плазме крови в эритроцитах и лимфоцитах [Edwards, 1980 ]. . ,

Получение фракции гистонов проводилось кислотно-спиртовым методом, который основан на различной растворимости основных фракций гистонов [Jons, 1964].

■ Выделение лимфоцитов проводили из гепаринизированной кровц с помощью градиента фиколл - верографина[Бейум, 1980].

' • Определение субпопуляций лимфоцитов производили на проточном цитоспектрофлюориметре Epics - С с моноклональными антитеддми фирмы "Cultron", дифференцирующих антигены ТЗ (СДЗ), Т4 (СД4),,Х8 (СД8), СД21. г ;■ ,., ;,„,

Определение пролиферагивной активности лимфоцитов проточной ДНК-цитометрией выполнялось по методу [Krishan, 1990] лизисом эритроцитов и отделением мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитов без центрифугирования, а также разделение популяций лейкоцитов н^ ос-huov аиплиза светорассеяния на проточном спектрофлуориметре Epics-C. Для идентификации моноцитов использовали моноклональные антитела СД14 или СД64,меченные EITG. > ,,

Определение активности сАМР и cGMP. из биоптатов кожи и выворотки крови проводили с:прмощью наборов ИФА в соответствии с,инструкциями фирмы "Иммунодиагностик". ч н .

Концентрацию ФНО-а в сыворотке крови определяли р помощью коммерческой тест-системы, двухсайтового твердофазного иНмунофер-ментного анализа, производства1 ТОО "Протеиновый контур" г.Санкт-Петербург.

Для индикации суммарных антител к тиреоглобулину (АтТГ). к микросомальной фракции тиреоцитов (АтМс) использовали тест-системы-ИФА НПО "Иммунотех"(г.Москва); для определения антител к нативной и денатурированной ДНК применяли тест- системы -ИФА фирмы "ЭКОлаб" Определение аутоантител к поверхностным антигенам фибробла-стоц кожи человека (АФ) в сыворотке крови проводили с помощью экспериментальной тест-системы ИФА. Суспензию фибробластов кожи человека^ концентрации 5000 клеток на 1 лунку) иммобилизовали на 96-луНОчные полистироловые планшеты (фирмы "Nunc"), предварительно активированные лизином, фиксировали глутаровым альдегидом, нейтрализовали глицином и свободную поверхность блокировали бычьим сывороточным альбумином методом ИФА [Горскова,1990 ]. .

Определение концентрации тирозина и триптофана проводилось спекТрофлюориметрическим методом [Юденфренд, 1965] на спектроф-люйриметре фирмы "Hitachi" из одной и той же пробы.

Показатели, характеризующие функциональное состояние печени: уровень общего биллирубина, общего белка, глюкозы, аспартат-, аланин -шинотрансфераз, лактатдегидрогеназы, а также концентрацию магния, сальция, фосфора определяли на биохимическом анализаторе "Ciba doming". '(;

'ЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕ1 ÍHblX ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

*оль хеМокинов и аутоиммунных нарушений при псориазе.

ПрИ проведении скрининга антител в сыворотках крови больных псо-

шазом С целью выявления возможных маркеров аутоиммунитета, было

■стацовлено, что уровень антител к нативной ДНК класса IgG повышен у

0 % больных, и у 20 % больных для антител класса IgM. Увеличение ан-

ител класса Ig G к денатурированной ДНК зарегистрировано у 10% боль-

9

ных, а антитела класса JgM - у 15% обследуемых, что может способствовать формированию аутоиммунного процесса. Уровень антител к антигенам щитовидной ¡железы отмечался в пределах нормы, повышенное содержание антител:К'тирео.глобулину ( АтТГ:) и к микросомальной фракции тиреоцитои (АхМС) обнаружено у больных псориазом с длительностью заболевания более 10 лет, что может послужить обоснованием для прогноза развития тиреоидной патологии.

В результате определения антител к поверхностным антигенам фиб-робластов кожи человека (АФ) у 155 больных распостраненным псориазом с помощью экспериментальной тест-системы ИФА, были выявлены АФ в 36% случаев, частота выявления АФ не зависела от пола.

Рис.1. Частота выявляемое™ антител к фибробластам кожи человека' Г' (АФ) при псориазе в зависимости от давности заболевания.

90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

По оси ординат: частота выявляемое™ АФ (%) По оси абсцисс: ' ' 1 - здоровые лица. Больные псориазом: 2 - до 1 года; '' 3-от 1 года до 5 лет; 4-более'10 лет. а>:

Наибольшая частота выявления АФ отмечалась у больных с артроПа-тиями (50%) и эксудативной формой псориаза (43%). Была отмечена четкая зависимость частоты выявления АФ от длительности заболевания

10

(рис.1).У больных,!страдающих псориазом 10 и более лет,- АФ,> были обнаружены в 62% Случаев, у больных псориазом менее :года и от 1 до 5 лет АФ выявлялись лишь у 7% 14% соответственно, что свидетельствует о наличии дермальных нарушений при псориазе и возможности формирования аутоиммунных процессов.

Концентрация ¡ФНО-а в периферической крови 105 больных распо-страненным псориазом;:в 2,5 раза превышала показатели контрольной группы (рис.2), в прогрессирующей стадии значения ФНО-а в 2,6 раза превышали значениядля стационарной стадии.

Рис.2. Уровень сывороточного ФНО-а при псориазе в зависимости , ,:от стадии и формы заболевания <

%

По оси ординат - % от нормы, взятой за 100 %. По оси абсцисс - 1 -тактически здоровые люди; 2 - больные псориазом, общая группа. Ста-ш псориаза: 3- стационарная стадия; 4- прогрессирующая стадия. Фору псориаза: 5 - экссудативная; 6- артропатическая; 7 эритродермиче-:ая; 8- смешанная.

Наиболее высокие значения ФНО-а (в 2,2 раза и 2,1 раза выше нормы соответственно) были выявлены у больных с эритродермической разновидностью псориаза и с различными артропатиями. В зависимости от длительности псориаза, наиболее высокая концентрация ФНО-а отмечалась у людей, с длительностью заболевания до 1 года. Высокие концентрации этого цитокина в крови при псориазе можно объяснить известными свойствами ФНО-а координировать репаративный процесс и регулировать процессы воспаления и пролиферации при взаимодействии с другими ростовыми факторами [Griffiths et. al.,1996; Elder, 1995; Bata-Csorgo at.al.,1995],

Пролиферативная активность клеток и ее регуляция при псориазе.

Процессы гиперпролиферации в эпидермисе при псориазе вызываются проникновением лимфоцитов в эпидермис и их взаимодействием с ке-ратиноцитами в иммунной индукции усиления клеточного цикла нормальных покоящихся кератиноцитов, в связи с этим было важноизучитъ пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови. Уровень пролиферирующих лейкоцитов в G2/M и S-фазах клеточного цикла у больных распостраненной формой псориаза был более чем в 2 раза выше чем у здоровых лиц ( табл.1), количество пролиферирующих моноцитов было в среднем в 2 раза меньше чем лимфоцитов. После курса ПУВА-терапии отмечалась тенденция в нормализации числа пролифериующих лейкоцитов. Полученные данные указывают на возможность клеточных взаимодействий кератиноцитов и лимфоцитов в усилении пролиферации при псориазе, могут служить основанием для выявления различий в про-лиферативной активности лимфоцитов iv vivo, в частности, их субпопуляций, а также могут быть использованы в качестве дополнительного критерия эффективности проводимой терапии с учетом реальных процессов i организме.

Таблица 1, Уровень (в %) пролиферативной активности лейкоцитов при псориазе (М±м)

NN пп Обслед. лица Пролиф. лейкоц. Моноцит Пролиф. Лимфоц. Пролиф. моноцит. В % к моноцит.

1. Здоровые 0,55±0,05 3,18±0,6 0,32±0,04 0,15±0,04 4,62±0,8

2. Псориаз долечен. 1,39±0,3 3,97+0,6 1,14+0,3" 0,24+0,06 5,99±1,2

3. Псориаз после леч 0,95+0,5 5,58±2,5 0,54±0,2 0,19+0,1 2,96±1,0

Р1.2 г <0,01 >0,05 . <0,01 >0,05 >0,05

>0,05 >0,05 >0,05 >0,05 =0,05

Ранее было показано, что уровень репликации ДНК связан с концентрацией в клетке циклических нуклеотидов: снижение количества сАМР приводит к стимуляции синтеза, повышение - к прекращению синтеза и индукции процессов дифференцировки, циклический вМР оказывал обратное действие в кератиноцитах [УоогЬееБ, 1976]. Нами установлено достоверное снижение в 2 раза уровня сАМР в эпидермисе больных распространенной формой псориаза по сравнению с контрольной группой в среднем с (0,34+-0,04)рМ/мг до (0,15+-0,05)рМ/мг, содержание сОМР в эпидермисе пятикратно возрастало с (0,62+-0,09)рМ/мг -в контроле до (3,49+-0,12)рМ/мг - при псориазе. При псориазе уровень сСМР в плазме крови возрастал до (11,2+-2,5)рМ/мл, с ( 6,3+-0,8) рМ/мл в контроле, а уровень сАМР снижался в среднем с (21,3+-1,8)рМ/млдо(11,4+-2,3)рМУмл. Установлено четкое совпадение повышенных показателей пролифератив-ной активности лимфоцитов ( 0,7-2,6 )% с повышением уровня сСМР до (16,8-25,0 ) рМ/ мл в плазме крови у больных псориазом.

При, изучении уровня различных ионов, влияющих на яролифера-тивную активность клеток было установлено, что при псориазе уровень кальций; в сыворотке крови невыходит за пределы,физиологических норм, уровень фосфора снижает^, у 20% больных, концентрация магния достоверно повышается по сравнению "с контролем с (1,78+-0,05)мЕг/л до (2,61+-0,2)мЕг/л.

Распределение гистоновых белков при псориазе. Концентрация тирозина в'

: - ^/ - ■ j

сыворотке крови здоровых лиц составила 19,5±0,8 мкг/мл, триптофана)

I

(25,8+1,1) мкг/ мл, при псориазе - достоверно (Р< 0,001 ) выше на 28% и 371 % соответственно. У 20% обследованных, было выявлено значительное I увеличение активности ферментов, характеризующих функциональное состояние печени: AJIT- в 3 раза, a ACT - в 2,5 раза по сравнению с контролем, при чем уровень тирозина и триптофана у этих больных был выше на 34% и 55% соответственно. Наиболее высокие значения концентрации изучаемых аминокислот отмечались у больных псориазом с выраженной гипергликемией : уровень глюкозы сыворотки крови был выше в 1,5 раза, а содержание тирозина и триптофана на 65% и 71%, что свидетельствует о существовании тесйой связи между степенью изменения уровня глкжо-генных аминокислот: тирозина и триптофана, и показателями функционального состояния печени. 1

Нами установлено достоверное снижение процентного содержания HI- гистонов в плазме крови при псориазе, при этом достоверно увеличивается общая фракция Н2аНЗН4 - гистонов; уровень Н2в - гистонов остается в пределах нормы. Отмечено резкое снижение доли лизйнсодержа-щих гистонов при одновременном повышении количества аргининбогатых гистонов (табл.2). Результаты свидетельствуют о присущем для псориаза снижении фракции Н1-гистонов в сыворотке крови, что может быть связано с перераспределением этих белков в крови и служить косвенным пока-

14

зателем активации генетических структур в клетках, вовлеченных в патологический процесс..

Таблица 2. Белки, предшественники нуклеиновых кислот у здоровых пациентов и больных псориазом в плазме и эритроцитах до и после лечения (М+-м) ,,

Показатель Контроль До лечения После лечения ;

Н1-гистоны,% '37,3+-2,6 - 27,04-5,0 * 27,04-3,0

Н2А-Н3-Н4,% 49,74-2,$,,, 60,0+-7,0 * 52,4+-4,1 ,

ЩВ-,% . 13,04-0,7 , 11,64-2,2 12,74-1,3

лцзин/аргинин . 0,774-0,08 , 0,484-0,13 * 0,464-0,06 >

КРФ плазмы, усл. ед/мл 20,4+-1,0-!. 11,74-0,06 * 19,7+-3,4**

КРФ эр., усл.ед/мл 73,44-8,9 - 17,34-4,1 * 24,84 _ 1,6 ■

плазма/эритр. 0,28+-0,02 0,96+-0,27 * 0,824-0,24

* *- обозначены достоверные различия показателей у больных псориазом (* -до)и(** -после) лечения

Величина кислоторастворимой фракции плазмы при псориазе достоверно снижена; самое большое снижение пула предшественников нук-леийЪвыХ кисЛот зарегистрировано в эритроцитах: (в среднем в 4-4,5 раза), наблюдается также изменение количественного соотношения КРФ между плазмой и эритроцитами. Таким образом, установлено, что при псориазе Нарушайся' транспорт предшественников нуклеиновых кислот, который являемся' отражением процессов, происходящих в псориатическом эпидермисе!1

Пр^ псориазе выявляются иммунные комплексы в эпидермисе, гис-тоны, будучи основными ядерными белками, обладают антигенными

свойствами. У 30% больных нами обнаружены антитела к нативной ДНК.

15 .

У данных больных зарегистрировано снижение доля гистонов Н1 и значительное повышение общей фракции Н2А-НЗ-Н4 гистонов.

В лимфоцитах установлено снижение процентного содержания Н1-гистонов (табл.3), а также уменьшение соотношения лизин / аргинин богатых белков. У этих больных увеличена доля аргинин-богатых гистонов (смешанная фракция), при практически не изменяющемся содержании Н2В-гистонов. Полученные данные согласуются с возрастанием пролнфе-ративной активности лимфоцитов периферической крови при псориазе приблизительно в 2,5 раза по сравнению со здоровыми лицами и, по-видимому, свидетельствуют об изменении функциональной активности лимфоцитов, об активации их генома. При псориазе наблюдалось снижение соотношения гистон/ДНК. Степень связи гистонов с ДНК различна. Соотношение гистон /ДНК в клетках определяется степенью репрессии генома, которая варьирует от 100% в ядерном эритроците до 70-80% в других клетках, и в какой-то степени может служить показателем его функциональной активности [Спирин, 1990].

В лимфоцитах отмечалась тенденция к снижению пула предшественников нуклеиновых кислот. Количество РНК на лимфоцит широко варьировало от 1,6 до 5,3 пг что, по-видимому, может свидетельствовать о перераспределении различных субпопуляций лимфоцитов; мы продемонстрировали, что при псориазе достоверно увеличено % содержание Т-лимфоцитов и Т-хелперов, и отмечалась тенденция к снижению В-лимфоцитов. Установлена связь между уровнем Hl, Н2В и смешанной фракцией гистонов и Т-супрессоров % и ( г=0,71) , и между уровнем В-клеток % и фракцией Н2В гистонов при псориазе. Это говорит в пользу участия ядерных структур лимфоцитов в развитии патологии. Особенности иммунного статуса больных псориазом тесно связанны со специфической активностью хроматина. ,

Таблица 3. Белки, нуклеиновые кислоты и их предшественники в (имфоцитах здоровых лиц и больных псориазом до и после лечения (М+-

О-

Указатель Здоровые лица До лечения После лечения

11 -гистоны,% 37,0+-1,5 26,8+-2,1 31,3+-1,0*

12А-Н3-Н4,% 44,0+-1,7 56,5+-3,0 50,2+-1,2*

12В-,% 19,0+-0,9 17,0+-1,1 18,4+-1,3

изин/аргинин 0,84+-0,06 0,46+-0,07 0,60+-0,03*

(НК/кл.,пг 2,15+-0,23 2,2+-0,2 2,8+-0,7

истон / ДНК 0,63+-0,06 0,53+-0,02 0,54+-0,05

НК / кл.,пг 3,62+-0,29 3,4+-0,3 3,3+-0,8

РФ,усл. Ед. 7,2+-1,2 6,0+-0,3 5,7+-0,5

1етаболизм пуриновых производных при псориазе. В плазме крови ак-ивность ПНФ при псориазе снижалась, а активность АДА не выходила за ределы физиологических колебаний нормы(Табл.4). Полученные данные згласуются с результатами авторов, отметивших незначительное увели-;ние активности АДА у больных псориазом в сыворотке крови по срав-гнию со здоровыми лицами и больными Т-клеточной лимфомой и грибо-здным микозом [ Koizumi et al.,1992 ^Специфическая активность 5'-уклеотидазы в плазме крови изменялась незначительно, общая актив-эсть 5'-НК имела тенденцию к повышению за счет повышения неспеци-ической активности 5'-НК, что, по-видимому, свидетельствует о наличии )спалительного процесса у больных псориазом.

Таблица 4, Активность АДА и ПНФ в различных биологических

объектах у здоровых и больных псориазом (М+.м).

Показатель Здоровые лица Больные псориазом Р1 Р2

До лечения После лечения -

, V: Лимфоциты

АДА,нмоль/ч. 106 клеток 102,5±2 161±40 96+17 ' >0,5 >0,5

ПНФ,нмоЛь/ч. 106 «лет. 165±31 184±41 134+32. >0,5 >0,5

Плазма

АДА нмоль/мг.ч 98±10 Н9±22 57±М - >0,5 <0,05

ПНФ нмоль/мг.ч 85±7 59±12 56±17 =0,5 >0,5

Эритроциты

АДА нмоль/мг.ч 91±8 184+26 130+25 <0,01 >0,5

ПНФ , нмоль/мг.ч 152±12 286±38 158±27 . <0,0 1 >0,5

Кожа

АДА нмоль/мг.ч 51±3 128±14 164±30 0,001 >0,5

ПНФ нмоль/мг.ч 72+22 14Ш9 225±46 ' <0,01 "J 1 >0,5

Р1 - достоверность различия между здоровыми лицами и больными псо риазом, Р2 - до и после лечения. '"'

В клетках кожи при псориазе наблюдается резкое снижение уров-!сй содержания всех монофосфатов пуринов: AMP, GMP и 1МР(Табл.5). Особенно важно исчезновение ключевого метаболита пуринового ряда шозин-5-монофосфата (IMP) и накопление конечный продуктов обмена: ссантина и мочевой кислотыПодобное соотношение пуриновых произ-юдных свидетельствует об активации их катаболизма.который характерен шя многих патологических Процессов, сопровождающихся нарушениями -каневого обмена и деструкцией тканевых структур и может служить оп->еделенным маркером тяжести течёния патологического процесса. Акгив-юсть АДА и ПНФ в биоптатах кожи при псориазе возрастала более, чем в (ва раза по сравнению со здоровыми лицами (Табл.4 ), при этом уровень денозина пятикратно снижался, а, соответственно, уровень инозина - воздетая (Табл.5). Двукратное увеличение активности ПНФ хорошо корре-¡ирует с парой субстратов аденозин/аденин, а найденные изменения в паре [нозин/гипоксантин - не соответствуют возросшей активности фермента. )то может быть вызвано резко возросшей активностью другого фермента [уринового обмена, а именно, ксантиноксидазы. При псориазе было наивно значительное увеличение активности ксантиноксидазы по сравнению ., эпидермисом здоровых лиц [ Matsuo et al.,1979 ]. В этом, случае шпок-антин может быстро переходить в ксантцн и далее в мочевую кислоту, в одобной ситуации накопление гипоксантина не будет происходить, но олжно наблюдаться увеличение уровней ксантина и мочевой кислоты, олученные данные подтвердили это предположение (Табл.5). Наши ис-ледования согласуются с данными авторов [ Matsue I. е.а.,1979 ], которые оказали, что специфическая активность ПНФ и ферментов, участвующих реутилизации свободных пуриновых соединений (1уанингипоксантнн и ценин фосфорибозилтрансферазы ), значительно выше в эпидермисе ольных псориазом, чем в эпидермисе здоровых лиц, авторы пришли к за-

ключению, что в псориатическом эпидермисе пуриновые нуклеотиды деградируют до азотистых оснований, а затем активно включаются в систему реутилизации.,

Таблица 5. Содержание пуринрвых соединений в биоптатах кожи у

Норма Псориаз После лечения

AMP 20+1 4±1* 8±2**

Ado 6±1 1±0.2* 1±0.3

Ade - 3±1* 4±I

Guo 3+1 - -

GMP 17±3 7±2* 4±1

IMP 18±3 - --

Ino 4±1 7±2 5±1

Hyp 7+2 3±1* 4+1

Хап 2±1 6i2* -

UA 2±1 ' "5±2 3il

В эритроцитах крови при псориазе регистрировалась тенденция накопления конечного продукта обмена пуринов - Hyp, а также повышение уровня Хап и UA в 4-5 раз и снижение концентрации IMP ( Табл.6 ). Активность АДА в эритроцитах при псориазе достоверно увеличивается и аналогичная тенденция характерна для ее субстратной пары адено-зин/инозин. С другой стороны, увеличение активности ПНФ в эритроцитах при псориазе не коррелирует с показателями таких субстратов, как аденозин/аденин и инозин/гипоксантин ( Табл.6 ) Скорее всего, в эритроцитах аденозин метаболизирует через аденозиндезаминазную активность, а не через ПНФ. Двукратное увеличение активности АДА и ПНФ в коже, и в эритроцитах, может свидетельствовать об однонаправленном изменении пуринового обмена в кератиноцитах и эритроцитах.

Таблица 6. Содержание пуриювых соединений в эритроцитах у больных псориазом( нмоль/1мл, М+- ш)

Норма Псориаз После лечения

АМР 214± 40 162+32 184±36

Ас1о 3± 1 2±1 1±0.4

Ас1е 3± 1 2± 1 0.2±0.1

вио -- - -

6МР 36±10 20±8 18±6

1МР 13±3 6+2* 14±3 * *

1по 3+1 7±2* 9±3

Нур 4+1 6±2 3+1

Хап 2±1 10+2* 3±1**

ил 3±1 12±3* 4+1**

В лимфоцитах при псориазе отмечалась тенденция к увеличению ктивностй АДА и ПНФ, ( Табл.4 ), а также отмечалось некоторое сниже-:ие общей активности 5'-НК в среднем с ( 2,0+-0,3 )нМ/мин!06 мл ,о(! ,4+-0,2)нМ/мин 10мл за счет достоверного уменьшения специфической ктивности 5'-НК с ( 1,4+-0,2 ) до ( 0,8+-0,2)нМ/мин10 мл у больных псо-иазом (Р<0,05), что указывает на изменение функциональной активности имфоцитов. При псориазе была выявлена прямая связь (г=0,7) между ак-ивностью АДА в лимфоцитах и числом В-лимфоцитов и обратная с коли-еством Т-хелперов % (г=-0,7). Активность 5'-НК коррелировала с абсо-ютным (г=0,8) и относительным числом Т-общих лимфоцитов (г=0,6), с бсолютным числом Т-хелперов (г=0,7), а также с иммунным коэффициен-ом (г=0,7). Взаимосвязи активности ПНФ с показателями субпопуляций имфоцитов при псориазе не было найдено.

Таблица 7. Содержание пуриновых соединений в лимфоцитах у больны; псориазом( рмоль/10 клеток, М± т) .,

Норма Псориаз После лечения

AMP 70±20 8±3* 18±б**

ADO 31±12 16+4* 12i; 4

ADE 2±1 6±2* 2+1**

GUO - - -

GMP 5±1 7+2 18+4**

IMP 18+3 12±4 8±2**

INO 24+5 ' 36+6* 12±3**

HYP 55±14 86±23 108±32

XAN 6±2 - -

UA 2±1 8±3* 5±2

В лимфоцитах при псориазе обращает на себя внимание резкое падение

аденозина.

ti"

концентрации адениновых производных: AMP и (Табл.7).Уровни гипоксантина и мочевой кислоты у больных псориазом превышали контрольные величины, что также говорит о перестройке обмена в иммунокомпетентных клетках и указывает на важность' иммуно-компетентного звена в патогенезе данного заболевания. Полученные результаты свидетельствуют о том, что изменение иммунного статуса при псориазе сопряжено со специфическими нарушениями активности ключевых ферментов пуринового обмена и с изменением уровней содержания промежуточных метаболитов в лимфоцитах, эритроцитах и эпидермисе, что отражают данные хроматографического анализа. Данные исследования могут послужить основой для коррекции метаболизма кератиноцитов и клеток лимфоидной системы с целью восстановлен«я иммунного статуса у больных псориазом.

)ценка эффективности применения препарата Энкад в комплексной тера-ии больнМх псориазом. После применения Энкада в эритроцитах и лим-юцитах отмечается тенденция к нормализации активности АДА и ГТНФ Габл.4). 2-х кратное увеличение соотношения АДА/ПНФ в плазме крови, также увеличение этого показателя в эпидермисе и лимфоцитах больных сориазок^, после проведенного лечения достигало нормальных величин в пазме, лимфоцитах и коже, данный показатель, по-видимому, можно ис-эльзовать в качестве контроля за эффективностью лечения. После прове-гнного лечения общая активность 5'- НК в плазме крови нормализуется, шжение неспецифической' активности 5'- НК, свидетельствует об леньшении воспалительного процесса в организме. После лечения корре-[ционные связи между активностями изученных ферментов характерно шближаются к корреляционным зависимостям, зарегистрированным у ;оровых лиц.

После курса терапии с препаратом нуклеотидной природы в эритритах нормализуются показатели свободных ПНК (табл.6) и активность ючевых ферментов пуринового метаболизма, АДА.ПНФ (табл.4) и 5'-<., а также нормализуется КРФ эритроцитов, что свидетельствует о по-жительной)динамике в транспорте ПНК, В лимфоцитах нормализуются нцентрации адениновых производных: AMP, аденозина и аденина »6л.7) и активности ферментов их обмена (табл.4);изменение соотноше-я лизин/аргинин богатых фракций приближается к контролю (табл.3) и мечается >пйрераспределение субпопуляций лимфоцитов, что свидетель-5ует об изменении функциональной активности лимфоцитов и эффек-аности действия терапии на метаболические процессы в лимфоцитах. В гтках кожи (табл.5), по-видимому, активность ксантиноксидазы значИ-[ьно ингибируется проводимыми медикаментозными мероприятиями.

Уровень гистонов в лимфоцитах и плазме крови у больных псориазом изменялись, параллельно, однако, после лечения была зарегистрирована различная динамика изучаемых показателей в плазме крови и лимфо-цитах(табл.2,3), что говорит в пользу представления о том, что отмеченное распределение гистонов в плазме крови при псориазе в значительной степени отражает метаболические нарушения, происходящие в пораженного эпидермисе.

Было найдено, что у 50% обследованных уровень ФНО-& после терапии значительно снижался, у 30% больных практически не изменялся, и только у 20% больных отмечалось некоторое увеличение уровня ФНО-а.

Терапевтический эффект от применения комплексной терапии ( фототерапия и Энкад ) наблюдался у всех больных после 3-5 сеансов ПУ-ВА-терапии с применением препарата Энкад. Полученные результаты позволяют судить о целесообразности использования комплексной терапии (Энкад и ПУВА-терапия) у больных распостраненным псориазом.

На основе проведенных исследований можно предложить следующую схему патохимических нарушений при псориазе .

Основным симптомом при псориазе является усиленная пролиферация кератиноцитов и нарушение процессов клеточной дифференцирое-ки. Одним из биохимических показателей усиления процесса пролиферации эпидермальных клеток является найденное нами снижение уровня сАМР и увеличение концентрации сБМР в биоптатах пораженной кожи В пораженном эпидермисе должно происходить ускорение процессов регеч нерации и репарации тканей раневой поверхности, данные процессы требуют увеличенного количества предшественников нуклеиновых кислот: ДНК, РНК и ПНК. ,

В псориатическом эпидермисе происходит активация катаболизма

пуриновых производных: в кератиноцитах отмечается резкое снижение

24

»нофосфатов пуринов AMP, GMP и IMP и накопление конечных продук-В обмена, что свидетельсвует о катаболизме пуриновых производных. В идермисе пури новые нуклеотиды деградируют до азотистых, оснований, ¡атем активно синтезируются по запасному. "Salvage" пути, утилизируя рины, образующиеся при распаде нуклеиновых кислот.

1 В настоящее время обсуждается вопрос о роли лимфоцитов при их щмодействии с «ератиноцитами при псориазе. Увеличению доли про-ферирующйх лимфоцитов в периферической крови, соответствует дву-атное увеличение соотношения активности АДА/ПНФ в лимфоцитах, торое указывав! на омоложение лимфоцитов. В лимфоцитах у больных ориазом' отмечается снижение специфической активности 5'-НК , что азывает на изменение функциональной активности лимфоцитов. Высо-i уделтая активность АДА и низкая активность 5'-НК должны созда-гь условия для поддержания низкого уровня аденозина. Снижение кон-тграции аденозина и AMP в лимфоцитах у больных псориазом установ-10 и подтверждено нами определением свободных субстратов фермен-ивных реакций. Изменение иммунного статуса при.псориазе сопряжено специфическими нарушениями активности ключевых ферментов пури-зого обмена и с изменением уровней содержания промежуточных мета-штов в лимфоцитах, на уровне ядерных структур, характерным являет-увеличение доли аргининбогатых гистонов при практически не отли-Ощимся от нормы содержании в них ДНК и РНК; уровень различных акций гистонов достоверно коррелирует с относительным количеством упрессоров и количеством В-клеток.

Транспорт пуриновых производных в эритроцитах при псориазе >ушен, на что. указывает многократное снижение пула предшественни-I нуклеиновых. В эритроцитах и коже при псориазе происходит актива-I катаболизма пуриновых производных, которая свидетельствует об од-

25

ненаправленном изменении пуринового обмена в кератиноцитах и эри роцитах, о возможном транспорте нуклеотидсв эритроцитами в клеи эпидермиса и лимфоциты.

В плазме крови больных псориазом уровень сАМР достовер! снижается по сравнению со здоровыми, а концентрация свМР достовер? повышается, эти изменения происходят параллельно изменениям цикл: ческих нуклеотидов в эпидермисе и свидетельствуют ,об увеличении пр лиферативной активности эпидермальных клеток и лимфоцитов при ув личении концентрации М§ в плазме крови.

Перераспределение различных фракций гистоноподобных белков плазме крови, заключающееся в снижении доли лизинсодержащих гнет нов при одновременном повышении количества аргининбогатых гистоно связано с активацией ядерных' структур кераТиноцитов при псориазе, ч: подтвердилось динамическими исследованиями уровня гистоноподобнь белков у больных псориазом в процессе комплексной терапии.

Выход в кровоток ядерного материала может способствова" формированию аутоиммунных процессов. У больных распространенны псориазом отмечается в крови повышенное содержание антител к ДНК преобладанием аутоантител к нативной ДНК, что может способствова' формированию аутоиммунного процесса; отмечена высокая частота выя ления антител к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека.

Установлено, что ФНО-а инициирует каскад синтеза эпидермальнь цитокинов в культурах клеток фибробластов и кератиноцитов,а также й рает регуляторную роль при выработке эпидермальных цитокинов, ра сматриваемых в качестве воспалительного компонента. Существует пре,

у

положение, что ФНО-а прямо или косвенно влияет на клеточную прол; ферацию и инфильтрацию псориатических бляшек.У больных псориазе

' п

выявляется достоверное повышение концентрации сывороточного ФНО

26

сравнении с практически здоровыми людьм, установлены достоверные зличия в показателях уровня ФНО-а в крови больных псориазом при зличных формах и стадиях течения заболевания.

Данные исследования дают возможность наметить рациональные пу-коррекции метаболизма кератиноцитов и клеток лимфоиД'ной системы с лью восстановления имммунного статуса у больных псориазом. При ак-вации процессов катаболизма в поврежденной эпидермальной ткани для сполнения пула свободных предшественников НК и усиления процессов генерации, необходим дополнительный источник предшественников С-для этой цели был предложен в качестве комплексной терапии препа-г нуклеотидной природы - Энкад, который одновременно является и ¡муномодулятором

лводы

На уровне целостного организма при псориазе существует система меж-шевого сопряжения метаболизма свободных пуриновых соединений и ючевых ферментов их метаболизма, включающая в себя пути катабо-зма, транспорта и утилизации нуклеозидов и азотистых оснований в идермисе, иммунокомпетентных клетках и эритроцитах. В эпидермисе и эритроцитах при псориазе отмечается резкое снижение нофосфатов пуринов AMP, GMP и IMP и накопление конечных продук-з обмена: гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты, что свидет'ёльст-;т об активации катаболизма пуриновых производных:, < ■. . Двукратное увеличение активности АДА и ПНФ в коже, и в эритроци-с, свидетельствует об однонаправленном изменении пуринового обмена :ератиноцитах и эритроцитах. При псориазе нарушается,,транспорт ПНК, эажая процессы, в псориатическом эпидермисе; в эритроцитах больных эриазом многократно снижается пул ПНК-

4. Соотношение активности ферментов и уровней содержания пуриновы соединений в различных тканях больных псориазом указывает как на о( щую тенденцию активации катаболизма пуринов и накопление конечны продуктов обмена, в изученных клетках, так и на определенные биохим> ческие различия в,обмене пуринов в клетках крови. Изменение активное! аденозиндезаминазы и пуриннуклеозидфосфрорилазы может служить oi новным биохимическим маркером, отражающим нарушения в эпидермис эритроцитах и лимфоцитах, а пуриннуклеозидфосфорилазы и в плаз\ крови.

5. В лимфоцитах,,периферической крови при псориазе возрастает прол! феративная активжхрть, меняется распределение субпопуляций лимфощ тов, которое связано с изменением активности аденозиндезаминазы, 5 нуклеотидазы и увеличением доли аргининбогатых гистонов.

6. Активация ядерных структур кератиноцитов при псориазе сопровожд; ется снижением процентного содержания Н1-гистонов в плазме, при од})1 временном увеличении общей фракции Н2аЩН4 - гистонов...

7. При псориазе выявлены аутоиммунные нарушения, заключающиеся повышенном содержании антител к ДНК . с пре,обладанием аутоантител нативной ДНК (30% больных). Отмечена высокая частота выявления анп тел к поверхностным, антигенам фибропластов кожи человека (36%), коп рая зависит от тяжести и длительности, заболевания, но не,зависит от noj Антитела к антигенам щитовидной железы в крови,больных распростр ненным псориазом присутствуют в пределах, допустимых нормой.

8. Установлена гиперпродукция сывороточного ФНО-а, указывающая i

присущее для псориаза острое воспаление дермы. В прогрессирующе

стадии заболевания значения активности ФНО-а в 2.6:,раза:.превышал

показатели, полученные у больных в стационарной стадии псориаза.

больных с псориатической эритродермией уровень ФНО-а достовер!

28

аше, чем при обычной форме псориаза. Наиболее высокая активность НО-а отмечена у больных, с длительностью заболевания до 1 года. . Применение комплексной терапии с препаратом нуклеотидной приро-.1 приводит к нормализации метаболизма пуриновых производных в итроцитах, лимфоцитах и эпидермисе. Наиболее информативным для [енки эффективности лечения оказалось соотношение активности АДА к НФ и определение уровня ФНО-а Данные исследования помогут наметь рациональные пути коррекции метаболизма кератиноцитов и клеток ¡мфоидной системы с целью восстановления имммунного статуса при ориазе.

шсок работ по теме диссертации.

Маркушева Л.И., Самсонов В.А., Фомина Е.Е., Полянская Н.П. Содержание розина и триптофана в сыворотке крови больных псориазом // Вопросы днаг-стики лечения и профилактики ЗПП и дерматозов. - Рязань, 1995. - С.75-76. Маркушева Л.И., Фомина Е.Е., Полянская Н.П., Волнухин В.А., Волков В.М., регородцева Е.Е. Значение комплексных биохимических исследований у пьных псориазом // Актуальные проблемы дермато венерологии. - Астрахань -,1995.-С.52-53.

Тихонов Ю.В., Маркушева Л.И., Тогузов Р.Т. Высокоэффективная жидкостная эматография пуриновых соединений в эпидермисе и крови больных псориазом Тез. докл.: VTI Всероссийский симпозиум по молекулярной жидкостной хрома-рафии. - М.,1996. - С.73.

Маркушева Л.И., Фомина Е.Е., Самсонов В.А. Некоторые показатели биохи-ческого, тиреоидного и аутоиммунного статуса у больных псориазом // Успехи >ретической и клинической медицины: Материалы 1 научной сессии РМАПО. I., 1995.-С.191.

Маркушева Л.И., Савина М.А., Решнна В.М. Гистоны, нуклеиновые кислоты и предшественники у больных псориазом // 7 Российский съезд дерматологов и [ерологов.-4.1. - Казань, 1996.- С.97.

■аркушева JI.И.. Фомина Е.Е., Сафонова Т.Г. Концентрация фактора некроз опухоли (а) в сыворотке крови больных псориазом // Там же. С.98.

7. Тихонов Ю.В.. Маркушева Л.И., Тогузов Р.Т. Анализ пуриновых соединени в эпидермисе и крови больных псориазом методом высокоэффективной жидкс стной колоноч ной ^юматографии // Там же,С. 1.08-109.

8. Маркушева Л.И., Фомина Е.Е., Самсонов В.А., Сафонова Т.Г. Спектр антите различной специфичности в сыворотке крови бальных псориазом // Кожные венерические болезни. - М.: Медицина, 1996. - С.79-83.

9. Маркушева Л.И., Савина М.А., Самсонов В.А. Решина В.М., Тогузов РЛ Анализ уровня гистонов в плазме крови у больных псориазом // Там же, С.6( 65.

10 . Маркушева Л.И., Полянская Н.П. Активность 5'-нуклеотидазы в плазме клетках крови при псориазе. // I конгресс'дерматовенерологов Казахстана, 199< - .Алматы, С.92.

11. Маркушева Л.И., Савина М.И., Решина В.М., Самсонов В.А., Тогузов Р.Т. Гистоны в крови при псориазе // там же,С.93.

12. Маркушева Л.И., Самсонов В.А., Тихонов Ю.В., Тогузов Р.Т., Савина М.И Решина В.М., Полянская Н.П. Новые данные о биохимических нарушениях пр псориазе // Научно-практическая конференция посвященная 75-летию ЦНИКВ1 Тезисы докладов. - М.,1996. - С.57-58.

13. Маркушева Л.И. Активность пуриновых ферментов при псориазе // Клит ческая лабораторная диагностика. - 1997. - № 6. - С.37.

14. Савина М.И., Маркушева Л.И., Решина В.М. Гистоновые белки крови пр псориазе // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997. - № 6. - С.44.

15. Тихонов Ю.В., Маркушева Л.И., Тогузов Р.Т. ВЭЖХ - анализ пуриновы соединений в эпидермисе и крови больных псориазом // Клиническая лаборато} ная диагностика - 1997. - № 6. - С.47.

16. Маркушева Л.И., Сафонова Т.Г. Влияние препарата ЭНКАД на активное! ферментов пуринового обмена при псориазе // Новое в диагностике ^ Леченй заболеваний, передающихся половым путем и болезней кожи. - М., 1997,- С.6:

66' 30

. Маркушева Л.И., Полетаев-А. И., Чистякова И.А. Пролиферативная актин-, сть лейкоцитов периферической крови при псориазе // Там же. т С.67-69. . Yu.V.Tikhonov, R.T.Toguzov, L.I.Markusheva. Purine. Metabolism in Psoriasis -

97, Basel, August 17-22, Medlab, 12 TH IFCC, European, Congress of Clinical lemistri.

. Кубанова A.A., Маркушева Jl.И., Фомина Е.Е. Уровень сывороточного фак-ра некроза опухоли (а ) при различных дерматозгсх // Русский журнал "ВИЧ/ 1ИД и родственные проблемы". - 1997. - С.146-147.

. Kubanova A.A., Markusheva L.I., Fomina Е.Е. The serum tumor necrosis factor /el in variou dermatoses U Russian J. of HIV / AIDS / cancer and relatied problems.. 997. - V. 1.- №. 1.- P.262-263.

. Маркушева Л.И., Тихонов Ю.В., Тогузов P.T. Пуриновые соединения и фер-нты их метаболизма при псориазе И Актуальные вопросы современной медины. - Воронеж, 1997. - С.39-44.

. Маркушева Л.И., Самсонов В.А., Фомина Е.Е., Чистякова И.А. Уровень сы-роточного фактора некроза опухоли (а) у больных псориазом // Веста, дерма-логии.-1997.-№3.- С.8- И.

. Кубанова A.A., Маркушева Л.И., Фомина Е.Е. Уровень сывороточного iKTopa некроза опухоли у больных различными дерматозами // Иммунология. -

98.- № 2,- С.47-49.

. Маркушева Л.И., Фомина Е.Е., Кеда Ю.М., Морозова М.С., Панков Ю.А. тгитела к фибробластам кожи человека у больных псориазом // Иммунология. -98. -№ 3. - С.52 - 53.

. Тихонов Ю.В., Маркушева Л.И., Тогузов Р.Т. Метаболизм пуриновых соеди-ний при псориазе // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998,- № 3.- С.З-

. Маркушева Л.И., Самсонов В.А., Фомина Е.Е., Кеда Ю.М., Димант Л.Е. Ан-тела к фибробластам кожи человека у больных различными дерматозами И ;стн. дерматол. и венерологии. - 1998. - № 2. - С.31 - 33.

27 . Маркушева Л.И., Тихонов Ю.В., Тогу зов Р.Т. Метаболический пул пурине вых соединений в эпидермисе и крови больных псориазом с применением пр( парата Энкад// Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - № 8. - С.43. 28. Маркушева Л.И., Савина М.И., Решина В.М., Талицкий В.В. Ядерные белк в оценке эффективности комплексной терапии у больных псориазом. / / там яо С.43.

1. Информационный лист: Маркушева Л.И., Волнухин В.А., Полянская Н.П. Адаптивные белки сыворотки крови у больных псориазом как критерий оценк общей реактивности организма. / / Веста, дерматол. и венерологии. - 1995. - J 5.-С.60.

Маркушева Людмила Игоревна (Россия). Метаболизм предшественников нуклеиновых кислот при псориазе.

При одновременном определении ключевых ферментов и уровня содержания свободных пуриновых соединений в эпидермисе и крови при псориазе выявлены активация катаболизма пуринов и накопление конечных продуктов обмена. При псориазе нарушается транспорт предшественников нуклеиновых кислот (ПНК), в эритроцитах многократно снижается пул ПНК. В лимфоцитах периферической крови возрастает пролифератнв-ная активность, снижается уровень Н1-гистонов, меняется распределение субпопуляций лимфоцитов, связанное с изменением активности аденозиндезаминазы, 5'-нуклеотидазы. Активация ядерных структур кератиноци-тов при псориазе сопровождается снижением процентного содержания HI-гистонов в плазме крови. Аутоиммунные нарушения заключаются в повышении содержания антител к ДНК и антител к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека; установлена гиперпродукция сывороточного ФНО-а, которая зависит от тяжести и длительности заболевания. Ludmila L. Markusheva (Russia). Metabolism of nucleic acid's predecessors in psoriases.

Activation of purine catabolism and accumulation of final metabolism products was discovered during simultaneous research of key enzymes and content level of free purines in epidermis and blood in psoriases. In psoriases transport of nucleic acid's predecessors (NAP) in erythrocytes is invalid and NAP pool is going to be significantly reduce. Proliferation activity and distribution of lymphocyte's subpopulations which connects with activity changes of adenosindesominase, 5'nucleotidase and reduction of Hl-histones is going to be increased in the lymphocytes of peripheiy blood. Activation of keratinocytes nuclei structures in psoriases is accompanied by decreasing of percent content Hl-histones in blood plasma. Autoimmune diseases include high DNA antibody's content, antibodies to surface antigenes of human's derma fibroblastes determination; hyperproduction of serum's TNF-a which depends on the hardness and duration of disease was found.

8.09.98г. Объем 2п. л._Тир. 100_Зак. 592

Тип. РУДН , Орджоникидзе, 3

Текст научной работыДиссертация по биологии, доктора биологических наук, Маркушева, Людмила Игоревна, Москва

Ü- CS 02

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ КОЖНО-ВЕНЕРОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

МАРКУШЕВА Людмила Игоревна

МЕТАБОЛИЗМ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ ПСОРИАЗЕ. 03.00.04 - биохимия

Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Р. Т. Тогузов

доктор медицинских наук, профессор В.А. Самсонов

Москва - 1998 г.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.......................................................................................................9

ГЛАВА I. Обзор литературы..........................................................................17

1.1 Особенности пролиферативной активности клеток, их регуляция на основе клеточных взаимодействий, цитокинами, циклическими нуклеотидами и аутоиммунные нарушения при псориазе.........................17

1.1.1. Пролиферативная активность эпидермальных клеток.....................17

1.1.2. Пролиферативная активность лейкоцитов при псориазе.................24

1.2. Иммунологические и аутоиммунные нарушения при псориазе.........27

1.3. Влияние эпидермальных ростовых факторов и цитокинов на

гиперпролиферацию при псориазе.................................................................33

1.3.1. Фактор некроза опухолей - альфа (ФНО - а)......................................36

1.4. Регуляция пролиферативной активности с помощью циклических

нуклеотидов.....................................................................................................40

2.1. Основные белки хроматина и их роль в регуляции нормальных и патологических процессов..............................................................................48

3.1. Ферментные системы обмена нуклеотидов...........................................65

3.2. Ферменты пуринового обмена при иммунной недостаточности и других патологических состояниях...............................................................70

3.3. Значение ПНК в разных видах обмена веществ.....................................79

3.4. Роль обменных нарушений при псориазе..............................................83

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ....90

2.1. Условия получения биологического материала....................................90

2.2.Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии пуриновых производных....................................................................................................92

2.2.1. Получение КРФ биоптатов кожи........................................................92

2.2.2. КРФ эритроцитов крови.......................................................................92

2.2.3. Получение КРФ лимфоцитов...............................................................93

2.2.4. Хроматографический метод исследования........................................93

2.3. Определение активности пуриннуклеозидфосфорилазы, аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы в различных биологических объектах.........................................................................................................100

2.4. Методика определения различных фракций гистонов......................103

2.4.1. Выделение кислоторастворимой фракции (КРФ), РНК и ДНК из лимфоцитов крови.........................................................................................103

2.4.2. Фракционирование гистонов лимфоцитов крови...........................104

2.4.3. Выделение гистоноподобных белков из плазмы крови..................105

2. 5. Определение субпопуляций лимфоцитов...........................................106

2.6. Методика определения пролиферативной активности лимфоцитов с помощью проточной ДНК- цитометрии.......................................................107

2.7.Определение активности с AMP и cGMP в различных биологических образцах..........................................................................................................108

2.8. Иммуноферментные методы исследования.........................................109

2.9. Методы клинической биохимии...........................................................113

3.10. Клиническая характеристика обследованных пациентов.................114

3.11. Применение препарата Энкад в комплексном лечении больных псориазом.......................................................................................................117

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ..............................................................................................119

ГЛАВА 3. РОЛЬ ХЕМОКИНОВ И АУТОИММУННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ПСОРИАЗЕ...........................................................................................119

3.1.Антитела к нативной денатурированной ДНК, к тиреоглобулину и микросомальной фракции тиреоцитов..........................................................119

3.2. Антитела к фибробластам кожи человека.............................................123

3.3. Уровень сывороточного фактора некроза-альфа при различных дерматозах......................................................................................................128

ГЛАВА 4. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ КЛЕТОК И ЕЕ РЕГУЛЯЦИЯ ПРИ ПСОРИАЗЕ...................................................................136

4.1. ДНК-анализ лейкоцитов при псориазе..................................................136

4.2. Уровень циклических нуклеотидов в эпидермисе и плазме крови...............................................................................................................144

4.3.Изменение концентрации некоторых ионов, влияющих на синтез

ДНК..................................................................................................................147

ГЛАВА 5. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ГИСТОНОВЫХ БЕЛКОВ ПРИ ПСОРИАЗЕ.....................................................................................................150

5.1. Содержание тирозина и триптофана в сыворотке крови здоровых лиц и больных псориазом.....................................................................................150

5.2. Различные фракции гистоновых белков плазмы крови......................152

5.3. Гистоновые белки в лимфоцитах..........................................................160

ГЛАВА 6. МЕТАБОЛИЗМ ПУРИНОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ПРИ ПСОРИАЗЕ.....................................................................................................167

6.1 Изучение активности ферментов пуринового обмена при псориазе в плазме крови..................................................................................................168

6.2. Анализ содержания свободных предшественников нуклеиновых кислот и активности ферментов их обмена в эпидермисе. .........................................................................................................................171

6.3. Изучение обмена пуриновых соединений в эритроцитах..................175

6.4. Анализ метаболизма пуриновых производных в лимфоцитах..........177

ГЛАВА 7. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА ЭНКАД В ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ.....................................190

7.1. Влияние терапии на клинические показатели у больных псориазом........................................................................................................191

7.2. Влияние комплексного применения Энкада на активность ферментов пуринового обмена........................................................................................196

7.3. Влияние комплексного применения препарата Энкад на пул свободных пуриновых соединений..............................................................200

7.4. Анализ действия комплексной терапии с применением препарата Энкад на гистоновые белки крови..............................................................210

7.5. Влияние терапии на иммунологические нарушения при

псориазе...........................................................................................................215

ЗАКЛЮЧЕНИЕ...............................................................................................222

ВЫВОДЫ.........................................................................................................226

ЛИТЕРАТУРА................................................................................................229

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АДА (ADA) - аденозиндезаминаза АДФ (ADP) - аденозиндифосфат АМФ (AMP) - аденозинмонофосфат АТФ (АТР) - аденозинтрифосфат

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГДФ (GDP) - гуанозиндифосфат

ГМФ (GMP) - гуанозинмонофосфат

ГТФ (GTP) - гуанозинтрифосфат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

КРФ - кислото-растворимая фракция

ПНК - предшественники нуклеиновых кислот

ПНФ - пуриннуклеозидфосфорилаза

РЕК - рибонуклеиновая кислота

УДФ - уридиндифосфат

УМФ - уридинмонофосфат

УТФ (UTP) - уридинтрифосфат

цАМФ (сАМР) - циклический аденозинмонофосфат

цГМФ (cGMP) - циклический гуанозинмонофосфат

ЦДФ - цитозиндифосфат

ЦТФ (СТР) - цитозинтрифосфат

5'-НК 5'- нуклеотидаза

Ade - аденин

Ado - аденозин

Gua - гуанин

Hyp - гипоксантин

IMP - инозинмонофосфат

Ino - инозин

Uric acid (UA) - мочевая кислота

Xan - ксантин

ФНО-а - фактор некроза опухолей - а

АФ - антитела к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека АтТГ - антитела к тиреоглобулину

АтМс - антитела к микросомальной фракции тиреоцитов

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. На пролиферацию эпидермиса влияют разнообразные факторы, одним из которых являются циклические нуклеотиды [Asahina et.al.,1995; Evain-Brion,1994; Heng et.al., 1994].Важное место в цепи регуляции пролиферативной активности клеток отводится гистонам-основным белкам, составляющим большую часть хроматина и выполняющим структурную функцию в его организации, конформационные изменения гистонов могут регулировать уровень конденсации хроматина и т.о. деятельность генома [Спирин, 1990]. Для процесса пролиферации необходимо наличие определенного сбалансированного пула предшественников нуклеиновых кислот (ПНК). Пуриновые соединения являются непосредственными и незаменимыми участниками в реакциях репликации, транскрипции и трансляции, в гликолизе, цикле Кребса и окислительного фосфорилирования, в окислении жирных кислот, при биосинтезе липидов. [Ленинджер, 1985]. Таким образом, различные нуклеотиды и их производные, выполняя в клетках самые разнообразные функции во всех звеньях обмена, играют интегративную роль в сети метаболических реакций.

При псориазе происходит нарушение иммунных механизмов, в которые вовлекаются Т-лимфоциты и их субпопуляции, взаимодействуя с кератиноцитами путем экспрессии адгезивных молекул, ростовых факторов и хемокинов [Nickoloff, et.al., 1993;Tagami et al.,1994; Heng et

а1.,1994; УоогИееБ, 1996]. Установлено, что нарушение метаболизма пуриновых нуклеотидов тесно связано с иммунными растройствами организма [01Ыей,1972]. При иммунодефицитных состояниях, обусловленных полным или частичным отсутствием аденозиндезаминазы (АДА) и пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ), в лимфоцитах, в сыворотке крови или в моче накапливаются повышенные количества аденозина, а также и соответствующие основания - гуанин, гипоксантин и ксантин, т.е. продукты незавершенного катаболизма пуринов [ Б^топсЬ е1 а1., 1978]. В свою очередь, выход в кровоток ядерного материала может способствовать формированию аутоиммунных процессов [Эадорожный,1983]. Определение аутоантител к ДНК, к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека, может быть необходимым звеном в изучении аутоиммунных механизмов в патохимии псориаза, а также послужить теоретическим обоснованием для разработки рациональных схем лечения.

Изучение активности ключевых ферментов пуринового обмена в сочетании с оценкой их реального субстратного окружения, лимитирующего скорость метаболизма пуриновых производных в нормальных и патологически измененных тканях, представляет не только теоретический, но и существенный практический интерес в качестве основы рационального поиска препаратов для коррекции данной патологии.

Цель работы. Выявление биохимических механизмов патогенеза псориаза на основе изучения особенностей метаболизма предшественников нуклеиновых кислот, ядерных белков хроматина в эпидермисе и крови и аутоиммунных нарушений при псориазе. Основные задачи исследования.

1. Выяснить особенности появления аутоантител к нативной и денатурированной ДНК, к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека, к микросомальной фракции тиреоцитов и тиреоглобулину в зависимости от формы, тяжести и длительности заболевания.

2. Оценить уровень фактора некроза опухолей-а (ФНО-а) в зависимости от формы и тяжести заболевания и в качестве критерия эффективности проводимой терапии.

3. Определить уровень пролиферативной активности лимфоцитов и сопоставить с уровнем циклических нуклеотидов в эпидермисе и крови.

4. Изучить особенности распределения различных фракций гистонов, нуклеиновых кислот и их предшественников (по показателям кислоторастворимой фракции) в лимфоцитах и плазме крови, сравнить уровни гистоновых белков с распределением субпопуляций лимфоцитов при псориазе.

5. Исследовать метаболизм свободных пуриновых соединений и активность ключевых ферментов пуринового обмена в эпидермисе, в лимфоцитах, в эритроцитах и плазме крови.

6. Сопоставить биохимические изменения в лимфоцитах с распределелением субпопуляций лимфоцитов и уровнем пролиферативной активности клеток.

7. Провести анализ эффективности комплексного способа терапии псориаза препаратом нуклеотидной природы.

8. На основе изучения особенностей метаболизма предшественников нуклеиновых кислот, циклических нуклеотидов и гистоновых белков, в эпидермисе и крови при сопоставлении с иммунологическими и аутоиммунными изменениями предложить схему патохимических нарушений при псориазе.

Научная новизна. Впервые предпринято систематическое исследование закономерностей обмена пуриновых оснований, нуклеозидов и нуклеозидмонофосфатов и ключевых ферментов их метаболизма в условиях реально существующих соотношений субстратов и активности ферментов в различных тканях организма.

Впервые даны качественные и количественные характеристики пула свободных пуриновых соединений и активности ферментов пуринового обмена в эпидермисе, являющемся местом поражения, лимфоцитах, отвечающих за иммунные механизмы развития псориаза, эритроцитах, являющихся транспортной системой свободных предшественников нуклеиновых кислот и плазме крови, среде поддерживающей гомеостаз в организме.

В работе впервые обнаружена активация катаболизма пуринов в эпидермисе и эритроцитах больных псориазом, которая сопровождается накоплением конечных продуктов обмена: гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты и увеличением активности пуриннуклеозидфосфорилазы и аденозиндезаминазы, что свидетельствует об однонаправленном изменении пуринового обмена в кератиноцитах и эритроцитах. Отмечен механизм ускоренной утилизации пуриновых соединений, образующихся при распаде кератиноцитов с помощью энергетически выгодного "запасного" пути. Получены новые данные о роли эритроцитов в качестве транспортной системы переноса предшественников нуклеиновых кислот между тканями организма; отмеченные изменения в метаболизме пуринов в эритроцитах являются отражением процессов, происходящих в псориатическом эпидермисе.

Впервые установлено, что изменение иммунного статуса при псориазе сопряжено со специфическими нарушениями активности ключевых ферментов пуринового обмена, с изменением уровней содержания промежуточных метаболитов в лимфоцитах, изменением пролиферативной активности лимфоцитов и перераспределением гистонов, которое зависит от распределения субпопуляций лимфоцитов.

Получены новые данные об относительном содержании гистоноподобных белков в плазме крови. Снижение содержания фракции

Н1 гистонов в плазме крови связано с активацией ядерных структур кератиноцитов при псориазе.

В работе получены новые данные о наличии аутоиммунных нарушений: повышенное содержание антител к ДНК с преобладанием аутоантител к нативной ДНК, антител к поверхностным антигенам фибробластов кожи человека, зависящие от длительности и тяжести заболевания. Отмечена гиперпродукция ФНО-а в сыворотке крови, зависящая от формы и стадии заболевания.

Научно-практическое значение работы. Разработано новое направление в изучении патохимии обмена предшественников нуклеиновых кислот в коже, а также в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных псориазом. Полученные данные раскрывают ряд метаболических нарушений и могут быть использованы для разработки новых принципов терапии данного заболевания с помощью метаболитов пуринового ряда, направленных на регуляцию и коррекцию ферментных систем обмена предшественников нуклеиновых кислот в различных тканях, а также направленных на коррекцию иммунологических нарушений. Показано, что наиболее информативным показателем, отражающим изменения пуринового обмена в эпидермисе, эритроцитах и плазме крови является определение активности пуриннуклеозидфосфорилазы, а в качестве контроля за эффективностью проводимой терапии соотношение активностей аденозиндезаминазы к пуриннуклеозидфосфорилазе.

Проведенные исследования позволили разработать ряд положений, имеющих практическое значение для оценки тяжести заболевания и решения вопроса об индивидуальной терапии - целесообразно использовать определение антител к ДНК и поверхностным антигенам фибробластов кожи человека, а также уровень ФНО-а. На основе изучения свободных пуриновых соединений, активности ферментов их обмена, распределения различных фракций гистонов и аутоиммнунных нарушений была предложена схема патохимических нарушений при псориазе. С помощью изученных биохимических и иммунологических показателей была проведена оценка эффективности комбинированной терапии с применением препарата нуклеотидной природы. Положения, выносимые на защиту.

1.Патохимия псориаза непосредственно затрагивает систему обмена предшественников нуклеиновых кислот, включая изменение активности ферментов и их субстратов.

2. Особенности метаболизма пуриновых производных в эпидермисе при псориазе заключаются в активации катаболизма с одновременным усилением реутилизации пуринов по "Salvage" - пути.

3. Эритроциты в качестве транспортной системы для предшественников нуклеиновых кислот осуществляют функцию сопряжения путей синтеза и распада ПНК в клетках кожи и иммунокомпетентных клетках.

4. Пролиферативные и ф