Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Метаболизм N-нитрозаминов в организме крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Метаболизм N-нитрозаминов в организме крупного рогатого скота"

я-зше

На правах рукописи

ВДОВКИНА Мария Александровна

' ¿У

МЕТАБОЛИЗМ 1Ч-НИТРОЗАМИНОВ В ОРГАНИЗМЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Специальность: 03.00.13 — физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА —2001

Работа выпотнена на кафетре физиотогии и биочнмии ли-вогных в Московской сетьскохозяиственной академии им К Л Тимирязева и 1аборатории методов скриииша канцерогенов НИИ канцерогенеза Московского онкоюгического центра имени Н Л Блочина

Научные руководите™ доктор оио юг ических нavre, профессор Н.С. Шевелев кандидат биологических huvk Л.В. Криво-шеева.

Официа [ьные оппоненты доктор био i на\к профессор H.A. \лфимцсв; кандидат бло J havk А.П. Огашш.

Bcдvщaя оргашпация Всесоюзный научно исстедоватетьскни инститч г кормов им ВФ Витьямса

Защита диссертации состоится üU'fC/2 ¿tfci-2001 1

в «/?>*часов на заседании диссертационно! оховета Д 220 04Я 09 в Московской се шскохозяйственнои академии им К \ Гимн рязева

\др^ 127^0, Москва, Но50, 1и\шря}евская v i 44, ученый сов^г V \А

С диксц.ициеи мо кно ознакомиться в ЦНБ МСХА

Автореферат

Ученьи Apeiap д.-сссргапионно

I VI Подко.пина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Среди соединений азота известны группы активных канцерогенных веществ, одной из которых являются нитрозоамины. Повсеместность распространения этой чрезвычайно обширной группы веществ, выраженная бластомогенность, способность вызывать опухоли практически любого органа у 40 видов животных, трансплацентарный и мутагенный эффекты и другие особенности указывают на большую опасность нитрозосоединений для животных и человека (Анохин Б. М. и др., 1994; Рубенчик Б. Л., 1990; РаПЬавагаШу Я. е1 а1,1980 и др).

В настоящее время учеными доказана возможность синтеза НА из предшественников, в частности нитратов, в организме моногасгричных животных (ГИЦтаЪ Б. Б., 1986). Не смотря на это, возможность образования нитроз аминов в организме полигастричных животных изучена недостаточно: Противоречивы данные о содержании НА в.кормах.

Желудок крупного рогатого скота, состоящий из четырех отделов, анатомически и физиологически существенно отличается от желудка других животных. Изучение образования НА в организме жвачных животных представляет не только научный, но и большой практический интерес, поскольку синтезированные в преджелудках канцерогены могут оказаться в составе мяса и молока. Также доказано, что нигрозамины, синтезированные в организме матери, могут оказывать токсическое и канцерогенное действие на плод.

На образование и накопление НА в организме оказывают влияние многие факторы, в том числе минеральные элементы. Магний является элементом структурно или функционально связанным со многими ферментными системами, одной из которых являются неспецифические оксидазы микросом, обезвреживающие токсические и канцерогенные вещества

Диссертация является самостоятельной частью комплексной темы: «Изучить метаболические пути и разработать эффективные способы повышения физиологического воздействия биологически активных веществ (биоэлементов, витаминов, тканевых препаратов и пробисггиков) на организм сельскохозяйственных и промысловых животных» - № гос. регистрации 01930005482. -

Цель и задачи исследований. Целью исследования являлось - изучить возможность и механизм образования нитрозаминов из нитратов в желудочно-кишечном тракте быков-кастратов, накопление нитрозаминов в мышечной ткани и

ЦЕНТРАЛЬНАЯ " 1 ' НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА Моск. сельсксжоз академии

внутренних органах, а также исследовать влияние магния на вышеперечисленные процессы

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи

- изучить возможность образования нигрозаминов из нитратов в рубце и сычуге быков-кастратов,

- исследовать зависимость между содержанием нитратов в рационе и уровнем нитроз аминов в рубце, сычуге и крови,

- исследовать динамику образования нитроз аминов в рубце и сычуге в зависимости от уровня нитратов и магния в рационе,

- исследовать динамику образования нигрозаминов в рубце и сычуге в зависимости от уровня рН,

- исследовать содержание нигрозаминов в разных отделах желудочно-кишечного тракта быков-кастратов,

- исследовать содержание нигрозаминов в крови и накопление их в мышечной ткани и внутренних органах,

- исследовать влияние магния на процессы синтеза, всасывания и кумуляции нигрозаминов в организме крупного рогатого скота

Научная новизна Впервые доказано, что нитроз амины могут синтезироваться в желудочно-кишечном тракте крупного рогатого скота из нитратов Установлено, в каком отделе желудочно-кишечного тракта происходит синтез нигрозаминов и прямая связь этого процесса с содержанием нитратов в химусе. Изучено влияние уровня рН на динамику образования и количественный выход нигрозаминов из нитратов в рубце и сычуге Прослежено распределение нигрозаминов в органах и мышечной ткани Впервые показано влияние магния на динамику образования и количественный выход нитроз аминов из нитратов в рубце и сычуге, всасывание данных соединений в кровь и кумуляцию в мышечной ткани и внутренних органах быков-кастратов

Практическая ценность выполненной работы заключается в том, что выявлен новый аспект отрицательного влияния нитратов на организм животных и экспериментально доказана роль магния, как фактора, снижающего образование нигрозаминов в желудочно-кишечном тракте и их накопление в мышечной ткани и внутренних органах. Полученные данные могут быть использованы при дальнейших исследованиях азотистого обмена крупного рогатого скота и

разработке методов снижения канцерогенного воздействия нитроз аминов на организм животных. Также полученные данные могут быть использованы в учебном процессе, в разделе обмен веществ и получение экологически чистых продуктов животноводства.

Основные положения, выносимые на защиту:

- возможность образования нигрозаминов в рубце и сычуге;

- образование нигрозаминов в рубце в зависимости от уровня нитратов и магния в рационе;

- динамика образования нигрозаминов в рубцовой жидкости и химусе сычуга в условиях in vitro в зависимости от содержания нитратов в среде и уровня рН;

- присутствие нигрозаминов в различных отделах желудочно-кишечного тракта быков-кастратов;

- динамика содержания нигрозаминов в крови во взаимосвязи с их содержанием в рубце; .

- кумуляция нигрозаминов в мышечной ткани и внутренних органах, пути выделения из организма.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на;

- научной конференции Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева (декабрь, 2000); ■ ■ -

- научной конференции молодых ученых и специалистов Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева, посвященной 136 годовщине со дня основания академии (июнь, 2001);

- межкафедральном заседании зооинженерного факультета ТСХА (июнь, 2001).

Публикации. По теме диссертации опубликованы две печатные работы. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах

машинописного текста, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методика исследований, заключение, выводы, предложения, литература, приложения. Работа содержит У/ таблиц, Ю рисунка?., 3 приложений. Список литературы включает /£<Р источников, в т. ч. <?<Р иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа проводилась в условиях вивария и кафедры «Физиологии и биохимии

сельскохозяйственных животных» МСХА, лаборатории «Методов скрининга канцерогенов» Московского Онкологического центра им Н А Блохина.

В качестве подопытных животных были использованы б быков-кастратов черно-пестрой породы 12-22-месячного возраста, подобранных методом пар-аналогов

Опыт проводили методом параллельных групп-аналогов по три животных в каждой группе Всем животным были наложены фистулы рубца методом Басова.

Эксперимент состоял из двух периодов В первом периоде животные получали основной суточный рацион обшей питательностью 7,1 корм ед. Естественное содержание нитратов в сухом веществе рациона составляло 0,03 %. Содержание магния - 2,1 г/кг сухого вещества.

Во втором периоде животные получали основной рацион, общая питательность которого составляла 7,81 корм ед. Естественное содержание нитратов в сухом веществе кормов составляло 0,1 %. В этот период эксперимента в рацион животным обеих групп вводили нитрат калия, увеличивая тем самым содержание нитратов до 0,58 % в сухом веществе корма Кроме того животным опытной группы в рацион вводили оксид магния в соответствии со схемой (табл 1)

В каждом опытном периоде у животных брали пробы цельного рубцового содержимого (ЦРС) и крови из яремной вены через 4 и 10 часов после кормления. В конце каждого периода были проведены балансовые опыты

По окончании второго периода из рациона животных исключали добавку нитрата калия и после трехнедельной выдержки провели убой животных с последующим отбором проб химуса из всех отделов желудочно-кишечного тракта, а также паренхиматозных органов, четырехглавого мускула бедра, большого и малого поясничных мускулов По окончании чкеперимента in vjvo и снятии нитратной нагрузки были проведены исследования in vitro

Таблица 1

_Схема опыта (иг vivo)_

Группа животных

Условия кормления

1 период (0,03 % нитратов от сухого вещества рациона)

Контрольная I OP,

Опытная [ OPt + Mg (1 г/кг сухого вещества рациона в составе оксида) |

2 период (0,58 % нитратов от сухого вещества рациона)

н

Контрольная

ОР2

Опытная

OPj + Mg (1 г/кг сухого вещества рациона в составе оксида)

\

Рубцовую жидкость брали у животных до утреннего кормления и, фазу инкубировали при температуре 39° С по схеме (табл. 2).

Таблица 2.

Группа животных Рацион Добавки к среде Уровень рН

1 вариант

Контрольная ОР2 Без внесения ЮЧ03 Естественный

Опытная ОР2 + Мя

2 вариант

Контрольная ОР2 Добавка КИОз (200 мг/л РЖ) перед началом инкубации Естественный

Опытная ОР2 +

3 вариант

Контрольная ОР2 Добавка ЮМ03 (200 мг/л РЖ) перед началом инкубации Сдвинут на единицу в кислую сторону от естественного уровня перед началом инкубации

Опытная ОР2 +■ Мя

Схема инкубации химуса сычуга в принципе была сходна с таковой для рубцовой жидкости.

Химус сычуга для инкубации отбирали при убое животных. Инкубацию проводили параллельно в четырех различных вариантах. В первом варианте инкубировали цельный сычужный химус, без добавок, при естественном уровне рН. Во втором варианте перед началом инкубации уровень рН сдвигали на единицу от естественного в щелочную сторону. В третьем и четвертом вариантах в химус перед началом инкубации вносили добавку нитрата калия, а в четвертом кроме того изменяли уровень рН в щелочную сторону.

Продолжительность инкубации составляла 4 часа. Пробы химуса для анализа брали через каждый час инкубации.

В течение эксперимента во всех отобранных пробах ЦРС, РЖ, химуса различных отделах желудочно-кишечного тракта, внутренних органах и мышечной ткани определяли содержание нитратов и нитроз аминов. В химусе также определяли уровень рН.

Полученный экспериментальный материал был обработан биометрически с использованием статистических компьютерных программ. Достоверность

разности между сравниваемыми средними величинами устанавливали с помощью критерия Сгьюдента

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3 1 Метаболизм N-нигрозаминов в рубце, сычуге и крови быков-

кастратов Эксперименты и vivo 3 1.1. Метаболизм N-аитрозаминов в цельном содержимом рубца Результаты первого периода эксперимента показали, что через 4 часа после кормления уровень нитратов в рубце у животных обеих групп был значительно выше, чем через 10 часов Так, у животных контрольной группы он выше в 2,55 раза, а у быков опытной - в 3,62 раза Уровень нитратов в цельном содержимом рубца через 10 часов после кормления был незначительным (табл 3) Не наблюдалось больших различий по этому показателю и между группами животных

Параллельно с нитратами в содержимом рубца идентифицировали и количественно определяли содержание НА. В результате исследований в образцах были обнаружены дваМ-нитрозамина. НДМА и НДЭА

У животных как опытной, так и контрольной групп содержание обоих нитроз аминов в рубце с течением времени, прошедшего после кормления увеличивалось

Таблица 3

Содержание нитратов и НА в ЦРС быков-кастратов в 1 период (0,03 % нитратов в

сухом веществе рациона)

Группа животных Время взятия проб N-NO3, мг/кг рН i НДМА, ¡ НДЭА, нг/кг 1 нг/кг 1

Контрольная 4 ч после кормления 5,6 г 1,41 1 6,22 Je 0,14 ' 5,8 i 0,44 16,1 ±2,58 1

Опытная 4 ч после кормления 7,6 1 5,93 ± 0,41* ± 1,28 Í 11,0 ± 0,07* j 14,2 ± 1,13

Контрольная 10 ч после кормления 2,2 ±0,00 6,83 ±0,186 49,3 ± 2,30 0 | 59,4 23,7 1

Опытная 10 ч после кормления 2,1 ±0,28* 7,13 ±0,22" 22,3 i 35,6 ± 1,94® 1 i . .

• - разность достоверна в сравнении с контрольной группой, р < 0,05, 6 - разность достоверна в сравнении с предыдущим часом

Так, в ЦРС. быков-кастратов контрольной группы в первый период эксперимента содержание НДМА через 10 часов после кормления, по сравнению с пиком пищеварения, возрастало в 8,5 раз (разность достоверна), а НДЭА - в 3,7 раза.

В рубце животных опытной группы эти показатели возрастали соответственно в 2,03 и 2,5 раза При этом рост содержания обоих нитрозаминов был достоверный. В ЦРС быков-кастратов опытной группы концентрация нитрозаминов выше, чем у контрольных через четыре часа после кормления, и ниже в состоянии «натощак».

Нитроз амины могут накапливаться в рубце животных двумя путями: либо поступать с кормом, либо синтезироваться непосредственно в рубце. В пользу первого предположения говорит более высокое содержание в рубце НДЭА, которого больше в кормах по сравнению с НДМА. В пользу второй гипотезы говорит тенденция к росту содержания нитрозаминов при снижении нитратов. Это подтверждают полученные коэффициенты корреляции: между содержанием нитратов и нитрозаминов (НДМА и НДЭА) обнаружена тесная отрицательная связь (минус 0,72 и минус 0,77, соответственно).

Таблица 4.

Содержание нитратов и НА в ЦРС быков-кастратов во 2 опытный период (0,58 %

нитратов в сухом веществе рациона).

Группа животных Время после кормления рН N-N03, мг/кг НДМА, нг/кг НДЭА, нг/кг

Контрольная 4 ч. после кормления 5,90 ±0,06* 17,1 ±2,83* 61,3 ±11,67' 39,8 ±23,62

Опытная 4 ч. после кормления 5,84 ± 0,21 13,2 ±4,24 121,4 ± 23,48* Н. О.»

Контрольная 10 ч. после кормления 6,42 ±0,106 12,5 + 2,55' 53.3 ± 3,75 Н. О.

Опытная 10 ч. после кормления 6,31 ±0,18' 4,7 ±0,21*^' 235,4 ± 14,35*Л' НО.

* — разность достоверна в сравнении с контрольной группой, р £ 0,05; 6 - разность достоверна в сравнении с предыдущим часом;

* - разность достоверна в сравнении с 1 периодом эксперимента при содержании 0,03 % нитратов в сухом веществе рациона

* - нитрозамин не обнаружен.

В течение второго периода эксперимента, когда животные получали высокие дозы шпротов в содержимом рубца быков опытной группы как до кормления, так и через 4 часа после кормления содержание нитратов было ниже, чем у контрольных. При длительной нитратной нагрузке в рубце развивается микробная ассоциация, восстанавливающая нитраты, поскольку возникает необходимость утилизации небелкового азота. Чем выше численность и активность бактерий-нитрификаторов, тем интенсивнее происходит разрушение субстрата (табл 4)

Интересные данные были получены по содержанию нигрозаминов Так, в рубце животных опытной группы, в сравнении с контрольным периодом эксперимента, концентрация НДМА как до, так и через 4 часа после кормления возрастала более, чем в II раз Поскольку разность между периодами эксперимента достоверна, можно предположить, что нитраты явились предшественниками нитрозаминов в рубце Однако, у животных контрольной группы концентрация НДМА была значительно шоке

Микрофлора рубца быстро восстанавливает нитраты в нитриты, но скорость этого восстановления может оказаться выше, чем скорость перехода нитрита в аммиак.

Поскольку нитрит-ион является высокореакционным веществом, он может вступать во взаимодействием с различными компонентами рубцового содержимого

В рубце у животных контрольной группы переход нитратов в нитриты замедлен, в связи с этим, вероятно, скорость восстановления большинства нитрит-ионов до аммиака выше, чем скорость их вступления в реакции нитрозирования Хотя синтез НА в рубце быков-кастратов контрольной группы замедлен, он тем не менее происходит Об этом говорит достоверность разности по содержанию НДМА между контрольным и опытным периодами эксперимента через 4 часа после кормления животных. Интересно заметить, что с ростом нитратной нагрузки резко снижается синтез НДЭА. Коэффициент корреляции, полученный между содержанием двух НА, может свидетельствовать о том, что при высокой дозе нитратов в среде между НДМА и НДЭА начинается «борьба за предшественника», то есть нитрит-ион Нитрит-ион в первую очередь выступал в качестве нитрифицирующего агента именно для димегил- а не диэтиламина.

3 12 Уровень нитрозаминов в крови во взаимоствязи с их содержанием в рубце

Параллельно с исследованием содержимого рубца мы изучали содержание нитратов и НА в крови. У животных контрольной группы в первый период

эксперимента уровень НА в крови незначительно отличается от содержания в рубце При этом, чем выше концентрация НА в рубце, тем выше она и в крови и максимальное содержание отмечено у животных в состоянии натощак. Вероятно, это связано с тем, что НА очень быстро всасываются стенкой рубца и переходят в кровь Так, во второй период эксперимента уровень НДМА в крови более, чем в три раза превышает таковой в рубце

Содержание НА в крови животных опытной группы, наоборот, в 1,5 - 2 раза ниже, чем в рубце Одним из факторов, снижающих всасывание нигрозаминов в кровь, может служить высокая обеспеченность организма азотом и его соединениями С ростом численности микрофлоры увеличивается и количество белка, которое животные получают за счет отмирающих бактерий и простейших Нельзя исключать и экскрецию НДМА в следующих отделах желудочно-кишечного тракта

Также, можно предположить, что шггрозамины быстро всасываются в кровь, и переходят в органы и ткани, где выступают в качестве одного из индукторов, повышающих активность системы неспецифических оксидаз микросом Поскольку эти ферменты являются магний-зависимыми, высокие дозы данного элемента могут повышать синтез и активность данной системы.

Эксперименты гп vitro 3 14 Метаболизм нитроз аминов в рубаовой жидкости Проведение экспериментов т vitro позволило получить более широкое представление о синтезе НА в рубце

При инкубации рубцовой жидкости в большинстве образцов были обнаружены N-нитрозодиметиламин (НДМА) и N-нигрозодиэтиламин (НДЭА)

В контрольном варианте инкубации РЖ (без внесения KNG3) наблюдался рост концентрации нитратов в течение всего периода (табл 5) Но, в РЖ животных контрольной группы, в отличие от опытной, было отмечено достоверное снижение содержания нитратов после трехчасового периода инкубации При этом происходило и достоверное снижение содержания ДМНА Максимальное количество ДМНА было зарегистрировано после двухчасовой инкубации РЖ Интересно отметать, что в РЖ животных опытной группы, при начальном содержании нитратов в РЖ практически в два раза ниже, чем в РЖ контрольных быков-кастратов, содержание НДМА через три часа от начала инкубации достигало примерно таких же показателей Следует отметить также, что в РЖ контрольных животных НДЭА был обнаружен только в 25 % проб, тогда как в РЖ опытных - в 67 % Вероятно, это связано с более высокой активностью

микрофлоры рубца.

Так, при просмотре под микроскопом образцов РЖ опытных животных была отмечена более высокая концентрация и активность простейших, по сравнению с РЖ контрольных быков-кастратов.

Таблица 5.

Показатели обмена НА в РЖ при содержании в рационе 2 г магния в кг сухого

вещества (in vitro).

Время, прошедшее от начала инкубации, ч рН N-NO3, мг/л НДМА, нг НДЭА, % проб, в которых он обнаружен от общего количества

Контрольный вариант (при естественном уровне нитратов в РЖ)

До инкубации 6,20 ± 0,05 86,9 + 21,78 49,8 + 4,45 100

1 5,97 ± 0,21 129,4 + 4,24 165,9 + 21,14 0

2 5,79 ±0,01* 157,5 ± 7,71* * 321,7 ±29,63 50

3 5,5610,15* 119^±6Д96 72,0 ± 7,07* * 0

4 5,62 ±0,07* 184,9 ±2,97** 53,8 ± 18,7 0

5 5,59 + 0,17* 198,4 ± 16,12* 105 ± 9,81 100

6 5,4 + 0,03* 210,1 ± 13,65* 120,7 ± 10,19* 0

Опытный вариант (при внесении в РЖ перед началом инкубации 200 мг/л КЖ>з)

До инкубации 6,42 + 0,10 250,3 ±2,90 49,8 + 4,45 ' 100

1 5,99 ± 0,07* S 288,9 ± 2,62* * 108,7 ±8,84** 100 .

2 5,96 + 0,05* 241,8 + 9,05* 254,6 + 7,07* 50

3 5,82 ± 0,02* 286,5 ±14,00 448,7 ±37,11* «.г 100

4 5,72 ±0,05* 271,8 ±2,05 157,2 ±21,16 100

5 5,72 ± 0,05* 289,7 ±24,91 109,4+11,02 50

6 5,68 ±0,08* 340,3 + 31,02* 57,2 ±6,16 50

* - данные достоверны в сравнении с контрольной группой, р ^ 0,05 6 - данные достоверны в сравнении с предыдущим часом, р < 0,05

• - данные достоверны в сравнении с уровнем до инкубации, р й 0,05

г - данные достоверны в сравнении с контрольным периодом инкубации, р 5 0,05.

Следовательно, в рубие КРС содержатся микроорганизмы, способные синтезировать НА даже при получении рациона с низким содержанием нитратов Нитрозиругошим агентом при образовании НА чаще всего выступают нитрит-ионы, которые легче всего связываются с вторичными аминами

Таблица 6

Показатели обмена НА в РЖ при содержании в рационе животных 3 г магния в кг

сухого вещества (т уг(го)

Время, прошедшее от начала инкубации, ч рН N-N0», мг/л НДМА, нг НДЭА, % проб, в которых он обнаружен от общего количества

Контрольный вариант (при естественном уровне нитратов в РЖ)

До инкубации 1 6,58 10.20 1 48,3 + 7.92 20,8 + 2,08* 1 100

I 1 6,18 ±0,14 | 107,6 ±0,00* 214,5 ± 20,06 * ' 100

2 5.95 ±0,14 1 138,7 ±4,536 337,8 ± 32,05* 66.7

3 5,88 ±0,14 I 140,0 ±10,08 268,1 +5,16*-* 66,7

4 ! 6.081:0,16 1 137,1 л: 2,19* 189.2 ±7,07&* 66,7

5 1 5,75 ±0,1<>* | 182,8 ±5,946 120,7 ^ 11,40 50

6 | 5,65 г 0,15' I 202,7 ± 18,58 162,1 5,37 * 50

Опытный вариант (при внесении в РЖ перед началом инкубации 200 мг/л ЮЮ3)

1 До инкубации 6,43 ±0,13 217,2 ± 3,54* 20,8 ± 2,08* 100

1 6 09 ^ 0,18 | 231,9 ±3,06* 94 0 ± 5,876, *"' 50

1 2 | 6,05 г 0,15 187,1 ±4,90*-6»» 339,7 ± 6,58* 66,7

| 3 | 5,95 ±0,18 175,0 ± 17,04* 151,1 ± 8,98*,в- кг 50

1 4 5.92 ±0,18 283,2 г 9Л6*4 • 127,2 ±4,05 0

5 5,87 £ 0,21 299,5 ± 23,90* 134,9 ±4,90 66,7

6 | 5,90 + 0,24 219,9 ± 7,28* 82,6 ± 8,06 1 50

* - данные достоверны в сравнении с контрольной группой, р < 0,05 6 - данные достоверны в сравнении с предыдущим часом, р 5 0,05

* - данные достоверны в сравнении с уровнем до инкубации, р £ 0,05

г - данные достоверны в сравнении с контрольным периодом инкубации, р 2 0,05

С ростом численности и активности микрофлоры в РЖ повышается и содержание продукта азотистого обмена - вторичных аминов, увеличивается и выход НА, но при этом, больше синтезируется НДМА, поскольку скорость нитрозирования его предшественника выше, чем НДЭА.

При добавлении в РЖ нитрата калия (опытный вариант инкубации) картина существенно менялась. Так, наблюдался рост содержания нитратов через 1 час и снижение через 2-3 часа (в зависимости от содержания магния в рационе животных) после начала инкубации (таблица 6.). Затем повышение концентрации нитратов возобновлялось (табл. 6).

Содержание ДМНА в РЖ контрольных животных увеличивалось в течение первых трех часов инкубации, причем через 3 часа уровень ДМНА был достоверно выше, чем при инкубации без внесения добавки KNOj. Затем содержание НДМА снижалось. В образцах РЖ опьггной группы животных наблюдалась та же тенденция, но максимальное содержание НДМА было отмечено через два часа инкубации. Вероятно, это связано с повышенной активностью микрофлоры.

В РЖ быков-кастратов.контрольной группы при инкубации с добавлением KN03 был найден НДЭА в 75 % проб, тогда как в РЖ животных опытной группы -в 47%.

Через 3-4 часа после инкубации уровень НА снижается, вероятно наступает их разложение.

При поступлении в рубец небольших количеств нитратов микроорганизмы расщепляют их до нитритов и аммиака. При увеличении в РЖ содержания нитратов, микрофлора, вероятно, начинает использовать выделяющийся при их расщеплении аммиак не только на синтез веществ своего тела, но и на получение энергии за счет процессов преобразования аммиака в нитрит и далее, вызывая тем самым еще больший рост нитратов в среде.

Синтез НА сильно зависит от многих факторов, в частности, от содержания в среде нитрозирующих агентов, а также уровня рН и времени пребывания корма в рубце. Так, при уровне нитратов в среде до 250 мг/л, коэффициент корреляции между содержанием НДЭА и N-N03,был [-0,76]. Между НДМА и N-N03 - [0,41]. При уровне нитратов более 250 мг/л коэффициенты корреляции между этими показателями были [-0,41] и [-0,12], соответственно. При'уровне нитратов более 250 мг/л была обнаружена очень тесная связь между содержанием НДМА и НДЭА [0,98]. Изменялись и коэффициенты корреляции между содержанием НА и рН. При низком уровне нитратов, коэффициенты корреляции между НДЭА, НДМА и

рН составляли [-0,52} и [0,67], соответственно При более высокой концентрации нотратов в среде эти коэффициенты равнялись [0,3] и [0,42] Это показывает, что оптимальным уровнем рН для синтеза НДМА будет 5,9 - 6,3, а для НДЭА - 5,5 -5,8

3 14 Метаболизм нитроз аминов в химусе сычуга Данные, полученные при инкубации цельного содержимого сычуга показали, что синтез НА может происходить и в этом отделе желудочно-кишечного тракта, но менее интенсивно, чем в рубце Синтез НА в кислой среде происходит в основном химическим путем, а не эгоиматически Для успешного прохождения реакции нигрозирования необходимо присутствие в среде достаточного количества проггонированной формы вторичных аминов, а следовательно фактором, оказывающим большое влияние является уровень рН Так, максимальное содержание НА при инкубации сычужного химуса было зарегистрировано при рН близком к 4,0 При снижении уровня рН и концентрации нитратов в среде уменьшалась и концентрация НДМА НДЭА был обнаружен тишь в следовых количествах в единичных пробах.

3 2 Содержание N нитроз аминов в разных отделах желудочно-кишечного

тракта быков-кастратов При анализе химуса разных отделов желудочно-кишечного тракта максимальное содержание НДМА было зарегистрировано в рубце (рис. 1)

Поскольку содержание НДМА в данном отделе было выше, чем поступление с кормом, можно предположить, что происходил его синтез _Рисунок 1

] СОмвржаниендмАараэныхотделахЖКТ

Отдел XV ИТ

Однако, интенсивного всасывания НДМА в кровь через стенку рубца, по-видимому, не происходило, поскольку концентрация в книжке незначительно ниже. Интенсивное всасывание НДМА происходило, по-видимому, в сычуге и в двенадцатиперстной кишке. Здесь НДМА был обнаружен лишь в следовых количествах. Резкое повышение концентрации как НДМА, так и нитратов было, обнаружено в тощей кишке, что вероятно связано с экскрецией данных соединений из крови обратно, в желудочно-кишечный тракт. Также незначительный переход НДМА из крови в желудочно-кишечный тракт, по-видимому, происходил в ободочной кишке. Накопление НДМА в тощей и ободочной кишках может быть связано не только с экскрецией, но и с более медленной скоростью прохождения химуса через данные отделы. ,

В результате проведения балансовых опытов было установлено, что • при низком содержании в рационе выделение НДМА из организма превышает их поступление , с кормом в среднем на 1/3, баланс нитратов при этом положительный. С ростом нитратной нагрузки наоборот, нитратов выделялось практически в два раза больше, чем поступало, а баланс НДМА был положителен.

3.3. Накопление 1Ч-нитроз аминов в мышечной ткани и внутренних органах.

При анализе внутренних органов животных контрольной и опытной групп были обнаружены различия между содержанием НДМА (табл. 7).

Максимальное содержание НДМА у животных контрольной группы было обнаружено в сердце, а минимальное — в легких. У животных опытной группы максимальное содержание НДМА было найдено в печени, а минимальное, также как и у быков контрольной в легких. При этом разность между содержанием НДМА в четырехглавом мускуле бедра, сердце, печени, селезенке и крови животных опытной группы по сравнению с контрольной была достоверной.

Нитроз амины характеризуются ярко выраженной органной специфичностью. По данным различных исследователей, органотропносгь НА может изменяться в зависимости от дозы и длительности действия, вида и линии животных, наличия активаторов и ингибиторов нитрозирования. В данном эксперименте полученная достоверность разницы показывает, что одним из факторов, влияющих на накопление НА в различных внутренних органах является содержание магния в рационе.

Активность системы неспецифических оксидаз микросом в различных органах и тканях не одинакова Различается и количественное содержание ферментов данной группы. Наиболее высокая их активность как правило наблюдается в

печени

Таблица 7

Содержание НА во внутренних органах и мышечной ткани быков-касгратов

Органы и мышцы Группа животных НДМА, нг/кг НДЭА, нг/кг

Четырехглавый мускул Контрольная 129,2 ± 8,98 Н О

бедра Опытная 375,2 ± 14,35' 103,8 ±29,42

Большой и малый.' Контрольная 55,4 ± 7,28 Н О

поясничный МУСКУЛ Опытная Н О Н О

Сердце Контрольная 697.3 £ 2,83 Н О

Опытная 428,7 * 9,81* Н О 1

Печень Контрольная 376,3 ± 6,79 Н О

Опытная 669,2 ± 12.02* Н О

Почки Контрольная 19,0 ±2.74 20,97 £ 1,91

Опытная 79,8 £3,71 108,8 £ 8,63*

1 Селезенка Контрольная 99,3 ± 0.42 Н О

Опытная 86,7 £ 2,78* 38,3 - 0,66

Легкие Контрольная 15,6 £ 1,51 20,2 £ 3,79

Опытная 68,2-9,05 71,3 ± 15,1

! Кровь Контрольная 154,2 ± 24,18 Н О

1 Опытная 39,1 £6,58* 14.2 £431*

* - разность достоверна по сравнению с контрольной группой

ВЫВОДЫ

1 Экспериментально доказан синтез в рубце у быков-кастратов М-шггрозодимстиламина и М-нигрозодиэтиламина. При этом наибольший выход зарегистрирован НДМА

2 Установлено, что нитраты являются одними из предшественников шпрозаминов при синтезе в рубце и сычуге

3 Проведенные нами исследования показали, что в желудочно-кишечном тракте крупного рогатого скота образуются М-нитрозодиэтиламин и М-нитрозодиэтиламин как при высоком (0,58 % от сухого вещества), так и низком (0,0$ % от сухого вещества) содержании нитратов в рационе Наиболее высокие концентрации М-шпрозодиметиламина обнаружены в рубце и тощей кишке.

4 Увеличение в рационе животных дозы магния с 2,1 до 3,1 г на кг сухого вещества стимулирует распад нитратов, увеличивает содержание шпрозаминов

в рубце при уровне нитратов ОДЗ% в сухом веществе рациона и снижает при концентрации предшественника на границе ПДК, а также укорачивает время пребывания нитроз аминов в крови.

5. В опытах in vitro наиболее интенсивно синтез нитрозаминов происходил при концентрациях нитратов в пределах 230 - 270 мг/л рубцовой жидкости, причем N-нитрозодимегиламин при рН 5,9 - 6,2, а N-нигрозодиэтиламин - 5,5 - 5,8. При более высоких или низких концентрациях нитратов или смещении уровня рН синтез нитрозаминов снижается. .

6. Максимальное содержание нитрозаминов в инкубируемой рубцовой жидкости зарегистрировано через два часа после начала инкубации.

7. При естественном содержании магния в рационе (2,1 г/кг сухого вещества) животных и низкой концентрации нитрата калия (0,1 % в сухом веществе) максимальное отложение N-нитрозодиметиламина наблюдается в сердечной мышце. N-нитрозодиэтиламин обнаружен только в почечной и легочной тканях.

8. При увеличении дозы магния в рационе до 3,1 г/кг сухого вещества максимальное отложение N-нитрозодиметиламина наблюдается в печени, N-нитрозодиэтиламин обнаруживается практически во всех органах и тканях.

9. При потреблении быками-кастратами нитратов в количестве 0,58 % сухого вещества рациона в течение 28 суток, кумуляция N-нитрозодиметиламина и,Ы-нитрозодиэтиламина происходит во всех паренхиматозных органах и мышечной ткани. Через 21 сутки после снижения уровня нитратов в рационе быков-кастратов до 0,1 % сухого вещества, N-нитрозодиметиламин и N-нитрозодиэтиламин полностью не выводятся и обнаруживаются во всех паренхиматозных органах и мышечной ткани.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Вдовкина М. А, Кривошеева Л. В. Метаболизм нитрозаминов в рубце крупного рогатого скота in vitro в зависимости от разного уровня нитратов в среде.// Доклады ТСХА, Москва, 2000. - С 210 - 216.

2. Вдовкина М. А, Динамика нитрозаминов в содержимом рубца в зависимости от уровня нитратов в рационе.// Рукопись депонирована" в НИИТЭИАгропром, ноябрь, 2001 г.

Oui ем / ni

Зак S6£,_Гира fQQ

AHO «Издатепьство МСХА» 127550 Москва vt Тимирязевская 44

Введение Диссертация по биологии, на тему "Метаболизм N-нитрозаминов в организме крупного рогатого скота"

Список используемых сокращений. Глава I. Обзор литературы.

1.1. Строение и физико-химические характеристики N-нитрозаминов.

1.2. Канцерогенность и другие проявления биологического действия N-нитрозаминов.

1.3. Синтез N-нитрозаминов и модифицирующие факторы. j 1.4. Эндогенный синтез N-нитрозаминов.

1.4.1. Биосинтез и распад нитратов, нитритов и аминов в пищеварительном тракте животных и человека.

1.4.2. Синтез N-нитрозаминов в организме из нитрита и аминов.

1.4.3. Синтез N-нитрозаминов в организме из. аминов и окислов азота.

1.4.4. Образование макрофагами N-нитрозаминов и их предшественников.

1.4.5. Образование N-нитрозаминов микрофлорой желудочно-кишечного тракта.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Вдовкина, Мария Александровна

выводы

1. Экспериментально доказан синтез в рубце у быков-кастратов N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина. При этом наибольший выход зарегистрирован НДМА.

2. Установлено, что нитраты являются одними из предшественников нитрозаминов при синтезе в рубце и сычуге.

3. Проведенные нами исследования показали, что в желудочно-кишечном тракте крупного рогатого скота образуются N-нитрозодиэтиламин и N-нитрозодиэтиламин как при высоком (0,58 % от сухого вещества), так и низком (0,03 % от сухого вещества) содержании нитратов в рационе. Наиболее высокие концентрации N-нитрозодиметиламина обнаружены в рубце и тощей кишке.

4. Увеличение в рационе животных дозы магния с 2,1 до 3,1 г на кг сухого вещества стимулирует распад нитратов, увеличивает содержание нитрозаминов в рубце при уровне нитратов 0,03 % в сухом веществе рациона и снижает при концентрации предшественника на границе ПДК, а также укорачивает время пребывания нитрозаминов в крови.

5. В опытах in vitro наиболее интенсивно синтез нитрозаминов происходил при концентрациях нитратов в пределах 230 - 270 мг/л рубцовой жидкости, причем N-нитрозодиметиламина при рН 5,9 - 6,2, a N-нитрозодиэтиламина - 5,5 - 5,8. При более высоких или низких концентрациях нитратов или смещении уровня рН синтез нитрозаминов снижается.

6. Максимальное содержание нитрозаминов в инкубируемой рубцовой жидкости зарегистрировано через два часа после начала инкубации.

7. При естественном содержании магния в рационе (2,2 г/кг сухого вещества) животных и низкой концентрации нитрата калия (0,1 % в сухом веществе) максимальное отложение N-нитрозодиметиламина наблюдается

Ill в сердечной мышце. N-нитрозодиэтиламин обнаружен только в почечной и легочной тканях.

8. При увеличении дозы магния в рационе до 3,1 г/кг сухого вещества максимальное отложение N-нитрозодиметиламина наблюдается в печени, N-нитрозодиэтиламин обнаруживается практически во всех органах и тканях.

9. При потреблении быками-кастратами нитратов в количестве 0,58 % сухого вещества рациона в течение 28 суток, кумуляция N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина происходит во всех паренхиматозных органах и мышечной ткани. Через 21 сутки после снижения уровня нитратов в рационе быков-кастратов до 0,1 % сухого вещества, N-нитрозодиметиламин и N-нитрозодиэтиламин полностью не выводятся и обнаруживаются во всех паренхиматозных органах и мышечной ткани.

112

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Завершая изложенные результаты можно сказать, что, схема данного эксперимента была разработана для того, чтобы смоделировать условия реального поступления предшественников в организм животных. Это далеко не идеальные условия для образования НА, зато они позволили приблизиться к оценке реальной степени опасности, связанной с поступлением в организм крупного рогатого скота малых и больших количеств нитратов с кормами и водой. Вероятно, сильное влияние посторонних факторов на нитрозирование при низких концентрациях предшественников послужило причиной большой вариабельности полученных данных.

Второй причиной большого разброса данных могло послужить то, что в организм поступали именно предшественники, а не готовые канцерогены. Количество нитрита и выход нитрозаминов очень сильно зависел от присутствия индукторов и ингибиторов реакции нитрозирования., от наличия определенного объема даже нейтрального субстрата, снижающего возможность встречи нитрита и амина. Не исключается также возможность существования таких факторов, влияющих на нитрозирование, о которых пока еще не известно, ведь метаболизм в организме крупного рогатого скота сильно отличается от такового у моногастричных животных. Тем не менее, в анализируемом эксперименте получены главные результаты - доказано статистически образование НА в рубце крупного рогатого скота, поступление и отложение их в различных органах и тканях. Выявлено влияние нового фактора - магния на Образование и метаболизм НА в желудочно-кишечном тракте, органах и тканях.

110

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Вдовкина, Мария Александровна, Москва

1. Анокпокс П. И., Беспалова Н. Д. Пути снижения нитратов в кормах // Кормовые культуры. М; 1990. - № 3. - С. 18 - 19.

2. Анохин Б. М., Жарков А. Д. Клиническое состояние телят, получавших повышенное количество нитратов в рационах // Профилактика и терапия болезней с/х животных: сб. науч. тр. Воронеж; 1994. - С.68 - 71.

3. Боговский П. А. Образование и распространенность нитрозосоединений в окружающей среде // Экология и рак. Киев: Наук. Думка, 1985. - С. 97 -134.

4. Боговский П. А., Боговский С. П. Количество видов и таксономическая принадлежность животных, для которых установлена канцерогенность N-нитрозосоединений // Эксперим. Онкология. 1982. - 4, №1. - С. 60 - 63.

5. Боговский П. А., Роома М. Я. О веществах, влияющих на образование канцерогенных N-нитрозосоединений // Эксперим. И клинич. Онкология. 1984. - № 6. - С. 3 - 11.

6. Буряков Н. П., Бурякова М. А. Использование питательных веществ коровами-первотелками при скармливании рационов, содержащих нитраты и разный уровень аскорбиновой кислоты //ВСХИЗО -агропромышленному комплексу: сб. науч. тр. -М.; 1994. С. 123 - 124.113

7. Вишняков С. И. Биохимическая характеристика обмена макроэлементов в организме сельскохозяйственных животных в норме и патологии: Автореф. на доктора биол. н. М.; 1968. - 25 с.

8. Власкина С. Г. Влияние некоторых алиментарных факторов на токсическое действие нитритов и эндогенный синтез N-нитрозаминов: Автореф. на канд. мед. наук М.; 1995. - 18 с.

9. Воронина М. В. Динамика показателей крови овец при экспериментальной нитратной гипотоксикации // Профилактика и терапия болезней с/х животных: сб. науч. тр. Воронеж; 1994. - С. 71 - 73.

10. Габович Р. Д., Припутана Л. С. Гигиенические основы охраны продуктов питания от вредных химических веществ. Киев: Здоров'я, 1987. - 248 с.

11. Гауптман Ю., Грефе X., Реманс Органическая химия. Пер. с нем. М.: Химия, 1979 831 с.

12. Гигиенические критерии состояния окружающей среды. 5 // Нитраты, нитриты, N-нитрозосоединения. Женева: ВОЗ, 1981. - 118 с.

13. Главин А. А. Особенности образования канцерогенных N-нитрозаминов из аминов, нитритов и нитратов в водной среде: Дисс. на канд. биол. н. -Киев; 1992. 170 с.

14. Гривул Г. Н. Изучение ассимиляции аммонийного азота в содержимом рубца с помощью '^-соединений: Автореф. на канд. биол. н. Львов; 1981.-18 с.

15. Ефимов А. А., Пашкин В. А. И др. Влияние хронической нитрат -нитритной интоксикации на мембранное пищеварение и показатели крови у свиней // Профилактика незаразных болезней и терапия с/х животных и114пушных зверей. С-Пб; 1992. - С. 20 - 22.

16. Каранина А. Л., Вышемирский Ф. А. К вопросу о влиянии нитратов на организм животных и состав молока // Совершенствование технологии и улучшение качества пищевых продуктов: Сб. науч. тр. Вологда: ООПВОЛУПРСТАТ. - 1994. - с. 3 - 8.

17. Карпиловская Е. Д., Рубенчик Б. Л. Влияние предшественников эндогенно образуемого N-диметилнитрозамина на активность деметилазы этого канцерогена в печени крыс // Бюл. Экспер. Биологии и медицины -1977. -84. -С. 717-719.

18. Катречко Л. И. Количественные изменения амилолитических микроорганизмов и азотистых соединений в содержимом рубца жвачных в зависимости от кормовых факторов: Автореф. на канд. биол. н. Львов; 1970. - 19 с.

19. Кильметова И. Р. Морфофункциональные изменения в организме гусей при острой интоксикации нитратами: Автореф. дисс. на канд. биол. н. -Уфа; 1996. 12 с.

20. Кинцель В., Скрибнер Дж. Д. Рак: эксперименты и гипотезы. М., «Мир», 1877., 360 с.

21. Кириллов В. Н. Физико-химические свойства и перекисное окисление липидов субклеточных структур почек при нитрозаминовом канцерогенезе и дополнительном введении антиоксидантов: Автореф. на канд. мед. н. Челябинск; 1988. - 17 с.

22. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание, И. П. Кондрахин, Н. В. Курилов, А. Г. Малахов и др. М.:115

23. Агропромиздат, 1985. С. 151 - 155.

24. Кондратьев В. С. Показатели В-витаминного обмена у глубокосупоросных свиноматок при кормовой субклинической нитратной интоксикации // Профилактика незаразных болезней и терапия с/х животных и пушных зверей. С-Пб; 1992. - С. 33 - 35.

25. Костюковский Я. Л., Меламед Д. Б. Канцерогенные N-нитрозамины: образование, свойства, анализ // Успехи химии. 1988, - 57, № 4. - С. 625 -655.

26. Кучинский Э. Г. Некоторые микроорганизмы рубца жвачных животных, усваивающие азот небелковых соединений: Автореф. на канд. биол. н. -Боровск; 1967. 14 с.

27. Литвинов Ю. Н. Физиологическое состояние телят и продуктивность коров при потреблении кормов, содержащих различные количества нитратов: Автореф. Дисс. На канд. Биол. Н.: Белгород, 1995. - 18 с.

28. Маги П. Н., Берне И. М. Канцерогенные нитрозосоединения // Успехи в изучении рака. М.: Медицина, 1971. - С. 242 - 323.

29. Менькин В. К., Маслов В. В. Применение тиосульфата натрия для профилактики нитрат нитритных отравлений крупного рогатого скота //116

30. Известия Тимиряз. с/х акад. М.: Изд-во МСХА. - Вып. 4. - С. 151-159.

31. Михайленко В. М., Рубенчик Б. JI. Алкилирование ДНК при эндогенном синтезе N-нитрозодиметиламина // Эксперим. Онкология. 1987. - 9, № 1. -С. 11-14.

32. Михайленко В. М., Фурман М. А. Повреждение ДНК печени крыс при эндогенном синтезе N-нитрозодиметиламина // Эксперим. Онкология. -1986. 8, № 1. - С. 39-41.

33. Морозкина Т. С. Роль витаминов Е и С в развитии злокачественного роста //Эксперим. Онкология. 1986. - 8, №3. - С. 3 - 10.

34. Мысник Н. Д. Превращение нитратов в рубце и их влияние на уровень и соотношение летучих жирных кислот в рубцовой жидкости: Автореф. на канд. биол. н. Боровск; 1967. -20 с.

35. Опополь Н. И., Добрянская Е. В. Нитраты. Кишинев: Штиинца, 1986. -371 с.

36. Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье и пищевых продуктах. М. Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1993. - 16 с.117

37. Осиньковская Н. Д., Рубенчик Б. JI. Биологические особенности клеток легких крыс, культивируемых в среде с предшественниками N-нитрозодиметиламина // Эксперим. Онкология. 1984. - 6, № 6. - С. 33 -37.

38. Осиньковская Н. Д., Рубенчик Б. JI. Действие N-нитрозодиметиламина и предшественников этого канцерогена на клетки почек крыс в однослойной культуре // Цитология и генетика. 1986. - 20, № 4. - С. 280 - 283.

39. Пашкин В. А. Мембранное пищеварение белков у свиней при нитратно -нитритной интоксикации: Автореф. Дисс. На канд. Ветер. Н.: С-Пб, 1993. -19 с.

40. Петрова М. А. Содержание нитратов и нитритов в кормах и крови животных // Новое в кормлении животных и кормопроизводстве: Сб. науч. тр. Моск. Вет. Акад., 1992. - С. 99 - 100.

41. Печкурова В. А. Нитраты в кормах, воде и молоке// Вопросы интенсификации животноводства. Дубровицы.,1994. - Вып. 2. - С. 51 -52.

42. Поляков В. Ф., Арсеньев Д. Д. Некоторые аспекты нитрозаминов, нитратов и нитритов в связи с интенсификацией сельскохозяйственного производства // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, химиотерапии и токсикологии. М.: ВИЭВ, 1990. - С. 83 - 87.

43. Попов В. А. Глобальный аспект загрязнения атмосферного воздуха. В кн.: Гигиена атмосферного воздуха, воды и почвы / под ред. Г. И. Сидоренко, М. И. Карачунской. М.: 1973, С. 3-16.

44. Реутов В. П., Сорокина Е. Г. и др. Комплексаторно приспособительные механизмы при нитратной гипоксии у крыс // Бюллетень экспер. биологии и медицины. -М.: «Медицина». - 1993. - Т. CXVI, № 11. - С. 506 - 508.

45. Роома М. Я., Пийроя А. Э. Влияние овощей на синтез нитрозодиметиламина в модельных системах // Канцерогенные нитрозосоединения и их предшественники образование и определение в118окружающей среде: Тез. V Всесоюз. Симп. Таллин: Б. И. 1984. - С. 41 -42.

46. Росивал Л., Энгаст Р., Соколай А. Посторонние вещества и пищевые добавки в продуктах. М.: Лег. И пищ. пром-сть, 1982. - 264 с.

47. Рубенчик Б. Л. Изменение содержания рибофлавина у крыс при канцерогенезе, вызванном п-диметиламиноазобензолом, и при введении пищевого красителя амаранта // Вопросы питания. М. - 1963. - № 3. - С. 72-78.

48. Рубенчик Б. Л. Изучение возможных канцерогенных примесей в пищевых продуктах // Рациональное питание. М. - 1973. - вып. 9. - С. 131 - 135.

49. Рубенчик Б. Л. О роли нитритов в канцерогенном действии нитрозаминов // Минеральные удобрения и качество пищевых продуктов. Таллин: Б. и., 1980.-С. 164- 167.

50. Рубенчик Б. Л. Образование канцерогенов из соединений азота. Киев: Наук. Думка, 1990 - 220 с.

51. Рубенчик Б. Л. Питание, канцерогены и рак. Киев: Наук. Думка, 1979. -220 с.

52. Рубенчик Б. Л., Костюковский Я. Л., Меламед Д. Б. Профилактика загрязнения пищевых продуктов канцерогенными веществами. Киев: Здоров'я, 1983. - 160 с.

53. Рубенчик Б. Л., Осиньковская Н. Д. и др. Роль нитратов в канцерогенезе // Экспериментальная онкология. Киев.: Наукова думка. - 1990. - № 5. -Т.12.-С. 3-7.

54. Рубенчик Б. Л., Плисс М. Б., Горбань Г. П. и др. О биохимических изменениях в печени, сопровождающих эндогенный синтез диметилнитрозамина // Канцерогенные N нитрозосоединения -действие, синтез, определение. - Таллин. - 1978. - С. 148 - 149.

55. Рубенчик Б. Л., Хмельницкий Г. О., Тпстш Л. А. Ма ш. Запоб1гання утворенню канцерогенних нпрозополук в оргашзм1 велико! poraToi119худоби // BicH. АН УРСР. 1987. - № 2. - С. 32 - 29.

56. Семерджян Г. А. Азотистые и углеводные соединения простейших отряда Oligotricha рубца жвачных: Автореф. на канд. биол. н. Ереван; 1971.-25 с.

57. Соколов В. А. Все о нитратах. М.: О-во "Знание" Российской Федерации, 1992. - 56 с.

58. Сокольская Н. Н. Оптимизация методов определения канцерогенных N-нитрозаминов в объектах окружающей среды и результаты исследований по Российской Федерации: Дисс. на канд. биол. н. М.; 1994. - 149 с.

59. Соловьева Т. Некоторые особенности метаболизма аммиака у жвачных животных в условиях различного кормления: Автореф. на канд. биол. н. -Харьков; 1971. -23 с.

60. Стрельников В. В. Влияние нитратных нагрузок на обмен веществ у птицы // Повышение эффективности мясного птицеводства на Северном Кавказе: сб. науч. тр. Краснодар: КГАУ. - 1996. - С. 112-114.

61. Сухомлин К. Г., Дмитриенко С. Н., Калинина А. А. Действие повышенных доз нитратов и нитритов на организм животных и их коррекция // Повышение эффективности мясного птицеводства на Северном Кавказе: сб. науч. тр. Краснодар: КГАУ. - 1996. - С. 103 - 109.

62. Титов В. Ю., Петренко Ю. М. и др. Механизм окисления оксигемоглобина, индуцированного перекисью водорода // БЭБМ; 1991. -С. 46-49.

63. Титов В. Ю., Фисинин В. И. И др. Механизм развития нитрит индуцированной метгемоглобении у животных и человека. Пути предотвращения и профилактики // Сельскохоз. Биология. 1997. - № 4.1201. С. 34-46.

64. Хазин Д. А., Буряков Н. П. Нитраты в рационах жвачных и профилактика нитратных отравлений // Агропромышленное производство: опыт, проблемы и тенденции развития. М; 1993. - №3 - С. 30 - 39.

65. Юрченко В. А. Образование канцерогенных нитрозаминов из малых количеств предшественников: Дисс. на канд. биол. н. М.; 1987. - 106 с.

66. Яблочкина С. JI. Влияние повышенных доз нитратов на процессы пищеварения и обмена веществ у жвачных животных // Зоотехнич. Наука Беларуси: сб. статей. Минск; 1996. - Т 32 (окончание). - С. 186 - 190.

67. Яблочкина С. Л. Влияние различных концентраций нитратов в кормах на здоровье и продуктивность бычков // Науч. основы развития животноводства в республ. Беларусь. Минск; 1995. - вып. 26. - С. 46 -51.

68. Яблочкина С. Л. Влияние уровня нитратов на биохимический состав крови бычков // Науч. основы развития животноводства в республ. Беларусь. Минск; 1995. - вып. 26. - С. 59 - 64.

69. Явоненко А. Ф. Роль стенки рубца в азотистом обмене крупного рогатого скота и овец: Автореф. на доктора биол. н. Львов; 1973. - 42 с.

70. Archer М. С. Catalysis and inhibition of N-nitrosation reaction // N-nitroso compounds: occurrence, biological effects and relevance to human cancer. -Lyon.: IARC, 1984. P. 263 - 274. - (IARC Sci. Publ.; № 57).

71. Arduini A., Mancielli G., Luca Radottig et. al Possible mechanism of inhibition of nitrite-induced oxidation of oxyhemoglobin by ergothioneine and urine acid // Arch. Biochem. Biophys. 1992. - 294. - P. 398 - 402.

72. Balish E., Witter J. P., Galley S. J. Distribution and metabolism of nitrate and121nitrite in rats // Gastrointestinal cancer: Endogenous Fact. New York: Cold Spring Harbour, 1981. - P. 305 - 319.

73. Bockler R., Meyer H., Schlag P. An experimental study on bacterial colonization, nitrite and nitrosamine production in the operated stomach // J. Cancer Res. And Clin. Oncol. 1983. - N 1. - P. 62 - 66.

74. Calmes S., Ohshima H., Bartsch H. Nitrosamine formation by denitrifying and non-denitrifying bacteria: Implication of nitrate reductase in nitrosation catalysis // J. Gen. Microbiol. 1988. - 134, N 1. - P. 221 - 226.

75. Cardesa A., Mirvish S. S., Hayen G. Т., Shubir P. Inhibitory effect of ascorbic acid on the acute toxicity of dimethylamine plus nitrite in rate // Proc. Exp. Biol. And Med. 1974. - 145. - P. 124 - 128.

76. Cooney R. V., Ross P. D. N-nitrosation and N-nitration of morfoline by nitrogen dioxide in aqueous solutions: effects of vanillin and related phenols // J. Agric. Food Chem. 1986. - 35. - P. 789 - 793.

77. Crampton R. F. carcinogenic dose-related response to nitrosamines // Oncology. 1980. - 37, N4. - P. 251 - 254.

78. Douglass, M. L., et al The chemistry of nitrosamine formation, inhibition and destruction. J. Soc. Cosmet., 1978, vol. 29, p. 581 - 606.

79. Druckrey H., Preussmann R., Ivancovic S. Organotrope carcinogen Wirkungen bei 65 Verschiedenen N-Nitroso-Verbindungen in BD-Raten // Z. Krebsforsch. 1967,-69.-S. 103-201.

80. Druckrey H., Schildbach A., Schmahl D., et al. Qualitative Analyse der carcinogenen Wirkung von Diathylnitrosamin // Arzneimittel-Forsch. 1963. -13.-S. 841 -851.

81. Eiter, K., Hebenbrok, K. F., Kabbe, H. J. Neue offenkettige und cyclische a-nitrosaminoalkylather. Justus Liebigs Ann. Chem., 1972, Bd. 765, S. 55

82. Fiala E. C., Reddy B. S., Weisburgen J. H. Naturally occurring anticarcinogenic substances in foodstuffs // Ann. Rev. Nutrition. 1985. - № 5. -P. 295-321.

83. Fritsch F., Saint-Blanquat G. Formation des nitrites a partir des nitrates dans le tube digestif// Ann. Nutr. Et alim. 1976. - 30, N 5/6. - P. 793 - 804.

84. Golovnya R. V. Analysis of volatile amines contained in foodstuffs as possible precursors of N-nitroso compounds // Environmental N-nitroso compounds: analysis and formation. Lyon: IARC, 1976. - P. 237 - 245. - (IARC Sci. Publ.; N14).

85. Green L. C., Ruiz de Luzuriaga K., Wagner D. A. et al. Nitrate biosynthesis in123man // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. Biol. Sci. 1981. - 78, № 12 P. 7764 -7768.

86. Hall J., Saffiiill R. The incorporation of Об-methyl-guanosin and o4-methyldeoxythymide monophosphate into DNA by DNA polymerases // Nucl. Acids Res. 1983. - 11. - P. 4185 - 4193.

87. Hasell C. L., Lee A. Campylobacter pylons, urease, hydrogen ion back diffusion and gastric ulcers // Lancet. 1986. - 11. - P. 15-16.

88. IARC, Vol. 17, 1978 (МАИР, t.17, 1978.)

89. Juszkiewicz Т., Kowalski B. Absorption, tissue deposition and passage into eggs of N-nitrosodimethylamine in hens // Environmental aspects of N-nitroso compounds. Lyon: IARC, 1978. - P. 433 - 439. - (IARC Sci. Publ.; N 19).

90. Juszkiewicz Т., Kowalski B. An investigation of the possible presence on formation of nitrosamine in animal feed // Environmental N-nitroso compounds: analysis and formation. Lyon: IARC, 1976. - P. 375 - 383. -(IARC Sci. Publ.; N 14).

91. Kawamura Т., Sakai K., Miyazawa F. et al. Nitrosamines in foods. 5. Distribution of secondary amines in foods // Nat. Inst. Hyg. Sci. 1981. - 12, N 5.-P. 394-398.

92. Kozaka H., Tyuma I. Mechanism of autocatalytic oxidation of oxyhemoglobin by nitrite // Environ. Health Perspect. 1987. - 73.

93. Kurzer M. S., Calloway D. H. Nitrate and nitrogen balances in man // Amer. J. Clin. Nutr. 1981. - 34, № 7. - P. 1305 - 1313.

94. Lakritz L., Wasserman A. E., Gates R., Spinelli A. M. Preliminary observation on amines and nitrosamines in non-normal human gastric contents // Environmental aspects of N-nitroso compounds. Lyon: IARC, 1978. - P.124425 431. - (IARC Sci. Publ.; N 19).

95. Lijinsky W/ Structure activity relationships among N-nitroso compounds // N-nitroso compounds. - Washington (D. C.): Amer. Chem. Soc., 1981. - P. 89 - 99. - (ACS Symp. Ser.; 174)

96. Magee P., Swann P. E. Nitroso compounds // Brit. Med. Bull. 1969.-25. -P. 240-244.

97. Marshall, J. Т., Dygan, L. R. Carbonylamine reaction products as a possible source of nitrosatable nitrogen. J. Agr. Food Chem., 1975, vol. 23, №5, p. 975 - 978.

98. Massey R. C., Forsythe L., Mc Weeny D. J. The effect of ascorbic acid and sorbic acid on N-nitrosamine formation in heterogeneous model system // J. Sci. Food Agric. 1982. - 33. P. 294 - 298.

99. Mergens W. J., Newmark H. L. Blocking nitrosation reactions in vivo // N-nitroso compounds. Washington (D. C.): Amer. Chem., Soc., 1981. - P. 193 -206 - (AS Symp. Ser.; 174).

100. Miller E. C., Miller J. A. Mechanisms of chemical carcinogenesis // Cancer. -1981. 47, N 5, Suppl. - P. 1055 - 1064.

101. Mirvish S. S. Ascorbic acid inhibition of N-nitroso compounds formation in chemical, food and biological systems // Inhibition of tumor induction and development. New York; London, 1981. - P. 101 - 126.

102. Mirvish S. S. Effect of vitamins С and E on NOnitroso compound formation, carcinogenesis and cancer // Cancer. 1986. - 58, N 8. - P. 1842 -1850.

103. Mirvish S. S. Formation of N-nitroso compounds: chemistry kinetics and in vivo occurrence // Toxicol. And Appl. Pharmacol. 1975. - 31. - P. 325 - 351.125

104. Mirvish S. S., Karlowski k., Birt D. F. et al. Dietary and other factors affecting nitrosomethylurea formation in the stomach// N-nitroso compounds: analysis, formation and occurrence. Lyon: IARS, 1980. - P. 271 - 280. -(LARS Sci. Publ.; N 31).

105. Mirvish S. S., Patil K., Gradirian P., Kommineni V. R. Disappearance of nitrite from the rat stomach contribution of emptying and other factors // J. Nat. Cancer Inst. 1975. - 54, N 4. - P 869 - 875.

106. Mitchell H. H., Shonle H. A., Grindley H. S. The origin of the nitrate in the urine // J. Biol. Chem. 1986. - 24. - P. 461 - 490.

107. Miwa M., Stuehr D. J., Marietta M. A. Et al. N-nitrosamine formation by macrophages // The relevance of N-nitroso compounds to human cancer: exposures and mechanisms. Lyon: IARC, 1984. - P. 880 - 884. - (IARC Sci. Publ.; N 84).

108. Montesano R. Alkylation of DNA and tissue specificity in n. Trosamine carcinogenesis // J. J. Supermol. Struct. Cell. Biochem. 1981. - 17. - P. 259 -273.

109. Newmarc H. L., Mergent W. J. a-Tocopherol (vitamin E) and its relationship to tumor induction and development. New York; London; Plenum press, 1981. - P. 127 - 168.

110. Odashima S. Overview: N-nitroso compounds as carcinogens for experimental animals and man // Oncology. 1980. - 37, N 4. - P. 282 - 286.

111. Parthasarathy R., Fridey S. Conformation of 06-alkylguanosine: molecular mechanism of mutagenesis// Carcinogenesis. 1986. - 7. - P. 221 - 227.

112. Pegg A. E. Properties of the 06-alkylguanine-DNA repair system of mammalian cell // N-nitroso compounds: occurrence, biological effects and126relevance to human cancer. Lyon: IARC, 1984. - p. 575 - 580. - (IARC Sci. Publ.; N 57).

113. Preussmann R., Eisenbrandt G. N-nitroso carcinogens in the environment // Chemical carcinogens. Washington (D. C.): Amer. Chem. Soc., 1984. - Vol. 2. - P. 829 - 868. - (ACS Monographs; N 182).

114. Preussmann R., Stewart В. M. N-nitroso carcinogens // Ibid. P. 643 -828.

115. Raynolds C., Thomson C. Ab initio calculations relevant to the mechanism of chemical carcinogenesis by N-nitrosamines. 1. The nitrosation of amines // Int. J. Quant. Chem: Quantum biol. Symp. 1984. - 11. - P. 167 - 181.

116. Rice S., Ichinotsubo D., Stemmermann C. Et al. Nitrosation reaction of stomach mucosal tissues of the human and dog // Gastrointestinal cancer: endogenous fact. New York, Cold Spring Harboum, 1981. - P. 185 - 203.

117. Ridd, J. H. Nitrosation, diazotization and deamination. -Q. Rev. Chem. Soc., 1961, vol. 15, p. 418

118. Rooma M., IJibu J. Influence of various milk products on the concentration of nitrite and the formation of nitrosodimethylamine in vitro // Nutrition and Cancer.- 1983,-№4.-P. 171-175.

119. Rubenchik B. L., Role of the organism in formation of carcinogenic N-nitrosodimethylamine // Modulators of experimental carcinogenesis. Lyon: IARC, 1983. - P. 239 - 242. - (IARC Sci. Publ.; N 51).

120. Saul R. L., Archer M. С Nitrate formation in rats exposed to nitrogen dioxide // Toxicol. And Appl. Pharmacol. 1983. - 67. - P. 284 - 291.

121. Saul R. L., Archer M. C. Oxidation of ammonia and hydroxylamine to nitrate in the rat // N-nitroso compounds: occurrence, biological effects and relevance to human cancer. Lyon: IARC, 1984. - P. 241 - 253. - (IARC, Sci. Publ: N 57).

122. Schmahl D., Habs M. Carcinogenicity of N-nitroso compounds. Species and route differences inregard to organotropism // Oncology. 1980. - 37, N 4.127-P. 237-242.

123. Schmahl D., Scherf H. Carcinogenic activity of N-nitrosodimethylamine in snakes // Naturwissenschafien. 1983. - 70. - S. 94.

124. Schweisberg F., Burkle V. Nitrite: a co-cancerogen? // J. Cancer Res. And Clin. Oncol. 1985. - 109, N 3. - P. 200 - 202.

125. Singer B. In vivo formation and persistence of modified nucleosides resulting from alkylating agents // Environ. Health Perspect. 1985. - 62. - P. 41-48.

126. Some N-nitroso compounds. Lyon: IARS, 1978. - 365 p. - (IARC, Monographs on the evaluation of the carcinogenic risk of chemicals to human; Vol. 17)

127. Stuehr D. J., Marietta M. A. Further studies on murine macrophage synthesis of nitrite and nitrate // The relevance of N-nitroso compounds to human cancer: exposures and mechanisms. Lyon: IARC, 1984. - P. 335 -340. - (IARC Sci. Publ.; N 84).

128. Stuehr D. J., Marietta M. A. Mammalian nitrate biosynthesis: mouse macrophages product nitrite and nitrate in response to Escherihia coli lipopolysaccharide // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. - 82. - P. 7738 -7742.

129. Suzuki K., Mitsuora T. N-nitrosamine formation by intestinal bacteria // N-nitroso compounds: occurrence, biological effects and relevance to human cancer. Lyon: IARC, 1984. - P. 275 - 281. - (IARC, Sci. Publ: N 57).

130. Tannenbaum S. R. Endogenous formation of N-nitroso compounds: a current perspective ?? The relevance of N-nitroso compounds to human cancer, exposures and mechanisms. Lyon: LARD, 1987. - P. 292 - 296. - (IARC Sci. Publ.; №84)

131. Tannenbaum S. R. Model for estimation of human exposure to endogenous N-nitrosodimetylamine // Oncology. 1980. - 37, № 4. - P. 232 - 235.

132. Tannenbaum S. R. Nitrate and nitrite origin in humans // Science. 1979.128205.-P. 204-208.

133. Tannenbaum S. R., Fett D., Young V. R., Land P. D. Nitrite and nitrate are formed by endogenous synthesis in the human intestine // Science. 1978. -200, № 4349. - P. 1487 - 1499.

134. Tannenbaum S. R., Green L. Metabolism of nitrate // Gastrointestinal cancer: Endogenous fact. New York; Cold Spring Harbour, 1981. - P. 331 -341.

135. Tannenbaum S. R., Weisman M., Fett D. The effect of nitrate intake on nitrite formation in human saliva // Food and Cosmet. Toxicol. 1976. - 14, № 6.-P. 549-552.

136. Telling G. M., Hoar D., Caswell D., Collings A. J. Studies on the effect of feeding nitrite and secondary amines to Wistar rate // Environmental N-nitroso compounds: analysis and formation. Lyon: IARC, 1076. - P. 247 - 254,-(IARC Sci. Publ.; N 14).

137. Terplan G., Hallermayer C., Kalbfus W. Et al. Untersuchungen zum Vorkommen von Nitrosaminen in Futturmitteln, Milch and Milchproducten // Milchwissenschaft. 1978. - 33, N 3. - S. 142 - 145.

138. Terracini В., Magee P. N., Barnes J. Hepatic pathology in rats on low dietary levels of dimethylnitrosamine // Brit. J. Cancer. 1967. - 21. - P. 559 -565.

139. Tomatis L. H., Hilfrich J., Turusov V. The occurrence of tumors in Fl, F2 and F3 descendants of BD rats exposed to N-nitrosomethylurea during pregnancy // Int. J. Cancer. 1975. - 15. - P. 385 - 390.

140. Tsuda M., Inui N., Takayama S. In vitro transformation of newborn hamster cells induced by sodium nitrite // GANN, Jap. J. Cancer res. 1976. -67,N2.-P. 165- 174.

141. Uibu J. Nitrate-reducing microorganisms in gastric juice of patients with stomach cancer // Nahrung. 1987. - 31, N 5/6. P. 533 - 537.

142. Wagner D. A., Shuker D. E., Bilmazes С et al. Effect of vitamins С and E on endogenous synthesis of N-nitrosamine acids in human: precursor-product studies with 15N-nitrate // Cancer Res. 1985. - 45, № 12. - P. 6519 - 6522.

143. Wagner D. A., Young V. R., Tannenbaum S. R. et al. Mammalian nitrate biochemistry: metabolism and endogenous synthesis // Ibid. P. 247 - 253.

144. Warthesen, J. J., Scanlan, R. A., Bills, D. D. Et al. Formation of heterocyclic N-nitrosamines from the reaction of nitrite and selected primary diamines and amine acids. J. Agric. Food Chem., 1975, vol. 23, p. 898

145. Witter J. P., Balish E. Distribution and metabolism of ingested NO3" and NO2" in germfree and conventional-flora rats // Appl. And Environ. Microbiol. 1979.-38,N5.-P. 861 -869.

146. Witter J. P., Balish E., Gatley S. J. Origin of excess of urinary nitrate in the rat // Cancer Res. 1982. - 42, N 9. - P. 3654 - 3658.

147. Yanagida, S., Barsotti, D. J., Harrington, G. W. Et al. 2-metyl-4-methoxy-1,2,3-oxadiazetidine a correction. Tetrahedron Lett., 1973, vol. 2671, № 29, p. 2671 -2682

148. Ziebarth D., Scheuning G. Effect of some inhibitors on the nitrosation of drugs in human gastric juice // Environmental N-nitroso compounds: analysis and formation. Lyon: IARC, 1976. - p. 279 - 290. - (IARC Sci. Publ.; N 14).130