Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Метаболические изменения в эритроцитах и сыворотке крови при различных формах миомы матки

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Метаболические изменения в эритроцитах и сыворотке крови при различных формах миомы матки"

На правах рукописи

КОВАЛЕНКО Татьяна Дмитриевна

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ЭРИТРОЦИТАХ И СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ МИОМЫ МАТКИ

03 00 04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ростов-на-Дону 2007

003160963

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

Микашинович Зоя Ивановна

Научный консультант кандидат медицинских наук, доцент

Ковалева Элеонора Александровна

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор Сторожук Петр Григорьевич

доктор биологических наук, профессор Горошинская Ирина Александровна

Ведущая организация Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии

Защита состоится «Л^у>2007 г ъ//С> час на заседании диссертационного совета Д 208 082 01 при ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» (344022, г Ростов-на-Дону, пер Нахи-чеванский, 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет»

Автореферат разослан г

Учёный секретарь диссертационного совета, профессор

Корганов Н Я

Общая характеристика работы.

Актуальность темы.

Проблема миомы матки является одной из наиболее важных в современной медицине С одной стороны, это обусловлено высокой частотой встречаемости заболевания в структуре гинекологической патологии (27%), широким возрастным охватом населения (диагностируется у 20% женщин старше 30 лет, до 40% женщин старше 40 лет) [Василевская Л Н и соавт, 2002, Савицкий Г А , Савицкий А Г, 2000] С другой стороны, в настоящий момент существует ряд теорий патогенеза заболевания, полностью не объясняющих механизм формирования опухоли, что обусловливает низкую эффективность патогенетической терапии, большой процент оперативного лечения (миома матки составляет до 80% всех гинекологических операций) и диктует необходимость изучения патогенетических механизмов развития миомы матки

В настоящий момент остается открытым вопрос о механизме возникновения маточных кровотечений, поскольку даже наличие узлов одинаковой локализации и размеров далеко не обуславливает одинаковую клиническую симптоматику

Большая часть женщин, больных миомой матки, страдает от сопутствующей течению миомы кровопотери Некроз эндометрия, покрывающего подслизистую миому, растяжение полости матки растущей миомой с увеличением менструирующей поверхности, снижение сократительной способности миометрия при обширном разрастании интрамуральных миом, способствует развитию сопутствующей миоме матки менструальной кровопотери, однако не обуславливает наличие данного клинического симптома у всех больных При изучении особенностей кровоснабжения матки при миоме матки установлено, что повышение массы миоматозной матки сопровождается увеличением диаметра маточных и яичниковых артерий [Савицкий Г А , 2000]

В связи с вышеизложенным остается актуальным уточнение молекулярных механизмов патогенеза заболевания, поиск возможных пусковых механизмов, провоцирующих возникновение кровотечения, выявление биохимических маркеров, отражающих клиническую картину заболевания, что необходимо для патогенетического обоснования индивидуализации терапии

Для решения поставленных вопросов необходимо определить вклад системы крови в формирование патогенеза миомы матки, отягощенной хронической кровопотерей В этой связи целесообразным представляется выяснение пусковых механизмов развития опухоли на основании анализа каллик-реин-кининовой системы, регулирующей микроциркуляцию, и оценки состояния АОЗ, энергообеспечивающих процессов, играющих важную роль в поддержании биологической полноценности системы крови

Цель исследования: выявить характер изменений важнейших метаболических процессов в эритроцитах и сыворотке крови, их патогенетическую значимость и информативность для оценки тяжести процесса у больных с миомой матки, отягощенной хронической кровопотерей

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1 Проанализировать состояние газотранспортной функции крови при миоме матки, осложненной и не осложненной кровотечением

2 Выяснить изменения углеводного обмена и состояние ферментативной антиоксидантной защиты в крови при формировании опухолевого процесса

3 Определить участие протеиназно-ингибиторных компонентов кал-ликреин-кининовой системы крови в формировании патогенеза миомы матки на фоне кровопотери

4 Сопоставить выявленные обменные сдвиги с особенностями клинической картины заболевания и определить информативные критерии оценки тяжести патологического процесса

Научная новизна:

Выявлены новые данные о неоднозначном характере перестройки ферментов АОЗ при миоме матки, осложненной и не осложненной кровотечением

Проведен анализ влияния доброкачественного новообразования - миомы матки и кровопотери на формирование адаптационо-компенсаторных механизмов газотранспортной функции эритроцитов крови Отмечено, что при миоме матки, осложненной кровотечением, формируется модуляционный механизм адаптации газотранспортной функции эритроцитов крови При миоме матки, не осложненной кровопотерей, адаптационо-компенсаторная перестройка газотранспортной системы крови осуществляется посредством как модуляционного механизма, так и эффекта Бора

Установлено, что при разных клинических формах миомы матки изменения активности ферментов углеводного обмена отличаются При миоме матки, осложненной кровотечением, перестройка метаболического обеспечения направлена, прежде всего, на поддержание работы ферментов АОЗ При миоме матки, не осложненной кровотечением, изменения углеводного обмена обеспечивают рост опухолевого узла

В работе дан анализ роли гуморальных факторов плазмы крови (ККС) в зависимости от особенностей формирования клинической картины заболевания При миоме матки, не осложненной кровотечением, формируется «содружественный» тип реагирования ККС на опухолевый рост При миоме матки, осложненной кровотечением, обнаружен «кининазный» тип реагирования

Научно-теоретическая и практическая значимость работы:

Фактический материал свидетельствует о неоднозначном ответе адап-тационно-приспособигельных реакций организма при разных формах миомы матки на опухолевый рост, что диктует необходимость индивидуального

подхода к подбору средств как медикаментозного, так и немедикаментозного воздействия

Установлены критерии прогнозирования вероятности развития крово-потери у женщин, больных миомой матки Предложены критерии, оценивающие выраженность протеолиза при миоме матки

На основании результатов исследования отобраны информативные биохимические параметры для выявления женщин, угрожаемых по развитию кровотечения, осложняющего течение миомы матки

Полученные результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре общей и клинической биохимии №1 РостГМУ

Публикации и апробация работы.

Основные положения диссертации представлены на IV и V национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005, 2007), на межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука итоги и перспективы» (Саратов, 2006), на юбилейной научно-практической конференции, посвященной 50-летию кафедры детских инфекционных болезней РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2006), на VII международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006), на международном конгрессе молодых ученых, студентов и аспирантов «Перспектива-2007» (г Нальчик, 2007), на 41-й всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины» (Тюмень, 2007), доложены на IV, V и VI межвузовских конференциях с международным участием «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2005, 2006, 2007), на 59-й, 60-й и 61-й научной конференции молодых ученых (Ростов-на-Дону, 2005, 2006,2007)

По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, из которых 7 - в центральной медицинской печати, 3 - на английском языке, 2-е моноавторством, в изданиях, рекомендованных ВАК - 1 публикация

В завершенном виде диссертация апробирована на конференции сотрудников кафедры общей и клинической биохимии №1 Ростовского государственного медицинского университета

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Выявлены неоднозначные изменения активности ферментов первой и второй линий АОЗ при разных формах миомы матки

2 Анализ газотранспортной функции эритроцитов крови выявил различия в формировании молекулярных механизмов адапгационо-приспособительных реакций организма при миоме матки, осложненной и не осложненной кровотечением, к формирующейся гипоксии

3 Характер ферментного спектра углеводного обмена при миоме матки, осложненной кровотечением, отличен от такового при миоме матки, не осложненной метроррагиями

4 По динамике протеиназно-ингибиторных компонентов ККС можно судить о степени тяжести клинического течения заболевания

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 рисунками, содержит 7 таблиц Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава №1), общей характеристики материала и методов биохимического исследования (глава №2), изложения полученных результатов (главы №3, №4, №5, №6), обсуждения полученных результатов (глава №7), выводов и практических рекомендаций Указатель литературы содержит 248 источников, из них 115 отечественных и 133 иностранных

Содержание работы.

Материалы и методы исследования

Для изучения характера изменений обмена веществ в эритроцитах и сыворотке крови при миоме матки, осложненной кровотечением без нарушения компонентов свертывающей системы (ПТИ, время свертывания, фибриноген) и без кровотечения, проведены исследования у 105 женщин

На основании данных истории болезней, клинических данных, данных УЗИ, патологоанатомических заключений было выделено 3 основные клинические группы *

Первую клиническую группу (контрольную) составили 33 практически здоровые женщины, без сопутствующей гинекологической патологии Средний возраст 45±3,5 лет

Вторую клиническую группу (сравнения) составили 35 женщины с миомой матки, не осложненной кровотечением Их возраст составил в среднем 44±3,7 лет

Третья клиническая группа (основная или клиническая) представлена 37 женщинами с миомой матки, осложненной кровотечением Их возраст составил в среднем 46±2,8 лет

Исследовалась сыворотка и эритроциты венозной крови женщин контрольной, основной клинических групп и группы сравнения Для Определения активности ферментов в клетках крови использовали 20% гемолизат, приготовленный на бидистилированной воде

В эритроцитах женщин контрольной, основной клинических групп и группы сравнения определяли активность ферментов антиоксидантной защиты спектрофотометрическими методами Активность каталазы определяли по методу Королюк М А и соавт, 1988 Активность супероксидцисмутазы

* приношу искреннюю благодарность доценту кафедры акушерства и гинекологии №1 РостГМУ Ковалевой Элеоноре Александровне за консультации при верификации клинического материала

оценивали по степени ингибирования восстановленного нитросинего тетра-золия в присутствии супероксидного радикала, генерируемого в реакции восстановления молекулярного кислорода адреналином по методу Мдвга Н Р , Рпс1оуюЬ 1, 1972, в модификации Саркисяна О Г, 2000 Активность глутати-онпероксидазы определяли по методу Моина В М , 1972, основанному на определении скорости окисления глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила Активность глутатионредуктазы определяли по скорости окисления НАДФН Определение скорости восстановленного глутатиона проводили методом Е11тап в Ь 1959 Активность ферментов в гемолизате пересчитывали на мкмоль/г Нв

Для изучения газотранспортной функции эритроцитов крови исследовали содержание гемоглобина по методу, описанному Лугановой И С , Блиновым М Н , 1975 Концентрацию гшровиноградной кислоты определяли по Фридеману и Хаугену в модификации Бабаскина П М (А С СССР №877436, 1981) Содержание молочной кислоты оценивали по реакции с параоксиди-фенилом, описанной Меньшиковой В В, 1987 2,3-дифосфоглицерат определяли неэнзиматическим методом Буве, Везвшап в модификации Лугановой И С , Блиновым М Н , 1975

Для выяснения особенностей изменения углеводного обмена оценивали следующие параметры Активность фосфорилазы определяли колориметрически по уменьшению количества фосфорной кислоты в фосфорной смеси по методу Фердмана Д Л , Сонина Е Ф в модификации Микашинович 3 И , 1989 Об активности фосфогексоизомеразы судили по количеству фруктозо-фосфата, образовавшегося при инкубировании глюкозофосфата с цельными эритроцитами и последующим окрашиванием фруктозофосфата в реакции Селиванова (Езерский Р Ф (1960) в модификации Микашинович 3 И (1989)) Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы определяли по методу Корн-берга Л в модификации Захарьина Ю Л, 1967 спектрофотометрически по степени восстановления НАДФ в ферментативной реакции с глюкозо-6-фосфатом в присутствии ионов магния Активность ферментов углеводного обмена выражали в мкмоль/г Нв в час

Показатели калликреин-кининовой системы изучали в сыворотке крови, взятой натощак из локтевой вены (без добавления гепарина) в силикони-рованную пробирку Определение активности калликреина и содержания прекалликреина проводили спектрофотометрически по методу Пасхиной Т С и Кринской А В (1974) Активность ферментов выражали в мед/мл Общую аргинин-эстеразную активность (ОБАЭЭ) определяли спектрофотометрически по скорости гидролиза эфирной связи под действием протеиназ исследуемой сыворотки в молекуле синтетического субстрата (БАЭЭ) методом РтгйвсЬоЫ, \Verle (1961) в модификации Пасхиной ТС, Яровой ГН (1970) Эстеразную активность сыворотки крови выражали в милиэстеразных единицах на мл (мэе/мл) Одна единица соответствует гидролизу 1 мкмоль БАЭЭ в 1 мин Активность а г антитрипсина определяли спетрофотометриче-ски по торможению аргинин-эстеразной активности трипсина разведенной в 50 раз сыворотки крови по методу Нартиковой В Ф , Пасхиной Т С (1979)

Активность ai-антигрипсина выражали в условных ингибиторных единицах в мл сыворотки крови (ИЕ/мл) За 1 ИЕ принято такое количество сыворотки, которое тормозит гидролиз трипсином 1 мкмоль БАЭЭ за 1 мин при 25 °С Активность ссг-макроглобулина определяли спектрофотометрически по сохраняющейся аргинин-эстеразной активности комплекса трипсин-аг-макроглобулин, образующегося после взаимодействия избытка трипсина с сывороткой крови, разведенной в 10 раз, и последующей инактивацией свободного, не связанного с а2-макроглобулином, трипсина соевым ингибитором трипсина по методу Нартиковой В Ф , Пасхиной Т С (1979) Активность а2-макроглобулина выражали в ИЕ/мл

Статистическая обработка экспериментальных данных проводилась согласно общепринятым методам с определением средней арифметической, ошибки средней с использованием компьютерной программы STADIA версия 6 0 (Кулайчев, 1996) на персональном компьютере IBM PC 486 DX4-100 О достоверности отличий учитываемых показателей контрольной и опытной групп судили по величине t-критерия Стьюдента после проверки распределения на нормальность Статистически достоверными считали отличия, соответствующие оценке ошибки вероятности р<0,05

Результаты и их обсуждение.

В работе проведен клинико-лабораторный анализ направленности изменений ферментов первой и второй линии антиоксидантной защиты организма при разных формах миомы матки в комплексе с изучением внутриклеточного метаболического обеспечения газотранспортной функции эритроцитов, углеводного обмена и активности протеиназно-ингибиторных компонентов кал-ликреин-кининовой системы (ККС)

Известно, что в опухолевой ткани происходит активация перекисного окисления липидов Поэтому нам представилось интересным изучить активность ферментов первой и второй линии антиоксидантной защиты (рис 1) Установлено, что при миоме матки, осложненной кровотечением, в сравнении с контрольной группой, активность СОД увеличена на 85% (р<0,01) на фоне достоверного снижения активности каталазы на 11% (р<0,05) Это свидетельствует об активной генерации перекиси водорода, инактивация которой не контролируется каталазой В группе женщин с миомой, не осложненной кровотечением, активность СОД увеличена на 65% При этом активность каталазы существенно не отличается от нормы

Учитывая дисбаланс в работе ферментативного звена первой линии защиты при обеих формах миомы матки, проведено изучение направленности изменений ферментативной активности второй линии АОЗ При миоме матки, осложненной кровотечением, активность ГПО достоверно повышается на 145%, а концентрация восстановленного глутатиона и активность ГР имеет тенденцию к снижению в сравнении с показателями контрольной группы При этом при не осложненной кровотечением форме активность ГПО имеет статистически значимый рост на 169%, а концентрация восстановленного

глутатиона и активность ГР достоверно снижаются па 12% и 23% соответственно по сравнению с показателями контрольной группы.

ЕЗ группа сравнения □ клиническая группа

Рис. I. Активность ферментов АОЧ у здоровых женщнн н больных с разными формам» мнимы матки.

Примечание: значения контрольной группы приняты за 100%

-у" - отличая статистически значимые по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, при обеих формах миомы матки выявлена однонаправленность изменений ферментативной активности, что указывает на общность патогенеза. Однако наблюдающиеся количественные отличия, несомненно, служат предпосылками возникновения клинически разной картины заболевания. Сопоставление коэффициентов СОД/каталаза у женщин, больных миомой матки, осложненной кровотечением, относительно группы без кровотечения, свидетельствует о достоверном его увеличении на 23,9% (р<0,05) (рис. 2). При этом в клинической группе коэффициент СОД/ГГЮ на 23,4% (р<0,05) выше, чем в фуппе сравнения. Очевидно, что при миоме магки, осложненной кровотечением, аккумуляция Н^Ог выражается в большей мерс. Известно, что биологические аффект ы перекиси водорода - превалирование вазоконстрикции или вазодилятациИ - зависят от ее концентрации. Вероятно, при миоме матки, не осложненной кровотечением, Н2О2 обладает вазоконег-рикгорным действием, препятствующим возникновению кровотечения. Накопление перекиси водорода в концентрации, превышающий некоторый пороговый уровень, является пусковым механизмом, инициирующим кровопо-терю. Данный эффект обусловлен активацией под действием высоких концентраций Н1О3 секреции п роста гл а иди нов Е2 и Ь, оказывающих вазодилята-горное действие. Кроме того, данные изменения могут указывать на развитие более глубоких повреждений, вызванных мемС)ранодеструктивным действием органических гидроперекисей, сопровождающих метроррагню. Возможно, незначительное повышение концентрации восстановленного глутатиона при осложненной метроррагией миоме (на 4,5%), сочетающееся с ростом ак-

тивности ГР на 20,4%, (рО ,05) относительно группы, не осложненной кро-вопотерей (рис. 2), свидетельствует о детоксикацноиной роли (ЩН как «ловушки» свободных радикалов за счет наличия тиодьных групп. Полученные результаты состояния ЛОЗ отражают биохимические сдвиги, вызванные опухолью в макроорганизме

130 120 % ПО 1001-

90

4-

12

-Ют-

сод

СОД/к атаяа за

GSE1

ГР

"Таз

содлтю

□ клиническая группа

Рис. 2. Активность ферментов АО'1 при разных формах миомы матки.

Примечание; значения группы сравнения приняты за 100%.

<У>- - отличия статистически значимые по сравнению с группой сравнения.

Известно, что рост опухоли сопровождается сдавленней близлежащих штатных тканей миометрия, приводя к формированию тканевой гипоксии Крово потеря, осложняя течение миомы матки, провоцирует ра звитие гемиче-ской гипоксии. Наиболее чувствительным индикатором, тонко реагирующим ira малейшее изменение парциального давления кислорода в организме, являются эритроциты, в связи с чем нам представилось интересным изучить уровень 2,3-ДФГ, лактата и ПВК.

При осложненной кровотечением форме отмечается рост концентрации 2,3-ДФГ (рис. 3) на 539,2% (р<0,001), а при не осложненной - на 351,5% (р<0,001), что приводит к снижению сродства гемоглобина к кислороду и направлено на улучшение доставки молекулярного кислорода тканям, свидетельствуя о формировании модуляционного механизма адаптации к гипоксии. В большей степени выраженный рост 2,3-ДФГ при миоме матки, осложненной кровотечением, свидетельствует о более выраженной степени гипоксии при миоме матки, осложненной кровотечением (рис, 4).

При миоме матки, осложненной кров отечет г нем, концентрация лактата достоверно выше на 20%, а при не осложненной - на 67% - относительно контрольной группы (рис. 3), что указывает па усиление гликолиза как основного энергоцродуцирующего механизма.

700 600 500 400 300 200 100 0

Ж

20

лактат

т

12

пвк

-а-

36-

8

1

лактат/ПВК 2,3-ДФГ

Щ группа сравнения □ клиническая группа

Рис. 3. Показатели газотранспортной функции эритроцитов у здоровых женщин и больных разными формами миомы матки.

Примечание значения контрольной группы приняты за 100%

- отличия статистически значимые по сравнению с контрольной группой

Концентрация ПВК при форме, осложненной кровотечением, на 39% выше, а без кровопотери - на 22% выше относительно контрольных значений (рис 3) Полученные данные свидетельствуют об активации анаэробного гликолиза при обеих формах миомы матки, но выражены в разной степени

Более высокая концентрация пирувата (на 13,5%, р>0,1) и 2,3-ДФГ (42,5%, р<0,05) в эритроцитах при осложненной кровотечением форме относительно группы сравнения (рис 4) может свидетельствовать об активации процессов адаптивного характера, направленных на оптимизацию микроциркуляции Вероятно, это обусловлено способностью ПВК модифицировать молекулу гемоглобина, улучшая процесс диссоциации оксигемоглобина как самостоятельно, так и опосредованно - путем активации синтеза 2,3-ДФГ [Микашино-вич 3 И, 1989] Более выраженный рост лактата на 28% (р <0,05) при миоме матки, не осложненной кровотечением (рис 4), стимулирует за счет эффекта Бора отдачу кислорода тканям, выполняя функцию 2,3-ДФГ, поэтому повышение последнего не так значительно, как при осложненной кровотечением форме

й группа сравнения □ клиническая группа

Рис. 4. Показатели газотранспортной функции эритроцитов при разных формах миомы матки

Примечание значения группы сравнения приняты за 100%

- отличия статистически значимые по сравнению с группой сравнения

Известно, что важную роль в поддержании структурно-функционального состояния эритроцитов играет углеводный обмен Несмотря на одинаковую, на первый взгляд, направленность изменений ферментов углеводного обмена при обеих формах миомы матки (рис 5), именно в разной степени выраженная активация ферментов указывает на метаболические нюансы, формирующие разные модели клинического течения заболевания

ЕЗ группа сравнения □ клиническая группа

Рис. 5. Активность некоторых ферментов углеводного обмена у здоровых женщин и больных миомой матки.

Примечание значения контрольной группы приняты за 100%

-=у=- - отличия статистически значимые по сравнению с контрольной группой

При миоме матки, осложненной кровотечением активность гликогенфос-форилазы на 56% (р <0,05) выше относительно контрольной группы (рис 6) При миоме матки, не осложненной кровотечением, активность гликогенфос-

фор и л азы на 92% (р <0,01) выше относительно значений контрольной группы. Данные изменения Свидетельствуют об активации гликогенолиза, более активно протекающего при миоме матки, не осложненной кровотечением, что указывает на интенсификацию функциональной активности клеток.

При миоме матки, осложненной кровотечением, активность ФГИ существенно не отличается от значений контрольной группы. Активация гликогенов лиза при миоме матки, не осложненной кровотечением, сопровождается падением активности ФГИ на 34% (р<0,05) в сравнении с клинической группой (рис. б), ростом лактата и ПВК (рис. 3), что может быть связано с одновременной активацией ПФП.

150

100

%

50

0

I

-61 !4

фосфор ил аз а

ФГИ

1

29

гл-6-ф-дг

Е2 группа сравнения □ клиническая группа

Рис. 6. Активность некоторых ферментов углеводного обмена при разных формах миомы матки.

Примечание; значения группы сравнения приняты за 100%.

-ф- - отличия статистически значимые по сравнению с группой сравнения.

Действительно, при осложненной кровотечением миоме активность глю-козо-6-фосфат-дегидрогеназь! на 75,72% (р <0,01) выше относительно контрольной группы (рис. 5). Очевидно, активация ПФП направлена ни поддержание глутатионзйвисимой АОЗ. При миоме матки, не осложненной кровотечением, активность глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы также, но в меньшей степени, достоверно выше на 37% относительно контроля. Однако, при этом активность ГР снижается на 23% относительно контрольных значений (рис. 1). Вероятно, ингибирование активности ФГИ направлено на обеспечение ПФП глюкозо-6-фосфатом. что необходимо для поддержания работы ГР -фермента глутатионзавйсимой АОЗ. Таким образом, при не осложненной кровотечением миоме метаболические изменения углеводного обмена направлены, в первую очередь, на активацию анаэробного гликолиза для повышения энергетического обеспечения макроорганизма. В то же время можно заключить, что кровопотеря стимулирует защитно-приспособительные

механизмы на молекулярном уровне, что отчетливо прослеяшвается по изменению активности ферментов углеводного обмена и второй линии АОЗ, работа которых в условиях онкогенеза оказывается более адекватной относительно данных группы пациенток с миомой матки, не осложненной кровопо-терей Вероятно, при не осложненной кровопотерей форме на молекулярном уровне формируются более тяжелые изменения, вызванные дисбалансом в работе глутатионзависимых антиоксидантных ферментов, что создает благоприятные условия для активного роста миоматозного узла

Для более глубокого анализа молекулярных адаптивных механизмов и выяснения патогенетической роли кровопотери при формировании миоматозного роста представлялось важным проанализировать состояние параметров ККС Так как ККС является центральным звеном в комплексе гуморальных систем, регулирующих гомеостаз свертывающей, иммунной, фибрино-литической, ренинангиотензиновой В качестве важной причины, обуславливающей активацию ККС, следует отметить тканевую гипоксию, ишемию Наиболее выраженные отличия на молекулярном уровне выявлены при анализе изменений активности протеиназно-ингибиторных компонентов ККС у больных разными формами миомы матки Выраженный рост активности ОБАЭЭ (рис 7) на 48% (р<0,05) при не осложненной кровотечением миоме свидетельствует о наличии протеолиза, вносящего вклад в изменение метаболического обеспечения, необходимого для роста миомы Протеолиз поставляет необходимые субстраты - аминокислоты, необходимые для синтеза структурно-функциональных компонентов миоцитов, обеспечивая рост опухолевого узла

Вероятно, именно кровопотеря разрывает «замкнутый круг», лишая макроорганизм возможности опухолевого роста Выявленное нами снижение активности ОБАЭЭ (рис 7) на 29,4% (р<0,05) при кровотечении, с одной стороны, указывает на лишение опухолевого узла источников, необходимых для роста - аминокислот С другой стороны, косвенным путем может свидетельствовать о снижении коллагеназ, а, следовательно, об ограничении распространения опухолевого узла в сторону неизмененного миометрия

При обеих формах миомы матки выявлена существенная активация ККС, что документируется выраженным ростом активности калликреина и прекалликреина Однако при осложненной кровопотерей форме данные изменения выражены в большей мере (рис 7) При миоме матки, не осложненной кровотечением, формируется «содружественный» тип реагирования ККС на опухолевый рост, о чем свидетельствует повышение активности практически всех изучаемых звеньев ККС, а именно достоверное увеличение активности ОБАЭЭ, КК, ПК, <Х2-МГ При миоме матки, осложненной кровотечением, обнаружен «кининазный» тип реагирования, что выражается в снижении активности ОБАЭЭ, повышении образования КК, активации агПИ

йгруппа сравнении □ клиническая группа

Put, 7, Состояние компонентов ККС крови у здоровы* женщин н больных миомой матки.

Примечание: значения контрольной группы приняты за [00%.

-ф- - отличия статистически значимые по сравнению с контрольной группой.

Рост активности калликреина при не осложненной миоме сдерживает его ингибитор - агмакроглобулин, активность которого на 12,84% (р<0,01) выше (рис. 7) относительно данных контрольной группы. При осложненной кровопотерей форме миомы активность сь-МГ не отличается от соответствующего показателя контрольной группы. Вероятно, отсутствие активации сь-МГ вызывает такое повышение активности калликреина, которое инициирует развитие кровопотери. Вероятно, именно изменение активности калликреина является маркером, указывающим на возможность развития кронопотери, Учитывая достоверное повышение активности сц-протеиназного ингибитора при миоме матки, осложненной кровотечением, сопровождающееся выраженным снижением активности ОБАЭЭ, можно расценивать данный параметр как фактор, ограничивающий опухолевую прогрессию. При не осложненной кровопотерей миоме матки вследствие достоверного ингибирова-ния активности а,-ПИ отмечено статистически значимое повышение ОБА-ЭЭ-активИоети, что создает предпосылки доя увеличения размеров опухоли. Кроме того, при миоме матки, осложненной кровотечением, как уже отмечалось, перекись водорода накапливается в большей мере. Как известно, Н2О2, вызывая олнонитевые разрывы ДНК [McDonald R.S., et al.j, индуцирует апоптотическую гибель клеток [Leimon S.V., et al.], что также, вероятно, тормозит опухолевую прогрессию.

Выявленные закономерности перестройки обменных процессов, имеющие как общие черты, так и отличия при различных формах миома матки, представлены на рисунке 8. Как видно из рисунка 8, перестройка исследуемых метаболических систем при миоме матки, не осложненной кровоте-

чением, указывает на прогрессирование роста опухоли В то время как при осложненной кровотечением форме отличительной особенностью организма женщины на кровопотерю, по-видимому, является запуск апоптоза, ограничивающего рост опухоли

Таким образом, можно сделать предположение, что умеренная крово-потеря является приспособительным механизмом организма, направленным на торможение роста миоматозного узла, а, возможно, препятствует перерождению доброкачественного образования - миомы в злокачественную опухоль Биохимические изменения свидетельствуют в пользу того, что потеря крови, не превышающая физиологических величин, провоцирует эффект лишения опухоли метаболических субстратов Наряду с этим, стимулируется постоянный выброс в кровоток новых форменных элементов, обеспечивая, таким образом, ферментативное обновление, в том числе и антиоксидантное, как за счет ферментных систем, так и неферментативных соединений, попадающих в кровоток при разрушении старых клеток

Клинические наблюдения показывают, что миоматозные узлы при миоме матки, не осложненной кровотечением, чаще подвергаются вторичным изменениям, чем миоматозные узлы при миоме матки, осложненной кровотечением Таким образом, сопоставление полученных данных биохимических исследований с клиническими наблюдениями, позволяет прийти к заключению о важной роли приспособительных реакций системы крови в патогенезе миомы матки

Все вышеизложенное позволяет сделать следующие выводы

Рисунок 8 Патогенез разных форм миомы матки.

Выводы:

1 Изменения активности ферментов АОЗ в эритроцитах при разных формах заболевания имеют одинаковую направленность, но выражены в разной степени в зависимости от клинической формы миомы матки

2 При миоме матки, осложненной кровотечением, активность СОД в эритроцитах и соотношение СОД/каталаза выше, чем в эритроцитах больных без сопутствующей кровопотери, что указывает на накопление в крови АФК

3 При обеих формах миомы матки формируется модуляционный механизм адаптации к гипоксии, о чем свидетельствует значительный рост концентрации 2,3-ДФГ При миоме матки, не осложненной кровопотерей, активируется также эффект Бора, на что указывает увеличение концентрации лактата

4 При разных клинических формах миомы матки изменения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и содержание пирувата и лактата выражены в разной степени, что позволяет их использовать в качестве биохимических критериев для дифференциальной диагностики

5 Рост активности ОБАЭЭ на фоне ингибирования активности а.]-ПИ при миоме матки, не осложненной кровотечением, указывает на потенциальную возможность опухолевого роста При миоме матки, осложненной кровотечением, активность протеолиза снижается

6 Повышение активности калликреина относительно значений контрольной группы при отсутствии изменений активности аг-МГ может служить маркером, отражающим угрозу развития кровотечения

Практические рекомендации:

Повышение активности калликреина на 194,2% и более относительно данных контрольной группы на фоне не отличающейся от нормы активности (х2-МГ позволяет использовать данные параметры дня прогнозирования вероятности развития кровопотери у женщин, больных миомой матки

С целью оценки выраженности гипоксии при миоме матки рекомендуется использовать в качестве информативных биохимических критериев определение активности гл-6-ФДГ, а также количества 2,3-ДФГ, пирувата и лактата в эритроцитах крови Рост коэффициента лактат/пируват на 18%, повышение концентрации 2,3-ДФГ на 351%, сочетающееся с активацией гл-6-ФДГ на 36% относительно параметров контрольной группы, характерно для миомы матки, не осложненной кровотечением

Для коррекции выявленных метаболических нарушений при миоме матки целесообразно рекомендовать использование тиоловых антиоксидан-тов, витаминов-антиоксидантов

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Саркисян, О Г Особенности антиоксидантной защиты при миоме матки, не осложненной кровотечением / О Г Саркисян, Т Д Коваленко // Труды IV межвузовской международной конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2005 - С 142

2 Микашинович, 3 И Роль антиоксидантной системы в формировании молекулярных механизмов патогенеза при миоме матки, ослоядаенной кровотечением / 3 И Микашинович, Т Д Коваленко, О Г Саркисян // Сборник трудов 4-й национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксццанты и здоровье человека» - Смоленск, 2005 - С 327-329

3 Саркисян, О Г Состояние антиоксидантной системы крови при миоме матки, осложненной кровотечением / О Г Саркисян, Т Д Коваленко // Труды IV межвузовской международной конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2005 - С 143

4 Коваленко, Т Д Состояние антиоксидангоной системы крови при различных формах миомы матки / Т Д Коваленко, А Опруженков, К Матвеева, Я Бурлуцкий // Аннотация докладов и материалов 59-й итоговой научной конференции молодых ученых РостГМУ - Ростов-на-Дону, 2005 - С 20

5 Kovalenko, Т D The state of antioxidant system of blood at utenne myo-mas complicated with bleeding / T D Kovalenko, О G Saikisjan, A V Le-tounovski // Труды IV межвузовской международной конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2005 -Р 187

6 Коваленко, ТД Активность глутатионзависимых ферментов эритроцитов у женщин, больных миомой матки, осложненной кровотечением / Т Д Коваленко, Е Шкотова, М Нестерова, В Чалян // Аннотация докладов и материалов 60-й итоговой научной конференции молодых ученых РостГМУ -Ростов-на-Дону, 2006 - С 17

7 Коваленко, Т Д Активность ферментов антиоксидантной защиты эритроцитов при различных формах миомы матки / Т Д Коваленко, 3 И Микашинович, О Г Саркисян, М Л Бабаева // Труды V международной конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2006 - С 97-99

8 Коваленко, Т Д Антиоксидантный ферментативный статус при миоме матки / Т Д Коваленко, О Г Саркисян // Материалы юбилейной научно-практической конференции, посвященной 50-летию кафедры детских инфекционных болезней РостГМУ - Ростов-на-Дону, 2006 - С 78-79

9 Коваленко, ТД Газотранспортная функция эритроцитов при миоме матки / Т Д Коваленко, 3 И Микашинович, О Г Саркисян // Материалы VII международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» - Москва, 2006 - С 250

10 Коваленко, ТД Особенности газотранспортной функции эритроцитов у женщин, больных миомой матки, не осложненной кровотечением / Т Д Коваленко, Е Шкотова, М Нестерова, К Матвеева // Аннотация докладов и ма-

териалов 60-й итоговой научной конференции молодых ученых РостГМУ -Ростов-на-Дону,2006 -С 17

11 Коваленко, Т Д Роль антиоксидантной ферментативной системы в патогенезе миомы матки / Т Д Коваленко, О Г Саркисян // Материалы межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука итоги и перспективы» -Саратов, 2006 - С 81

12 Kovalenko, Т D Metabolic changes in erythrocytes at uterine myomas with subserose localizations / T D Kovalenko // Труды V международной конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2006 -Р 217-218

13 Коваленко, ТД Активность протеиназно-ингибигорных компонентов калликреин-кининовой системы при миоме матки, осложненной метрорраги-ей / Т Д Коваленко, Е А Черногубова, О Г Саркисян // материалы международного конгресса студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспекти-ва-2007», том IV - Нальчик, 2007 - С 113-114

14 Коваленко, Т Д Направленность изменений метаболизма углеводов в эритроцитах при миоме матки / Т Д Коваленко, 3 И Микашинович, О Г Саркисян, Ю С Шавлак // Труды VI межвузовской конференции с международным участием «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2007 - С 79-83

15 Коваленко, ТД Окислительный стресс и миома матки / Т Д Коваленко, О Г Саркисян, Ю С Шавлак // Материалы 41-й всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины» - Тюмень, 2007 - С 53-54

16 Коваленко, Т Д Роль оксидативного стресса в развитии миомы матки / Т Д Коваленко, О Г Саркисян // Казанский медицинский журнал Приложение Озонотерапия -2007 - С 112-113

17 Коваленко, ТД Состояние первой линии антиоксидантной защиты при разных формах миомы матки / Т Д Коваленко // Сборник трудов 5-ой национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» - Смоленск, 2007 - С 169-170

18 Коваленко, Т Д Состояние углеводного обмена в эритроцитах при миоме матки / Т Д Коваленко, В Чалян, В Житлова // Аннотация докладов и материалов 61-й итоговой научной конференции молодых ученых РостГМУ - Ростов-на-Дону, 2007 - С 138

19 Kovalenko, TD Status of some components of kallikrem-kimn system at utenne myomas / T D Kovalenko, ZI Mikashmowich, O G Sarkisjan, V V Chaljan И Труды VI межвузовской конференции с международным участием «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2007 - Р 237-238

Список сокращений.

АКМ - активные кислородные метаболиты

АОЗ - антиоксвдантная защита

АОС - антиоксидантная система

БАЭЭ - этиловый эфир 1\1-бензоил-Ь-аргинина

ОЭН - восстановленный глутатион

ГР - Глутатионредуктаза

ГПО - Глутатионпероксидаза

Гл-6-ф-ДГ - глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназа

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

2,3-ДФГ - 2,3-дифосфоглицерат

КК - калликреин

КИ - коэффициент ингибирования ККО - коэффициент калликреинообразования Лактат/ПВК - коэффициент лактат/пируват МГ — аг-макроглобулин

ОБАЭЭ - общая аргинин-эстеразная активность

ПВК - пировиноградная кислота

ПИ - агпротеиназный ингибитор

ПК - прекалликреин

ПФШ — пентозо-фосфатный шунт

СОД - супероксидцисмутаза

СОД/каталаза - коэффициент супероксщщисмутаза/каталаза СОД/ГПО - коэффициент супероксиддисмутаза/глутатионпероксидаза ФГИ - фосфогексоизомераза

Печать цифровая Бумага офсетная Гарнитура «Тайме» Формат 60x84/16 Объем 1,0 уч -изд -л Заказ № 292 Тираж 100 экз Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г Ростов-на-Дону, ул Суворова, 19, тел 247-34-88