Метаболическая активность и функциональные резервы лейкоцитов при наркомании

Каримова, Равшания

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Метаболическая активность и функциональные резервы лейкоцитов при наркомании
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Метаболическая активность и функциональные резервы лейкоцитов при наркомании"

^75 Ю На правах рукописи

Каримова Равшания

Метаболическая активность и функциональные резервы лейкоцитов при наркомании

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 4 СЕН 2009

Душанбе - 2009

003477510

Работа выполнена на базе научно-технического и учебного центра Таджикского государственного медицинского университета им. Абуали ибни Сино.

Научные консультанты:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Защита диссертации состоится «'

Заслуженный деятель науки РТ, академик АН РТ, доктор биологических наук, профессор -М.М. Якубова.

Заслуженный деятель науки РТ, академик МАИА, доктор биологических наук, профессор -Н.Е. Бердиее.

академик РАМП, доктор медицинских наук, профессор В.Л. Козлов

доктор биологических наук, профессор A.M. Сабурова

доктор медицинских наук, профессор Н.М. Шаропова

Научно-исследовательский институт гастроэнтерологии A11 РТ

часов на заседании диссертационного совета Д 737.004.05 при Таджикском национальном университете (734025 г. Душанбе, проспект Рудаки, 17)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Таджикского национального университета.

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

З.М. Хамрабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы появилось множество работ, свидетельствующих об иммунологической недостаточности у больных наркоманией [Гамалея Н.Б., 1994; Хотовицкий A.B., 2002; Вавренчук В.В. 2005; Акперов Э.К., 2005; Bouix О., et al., 1995; Eisenstein, 1997; Gaureriaux-Ruff С., et al., 1998]. Однако сведения по изучению биохимических механизмов, лежащих в основе нарушения иммунологических реакций при воздействии наркотических веществ, в литературе весьма ограничены. В связи с этим изучение иммуно-биохимических изменений, происходящих при метаболической перестройке организма у больных наркоманией, позволяет проводимое исследование сделать патогенетически более обоснованным.

Известно, что гранулярные лейкоциты являются важным компонентом защитной системы организма человека и животных. Свою основную функцию они осуществляют с помощью фагоцитоза - филогенетически наиболее древнего механизма защиты от проникающих в организм инородных частиц [Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995; Кузнецов В.Ф., 1995; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Klebanoff S.J., 1992; Heufelder А.Е., Bahn R.S., 1993; Peterson R.K., Nielsen H.B., 1997; Shiratsuch A., Nakanishi Y., 1999]. Фагоцитоз является частью многообразных функций нейтрофилов, участвующих в промежуточном обмене веществ, а также в реактивности и в системе специфических реакций иммунного надзора и защиты. Однако механизм фагоцитоза до настоящего времени полностью не изучен, что делает актуальной проблему поиска новых подходов и биохимических основ в исследовании естественных и специфических иммунных реакций.

В свете современных представлений поглощение и переваривание микробов осуществляется с помощью разнообразных биохимических реакций: потребление кислорода, гликолиза и биосинтеза. Контакт фагоцитарных объектов с поверхностью клетки приводит к функциональным

изменениям "компонентов плазматической мембраны и стимуляции метаболических процессов в фагоците (рис.1). Повышение активности окислительно-восстановительных реакций при фагоцитозе усиливает окисление глюкозы через гексозомонофосфатный шунт и способствует накоплению перекиси водорода, и свободных радикалов в нейтрофилах. Перекись водорода является сильным окислителем клеточных компонентов [Галанкин И.В., Сапрыкин В.П., 1997; Першин Б.Б. и соавт., 2003; Овсянников М.В., 2005; Ambruso D. et al., 1990; Droge W. et al., 1992; Weigent D.A., et al. 1995]. При малой ее концентрации усиливается окислительный метаболизм в фагоцитах, активируются процессы завершенности фагоцитоза и адгезии нейтрофилов к эндотелию сосудов с последующей их миграцией в экстравазалыюе русло. Высокие концентрации перекиси водорода приводят к гиперпродукции биологических оксидантов в нейтрофилах с мощным цитотоксическим потенциалом, влияющих на механизм клеточного распознавания антигенов и резистентности самих нейтрофилов.

Для характеристики фагоцитарной активности нейтрофилов первостепенное значение имеет состояние завершенного и незавершенного фагоцитоза. Изучение завершенности фагоцитоза является одним из главных, но наименее изученных звеньев клеточной реактивности организма. Поэтому расшифровка биохимических механизмов в изменении метаболизма и состоянии клеточных мембран является актуальной в исследованиях адаптационных и компенсаторных возможностей нейтрофилов при наркотической интоксикации. Изучение биохимических основ единой клеточно-гуморальной защиты организма расширит понятие о патогенезе опийной наркомании и с этих позиций поможет разработать новые пути прогнозирования, диагностики и эффективности проводимой терапии.

Цель исследования. Изучить особенности функциональной активности Нейтрофилов в системе взаимосвязи с показателями клеточного и гуморального иммунитета, усовершенствовать методы и биохимические

подходы к определению фагоцитарного процесса в клинических и экспериментальных исследованиях.

Задачи исследования: 1.Изучить биохимические механизмы фагоцитарной реакции сегментоядерных нейтрофилов крови при опийной наркомании.

2. Исследовать морфологические особенности и функциональные резервы фагоцитарных клеток после завершения переваривания микробов.

3.Изучить возможность участия нейтрофилов в реакции повторного фагоцитоза при увеличении антигенных и дестабилизирующих воздействий.

4. Определить состояние адаптационных и компенсаторных возможностей нейтрофилов при моделировании наркотической зависимости в эксперименте.

5. Изучить метаболическую активность и функциональные изменения гранулярных лейкоцитов, при введении наркотических веществ in vitro.

6. Выявить характер изменения показателей фагоцитоза в системе взаимосвязи с показателями клеточного, гуморального иммунитета и биохимических реакций у наркозависимых лиц.

7. Разработать способ определения наличия опиатов в крови с использованием реакции фагоцитоза.

8. Разработать новый способ расчета НСТ-положительных клеток как показателя кислородзависимых систем бактерицидности гранулоцитов с учетом стадий завершенного и незавершенного фагоцитоза.

Впервые приводятся теоретическое, практическое обоснование и биохимические подходы к пониманию проявления феномена повторного фагоцитоза нейтрофилов в кровеносном русле.

Впервые выявлена новая форма фагоцитарной недостаточности нейтрофильных лейкоцитов - неэффективная

гиперактивность, проявляющаяся в высокой активности к завершению фагоцитоза при низкой способности к поглощению и переваливанию микробов.

Разработан простой иммунологический тест определения опиатов в крови с помощью реакции фагоцитоза, основанный на усилении метаболической активности клеток после введения наркотических веществ in vitro.

Модифицирован способ расчета НСТ-позитивных клеток по степени восстановления нитросинего тетразолия в стадиях завершенного и незавершенного фагоцитоза.

Практическая значимость:

Разработанный новый способ определения фазы «созидательного покоя» дает возможность более четкого выявления стадии завершенности фагоцитоза и может быть использован в качестве дополнительного теста в прогнозировании заболевания и эффективности проводимых лечебных мероприятий.

Выявленная новая форма фагоцитарной недостаточности -мало фагоцитирующих и быстро переходящих в стадию завершения и «покоя», позволяет оценить тяжесть абстинентного синдрома, степень наркотической интоксикации и помочь в разработке новых биохимических подходов в патогенезе наркомании.

Феномен повторного фагоцитоза выявляет новые аспекты функционирования нейтрофилов и его эндогенные механизмы, ответственные за регуляцию адаптационных процессов при патологическом влечении к наркотическим веществам.

Разработанный фагоцитарный тест, определяющий наличие опиатов в крови, повышает эффективность иммунологической диагностики наркотической зависимости.

Модификация способа расчета НСТ-теста упрощает подсчет зерен формазана внутри фагоцита и позволяет более четко дифференцировать стадию переваривания и завершения фагоцитарной реакции, а также степень активности окислительно-восстановительных реакций, происходящих в микроцитах при наркотической интоксикации.

Определение концентрации перекисного "окисления липидов (ПОЛ) и активности фермента супероксидцисмутазы (СОД) в сыворотке крови позволяет оценить структурное и функциональное состояние мембран, а также адаптационно-компенсаторные возможности антиоксидантной защиты при длительном воздействии наркотических веществ.

Результаты исследований можно использовать в учебном процессе, в научно-исследовательских и в клинических лабораториях иммунологического, биохимического, микробиологического и гематологического профиля.

Положения, выносимые на защиту:

* У больных с опийной наркоманией в период абстиненции увеличиваются показатели завершенности фагоцитоза, снижается активность НСТ-восстанавливающей и адгезивной способности лейкоцитов. Хроническая опийная интоксикация увеличивает реактивность и скорость фагоцитарного процесса, функционально ослабленные фагоциты мало фагоцитируют и быстро переходят в стадию завершенности и «покоя». У пациентов, страдающих опийной зависимостью, в период отмены наркотиков снижается содержание Т- и особенно В-лимфоцитов, Т-хелперов, наряду с этим увеличивается содержание Т-супрессоров, ЦИК, а также 1§М и ^А.

* У наркозависимых больных в период лишения употребления наркотика увеличивается содержание конечных продуктов ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) в начале абстиненции и умеренно снижается в постабстинентном состоянии, тогда как активность супероксидцисмутазы (СОД) в сыворотке крови снижена в течение всего периода наблюдения.

* В крови лабораторных белых мышей наибольшие показатели завершенности фагоцитоза отмечены в состоянии отмены введения морфина по сравнению с острой и хронической формой наркотической интоксикации. Дисфункция нейтрофилов (повышение завершенности фагоцитоза, снижение НСТ-восстанавливающей и адгезивной способности) у животных менее выражена, чем у людей. Вместе с тем, процент

активности нейтрофилов, принимающих участие в повторном фагоцитозе, несколько выше у животных, чем у наркозависимых больных.

■Внедрение результатов исследования в практику.

Имеются 3 патента Государственного патентного ведомства Республики Таджикистан (№ 0800168 от 10.01.2008 г.; № 080071 от 10.01.08 г.; № 0800336 от 18.06.2008 г.), получено 8 удостоверений на рационализаторские предложения, выданные ТГМУ им. Абуали ибни Сино, изданы 2 методических рекомендаций по совершенствованию метода определения фагоцитарной реакции нейтрофилов в крови.

Материалы исследований используются в учебном процессе на кафедрах нормальной физиологии, патологической физиологии, микробиологии и хирургических болезней №1.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на: II Всемирном конгрессе по иммунологии и аллергии (М.,2004), на I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); на международной конференции «Актуальные проблемы физиологии человека и животных» (Душанбе, 2003), в научно-медицинском журнале «Вестник Авиценны» Таджикского государственного медицинского университета им. Абуали ибни Сино; в научном журнале «Вестник национального университета» (Душанбе, 2004-2005 гг.), а также на 53-й научно-практической конференции ТГМУ (с международным участием) (Душанбе, 2005), научно-практической конференции с международным участием «Семейная медицина и здоровье человека» (Душанбе,2005), обсуждены на заседании межкафедральной экспертной комиссии по теоретическим дисциплинам ТГМУ им. Абуали ибн Сино (29 июня 2008г), на расширенном межкафедральном заседании кафедры биохимии биологического факультета ТНУ (31 марта 2009г).

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 32 научных работах, из них 2 депонированные рукописи.

■ ' Структура и объем работы. Диссертация изложена на 259 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы с общей характеристикой материала и

методов исследования, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы. Работа иллюстрирована 36 таблицами, 19 рисунками и, 8 микрофотографиями. Библиографический указатель включает 370 названий, из них 130 на английском языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Характеристика клинического и экспериментального исследования. С целью выполнения поставленных задач были обследованы больные с героиновой наркоманией при синдроме лишения введения наркотика - 80 чел и острой наркотической интоксикацией (одурманивание) - 40 чел. Все обследованные были мужского пола в возрасте от 23 лет до 41 года. В качестве сравнения исследовали венозную кровь 25 больных с алкоголизмом, 20 - с психическими расстройствами, 30 -практически здоровых людей (доноров), а также 110 студентов при различной степени эмоционального напряжения.

Состояние наркотической и алкогольной зависимости, а также острого и хронического стресса моделировали на 100 беспородных белых мышах массой 18 -20 г, которые были разделены на 3 экспериментальные группы: 1- наркотическая зависимость (состояние острой, хронической интоксикации и отмены введения морфина); 2 - алкогольная зависимость (острая, хроническая интоксикация и отмена введения этанола); 3 - воздействие стресса (острая и хроническая форма).

В работе использован комплекс гематологических, иммунологических, биохимических и гистологических методов, исследования.

Методы исследования. Определение неспецифических факторов иммунитета. Изучение фагоцитарной активности сегментоядерных нейтрофютов проводили по методу Н.В. Васильева и соавт., 1972 в нашей модификации (Н.Б, Бердиев и соавт., 1983, 1990). В качестве тест-микроба использовали суточную культуру кишечной палочки. Количественную характеристику полученных результатов проводили по стадиям фагоцитарного процесса в разные периоды времени

выдерживания в термостате: 5 мин (ФАН1), 30 мин (ФАН2) и 120 мин (ФАНЗ). О завершенности реакции фагоцитоза судили по поэтапным морфологическим преобразованиям нейтрофила после полного лизиса захваченных микробов. При определении повторного фагоцитоза в циркулирующей крови после регенерации клеточных элементов, нарушенных в процессе «респираторного взрыва», рассчитывали показатели поглощения и переваривания микробов. НСТ-тест определяли по методу Park. Оценку НСТ-позитивных клеток проводили в нашей модификации с учетом стадий завершенного и незавершенного фагоцитоза. Кроме того, изучали адгезивную способность лейкоцитов (A.A. Бутакова и соавт., 1991), спонтанную аггломерацию лейкоцитов по методу Flech, увеличение ядерной фрагментации (С.А. Навноцкий, 1990) и % лизиса как показателя полного истощения резервов лейкоцитов.

Исследование клеточного и гуморального иммунитета проводили в расширенном наборе тестов I уровня: розеткообразующую способность Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов по методу Jondal в модификации Понякиной И.Д. с соавт., (1983); розеткообразующую способность нейтрофилов по методу Авдеева B.C. и соавт., (1984). Параллельно определяли количество теофиллинрезистентных (ТФР) и

теофиллинчувствительных (ТФЧ) лимфоцитов. Количественное определение IgA, IgM, IgG в сыворотке крови проводили методом радиальной иммунодиффузии (РИД) в геле по Mancini, содержание циркулирующих иммунных комплексов - с помощью реакции преципитации 4%-ным раствором полиэтиленгликоля (мол.м. 6000).

.,. Биохимические методы исследования. Активность ПОЛ оценивали по концентрации (МДА) по методу И.Д. Стальной, (1985). Определение активности антиоксидантной защиты (СОД) проводили методом В.А. Костюк (1987).

Экспериментальные методы. С целью моделирования наркотической и алкогольной зависимости лабораторные белые мыши были разделены на три параллельные экспериментальные группы: с острой и хронической интоксикацией, а также при

лишении введения препарата. В качестве контроля была использована интактная группа животных. Для наркотизации животных использовали раствор морфина гидрохлорида (5 мг/кг), алкоголизацию проводили с помощью внутрижелудочного введения 40% раствора этанола (0,2-0,6 мл). Состояние острого эмоционального стресса изучали после 2 ч иммобилизации животных, а физического - после принудительного плавания.

Степень интоксикации и влияния стресса определяли с помощью тест-системы поведенческих реакций методом «открытое поле» по Константинопольскому М.А. и соавт. (1992). После декапитации, в крови животных изучали неспецифические факторы иммунитета, а внутренние органы (печень, сердце, головной мозг и тимус) подвергали гистологическому исследованию.

Методы статистической обработки материала. Статистический анализ результатов проведен с использованием специализированной программы 8Р88-16,0. Различия между двумя величинами считали достоверными, если вероятность их отклонения не превышала 5% (Р<0,05).

Результаты исследования и их обсуждение

Иммунологическое и биохимическое исследование крови у больных с опийной наркоманией проводили в состоянии лишения употребления наркотиков - на 1, 3, 5, 7, 9 и далее сутки, поскольку именно в этот период в организме развивается симтомокомплекс, оказывающий влияние на нормальное функционирование всех органов и систем, включая и механизмы естественной защиты. Основное внимание было сосредоточено на изучении состояния сегментоядерных нейтрофилов после полного переваривания микробов. Результаты исследований свидетельствуют о выраженной фагоцитарной активности микроцитов в начальные периоды наблюдения, характеризующиеся увеличением показателей завершенности фагоцитоза (табл. 1). В последующие сроки ФАН отличается незначительным снижением интенсивности суммарных

показателей, однако уровень их активности остается выше, чем в группе доноров (Р<0,001). Усиление окислительного метаболизма в нейтрофилах под действием наркотиков приводит к гиперпродукции активных форм кислорода -биологических оксидантов, ускоряющих процесс завершенности фагоцитоза. Результаты наших исследований совпадают с мнениями ряда ученых [Гусев С.А., 1990; Клюбин И.В., 1996; Сапин М.Р., 2000; Bayer B.M.et al., 1990; Blalock I.E., 1992; Kle-banoff S.J., 1992] высказывающих предположение о способности лейкоцитов приспосабливаться к условиям резко возросшей функциональной активности изменением своего метаболизма.

Оценка кислородзависимых систем бактерицидное™ нейтрофилов с помощью НСТ-теста, свидетельствует о подавлении восстанавливающей способности нейтрофилов в крови больных в сравнении с практически здоровыми людьми (рис. 2). Активность HCT-восстанавливающей способности лейкоцитов после проведенного лечения сохраняется на уровне показателей, выявленных при поступлении, однако среднее ее значение остается ниже, чем в группе доноров. Индекс HCT, напротив, имеет отчетливую тенденцию к повышению и почти в 2 раза превышает исходную величину (Р<0,01).

/о

100 i

60 50 40 30

^--

контроль

1 3 5

Продолжительность наблюдения (сутки) СПЗФ -i- Адг. HCTJ

суг

Рис. 2 Некоторые показатели неспецифического иммунитета у больных наркоманией в динамике стационарного наблюдения

В результате проведенного исследования выявлено, что наркотические препараты стимулируют метаболическую активность микрофагов. Активизация фазы завершенности фагоцитоза протекает на фоне ослабления процессов поглощения и переваривания, что отражает нарушение механизмов антибактериальной системы фагоцитов.

При изучении адгезивных свойств нейтрофилов выявлена тенденция снижения показателей у наркозависимых больных. Анализ средних значений указывает на наличие отрицательных связей между фагоцитарной и адгезивной активностью гранулярных лейкоцитов. Данная закономерность особенно выражена на 5 и 7 сут наблюдения.

СПЗФ, %

10 9 8 7 6 5 4

1 -1-:-

о -I-,---,-и

контроль 1 3. 5 7 сут

Продолжительность наблюдения (сутки) ша+шш СПЗФ «швь««« НСТ —ф- Адг.

Рис. 3 Показатели функциональной активности сегментоядерных нейтрофилов в динамике алкогольной абстиненции

В качестве сравнения проведены исследования функционально-метаболической активности микрофагов в динамике алкогольной абстиненции (табл. 2). У этой категории больных показатели ФАН характеризуются волнообразным течением - существенным повышением на 1 и 3 сут и незначительным снижением в последующие сроки. Однако уровень их активности остается в 1,5 раза выше контрольных величин. Наряду с этим также отмечается более четкая обратная зависимость между изменениями параметров адгезии и завершенности фагоцитоза. В динамике снижения показателей

НСТ-теста выявляется более равномерный характер, а в показателях интенсивности восстановления целостности клеточных элементов, напротив, стабильное повышение величин как в состоянии алкогольной, так и наркотической абстиненции. Следует отметить, что клиническая картина выздоровления больных чаще опережает восстановление функции нейтрофилов в крови.

Разработанный нами способ определения завершенности фагоцитоза и этапов структурного обновления фагоцитов позволяет определить интенсивность фагоцитарных реакций в циркулирующей крови и функциональной готовности нейтрофилов к пополнению прикраевого пула сосудистого русла для миграции в ткани с повышенной метаболической активностью. Выявленная особенность функционирования нейтрофилов в условиях патологии - увеличение реактивности и скорости фагоцитарного процесса - приводит к истощению энергетического ресурса микрофагов и делает фагоцитоз неэффективным. Вследствие чего функционально ослабленные фагоциты мало фагоцитируют и быстро переходят в стадию завершенности и «покоя». Снижение активности антиоксидантной системы и повышение накопления продуктов ПОЛ способствуют появлению в клеточных мембранах токсических радикалов, ускоряющих, дегенеративные изменения клеточных структур фагоцитов - разрыву оболочки и высвобождению внутриклеточных резорбтивных ферментов в окружающую среду.

В разгар развернутого абстинентного синдрома у больных наркоманией увеличены относительные величины агрегации и лизиса лейкоцитов. Повышение индекса этих показателей при ФАН2 отмечается на 3 и 5 сут заболевания. Возможно, это связано с тем, что максимальная выраженность клинического проявления болезни приходится на 2-3, а ослабление - на 5-7 сут синдрома лишения наркотиков, что свидетельствует о напряженности неспецифической защиты организма в этот период. Выявленные изменения указывают на то, что величина фагоцитарных критериев находится под многоуровневым

контролем со стороны различных систем организма и что дефектность фагоцитоза может явиться универсальным фактором патогенеза при многих заболеваниях человека.

Формирование наркотической зависимости у белых мышей при внутрибрюшинном введении морфина, определяется повышением интенсивности фагоцитарной реакции нейтрофилов в исследуемой крови (табл. 3). Показатели завершенности фагоцитоза достигают своего максимального уровня как при хронической интоксикации препаратом, так и при его отмене. Наибольшая стимуляция метаболической активности микрофагов замечена при отмене введения морфина, что, по-видимому, связано с усилением центральных механизмов регуляции защитных систем организма.

Наряду с увеличением напряженности ФАН в крови экспериментальных животных достоверно увеличивается число лейкоцитов и сегментоядерных нейтрофилов в 1 мкл крови. Наличие антигенных раздражителей в крови экспериментальных животных стимулирует выработку лейкоцитов в красном костном мозге и повышает активность их в циркуляторном русле.

Повышение функциональной активности нейтрофилов подтверждается увеличением НСТ-восстанавливающей способности фагоцитов. Процент поглотительной активности зерен формазана почти в 3-4 раза превышает величину показателей интактной группы (рис.4). В сравнительном анализе данных фагоцитарных параметров (СПЗФ) и НСТ-позитивных клеток выявлена положительная взаимосвязь. Наличие опиатов в крови вызывает резкое увеличение поглощения зерен красителя и ускорение процесса завершенности фагоцитоза. В то же время выявлено, что с повышением интенсивности фагоцитарной реакции снижается количество поглощенных микробов одним нейтрофилом. В данном случае преобладает негативная взаимосвязь между активностью нейтрофилов, вовлеченных в фагоцитарный процесс, и снижением йндекса переваривания. Подавление резервных ' возможностей микроцитов у наркотизированных мышей вызывает ослабление

.15

неспецифической резистентности организма в борьбе с

Кант роль Острая Хронически Абстиненци

форм

* HílpKClTUíaiJlin Л АлКОГОЛМвЧЧЯ i " 1

Рис 4. Адгезивная способность лейкоцитов крови

моделировании на животных наркотической и алкогольной интоксикации

В проведенном нами эксперименте выявлено разнонаправленные связи фагоцитарных величин с результатами реакции ИСТ и адгезявностью нейтрофилов. Так но отношению к НСТ-востанавливающей способности клеток, отражающей бактерицидную активность нейтрофилов, выявлена положительная взаимосвязь (Р<0,05), а по отношению к показателям адгезивной активности, характеризующей готовность микрофагов к присоединению к прикраевому пулу сосудистой стенки, - негативную связь (Р <0,0 01). Количественные показатели адгезии в 1,5-2 раза ниже по сравнению с величинами интактной группы. Такая особенность гранулоцитов свидетельствует об увеличении времени пребывания фагоцитов а циркулирующей крови.

В данной работе нами впервые представляются доказательства существования феномена повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов б системе кровеносного русла. Высокая активизация иолиморфноядерных лейкоцитов к завершенности фагоцитоза, снижение адгезивности гранулоцитов и усиление стимулирующих факторов позволяют нейтрофилам, по-нашему мнению, пройти ряд этапов

обновления клеточных структур в период стадии

«созидательного покой» и никоторому количеству наиболее

активных клеток вновь вступить в реакцию повторного

фагоцитоза._________

Ки I чрогИ.

I Наркотизация

Рис. 5 Активность показателей ИСТ - теста при воздействии этанола и морфина о эксперименте

Результаты исследования свидетельствуют о том, что у практически здоровых людей при 5- и 30-минутном фагоцитарном процессе явлений повторного фагоцитоза не наблюдается. При 2-часовой длительности фагоцитарной реакции 7% се гае нтоядерНЪШ нейтрофилов оказываются вовлеченным и процесс повторного фагоцитоза. У больных же с опийной наркоманией на 5 сут стационарного лечения величина этого показателя достигает !1% даже при кратковременной (5 Мин) стимуляции нейтрофилов фагоцитарным объектом. При более позднем фагоцитарном процессе (2 час) активность нейтрофшюв у них. почти в 2 раза превышает уровень контрольной группы (Р<0,001). У больных с алкоголизмом нарастание числа клеток до 6%, замеченных в реакции повторного фагоцитоза, отмечается на 3 сут абстиненции, а у больных с психическими расс тройствами данный феномен не наблюдается,

В экспериментальных исследованиях у животных показатели активности нейтрофилов, принимающих участие в

повторном фагоцитозе, оказываются более выраженными, чем у людей.

У интактных мышей частота выявлений активности нейтрофилов при ФАНЗ более чем в 3 раза превышает уровень аналогичных показателей у здоровых людей (доноров). Наиболее активны в этом отношении были фагоцитарные клетки при|фОнической форме наркотической интоксикации и в меньшей степени их активность проявлялась при алкогольной зависимое т*-;"

Влияние'постоянного стресса на организм белых мышей также вызывает стимуляцию фагоцитарных реакций, выявляя признаки повторного фагоцитоза. Процент позитивных клеток выше при 30-минутном (20%), нежели, чем при 2-часовом фагоцитарном процессе (18%). Состояние острого (иммобилгоацйотшого) Стресса характеризуется

гиперактивизацией Лейкоцитов с высоким показателем повторного фагоцитоза даже при кратковременной фазе фагоцитарного процесса (5-мин). При 30-минутной продолжительности фагоцитарной реакции этот показатель наиболее ; выражен и почти в 2 раза превышает уровень повторного фагоцитоза, отмеченный у людей в состоянии острого эмоционального напряжения.

Таким образом, проявление повторного фагоцитоза нейтрофилов в циркулирующей крови, выявленное как в клинических, так и в экспериментальных исследованиях, свидетельствуют о высокой степени напряженности факторов неспецифического иммунитета. Высокая активизация процессов окислительного характера способствует тому, что после фазы «созидательного покоя» гранулоциты вновь готовы приступить к выполнению своей основной функции - фагоцитированию инородных частиц с целью восстановления нарушенного антигенного баланса в крови. Возможно, увеличение срока пребывания зрелых нейтрофилов в крови снижает скорость их миграции через экстравазальное русло и является причиной повреждения внутренних органов у больных с наркоманией.

Кислородзависимый механизм (гликогенолиз) Кислороднезависимый механизм (гликолиз)

Аэробное окисление глюкозы Анаэробное окисление глюкозы

I 4

В клеточных мембранах В мембранах лизосом

I I

Глюкоза

Активация оксидаз...........—> (эндогенный гликоген) .....Активация гидролаз

4 I I

Окисление ненасыщенных жирных АТФ Накопление молочной кислоты кислот, образование свободных 4

радикалов Стимуляция 4

фагоцитоза Понижение рН

Рис. 1. Характеристика окислительно-восстановительных реакций в полиморфноядерных лейкоцитах в процессе фагоцитоза

Таблица 1

Характеристика активности фагоцитарной реакции нейтрофилов в состоянии наркотической

абстиненции при ФАН2 (М+ш)

Обследованные, сроки наблюдения 0 ст 1 стадия п стадия III стадия IV стадия АЗФ Этапы обновления СПЗФ НЗФ ПАЛ Лизис

% ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ 1 2 3 % ФИ ФЧ % ПАЛ %

Здоровые 18,9± 2,7 3,5± 0,1 36,0± 2,9 5,3± 0,2 22,1± 3,1 4,0± 0,9 10,0+ 0,5 8,0+ 0,3 5,0+ 0,1 45,1± 1,0

Больные наркоманией: 1 сут 2,5± 0,1* 5,4± 0,2 67,0± 4,3* 3,9± 1,0 20,0± 2,1* 10,5± 1,1 97,5± 2,5*

3 сут 5,0± 0,9* 6,0± 1,0 24,3± 1,6 1,0± 0,1 30,2± 2,0* 28,0± 1,7* 8,0± 0,4 90,5± 1,4* 4,5+ 0,3 4,0+ 0,1

5 сут 10,0± 1,0* 1,0+ од 19,0± 1,2 17,2+ 1,2* 25,5+ 1,0* 19,7± 2,1* 81,4± 1,4* 8,6+ 0,4 3,5+ 0,1 -

7 сут 1,3± 0,1 3,0± 0,1 2,0± 0,1 2,0± 0,2 2,0± 0,1 2,3± 0,1 19,7± 1,3 43,2+ 2,2* 24,8± 1,7* 7,0± 0,3 94,7+ 1,4*

9 сут 19,3± 2,0 55,3+ 3,1* 10,7± 2,0 8,7± 1,1 94,0± 2,1*

* показано достоверное отличие от соответствующего контроля (р < 0,05)

Таблица 2

Функциональные особенности нейтрофилов у больныхс алкоголизмом в динамике абстинентного синдрома (М±м)

срок исслед. Ост 1 стадия II стадия III стадия IV стадия АЗФ Этапы обновления СПЗФ НЗФ ПАЛ Лизис

% ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ 1 2 3 % ФИ ФЧ % ИАЛ %

ФАН1 Доноры 34,5 ± 1,1 10,1 ± 0.1 3,7 ± 0.1 18,8± 0,9 2,9 ± 0 1 12,9 0.5 3,3 0.4 5,9 ± 0.1 4,2 ± 0,7 17,8 ± 2,1 4,7 ^ 0,1 17,8 ± 2,1

Больные с алкоголиз 1 сут 2,4 ± 0,2* 4,3 ± 0,9 3,4 ± 1,2* 3,7 ± 0,6 4,0 ± 0,5 5,7 ± 1,3 29,2 ± 3,2* 31,2± 2,7 16,2 ± 2,0 13,6 ± 1.5 90,2 ± 2,4*

3 сут 13,8 ± 1,0 51,8± 3,8 28,3 ± 2,4 6,1 • ± 1,0 100,0 ± 2,1*

5 сут 5,2 ± 0,6 3,3 ± 0,4 19,0 ± лл 41,2± 3,2 27,4 ± 2,7 4,2 ± 0,1 91,8 ± 1,9* 3.0± 0,4 5,5 ± 0,1

7 сут 3,0 ± 0,1 3,0 ± 0,4 4,3 ± 0,1 2,9 ± 0,1 6,7 ± 0,3 2,7 ± од 20,0 ± 1,5 39,0± 1,3 24,0 ± 1,0 3,0 ± 0,2 86,0 ± 1,0

ФАН2 Доноры 18,9 2,7 3,5 ± 0,1 35,4 ± 2,9 5,3 ± 0,2 22,1 3,1 4.0 ± 0,5 10,0 + 0,5 8,0 + 0,3 5,0 + 0,1 45,1 ± 1,0

Больные с алкоголиз 1 сут 10,8 ± 1,4* 39,4± 2,8* 32,8 ± 3,0* 17,0 ± 2,0* 100,0 ± 2,3*

3 сут 17,7 ± 1,4* 29,0± 3,3* 27,3 3,0* 26,0 ± 2,5* 100,0 ± 2,6*

5 сут 8.8 ± 0,9 8,9 ± 1.2 10,8 ± 1.7 3,4 £ 0,4 18,8 ± 1,3 24,2± 3,8 19,6 ± 3,4 10,6 ± 2,7 73,2 ± 2.8* 7,2± 1,0 8,0 ± 0,3

7 сут 4,5 ± 0,6 6,3 ± 1,0 19,5 ± 2,8 7,4 + 1,1 16,0 1,0 38,5± 3,0 12,5 ± 2,3 9.0 ± 2.1 76,0 ± |2,1*

Примечание: * различие показателей по отношению к донорам (Р < 0,05)

Таблица 3

Исследование интенсивности фагоцитарных реакций полиморфноядерных лейкоцитов крови у _ экспериментальных животных при введении морфина in vitro (М±м)__

Группы обслед-х 0 сг I ст Пет Шст fVer АЗФ Этапы обновления СПЗФ НЗФ 1стп/ф JI ст пУф Шст л/ф Лейкерг Лизис

ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ 1 2 3 % ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ ФИ ФЧ % ИАА %

интактные До введения 2,0± 0,1 4,0± 0,3 9,2 ± 0,5 6.4± 0,3 5,1 ± 0,1 15,4 ± 1,0 19,4± 1,2 23,0± 0,9 62,9 2,0

После введения 25.3± 3,1* 1Д ± ОД 5,2 ± 1,0* 1,5 ± 0,3* 32,0 ± 1,5* 68,0 ± 5,2

Наркотиз

До введения 15,7± 2,0 9,3 ± 0,3 57,0± 1,7 82,0 ± 1Д 3,3 ± 0,7 2,1± 0,3 5,0 ± 1,7 2,6± 0,2 8, ± 2.0 1,7± ол

После введения 35,0 ± 1,7* 6,0 1,7 90,5± 3,4* 100,0± 1,1* 11,3± 2,1* 2,2± 0,2 18,0± 2.7* 3,0± 1,7

Алког-ные

До введения 6,0± 0,4 2,5± 0,1 1,5 ± 1,1 1.5± 1.1 17,5± 0,7 15,0 ± 0,5 5,0 ± 0,2 55.0± 1,8 92,5 ± 3,5

После введения 11,8± 2,7* 3,3± U 30,2± 3,0* 12,0 ± 2,4* 15,0± 2,6* 3 l.ftfc 1,3* 88,2 ± 2,9* 12,5± 2,6 2,6± 0,3

Стресс

До введения 17,3 3,3 224= С? 46,0= 3,4 85,7 ± 3,0 22,0± 1,3 2,9* 1,6 18,5± 3,0 1,6= 0,8 14,3 ± 3,1

После введения 18,7± 1,0* 18,7 ± 1,0* 81,3 ± 3,3*

Примечание: * достоверное отличие показателен после введения препарата от показателей до введения (Р < 0,001

Существующие литературные данные указывают на подавляющее действие морфина на клетки иммунной системы, в частности на 'Г- и В-лимфоциты, однако фактов относительно проведенных анализов с воздействием морфина in vitro на сегментоядерные нейтрофилы в процессе фагоцитоза, нами не обнаружено. С этой целью мы провели ряд клинических (на больных с наркоманией, алкоголизмом и на здоровых людях в состоянии психоэмоционального напряжения, а также донорах) и экспериментальных исследований (при различных формах наркотической, алкогольной интоксикации, при стрессе и на интактных белых мышах).

Материалы анализов свидетельствуют о резком угнетении функциональной активности нейтрофилов у здоровых людей при введении раствора морфина гидрохлорида in vitro. Суммарные показатели завершенного фагоцитоза почти в 3 раза ниже, чем до введения морфина. У больных с алкоголизмом процент переваривающей активности выше после введения препарата, а фагоцитарный показатель приближается к фоновым величинам со слабым проявлением повторного фагоцитоза. У больных с наркоманией процент завершенности фагоцитоза достигает своего «плато» с максимальной выраженностью признаков повторного фагоцитоза. В экспериментальных исследованиях установлено, что при введении морфина in vitro у интактных животных отмечается резкое подавление фагоцитарной функции лейкоцитов с высоким процентом лизиса клеток (60%). Аналогичная картина наблюдается и в состоянии длительного стресса. При алкогольной интоксикации введение препарата вызывает усиление процессов переваривания и лизиса микробов, а показатели морфофункционального преобразования приближаются к исходным величинам. При наркотической интоксикации результаты по всем фагоцитарным критериям выше, чем в предыдущих группах. Выявленные особенности функционирования полинуклеаров при воздействии морфина позволяют сделать предположение о том, что наркотические препараты, включая алкоголь, способны изменять свойства опиоидных рецепторов на поверхности иммунокомпетентных

клеток, в том числе нейтрофилов периферической крови человека [Зозуля A.A., Пшеничкин С.Ф., 1990; Carr D.J., 1991; Chukwuocha R., et ah, 1994; Makman M.N.., et al., 1995; Roy S., Loh H.H., 1996]. Морфин обладает сродством к мю-опиоидным рецепторам, а при его введении происходит изменение конформационного состояния данных рецепторов таким образом, что при их блокаде происходит повышение уровня внутриклеточного цАМФ и усиление метаболизма в нейтрофилах. Проведенные исследования позволяют оценивать функциональное состояние опиоидных рецепторов на поверхности нейтрофилов периферической крови человека и животных, что имеет диагностическое и прогностическое значение в плане выявления наличия опиатов в крови.

Гистологическое исследование препаратов не выявило особых изменений в органах животных при введении морфина, этанола и воздействии стресса. По-видимому, интоксикация психоактивными веществами и воздействие сильного и длительного стресса в течение недели не приводит к существенным изменениям в нейро-гуморальных регуляторных процессах организма белых мышей, но не вызывает необратимых нарушений в жизненно-важных органах грызунов.

Как известно, при опийной наркомании происходят выраженные изменения в состоянии специфического иммунитета и неспецифической резистентности, направленные на поддержание внутренней среды организма. Полученные результаты свидетельствуют о выраженном снижении количественной и функциональной активности Т-лимфоцитов, Т-хелперов, особенно B-лимфоцитов и, напротив, увеличение содержания Т-супрессоров, ЦИК, IgM и [gA. Эти различия у больных с опийной наркоманией в состоянии абстиненции носят универсальный характер. Мы попытались выявить взаимосвязь между фагоцитарными параметрами и к л сто чно- гу моральными факторами защиты.

В проведенном исследовании установлено, что количество Т-лимфоцитов негативно связано с суммарным показателем завершенности фагоцитоза как при ФАН1, так и при ФАН2.

Причем при ФАН1 эта закономерность более выражена, что свидетельствует о снижении поглотительной активности и выраженной способности нейтрофилов к завершению реакции фагоцитоза. Причиной недостаточности в функционировании лимфоцитов и микрофагов, вероятно, является то, что увеличение потребления наркотиков снижает активность фермента СОД в сыворотке крови, нейтрализующего действие свободных радикалов. Одновременное повышение активности фермента аденилатциклазы (АД) приводит к снижению реакции розегкообразования Т-лимфоцитов и нарушению клеточного гомеостаза. В динамике наркотической абстиненции эта взаимосвязь наиболее выражена на 1 и 2 сут наблюдения. На 3 и 5 сут выявлен дисбаланс между способностью к розеткообразованию лимфоцитов и к завершенности фагоцитоза нейтрофилов. Между показателями теофиллинрезистентных функции лимфоцитов и фагоцитарными критериями в динамике наблюдения отмечена положительная взаимосвязь, а в отношении теофиллинчувствительных лимфоцитов к фагоцитозу - отрицательная. Соотношение иммунорегуляторного индекса ТФР/ТФЧ на протяжении острой фазы и в постабстинентном состоянии больных остается стабильно сниженным в сравнении с группой здоровых лиц. Повышение Т-супрессорной и снижение Т-хелперной активности лимфоцитов в процессе адаптации к отмене наркотиков свидетельствуют о снижении иммунологической реактивности и напряженности аутоиммунных процессов в организме больных с героиновой наркоманией. Установлено особенно резкое угнетение функции В-лимфоцитов у наркозависимых лиц со слабой способностью к нормализации в процессе проведенного лечения. Снижение экспрессии СД22+-детерминант может служить признаком тяжести заболевания. Между розеткообразующей способностью нейтрофилов и интенсивностью в фазе завершения фагоцитарной реакции наблюдается обратная зависимость: уменьшение одного из показателей приводит к повышению второго и наоборот.

Таким образом, снижение количества В-лимфоцитов свидетельствует о тяжести абстинентного состояния больных, а

повышение способности к розеткообразованию данных клеток -о снижении остроты патологического процесса. Одновременно с понижением числа Т- и В-лимфоцитов у пациентов с хронической опийной интоксикацией отмечается дисбаланс в пуле основных классов иммуноглобулинов. Между содержанием

и СПЗФ отмечается слабая негативная связь (Р>0,05) Повышение уровня ^М в 3,5 раза в период острой фазы абстиненции положительно коррелирует с показателями фагоцитоза. На 5 и 7 сут эта закономерность не выявляется, а на 9 сут оказывается даже негативной. Содержание в развернутую стадию абстиненции и до конца исследования имеет тенденцию к умеренному снижению показателей. При выявлении взаимосвязи с критериями ФАН выраженность ее пропорциональна величинам предыдущих классов иммуноглобулинов.

Полученные данные свидетельствуют о напряжении гуморального иммунитета в разгар синдрома отмены. Индукция реакций антителообразования является, по всей вероятности, достаточно необходимой, поскольку хроническое поступление опия и его производных запускает иммунный ответ, конечным итогом которого является связывание антигена с антителом и элиминация его из организма. Избыточное антителообразование приводит к повышению уровня циркулирующих иммунных комплексов и увеличению активности нейтрофилов к фагоцитозу. Реакция нейтрофила, направленная на элиминацию избытка иммунных комплексов, зависит во многом от силы и времени антигенного воздействия на иммунную систему и исходного уровня функциональной активности клеток. Между ЦИК и СПЗФ выявлена прямая взаимосвязь. Ослабление фагоцитарной функции нейтрофилов способствует накоплению иммунных комплексов в крови и оседанию их в тканях в повышенной концентрации. Наряду с этим, длительная персистенция в организме ЦПК у больных с наркоманией приводит к истощению функционального резерва гранулоцитов, а вследствие гиперактивизации и скорой гибели клеток - к формированию нейтропении.

У больных- в состоянии острой наркотической интоксикации отмечается высокая реактивность зернистых

лейкоцитов при 5-минутном фагоцитарном процессе: показатели завершенности фагоцитоза выше, чем у больных в стадии абстиненции. Вместе с тем, отмечается и увеличение числа лейкоцитов в циркулирующей крови. При 30-минутном фагоцитарном процессе величина суммарных показателей снижена, хотя и сохраняется на уровне двукратного увеличения показателей фона.

У больных с острым наркотическим отравлением выявлена прямая позитивная связь СПЗФ с содержанием ^ М и А в сыворотке крови. В результате накопления нерастворимых иммунных комплексов в крови стимулируется кислородзависимый путь метаболизма нейтрофилов, приводя их к гиперактивности как при ФАН1, так и при ФАН2.

Для больных с алкоголизмом в отличие от больных наркоманией характерно менее выраженное угнетение способности лимфоцитов к розеткообразованию. Выявлена негативная взаимосвязь между показателями биоцидности нейтрофилов и количеством Т-лимфоцитов. Эта зависимость более выражена в условиях ФАН1 (Р<0,001) нежели при более длительном фагоцитарном процессе (ФАН2), что подтверждает высокую реактивность сегментоядерных нейтрофилов при алкогольной и наркотической интоксикации. Снижение количественного состава В-лимфоцитов при алкогольной интоксикации не столь значительно по сравнению с таковым у наркозависимых: больных. Наряду с этим отмечается умеренное повышение количества иммуноглобулинов. Избыточное антителообразование приводит к повышению уровня ЦИК. Уровень иммунных комплексов в крови данной категории больных значительно выше, чем в предыдущей группе, что по всей вероятности является следствием длительности антигенной стимуляции недоокисленных продуктов этанола в крови.

Известно, что на функционирование иммунной систёМы оказывает влияние выраженность психоэмоционального напряжения. Психологический статус играет решающую роль в устойчивости организма к стрессу. При изучении влияния психоэмоционального напряжения на иммунологические

показатели крови студентов в период сдачи экзаменов (во время летней экзаменационной сессии) установлено увеличение интенсивности фагоцитарного процесса в 2,5 раза по сравнению с контрольной группой. Вместе с тем отмечается увеличение числа лейкоцитов, а также содержание абсолютного и относительного количества сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови.

Установлено, что процесс фагоцитоза зависит от взаимоотношений высших отделов нейроэндокринной регуляции, а также от закономерностей функционирования мембранных систем, участвующих в сохранении гомеостаза. Накопление свободных радикалов, происходящее при метаболической активации фагоцитов, нарушает нормальное течение процессов окислительного фосфорилирования с нарушением структуры клеточных мембран. В соответствии с представленными данными в табл. 4 у больных с опийной наркоманией в период лишения употребления наркотиков достоверно увеличивается содержание в крови продуктов ПОЛ по сравнению с показателями здоровых людей (Р<0,01). Статистически выраженное повышение отмечается в разгар абстинентного состояния; удельный вес показателей указанных величин у пациентов более чем в 3 раза выше уровня контроля. Анализ динамики показателей ПОЛ указывает на снижение активности накопления в крови токсичных продуктов кислорода при спаде клинических проявлений болезни.

Результаты исследования состояния системы АОЗ, предотвращающие образование гидроксильных радикалов, выявили выраженную тенденцию к подавлению активности ферментов. Существенное угнетение до 2,5 раза отмечается на 3 сут (Р<0,001). В дальнейшие сроки исследования отмечена положительная динамика указанных показателей, но величина их на . : 60% остается ниже уровня фона. Напряженность антиоксидантных ферментных систем может быть причиной неполной нейтрализации перекиси водорода, приводящий к развитию затяжного течения абстинентного состояния.

Таблица 4

Характеристика биохимических н иммунологических показателей крови больных с опийной наркоманией и алкоголизмом (М±т)

Показатели Контроль 1 сут наркотич. абстиненц 7 сут наркотич. абстиненц. 1 сут алкогольн. абстиненц 7 сут алкогольн. абстиненц

ПОЛ 1,3±0,2 4,9±0,2** 3,7±1,8* 2,1 ±0,1* 1,9±0,1

сод 17,9±0.2 7,5±0,2*** 11,6±0,2* 8,0±0,3*** 13,4±0,3**

СПЗФ 45,1±1,0 97,5±2,5*** 76,9±2,0** 100,0±2,6 76,0±2,1**

НСТ-тест 97,8±3,4 80,4±3,3** 82,0±3,0* 90,5±3,0* 80,0±2,5*

индексНСТ 3,0±0,5 4,7±0,3 5,1±0,4 3,7±0.1 4,5±0,2 .

Адгезия 85,4±2,6 77,3±3,3* 64,0±2,9* 78,0±2,7** 84,0±3,0

Примечание: * Р < 0,05; ** Р < 0,01; *** Р < 0,001

В результате проведенного сравнения с группой больных с алкоголизмом выявлено усиление процесса ПОЛ в период алкогольной интоксикации, хотя напряженность показателей менее выражена, чем у больных с наркоманией. В начальные сроки наблюдения зарегистрировано достоверное повышение уровня ПОЛ относительно контроля (Р<0,05). В последующем напряженность цитоцидной активности мембран, связанная с гиперпродукцией супероксидов снижается, и их величина приближается к уровню фона. Снижение удельного веса МДА на протяжении всего срока сочетается с уменьшением показателей СОД. Анализ активности фермента супероксиддисмутазы при алкогольной интоксикации выявил угнетение его на 53% по сравнению с группой контроля. Указанные нарушения объясняются срывом механизма окисления у больных в состоянии наркотической и алкогольной абстиненции.

Анализ факторов взаимосвязи фагоцитарных показателей с биохимическими параметрами выявил положительную корреляцию между ПОЛ и СПЗФ у наркозависимых больных. Трехкратное увеличение ПОЛ в сыворотке крови стимулирует метаболическую активность фагоцитов, ускоряя суммарные эффекты завершенности фагоцитоза по сравнению с контролем (Р<0,001). Эта закономерность менее выражена у больных с алкоголизмом, максимальная величина фагоцитарных критериев у которых сочетается с положительной динамикой ПОЛ. Анализ активности АОЗ выявляет обратную зависимость между СОД и СПЗФ как при наркотической, так и при алкогольной зависимости. Нарушение перекисных и антиокислительных процессов на всех этапах обследования свидетельствует о дестабилизирующем влиянии этих систем на метаболический гомеостаз фагоцитов.

У больных с алкоголизмом выявленная закономерность между показателями состояния функционально-метаболической активности лейкоцитов (ПОЛ, НСТ, индекс НСТ-геста и СПЗФ), менее выражена, чем у больных с наркоманией. Усиление процессов ПОЛ и нарушение клеточных механизмов защиты от свободнорадикального окисления вызывает нарушение не только фагоцитарной, но и функциональной активности сегментоядерных

нейтрофютов после завершения переваривания фагоцитарных микробов. Сбой в согласованности этих систем может быть причиной снижения адгезивной способности лейкоцитов к эндотелию сосудов.

Полученный материал свидетельствует о статистически значимом снижении адгезивности лейкоцитов в начальных (Р<0,05) и завершающих сроках наблюдения (Р<0,01) пациентов. Следует отметить, что степень выраженности этого показателя наблюдается при спаде активности клинической картины синдрома воздержания. У больных же с алкогольной зависимостью установлена положительная динамика в показателях адгезии лейкоцитов. К концу срока исследования частота колебаний данного параметра приближается к контрольным величинам. Следует отметить, что снижение адгезивной способности лейкоцитов может блокировать процесс миграции микрофагов из сосудистого русла и способствовать формированию патологического процесса воспалительного и не воспалительного генеза во внутренних органах.

Сравнительный анализ данных выявил наиболее высокий ; уровень напрежонности факторов неспецифической сопротивляемости. Активность фагоцитарных критериев в 2 раза превышает уровень контрольной группы. Это можно объяснить тем, что лейкоциты, циркулирующие в крови, являются мобильными клетками и способны приспосабливаться к условиям резко возрастающей функциональной активности изменением уровня клеточного метаболизма,. Недостаточность фагоцитарных систем у человека и животных клинически проявляется в виде инфекционно-воспалительных процессов во внутренних органах. Приведенные сведения определяют актуальность всестороннего изучения приобретенных дефектов фагоцитоза, и выявляют целесообразность разработки новых способов исследования функциональной активности нейтрофилов при наркомании.

выводы

1. Выявлены патологические сдвиги ПОЛ и АОС в сыворотке крови наркозависимых больных в состоянии отмены употребления наркотиков, проявляющиеся в повышении уровня МДА и снижении активности СОД. Выраженная интенсификация ПОЛ является действующим фактором повреждения клеточных мембран, приводящий к снижению антибактериального эффекта фагоцитов.

12. Показано, что после завершения реакции фагоцитоза нейтрофиЛы проходят стадию «созидательного покоя», в которой происходит восстановление клеточных структур, в виде осветления цитоплазмы, сцепления разрозненных ядерных фрагментов и восстановления четкости контур. Указанные проявления регенеративных процессов объясняются возможностью восстановления бактерицидных свойств нейтрофилов после завершения переваривания микробов.

3. Отмечено, что при повышении активности завершенности реакции фагоцитоза, в нейтрофилах происходит обновление клеточных структур, и часть более мобильных клеток, не примкнувших к прикраевому пулу сосудистой стенки может принимать участие в реакции повторного фагоцитоза. Вероятно, это вынужденная мера, связанная с гиперполяризацией мембран, на фоне длительного воздействия стимулирующего фактора.

4. Установлено нарушение функционирования сегментоядерных нейтрофилов в виде повышенной активности завершения фагоцитоза (гиперреактивности), снижение поглотительной, адгезивной и НСТ-восстанавливающей способности нейтрофилов, что указывает на подавление механизмов поддержания клеточного гомеостаза при адаптации животных к наркотической зависимости.

5. Выявлено резкое подавление функции лейкоцитов в крови интактных животных и практически здоровых людей (доноров) при введении морфина в процесс фагоцитоза in vitro. Показатели фагоцитарных критериев у наркозависимых, напротив, повышены и более выражены, чем в других группах сравнения (алкогольной интоксикации и стрессе). Обнаруженные изменения в функционировании гранулоцитов могут быть специфичными для опийной наркомании и зависеть от состояния мю-рецепторного аппарата на поверхности нейтрофила.

6. Особенностью нарушения иммунного статуса больных героиновой наркоманией является снижение Т- и В-лимфоцитов, Т-

хелперов, повышение содержания ]gA и ЦИК, Дисбаланс в

системе ПОЛ и АОС, неэффективная гиперактивизация фагоцитарных клеток крови. Дезорганизация компонентов иммунной системы, обеспечивающих клеточный и гуморальный гомеостаз, снижает бактерицидные свойства нейтрофилов и неспецифическую сопротивляемость организма.

7. Разработан упрощенный метод выявления наличия оииатов в крови с помощью реакции фагоцитоза, который является дополнительным иммунологическим тестом в клинических и экспериментальных исследованиях.

8. Разработан упрощенный способ расчета зерен формазана в сегментоядерных нейтрофилах при определении НСТ-теста. В фагоцитах завершивших реакцию фагоцитоза, зерна формазана имеют бледную окраску и располагаются внутри или рядом с нейтрофилом, проходящим процесс реструктуризации. При незавершенном фагоцитозе - они темные и расположены внутри фагоцита.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Исследование биохимических показателей крови повышает рациональность обследования больных с наркоманией, так как увеличение накопления продуктов ПОЛ и снижение активности СОД приводит к фагоцитарной недостаточности нейтрофилов и развитию вторичного иммунодефицита.

2. При определении завершенности реакции фагоцитоза необходимо ориентироваться на восстановительные процессы нейтрофилов в стадии «созидательного покоя».

3. При определении показателей состояния неспецифического иммунитета у больных с наркоманией необходимо учитывать новую форму фагоцитарной недостаточности нейтрофилов - неэффективную гиперреактивность, которая коррелирует с биохимическими показателями крови и клиническими проявлениями болезни.

4. Фагоцитарный тест, выявляющий наличие опиатов в крови, является дополнительным иммунологическим методом, позволяющим определить степень наркотической зависимости в клинических и экспериментальных исследованиях.

5. Модифицированный способ расчета НСТ-теста позволяет более четко дифференцировать стадии завершенного и незавершенного фагоцитоза и упрощает технику подсчета НСТ-позитивнЫх клеток: ;

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Каримова Р.Ш. Состояние переваривающей активности полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови крыс при адаптации к высокогорью / Р.Ш.Каримова // Адаптация, стресс, здоровье; материалы науч.-практ. конф. ТГМУ. - Душанбе, 2001. - С. 81-84.

2. Бердиев Н.Б. Переваривающая активность сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови у больных с нарушением мозгового крово обращения /Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова // Адаптация, стресс, здоровье; материалы науч.-практ. конф. ТГМУ. - Душанбе, 2001.-С. 263-264.

3. Бердиев Н.Б. Активность фазы лизиса и завершенности фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов при гнойном поражении легких / Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова, Л.В. Адамчук // Вестник Авиценны. - 2001. - № № 1-2. - С. 74-78.

4. Бердиев Н.Б. Сравнительная характеристика морфологических изменений сегментоядерных нейтрофилов в стадии завершенного, незавершенного и после завершения фагоцитоза / Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова, Х.М.Мирзоев // Вестник Авиценны. - 2001. - № № 1-2. -С. 71-74.

5. Бердиев Н.Б.Активность процесса переваривания сегментоядерных нейтрофилов у больных наркоманией / Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова//Садаф. - 2003.- №№ 1-2. - С. 11-12.

6. Бердиев Н.Б. Влияние времени инкубации на интенсивность фагоцитарной активности при наркомании /Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова // материалы между нар. науч.- практ. конф. ТНУ. - Душанбе, 2003. - С. 39-41.

7. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови доноров в динамике фагоцитарного процесса / Р.Ш.Каримова и др.// материалы. годич..науч. конф. ТГМУ. - Душанбе, 2003.-С. 69-71.

8. Бердиев Н.Б. Изменение функциональной активности нейтрофилов у лиц с аутоиммунной реактивностью / Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова //Актуальные вопросы стоматологии; материалы науч.-практ. конф,-Душанбе, 2004. - С. 139-140.

9. Шукуров Ф.А. Состояние функциональной активности нейтрофилов при эмоциональном стрессе / Ф.А.Шукуров, Р.Ш. Каримова, Н.К.Беришева // сб.науч.ст. IX межд. контр, по клинич. патологии. - Москва, 2004. - Т. 6, № 1. - С. 37.

10. Каримова Р.Ш. Оценка переваривающей способности сегментоядерных нейтрофилов у больных с героиновой наркоманией / Р.Ш.Каримова, А.А.Онищенко // материалы. IX междунар. конгр. по : клинич. патологии.-Москва, 2004.-Т. 6, № 1. - С. 165-166.

11. Каримова Р.Ш. Функциональные особенности сегментоядерных нейтрофилов при наркомании / Р.Ш.Каримова,: ■ Н.Б.Бердиев // Вестник Авиценны. - 2004. - №№ 1-2. - С. 105 - 109. ;

12. Каримова Р.Ш. Поглотительная и переваривающая активность сегментоядерных нейтрофилов при героиновой наркомании , / Р.Ш.Каримова, Н.Б.Бердиев // Вестник нац. ун-та ТНУ. - 2004. - № 4,-С. 170-174.

13. Каримова Р.Ш. Показатели морфофункционального состояния нейтрофильных гранулоцитов у больных героиновой наркоманией / Р.Ш.Каримова // Вестник нац. ун-та ТНУ. - 2004. - № 4. -С. 185-189.

14. Бердяев Н.Б. Особенности иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов у больных с героиновой наркоманией / Н.Б.Бердиев, Р.Ш.Каримова // Вестник Авиценны. - 2005. - №№ 3-4; s С. 131-134.

15. Каримова Р.Ш. Функционально-метаболическая активность нейтрофилов при героиновой наркомании / Р.Ш.Каримова // Вестник Авиценны,- 2005. - №№ 3-4. - С. 126 - 130.

16. Каримова Р.Ш. Фагоцитарная и адгезивная способность сегментоядерных нейтрофилов периферической крови у больных героиновой наркоманией / Р.Ш.Каримова // Вестник национ. ун-та 'ГНУ. - 2005.- № 3. - С. 120 - 123.

17. Каримова Р.Ш. Антимикробный потенциал нейтрофильных лейкоцитов в состоянии абстиненции у больных с героиновой наркоманией / Р.Ш. Каримова, Р.Рахимова // материалы. I съезда физиол. СНГ. - Сочи, 2005. - Т. 1. - С. 113.

18. Каримова Р.Ш. Состояние функциональной активности лейкоцитов периферической крови при взаимодействии психоактивных веществ in vitro у больных наркоманией / Р.Ш.Каримова //Лекарства и здоровье; материалы науч-практ. копф. - Душанбе, 2005. - С. 353-355- >

19. Бердяев Н.Б. Особенности неспецифической реактивности организма у больных с героиновой наркоманией / Н.Б.Бердиев, Р.Ш. Каримова // Лекарства и здоровье: материалы науч-практ. конф. -Душанбе, 2005.-С.355-357. ,; ;!

20. Неспецифические факторы иммунитета у студентов в процессе обучения и при психоэмоциональном стрессе / Р.Ш.Каримова и др.// материалы, национ. науч-практ. конф. с междунар. участием. -Душанбе, 2005. - С. 291 - 295.

21. Взаимодействие нервной и иммунной систем организма / Н.Б.Бердиев и др. // Стоматология Таджикистана. - Душанбе, 2006. - № 3,-С. 45- 46.

22. Каримова Р.Ш. Модификация способа расчета восстановления нитросинего тетразолия в нейтрофильных лейкоцитах по активности фазы завершенности фагоцитоза / Р.Ш.Каримова // Вестник Авиценны - 2006. - №№ 3-4.- С. 115 -118.

23. Каримова Р.Ш. Структурное преобразование нейтрофилов после завершения переваривания микробов при различных видах патологии / Р.Ш.Каримова, Н.Б.Бердиев // Вестник Авиценны - 2006. -№№3-4.-С. 118-121.

24. Каримова Р.Ш. Патогенетические основы формирования наркотической и алкогольной зависимости / Р.Ш.Каримова, Н.Б.Бердиев; Тадж. гос.мед.ун-т,- Душанбе, 2007. - 7 е.- Деп.в НПИЦ 11.12.2007; №06 (1763а)

25. Каримова Р.Ш. Изменение функциональной активности сегменТоядерных нейтрофилов при психоэмоциональном напряжении / Р.Ш.Каримова; Тадж. гос.мед.ун-т.- Душанбе, 2007. - 13 е.- Деп.в НПИЦ 11.12.2007; №06 (1764а)

26. Особенности влияния Echinococcus granulosis на течение поздних стадий фагоцитарного процесса при эхинококковой болезни / Ш.Р.Умаров и др. // Известия. АН РТ. - Душанбе, 2007. - №3,- С. 70 -74. . .

27. Каримов P.P. Изменение реактивности нейтрофилов при стимуляции фагоцитарного процесса в эксперименте /Р.Р.Каримов, С.С.Сатторов, Р.Ш. Каримова // материалы нучн.-практ. конф. -Душанбе,2008. -С. 166-167.

28. Каримова Р.Ш. Состояние метаболической активности лейкоцитов крови у больных алкоголизмом / Р.Ш.Каримова, Ф.А.Шукуров // материалы нучн.-практ. конф. - Душанбе, 2008. - С. 5051.

29. Шукуров Ф.А. Некоторые аспекты микробицидной функции нейтрофилов при психоэмоциональном напряжении / Ф.А.Шукуров, Р.Ш.Каримова; //Медико-социальные проблемы современ. России; сб.науч.ст,- Москва,2008. - Вып.З. - С. 83-86.

30. Особенности влияния Echinococcus granulosis "на течение ранних стадий фагоцитарного процесса при эхинококковой болезни / Ш.Р.Умаров и др. // Вестник Авиценны. - 2008. - № 4. - С.14 - 18.

31. Особенности влияния Echinococcus granulosis на течение стадии" завершенности фагоцитарного процесса при эхинококковой болезни / Ш.Р.Умаров и др. // Вестник АН РТ. - Душанбе, 2008. - № 1.-С.73 - 78.

32. Каримова Р.Ш. Состояние Т-клеточного звена иммунитета у больных героиновой наркоманией / Р.Ш.Каримова, М.МЯкубова, 11.Б.Бердиев // Вестник АН РТ. - Душанбе, 2009. - № 1. - С. 47-51.

Изобретения

Пат. 168 TG. Способ определения стадии завершенности фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов крови / Р.Каримова, Н.Бердиев, Л.В.Аджамчук; Тадж.госмед.ун-т. - № 0800168; заявл. 10.01.2008, №0800170; олубл.08.08.2008, Бюл.№ 51. -5 с.

Пат. 169 TG Способ определения повторного фагоцитоза нейтрофилов в крови после стадии завершенного фагоцитоза / Р.Каримова; , Тадж.госмед.ун-т - №0800169; заявл. 10.01.2008, №0800171; опубл.08.08.2008, Бюл № 51 - 5 с.

Пат. 170 TG Способ определения наркотических веществ (опиатов) с помощью реакции фагоцитоза / Р.Каримова; Тадж.госмед. ун-т. -№ 0800170; заявл. 18.07.2008, №0800236; олубл.05.09.2008, Бюл.№ 51. -4 с.

Рационализаторские предложения

1. Определение хемотаксической активности нейтрофилов микропипеточным методом / Р.Каримова; Тадж.гос.мед.ун-т. - удост.№ 2084-Р-203; дата подачи 16.01.2004 г.

2. Способ определения завершенности фагоцитоза по преобразованию клеточных структур нейтрофилов в периферической крови / Р. Каримова, Н.Бердиев; Тадж.гос.мед ун-т.-удост,№ 2085-Р-204; дата подачи 16.01.2004 г.;

3. Выявление повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов в пе риферической крови / Р.Каримова; Тадж.гос.мед ун-т. -удост.№ 2086-Р-205; дата подачи 16,01.2004 г.

4. Способ оценки повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови / Р.Каримова; Тадж.гос.мед.ун-т. -удост.№ 2091-Р-206; дата подачи 18.02.2004 г.

5. Способ определения истощения функциональных резервов фагоцитиующих нейтрофилов / Р.Каримова, Н.Бердиев; Тадж.гос.мед.ун-т. - удост. № 2087-Р-207; дата подачи 18.02.2004 г.

6. Способ выявления функциональных резервов сегментоядерных нейтрофилов крови методом стимуляции in vitro / P. Каримова, А.А.Оншценко; Тадж.гос.мед.ун-т.- удост.№ 2090-Р-208; дата подачи 18.02.2004 г.

7. Способ оценки фагоцитарной активности 'сегментоядерных нейтрофилов при инкубации микробно-лейкоцитарной взвеси в условиях двойного сосуда / Р.Каримова, Н.А.Нуруллаева, Р.Р.Каримов; Тадж.гос.мед.ун-т. -удост.№ 3135-Р-437; дата подачи 26.05.06 г.

8. Способ расчета восстановления нитросинего тетразолия в сегментоядерных нейтрофилах по активности фазы завершенного и незавершенного фагоцитоза / Р.Каримова; Тадж.гос.мед.ун-т. - удост.№ 3137-Р-439; дата подачи 26.05.06 г.

Методические рекомендации

1 .Определение реакции фагоцитоза полиморфноядерных лейкоцитов / Н.Бердиев, Р.Каримова.- Душанбе, 2004 г. - 10 с.

2. Якубова М.М., Бердяев Н.Б., Каримова Р.Ш. «Изменение метаболической активности сегментоядерных нейтрофилов крови при стимуляции фагоцитарного процесса в эксперименте / М.М.Якубова, Н.Бердиев, Р.Каримова. - Душанбе, 2009 г.- 17 с.

Сдано в набор 15.08.2009 г. Подписано в печать 16.08.2009г. Формат 60x84 '/16. Тираж 100 экз.

Типография Министерства образования Республики Таджикистан г. Душанбе, 1-й проезд, ул. Лахути 6.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Каримова, Равшания

Стр.:

Оглавление

Введение

Глава 1. Состояние иммунобиологического гомеостаза у больных наркоманией (обзор литературы).

1.1. Биологические, нейрофизиологические и нейрохимические основы развития наркомании.

1.2. Общие патогенетические и биохимические аспекты алкоголизма и наркомании.

1.3. Влияние эндогенной опиоидной системы на формирование адаптационного синдрома при стрессах.

1.4. Роль опиоидной системы в реализации нервного и иммунного взаимодействия.'.

1.5. Характеристика механизмов антимикробной защиты организма.

1.5.1. Биохимические механизмы фагоцитарного процесса.

1.5.2. Состояние завершенности фагоцитоза в свете современных представлений.

1.5.3. Функционально - метаболическая активность нейтрофилов при наркотической, алкогольной зависимости и эмоциональном напряжении.

1.6. Оценка некоторых биохимических показателей при опийной наркомании.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Показатели неспецифических факторов иммунитета.

2.1.1. Изучение фагоцитарного процесса сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови.

2.1.2. Определение активности завершенной фазы фагоцитоза с учетом структурного обновления нейтрофилов после переваривания микробов.

2.1.3.Исследование повторного фагоцитоза полиморфноядерных лейкоцитов в цельной крови.

2.1.4 .Изменение фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов под влиянием морфина in vitro.

2.1.5.Расчет коэффициентов, определяющих состояние бактерицидного потенциала микроцитов.58.

2.1.6.Метод восстановления нитросинего тетразолия.

2.2. Исследование клеточного и гуморального звена иммунитета.59.

2.3. Биохимические методы исследования.

2.4. Экспериментальные методы.

2.5. Методы статистической обработки материала.

Глава 3. Факторы неспецифической иммунологической защиты у больных героиноыой наркоманией.

3.1. Поглотительная и переваривающая активность сегментоядерных нейтрофилов.

3.2. Исследование фагоцитарного процесса в динамике абстинентного синдрома.

3.3. Этапы структурного обновления фагоцитов после завершения переваривания микробов у больных в состоянии наркотической абстиненции.

3.4. Функциональная активность гранулярных лейкоцитов в состоянии острой наркотической интоксикации.

3.5. Реактивность нейтрофилов к объекту фагоцитоза у больных алкоголизмом.

3.6. Состояние защитного потенциала микрофагальной системы у больных с психическими расстройствами.

3.7. Особенности неспецифической сопротивляемости организма при эмоционально-стрессовой реакции.

3.8. Анализ взаимоотношений показателей НСТ-теста, адгезивных свойств нейтрофилов и фагоцитарных критериев.

Глава 4. Феномен повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтроилов крови при опийной наркомании.

Глава 5. Изменения параметров фагоцитоза при моделировании наркотической, алкогольной зависимости и состояния эмоциоального стресса в эксперименте

5.1. Изменение функциональной активности нейтрофилов при наркотической интоксикации в эксперименте.

5.2. Влияние этанола на функциональную активность нейтрофилов белых мышей.

5.3. Иммунологическая реактивность экспериментальных животных при различных формах эмоционального напряжения.

5.4. Изменение некоторых показателей формулы крови лабораторных животных.

5.5. Особенности изменения ядерной фрагментации сегментоядерных нейтрофилов крови белых мышей при функциональном напряжении.

5.6 Состояние антимикробного потенциала нейтрофилов в экспериментальных исследованиях.

5.7. Фагоцитарный тест выявления наличия опиатов в крови в экспериментальных и клинических исследованиях.

Глава 6. Состояние клеточного и гуморального иммунитета у больных опийной наркоманией.

Глава 7. Сравнительная оценка биохимических и иммунологических показателей при наркомании и алкоголизме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Метаболическая активность и функциональные резервы лейкоцитов при наркомании"

Актуальность проблемы. Увеличивающийся рост заболеваемости наркоманией во многих странах мира, экономический и социальный ущерб, медицинские последствия наркомании, способствующие ухудшению показателей состояния здоровья населения, указывают на то, что изучение различных аспектов наркомании является задачей первостепенной важности.

В последние годы появилось множество работ, свидетельствующих об иммунологической недостаточности у больных наркоманией и возросшем интересе к изучению влияния наркотических препаратов на иммунную систему животных и людей {28,31,53,88,270,340}. Известно, что иммунная система организма находится под влиянием сложных нервных, эндокринных и медиаторных воздействий, тесно соприкасаясь, они активно участвуют в единой нервной, клеточно-гуморальной системе защиты организма {16,218,244,306,323,350,363}.

В настоящее время стало очевидным, что нейтрофильные лейкоциты - важный компонент защитной системы организма. Свою защитную функцию они осуществляют с помощью фагоцитоза — филогенетически наиболее древнего механизма защиты от проникающих в организм чужеродных агентов. Выявлено, что нейтрофилы находятся под влиянием нейросекреторной регуляции ЦНС: они являются как бы клеточными посредниками между ЦНС и соединительной тканью. Гранулярные лейкоциты получают нейросекреторные сигналы от нервной системы, определяющие их статус и способность реализации в тканях своего функционального потенциала, одновременно осуществляется механизм обратной связи — информация клеток вегетативных ядер ЦНС о метаболическом состоянии тканей организма { 9,41,124,204,255,366}.

В качестве распознающего аппарата нейтрофил располагает рецепторами к разнообразным продуктам экзогенной и эндогенной природы. Известно, что помимо рецепторов к СЗ компоненту комплемента и Бс - фрагменту иммуноглобулинов, на мембране нейтрофилов обнаружены несколько типов опиоидных рецепторов, с помощью которых опиоидные пептиды в физиологических концентрациях способны модулировать такие функции нейтрофилов, как миграция, фагоцитоз, «респираторный взрыв» и цитотоксичность {14,12,44,263,264}. Наряду с этим на поверхности полиморфноядерных лейкоцитов также обнаружены рецепторы к холинергическим и адренергическим агентам, гистамину, глюкокортикоидам и т.д. Взаимодействие рецепторов с соответствующими агонистами приводит к специфичным функциональным ответам.

Фагоцитоз является частью многообразных функций нейтрофилов, участвующих в промежуточном обмене веществ, реактивности и в системе специфических реакций иммунного надзора и защиты {18,46,312,322, 335}. Однако механизм' фагоцитоза до настоящего времени полностью не изучен {4,35,116}, это делает актуальной проблему поиска новых подходов и биохимических основ в исследовании естественных и специфических иммунных реакций.

В свете современных представлений поглощение и переваривание микробов осуществляется с помощью разнообразных биохимических реакций: потребление кислорода, гликолиз, а также процессы биосинтеза. Контакт частиц с поверхностью клетки приводит к функциональным изменениям компонентов плазматической мембраны, сигнализирующие о формировании НАДН-оксидазного комплекса в мембранах клетки - активация оксидазы, которая катализирует окисление НАДФН2 молекулярным кислородом с образованием НАДФ и

Н2О2. Окисленная форма кофермента стимулирует превращение глюкозо-6-фосфата через пентозный цикл и образование НАДФН.

Повышение активности окислительно-восстановительных реакций при наркотическотической зависимости усиливает окисление глюкозы через гексозомонофосфатный шунт и способствует накоплению перекиси водорода и свободного радикала в нейтрофилах. Перекись водорода является сильным окислителем клеточных компонентов. При малой её концентрации усиливается окислительный метаболизм в фагоцитах, активируются процессы завершенности фагоцитоза и адгезии нейтрофилов к эндотелию сосудов с целью миграции их в экстравазальное русло. Высокие концентрации приводят к гиперпродукции биологических оксидантов в нейтрофилах с мощным цитотоксичкским потенциалом, влияющих на механизм клеточного распознавания антигенов и резистентности самих нейтрофилов.

Наряду с этим в организме больных наркоманией отмечается ослабление антиоксидантной защиты, которое выражается снижением активности двух ферментных систем - супероксиддисмутазы и каталазы, нейтрализующие активность токсичных форм кислорода {54,143}. Ослабление активности фермента супероксиддисмутазы (СОД) и особенно каталазы создает условие для увеличения перекисного окисления липидов (ПОЛ). Установлено, что повышение продуктов ПОЛ может быть одной из причин повреждения клеточных мембран и нарушения процессов внутриклеточного метаболизма. Снижение активности ферментов препятствует обезвреживанию токсичных продуктов окисления, способствуя развитию патологических процессов в органах и тканях. При систематическом потреблении наркотических веществ наблюдается расбалансировка в системе ПОЛ и АОС. Указанные нарушения объясняются срывом механизма окисления, а также истощением не только адаптационных, но и ряда компенсаторных возможностей антиокислительной защиты. Выявлено, что при употреблении наркотических веществ повышается концентрация катехоламинов, что приводит к излишнему повышению уровня цАМФ. Это способствует активации липолиза и высвобождению жирных кислот и триглицеридов, которые, попадая в метаболический цикл жирных кислот, потребляют большое количество АТФ и кислорода. Длительное употреблние наркотиков вызывает уменьшение запасов катехоламинов в организме как следствие истощения компенсаторных возможностей гипофизарно-надпочечниковой системы.

Для характеристики фагоцитарной активности нейтрофилов первостепенное значение имеет состояние завершенного и незавершенного фагоцитоза. Изучение завершенности фагоцитоза является одним из главных, но наименее изученных звеньев клеточной реактивности организма. -Поэтому :; поиск изучения метаболических изменений, биохимических процессов и морфофункциональных преобразований, происходящих в нейтрофиле после фазы переваривания микробов, является одной из важных задач иммунологии, а использование этих особенностей в качестве лабораторного теста при наркотической зависимости поможет разработать новые пути прогнозирования, диагностики и профилактики наркомании.

Цель исследования. Изучить особенности функциональной активности нейтрофилов в системе взаимосвязи с показателями клеточного и гуморального иммунитета у больных героиновой наркоманией. Усовершенствовать методы и биохимические подходы фагоцитарного процесса в клинических и экспериментальных исследованиях.

3. Изучить возможность участия нейтрофилов в реакции повторного фагоцитоза, при увеличении антигенных и дестабилизирующих воздействий.

4 Определить состояние адаптационных и компенсаторных возможностей нейтрофилов при моделировании наркотической зависимости в эксперименте.

7. Разработать способ определения наличия опиатов в крови с использованием реакции фагоцитоза.

Научная новизна: Впервые для определения завершенности фагоцитоза в крови больных наркоманией учитывается фаза «созидательного покоя», которая начинается после завершения переваривания микробов. Впервые приводятся теоретическое, практическое обоснование и биохимические подходы к пониманию проявления феномена повторного фагоцитоза нейтрофилов в кровеносном русле.

Впервые выявлена новая форма фагоцитарной недостаточности нейтрофильных лейкоцитов - неэффективная гиперактивность, проявляющаяся в высокой активности к завершению фагоцитоза при низкой способности к поглощению и перевариванию микробов.

Разработан простой иммунологический тест определения опиатов в крови, с помощью реакции фагоцитоза, основанный на усилении метаболической активности клеток, после введения наркотических веществ in vitro.

Практическая значимость:

Разработанный новый способ определения фазы «созидательного покоя» дает возможность более четкого выявления стадии завершенности фагоцитоза и может быть использован в качестве дополнительного теста в прогнозировании заболевания, и эффективности проводимых лечебных мероприятий.

Выявленная новая форма фагоцитарной недостаточности — мало фагоцитирующих и быстро переходящих в стадию завершения - и «покоя», позволяет оценить тяжесть абстинентного синдрома, степень наркотической интоксикации и помочь в разработке новых биохимических подходов в патогенезе наркомании.

Феномен повторного фагоцитоза выявляет новые аспекты функционирования нейтрофилов и его эндогенные механизмы, ответственные за регуляцию адаптационныыых процессов при патологическом влечении к наркотическим веществам.

Разработанный фагоцитарный тест, определяющий наличие опиатов в крови повышает эффективность иммунологической диагностики наркотической зависимости.

Определение концентрации перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активности антиоксидантной защиты (СОД) в сыворотке крови позволяет оценить структурное и функциональное состояние клеточных мембран, а также адаптационно-компенсаторные возможности антоксидантной защиты при длительном воздействии наркотических веществ.

Результаты исследований можно использовать в учебном процессе, в научно-исследовательских и в клинических лабораториях биохимического, микробиологического и гематологического профиля. Апробация работы. Тема диссертации утверждена на Проблемной комиссии по теоретической медицине, протокол № 8 от 21 ноября 2003 г., на Ученом Совете ТГМУ, протокол № 7 от 24 февраля 2005 г.

Основные положения работы доложены и обсуждены на II Всемирном конгрессе по иммунологии и аллергии (Москва, май - 2004), на I съезде физиологов СНГ (Сочи, сентябрь — 2005), на международной конференции «Актуальные проблемы физиологии человека и животных» (Душанбе, май — 2003), освещены в материалах 53-й научно-практической конференции ТГМУ (с международным участием) (Душанбе, октябрь — 2005), в материалах научно-практической конференции с международным участием «Семейная медицина и здоровье человека» (Душанбе, декабрь - 2005), а также в научно-медицинском журнале (Вестник Авиценны) ТГМУ им. Абуали ибни Сино, обсуждены на заседании межкафедральной экспертной комиссии по теоретическим дисциплинам ТГМУ (29 июня 2008 г), на расширенном межкафедральнм заседании кафедры биохимии биологического факультета ТНУ (31 марта 2009 г).

Внедрение работы. По результатам работы получены 3 авторских свидетельств на изобретение: 1. № 0800168 от 10.01.2008 г. Каримова Р., Бердиев Н., Адамчук JI.B.: «Способ определения стадии завершенности фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов крови»; 2. № 080071 от 10.01.08 г Каримова Р.: «Способ определения повторного фагоцитоза нейтрофилов в крови после стадии завершенного фагоцитоза»; 3. № 0800336 от 18.06.2008 г. Каримова Р. «Способ определения наркотических веществ (опиатов) с помощью реакции фагоцитоза».

Восемь сертификатов рационализаторского предложения: 1. Каримова Р.Ш. «Определение хемотаксической активности нейтрофилов микропипеточным методом» № 2084-Р-203 от 16.01.2004 г.; 2. Каримова Р.Ш., Бердиев Н.Б. «Способ определения завершенности фагоцитоза по преобразованию клеточных структур нейтрофилов в периферической крови» № 2085-Р-204 от 16.01.2004 г.; 3. Каримова Р.Ш. «Выявление" повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови» № 2086-Р-205 от 16,01.2004 г.; 4. Каримова Р.Ш. «Способ оценки повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови» № 2091-Р-206 от 18.02.2004 г.; 5. Каримова Р.Ш., Бердиев Н.Б. «Способ определения истощения функциональных резервов фагоцитиующих нейтрофилов» № 2087-Р-207 от 18.02.2004 г.; 6. Каримова Р.Ш., Онищенко A.A. «Способ выявления функциональных резервов сегментоядерных нейтрофилов крови методом стимуляции in vitro» № 2090-Р-208 от 18.02.2004 г.; 7. Каримова Р.Ш., Нуруллаева H.A., Каримов P.P. «Способ оценки фагоцитарной активности сегментоядерных нейтрофилов при инкубации микробно-лейкоцитарной взвеси в условиях двойного сосуда» № 3135-Р-437 от 26.05.06 г.; 8. Каримова Р.Ш. «Способ расчета восстановления нитросинего тетразолия в сегментоядерных нейтрофилах по активности фазы завершенного и незавершенного фагоцитоза» № 3137-Р-439 от 26.05.06 г. Опубликованы 2 методические рекомендации: 1. Бердиев Н.Б., Каримова Р.Ш. «Определение реакции фагоцитоза полиморфноядерных лейкоцитов». Душанбе, 2004 г.; 2. Якубова М.М., Бердиев Н.Б., Каримова Р.Ш. «Изменение метаболической активности сегментоядерных нейтрофилов крови при стимуляции фагоцитарного процесса в эксперименте». Душанбе, 2009 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 научных работ, из них 14 в международных журналах, остальные вошли в сборники научных статей.

Структура и объем работы. Диссертация изложена настраницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы с общей характеристикой материала и методов исследования, 7 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя -литературы. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 19 рисунками и 8 " микрофотографиями. Библиографический указатель включает ^ названий, из нихна английском языке.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Каримова, Равшания

ВЫВОДЫ

1. Выявлены патологические сдвиги ПОЛ и АОС в сыворотке крови наркозависимых больных в состоянии отмены употребления наркотиков, проявляющиеся в повышении уровня МДА и снижении активности СОД. Выраженная интенсификация ПОЛ является действующим фактором повреждения клеточных мембран, приводящая к снижению антибактериального эффекта фагоцитов.

2. Показано, что после завершения реакции фагоцитоза нейтрофилы проходят стадию «созидательного покоя», в которой происходит восстановление клеточных структур, в виде осветления цитоплазмы, сцепления разрозненных ядерных фрагментов и восстановления четкости контура. Указанные проявления регенеративных ' процессов объясняются . возможностью , восстановления бактерицидных свойств нейтрофилов после завершения переваривания микробов.

3. Отмечено, что при повышении активности завершенности реакции фагоцитоза, в нейтрофилах происходит обновление клеточных структур, и часть более мобильных клеток, не примкнувших к прикраевому пулу сосудистой стенки, может принимать участие в реакции повторного фагоцитоза. Вероятно, это - вынужденная мера, связанная с гиперполяризацией мембран, на фоне длительного воздействия стимулирующего фактора.

4. Установлено нарушение функционирования сегментоядерных нейтрофилов в виде повышенной активности завершения фагоцитоза (гиперреактивности), снижения поглотительной, адгезивной и НСТ-восстанавливающей способности нейтрофилов, что указывает на подавление механизмов поддержания клеточного гомеостаза при адаптации животных к наркотической зависимости.

5. Выявлено резкое подавление функции лейкоцитов в крови интактных животных и практически здоровых людей (доноров) при введении морфина в процесс фагоцитоза in vitro. Показатели фагоцитарных критериев у наркозависимых, напротив, повышены и более выражены, чем в других группах сравнения -алкогольной интоксикации и стрессе. Обнаруженные изменения в функционировании гранулоцитов могут быть специфичными для опийной наркомании и зависеть от состояния мю-рецепторного аппарата на поверхности нейтрофила.

6. Особенностью нарушения иммунного статуса больных героиновой наркоманией является снижение Т- и В-лимфоцитов, Т-хелперов, повышение содержания IgM, IgA и ЦИК, дисбаланс в системе ПОЛ и АОС, неэффективная гиперактивизация фагоцитарных клеток крови. Дезорганизация компонентов иммунной системы, обеспечивающих клеточный и гуморальный гомеостаз, снижает бактерицидные свойства нейтрофилов и неспецифическую сопротивляемость организма.

7. Разработан упрощенный метод выявления наличия опиатов в крови с помощью реакции фагоцитоза, который является дополнительным иммунологическим тестом в клинических и экспериментальных исследованиях.

8. Разработан упрощенный способ расчета зерен формазана в сегментоядерных нейтрофилах при определении НСТ-теста. В фагоцитах, завершивших реакцию фагоцитоза, зерна формазана имеют бледную окраску и располагаются внутри или рядом с нейтрофилом, проходящим процесс реструктуризации. При незавершенном фагоцитозе - они темные и расположены внутри фагоцита.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Завершенность фагоцитоза как конечный результат фагоцитарной реакции, определяющая способность клетки уничтожать живые мишени, зависит от сбалансированности эффекторных механизмов, условий реакций (аэробности и анаэробности среды) и свойств фагоцитарного объекта. Затрата энергии на акт фагоцитоза обеспечивается за счет гликолиза, который протекает в нейтрофилах как в аэробных, так и в анаэробных условиях (рис.18). В настоящее время оценку завершенности фагоцитоза проводят по деструкции микробных клеток и некоторым цитоплазматическим изменениям фагоцита - вакуолизации цитоплазмы и бесформенности поверхностных очертаний {Васильев Н.В. с соавт., 1972}. Недостаточная изученность морфофункционального состояния нейтрофилов в этой фазе, определила цель и задачи наших исследований. Для повышения точности определения завершенности фагоцитоза нами разработан способ определения завершенности, фагоцитоза по- поэтапным процессам, происходящим при восстановлении клеточных структур нейтрофила в стадии «созидательного покоя». С целью полноты изучения фазы завершенности фагоцитоза, нами введен интегральный показатель, определяющий состояние завершения фагоцитарной реакции существующим способом и этапов реструктуризации в нашей модификации - СПЗФ (суммарный показатель завершенности фагоцитоза).

Полученные результаты таким споосбом свидетельствуют о выраженной фагоцитарной активности микроцитов у больных наркоманией в начальные сроки исследования, выражающейся в увеличении показателей завершенности фагоцитоза. В последующем, отмечается незначительное снижением интенсивности суммарных показателей данных параметров, однако уровень активности их остается выше, чем в группе доноров. Выявленные отличия, по-видимому, обусловлены тем, что наркотические вещества усиливают процессы окислительного метаболизма в нейтрофилах. Активизация окислительно-восстановительных реакций при фагоцитозе стимулирует окисление глюкозы через гексозомонофосфатный шунт и способствует накоплению перекиси водорода и свободных радикалов кислорода в нейтрофилах (рис.19). Функциональные ответы клеток на Н2О2 сопровождаются гиперполяризацией плазматической мембраны и транзиторным повышением ионов Са, обладающими мощными бактерицидными свойствами и ускоряющими процесс завершенности фагоцитоза.

Как известно, образование супероксиданиона является наиболее ранним продуктом «респираторного взрыва» в нейтрофилах и сочетается с процессами биосинтеза. В то же время интенсивный синтез токсичных интермедиаторов кислорода представлеяет угрозу для самой клетки, поскольку они обладают способностью4 инициировать свободнорадикальное -, окисление липидов и активировать эндогенные фосфорилазы, что может привести к нарушению целостности клеточных мембран {Thomas J., 1988}.

Полученные нами данные согласуются с исследованиями некоторых авторов {4,28,31,266}, высказывающих предположение о способности лейкоцитов приспосабливаться к условиям резко возросшей функциональной активности изменением своего метаболизма. Наряду с этим токсичные формы кислорода оказывают подавляющие влияния на активность лизосомальных ферментов, направленных на внутриклеточное переваривание микробов (рис. 19).

Проведенные нами исследования кислородозависимого метаболизма в полиморфноядерных лейкоцитах, определяемое с помощью НСТ-теста, свидетельствует о снижении восстанавливающей способности нейтрофилов нитросинего тетразолия в течение всего периода наблюдения. Активность НСТ после проведенного лечения сохраняется на уровне показателей, выявленных при поступлении, хотя в период проведения терапевтических мероприятий наблюдается некоторое увеличение процента позитивных клеток, но уровень их остается ниже исходной. На наш взгляд, существующий способ подсчета формазановых зерен внутри фагоцита и определение НСТ-положительных клеток {Парк А. и соавт., 1981; Бажора Ю.И. с соавт., 1981}является трудоемким, поэтому мы ввели упрощенный способ определения НСТ-позитивных клеток по стадии завершенного фагоцитоза (по вышеуказанному нашему методу) и НСТ-отрицательных клеток по стадии незавершенного фагоцитоза. Отношением показателей незавершенного фагоцитоза к показателям завершенного фагоцитоза при поглощении формазановых зерен нитросинего тетразолия, выраженного в процентах, определяли индекс восстанавливоющей способности нейтрофилов. Из результатовданного исследования следует, что индекс восстанавливающей способности нейтрофилов у наркозависимых больных почти в 2 раза превышает - уровень показателей контрольной группы. В ходе наблюдения выявлено, что наркотические препараты - стимулируют метаболическую активность микрофагов. Активизация фазы завершенности фагоцитоза протекает на фоне ослабления процессов поглощения и переваривания, что отражает нарушение механизмов антибактериальной системы фагоцитов.

При изучении адгезивной способности нейтрофильных гранулоцитов установлено продолжающееся снижение показателей на протяжении всего периода наблюдения больных в состоянии наркотической абстиненции. Анализ средних значений указывает на наличие отрицательных связей между фагоцитарной и адгезивной активностью гранулярных лейкоцитов -повышение фагоцитарной и снижение адгезивных свойств лейкоцитов у больных наркоманией. Данная закономерность особенно выражена на 5 и 7 сут наблюдения. Предполагается, что активные формы кислорода, образующиеся в процессе активации фагоцитоза, являются нейтрофильными медиаторами, обеспечивающие миграцию лейкоцитов в зону нарушенного гомеостаза (119,122). В то же время интенсивный синтез интермедиаторов при увеличении антигенной стимуляции в крови подавляет адгезивную способность лейкоцитов и увеличивает время пребывания их в кровеносной системе.

Таким образом, результаты динамических исследований свидетельствуют о продолжающихся нарушениях функционально-метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов, несмотря на проведенное комплексное лечение и клиническое улучшение стационарных больных.

В качестве сравнения нами проведены исследования функционально-метаболической активности микрофагов при алкогольной интоксикации. У этой категории больных показатели ФАН характеризуются волнообразным течением - существенным повышением на 1 и 3 сут и некоторым снижением в последующие сроки, хотя и с превышением результатов (в 1,5 раза) контрольных величин. Также обнаружена более четкая обратная зависимость между изменениями параметров адгезии .и. завершенности фагоцитоза по сравнению с больными наркоманией. Динамика снижения показателей НСТ имеет более равномерный характер. В показателях интенсивности процессов цитоморфологических преобразований нейтрофилов после завершения переваривания микробов отмечено стабильное повышение величин в состоянии как алкогольной, так и наркотической абстиненции, а клиническое выздоровление чаще опережает восстановление функции нейтрофилов.

Следовательно, разработанный нами способ определения завершенности фагоцитоза и этапов структурного обновления фагоцитов позволяет выявить интенсивность фагоцитарных реакций в циркулирующей крови и функциональную готовность нейтрофилов к пополнению прикраевого пула сосудистого русла для миграции в ткани с повышенной метаболической активностью. Полученные результаты свидетельствуют о высокой информативности данного способа для выявления вторичной недостаточности фагоцитоза.

Выявленная особенность функционирования нейтрофилов в условиях патологии - увеличение реактивности и скорости фагоцитарного процесса приводит к истощению энергетического ресурса микроцитов и делает фагоцитоз неэффективным. Вследствие чего функционально ослабленные фагоциты мало фагоцитируют и быстро переходят в стадию завершенности и «покоя».

Таким образом, нами выявлена новая форма фагоцитарной недостаточности нейтрофилов при патологии — неэффективной гиперактивности фагоцитарной реакции (в отличие от ныне существующей, при которой происходит подавление переваривающей активности и снижение показателей завершенного фагоцитоза). Причиной, по-видимому, является то, что в состоянии высокой степени вегето-соматических и психологических расстройств, под влиянием стимуляции нервных и гуморальных факторов в разгар синдрома отмены происходит нарушение биохимических механизмов в регуляции клеточного метаболизма фагоцитов. - .

Психоактивные вещества, способствуют появлению в клеточных мембранах токсических радикалов, которые инициируют образование перекисных соединений, которые, наряду с активизацией метаболических процессов, изменяют устойчивость нейтрофилов к повреждающим факторам. Вместе с те5м ускоряются дегенеративные процессы клеточных структур: разрыв оболочки и высвобождение внутриклеточных ферментов в окружающую среду {106,339}. Следует отметить, что повышение продуктов ПОЛ может быть одной из основных причин повреждения клеточной поверхности и нарушения процессов внутриклеточного метаболизма. Скорость образования и утилизация ПОЛ сбалансирована за счет регуляции их антиоксидантной защитной системы. Супероксиддисмутаза (СОД) обезвреживает супероксидный анион-радикал путем их дисмутации в перекись водорода и триплетный кислород. Разная степень торможения активности антиоксидантных ферментов создает условия для накопления Н2О2, которая сама является ингибитором СОД. Усиление ПОЛ приводит к формированию вторичной недостаточности фагоцитоза, компонентом которого является активизация фагоцитарной активности, ускорение завершенности фагоцитоза и снижение поглотительного потенциала нейтрофилов.

У больных с героиновой зависимостью в состоянии отмены употребления наркотиков наблюдаются патологические сдвиги ПОЛ и АОС, проявляющиеся в повышении уровня МДА и снижении активности СОД. Указанные нарушения объясняются срывом механизма окисления, а также истощением не только адаптационных, но и ряда компенсаторных возможностей антиокислительной защиты.

Замечено, что в разгар клинических проявлений синдрома отмены введения наркотикотических веществ, у пациентов увеличены процентные показатели агрегации и лизиса лейкоцитов. Повышение индекса лейкергии и лизиса при оптимальной продолжительности фагоцитарного процесса (до 30 мин) отмечается на 3 и 5 сут з аб о л св ан ия .гУ ста н о в л е но, что максимальная выраженность клинического проявления данного синдрома приходится на 2-3 сут, а ослабление — на 5-7 сут, что указывает на напряженность неспецифической защиты организма в этот период.

Анализируя данные можно отметить, что величина фагоцитарных критериев находится под многоуровневым контролем со стороны различных систем организма. Деффектность нейтрофильного фагоцитоза может явиться универсальным фактором патогенеза при многих заболеваниях человека.

Формирование наркотической зависимости в экспериментальных исследованиях при введении раствора морфина белым мышам, констатирует повышение интенсивности фагоцитоза в группе с наркотической интоксикацией. Показатели завершенности фагоцитоза достигали максимального уровня, как при ежедневном введении морфина, так и при его прекращении. Наибольшая стимуляция метаболической активности микрофагов отмечается в состоянии отмены, что связанно, по-видимому, с усилением центральных механизмов регуляции защитных систем. Наряду с увеличением напряженности ФАН в крови экспериментальных животных достоверно увеличивается число лейкоцитов и сегментоядерных нейтрофилов. Наличие антигенных раздражителей в крови экспериментальных животных стимулирует выработку лейкоцитов в красном костном мозге и повышает активность их в циркулирующей крови. Стимуляция функциональной активности нейтрофилов подтверждается увеличением НСТ-восстанавливающей способности фагоцитов. Процент поглотительной активности зерен формазана почти в 3-4 раза превышает показатель активности интактной группы. В сравнительном анализе данных фагоцитарных параметров (СПЗФ) и количеством НСТ-позитивных клеток выявлена положительная взаимосвязь. Наличие опиатов в крови вызывает резкое увеличение поглощения зерен красителей и ускорение процесса ч «■■ завершенности фагоцитоза. В то же время- замечено, что с повышением - ;; -интенсивности фагоцитарной реакции снижается 'количество поглощенных микробов-'одним нейтрофилом. В данном случае,. преобладает: негативная взаимосвязь между активностью нейтрофилов, вовлеченных в фагоцитарный процесс, и снижением индекса переваривания. Снижение резервных возможностей микроцитов у наркотизированных мышей характеризует подавление неспецифической резистентности организма в борьбе с бактериальной инфекцией.

В приведенном материале отмечаются разнонаправленные связи фагоцитарных величин с результатами реакции НСТ и адгезивностью нейтрофилов. По отношению к НСТ-восстанавливающей способности клеток, отражающей бактерицидную активность нейтрофилов, выявлена положительная взаимосвязь, а по отношению к показателям адгезивной способности, характеризующей готовность микрофагов к присоединению к прикраевому пулу сосудистой стенки - негативная связь. Количественные показатели адгезии в 1,5-2 раза ниже по сравнению с величинами интактной группы. Такая особенность гранулоцитов свидетельствует об увеличении времени пребывания фагоцитов в циркулирующей крови.

В данной работе нами впервые представляются доказательства существования феномена повторного фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов в системе кровеносного русла. Высокая активизация полиморфноядерных лейкоцитов к завершенности фагоцитоза, снижение адгезивности гранулоцитов при усилении сигналов, стимулирующих фагоцитоз в сывороточной системе крови, позволяют нейтрофилам, по-нашему мнению, пройти ряд этапов обновления клеточных структур в период стадии «созидательного покоя» и затем некоторому количеству наиболее активных клеток вновь вступить в реакцию повторного фагоцитоза.

На основании совокупности полученных данных выявлено, что у практически здоровых людей при 5 - и 30 — минутном фагоцитарном процессе явлений повторного фагоцитоза не наблюдается: При 2 - часовой длительности фагоцитарной реакции незначительное число сегментоядерных нейтрофилов оказывается вовлеченным в процесс повторного фагоцитоза. У больных героиновой наркоманией на 5 сут стационарного лечения явления повторного фагоцитоза в крови отмечаются даже при кратковременной стимуляции (5 мин) фагоцитирующих клеток фагоцитарным объектом. Однако наибольшая активность повторного фагоцитоза проявляется при 2 -часовом фагоцитарном процессе, при котором величина активности нейтрофилов у больных почти в 2 раза превышает уровень контрольной группы. При сравнении с другими группами, в частности, с группой больных с психическими расстройствами и больных в состоянии алкогольной интоксикации, данный феномен замечен только у больных алкоголизмом на 3 сут наблюдения. Полученные результаты указывают на повышение метаболических процессов в нейтрофилах при героиновой наркомании, приводящих к явлению повторного фагоцитоза. Усиление этих реакций отмечается на 3-5 сут поступления больных на стационарное лечение, что необходимо учитывать при назначении им комплексной терапии.

В экспериментальных исследованиях активность нейтрофилов, принимающих участие в повторном фагоцитозе, оказывается более выраженной, чем у людей. У интактных мышей при 2 часовом фагоцитарном процессе этот показатель более чем в 3 раза превышает показатель здоровых людей (доноров). Наиболее активны в этом отношении фагоцитарные клетки при хронической форме наркотической интоксикации. При хроническом введении алкоголя внутрь животным активность микроцитов к повторному фагоцитозу менее выражена.

Таким образом, сравнительная характеристика фагоцитарных параметров в экспериментальных исследованиях отражает тяжесть сдвигов неспецифических факторов иммунитета при наркотической интоксикации.

Влияние постоянного стресса на организм белых мышей также вызывает стимуляцию -фагоцитарных реакций, выявляя признаки повторного фагоцитоза. Удельный вес показателей выше при 30 - минутном, нежели при 2 — часовом, фагоцитарном процессе. Влияние острого (иммобилизационого) стресса вызывает гиперактивизацию лейкоцитов с высоким показателем повторного фагоцитоза, даже при кратковременном — 5 минутном взаимодействии нейтрофилов с объектом фагоцитоза. При 30 - минутной продолжительности фагоцитарной реакции этот показатель наиболее выражен и почти в 2 раза превышает уровень повторного фагоцитоза, отмеченный у людей в состоянии острого эмоционального напряжения.

Таким образом, проявление феномена повторного фагоцитоза нейтрофилов в циркулирующей крови, выявленное как в клинических, так и в экспериментальных исследованиях, свидетельствуют о высокой степени напряженности факторов неспецифического иммунитета. Высокая активизация процессов окислительного характера, происходящих в нейтрофилах, способствует тому, что полинуклеарные клетки после фазы созидательного покоя» вновь готовы приступить к выполнению своей основной функции - фагоцитированию агентов с чужеродной информацией с целью восстановления нарушенного антигенного баланса в крови. Дисфункция нейтрофилов в фагоцитарной реакции проявляется в виде снижения поглотительной активности нейтрофилов. Патогенетической основой данного деффекта фагоцитоза является инициация перекисного окисления липидов, приводящая к повреждению биологических мембран и катализирующий процесс завершенности фагоцитоза, а также снижение способности воспринимать внешние стимулы и опсонизированные объекты фагоцитоза. Представленный вид вторичной недостаточности нейтрофилов выявлен впервые.

В литературе последних лет накоплено достаточно материала о действии наркотических веществ на клетки иммунной системы, в частности на Т- и В-лимфоциты. Сообщений по .-> изучению иммунологических эффектов'*при стимуляции морфином иммунокомпетентных клеток in vitro немногочислены {Гамалея Н.Б., 1994, Вырупаев К.В., 2000.}. Диагностика хронической опийной интоксикации и ее осложнений по выявлению в крови антител к морфину был изучен в работе Гамалея Н.Б., 1992. Однако публикаций по изучению изменений функциональной активности сегментоядерных нейтрофилов при воздействии морфина in vitro нами не обнаружено. С этой целью мы провели ряд клинических (на больных наркоманией, алкоголизмом, в состоянии психо-эмоционального напряжения и донорах) и экспериментальных (при различных формах наркотической, алкогольной интоксикации, при стрессе и на интактных белых мышах) исследований о влиянии опиоидов на фагоцитарную активность полиморфноядерных лейкоцитов.

Материалы анализов свидетельствуют о резком угнетении функциональной активности нейтрофилов у здоровых лиц при введении раствора морфина гидрохлорида in vitro. Суммарные показатели завершенного фагоцитоза почти в 3 раза ниже, чем до введения морфина. У больных алкоголизмом процент переваривающей активности выше после введения препарата, а фагоцитарный показатель приближается к фоновым величинам со слабым проявлением повторного фагоцитоза. У больных героиновой наркоманией процент завершенности фагоцитоза достигает своего «плато» с максимальной выраженностью признаков повторного фагоцитоза. В экспериментальных исследованиях установлено, что при введении морфина in vitro в лейкоцитарно-микробную взвесь интактных животных отмечается резкое подавление фагоцитарной функции лейкоцитов с высоким процентом лизиса клеток. У мышей с алкогольной интоксикацией препарат вызывает усиление переваривающей и лизирующей активности микрофагов, а показатели приближаются к исходным величинам, с более выраженной, чем у больных алкоголизмом, активностью к повторному фагоцитозу. При наркотической интоксикации результаты по всем фагоцитарным критериям выше, чем; в > предыдущих группах. ■; ^ г « м л

В состоянии: длительного стресса морфин подавляет фагоцитарную -активность лейкоцитов, снижает функциональные резервы, в крови увеличивается число скученных и лизированных нейтрофилов.

Выявленные особенности функционирования полинуклеаров при воздействии морфина позволяют сделать предположение о том, что наркотические препараты, включая алкоголь, способны изменять свойства опиоидных рецепторов на поверхности иммунокомпетентных клеток, в том числе нейтрофилов периферической крови человека {255,276,298}. Морфин обладает сродством к мю-опиоидным рецепторам, и при его введении происходит изменение конформационного состояния опиатных рецепторов, таким образом, что при их блокаде происходит повышение уровня внутриклеточного цАМФ и усиление соответствующего метаболизма в нейтрофилах. Биохимический механизм осуществления эффектов опиоидов на мембрану клеток связан с угнетением активности аденилатциклазы (АД), приводящим к снижению уровня внутриклеточного цАМФ (циклического 3,5-аденозинмонофосфата). Прямым действием этих процессов является снижение активности цАМФ-зависимой протеинкиназы, в результате чего многие белки в клетке у интактных животных и у людей, не употребляющих наркотические вещества, остаются нефосфорилированными. При хронической наркотической интоксикации клетки крови становятся толерантными к морфину {Parker,1979; Carr et al.,1988}. Добавление опиатов приводит к значительному повышению активности АД и уровню цАМФ {Klee et al.,1984}.

Таким образом, разработан упрощенный метод выявления наличия опиатов в крови с помощью фагоцитарной реакции сегментоядерных нейтрофилов. В связи с мобильностью и высокой чувствительностью к воздействию различных веществ, нейтрофилы могут служить удобной моделью изучения механизмов влияния морфина и.- других • наркотических препаратов на организм. - " :

Как известно, при героиновой наркомании происходит выраженное изменение в состоянии специфического и неспецифической иммунитета, направленное на поддержание внутренней среды организма. В процессе развития иммунного ответа активируются факторы неспецифической защиты и в первую очередь фагоцитарная активность лейкоцитов, осуществляющих взаимосвязь между другими защитными и регулирующими системами организма. Избыточное возбуждение фагоцитов вызывает выработку большого количества активных метаболитов кислорода, которые могут вызвать нарушение функций иммунокомпетентных клеток, и формировать иммунодефицитное состояние {69}. С этой целью в комплекс лабораторных методов исследования мы включили изучение розеткообразующей способности лимфоцитов: СДЗ+, СД22+, розеткообразующую способность нейтрофилов, активность Т-хелперов и Т-супрессоров, а также содержание иммуноглобулинов класса: IgA, IgM, IgG и ЦИК. Полученные результаты свидетельствуют о выраженном снижении содержания Т-лимфоцитов (СДЗ+), Т-хелперов (СД4+) и особенно В-лимфоцитов (СД22+) и, напротив, увеличение содержания Т-супрессоров, ЦИК, ^ М и Эти различия у больных опийной наркоманией в состоянии воздержания от употребления ПАВ носят универсальный характер. Мы попытались выявить взаимосвязи между фагоцитарными параметрами и клеточно-гуморальными факторами защиты.

В проведенном исследовании установлено, что количество Т-лимфоцитов негативно связано с суммарным показателем завершенности фагоцитоза как при ФАН1, так и при ФАН2. Причем при ФАН1 эта закономерность более выражена, что свидетельствует о снижении поглотительной активности и выраженной способности нейтрофилов к завершению реакции фагоцитоза. Причиной недостаточности в функционировании лимфоцитарного и микрофагального звена иммунитета, вероятно, является то, что увеличение потребления наркотиков снижает -активность фермента супероксиддисмутазы, нейтрализующей действие супероксидов в фагоцитах. Одновременное увеличение активности фермента аденилатциклазы приводит .к снижению реакции розеткообразования Т-лимфоцитов и нарушению клеточного гомеостаза. В динамике проведенного исследования эта взаимосвязь наиболее выражена на 1 и 2 сут наблюдения. На 3 и 5 сут выявлен дисбаланс между способностью к розеткообразованию лимфоцитов и к завершенности фагоцитоза нейтрофилов. Между показателями Т-хелперной функции лимфоцитов и фагоцитарными критериями отмечена положительная взаимосвязь, в отношении Т-супрессорной популяции лимфоцитов — отрицательная. Соотношение иммунорегуляторного индекса СД4+/СД8+ на протяжении начального и конечного сроками наблюдения больных остается стабильно сниженной в сравнении с группой здоровых лиц. Повышение Т-супрессорной и снижение Т-хелперной активности лимфоцитов у больных опийной наркоманией в процессе адаптации к отмене наркотиков, свидетельствует о снижении иммунологической реактивности и напряженности аутоиммунных процессов в организме. Установлено особенно резкое угнетение функции В-лимфоцитов у наркозависимых лиц со слабой способностью к нормализации в процессе проведенного лечения. Причиной снижения способности лимфоцитов к розеткообразованию, вероятно, является то, что опиаты увеличивают активность АД и повышают уровень внутриклеточного цАМФ, оказывающего подавляющее влияние на синтез рецепторов для эритроцитов барана или повышенной потери их с поверхности лимфоцита.

Снижение экспрессии СД22+ - детерминант может служить признаком тяжести заболевания. Между розеткообразующей способностью нейтрофилов и интенсивностью в фазе завершения фагоцитарной реакции наблюдается обратная зависимость: уменьшение одного из показателей приводит к накоплению второго и наоборот. - ■:: ч 1. - ,, ■ I ■.

Таким образом, снижение количества В-лимфоцитов свидетельствует о тяжести течения болезни, а повышение активности к розеткообразованию данных клеток — о снижении остроты патологического процесса. В основе супрессирующего влияния опиатов на иммунокомпетентные клетки лежит уменьшение плотности опиоидных рецепторов на поверхности Т- и В-лимфоцитов в результате существенной перестройки мембранных структур под влиянием хронической интоксикации опиатами {296,300}.

Одновременно с понижением числа Т- и В-лимфоцитов у пациентов с хронической опийной интоксикацией отмечается дисбаланс в пуле основных классов иммуноглобулинов. Между содержанием 1§0 и СПЗФ отмечается слабая негативная связь. Повышение уровня 1§М в 3,5 раза в период острой фазы синдрома лишения положительно коррелирует с показателями фагоцитоза. На 5 и 7 сут эта закономерность не выявляется, а на 9 сут оказывается даже негативной. Содержание 1§А в развернутую стадию заболеванияпервые и до конца исследования имеет тенденцию к умеренному снижению показателей. При выявлении взаимосвязи с критериями ФАН выраженность ее пропорциональна величинам предыдущих классов иммуноглобулинов.

Полученные данные свидетельствуют о напряжении гуморального иммунитета в первые сутки исследования. Индукция реакций антителообразования является, по всей вероятности, достаточно необходимой, поскольку хроническое поступление опия и его производных запускает иммунный ответ, конечным итогом которого является связывание антигена с антителом и элиминация его из организма. Избыточное антителообразование приводит к повышению уровня циркулирующих иммунных комплексов и увеличению активности нейтрофилов к фагоцитозу. Реакция нейтрофила, направленная на элиминацию избытка иммунных комплексов, зависит во многом от силы и времени антигенного воздействия на иммунную систему и исходного уровня функциональной активности ¡ клеток. Между содержанием ЦИК и СПЗФ выявлена/прямая взаимосвязь. Ослабление фагоцитарной функции нейтрофилов способствует циркуляции иммунных комплексов в крови и оседанию в тканях в повешенной концентрации, вызывающей повреждение тканей. Наряду с этим, длительная персистенция в организме иммунных комплексов у больных наркоманией приводит к истощению функционального резерва гранулоцитов, а вследствие гиперактивации и скорой гибели клеток, формированию нейтропении. Оценку функционального состояния лейкоцитов и степень энзиматических дефектов клеточного иммунитета, ведущих к дисфагоцитозу, позволяет выявить заимосвязь НСТ-теста с фагоцитарной реакцией нейтрофильных гранулоцитов и содержанием ЦИК в сыворотке крови. В представленном материале выявлены низкие относительные показатели и высокие индексы НСТ, которые имеют позитивную связь с содержанием ЦИК и негативную связь с суммарными показателями завершенности фагоцитоза.

У больных в состоянии острой наркотической интоксикации отмечается высокая реактивность зернистых лейкоцитов при 5 - минутном фагоцитарном процессе, показатели завершенности фагоцитоза выше аналогичных показателей больных в состоянии воздержания. При 30 — минутном фагоцитарном процессе величина суммарных показателей снижена, хотя и сохраняется на уровне двукратного увеличения фона. Представленные данные свидетельствуют о том, что наркотические препараты вызывают изменение нейрогуморальных регуляторных систем организма, приводящих к увеличению выброса клеток защитной системы — лейкоцитов в кровеносное русло, и стимулируют метаболические реакции в фагоцитарных клетках. У больных с острым наркотическим отравлением в процессе проведения комплексного лечения супрессия розеткообразующей способности иммунекомпетентных клеток не столь выражена, как в предыдущей группе: •, .:•: выявлена прямая позитивная связьСПЗФ ^«^содержанием* 1§М :;и. повышение продукции антител сопровождается(повышением-.уровня *ЦИК. В результате накопления нерастворимых иммунных комплексов в ; крови стимулируется кислородзависимый путь метаболизма нейтрофилов, приводя их к гиперактивности как при ФАН1, так и при ФАН2.

В качестве группы сравнения иммунологических показателей были обследованы больные алкоголизмом. Свой выбор мы оправдывали тем, что в патогенезе алкоголизма существуют опиоидные механизмы развития фармакологического эффекта этанола. Результаты полученного материала выявили, что для больных алкоголизмом в отличие от больных наркоманией характерно менее выраженное угнетение способности лимфоцитов к розеткообразованию. Выявлена негативная взаимосвязь между показателями биоцидности нейтрофилов и количеством Т-лимфоцитов. Эта зависимость более выражена в условиях ФАН1, нежели при более длительном фагоцитарном процессе (ФАН2), что подтверждает высокую реактивность сегментоядерных нейтрофилов при алкогольной и наркотической интоксикации. Снижение количественного состава В-лимфоцитов не столь значительно по сравнению с таковым у наркозависимых больных. Вместе с тем, отмечается умеренное повышение количества всех классов иммуноглобулинов. Избыточное антителообразование приводит к повышению уровня ЦИК. Уровень иммунных комплексов в крови данной категории больных значительно выше, чем в предыдущей группе, что по всей вероятности, является следствием длительности антигенной стимуляции недокисленных продуктов этанола в крови. Нарушение элиминации ЦИК приводит к увеличению активности нейтрофилов к фагоцитозу. В свою очередь, длительная персистенция в организме иммунных комплексов приводит к истощению фагоцитарного резерва. Несостоятельность фагоцитоза способствует циркуляции ИК в повышенном количестве даже в период относительного клинического благополучия. Повышение ЦИК на фоне резкого снижения свободного : комплемента - в сыворотке крови больных предрасполагает к развитию иммунокомплексной патологии.

Анализ факторов взаимоотношений фагоцитарных показателей с биохимическими параметрами свидетельствует о преобладании прямолинейной связи с ПОЛ. Уровень продуктов ПОЛ позитивно коррелирует со СПЗФ. При активации ПОЛ выявляется усиление завершенности фагоцитоза, снижение показателей НСТ и адгезивности нейтрофилов. Выявленная корреляционная взаимосвязь свидетельствует о тяжести абстинентного состояния и снижении защитно-приспособительных реакций в этот период. Анализ патологических сдвигов ПОЛ у больных в начальные сроки исследования дает основание считать, что при проведении традиционного лечения не устраняются нарушения механизмов окисления, сочетающиеся со снижением компенсаторных возможностей АОС и являющиеся следствием более длительной наркотической интоксикации. Изучение данных показателей может быть использовано как дополнительный диагностический критерий при выявлении тяжести наркотической интоксикации и основание назначения антиоксидантной терапии при комплексном лечении больных наркоманией.

Функционирование иммунной системы зависит от влияния и выраженности психоэмоциональных стрессовых факторов, Психологический статус играет решающую роль в устойчивости организма к стрессу. Современное представление о влиянии стресса на поведение, эндокринную систему, вегетативную часть нервной системы, определяет широту охвата исследуемых аспектов патогенеза его различных форм. При этом закономерно возрастает интерес к изучению иммунологических аспектов при длительном и сильном воздействии стрессов на организм человека. Отечественными и зарубежными исследователями {78,217,338} отмечается выраженное угнетение клеточного иммунитета и неспецифической резистентности организма,'*,что, возможно, является одной из причин, срыва адаптации, . > . повышениям риска:- инфекционных, аутоиммунных и- онкологических , заболеваний. ; , ;

При изучении влияния психоэмоционального напряжения на иммунологические показатели студентов в период сдачи экзаменов во время летней экзаменационной сессии установлено увеличение интенсивности фагоцитарного процесса в 2,5 раза по сравнению с контрольной группой. Вместе с тем, отмечается увеличение числа лейкоцитов в 1мкл. крови, абсолютного и относительного количества сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови. Повышение тонуса симпатической нервной системы возбуждает альфа-адренорецепторы, локализованные в органах депо, а также стимулирует красный костный мозг, обеспечивая ускорение миграции лейкоцитов в кровь.

Из приведенных материалов выявлено, что показатели клеточного и гуморального звена иммунитета изменяются незначительно по сравнению с факторами неспецифической резистентности.' Активность фагоцитарных критериев в 2 раза превышает уровень котрольной группы. Это можно объяснить тем, что лейкоциты, циркулирующие в крови, являются метаболически активными клетками и способны приспосабливаться к условиям резко возрастающей функциональной активности, изменяя уровень метаболизма.

В ходе проведенных исследований выявлено, что наркотическая зависимость, алкоголизм и стресс проявляются выраженным усилением окислительного метаболизма в клетках, стимулирующим фагоцитарный процесс с образованием токсичных метаболитов кислорода, влияющим на механизмы клеточного распознавания антигенов и резистентности самих нейтрофилов. Недостаточность фагоцитарных систем у человека и животных клинически проявляется в виде инфекционно-воспалительных процессов во внутренних органах. Приведенные сведения определяют актуальность всестороннего изучения приобретенных дефектов фагоцитоза, определяют целесообразность создания новых способов исследования функциональной активности нейтрофилов и разработки способов их патогенетической профилактики.

Таким образом, на основании комплексного изучения фагоцитарной активности и внутриклеточного метаболизма полиморфноядерных лейкоцитов у больных опийной наркоманией нами установлено, что опийная наркотическая зависимость сопровождается выраженными изменениями в единой интегральной клеточно-гуморальной и неспецифической системе защиты организма. Наркотические вещества опийной природы оказывают в основном супрессирующее действие на иммунокомпетентные клетки. Однако нарушение механизмов естественной резистентности имеет свои особенности. Комплексное исследование функциональной активности нейтрофилов расширяет возможности патогенетической трактовки клинических проявлений наркомании и помогает разработке дополнительных способов коррекции проводимых терапевтических мероприятий. У данной категории больных имеет место развитие патологического процесса с активизацией симпато-адреналовой и гипофизарно-надпочечниковой систем с запуском проферментно-ферментного комплекса каскада комплемента, опсонинов, иммунокомпетентных клеток, окислением ЫАХ)РН до ЫАГ)Р. Дезорганизация этих систем, которые находятся в тесной взаимосвязи с центральной нервной системой, ведут к нарушению клеточного и гуморального гомеостаза и усугубляют процесс течения наркомании.

Рис. 18

Характеристика окислительно-восстановительных реакций в полиморфноядерных лейкоцитах в процессе фагоцитоза

Кислородзависимый механизм (гликогенолиз)I аэробное окисление глюкозы

В клеточных мембранах

Активация оксидаз

Глюкоза

-> (эндогенный гликоген) -«

Окисление ненасыщенных жирных кислот, образование перекиси водорода и свободных радикалов.

АТФ I

Стимуляция фагоцитоза

Кислороднезависимый механизм гликолиз)-анаэробное окисление глюкозы

В мембранах лизосом

Активация гидролаз

Накопление молочной кислот,

Понижение рН среды

Рис. 19

Адаптационные перестройки в механизмах кислороднезависимого киллинга микробов в сегментоядерных нейтрофилах крови

1. Образование фаголизосом - слияние фагосомы (вакуоль, внутри которых находятся внедрившиеся микроорганизмы) с лизосомами (гранулами цитоплазмы, содержащие пищеварительные ферменты);

2. Активация гидролаз: миелопероксидазы, лактоферрина, эластазы, К.Ф., Щ.Ф., лизоцима, катионных белков.

3. Накопление молочной кислоты, образовавшейся в результате гликолиза;

4. Увеличение кислой среды вакуоли - понижение рН до 3

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Каримова, Равшания, Душанбе

1. Авакян Г.Н. с соавт. Поражение периферического нейромоторного аппарата в ЦНС при хроническом алкоголизме / Г.Н. Авакян // Вопросы наркологии, 1990. № 4. - С.24 - 29.

2. Агаджанян H.A. Фомирование оптимального функционального уровня неспецифической резистентнности в период адаптации студентов к условиям вуза / H.A. Агаджанян, Т.В. Попова, М.Ф. Сауткин // Физиология человека — 1994. — 360 с.

3. Адаменко Р.П. Роль адгезии клеток в рецепторных механизмах взаимодействия поли- и мононуклеарных фагоцитов крови человека / Р.П. Адаменко // Иммунология, 1995. №4. - С. 29-31.

4. Акперов Э.К. Состояние факторов неспецифической иммунологической резистентности у лиц, употребляющих опий и героин: автореф. дис. . канд.мед.наук. / Э.К.Акперов; Астана, 2005.- 20 с.

5. Алексеева Д.И. Иммунологические расстройства и их коррекция у больных хроническим алкоголизмом: автореф. дис. . канд.мед.наук. / Д.И.Алексеева М.,' 2003.- 20 с.

6. Общность патогенетических механизмов алкоголизма и наркоманий, и пути поиска средств лечения этих заболеваний / И.П. Анохина и др. // Фармакология, и токсикология. 1990. - Т. 53., № 4. - С. 4-9.

7. Анохин П.К. Биология и нейрофизиология условного рефлекса / П.К.Анохин. М.; Медицина. - 1998.- 402 с.

8. Анохина И.П. Биологические основы индивидуальной чувствительности к психоактивным веществам И.П. Анохина // Материалы, науч. практ. конф. Суздаль, 2001.- С. 9.

9. Архипов Г.С. Основные направления психонейроиммунологии / Г.С. Архипов и др.// Иммунология. 1990. - № 5. - С. 7 - 9.

10. Арушанян Э.Б. Структурные основы механизмов гипоталамической регуляции эндокринных функций / Э.Б. Арушанян // Успехи физиологических, наук. 1996. - Т. 27. - С. 3-57.

11. Ашмарин И.П. Нейрохимия / И.П.Ашмарин, П.В. Стукалов М.; Ин-т биомед. хим. РАМН, 1996 - 470 с.

12. Бакулев М.М К вопросу о реактивности циркулирующих нейтрофилов периферической крови человека / М.М. Бакулев, Р.З. Зурнаева // Бюл. эксперимент, биол. и мед. 1992. - Т. 114, № 11. - С. 542 - 544.

13. Индукция аутоантител к серотонину и катехоламинам у хронически морфинизированных крыс с проявлением абстинентного синдрома Л.А.Башарова и др. // Бюллетень эксперимент, биол. и мед. — 1993. -Т.115.-С. 469-471

14. Бахов Н.И Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей / Н.И. Бахов, Л.З.Александрова, В.Н.Титов // Архив патологии. 1991. - № 9. -С. 3-12.

15. Бобров А.Е. // Проблемы, эндокринологии. — 1995. №2. - С. 22 - 25.

16. Божко В.Г. Антимикробный потенциал фагоцитов на начальных этапах экспериментальной мелоидозной инфекции: автореф. дис. канд.мед.наук / В.Г.Божко Волгоград, 1994. - 24 с.

17. Болдырев A.A. Биологические мембраны и транспорт ионов / A.A. Болдырев.-М.; 1985. 207 с.

18. Введение в биомембраналогию / A.A. Болдырев и др. — М.; 1990. 208 с.

19. Борисова Е.В. Механизмы адаптации к развитию зависимости от наркотиков и стрессорным воздействиям / Е.В. Борисова // материалы. 1 съезда физиологов СНГ. Сочи, 2005. - Т.1. - С. 178.

20. Бутаков A.A. // Иммунология. 1991. - № 5. - С.71 - 72.

21. Стресс и иммунитет / Г.М. Бутенко и др. // Между нар. мед. журнал.-2001,-Т. 7.- С. 91-94.

22. Вавренчук В.В. Аутоиммунные процессы, особенности висцеральной патологии и общей реактивности у наркозависимых больных: автореф. дис . канд. мед. наук /В.В.Вавренчук. Москва, 2005. — 20 с.

23. Векшина H.A. Биологические механизмы различного отношения крыс к этанолу / H.A. Векшина, Н.Б.Гамлея, A.C. Семенов // Вопросы наркологии.- 1989. № 1, - С. 8-11.

24. Власова С.Н. Активность глютатионзависимых ферментов при хронических заболеваниях печени у детей / С.Н. Власова, E.H. Шабунина, И.А. Переслегина // Лабораторное дело. 1990. - № 8. - С. 19-22.

25. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольых экстрактах крови / И.А. Волчегорский и др. // Вопросы мед. химии. 1989. - Т.35, №1.- С. 127- 131.

26. Вырупаев К.В. Особенности иммунитета и гемостаза у больных опийной наркомании: автореф. дис. канд.мед.наук / К.В.Вырупаев Чита, 2000. -20 с.

27. Гаврилов В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мешкурадная // Лабораторное дело. 1983. - № 3. С. 33 - 36.

28. Гаврилова Е.А. Стресс-индуцированные нарушения иммунной функции и их психокоррекция / Е.А. Гаврилова, Л.Ф. Шабанова // Физиология человека. 1998. - Т.28, № 1. - С. 123-130.

29. К вопросу о механизмах участия иммунной системы в патогенезе опийной зависимости / Н.Б. Гамалея и др. // Вопросы наркологии. -1992.- №3-4.- С.113-115.

30. Гамалея Н.Б. Иммунологическая характеристика и иммунодиагностика * I опийной наркомании: автореф. дис.д-ра мед. наук / Н.Б. Гамалея. М.,-' •> 1992.-40 с.

31. Гамалея Н.Б. Показатели клеточного и гуморального иммунитета у больных героиновой наркоманией и их коррекция иммуномодулятором тактивином / Н.Б. Гамалея // Вопросы наркологии. 2001. - №.4. — С.50 - 59.

32. Гамалея Н.Б. Диагностика хронической опийной интоксикации и ее осложнений, по выявлению в крови антител к морфину / Н.Б. Гамалея // Вопросы наркологии. 1994.- №2.- С. 45-53.

33. Галанкин И.В. Невоспалительная форма антибактериального реагирования нейтрофильных лейкоцитов / И.В. Галанкин, В.П. Сапрыкин // Архив патологии. — 1997. № 4. - С. 13-15.

34. Голдберг Е.Д. Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза / Е.Д. Голдберг, A.M. Дыгай, И.А. Хлустов Томск: изд-во Томск, ун-та, 1997. — 218 с.

35. Гомазков O.A. Нейропептиды и ростовые факторы мозга / O.A. Гомазков М.; Медицина, 2002. - 239 с.

36. Гончаренко М.С. Метод определения перекисного окисления липидов / М.С. Гончаренко, A.M. Латипова // Лабораторное дело. 1985. - № 1. -С. 60-61.

37. Иерархические взаимоотношения между органами гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (ГТАС) при воспалении / В.В. Гриневич и др. // Успехи физиол. наук. 1999. - № 4. - С. 50-66.

38. Громов Л.А. Нейропептиды / Л.А. Громов // Киев; Здоров'я. 1992. - С. 246. ' - Г.

39. Гулин A.B. Особенности психофизиологических показателей организма' студентов высшего учебного заведения в процессе обучения / A.B. Гулин, Д.В. Красичков, Р.В. Левашов // Вестник Авиценны. — Душанбе, 2007. -№4.- С. 91-97.

40. Гулямов М.Г. Наркомания / М.Г. Гулямов, Б.С. Айденьдяев Душанбе: Адиб.- 1996.- 313 с.

41. Гундашева Д. Стресс, опиоидные гормоны и иммунитет / Д. Гундашева // Ветеринарная, медицина .- 1996. № 3. - С. 195-198.

42. Гусев С.А. Особенности окислительного метаболизма нейтрофилов крови у больных острым миелобластным лейкозом / С.А. Гусев // Архив патологии. 1990. - №3. - С. 12 - 14.

43. Дмитриева И.Г. Особенности клеточного и гуморального иммунитета у больных опийной и эфедроновой наркоманией / И.Г. Дмитриева, В.О. Найденова, C.B. Чуканов // Вопросы наркологии. 1994. - №2. - С.54-57.

44. Долгина E.H. Механизмы цитокин-индуцированной активации фагоцитов / E.H. Долгина, Н.В. Долгова, Ю.А. Косикова // Russian Journal of immunology. -1999.- Vol. 4.- Supple. 1.

45. Долгушин И.И Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин М.; Медицина. - 2001. - 378 с.

46. Долгушин И.И. Влияние иммуностимулирующих нейтрофилокинов на развитие оксидантного стресса у мышей / И.И. Долгушин, A.B. Власов, A.B. Зурочка // материалы науч.-практ. конф. Челябинск, 1992. - С. 29.

47. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Дранник -М:, 2003. 247 с.

48. Дроздов А.З. Активность некоторых ферментов метаболизма катехоламинов в мозге крыс с различным отношением к потреблению этанола 1 : у их потомства / А.З. Дроздов, H.A. Христолюбова, И.П. Анохина. //Вопросы наркологии. — 1990. № 3. - С. 14-17.

49. Дунаевский В.В. Наркомании и токсикомании / В.В. Дунаевский, В.Д. Стяжкин М.; Медицина. - 1990. - 230 с.

50. Евсеев В.А. Стресс в механизмах развития вторичных иммунодефицитных состояний / В.А. Евсеев, C.B. Магаева // Вестник АМН СССР.- 1985.- №8.- С. 18-23.

51. Евсеев В.А. Иммунологические парадоксы алкоголизма перспективы иммунотерапии/В.А. Евсеев // Иммунология. — 1990.-№2-С.4-8.

52. Егорова Г.А. Особенности неспецифических адаптационных реакций ииммунного статуса у студентов в процессе адаптации в условияхобучения в ВУЗе: автореф. дис.канд. мед. наук / Г.А. Егорова — Москва, 2007. 22 с.

53. Наркомания. Нейропептид-морфиновые рецепторы / C.B. Зайцев и др. -М; Изд-во Моск. ун-та.- 1993. С. 68-69.

54. Зайцев Т. Сравнительная оценка модулируемых на животных алкогольных состояний и соответствующей патологией человека / Т. Зайцев // материалы межд. науч.-практ. конф. Суздаль, 2006.- С. 61.

55. Зайченко М.И. Исследование проявлений импульсивности у крыс / М.И. Зайченко // сб. науч. ст. II съезда физиологов СНГ. Кишинев, 2008. -С.52

56. Изменение вегетативного статуса студентов на эмоционально-значимых этапах учебного процесса / Н.В. Зарипов и др. // сб.науч. ст. I съезда физиологов СНГ.- Сочи, 2005.- С. 275.

57. Зозуля А.А Опиоиды и иммунитет / A.A. Зозуля, С.Ф. Пшеничкин // Итоги науки и техники.- Иммунология. М., 1990. - Т. 25. - С. 48-121.

58. Зурнаджи Ю.Н. Эндокринный гипоталамус / Ю.Н. Зурнаджи // Архив патологии. 1991. - № 1. - С. 3-8.

59. Иванова М.Р. Состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных вирусным гепатитом В: автореф. дис. канд. мед. наук / М.Р. Иванова. Нальчик, 1996. — 20 с.

60. Исаева В.Г. Постстрессовые состояния и коммуникативные нарушения иммунитета и крови / В.Г. Исаева // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 2000. № 4. — С. 9 — 11.

61. Исометдинов А.И. Новое о формах адаптации, стресса и здоровья / А.П. Исометдинов // Адаптация, стресс, здоровье: материалы 49-й науч.-практ. конф-Душанбе, 2001. С. 64-68.

62. Йегер JI. Клиническая иммунология и аллергология / JI. Йегер М.; Медицина. - 1990. - Т. 1. - 196 с.

63. Каниболоцкий A.A. Морфология органов иммунной системы при наркомании / A.A. Каниболоцкий // Архив патологии. 2002. - Т. 64, № 4.- С. 21-25.

64. Каримова Р. Переваривающая активность сегментоядерных нейтрофилов крови животных и человека в экстремальных состояниях: автореф. дис. канд. биол. наук / Р. Каримова. Душанбе, 2000. - 22 с.

65. Карпищенко А.И. Медицинские лабораторные технологии. Справочник-интермедика / А.И. Карпищенко. С.Петербург. - 2002. - Том 1. - С.288.

66. Кеворков H.H. Гормональная регуляция иммунного ответа: автореф. дис. д-ра мед. наук / H.H. Кеварков Пермь, 1995. - 40 с.

67. Активация и эффективные функции лимфоцитов при окислительном стрессе / O.A. Кизенко и др. // сб. науч. тр.1 съезда иммунологов России. Новосибирск, 1992. — С. 296.

68. Кипяткин Е.А. Нейрофизиология и нейрохимия наркотической зависимости / Е.А. Кипяткин // Успехи современной биологии. 1990. -Т. 109, Вып.1.-С. 130-145. ^

69. Состояние лизосомального аппарата лимфоцитов периферической крови у больных опийной наркоманией с различной продолжительностью заболевания / Т.К. Климентьева и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - №8. - С.41

70. Климова С.Н. Особенности клеточного и гуморального иммунитета у больных опийной и эфедроновой наркоманией / С.Н. Климова, Л.И. Ульянова, Н.Б.Гамалея // Вопросы наркологии. 1994. - № 2. - С. 54-57.

71. Клюбин И.В. Изучение роли Н202 в функциональном ответе макрофагов: автореф. дис. канд. биол. наук / И.В. Клюбин СПб, 1996. - 20 с.

72. Коган В.Е. Механизм структурно-функциональной модификации биомембран при перекисном окислении липидов: автореф. дис. д-ра мед. наук / В.Е. Коган. Москва, 1981. - 40 с.

73. Колесников О.JI. Влияние неспецифической иммуностимуляции на стресс-реактивность и выбор адаптационной стратегии организма: автореф. дис. д-ра мед. наук / О.Л. Колесников. — Моаква, 1998. 36 с.

74. Кондрашова М.Н. Защита от стресса на уровне митохондрий / М.Н. Кондрашова, Е.В. Григоренко. Пущино; Медицина, 1981. - 286 с.

75. Оценка индивидуальной чувствительности крыс линии Вистар к формированию зависимости к морфину / М.А. Константинопольский и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 1992. Т.55.- №2.- С. 9-11.

76. КорневаЕ.А. Иммунофизиология /Е.А. Корнева // Сиб. наука. 1995.- С. 240.

77. Коробейникова Э.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой / Э.Н. Коробейникова // Лабораторное дело. 1989. - №.7. - С.8 - 10.

78. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк и др. // Лабораторное дело. 1988. - № 1. - С. 16 - 19.

79. Некоторые биохимические показатели больных героиновой зависимостью в период отмены наркотика / Л.И. Корытов и др. // сб.науч. трудов I съезда физиологов СНГ. — Сочи, 2005. Т.2. - С. 183.

80. Кост Н.В. Влияние морфина на уровень цАМФ лимфоцитов / Н.В. Кост, A.A. Зозуля // Фармакология, и токсикология. 1983. - № 2. - С. 44 - 47.

81. Костюкова Ю.М. Фагоциты периферической крови человека как адекватная система для исследований в области фармакологии и иммунологии / Ю.М. Костюкова Ю.М., О.Р. Асеева, В.В. Васильев. // сб.науч. тр. 1 съезда иммунол. России. Новосибирск, 1992. - С. 192.

82. Кошкина Е.А. Распространенность употребления наркотиков и других психоактивных веществ в России на современном этапе / Е.А. Кошкина

83. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. -№4.- С. 15-19.

84. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы / Г.Н. Крыжановский. М.; Медицина, 1997. - 352 с.

85. Развитие иммунных нарушений при интенсивных физических нагрузках / О.Т. Кудаева и др. // Russ. J. Immunol, 1999. № 4. - P. 1-34.

86. Кузнецова Н.И. Биологические и медицинские аспекты алкоголизма / Н.И. Кузнецова. М.; Медицина. - 1984. - С. 101-112.

87. Кузнецова Н.И. Итоги и перспективы иммунологического изучения хронического алкоголизма / Н.И. Кузнецова // Биологические и медицинские, аспекты алкоголизма. Москва, 1984.- С. 101-112.

88. Кузнецов В.Ф. Патофизиология воспалительного процесса / В.Ф. Кузнецов. Киров: Здоровья, 1990. - С. 30.

89. Кузнецов В.Ф. Патофизиология реактивного нейтрофила в системе клеточно-гуморальных взаимодействий: автореф. дис. д-ра мед.наук / В.Ф. Кузнецов. Челябинск, 1995. - 40 с.

90. Кулацкий Ю.М. Фагоциты периферической крови человека как адекватная система для исследований в области фармакологии и иммунологии /Ю.М. Кулацкий, О.Г. Асеева, В.В. Васильев // сб. науч. тр. I съезда иммунологов России. Новосибирск, 1992. - С.364 - 365.

91. Кулмуканова К.К. Изучение реакции лейкергии антигенами мозга у больных с опийной наркоманией / К.К. Кулмуканова // Астана медициналык журналы. 2001. - № 1. — С. 83 — 86.

92. Изменение метаболизма клеточных рецепторов при остром эмоциональном напряжении / А.Я.Кульберг и др. // Иммунология. — 1989. №4. - С. 60-63.

93. Куправа М.В. Изменение состояния фагоцитоза при адаптации к острой гипоксии в условиях измененной газовой среды и охлаждения: автореф. дис. канд. мед. наук. / М.В. Куправа. СПб, 1997. - 20 с.

94. Лангуа К.Ш. Морфологические и гистохимические изменения в головном мозге при экспериментальной морфиновой интоксикации / К.Ш. Лангуа. -Тбилиси, 1987. С. 32-92.

95. Лебедев К.Н. Иммунограмма в клинической практике / К.Н. Лебедев, И.Д. Понякина. М.; Медицина. - 1990. - С. 224.

96. Динамика биохимических индукторов стресс реакции при различной тактике хирургического лечения больных сочетанной травмой черепа и нижних конечностей / Л.Л.Лебедев и др. // Вопросы медицинской химии. - 1999. - № 6. - С.495 - 500.

97. Ледванов Т.Ю. Изменение электрофоретической 1 подвижности и функциональной активности лимфоцитов крови у больных опийной наркоманией / Т.Ю. Ледванов, М.Ю. Ледванов,, В.В. Фирстова // Вопросы наркологии. 1998. - № 3. - С. 71 - 76.

98. Липатова В.Г. Влияние эндотоксина на окислительный метаболизм ПМЯЛ / В.Г. Липатова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1991 - № 4 - С.404- 406.

99. Лишманов Ю.Б. Опиоидные нейропептиды, стресс и адаптационная защита сердца / Ю.Б. Лишманов, Л.Н. Маслов; Томск: изд-во Том. ун-та. -1994.- 301 с.

100. Ломоносова Е.Е. Механизм антиоксидантной защиты печени крыс при . действии ароматических аминов / Е.Е. Ломоносова, А.Т. Пикулев, В.П.

101. Курченко // Биохимия. 1992,- № 57 (7). - С.1077 1082.

102. Лукачер Н.Г. Иммунный статус у больных опийной наркоманией / Н.Г. Лукачер, И.Д. Понякина, Н.К. Баклов // Вопросы наркологии. — 1989. -№ 3. С. 34.

103. Лукачер Н.Г. Клинико-иммунологические корреляции при опийном абстинентном синдроме / Л.Г. Лукачер, И.Д. Понякина, Н.Б. Ласкова // Вопросы наркологии. 1990.- №3.- С. 26-30.

104. Лукашин Н.К. Метаболизм глюкозы в головном мозге крыс при хронической алкогольной интоксикации / Н.К. Лукашин // Вопросы наркологии. 1991. - № 1. - С. 6-8.

105. Спектрофотометрическое определение конечных продуктов перекисного окисления липидов / Е.И. Львовская и др. // Вопросы медицинской химии. 1991. - № 4. - С. 92 - 93.

106. МазингЮ.А. Нейтрофильные гранулоциты и.системы защиты.организма*

107. Ю.А. Мазинг // Архив патологии. 1991. - № 9. -, С. 70-72. ■ - • , и

108. Мазинг Ю.А. Морфофункциональные основы антимикробной активности фагоцитов: автореф. дис. д-ра биол.наук /Ю.А. Мазинг-М.1995.-40 с.

109. Содержание противовоспалительных цитокинов интерлейкина-2, ИЛ-8 и растворимого рецептора ИЛ-2 в крови у больных с ИБС различных вариантов / В.И. Мазуров и др. . // Терапевтический архив. -2001.- № 12.- С. 28.

110. Мазурчик Н.В. Особенности поражения печени у героиновых наркоманов: автореф. дис. канд. мед. наук / Н.В. Мазурчик М., 2003.-20 с.

111. Макарова С.Е. Лекарственная профилактика посттравматических стрессовых расстройств / С.Е. Макарова // материалы, межд. конф. — Суздаль, 2001.- С. 95.

112. Мансуров K.K. Ультразвуковые изменения митохондрий гепатоцитов крыс при острой этаноловой интоксикации / К.К. Мансуров // сб. науч.ст. 1-го съезда иммунол. и аллергол. Душанбе, 1991. — С. 93-94.

113. Маньковская И.В. Нейроэндокринные нарушения при психических расстройствах, вызванных злоупотреблением ПАВ: автореф. дис. канд. мед. наук / И.В. Маньковская. М, 1998. - 20 с.

114. Маянский Д.Н. Взаимодействие лейкоцитов с эндотелием сосудов / Д.И. Маянский // Успехи современной биологии. — 1988. Т. 106.- С. 290 -305.

115. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. 2-е изд. перераб и доп. / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука Сиб. отд. -1989.-344 с.

116. Маянский А.Н. Патогенетические аспекты нейтрофилзависимых реакций / А.Н. Маянский // Патологическая физиология. -1989. №6. - С. 66 - 72.-:

117. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление / Д.Н. Маянский. М.; ' Медицина, 1991. - 272 с.

118. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский. Казань; Магариф. — 1993. - 192 с.

119. Маянский А.Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы / А.Н. Маянский // Вест. РАМН.-1993. № 4.- С. 52-55.

120. Мещеряков Н.Ф. Центральные механизмы формирования морфиновой зависимости / Н.Ф. Мещеряков, С.К.Судаков // Вопросы наркологии. -1991.-№2.- С. 33-39.

121. Минаева Е.В. Легочной сурфактант и неспецифическая иммунологическая резистентность у крыс с разной степенью прогностической устойчивости к эмоциональному стрессу / Е.В. Минаева // Вестнпк новых мед. технологий. 2002. — Т.9, №. 1. — С. 21 — 24.

122. Митин К.С. Ультраструктурная морфология острого отравления алкоголем /К.С. Митин// Архив патологии. 1988. - №3.- С. 74-81.

123. Митяева H.A. Микроскопические изменения в головном мозге при комбинированном отравлении алкоголем, морфином и психотропными веществами / H.A. Митяева // Суд.- мед.ээспертиза. 1991. - Т. 5, № 1. -С. 33-40

124. Митяева H.A. Микроскопические изменения в головном мозге при комбинорованном отравлении алкоголем, морфином и психотропными веществами /H.A. Митяева// Суд,- мед. экспертиза. — 1995. Т. 5, № 1. - С.15 - 17.

125. Михайлова A.A. Участие медиаторов иммунитета в нейроиммун-ном воздействии / A.A. Михайлова // Иммунология. — 1992.- № 4.- С. 4-8.

126. Мкрчян К.Б. Функциональная активность лейкоцитов по данным теста HCT у больных со злокачественными новообразованиями: автореф. дис. канд. мед. наук /К.Б. Мкрчян. Ереван, 1992. - 20 с.

127. Морозов- Г.В. Современные подходы к диагностике и- терапии • -%J> < ноотропами- иммунных и метаболических нарушений при .опийной ' > наркомании / Г.В. Морозов // Наркология. - 2002. - № 4. - С. 34-37.

128. Мотавкина Н.С. Тенденции в иммунологических сдвигах у больных наркоманией, как показатели их иммунологического статуса / Н.С. Мотавкина // Тихоок. мед. журнал. 2002. - № 1. — С. 89 - 90.

129. Мураева H.A. Возрастные аспекты приспособления иммунной системы к действию хронического стресса: автореф. дис. . канд. мед. наук / H.A. Мураева.- М., 2006.- 22 с.

130. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов / Я.Мусил М.; Медицина, 1985. - 432 с.

131. Мягкова М.А. Иммуноглобулины, связывающие биогенные амины, у больных с наркотической зависимостью / М.А. Мягкова, М.В. Лушникова, О.Ю.Полевая // Иммунология.- 1992.-№3.- С. 45-47.

132. Мягкова В.В. Иммунохимические свойства антител к бетта-эндорфину у больных с наркотической зависимостью / В.В. Мягкова, О.Н. Панченко // Иммунология. 1994. - № 4. - С. 56-58.

133. Ядерная фрагментация нейтрофильных гранулоцитов у больных ангиной / С.А. Навноцкий и др. // Лабораторное дело. 1990.- № 8. - С. 29 -32.

134. Нагоев Б.С. Очерки о нейтрофильном гранулоците / Б.С. Нагоев. -Нальчик: Эльбрус. 1986. - 144 с.

135. Нестерова И.В. Физиология нейтрофильных гранулоцитов / И.В. Нестерова и др. // сб. науч. ст. 1 съезда физиологов СНГ. 2005 — Т. 1. - С. 104.

136. Нестлер Э. Мозг наркомана / Э. Нестлер, Р. Маленко // В мире науки . — 2004.- № 6.- С. 51-57.

137. Новиков В.К. Фармакологический анализ роли стресс-лимитирующих систем в разитии отека — набухания головного мозга / В.К. Новиков*// ' материалы науч.-практ. межд. конф. Суздаль, 2001. — С. 109.

138. Взаимодействие гормонально-медиаторных систем >и свободнорадикальных процессов при наркомании / М.В. Овсяников и др. // сб.науч. ст. 1 съезда физиологов СНГ. — Сочи, 2005. Т.2. - С. 515.

139. Орлова Е.Г. Адренергическая регуляция функций фагоцитирующих клеток при остром стрессе: автореф. дис. канд. биол. наук / Е.Г. Орлова.- Пермь, 2000. — 20 с.

140. Осипов О.В. Нарушения физиологических механизмов регуляции неспецифической резистентности организма при остром отравлении спиртами: автореф. дис. канд. мед. наук / О.В. Осипов.- М., 2002. — 20 с.

141. Павышенко А.Ф. Особенности экспрессии генов цитокинов в полушариях головного мозга мышей (СВА х с 57 В1) / А.Ф. Павышенко, В.В. Абрамов, В.А. Козлов// Аллергол. иммунол. 2003.— Т. 4, № 3. - С. 39-40.

142. Пансуевич О.С. Нейрогипофизарные гормоны / О.С. Пансуевич, Г.И. Чипенс, C.B. Михайлова. —Рига; Знатнэ. 1986. -246 с.

143. Панченко Л.Ф. Саморегуляция опиатных рецепторов головного мозга крыс при хроническом введении морфина / Л.Ф. Панченко, A.M. Балашов // Вест. АМН СССР. М., 1986,- №8.- С. 18-22.

144. Перекисное окисление липидов, система антиперекисной защиты плазмы крови, патологии печени и сердца у подростков злоупотребляющих героином / Л.Ф. Панченко и др. // Вопросы медицинской химим. 1999. - № 6. — С. 501 — 505.

145. Пауков B.C. Медико-биологические проблемы алкоголизма / B.C. Пауков, А.И. Угрюмов. М.; Медицина. - 1988. - 345 с.

146. Пауков B.C. Межорганные отношения при алкогольной интоксикации / B.C. Пауков, А.И. Угрюмов, Н.Ю. Беляева // Архив патологии. — 1991. -№3.-С. 3-11.

147. Комплекс методов оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток периферической крови / Б.В. Пенегин и др. //исб.науч. ст. I съезда иммунологов России. — Новосибирск, 1992. С. 364 -365.

148. Першин С.Б. Нейроэндокринная (гипатоламо-гипофизарная) регуляция иммуногенеза / С.Б. Першин, И.Д. Френкель, В.Д. Сидорова // Иммунология. 1985. - № 4. - С. 7-10.

149. Физические нагрузки и иммунологическая реактивность / Б.Б. Першин и др. // Аллерг. и иммунология. — 2003. — Т. 4, № 3. — С. 46-64.

150. Першин Б.Б. Стресс, вторичный иммунодефицит и заболеваемость. / Б.Б. Першин. М.; Медицина, 1994. - 189 с.

151. Рецепторы и фагоцитарная активность нейтрофилов при острых хирургических заболеваниях органов брюшной полости / Р.В. Петров и др. // Иммунология. 1982. - № 4. - С. 63.

152. Петров Р.В. Иммунология. / Р.В. Петров. М.; Медицина, 1982. - 366 с.

153. Фагоцитарная активность нейтрофилов и гуморальные факторы общего и местного иммунитета при интенсивных физических нагрузках / И.В. Петрова и др. // Микробиология, эпидемиология, и иммунология. -1983.- №12.- С. 53-57.

154. Комплексные параметры иммунной системы организма у здоровых людей 18-25 лет / Р.В. Петров и др. // Метод, рекомендации. М., 1984. -90 с.

155. Петрова Р.В. Оценка состояния здоровья практически здоровых лиц с помощью иммунологических показателей / Р.В. Петрова, H.A. Михайленко // Иммунология. 1990. - № 1. - С. 60-64.

156. Петров Р.В. Клеточные мембраны и иммунитет / Р.В. Петров, Р.И. Атауллаханов М.; Высшая школа, 1991. - 270 с.

157. Печковский Д.В. Механизмы фагоцитоза и бактерицдности нейтрофилов человека / Д.В. Печковский, М.П. Потапнев // Здравоохр. Белоруссии. -1994.- №4.- С. 39-41.

158. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. / В.Е. Пигаревский. М.; Медицина, 1988. — 126 с.

159. Пиголкин Ю.И. Морфологическая диагностика наркотической интоксикации в судебной медицине / Ю.И. Пиголкин — М.; Медицина, 2004. 310 с.

160. Пиголкин Ю.И. Органы иммунной системы при хронической наркотической интоксикации / Ю.И. Пиголкин // Судебно-мед. экспертиза 2006. - Т.49, №.2. С. 3 - 8.

161. Пизов A.B. Активность свойств лейкоцитов в условиях нормы и при морфофункциональном изменении соединительной ткани: автореф. дис. канд. биол. наук. Ярославль, 1999.-20 с.

162. Плецитый К.Д. Влияние алкоголя, наркотиков и табакокурения на иммунную систему / К.Д. Плецитый, Т.В. Давыдова М.; Медицина, 1989.-286 с.

163. Иммуноглобулины, связывающие опиоидные пептиды у больных атопическим дерматитом и опийной наркоманией / О.Б. Полевая и др. // Иммунология. 1991. - № 2. - С. 42 - 44.

164. Полевая О.Ю. Иммуноглобулины, связывающие опиоидные пептиды, биогенные амины и опиаты у больных опийной наркоманией / О.Ю. Полевая, С.А. Брюн, М.А. Мягкова // Вопросы наркологии. — 1993. № 2,- С. 40-41.

165. Понякина И.Д. Метод розеткообразования для выявления Т- и В-иммупокомпонентных клеток. Возможности и ограничения / И.Д. Понякина, К.И. Лебедев // Иммунология. 1983. - №4.- С. 10-20.

166. Мозг и алкоголь / Э.Н. Попов и др. М.; Медицина, 1984. - 304 с.

167. Попыхов Д.А. Эндогенное ауторазеткообразование и ферментативная активность лейкоцитов крови у больных опийной наркоанией / Д.А. Попыхов // Деп. рукопись.- М., 2000 г. —:12 с.

168. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении •/ М.П. Потапнев // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 34-39.

169. Прасникова Г.И. Особенности функционирования ферментной антиоксидантной системы в эритроцитах и нейтрофилах крови больных с генерализованными формами менингококкововй инфекции / Г.И. Прасникова и др. // Терапевтический архив. 1990. - № 11. - С. 22-24.

170. Пятницкая И.Н. Злоупотребление алкоголем и начальная стадия алкоголизма / И.Н. Пятницкая. М.; Медицина, 1988.- С. 110-115.

171. Раевский В.В. Нейроонтогенез / В.В. Раевский М.; Медицина, 1990. -238 с.

172. Редысин А.П. Фагоцитарные реакции в иммунном статусе при гнойной инфекции: автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1989. -20 с.

173. Механизмы влияния ацетилхолина на интенсивность гуморального иммунного ответа / И.А. Рентова и др. // Иммунология. 1989. - № 4. - С. 52-55.

174. Рисберг В.Ю. Особенности иммунного статуса и апоптоз лимфоцитов при опийной наркомании: автореф. дис. канд. мед. наук / В.Ю. Рисберг. — М., 2002. -20 с.

175. Роговин В.В. Антимикробные белки и пептиды нетрофильных лейкоцитов /В.В. Роговин, P.A. Муравьев, В.А. Фомина // Известия А.Н. Сер. Биол. 1992. - № 6. - С. 192.

176. Ройт А. Основы иммунологии / А.Ройт . М.; Мир, 1994. - 328 с.

177. Рочев В.П. Регуляторное влияние антител на закономерности формирования специфической фагоцитарной реакции на микроорганизмы / В.П. Рочев, В.А.Черешнев, И.В. Фельдблюм // Иммунология. 1991. - № 4. - С.19-21.

178. Савилов П.Н. Фагоцитоз регулирующая функция печени / П.Н. Савилов // Физиолгический журнал им. И.И. Сеченова. — М., 2004.-Т.90, № 8.-е. 121. . *?. , . .

179. Сапин М.Р. Иммунная система: человека / М.Р. Сапин, JI.E.'Этинген. —• :

180. М.; Медицина, 1996. 304 с.

181. Сапин М.Р. Иммунная система, стресс и иммунодефицит / М.Р. Сарин — М., Медицина. 2000.

182. Синтез РНК при активации нейтрофила / Д.С. Саркисов и др. // Архив патологии. 1986. - №12. - С. 38 - 43

183. Сафронов А.Г. Индивидуальная чувствительность к психотропным средствам при опийном абстинентном синдроме / А. Г. Сафронов, A.A. Корчагин // материалы науч.- практ. межд. конф. -.Суздаль, 2001 -С. 136.

184. Селедцов A.M. Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантных систем при опийной наркомании, алкоголизме, токсикамании, обусловленной вдыханием паров органических раствопрителей / A.M. Селедцов // Вопросы наркологии. 1990. - № 3. -С. 51-53.

185. Сепиашвили Р.И. Физиология иейтрофильиых гранулоцитов и иммунный гомеостаз / Р.И. Сепиашвили, И.В. Нестерова // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2004. — Т. 90, № 8. - С. 117-118.

186. Сергеева М.Г. Модуляция пролиферации лимфоцитов периферической крови и трансформирование лимфоидных клеток человека морфином / М.Г. Сергеева, З.В. Гришина С.Д. Варфоломеев // Иммунология. 1992.- № 6. С. 63-67.

187. Иммунологические показатели при диагностике начальной стадии хронического алкоголизма / А.И. Смолягин и др. // Лабораторное дело. 1991. -№3.~ С. 61-64.

188. Сосин И.К. Героиновая наркомания: клинико-терапевтический аспект / И.К. Сосин, Ю.Ф. Чуев // Межд. мед. журнал. 1999. - № 1. - С.61 -64.

189. Нейрофармакологические и биологические аспекты алкоголизма / A.B. Станишевская и др. М.; Медицина. - 1983. - 358 с. /

190. Судаков К.В. Биологические мотивации / К.В. Судаков. — М.; Медицина.- 1982-344 с.

191. Судаков К.В. Системные механизмы эмоционального стресса / К.В. Судаков, Е.А. Юматов, Л.С. Ульянинский Кишинев: Наука, 1987. -410 с.

192. Судаков К.В. Биологические мотивации как основа наркотической зависимости и алкогольного влечения / К.В. Судаков // Вопросы наркомании. 1990. - № 3. - С. 3-13.

193. Взаимосвязь индивидуальных поведенческих и физиологических особенностей крыс Вистар с формированием у них зависимости от морфина / С.К. Судаков и др. // Лабораторные животные. 1991. - Т. 1, № 4.-С.13— 20.

194. Судаков C.K. Корковые механизмы опийной зависимости / С.К. Судаков, И.В. Русакова, М.М. Тригуб // сб.науч. ст. 1 съезда физиологов СНГ. -2005,- Т. 1 С. 131.

195. Суздальский P.C. Иммунологические аспекты стимуляции работоспособности у спортсменов: автореф. дис. д-ра мед. наук / P.C. Суздальский. -М., 1984. 45 с.

196. Суркина И.Д. Лейкоциты крови у спортсменов в процессе адаптации к нагрузкам / И.Д. Суркина, Л.В. Козловская // Лабораторное дело. 1980. - № 10.-С. 597- 601.

197. Активация лизосомального аппарата фагоцитов миелопептидами / С.А. Сходова и др. // Иммунология. 1986. - № 5. - С. 84-86.

198. Сытинский И.А. Биохимические основы действия этанола на ЦНС / И.А. Сытинский. М.; Медицина, 1980. — 308 с.

199. Тайжанова Д.Ж. Цитогенетические изменения у потребителей опия с поражением внутренних органов / Д.Ж. Тайжанова, Н.К. Дюсембаева •// Вестник Казахского. НМУ. 2002. - № 1 (15). - С. 83-86.

200. Темнова A.B. Электрокинетические характеристики тимоцитов и состояние митохондрий при иммобилизационном стрессе / А.В .Темнова, А.И. Мирошников, Е.В. Григоренко // Иммунология. — 1984. № 5. -С. 62-64.

201. Темперлин Д. Физиология обмена веществ в эндокринной системе / Д. Темперлин, X. Темперлин // Пер. с англ. М.; Мир., 1989. - 512 с.

202. Темчук М.Ю. Диагностическая значимость биохимических и иммунологических показателей у больных с наркотической и алкогольной зависимостью: автореф. дис. канд. мед. наук / М.Ю. Темчук. М., 2004.-20 с.

203. Теребилина H.H. Соотношение клинических и нейроэндокринных показателей в динамике абстинентного делирия: автореф. дис. канд. мед. наук / H.H. Теребилина. М., 1986. - 20 с.

204. Терещенко И.Л. Роль системы нейтрофильных гранулоцитов в формировании особенностей развития патологического процесса / И.Л. Терещенко. А.П. Кашупина // Патологическая физиология 1993 - № 4. -С.56 - 60.

205. Тимин O.A. Роль тимуса в регуляции перекисного окисления липидов и липидного спектра различных тканей в норме и при стрессе: автореф. дис. . канд. мед. наук. / O.A. Тимин. Томск, 1994. - 18 с.

206. Томилин В.А. Взаимодействие иммунной и опиоидной систем в формировании опийной зависимости / В.А. Томилин // сб. науч.ст. XII съезда психиатров России. Москва, 1996. - С. 24.

207. Алкогольные поражения головного мозга / А.И. Угрюмов и др. // Архив патологии. 1986. - № 10. - С. 14-21.

208. Угрюмов М.В. Нейроэндокринная регуляция в онтогенезе / М.В. Угрюмов М.; Медицина. - 1989. - 601 с.

209. Ульянкина Т.И. История опиумных препаратов и проблема возникновения наркомании / Т.И. Ульянкина // Рус. мед. журнал. -1998. -№4-С.905- 910.

210. У. Пола. Иммунология / У.Пола. М. Мир, 1989 - 360 с.

211. Влияние эндогенных опиоидных пептидов в регуляции иммунного гомеостаза / Б.С. Утешев и др. // Фармакология и токсикология. 1990. - Т.53, № 1. - С. 10-16.

212. Федотова Г.Г. Морфоцитохимические исследования лейкоцитов периферической крови человека при действии гелий-неонового лазера:автореф. дис. . канд. биолог, наук / Г.Г. Федотова. Саранск, 1995.-22 с.

213. Фокин И.Ф. Взаимосвязи между деятельностью головного мозга и иммунной системой у человека / И.Ф.Фокин, Н. В. Пономарев, Т.П. Секирина // Иммунология- 1995.- Т. 21, №2.- С. 15.

214. Наркология / JI.C. Фридман и др. М.; Медицина, 1998. — 380 с.

215. Фридман JI.C. Наркология / JI.C. Фридман, Н.Ф. Флеминг, Г.Д. Робертс.-СПб., 2000. 350 с.

216. Хаитов P.M. Оценка основных этапов фагоцитарного процесса: современные подходы и перспективы развития исследований / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Пат. физиология, и эксперемент. терапия. -1995.- №3.- С. 3-11.

217. Хаитов P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.,—- 1995.-№4.-с. 3-7. • . - .;)

218. Хаитов P.M. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1995. - № 4. - с. 6-11.

219. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы / P.M. Хаитов. М., 2001. — 223 с.

220. Хаитов P.M. Иммунитет и стресс / P.M. Хаитов // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. — 2001. Т. 67, №. 8. -С.1060 - 1072.

221. Хотовицкий A.B. Нарушения в системе клеточного иммунитета у больных алкоголизмом и перспективы их коррекции с помощью иммуномодулятора тактивина / A.B. Хотовицкий // Вопросы наркологии. 2000. - №.4-С. 4 - 56.

222. Хотовицкий A.B. Клинико-иммунный статус больных героиновой наркоманией и пути терапевтической коррекции: автореф. дис. канд. мед. наук / A.B. Хотовицкий — М., 2002 20 с.

223. Чейдо М.А. Влияние опиоидных пептидов на процессы иммуномодуляции / М.А. Чейдо, Г.В. Идова // Российский физиологический журнал 1998. - № 4. — С. 358 - 390.

224. Медиаторы и синапсы / С.Ю. Черепанов и др.. Учебное пособие для медицинских вузов. Казань, 1999. - 46 с.

225. Иммунофизиология / В.А. Черешков и др.- Екатеринбург: Наука., 2002. -258 с.

226. Биохимическая картина крови у злоупотребляющих препаратами конопли. Актуальные проблемы медико-социальной реабилитации алкоголизмом и наркоманией / Т.В. Чернобровкина и др. // Науч. труды.-Москва, 1994.-С. 157- 163. >

227. Чурин A.A. Реакция иммунной системы у мышей, перенесших иммобилизационный • стресс / A.A. Чурин // Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии.-2000.- №.2— С.52—54.

228. Чурин A.A. Реакции иммунной и кроветворной системы мышей с различным генотипом на стресс: автореф. дис. д-ра мед. наук / A.A. Чурин. М., 2004. - 40 с.

229. Шабанов П.Д. Руководство по наркологии / П.Д. Шабанов. Санкт-Петербург, 1998-340 с.

230. Шаляпина В.Д. Механизм развития стресса / В.Д. Шаляпина, Р.Т. Лозановская, Н.А.Чемыртан.-Кишенев, 1987. С. 138- 150.

231. Шамис М.В. Иммунный статус и морфофункциональное состояние нейтрофилов периферической крови при вирусных гепатитах на фоне опийной наркомании:, автореф. дис. канд. мед. наук / М.В. Шамис — Томск, 2001.-20 с.

232. Шарапова Н.Г. Механизм повреждений мембран лимфоцитов крови у больных опийной наркоманией в состоянии абстинентного синдрома: автореф. дис.канд. мед. наук / Н.Г. Шарапова,-М., 2004-20 с.

233. Шилов Ю.И. Адренергические механизмы регуляции фагоцитарной активности нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов периферической крови крыс при остром стрессе / Ю.А. Шилов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2000. — Т. 129, №.5.- С. 563 — 566.

234. Ширинский И.В. Психонейроиммунные нарушения при хроническом стрессе и методы их медикаментозной коррекции: автореф. дис. канд. мед. наук / И.В. Ширинский М., 2003. - 20 с.

235. Шубик В.М. Иммунитет и здоровье спортсменов / В.М. Шубик. М.: Физкультура и спорт, 1985. - 215 с.

236. Шукуров Ф.А. Адаптация, стресс и здоровье / Ф.А. Шукуров // материалы науч.-прак. конф. ТГМУ. Душанбе, 2001. - С. 193-204. ;;

237. Циркулирующие иммунные комплексы у больных хроническим ' алкоголизмом в состоянии абстиненции и острых алкогольных психозов / -Д.И. Шустов и др. // Вопросы наркологии. 1991. - № 1. - С. 10-11.

238. Щепоткин И.А. Регуляция функциональной активности нейтрофилов цитокинами / И.А. Щепоткин, Н.В. Чердынцева, Н.В. Васильев // Иммунология. 1994. - № 1. - С. 42-43.

239. Юматов E.H. Физиологические закономерности индивидуальной чувствительности к эмоциональному стрессу и к биологически активным веществам / E.H. Юматов // материалы науч.-практ. междунар. конф. -Суздаль, 2001.- С. 165.

240. Иммунная система и регуляция физиологических функций. Учебное пособие / Б.Г. Юшков и др.. — Екатеринбург, 2001. 74 с.

241. Ярилин A.A. Клеточные факторы регуляции иммуногенеза / A.A. Ярилин. Новосибирск: Наука, 1985. - 370 с.

242. Neuro-immune-endocrine functional sistem and vascular patologi /M.A. Aller et al. // Med. Hipotheses. 2001. - Vol. 57, № 5. - 561 - 569.

243. Assembly and activation of the NaDHP: oxydoreductase in Human neutrophils /D. Ambruso et. al. // J. Biol. Chem. 1990. -V. 265. - P. 924 - 930.

244. Morphine inhibition of lymphocyte activity is meliated by an opioid dependent mechanism / B.M. Bayer et al // Neuropharmacol. 1990. - V. 29.-P. 369-374.

245. The Immune effects of neuropeptides / I. Berczi et al // Baillieras Clin Rheumatol, 1996. Vol. 10, № 2. - P. 227-357.

246. Berczi I. The stress concept and neuroimmuneregulation in modern biologi /1 Berczi.// Ann. 1. Acad. Sei, 1998. Vol. 851.-P. 312.

247. Biagini R.E. Immunologic analyses of peripheral leukocytes from worcers at an ethical narcotics manufactaring facility / R.E. Biagini, G.M. Henningsen, S.L. Klincewict // Archives of Environmental HtaltH. 1995. - Vol. 50,№ 1 -P.7- 12. ■ ■

248. Blalock I. E. A Molecular Basis. For bidirectional communication between the Immune and neuroendocrine system / I.E. Blalock // Physiol. Rew. -1989. - V. 69. №1. - P. 1-32.

249. Clinical significance of platelet-associated immunoglobulins in narcotic addicts with human Immunodeficitency virus infection / L. Borradori et al // Clin, immunol., Immunopathol. 1990. - V. 54. - P. 256 - 265.

250. Bouix O. Effects of naloxone opiate blocade on the immunomodulation Induced by exercise in rats / O. Bouix, M. Femezoini, A. Orsetti // J. Sports. Med. 1995.- №16.- P. 29-33.

251. Induced mild psychological stress and human immune response / J. E., Brosskat et al.// Psychophysiol.-Praha, 1988. P. 45.

252. Bryant H.I.,Suppressive effects of morphine pelletiplants on in vivo parameters of immune function / H. I. Bryant H.I., R.E. Roudebush R.E. // J. Pharmacol Exp. Ther. 1990. - Vol. 255. - P. 410 - 414.

253. Fpoptosis: one of the mechanisms that maintains unresponsiveness of intenstinal mucosal immune system / P.Bu et al. // J. Immunol. 2001. -Vol. 166. - № 10. - P. 6399 - 6403.

254. Bukulmez O. Leucocytes in ovarion faction / O. Bukulmez, A. Arici // Hun. Reprod. Update, 2000. Vol. 6. - № 1. - P. 1-15.

255. Calder P.S. Full Utilisotion by cells of the immune system / P/S. Calder // Proc. Nutr. Soc. 1995. - P. 65-82.

256. Carr D.J. Neuropeptides and immunopeptides: missengerg in a neuroimmune axis / D. J. Carr, J. E. Blalock // Neuroimmune Sci. 1990. - V. 594. - P. 371.

257. Carr D.J. Anti opioid receptor antibody recognition of a binding site on brain and leucocyte opioid receptors / D.J. Carr, R.C. Rice // Neuroendocrinol. -1990.-Vol. 51.- P. 552-560.

258. Carr D.J. The.Role of Endogenous Opioids and-their receptors in the immune system / D.J. Carr // Pror. Exp. bioL Med. 1991. - P. 710-720. :

259. A reappraisal of the rol of the various opioids receptor subtypes in cellmediated immunity / M.C. Caroleo et al. // Neuroimmunomodulation. 1994. - Vol. 1(2).-P. 141-147.

260. Chao C.C. Activation of mu opioid reseptors inhibits microglial cell chemotaxis / C.C. Chao // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. - Vol. 281, № 2. -P. 998- 1004.

261. Expression of a novel protein by regenerating hepatocytes and peripheral blood lymphocytes / A.Chedid et al. // Clin. Diagn. Kab. Immunol. 2001. - Vol. 8, №6. -P. 1292-1294.

262. Chryssikopoulos A. The relationship between the immune and endocrine systems / A. Chryssikopoulos // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1997. Vol. 816. - P. 83-93.

263. Chukwuocha R. U. The in vivo effects of opioid peptides on murine immune response / R.U. Chukwuocha, E. Reyes , S.Tokuda // Int. Immunopharmacol.- 1994. Vol. 16. - № 3. - P.205 - 215.

264. Cleary T.Y. Mechanisms of intalrvid effect on polymorpho- nuclear leukocytes / T.Y. Cleary, L.L. Pickering // Clin, and Lab. Immunol.-1983 V.ll, № 1.-P.21-26.

265. Cochrane C.C. Polimorphonuclear leukocytes in immunologic reactions the destruction of vascular basement membrane in vivo and in vitro / C.C. Cochrane, B.S. Aikin // J. Exp.Med. 1996. - V.124 - P. 733-752.

266. Cohen A. Neutrophils in normal lungs / A.Cohen, M. Possi // Amer. Rev. Resp. Dis. 1983. — V. 127.- Supple. 1.- P. 3-9.

267. Corn J.A. The activation of mononuclear phagocytosis: fast, fancy, future / J.A. Corn // J. Immunol. 1988.- V. 121.- P. 813 - 816.

268. Dantzer R. Actions neurotropes des. cytakines / R.Dantzer // Pathol. Biol.- 1994. V. 42, № 9. - P. 826'.- 829

269. Deschaux P. Pituitary thymic gonadal axis physiological and immune interation between LH thymosins, leyding cells and ageing / P. Deschaux, M. Rouabhia, J. Chakir // J.Oncol. - 1993.- V. 25, № 2. - P. 31-41.

270. Dewey W. L. Cannabinoid pharmacology / W.L. Dewey // Pharmacol. Rev.- 1986. -V. 33. -P. -151 -178.

271. Immunohistrochemical localization of mu-opioid receptors in the central nervous system of the rat / Y.Q. Ding et al.// J. Comp. Neurol. 1996.-V. 367. - P. 375 - 402.

272. Oxidants and antioxidants in immune regulation and immunopathology / W. Droge et al. // Biol. chem. 1992. - Vol. 373, № 9. - 740 - 741.

273. Ehrhart Borstein M. Intraadrenol interactions in the regukation of adrenocorticol steroidogenesis / M. Ehrhart — Borstein, J.P. Hinson, S.P. Borstein // Endocr. Rev. - 1998. - Vol.19. - P. 101 - 143.

274. Eisenstein T.K. Effects of opioids on immune function and host defense to infution / T.K. Eisenstein // Rockville. 1997. - P. 32.

275. Eisenstein T.K. Opioid modulation of Immune responses: effects on phagocyte and limfoid cell populations / T.K. Eisenstein, M.E. Hilburger. // Neuroimmunol. 1998.- V. 83, №1-2. - P. 36 - 44.

276. Elenkov I. J. Yhe sympathetic neurva an intigrative interface between two supersystems: the brain and immune system /1.J. Elenkov et al. // Pharmacol. Rev. 2000. Vol. 52.- № 4. - P.595 - 638.

277. Fabry Z. Wervous tissue as an immune compartment: the dialut of Immune response in the CNS / Z. Fabry, C.S. Raine, M.N. Hari // Immunol. Today.- 1994.- V. 15, № 15.- P. 218 224.

278. Farner M.A. Exercise induced stimulation of murine macrophage phagocytosis may be mediated by thyroxine / M.A. Farner, C. Barriga, E.Ortega // Physiol. - 1996. - V. 80. - P. 899 -903.

279. Farner M.A. Effect of age on adherence and Chemotaxis capacities of peritoneal macrophages influence of physicol activiti stress / M.A. Farner et al. // Mech. Ageing. Dev. 1997. - V. 179. - P. 179 - 189.

280. Ferencik M. Is the immune system our sixth sensei relation between the immune and neura endocrine systems / M. Ferencik, V. Stvirtinova. // Bratisl. Lek. Listy. 1997. - Vol. 98, № 4. - P. 187 - 198.

281. Findeisen G. R. Stress and immunonotwart: stressbewaltiging zur krankheit sverkutung und behandeung / G.R. Findeisen // Arstl. Fottbild. 1992. -Bid. 86. № 22.- S. 1117 - 1123.

282. Bidirectional Effect of met-encephflin on macrophageeffector fuction / G. Foris et al. // Mol. Cell. Biochem. 1991.- V. 69, №2,- P. 127 - 137.

283. Freeman J.G. Catecholamines in murine done marrow derived mast sell / J.G. Freeman et al. // J. Neuroimmunol. 2001. - Vol. 119, № 2. - P. 231 -238.

284. Fry R.W. Acute intensive interval training aut T-limphocyte function / R.W. Fry, A.R. Morton, D. Keas // Med. Sei. Sports Exerc. 1992. - V. 24. - P. 339 - 345.

285. Fujii T. An Independent non-neuronal cholinergic system in lymphocytes / T. Fujii, K. Kawashima // Jpn. J. Pharmacol. 2001. - Vol. 85, № 1.- P.l 1 - 15.

286. Gabrilovac J. Gender Related differences in murine T- and B- limphocyte ■ proliferative alility in response to in vivo . enkefalin administration 7 J. ' Gabrilovac, T. Marroti // Pharmacol. - 2000. - V. 392. - P. 101 - 108.',;

287. Gahmberg C.G. Leucocyte cell adhesion proteins: from molecular dessection to clinical applications / C.G. Gahmberg, P.L. Nortamo, L.Valmu // Ann. Med . Vol. 24, № 5. - P. 329 - 335.

288. Induction of antibodies to morphine during chronic morphine treatment in rodents and opiate addicts / N.B. Gamaleya et al. // Drug. Alcohol Depend. — 1993.-Vol. 32.-P. 59-64.

289. Gamaleya N.B. Cellular and humoral immyniti in opiate addicts / N.B. Gamaleya // Forens. Sei. Intern. 1993. - Vol. 63. - P. 285 - 293.

290. Gamaleya N.B. Activation of murine macrofages by hydrogen peroxide / N.B. Gamaleya, K.M. Kirpichnikova, I.V. Kluybin I.V. // Cellular Signaling. -1994. Vol. 6. - P. 949 - 957.

291. Gamaleya N.B. Hydrogen peroxide as an activator of macrophages / N/B. Gamaleya, I.V. Kluybin, R.V. Kirpichnikova // Cell. Biology International. 1994.-Vol. 18.-P. 494.

292. Mdulation of rat uterine contractility by mast cells and their mediators / R.E. Garfield et al. // Am. J. Obstet Gynecol. 2000. - Vol. 183, № 1.- P.l 18 -125.

293. Abolition of morphine immunosuppression in mice lacking the mu-opioid receptor gene / C. Gavreriaux- Ruff et al. // Proc. Nate Acad. Sci USA. -1998. - Vol.95 (11).- P.6326 - 6330.

294. Goerzl E.J. Neuropeptides, mast cell and allergi novel mechanisms and therapeputio possiblities / E.J. Goerzl, PJ. Cheng, A. Hassner // Clin. Exp. Allergi. 1990. - V. 20, № 4. - P. 3 - 7.

295. Herz A. Opioids / A. Herz // Springer Verlad: Berlin, 1993. 370 p. *

296. Heufelder A.E. Leucocyte integrin activation / A.E. Heufelder A.E. Bahn // Clin. Exp. Immunol. 1993 - Vol. 92. - P. 296.

297. Morphine alters macrophage and peritoneal cavity / M.E. Hilburger et al. // J. Neuroimmunol. 1997. - Vol.80 (1-2). - P. 106 - 114.

298. Hoffman P. The Endorphin hypothesis in: physical activity and mental health / Hoffman P. // Neuroendocr. 1997. - P. 163 - 177.

299. Hoffman G.E. Exercise and the immune system: A model of stress response / G.E. Hoffman, L. Yoets, B.R. Pederson // Immunol.Today. 1999. - V.15. -P. 382.

300. Effects of morphine on metabolism of dopamine and serotonin in brocins of alcohol-preferring AA and Alcohol-avoiding ANA rats / A. Honkanen et a. //Alcohol. 1999. - Vol. 18, № 1 - P. 3 - 10.

301. Ikeda V. Developmental changesin interstinal globule leukocytes of normal rats / V.Ikeda, S.Yamashina // Cell Nissue Res. 1993.- Vol. 273, № 3. - P. 447-455.

302. Characterization of polimorphonuclear leukocyte-induced vasoconstiction in isolated human umbilical veins / S.W. Kerr et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. -1998.- Vol. 287, № 2. P. 640 - 647.

303. An antisense oligodeoxynucie otide to the delta opioid receptor (DOR-1) inhibits morphine toleranse and acute dependence in mice / B.Kest et al. //c Brain Res. Buii. — 1996. — Vol. 39 (3). — P. 185 — 188. . >

304. Khansari D.M. Effects of stress on the immune system / D.M. Khansari,' A.J. Mugro, R.E. Faith // Immunol. Today. 1990. - № 11. - P. 170 - 175.!

305. Kinoshita Y.s Cellular and molecular interactions of thymus with endocrine organs and neurous system / Y.Kinoshita, F. Hato // Cell. Mol. Biol. (Nosy-le-grand).-2001.-Vol. 57, № l.-P. 103-117.

306. Klebanoff S.J. Antimicrobial mechanisms of phagocytes / S. J. Klebanoff.// Brit J. Haematol. 1992 - V.82, № 1 - P. 243 - 244.

307. Klyubin L, W. Hydrogen peroxigeinduced Chemotaxis of mouse peritoneal neutrophies / L. W. Klyubin, R.M. Kirpichnikowa, A.Yamalui // Eur. J. Cell. Biology. 1996.-V.70. - P. 347-351.

308. Knapp P.E. Mu-op ioid receptor activation enhances DWA synthesis in immature oligodendracytes / P.E.Knapp, K.G.Hauser. // Brain. Res. 1996. -Vol. 16, № l.-P. 743.

309. The role of stress hormones in exercise-indused suppression of alveolar macrophage antinizal function / M/L.Kohut et al. // J.Neuroimmunol. 1998. - № 8. - P. 193-200.

310. Virusspecific cytotaxis T-cell-mediated lysis of lymphocytes in vitro and in vivo / D. Kyburz et al. // J. Immunol. 1993. - № 1. - P. 5051 - 5059.

311. Lause S. Effects of lipopolysacchoride and glucocrticoids on expression of interleukin -1 betta converting enzyme in the pituitary and brain of mice / S.Lause, E.Goujon, C.Combe // J. Neuroimmunol. — 1996. Vol. 68.-P.61-68.

312. Lazarus H. Granulocyte transfusions. Have we learned anything / H. Lazarus // J. Lab. Clin. Med.- 1990.- V.115. -P. 346 351.

313. Leuwenberg J. Adhesion of polymorphonuclear cells, to human endothelial eels / J.Leuwenberg, G.Jeundhomme, W.Hurman // Clin. Exp. Immunol. -1990.- V. 81.-P. 496-500.

314. Lewis M'. D. Biochemistry of the acute allergic reactions / M.D. Lewis // New York. .1990. - P. 19 -26. : 1 ' •

315. Morphin enhances complement receptor-mediated phagocytosis of Ctryptococcus neeoformans by human microglia / M.M.Lipovscy et al. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1998. - Vol. 87 (2). - P. 163 - 167.

316. Morphine induced conformational changes in human monocytes, granulocytes, and endothelial cells and in invertebrate immunocytes and microglia are mediated by nitric oxide / Y.Liu et al. // J. Immunol. - 1996. -Vol. 156, № 12. - P. 4845 - 4850.

317. Madden K. S. Experementae basis for neural immune interactions / K.S. Madden, D.L. Felten // Physiol. Pev. 1995. - V.75. - P. 77- 106.

318. Makman M.N. Human granulocytes contain an opiate alkaloid-elective recepnor mediatihg inhibition of cytokine induced activation and Chemotaxis / M.N. Makman, T.V. Bilfmger, G.B.Stefano // J. Immunol. 1995. - Vol. 1, № 3. - P. 1323- 1330.

319. Opioid-induced modification of granulocyte function / M. Martin et al // Int. J. Immunopharmacol.- 1988. V.10. - P. 425-433.

320. Martinez P. Effects of cocaine and morphine on Ig G prodaction ty by human peripheral blood lymphocytes in vitro / P. Martinez, R.R.Watson // Life Sei.- 1990. Vol. 47. - P. 59 - 64.

321. Enhancement of natural cytotoxicity B-endorphin / P.M. Mathews et al. // J. Immunol.- 1993. V.130, № 4. - P. 63- 65.

322. Miery L. Neuro-immuno-cutaneous system (NICS) / L. Miery // Pathol. Biol. (Paris). 1996. - Vol. 44, № 10. - P. 867 - 874.

323. Moonis. M: Macrophages in host defense / M.Moonis,-, J.Ahmad, B.K.Bachhawart /A Indian J. Biochem. Biophys. 1992. - V. 29, №"2*. ■ P,: !•• v • < 115-122. ,

324. Molecular biological characterization of intraepithetial lymphocytes and their receptors / H.Nagura et al. // Nippon Rinsho. 1996. - Vol.54, № 4. - P. 1162-1169.

325. Cytokines, biochemical and hematologic Indices following endotoxin administration in normal man / D.Nix et al. // Cire. Shock. - 1993. - № 2. — P. 194.

326. Adhesive effect of certain cytocines / J.D. Ogle et al. // Inarmation. 1992. -Vol. 16,№6.-P. 603-612.

327. Neuropeptides secretion in exercise / G.W. Onuoha et al. // Neuropeptides. 1988. - V. 32. - P. 229 - 245.

328. Ortega E. Exercise-induced stimulation of myrine macrophage Chemotaxis: role of corticosterone and prolactin as mediators / E. Ortega // Physiol. Lond.- 1997. P. 729-734.

329. Corticosterone, prolactin and thyroid hormones mediators of the stimulated phagocytic capacity of peritoneal macrophages after high intensity exercise / E.Ortega etal. // IntJ. Sportr. Med. - 1996. - V. 17. - P. 149- 155.

330. Intermittent but intracerebroventricular interleukin 1 sim,ilary affect immune responses and immunocyte beta-endorphin concentrations in the rat / A.E.Panerai et al. // Int. J. Clin Pharm. Res. - 1997. - Vol. 17, № 2-3. - P. 115-116.

331. Parker C.W. Neutrophill Mechanisms / C.W. Parker // Amer. Pev. Respir. Dis. 1991. - V. 143, №3. - P. 559-560.

332. Chronic exposure to morphine attenuates exppression of interleukin-1 beta in brain / N.A. Patel et al. // Brain Res. 1996. - Vol. 712 (2). - P. 340 - 344.

333. Peterson R.K. Acute and the Immune system / R.K.Peterson, H.B. Nielsen // Exercise Immunology (Heidelberg, springer). 1997 - P. 5-38.

334. Peterson R.K. The opioid — cytokine connection / R.K. Peterson,. T.W. Molitor, C.C. Chao // J. Neuroimmunol. 1998. - V. 83. - P. 63-69.

335. Plerpaoli W. Neuroimmunomodulation of Aging: a program in the pineal gland / W. Plerpaoli // Ann. N.Y.Acad. Sci. 1998. - V. 840 - P. 491 - 497.

336. Stimulation of natural killer cell activity by murine retroviral infection and cocaine / T.S. Poet et al. // Toxil. Lett. 1991. - Vol. 59.- P. 147 - 152/

337. Suppression of immune parameters in animal models of morphine dependense. Immunol models of morphine dependense / J.M. Portoles J.M. et al. // Immunol. Invest. 1995 - Vol.24, № 4. - P. 643 - 652.

338. Rees R.C. Cytokines: their role in regulating Immunity and the response to Infection / R.C. Rees // Rev. Med. Microbiol. 1992. - V. 13, № 1.- P.9 - 14.

339. Renoux G. The positive regulation of T-cell by the neocortex is Likely to involve a dopamine pathway / G. Renoux // Psychoneuroimmunology. — New York.-1992.-P. 39.

340. Renoux G., The Role of macrophages in the activation of T- and B-Lymphocytes in vitro. Immunology of the macrophage ed .by D.S. Welson / G. Renoux // New York. Acad. Press. 1986. - P. 162 - 201.

341. Ross G. Clinikal and laboratori features of patients with an Inherited deficiency of neutrophil membrane complement receptor tupe 3 (CR3) and the related membrane antigens LFA-1 and pi50 / G. Ross // J. Clin. Immunol.- 1986.-V. 6.P. 107-113.

342. Roy S. Effects of opioids on the immune system / S. Roy, H.H. Loh // Neurochem. Res. 1996. - Vo. 21 (11).-P. 1375- 1386.

343. Neuroendocrine control of the thymus / Savino W. et al. // Ann. Acad.Sci.-1998. V. 840, № 4. - P. 470 - 479.

344. Site of opioid action in the human brain: mu and kappa adonists subjective and cerebral blood flow effects / T.E. Schlaepfer et al. // Amer. J. Psychiatry. -1998.-Vol. 155, №4.-P. 470-473:

345. Immunoregulatory-effects »of morphine on human lymfocytes / S.A. Schvartz et al. // Clinical a Diagnosic Laboratory Immunology. 1997. - Vol.4, № 2. -P. 127-132.

346. Shiratsuch A. Elimination of unvanted cells by phagocytes / A.Shiratsuch, Y. Nakanishi // Seikagaku. 1999. - Vol. 71, № 4. - P. 282 - 286.

347. Morphine enhances macrophage apoptosis / P.S.Singhal et al. // J. Immunol.- 1998.-Vol. 15, №4.-P. 1886-1893.

348. Sonetti D. Opiate signaling regulates microglia activities in the invertebrate nevous system / D. Sonetti, E. Ottavian, G.B. Stefano // Gen. Pharmacol. -1997.-Vol. 29, № 1.-P. 39-47.

349. Specter S. Marijuana and immunity: tetrahydrocannabinol mediated inhibition of lymphocyte blastogenesis / S. Specter, G.Lancz, J. Hazelden // Int. J. Immuno-pharmacol. 1990. - Vol. 12. - P. 261 - 267.

350. Evaluation of Wistar rats individual sensivity to the development of physical dependence on morphine / S. K.Sudalcov et al. // Drug Alcohol Depend. -1991.-Vol.29.-P. 69-75.

351. Differences in morphine reinforcement property in two indred rat strains -associations with cortical receptors, behavioral activity, analgesia and cataleptio effects of morphine / Sudakov S. et al. // Psychopharmacol. -1993.- Vol. 112.-P. 183- 188.

352. Teshima H. Emotional stress, behavier and immune function / H. Teshima, H. Sogawa // Neurosci. 1989. - № 9. - P. 5 - 12.

353. Thomas P.T. Direct cellular immunomodulation produced by diacetylmorphine (heroin) or methadone / P.T. Thomas, R.V. House, H.N. Bhargava // General Pharmacology. 1995. - Vol. 26, № 1. - P. 123 - 130.

354. Tryoen-Toth P. Down-regulation of mu-opioid receptor expression in rat oligodendrocytes during theiz development in vitro / P. Tryoen-Toth, G. Gaveriayx-Ruff, G. Labocerdette // J. Neurosci. Res.- 2000. Vol. 60, № 1. -P. 10-20. . <

355. Vasilakov J. Herpes simplex virus class irestrieted peptide induced cytotoxic T-Lymphocytes in vivo independent of CD4-T-cells / J. Vasilakov, J. Michael // J. Immunol. 1999. - № 6. - P. 2346-2355.

356. Villiger P.M. Interagtionen zwischen nerven and immunosystem / P.M. Villiger // Schweiz Med. Wochen. Schr. 1994. - Bd.124, № 20. - P. 857866.

357. Watson F. Neuyrophil function in whole blood and after purification: changes in receptor expression, oxidase activity and responsivenss to cytocines / F. Watson, J.J. Robinson, S.W. Edwards // Biosci Repts. 1992. - Vol. 12, № 2. — P. 123- 133.

358. Weidenfeld J. Effects of bacterial endotoxin on the glucocorticid feedback regulation of adrenocortical response to stress / J.Weidenfeld, R. Yiriniya // Neuroimmunomodulation. 1996. - Vol. 3. - P. 352 - 357.

359. Weigent D.A. Associations between the neuroendocrine and immune system / D.A. Weigent, J.E. Blalock // J. Leukos. Biol. 1995. - V. 57. - P. 137 -150.

360. Wilmore J.H. Physiology of sport and exercise champaing / J.H. Wilmore, D.L. Costile // Human Kinetics. 1994.- 282 p.

361. Exercise induced modulation of macrophage function immunol cell / J:A. Woods et al. // Biology. 2000. - V. 78. - P. 545 - 553.

362. In vivo treatment with benzodiazepines inhibits murine phagocyte oxidative metabolism and production of interleukin-1, tumor necrosis factor and interleukin-6 / F. Zavala et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1990. - Vol. 255. - P. 442 - 450.

363. Zurawski G. Indused abundant preproenkephalin MR synthesis / G. Zurawski, M.Benedik, B.J.Kamb // Science 1986.-V.232, № 475.-P. 772.

Информация о работе

Каримова, Равшания
доктора биологических наук
Душанбе, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Метаболическая активность и функциональные резервы лейкоцитов при наркомании - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы