Механизмы плейотропного действия гена small bristles (Dm nxfl) Drosophila melanogaster, принадлежащего эволюционно консервативному семейству nxf (nuclear export factor)

Мамон, Людмила Андреевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы плейотропного действия гена small bristles (Dm nxfl) Drosophila melanogaster, принадлежащего эволюционно консервативному семейству nxf (nuclear export factor)
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Механизмы плейотропного действия гена small bristles (Dm nxfl) Drosophila melanogaster, принадлежащего эволюционно консервативному семейству nxf (nuclear export factor)"

084607760

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

Механизмы плейотропного дейст~._____™

small bristles (Dm nxfl) Drosophila melanogaster, принадлежащего эволюционно консервативному семейству nxf (nuclear export factor)

Специальности 03.02.07 - генетика и 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

На правах рукописи

МАМОН Людмила Андреевна

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург 2010

СЕН 2010

004607760

Работа выполнена в Санкт-Петербургском государственном университете на кафедре генетики и селекции и в Институте биофизики клетки, г. Пущино.

Научные консультанты: академик доктор биологических наук

Сергей Георгиевич Инге-Вечтомов Санкт-Петербургский государственный университет

профессор, доктор биологических наук Михаил Борисович Евгеньев Институт молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта, г. Москва

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Константин Васильевич Квитко,

профессор каф. микробиологии Санкт-Петербургского

государственного университета

доктор биологических наук Александр Викентьевич Родионов, заведующий лабораторией Ботанического института РАН, Санкт-Петербург

доктор биологических наук Татьяна Владимировна Кузнецова, ведущий научный сотрудник Института акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта, Санкт-Петербург

Ведущее учреждение: Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург

Защита состоится //У ОкУл ¿)1/Ц %0{0 в ^Цну на заседании совета Д 212.232.12 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7/9. Санкт-Петербургский государственный университет, кафедра генетики и селекции, ауд. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. М.Горького Санкт-Петербургского государственного университета

Автореферат разослан ¿¿¿О. ¿У 2010

И.о. ученого секретаря диссертационного совета

д.б.н. М.В.Падкина

Введение

Актуальность проблемы. Гены, обеспечивающие сохранение, передачу и реализацию наследственной информации характеризуются широким спектром плейотропных эффектов. Именно такие гены обеспечивают системный контроль генетических процессов в клетке и относятся к эволюционно древним, проявляя удивительный консерватизм. Достижения геномики делают особенно актуальным изучение структуры и функции подобных генов, используя преимущества модельных объектов.

Гены семейства nxf описанные у большинства эукариот от дрожжей до человека, вовлечены в контроль экспорта различных мРНК из ядра в цитоплазму (Herold et al., 2003). У D.melanogaster ортологом генов nxfl является ген sbr (Herold et al., 2000; Третьякова и др, 2001; Wilkie et al., 2001), поэтому ген sbr получил еще одно название - Dm nxfl. Универсальной функцией гена Dm nxfl и его ортологов у человека (Hs nxfl) и мыши (Mm nxfl) является транспорт мРНК из ядра в цитоплазму (Kang and Cullen, 1999; Herold et al., 2003; Sasaki et al., 2005).

Исходя из универсальной функции, продукты генов nxfl относят к транспортным рецепторам, состоящим, по крайней мере, из двух частей. Первая -рецепторная - определяет взаимодействие с РНК (взаимодействие может быть специфичным - это узнавание последовательности СТЕ (constitutive transport element), и не специфичным - через адапторные молекулы) (Hautbergue et al., 2008). Вторая - транспортная - обеспечивает взаимодействие с нуклеопоринами -белками ядерных поровых комплексов с тем, чтобы переместить комплекс, содержащий мРНК, из ядра в цитоплазму (Braun et al., 2001, 2002). Затем, как правило, фактор NXF1 покидает транспортируемый комплекс и возвращается обратно в ядро (Palacios, 2002). Важно отметить, что не все мРНК приступают к трансляции сразу после выхода из ядра в цитоплазму. С существованием долгоживущих и временно не транслируемых мРНК связывают возникновение семейства генов nxf и появление генов-паралогов, контролирующих судьбу мРНК в цитоплазме (Jun et al., 2001; Tretyakova et al., 2005; Lai et al., 2006; Takano et al., 2007; Katahira et al., 2008). Специализация факторов NXF как рецепторов мРНК может проявляться не только в существовании семейства генов nxf но и в том, что генам nxf соответствует, как правило, несколько продуктов.

Исследования на мутантах показали, что под контролем гена Dm nxfl (sbr) находятся два фундаментальных клеточных процесса: реакция клетки на действие теплового стрессора (Евгеньев, Левин, 1980; Евгеньев, Денисенко, 1990) и расхождение хромосом в процессе клеточных делений (Мамон и др., 1990; Никитина и др., 2003; Кьергаард, Мамон, 2007; Golubkova et al., 2006; 2009).

Существование сложных межаллельных взаимодействий и доминантных аллеле-слецифичных признаков позволило высказать предположение о том, что гену Dm nxfl, помимо известной универсальной функции - обеспечения ядерно-цитоплазматического транспорта мРНК, свойственны и специализированные функции, одна из которых - контроль расхождения хромосом в клеточных делениях. Основой широкого спектра плейотропных эффектов может быть полиморфизм продуктов гена, обеспечивающий их специализацию.

С усложнением организации живых систем часто возникают потребности в специализации универсальных функций. Эволюция генов в основном идет по пути объединения и возникновения новых комбинаций элементарных функций (Long et al., 2003). Объединение элементарных функций при формировании гена порождает ситуацию, при которой отдельные мутации могут нарушать конкретную элементарную функцию, не затрагивая остальные (Dudley et al., 2005; van de Peppel, Holstege, 2005). В этом случае плейотропные эффекты гена отражают его полифункциональность и могут проявляться как аллеле-специфичные.

Настоящая работа направлена на определение путей формирования специализированных функций гена Dm nxfl у D.melanogaster, нарушение которых приводит к плейотропным эффектам. Вследствие эволюционной консервативности семейства генов nxf выявленные с использованием модельного объекта закономерности имеют общебиологическое значение.

Цель работы заключается в определении молекулярных механизмов плейотропного действия эволюционно консервативного гена Dm nxfl (sbr) D.melanogaster, вовлеченного в контроль важнейших клеточных процессов: реакции клетки на действие стрессора, ядерно-цитоплазматического транспорта мРНК и расхождения хромосом в клеточных делениях.

Задачи:

1. Определить плейотропные эффекты гена Dm nxfl (sbr) D.melanogaster и исследовать их механизмы.

2. Оценить характер взаимоотношений между нарушением реакции клетки на действие стрессора и хромосомной нестабильностью.

3. Исследовать механизмы хромосомной нестабильности у мутантов по гену Dm nxfl (sbr) D.melanogaster, отвечающему за экспорт различных мРНК из ядра в цитоплазму.

Научная новизна. Впервые показано, что мутации эволюционно консервативного гена Dm nxfl (sbr) у Drosophila melanogaster нарушают расхождение хромосом в клеточных делениях и вызывают характерные изменения веретена первого деления мейоза у самок. Данные эффекты можно рассматривать как проявление специализированной функции исследуемого гена наряду с другими аллеле-специфичными эффектами.

Выявлен полиморфизм мРНК Dm nxfl. Большинство специфичных транскриптов гена Dm nxfl D.melanogaster выявлено впервые.

Использование полученных нами антител к С-терминальному фрагменту белка Dm NXF1 позволило методом Вестерн-блот анализа впервые идентифицировать специфичный для семенников короткий белковый продукт гена Dm nxfl наряду с универсальной его формой. Существование полиморфизма продуктов гена Dm nxfl свидетельствует о возможных путях специализации факторов NXF в пределах данного семейства белков.

Секвенированы участки ДНК, соответствующие рецессивным летальным аллелям гена sbr (Dm nxfl), и показана роль нарушений С-терминальной

половины белка Dm NXF1 в определении плейотропных доминантных эффектов этих аллелей.

Теоретическое и практическое значение работы.

Эволюционная консервативность структуры и функции белков семейства NXF делает результаты исследований важными для понимания роли данных белков не только у D.melanogaster, но и у других организмов, включая человека. Доминантные проявления мутантных аллелей гена Dm nxfl (нарушение расхождения хромосом в клеточных делениях, мужская стерильность и нарушение сексуального поведения) позволяют рассматривать гены семейства nxf в качестве генов-кандидатов при определении генетических основ соответствующих наследственных патологий у человека.

Интерес к генам, вовлеченным в контроль расхождения хромосом в клеточных делениях, определяется, прежде всего, тем, что с нарушением числа хромосом связано подавляющее большинство раковых заболеваний у человека (Hartwell, Kastan, 1994; Lengauer et al., 1998; Cahill et al., 1999; Sen, 2000; Nowak et al., 2002; Atkin, 2003). И если раньше полагали, что анеуплоидия является следствием злокачественного перерождения клетки, то в настоящий момент появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что анеуплоидия может быть причиной рака (Marx, 2001; Atkin, 2003; Копнин, 2007).

Выявление механизмов плейотропного действия генов, основанных на аллеле-специфичных проявлениях, позволяет определять структурно-функциональные элементы гена, что важно при создании рекомбинантных генетических конструкций в генной инженерии и разработке методов молекулярной диагностики наследственных патологий человека.

Основные положения, выносимые на защиту:

Жизненно важный эволюционно консервативный ген small bristles (sbr) D.melanogaster, относящийся к семейству генов nxf (Nuclear eXport Factor), отвечает не только за транспорт большинства типов мРНК из ядра в цитоплазму, но и вовлечен в регуляцию расхождения хромосом в клеточных делениях. Продукт гена sbr (Dm nxfl) участвует в формировании аппарата деления клетки, влияя на поведение хромосом в мейозе и эмбриональных митозах. Полученные нами результаты позволяют отнести sbr к уже известным генам, выполняющим в клетке двойственную функцию: не только ядерно-цитоплазматический транспорт мРНК, но и транспорт хромосом к полюсам деления клетки. Появление в эволюции транспортных систем, выполняющих такую двойственную функцию, связано с возникновением ядерной оболочки и обособлением ядра в виде самостоятельного клеточного компартмента. Названные транспортные системы в процессе функционирования в клеточном цикле сменяют друг друга, используя общие структурно-функциональные модули.

Полиморфизм транскриптов и белковых продуктов, описанный для гена Dm nxfl, отражает характер эволюционной дивергенции и специализации транспортных рецепторов, принадлежащих семейству NXF и обеспечивающих перемещение в клетке различных мРНК.

На основе полученных данных сформулирована гипотеза о том, что продукты гена Dm nxfl кроме универсальной функции - обеспечение ядерно-

цитоплазматического транспорта большинства мРНК из ядра в цитоплазму -выполняет и специализированные цитоплазматические функции, по-видимому, связанные с транспортом, сохранением в нетранслируемом состоянии особых мРНК или их деградацией. Присутствие подобных мРНК, относящихся к классу долгоживущих или локализованных, является характерной особенностью половых, эмбриональных нервных и стволовых клеток, а также необходимо при формировании аппарата деления клетки.

Данное предположение основывается на плейотропных эффектах мутантых аллелей гена Dm rtxfl, таких как повышенная частота анеуплоидных потомков, аномалии веретена первого деления мейоза у самок, нарушение эмбриональных митозов, женская и мужская стерильность, нарушение памяти, временная атаксия.

Выполняя специализированные функции, фактор Dm NXF1 может входить в состав или участвовать в формировании макромолекулярных комплексов РНП, представляющих собой эволюционно древний способ хранения, передачи и реализации наследственной информации, не утративший своего значения в стволовых, нервных, генеративных и эмбриональных клетках.

Апробация работы: Материалы диссертации были представлены на следующих отечественных и международных конференциях и симпозиумах: Всесоюзном симпозиуме «Структура и функции клеточного ядра» (Гродно, 1990); Всесоюзном совещании «Генетика развития растений и животных» (Ташкент, 1990); Всесоюзной конференции по генетике и цитологии мейоза (Новосибирск, 1990); Всесоюзной конференции по генетике насекомых (Москва, 1991); Международной конференции "Гипоксия в медицине" (Москва, 1996); Международной конференции «Molecular chaperones and the heat shock response», Cold Spring Harbor Lab., (Нью Йорк, 1996); 37-й, 38-й, 39-й, 40-й, 41-й, 42-й, 43-й, 44-й, 45-й. 46-й Ежегодных конференциях по исследованиям на дрозофиле (Сан Диего, 1996; Чикаго, 1997; Вашингтон, 1998; Белевью, 1999; Питтсбург, 2000; Вашингтон, 2001; Сан Диего, 2002; Чикаго, 2003; 2004; Сан-Диего, 2005); 26-м Ежегодном совещании EEMS (Рим, 1996); 15-й Европейской исследовательской конференции (Варна, Болгария, 1997); Съездах ВОГиС (Санкт-Петербург, 2000; Москва, 2004; Москва, 2009); 17-й Европейской дрозофилиной конференции (Эдинбург, 2001); Международной конференция «Генетика в России и мире» (Москва,2006); 20-м Международном конгрессе по генетике (Берлин, 2008); Международном научно-методическом семинаре «Современные методы микроскопии в исследовании живых систем» (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 56 печатных работ, из них 25 статей в реферируемых отечественных и зарубежных журналах, рекомендованных перечнем ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей материалы и методы, результаты и их обсуждение, заключения и выводов, а также списка цитированной литературы, насчитывающего 640 источников. Работа изложена на 310 страницах машинописного текста, включая приложение, иллюстрирована 52 рисунками и 14 таблицами.

Содержание работы Материалы и методы исследования

В работе использованы следующие линии и гибриды:

Линии, не содержащие мутантных аллелей гена sbr: не маркированные -Кантон С, Орегон R, линия Т и маркированные: 1) waB, 2) у, 3) v, 4) ras v,

5) Df(l)vu/ In(l)FM61, yudse dm B/Dp(l;Y) v+/, 6)ycíB, l)yct/Dp (!;Y)y+

Линии, несущие мутантные аллели гена sbr:

1) l(l)ts№; bw; st, 2) ras l(l)ts403 v, Ъ)у cvl(l)ts403, 4)ycvsbr'° (l(l)ts403)/

Dp (1;Y) y+, 5) ras sbr', 6) Df(l)vu, ras mD/FM6l,y31dse8 dm B/Dp(l; Y) v+/>

7) l(l)24/45A (sbr12) /FM6, y se8 dm B, 8) l(l)K4 fcar (sbr5) /FM61, y se8 dm В /

Dp(l; Y) vV

А также гибриды, несущие различные комбинации аллелей гена sbr и не содержащие мутантных аллелей гена sbr.

Название линий и обозначения мутаций даны в соответствии со справочником (Lindsley, Zimm, 1992).

Развитие особей всех линий и гибридов происходило при температуре 24,0+0,5°С.

Методы

В работе были использованы следующие методы:

гибридологического анализа при определении частоты анеуплоидных потомков у самцов и самок-имаго, подвергнутых тепловому воздействию и облучению;

цитологические при анализе эмбриональных митозов у потомков самок и мейотических делений у самок D.melanogaster, гистологического анализа семенников при определении причин стерильности самцов D.melanogaster,

Нозерн-блот гибридизации; Вестерн-блот гибридизации; ОТ-ПЦР; секвенирования фрагментов ДНК; клонирования фрагментов ДНК, трансформации бактериальных клеток, выделения и очистки белка при получении антител к фрагменту белка SBR (Dm NXF1).

Автор приносит благодарность всем тем, кто сделал возможным выполнение данной работы:

Коллекция мутантов гена sbr была предоставлена И.Ф.Жимулевым, в лаборатории которого были получены также геномные клоны гена sbr.

Геномные Р1 клоны получены от M.Ashbumer (Великобритания).

Клон кДНК гена sbr получен от E.Izaurralde (Германия).

Большинство результатов с использованием молекулярных методов получено с участием И.В.Третьяковой, Г.Т.Лёзина и Н.А.Иванковой в Институте биофизики клетки (Пущино) и Э.О.Аванесян, Е.Г.Марковой, А.В.Маркова на базе фирмы Хеликс (Санкт-Петербург).

Антитела к С-терминальному фрагменту белка получены О.Маренковым (Институт биофизики клетки, Пущино).

Экспериментальные данные по мейозу у самок D.melanogasíer получены Е.В.Голубковой в совместных исследованиях с 8.Ыокка1а (Университет Турку. Финляндия).

Автор приносит благодарность ученикам и коллегам, принимавшим участие в данной работе, что отражено в публикациях:

И.В.Третьяковой, Ю.А.Куцковой, А.В.Кьергаард (Комаровой), Е.В.Голубковой, Е.А.Никитиной, И.В.Чуркиной, Н.Н.Костроминой,

О.М.Пугачевой, В.В.Касаткиной, А.А.Ацапкиной, А.С.Мусориной; О.С. Сотниковой, А.Н.Шершабовой, Е.П.Деминой, Л.В.Барабановой, О.Г.Зацепиной, Л.В.Бондаренко, Е.Л.Мазур.

Результаты и обсуждение

Исследуя эффекты теплового воздействия (ТВ) (37 °С, 1 ч) на самок линии 1(1)15403 с нарушенным синтезом БТШ, мы показали, что частота анеуплоидных потомков при таком воздействии составляет 4,9-6,1 % (Табл.1) и превышает регистрируемую при действии рентгеновых лучей в дозе 9,3 Гр (Мамон и др., 1990; 1998). Таким образом, у особей линии 1(1^403 при ТВ нарушенными оказываются два важнейших клеточных процесса: регуляция синтеза БТШ на посттранскрипционном уровне (Евгеньев, Денисенко, 1990) и расхождение половых хромосом в мейозе у самок D.melanogaster. Для понимания функции гена хйг важно было ответить на вопрос, связаны ли причинно-следственной связью эти проявления мутации 1(1^403 ($Ьг'°).

Поскольку синтез БТШ определяет формирование термотолерантности (ЬшсЦшб!, 1986), мы оценили ее формирование по различным признакам. Показали формирование термотолерантности по таким критериям, как выживаемость самок-имаго, повреждаемость яйцевых камер в овариолах, динамика яйцеоткладки. В то же время предварительное действие (35 °С, 1 ч) не снижает частоту нерасхождения и потерь половых хромосом в мейозе у самок при комбинированном воздействии (ТВ 35+37) по сравнению с ТВ (37 °С, 1 ч). Это заставило нас усомниться в том, что нарушение синтеза БТШ и нарушение расхождения хромосом при тепловом воздействии на самок линии 1(1)и403 связаны между собой причинно-следственной связью.

Влияние мутантного аллеля *Ъги (1(1)1x403) в компаунде с нулевым аллелем на фертильность самок ЪгозорЫЫ те1апода$1ег в условиях пермиссивной температуры

Для понимания функции гена яЬг особый интерес представляли такие проявления мутантного аллеля Ц1)1$403 (далее аЪги>), которые можно выявить, не прибегая к тепловому воздействию. Среди них - влияние мутации $Ьг'° в условиях пермиссивной температуры 24,5 ± 0,5 °С на репродуктивные функции самок. В наибольшей степени этот эффект проявляется, когда мутантный аллель бЬг'0 присутствует в одной дозе (Голубкова, 2004), т.е. на фоне делеции 0/(1)чи, удаляющей ген бЪг (Жимулев и др., 1982). Далее в тексте делеция В/(1)уи, являющаяся нулевым аллелем гена зЬг, для краткости будет обозначена - 0.

Таблица 1. Частота (%) исключительных самок и самцов в потомстве из последовательных суточных яйцекладок самок Кантон С и 1(1)и403 при различных воздействиях (Мамон и др., 1998)

Линия Сутки Вариант Число регулярных самок Частота (%) исключительных самок самцов

Контроль 1268 0,1 0,1

ТВ (35°С, 1 ч) 840 0,1 0,1

1 ТВ (37°С, 1 ч) 319 м 5J

ТВ (35°С, 1 ч) + (24.50С, 1,5 ч) +ТВ (37°С, 1 ч) 338 и.

Контроль 1437 0,1 0,1

1(1)Ш03 ТВ (35°С, 1 ч) 1393 0,1 0,1

2 ТВ (37°С, 1 ч) 1005 42 6J.

ТВ (35°С, 1 ч) + (24,5°С, 1,5 ч) +ТВ (37°С, 1 ч) 805 4J м

1-4 Контроль 4689 0,2 0,1

Кантон С 1 ТВ (37°С, 1 ч) 611 0,7 0,5

2 513 0,4 0,3

3 714 0,1 0,1

4 821 0,1 0,1

Примечание: Выделены жирным шрифтом и подчеркнуты значения в вариантах опыта, отличающиеся статистически значимо от контрольных (Р<0,05).

Доля неразвившихся яиц в потомстве самок хЬг10/0 и 0кЬг'°, полученных в результате реципрокных скрещиваний, статистически значимо превышает данный показатель для самок других исследуемых генотипов, составляя 72,9 и 82,8 %, соответственно (Табл.2). Причем основную долю составляют яйца без признаков развития или погибшие на ранних этапах эмбриогенеза. Самки генотипа зЪг10! О и О/яЬг10 отличаются от самок других исследуемых генотипов и по частоте появления личинок с нарушениями мальпигиевых сосудов, частота достигает 25%. Обычно аномальные личинки погибают на стадии первого возраста. В потомстве самок других исследуемых генотипов доля аномальных личинок не превышает 0,4% (Табл.2).

Самки генотипа яЬг10/0 отличаются от самок других исследуемых генотипов крайне низкой плодовитостью - не более 3 потомков на одну самку за одни сутки. Плодовитость самок по сравнению с самками дикого типа

снижена не более чем втрое и составляет около 10 потомков ($) на одну самку за одни сутки.

Поскольку плодовитость зависит от многих факторов, важно оценить вклад каждого из факторов в снижение плодовитости самок яЬг10/0.

Таблица 2. Показатели, определяющие плодовитость самок различных генотипов: продуктивность, гибель потомков на эмбриональной стадии и стадии личинки первого возраста (Голубкова и др., 2004)_____

Линии и Общее Среднее Эмбриональ- Общее Частота

гибриды число число яиц ная число аномаль-

отложенных на самку смертность, личинок ных

яиц за сутки % личинок, % от общего числа личинок

+ / + 7520 40,1 5,7 ± 0,27 5116 0,4 ± 0,06

{СаЫоп

+ 1БЪГш 2292 50,8* 3,1 ±0,36** 1917 0,2 ±0,10

вЬг'и1 + 2187 49,8* 6,5 ± 0,91 672 0,2 ±0,17

БЪгит 3234 47,9* 26,4 ± 0,78* 2153 0.2 ±0,10

и/яЬгш 4679 50,5* 26,4 ± 0,64* 3511 0,4 ±0,11

+ /0 3950 47,8* 26,6 ± 0,70* 2071 0,2 ±0,10

0 / + 3404 45,8* 29,2 ±0,78* 1938 0,4 ±0,14

+ /ьз 1741 47,1* 24,5 ± 1,03* 1300 0,2 ±0,12

¿3/ + 2150 48,4* 26,1 ±0,95* 1551 0,2 ±0,11

зЬ^/зЬг"' 5943 25,3** 14,7 ±0,46* 1804 0,4 ±0,15

зЪг'1' / 0 5309 25,0** 72,9 ±0,61 197 25,7 ±3,11 *

0 / эЬг10 3755 29,9** 82,8 ±0,61 *** 518 27,0 ± 1,95 #

Примечание: При обозначении генотипов гибридных самок, полученных в результате реципрокных скрещиваний, на первом месте указывается генотип материнской линии, используемой при получении соответствующих гибридов.

* Отмечены значения, превышающие статистически значимо при Р < 0,05 значения, полученные для самок + / +.

** Отмечены значения, которые являются статистически значимо при Р < 0,05 ниже таковых, полученных для самок + / +.

*** Отмечены значения, превышающие статистически значимо при Р < 0,05 значения, полученные для самок остальных исследуемых генотипов.

Самки генотипа хЬг'°Ю отличаются от самок других исследуемых генотипов крайне низкой плодовитостью - не более 3 потомков на одну самку за одни сутки. Плодовитость самок $Ъг'0ЬЬг10 по сравнению с самками дикого типа снижена не более чем втрое и составляет около 10 потомков (9) на одну самку за одни сутки.

Поскольку плодовитость зависит от многих факторов, важно оценить вклад каждого из факторов в снижение плодовитости самок зЬг10!0.

Хромосомная нестабильность при пермиссивной температуре, выявленная при анализе эмбриональных митозов у потомков самок, гемизиготных по мутации ¡(1)1x403 (чЬг")

Для выяснения причин ранней эмбриональной смертности в потомстве самок 5Ьг/С1/0, являющейся основной причиной снижения их плодовитости, анализировали яйца самок различных генотипов, собранные в течение не более трех часов после откладки (Голубкова, 2004; Оо1иЬкоуа е1 а1., 2006).

Среди нарушений раннего эмбрионального развития мы выделяли: асинхронность ранних митозов (Рис. 1 В), нарушения деления ядер (Рис. 1 Г-Е), несоответствие морфологии эмбрионов их возрасту, определяемому по времени развития от момента откладки яйца (Табл. 3).

Таблица 3. Частота эмбрионов с различными нарушениями раннего эмбрионального развития (%) в зависимости от генотипа родительских самок (ОоЫЬкоуа с1 а!., 2006)

Генотип родительских самок Число яиц (эмбрионов) Частота различных нарушений (%)

Асинхронность ранних митозов Нарушения митотических делений Задержка развития Один пронуклеус

+/+ 156 0,6 0,6 1,3 0

205 1,0 2,4 3,9 0

0/+ 124 1,6 1,6 24,2 0

зЪг'ЪЬг'" 99 2,0 12,1# 8,1 0

0 Ш'и 135 8,9* 14,1# 24,4 10,4*

Примечание: отмечены статистически значимые различия при Р<0,05 при сравнении: * -самок 0А6г'"и самок других исследуемых генотипов ; # - самок зЬг,а1$Ьг'0, ОЛбг'0 и самок других исследуемых генотипов

Характерной особенностью раннего эмриогенеза D.melanogaster является синхронность первых митотических делений дробления (Рис. 1 А,Б). В потомстве самок частота эмбрионов с асинхронными делениями достигает 8,9 %

(Табл.3), что статистически достоверно отличает самок ¿¿/■"'/О от самок других исследуемых генотипов. В норме синхронно делящиеся ядра ранних эмбрионов имеют одинаковые размеры и характеризуются определенным распределением в

Рисунок 1. Эмбрионы ДгаусрАг'/д melanogaster в возрасте 1 -1,5 ч после откладки яйца (окраска ОАР1). (Плоска - 10 цт) (Голубкова, 2004; Оо1иЬкоуа е1 а1., 2006)

А,Б - Нормальные эмбрионы в потомстве самок +/+. Деления ядер синхронные, ядра распределены равномерно. В - Е - Эмбрионы с нарушениями делений в потомстве самок ¡Ьг10 / 0 ; В -Ядра, имеют разные размеры, распределены неравномерно; Г - Асинхронные деления ядер. Д,Е - «Митотические катастрофы» - скопления хромосом, окруженные пустым пространством.

эмбрионе, зависящим от стадии развития (Рис. 1 А,Б ). У эмбрионов с нарушениями делений ядер можно было встретить области, в центре которых находилось скопление множества хромосом, окруженное пустым пространством (Рис. 1 Д,Е). Такие нарушения образно называют «митотическими катастрофами» (О'Эог й а!., 2006). Эмбрионы с нарушениями делений ядер в потомстве самок

гомо- и гемизиготных по sbr'a появляются с частотой 12,1 и 14,1 %, соответственно (Табл. 3).

Отличительной особенностью самок sbr10/0 является то, что только среди яиц, отложенных такими самками, с частотой 10,4 % встречаются яйца с одним пронуклеусом (Табл. 3). К сожалению, нам не удалось установить, является ли единственный пронуклеус мужским или женским.

Специфика раннего эмбриогенеза у D, melanogaster заключается в том, что первые 13 эмбриональных митозов происходят синхронно (Foe, Alberts, 1983; Ji et al., 2004) и контролируются факторами, запасенными в оогенезе (Edgar et al., 1994). До 8 цикла делений зиготические гены почти не экспрессируются (Pritchard, Schubiger, 1996), а, следовательно, нет необходимости в ядерно-цитоплазматическом экспорте мРНК. Полученные результаты позволили высказать предположение о том, что в контроль ранних эмбриональных митозов вовлечен материнский продукт гена sbr, запасенный в процессе оогенеза.

Регуляция экспрессии генов в раннем эмбриогенезе D. melanogaster происходит на уровне трансляции материнских мРНК, которые вначале трансляционно неактивны и могут быть активированы тогда, когда появляется потребность в соответствующем белке. Один из механизмов трансляционной активации в период раннего развития - цитоплазматическое полиаденилирование транскрипта (Groisman et al., 2002).

Нарушение синтеза белков теплового шока у мутантов l(l)ts403 (sbr1") -рецессивный признак, а повышенная частота анеуплоидных потомков -доминантный

Частоты исключительных особей в потомстве гетерозиготных по мутации sbr10 самок (sbrl0/+) имеют промежуточные значения по сравнению с подобными частотами в потомстве самок дикого типа и самок, гомозиготных по данной мутации. У гибридных самок генотипа sbr' / sbr10 частоты нерасхождения и потерь половых хромосом не отличаются от соответствующих частот, показанных для самок генотипа + / sbr10. Это позволяет заключить, что по данному признаку мутация sbr10 проявляет неполное доминирование, а мутации sbr10 и sbr' являются комплементарными.

Сравнение самок sbr'°/+ с самками Df(I)vu / + (0/+) по частоте анеуплоидных потомков свидетельствует о том, что не недостаток нормального продукта гена sbr, а именно присутствие мутантного белка SBR/0, влияет на расхождение половых хромосом в мейозе у самок, подвергавшихся тепловому воздействию. Можно предположить, что продукт мутантного аллеля sbr10 в результате тепловой модификации приобретает такие свойства, которые позволяют ему оказывать доминантное влияние на расхождение половых хромосом в мейозе у самок и последующих эмбриональных митозах в присутствии нормального продукта.

Рецессивный эффект мутации sbr10 в отношении синтеза БТШ при тепловом воздействии (Третьякова, 2000) и ее полудоминантный эффект в отношении расхождения хромосом указывают на то, что повышенная частота анеуплоидных

потомков у самок sbr10, подвергнутых тепловому воздействию, не является следствием нарушения синтеза БТШ.

Повышенная частота анеуплоидных потомков с нарушенным числом и набором не только отцовских, но и материнских половых хромосом, у подвергавшихся тепловому воздействию самцов, несущих мутацию l(l)ts403 (sbr10)

Для выяснения роли мутации l(l)ts403 (sbr ) в регуляции сегрегации хромосом в процессе клеточных делений исследовали нерасхождение и потери половых хромосом при тепловом воздействии (ТВ) (37 °С, 1 ч) на самцов D.melanogaster. Поскольку самцы-имаго, несущие мутацию sbr10, очень теплочувствительны и погибают при ТВ (37 °С, 1 ч) мы подвергали воздействию самцов в возрасте предкуколки или куколки (Комарова, 2002; Кьергаард, Мамон, 2007). Максимально зрелые половые клетки у самцов на стадии предкуколки, как правило, вступают в мейоз. Разработанная нами схема скрещиваний позволяла по фенотипу потомков определять, какой набор половых хромосом получил исключительный потомок.

Повышение частоты всех классов исключительных особей в потомстве

т ю

самцов sbr в основном приходится на период реализации спермиев, которые в период тепловой обработки находились на стадии мейоза. Так, при тепловой обработке куколок в возрасте 24, 48 и 72 ч частота исключительных особей была максимальной в потомстве, полученном от скрещивания в первые, вторые и третьи сутки, соответственно (Табл. 4).

Исходя из фенотипа исключительных потомков (фенотипические классы 1, 2, 6, 7, 8 и 9) можно заключить, что ТВ (37 °С, 1 ч) на мейоциты самцов, находившихся в момент воздействия на стадии куколки, приводит к нарушению сегрегации как отцовских, так и материнских половых хромосом.

Особенность данного объекта заключается в том, что к моменту оплодотворения в сперматоците дрозофилы мейоз уже завершен, а ооцит находится на стадии метафазы первого деления мейоза (Huettner, 1924; Cooper, 1950). Проникновение спермия в яйцо индуцирует цепь цитологических событий, быстро сменяющих друг друга. Материнское ядро заканчивает мейоз и сближается с мужским пронуклеусом. Возможно, спермий привносит в зиготу какие-то факторы, способные повлиять на сегрегацию материнских хромосом после оплодотворения.

Известно, что при оплодотворении вместе со спермием в яйцеклетку попадают отцовские хромосомы, компоненты ядерной мембраны и центросома, а также ассоциированные с ними белки и растворимые белки цитоплазмы (Riparbelli M.G., Callaini , 1996; Callaini G„ Riparbelli, 1996; Palermo et al„ 1994). Показано, что у D.melanogaster в яйцеклетку проникает весь сперматозоид, включая хвост (Karr,1991; Кагг, Pitnick,1996). Полученные данные указывают на то, что факторы, влияющие на расхождение хромосом после оплодотворения, проявляют наибольшую теплочувствительность в период мейоза у самцов.

Таблица 4. Частота исключительных потомков, полученных от скрещивания интактных самок у а В с самцами у сп> лЪг10 Юр (1 ;У) у+, подвергнутыми тепловому воздействию (37 °С, 1 ч) на стадии куколки (Кьергаард, Мамон, 2007)

Вариант Возраст куколок в момент воздейст вия, ч Номер суточ ной пере кидки Число потом ков Частота исключительных потомков следующих фенотипов, %

1 Самки с1В 2 Самцы у СУ стериль ные 3 Самки +/В 4 Самцы уйВ стериль ные 5 Самцы у йВ фертиль ные 6 Самцы СУ стериль ные 7 Самцы СУ фертиль ные 8 Самки у «В 9 Самки у СУ

Опыт 24 1 1182 1,9* 1,0* 1,7* 1,9* 1,7* 0,4 1,6* 1,3* 0,3

2 1240 1,6* 0,8* 1,5* 1,5* 1,6* 0,2 1,3* 1,3* ОД

3 1341 0,5 0,2 0,2 0,9* 0,9* 0,1 0,6 0,9* ОД

Опыт 48 1 1109 0,3 0,1 0,4 0,4 0,3 0,2 0,2 0,5 0

2 1245 2,1* 1,9* 2,0* 1,8* 1,0* 0,3 2,2* 1,6* 0,2

3 1324 1,5* 0,6 1,4* 1,0* 1,2* 0,2 1,3* 1,3* 0,4

Опыт 60 1 1290 0 0 0,2 0,2 0,4 0,2 0,5 0,4 ОД

2 1280 ОД 0,1 0,2 0,1 0,9* од 0,3 0,5 ОД

3 1387 1,2* 0,9* 1,6* 1,4* 1,0* 0,4 2,2* 2,2* 0,3

Контроль 1 1233 0 0 0,1 0,1 0,5 0 0 0 0

2 1369 0 0 0,1 0,2 0,3 0 0 0 0

3 1407 0 0,1 0 0,1 0,4 0 0 0 0

Примечание: * - статистически значимые отличия данных в опыте от соответствующих данных в контроле при уровне значимости Р<0,05. Возможные причины возникновения исключительных особей:

1 - нерасхождеие материнских Х-хромосом; 2 - потеря материнских половых хромосом; 3 - нерасхождение отцовских X и У-хромосом или транслокация участка, маркированного у+, на отцовскую Х-хромосому ; 4 - потеря отцовских половых хромосом; 5 - утрата маркера У-хромосомы; 6 - потеря материнских Х-хромосом и транслокация участка, маркированного у+, на отцовскую Х-хромосому; 7 -нерасхождение отцовских X и У-хромосом и потеря материнских половых хромосом; 8 - нерасхождение материнских Х-хромосом и потеря отцовской половой хромосомы или нерасхождение материнских Х-хромосом и утрата участка У-хромосомы, маркированного у+; 9 -нерасхождение отцовских Х-хромосом и потеря материнской Х-хромосомы.

Более высокая частота появления исключительных особей в потомстве подвергнутых ТВ (37 °С, 1 ч) самцов, несущих мутацию sbr10, позволяет предположить, что этот фактор, попадающий в яйцеклетку вместе со спермием и способный повлиять на расхождение хромосом после оплодотворения, может быть продуктом гена sbr, взаимодействовать с ним или формироваться при его участии. Поскольку мы наблюдали эффект только в том случае, когда действовали на мейоциты самцов, и не наблюдали эффекта при действии на постмейотические половые клетки, первые два предположения кажутся менее вероятными, поскольку не объясняют, почему при действии на более поздние стадии сперматогенеза эффект отсутствует.

Известно, что веретено первого митоза дробления у D.melanogaster формируется из материала ооцита с участием отцовской центросомы, в то время как ооцит своей центросомы не содержит (Schatten, 1994; Riparbelli., Callaini, 1996; Callaini., Riparbelli, 1996). Это позволяет предположить, что с центросомой в ооцит могут попадать факторы, способные повлиять на поведение хромосом в период деления. Наиболее подходящими на роль таких факторов являются мРНК, поскольку небольшое количество этих молекул за счет трансляции может обеспечить построение аппарата расхождения хромосом и необходимый контроль периодичности его функционирования. Это особенно важно в первые часы эмбрионального развития D.melanogaster, которые протекают в отсутствие транскрипционной активности зиготического генома (Edgar, Schubiger, 1986,).

Гибридологический анализ позволяет увидеть последствия нарушений поведения хромосом в клеточных делениях, но не дает возможности увидеть те нарушения, которые приводят к появлению анеуплоидных потомков, поэтому нами был проведен цитологический анализ мейоза у самок, несущих мутантные аллели гена sbr, молекулярная природа которых была известна к этому моменту.

Доминантные проявления мутантных аллелей гена Dm nxß (sbr)

Высокая частота трехполюсных веретен деления в мейозе у самок sbr5/+

Цитологический анализ мейоцитов показал, что самки sbr10, sbr5/sbr10 , +/sbr} и в особенности самки sbr10/ О, характеризуются высокой частотой нарушений первого деления мейоза (Табл.5). При этом основными нарушениями являются изменения морфологии веретена (сужение, искривление), изменения числа хромосом и их положения на веретене (Рис. 2Б;). Самая высокая частота нарушений мейоза наблюдается у самок О/ sbr10. Она достигает 73% (Табл. 5). Самки sbr5/sbr10 имеют более низкую частоту нарушений мейоза, составляющую 38,5 %, а частота нарушений мейоза у самок, гомозиготных по мутации sbr'°/sbrw, составляет 17,9 % (Табл. 5). Интересно отметить, что самки + / sbr5 имеют высокую частоту аномалий первого мейотического деления - 43,4 %, а самки + / sbr10 - на порядок более низкую - 4,5 %.

Для самок, несущих аллель sbr'0 к при этом не несущих аллеля дикого типа, наиболее характерными являются нарушения индивидуализации бивалентов на метафазной пластинке (Рис, 2Б и В). Очень часто хромосомные биваленты вообще не разделяются, представляя собой единую массу хроматина (Рис. 2В). У самок sbr5 /+ доля таких нарушений составляет только 7 % и значительную долю

Таблица 5. Частота нарушений первого деления мейоза у самок Drosophila melanogaster,

Генотип самок Частота аномальных делений первого деления мейоза (%) Объем выборки (число проанализированных делений)

+/+ 1,7±1,2 115

0/+ 3,2±1,8 95

+/sbrw 4,5±2,2 89

sbr'°/sbrw 17,9±3,6*- 112

0 Isbr'0 73,3±4,3*#л 105

sbrlsbr10 38,5±5,1*# 91

+lsbr5 43,4±5,0* 99

Примечание-. Отмечены статистически значимые различия при Р<0,05:

* - между самками генотипа +/+ и самками других исследованных генотипов;

# - между самками генотипа ОЬЬг и генотипа ¡Ьг'Ыг10;

Л - между самками генотипа ОЛАг" и самками других исследованных генотипов; ■ - между самками збг^/збг" и самками других исследованных генотипов

нарушений (около 30 %) составляют трехполюсные деления (Рис. 3, Рис.2Г). У самок, несущих аллель яЪг10, трехполюсные деления не выявлены (Рис. 3). Поскольку частота нарушений мейоза у самок бЬг5 ЫЪг10 значительно ниже, чем у самок 0/ ¡Ьг , можно заключить, что аллель «¿г5 не является нулевым. Более того, аллель зЬг5 характеризуется доминантным проявлением на фоне аллеля яЬг+ -образованием трехполюсных веретен деления (Рис. 2Г), что указывает на наличие мутантного продукта БВЯ5, оказывающего доминантно-негативный эффект.

У самок встречаются деления с редуцированным числом бивалентов

(Рис.2Б). Редукция числа бивалентов могла произойти в результате потери хромосом в предшествующих митозах. К потерям хромосом может приводить и преждевременное разделение хроматид в первом делении мейоза (Рис. 2Д).

„Й*1'

-—

Рисунок 2. Первое деление мейоза у самок £>го.$о/>/)г7а оте/аио^а5<ег (СоЫЬкоуа е1 а1., 2009).

А) Нормальная метафаза первого мейотического деления у самки +/+ (Полоска, 5 цт).

Б, В) Аномальные метафазы первого мейотического деления у самки зЬг10/0 (Б - узкое веретено, уменьшено число бивалентов, В - веретено искривлено, нарушена индивидуализация бивалентов).

Г) Трехполюсная анафаза первого мейотического деления у самки

Д) Преждевременное разделение хроматид Х-хромосомы с отставанием одной хроматиды в первом делении мейоза у самки ¡Ьг10/0.

Е) Нерасхождение половых хромосом (обе Х-хромосомы отходят к одному полюсу) в первом делении мейоза у самки ¡Ьг1 /0.

Примечание: нарушения первого мейотического деления проявляются в изменении морфологии веретена (Б-Г) и числа хромосом (Б), а также в нарушении расхождения хромосом (Д и Е).

!■! 02 ИЗ Е34 05

Рисунок 3. Доля различных типов нарушений первого деления мейоза у самок ОгозорЫ\а те1апо§а$1ег, имеющих статистически значимое превышение частоты отклонений от нормы, в зависимости от генотипа (Со1иЬкоуа е1 а1., 2009)

Типы нарушений первого деления мейоза: 1 - трехполюсные деления; 2 - измененная форма веретена; 3 - нарушение индивидуализации бивалентов; 4 - потери и нерасхождения хромосом; 5 — прочие.нарушения.

Примечание: у- отмечены показатели, отличающиеся статистически значимо (при Р < 0,05), от показателей, полученных для самок остальных исследуемых генотипов.

указывает на наличие мутантного продукта SBR5, оказывающего доминантно-негативный эффект.

У самок встречаются деления с редуцированным числом бивалентов

Итак, обе исследованные мутации вызывали нарушения первого деления мейоза у самок, проявляя аллеле-специфичные эффекты. Для понимания функциональной значимости определенных частей продуктов гена sbr важны данные о природе мутантных аллелей.

Мы показали, что делеция sbr5 затрагивает С-терминальную часть белка SBR (Golubkova et al., 2009), т.е. участок, отвечающий у белков-ортологов за связь с нуклеопоринами (Bachi et al., 2000; Izaurralde, 2001; Grant et al., 2002). Делеция приводит к утрате части домена NTF2-like и гибкого линкера, связывающего домен NTF2-like с доменом UBA-like.

Учитывая высокую степень гомологии факторов NXF1 и отсутствие данных о белках-партнерах фактора Dm NXF1, можно обратиться к данным, известным для фактора NXF1 млекопитающих. Среди белков, взаимодействующих с фактором NXF1 и способных оказать влияние на формирование веретена деления, известны фактор Gle2/Rael (Bachi et al., 2000) и белки, взаимодействующие с микротрубочками MAPI А и MAP IB (microtubule associated protein) (Tretyakova et al., 2005). Причем за взаимодействие с белком Rael, который вовлечен в контроль клеточных делений, ответственна именно С-терминальная часть белка Hs NXF1 (ТАР) (Bachi et.al., 2000; Blevins et al., 2003).

Факторы, участвующие в формировании полюсов веретена, как возможные партнеры белка Dm NXF1 (SBR).

Характерной особенностью мейоза у самок многих организмов, в том числе и D.melanogaster, является то, что веретено мейотического деления формируется в отсутствии центросом и астральных МТ (Compton, 2000). Центрами нуклеации пучков микротрубочек, которые по мере их роста фокусируются на полюсах деления, являются хромосомы (McKim, Hawley, 1995). Короткие МТ отходят от хромосом еще до образования веретена первого деления мейоза у D.melanogaster (Hatsumi, Endow, 1992).

Процесс формирования анастрального веретена у D.melanogaster происходит в несколько этапов. Первый этап наступает после разрыва ядерной оболочки, когда МТ взаимодействуют с хромосомами (Theurkauf, Hawley, 1992; Skeld et al., 2005). Возможно, такое взаимодействие способствует индивидуализации бивалентов и превращению компактной массы хроматина кариосомы в дискретные биваленты, хорошо различимые на метафазной пластинке. МТ облепляют хромосомы и отталкивают биваленты друг от друга. На следующем этапе построения веретена деления очень большую роль играют процессы латерального взаимодействия МТ и их перемещения относительно друг друга (Skóld et al., 2005). По мере удлинения МТ происходит их фокусирование на полюсах веретена, что способствует выравниванию бивалентов на экваторе метафазной пластинки (Theurkauf, Hawley, 1992; Heald et al., 1996).

У мутантов по гену sbr нарушается, как процесс индивидуализации бивалентов хромосом на метафазной пластинке (Рис. 2В), так и их выравнивание в области экватора (Рис. 2Е). Кроме того, веретено первого деления мейоза у мутантных самок sbr'0 (Рис. 2Б,В) часто выглядит более узким, чем у самок, имеющих хотя бы один аллель дикого типа (Рис. 2А). Поскольку описываемые нами аномалии первого деления мейоза связаны, прежде всего, с нарушениями веретена деления, важно понять, на каких этапах формирования веретена деления (захват МТ хромосомами, нуклеация МТ, рост и стабилизация концов МТ, а также образование поперечных сшивок между МТ и их фокусирование на полюсах веретена) требуется участие белка SBR. Нарушение индивидуализации бивалентов и их выравнивания на метафазной пластинке (Рис.2Б,Е; 3) у самок, несущих аллель sbr'0, позволяет предположить, что белок SBR может иметь отношение к комплексам, взаимодействующим с плюс-концами МТ и участвующим в стабилизации МТ. Эти комплексы играют важную роль в поиске и захвате хромосом микротрубочками (Schuyler, Pellman, 2001; Hayashi et al., 2005).

Высокая частота трехполюсных метафаз у самок sbrs/+ позволяет предположить, что белок SBR нужен и для формирования полюсов веретена. Интересно, что образование трехполюсных веретен в мейозе I наблюдается только в том случае, когда мутантный белок SBR5 присутствует наряду с нормальным белком SBR, т.е. у самок +/sbr5.

На первый взгляд кажется парадоксальным отсутствие трехполюсных веретен в мейозе I у самок sbr5/ sbr'0. Однако, если принять во внимание различия между самками sbr5/ sbr'0 (55 %) и +/sbr5 (7 %) по признаку нарушение

индивидуализации хромосом на метафазной пластинке (доля таких нарушений указана в скобках) можно предположить, что образование терхполюсных веретен деления происходит только в том случае, когда доля нарушений индивидуализации хромосом на метафазной пластинке не велика (около 7 %).

Фокусирование МТ на полюсах происходит в результате скольжения макромолекулярных комплексов в направлении минус-конца МТ, в результате такого скольжения происходит установление поперечных сшивок между МТ.

Данные о нарушениях организации хромосом на метафазной пластинке и веретена первого деления мейоза у самок D.melanogaster, несущих различные комбинации аллелей яЬг, а также результаты, представленные ранее, свидетельствуют в пользу того, что участие фактора БВЯ в формировании аппарата деления клетки может представлять собой одну из специализированных функций данного фактора.

Доминатные эффекты аллеля иЬг'2 - стерильность и нарушение сексуального поведения самцов ъЬг'2! Ор(1;У)у+ у+

Доминатные эффекты характерны и для аллеля яЬг'2 (1(1)24/45А)- это нарушение фертильности и сексуального поведения самцов, несущих аллель ьЪг11 в гетерозиготном состоянии (Третьякова, 2000; Касаткина, 2007). Данная мутация является летальной в гомо- и гемизиготе (Еекеп сп а1., 1985). Однако на фоне нормального аллеля бЬг+, транслоцированного в У-хромосому, можно получить жизнеспособных самцов, хотя их жизнеспособность значительно снижена по сравнению с особями других генотипов - самцами-сибсами или самками-сибсами.

Анализ нефиксированных препаратов содержимого семенника и семенных пузырьков показал, что у самцов, гетерозиготных по гену хЬг'2, как правило, отсутствуют подвижные сперматозоиды, а сперматозоиды самцов-сибсов РМбч, у VВ/Ир (1;У)у+у' подвижны.

Аллель вЬг12имеет делецию размером 30 нуклеотидов в экзоне 9 - с!е1(13075-13104). При этом рамка считывания не нарушается. Таким образом, в предполагаемом белковом продукте мутантного аллеля $Ьг12, по сравнению с нормальным белком БВЯ, удалены 10 аминокислот ТШГШАТНЕ с 526 по 535. Первые 4 из 10 делетированных аминокислот относятся к домену !\ТТР2-Нке, а остальные 6 аминокислот принадлежат участку, соединяющему домены ЫТР2-Нке и иВА-Нке.

Отличительной особенностью сперматогенеза многих животных, включая D.melanogaster, является то, что транскрипция генов идет не только в интерфазных диплоидных, но и в мейотических и даже гаплоидных клетках (К1еепе, 2001, 2003). При этом существует множество различных мРНК, трансляция которых происходит не сразу после транскрипции. В течение нескольких суток транскрипты могут сохраняться в состоянии недоступном для трансляции. Активная трансляция таких транскриптов происходит в период спермиогенеза (К1еепе, 1996, 2003; Kotaja е1 а1., 2006). Спермиогенез - это процесс превращения сперматид в зрелые сперматозоиды, характеризующийся формированием сложных морфологических структур, которые наделяют сперматозоид функциями одноклеточного организма, способного улавливать

сигналы из окружающей среды и направленно перемещаться, конкурируя с другими сперматозоидами в активном поиске яйцеклетки. В период спермиогенеза активируется трансляция мРНК, находящихся в составе комплексов РНП, блокирующих трансляцию (Kleene, 2001, 2003; Hawthorne et al., 2006; Iguchi et al., 2006). Сохранение в неактивном состоянии важно и для таких мРНК, которые попадают в яйцеклетку вместе со сперматозоидом и могут иметь значение для оплодотворения, слияния пронуклеусов и эмбрионального развития (Ostermeier et al., 2004).

Возможно, в формировании комплексов РНП принимает участие и белок Dm NXF1. Полученные нами данные позволяют предполагать, что в процессе сперматогенеза белок Dm NXF1 участвует в формировании факторов, попадающих в яйцеклетку вместе со сперматозоидом и влияющих на расхождение как отцовских, так и материнских хромосом в период эмбриональных делений (Кьергаард, Мамон, 2007).

Самцы, несущие мутацию sbr12, имеют нарушения не только сперматогенеза, но и сексуального поведения - они не спариваются с девственными самками в течение первых 90 мин после их объединения. В то время как более 70 % самцов-сибсов FM6v, у v В/ Dp (l;Y)yr v+ спариваются с самками в течение первых 15 мин, а через 30 мин этот показатель для самцов без мутации sbr'2 достигает 100 %.

Важно отметить, что белки, взаимодействующие с мРНК в цитоплазме и участвующие в регуляции их трансляции, нередко вовлекаются в контроль и поведения, и сперматогенеза (Chennathukuzhi et al., 2003; Yang et al., 2004; Zhang et al., 2004).

Мутация sbr12 нарушает жизненно-важные функции, оказывая рецессивный летальный эффект в геми- и гомозиготном состоянии, который компенсируется присутствием аллеля дикого типа. В то время как нарушения специализированных функций данного фактора, определяющих подвижность сперматозоидов и сексуальное поведения самцов, проявляются на фоне присутствия продукта нормального аллеля.

Известно, что у млекопитающих факторы NXF2 и NXF3, специфичные для семенников, отличаются от фактора NXF1 либо последовательностью LRR, либо С-терминальной частью молекулы. Цитоплазматическая локализация соответствующих белков предполагает существование цитоплазматических функций (Herold et al., 2000; Sasaki et al., 2005) и наличие цитоплазматических бел ков-партнеров.

Полиморфизм продуктов как возможный источник плейотропиого действия гена Dm nxfl (sbr).

Полиморфизм транскриптов гена Dm nxfl (sbr)

Существование аллелей гена sbr, характеризующихся специфичными доминантными проявлениями и сложными межаллельными взаимодействиями, позволило предположить, что специализация функций гена Dm nxfl может происходить за счет существования дополнительных продуктов гена. Известно, что благодаря полиморфизму транскриптов и белковых продуктов функциональные возможности гена значительно расширяются (Câceres,

Kornblihtt, 2002). К источникам полиморфизма транскриптов можно отнести: альтернативный сплайсинг (включая сохранение интронов), использование альтернативных промоторов или терминаторов транскрипции, использование альтернативных сайтов полиаденилирования и изменение степени полиаденилирования. Для генов семейства nxf описаны почти все названные источники полиморфизма транскриптов (Herold et al., 2000; Jun et al., 2001; Sasaki et al., 2005), однако связь полиморфизма со специализацией белков данного семейства определена недостаточно.

Для проверки предположения о том, что гену sbr (Dm nxfl) может соответствовать несколько продуктов, используя метод Нозерн-блот-гибридизации, исследовали характер экспрессии гена на уровне транскрипции в зависимости от органа, части тела или стадии онтогенеза (Иванкова и др., 2009; lvankova et al., 2010).

Поскольку мутанты по гену sbr характеризуются, прежде всего, дефектами репродуктивной и нервной систем, мы анализировали экспрессию гена sbr в семенниках, яичниках и головах взрослых насекомых, а также в нервных ганглиях и слюнных железах личинок третьего возраста. Для анализа экспрессии гена sbr разделенную путем гель-электрофореза тотальную РНК из исследуемых образцов гибридизовали с двумя зондами: PI (фрагмента Sacl-Xbal из геномного субклона DS03615) и AJ (кДНК sbr).

Характер экспрессии локуса small bristles

По результатам Нозерн-блот-анализа гену sbr соответствуют, по крайней мере, четыре транскрипта, размеры которых 1,9 т.н., 2,8 т.н., 3,0 - 3,5 т.н. и 5,1 т.н. (Рис. 4). Транскрипт 3,5 т.н. представлен во всех исследуемых нами образцах и вероятно соответствует известной мРНК sbr - 3283 н. (GenBank AJ251947, AJ318090, NM_079921) (Herold et al., 2001; Korey et al., 2001; Wilkie et al., 2001), варьирование размера транскрипта в интервале 3,0 - 3,5 т.н. может быть связано с характером и степенью цитоплазматического полиаденилирования. С таким предположением согласуется присутствие в 3'UTR мРНК sbr сайтов цитоплазматического полиаденилирования.

12 3 4

Рисунок 4. Транскрипты гена Dm nxfl (sbr) Drosophila melanogasler, выявляемые в различных органах личинок и имаго методом Нозерн-блот гибридизации с зондом AJ (lvankova et al., 2010) Примечание. М - молекулярные маркеры с указанием размера в нуклеотидах; 1- РНК из яичников взрослых самок в различных концентрациях; 2 - РНК из семенников взрослых самцов; 3 - РНК из нервных ганглиев личинок третьего возраста; 4 - РНК из слюнных желез личинок третьего возраста.

Три других транскрипта - 1,9 т.н., 2,8 т.н. и 5,1 т.н. являются специфичными. Если транскрипты 1,9 т.н. и 2,8 т.н. характерны для семенников,

то транскрипт 5,1 т.н. по нашим данным специфичен для нервной системы. Появление специфичных транскриптов возможно определяется специализацией соответствующих белковых продуктов в отношении особых мРНК или связано с особенностями посттранскрипционной регуляции экспрессии самого гена Dm nxfl.

Локус small bristles в геноме D.melanogaster является генетически сложным. В данном локусе располагается несколько предсказанных генов (Flybase, 2009), и гену sbr соответствует предсказанный ген CG1664. Данный ген включает 10 экзонов и 9 интронов (Herold et al., 2001) (Рис.5) и имеет протяженность 14 344 п.н. Предполагаемая полностью сплайсированная мРНК sbr (кДНК, CG1664-RA, EMBL) включает 5'UTR (504 н.), 3'UTR (760 н.) и кодирующую область гена (2019 н.). Около 61% всей ДНК гена приходится на интрон 3-4 размером 8892 н.

inn «и - »«.о? %<тя

■ ■к I шишига*

ии,1-4 ' »89»

-•*•> 1 - 61« »км.4 - »г -•►•» - }7

___ в id ч»1 •• - .110 вка,7 - 230

ЭКМ .4 ~ 1И

m» , я « Viz

»ка.з - 93 9 _ 4Г>

.to - a^ù

Рисунок 5. Структура локуса sbr у Drosophila melanogaster. Указаны размеры экзонов и интронов в н.п.

Сперматогенез нуждается в существовании тканеспецифичных изоформ NXFs

Согласно нашим данным (Ivankova et al., 2010) в семенниках представлены специфичные мРНК sbr - 1,9 т.н. и 2,8 т.н., в то время как соответствующие короткие транскрипты Hs nxfl и Mm nxfl не описаны (Herold et al. 2001; Sasaki et al., 2005). Возможно, существование транскриптов гена Dm nxfl (sbr), специфичных для семенников, отражает начальные этапы дивергенции генов nxf в пределах генного семейства. У млекопитающих специализация функций произошла за счет появления специализированных генов-паралогов nxfl и nxfl, экспрессия которых наблюдается в семенниках или и в семенниках и мозге (Herold et al., 2000; Wang et al., 2001 ; Sasaki et al., 2005).

Характеристика интрона 5-6 Dm nxfl: структура, эволюционная консервативность и функциональная значимость

Мы предположили, что транскрипт 5,1 т.н. включает интрон 5-6 (1602 н.). Аналогичный вариант сплайсинга описан для генов Mm nxfl мыши (Sasaki et al., 2005) и Hs nxfl человека (Li et al., 2006), являющихся ортологами гена Dm nxfl дрозофилы (Herold et al., 2000). Сохранение интрона - одна из форм альтернативного сплайсинга (Black, 2003; Forrest et al., 2004; Galante et al., 2004; Hiller et al., 2005; Ohler et al, 2005). Интрон-содержащие мРНК имеют ограничения на этапе транспорта из ядра в цитоплазму и в период трансляции (Chang et al. 1990; Hammarskjöld, 2001). Однако РНК вирусов, содержащие интроны, экспортируются из ядра благодаря тому, что содержат последовательность СТЕ (constitutive transport element), которая непосредственно

взаимодействует с белком Hs NXF1 (ТАР), участвующим в экспорте клеточных мРНК (Grüteret al., 1998).

мРНК Hs nxfl, содержащая интрон 10-11, активно транслируется в культуре клеток и производит белок, состоящий из 356 а.к., из которых 18 С-терминальных аминокислот соответствуют последовательности интрона 10-11, предшествующей первому стоп-кодону в данном интроне (Li et al., 2006).

Выравнивание ортологичных последовательностей показало, что, как у Н.sapiens, так и у M.musculus в генах Hs nxfl и Mm nxfl экзоны 10 и И соответствуют экзонам 5 и 6 в гене sbr (Dm nxfl) (Herold et al., 2000; Sasaki et al., 2005). Причем у всех трех видов существует не только гомология, но и соответствие размеров экзонов, между которыми не вырезается интрон. Экзон, расположенный слева от невырезанного интрона 5-6 (Dm nxfl) или 10-11 (Hs nxfl и Mm nxfl), составляет 110 н., а экзон, расположенный справа - 37 н. (Рис.5). Сохранение гомологичных интронов в транскриптах ортологичных генов nxfl является консервативным в эволюции, указывая на функциональную значимость не только интрона, сохраняемого в транскриптах, но и всего блока экзонов и интрона между ними.

Состав альтернативных транскриптов гена sbr (Dm nxfl)

Сохранение интрона в транскрипте 5.1 т.н.

Предположение о том, что транскрипт 5,1 т.н. является результатом недосплайсинга и сохраняет интрон 5-6, подтвердили, используя метод ОТ-ПЦР. Нам не удалось амплифицировать фрагмент, содержащий интрон 5-6 целиком, возможно, из-за сложной вторичной структуры, которую формирует РНК, в состав которой входит данный интрон. Для доказательства включения интрона 56 в состав транскриптов гена sbr использовали пару праймеров, один из которых -прямой - ех4 (Fl) - локализован в экзоне 4, а другой - обратный - in5-6 (R) - в интроне 5-6. В качестве исходного материала служила РНК, выделенная из семенников или из голов и яичников взрослых мух. Показали, что если в качестве исходного материала используется РНК, выделенная из голов и яичников взрослых особей, то амплифицируется фрагмент размером 659 п.н., а если РНК, выделенная из семенников, то фрагмент ожидаемого размера присутствует в незначительном количестве (Рис. 6А).

По результатам секвенирования полученный фрагмент содержит часть интрона 5-6, экзон 5 и часть экзона 4 и не содержит интрон 4, что подтверждает РНКовое происхождение фрагмента. Аналогичные результаты получены при использовании прямого лраймера в экзоне 1 - exl (F) - и обратного в интроне 5-6.

Специфичный для семенников транскрипт 2,8 т.н.

К появлению коротких транскриптов, специфичных для семенников, может привести: использование альтернативного промотора, альтернативный сплайсинг, приводящий к вырезанию экзона(ов) или части экзона(ов) и использование альтернативного сайта терминации транскрипции или полиаденилирования. Методом ОТ-ПЦР, используя два разных прямых праймера в экзоне 4 - ех4 (Fl) или ех4 (F2) - и обратный праймер - exlO (R4), комплементарный некодирующей последовательности экзона 10 (Рис. 7), показали, что в семенниках D.melanogaster отсутствуют полноразмерные транскрипты гена Dm nxfl (Рис. 6Б).

А Б

Рисунок 6. Результаты ОТ ПЦР при определении сохранения интрона 5-6 в транскриптах гена sbr (Dm nxfl), присутствующих в разных органах или частях взрослых особей D.melanogaster (Аванесян, 2009)

А-Праймеры- ех4 (F1) и in5-6 (R). Ожидаемый размер фрагмента-659 п.н. Дорожки соответствуют вариантам ОТ-ПЦР с использованием РНК из разных органов и частей тела взрослых особей D.melanogaster: 1 - семенники; 2 - головы; 3 - яичники (А); нечетные -семенники, четные - головы (Б). M - шкала размера транскриптов (н.п.). Б- Дорожки 1 и 2 : праймеры - exl (F) и ех5 (R). Ожидаемый размер фрагмента - 973 п.н. Дорожки 3 и 4 : праймеры - ех4 (F1) и exlO (R4). Ожидаемый размер фрагмента- 1951 п.н. Дорожки 5 и 6 : прямой праймер - ех4 (F2) и exlO (R4). Ожидаемый размер фрагмента-1549 п.н.

Результаты ОТ-ПЦР позволили заключить, что транскрипты гена Dm nxfl, присутствующие в семенниках, укорочены с З'-конца. Это предположение подтвердили результаты ОТ ПЦР с использованием прямого праймера - ех9 (F), и пяти обратных праймеров в экзоне 10 (Рис.7).

Поскольку размер транскрипта уменьшается за счет 3'UTR, транскрипту 2,8 т.н. может соответствовать полноразмерный белок Dm NXF1 (SBR) известной молекулярной массы 74 kDa. Укороченные транскрипты гена Dm nxfl, присутствующие в семенниках, лишены последовательностей, важных для осуществления цитоплазматического полиаденилирования и регуляции их трансляции (Рис. 7).

Специфичный для семенников транскрипт 1,9 т.н.

Размер самого короткого транскрипта (1,9 т.н.), специфичного для семенников, свидетельствует об альтернативном сплайсинге или использовании альтернативного промотора. Поскольку, используя разные пары праймеров, мы не смогли выявить случаи альтернативного сплайсинга, способного сделать

AUCGCAUAGGAGUOTCCGUAGGACAGAGCCGCGUGCCACATCCACATAATCGAATGCUGUUUUUUUUU UUUUGGUUUUGUAAUUAAAUUUUAAAAUDAUUAGAGAAACCUCUAUAUAAUAAUAAUAAUUAAUAOUA UUAAGCUGCGAAGUUGUGUGCACAUUCGGGCAGUAGCAAUUAUUAUCCCAGCACUGCGGGCAAUGUGC AUCAACGAUCACAGUUCUUCGAUAGAUUAGUUUAGCUCUCUUUAAGUUCCGUCCGCAGAUCCGCUGGU CDACADUGAGGCCAGGACGAGUCUGCGAACGGUAGUCCCaUOAGAGUUAAAGUUGUUUUAGAUUCCUA AGCCAAACACCUUCAAACACACACAACACGACAACACUAUUAAACGUAAUGCAACAAUGUUGUCGAAU CGAAAGAAACCCAAUUUUUAUUUUAAUAUAUACGACGAaACCGAAACCAAGGCGAljGGUCGAAAAGCA UGGAUCGCGCCAAUAAUUCUADAUUCCCCGCUUOCCCAGAUCCUCGACUCGCCUUACAUOUUGUAUAC AAAUACCAUAGAAUAAAAAGAAACAUUUUGACCACUGUAAAAAOUUUGUAACGCUCGGAAACCAAAAU UACCUUUAUTOCUUAAUAGAAAAAAAUUAUUCGAUUUACAAUACACGCUUAGCCGUAAAUUCAAUUGA AUUUAAGUGUAAGAUAUAUAAAAAUOAUAUACAUUAAGACAAAAGUGUAGAUUCAUAAAUAAAUUOUU CAGAAUAGAAU - 3'

Рисунок 7. Фрагмент последовательности мРНК Dm nxfl, соответствующий 3'-нетранслируемому району (3'UTR)

Примечание: жирным шрифтом выделены: последовательности отвечающие за цитоплазматическое полиаденилирование транскриптов - это CPE - cytoplasmic polyadenylation element - UUUUUAU, взаимодействующий с фактором СРЕВ - CPE-binding protein и два гексануклеотида (AAUAAA), взаимодействующие с фактором CPSF - cytoplasmic polyadenylation stimulator factor; темно-серым цветом отмечены последовательности, комплементарные обратным праймерам, не дающим результата при проведении ОТ-ПЦР на основе РНК из семенников; серым - последовательности, комплементарные обратным праймерам, позволяющим получить амплифицируемый фрагмент во всех исследуемых пробах.

транскрипт гена Dm nxfl почти вдвое короче полноразмерного, стали проверять гипотезу существования альтернативного промотора, тем более, что в интроне 3-4 такие последовательности предсказаны программой поиска промоторов (Promoter 2.0 Prediction Server. Vector NTI) и такое предположение существовало до 2000 г. (Herold et al„ 2000; Третьякова, 2000).

Для проверки существования альтернативного промотора в интроне 3-4 мы старались выбрать такой прямой праймер, который находился бы максимально близко к З'-концу интрона 3-4 , а обратный - в экзоне 7 (Рис. 8). Фрагмент ожидаемого размера выявляется только в пробах из семенников, где при считывании мРНК sbr с альтернативного промотора может появиться укороченный транскрипт (1,9 т.н).

Характер экспрессии гена Dm nxfl в семенниках отражает общие тенденции генной экспрессии, свойственные данному органу. Многие гены в сперматогенезе часто используют альтернативные сайты инициации и терминации транскрипции (Kleene, 2005). Характерным для семенников является наличие транскриптов, укороченных по сравнению с транскриптами тех же генов, присутствующих в других органах (Steger, 1999; Kleene, 2003, 2005).

Полиморфизм транскриптов предполагает существование и полиморфизма белковых продуктов гена sbr (Dm nxfl). Для идентификации альтернативных белковых продуктов, выполняющих по нашему предположению специализированные функции, необходимо было получить антитела к белку SBR.

Рисунок 8. Результаты, полученные методом ОТ ПЦР при определении структуры коротких транскриптов гена яЬг (От пх/1), присутствующих в семенниках взрослых особей й.те1апо£;а$1ег (Аванесян, 2009). Прямой праймер локализован в интроне 3-4, обратный - в экзоне 7. Ожидаемый размер фрагмента - 846 н. Дорожки соответствуют вариантам ОТ-ПЦР с использованием РНК из разных органов и частей тела взрослых особей 0.те1апо§си/ег: 1 - семенники, 2 -головы

Полиморфизм белковых продуктов гена Dm nxfl (sbr)

Полученные нами антитела к С-терминальному участку белка позволили методом Вестерн-блот анализа выявить у D.melanogaster во всех образцах, полученных из разных органов и частей тела, универсальную (74 kDa) форму белка SBR, а также специфичную для семенников (62 kDa) короткую форму данного белка (Рис. 9). Можно предположить, что короткой форме белка SBR соответствует короткий транскрипт 1,9 т.н., выявляемый в семенниках методом Нозерн-блот-анализа (Рис. 4).

Рисунок 9. Результаты Вестерн-блот-анализа экспрессии гена sbr в разных органах и частях тела взрослых самок и самцов D. melanogaster в зависимости от генотипа (Касаткина, 2007)

М - маркер молекулярной массы. На дорожки нанесены пробы из: 1 - яичников (+/ +); 1 - голов самцов (sbr12 / Dp(l;Y)y+ v+) ; 3 — голов самцов (FM6/Dp(l;Y)y+ v+j ; 4 - семенников (sbr12 / Dp(];Y) у+ v+), 5 - семенников (FM6/Dp(l;Y)y+ v+).

Примечание: стрелки указывают на полноразмерную и укороченную формы белка SBR.

Транскрипту может соответствовать белок, содержащий 536 а.к., вместо 672 а.к.. Молекулярная масса короткого белка может составлять около 60 kDa, что подтверждено нами методом Вестерн-блот-анализа (Рис. 9).

Полученные нами антитела позволяют идентифицировать только белковые продукты гена Dm nxfl (sbr), содержащие аминокислотную последовательность, соответствующую большей части экзона 9. Однако, исходя из возможных вариантов транскриптов данного гена, можно ожидать, что гену Dm nxfl (sbr) соответствуют и другие белковые продукты (Рис. 10).

Заключение

Механизмы и источники плейотропного действия генов

Среди генов довольно часто встречаются такие, которые влияют на проявление нескольких признаков. Это явление назвали плейотропией (Dobzhansky, Holz, 1943; Caspari, 1952). Крайняя степень плейотропии

проявляется в том, что один и тот же ген может влиять на две (или более) особенности организма, на первый взгляд не связанные между собой.

Центральный вопрос плейотропии заключается в том, вызваны ли плейотропные эффекты генов множеством молекулярных функций, или эти эффекты являются следствием нарушения одной и той же функции, вовлеченной во множество клеточных процессов (Dudley et al., 2005; van de Peppel, Holstege, 2005).

Гены, участвующие в контроле разнообразных клеточных процессов, вовлечены в сеть взаимодействий (Van de Peppel, Holstege, 2005). Взаимодействующие белковые продукты генов образуют протеом (Freatherstone, Brodie, 2002; Von Mering, 2002).

P(139)L s brio

M(499)l T(493)S

s br10

Df(1)sbr5

Df(1)sbr12

Ген sbr (Dm nxfl)

Домены

RBD LRR

NTF2-like UBA-like

3,2 т.н. 5'UTR 3'UTR Полноразмерный

2,8 т.н. 5'UTR 3'UTR Семенниково специфичные

1,9 v.H. 5'UTR 3'UTR

Нейро специфичный

5'UTR [ 3'UTR

Рисунок 10. Структура гена Dm nxfl (sbr) и его возможных продуктов. Примечание:

Домены: RBD (RNA-binding domain) - РНК-связывающий; LRR - leucine rich repeats - лейцин богатые повторы;

NTF2-like (NTF - nuclear transport factor) -похожий на фактор ядерного транспорта;

UBA-like (UBA- ubiquitin associated) - похожий на последовательность, взаимодействующую с

убиквитином.

Цветом обозначены транслируемые участки. Пунктирной линией показан сохраненный интрон 5-6.

Линией показан фрагмент последовательности, который использовали при получении антител.

Протеом - система более динамичная, чем геном. Она изменяется в развитии, реагирует на внешние воздействия. В протеоме белки регулируют и дополняют друг друга (Otto, 2004). Гены с высокой степенью плейотропии часто кодируют белки, находящиеся в составе различных белковых комплексов. Выявление специфических белковых взаимодействий или взаимодействующих

партнеров является определяющим для понимания механизмов плейотропного действия гена.

Существование нескольких продуктов гена может создавать предпосылки для эволюционной дивергенции в пределах генного семейства. Специфичность транскриптов гена sbr (Dm nxfl) в отношении нервной системы и семенников не является удивительным, поскольку более высокая сложность транскриптома и протеома, характерная для нервных и генеративных клеток, обеспечивает большую пластичность данных систем.

Специфичным транскриптам могут соответствовать и специфичные белковые продукты. Использование полученных нами антител к С-терминальному фрагменту полноразмерного белка Dm NXF1 (SBR) позволило идентифицировать два белковых продукта - полноразмерный - 74 ГОа (672 а.к ) и специфичный для семенников около 60 kDa, который, по нашему предположению, соответствует семенниково-специфичному транскрипту 1,9 т.н. К сожалению, полученные нами антитела не позволяют ответить на вопрос, соответствует ли нейроспецифичному транскрипту - 5.1 т.н. еще одна форма белка SBR, которая включает только его N-терминальную часть (домены RBD и LRR) (Рис. 10). Поскольку во всех (выявленных и предполагаемых) продуктах гена sbr (Dm nxfl) сохраняются домены, отвечающие за взаимодействие с РНК, можно предположить, что утрата тех или иных последовательностей белка SBR может привести к специализации соответствующего продукта в отношении определенных РНК и неспособности укороченного продукта к выполнению универсальной функции.

Еще одним источником плейотропного действия гена может быть взаимодействие с различными белками-партнерами. Поскольку в молекуле NXF1 существуют дискретные области, отвечающие за взаимодействие с соответствующими факторами, можно предположить, что повреждения определенной области белковой молекулы в результате мутации, приводящие к нарушению таких взаимодействий, могут блокировать только ту функцию полифункционального фактора, которая от этого взаимодействия зависит. В результате фенотипы мутантов могут оказаться настолько различными, что на первый взгляд трудно представить, что это мутации одного и того же гена. Существование функциональной независимости отдельных частей молекулы может приводить к разным эффектам у мутантов.

Функции факторов NXF и возможные пути их специализации Известно, что N-терминальная половина белка NXF1 (ТАР) функционально независима от С-терминальной половины молекулы (Bear et al., 1999). N-терминальная часть представлена доменами RBD и LRR (Рис. 10). Участок, предшествующий RBD, является наиболее дивергентным в семействе NXF (Jim et al., 2001). В этом районе в белке Hs NXF1 располагаются последовательности, соответствующие сигналу ядерной локализации - NLS (nuclear localization signal) и сигналу ядерного экспорта - NES (nuclear export sequence) (Bear et al., 1999; Kang, Cullen, 1999; Katahira et al., 1999; Tan eta1., 2005).

Использование альтернативного промотора локализованного в интроне 3-4 приводит к появлению коротких транскриптов гена Dm nxfl, которым могут

соответствовать белковые продукты, лишенные участка, примыкающего слева к домену RBD. Это может приводить к ограничению функций и специализации соответствующих коротких белков (Рис. 10).

Согласно нашим данным изменения С-терминального домена приводит к нарушению таких специализированных функций, как формирование аппарата деления клетки, образование подвижных сперматозоидов и сексуальное поведение самцов. Это свидетельствует о функциональной сложности С-терминальной части молекулы Dm NXF1 и ее значении в формировании специализированных функций.

Присутствие в белке Dm NXF1 дискретных структурно-функциональных элементов позволяет предположить, что специализация факторов NXF может происходить за счет утраты определенных частей молекулы, не нужных, а возможно и мешающих выполнению специализированных функций.

Утрата N- или/и С-терминальной части полноразмерного белка может приводить к нарушению способности белка попадать в ядро или выходить из ядра, сохраняя в той или иной степени способность к взаимодействию с РНК.

Со специализированными функциями гена sbr (Dm nxfl) можно связать такие фенотипы мутантных аллелей, как:

1. Повышенная частота анеуплоидных потомков (Мамон и др., 1990; Никитина и др., 2003а; Пугачева, Мамон, 2005; Кьергаард, Мамон, 2007)

2. Дефекты веретена мейотического деления (Golubkova et al., 2009)

3. Аномалии эмбриональных митозов (Golubkova et al., 2006)

4. Повышенная частота яиц с одним пронуклеусом (Golubkova et al., 2006)

5. Мужская стерильность (Tretyakova, Mamón, 1998; Касаткина, 2007)

6. Нарушение памяти (Никитина и др., 20036)

7. Временная атаксия взрослых особей, гомозиготных по аллелю l(l)ts403 (sbr") при тепловом воздействии (Мамон и др., 1999).

Возможность регуляции экспрессии генов на уровне трансляции делает реализацию наследственной информации относительно независимой от процесса транскрипции. Такая независимость особенно важна в периоды, когда-либо не идет транскрипция, как при формировании генеративных клеток или в период ранних эмбриональных митозов у ряда животных, либо в том случае, когда процессы транскрипции и трансляции разобщены во времени и пространстве, как в крайне поляризованных нервных клетках и сперматозоидах. Способ сохранения, передачи и реализации наследственной информации в виде комплексов РНП является эволюционно очень древним (Spirin, 1969), и для полной автономности ему не хватает способности к редупликации.

Эволюционно консервативному гену Dm nxfl (sbr) D.melanogaster, как и ортологичным генам человека Hs NXF1 и мыши Мт nxfl, соответствуют, помимо универсального, и специфичные продукты, что может отражать этапы эволюционной дивергенции в пределах семейства генов nxf. У D.melanogaster нами описаны семенниково-специфичный транскрипт и белок, а также нейроспецифичный транскрипт, в то время как у человека и мыши существуют паралогичные гены nxfl и nxf3, Hs nxfS , Мт nxfl, экспрессия которых специфична для семенников или мозга. Выявленный и предполагаемый полиморфизм

продуктов гена nxfl отражает функциональную сложность транскриптома и протеома, характерную для нервной и репродуктивной систем и может служить источником возникновения специализированных функций.

Нами высказано предположение о том, что фактор Dm NXF1, кроме универсальной функции - обеспечение ядерно-цитоплазматического транспорта большинства мРНК из ядра в цитоплазму - выполняет и специализированные цитоплазматические функции. Данное предположение основывается на плейотропных эффектах мутантых аллелей гена Dm nxfl и находит подтверждение в цитоплазматической локализации фактора Dm NXF1 (Голубкова и др., 2009).

Выводы

1. Эволюционно консервативный ген Dm nxfl (sbr) D.melanogaster, известной функцией которого является ядерно-цитоплазматический транспорт мРНК, вовлечен в контроль расхождения хромосом в клеточных делениях.

2. Нарушение стресс-реакции на тепловое воздействие у теплочувствительного мутанта l(l)ts403 (sbr10) не является причиной хромосомной нестабильности.

3. Ген Dm nxfl (sbr) оказывает материнское влияние на характер эмбриональных митозов у ранних эмбрионов: присутствуя в одной дозе, теплочувствительный аллель sbr10 вызывает при пермиссивной температуре нарушение эмбриональных митозов у потомков самок, гетерозиготных по мутации sbr10 и делеции, удаляющей ген Dm nxfl (sbr) .

4. Продукты гена Dm nxfl (sbr) участвуют в формировании компонентов сперматозоида, повышающих после попадания в яйцеклетку частоту анеуплоидных потомков с нарушенным числом и набором не только отцовских, но и материнских хромосом.

5. Выявленный полиморфизм транскриптов и белковых продуктов гена Dm nxfl (sbr), проявляющих органоспецифичность, рассматривается как основа формирования соответствующих специализированных функций. Определены структурно-функциональные элементы в транскриптах и белковых продуктах гена Dm nxfl (sbr), комбинация которых может приводить к появлению специфичных продуктов данного гена.

6. Важную роль в выполнении специализированных функций играет С-терминальная части молекулы Dm NXF1. Делеции, удаляющие часть С-терминальной половины гена Dm nxfl (sbr), характеризуются специфичными доминантными эффектами: делеция sbr3 вызывает образование трехполюсных мейозов у самок, а делеция sbr12 нарушает фертильность и половую активность самцов.

7. Предложена гипотеза об эволюционной дивергенции и специализации фактора Dm NXF1 (NXF - Nuclear eXport Factor): продукты гена Dm nxfl могут находиться в составе комплексов РНП, сопровождая особые мРНК не только при ядерном экспорте, но и в цитоплазме, что особенно важно для сперматогенеза, оогенеза, нейрогенеза, раннего эмбриогенеза и при регуляции клеточных делений.

Список публикаций по материалам диссертации

1. Мамон JI.A., Мазур E.JL, Чуркина И.В., Барабанова J1.B. Влияние высокой температуры на частоту нерасхождения и потерь половых хромосом у самок Drosophila melanogaster линии l(l)ts403 с дефектом в системе белков теплового шока // Генетика.-1990.-Т.26. № З.-С.554-556.

2. Мамон Л.А., Барабанова JI.B. Неслучайное распределение спонтанных и индуцированных высокой температурой рецессивных летальных мутаций в X-хромосоме дрозофилы // Генетика. -1991.-Т.27.-№ 9.-С.1541-1546.

3. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Динамика индукции и регрессии пуфов 87А, 87С и 93D в политенных хромосомах дрозофилы Drosophila melanogaster при действии аноксии и высокой температуры//Цитология.-1991.-Т.ЗЗ.-№12.-С.99-105.

4. Мамон Л.А., Барабанова JI.B., Костромина H.H. Частота нерасхождения и потерь половых хромосом в оогенезе у мутанта l(l)ts403 D. melanogaster с дефектом в системе белков теплового шока при действии аноксии и высокой температуры // Генетика.- 1992.- Т.28.- №4.- С.64-71.

5. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Роль белков теплового шока в восстановлении индуцированных высокой температурой повреждений митотических хромосом у D. те/апо££Шег//Генетика.-1993.-Т.29.- №4.- С.606-612.

6. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Роль белков теплового шока в восстановлении клеточной пролиферации после воздействия высокой температурой на личинок D. melanogaster // Генетика.-1993.-Т.29.-№5.- С.791-798.

7. Тихомирова М.М., Мазур Е.Л., Барабанова Л.В., Мамон Л.А. Температурная модификация мутационного процесса и белки теплового шока // Генетика. -1993.-Т.29.-№ 2.-С.280-287.

8. Тихомирова М.М., Ватти К.В., Мамон Л.А., Барабанова Л.В., Куцкова Ю.А. Механизмы, обеспечивающие устойчивость генетического материала клетки к стрессовым воздействиям // Генетика,- 1994,- Т.ЗО,- № 8.- С.1097-1104.

9. Куцкова Ю.А., Мамон Л.А. Время регрессии пуффов теплового шока в политенных хромосомах дрозофилы Drosophila melanogaster как критерий оценки эффекта различных стрессовых воздействий // Цитология.-1995.-Т.37.- № 1/2.-С.166-174.

10. Куцкова Ю.А., Мамон Л.А. Последствия экстремальных воздействий на соматические клетки Drosophila melanogaster в условиях нарушенного синтеза белков теплового шока // Генетика.- 1996,- Т.32.-№ 10.-С. 1406-1416 .

11. Мамон Л.А., Комарова A.B., Бондаренко Л.В., Барабанова Л.В., Тихомирова М.М. Формирование термотолерантности у линии Drosophila melanogaster l(l)ts403 с нарушенным синтезом белков теплового шока. // Генетика.-1998.-Т.34.-№ 7.-С.920-928.

12. Мамон Л.А., Никитина Е.А., Пугачева О.М", Голубкова Е.В. Влияние материнского и отцовского организмов на определяемую мутацией l(l)ts403 теплочувствительность ранних эмбрионов Drosophila melanogaster.ll Генетика.-1999.- Т.35,- № 8,- С.1078-1085 .

13. Мамон Л.А., Бондаренко Л.В., Третьякова И.В., Комарова A.B., Никитина Е.А., Пугачева О.М., Голубкова Е.В. Последствия клеточного стресса

при нарушенном синтезе белков теплового шока у дрозофилы // Вестн. С-Петербург. ун-та,- 1999,- Сер.З,- Вып .4 -(№ 24).- С.100-114.

14. Третьякова И.В., Лёзин Г.Т., Маркова Е.Г., Евгеньев М.Б., Мамон JI.A. Продукт гена sbr у Drosophila melanogasler и его ортологи у дрожжей и человека. // Генетика,- 2001. - Т.37.- № 6.- С. 725-736.

15. Никитина Е.А., Комарова А.В., Голубкова Е.В., Третьякова И.В., Мамон JI.A. Полудоминантное влияние мутации l(l)ts403 (sbr10) на нерасхождение половых хромосом в мейозе у самок Drosophila melanogaster при тепловом воздействии // Генетика,- 2003.-Т.39.- № 3.- С.341-348.

16. Пугачёва О.М., Мамон JI.A. Генетический контроль развития мальпигиевых сосудов у Drosophila melanogaster И Онтогенез.-2003,- Т.34,- № 5.-С.325-342.

17. Голубкова Е.В., Пугачева О.М., Демина Е.П., Шершабова А.Н., Мусорина А.С., Мамон JI.A. Стерилизующий эффект мутантного аллеля sbr'0 (l(I)ts403) в компаунде с нулевым аллелем у самок Drosophila melanogaster // Генетика.- 2004. -Т.40.- № 4.- С.469-477.

18. Мамон JI.A. Взаимоотношения между ядерно-цитоплазматическим транспортом и расхождением хромосом. //Цитология.-2005.-Т.47.-№ 3.-С.263-276.

19. Пугачева О.М., Мамон Л.А. Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403 (sbr10) у Drosophila melanogaster // Цитология,- 2005,- Т.47.- № 7. -С. 623-636.

20. Golubkova E.V., Nokkala S., Mamon L.A. The nuclear export factor gene small bristles is involved in the control of early embryonic mitoses in Drosophila melanogaster. //Drosophila Inform. Serv.- 2006.- V.89.- P.31-39.

21. Кьергаард А.В., Мамон JI.A. Действие гипертермии на мейоциты самцов Drosophila melanogaster индуцирует появление потомков с нарушением набора не только отцовских, но и материнских половых хромосом // Генетика,-

2007.- Т.43. -С.1379-1387.

22. Мамон Л.А.. Центросома как «мозг» животной клетки // Цитология. -

2008.- Т.50.-№ 1,- С.5-17.

23. Golubkova E.V., Markova E.G., Markov A.V., Avanesyan E.O., Nokkala S., Mamon L.A. Dm nxfl/sbr gene affects the formation of meiotic spindle in female Drosophila melanogaster II Chromosome Research.- 2009. -V.17.- P.833-845.

24. Иванкова H.A., Третьякова И.В., Лезин Г.Т., Аванесян Э.О., Евгеньев М.Б., Мамон JI.A. Универсальный и специфичные транскрипты эволюционно консервативного гена Dm nxfl (sbr - small bristles) у Drosophila melanogaster И Вестн. С.-Петерб. ун-та. - 2009. - Сер. 3.- Вып. 4.- С. 14-27.

25. Ivankova N., Tretyakova I., Lyozin G., Avanesyan E., Zolotukhin A., Zatsepina O.G., Evgen'ev M.B., Mamon L.A. Alternative transcripts expressed by small bristles, the Drosophila melanogaster nxfl gene // Gene.-2010.- V.458.-P. 11-19.

Подписано в печать 18.05.2010 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ, л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ № 1633.

Отпечатано в ООО «Издательство "ЛЕМА"» 199004, Россия, Санкт-Петербург, В.О., Средний пр., д.24 тел.: 323-30-50, тел./факс: 323-67-74 e-mail: izd_lema@raail.ru http://www.lemaprint.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Мамон, Людмила Андреевна

ОГЛАВЛЕНИЕ.2

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. 7

ВВЕДЕНИЕ.10

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Характеристика генов семейства пх/и их продуктов

1.1. Белок № МХЗ71 (ТАР) и его ортологи.17

1.2. Характеристика паралогичных генов пх/и соответствующих им белков.22

2. Взаимодействия белков КХР1 с различными факторами

2.1. Связь сплайсинга, ядерного экспорта, деградации и трансляции мРНК, опосредованная взаимодействием белков КХП с соответствующими факторами.27

2.2. Белки-партнеры НХШ, взаимодействующие со специфичными мРНК.32

3. Плейотропные эффекты мутантных аллелей гена Ит пх/1 (яЬг)

3.1. Аллели бЪг и бЪг'.

3.2 Теплочувствительные аллели йЬг'0 (1(1^403) и яЬг*

1(1^148).35

3.3. Аллель бЬг , вызывающая стерильность самцов.38

3.4. Рецессивные летальные аллели зЪг5 (1(1)К4), яЬг12 (1(1)24/45А), таёе11ап {бЬг/П8,п).39

4. Взаимоотношения между ядерно-цитоплазматическим транспортом мРНК и расхождением хромосом в период деления клетки.42

4.1. Связанные с хроматином компоненты ядерных поровых комплексов.45

4.2. Транспортные рецепторы и связанные с ними молекулы, влияющие на расхождение хромосом.49

4.3. Динамика ядерной оболочки в период деления клетки.52

4.4. Веретено деления и участие компонентов ядерно-цитоплазматического транспорта в его формировании.56

4.5. Кинетохоры как место локализации различных элементов ядерно-цитоплазматического транспорта.57

5. Аппарат деления клетки и роль РНК в его биогенезе

5.1. Компоненты центросомы.64

5.2. Роль центросом в нуклеации и поддержании минус-концов икротрубочек.65

5.3. Роль моторного динеинового комплекса в биогенезе центросомы.68

5.4. Составные компоненты центросом.70

5.5. РНК в составе центросом.72

5.6. Редупликация центросом.74

5.7. Клетки без центросом.78

5.8. Центросомы в эмбриогенезе.80

5.9. Мутации, ведущие к утрате или дефектам центросом.81

5.10. Роль центросомы в дифференциации нейронов.83

5.11. Центросома в мужских генеративных клетках.85

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Материалы

1.1. Линии, не содержащие мутантных аллелей гена sbr.

1.2. Линии, несущие мутантные аллели гена sbr.90

1.3. Гибриды, не несущие мутантных аллелей гена sbr.

1.4. Гибриды, несущие различные комбинации аллелей гена sbr.92

2. Методы

2.1. Гибридологический анализ частоты анеуплоидных потомков у самок-имаго, подвергнутых тепловому воздействию и облучению.

2.2. Оценка термотолерантности по различным критериям частота анеуплоидных потомков, выживаемость самок-имаго и повреждаемость яйцевых камер).94

2.3. Оценка плодовитости самок-имаго.96

2.4. Анализ эмбриональных митозов у потомков самок, несущих и не несущих мутации гена sbr.97

2.5. Определение частоты анеуплоидных потомков при тепловом воздействии (ТВ) (37 °С, 1 ч) на самцов D.melanogaster.98

2.6. Амплификация и секвенирование фрагментов

ДНК, соответствующих нормальному и мутантному аллелям гена sbr.101

2.7. Цитологический анализ мейотических делений у самок D.melanogaster.

2.8. Гистологический анализ семенников и анализ половой активности самцов.102

2.9. Метод Нозерн-блот гибридизации.103

2.10. Получение антител к фрагменту белка SBR (Dm NXF1).104

2.11. Метод Вестерн-блот гибридизации.

2.12. Метод ОТ ПЦР.106

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Отсутствие причинно-следственной связи между временным блоком синтеза БТШ и нарушением расхождения хромосом у мутантых особей 1(1)18403 (яЬг10) 1.1. Высокая частота анеуплоидных потомков с нарушенным числом половых хромосом в результате теплового воздействия на самок-имаго D.melanogaster, несущих мутацию 1(1^403 (¡¡ЬгЮ).108

1.2. Отсутствие формирования термотолерантности по признаку высокая частота анеуплоидных потомков и ее формирование по другим признакам.110

1.3. Влияние мутантного аллеля зЪг10 (1(1^403) в компаунде с нулевым аллелем на фертильность самок ИгоБОркИа те1апо2аБ(ег в условиях пермиссивной температуры.123

1.4. Хромосомная нестабильность при пермиссивной температуре, выявленная при анализе эмбриональных митозов у потомков самок, гемизиготных по мутации

1(1)К403 (эЬг10).132

1.5. Нарушение синтеза белков теплового шока у мутантов 1(1 №403 (¿Ъг10) - рецессивный признак, а повышенная частота анеуплоидных потомков - доминантный.139

2. Повышенная частота анеуплоидных потомков с нарушенным числом и набором не только отцовских, но и материнских половых хромосом, у подвергавшихся тепловому воздействию самцов, несущих мутацию

1(1)Ы03 (бЬГ10).146

3. Доминантные проявления мутантных аллелей гена Бт пх/1 (бЬг)

3.1. Высокая частота трехполюсных веретен деления вмейозеу самок бЬг5 / +.157

3.2. Стерильность и нарушение сексуального поведения самцов зЪг12 / Ир(1 ;У)у+у+.174

4. Полиморфизм продуктов как возможный источник плейотропного действия гена

4.1. Полиморфизм транскриптов гена Вт пх/1 (яЬг).182

4.2. Состав альтернативных транскриптов гена зЬг (Вт пх/1).210

4.3. Полиморфизм белковых продуктов гена Бт пх/1 (бЬг).220

Глава IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Механизмы и источники плейотропного действия генов.227

2. Функции факторов ИХБ и возможные пути их специализации.233

3. Эволюционная общность белков семейства №0% динеинов и центросом. 243

4. Комплексы РНП при сборке веретена деления, в биогенезе центросомы и ее производных (ресничек и жгутиков).248

5. Факторы МХБ как связующее звено между протеомом и транскриптомом в клетке.252

6. Белки ИХБ как возможные компоненты Р-гранул. 253

ВЫВОДЫ.257

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы плейотропного действия гена small bristles (Dm nxfl) Drosophila melanogaster, принадлежащего эволюционно консервативному семейству nxf (nuclear export factor)"

Гены семейства nxf (inuclear export factor), описанные у большинства эукариот от дрожжей до человека, вовлечены в контроль экспорта большинства, а возможно и всех мРНК из ядра в цитоплазму (Herold et al., 2003). У D.melanogaster ортологом генов nxfl является ген sbr {small bristles) (Herold et al., 2000; Третьякова и др, 2001; Wilkie et al., 2001), поэтому он получил еще одно название - Dm nxfl. Универсальной функцией гена Dm nxfl и его ортологов у человека (Hs nxf Г) и мыши (Mm nxfl) является транспорт мРНК из ядра в цитоплазму (Kang and Cullen, 1999; Herold et al., 2003; Sasaki et al., 2005).

Ранее было показано, что мутантный аллель гена sbr Drosophila melanogaster (sbr10 , синоним - l(l)ts403) вызывает нарушение синтеза белков теплового шока в ответ на тепловое воздействие (Евгеньев, Левин, 1980; Евгеньев, Денисенко, 1990) и влияет на поведение хромосом в клеточных делениях (Мамон и др., 1990). Эти данные свидетельствовали о том, что под контролем гена sbr находятся два фундаментальных клеточных процесса: реакция клетки на действие стрессоров и расхождение хромосом в процессе клеточных делений.

Исходя из выявленной функции гена Dm nxfl (sbr) и его ортологов, временный блок синтеза БТШ в ответ на тепловое воздействие у мутантов sbr10 (l(l)ts403) стал понятным. У теплочувствительного мутанта (sbr10) и при тепловом воздействии нарушается транспорта мРНК, в том числе и мРНК генов, контролирующих белки теплового шока Qisp — heat shock protein) (Третьякова и др., 2001; Wilkey et al., 2001).

Мы показали, что нарушение синтеза белков теплового шока является рецессивным признаком, как и большинство других, обеспечивающих жизнеспособность на организменном и клеточном уровнях, в то время как высокая частота анеуплоидных потомков - это доминантный признак (Никитина и др., 2003а). Нами были выявлены и другие аллеле-специфичные признаки, некоторые из которых также оказались доминантными. Это позволило высказать предположение о том, что гену Dm nxfl, помимо известной универсальной функции - обеспечения ядерно-цитоплазматического транспорта мРНК, свойственны и специализированные функции, одна из которых - контроль расхождения хромосом в клеточных делениях.

Исходя из универсальной функции, продукты генов nxfl относят к транспортным рецепторам, состоящим, по крайней мере, из двух частей. Первая - рецепторная - определяет взаимодействие с РНК (взаимодействие может быть специфичным - это узнавание последовательности СТЕ (constitutive transport element), и не специфичным - через адапторные молекулы) (Hautbergue et al., 2008). Вторая -транспортная - обеспечивает взаимодействие с нуклеопоринами -белками ядерных поровых комплексов с тем, чтобы переместить комплекс, содержащий мРНК, из ядра в цитоплазму (Braun et al., 2001, 2002). Затем, как правило, фактор NXF1 покидает транспортируемый комплекс и возвращается обратно в ядро (Palacios, 2002). Важно отметить, что не все мРНК приступают к трансляции сразу после выхода из ядра в цитоплазму. С существованием долгоживущих и временно не транслируемых мРНК связывают возникновение семейства генов nxf и появление генов-паралогов, контролирующих судьбу мРНК в цитоплазме (Jun et al., 2001; Tretyakova et al., 2005; Lai et al., 2006; Takano et al., 2007;

Katahira et al., 2008). Специализация факторов NXF как рецепторов мРНК может проявляться не только в существовании семейства генов nxf но и в том, что генам nxf, соответствует, как правило, несколько продуктов.

С усложнением организации живых систем возникают потребности в специализации универсальных функций. Эволюция генов часто идет по пути объединения и возникновения новых комбинаций элементарных функций (Long et al., 2003). Объединение элементарных функций при формировании гена порождает ситуацию, при которой отдельные мутации могут нарушать конкретную элементарную функцию, не затрагивая остальные (Dudley et al., 2005; van de Peppel, Holstege, 2005). В этом случае плейотропные эффекты гена отражают его полифункциональность и могут проявляться как аллеле-специфичные.

Цель работы состояла в определении молекулярных механизмов плейотропного действия эволюционно консервативного гена Dm nxfl (sbr) D.melanogaster, вовлеченного в контроль важнейших клеточных процессов: реакции клетки на действие стрессора, ядерно-цитоплазматического транспорта мРНК и расхождения хромосом в клеточных делениях.

Задачи:

1. Определить плейотропные эффекты гена Вт пх/1 (яЬг) В.те1апо^аз1ег и исследовать их механизмы.

2. Определить характер взаимоотношений между нарушением реакции клетки на действие стрессора и хромосомной нестабильностью.

3. Определить механизмы хромосомной нестабильности у мутантов по гену Вт пх/1 (яЬг) B.melanogaster, отвечающему за экспорт различных мРНК из ядра в цитоплазму.

Научная новизна. Впервые показано, что мутации эволюционно консервативного гена Вт пх/1 (яЬг) у ВгоБоркИа те1апо§аз1ег нарушают расхождение хромосом в клеточных делениях и вызывают характерные изменения веретена первого деления мейоза у самок и данный эффект можно рассматривать как проявление специализированной функции исследуемого гена наряду с другими аллеле-специфичными эффектами.

Выявлен полиморфизм мРНК гена Вт пх/1. Большинство специфичных транскриптов гена Вт пх/1 B.melanogaster выявлено впервые.

Использование полученных нами антител к С-терминальному фрагменту белка Бш КХБ1 позволило методом Вестерн-блот анализа впервые идентифицировать специфичный для семенников короткий белковый продукт гена Вт пх/1 наряду с универсальной его формой. Существование полиморфизма продуктов гена Вт пх/1 свидетельствует о возможных путях специализации факторов ЮЯ7 в пределах данного семейства белков.

Секвенированы участки ДНК, соответствующие рецессивнымлетальным аллелям гена эЬг (Вт пх/1), и показана роль нарушений С-терминальной половины белка Бш КХР1 в определении плейотропных доминантных эффектов этих аллелей.

Теоретическое и практическое значение работы

У человека рак, вызванный хромосомной нестабильностью, связывают с мутациями в генах Bubi, BubRl и Mad2 (Cahill et al., 1998; Imai et al., 1999; Gemma et al., 2001; DePinho, Polyak, 2004; Hanks et al., 2004). Аномалии экспрессии генов, вовлеченных в контроль расхождения хромосом, могут вызывать предрасположенность к раку, индуцируемому канцерогенами, как это показано для генов Rael и ВиЬЗ (Babu et al., 2003).

Такие выявленные нами впервые плейотропные эффекты гена sbr, как нарушение расхождения хромосом в клеточных делениях, мужская стерильность и нарушение сексуального поведения и др. (Мамон и др., 1999), позволяют рассматривать гены семейства nxf в качестве генов-кандидатов при определении генетических основ соответствующих наследственных патологий у человека.

Основные положения, выносимые на защиту:

Жизненно важный эволюционно консервативный ген small bristles (sbr) D.melanogaster, относящийся к семейству генов nxf (Nuclear eXport Factor), отвечает не только за транспорт большинства типов мРНК из ядра в цитоплазму, но и вовлечен в регуляцию расхождения хромосом в клеточных делениях. Продукт гена sbr (Dm nxfIs) участвует в формировании аппарата деления клетки, влияя на поведение хромосом в мейозе и эмбриональных митозах. Полученные нами результаты позволяют отнести sbr к уже известным генам, выполняющим в клетке двойственную функцию: не только ядерно-цитоплазматический транспорт мРНК, но и транспорт хромосом к полюсам деления клетки. Появление в эволюции транспортных систем, выполняющих такую двойственную функцию, связано с возникновением ядерной оболочки и обособлением ядра в виде самостоятельного клеточного компартмента. Причем обе транспортные системы в процессе функционирования в клеточном цикле сменяют друг друга, используя общие структурно-функциональные модули.

На основе полученных данных сформулирована гипотеза о том, что продукты гена Dm nxfl кроме известной функции - обеспечение ядерно-цитоплазматического транспорта большинства мРНК из ядра в цитоплазму - выполняет и специализированные цитоплазматические функции, по-видимому, связанные с транспортом, деградацией или сохранением в нетранслируемом состоянии особых мРНЕС. Присутствие подобных мРНК, относящихся к классу долгоживущих или локализованных, является характерной особенностью половых, эмбриональных нервных и стволовых клеток, а также необходимо при формировании аппарата деления клетки.

Данное предположение основывается на плейотропных эффектах мутантых аллелей гена Ит пх/1, таких как повышенная частота анеуплоидных потомков, аномалии веретена первого деления мейоза у самок, нарушение эмбриональных митозов, женская и мужская стерильность, нарушение памяти, временная атаксия.

Выполняя специализированные функции, фактор От N^1 может входить в состав или участвовать в формировании макромолекулярных комплексов РНП, представляющих собой эволюционно древний способ хранения, передачи и реализации наследственной информации, не утративший своего значения в стволовых, нервных, генеративных и эмбриональных клетках.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Мамон, Людмила Андреевна

ВЫВОДЫ

6. Важную роль в выполнении специализированных функций играет С-терминальная части молекулы Dm NXF1. Делеции, удаляющие часть С-терминальной половины гена Dm nxfl (sbr), характеризуются специфичными доминантными эффектами: делеция sbr5 вызывает образование трехполюсных мейозов у самок, а делеция sbr12 нарушает фертильность и половую активность самцов.

259

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Мамон, Людмила Андреевна, Санкт-Петербург

1. Аванесян Э.О. Характеристика экспрессии гена small bristles (Dm nxfl) в норме и у мутантов Drosophila melanogaster //Магистерская дис. 2009. 73 с.

2. Ацапкина A.A., Голубкова Е.В., Касаткина В.В., Аванесян Э.О., Иванкова H.A., Мамон JI.A. Особенности сперматогенеза у Drosophila melanogaster: роль основного транспортного рецептора мРНК (DmNXFl) // Цитология. 2010.

3. Бураков A.B., Надеждина Е.С. Динеин и динактин как организаторы системы клеточных микротрубочек //Онтогенез. 2006. Т.37. С.323-339.

4. Воронина A.C. Регуляция на уровне трансляции в раннем развитие эукариот //Молек. Биол. 2002. Т.36. С.956-969.

5. Голубкова Е.В. Влияние аллелей гена small bristles (sbr) на репродуктивные функции самок и морфогенез у Drosophila melanogaster //Дис. канд. биол. наук. Санкт-Петербург: СПбГУ. 2004. 129 С.

6. Евгеньев М.Б., Денисенко О.H. Влияние fe-мутации на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение Ш. Синтез белков, родственных БТШ70 II Генетика. 1990. Т. 26. № 2. С.266-271.

7. Евгеньев М.Б., Левин A.B. Влияние te-мутации на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение 1. Анализ синтеза белков // Генетика. 1980. Т.16. № 6. С.1026-1029.

8. Жимулев И.Ф., Бгатов A.B., Фомина A.B., Крамере П.Г.Н., Ээкен Я., Похолкова Г.В. Генетические локусы в интервале ras-dsh Х-хромосомы Drosophila melanogaster //Докл. АН СССР. 1980а. Т.255. С.738-742.

9. И. Иванкова H.A., Третьякова И.В. , Лезин Г.Т., Аванесян Э.О., Евгеньев М.Б., Мамон Л.А. Универсальный и специфичные транскрипты эволюционноконсервативного гена Dm nxfl (sbr small bristles) y Drosophila melanogaster. Вестн.

10. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2009. Вып. 4. С. 00-00.

11. Инге-Вечтомов С.Г. Матричный принцип в биологии (прошлое, настоящее, будущее?) //Экологическая генетика. 2003. № 1. С.6-15.

12. Касаткина В.В. Изучение роли гена sbr {Dm NXF1) в определении мужской фертильности у Drosophila melanogaster //Магистерская дис. Санкт-Петербург: СПбГУ. 2007. 66 С.

13. Комарова A.B. Изучение нерасхождения и потерь половых хромосом в мейозе у Drosophila melanogaster при нарушении синтеза белков теплового шока //Автореф. дис. канд. биол. наук. Санкт-Петербург: СПбГУ. 2002. 17 с.

14. Копнин Б.П. Нестабильность генома и онкогенез // Мол. Биол. 2007. Т.41. С.369-380.

15. Куцкова Ю.А., Мамон JI.A. Время регрессии пуффов теплового шока в политенных хромосомах дрозофилы Drosophila melanogaster как критерий оценки эффекта различных стрессовых воздействий // Цитология.-1995.-Т.37.- № 1/2.- С. 166-174.

16. Лакин Г.Ф. Биометрияю M.: Высшая школа. 1990. 352 с .

17. Левин A.B., Лозовская Е.Р., Евгеньев М.Б. Влияние высокой температуры на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение II. Анализ действия te-мутации // Генетика. 1984. Т.20, № 6. С.949-953.

18. Мамон Л.А. Взаимоотношения между ядерно-цитоплазматическим транспортом и расхождением хромосом //Цитология. 2005. Т.47. № 3. С.263-276.

19. Мамон Л.А. Центросома как «мозг» животной клетки //Цитология. 2008. Т.50. № 1. С.5-17.

20. Мамон Л.А., Комарова A.B., Бондаренко Л.В., Барабанова Л.В., Тихомирова М.М. Формирование термотолерантности у линии Drosophila melanogaster l(l)ts403 с нарушенным синтезом белков теплового шока // Генетика. 1998. Т.34. № 7. С.920-928.

21. Мамон J1.A., Куцкова Ю.А. Динамика индукции и регрессии пуфов 87А, 87С и 93D в политенных хромосомах дрозофилы Drosophila melanogaster при действии аноксии и высокой температуры // Цитология. 1991. Т.ЗЗ. № 12. С.99-105.

22. Мамон JI.A., Куцкова Ю.А. Роль белков теплового шока в восстановлении клеточной пролиферации после воздействия высокой температурой на личинок D. melanogaster II Генетика. 19936. Т.29. №5. С.791-798.

23. Маркова Е.Г. Генетическая и молекулярная характеристика ряда летальных аллелей гена small bristles у Drosophila melanogaster II Магистерская дис. 2002. 72 с.

24. Мережко М.А. Роль гена Dm nxfl (sbr) в формировании мальпигиевых сосудов у D.melanogaster. Выпускная квалиф. работа. 2010.

25. Никитина Е.А. Плейотропный эффект мутации l(l)ts403 с нарушенным ответом на тепловой шок у Drosophila melanogaster. //Дис. канд. биол. наук. Санкт-Петербург: СПбГУ. 1999. 200 с.

26. Никитина Е.А., Токмачева Е.В., Савватеева-Попова Е.В. Тепловой шок в период развития центральных структур мозга дрозофилы: формирование памяти у мутанта l(l)ts403 Drosophila melanogaster И Генетика. 20036. Т.39. № 1. С. 3340.

27. Никулина А.О. Локализация продукта гена small bristles (Dm nxfl, sbr) в нервном ганглии личинок Drosophila melanogaster. Выпускная квалиф. работа. 2009. 67 с.

28. Пугачёва О.М., Мамон ji.a. Генетический контроль развития мальпигиевых сосудов у Drosophila melanogaster II Онтогенез. 2003. Т.34. № 5. С.325-342.

29. Пугачева О.М., Мамон JI.A. Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403 (sbr10) у Drosophila melanogaster //Цитология. 2005. T.47. № 7. С. 623-636.

30. Сотникова О.С. Изучение влияния летального аллеля sbr5 (1(1)К4) гена small bristles на структуру хроматина Drosophila melanogaster. Магистерская дисс. 2005. 55 с.

31. Тихомирова М.М. Белки теплового шока и мутагенез //Вестник Ленингр. ун-та. 1989. Сер. 3. Вып.2. С.90-94.

32. Тихомирова М.М., Беляцкая О.Я. Репарация ДНК в оогенезе дрозофилы //Генетика. 1984. Т.20. С. 1824-1829.

33. Тихомирова М.М., Ватта К.В., Мамон JI.A., Барабанова JI.B., Куцкова Ю.А. Механизмы, обеспечивающие устойчивость генетического материала клетки к стрессовым воздействиям // Генетика. 1994. Т.30. № 8. С.1097-1104.

34. Третьякова И.В. Молекулярно-генетический анализ участка ДНК Drosophila melanogaster, содержащего жизненно-важный ген l(l)ts403 //Дис. канд. биол. наук. Санкт-Петербург: СПбГУ. 2000.158 С.

35. Третьякова И.В., Лёзин Г.Т., Маркова Е.Г., Евгеньев М.Б., Мамон Л.А. Продукт гена sbr у Drosophila melanogaster и его ортологи у дрожжей и человека //Генетика. 2001. Т.37. С.725-736.

36. Abe R., Sakashita Е., Yamamoto К., Sakamoto Н. Two different RNA binding activities for the AU-rich element and the poly(A) sequence of the mouse neuronal protein mHuC // Nucleic Acids Res. 1996. V.24. P.4895-4901.

37. Abe R., Uyeno Y., Yamamoto K., Sakamoto H. Tissue-specific expression of the gene encoding a mouse RNA binding protein homologous to human HuD antigen // DNARes. 1994. V.l. P.175-180.

38. Abrams J.M., White K., Fessler L.I., Steller H. Programmed cell death during Drosophila embryogenesis // Development. 1993. V.l 17. P. 29-43.

39. Adam S.A. Transport pathways of macromolecules between the nucleus and cytoplasm //Curr. Opin Cell Biol. 1999. 11: 402-406.

40. Adams R.R., Carmena M., Earnshaw W.C. Chromosomal passengers and the (aurora) ABCs of mitosis //Trends Cell Biol. 2001.11: 49-54.

41. Affolter M., Barde Y. Self-renewal in fly kidney // Dev. Cell 2007. V.13. P.321-322.

42. Aitchison J.D., Rout M.P. A tense time for the nuclear envelope //Cell. 2002. V.108. P.3010-3014.

43. Akey C.W., Radermacher M. Architecture of the Xenopus nuclear pore complex revealed by three-dimensional cryo-electron microscopy //J.Cell Biol. 1993. V.122. P.1-19.

44. Akhmanova A., Steinmetz M.O. Tracking the ends: a dynamic protein network controls the fate of microtubule tips //Nat.Rev. Mol. Cell Biol. 2008. V.9. P.309-322.

45. Alliegro M.C., Alliegro M.A., Pallazzo R.E. Centrosome-associated RNA in surf clam oocytes //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V.103. P.9034-9038.

46. Amrani N., Sachs M.S., Jacobson A. Early nonsense: niRNA decay solves a translational problem // Nature Reviews. Mol. Cell Biol. 2006. V.7. P.415-425.

47. Anderson D J., Vargas J.D., Hsiao J.P., Hetzer M.W. Recruitment of functionally distinct membrane proteins to chromatin mediates nuclear envelope formation in vivo // J.Cell. Biol. 2009. V.186. P.183-191.

48. Anderson P., Kedersha N. RNA granules // J.Cell Biol. 2006. V.172. P.803-808.

49. Antar L.N., Dictenberg J.B., Plociniak M., Afroz R., Bassell G.J. Localization of FMRP-associated mPNA granules and requirement of microtubules for activity-dependent trafficking in hippocampal neurons // Genes Brain Behav. 2005. V.4. P.350-359

50. Arking R. Temperature-sensitive cell-lethal mutants of Drosophila: isolation and characterization // Genetics. 1975. V.80. N 3. P.519-537.

51. Aschrafi A., Cunningham B.A., Edelman G.M., Vanderklish P.W. The fragile X mental retardation protein and group 1 metabotropic glutamate receptors regulate levels of RNA granules in brain // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2004. V.102. P.2180-2185.

52. Atkin N.B. Aneuploidy in carcinomas may be initiated by the acquisition of a single trisomy//Cytogen Genome Res. 2003. V.101. P.99-102.

53. Azad A.K., Ideue t., Ohshima Y., Tani T. A mutation in the gene involved in sister chromatid separation causes a defect in nuclear mRNA export in fission yeast //Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. V.310. P.176-181.

54. Azimzadeh J., Bornens M. Structure and duplication of the centrosome // J. Cell Sci. 2007. V.120. P.2139-2142.

55. Babu J.R., Jeganathan K.B., Baker D.J., Wu X., Kang-Decker N., van Deursen J.M. Rael is an essential mitotic checkpoint regulator that cooperates with Bub3 to prevent chromosome missegregation //J.Cell Biol. 2003. V.160. P.341-353.

56. Badano J.L., Katsanis N. Life without centrioles: cilia in the spotlight //Cell. 2006. V.125. P.1228-1230.

57. Bahe S., Stierhof Y.D., Wikinson C.J., Leiss F., Nigg E.A. Rootletin forms centriole-associated filaments and functions in centrosome cohesion //J. Cell Biol.2005. V.171. P.27-33.

58. Bailer S.M., Balduf C., Katahira J., Podtelejnikov A., Rollenhagen C., Mann M., Pante N., Hurt E. Nupll6p associates with the Nup82p-Nsplp-Nupl59p nucleoporin complex//J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.23540-23548.

59. Baird D.H., Myers K.A., Mogensen M., Moss D., Baas P.W. Distribution of the microtubule-related protein ninein in developing neurons //Neuropharmacology. 2004. V.47. P.677-683.

60. Baker J.D., Adhikarakunnathu S., Kernan MJ. Mechanosensory-defective, male sterile unc mutants identify a novel basal body protein required for cillogenesis in Drosophila //Development. 2004. V.131. P.3411-3422.

61. Bamba C., Bobinnec Y., Fukuda M., Nishida E. The GTPase Ran regulates chromosome positioning and nuclear envelope assembly in vivo //Curr. Biol. 2002. V.12. P.503-507.

62. Barnard D.C., Cao Q., Richter J.D. Differential phosphorylation control Maskin association with eukaryotic translation initiation factor 4E and localization of the mitotic apparatus //Mol.Cell Biol. 2005. V.25. P.7605-7615.

63. Bartolini F., Gundersen G.G. Generation of noncentrosomal microtubule arrays //J. Cell Sci. 2006. V.119. P.4155-4163.

64. Barton N.H. Pleiotropic models of quantitative variation //Genetics. 1990. V.124. P.773-782.

65. Bashirullah A., Cooperstock R.L., Lipshitz H.D. RNA localization in development // Annu. Rev.Biochem. 1998. V.67. P.335-394.

66. Basto R., Lau J., Vinogradova T., Gardiol A., Woods C.G., Khodjakov A., Raff J.W. Flies without centrioles //Cell. 2006. V.125. P.1375-1386.

67. Beaudouin J, Gerlich D., Daigle N., Eilis R., Ellenberg J. Nuclear envelope breakdown proceeds by microtubule-induced tearing of the lamina //Cell. 2002. V.108. P.83-96.

68. Beckham C.J., Parker R. P bodies, stress granules, and viral life cycles // Cell Host & Microbe. 2008. V.3. P.206-212

69. Bednenko J., Cingolai G., Gerace L. Nucleocytoplasmic transport: navigating the channel //Traffic. 2003. V.4. P.127-135.

70. Behm-Ansmant I., Gatfield D., Rehwinkel J., Hilgers V., Izaurralde E. A conserved role for cytoplasmic poly(A)-binding protein 1 (PABPC1) in nonsensemediated mRNA// EMBO J. 2007. V. 26. P.l-11.

71. Beisson J., Wright M. Basal body/centriole assembly and continuity //Curr. Opin. Cell Biol. 2003. V.15. P.96-104.

72. Beckham C.J., Parker R. P bodies, stress granules, and viral life cycles // Cell Host & Microbe. 2008. V.3. P.206-212.

73. Benashski S.E., Harrison A., Patel-King R.S., King S.M. Dimerization of the highly conserved light chain shared by dynein and myosin V //J. Biol. Chem. 1997. V.272. P.20929-20935.

74. Ben-Efraim I., Gerace L. Gradient of increasing affinity of importin beta for nucleoporins along the pathway of nuclear import //J. Cell Biol. 2001. V.152. P.411-417.

75. Benihashemi L., Wilson G.M., Das N., Brewer G. Upfl/Upf2 regulation of 3' untranslated region splice variants of AUF1 links nonsense-mediated and A + U -rich element-mediated mRNA decay // Mol. Cell. Biol. 2006. V.26. P.8743-8754.

76. Bettencourt-Dias M., Rodrigues-Martins A., Carpenter L., Riparbelli M., Lehmann L., Gatt M.K., Carmo N., Balloux F., Callaini G., Glover D.M. SAK/PLK4 is required for centriole duplication and flagella development //Curr. Biol. 2005. V.15. P.2199-2207.

77. Bickel S.E., Orr-Weaver T.L. Holding chromatids together to ensure they go their separate ways//BioEssays. 1996. V.18. P.293-300.

78. Black D. L. Mechanisms of alternative pre-messenger RNA splicing // Annu. Rev. Biochem. 2003. V.72. P.291-336.

79. Blanchette M. Labourier E. Green R.E. Brenner S.E. Rio D.C. Genome-wide analysis reveals an unexpected function for the Drosophila splicing factor U2AF50 in the nuclear export of intronless mRNAs //Mol. Cell. 2004. Y.14. P.775-786.

80. Blevins M.B., Smith A.M., Phillips E.M., Powers M.A. Complex formation among the RNA export' proteins Nup98, Rael/Gle2, and TAP //J.Biol.Chem. 2003. V.278. P.20979-20988.

81. Blob el G. Gene gating: a hypothesis //Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1985. V.82. P.8527-8529.

82. Blower M.D., Nachury M., Heald R., Weis K. A Rael-containing ribonucleoprotein complex is required for mitotic spindle assembly // Cell 2005. V.121. P.223-234.

83. Bonaccorsi S., Giansanti M.G., Gatti M. Spindle self-organization and cytokinesis during male meiosis in asterless mutants of Drosophila melanogaster //J. Cell Biol. 1998. V.142. P.751-761.

84. Bornens M. Centrosome composition and microtubule anchoring mechanisms //Curr. Opin. Cell Biol. 2002. V.14. P.25-34.

85. Bourguet D., Raymond M. The molecular basis of dominance relationships: the case of some recent adaptive genes // J. Evol. Biol. 1998. V.l 1. P.103-122.

86. Bowman S.K., Neumuller R.A., Novatchkova M., Du Q., Knoblich J.A. The Drosophila NuMA homolog Mud regulates spindle orientation in asymmetric cell division // Development Cell. 2006. V.10. P.731-742.

87. Bramham C.R., Wells D.G. Dendritic mRNA: transport, translation and function // Nature Rev. Neurosci. 2007. V.8. P. 776-789.

88. Braun I.C., Herold A., Rode M., Conti E., Izaurralde E. Overexpression of TAP/pl5 heterodimers by passes nuclear retention and stimulates nuclear mRNA export // J. Biol. Cell. 2001. V.276. P.20536-20543.

89. Braun I.C. Herold A., Rode M., Izaurralde E. Nuclear export of mRNA by TAP/NXF1 requires two nucleoporin-binding sites but not pl5 // Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. P.5405-5418. '

90. Brendel C., Rehbein M., Kreienkamp H.-J., Buck F., Richter D., Kindler S. Characterization of staufen 1 ribonucleoprotein complexes // Biochem. J. 2004. V.384. P.239-246.

91. Brengues M., Teixeira D., Parker R. Movement of eukaryotic mRNAs between polysomes and cytoplasmic processing bodies //Science. 2005. V.310. P.486-489.

92. Broadus J., Doe C.Q. Extrinsic cues, intrinsic cues and microfilaments regulate asymmetric protein localization in Drosophila neuroblasts //Curr. Biol. 1997. V.7. P.827-835.

93. Brown J.A., Bharathi A., Ghosh A., Whalen W., Fitzgerald E., Dhar R. A mutation in the Schizosaccharomyces pombe rael gene causes defects in poly(A)+ RNA export and in the cytoskeleton //J.Biol.Chem. 1995. V.270. P.7411-7419.

94. Brown C.R., Hong-Brown L.Q., Doxsey S.J., Welch W.J. Molecular chaperones and the centrosome // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 824-840.

95. Burke DJ. Complexity in the spindle checkpoint //Curr. Opin. Genet. Develop. 2000. V.10. P.26-31.

96. Busson S., Dujardin D., Moreau A., Dompierre J., De Mey J.R. Dynein and dynactin are localized to astral microtubules and at cortical sites in mitotic epithelial cells //Curr. Biol. 1998. V.8. P.541-544.

97. Cabernard C., Doe C.Q. Stem cell self-renewal: centrosomes on the move //Curr. Biol. 2007. V.17. R465-467.

98. Caceres J.F., Kornblihtt A.R. Alternative splicing: multiple control mechanisms and involvement in human disease //Trends Genet. 2002. V.18. P. 186-193.

99. Cahill D.P., Kinzler K.W., Vogelstein B., Lengauer C. Genetic unstability and Darwinian selection in tumours //Trends Cell Biol. 1999. V.9. M57-M60.

100. Cahill D.P., Lengauer C., Yu J., Riggins G.J., Willson J.K., Markowitz S.D., Kinzler K.W., Vegelstein B. Mutations of mitotic checkpoint genes in human cancers //Nature. 1998. V.392. P.300-303.

101. Callaini G., Riparbelli M.G. Fertilization in Drosophila melanogaster centrosome inheritance and organization of the first mitotic spindle //Develop. Biol. 1996. V.176. P.199-208.

102. Campbell M.C., Chan G.K., Yen T J. Mitotic checkpoint proteins Hs MAD1 h Hs MAD2 are associated with nuclear pore complexes in interphase //J.Cell Sci. 2001. V.114. P.953-963.

103. Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. The embryonic development of Drosophila melanogaster //Berlin. Springer-Verlag. 1985.

104. Carazo-Salas R.E., Grass O.J., Mattaj I.W., Karsenti E. Ran-GTP coordinates regulation of microtubule nucleation and dynamics during mitotic spindle assembly //Nat.Cell Biol. 2001. V.3. P.228-234.

105. Carson J.H., Cui H., Barbarese E. The balance of power in RNA trafficking // Curr. Opin. Neurobiol. 2001. V.ll. P.558-563.

106. Caspari E. Pleiotropic gene action //Evolution. 1952. V.6. P.l-18.

107. Cataldo L., Mastrangelo M.A., Kleene K.C. Differential effects of heat shock on translation of normal mRNAs in primary spermatocytes, elongated spermatids and Sertoli cells in seminiserous tubule culture // Exp. Cell Res. 1997. V. 231. № 1. P.206-213.

108. Chang D.D., Sharp P.A. Messenger RNA transport and HIV rev regulation // Science. 1990. V.249. P.614-615.

109. Cheng J., Tiirkel N., Hemati N., Fuller M.T., Hunt A.J., Yamashita Y.M. Chromosome misorientation reduces stem cell division during ageing // Nature. 2008. V.456. P.599-604.

110. Cheeseman I.M., Drabin D.G., Barnes G. Simple centromere, complex kinetochore: linking spindle microtubules and centromeric DNA in budding yeast //J.Cell Biol. 2002. V.157. P.199-203.

111. Chennathukuzhi V., Morales C.R., El-Alfy M., Hecht N.B. The kinesin KIF17b and RNA-binding protein TB-RBP transport specific cAMP-responsive elementmodulator-regulated mRNAs in male germ cells //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. V.100. P.15566-15571.

112. Chia W., Somers W.G., Wang H. Drosophila neuroblast asymmetric divisions: cell cycle regulator, asymmetric protein localization, and tumorigenesis // J.Cell Biol. 2008. V. 180. P.267-272.

113. Chomczynski, P, Sacchi, N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction //Anal. Biochem. 1987. V.162. P.156-159.

114. Chuang J.Z., Yeh T.Y., Bollati F., Conde C., Canavosio F., Caceres A., Sung C.-H. The dynein light chain Tctex-1 has a dynein-independent role in actin remodeling during neurite outgrowth // Develop. Cell. 2005. V.9. P.75-86.

115. Cleveland D.W., Mao Y., Sullivan K.F. Centromere and kinetochores: from epigenetics to mitotic checkpoint signaling //Cell. 2003. V.112. P.407-421.

116. Coakley T. Hyperthermia effects on the cytoskeleton and on cell morphology // Temperature and animal cells. Symposia of the Society for Experimental Biology. 1987. №41. P.187-211.

117. Compton D.A. Spindle assembly in animal cells //Annu. Rev. Biochem. 2000. V.69. P.95-114.

118. Conti E., Izaurralde E. Nuclearcytoplasmic transport enters the atomic age //Curr. Opin. Cell Biol. 2001. V.3. P.310-319.

119. Conti E., Izaurralde E. Nonsense-mediated messenger RNA decay: molecular insights and mechanistic variations across species // Curr. Opin. Cell Biol. 2005. V.17. P.316-325.

120. Cooper K.W. Normal spermatogenesis in Drosophila II Biology of Drosophila. N.Y. 1950. P.1-61.

121. Cougot N., Babajko S., Séraphin B. Cytoplasmic foci are sites of mRNA decay in human cells // J.Cell Biol. 2004. V.165. P.31-40.

122. Craig J.M., Earnshaw W.C., Vagnarelli P. Mammalian centromeres: DNA sequence, protein composition, and role in cell cycle progression IIExp. Cell Res. 1999. V.246. P.249-262.

123. Cronshaw J.M., Krutchinsky A.N., Zhang W., Chait B.T., Matunis M.J. Proteomic analysis of the mammalian nuclear complex //J. Cell Biol. 2002. V.158. P.915-927.

124. Cullen B.R. Nuclear RNA export // J. Cell Sci. 2003. V.l 16. P.587-597.

125. Cullen C.F., Ohkura H. Msps protein is localized to acentrosomal poles to ensure bipolarity of Drosophila meiotic spindles //Nat.Cell Biol. 2001. V.3. P.637-642.

126. Cummings M., King R. The cytology of the vitellogenetic stages of oogenesis in Drosophila melanogaster II J. Morph. 1969. V.128. P.427-442.

127. Darnell R.B. Memory, synaptic translation, and prions? //Cell. 2003. V.115! P.767-770.

128. Dasso M. Running on Ran: nuclear transport and the mitotic spindle //Cell. 2001. V.104. P.321-324.

129. Davis E.E., Brueckner M., Katsanis N. The emerging complexity of the vertebrate cilium: new functional roles for an ancient organelle //Develop. Cell. 2006. V.ll. P.919.

130. De Anda F.C., Pollarolo G., Da Silva J.S., Carmoletto P.G., Feiguin F., Dotti C.G. Centrosome localization determines neuronal polarity //Nature. 2005. V.436. P.704-708.

131. Debec A., Courgeon A.M., Maingourd M., Maisonhaute C. The response of the centrosome to heat shock and related stresses in a Drosophila cell line // J. Cell Sci. 1990. V. 96. P. 403-412.

132. DePinho R.A., Polyak K. Cancer chromosomes in crisis // Nature Genet. 2004. V.36. № 9. P.932-934.

133. Desai A., Mitchison TJ. Microtubule polymerization dynamics //Armu. Rev. Cell Develop. Biol. 1997. V.13. P.83-117.

134. Devys D., Lutz Y., Rouyer N. et al. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragil X permutation // Nat. Genet. 1993. V.4. P.335-340.

135. Dixit R., Ross J.L., Goldman Y.E., Holzbaur E.L.F. Differential regulation of dynein and kinesin motor proteins by tau II Science. 2008. V.319. P.1086-1089.

136. Doane W.W. Completion of meiosis in uninseminated eggs of Drosophila melanogaster II Science. 1960. V.132. P.677-678.

137. Dobie K.W., Hari K.L., Maggert K.A., Karpen G.H. Centromere proteins and chromosome inheritance: a complex affair //Curr. Opin. Genet. Develop. 1999. V.9. P.206-217.

138. Dobzhansky T., Holz A.M. A reexamination of the problem of manifold effects of genes in Drosophila melanogaster //Genetics. 1943. V.28. P.295-303.

139. Doe C.Q. Neural stem cells: balancing self-renewal with differentiation // Development 2008. V.135. P.1575-1587.

140. Dostie J., Dreyfiiss G. Translation is required to remove Y14 from mRNAs in cytoplasm // Curr. Biol. 2002. V.12. P. 1060-1067.

141. Doubilet S., McKim K.S. Spindle assembly in the oocytes of mouse and Drosophila similar solutions to a problem // Chromosome Research. 2007. V.15. P.681-696.

142. Doxsey S. The centrosome a tiny organelle with big potential //Nature Genet. 1998. V.20. P.104-106.

143. Doxsey S. Duplicating dangerously: linking centrosome duplication and aneuploidy//Mol. Cell. 2002. V.10. P.439-440.

144. Doxsey S., McCollum D., Theurkauf W. Centrosomes in cellular regulation //Annu. Rev. Cell Develop. Biol. 2005a. V.21. P.411-434.

145. Doxey S., Zimmerman W., Mikule K. Centrosome control of the cell cycle //Trends Cell Biol. 2005b. V.15. P.303-311.

146. Dreyfiiss G., Kim V.N., Kataoka N. 2002. Messenger-RNA-binding proteins and the messengers they carry //Nat.Rev.Mol.Cell Biol. V.3. P.195-205.

147. Dreyfiiss G., Matunis M.J., Pinol-Roma S., Burd C.G. hnRNP proteins and the biogenesis of mRNA // Annu.Rev.Biochem. 1993. V.62. P.289-321.

148. Du L., Richter J.D. Activity-dependent polyadenylation in neurons // RNA. 2005. V.ll. P.1340-1347.

149. Dubnau J et al. The Staufen/pumilio pathway is involved in Drosophila long-term memory //Curr.Biol. 2003. V.13. P.286-296.

150. Duboise S.M., Lee H., Guo J., Choi J.-K., Czajak S., Simon M., Desrosiers R.C., Jung J.U. Mutation of the Lck-binding motif of Tip enhances lymphoid cell activation by herpesvirus saimiri //J.Virol. 1998. V.72. P.2607-2614.

151. Duchaine T.F., Hemraj I., Furic L., Deitinghoff A., Kiebler M.A., DesGroseillers L. Staufen2 isoforms localize to the somatodendritic domain of neurons and interect with different organelles // J. Cell Sci. 2002. V.l 15. P.3285-3295.

152. Dudley A.M., Janse D.M., Tanay A., Shamir R., Church G.M. A global view of pleiotropy and phenotypically derived gene function in yeast // Mol. Syst. Biol. 2005. V.l. 2005.0001.

153. Dugre-Brisson S., Elvira G., Bonlay K., Chatel-Chaix L., Maland A.J., DesGroseillers L. Interaction of Staufen 1 with the 5' end of mRNA facilitates translation of these RNAs // Nuclear Acid Res. 2005. V.33. N 5. P.4797-4812.

154. Dybas, L.K., Harden, K.K., Machnicki, J.L., and Geer, B.W. Male fertility in Drosophila melanogaster: lesions of spermatogenesis associated with male sterile mutations of the vermilion region //J. Exp. Zool. 1983. V.226. P.293-302.

155. Echeverri C.J., Paschal B.M., Vaughan K.T., Vallee R.B. Molecular characterization of the 50-kD subunit of dynactin reveals function for the complex in chromosome alignment and spindle organization during mitosis //J.Cell Biol. 1996.V.132. P.617-633.

156. Edgar, B.A., Schubiger, G. Parameters controlling transcriptional activation during early Drosophila development //Cell. 1986. V.44. P.871-877.

157. Edgar B.A., Sprenger F., Duronio R.J., Leopold P., O'Farrell P.H. Distinct molecular mechanisms regulate cell cycle timing at successive stages of Drosophila embryogenesis // Genes Dev. 1994. V.8. P.440-453.

158. Eeken J.C., Sobels F.H., Hyland V., Schalet A.P. Distribution of MR-induced sex-linked recessive lethal mutations in Drosophila melanogaster //Mutat. Res. 1985. V.150. P.261-275.

159. Elliott, D.J., Grellscheid, S.N. Alternative RNA splicing regulation in the testis //Reproduction 2006. V.132. P.811-819.

160. Ellis J. Proteins as a molecular chaperones // Nature. 1987. V.328, No 6129. P.378-379.

161. Endow S.A. Microtubule motors in spindle and chromosome motility //Eur. J. Biochem. 1999. V.262. P.12-18.

162. Engel E. Uniparental disomy (UPD), genomic imprinting and a case for new genetics // Ann. Genet. 1997. V.40. P.24-34.

163. Erkmann J.A., Kutay U. Nuclear export of mRNA: from the site of transcription to the cytoplasm // Exptl.Cell Res. 2004. V.296. P. 12-20.

164. Eulalio A., Behm-Ansmant I., Izaurralde E. P-bodies: at the crossroads of post-transcriptional pathways //Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2007a. V.8. P.9-22.

165. Eulalio A., Behm-Ansmant I., Schweizer D., Izaurralde E. H-body formation is a consequence. Not the cause, of RNA-mediated gene silencing // Mol. Cell. Biol. 2007b. V.27. P.3970-3981.

166. Evgen'ev M.B., Zatsepina O.G., Titarenco H. Autoregulation of heat-shock system in Drosophila melanogaster. Analysis of heat-shock responsce in a temperature sensitive cell lethal mutant // FEBS Lett. 1985. V.188, № 2. P.286-290.

167. Fabunmi R.P., Wigley W.C., Thomas P.J., DeMartino G.N. Activity and regulation of the centrosome-associated proteasome //J. Biol.Chem. 2000. V.275. P.409-413.

168. Fahmy O.G., Fahmy M. New mutants report //Drosophila Inform. Serv. 1959. V.33. P.82-94.

169. Fan X.C., Steitz J.A. HNS. A nuclear-cytoplasmic shuttling sequence in HuR //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V.95. P.15293-15298.

170. Fan L., Simard L.R., Survival motor neuron (SMN) protein: role in neurite outgrouth and neuromuscular maturation during neuronal differentiation and development //Human Mol. Genetics. 2002. V.ll. № 14. P.1605-1614.

171. Fang G. Checkpoint protein BubRl acts synergistic ally with Mad2 to inhibit anaphase-promoting complex //Mol. Biol. Cell. 2002. V.13. P.755-766.

172. Fang G., Yu H., Kirschner M.W. The checkpoint protein MAD2 and the mitotic regulator CDC20 form a ternary complex with the anaphase-promoting complex to control anaphase initiation//Genes Develop. 1998. V.12. P.1871-1883.

173. Fant X., Merdes A., Haren L. Cell and molecular biology of spindle poles and NuMA//Int. Rev. Cytol. 2004. V.238. P.l-57.

174. Feng Y., Wente S.R., Majerus P.W. Overexpression of the inositol phosphatase SopB in human 293 cells stimulates cellular chloride influx and inhibits nuclear mRNA export //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. P.875-879.

175. Fillman C., Lykke-Andersen J. RNA decapping inside and outside of processing bodies // Curr. Opin. Cell Biol. 2005. V.17. P.326-331.

176. Foe V.E., Alberts B.M. Studies of nuclear and cytoplasmic behavior during the five mitotic cycles that precede gastrulation in Drosophila embryogenesis // J. Cell Sci. 1983. V.61. P. 31-70.

177. Foley K., Cooley L. Apoptosis in late stage Drosophila nurse cells does not require genes within the H99 deficiency //Development. 1998.V.125. P. 1075-1082.

178. Forrest S.T., Barringhaus S.T., Perlegas D., Hammarskjold M.L., McNamara C.A. Intron retention generates a novel Id3 isoform that inhibits vascular lesion formation // J. Biol. Chem. 2004. V.279. P.32897-32903.

179. Foster K.R., Shaulsky G., Strassmann J.E., Queller D.C., Thompson C.R.L. Pleiotropy as a mechanism to stabilize cooperation // Nature. 2004. V.431. P.693-696.

180. Fox C.A., Sheets M.D., Wickens M.P. Poly(A) addition during maturation of frog oocytes: distinct nuclear and cytoplasmic activities and regulation by the sequence UUUUUAU // Gene Dev. 1989. V.3. P.2151-2162.

181. Freatherstone D.E., Brodie K. Wrestling with pleiotropy: genomic and topological analysis of the yeast expression network //BioEssay. 2002. V.24. P.267-274.

182. Fribourg S., Braun I.C., Izaurralde E., Conti E. Structural basis for the recognition of a nucleoporin FG repeat by the NTF2-like domain of the TAP/pl5 mRNA nuclear export factor// Mol. Cell. 2001. V.8. P.645-656.

183. Fu X.D. The superfamily of arginine/serine-rich splicing factors // RNA. 1995. V.l. P.663-680.

184. Fukata M., Watanabe T., Noritake J., Nakagawa M., Yamaga M., Kuroda S., Matsuura Y., Iwamatsu A., Perez F., Kaibuclii K. Racl and Cdc42 capture microtubules through IQGAP1 and CLIP-170 // Cell. 2002. V.109. P.873-885.

185. Fuller M.T. Spermatogenesis. In: The development of Drosophila melanogaster. //NY. Cold Spring Harbor Lab. Press. 1993. P.71-147.

186. Fuller M.T. Genetic control of cell proliferation and differentiation in Drosophila spermatogenesis //Semin. Cell Develop. Biol. 1998. V.9. P.433-444.

187. Funabiki H. Two birds with one stone dealing with nuclear transport and spindle assembly//Cell. 2005. V.121. P. 157-158.

188. Gaglio T., Dionne M.A., Compton D.A. Mitotic spindle poles are organized by structural and motor proteins in addition to centrosomes //J.Cell.Biol. 1997. V.l38. P.1055-1066.

189. Galante P.A., Sakabe N.J., Kirschbaum-Slager N., de Souza S.J. Detection and evoluation of intron retention events in the human transcriptome // RNA. 2004. V.10. P.757-765.

190. Gallouzi I.E., Steitz J.A. Delineation of mRNA export pathways by the use of cell-permeable peptides // Science. 2001. V.294. P.1895-1901.

191. Gao F.-B. Messenger RNAs in dendrites: localization, stability, and implications for neuronal function//BioEssays. 1998. V.20. P.70-78.

192. Gard D.L., Becker B.E., Josh Romney S. MAPing the eukaryotic tree of life: structure, function, and evolution of the MAP215/Disl family of microtubule-associated proteins //Int. Rev. Cytol. 2004. V.239. P.179-272.

193. Gatfield D., Izaurralde E. REFl/Aly and the additional exon junction complex proteins and dispensable for nuclear mRNA export //J.Cell.Biol. 2002. V.159. P.579-588.

194. Gatfield D., Unterholzner L., Ciccarelli F.D., Bork P., Izaurralde E. Nonsensemediated mRNA decay in Drosophila: at the intersection of the yeast and mammalian pathways // EMBO J. 2003. V.22. P.3960-3970.

195. Gatfield D., Izaurralde E. Nonsense-mediated messenger RNA decay is initiated by endonucleolytic cleavage in Drosophila II Nature. 2004. V.429. P.575-578.

196. Gebauer F., Hentze M.W. Fertility facts: male and female germ cell development requires translational control by CPEB // Mol. Cell. 2001. V.8. P.247-249.

197. Geer, B.W., Lischwe, T.D., and Murphy, K.G. Male fertility in Drosophila melanogaster. genetics of the vermilion region //J.Exp. Zool. 1983. V.225. P.107-118.

198. Gemma A., Hosoya Y., Seike M., Uematsu K., Kurimoto F., Hibino S., Yoshimura A., Shibuya M., Kudoh S., Emi M. Genomic structure of the human MAD2 gene and mutation analysis in human lung and breast cancers //Lung Cancer. 2001. V.32. P.289-295.

199. Georgatos S.D., Pyrpasopoulou A., Theodoropoulos P.A. Nuclear envelope breakdown in mammalian cells involves stepwise lamina disassembly and microtubule-drive deformation of the nuclear membrane //J. Cell Sci. 1997. V.l 10. P.2129-2140.

200. Gepner J., Li M.-G., Ludmann S., Kortas C., Boylan K., Iyadurai S J.P., McGrail M., Hays T.S. Cytoplasmic dynein function is essential in Drosophila melanogaster //Genetics. 1996. V.142. P.865-878.

201. Gergely F., Kidd D., Jeffers K., Wakefield J., Raff J.W. D-TACC: a novel centrosomal protein required for normal spindle formation in the early Drosophila embryo //EMBO J. 2000. V.19. P.241-252.

202. Gergely F., Dravian V.M., Raff J.W. The ch-TOG/XMAP215 protein is essential for spindle pole organization in human somatic cells //Genes Develop. 2003. V.17. P.336-341.

203. Ghosh-Roy A., Desai B.S., Ray K. Dynein light chain 1 regulates Dynamin mediated F-actin assembly during sperm individualization in Drosophila // Mol.Biol. Cell 2005. V.16. P.3107-3116.

204. Gibson G., Gehring WJ. Head and thoracic transformations caused by ectopic expression of Antennapedia during Drosophila development // Development. 1988. V.102. P.657-675.

205. Gillett E.S., Sorger P.K. Tracing the pathway of spindle assembly checkpoint signaling//Develop. Cell. 2001. V.l. P.162-164.

206. Glanzer J., Miyashiro K.Y., Sul J.-Y., Burrett L., Belt B., Haydon P., Eberwine J. RNA splicing capability of live neuronal dendrites // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2005. V.102. N 46. P.16859-16864.

207. Glover D.M., Gonzalez C., Raff J.W. The centrosome //Sci. Amer. 1993. V.268. P.62-68.

208. Goetre B., Tuebing F., Xie Y., Dorostkar M.M., Thomas S., Pehl U., Boehm S., Macchi P., Riebber M.A. The brain-specific double-stranded RNA-binding protein Staufen 2 is required for dendritic spine morphogenesis // J.Cell Biol. 2006. V.172. P.221-231.

209. Goldberg M.W., Allen T.D. The nuclear pore complex and lamina: three-domensional structures and interactions determined by field emission in-lens scanning electron microscopy //J. Mol. Biol. 1996. V.257. P.848-865.

210. Golovanov A.P., Hautbergue G.M., Tintaru A.M., Lian L.-Y., Wilson S.A. The solution structure of REF2-I reveals interdomain interactions and regions involved in binding mRNA export factors and RNA //RNA. 2006. V.12. P.1933-1948.

211. Golubkova E.V., Markova E.G., Markov A.V., Avanesyan E.O., Nokkala S., Mamon L.A. Dm nxfl/sbr gene affects the formation of meiotic spindle in female Drosophila melanogaster II Chromosome Research. 2009. V.l7. P.833-845.

212. Golubkova, E.V., Nokkala, S., Mamon, L.A., The nuclear export factor gene small bristles is involved in the control of early embryonic mitoses in Drosophila melanogaster //Drosophila Inform. Serv. 2006. V.89. P.31-39.

213. Gonzalez C., Tavosanis G., Mollinari C. Centrosomes and microtubule organization during Drosophila development//J. Cell Sci. 1998. V.lll. P.2697-2706.

214. Gorbsky G.J., Ricketts W.A. Differential expression of a phosphoepitope at the kinetochores of moving chromosomes //J.Cell Biol. 1993. V.122. P.1311-1321.

215. Gôrlich D., Kutay U. Transport between the cell nucleus and the cytoplasm //Annu. Rev. Cell Develop. Biol. 1999. V.15. P.607-660.

216. Gorr I.H., Boos D., Stemmann O. Mutual inhibition of separase and Cdkl by two-step complex formation//Mol. Cell. 2005. V.19. P. 135-141.

217. Goshima G., Nédélec F., Vale R.D. Mechanisms for focusing mitotic spindle poles by minus end-directed motor proteins //J. Cell Biol. 2005. V.171. P.229-240.

218. Grant R.P., Hurt E., Neuhaus D., Stewart M. Structural basis for the interaction between the Tap C-terminal domain and FG repeat-containing nucleoporins // Nat. Struct. Biol. 2002 V.9. P. 247-251.

219. Groisman I., Huang Y.-S., Mendez R., Cao Q., Theurkauf W., Richter J.D. CPEB, maskin, and cyclin B1 mRNA at the mitotic apparatus: implications for local translational control of cell division //Cell. 2000. V.103. P.435-447.

220. Groisman I., Jung M.-Y. Sarkissian M., Cao Q., Richter J. Translational control of the embryonic cell cycle // Cell 2002. V.109. P.l-20.

221. Grophans H., Filipowicz W. The expanding world of small RNAs.// Nature. 2008. V.451. P.414-416.

222. Grosso A.R., Gomes A.Q., Barbosa-Morais N.L., Caldeira S., Thorne N.P., Grech G., von Lindern M., Carmo-Fonseca M. Tissue-specific splicing factor gene expression signatures //Nucleic Acids Res. 2008. V.36. P.4823-4832.

223. Grass O.J., Carazo-Salas R.E., Schatz C.A., Guarguaglini G., Kast J., Wilm M., Le Bot N., Vernos I., Karsenti E., Mattaj I.W. Ran induces spindle assembly by reversing the inhibitory effect of importin a on TPX2 activity //Cell. 2001. V.104. P.83-93.

224. Griiter P., Tabemero C., von Kobbe C., Schmitt C., Saavedra C., Bachi A., Wilm M., Felber B.K., Izaurralde E. TAP, the human homolog of Mex67p, mediates CTE-dependent RNA export from the nucleus //Mol. Cell. 1998. V.l. P.649-659.

225. Hackstein J.H.P. Spermatogenesis in Drosophila: a genetic approach to cellular and subcellular differentiation//Eur.J.Cell.Biol. 1991. V.56. P.151-169.

226. Hammarskjôld M.-L. Constitutive transport element-mediated nuclear export // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2001. V.259. P.77-93.

227. Hanks S., Coleman K., Reid S., Plaja A., Firth H., Fitz P.D., Kidd A., Méhes K., Nash R., Robin N., Shannon N., Tolmie J., Swansbury J., Irrthum A., Douglas J.,

228. Rahman N. Constitutional aneuploidy and cancer predisposition caused by biallelic mutations in BUB1B // Nature Genet. 2004. V. 36. P.l 159-1161.

229. Harel A., Oq'alo A.V., Vincent T., Lachish-Zalait A., Vasu S., Shah S., Zimmerman E., Elbaum M., Forbes D J. Removal of a single pore subcomplex results in vertebrate nuclei devoid of nuclear pores //Mol.Cell. 2003. V.l 1. P. 853-864.

230. Hartwell L.H., Kastan M.B. Cell cycle control and cancer //Science. 1994. V.266. P.1821-1828.

231. Hastings M.L., Krainer A.R. Pre-mRNA splicing in the new millennium // Curr. Opin. Cell Biol. 2001. V.13. P.302-309.

232. Hatsumi M., Endow S.A. Mutants of the microtubule motor protein, nonclaret disjunctional, affect spindle structure and chromosome movement in meiosis and mitosis //J. Cell Sci. 1992. V.101. P.547-559.

233. Hautbergue G.M., Huang M.-L., Golovanov A.P., Lian L.-Y., Wilson S.A. Mutually exclusive interaction drive handover of mRNA from export adaptors to TAP //Proc. Natl. Acad. Sci USA. 2008. V.105. P.5154-5159.

234. Hawthorne S.K., Busanelli R.R., Kleene K.C. The 5TJTR and 3TJTR of the sperm mitochondria-associated cysteine-rich protein mRNA regulate translation in spermatids by multiple mechanisms in transgenic mice //Develop. Biol. 2006. V.297. P.118-126.

235. Hayashi I., Wilde A., Mai T.K., Ikura M. Structural basis for the activation of microtubule assembly by the EB1 and pl50Glued complex // Mol. Cell. 2005. V.19. P.449-460.

236. Heald R., Tournebize R., Blank T., Sandaltzopoulos R., Becker P., Hyman A., Karsenti E. Self-organization of microtubules into bipolar spindles around artificial chromosomes in Xenopus egg extracts //Nature. 1996. V.382. P.420-425.

237. Heald R., Tournebize R., Habermann A., Karsenti E., Hyman A. Spindle assembly in Xenopus egg extracts: respective roles of centrosomes and microtubule self-organization//J.Cell.Biol. 1997. V.138. P.615-628.

238. Hendrick J.P., Hartl F.I. Molecular chaperone functions of heat shock proteins // Annu. Rev. Biochem. 1993. V.62. P.349-384.

239. Herold A., Klymenko T., Izaurralde E. NXFl/pl5 heterodimers are essential for mRNA nuclear export in Drosophila II RNA. 2001. V.7. P.1768-1780.

240. Herold A., Teixeira L., Izaurralde E. Genome-wide analysis of nuclear mRNA export pathways in Drosophila II EMBO J. 2003. V.22. P.2472-2483.

241. Hetzer M., Gruss O J., Mattaj I.W. The Ran GTPase as a marker of chromosome position in spindle formation and nuclear envelope assembly //Nature Cell Biol. 2002. V.4. E177.

242. He X., Zhang J. Toward a molecular understanding of pleiotropy //Genetics. 2006. V.173. P.1885-1891.

243. Hiller M., Huse K., Platzer M., Backofen R. Non-EST based prediction of exon skipping and intron retention events using Pfam information //Nucleic Acids Res. 2005. V.33. P.5611-5621.

244. Hilleren P., Parker R. Mechanisms of mRNA surveillance in eukaryotes // Annu Rev. Genet. 1999. V.33. P.229-260.

245. Hinchcliffe E.H., Li C., Thompson E.A., Maller J.L., Sluder G. Requirement of cdk2-cyclin E activity for repeated centrosome reproduction Xenopus egg extracts //Science. 1999. V.283. P.851-854.

246. Hinchcliffe E.H., Miller F.J., Cham M., Khodjakov A., Sluder G. Requirement of a centrosomal activity for cell cycle progression through Gl into S phase //Science. 2001. V.291. P.1547-1550.

247. Hirokawa N., Nöda Y., Okada Y. Kinesin and dynein superfamily proteins in organelle transport and cell division //Curr. Opin. Cell Biol. 1998. V.10. P.60-73.

248. Hodgkin J. Seven types of pleiotropy //Int. J. Dev. Biol. 1998. V.42. P.501-505.

249. Hoffinan D.B., Pearson C.G., Yen T.J., Howell B J., Salmon E.D. Microtubule-dependent changes in assembly of microtubule motor proteins and mitotic spindle checkpoint proteins at ptkl kinetochores //Mol. Biol. Cell. 2001. V.12. P.1995-2009.

250. Holland A.J., Taylor S.S. Cyclin-Bl-mediated inhibition of excess separase is required for timely chromosome disjunction //J. Cell Sci. 2006. V.l 19. P.3325-3336.

251. Holmfeldt P., Stenmark S., Gullberg M. Differential functional interplay of TOGp/XMAP215 and the KinI kinesin MCAK during interphase and mitosis //EMBO J. 2004. V.23. V.621-631.

252. Howard J., Hyman A.A. Dynamics and mechanics of the microtubule plus end //Nature. 2003. V.422. P. 753-758.

253. Howell B.J., Hoffman D.B., Fang G., Murray A.W., Salmon E.D. Visualization of Mad2 dynamics at kinetochores, along spindle fibers, and at spindle pole in living cells //J.Cell Biol. 2000. V.150. P.1233-1249.

254. Hoyt M.A. Exit from mitosis: spindle pole power //Cell. 2000. V.102. P.267-270.

255. Hoyt M.A. A new view of the spindle checkpoint //J.Cell Biol. 2001. V.154. P.909-912.

256. Huang J., Raff J.W. The disappearance of cyclin B at the end of mitosis is regulated spatially in Drosophila cells //EMBO J. 1999. V.18. P.2184-2195.

257. Huang Y., Gattoni R., Stevenin J., Steitz J.A. SR splicing factors serve as adapter proteins for TAP-dependent mRNA export // Mol.Cell. 2003. V.l 1. P.837-843.

258. Huang Y.-S., Richter J.D. Regulation of local mRNA translation //Curr. Opin. Cell Biol. 2004. V.16. P.308-313.

259. Huang Y., Steitz J.A. Srprises along a messenger's journey // Molecular Cell. 2005. V.17. P.613-615.

260. Huang Y., Yario T.A., Steitz J.A. A molecular link between SR protein dephosphorylation and mRNA export // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004b. V. 101. P.9666-9670.

261. Huettner A.f. Maturation and fertilization in Drosophila melanogaster II J.Morphol. -1924. V.39. - P.249-265.

262. Hurt E., Strafcer K., Segref A., Bailer S., Schlaich N., Presutti C., Tollervey D., Jansen R. Mex67p mediates nuclear export of a variety of RNA polymerase II transcripts//J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.8361-8368.

263. Hut H.M.J., Lemstra W., Blaauw E.H., van Cappellen G.W.A., Kampinga, Sibon O.C.M. Centrosomes split in the presence of impaired DNA integrity during mitosis //Mol. Biol. Cell. 2003. V.14. P. 1993-2004.

264. Hyman A.A., Karsenti E. Morphogenetic properties of microtubules and mitotic spindle assembly //Cell. 1996. V.84. P.401-410.

265. Iguchi N., Tobias J.W., Hecht N.B. Expression profiling reveals meiotic male germ cell mRNAs that are translationally up- and down-regulated //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V.103. P.7712-7717.

266. Imai Y., Shiratori Y., Kato N., Inoue T., Omata M. Mutational inactivation of mitotic checkpoint genes, hsMAD2 and hBUBl, is rare in sporadic digestive tract cancer//Japp.J.Cancer Res. 1999. V.90. P.837-840.

267. Iouk T., Kerscher O., Scott R.J., Basrai M.A., Wozniak R.W. The yeast nuclear pore complex functionally interacts with components of the spindle assembly checkpoint//J.Cell Biol. 2002. V.159. P.807-819.

268. Izaurralde E. A conserved family of nuclear export receptors mediates the exit of messenger RNA to the cytoplasm // CMLS Cell. Mol. Life Sci. 2001. V.58. P. 11051112.

269. Ivankova N., Tretyakova I., Lyozin G. T., Avanesyan E., Zolotukhin A., Zatsepina O.G., Evgen'ev M.B., Mamon L.A. Alternative transcripts expressed by small bristles, the Drosophila melanogaster nxfl gene //Gene. 2010. V.458. P. 11-19.

270. Izaurralde E., Kutay U., von Kobbe C., Mattaj I.W., Gorlich D. The asymmetric distribution of the constituents of the Ran system is essential for transport into and out of the nucleus //EMBO J. 1997. V.16. P.6535-6547.

271. Jallepalli P.V., Lengauer C. Chromosome segregation and cancer: cutting through the mystery//Nat. Rev. Cancer. 2001. V.l. P. 109-117.

272. Ji J.Y., Squirrell J.M., Schubiger G. Both cyclin B levels and DNA-replication checkpoint control the early embryonic mitoses in Drosophila. Development //2004. V.131. P.401-411.

273. Jin L., Guzik B.W., Bor Y.-c. Rekosh D., Hammarskjold M.L. Tap and NXT promote translation of unspliced mRNA // Genes Devel. 2003a. V.17. P.3075-3086.

274. Jin P., Zarnescu D.C., Zhang F., Pearson C.E., Lucchesi J.C., Moses K., Warren S.T. RNA-mediated neurodegeneration caused by the fragile X permutation rCGG repeats in Drosophila 11 Neuron. 2003b. V.39. P.739-747.

275. Job D., Valiron O., Oakley B. Microtubule nucleation //Curr. Opin. Cell Biol. 2003. V.15.P.111-117.

276. Job K., Eberwine J. Localization and translation of mRNA in dendrites and axons //NatureReviews Neurosci. 2001. V.2. P.889-898.

277. Joseph J., Tan S.H., Karpova T.S., McNally J.G., Dasso M. SUMOl targets RanGAPl to kinetochores and mitotic spindle //J. Cell Biol. 2002. V.156. P.595-602.

278. Joseph J., Liu S.T., Jablonski S.A., Yen T.J., Dasso M. The RanGAPl-RanBP2 complex is essential for microtubule kinetochore interaction in vivo// Curr Biol. 2004. V.14. P.611-617.

279. Jung J.U., Lang S.M., Jun T., Roberts T.M., Veilette A., Desrosiers R.C. Downregulation of Lck-mediated signal transduction by tip of herpesvirus saimiri // J.Virol. 1995. V.69. P.7814-7822.

280. Kalab P., Pu R.T., Dasso M. The Ran GTPase regulates mitotic spindle assembly //Curr. Biol. 1999. V.9. P.481-484.

281. Kanai Y., Dohmae N., Hirokawa N. Kinesin transports RNA: isolation and characterization of an RNA-transporting granule. //Neuron. 2004. V.43. P.513-525.

282. Kang Y., Cullen B.R. The human TAP protein is a nuclear mRNA export factor that contains novel RNA-binding and nuclearcytoplasmic transport sequences //Genes Develop. 1999. V.13. P.l 126-1139.

283. Karr T.L. Centrosome inheritance: A central "in-egg-ma" solved? //Curr. Biol. 2001. V.ll. R21-R24.

284. Karr T.L., Pitnick S. The ins and out of fertilization //Nature. 1996. V.379. P.405-406.

285. Karsenti E., Kobayashi S., Mitchison T., Krischner M. Role of the centrosome in organizing the interphase microtubule array: properties of cytoplasts containing or lacking centrosomes //J.Cell Biol. 1984a. V.98. P.1763-1776.

286. Karsenti E., Newport J., Hubble R., Krischner M. Interconversion of metaphase and interphase microtubule arrays, as studied by the injection of centrosomes and nuclei into Xenopus eggs //J.Cell Biol. 1984b. V.98. P.1730-1745.

287. Kasashima K., Sakashita E., Saito K., Sakamoto H. Complex formation of the neuron-specific ELAV-like Hu RNA-binding proteins // Nucleic Acids Res. 2002. V.30. № 20. P.4519-4526.

288. Kasashima K., Terashima K., Yamamoto K., Sakashita E., Sakamoto H. Cytoplasmic localization is required for the mammalian ELAV-like protein HuD to induce neuronal differentiation // Genes Cells. 1999. V.4. P.667-683.

289. Katahira J., Straper K., Podtelejnikov A., Mann M., Jung J.U., Hurt E. The Mex67p-mediated nuclear inRNA export pathway is conserved from yeast to human // EMBO J. 1999. V.18. P.2593-2609.

290. Kataoka N. Diem M.D. Kim V.N. Yong J. Dreyfuss G. Magoh, a human homolog of Drosophila mago nashi protein, is a component of the splicing-dependent exon-exon junction complex //EMBO J. 2001. V.20 P.6424-6433.

291. Kataoka N. Yong J. Kim V.N. Velazquez F. Perkinson R.A. Wang F. Dreyfuss G. Pre-mRNA splicing imprints mRNA in the nucleus with a novel RNA-binding protein that persists in the cytoplasm //Mol. Cell. 2000. V. 6. P.673-682.

292. Kearney, J.B., Wheeler, S.R., Estes, P. Parente, B., Crews, S.T. Gene expression profiling of the developing Drosophila CNS midline cells //Devel. Biol. 2004. V.275. P.473-492.

293. Keating T.J., Peloguin J.G., Rodionov V.L., Momcilovic D., Borisy G.G. Microtubule release from the centrosome //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P.5078-5083.

294. Keene J.D., Tenenbaum S.A. Eukaryotic mRNPs may represent posttranscriptional opérons //Mol. Cell. 2002. V.9. P.l 161-1167.

295. Kellogg D.R., Moritz M., Alberts B.M. The centrosome and cellular organization //Annu. Rev. Biochem. 1994. V.63. P.639-674.

296. Kerscher O., Hieter P., Winey M., Basrai M.A. Novel role for a Saccharomyces cerevisiae nucleoporin, Nupl70p, in chromosome segregation //Genetics. 2001. V.157: P.1543-1563.

297. Kernan M., Cowan D., Zuker C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila //Neuron. 1994. V.12. P.l 195-1206.

298. Kerssemakers J.W.J., Munteanu E.L., Laan L., Noetzel T.L., Janson M.E., Dogterom M. Assembly dynamics of microtubules at molecular resolution //Nature. 2006. V.442. P.709-712.

299. Khodjakov A., Cole R.W., Oakley B.R., Rieder C.L. Centrosome-independent mitotic spindle formation in vertebrates //Curr. Biol. 2000. V.10. P.59-67.

300. Khodjakov A., Rieder C.L. Chromosomes enhance the fidelity of cytokinesis in vertebrates and are required for cell cycle progression // J.Cell. Biol. 2001. V.153. P.237-242.

301. Kiebler M.A., Bassell GJ. Neuronal RNA granules: movers and markers // Neuron. 2006. V.51. P.685-690.

302. Kim A.J., Endow S.A. A kinesin family tree //J.Cell Sci. 2000. V.113. P.3681-.3682.

303. Kim H., Ling S.-C., Rogers G.C., Kural C., Selvin P.R., Rogers S.L., Gelfand V.I. Microtubule binding by dynactin is required for microtubule organization but not cargo transport// J. Cell Biol. 2007. V.176. P.641-651.

304. Kim Y.K., Furic L., DesGroseillers L., Maquat L.E. Mammalian Staufen 1 recruits Upfl to specific mRNA 3'UTRs so as to elicit mRNA decay // Cell. 2005. V.120. P.195-208.

305. Kim V.N., Yong J., Kataoka N., Abel L., Diem M.D., Dreyfiiss G. The Y14 protein communicates to the cytoplasm the position of exon-exon junctions // EMBO J. 2001. V.20. P.2062-2068.

306. King P.H., Andrews L.G., Keene J.D. Hel-Nl: an autoimmune RNA-binding protein with specificity for 3' uridylate-rich untranslated regions of growth factor mRNAs //Mol. Cell. Biol. 1993. V.13. P.3494-3504.

307. King R.C., Burnett R.G. Autoradiografic study of uptake to tritiated glycine, thymidine, and uridine by fruit fly ovaries // Science. 1959. V.129. P.1674-1675.

308. King R.C., Robinson G.V., Smith R.F. Oogenesis in adult Drosophila melanogaster // Growth. 1956. V.20. P.120-157.

309. Kinoshita K., Arnal I., Desai A., Drechsel D.N., Hyman A.A. Reconstitution of physiological microtubule dynamics using purified components //Science. 2001. V.294. P.1340-1343.

310. Kinoshita K., Habermann B., Hyman A.A. XMAP215: a key component of the dynamic microtubule cytoskeleton //Trends Cell Biol. 2002. V.12. P.267-273.

311. Kiseleva E., Rutherford S., Cotter L.M., Allen T.D., Goldberg M.W. Steps of nuclear pore complex disassembly and reassembly during mitosis in early Drosophila embryos //J.Cell Sci. 2001. V.114. P.3607-3618.

312. Kitagawa K., Hieter P. Evolutionary conservation between budding yeast and human kinetochores //Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001. V.2. P.678-687.

313. Kleene K.C. Patterns of translational regulation in the mammalian testis // Mol. Reprod. Dev. 1996. V.43. P. 268-281.

314. Kleene K.C. A possible meiotic function of the peculiar patterns of gene expression in mammalian spermatogenic cells //Mech. Devel. 2001. V.106. P.3-23.

315. Kleene K.C. Patterns, mechanisms, and functions of translation regulation in mammalian spermatogenic cells //Cytogenet. Genome Res. 2003. V.103. P.217-224.

316. Kleene K.C. Sexual selection, genetic conflict, selfish genes and the atypical patterns of gene expression in spermatogenic cells //Develop. Biol. 2005. V.277. P.16-26.

317. Knoblich J.A. Mechanisms of asymmetric stem cell division // Cell 2008. V.132. P.583-597.

318. Kochanski R., Borisy G. Mode of centriole duplication and distribution //J. Cell Biol. 1990. V.110. P.1599-1605.

319. Kohler M., Haller H., Hartmann E. Nuclear transport pathways //Exp.Nephrol.1999. V.7. P.290-294.

320. Korey C.A., Wilkie G. S., Davis I., Van Vactor D. 2001. small bristles, DmNXFl, is required for the morphogenesis of multiple tissues during Drosophila development//Genetics. 159: 1659-1670.

321. Kosik K.S., Krichevsky A.M. The message and the messenger: delivering RNA in neurons. Sci. STKE. 2002. V.126. P. 1-4.

322. Kosik K.S., Krichevsky A.M. The elegance of the microRNAs: a neuronal perspective //Neuron. 2005. V.47. P.779-782.

323. Kotaja N., Lin H., Parvinen M., Sassone-Corsi P. Interplay of PIWI/Argonaute protein MIWI and kinesin KIF17b in chromatoid bodies of male germ cells // J. Cell Sci. 2006. V.119. P.2819-2825.

324. Koushika S.P., Soller M., White K. The neuron-enriched splicing pattern of Drosophila erect wing is dependent on the presence of ELAV protein // Mol. Cell. Biol.2000. V.20. P.1836-1845.

325. Kraemer D., Blobel G. mRNA binding protein mrnp 41 localizes to both nucleus and cytoplasm //Proc.Nat. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P.9119-9124.

326. Kramer E.R., Scheuringer N., Podtelejnikov A.V., Mann M., Peters J.-M. Mitotic regulation of the APC activator proteins CDC20 and CDH1 //Mol. Biol. Cell. 2000. V.ll. P.1555-1569.

327. Krichevsky A.M., Kosik K.S. Neuronal RNA granules: a link between RNA localization and stimulation-dependent translation // Neuron. 2001. V.32. P.683-696.

328. Kuersten S., Arts GJ. Walther T.C., Englmeier L., Mattaj I.W. Steady-state nuclear localization of exportin-t involves RanGTP binding and two distinct pore complex interaction domains //Mol. Cell Biol. 2002. V.22. P.5708-5720.

329. Kiinzler M., Hurt E.C. Csel functions as the nuclear export receptor for importin alpha in yeast //FEBS Lett. 1998. V.433. P. 185-190.

330. Kiinzler M., Hurt E. Targeting of Ran: variation on a common theme? //J.Cell.Sci. 2001. V.114. P.3233-3241.

331. Kwon M., Scholey J.M. Spindle mechanics and dynamics during mitosis in Drosophila //Trends Cell Biol. 2004. V.14. P. 194-205.

332. Lacey K.R., Jackson P.K., Stearns T. Cyclin-dependent kinase control of centrosome duplication//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. P.2817-2822.

333. Lai D., Sakkas D., Huang Y. The fragile X mental retardation protein interacts with a distinct mRNA nuclear export factor NXF2 // RNA 2006. Y.12. P.1446-1449.

334. Lambert J.D., Nagy L.M. Asymmetric inheritance of centrosomally localized mRNA during embryonic cleavages. //Nature. 2002. V.420. P.682-686.

335. Lansbury P.T. Evolution of amyloid: what normal protein folding may tell us about fibrillogenesis and disease // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. P.3342-3344.

336. Lange B.M.H. Integration of the centrosome in cell cycle control, stress response and signal transduction pathways //Curr. Opin. Cell Biol. 2002. V.14. P.35-43.

337. Le Bot N., Tsai M.C., Andrews R.K., Ahringer J. TACC-1, a regulator of microtubule length in the C.elegans embryo //Curr. Biol. 2003. V.13. P.1499-1505.

338. Ledbetter D.H., Engel E. Uniparental disomy in humans: development of an imprinting map and its implications for prenatal diagnosis // Human Mol. Genet. 1995. V.4. P.1757-1764.

339. Lee M.J., Gergely F., Jeffers K., Peak-Chew S.Y., Raff J.W. Msps/XMAP215 interacts with the centrosomal protein D-TACC to regulate microtubule behaviour //Nat. Cell Biol. 2001. V.3. P.643-649.

340. Lefevre G. The eccentricity of vermilion deficiencies in Drosophila melanogaster //Genetics. 1969. V.63. P.589-600.

341. Le Hir H., Izaurralde E., Maquat L.E., Moore M.J. The sliceosome deposits multiple proteins 20-24 nucleotides upstream of mRNA exon-exon junctions. // EMBO J. 2000. V.19. P.6860-6869.

342. Le Hir H., Gatfield D., Braun I.C., Forler D., Izaurralde E. The protein Mago provides a link between splicing and mRNA localization //EMBO J. 2001a. V.20. P.1119-1124.

343. Le Hir H., Gatfield D., Izaurralde, Moore MJ. The exon-exon junction complex provides a binding platform for factors involved in mRNA export and nonsence-mediated mRNA decay // EMBO J. 2001b. V.20. P.4987-4997.

344. Lengauer C., Kinzler K.W., Vogelstein B. Genetic instabilities in human cancers //Nature. 1998. V.396. P.643-649.

345. Levesque L., Bor Y.-C., Matzat L.H., Jin L., Berberoglu S., Rekosh D., Hammarskjold M.L. Paschal B.M. Mutations in Tap uncouple RNA export activity from translocation through the nuclear pore complex //Mol. Biol. Cell 2006. V.17. P.931-943 .

346. Li H.Y., Mirtz D., Zheng Y. A mechanism of coupling RCC1 mobility to RanGTP production on the chromatin in vivo //J.Cell Biol. 2003. V.160. P.635-644.

347. Li M.G., Serr M., Newman E.A., Hays T.S. The Drosophila tctex-1 light chain is dispensable for essential cytoplasmic dynein functions but is required during spermatid differentiation//Mol. Biol. Cell 2004. V.15. P.3005-3014.

348. Li Y., Bor Y.-c., Misawa Y., Xue Y., Rekosh D., Hammarskjold M.-L. An intron with a constitutive transport element is retained in a Tap messenger RNA //Nature. 2006. V.443. P.234-237.

349. Lieberfarb M.E., Chu T., Wreden C., Theurkauf W.J., Gergen P., Strickland S. Mutations that perturb poly(A)-dependent maternal mRNA activation block the initiation of development// Development. 1996. V.122. P. 579-588.

350. Liker E., Fernandez E., Izaurralde E., Conti E. The structure of the mRNA nuclear export factor TAP reveals a cis arrangement of a noncanonical RNP domain and a leucine-rich-repeat domain // EMBO J. 2000. V.19. P.5587-5598.

351. Lin H. Cell biology of stem cells: an enigma of asymmetry and self-renewal // J. Cell Biol. 2008. V.180. P.257-260.

352. Lindsley, D.L., Zimm3 G.G. 1992. The Genome of Drosophila melanogaster. San Diego. Acad. Press.

353. Lindquist S. The heat shock response // Ann. Rev. Biochem. 1986. V.55. P.1151-1191.

354. Ling S.-C., Fahrner P.S., Greenough W.T., Gelfand V.I. Transport of Drosophila fragile X mental retardation protein-containing ribonucleoprotein granules by kinesin-1 and cytoplasmic dynein//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. V.101. P. 17428-17433.

355. Lippincott-Schwartz J. Ripping up the nuclear envelope //Nature. 2002. V.416. P.31-32.

356. Lipshitz H.D., Smibert C.A. Mechanisms of RNA localization and translational regulation// Curr. Opin. Genet. Develop. 2000. V.10. P.476-488.

357. Long M., Betran E., Thornton K., Wang W. The origin of new genes: glimpses from the young and old. Nature Reviews //Genetics. 2003. V.4. P.865-875.

358. Lund T., Medveczky M.M., Neame P.J., Medveczky P.G. A herpesvirus saimiri membrane protein required for interleukin-2 independence forms a stable complex with p561ck //J. Virol. 1996. V.70. P.600-606.

359. Lund T.C., Prator P.C., Medveczky M.M., Medveczky P.G. The Lck binding domain of herpesvirus saimiri tip-484 constitutively activates Lck and STAT3 in T cells //J. Virol. 1999. V.73. P.1689-1694.

360. Lykke-Andersen J., Shu M.D., Steitz J.A.Communication of the position of exon-exon junctions to the mRNA surveillance machinery by the protein RNPS1 // Science. 2001. V.293. P. 1836-1839.

361. Lykke-Andersen J., Shu M.-D., Steitz J.A. Human Upf proteins target an mRNA for nonsense-mediated decay when bound downstream of a termination codon // Cell. 2000. V.103. P.1121-1131.

362. Ma W.J., Chung S., Furneaux H. The Elav-like proteins bind to AU-rich elements and to poly(A) tail of mRNA //Nucleic Acids Res. 1997. V.25. P.3564-3569.

363. Mahajam-Miklos S., Cooley L. Intercellular cytoplasm transport during Drosophila oogenesis // Devel. Biol. 1994. V.165. P. 336-351.

364. Maiato H., Rieder C.L., Khodjakov A. Kinetochore-driven formation of kinetochore fibers contributes to spindle assembly during animal mitosis // J.Cell Biol. 2004. V.167. P.831-840.

365. Mamon L.A., Nikitina E.A., Golubcova E.V., Pugachova O.M. Heat shock induced cellular and early embryonic death in Drosophila melanogaster ¿s-mutant strain // Pathophysiology.-1998.-V.5 (Supplement 1).-P.9.

366. Manley G., Rosenfeld M., Wong E., Henson J., Posner J.B., Furneaux H.M. HuD, a paraneoplastic encephalomyelitis antigen, contains RNA-binding domains and is homologous to Elav and Sex-lethal // Cell. 1991. V.67, P.325-333.

367. Manohar C.F., Short M.L., Nguyen A., Nguyen N.N., Chagnovich D., Yang Q., Cohn S.L. HuD, a neuronal-specific RNA-binding protein, increases the in vivo stability of MYCN RNA // J.Biol. Chem. 2002. V.277. P.1967-1973.

368. Maquat L.I. Nonsense-mediated mRNA decay: splicing, translation and mRNP dynamics //Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2004. V.5. P.89-99.

369. Margalit A., Vlcek S., Gruenbaum Y., Foisner R. Breaking and making of the nuclear envelope //J.Cell. Biochem. 2005. V.95. P.454-465.

370. Martinez-Campos M., Basto R., Baker J., Kernan M., Raff J.W. The Drosophila pericentrin-like protein is essential for cilia/flagella function, but appears to be dispensable for mitosis //J.Cell Biol. 2004. V.165. P.673-683.

371. Marx J. Do centrosome abnormalities lead to cancer? //Science. 2001. V.292. P.426-429.

372. Masuyama K., Taniguchi I., Kataoka N., Ohno M. SR proteins preferentially associate with mRNAs in the nucleus and facilitate their export to the cytoplasm // Genes Cells. 2004. V.9. P.959-965.

373. Mattaj I.W., Englmeier L. Nucleocytoplasmic transport: the soluble phase //Annu. Rev. Biochem. 1998. V.67. P.265-306.

374. Matunis M.J., Coutavas E., Blobel G.A. A novel ubiquitin-like modification modulates the partitioning of the Ran-GTPase-activating protein RanGAPl between the cytosol and the nuclear pore complex //J.Cell Biol. 1996. V.135. P.1457-1470.

375. Matzat L.H., Berberoglu S., Levesque L. Formation of a Tap/NXFl homotypic complex is mediated through the amino-terminal domain of Tap and enhances interaction with nucleoporins // Mol. Biol. Cell. 2008. V.19. P.327-338.

376. McDermott K.M., Zhang J., Hoist C.R., Kozakiewicz B.K., Singla V., Tisty T.D. pl61NK4a prevents centrosome dysfunction and genomic instability in primary cells //PloS Biol. 2006. V.4. P.350-365.

377. McGrail M., Hays T.S. The microtubule motor cytoplasmic dynein is required for spindle orientation during germline cell divisions and oocyte differentiation in Drosophila //Development. 1997. V.124. P.2409-2419.

378. McGrew L.L., Dworkin-Rasti E., Dworkin M.B., Richter J.D. Poly(A) elongation during Xenopus oocyte maturation is required for translation recruitment and is mediated by a short sequence element // Gene Dev. 1989. V.3. P.803-815.

379. McKim K.S., Hawley R.S. Chromosomal control of meiotic cell division //Science. 1995. V.270. P.1595-1601.

380. McNally K., Audhya A., Oegema K., McNally FJ. Katanin controls mitotic and meiotic spindle length //J.Cell Biol. 2006. V.175. P.881-891.

381. Megraw T.L., Kao L.-R., Kaufman T.C. Zygotic development without functional mitotic centrosomes // Curr. Biol. 2001. V.ll. P.116-120.

382. Megraw T., Kilaru S., Turner R., Kaufinan T.C. The centrosome is a dynamic structure that ejects PCM flares //J.Cell Sci. 2002. V.115. P.4707-4718.

383. Meizel S. The sperm, a neuron with a tail: "neuronal" receptor in mammalian sperm //Biol. Rev. 2004. V.19. P.713-732.

384. Mendez R., Richter J.D. Translational control by CPEB: a means to the end // Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2001. V.2. P.521-529.

385. Merdes A., Cleveland D.W. Pathways of spindle pole formation: different mechanisms, conserved componenets //J.Cell Biol. 1997. V.138. P.953-956.

386. Michel C.I., Kraft R., Restifo L.L. Defective neuronal development in the mushroom bodies in Drosophila fragile X mental retardation 1 mutants // J.Neurosci. 2004. V.24. P.5798-5809.

387. Miki T., Takano K., Yoneda Y. The role of mammalian Staufen on mRNA traffic: a view from its nucleocytoplasmic shuttling function // Cell Struct. Function. 2005. V.30. P.51-56.

388. Miller B.R., Powers M., Park M., Fischer W., Forbes D.J. Identification of a new vertebrate nucleoporin, Nupl88, with the use of a novel organelle trap assay //Mol. Biol. Cell. 2000. V.ll. P.3381-3396.

389. Misteli T., Spector D.L. The cellular organization of gene expression // Curr. Opin. Cell Biol. 1998. V.10. P.323-331.

390. Monshausen M., Gehring N.H., Kosik K.S. The mammalian RNA-binding protein Staufen 2 links nuclear and cytoplasmic RNA processing pathways in neurons //NeuroMolecular Medcine. 2004. V.6. P.127-144.

391. Moritz M., Agard D.A. y-Tubulin complexes and microtubule nucleation //Curr. Opin. Struct. Biol. 2001. V.ll. P.174-181.

392. Morrison S.J., Spradling A.C. Stem cells and niches: mechanisms that promote stem cell maintenance throughout life // Cell 2008. V.132. P.598-611

393. Muller H., Fogeron M.L., Lehmann V., Lehrach H., Lange B.M.H. A centrosome-independent role for y-TuRC proteins in the spindle assembly checkpoint //Science. 2006. V.314. P.654-657.

394. Murphy R., Warkins J.I., Wente S.R. GLE2, a Saccharomyces cerevisiae homolologue of the Schizosaccharomyces pombe export factor RAE1, is required for nuclear pore complex structure and function //Mol. Biol. Cell. 1996. V.7. P.1921-1937.

395. Nachury M.V., Maresca T.J., Salmon W.C., Waterman-Storer C.M., Heald R., Weis K. Importin P is a mitotic target of the small GTPase Ran in spindle assembly //Cell. 2001. V.104. P.95-106.

396. Nachury M.V.,Weis K. 1999. The direction of transport through the nuclear pore can be inverted //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 96: 9622-9627.

397. Nakielny S., Dreyfuss G. Transport of proteins and RNAs in and out of the nucleus //Cell. 1999. V.99. P.677-690.

398. Nasmyth K., Peters J.M., Uhlmann F. Splitting the chromosome: cutting the ties that bind sister chromatids //Science. 2000. V.288. P.1379-1384.

399. Nguyen H.G., Chinnappan D., Urano T., Ravid K. Mechanism of Aurora-B degradation and its dependency on intact KEN and A-boxes: identification of an aneuploidy-promoting property //Mol.Cell. Biol. 2005. V.25. P.4977-4992.

400. Nicklas R.B., Campbell M.S., Ward S.C., Gorbsky G.J. Tension-sensitive kinetochore phosphorylation in vitro //J.Cell Sci. 1998. V.ll 1. P.3189-3196.

401. Nicotera P., Bano D. Memory, synaptic translation, and. prions ? //Cell. 2003. V.115. P.767-770.

402. Nigg E.A. Mitotic kinases as regulators of cell division and its checkpoints //Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001. V.2. P.21-32.

403. Nigg E.A. A licence for duplication //Nature 2006. V.442. P.874-875.

404. Nikerson J.A. Experimental observations of a nuclear matrix // J.Cell Sci. 2001. V.114. P.463-474.

405. Noetzel T.L., Drechsel D.N., Hyman A.A., Kinoshita K. A comparison of the ability of XMAP215 and tau to inhibit the microtubule destabilizing activity of XKCM1 //Philos, Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2005. V.360. P.591-594.

406. Nogales E., Whittaker M., Milligan R.A., Downing K.H. High-resolution model of the microtubule //Cell. 1999. V.96. P.79-88.

407. Nokkala S., Nokkala C. Cytological analysis of oogenesis // In: Methods in Molecular Biology. V.247. Drosophila Cytogenetics Protocols. Edited by D.S.Henderson. Humana Press Inc. Totowa.NJ. 2003. P. 129-135.

408. Nowak M.A., Komarova N.L., Sengupta A., Jallepalli P.V., Shin I.-M., Vogelstein B. The role of chromosomal instability in tumor initiation //Proc. Nat. Acad. Sci.USA. 2002. V.99. P. 16226-16231.

409. Nusslein-Volhard, C. Determination of the embryonic axes of Drosophila //Development 1991. V.l (Suppl.). P.l-10.

410. O'Dor E., Beck S.A., Brock H.W. Polycomb group mutants exhibit mitotic defects in syncytial cell cycle of Drosophila embryos // Devel. Biol. 2006. V.290. P.312-322.

411. Oegema K., Marshall W.F., Sedat J.W., Alberts B.M. Two proteins that cycle asynchronously between centrosomes and nuclear structure: Drosophila CP60 and CP 190 // J.Cell. Sci. 1997. V.l 10. P.1573-1583.

412. Ohler U., Shamron N., Burge C.B. Recognition of unknown conserved alternatively spliced exons //Plos Comput. Biol. 2005. VI. P. 113-122.

413. Okano H.J., Darnell R.B. A hierarchy of Hu RNA binding proteins in developing and adult neurons // J.Neurosci. 1997. V.17. P.3024-3037.

414. Ostermeier G.C., Miller D., Huntriss J.D., Diamond M.P., Krawetz S.A. Delivering spermatozoan RNA to the oocyte //Nature. 2004. V.429. P. 154.

415. Otto S.P. Two steps forward, one step back: the pleiotropic effects of favoured alleles //Proc. R. Soc. Lond. Biol. Sci. 2004. V.271. P.705-714.

416. Paddy M.R., Saumweber H., Agard D.A., Sedat J.W. Time-resolved, in vivo studies of mitotic spindle formation and nuclear lamina breakdown in Drosophila early embryos //J.Cell Sci. 1996. V.109. P.591-607.

417. Palacios I.M., Gatfield D., St.Johnston D., Izaurralde E. An eIF4AIII-containing complex required for mRNA localization and nonsense-mediated mRNA decay // Nature 2004. V.427. P.753-757.

418. Palacios I.M. RNA processing: splicing and the cytoplasmic localization of mRNA //Curr. Biol. 2002. V.12. R50-R52.

419. Palermo G., Munne S., Cohen J. The human zygote inherits its mitotic potential from the male gamete // Hum. Reprod. 1994. Y.9, №7. P.l 120-1125.

420. Pan J., Snell W. The primary cilium: keeper of the key to cell division // Cell. 2007. V.129. P.1255-1257.

421. Pante N., Aebi U. Sequential binding of import ligands to distinct nuclear pore regions during their nuclear import //Science. 1996. V.273. P. 1729-1732.

422. Parker R, Sheth U. P bodies and the control of mRNA translation and degradation // Mol. Cell 2007. V.25. P.635-646.

423. Peset I., Seiler J., Sardon T., Bejarano L.A., Rybina S., Vernos I. Function and regulation of Maskin, a TACC family protein, in microtubule growth during mitosis //J.Cell Biol. 2005. V.170. P.1057-1066.

424. Peters J.M. The anaphase-promoting complex: proteolysis in mitosis and beyond //Mol.Cell. 2002. V. 9. P.931-943.

425. Pfarr C.M., Coue M., Grissom P.M., Hays T.S., Porter M.E., Mcintosh J.R. 1990. Cytoplasmic dynein is localized to kinetochores during mitosis //Nature. 345: 263-265.

426. Pfleger C.M, Krischner M.W. The KEN box: an APC recognition signal distinct from the D box targeted by Cdhl //Genes Dev. 2000. V.14. P.655-665.

427. Plotnikova O.V., Golemis E.A., Pugacheva E.N. Cell cycle-dependent ciliogenesis and cancer //Cancer Res. 2008. V.68. P.2058-2061.

428. Popov A.V., Severin F., Karsenti E. XMAP215 is required for the microtubule-nucleating activity of centrosomes //Curr. Biol. 2002. V.12. P.1326-1330.

429. Pritchard C.E., Fomerod M., Kasper L.H., van Deursen J.M. RAE1 is a shuttling mRNA export factor that binds to a GLEBS-like NUP98 motif at the nuclear pore complex through multiple domains //J. Cell Biol. 1999. 145:237-254.

430. Pritchard D.K., Schubiger G. Activation of transcription in Drosophila embryos is a gradual process mediated by the nucleoplasmic ratio // Genes Dev. 1996. V.10. P.1131-1142.

431. Promislow D.E.L. Protein networks, pleiotropy and the evolution of senescence // Proc. Biol. Sci. 2004. V.271. P. 1225-1234.

432. Pugacheva E.N., Jablonski S.A., Hartman T.R., Henske E.P., Golemis E.A. HEFl-dependent Aurora A activation induces disassembly of the primary cilium // Cell. 2007. V.129. P.1351-1361.

433. Puis I., Jonnakuty C., LaMonte B.H., Holzbaur E.L., Tokito M., Mann E., Floeter M.K., Bidus K., Drayna D., Oh S.J. et al., Mutant dynactin in motor neuron disease // Nat. Genet. 2003. V.33. P.455-456.

434. Quarmby L.M., Parker J.D.K. Cilia and the cell cycle? // J.Cell Biol. 2005. V. 169. P.707-710.

435. Quintyne N.J., Schroer T.A. Distinct cell cycle-dependent roles for dynactin and dynein at centrosomes //J. Cell Biol. 2002. V.159. P.245-254.

436. Raff J.W., Jeffers K., Huang J.Y. The roles of Fzy/Cdc20 and Fzr/Cdhl in regulating the destruction of cyclin B in space and time //J.Cell.Biol. 2002. V.157. P.l 139-1149.

437. Rebollo E., Sampaio P., Januschke J., Llamazares S., Varmark H., Gonzalez C. Functionally unequal centrosomes drive spindle orientation in asymmetrically dividing Drosophila neural stem cells // Dev. Cell 2007. V.12. P.467-474.

438. Reed R., Hurt E. A conserved mRNA export machinery coupled to pre-mRNA splicing//Cell. 2002. V.108. P.523-531.

439. Rexach M., Blobel G. Protein import into nuclei: association and dissociation reactions involving transport substrate, transport factors, and nucleoporins //Cell. 1995. V.83. P.683-692.

440. Rieder C.L., Faruki S., Khodjakov A. The centrosome in vertebrates: more than a microtubule-organizing center//Trends Cell Biol. 2001. V.ll. P.413-419.

441. Riparbelli M.G., Callaini G. Meiotic spindle organization in fertilized Drosophila oocyte: presence of centrosomal components in the meiotic apparatus // J.Cell Biol. 1996. V.143. P.1603-1616.

442. Riparbelli M.G., Whitfield W.G.F., Dallai R., Callaini G. Assembly of the zygotic centrosome in the fertilized Drosophila egg //Mech. Develop. 1997. V.65. P.135-144.

443. Ris H. High-resolution field-emission scanning electron microscopy of nuclear pore complex //Scanning. 1997. V.19. P.368-375.

444. Robinson J.T., Wojcik E.J., Sanders M.A., McGrail M., Hays T.S. Cytoplasmic dynein is required for the nuclear attachment and migration of centrosomes during mitosis in Drosophila //J. Cell Biol. 1999. V.146. P.597-608.

445. Roll-Mecak A., Vale R.D. Making more microtubules by severing: a common theme of noncentrosomal microtubule array? //J. Cell Biol. 2006. V.175. P.849-851.

446. Rusan N.M., Peifer M. A role for a novel centrosome cycle in asymmetric cell division//J. Cell Biol. 2007. V.177. P.13-20.

447. Rutherford S.A., Goldberg M.W., Allen T.D. Three-dimensional visualization of the route of protein import: the role of nuclear pore complex substructures //Exp. Cell Res. 1997. V.232. P. 146-160.

448. Ryan K.J., Wente S.R. The nuclear pore complex: a protein machine bridging the nucleus and cytoplasm//Curr. Opin. Cell. Biol. 2000. V.12. P.361-371.

449. Saitoh H., Pu R., Cavenagh M., Dasso M. RanBP2 associates with Ubc9p and modified from of RanGAPl //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P.3736-3741.

450. Saito, K., Fujiwara, T., Katahira, J., Inoue, K., Sakamoto, H. TAP/NXF1, the primary export receptor, specifically interacts with a neuronal RNA-binding protein HuD //Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. V.321. P.291-297.

451. Salina D., Bodoor K., Eckley D.M., Schroer T.A., Rattner J.B., Burke B. Cytoplasmic dynein as a facilitator of nuclear envelope breakdown //Cell. 2002. V.108. P.97-107.

452. Salina D., Enarson P., Rattner J.B., Burke B. Nup358 integrates nuclear envelope breakdown with kinetochore assembly //J.Cell Biol. 2003. V.162. P.991-1001.

453. Sallivan B.A., Willard H.F. Stable dicentric X chromosomes with two functional centromeres //Nat. Genet. 1998. V.20. P.227-228.

454. Sasaki M., Takeda E., Takano K., Yomogida K., Katahira J., Yoneda Y. Molecular cloning and functional characterization of mouse Nxf family gene products // Genomics 2005. V.85. P.641-653.

455. Schatten G. The centrosome and its mode of inheritance: the reduction of the centrosome during gametogenesis and its restoration during fertilization // Devel. Biol. 1994. V. 165. P.299-335.

456. Schiebel E. y-Tubulin complexes: binding to centrosomes, regulation and microtubule nucleation //Curr. Opin. Cell Biol. 2000. Y.12. P.l 13-118.

457. Schisa J.A., Pitt J.N., Priess J.R. Analysis of RNA associated with P granules in germ cells of C.elegans adults //Development. 2001. V.128. P.1287-1298.

458. Schmitt I., Gerace L. In vitro analysis of nuclear transport mediated by the C-terminal shuttle domain of Tap //J. Biol. Cell 2001. V.276. P.42355-43363.

459. Schmidt U., Richter K., Berger A.B., A.B., Lichter P. In vivo BiFC analysis of Y14 and NXF1 mRNA export complexes: preferential localization within and around SC35 domains //J.Cell Biol. 2006. V.172. N3. P.373-381.

460. Schneuwly S., Kuroiwa A., Gehring W.J. Molecular analysis of the dominant homeotic Antennapedia phenotype // EMBO J. 1987. V.6. P.201-206.

461. Scholey J.M., Anderson K.V. Intraflagellar transport and cilium-based signaling // Cell. 2006. V.125. P.439-442.

462. Scholey J.M., Brust-Mascher I., Mogilner A. Cell division //Nature. 2003. V.422. P.746-752.

463. Schreiber S.L., Bernstein B.E. Signaling network model of chromatin //Cell. 2002. V.lll. P.771-778.

464. Schuyler S.C., Pellman D. Microtubule "plus-end-tracking proteins": the end is just the beginning //Cell. 2001. V.105. P.421-424.

465. Segref A., Sharma K., Doye V., Hellwig A., Huber J., Luhrmann R., Hurt E. Mex67p, a novel factor for nuclear mRNA export, binds to both poly(A)+ RNA and nuclear pores //EMBO J. 1997. V.16. P.3256-3271.

466. Sen S. Aneuploidy and cancer //Curr.Opin Oncol. 2000. V.12. P.82-88.

467. Shah J.V., Cleveland D.W. Waiting for anaphase: Mad2 and spindle assembly checkpoint //Cell. 2000. V.103. P.997-1000.

468. Shamsher M.K., Ploski J., Radu A. Karyopherin 02B participates in mRNA export from the nucleus //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2002. V.99. P.14195-14199.

469. Sharp D.J., Brown H.M., Kwon M., Rogers G.C., Holland G., Scholey J.M. Functional coordination of three mitotic motors in Drosophila embryos //Mol. Biol. Cell. 2000a. V.ll. P.241-253.

470. Sharp D.J., Rogers G.C., Scholey J.M. Cytoplasmic dynein is required for poleward chromosome movement during mitosis in Drosophila embryos //Nat. Cell Biol. 2000b. V.2. P.922-930.

471. Sharp D.J., Yu K.R., Sisson J.C., Sullivan W., Scholey J.M. Antagonistic microtubule-sliding motors position mitotic centrosomes in Drosophila early embryos //Nat. Cell Biol. 1999. V.l. P.51-55.

472. Sheflin L.G., Zou A.-P., Spaulding S.W. Androgens regulate the binding of endogenous HuR to the AU-rich 3'UTR of HIV-la and EGF mRNA // Bioch. Biophys. Res. Commun. 2004. V.322. P.644-651.

473. Sheth U., Parker R. Decapping and decay of messenger RNA occur in cytoplasmic processing bodies // Science 2003. V.300. P.805-808.

474. Sheth U., Parker R. Targeting of aberrant mRNAs to cytoplasmic processing bodies // Cell. 2006. V.125. P.1095-1109.

475. Singh S.R., Hou S.X. Lessons learned about adult kidney stem cells from the Malpighian tubules of Drosophila // J. Amer. Soc. Nephrol. 2008. V. 19. P.660-666.

476. Singh S.R., Hou S.X. Multipotent stem cells in the Malpighian tubules of adult Drosophila melanogaster II J. Exptl. Biol. 2009. V.212. P.413-423.

477. Singh S.R., Liu W., Hou S.X. The adult Drosophila Malpighian tubules are maintained by pluripotent stem cells // Cell Stem Cell 2007. V.l. P. 191-203.

478. Siomi M.C. The molecular mechanisms of messenger RNA nuclear export. Cell Struct. Function. 2000. V.25. P.227-235.

479. Sitterlin D. Characterization of the Drosophila Rael protein as a G1 phase regulator of the cell cycle // Gene. 2004. V.326. P.107-116.

480. Skold H.N., Komma D.J., Endow S.A. Assembly pathway of anastral Drosophila oocyte meiosis I spindle//J.Cell Sci. 2005. V.l 18. P.1745-1755.

481. Sluder G. Two-way traffic: centrosomes and the cell cycle //Nature Rev. Mol. Cell Biol. 2005. V.6. P.743-748.

482. Smith D.F., Whitesell L., Katsanis E. Molecular chaperones: biology and prospects for pharmacological intervention // Pharmacological Rev. 1998. V.50. № 4. P.493-513.

483. Smith M.M. Centromeres and variants histones: what, where, when and why? //Curr. Opin. Cell Biol. 2002. V.14. P.279-285.

484. Smith S., de Lange T. Cell cycle dependent localization of the telomeric PARP, tankyrase, to nuclear pore complexes and centrosomes //J.Cell Sci. 1999. V.l 12. P.3649-3656.

485. Smythe C., Jenkins H.E., Hutchison C.J. Incorporation of the nuclear pore basket protein Nupl53 into nuclear pore structures is dependent upon lamina assembly: evidence from cell-free extracts ofXenopus eggs //EMBO J. 2000. V.19. P.3918-3931.

486. Solecki D.J., Govek E.-E., Tomoda T., Hatten M.E. Neuronal polarity in CNS development// Genes Develop. 2006. V.20. P.2639-2647.

487. Sonnenblick B.P. The early embryology of Drosophila melanogaster II Biology of Drosophila. N.Y. 1950. P. 62-167.

488. Spana E., Doe C.Q. The prospero transcription factor is asymmetrically localized to the cell cortex during neuroblast mitosis in Drosophila //Development. 1995. V.121. P.3187-3195.

489. Spirin A.S. Informosomes //Europ.J.Biochem. 1969. V.10. P.20-35.

490. Spradling A.C. Developmental genetics of oogenesis // In: "The development of Drosophila melanogaster" (Eds.Bate M., Arias A.M.) Cold Spring Harbor. Cold Spring Harbor Lab. Press. 1993. V.l. P.l-69.

491. Spradling A.C. Makeshift sperm production // Nature 2008. V.456. P.583-585.

492. Sprenger F., Stevens L.M., Nusslein-Volhard C. The Drosophila gene torso encodes a putative receptor tyrosine kinase I I Nature 1989 V.338. P.478-483.

493. Stearns T. Chromosome duplication: a centriolar Pas de deux //Cell. 2001. 105: 417-420.

494. Stearns T., Miney M. The cell center at 100 //Cell. 1997. V.91. P.303-310.

495. Stebbins-Boaz B., Cao Q., de Moor C.H., Mendez R., Richter J.D. Maskin is a CPEB-associated factor that transiently interacts with eIF-4E //Mol.Cell. 1999. V.4. P.1017-1027.

496. Steffen W., Fuge H., Dietz R., Bastmeyer M., Muller G. Aster-free spindle poles in insect spermatocytes: evidence for chromosome-induced spindle formation //J.Cell Biol. 1986. V.l 02. P.1679-1687.

497. Steuer E.R., Wordeman L., Schroer T.A., Sheetz M.P. Localization of cytoplasmic dynein to mitotic spindles and kinetochores //Nature. 1990. V.345. P.266-268.

498. Stewart M., Baker R.P., Bayliss R., Clayton L., Grant R.P., Littlewood T., Matsuura Y. Molecular mechanism of translocation through nuclear pore complexes during nuclear protein import // FEBS Lett. 2001. V.498. P.145-149.

499. Stewart C.L., Roux K.J., Burke B. Blurring the boundary: the nuclear envelope extends its reach// Science. 2007. V.318. P.1408-1412.

500. Steward O., Schuman E.M. Protein synthesis at synaptic sites on dendrites.// Annu. Rev. Neurosci. 2001. V.24. P.299-325.

501. Strafstrom J.P., Staehelin L.A. Dynamics of the nuclear envelope and of nuclear pore complexes during mitosis in the Drosophila embryo //Eur. J. Cell Biol. 1984. V.34. P.179-189.

502. StraBer K., Hurt E. Nuclear RNA export in yeast IIFEBS Lett. 1999. V.452. P.77-81.

503. StraBer K. Hurt E. Yralp, a conserved nuclear RNA-binding protein, interacts directly with Mex67p and is required for mRNA export //EMBO J. 2000. V.19. P.410-420.

504. Stutz F. Bachi A. Doerks T. Braun I. Seraphin B. Wilm M. Bork P. Izaurralde E. REF, an evolutionary conserved family of hnRNP-like proteins, interacts with TAP/Mex67p and participates in mRNA nuclear export //RNA. 2000. V.6. P.638-650.

505. Stutz F., Izaurralde E. The interplay of nuclear mRNP assembly, mRNA surveillance and export // TRENDS in Cell Biol. 2003. V.13. № 6. P.319-327.

506. Sudakin V., Chan G.K., Yen T.J. Checkpoint inhibition of the APC/C in HeLa cells is mediated by a complex of BUBR1, BUB3, CDC20, and MAD2 //J.Cell Biol. 2001. V.154. P.925-936.

507. Sukegawa J., Blobel G. A nuclear pore complex protein that contains zink finger motifs, binds DNA, and faces the nucleoplasm //Cell. 1993. V.72. P.29-38.

508. Suntharalingam M., Wente S.R. Peering through the pore: nuclear pore complex structure, assembly, and function //Develop. Cell. 2003. V.4. P.775-789.

509. Taagepera S., Campbell M.S., Gorbsky G.J. Cell-cycle-regulated localization of tyrosine and threonine phosphoepitopes at the kinetochores of mitotic chromosomes //Exp. Cell Res. 1995. V.221. P.249-260.

510. Takano K., Miki T., Katahira J., Yoneda Y. NXF2 is involved in cytoplasmic mRNA dynamics through interactions with motor proteins // Nucleic Acid Res. 2007. V.35. P.2513-2521.

511. Tai A.W., Chuang J.-Z., Sung C.-H. Localization of Tctex-1, a cytoplasmic dynein light chain, to the Golgi apparatus and evidence for dynein complex heterogeneity //J.Biol.Chem. 1998. V.273. P.19639-19649.

512. Tai A.W., Chuang J.Z., Sung C.H. Cytoplasmic dynein regulation by subunit heterogeneity and its role in apical transport // J. Cell. Biol. 2001. V.153. P.1499-1509.

513. Tan W., Zolotukhin A.S., Bear J., Patenaude D.J., Felber B.K. The mRNA export in Caenorhabditis elegans is mediated by Ce-NXF-1, an ortholog of human TAP/NXF and Saccharomyces cerevisiae Mex67p //RNA. 2000. V.6. P. 1762-1772.

514. Tan W., Zolotukhin A. S., Tretyakova I., Bear J., Lindtner S., Smulevitch S. V., and Felber B. K. Identification and characterization of the mouse nuclear export factor (Nxj) family members // Nucleic Acids Res. 2005. V. 33. P. 3855-3865.

515. Tang S.J., Meulemans D., Vazquez L., Colaco N., Schuman E. A role for a rat homolog of staufen in the transport of RNA to neuronal dendrites // Neuron. 2001. V.32. P.463-475.

516. Tange Y., Hirata A., Niwa O. An evolutionarily conserved fission yeast protein, Nedl, implicated in normal nuclear morphology and chromosome stability, interacts with Dis3, Piml/RCCl and an essential nucleoporin //J.Cell Sci. 2002. V.115. P.4375-4385.

517. Tange T.O., Nott A., Moore M.J. The ever-increasing complexities of the exon junction complex //Curr. Opin. Cell Biol. 2004. V.16. P.279-284.

518. Taylor S.S., Ha E., McKeon F. The human homologue of Bub3 is required for kinetochore localization of Bub 1 and a Mad3/Bubl -related protein kinase //J. Cell Biol. 1998. V.142. P.l-11.

519. Taylor S.S., McKeon F. Kinetochore localization of murine Bubl is required for normal mitotic timing and checkpoint response to spindle damage //Cell. 1997. V.89. P.727-735.

520. Tekotte H., Davis I. 2002. Intracellular mRNA localization: motors move messages//Trends Genet. 18: 636-642.

521. Terada Y., Uetake Y., Kuriyama R. Interaction of Aurora-A and centrosomin at the microtubule-nucleating site in Drosophila and mammalian cells //J. Cell Biol. 2003. V.162. P.757-763.

522. Terasaki M., Campagnola P., Rolls M.M., Stein P.A., Ellenberg J., Hinkle B., Slepchenko B. A new model for nuclear envelope breakdown //Mol. Biol. Cell 2001. V.12. P.503-510.

523. Theodoropoulos P.A., Polioudaki H., Koulentaki M., Kouroumalis E., Georgatos S.D. PBC68: a nuclear pore complex protein that associates reversibly with the mitotic spindle //J.Cell Sci. 1999. V.112. P.3049-3059.

524. Theurkauf W.E. Microtubules and cytoplasm organization during Drosophila oogenesis //Devel. Biol. 1994. V.165. P. 352-360.

525. Theurkauf W.E., Hawley R.S. Meiotic spindle assembly in Drosophila females: behavior of nonexchange chromosomes and the effects of mutations in the nod kinesine-like protein//J.Cell Biol. 1992.116: 1167-1180.

526. Thomas M.G., Tosar L.J., Loschi M., Pasquini J.M., Correale J., Kindler S., Boccaccio G.L. Staufen recruitment into stress granules does not affect early mRNA transport in oligodendrocytes // Mol.Biol. Cell 2005. V.16. P.405-420.

527. Toba G., White K. The third RNA recognition motif of Drosophila ELAV protein has a role in multimerization // Nucl. Acid Res. 2008. V.36. P.1390-1399.

528. Tretyakova I.V., Mamon L.A. The addition to the analysis of small bristles (sbr) locus containing the l(l)ts403 allele in Drosophila melanogaster II Drosophila 39th annual Research Conference, Washington, USA, March 25-29 1998.

529. Tretyakova, I., Zolotukhin A.S., Tan W., Bear J., Propst F., Ruthel G., Felber B.K. NXF family protein participates in cytoplasmic mRNA trafficking //J. Biol. Chem. 2005. V.280. P.31981-31990.

530. Tsou M.F., Stearns T. Controlling centrosome number: licenses and blocks //Curr. Opin. Cell Biol. 2006a. V.18. P.74-78.

531. Tsou M.-F.B., Stearns T. Mechanism limiting centrosome duplication to once per cell cycle //Nature. 2006b. V.442. P.947-951.

532. Turner B.M. Cellular memory and the histone code //Cell. 2002. V.lll. P.285-291.

533. Uhlmann F. The mechanism of sister chromatid cohesion II.Exp. Cell Res. 2004. V.296. P. 80-85.

534. Unwin P.N., Milligan R.A. A large particle associated with the perimeter of the nuclear pore complex //J.Cell Biol. 1982. V.93. P. 63-75.

535. Usui T., Maekawa H., Pereira G., Schiebel E. The XMAP215 homologue Stu2 at yeast spindle pole bodies regulates microtubule dynamics and anchorage //EMBO J. 2003. V.22. P. 4779-4793.

536. Vaisberg E.A., Koonce M.P., Mcintosh J.R. Cytoplasmic dynein plays a role in mammalian mitotic spindle formation //J. Cell Biol. 1993. V.123. P. 849-858.

537. Vallee R.B., Williams J.C., Varma D., Barnhart L.E. Dynein: an ancient motor protein involved in multiple modes of transport //J. Neurobiol. 2004. V.58. P. 189-200.

538. Van de Peppel J., Holstege F.C.P. Multifunctional genes //Mol. Systems Biol. J. 2005. 2005.0003.

539. Venables, J.P. Alternative splicing in the testes // Curr. Opin. Cell Genet. Dev. 2002. V.12. P. 615-619.

540. Vasu S.K., Forbes D. Nuclear pores and nuclear assembly //Curr. Opin. Cell Biol.2001. V.13.P.363-375.

541. Vaughan K.T., Tynan S.H., Faulkner N.E., Echeverri C.J., Vallee R.B. Colocalization of cytoplasmic dynein with dynactin and CLIP-170 at microtubule distal ends //J. Cell Sci. 1999. V.112. P. 1437-1447.

542. Venables, J.P. Alternative splicing in the testes //Curr. Opin. Cell Genet. Dev.2002. V.12. P. 615-619.

543. Venkel Z., Gaspar I., Toth G., Szabad J. a4-Tubulin is involved in rapid formation of long microtubules to push apart the daughter centrosomes during early Drosophila embryogenesis //J.Cell Sci. 2006. V.119. P.3238-3248.

544. Vidair C.A., Doxsey S.J., Dewey W.C. Heat shock alters centrosome organization leading to mitotic dysfunction and cell death //J. Cell Physiol. 1993. V.154. P.443-455.

545. Vig B.K. Recognition of mammalian centromeres by anti-dynein and anti-dynactin components //Mutagenesis. 1998. V.13. P.391-396.

546. Vorobjev I.A., Chentsov Yu.S. The dynamics of reconstitution of microtubules around the cell center after cooling //Eur. J. Cell Biol. 1983. V.30. P.149-153.

547. Von Mering C., Krause R., Snel B., Cornell M., Oliver S.G., Fields S., Bork P. Comparative assessment of large-scale data sets of protein-protein interactions Nature //2002. V.417. P.399-403.

548. Wadsworth P., Khodjakov A. E pluribus ununv. Towards a universal mechanism for spindle assembly//Trends Cell Biol. 2004. V.14. P. 413-419.

549. Wagner E., Lykke-Andersen J. mRNA surveillance: the perfect persist // J.Cell Sci. 2002. V.115. P.3033-3038.

550. Wakamatsu Y., Weston J.A. Sequential expression and role of Hu RNA-binding proteins during neurogenesis //Development. 1997. V.124. P.3449-3460.

551. Wakefield J.G., Huang J.-y, Raff J.R. Centrosomes have a role in regulating the destruction of cyclin B in early Drosophila embryos //Curr. Biol. 2000. V.10. P.1367-1370.

552. Walczak C.E. A model for the proposed roles of different microtubule-based motor proteins in establishing soindle bipolarity // Curr. Biol. 1998. V.8. P.903-913.

553. Wang, P.J., McCarrey, J.R., Yang, F., Page, D.C. An abundance of X-Iinked genes expressed in spermatogonia //Nat. Genet. 2001. V.27. P.422-426.

554. Wang W., Caldwell M.C., Lin S., Furneaux H., Gorospe M. HuR regulates cyclin A and cyclin B1 mRNA stability during cell proliferation //EMBO J. 2000. V.19. P.2340-2350.

555. Wassmann K., Benezra R. Mitotic checkpoint: from yeast to cancer //Curr. Opin.Genet. Develop. 2001. V.ll. P.83-90.

556. Water J.C., Salmon E.D. Chromosomes take an active role in spindle assembly //BioEssays. 1995. V.17. P.911-914.

557. Weis K. hnportins and exportins: how to get in and out of the nucleus //Trends Biochem. Sci. 1998. V.23. P.185-189.

558. Weis K. Regulation access to the genome: nucleocytoplasmic transport throughout the cell cycle //Cell. 2003. V.112. P.441-451.

559. Wente S.R. Gatekeeper of the nucleus //Science. 2000. V.288. P.1374-1377.

560. Weaver B.A., Cleveland D.W. Decoding the links between mitosis, cancer, and chemotherapy: checkpoint, adaptation, and cell death//Cancer Cell. 2005. V.8. P.7-12.

561. Wiegand H.L. Coburn G.A., Zeng Y., Kang Y., Bogerd H.P., Cullen B.R. Formation of Tap/NXTl heterodimers activates tap-dependent nuclear mRNA export by enhancing recruitment to nuclear pore complexes //Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. P. 245-256.

562. Wiese C., Zheng Y. Tubulin complexes and their interection with microtubule-organizing centers //Curr. Opin Struct. Biol. 1999a. V.9. P.250-259.

563. Wiese C., Zheng Y. Microtubule nucleation: y-tubulin and beyond //J.Cell Sci. 2006. V.l 19. P.4143-4153.

564. Wilkie G. S. Drosophila melanogaster mRNA for tip associating protein (sbr gene). GenBank/EMBL/DDBJ 1999. 12.21: AJ251947 (http:www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/guery.fcgi?cmd=Search&db=Nucleotide&doptcmdl =GenBank& tool=FlyBase&term=AJ.

565. Wilkie G. S. , Zimyanin V., Kirby R., Korey C., Francis-Lang H., Van Vactor D., Davis I. small bristles, the Drosophila ortholog of NXF-1, is essential for mRNA export throughout development//RNA. 2001. V. 7. P.1781-1792.

566. Willemsen R., Oostra B.A., Bassell G.J., Dictenberg J. The Fragile X syndrome: from molecular genetics to neurobiology //Mental Retardation and Developmental Disabilities. 2004. V.10. P.60-67.

567. Williams B.C., Murphy T.D., Goldberg M.L., Karpen G.H. Neocentromere activity of structurally acentric mini-chromosomes in Drosophila //Nat.Genet. 1998. V.l8. P.30-37.

568. Williams G.C. Pleiotropy, natural selection, and the evolution of senescence //Evolution 1957. V.ll. P.398-411.

569. Wilusz C.J., Wilusz J. Bringing the role of mRNA decay in the control of gene expression into focus //Trends Genet. 2004. V.20. P.491-497.

570. Wong C., Stearns T. Centrosome number is controlled by a centrosome-intrinsic block to reduplication //Nature Cell Biol. 2003. V.5. P.539-544.

571. Wong R.W., Blobel G., Coutavas E. Rael interaction with NuMA is required for bipolar spindle formation // Proc. Natl. Acad. Sci. 2006. V.103. P.19783-19787.

572. Woods C.G., Bond J., Enard W. Autosomal recessive primary microcephaly (MCPH): a review of clinical, molecular, and evolutionary findings //Am. J. Hum. Genet. 2005. V.76. P.717-728.

573. Xiao A., McGrew J.T., Schroeder A.J., Fitzgerald-Hayes M. CSE1 and CSE2, two new genes required for accurate mitotic segregation in Saccharomyces cerevisiae //Mol. Cell. Biol. 1993. V.8. P.4691-4702.

574. Xu K., Bogert B.A., Li W., Su K., Lee A., Fen-Biao G. The fragile X-related gene affects the crawling behavior of Drosophila larvae by regulating the mRNA level of theDEG/ENaC protein pickpocketl //Curr. Biol. 2004. V.14. P.1025-1034.

575. Yamashita Y.M., Jones D.L., Fuller M.T. Orientation of asymmetric stem cell division by the APC tumor suppressor and centrosome //Science 2003. V. 301. P.1547-1550.

576. Yamashita Y.M., Mahowald A.P., Perlin J.R., Fuller M.T. Asymmetric inheritance of mother versus daughter centrosome in stem cell division //Science. 2007. V.315. P.518-521.

577. Yang J., Bogerd H.P., Wang P.J., Page D.C., Cullen B.R. Two closely related human nuclear export factors utilize entirely distinct export pathways //Mol. Cell. 2001. V.8. P.397-406.

578. Yang Z., Jakymiw A., Wood M.R., Eystathioy T., Rubin R.L., Marvin J.F., Chan E.K.L. GW182 is critical for the stability of GW bodies expressed during the cell cycle and cell proliferation//J.Cell Sci. 2004. V.117. P.5567-5578.

579. Yeo G., Holste D., Kreiman G., Burge C.B. Variation in alternative splicing across human tissues //Genome Biology. 2004. V.5. R74.

580. Yoon D.W., Lee H., Seol W., DeMaria M., Rosenzweig M., Jung J.U. Tap: a novel protein that interacts with tip of herpesvirus saimiri and induces lymphocyte aggregation//Immunity. 1997. V.6. P.571-582.

581. Yoon J.H., Love D.C., Guhathakurta A., Hanover J.A., Dhar R. Mex67p of Shizosaccharomyces pombe interacts with Raelp in mediating mRNA export //Mol.Cell. Biol. 2000. V.20. P.8767-8782.

582. Yu H. Regulation of APC-Cdc20 by the spindle checkpoint //Curr. Opin. Cell Biol. 2002. V.14. P.706-714.

583. Zalfa F., Giorgi M., Primerano B., Moro A., Di Penta A., Reis S., Oostra B., Bagni C. The Fragile X syndrome protein FMRP associates with BC1 RNA and regulates the translation of specific mRNAs at synapses //Cell. 2003. V.112. P.317-327.

584. Zalokar M. Autoradiographic studies of protein and RNA during early development of Drosophila eggs //Dev. Biol. 1976. V. 49. P. 425-437.

585. Zenklusen D., Vinciguerra P., Strahm Y., Stutz F. The yeast hnRNP-like proteins Yralp and Yra2p participate in mRNA export through interaction with Mex67p II.Mol. Cell. Biol. 2001. V.21. P.4219-4232.

586. Zhang C., Clarke P.R. Chromatin-independent nuclear envelope assembly induced by Ran GTPase inXenopus egg extracts //Science. 2000. V.288. P.1429-1432.

587. Zhang C., Hughes M., Clarke P.R. Ran-GTP stabilizes microtubule asters and inhibits nuclear assembly in Xenopus egg extracts //J.Cell. Sci. 1999. V.112. P.2453-2461.

588. Zhang D., Nicklas R. The impact of chromosomes and centrosomes on spindle assembly as observed in living cells //J.Cell Biol. 1995. V.129. P. 1287-1300.

589. Zhang M., Wang Q., Huang Y. Fragile X mental retardation protein FMRP and the RNA export factor NXF2 associate with and destabilize Nxfl mRNA in neuronal cells //Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2007. V.104. P.10057-10062.

590. Zhang Y.Q. , Bailey A.M., Matthies H.J.G., Renden R.B., Smith M.A., Speese S.D., Rubin G.M., Broadle K. Drosophila fragile X-related gene regulates the MAP1B homolog Futsch to control synaptic structure and function //Cell. 2001. V.107. P.591-603.

591. Zhang Y.Q. , Matthies H.J.G., Mancuso J., Andrews H.K., Woodruff III E., Friedman D., Broadie K. The Drosophila fragile X-related gene regulates axoneme differentiation during spermatogenesis //Develop. Biol. 2004. V.270. P.290-307.

592. Zheng Y., Wong M.L., Alberts B., Mitchison T. Nucleation of microtubule assembly by a gamma-tubulin-containing rings complex //Nature. 1995. V.378. P.578-583.

593. Zhimulev I.F., Belyaeva E.S., Pokholkova G.V., Kotchneva G.V., Fomina O.V., Bgatov A.V., Khudyakov Ju., Patzevich I., Semeshin V.F., Baritcheva E.M., Aizenzon M.G., Kramers, P., Eeken J. 1982. Report of new mutants //Dros. Inform. Serv. V.58: 210-214.

594. Zhong L., Belote J.M. The testis-specific proteasome subunit Prosa6T of D.melanogaster is required for individualization and nuclear maturation during spermatogenesis //Development. 2007. V.134. P.3517-3525.

595. Zhou F.Q., Zhou J., Dedhar S., Wu Y.H., Snider W.D. NGF-induced axon growth is mediated by localized inactivation of GSK-3beta and functions of the microtubule plus end binding protein APC //Neuron. 2004. V.42. P.897-912.

596. Zhou H., Kuang J., Zhong L., Kuo W.-L, Gray J.W., Sahin A., Brinkley B.R., Sen S. Tumour amplified kinase STK/BTAK induces centrosome amplification, aneuploidy and transformation//Nature Genet. 1998. V.20. P.189-193.

597. Zhou Z., Luo M.J., Straesser K., Katahira J., Hurt E., Reed R. The protein Aly links pre-messenger-RNA splicing to nuclear export in metazoans //Nature. 2000. V.407. P.401-405.

598. Zolotukhin A.S., Michalowski D., Smulevitch S., Felber B.K. Retroviral constitutive transport element envolved from cellular TAP (NXFl)-binding sequences //J.Virol. 2001. V.75. P.5567-5575.

599. Zolotukhin A.S. Tan W. Bear J. Smulevitch S. Felber B.K. U2AF participates in the binding of TAP (NXF1) to mRNA //J. Biol. Chem. 2002. V.277. P.3935-3942.

600. A Database of Drosophila Genes & Genomes. FlyBase: enhancing Drosophila Gene Ontology annotations. Nucleic Acids Research.- 2009.- http://www.flvbase.org.

601. The National Center for Biotechnology Information (NCBI). Biomedical and genomic information. 2009.- http://www.ncbi.nlm.nih.gov.

602. Promoter 2.0 Prediction Server.

603. SWISS-MODEL 2009 - swissmodel.expasy.org/workspace

Информация о работе

Мамон, Людмила Андреевна
доктора биологических наук
Санкт-Петербург, 2010
ВАК 03.02.07

Диссертация

Механизмы плейотропного действия гена small bristles (Dm nxfl) Drosophila melanogaster, принадлежащего эволюционно консервативному семейству nxf (nuclear export factor) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы