Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетический анализ участка ДНК Drosophila melanogaster, содержащего жизненно-важный ген l(1)ts403

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетический анализ участка ДНК Drosophila melanogaster, содержащего жизненно-важный ген l(1)ts403"

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ТРЕТЬЯКОВА ИРИНА ВИКТОРОВНА

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ УЧАСТКА ДНК ВКОБОРНИА МЕ1А1ЧОСАБТЕ11, СОДЕРЖАЩЕГО ЖИЗНЕННО-ВАЖНЫЙ ГЕН 1(1^403

Специальность: 03.00.15. - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

2000

Работа выполнена в лаборатории генетики животных БиНИИ СПбГУ; в лаборатории молекулярной цитогенетики дрозофилы ИЦиГ СО РАН (Новосибирск); в лаборатории молекулярных механизмов клеточного стресса ИБК РАН (Пущино)

Научный руководитель: доцент кафедры генетики и селекции СПбГУ

кандидат биологических наук Л.А.Мамон

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Е.В.Савватеева-Попова

Ведущее учреждение:

доктор биологических наук А.П.Перевозчиков

Петербургский институт ядерной физики РАН им. Б.П.Константинова

.Защита диссертации состоится « ^ » 2000 г.

в /X ч. на заседании Диссертационного совета Д.063.57.21. по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук в Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9, СПбГУ, кафедра генетики и селекции, аудитория 1.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Санкт-Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан « » 2000 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор биологических наук

£ ОНЧЛ, 0

А.Ф. Смирнов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Под влиянием повреждающих факторов внешней среды может произойти нарушение гомеостаза живого организма. Это может привести либо к гибели, либо к адаптации организма к изменившимся условиям и установлению нового гомеостаза. Физиологические изменения в клетках организма могут стать предпосылкой и условием возникновения генетических изменений, то есть мутаций. Эта гипотеза была предложена М.Е.Лобашевым в 1947 году (Лобашев, 1947) и в последующем стала основой для развития генетических исследований на кафедре генетики и селекции СПбГУ. Одним из направлений этих исследований стало изучение влияния белков теплового шока (БТШ) на мутационный процесс (Тихомирова и др., 1994). Перспективным подходом к исследованию этой проблемы является использование мутантных линий дрозофилы с нарушенным синтезом БТШ. Такая мутация 1(1)15403 была получена Р.Аркингом (АгЫг^, 1975). Она была локализована в районе 9¥ Х-хромосомы Ого5орЫ1а melanogaster (7Ыти1еу еЧ а1., 1981). Мутация 1(1)15403 принадлежит локусу (ее синонимом является однако между аллелями этого локуса существуют непростые аллельные отношения (7Ыгтш1е\' й а1., 1981). Было показано, что мутация 1(1)15403 обладает широким спектром плейотропных эффектов и после температурного воздействия затрагивает такие функции клетки и организма, как синтез БТШ (Evgen'ev й а1., 1979, Евгеньев, Денисенко, 1990), расхождение половых хромосом в мейозе у самок мутантной линии, конденсацию хроматина и пролиферативную активность в митотических клетках, раннее эмбриональное развитие, морфогенез (Мамон и др., 1999). Подобные гены, как правило, являются консервативными в эволюции. Обнаружение гомологии между клонированными генами дрозофилы и генами человека, в свою очередь, открывает широкие возможности для всестороннего изучения структуры и функции гомологичных генов человека, т.к. дрозофила представляет собой удобную экспериментальную модель для молекулярно-генетических исследований. Изучение структуры и функции таких

генов у модельных объектов имеет значение не только для развития фундаментальных исследований, но и способствует всестороннему изучению функции гомологичных генов человека. Цель и задачи исследования:

Цель данной работы состоит в исследовании молекулярной структуры жизненно важного гена 1(1)15403, вовлеченного в контроль важнейших клеточных процессов, в том числе реакцию клеточного стресса. В рамках поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Используя серию перекрывающихся делеций, определить локализацию гена, мутация которого приводит к нарушению картины синтеза БТШ после ТШ в линии дрозофилы 1(1)15403.

2. Определить характер доминирования для мутантного аллеля 1(1)15403 и нормального аллеля данного гена по признаку нарушения синтеза БТШ после ТШ.

3. Клонировать последовательность ДНК Х-хромосомы Вго.чоркИа те1апо^а5(ег, содержащую ген 1(1)15403.

4. Методом гибридизации РНК-ДНК по Нозерну проверить, влияет ли мутация 1(1)15403 на сплайсинг мРНК гена Нзр83.

5. Секвенировать фрагменты нуклеотидной последовательности ДНК в области локализации гена 1(1)15403 и установить их гомологию с опубликованными в Интернете последовательностями генома дрозофилы.

6. Дать молекулярно-генетическую характеристику района ДНК, в котором локализуется ген 1(1)15403.

Научная новизна и значимость работы.

Впервые клонирован в виде серии перекрывающихся фаговых клонов участок X-хромосомы О. те1апо§а$1ег протяженностью более 60 т.п.о., и в его составе ген 1(1)Ы03.

Впервые выявлены 2 перекрывающихся транскрипта, считывающиеся с участка ДНК, содержащего ген ¡(1)15403.

Впервые для нескольких линий Бго5орЫ1а melanogaster описан межлинейный полиморфизм длин рестрикционных фрагментов, образуемых при гидролизе эндонуклеазой рестрикции I ПпсПП и выявляемых при гибридизации с зондом из области локализации гена 1(1)15403.

Теоретическая и практическая ценность работы. Полученные результаты используются для дальнейшего исследования структуры и функций гена 1(1)15403.

Полученные нами клоны были использованы в работе Е.Б.Кокоза (Коко7.а, 2Ыти1еу, 1994) для выявления в геноме дрозофилы диспергированных повторов, специфичных для половой хромосомы.

Фаговые и плазмидные клоны, полученные в данной работе, используются в учебном процессе на кафедре генетики и селекции СПбГУ в практических курсах для студентов и магистрантов.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях: на Лобашевских чтениях, посвященных 90-летию М.Е.Лобашева (Санкт-Петербург, 1997); на семинарах лаборатории генетики животных БиНИИ СПбГУ и специализации генетика животных кафедры генетики и селекции СПбГУ; на Первой Всесоюзной конференции по генетике насекомых (Москва, 1991); на 37-й (Сан Диего, 1996), 38-й (Чикаго, 1997), 39-й (Вашингтон, 1998) и 41-й (Питтсбург, 2000) Международных конференциях по дрозофиле; на II Съезде ВОГиС (Санкт-Петербург, 2000).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ. Объем и структура работы. Диссертация изложена на 160 страницах, состоит из Введения, Материаюв и методов, Результатов и обсуждения, Заключения и Выводов, трех Приложений; содержит 12 рисунков и 4 таблицы. Список литературы включает 234 названия, из которых 39 на русском языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работе были использованы линии дикого типа (Oregon-R и СаМоп-Б) из коллекции кафедры генетики и селекции СПбГУ; линии, несущие мутации в

локусе small bristles (sbr): l(l)ts403; bw; si предоставлена М.Б.Евгеньевым; линии предоставленные И.Ф.Жимулевым: 1 )ycv ¡(l)ts403 /FM6, 2) sbr, 3) Df(])vu / FM6 l69' /Dp v+Yy+ (Li), 4) Df(l)vu, ras2 m"/ FM6169j /Dp v+Yy' (L4), 5) Df(l)/K /FMól69'/ Dp v*\y (M6), 6) ¡(1)24/45A / FM6, 7) w " 1(1)K2 В /FM6v , 8) l(l)K4 В / FM6v, 9) l(l)K5 В / FM6v (выделены аллели локуса sbr); в процессе работы нами были выведены и использованы линии: 1) l(l)K4 / FM6v/ Dp v )'_>г, 2) ras2 l(l)ts40i v, 3) ras2 sbr v, 4) у2 Df(l)w67c23 2 l(l)ts403, 5)y2Df(l)w67c23 2sbr. Все балансерные хромосомы, хромосомные перестройки и мутации, маркирующие эти линии, описаны в справочнике Линдсли и Жимм "The Genome of Drosophila melanogaster"(Lindsley, Zimm, 1992).

Штаммы Escherihia coli: K802 (Wood, 1966) - использовали для размножения рекомбинантных бактериофагов к\ XLl-Blue (Bullock et al., 1987) - для размножения плазмид, атакже для размножения клонов бактериофагов X и PI. Для клонирования участка ДНК дрозофилы, содержащего ген l(l)ts403 на первом этапе использовали библиотеку геномной ДНК дрозофилы Oregon-R/EM В L4, любезно предоставленную доктором Ф.Кафатосом (США) (Kozlova et al., 1994). Микроклон 3/18 из микробиблиотеки геномной ДНК дрозофилы района 1 OA 1-2 и прилегающих к нему участков Х-хромосомы (Кокоза и др., 1990) был любезно предоставлен И.Ф.Жимулевым. На втором этапе клонирования использовали набор из 13 клонов PI (Smoller et al., 1994) из района 9F Х-хромосомы дрозофилы, любезно предоставленных проф. М.Эшбернером. Для клонирования и секвенирования фрагментов ДНК использовали плазмидные векторы: pUC19 (Yanish-Perron et al., 1985); pBluescriptSK" (Short, 1988). При создании генетической конструкции для трансформации дрозофилы использовали вектор pCaSpeR 3 (Thummel С., Pirrotta V., 1991, 1992). Применяли стандартные методы работы с дрозофилой (Ashburner, 1989), молекулярно-генетические методы (Sambrook et al., 1989), использовали компьютерные программы, доступные в Интернете, а также программы Omiga (Oxford Molecular) и DNA-Star (LaserGene).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Определение локализации гена, приводящего к нарушению картины синтеза БТШ после Tili в линии l{l)ts403 и характера доминирования данной мутации проводили методом делеционного картирования, используя делеции Df(])vu (L3, не удаляет ген) и Df(l)vIJ (L4, удаляет его) (Жимулев, 1982). Результаты SDS-ПААГ электрофореза меченых[3Н]-Ьеи белков выделенных из слюнных желез личинок дрозофилы женского пола, представлены на рисунке 1.

Рис. 1. Синтез БТШ, индуцированных ТШ (37,5°С, 1 ч) сразу после воздействия на личинок III возраста дрозофилы в клетках слюнных желез в зависимости от генотипа обработанных особей. Сокращения:

OR - линия Oregon-R (аллель дикого типа); L3 - делеция L3 (аллель дикого типа); L4 - делеция L4 (О-ачлель гена l(l)ts403)\ ts - мутантный аллель l(l)ts403.

Картины нарушений синтеза БТШ после ТШ у гомозигот (ts/ts) и гемизигот (ts/L4) по мутации совпадают, в то время как гетерозиготы ts/L3 и гомозиготы по аллелю дикого типа +/+, а также гемизиготы (несущие нормальный аллель в одной дозе) +/L4 дают одинаковую нормальную картину синтеза БТШ. Таким образом, полученные данные показывают, что мутация, приводящая к нарушению синтеза БТШ после ТШ, локализована между дистальными точками разрыва делеций L3 и L4, так же, как и мутация, приводящая к нарушению выживаемости дрозофил в условиях рестриктивной температуры. То есть, по всей вероятности, эти признаки являются следствиями одной мутации - l(l)ts403, хотя и нельзя исключить, что они могут быть обусловлены различными тесно сцепленными мутациями.

Эти же результаты позволяют заключить, что мутантный аллель l(l)ts403 по признаку нарушения синтеза БТШ после теплового шока является рецессивным по отношению к нормальному (+) аллелю данного гена.

Исследование влияния мутации l(l)ts403 на сплайсинг мРНК Hsp83. Ранее было показано, что исследуемая мутация проявляет свое действие до этапа трансляции. (Лозовская и др., 1982; Левин и др., 1984). Поскольку размер пуфов ТШ и интенсивность включения [3Н]-уридина в них достоверно не различаются у мутантов и в контроле - у особей дикого типа, было высказано предположение о том, что при повышении температуры мутация l(l)ts403 проявляет свое действие после этапа транскрипции, вероятно, на уровне процессинга мРНК (Лозовская и др., 1982; Левин и др., 1984).

Как известно, ген Hsp83, единственный из генов теплового шока, имеет интрон размером около 1 т.п.о. (Holmgren et al., 1979), то есть его первичный транскрипт при процессинге должен подвергнуться сплайсингу. Если этот процесс нарушен у мутантных особей после ТШ, то при гибридизации по Нозерну с клоном, содержащим ген Hsp83, будет наблюдаться полоса мРНК большей молекулярной массы (содержащей интрон), чем в контроле - у дрозофилы дикого типа. С целью прямой проверки этого предположения мы осуществили гибридизацию по Нозерну поли(А+)-РНК, выделенной из яичников дрозофил мутантной линии и линии дикого типа Oregon-R до и после ТШ (37,5°С, 1 час) с меченым [32Р] зондом - клоном, содержащим ген Hsp83 (клон 244) (рис. 2).

OR OR ts ts Рис.2. Результаты гибридизации по Нозерну поли(А)+мРНК, выделенной из яичников дрозофил линий Oregon-R и l(l)ts403;

К ТШ К ТШ ¿w. st с ДНК-зондом - клоном 244 (Hsp83). Примечания:

OR - линия Oregon-R;

Is - линия I(I)ts403; bw; st;.

К — контроль (без воздействия);

Hspla ТШ - опыт (ТШ 37,5°С, 1 ч).

Как видно из рис.2, не наблюдается ни качественных, ни явных количественных отличий мутантов от нормы. Следовательно, сплайсинг мРНК Hsp83 у мутантных особей не нарушен. Наличие гибридизации с клоном 244 (Hsp83) во всех вариантах, в том числе, без воздействия, обусловлено тем, что в яичниках дрозофил Hsp83 экспрессируется конститутивно (Zimmerman et al., 1983).

Полученные нами данные позволяют заключить, что нарушение синтеза БТШ после ТШ у дрозофил мутантной линии вызвано не нарушением сплайсинга, а нарушением протекания других процессов на этапе между транскрипцией и трансляцией генов, кодирующих БТШ.

Клонирование последовательности ДНК Х-хромосомы Drosophila melanogaster, содержащей ген l(l)ts403. Изучение молекулярной природы исследуемого гена может ответить на многие вопросы, возникающие при анализе фенотипических проявлений мутации l(l)ts403. Первым этапом этой работы стало клонирование области ДНК дрозофилы, содержащей этот ген. Первоначально мы выбрали метод «прогулки по хромосоме» (Bender et al., 1983) для клонирования участка ДНК дрозофилы между дистальными точками разрыва делеций L3 и L4. В нашем распоряжении были микроклоны ДНК дрозофилы из района 9F-10A X хромосомы (Кокоза и др., 1990). В результате «прогулки по хромосоме», взяв в качестве исходного зонда микроклон 3/18, мы получили набор перекрывающихся клонов ДНК дрозофилы линии Oregon-R в векторе EMBL4 (Kozlova et al., 1994). Последний из этих клонов, названный 3.18.8, содержит дистальную точку разрыва делеции L3, и участок этого клона размером около Ют.п.о. является частью той области генома дрозофилы, в которой локализован ген l(l)ts403, то есть является частью зоны поиска исследуемого гена. (Рис. 3) Дальнейшая «прогулка по хромосоме» была затруднена из-за того, что в дисталыюй части клона 3.18.8 находится короткая диспергированная повторяющаяся последовательность генома дрозофилы (Кокоза, 1994; Kokoza, Zhimulev, 1994),что делало невозможным эффективный скрининг геномной библиотеки дрозофилы и осуществление следующего «шага». Для завершения работы по клонированию области ДНК, ограниченной дистальными точками разрыва делеций L3 и L4 мы использовали библиотеку PI клонов , созданную Хартлом с соавторами (Smoller et al., 1994). Из 13 клонов PI из района 9F

*_теломера

3,3RS(3.18.8) 3.18.7

центромера

3-18.2

3/18

2 |g g вш2,ЗШ1(3.18.8)

3.18.4

3.18.1

L3

Мб

Рис. 3 Схема расположения микроклона 3/18 и Х-клонов, полученных нами в результате «прогулки по хромосоме». Показаны фрагменты ДНК, в которых локализуются определенные нами точки разрыва делений (Мб и L3), фрагмент 3,3RS(3.18.8), содержащий диспергированную повторяющуюся последовательность генома дрозофилы, специфичную для Х-хромосомы, а также фрагмент 2,3HR(3.18.8), использованный в качестве зонда при выборе клона Р1, содержащего исследуемый участок ДНК дрозофилы.

дрозофилы (любезно предоставленных М.Ашбурнером), мы выбрали один -клон DS03615, поскольку только этот клон дал положительный сигнал при дот-гибридизации ДНК анализируемых Р1 клонов с меченым [32Р] зондом - клоном 2,3HR(3.18.8) (рис. 3). После построения рестрикционной карты клона DS03615 и сопоставления ее с картой клона 3.18.8, а также гибридизации in situ субклона 12RR(DS03615) с политенными хромосомами дрозофилы линии L4 (выполненной Е.С.Зеленцовой) оказалось, что Р1 клон DS03615 имеет вставку размером 85,5 т.п.о., и полностью перекрывает область ДНК дрозофилы между дистальными точками разрыва делеций L3 и L4, то есть область локализации гена l(l)ts403.

Секвенирование фрагментов ДНК в области локализации гена l(l)ts403 и установление их соответствия с опубликованными в Интернете последовательностями генома дрозофилы. Мы провели выборочное секвенирование коротких нуклеотидных последовательностей ДНК в пределах клона 3.18.8 для сопоставления клонированного нами участка ДНК X хромосомы дрозофилы с уже секвенированными и представленными в Интернете районами генома дрозофилы. Нами были секвенированы по Сэнгеру концевые участки следующих субклонированных в плазмидных векторах фрагментов этого клона (рис. 4):

б^ЯЯ 6ХХЮ Ш00 '

здооо мооо бахм eißflö БЙоо бэооо ййЗП бэооо П ббооо 67000 бадоо 690« 7üöoo 71000

CG1664 CG15210 CG15209

В—I-1-1-(-1-1---1-1-

sbr

59000 60000 61000 62000 S3COO 64000 65000 66000 67000 60000 69000

4,0НН(3.18.7)

1,0RH(3.18 8) 2,3HR(318.8) 2,4RH(3.18 7) д --7,2SH(3.18.8) -

7,7RS(3.18 8)

Sacl (60034) Xbal(66417)

Рис.4. Молекулярно-генетическая характеристика участка ДНК дрозофилы, содержащего ген sbr (I(l)ts403)

А-скэффолд 142000013386053 и расположение в нем экзонов предсказанных генов; Б - расположение экзонов реального гена sbr, определенное нами на основании данных выравнивания нуклеотидных последовательностей кДНК гена sbr (Wilkie, 1999) и сиквенса генома дрозофилы (Adams et al., 2000);

В - расположение фаговых Уклонов 3.18.7 и 3.18.8; показано положение фрагмента ДНК, содержащего точку разрыва делеции L3;

Г - расположение секвенированных нами участков ДНК относительно координат скэффолда 142000013386053;

Д - расположение фрагментов ДНК, клонированных нами в плазмидах; Е - расположение фрагмента ДНК, клонированного Г.Т.Лёзиным в векторе pCaSpeR 3 и использованного для трансформации дрозофилы.

3,3RS(3.18.8) - 203 н.п. от сайта EcoRI и 371 н.п. от сайта Sali (3,3S); 1,0HR(3.18.8) - 553 н.п. от сайта Hindlll;

2,3HR(3.18.8) - 360 н.п. от сайта Hindlll и 378 н.п. от сайта EcoRI (2,3R);

7,2SH(3.18.8) - 267 н.п. от сайта Sali (7,2S);

2,4RH(3.18.7) -331 н.п. от сайта EcoRI и 369 н.п. от сайта Hindlll.

Всего нами было секвенировано 8 участков клона 3.18.8 (и/или 3.18.7), их

суммарная длина составила 2832 п.о.

Установление соответствия секвенированных нами нуклеотидных последовательностей с высокогомологичными последовательностями, имеющимися в Интернете В результате сопоставления наших данных с опубликованными в Интернете результатами секвенирования генома дрозофилы (Adams et al., 2000;) и сиквенса кДНК гена small bristles (sbr) (Wilkie, 1999) мы

обнаружили протяженные участки однозначного соответствия между ними и построили карту расположения клонированных нами, а также Г.Уилки участков ДНК дрозофилы, взяв за основу координаты скэффолда 142000013386053, который содержит все сравниваемые нуклеотидные последовательности (или их аллельные варианты). На рис. 4 представлен также предсказанный компьютерной программой ген С01664, расположенный в этом участке ДНК и соответствующий реальному гену эЬг.

Таким образом, ген ¿¿г содержится в пределах выделенных нами клонов 3.18.8 и 0803615.

Молекулярно-генетическая характеристика района района ДНК, в котором локализуется ген ¡{1)15403. Мы провели гибридизацию поли(А+)мРНК из яичников дрозофил с мечеными [32Р] фрагментами клонаЗ.18.8 по Нозерну. Были использованы самки дрозофил двух линий - Oregon-R и ¡(1)15403; Ьк; ¿7, подвергнутые и не подвергнутые ТШ (37,5°С, 1 час). Как видно из рис. 5, фрагмент 7,7115(3.18.8), взятый в качестве зонда, при гибридизации по Нозерну выявляет четыре типа различных мРНК, гомологичных различным участкам этого фрагмента ДНК (они обозначены номерами 1,2, 3,4). Фрагмент 3,3118(3.18.8) выявляет две разновидности мРНК (1 и 2), причем, они по своей молекулярной массе и положению в геле совпадают с двумя наиболее тяжелыми мРНК, гомологичными также и фрагменту 7,7118(3.18.8). Фрагмент 2,4НЯ(3.18.8) гомологичен мРНК 4; фрагмент 4,0Н11(3.18.8) гомологичен мРНК 3 (рис. 5, таблица). Как следует из этих данных, можно с высокой вероятностью утверждать, что мРНК 1 и 2 соответствуют участку ДНК дрозофилы, гомологичному как фрагменту 7,71*8(3.18.8); так и фрагменту 3,3118(3.18.8) (рис. 4). В то же время, как следует из данных по секвенированию, фрагменты 3,3118(3.18.8) и 7,7Я8(3.18.8) оба содержат участки, гомологичные гену ябг. Поскольку известен размер мРНК этого гена-2480 н.п. (\Villde, 1999), можно сказать, что эта мРНК соответствует выявленной нами мРНК 2 (рис. 5, таблица).

Таблица. Схема результатов гибридизации по Нозерну поли(Л+)мРНК из яичников дрозофилы с различными зондами из района локализации гена 1(1)н403

4-

мт л—* Щ 1

Ш «Л ** '

зонд и РНК 7,7118(3.18.8) 3,3115(3.18.8) 2,4И1(3.18.7) 4,011(3.18.7)

1 ШШЭ на

2

3 ИЖИИРЖЯ

4

Рис.5. Гибридизация по Нозерну зонда-фрагмента 7,7Я8 клона 3.18.8 с поли(А)+ мРНК, выделенной из яичников дрозофилы различных генотипов, до и после ТШ 37,5°С, 1ч

Для получения дополнительной характеристики интересующего нас района ДНК мы провели гибридизацию по Саузерну гидролизатов ДНК дрозофил различных генотипов, полученных в результате расщепления рестриктазой НтсИП, с меченым [32Р] фрагментом 3,3118(3.18.8) и выявили рестрикционныи

полиморфизм по двум фрагментам (размером 9,5 т.п.о. и 5 т.п.о. в линии Oregon-R). Результаты представлены на рис. 6. Данный факт можно использовать в дальнейшей работе по клонированию мутантных аллелей локуса $Ьг с целью изучения структуры и механизмов действия этих аллелей.

« о

к а. < а « 00|}00 ^ п. ^ -г

£

ей

^ ?

а а и и. ¡4

9,5 т.п.о.-5 т.п.о.

Рис.6. Гибридизация по Саузерну клона 3,31*5(3.18.8) с ДНК дрозофил различных генотипов, гидролизованных рестриктазой НтсИП.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проделанной нами работы был клонирован участок ДНК дрозофилы, содержащий жизненно-важный ген 1(1)15403, и дана молекулярно-генетическая характеристика этого участка. Оказалось, что исследуемый ген консервативен в эволюции, и его ортологи известны у человека, мыши, крысы, нематоды, дрожжей. Во всех исследованных случаях продукт гена 1(1)15403 или его ортологов играют важную роль в экспорте мРНК из ядра в цитоплазму. Это позволяет объяснить влияние мутации 1(1)1б403 на синтез БТШ при тепловом воздействии. Молекулярно-генетический анализ других мутантных аллелей локуса 5Ьг, имеющихся в нашем распоряжении, открывает перспективы для изучения структуры и функции исследуемого гена, а также механизмов межаллельных взаимодействий. Нами была проделана предварительная работа, позволяющая приступить к клонированию мутантных аллелей локуса .чЬг. Поскольку дрозофила является удобной генетической моделью для молекулярно-генетических исследований, и ген, ортологичный гену ¿¿>г, известен у человека, разрабатываемая нами модель создает возможности для изучения влияния исследуемого гена и его мутантных аллелей на такие генетические процессы, которые недоступны для изучения на модели культуры клеток человека.

ВЫВОДЫ

1. Мутация 1(1)15403, вызывающая у особей дрозофилы нарушение картины синтеза БТШ после теплового шока, локализуется между дистальными точками разрыва делеций ЬЗ и Ь4.

2. Мутантный аллель 1(1)15403 по признаку нарушения синтеза БТШ после теплового шока является рецессивным по отношению к нормальному аллелю данного гена.

3. Мутация 1(1)15403, влияющая при тепловом воздействии на экспрессию генов БТШ на посттранскрипционном уровне, не приводит к нарушению сплайсинга мРНК гена Н5р83.

4. Клонирована последовательность ДНК Х-хромосомы ОгозорИПа ше1апо§а51ег, содержащая ген 1(1)15403.

5. Секвенированы фрагменты нуклеотидной последовательности ДНК в области локализации гена ¡(1)15403 (всего 2832 п.о.), и установлено их соответствие с опубликованными в Интернете последовательностями генома дрозофилы. Все секвенированные нами участки ДНК расположены в скэффолде 142000013386053 в интервале координат с 58403 по 68438).

6. Показано, что участку ДНК дрозофилы, в котором локализуется ген ¡(1)15403, соответствует два типа мРНК - размерами около 5 т.о. и около 2,5 т.о., причем кодирующие последовательности ДНК для этих мРНК перекрываются.

7. Район ДНК, в котором локализуется геи 1(1)15403, характеризуется полиморфизмом длин рестрикционных фрагментов, образуемых при гидролизе рестриктазой НтсШ1.

* * *

Автор выражает глубокую благодарность своему научному руководителю Людмиле Андреевне Мамон, Михаилу Борисовичу Евгеньеву, который фактически был вторым руководителем этой работы, всем, кто участвовал в экспериментах, помогал своими советами, поддержкой, вниманием. Работа была поддержана фондом Роберта Хавемана (Германия).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Protopopov М.О., Belyaeva E.S., Tretyakova I.V., Zhimulev I.F. Molecular map of the 2B region of Drosophila melanogaster X chromosome // Dros Inf. Serv.- 1991.- V. 70,-P. 182—184.

2. Третьякова И.В. Делеционное картирование мутации l(l)ts403 дрозофилы по признаку нарушения синтеза белков теплового шока // Первая всесоюзная конференция по генетике насекомых (М., 19-21 ноября 1991 г.): Тез. докл. - М., 1991,- С. 107.

3. Третьякова И.В., Мамон JI.A. Определение критической температуры, изменяющей синтез белков теплового шока у личинок l(l)ts403 дрозофилы, развивающихся при разных температурах // Первая всесоюзная конференция по генетике насекомых (М., 19-21 ноября 1991 г.): Тез. докл. - М., 1991,- С. 108.

4. Kozlova T.I., Semeshin V.F., Tretyakova I.V., Kokoza E.B., Pirrotta V., Grafodatskaya V.E., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Molecular and cytogenetical characterization of the 10A1-2 band and adjoining region in the Drosophila melanogaster polytene X chromosome // Genetics.- 1994,- V. 136.-N 3.- P. 1063—1073.

5. Barabanova L.V., Mamon L.A., Kutskova Yu.A., Tretyakova I.V. Transcriptional and post-transcriptional regulation of heat shock response in Drosophila melanogaster. Drosophila 37th annual Research Conference (San Diego, USA, April 27 - May 1,

1996): Abstracts.- San Diego, 1996,- P. 12.

6. Barabanova L., Mamon L., Bondarenko L., Komarova A.., Tretyakova I. I(l)ts403 as D.melanogaster ts-meiotic mutant // Drosophila 38th annual Research Conference (Chicago, USA, April 16-20, 1997): Abstracts.-Chicago.- 1997.-P.173.

7. Mamon L., Kutskova Yu., Komarova A., Tretyakova I., Barabanova L., Bondarenko L., Tikhomirova M. Pleiotropic effect of D.melanogaster l(l)ts403 mutation under heat shock // Drosophila 38th annual Research Conference (Chicago, USA, April 16-20,

1997): Abstracts.- Chicago.- 1997.- P.174A..

8. Tretyakova I.V., Mamon L.A., The addition to the analysis of small bristles (sbr) locus containing the l(l)ts403 allele in Drosophila melanogaster // Drosophila 39th annual Research Conference (Washington, USA, March 25-29, 1998): Abstracts.-Washington.- 1998,- P. 779C.

9. Мамон Л.А, Бондаренко Jl.B., Третьякова И.В., Комарова А.В., Никитина Е.А., Пугачева О.М., Голубкова Е.В. Последствия клеточного стресса при нарушенном синтезе белков теплового шока у дрозофилы // Вестн. СПб Ун-та,- 1999.- Сер. 3.-Вып. 4,-№24,- С. 100-114.

10. Мамон Л.А., Комарова А.В., Никитина Е.А., Третьякова И.В., Барабанова Л.В., Бондаренко Л.В., Пугачева О.М., Голубкова Е.В. Доминантные и рецессивные эффекты мутации l(l)ts403 у Drosophila melanogaster // II Съезд ВОГиС (СПб, 1-5 февраля 2000 г.): Тез. докл.- СПб, 2000,- Т. 2,- С. 52-53.

11. Mamon L.A., Komarova A.V., Nikitina Е.А., Tretyakova I.V., Golubkova E.V., Pugatchova O.M., Gudkova A.A. Dominant effects of l(l)ts403 mutation in D.melanogaster //. Drosophila 41st annual Research Conference (Pittsburg, USA, March 22-26,2000): Abstracts.- Pittsburg.- 2000.- P. 412C.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Третьякова, Ирина Викторовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Температурный стресс и белки теплового шока (БТШ)

1.1. Роль температуры в процессах жизнедеятельности организмов

1.2. БТШ - белки стресса

1.3. Функции БТШ

1.4. Регуляция экспрессии генов БТШ

1.5. БТШ и мутационный процесс

2. Мутантная линия дрозофилы l(l)ts403 как модель для изучения последствий теплового шока

2.1. Влияние мутации 1(1)ts403 на экспрессию генов БТШ после ТШ

2.2. Влияние мутации l(l)ts403 на плодовитость самок, подвергнутых ТШ

2.3. Влияние мутации l(l)ts403 на пролиферацию и конденсацию 22 хроматина в соматических клетках у личинок, подвергнутых ТШ

2.4. Влияние мутации l(l)ts403 на расхождение и потери половых хромосом в мейозе у самок, подвергнутых ТШ

2.5. Влияние мутации l(l)ts403 на раннее развитие эмбрионов дрозофилы, подвергнутых ТШ

3. Генетические и цитогенетические данные о картировании локуса small bristles, содержащего мутацию l(l)ts

4. Резюме

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Материалы

1.1. Линии Drosophila melanogaster, использованные в работе

1.2. Штаммы Escherihia coli, использованные в работе

1.3. Библиотеки и клоны геномной ДНК дрозофилы

1.4. Векторы для конструирования рекомбинантных плазмид

2. Методы исследования

2.1. Методы работы с дрозофилой

2.1.1. Условия содержания культур дрозофилы

2.1.2. Получение гибридов дрозофилы, несущих различные комбинации аллелей локуса sbr

2.1.3. Экспериментальный тепловой шок

2.2. Методы работы с микробиологическими объектами 36 2.3 Электрофоретический анализ белков теплового шока

2.4. Электрофоретический анализ ДНК

2.5. Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции

2.6. Препаративное выделение фрагментов ДНК

2.7. Переклонирование фрагментов ДНК в плазмидные векторы

2.8. Трансформация Escherichia coli плазмидной ДНК

2.9. Быстрый лизис бактерий

2.10. Выделение плазмидной ДНК

2.11. Выделение ДНК клонов PI

2.12. Скрининг геномной библиотеки дрозофилы

2.13. Включение радиоактивной метки в ДНК

2.14. Гибридизация ДНК-ДНК

2.15. Радиоавтография

2.16. Отбор рекомбинантных фаговых клонов

2.17. Выделение ДНК бактериофага X

2.18. Построение реетрикционных карт рекомбинантных клонов

2.19. «Прогулка по хромосоме»

2.20. Определение ориентации вновь выделенного клона геномной

ДНК дрозофилы

2.21. Выделение геномной ДНК дрозофилы

2.22. Гибридизация in situ с ДНК политенных хромосом дрозофилы

2.23. Выделение ро1у(А)+мРНК из самок дрозофилы

2.24. «Nothern» гибридизация

2.25. Секвенирование ДНК по Сэнгеру

2.26. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей

2.27. Компьютерный анализ аминокислотных последовательностей

2.28. Трансформация клеток зародышевого пути дрозофилы

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Определение локализации гена, мутация которого приводит к нарушению картины синтеза БТШ после теплового шока у дрозофилы

2. Определение характера доминирования мутации l(l)ts403 по признаку нарушения картины синтеза БТШ после теплового шока

3. Исследование влияния мутации l(l)ts403 на сплайсинг мРНК Hsp

4. Клонирование последовательности ДНК Х-хромосомы Drosophila melanogaster, содержащей ген l(l)ts

4.1. «Прогулка по хромосоме»

4.2. Выбор и картирование клона Р1, содержащего ген l(l)ts403 63 5. Молекулярно-генетическая характеристика района ДНК дрозофилы, содержащего ген l(l)ts

5.1. Секвенирование фрагментов ДНК в области локализации гена l(l)ts403 и установление их соответствия с опубликованными в 68 Интернете последовательностями генома дрозофилы

5.2. Выявление экзон-интронной структуры гена sbr

5.3. Идентификация гена sbr (l(l)ts403) в пределах клонированного 75 нами участка ДНК

5.3.1. Данные о генах, гомологичных sbr и описанных у других организмов

5.3.1.1. Гены ТАР/Мех67р - ортологи гена sbr

5.3.1.2. Транспорт мРНК из ядра в цитоплазму

5.3.1.3. Экспериментальная изученность генов ТАР/Мех67р

5.3.1.4. Доменная структура факторов ТАР/Мех67р

5.3.2. Сравнение ортологичных белков TAP/Mex67/s6r

5.3.3. Выявление фракций мРНК, считывающихся с участка ДНК, в котором локализуется ген l(l)ts

5.3.4. Создание конструкции для трансформации мутантных эмбрионов дрозофилы

5.3.4.1. Определение регуляторных районов гена sbr

5.3.4.2. Трансформация клеток зародышевого пути эмбрионов дрозофилы линий, несущих мутации в локусе sbr

5.3.4.3. Анализ результатов трансформации дрозофилы

5.3.5. Выявление межлинейного рестрикционного полиморфизма

ДНК в районе локализации гена l(l)ts

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетический анализ участка ДНК Drosophila melanogaster, содержащего жизненно-важный ген l(1)ts403"

Неотъемлемым свойством всех живых организмов является способность адаптироваться к изменяющимся условиям окружающей среды и отвечать на внешние воздействия физико-химических факторов изменением метаболизма клетки и всего организма. Резкие изменения условий окружающей среды могут привести к гибели организма, но если сила воздействия не слишком велика, организм может вернуться к нормальной жизнедеятельности. То состояние организма, при котором нарушенная жизнедеятельность может быть восстановлена, Д.Н.Насонов назвал «паранекрозом», сформулировав свою паранекротическую теорию (Насонов, 1937). На основании этой теории М.Е.Лобашев выдвинул физиологическую (паранекротическую) гипотезу мутационного процесса, предполагая, что при воздействии внешних факторов в генетических структурах клетки возникают обратимые изменения, которые при восстановлении нормальной жизнедеятельности могут либо вернуться к норме, либо реализоваться в мутации (Лобашев, 1947). Он предложил метод последовательного действия двух факторов, один из которых является мутагенным, а второй - модифицирующим действие первого.

Модифицирующее влияние высокой температуры на мутационный процесс, индуцированный рентгеновским облучением, долгие годы изучалось на кафедре генетики и селекции СПбГУ (ЛГУ) в работах проф. М.М.Тихомировой с соавторами (Тихомирова и др., 1993). Было показано, что хотя температура сама по себе не обладает выраженным мутагенным эффектом, она, действуя после облучения, может значительно усиливать эффект рентгеновского облучения, который оценивали по частоте нерасхождения и потерь половых хромосом дрозофилы (Тихомирова, 1989; Тихомирова и др., 1993).

Особое место в этих исследованиях заняла мутантная линия дрозофилы l(l)ts403 (Arking, 1975) с дефектом в ответе клеток на тепловой шок (ТШ) (Евгеньев, Левин, 1980; Evgen'ev et al., 1979; Evgen'ev et al., 1985). В отличие от всех других ранее исследованных линий дрозофилы линия l(l)ts403 характеризовалась ещё и тем, что одно лишь температурное воздействие (37°С, 1 ч) на самок этой линии индуцировало нерасхождение и потери половых хромосом в мейозе с частотой около 4% (Мамон и др., 1992), что выше, чем после рентгеновского облучения в дозе 9,3 Гр (около 1 ООО рентген) (Тихомирова, 1980; Тихомирова, Беляцкая, 1984). Это позволило на предварительном этапе исследования предположить, что мутагенный эффект температуры на самок линии l(l)ts403 обусловлен дефектом в системе белков теплового шока (БТШ) в клетках мутантов после температурного воздействия и использовать данную линию для изучения роли БТШ в мутационном процессе (Тихомирова, 1989; Тихомирова и др., 1993; 1994).

Дальнейший анализ выявил новые плейотропные эффекты мутации l(l)ts403 при температурном воздействии. Было показано, что у мутантных особей дрозофилы после теплового шока резко снижается выживаемость и плодовитость (Мамон и др., 1998), нарушается пролиферативная активность (Мамон, Куцкова, 1993а; Куцкова, Мамон, 1996) и состояние хроматина в соматических клетках (Мамон, Куцкова, 19936; Куцкова, Мамон, 1994), тепловой шок оказывает сильнейшее воздействие на теплочувствительность ранних эмбрионов (Мамон и др., 1999), морфогенез (Мамон и др., 1999; Никитина, 1999) и двигательную активность имаго (Mamón et al., 2000). Причем, не все проявления исследуемой мутации обусловлены нарушениями в синтезе БТШ после теплового воздействия (Мамон и др., 1999а).

Таким образом, мутация l(l)ts403 затрагивает ген дрозофилы, вовлеченный в различные жизненно-важные процессы, характеризующиеся эволюционным консерватизмом, такие как ответ клетки на тепловой шок и процесс расхождения хромосом в мейозе.

Цель и задачи исследования:

Цель данной работы состоит в исследовании молекулярной структуры и функции жизненно важного гена 1(1^403, вовлеченного в контроль важнейших клеточных процессов, в том числе реакцию клеточного стресса. В рамках поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Используя серию перекрывающихся делеций, определить локализацию гена, мутация которого приводит к нарушению картины синтеза БТШ после ТШ.

2. Определить характер доминирования для мутантного l(l)ts403 и нормального аллелей данного гена по признаку нарушения синтеза БТШ после ТШ.

3. Методом гибридизации РНК-ДНК проверить, влияет ли мутация 1(1^403 на сплайсинг мРНК гена Шр83.

4. Клонировать последовательность ДНК Х-хромосомы Drosoph.Ua те1апо§а81ег, содержащую ген 1(1)15403.

5. Секвенировать фрагменты нуклеотидной последовательности ДНК из области локализации гена 1(1^403 и установить их гомологию с опубликованными в Интернете последовательностями генома дрозофилы.

6. Дать молекулярно-генетическую характеристику района ДНК, в котором локализуется ген 1(1^403.

Научная новизна и значимость работы.

Впервые клонирован в виде серии перекрывающихся фаговых клонов участок Х-хромосомы Вгозорк'йа melanogaster протяженностью около 50 т.п.о., и в его составе ген 1(1)1&403.

Впервые выявлены 2 перекрывающихся транскрипта, считываемые с участка ДНК, содержащего ген 1(1)18403.

Впервые для нескольких линий ОгояорИПа melanogaster описан межлинейный полиморфизм длин рестрикционных фрагментов, образуемых при гидролизе эндонуклеазой рестрикции НтсИП и выявляемых при гибридизации с зондом из области локализации гена 1(1)18403.

Теоретическая и практическая ценность работы. Полученные результаты используются для дальнейшего исследования структуры и функции гена l(l)ts403. Полученные нами клоны были использованы в работе Е.Б.Кокоза (Кокоза, 1994; Кокога, 7Ыши1еу, 1994) для выявления в геноме дрозофилы диспергированных повторов, специфичных для половой хромосомы. Фаговые и плазмидные клоны, полученные в данной работе, используются в учебном процессе на кафедре генетики и селекции СПбГУ в практических курсах для студентов и магистрантов.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях: на Лобашевских чтениях, посвященных 90-летию М.Е.Лобашева (Санкт-Петербург, 1997); на семинарах лаборатории генетики животных БиНИИ СПбГУ и специализации генетика животных кафедры генетики и селекции СПбГУ; на Первой Всесоюзной конференции по генетике насекомых (Москва, 1991); на 37-й (Сан Диего, 1996), 38-й (Чикаго, 1997), 39-й (Вашингтон, 1998) и 41-й

12

Питтсбург, 2000) Международных конференциях по дрозофиле; на II Съезде ВОГиС (Санкт-Петербург, 2000).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 160 страницах, состоит из Введения, Материалов и методов, Результатов и обсуждения, Заключения и Выводов, трех Приложений; содержит 12 рисунков и 5 таблиц. Список литературы включает 239 названий, из которых 41 на русском языке.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Третьякова, Ирина Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Мутация 1(1)15403, вызывающая у особей дрозофилы нарушение картины синтеза БТШ после теплового шока, локализуется между дистальными точками разрыва делеций ЬЗ и Ь4.

2. Мутантный аллель 1(1^403 по признаку нарушения синтеза БТШ после теплового шока является рецессивным по отношению к нормальному аллелю данного гена.

3. Мутация 1(1)18403, влияющая при тепловом воздействии на экспрессию генов БТШ на посттранскрипционном уровне, не приводит к нарушению сплайсинга мРНК гена Шр83.

4. Клонирована последовательность ДНК Х-хромосомы Ого8орЫ1а те1аш^аз1ег, содержащая ген 1(1^8403.

5. Секвенированы фрагменты нуклеотидной последовательности ДНК в области локализации гена 1(1^403 (всего 2832 п.о.), и установлено их соответствие с опубликованными в Интернете последовательностями генома дрозофилы. Все секвенированные нами участки ДНК расположены в скэффолде 142000013386053 в интервале координат с 58403 по 68438.

6. Показано, что участку ДНК дрозофилы, в котором локализуется ген 1(1^403, соответствует два типа мРНК - размерами около 5 т.о. и около 2,5 т.о., причем кодирующие последовательности ДНК для этих мРНК перекрываются.

7. Район ДНК, в котором локализуется ген l(l)ts403, характеризуется полиморфизмом длин рестрикционных фрагментов, образуемых при гидролизе рестриктазой НтсШ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проделанной нами работы был клонирован участок ДНК дрозофилы, содержащий жизненно-важный ген 1(1)15405, и дана молекулярно-генетическая характеристика этого участка. Оказалось, что исследуемый ген консервативен в эволюции, и его ортологи известны у человека, мыши, крысы, нематоды, дрожжей. Во всех исследованных случаях продуктУгена 1(1^405 или его ортологов играют важную роль в экспорте мРНК из ядра в цитоплазму. Действительно, если у мутанта 1(1)18405 при ТШ нарушается транспорт мРНК из ядра в цитоплазму, это может стать причиной нарушения синтеза БТШ, описанного М.Б.Евгеньевым с соавторами (Евгеньев, Левин, 1980; Евгеньев, Денисенко, 1990; Еу£еп'еу е1 а1., 1979; 1985). Это позволяет дать объяснение многим фенотипическим проявлениям мутации 1(1^405, которые на протяжении многих лет исследовались на кафедре генетики и селекции СПбГУ (ЛГУ). В основном, это проявления, зависящие от функционирования системы БТШ (эффекты мутации 1(1^405 на выживаемость и плодовитость самок дрозофилы, подвергнутых ТШ).

Однако ряд эффектов мутации 1(1)18405 не представляется возможным объяснить нарушенным синтезом БТШ после теплового воздействия. Такие фенотипические проявления исследуемой мутации, как повышенная частота нерасхождения половых хромосом в мейозе у самок, подвергнутых ТШ, а также чрезвычайная теплочувствительность ранних эмбрионов, позволяют охарактеризовать мутантный аллель 1(1)18405 как аллель с приобретением новой функции . Эти признаки имеют полудоминантный характер наследования и могут передаваться потомкам, проявляя неменделевский тип наследования (Мамон и др., 1999а).

Ill

Новую информацию о функционировании исследуемого гена и о механизмах межаллельных взаимодействий может дать молекулярно-генетический анализ других мутантных аллелей локуса sbr, имеющихся в нашем распоряжении. Нами была проделана предварительная работа, позволяющая приступить к клонированию участков ДНК, содержащих эти мутантные аллели.

Поскольку ген, ортологичный гену sbr, известен у человека, а дрозофила является удобной генетической моделью для изучения генетических процессов и явлений, это открывет такие возможности для исследования функций данного гена и его мутантных аллелей у дрозофилы, которые недоступны для изучения у человека.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Третьякова, Ирина Викторовна, Санкт-Петербург

1. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура. JL: Наука, 1975. 330 с.

2. Александров В.Я. Реактивность клеток и белки. JL: Наука. 1985. 318с.

3. Евгеньев М.Б., Денисенко О.Н. Влияние fe-мутации на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение III. Синтез белков, родственных БТШ70 // Генетика. -1990. Т. 26, № 2. - С. 266-271.

4. Евгеньев М.Б., Левин A.B. Влияние ¿¿-мутации на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение 1. Анализ синтеза белков // Генетика. 1980. Т. 16, №6. С.1026-1029.

5. Жимулев И.Ф., Бгатов A.B., Фомина О.В., Крамере П.Г.Н., Ээкен Я., Похолкова Г.В. Генетические локусы в интервале ras-dsh X-хромосомы Drosophila melanogaster II Докл. АН СССР. 1980а. -Т.255, №3. - С.738-742.

6. Жимулев И.Ф., Семешин В.Ф., Кочнева Г.В., Фомина О.В., Баричева Э.М., Беляева Е.С. Цитогенетическое изучение района 9Е-10А Х-хромосомы Drosophila melanogaster. Сообщение IV.

7. Получение и характеристики хромосомных перестроек в интервале ras dsh II Генетика. - 1982.- Т.18, №4.- С.596-612.

8. Кокоза Е.Б., Козлова Т.Ю., Умбетова Г.Х., Дубровский Э.Б., Пирротта В., Жимулев И.Ф. Молекулярный и цитогенетический анализ диска 10А1-2 D. Melanogaster // Генетика. 1990. - Т. 26, № 8.-С. 1361-1369.

9. Кокоза Е.Б. Молекулярно-цитогенетическая характеристика хромомеров политенных хромосом Drosophila melanogaster. Дисс. канд. биол. наук. Новосибирск, 1994. - 190 с.

10. Куцкова Ю.А., Мамон J1.A. Время регрессии пуфов теплового шока в политенных хромосомах Drosophila melanogaster как критерий для сравнения эффекта различных стрессовых воздействий //Цитология. 1994. - Т.36, № 9/10. - С.1021-1029.

11. Куцкова Ю.А., Мамон J1.A. Последствия экстремальных воздействий на соматические клетки Drosophila melanogaster в условиях нарушенного синтеза белков теплового шока // Генетика. 1996. - Т.32, №10. - С.1406-1416.

12. Кэресс Р. Р-зависимая трансформация клеток зародышевого пути дрозофилы. Клонирование ДНК. Методы / под ред. Д. Гловера. -М.: Мир, 1988. С. 538.

13. Левин A.B., Лозовская Е.Р., Евгеньев М.Б. Влияние высокой температуры на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение II. Анализ действия te-мутации // Генетика.- 1984.- Т.20, №6.- С.949-953.

14. Лобашев М.Е. Физиологическая (паранекротическая) гипотеза мутационного процесса // Вестн. Ленингр. ун-та. 1947. - № 8.-С. 10-29.

15. Лозовская Е.Р., Левин A.B., Евгеньев М.Б. Тепловой шок у дрозофилы и регуляция активности генома // Генетика. 1982. -Т.18, N11. - С.1749-1762.

16. Мамон Л.А., Барабанова Л.В. Неслучайное распределение спонтанных и индуцированных высокой температурой рецессивных летальных мутаций в Х-хромосоме дрозофилы // Генетика. -1991. Т.27, №9. - С. 1541 -1546.

17. Мамон Л.А., Комарова A.B., Бондаренко Л.В., Барабанова Л.В., Тихомирова М.М. Формирование термотолерантности у линии Drosophila melanogaster l(l)ts403 с нарушенным синтезом белков теплового шока // Генетика. 1998. - Т.34, №7. - С.920-928.

18. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Динамика индукции и регрессии пуффов 8 7А, 87С и 93 D в политенных хромосомах дрозофилы Drosophila melanogaster при действии аноксии и высокой температуры // Цитология.- 1991.- Т.ЗЗ, №12.- С.99-105.

19. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Роль белков теплового шока в восстановлении индуцированных высокой температурой повреждений митотических хромосом у D. melanogaster II Генетика. 1993а. - Т.29, №4. - С.606-612.

20. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Роль белков теплового шока в восстановлении клеточной пролиферации после воздействия высокой температурой на личинок О. melanogaster II Генетика. -19936. Т.29, №5. - С.791-798.

21. Мамон Л.А., Никитина Е.А., Пугачева О.М., Голубкова Е.В. Влияние материнского и отцовского организмов на определяемую мутацией 1(1)18403 теплочувствительность ранних эмбрионов ОговоркПа melanogaster II Генетика. 19996. - Т.35, N8. - С.1078-1085.

22. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. 479 с.

23. Маргулис Б.А., Гужова И.В. Белки стресса в эукариотической клетке // Цитология.- 2000.-Т. 42, № 4.- С. 323-342.

24. Насонов Д.Н. Об ответной реакции живой протоплазмы на действие различных раздражителей // Уч. записки ЛГУ. 1937. -Т.П.-С.227-236.

25. Никитина Е.А. Плейотропный эффект мутации/^^ОЗ с нарушенным ответом на тепловой шок у ОгояоркИа melanogaster\ Аавтореф. Дис. . канд. биол. наук. Санкт-Петербург: СПбГУ, 1999.

26. Семешин В.Ф., Жимулев И.Ф., Беляева Е.С. Цитогенетическое изучение района 9Е-10А Х-хромосомы Drosophila melanogaster. Сообщение I. Морфология района и картирование делеций, затрагивающих диск 10А1-2 // Генетика. 1979. - Т. 15, №10. -С.1784-1792.

27. Страшнюк В.Ю., Таглина О.В., Шахбазов В.Г. Параллельные изменения пуфинга политенных хромосом и биоэлектрических свойств клеточных ядер в слюнных железах Drosophila melanogaster после теплового шока // Генетика. 1990. - Т.26, №5. -С.874-878.

28. Тихомирова М.М., Беляцкая О.Я. Репарация ДНК в оогенезе дрозофилы //Генетика. 1984. - Т.20, №11. - С. 1824-1829.

29. Тихомирова М.М. Белки теплового шока и мутагенез // Вестник ЛГУ. 1989. - Сер.З, Вып.2, №10. -С.90-94.

30. Тихомирова М.М., Ватти К.В., Мамон JI.A., Барабанова JI.B., Куцкова Ю.А. Механизмы, обеспечивающие устойчивость генетического материала клетки к стрессовым воздействиям // Генетика. 1994. - Т.30, N8. - С.1097-1104.

31. Тихомирова М.М., Мазур Е.Л., Барабанова Л.В., Мамон Л.А. Температурная модификация мутационного процесса и белки теплового шока // Генетика. 1993. - Т.29, N2. - С.280-287.

32. Третьякова И.В. Делеционное картирование мутации l(l)ts403 дрозофилы по признаку нарушения синтеза белков теплового шока // Первая всесоюзная конференция по генетике насекомых (М., 1921 ноября 1991 г.): Тез. докл. М., 1991. - С. 107.

33. Abravaya К., Myers М.Р., Murphy S.P., Morimoto R.I. The human heat shock protein hsp70 interact with HSF, the transcription factor that regulates heat shock gene expression // Genes Dev.- 1992.- V.6.1. P.1153-1164.

34. D., Ballew R.M., Basu A., Baxendale J., Bayraktaroglu L., Beasley

35. F., Gorrell J.H., Gu Z., Guan P., Harris M., Harris N.L., Harvey D., Heiman T.J., Hernandez J.R., Houck J., Hostin D., Houston K.A., Howland T.J., Wei M.H., Ibegwam C., Jalali M., Kalush F., Karpen

36. G.H., Ke Z., Kennison J.A., Ketchum K.A., Kimmel B.E., Kodira C.D., Kraft C., Kravitz S., Kulp D., Lai Z., Lasko P., Lei Y., Levitsky A.A., Li J., Li Z., Liang Y., Lin X., Liu X., Mattei В., Mcintosh T.C., McLeod

37. Aguade M., Miyashita N., Langley C.H. Restriction-map variation at the zeste-tko region in natural populations of Drosophila melanogaster I I Mol. Biol. Evol.- 1989.- V. 2, N 2.- P. 123-130.

38. Alexander D.C., McKnight T.D., Williams B.G. A simplified and efficient vector-primer cDNA cloning system // Gene. 1984. - V.31, N1-3. - P.79-89.

39. Ali A., Bharadwaj S., (JCarroll R., OvsenekN. Hsp90 interacts with and regulates the activity of heat shock factor 1 in Xenopus oocytes // Mol. Cell Biol.- 1998,- V.18, №9,- P.4949-4960.

40. Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A., Zhang J., Zhang Z., Miller W., Lipman D.J. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs // Nucleic Acids Res. 1997. - V.25, N17. - P.3389-3402.

41. Anderson K.V., Lengyell J. A. Rates of synthesis of major class of RNA in Drosophila embryos // Dev.Biol. 1979. V.70. P.217-231.

42. Anitha B., Chandra N., Gopinath P.M. and Durairaj G. Genotoxicity evaluation of heat shock in gold fish (Carassius auratus) I I Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis.- 2000.-V.469, N 1.- P.1-8.

43. Arking R. Temperature-sensitive cell-lethal mutants of Drosophila: isolation and characterization // Genetics. 1975. - V.80, N 3. - P.519-537.

44. Arrigo A.P., Fakan S., Tissieres A. Localization of the heat shock proteins in Drosophila melanogaster tissue culture cells // Dev. Biol. -1980. V.78, N 1. - P.86-103.

45. Arrigo A.P. sHsp as novel regulators of programmed cell death and tumorigenicity // Pathol Biol (Paris).- 2000.- V. 48, N 3,- P. 280-288.

46. Ashburner M., Bonner J.J. The induction of gene activity in Drosophila by heat shock // Cell.- 1979.- V. 17,- P.241-254.

47. Ashburner M. Drosophila: A Laboratory Handbook. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. pp.

48. Ashburner M. Patterns of puffing activity in salivary gland chromosomes of Drosophila. V. Responses to environmental treatment // Chromosoma. 1970. - V.31, N 3. - P.356-376.

49. Atherton D.D., Gall J. Salivary gland squashes for in situ nucleic acid hybridization studies // Dros. Inf. Serv. 1972. - Y.49. - P. 131-133.

50. Bateman A., Birney E., Durbin R., Eddy S.R., Howe K.L., Sonnhammer E.L. The Pfam Protein Families Database // Nucleic Acids Res. 2000. - V.28, N 1. - P.263-266.

51. Barabanova L., Mamon L., Bondarenko L., Komarova A., Tretyakova I. I(l)ts403 as D.melanogaster ts-meiotic mutant // Drosophila 38th annual Research Conference (Chicago, USA, April 16-20, 1997): Abstr.-Chicago.- 1997.-P. 173.

52. Bender W., Akam M., Karch F., Beachy P.A., Peifer M., Spierer P., Lewis E.B., Hogness D.S. Molecular genetics of the bithorax complex in Drosophila melanogaster I/ Science. 1983. - V.221. - P.23-29.

53. Biesinger B., Muller-Fleckenstein I., Simmer B., Lang G., Wittmann S., Platzer E., Desrosiers R.C., Fleckenstein B. Stable Growth Transformation of Human T Lymphocytes by Herpesvirus saimiri // Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. - V.89, N 7. - P.3116-3119.

54. Birnboim H.C., Doly J.N. A rapid alkaline extraction method for screening recombinant plasmid DNA // Nucl. Acids Res. 1979. - V.7, N6.-P. 1513-1523.

55. Bonner W., Laskey R.A. A film detection method for 3H.-labelled proteins and nucleic acids in polyacrylamide gels // Europ. J. Biochem. -1974. V.46,N 1. -P.83-88.

56. Bork P. Mobile modules and motifs // Curr. Opin. Struct. Biol. 1992. -V.2. P.413-421.

57. Bork P., Koonin E.V. Predicting functions from protein sequences -were are the bottlenecks? // Nature Genetics. 1998. - V.18, N 4. -P.313-318.

58. Brostrom C.O., Brostrom M.A. Regulation of translational initiation during cellular response to stress // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 1998-. V.58.- P.79-125.

59. Bullock T.L., Clarkson W.D., Kent H.M., Stewart M. The 1.6 A resolution crystal structure of nuclear transport factor 2 (NTF2) // J. Mol. Biol. 1996. - V.260, N 3. - P.422-431.

60. Bullock W.O., Fernandez J.M., Short J.M. XL 1-Blue: A high efficiency plasmid transforming recA Escherichia coli strain with beta-galactosidase selection // BioTechniques. 1987. - V.5. - P.376.

61. Burdon R.H. Thermotolerance and the heat shock proteins // Temperature and animal cells. Simposia of the Society for Experimental Biology. 1987.- № 41,- P.269-283.

62. Canagarajah B.J., Khokhlatchev A., Cobb M.H., Goldsmith E.J. Activation mechanism of the MAP kinase ERK2 by dual phosphorylation // Cell. 1997. - V.90, N 5. - P.859-869.

63. Chen F., Forres M., Duncan R.F. Activation of mitogen-activated protein kinase by heat shock treatment // Biochem J. 1995. - V.312, Part 2.-P.341-349.

64. Chernoff Y.O., Lindquist S.L., Ono B., Inge-Vechtomov S.G., Leibman S.W. Role of the chaperone protein Hspl04 in propagation of the yeast prion-like factor psi+. // Science. 1995. - V.268, N 5212. - P.880-884.

65. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. // Anal Biochem. 1987. - V.162, N1. - P.156-159.

66. Corpet F., Servant F., Gouzy J., Kahn D. ProDom and ProDom-CG: tools for protein domain analysis and whole genome comparisons // Nucleic Acids Res. 2000. - V.28, N 1. - P. 267-269.

67. Creagh E.M., Sheehan D., Cotter T.G. Heat shock proteins—modulators of apoptosis in tumour cells // Leukemia.- 2000.- V. 14, N 7.- P. 11611173.

68. Cullen B.R., Malim M.H. The HIV-1 rev protein: Prototype of a novel class of eukaryotic post-transcriptional regulators // Trends Biol. Sci. -1991.-V.16,N9.-P. 346-350.

69. Cullen B. R. Nuclear RNA export pathways // Mol. Cell. Biol.- 2000,-V. 20, N 12,-P. 4181-4187.

70. Cummings C.J., Mancini M.A., Antalfly B., DeFranco D.B., Orr H.T., Zoghbi H.Y. Chaperone suppression of aggregation and altered subcellular proteasome localization imply protein misfolding in SCA1 // Nature Genet. 1998. - V.19, N2. - P.148-154.

71. Dahlgaard J., Loeschcke V., Michalak P., Justesen J. Induced thermotolerance and associated expression of the heat-shock protein Hsp70 in adult Drosophila melanogaster II Funct. Ecol. 1998. - V.12, N 5. - P.786-793.

72. Dieckmann T., Withers-Ward E.S., Jarosinski M.A., Liu C.F., Chen I.S., Feigon, J. Structure of a human DNA repair protein UBA domain that interacts with HIV-1 Vpr // Nature Struct. Biol. 1998. - V.5, N 12. -P. 1042-1047.

73. Dower W.J., Miller J.F., Ragsdale C.W. High efficiency transformation of E. coli by high voltage electroporation. // Nucleic Acids Res. 1988. -V.16, N13. - P.6127-6145.

74. Drees B.L., Grotkopp E.K., Nelson H.C. The GCN4 leucine zipper can functionally substitute for the heat shock transcription factor's trimerization domain // J. Mol. Biol.- 1997,- V.273, №1.- P.61-74.

75. Dubrovsky E.B., Zhimulev I.F. Trans-regulation of ecdysterone-induced protein synthesis in Drosophila melanogaster salivary glands // Dev. Biol. 1988. - V.127, N 1. - P.33-44.

76. Duncan R.F., Cavener D.R., Qu S. Heat shock effects on phophorylation of protein synthesis initiation factor proteins eIF-4E and eIF-2 in Drosophila // Biochemistry. 1995. - V.34, N9. - P.2985-2997.

77. Dura J.M. Stage dependent synthesis of heat shock induced proteins in early embryos of Drosophila melanogaster II Mol. Gen. Genet. 1981. -V.184, N3. - P.381-385.

78. Dybas L.K., Harden K.K., Machnicki J.L., Geer B.W. Male fertility in Drosophila melanogaster. lesions of spermatogenesis associated with male sterile mutations of the vermilion region 11 J. exp. Zool. 1983. -V.226, N2. - P. 293-302.

79. Edgar B.A., Datar S.A. Zygotic degradation of two maternal Cdc25 mRNAs terminates Drosophila's early cell cycle program // Genes Dev. -1996. V.10, N15. - P.1966-1977.

80. Edgar B.A., Schubiger G. Parameters controlling transcriptional activation during early Drosophila development // Cell. 1986. - V.44, N6. - P.871-877.

81. Eeken J.C., Sobels F.H., Hyland V., Schalet A.P. Distribution of MR-induced sex-linked recessive lethal mutations in Drosophila melanogaster II Mutat. Res. 1985. - V.150, N 1-2. - P.261-275.

82. Engels W.R. P elements in Drosophila // Curr. Topics Microbiol. Immunol. 1996. - V.204. - P. 103-123.

83. Ephrussi B., Beadle G.B. Technique of transplantation of Drosophila // Amer. Naturalist. 1936. - V60, N 728. - P.218-225.

84. Evgerfev M.B., Levin A.V., Losovskaya E.R. The analysis of temperature-sensitive (ts) mutation influencing the expression of heat shock-inducible genes in Drosophila melanogaster II Mol. Gen. Genet. -1979.- V.176, N 2. P.275-280.

85. Evgen'ev M.B., Zatsepina O.L., Titarenco H. Autoregulation of heat-shock system in Drosophila melanogaster. Analysis of heat-shock responsce in a temperature sensitive cell lethal mutant // FEBS Lett. -1985. V.188, N2. - P.286-290.

86. Fabre E., Hurt E. Yeast genetics to dissect the nuclear pore complex and nucleocytoplasmic trafficking // Annu. Rev. Genet. 1997. - V.31. -P.277-313.

87. Fahmy O.G., Fahmy M. New mutants report // Dros. Inf. Serv. 1959.- V.33.-P.82-94.

88. FlyBase. The FlyBase database of the Drosophila genome projects and community literature // Nucleic Acids Research. 1999. - V.27, N 1.- P.85-88.

89. Frischauf A.M., Lehrach H., Poustka A., Murray N. Lambda replacement vectors carrying polylinker sequences // J. Mol. Biol. -1983. Y.170, N4. - P.827-842.

90. Gabai VL, Meriin AB, Yaglom JA, Volloch VZ, Sherman MYRole of Hsp70 in regulation of stress-kinase JNK: implications in apoptosis and aging // FEBS Lett.- 1998,- V. 438, N 1-2.- P. 1-4.

91. Gall J.D., Pardue M.L. Nucleic acid hybridization in cytological preparations // Met. Enzimol. 1971. - V.21. - P.470-480.

92. Glover D.M. Mitosis in the Drosophila embryo in and out of control // Trends Genet. - 1991. - V.7, N4. - P.125-132.

93. Grüter P., Tabernero C., von Kobbe C., Schmitt C., Saavedra C., Bachi A., Wilm M., Felber B.K., Izaurralde E. TAP, the human homolog of Mex67p, mediates CTE-dependent RNA export from the nucleus // Mol. Cell. 1998. - V.l, N 5. - P.649-659.

94. Hanahan D. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids // J. Mol. Biol. 1983. - V.166, N3. - P.557-580.

95. Hartl D.L., Nurminsky D.I., Jones R.W., Lozovskaya E.R. Genome structure and evolution in Drosophila: applications of the framework PI map // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1994.- V. 91, N 15,- P. 6824-6829 .

96. Hartl F.U. Molecular chaperones in cellular protein folding // Nature. -1996. V.381, N 6583. - P.571-579.

97. Head M.W., Goldman J.E. Small heat shock proteins, the cytoskeleton, and inclusion body formation // Neuropathol Appl Neurobiol.- 2000.- V. 26, N 4.-P. 304-312.

98. Hofmann K., Bucher P. The UBA domain: a sequence motif present in multiple enzyme classes of the ubiquitination pathway // Trends Biochem. Sci. 1996. - V.21, N 5. - P.172-173.

99. Holmgren R., Livak K., Morimoto R., Freund, R., Meselson M. Studies of cloned sequences from four Drosophila heat shock loci // Cell. 1979. - V.18, N 4. - P.1359-1370.

100. Hurt E., StraGer K., Segref A., Bailer S., Schlaich N., Presutti C., Tollervey D., Jansen R. Mex67p Mediates Nuclear Export of a Variety of RNA Polymerase II Transcripts // J. Biol. Chem. 2000- V. 275, Iss. 12.-P. 8361-8368.

101. Izaurralde E., S. Adam. Transport of macromolecules between the nucleus and the cytoplasm // RNA. 1998. - V.4, N 4. - P.351-364.

102. Jiang J.C., Gibson J.B. The alcohol dehydrogenase polymorphism in natural populations of Drosophila melanogaster: restriction map variation in the region of the Adh locus in populations from two hemispheres//Heredity.- 1992.-V. 68, Pt l.-P. 1-14.

103. Joanisse D.R., Michaud S., Inaguma Y., Tanguay R.M. Small heat shock proteins of Drosophila: Developmental expression and functions // J. Biosci., Bangalore. 1998. - V.23, N 4. - P.369-376.

104. Jolly C., Morimoto R.I. Role of the Heat Shock Response and Molecular Chaperones in Oncogenesis and Cell Death // J Natl Cancer Inst.- 2000.-V.92,N 19.-P. 1564-1572.

105. Jung J.U., Lang S.M., Jun T., Roberts T.M., Veillette A., Desrosiers R.C. Downregulation of Lck-mediated signal transduction by tip of herpesvirus saimiri // J. Virol. 1995. - V.69, N12. - P.7814-22.

106. Kang Y., Cullen B.R. The human TAP protein is a nuclear mRNA export factor that contains novel RNA-binding and nucleocytoplasmic transport sequences // Genes Dev. 1999. - V.13, N 9. - P.1126-1139.

107. Katahira J., Strasser K., Podtelejnikov A., Mann M., Jung J.U., Hurt E. The Mex67p-mediated nuclear mRNA export pathway is conserved from yeast to human // EMBO J. 1999. - V. 18, N 9. - P.2593-2609.

108. Keszenman D.J., Santos J.F., Boeira J.M., Saffi J., Henriques J.A. Heat shock changes the response of the pso3 mutant of Saccharomyces cerevisiae to 8-methoxypsoralen photoaddition // Curr Genet.- 1994.- V. 26, N2.-P. 100-104.

109. Keszenman D.J., Carmen Candreva E., Nunes E. Cellular and molecular effects of bleomycin are modulated by heat shock in Saccharomyces cerevisiae IIDNA Repair. 2000. - V.459, N 1. - P.29-41.

110. Kimmerly W., Stultz K., Lewis S., Lewis K, Lustre V., Romero R, Benke J., Sun D., Shirley G., Martin C., Palazzolo M. A PI-based Physical Map of the Drosophila Euchromatic Genome // Genome Research. 1996. - V.6, N 5. - P.414-430.

111. Kitada K., Johnson A.L., Johnston L.H., Sugino A. A multicopy suppressor gene of the Saccharomyces cerevisiae G1 cell cycle mutantgene dbf4 encodes a protein kinase and is identified as CDC5 // Mol. Cell. Biol. 1993. -V.13, N 7. - p.4445-4457.

112. Kobe B., Deisenhofer J. The leucine-rich repeat: a versatile binding motif// Trends Biochem. Sci. 1994. -V.19, N 10. - P.415-421.

113. Kobe, B., Deisenhofer, J. Proteins with leucine-rich repeats // Curr. Opin. Struct. Biol. 1995. - V.5. - P.409-416.

114. Kramers P.G.N., Schalet A.P., Paradi E., Huiser-Hoogteyling L. High proportion of multi-locus deletions among hycanthone-induced X-linked recessive lethals in Drosophila melanogaster // Mutat. Res. 1983. -V.107, N 2. - P.187-201

115. Krebs R.A., Feder M.E., Lee J. Heritability of expression of the 70KD heat-shock protein in Drosophila melanogaster and its relevance to the evolution of thermotolerance //Evolution. 1998. - V.52, N 3. - P.841-847.

116. Kroeger P.E., Morimoto R.I. The heat shock transcriptional response // Inducible gene expression.- 1995.- V.1-. P.24-61.

117. Kulp D., Haussler D., Reese M.G., Eeckman F.H. A generalized Hidden Markov Model for the recognition of human genes in DNA. // ISMB-96, St. Louis, MO, AAAI/MIT Press. 1996.

118. Kurtz S., Ross J.J., Petko L., Lindquist S. An ancient developmental induction: Heat shock proteins induced in sporulation and cogenesis // Science.- 1985.-V. 231.-P. 1154.

119. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. - V.227, N 259. - P.680-685.

120. Langley C.H., Aquadro C.F. Restriction-map variation in natural populations of Drosophila melanogaster: white-locus region.// Mol Biol Evol .-1987.- V. 4, N 6.- P.651-663 .

121. Lefevre G.Jr. Salivary chromosome bands and the frequency of crossingover in Drosophila melanogaster II Genetics. 1971. - V.67, N 4.-P.497-513.

122. Legrain, P., Rosbash, M. Some cis- and trans-acting mutants for splicing target pre-mRNA to the cytoplasm // Cell .-1989. V. 57, N 4.-P. 573-583.

123. Lindquist S. Varying patterns of protein synthesis in Drosophila during heat shock: implications for regulation // Dev Biol.- 1980.- V. 77.- N 2.-P. 463-479.

124. Lindquist S. The heat response // Ann. Rev. Biochem. 1986. - V.55. -P.1151-1191.

125. Lindsley D.L., Grell E.H. Genetic variations of Drosophila melanogaster. Pubis Carnegie Instn., 1968. 627. 469pp.

126. Lindsley, D.L., Zimm, G.G. The Genome of Drosophila melanogaster. Academic Press, 1992. 1133pp.

127. Lis J.T., Simon J.A., Sutton C.A. New heat shock puffs and beta-galactosidase activity resulting from transformation of Drosophila with an hsp70-lacZ hybrid gene // Cell. 1983. - V.35, N 2. - P.403-410.

128. Lund T., Medveczky M.M., Geek P., Medveczky P.G. A herpesvirus saimiri protein required for interleukin-2 independence is associated with membranes "of transformed T cells // Cell. 1992. - V.70, N4. -P.585-593.

129. Lund T., Medveczky M.M., Neame P.J., Medveczky P.G. A herpesvirus saimiri membrane protein required for interleukin-2 independence forms a stable complex with p561ck // J. Virol. 1996. -V.70, N1. - P.600-606.

130. Lund T.C., Prator P.C., Medveczky M.M., Medveczky P.G. The Lck binding domain of herpesvirus saimiri tip-484 constitutively activates Lck and STAT3 in T cells // J. Virol. 1999. - V.73, N2. - P. 1689-1694

131. Mamon L.A., Nikitina E.A. The period of maximum sensitivity to heat shock during the ontogenesis of Drosophila melanogaster l(l)ts403 mutant // 15th European Drosophila Res. Conf. (Varna, Bulgaria, September 22 26, 1997): Abstr.- Varna.- 1997.- P.69.

132. Melendez L.V., Hunt R.D., Daniel M.D., Blake B.J., Garcia F.G. Acute lymphocytic leukemia in owl monkeys inoculated with herpesvirus saimiri // Science. 1971. - V. 171, N 976. - P. 1161 -1163.

133. Meyer M.P., Bukau B. Molecular chaperones: the busy life of Hsp90 // Curr Biol.- 1999.- V. 9, N 9.-R322-325.

134. Milanesi L., Muselli M., Arrigo P. Hamming Clustering method for signals prediction in 5' and 3' regions of eukaryotic genes // Comput. Applic. Biosci. 1996. - V. 12, N5. - P.399-404.

135. Mirkes P.E. Molecular/cellular biology of the heat stress response and its role in agent-induced teratogenesis // Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 1997. - V.396, N 1-2. - P.163-173.

136. Mitchel R.E., Morrison D.P. Heat-shock induction of ionizing radiation resistance in Saccharomyces cerevisiae. Transient changes in growth cycle distribution and recombinational ability // Radiat Res. -1982.- V. 92, N1,- P. 182-187.

137. Mitchel R.E., Morrison D.P. Heat-shock induction of ultraviolet light resistance in Saccharomyces cerevisiae // Radiat Res.- 1983.- V. 96.-N l.-P. 95-99.

138. Miyashita N., Langley C.H. Molecular and phenotypic variation of the white locus region in Drosophila melanogaster II Genetics. 1988.-V. 120,N l.-P. 199-212

139. Miyashita N.T., Langley C.H. Restriction map polymorphism in the forked and vermilion regions of Drosophila melanogaster II Jpn J Genet.- 1994.-V. 69, N 3,- P. 297-305.

140. Molina T.J., Kishihara K., Siderovski D.P., van Ewijk W., Narendran A., Timms E., Wakeham A., Paige C.J., Hartmann K.U., Veillette A. Profound block in thymocyte development in mice lacking p561ck // Nature. 1992. - V.357, N 6374. - P.161-164.

141. Morimoto R.I., Kline M.P., Bimston D.N., Cotto J.J. The heat-shock response: regulation and function of heat-shock proteins and molecular chaperones // Essays Biochem. -1997.- V. 32.- P. 17-29.

142. Morrow G., Inaguma Y., Kato K., Tanguay R.M. The small heat shock protein hsp22 of Drosophila melanogaster is a mitochondrial protein displaying oligomeric organization // J. Biol. Chem. 2000. - V.275, N.40. - P.31204-31210.

143. Nadeau K., Das A., Walsh C.T. Hsp90 chaperonins posses ATPase activity and bind heat shock transcription factor and peptidyl prolyl isomerase // J. Biol. Chem.- 1993.- V.268, №2.- P. 1479.

144. Nigg E.A. Nucleocytoplasmic transport: signals, mechanisms and regulation //Nature. 1997. - Y.386, N 6627. -P.779-787.

145. Ohtsuka K, Suzuki T.Roles of molecular chaperones in the nervous system // Brain Res Bull.- 2000.- V. 53, N 2.- P. 141-146.

146. Orosz A., Wisniewski J., Wu C. Regulation of Drosophila heat shock factor trimerization: global sequence requirements and independence of nuclear localization //Mol Cell Biol. -1996.- N 12.- P. 7018-7030.

147. Pelham H.R.B. Hsp70 accelerates the recovery of nucleolar morphology after heat shock // EMBO J. 1984. - V.3, N 13. - P.3095-3100.

148. Pennisi E. Heat shock protein mutes genetic changes // Science. -1998. V.282,N5395.-P.1796.

149. Pierce J.C., Sauer B., Sternberg N. A positive selection vector for cloning high molecular weight DNA by the bacteriophage PI system: improved cloning efficacy // Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. - V.89, N6. -P.2056-2060.

150. Prestridge D.S. Predicting Pol II Promoter Sequences Using Transcription Factor Binding Sites // J. Mol. Biol. 1995. - Y.249, N 5. -P.923-932.

151. Protopopov M.O., Belyaeva E.S., Tretyakova I.V., Zhimulev I.F. Molecular map of the 2B region of Drosophila melanogaster X chromosome // Dros. Inf. Serv. 1991. - V.70. - P. 182-184.

152. Purnelle, B., Comblez, S., Coster, F., Naveau F., Goffeau A. 1996. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Search&db=::Nucle otide&doptcmdl=GenBank&tool=FlyBase&term=Z8103 5 ACCN.).

153. Rattner J.B. Hsp70 is localized to the centrosome of dividing HeLa cells // Exptl. Cell Res. 1991. - V. 195, N1. - P. 110-113.

154. Reese M.G., Eeckman F.H. Novel Neural Network Algorithms for Improved Eukaryotic Promoter Site Recognition // Accepted talk for The seventh international Genome sequencing and analysis conference,

155. Hyatt Regency, Hilton Head Island, South Carolina. 1995. September 16-20.

156. Reese M.G., Eeckman F.H., Kulp D., Haussler D. Improved splice site detection in Genie // Proceedings of the First Annual International Conference on Computational Molecular Biology (RECOMB). 1997. Santa Fe, NM, ACM Press, New York.

157. Roti Roti J.L., Turkel N. Heat-induced changes in nuclear-assotiated proteins in normal and thermotolerant He-La cells // Radiat. Res. 1994. - V.139, N 1. - P.73-81.

158. Rubin G.M., Spradling A.C. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors // Science. 1982. - V.218. - P.348-353.

159. Rubin G.M., Spradling A.C. Vectors for P element-mediated gene transfer in Drosophila // Nucleic Acids Res. 1983. - V.l 1, N18. -P.6341-6351.

160. Rutherford S.L., Lindquist S. Hsp90 as a capacitor for morphological evolution // Nature. 1998. - V.396, N 6709. - P.336-342.

161. Sakamoto K., Urushidani T., Nagao T. Translokation of hsp27 to cytoskeleton by repetitive hypoxia reoxygenation in the rat myoblast cell line H9c2 II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V.251, N2. -P.576-579.

162. Samali A., Cotter T.G. Heat shock proteins increase resistance to apoptosis //Exp. Cell Res.- 1996.- V.223, №1.- P.163-170.

163. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual 2nd ed // Cold Spring Harbor laboratory Press. - 1989.

164. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. 1977. - V.74, N12. -P.5463-5467.

165. Santoro M.G. Heat shock factors and the control of the stress response // Biochem. Pharmacol.- 2000.- V. 59, N 1.- P.55-63.

166. Santos-Rosa H., Moreno H., Simos G., Segref A., Fahrenkrog B., Pante N., Hurt E. Nuclear mRNA export requires complex formation between Mex67p and Mtr2p at the nuclear pores // Mol. Cell. Biol. -1998. V.18, N 11. - P.6826-6838.

167. Schalet A.P. The distribution of and complementation relationships between spontaneous X-linked recessive lethal mutations recovered from crossing long-term laboratory stocks of Drosophila melanogaster II Mutat. Res. 1986. - V. 163. - P. 115-144.

168. Schlesinger M.J. Heat shock proteins: the search for the functions // J.Cell Biol. 1986. V.103. P.321-325.

169. Sefton B.M., Campbell M.A. The role of tyrosine protein phosphorylation in lymphocyte activation // Annu. Rev. Cell. Biol. -1991. -V.7. P.257-274.

170. Segref A., Sharma K., Doye V., Hellwig A., Huber J., Luhrmann R., Hurt E. Mex67p, a novel factor for nuclear mRNA export, binds to both poly(A)+ RNA and nuclear pores // EMBO J. 1997. - V. 16, N 11. -P.3256-3271.

171. Shi Y., Mosser D.D., Morimoto R.I. Molecular chaperones as HSF1-specific transcriptional repressors // Genes Dev.- 1998,- V. 12, N 5.- P. 654-666.

172. Short J.M., Fernandes J.M., Sorge J.A., Huse W.D. X ZAP: A bacteriophage X expression vector with in vivo excision properties // Nucleic Acids Res. 1988. - V.16, N15. - P.7583-7600.

173. Smith D.F., Whitesell L., Katsanis E. Molecular chaperones: biology and prospects for pharmacological intervention // Pharmacol Rev.-1998.-V 50, N4.- P. 493-514.

174. Smoller D.A., Petrov D., Hartl D.L. Characterization of bacteriophage PI library containing inserts of Drosophila DNA of 75-100 kilobase pairs // Chromosoma. 1991. - V. 100, N8. - P.487-494.

175. Sorger P.K. Heat shock factor and the heat shock response // Cell. -1991.-V. 65, N3.- P. 363-366.

176. Spradling A., Pardue M.L., Penman S. Messenger RNA in heat shocked Drosophila cells // J. Mol. Biol. 1977. - V.109, N 4. - P.559-587.

177. Spradling A.C. P-element mediated transformation // Drosophila, A practical Approach / Ed Roberts D.B. Oxford: IRL Press, 1986. P. 175197.

178. Spradling A.C., Rubin G.M. Transposition of cloned P-elements into Drosophila germ line chromosomes // Science. 1982. - V.218, N 4570. - P.341-347.

179. Sternberg N. Bacteriophage PI cloning system for the isolation, amplification, and recovery of DNA fragments as large as 100 kilobase pairs //Proc. Natl. Acad. Sei. 1990. - V.87, N 1. - P.103-107.

180. Strasser K., Hurt E. Yralp, a conserved nuclear RNA-binding protein, interacts directly with Mex67p and is required for mRNA export // EMBO J. 2000. - V. 19, N 3. - P.410-420.

181. Straus D.B., Weiss A. Genetic evidence for the involvement of the lck tyrosine kinase in signal transduction through the T cell antigen receptor // J. Virol. 1995. - V.69, N7. - P.4495-4499.

182. Stutz F., Rosbash M. Nuclear RNA export // Genes and Dev. 1998. -V.12, N 21. - P. 3303-3319.

183. Suyama M., Doerks T., Braun I.C., Sattler M., Izaurralde E., Bork P. Prediction of structural domains of TAP reveals details of its interaction with pi5 and nucleoporins // EMBO Reports. 2000. - V.l, N1. - P.53-58.

184. Taketo A. DNA transfection of Escherichia coli by electroporation // Biochim. Biophys. Acta. 1988. - V.949, N3. - P.318-324.

185. Tang H., Wong-Staal F. Specific interaction between RNA helicase A and TAP, two cellular proteins that bind to the Constitutive Transport Element of type D retrovirus // J. Biol. Chem. 2000. - V.275, N42. -P.32694-32700.

186. Tanguay R.M. Transcriptional activation of heat shock genes in eukaryotes // Biochem Cell Biol. 1988. V.66, N 6. P.584-593.

187. Tanguay R.M., Joanisse D.R., Inaguma Y., Michaud S. Heat shock proteins: In search of functions during development // J. exp. Bot.1998. V.49. - P.78.

188. Tannoch V.J., Cormier-Regard S. and Claycomb W.C. GenBank/EMBL/DDB J AF093139. 1998:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Search&db=Nucle otide&doptcmdl=GenBank&tool=FlyBase&term=AF093139ACCN.).

189. Tannoch V.J., Cormier-Regard S., Claycomb W.C. GenBank/EMBL/DDB J AF093140. 1998 :http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Search&db=Nucle otide&doptcmdl=GenBank&tool=FlyBase&term=AF093140ACCN.).

190. Tatar, M. Evolution of senescence: longevity and the expression of heat shock proteins // Am. Zool.- 1999. V.39, N 6. - P.920-927.

191. Tatusova T.A., Madden T. L. Blast 2 sequences a new tool for comparing protein and nucleotide sequences // FEMS Microbiol. Lett.1999. 174, N 2. - P.247-250.

192. The C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology // Science. -1998. V.282, N 5396. - P.2012-2018.

193. Thomas P.S. Hybridization of denatured RNA and small DNA fragments transferred to nitrocellulose. // Proc Natl Acad Sei U S A. -1980,- V.77, N 9,- P.:5201-5205.

194. Thummel C., Pirrotta V. Technical Notes: NewpCaSpeR P-element vectors//D. I. N. -1991.-V.2.http://flybase.bio.indiana.edu/docs/news/DIN/dinvol2.txt)

195. Thummel C., Pirrotta V. Technical notes: newpCasper P-element vectors // Dros. Inf. Serv. 1992. - V.71. - P. 150.

196. Tissieres A., Mitchell H.K., Tracy U.M. Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melanogaster: Relation to chromosome puffs // J. Mol. Biol. 1974. - V.85, N3. - P.389-398.

197. Velazques J.M., DiDomenico B.J., Lindquist S. Intracellular localization of heat shock proteins in Drosophila // Cell. 1980. - V.20, N3. - P.679-689.

198. Vogelstein B., Gillespie D. Preparative and analytical purification of DNA from agarose // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1979. -V.76, N2. -P.615-619.

199. Wang Z, Lindquist S. Developmentally regulated nuclear transport of transcription factors in Drosophila embryos enable the heat shock response // Development. 1998. - V.125, N23. - P.4841-4850.

200. Weigl E., Kopecek P., Raska M., Hradilova S. Heat shock proteins in immune reactions // Folia Microbiol (Praha).- 1999.- V. 44, N 5.- P. :561-566.

201. Wilkie G.S., 1999 Drosophila melanogaster mRNA for tip associating protein (sbr gene). GenBank/EMBL/DDBJ 1999.12.21 :AJ251947 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Search&db—Nucle otide&doptcmdl=GenBank&tool=FlyBase&term=AJ251947ACCN. ).

202. Wood W.B. Host specificity of DNA produced by Escherichia coli: Bacterial mutations affected the restriction and modification of DNA // J. Mol. Biol. 1966. - Y.16. - P.118.

203. Wosser D.D., Duchaine J., Massie B. The DNA-binding activity of the human heat shock transcriptional factor is regulated in vivo by hsp70 // Mol. Cell Biol.- 1993,- V.13, №9,- P.5427-5438.

204. Xiao H., Lis J.T. Germline transformation used to define key features of the heat shock response element // Science.- 1988.- V.239.- P. 11391142.

205. Yanase S., Hartman P. S., Ito A., Ishii N. Oxidative stress pretreatment increases the X-radiation resistance of the nematode Caenorhabditis elegans 11 Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 1999. - V.426, N 1. - P.31-39.

206. Yanisch-Perron C., Vieira J., Messing J. Improved M13 phage cloning vectors and host strains: Nucleotide sequences of the M13mpl8 and pUC19 vectors//Gene. 1985.-V.33,N1. -P.103-119.

207. Yoon D.W., Lee H., Seol W., DeMaria M., Rosenzweig M., Jung J.U. Tap: a novel cellular protein that interacts with tip of herpesvirus saimiri and induces lymphocyte aggregation // Immunity. 1997. - V.6, N5.1. P.571-582.

208. Zalokar M. Autoradiographic study of protein and RNA formation during early development of Drosophila eggs // Dev. Biol. 1976. -V.49, N2. - P.425-437.

209. Zalokar M., Erk I. Division and migration of nuclei during early embryogenesis of Drosophila melanogaster II J. Microscopie Biol.Cell. -1976.-V.25.-P.97-106.

210. Zasloff M. tRNA transport from the nucleus in a eukaryotic cell: Carrier-mediated translocation process // Proc. Natl. Acad. Sci. 1983. -V.80, N 21.- P.6436-6440.

211. Zhimulev I.F., Ilyina O.V. Localization and some characteristics of sbr in D. melanogaster II Dros. Inf. Serv. 1980. - V.55. - P. 146.

212. Zimmerman, J.L., Petri, W., Meselson, M. Accumulation of a specific subset of Drosophila melanogaster heat shock mRNAs in normal140development without heat shock // Cell. 1983. - V.32, N 4. - P. 11611170.

213. Zou J., Guo Y., Guettouche T., Smith D.F., Voelmy R. Repression of heat shock transcription factor HSF1 activation by Hsp90 (Hsp90 complex) that forms a stress-sensitive complex with HSF1 // Cell.-1998,- V.94, №4.- P.471-480.