Механизмы действия арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки

Яковлева, Ольга Владиславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы действия арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы действия арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки"

На правах рукописи

О/

Яковлева Олы а Владиславовна и0305404б

МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ ЛРЛХИДОНОВОЙ КИСЛО ! Ы мл П-.КП'ЦИЮ МНДИАТОРЛ И ИОННЫ1ГГОКИ ДВИГАТЕЛЬНОГО

пкрвно! о окончания лягушки

03.00.13 — физиоло! ия

Л В Г О Р К С|> К 1> л г

дпссеришии на соискание ученой сюнсии кандидат биоло) ичсских наук

казань-2007

003054046

Рабоо выполнена на кафедре физиологии человека и живошых государственного образовательного учреждения высшего профессиональною образования Казанского юсударствснлого универсиIс 1а им. В И. Ульянова-Ленина.

Научный руководитель:

кандидат биологических паук, доцеиI Сигдикова Гузель Фариювпа

Официальные оиноненты:

док юр биологических наук, Ьухарасва Элл я Лхмсншна

док юр медицинских наук, профессор Волков Нвгений Михайлович

Ведущий ор!анизации -Московский государе I венный универси 1С1 им. М.В. Ломоносова, г. Москва.

212Ю78.

кандидаI а биологических наук по специальное 1 ям: 03.00.13 - фишолотя при ГО У ШК) 1ашрском юсударс!венном гуманишрпо-педаго! ическом универси гете (42002 I,1. Казань, ул. I а I аре гаи, д.2)

Панина «км он гея Л 2007 1. часов на заседании

диссер1ациоп||ого совета Д 212:078.02 но присуждению ученой с(епспи

С диссер1ацией можно ознакомился в научной библио1еке ГО У НПО I ¡царскою юсударепзенпою Iумани 1арпо-педа101 ичсско! о универси1с1а по адресу: г. Казань, ул. I а!арс1ап, д. 2

Авюрсфера! разослан " - 2007..

Ученый секрсчарь днссер I анион11 о I о Сове I а док юр медицинских наук, —

профессор ' *" Зефиров Т.Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Изучение механизмов действия внутриклеточных посредников является актуальной задачей нейрофизиологии. Арахидоновая кислота и ее метаболиты относятся к одной из систем вторичных посредников, которые опосредуют эффекты нейромедиаторов и гормонов, играют важную роль в воспалительных процессах и нейродегенеративных заболеваниях (Katsuki et al., 1995; Brash, 2001; Крутецкая и др., 2003; Bazan, 2003; Strokin et al., 2003). Образование арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов происходит с помощью фосфолипазы А2 при активации метаботропных рецепторов, таких как P2Y пуриновые рецепторы в двигательном нервном окончании (Grishin et al., 2005) и астроцитах (Bruner, Murphy, 1993), М( мускариновые рецепторы в верхнем шейном ганглии крысы (Liu, Rittenhouse, 2003). Одним из факторов, приводящих к активации фосфолипазы А2, является увеличение внутриклеточной концентрации ионов Са2+ (Katsuki et al., 1995) Показано также, что эффекты перекиси водорода в гладких мышцах опосредуются эндогенным образованием арахидоновой кислоты (Barlow et al., 2000). В центральной нервной системе арахидоновая кислота участвует в регуляции секреции медиатора, в поддержании долговременной потенциации в гиппокампе, в модуляции активности ионных каналов (Meves, 1994, Katsuki et al., 1995; Piomelli, 1996; Evans et al., 1999; Nishizaki et al., 1999; Izumi et al, 2000; Liu et ai., 2001; Chen et al., 2002).

Эффекты арахидоновой и других жирных кислот разделяют на прямые и опосредованные. К прямым эффектам относят непосредственное взаимодействие молекулы арахидоновой кислоты с белковыми комплексами ионных каналов или их липидным окружением, белками экзо- и эндоцитоза и другими сигнальными белками (Ordway et al., 1991; Fraser et al., 1997; Denson et al., 2000). Опосредованное влияние связано с метаболизмом арахидоновой кислоты по циклооксигеназному, липоксигеназному и эпоксигеназному (цитохром Р450-зависимому) путям (Meves, 1994; Katsuki et al., 1995). В нервно-мышечных синапсах холоднокровных и теплокровных животных арахидоновая кислота и ее метаболиты проявляли ингибиторное действие на высвобождение медиатора (Madden, Van der Kloot, 1985; Tsurusaki et al., 1987; Edwards et al., 1990, Grishin et al., 2005). Однако, невыяснены механизмы пресинаптического действия арахидоновой кислоты. Неясно оказывает ли арахидоновая кислота собственные эффекты на секрецию медиатора или они опосредованы ее метаболитами? Простагландины - метаболиты арахидоновой кислоты по циклооксигеназному пути, снижают спонтанную секрецию медиатора чз двигательных нервных окончаний (Illes et al., 1977; Tsurusaki, 1987), однако, механизмы действия простагландинов на нервно-мышечную передачу не изучены.

Исследования последних лет свидетельствуют о ключевой роли эндогенных жирных кислот в процессах экзо- и эндоцитоза синаптическ га везикул (ЯоЬгЬсищЬ, ВгоасКе, 2005; 21ттегЬе^, СЬетотогсПк, 2005; Ong ег а1., 2006), о чем свидетельствуют и эффекты токсинов, обладающих фосфолипазной активностью, на везикулярный цикл (Ш§от е1 а1., 2005; ЯоввеКо е1 а!., 2006; СЬегпотогсНк е1 а1, 2006). Поэтому актуальным является анализ влияния арахидоновой кислоты на процессы рециклизации синаптических везикул.

Цель и задачи исследования.

Целью данного исследования явилось выявление механизмов, лежащих в основе действия арахидоновой кислоты в нервно-мышечном синапсе лягушки.

В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эффекты арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки.

2. Выявить возможность тонического образования арахидоновой кислоты в нервно-мышечном синапсе лягушки с использованием блокаторов фосфолипазы Аг

3. Исследовать роль циклооксигеназного и липоксигеназного путей метаболизма в эффектах арахидоновой кислоты.

4. Сравнить эффекты насыщенных арахиновой и миристиновой и ненасыщенных олеиновой и арахидоновой жирных кислот на секрецию медиатора и калиевые токи двигательного нервного окончания.

5. Исследовать эффекты неметаболизируемого аналога арахидоновой кислоты - 5,8,11,14-эйкозатетрайноевой кислоты (ЕТУА) - на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания.

6. Оценить влияние экзогенной и эндогенной арахидоновой кислоты и насыщенной арахиновой кислоты на процессы экзо- и эндоцитоза синаптических везикул с использованием флуоресцентной микроскопии.

Положения, выносимые на защиту:

1. В нервно-мышечном синапсе лягушки арахидоновая кислота снижает вызванное освобождение медиатора, действуя на пресинаптическом уровне и этот эффект опосредуются метаболитом по циклооксигеназному пути -простагландином Е2.

2. Арахидоновая кислота оказывает прямые эффекты на потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые токи, действуя непосредственно на соответствующие каналы нервного окончания.

3. Эндогенная арахидоновая кислота замедляет процессы эндоцитоза синаптических везикул в двигательном нервном окончании.

Научная новизна. В работе проведено впервые проведено комплексное исследование механизмов действия арахидоновой кислоты в нервно-мышечном соединении холоднокровных. Впервые показано, что арахидоновая кислота снижает вызванное освобождение медиатора и этот эффект

опосредуются метаболитом по циклооксигеназному пути - простагландином Ег- Впервые показано, что арахидоновая кислота и простагландин Е2 снижают кальциевые токи нервного окончания.

Выявление механизмов действия арахидоновой кислоты на ионные токи нервного окончания показало, что она способна напрямую угнетать потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые токи. Это действие арахидоновой кислоты не имитировалось ни детергентом, ни насыщенными жирными кислотами, а наблюдалось лишь под действием ненасыщенных кислот. Впервые показан тот факт, что эндогенная и экзогенная арахидоновая кислота замедляет процессы эндоцитоза синаптических везикул.

Научно-практическая ценность работы. Исследование имеет теоретическое значение, так как полученные экспериментальные данные позволяют ближе подойти к пониманию физиологической роли арахидоновой кислоты в нервно-мышечном синапсе лягушки. Более глубокое понимание механизмов, регулирующих процессы секреции медиатора, может полнее объяснить механизмы лежащие в основе памяти, поведения, научения, нейродегенеративных заболеваний и т.п. Вскрытие механизмов регуляции экзо- и эндоцитоза дает возможность управления этими процессами, что позволяет разрабатывать методы борьбы с проникновением вирусов, эффективного поступления лекарственных препаратов, лечения ряда нейродегенеративных заболеваний. Результаты исследования представляют практическую ценность для физиологов, биофизиков, биохимиков, фармакологов и нейрохимиков при изучении влияния нейромодуляторов, систем вторичных посредников на синаптическую передачу и двигательный аппарат. Полученные данные используются при чтении лекций на кафедре физиологии человека и животных Казанского государственного университета. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ (02-04-48822,0304-96252, 05-04-48428, 06-04-49125); грантов «Ведущая научная школа» (НШ-1383.2003.4, НШ-4520.2006.4, гос. контракт № 02.445.11.7351); грантов АН РТ (03.3.10-222/2003, 03.3.8-343/2005-2006); фантов АН РТ для молодых ученых (14-7/2005, 12-9/2006); гранта СПбГУ для аспирантов (СПГА № 04-2.12-546).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на следующих конференциях и форумах: Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2002), Всероссийском научном симпозиуме «Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке» (Казань, 2002, 2004, 2006), конференции молодых ученых "Биология - наука 21-го века" (Пущино, 2003, 2005), Международной конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности (Москва, 2003), Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2003, 2005), Международной конференции «Медиаторы в формировании нейрональных сетей» (Ля Сиота, Франция, 2003), XIX Съезде физиологов России (Екатеринбург, 2004), V

Съезде физиологов Сибири (Томск, 2005), Международной школе-конференции IBRO «Рецепторы, каналы, мессенджеры» (Ялта, 2004), I Съезде физиологов СНГ (Дагомыс, 2005), I Съезде биофизиков России (Воронеж, 2005), IX школе по нейробиологии (Казань, 2005), Международной школе-конференции «Простые нервные системы» (Казань, 2006), Всероссийской конференции «Нейрохимия: Фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), Всероссийской конференции «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС» (Пенза, 2006), ежегодных научных конференциях в Казанском государственном университете.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 печатных работ.

Структура и объем работы. Диссертация объемом 152 страниц машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов исследования, выводов и списка цитируемой литературы, включающей 247 источников, из которых 32 отечественных и 215 иностранных. Диссертация содержит 36 рисунков и 6 таблиц.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проводили на изолированных нервно-мышечных препаратах кожно-грудинной и портняжной мышц лягушек Rana ridibunda в осенне-зимний период. Все эксперименты выполнены в условиях постоянной перфузии препарата раствором Рингера для холоднокровных животных (в мМ): NaCl - 118.0; КС1 - 2.5; СаСЬ - 1.8; NaHCOj - 2.4 (t - 20°С, рН - 7.2-7.4). Для устранения сокращения мышц использовали раствор Рингера с пониженным содержанием ионов Са2+ (0.2-0,4 мМ) и добавлением ионов Mg' (2-4 мМ). В ряде экспериментов для этих целей применяли стандартный раствор Рингера с добавлением d-тубокурарина (0.03 мМ). Для выявления Са2+-активируемых ЬС-токов использовали блокатор потенциалзависимых К+-каналов - 4-аминопиридин (0.15 мМ). Для регистрации Са2+-токов использовали стандартный раствор Рингера, содержащий (в мМ): 4-аминопиридин - 0.1; тетраэтиламмоний - 0.25. В экспериментах использовали следующие фармакологические препараты фирмы Sigma: арахидоновая, арахиновгя, олеиновая, миристиновая жирные кислоты, аристолеховая кислота и палметилтрифлуорокетон - блокаторы фосфолипазы Аз, индометацин -блокатор циклооксигеназ, простагландин Ei (ПГЕ2) - метаболит арахидоновой кислоты (АК) по циклооксигеназному пути, деоксихолат - детергент, 2-(1-thienyl)ethyÍ3,4-dihydroxybenzy idenecyanoaceta (THEDIA) - блокатор 5,12,15-липоксигеназ, 5,8,11,14-eicosatetraynoic acid (ETYA) - неметаболизируемый аналог АК. Нерастворимые в воде вещества растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) (Sigma) в бескислородной среде. Концентрация DMSO в используемых растворах не превышала 0.01%. Указанная концентрация DMSO

не оказывала влияния на освобождение медиатора или ответ нервного окончания (НО) в контрольных экспериментах (Архипова и др., 2005).

Раздражение двигательного нерва производили прямоугольными электрическими импульсами сверхпороговой амплитуды длительностью 0.20.3 мс с частотой 0.2-0.4 имп/с или пачками ритмических стимулов (500 раздражений) с частотой 10 или 50 имп/с. Регистрацию биопотенциалов производили с помощью микроэлектродов. С помощью внеклеточного отведения регистрировали трехфазные ответы НО и следующие за ними токи концевой пластинки (ТКП). Для выявления Са2+-токов НО использовали метод периневрального отведения. Миниатюрные ТКП (МТКП) регистрировали внутриклеточными электродами в стандартном растворе Рингера. Для анализа и последующей обработки параметров сигналов использовали автоматизированную систему, созданную на базе АЦП L-CARD-1250 и Pentium-Ill с использованием оригинальной программы «Ritm» (автор программы - Т.В Лайков). Для статистической обработки экспериментальных данных использовали параметрический t-критерий Стьюдента.

Для анализа влияния АК на процессы экзо- и эндоцитоза использовали флуоресцентный маркер - FM 1-43 (SynaptoGreen, Biotium, 6 мкМ). Маркер обратимо связывается с пресинаптической мембраной и в процессе эндоцитоза оказывается внутри вновь образующихся синаптических везикул («загружается» в НО). При успешной загрузке вдоль НО наблюдаются светящиеся пятна, являющиеся кластерами везикул, прошедших ци\л эндоцитоза (Betz et al., 1992, Зефиров и др., 2003). Флуоресценцию наблюдали с помощью универсального микроскопа МИКМЕД-2 (ЛОМО, Санкг-Петербург). В дальнейшем с использованием компьютерных программ определяли среднее значение свечения всех пикселей пятна (в относительных единицах) (Зефиров и др., 2003)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Эффекты АК на спонтанную и вызванную секрецию ацетнлхолина и ионные токи двигательного НО

Добавление АК (5 мкМ) в перфузируемый раствор ([Са2+]у=0 2-0.4 мМ) при одиночной стимуляции нерва приводило к обратимому снижению квантового состава ТКП до 58.1±4.8% (п=6, р<0.05) к 30 минуте эксперимента (Рис. 1А, табл. 1). При этом АК (10 мкМ) снижала частоту МТКП, не изменяя их амплитудно-временных параметров1'. Под действием АК (5 мкМ) происходило снижение амплитуды 3-ей фазы ответа НО до 73.6±5.3% (п=5, р<0.05) (Рис. 1Б, табл. 1). Известно, что в условиях низкой концентрации ионов Са2+ в растворе 3 фаза ответа НО отражает в основном выходящие К^-токи через потенциалзависимые К~-каналы (Зефиров, Халилов, 1987), значит, АК

- Исследование Са2*-тока и МТКП выполнено совместно со ст препода ватеюм кафедры нормальной физиологии КГМУ. к б н С Н Гришиным

Таблица 1

Структура, используемые концентрации и эффекты жирных кислот на секрецию медиатора и К+-токи ____двигательного нервного окончания

Жирны« кислоты Концентрация, мкМ Квантовый состав ТКП, % Амплитуда 3 фазы ответа НО [Са2+1о=0.4мМ, % Амплитуда 3 фазы ответа НО ГСа2+]о=1.8мМ, % 11

Арахидоновая (С20:4) VVWWWS=AAcooh 5 10 20 50 58.0±4.8* 56.9±3.2* 56.9±2.9* 55.6±4.9* 73.6±5.3' 73.1±4.Г 73.5±3.4* 72.5±5.5* 60.4±2.5* 5 5 5 4

Олеиновая (С 18:1) W\A/=VSAA/C00H 5 10 20 53.5±5.9* 55.2±7.9* 77.7±6.Г 85.9±2.2" 84.8±2.5* 90.7±6.1 80.0±2.3* 5 5 4

Арахиновая (С20:0) WWWWNAcooh 5 10 20 55.5±4.5" 63.2±5.2* 64.0±5.2* 89.1±5.1 91.5±4.1 98.6±2.1 98.4±3.2 4 5 4

Миристиновая (С 14:0) ЧЛЛАЛЛЛсоон 5 10 20 67.8±5.9' 53.5±5.9* 58.1±3.3* 93.2±16.2 88.4±14.7 75.8±21.8 94.8±7.1 4 5 4

Примечание. Даны средние значения ± стандартные ошибки;, п- количество экспериментов; - р < 0.05

100

sc (-

80-

5 60-

30 40 Время, мин

показан

[Са2+]0=0.2-0.4 „2+1 _

Рис. 1. Влияние арахидоновой кислоты на вызванную секрецию медиатора и амплитуду 3-ей фазы ответа нервного окончания.

А - изменение квантового состава токов концевой пластинки при действии арахидоновой кислоты (50 мкМ); Б - усредненные ответы нервного окончания (30 реализаций) в норме и при действии арахидоновой кислоты (50 мкМ) (стрелками эффект). 1 - потенциалзависимые К+-токи, внеклеточное отведение, мМ, 2 - Са~+-активируемые К+-токи, внеклеточное отведение, [Са'!+]о=1.8 мМ, 4-аминопирндин 0.1 мМ; 3 - Са2+-токи, периневральное отведение, [Са2+]о=1.8 мМ; 4-аминопиридин 0.1 мМ, тетраэтиламмоний 0.25 мМ.

угнетает потенциалзависимые К+-токи. В условиях блокирован потенциалзависимых К+-каналов ([Са"+]()=1.8 мМ) АК (50 мкМ) обратимо снижала амплитуду 3-ей фазы ответа НО, отражающей токи через Са2+-активируемые К+-каналы, до 60.1 ±2.5% (п=4, р<0.05) (Рис 1Б, табл. 1). Уменьшение секреции медиатора и амплитуды Са2+-активируемых Ю-токов может быть связано с непосредственным угнетающим действием АК на Са2+-токи. Действительно, в условиях периневрального отведения АК (50 мкМ) уменьшала амплитуду 3-ей фазы, отражающей токи через Са2+-каналы НО до 83.3±2.3% (п=5, р<0.05) (рис. 1Б)

Низкие концентрации АК были столь же эффективными, как и высокие, несмотря на длительное время экспозиции (в течение часа) (Табл. 1). В клетках существуют механизмы, обеспечивающие регуляцию концентрации свободных жирных кислот и, в том числе, АК. Кроме того, отсутствие дозозависимости может быть связано с быстрой деградацией АК ферментами метаболизма то циклооксигеназному, липоксигеназному и цитохром Р450 путям, а также встраиванием жирной кислоты в мембранные фосфолипиды (Эе Сео^е е1 а1, 1989; РюшеШ, 1996).

2. Влиянне АК на секрецию медиатора и амплитуду 3-ей фазы ответа нервного окончания при ритмической стимуляции

В условиях низкой концентрации Са2' в растворе ритмическая стимуляция в контроле сопровождалась развитием облегчения, которое выражалось в

увеличении квантового состава ТКП. При стимуляции с частотой 10 имп/с квантовый состав ТКП к 40-ой секунде (401-500 сигналы) возрастал до 193.6±8.4 % (п=19, р<0.05), а при частоте 50 имп/с к 8-ой секунде (401-500 сигналы) - до 408.8± 15.1% (п=19, р<0.05) (Рис. 2А, В).

Рис. 2 Влияние арахидоновой кислоты и простагландина Е2 на секрецию медиатора и амплитуду 3-ей фазы ответа нервного окончания при ритмической стимуляции.

Динамика изменения квантового состава токов концевой пластинки и амплитуды 3-ей фазы ответа нервного окончания при стимуляции нерва с частотой 10 ими/с (А, Б) и 50 имп/с (В, Г) в контроле, в присутствии арахидоновой кислоты (10 мкМ) и простагландина Ез (10 мкМ). По оси абсцисс - номер сигнала, по оси ординат - квантовый состав токов концевой пластинки и амплитуда 3-ей фазы ответа нервного окончания в % относительно исходного уровня. ■ - контроль (К), о -ара\идоновая кислота (АК), Д - простагландин Е2 (ПГЕ2).

Ритмическое раздражение наряду с облегчением секреции медиатора приводило к прогрессирующим изменениям формы ответа НО. Наиболее ярко

изменялась амплитуда 3-ей фазы, отражающая выходящие К+-токи Во время стимуляции с частотой 10 имп/с амплитуда 3-ей фазы ответа НО к 40 с снижалась до 72.4±5.2% (п=19, р<0.05) (Рис. 2Б), а с частотой 50 имп/с к 8 с -до 78.7+2.7% (п=19, р<0.05) (Рис. 2Г).

Степень облегчения во многом зависит от начального уровня квантового состава ТКП в индивидуальном синапсе, поэтому в каждой серии экспериментов за 100% уровень принималось значение, полученное при одиночной стимуляции в контроле и после воздействия вещества. При раздражении с частотой 10 имп/с на фоне действия АК (10 мкМ) облегчение было достоверно больше контрольных значений. К 40 с стимуляции квантовый состав ТКП достигал 243.8±12.8% (п=5, р<0.05) (Рис. 2А). Амплитуда 3-ей фазы ответа НО к 40 с стимуляции не отличалась от контрольных значений (Рис. 2Б). При стимуляции с частотой 50 имп/с на фоне действия АК квантовый состав ТКП через 8 с составлял 493.5±17.5% (п=5, р<0.05) (Рис. 2В), что превышало контрольные значения. Динамика снижения амплитуды 3-ей фазы ответа НО в процессе раздражения с частотой 50 имп/с не отличалась от контроля (Рис. 2Г).

В зависимости от частоты ритмической активности преобладают различные механизмы облегчения (Зефиров, Мухамедьяров, 2004). При меньшей частоте раздражения (10 имп/с) инактивация потенциалзависимых К+-каналов приводит к увеличению длительности потенциала действия и к усилению входящих Са2+-токов. При стимуляции с частотой 50 имп/с облегчение выражено больше, так как при этой частоте ритмической стимуляции наблюдается более значительное накопление «остаточного Са"+» в аксоплазме (Bielefeldt et al., 1993). Наряду с этим происходит активация Са2"-активируемых К4-каналов, что ведет к уменьшению величины входящих Са2+-токов и ограничению роста секреции медиатора в процессе ритмической активности (Bielefeldt et al, 1993, Зефиров, Мухамедьяров, 2004). АК приводила к более выраженному облегчению, что может быть связано, как с исходно сниженным уровнем секреции, так с ее угнетающим действием на потенциалзависимые и Са2+-активируемые К+-токи.

3. Эффекты ингибиторов фосфолипазы А2 на нервно-мышечную передачу

Образование АК из клеточных мембран происходит с помощью фосфолипаз при действии ряда сигнальных факторов - при активации метаботропных G-белок связанных рецепторов, при увеличении внутриклеточной концентрации ионов Са2+ и активных форм кислорода. Для исследования возможности эндогенного образования АК использовали блокаторы фосфолипазы А3 ([Са2+]=0.2-0.4 мМ) - аристолеховую кислоту и палметилтрифлуорокетон. Добавление аристолеховой кислоты (10 мкМ) приводило к увеличению квантового состава ТКП до 142.4±9.1% (п=4, р<0.05) Палметилтрифлуорокетон (10 мкМ) увеличивал квантовый состав ТКП до

120.9±9.3% (п=5, р<0.05). Блокаторы фосфолипазы Аг не влияли на параметры ответа НО. Таким образом, показана возможность тонического образования АК в области нервно-мышечного синапса, которая может опосредовать пресинаптическое действие нейромедиаторов и нейромодуляторов.

4. Исследование роли липоксигеназ и циклооксигеназ в эффектах АК на секрецию медиатора и ионные токи нервного окончания

Для выявления роли липоксигеназного пути метаболизма в эффектах АК использовали блокатор 5, 12, 15- липоксигеназ - ТНЕ01А (20 мкМ), который не изменял ни квантового состава ТКП, ни амплитуды 3-ей фазы ответа НО. По-видимому, липоксигеназный путь метаболизма АК не играет значительной роли в реализации эффектов АК в нервно-мышечном соединении лягушки. Для блокирования циклооксигеназного пути метаболизма АК использовали индометацин (20 мкМ). Индометацин увеличивал квантовый состав ТКП до 220±11.4% (п=4, р<0.05) относительно контроля (Рис. ЗА) и снижал амплитуды потенциалзависимых К+-токов до 60.5±1.5% (п=7, р<0.05) ([Са2+]0=0.2-0.4мМ) и Са2+-активируемых К+-токов до 79.4±7.9% (п=5, р<0.05) ([Са2+]0=1.8 мМ) (Рис. ЗБ). На фоне действия индометацина эффекты АК (10 мкМ) на амплитуду К+-токов сохранялись, а на квантовый состав ТКП не проявлялись (Рис. 3).

^250 О

Я 200

, я

= §150

в 2100

а £ й я

о -е-ь»

55 « 60 л ч и Ъ Ё \ 50

Индометацин

АК

£ 5

-С я

Ол

'<¡>¿¿6

°Оо.,

а9Фо

оо

10 20

«0 50 60 1ремя, мин

■па»!

я 60

2 <

АК

Ии

ИаМК

Рис. 3. Роль циклооксигеназного пути метаболизма в эффектах арахидоновой кислоты.

А - Динамика изменения квантового состава токов концевой пластинки (■) и амплитуды 3-ей фазы ответа нервного окончания ([Са2+]0=0.2-0.4 мМ) (о) под действием индометацина (20 мкМ) и арахидоновой кислоты (АК, 50 мкМ). Сплошной линией указано время действия веществ (по оси ординат - изменение квантового состава токов концевой пластинки и амплитуды 3-ей фазы в %); Б -Действие арахидоновой кислоты (АК, 10 мкМ), индометацина (Инд, 20 мкМ) на амплитуду Са2+-зависимых К+-токов ([Са2+]=1.8 мМ, 4-аминопиридин) (по оси ординат - амплитуда 3-ей фазы ответа НО в %. * - р<0.05).

По-видимому, метаболиты АК по циклооксигеназному пути уменьшают секрецию медиатора, а снижение К4-токов НО связано с собственным действием АК.

5. Эффекты ПГЕ2 на секрецию медиатора и ионные токи двигательного НО

ПГЕ2 (метаболит АК по циклооксигеназному пути) снижал вызванную секрецию медиатора и уменьшал амплитуду 3-ей фазы ответа НО ([Са2~]0=0.2-0.4 мМ) (Рис. 4, табл. 2). При этом ПГЕ2 обратимо снижал частоту МТКП до 85.8±2.1% (п=6, р<0.05), не изменяя амплитудно-временных параметров МТКП" ([Са2+]0=1.8 мМ). ПГЕ2 снижал амплитуду 3-ей фазы ответа НО, отражающей Са2+-активируемые К+-токи, до 62.7±1.7% (п=5, р<0.05) (Рис. 4Б).

Таблица 2

Эффекты простагландина Е2 на вызванную секрецию медиатора и ___3-ю фазу ответа нервного окончания

Концентрация ПГЕ2, мкМ Амплитуда 3-ей фазы ответа НО ГСа2+1о=0.4мМ, % Квантовый состав ТКП, % п

1 93.1±1.8 90.5±1.7 5

5 88.4±4.2* 74 7±2.4* 5

10 88.1±5.1 * 75.1±3.7* 7

20 80.2±4.2* 74.2±2.8* 6

50 68.2±2.3* 71.2±2.6* 7

Примечание. Даны средние значения ± стандартные ошибки; п -количество экспериментов; * - р<0.05

В условиях периневрального отведения ([Са2+]0=1.8 мМ) ПГЕ2 уменьшал амплитуду 3-ей фазы ответа, отражающей Са3+-токи' НО до 88±1.2% (п=5, р<0.05) относительно контроля (Рис.4 Б).

Исследование влияния ПГЕ2 на секрецию медиатора и амплитуду 3-ей фазы ответа НО при ритмическом раздражении выявило эффекты, сходные с действием АК. Под влиянием ПГЕз при ритмическом раздражении как с частотой 10 имп/с, так и с частотой 50 имп/с наблюдалось облегчение большее по сравнению с контрольными значениями (до 235.5±8.3% и 469 7±18 5%, п=5, р<0.05) (Рис. 2А, В). На фоне действия ПГЕ2 изменение амплитуды 3-ей фазы ответа НО при ритмическом раздражении не отличалось от контрольных значений (Рис. 2Б, Г).

Таким образом, АК уменьшает секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки через синтез метаболитов по циклооксигеназному пути. Одним из механизмов ингибиторного действия АК является угнетение Са2+-токов двигательного НО. Изменения потенциалзависимых и Са2+-активируемых К+-токов могут быть связаны как с действием ПГЕ2 так и с

собственными эффектами АК, о чем свидетельствует продолжение эффекта АК на 3 фазу ответа НО на фоне индометацина.

Рис. 4 Влияние простагландина Е2 на потенциалзависимые и Са2+-акгивируемые К+ и Са"+-токи нервного окончания

А - изменение амплитуды 3-ей фазы ответа НО под действием простагландина Е2 (50 мкМ) в % относительно контроля * - р<0 05 относительно контроля; Б -усредненные ответы нервного окончания (30 реализаций) в норме и при действии простагландина Е2 (стрелками показан эффект); 1 - потенциалзависимые К+-токи. внеклеточное отведение, [Са2*]0=0 2-0.4 мМ, 2 - Са2'-активируемые К+-токн, внеклеточное отведение, [Са2+]0=1.8 мМ, 4-аминопиридин 0.1 мкМ, 3 - Са~+-токи, периневралыюе отведение, [Са2+1о=1.8 мМ; 4-аминопиридин 0 1 мМ, геграэтиламмоиий 0.25 мМ.

6. Влияние насыщенных и ненасыщенных жирных кислот на секрецию медиатора и калиевые токи нервного окончания

Для анализа прямых эффектов АК использовали жирные кислоты с разной степенью насыщенности и длиной углеводородной цепи. Мононенасыщенная олеиновая (С 18:1) кислота в концентрациях 5, 10, 20 мкМ снижала вызванную секрецию медиатора из двигательного НО лягушки (Рис. 5А, табл. 1). Насыщенные арахиновая (С 20:0) и миристиновая (С 14:0) кислоты в концентрации 10 мкМ снижали квантовый состав ТКП до 63.2±5.2% (п=4, р<0.05) и до 53.5±5.9% (п=4, р<0.05), соответственно (Рис. 5, табл. 1).

Анализ влияния жирных кислот на электрогенез НО выявил различия в эффектах насыщенных и ненасыщенных кислот. Олеиновая кислота (10 мкМ) уменьшала амплитуду потенциалзависимых К+-токов до 84.8±2.5% (п=4, р<0.05) относительно контроля (Рис. 5Б; табл. I), а также снижала амплитуду Са2+-активируемых К+-токов до 80.0±2.3% (п=4; р<0.05) (табл. 1). Насыщенные

арахиновая и миристиновая кислоты не оказывали влияния ни на потенциалзависимые, ни на Са2+-активируемые К+-токи ответа НО.

А Б

Рис. 5. Влияние насыщенных и ненасыщенных жирных кислот на секрецгю медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания

Динамика изменения квантового состава ТКП (А) и амплитуды 3-ей фазы ответа нервного окончания (Б) на фоне действия арахидоновой, олеиновой, арахиновой и миристиновой кислот при одиночной стимуляции (0.2 имп/с) Представлены эффекты жирных кислот в концентрации 10 мкМ (по оси абсцисс - время в минутах от начала эксперимента, по оси ординат - изменение квантового состава токов концевой пластинки и амплитуды 3-ей фазы ответа нервного окончания в %); о -арахидоновая кислота (АК), Д - олеиновая кислота (ОК), □ - арахиновая кислота (АрК), О - миристиновая кислота (МК).

Исследование влияния ненасыщенной олеиновой кислоты на развитие облегчения и динамику выходящих К+-токов при ритмическом раздражении выявило эффекты подобные действию АК. При ритмическом раздражении на фоне действия олеиновой кислоты облегчение было достоверно больше по сравнению с контрольными значениями. При стимуляции с частотой 10 имп/с квантовый состав ТКП составил 235.6±13.1% (п=5, р<0.05) и при стимуляции с частотой 50 имп/с 493.1+63.9% (п=5, р<0.05) (Рис. 6А, В). Изменения амплитуды 3-ей фазы ответа НО не отличались от контрольных (Рис. 6Б, Г).

Исследование влияния насыщенных жирных кислот на развитие облегчения и динамику выходящих К+-токов при ритмическом раздражении не выявило достоверных отличий по отношению к контролю (Рис. 6).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что АК и другие жирные кислоты снижают вызванную секрецию медиатора и угнетают потенциалзависимые и Са2"-активируемые К+-токи НО. Первый эффект не зависит от степени насыщенности жирных кислот, а второй характерен для ненасыщенных (арахидоновой и олеиновой) кислот.

в г

Рис. 6. Влияние жирных кислот на секрецию медиатора и амплитуду 3-ей фазы ответа нервного окончания при ритмической стимуляции.

Изменение квантового состава токов концевой пластинки и амплитуды 3-ей фазы ответа нервного окончания при стимуляции с частотой 10 имп/с (А, Б) и 50 имп/с (В, Г) в контроле и в присутствии жирных кислот (10 мкМ) (по оси абсцисс -номер сигнала, по оси ординат - квантовый состав токов концевой пластинки и амплитуда 3-ей фазы ответа нервного окончания в %. * - контроль (К), сокращения как в рисунке 5).

7. Влияние неметаболизнруемого аналога АК - ЕТУА на нервно-мышечную передачу

Для выявления собственного эффекта АК использовали негидролизуемый аналог - ЕТУА, который также блокирует все пути метаболизма АК. Добавление ЕТУА в концентрациях 5 мкМ и 10 мкМ снижало квантовый состав ТКП до 72.1±1.6% (п=6, р<0.05) и до 88.1±3.4% (п=5, р<0.05), соответственно (рис. 7А). В то же время ЕТУА в концентрациях 20 мкМ и 30 мкМ увеличивала квантовый состав ТКП до 123.4±3.8% (п=5, р<0.05) и 136.1±4.8% (п=7, р<0.05), соответственно. При этом во всех исследуемых

концентрациях ЕТУА снижала амплитуды потенциалзависимых и Са2+-активируемых К+-токов (рис. 7Б).

-г 140

« 120 о

У 100

л а о н г я а Ь5

5 10

15 20 25 30 |ЕТУА|, мкМ

100-

80-|

ю О

ез Я « *

10 15 20 25 30 |ЕТУА|, мкМ

Рис. 7. Влияние неметаболнзируемого аналога арахидоновой кислоты ЕТУА на секрецию медиатора и потенциалзависимые К+-токи нервного окончания

А - дозозависимое действие ЕТУА на квантовый состав токов концевой пластинки; Б - эффекты ЕТУА на 3 фазу ответа нервного окончания, отражающую потенциалзависимые К+-токи (по оси абсцисс - концентрация ЕТУА в мкМ. но оси ординат - квантовый состав токов концевой пластинки и амплитуда 3-ей фазы ответа нервного окончания в %).

Эффекты ЕТУА в низких концентрациях свидетельствуют о собственных ингибиторных эффектах АК на освобождение медиатора и К'-то к и НО Усиление секреции медиатора при действии высоких концентраций ЕТУА может быть связано с увеличением длительности потенциала действия НО за счет угнетения потенциалзависимых и Са2+-активируемых К+-токов. Кроме того, не исключена и вероятность детергентного эффекта высоких концентраций АК при ее эндогенном накоплении в результате блокирования путей ее метаболизма, как и в случае индометацина. Так нами было показано, что детергент - деоксихолат (Ю мкМ) приводил к усилению вызванной секреции ацетилхолина.

8. Влияние АК на процессы экзо- и эндоцитоза в двигательном нервном окончании

Для оценки влияния АК на динамику секреции медиатора и процессов экзо- и эндоцитоза использовали электрофизиологические и флуоресцентные методы исследования. Все эксперименты проведены в условиях нормального содержания ионов Са2+ (1.8 мМ) в растворе. Для анализа интенсивности экзоцитоза синаптических везикул использовали ритмическую стимуляцию двигательного нерва с частотой 20 имп/с в течение 3 минут, при которой задействованы как рециклиру ющийся, так и резервный пул синаптических везикул. Затем частоту стимуляции снижали до 0.2 имп/с и регистрировали

восстановление амплитуды ТКП. В контроле раздражение двигательного нерва кожно-грудинной мышцы лягушки с частотой 20 имп/с сопровождалось характерными изменениями амплитуды ТКП (Рис. 8А). Первоначально наблюдалось выраженное снижение амплитуды сигналов, затем падение амплитуды ТКП замедлялось и к 3 мин стимуляции амплитуда сигналов падала до 14.2±3.1% (п=5) от исходной (Рис. 8). Для анализа суммарного освобождения медиатора при ритмической стимуляции производили суммирование амплитуд ТКП в отдельном эксперименте (Рис. 8А). Из графика видно, что освобождение медиатора в начале стимуляции резко нарастает и к 3 мин стимуляции - выходит на плато.

К н

п &

с £

>5 12Ц в>

4 ее X

С.

120 150

Время, сек

Кипра п. АК Катран, АК

Рис. 8. Влияние экзогенной арахидоновой кислоты на процессы экзо- и эндоцитоза сннаптических везикул:

А - кумулятивные кривые, полученные путем суммирования амплитуды токов концевой пластинки в контроле (■) и на фоне действия арахидоновой кислоты (АК, 10 мкМ) (о); вверху - график снижения амплитуды токов концевой пластинки при ритмической стимуляции По оси абсцисс - время в секундах от начала эксперимента, по оси ординат - изменение амплитуды токов концевой пластинки; Б -усредненное свечение терминален в контроле и в присутствии арахидоновой кислоты (10 мкМ) (белые столбики - яркость свечения при аппликации красителя во время стимуляции с частотой 20 имп/с в течение 3 мин; черные столбики - яркость свечения при аппликации красителя в течение 5 мин после прекращения стимуляции: по оси ординат - интенсивность флуоресценции (относительные единицы)).

Для исследования эндоцитоза сннаптических везикул определяли средний уровень свечения нервных терминалей лягушки при добавлении ИМ 1-43 во время (3-х мин аппликация) и после (5-и мин аппликация) стимуляции двигательного нерва электрическими импульсами с частотой 20 имп/с в

течение 3-х мин в контроле и после воздействия АК и блокатора фосфолипазы А2. В контроле интенсивность флуоресценции нервных терминалей при аппликации эндоцитозного маркера РМ 1-43 во время стимуляции с частотой 20 имп/с составила 105.215.7 о.е. (п=45). Яркость свечения терминалей во время восстановления составила 132.9+5.8 о.е. (п=45) (Рис. 8Б).

Добавление АК (10 мкМ) замедляло первоначальный спад амплитуды ТКП. К концу 3 мин стимуляции амплитуда ТКП составила 25.8±3.1% (п = 5), что не отличалось от контрольных значений (Рис. 8А). Из графика суммарных амплитуд ТКП в отдельном эксперименте видно, что при действии АК в течение 3-х мин стимуляции освободилось большее количество синаптических везикул по сравнению с контролем (Рис. 8А). Замедление спада амплитуд ТКП свидетельствует о снижении скорости истощения везикулярных пулов, что может быть связано со снижением начального уровня освобождения при действии АК. Кроме того, возможно, что АК увеличивает скорость мобилизации везикул из резервного пула в пул, готовый к освобождению. При этом усиливается процесс перехода везикул из локированного состояния в состояние прайминга, и поэтому увеличивается общее количество освободившегося медиатора. Показано, что в клетках феохромоцитомы-12 крысы АК в отличие от других жирных кислот усиливает слияние синаптических везикул с плазматической мембраной (Ог^, 2006). Этот эффект может быть связан как изменением физико-химических свойств мембраны (текучести), так и с модуляцией функций белков, участвующих в основных стадиях экзоцитоза Действительно, АК регулирует образование БЫАКЕ-комплекса путем дестабилизацию связи синтаксин1/Мипс18, тогда как насыщенная арахиновая кислота не способствует формированию БЫЛИЕ-комплекса, что свидетельствует о важности структурных особенностей АК (Шсктап, 0ау1еюу, 2005).

Для исследования влияния АК на процессы эндоцитоза синаптических везикул нервно-мышечный препарат лягушки предварительно выдерживали в растворе Рингера, содержащем АК (10 мкМ). В препаратах, к которым добавление красителя производилось во время стимуляции, интенсивность свечения нервных терминалей не отличалась от контрольной (105.5±2.9 о.е., п=45, р>0.05) (Рис. 8Б). Яркость свечения терминалей в препаратах, к которым добавление красителя производилось после ритмической стимуляции, составила 106.5+3.1 о.е. (п=44, р<0.05), что ниже свечения в контроле (Рис. 8Б)2).

По-видимому, АК замедляется скорость эндоцитоза синаптических везикул, что будет приводить к снижению количества РМ 1-43, загруженного в НО. Ингибирующим влиянием продуктов фосфолипазы А2- жирных кислот и

2) - Выражаю благодарность чл -корр РАМН Зефирову А.Л. зав. кафедрой нормальной физиологии КГМУ, на базе которой выполнялась работа по флуоресцентной микроскопии, за помощь в обсуждении полученных результатов

лизофосфолипидов на эндоцитоз синаптических везикул можно объяснить эффекты токсинов, обладающих фосфолипазной aKTHBHocTbio(Rigoni et al., 2004). Электронно-микроскопические исследования показали, что при действии данных токсинов (кротоксин, Р-бунгаротоксин, тайпоксин) происходит набухание и увеличение терминален аксона, уменьшение количества синаптических везикул, появление клатрин-покрытых 12-образных инвагинаций мембраны (Chen, Lee, 1970; Cull-Candy et al., 1976; Harris et al., 2000; Rigoni et al., 2004). Кинетика освобождения медиатора и морфологические изменения предполагают, что эти токсины ингибируют эндоцитоз синаптических везикул (Hodgson, Wickramaratna, 2002; Rossetto et al., 2006).

120 180 Время, сек

Рис. 9. Влияние палметилтрифлуорокетона на процессы экзо- и эндоцитоза синаптических везикул:

А - Кумулятивные кривые, полученные путем суммирования амплитуды токов концевой пластинки в контроле (■) и на фоне действия палметилтрифлуорокетона (Ю мкМ) (о). По оси абсцисс - время в секундах от начала эксперимента, по оси ординат - изменение амплитуды токов концевой пластинки в мУ (представлены данные одного эксперимента); вверху - график снижения амплитуды токов концевой пластинки при ритмической стимуляции; Б - Свечение терминален в контроле и в присутствии палметилтрифлуорокетона (10 мкМ) (белые столбики - яркость свечения при аппликации красителя во время стимуляции с частотой 20 имп/с в течение 3 мин, черные столбики - яркость свечения при аппликации красителя в течение 5 мин после прекращения стимуляции; по оси ординат - интенсивность флуоресценции (относительные единицы)).

Ингибирование фосфолипазы А? не приводило к значительным изменениям динамики спада амплитуды ТКП, концу 3 мин амплитуда ТКП составила 15.9±3.5% (п=5, р>0.05) (Рис. 9А). Из графика суммарных амплитуд

ТКП в отдельном эксперименте видно, что при действии палметилтрифлуорокетона в течение 3-х мин стимуляции количество высвободившихся синаптических везикул не отличается от контроля (Рис. 9А).

В препаратах, в которых добавление красителя производилось во время стимуляции, интенсивность свечения нервных терминалей была больше, чем в контроле (120.0±3.3 о.е, п=45, р<0.05). Яркость свечения терминалей в препаратах, к которым красителя добавляли во время восстановления, составило 104.7+5.8 о.е. (п=45, р<0.05), что меньше контрольных значений (Рис. 9Б).

По-видимому, ингибирование фосфолипазы А2 усиливает рециклизацию синаптических везикул во время стимуляции. При этом скорость эндоцитоза увеличивается в большей степени, чем скорость экзоцитоза. В результате к концу стимуляции количество мембранного материала, способного в дальнейшем к эндоцитозу оказалось меньше, чем в контроле, поэтому свечение терминалей, загруженных после стимуляции меньше, чем в контроле. Таким образом, увеличение уровня АК при экзогенном введении увеличивает суммарное освобождение медиатора при высокочастотном раздражении и замедляет эндоцитоз синаптических везикул, тогда как блокирование фосфолипазы А2 усиливает рециклизацию везикул.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе проведенных исследований было показано, что АК оказывает пресинаптический ингибиторный эффект на секрецию ацетилхолина в нервно-мышечном синапсе лягушки. Уменьшение секреции медиатора при действии АК опосредуется ее метаболитом по циклооксигеназному пути - ПГЕ2 и связано с угнетением Са2+-токов двигательного НО. При этом АК угнетает потенциалзависимые и Са2+-активируемые К+-токи НО. Показано, что снижение секреции медиатора под действием АК имитируется насыщенными и ненасыщенными жирными кислотами и неметаболизируемым аналогом АК ЕТУА (в низких концентрациях), тогда как изменение потенциалзависимых и Са2+-активируемых К+-токов наблюдается лишь под действием ненасыщенных жирных кислот. Это свидетельствует о собственных прямых эффектах молекулы АК на потенциалзависимые и Са2+-активируемые К~-каналы. В условиях ритмического раздражения (10 и 50 имп/с) арахидоновая и олеиновая жирные кислоты и простагландин Е2 приводят к более выраженному облегчению секреции медиатора, тогда как эффекты ненасыщенных миристиновой и арахиновой кислот не отличаются от контроля. При блокировании путей метаболизма АК индометацином и ЕТУА (в высоких концентрациях) происходит усиление освобождения медиатора и снижение К+-токов двигательного НО. По-видимому, при этом происходит накопление эндогенной АК, которая в высоких концентрациях проявляет детергентный эффект.

Исследование влияния экзогенной АК на процессы экзо- и эндоцитоза двигательного НО показало, что АК уменьшает загрузку флуоресцентного красителя в двигательные нервные терминали, что свидетельствует об угнетающем действии на эндоцитоз синаптических везикул. Блокирование синтеза АК напротив усиливает рециклизацию везикул. По-видимому, экзогенная и эндогенная АК замедляет эндоцитоз синаптических везикул в двигательном НО лягушки.

Сделано заключение, что АК является пресинаптическим модулятором передачи возбуждения в синапсе, оказывая значительный эффект на молекулярные механизмы экзо- и эндоцитоза синаптических везикул и ионные каналы двигательного НО.

ВЫВОДЫ

1. Экзогенная арахидоновая кислота (5-50 мкМ) угнетает спонтанную и вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки, действуя на пресинаптическом уровне. Арахидоновая кислота снижает потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые и кальциевые токи двигательного нервного окончания.

2. Блокаторы фосфолипазы А2 - аристолеховая кислота (10 мкМ) и палметилтрифлуорокетон (10 мкМ) вызывают увеличение вызванного освобождения ацетилхолина, что свидетельствует о тоническом образовании арахидоновой кислоты в нервно-мышечном синапсе лягушки.

3. Индометацин (20 мкМ), блокатор циклооксигеназного пути метаболизма арахидоновой кислоты, усиливает вызванную секрецию медиатора и угнетает потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые токи. Блокирование липоксигеназного пути метаболизма (ТНЕ01А, 20 мкМ) не влияет ни на освобождение ацетилхолина, ни на потенциалзависимые калиевые токи нервного окончания

4. Простагландин Е2 (1-50 мкМ) оказывает дозозависимое угнетающее действие на спонтанную и вызванную секрецию медиатора и потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые и кальциевые токи двигательного нервного окончания.

5. Насыщенные (миристиновая и арахиновая) и ненасыщенная (олеиновая) жирные кислоты (5-20 мкМ) снижают вызванную секрецию медиатора, тогда как снижение амплитуды потенциалзависимых и кальций-активируемых калиевых токов наблюдается лишь при действии ненасыщенной олеиновой кислоты.

6. В условиях ритмического раздражения (10 и 50 имп/с) арахидоновая и олеиновая жирные кислоты и простагландин Е2 приводят к более выраженному облегчению секреции медиатора, тогда как эффекты ненасыщенных миристиновой и арахиновой кислот не отличаются от контроля.

7. Неметаболизируемый аналог арахидоновой кислоты - ETYA в низких концентрациях (5-10 мкМ) оказывает угнетающее действие на вызванное освобождение медиатора. В высоких концентрациях (20-30 мкМ) ETYA вызывает увеличение вызванной секреции медиатора. ETYA во всех исследованных концентрациях угнетает потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые токи двигательного нервного окончания лягушки.

8. С помощью флуоресцентной микроскопии показано, что арахидоновая кислота снижает свечение нервных терминалей относительно контроля при «загрузке» красителя FM 1-43 после стимуляции двигательного нерва с частотой 20 имп/с в течение 3 мин, что свидетельствует о замедлении процесса эндоцитоза синаптических везикул в нервном окончании.

9. Блокатор фосфолипазы А2 - палметилтрифлуорокетон усиливает интенсивность свечения нервных терминалей относительно контроля при «загрузке» FM 1-43 во время стимуляции и снижает интенсивность свечения при «загрузке» красителя после стимуляции, что свидетельствует об усилении рециклизации синаптических везикул в нервном окончании.

ОСНОВНЫЕ ОПУБЛИКОВАННЫЕ РАБОТЫ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Архипова О.В. Пресинаптические эффекты арахидоновой кислоты и простагландина Е2 в нервно-мышечном соединении лягушки / Архипова О.В., Ситдикова Г.Ф., Гришин С.Н., Зефиров А.Л. // Росс, физиол. жур. им. И М. Сеченова. - 2005. - Т. 95. - № 2. - С. 17-25.

2. Яковлева О.В. Жирные кислоты модулируют процессы секреции медиатора и функционирования калиевых каналов в двигательном нервном окончании / Яковлева О.В., Ситдикова Г.Ф., Герасимова Е.В., Зефиров А.Л. // Нейрохимия. - 2006. - Т. 23. - № 4. - С. 310-316.

3. Arkhipova O.V. The presynaptic effects of arachidonic acid and prostaglandin E2 at the frog neuromuscular junction / Arkhipova O.V., Grishin S.N., Sitdikova G.F., Zefirov A.L. // Neurosci. Behav. Physiol. - 2006. - V. 36 (3). - P. 307-312.

4. Архипова О.В. Эффекты циклооксигеназного пути метаболизма арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания / Архипова О.В., Гришин С.Н., Ситдикова Г.Ф., Зефиров А.Л. // Сборник статей «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». -Пущино,-2003.-С. 21-24.

5. Яковлева О.В. Модуляция потенциалзависимых калиевых токов и освобождения медиатора в двигательном нервном окончании жирными кислотами / Яковлева О.В., Ситдикова Г.Ф // Сборник статей «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». - Пущино. - 2005. - С. 196-199.

6. Yakovleva O.V. Effects of phospholipase A2 inhibitor aristolohic acid on evoked transmitter release in frog neuromuscular junction // Yakovleva O.V., Sitdikova G.F., Yakovlev A.V., Zefirov A.L. // Abstr. of International symp. «Biological motility». - Pushcino. - 2004. - P. 25-26.

7. Ситдикова Г.Ф. Исследование роли циклооксигеназного и липоксигеназного путей метаболизма арахидоновой кислоты на освобождение медиатора и ионные токи в нервно-мышечном соединении / Ситдикова Г.Ф., Яковлев А.В., Яковлева О.В. // Материалы Всероссийского съезда биофизиков. - Воронеж. - 2004. - С. 15-16.

8. Yakovleva O.V. Effects of arachidonic acid in frog neuromuscular junction / Yakovleva O.V., Yakovlev A., Sitdikova G., Zefirov A.// 3nd INMED conference "The multiple facets of GABAergic synapses". - La Ciotat, France. - 2004. - P. 22.

9. Яковлева О.В. Роль каскада арахидоновой кислоты в модуляции секреции медиатора и ионных токов двигательного нервного окончания // Росс, физиол. жур. им. И.М.Сеченова. - 2004. - Т. 90. - № 8. - С. 236.

10. Яковлева О.В. Эффекты различных концентраций арахидиковой кислоты на ионные токи нервного окончания и секрецию медиатора / Яковлева О.В., Левченкова Е.В. // Материалы науч. конф. «Нейрохимия: Фундаментальные и прикладные аспекты». - М. — 2005. — С. 132.

11. О.В. Яковлева Исследование особенностей действия жирных кислот на кратковременную синаптическую пластичность / О.В. Яковлева, Е.В. Герасимова, Г.Ф. Ситдикова // Науч. тр. I Съезда физиологов СНГ. - Сочи. -2005.-С. 53.

12. Яковлева О.В. Влияние жирных кислот на ионные токи двигательного нервного окончания и вызванной секреции медиатора / Яковлева О.В., Герасимова Е.В. // Бюллетень Сибирской медицины. (Тезисы докладов V Съезда физиологов Сибири) - 2005. - Т.4 - приложение 1 - С. 122

13. Яковлева О.В. Эффекты жирных кислот в условиях ритмического раздражения двигательного нервного окончания / Яковлева О.В, Ибатуллина А.Р., Козина Е.В. // XIII Международное совещание и VI школа по эволюционной физиологии. - СПб. - 2006. - С. 257-258.

14. Yakovleva O.V. Role of arachidonic acid in short-term plasticity / Yakovleva O.V., Ibatullina A.R., Sitdikova G.F. // VIII региональная конф. международного общества нейробиологии беспозвоночных «Простые нервные системы». -Казань.-2006. - С. 100.

15. Yakovleva O.V. Effects of fatty acids on short-term plasticity in frog neuromuscular junction / Yakovleva O.V., Sitdikova G.F. // Abstr. of International symposium "Biological motility". - Pushchino. - 2006. - P. 65-66.

16. Яковлева О.В. Действие метаболитов арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и электрогенез двигательной нервной терминали / Яковлева О.В., Ибатуллина А.Р., Ситдикова Г.Ф. // Тезисы науч. конф. «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС». - Пенза. - 2006. - С. 34-35.

Подписано в печать 16.01.07 г. Форм. бум. 60x80 1/16. Печ. л 1,5. Тираж 100. Заказ 9.

Отпечатано с готового оригинал—макета в ООО «Вестфапика» г.Казань, ул. Б Красная, 67

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Яковлева, Ольга Владиславовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Жирные кислоты, структура, физико-химические свойства

1.2. Освобождение жирных кислот из мембран

1.2.1. Классификация фосфолипаз А

1.2.2. Функциональное значение и регуляция фосфолипазы Аг

1.2.3. Контроль за уровнем жирных кислот в клетке

1.3. Биологическая роль жирных кислот

1.3.1. Биологические эффекты арахидоновой кислоты

1.3.2. Пути метаболизма арахидоновой кислоты

1.3.2.1. Циклооксигеназный путь метаболизма арахидоновой кислоты

1.3.2.2. Липоксигеназный путь метаболизма арахидоновой кислоты

1.3.2.3. Цитохром Р450 путь метаболизма арахидоновой кислоты

1.3.3. Влияние жирных кислот на синаптическую передачу

1.4. Механизмы действия жирных кислот

1.4.1. Влияние жирных кислот на физические свойства мембран

1.4.2. Влияние жирных кислот на ионные каналы

1.4.2.1. Влияние жирных кислот на кальциевые каналы

1.4.2.2. Влияние жирных кислот на калиевые каналы

1.4.2.3. Влияние жирных кислот на натриевые каналы

1.4.2.4. Влияние жирных кислот на хлорные каналы

1.4.2.5. Влияние жирных кислот на ионотропные рецепторы

1.4.3. Влияние жирных кислот на внутриклеточные сигнальные системы

1.4.4. Влияние жирных кислот на процессы экзо- и эндоцитоза

2 ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Растворы и фармакологические вещества

2.3. Изготовление, заполнение и подведение микроэлектродов

2.4. Регистрация биопотенциалов

2.5. Анализ синаптических сигналов

2.6. Статистическая обработка экспериментальных данных

2.7. Флуоресцентная микроскопия

2.8. Применение РМ1

2.9. Регистрация свечения

2.10. Анализ изображений

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Эффекты арахидоновой кислоты на спонтанную и вызванную секрецию ацетилхолина и ионные токи двигательного нервного окончания

3.2. Влияние арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и амплитуду третьей фазы ответа нервного окончания при ритмическом раздражении

3.3 Эффекты ингибиторов фосфолипазы Аг на нервно-мышечную передачу

3.4. Исследование роли липоксигеназ и циклооксигеназ в эффектах арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи нервного окончания

3.5. Эффекты простагландина Е2 на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания

3.6. Влияние простагландина Ег на секрецию медиатора и амплитуду третьей фазы ответа нервного окончания при ритмическом раздражении

3.7. Влияние насыщенных и ненасыщенных жирных кислот на секрецию медиатора и ионные токи нервного окончания

3.8. Влияние насыщенных и ненасыщенных жирных кислот на секрецию медиатора и амплитуду третьей фазы ответа нервного окончания при ритмическом раздражении

3.9. Влияние неметаболизируемого аналога арахидоновой кислоты - ЕТУА на нервно-мышечную передачу

3.10. Действие детергента - деоксихолата на нервно-мышечную передачу

3.11. Влияние арахидоновой кислоты на процессы экзо- и эндоцитоза в двигательных нервных окончаниях

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. Влияние арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания

4.2. Эндогенный синтез арахидоновой кислоты в области нервно-мышечного синапса

4.3. Роль метаболитов арахидоновой кислоты в модуляции секреции медиатора и ионных токов двигательного нервного окончания.

4.4. Влияние арахидоновой кислоты и простагландина Ег на секрецию медиатора и амплитуду третьей фазы ответа нервного окончания при ритмическом раздражении

4.5. Прямые эффекты арахидоновой кислоты на механизм секреции медиатора и ионные каналы двигательного нервного окончания

4.6. Исследование роли арахидоновой кислоты и фосфолипазы Аг в процессах эндоцитоза синаптических везикул

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы действия арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки"

Актуальность исследования

Изучение механизмов действия внутриклеточных посредников является актуальной задачей нейрофизиологии. Арахидоновая кислота и ее метаболиты относятся к одной из систем вторичных посредников, которые опосредуют эффекты нейромедиаторов и гормонов, играют важную роль в воспалительных процессах и нейродегенеративных заболеваниях (Katsuki et al., 1995; Brash, 2001; Крутецкая и др., 2003; Bazan, 2003; Strokin et al., 2003). Образование арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов происходит с помощью фосфолипазы А2 при активации метаботропных рецепторов, таких как Р2у пуриновые рецепторы в двигательном нервном окончании (Grishin et al., 2005) и астроцитах (Bruner, Murphy, 1993), Mi мускариновые рецепторы в верхнем шейном ганглии крысы (Liu, Rittenhouse, 2003). Одним из факторов, приводящих к активации фосфолипазы А2, является увеличение внутриклеточной концентрации ионов Са (Katsuki et al., 1995). Показано также, что эффекты перекиси водорода в гладких мышцах опосредуются эндогенным образованием арахидоновой кислоты (Barlow et al., 2000). В центральной нервной системе арахидоновая кислота участвует в регуляции секреции медиатора, в поддержании долговременной потенциации в гиппокампе, в модуляции активности ионных каналов (Meves, 1994; Katsuki et al., 1995; Piomelli, 1996; Evans et al., 1999; Nishizaki et al., 1999; Izumi et al., 2000; Liu et al., 2001 ; Chen et al., 2002).

Эффекты арахидоновой и других жирных кислот разделяют на прямые и опосредованные. К прямым эффектам относят непосредственное взаимодействие молекулы арахидоновой кислоты с белковыми комплексами ионных каналов или их липидным окружением, белками экзо- и эндоцитоза и другими сигнальными белками (Ordway et al., 1991; Fraser et al., 1997; Denson et al., 2000). Опосредованное влияние связано с метаболизмом арахидоновой кислоты по циклооксигеназному, липоксигеназному и эпоксигеназному цитохром Р45о-зависимому) путям (Meves, 1994; Katsuki et al., 1995). В нервно-мышечных синапсах холоднокровных и теплокровных животных арахидоновая кислота и ее метаболиты проявляли ингибиторное действие на высвобождение медиатора (Madden, Van der Kloot, 1985; Tsurusaki et al., 1987; Edwards et al., 1990, Grishin et al., 2005). Однако, невыяснены механизмы пресинаптического действия арахидоновой кислоты. Неясно оказывает ли арахидоновая кислота собственные эффекты на секрецию медиатора или они опосредованы ее метаболитами? Простагландины - метаболиты арахидоновой кислоты по циклооксигеназному пути, снижают спонтанную секрецию медиатора из двигательных нервных окончаний (Illes et al., 1977; Tsurusaki, 1987), однако, механизмы действия простагландинов на нервно-мышечную передачу не изучены.

Исследования последних лет свидетельствуют о ключевой роли эндогенных жирных кислот в процессах экзо- и эндоцитоза синаптических везикул (Rohrbough, Broadie, 2005; Zimmerberg, Chernomordik, 2005; Ong et al., 2006), о чем свидетельствуют и эффекты токсинов, обладающих фосфолипазной активностью, на везикулярный цикл (Rigoni et al., 2005; Rossetto et al., 2006; Chernomordik et al, 2006). Поэтому актуальным является анализ влияния арахидоновой кислоты на процессы рециклизации синаптических везикул.

Цель и задачи исследования.

В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:

Положения, выносимые на защиту:

Научная новизна.

В работе впервые проведено комплексное исследование механизмов действия арахидоновой кислоты в нервно-мышечном соединении холоднокровных. Впервые показано, что арахидоновая кислота снижает вызванное освобождение медиатора и этот эффект опосредуются метаболитом по циклооксигеназному пути - простагландином Ег. Впервые показано, что арахидоновая кислота и простагландин Ег снижают кальциевые токи нервного окончания. Установлено, что снижение секреции медиатора под действием арахидоновой кислоты имитируется насыщенными и ненасыщенными жирными кислотами.

Научно-практическая ценность работы.

Исследование имеет теоретическое значение, так как полученные экспериментальные данные позволяют ближе подойти к пониманию физиологической роли арахидоновой кислоты в нервно-мышечном синапсе лягушки. Более глубокое понимание механизмов, регулирующих процессы секреции медиатора, может полнее объяснить механизмы лежащие в основе памяти, поведения, научения, нейродегенеративных заболеваний и т.п. Вскрытие механизмов экзо- и эндоцитоза дает возможность управления этими процессами, что позволяет разрабатывать методы борьбы с проникновением вирусов, эффективного поступления лекарственных препаратов, лечения ряда нейродегенеративных заболеваний. Результаты исследования представляют практическую ценность для физиологов, биофизиков, биохимиков, фармакологов и нейрохимиков при изучении влияния нейромодуляторов, систем вторичных посредников на синаптическую передачу и двигательный аппарат. Полученные данные используются при чтении лекций на кафедре физиологии человека и животных Казанского государственного университета.

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов: РФФИ (02-04-48822, 0304-96252, 05-04-48428, 06-04-49125); «Ведущая научная школа» (НШ-1383.2003.4, НШ-4520.2006.4, гос. контракт № 02.445.11.7351); АН РТ (03.3.10222/2003, 03.3.8-343/2005-2006); АН РТ для молодых ученых (14-7/2005, 129/2006); гранта СПбГУ для аспирантов (СПГА № 04-2.12-546).

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы доложены на следующих конференциях и форумах: Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2002), Всероссийском научном симпозиуме «Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке» (Казань, 2002, 2004, 2006), конференции молодых ученых "Биология - наука 21-го века" (Пущино, 2003, 2005), Международной конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности (Москва, 2003), Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2003, 2005), Международной конференции «Медиаторы в формировании нейрональных сетей» (Ля Сиота, Франция, 2003), XIX Съезде физиологов России (Екатеринбург, 2004), V Съезде физиологов Сибири (Томск, 2005), Международной школе-конференции IBRO «Рецепторы, каналы, мессенджеры» (Ялта 2004), I Съезде физиологов СНГ (Дагомыс, 2005), I Съезде биофизиков России (Воронеж, 2005), IX школе по нейробиологии (Казань, 2005), Международной школе-конференции «Простые нервные системы» (Казань, 2006), Всероссийской конференции «Нейрохимия: Фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), Всероссийской конференции «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС» (Пенза, 2006), ежегодных научных конференциях в Казанском государственном университете.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 печатных работ.

Структура и объем работы.

Диссертация объемом 152 страниц машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов исследования, выводов и списка цитируемой литературы, включающей 247 источников, из которых 32 отечественных и 215 иностранных. Диссертация содержит 36 рисунков и 6 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Яковлева, Ольга Владиславовна

ВЫВОДЫ

7. Неметаболизируемый аналог арахидоновой кислоты - ЕТУА в низких концентрациях (5-10 мкМ) оказывает угнетающее действие на вызванное освобождение медиатора. В высоких концентрациях (20-30 мкМ) ЕТУА вызывает увеличение вызванной секреции медиатора. ЕТУА во всех исследованных концентрациях угнетает потенциалзависимые и кальций-активируемые калиевые токи двигательного нервного окончания лягушки.

8. С помощью флуоресцентной микроскопии показано, что арахидоновая кислота снижает свечение нервных терминалей относительно контроля при «загрузке» красителя БМ 1-43 после стимуляции двигательного нерва с частотой 20 имп/с в течение 3 мин, что свидетельствует о замедлении процесса эндоцитоза синаптических везикул в нервном окончании.

9. Блокатор фосфолипазы А2 - палметилтрифлуорокетон усиливает интенсивность свечения нервных терминалей относительно контроля при «загрузке» БМ 1-43 во время стимуляции и снижает интенсивность свечения при «загрузке» красителя после стимуляции, что свидетельствует об усилении рециклизации синаптических везикул в нервном окончании.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Яковлева, Ольга Владиславовна, Казань

1. Архипова О.В. Пресинаптические эффекты арахидоновой кислоты и простагландина Е2 в нервно-мышечном синапсе / Архипова О.В., Ситдикова Г.Ф., Гришин С.Н., Зефиров А.Л. // Росс, физиол. жур. им. И.М. Сеченова. -2005. Т.95. - С.124-134.

2. Безуглов В. В. Биоактивные амиды жирных кислот / Безуглов В.В., Бобров М.Ю., Арчаков A.B. // Биохимия. 1998. - Т.63(1). - С.27-37.

3. Березин И.В. Основы биохимии: учебное пособие / Березин И.В., Савин Ю.В. // Изд-во МГУ. 1990. - 254с.

4. Бышевский А.Ш. Влияние соединений, модифицирующих превращения арахидоновой кислоты в тромбоцитах, на эффекты этилэстрадиола / Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Шаповалов П.Я// Биохимия. 1994. -Т.1. - С.10-15.

5. Васьковский В.Е. Липиды // Сорос. Образ, жур. 1997. - №3. - С.32-38

6. Гончар М.В. Регуляция арахидоновой кислотой синтеза простаноидов в макрофагах / Гончар М.В., Сергеева М.Г., Мевх А.Т., Варфоломеев С.Д. // Биохимия. 1999. - Т.64. - вып.2. - С.239-246.

7. Зефиров А.Л. Ионные каналы нервного окончания / Зефиров А.Л., Ситдикова Г.Ф. // Успехи физиол. наук. 2002. - Т.ЗЗ. - №4. - С.3-33.

8. Зефиров А.Л. Ионные токи нервного окончания в портняжной мышце лягушки / Зефиров А.Л., Халилов И.А // Нейрофизиол. 1985. - Т. 17. - №6. -С.770-778.

9. Зефиров А.Л. Кальциевые и кальцийактивируемые калиевые токи двигательного нервного окончания лягушки / Зефиров А.Л.,. Халилов И.А, Хамитов Х.С. // Нейрофизиол. 1987. - Т. 19. - №4. - С.467-472.

10. Зефиров А.Л. Механизмы кратковременных форм синаптической пластичности форм синаптической пластичности / Зефиров А.Л., М.А. Мухамедьяров М. // Росс, физиол. жур. им. И.М. Сеченова. 2004. - Т. 90. - № 8. - С.1041-1059.

11. Зефиров A.Jl. Молекулярные механизмы квантовой секреции медиатора в синапсе / Зефиров А.Л., Черанов С.Ю. // Успехи физиол. наук. 2000. - Т.31(3). - С.3-22.

12. Иванов И.В. Цитохром Р45о-зависимый метаболизм арахидоновой кислоты / Иванов И.В., Гроза Н.В., Мягкова Г.И. //Биохимия. 1999. - Т.64. -№7. - С.869-882.

13. Казанский В.В. Методика изготовления "самозаполняющихся" микроэлектродов // Физиол. Жур. СССР. 1973. - Т. 59. - № 6. - С. 695 - 696.

14. Каменская М.А. Современные представления о механизме квантового освобождения медиатора из моторных нервных окончаний скелетной мышцы // Успехи физиологических наук. 1972. - Т. 3. - № 3. - С.22-63.

15. Камкин А.Г. Клиническая и фундаментальная физиология / Камкин А.Г., Каменский A.A. // Изд-во «Академия». 2004. - 1450с.

16. Княжеская Н.П. Аспириновая бронхиальная астма // РМЖ. 1998. - Т.6. -С.23.

17. Когтева Г.С. Ненасыщенные жирные кислоты / Когтева Г.С., Безуглов В.В. // Биохимия. 1998. - Т.63. - Вып.1. - С.6-15.

18. Костюк П.Г. Микроэлектродная техника // Киев: Наукова думка. 1960. -175с.

19. Крутецкая З.И. Механизмы внутриклеточной сигнализации / Крутецкая З.И., Лебедев О.Е, Курилова Л.С. // Монография. Спб.: Изд-во СПбГУ. - 2003. -208с.

20. Лакин Г.Ф. Биометрия // М.: Наука. 1984. -351с.

21. Ленинджер А. Основы биохимии Т1-3 // М: Мир. 1985 - 412 с

22. Марри Р. Биохимия человека / Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуел В. //М.: Мир, 1993.-381с.

23. Мохова E.H. Участие анионных переносчиков внутренней мембраны митохондрий в разобщающем действии жирных кислот / Мохова E.H., Хайлова Л.С. // Биохимия. 2005. - Т. 70. - вып.2. - С. 197-202.

24. Петров A.M. Кинетика рециклирования синаптических везикул в двигательном нервном окончании лягушки / Петров A.M., Зефиров А.Л. // Материалы конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» Изд-во ОО «11-й формат». 2005. - С. 178-181.

25. Сала А. Лейкотриены: липидные биоэффекторы воспалительных реакций / Сала А., Зарини С., БоллаМ.//Биохимия. 1998. -Т.63. - Вып.1. - С.101 - 110.

26. Сергеева М.Г. Простагландин Н-синтаза макрофагов мыши: ингибирующее и активирующее действие бруфена / Сергеева М.Г., Гончар М.В., Намгаладзе Д.А., Мевх А.Т., Варфоломеев С.Д. // Биохимия. 1997. -Т.62. - Вып.З. - С.316-322.

27. Строкин М.Л. Экспериментальное и теоретическое исследование включения арахидоновой кислоты в макрофаги / Строкин М.Л., Сергеева М.Г., Мевх А.Т., Варфоломеев С.Д. //Биохимия. -2001. -Т.66. Вып.З. -С.З83-393.

28. Фалл ер Д.М. Молекулярная биология клетки. Руководство для врачей / Фаллер Д.М., Шидлс Д // Изд-во «Бином-пресс». 2004. - 272с.

29. Хухо Ф. Нейрохимия. Основы и принципы. // Изд-во:«Мир». -1990. -384с.

30. Чизмашев Ю.А. Как сливаются биологические мембраны // Сорос. Образ. Жур. 2001. - Т.7. - №5. - С.4-9.

31. Abe K. Arachidonic acid metabolism in ischemic neuronal damage / Abe K., Yoshidomi M., Kogure K. // Ann NY Acad Sci. 1989. - V.559. - P.259-268.

32. Adesuyi S.A. Lipoxygenase metabolism of arachidonic acid in brain / Adesuyi S.A., Cockrell C.S., Gamache D.A., Ellis E.F. // J. Neurochem. 1985. - V.45. -P.770-776.

33. Amruthesh S.C. Brain synthesis and cerebrovascular action of epoxygenase metabolites of arachidonic acid / Amruthesh S.C., Falck J.R., Ellis E.F. // J. Neurochem. -1992.-V.58. -P.503-510.

34. Anderson M.P. Fatty acids inhibit apical membrane chloride channels in airway epithelia / Anderson M.P., Welsh M.J. // PNAS USA. 1990. - V.87. - P. 7334-7338.

35. Andreasen T.J. Effects of phospholipase A2 on the binding and ion permeability control properties of the acetylcholine receptor / Andreasen T.J., Doerge D.R., McNamee M.G. // Arch Biochem Biophys. 1979. - V. 194(2). - P.468-480.

36. Aramori I. Signal transduction and pharmacological characteristics of a metabotropic glutamate receptor, mGluRl, in transfected CHO cells / Aramori I., Nakanishi S. //Neuron. 1992. - V.8. - P.757-765.

37. Axelrod J. PLA2 and G proteins. // Trends Neurosci. 1995. - V.18. - P. 64-65.

38. Axelrod J. Receptor-mediated activation of phospholipase A2 and arachidonic acid release in signal transduction // Biochem. Soc. Trans. 1990. - V.18. - P.503-507.

39. Axelrod J. Receptor-mediated activation of phospholipase A2 via GTP-binding proteins: arachidonic acid and its metabolites as second messengers / Axelrod J., Burch R. M., Jelsema C. L. // Trends Neurosci. 1988. - V.l 1. - P.l 17-123.

40. Baker R.R. Positional distribution and turnover of fatty acids in phosphotidic acid, phosphoinositides, phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine in rat bran / Baker R.R., Thompson W // Biochim Biophys Acta. 1972. - V.270. - P.489-503.

41. Barlow R.S. H202 opens BKca channels via the PLA2-arachidonic acid signaling cascade in coronary artery smooth muscle / Barlow R.S., El-Mowafy A.M., White R.E. // Am. J. Physiol. 2000. - V.279. - P.475-483.

42. Barr G.O. On the nature and role of fatty acid essential in nutrition / Barr G.O., Barr M.M. // J. Biol. Chem. 1930. - V.86. - P.587-621.

43. Bazan A.R. Arachidonic acid as a bioactive molecule // Prostag and their precursors. 2001. -V. 107. - P. 1339-1345.

44. Bazan N.G. Synaptic lipid signaling: significance of polyunsaturated fatty acids and platelet-activating factor // J Lipid Res. 2003. - V.44. - P.2221-2233.

45. Bazan N.G.Jr Increased levels of brain free fatty acids after electroconvulsive shock / Bazan N.G.Jr, Rakowski H. // Life Sci. 1970. - V.9. - P.501-507.

46. Bell R.L. DG lipase: a pathway for arachidonate release from human platelets / Bell R.L., Kennerly D.A., Stanford N. // PNAS. 1979. - V.76. - P.3238-3241.

47. Ben-Ari Y. Protein kinase C modulation of NMD A currents: an important link for LTP induction / Ben-Ari Y, Aniksztejn L, Bregestovski P. // Trends Neurosci. -1992. V.15 (9). - P.333-339.

48. Betz W.J. Optical analysis of synaptic vesicle recycling at the frog neuromuscular junction / Betz W.J., Bewick G.S. // Science. 1992. - V. 255 (5041).- P.200-203.

49. Birkle D.L. Effect of bicuculline-induced status epilepticus on prostaglandins and hydroxyeicosatetraenoic acids in rat brain subcellular fractions/ Birkle D.L., Bazan N.G. //J Neurochem. 1987.- V.48. - P.1768-1778.

50. Blackwood R.A. PLA2 promotes fusion between PMN-specific granules and complex liposomes / Blackwood RA., Transue AT., Harish DM et al // J Leukoc Biol.- 1996. V.59. - P.663-670.

51. Bliss T.V.P. A synaptic model of memory: long-term potentiation in the hippocampus / Bliss T.V.P., Collingridge G.L. // Nature. 1993. - V.361. - P. 31-39.

52. Brash A.R. Arachidonic acid as a bioactive molecule // J. Clinical Investigation. 2001. - V. 107. - № 11. - P. 1339-1345.

53. Brock T.G. Arachidonic acid is preferentially metabolized by cyclooxygenase-2 to prostacyclin and prostaglandin E2 / Brock T.G., McNish R.W., Peters-Golden M. // J Biol Chem. 1999. - V.274. - P. 11660-11666.

54. Brown W.L. Phosphlipase A2 enzymes in membrane trafficking: mediators of membrane shape and function / Brown W.L., Chambers K., Doody A // Traffic. -2003.-V.4. -P.214-221.

55. Bruner G. Purinergic P2Y receptors on astrocytes are directly coupled to phospholipase A2 / Bruner G., Murphy S. // Glia. 1993. - V.7(3). - P.219-224.

56. Capdevila J.H. Novel hypothamamic arachidonate products stimulate somatostatin release from the medianeminence / Capdevila J.H., Chacos N., Falck J.R. Manna S., Negro-Vilar A., Ojeda S.R. // Endocrinology. 1983. - V.113. -P.421-423.

57. Casavant R.H. Fatty acid-activated K+ channels in autonomic neurons: activation by an endogenous source of free fatty acids / Casavant R.H., Xu Z., Dryer S.E. // J Neurochem. 2000. - V.74. - P. 1026-1033.

58. Chen C. Cyclooxygenase-2 regulates prostaglandin E2 signaling in hippocampal long-term plasticity / Chen C., Magee J.C., Bazan N.G. // J. Neurophysiol. 2002. - V.87. - P.2851-2857.

59. Chen I.L. Ultrastructural changes in the motor nerve terminals caused by beta-bungarotoxin / Chen I.L., Lee C.Y. // Virchows Arch B Cell Pathol. 1970. - V.6. -P.318-325.

60. Chen W-H. Arachidonic acid-induced H+ and Ca2+ increases in both the cytoplasm and nucleoplasm of rat cerebellar granule cells / Chen W-H., C-R Chen, K-T Yang, W-L Chang, M-J Su, C-C Wu, Mi-L Wu // J. Physiol. 2001. - V.537. -P.497-510.

61. Chernomordik L.V. Menbranes of the world unite / Chernomordik L.V., Zimmerberg J, Kozlov M.M. // J Cell Biol. 2006. - V. 175. - №2. - P.201-207.

62. Chow S.C. Suppression of growth in a leukemic T cell line by n-3 and n-6 polyunsaturated fatty acids / Chow S.C., Sisfontes L, Bjorkhem I, Jondal M. // Lipids. 1989. - V.24(8). - P.700-704.

63. Clarke A. Modulation of BKca channels activity by fatty acids: structural requirements and mechanism of action / Clarke A., Petrou S., Walsh J.V., Singer J.J. // Am. J. Physiol. 2002. - V.283. - P.C1441-C1453.

64. Colbert C.M. Arachidonic acid reciprocally alters the availability of transient and sustained dendritic K(+) channels in hippocampal CA1 pyramidal neurons / Colbert C.M, Pan E. //J. Neurosci. 1999. - V. 19(19). - P.8163-8171.

65. Cossins A.R. Evolutionary adaptation of membrane to temperature / Cossins A.R., Prosser C.L. // PNAS. 1978. - V. 75. - P.2040-2043.

66. Crosland R.D. Effect of arachidonic acid on twitch tension of the rat phrenic nerve diaphragm // J. Pharmacol Exp. Ther. 1993. - V.264. - P. 1311-1314.

67. Cull-Candy S.G. The effects of taipoxin and notexin on the function and fine structure of the murine neuromuscular junction / Cull-Candy S.G., Fohlman J., Gustavsson D., Lullmann-RauchR. //Neurosci. 1976. - V.l. - P. 175-180.

68. Danthi S.J. Modulation of native T-type calcium channels by x-3 fatty acids / Danthi S.J., J.A. Enyeart, J.J. Enyeart // Biochem Biophys Res Comm. 2005. -V.327. - P.485-493.

69. De George J.J. Intravenous injection of (14C) arachidonate to examine regional brain lipid metabolism in unanesthetized rat / De George J.J., Noronha J.G., Bell J., Rapoport S.I. //J Neurosci Res. 1989. - V.24. - P.413-423.

70. Deka N. Purification and properties of acyl-CoA: l-acyl-s/7-glycero-3-phosphocholine-O-acyltransferase from bovine brain microsomes / Deka N., Sun G.Y., MacQuarrie R. // Arch Biochem Biophys. 1986. - V. 246. - P.554-563.

71. Delton-Vandenbroucke I. Modulation of norepinerphrin stimulated cycle AMP accumulation in rat pinealocytes by n-3 fatty acid / Delton-Vandenbroucke I., Sarda N. // Eur J Pharm. 1996. - V.3. - P.379-384.

72. Denson D.D. Effects of fatty acids on BK channels in GH3 cells / Denson D.D., Wang X., Worrell R.T., Eaton D.C. // Cell Physiology. 2000. - V. 279. -P.C1211-C1219.

73. Devor D.C. Modulation of K+ channels by arachidonic acid in T84 cell. Activation of a Ca2+-dependent K+ channel / Devor D.C., Frizzell R.A. // Am. J. Physiol. 1998. - V. 274 - P.C149-C160.

74. Dhopeshwarkar G.A. Biosynthesis of polyunsaturated fatty acids in the developing brain: metabolic transformations of intracranially administered 1-14C linoleic acid / Dhopeshwarkar G.A, Subramanian C. // Lipids. 1976. - V. 11. -P.67-71.

75. Diaz B.L. Phosphlipase A2 / Diaz B.L., Arm J.P. // Prostag Leukot Essent FA. 2003. - V. 69. - P.87-97.

76. Dobrunz L.E. Heterogeneity of release probability, facilitation, and depletion at central synapses / Dobrunz L.E., Stevens C.F. // Neuron. 1997. - V.18(6). -P.995-1008.

77. Doroshenko N. Ca2+ influx is not involved in acute cytotoxicity of arachidonic acid / Doroshenko N, Doroshenko P // Biochem Pharm. 2003. - V.67. - P.903-909.

78. Downey P. Renal concentrating defect in mice lacking group IV cytosocil phospholipase A2 / Downey P., Sapirstein A., O'Leary et al // Am J Physiol. Renal. Physiol. 2001. - V. 280. - P.F607-F618.

79. DuBourdieu D.J. Multiple pathways for signal transduction in the regulation of arachidonic acid metabolism in rat peritoneal macrophages / DuBourdieu D.J., Morgan D.W. // Biochim Biophys Acta. 1990. - V. 1054(3). - P.326-332.

80. Dumuis A. NMDA-receptors activate the arachidonic acid cascade system in striatal neurons / Dumuis A., Sebben, M., Haynes, L., Pin, L.-P., Bockaert, J. // Nature. 1988. - V. 336. - P.68-70.

81. Dutta A.K. Regulation of an ATP-conductive large-conductance anion channel and swelling-induced ATP release by arachidonic acid / Dutta A.K., Y. Okada, R. Z. Sabirov // J. Physiology. 2002. - V.542. - P.803-816.

82. Edwards J. The effect of inhibitors arachidonic acid metabolism on spontaneous and evoked endplate potentials at normal and frog neuromuscular junction / Edwards J., Hawgood B.J., Smith I.C. // Toxicon. 1990. - V.28. - P.985-988.

83. Ellis E.F. Dilation of celebral arterioles by cytochrome P450 metabolites of arachidonic acid / Ellis E.F., Police R.J., Yancey L., McKinney J.S., Amruthesh S.C // Am J Physiol. 1990. - V. 259. - P.HI 171-H1177.

84. Evans A.R. The cAMP transduction cascade mediates the PGE2-induced inhibition of potassium currents in rat sensory neurons / Evans A.R., Vasko M.R., Nicol G.D. // J Physiol. 1999. - V.516. - P. 163-178.

85. Exton J.H. Signaling through phosphatidylcholine breakdown // J Biol Chem. -1990.-V.265.-P.1-4.

86. Faraci F.M. Arachidonate dilates basilar by lipoxygenase-dependent mechanism and activation of K+ channels / Faraci F.M., Sobey C.G., Chrissobolis S., Lund D.D. et al. // Am J Physiol. 2001. - V.281. - P.R246-R253.

87. Farooqui A.A. Brain phospholipases A2: a perspective on the history / Farooqui A.A., Horrocks L.A. //Prostag Leukot Essen FA. 2004. - V.71(3). - P. 161-169.

88. Farooqui A.A. Deacylation and reacylation of neural membrane glycerophospholipids / Farooqui A.A., Horrocks L.A., Farooqui T. // J Mol Neurosci. -2000.-V. 14(3). -P.123-135.

89. Farooqui AA Characterization and solubilization of membrane bound diacylglycerol lipases from bovine brain / Farooqui AA, Taylor WA, Horrocks LA. //J. Biochem. 1986. -V. 18. - P.991-997.

90. Forst S. Structural and functional properties of a phospholipase A2 purified from an inflammatory exudates / Forst S., Weiss J., Elsbach P. et al. // Biochem. -1986. V.25. - P.8381-8385.

91. Gaiti A. The aging brain: A normal phenomenon with not-so-normal arachidonic acid metabolism. // Ann NY Acad Sci. 1989. - V.559. - P.365-373.

92. Gallai-Hatchard J. The formation of lysophosphatides from diacyl phosphatides by brain preparations / Gallai-Hatchard J., W. Magee, R. Thompson, G.R. Webster // J.Neurochem. 1962. - V.9. - P.545-554.

93. Ghiara P. The cyclo-oxygenase pathway in the vascular heart of the frog, Rana esculenta / Ghiara P., Parente L., Piomelli D. // Gen Pharmacol. 1984. - V.15. -P.309-313.

94. Gijon M. Recent advances in the regulation of cytosolic phospholipase A2 / Gijon M., Spenser D.M., Leslie C.C. // Advan Enzyme Regul. 2000. - V.40. -P.255-268.

95. Gill R Membrane structure-function relationships in cell-mediated cytolysis. Effect of exogenously incorporated fatty acids on effector cell function in cellmediated cytolysis / Gill R, Clark W. // J. Immunol. 1980. - V.125. - P.689-695.

96. Glitsch M.D. Effects of inhibitors of the lipo-oxygenase family of enzymes on the store-operated calcium current ICRAC in rat basophilic leukaemia cells / Glitsch M.D., Bakowski D„ Parekh A.B. // J. Physiol. 2002. - V.539. - P.93-106.

97. Goda Y. Calcium regulation of neurotransmitter release: reliably unreliable / Goda Y, SudhofTC. // Curr Opin Cell Biol. 1997. - V.9(4). - P.513-518.

98. Grishin S.A. Mechanisms of ATP action on motor nerve terminals at the frog neuromuscular junction / Grishin S, A. Shakirzyanova, A. Giniatullin, R. Afzalov, R. Giniatullin // Eur. J. Neurosci. 2005. - V.21. - P.1271-1279.

99. Gronchi V. Richerche sulla lecitinasi "A" del pancreases; estrazione dell'enzima e sua azione in vitro // Experimentale. 1932. - V.90, - P.223-230.

100. Hammarstrom S. Increased consentrations of nonesterified arachidonic acid, 12L-hydroxy-5,8,10,14-eicosatetraenoic acid, prostaglandin E2, and prostaglandin F2 in epidermis of psoriasis // PNAS. 1975. - V.1299. - P. 1-15.

101. Harish O.E. Retrograde modulation at neuromuscular synapses: involvement of G-protein and arachidonic acid cascade / Harish O.E., Poo M.M. //Neuron. 1992. -V.34.-P.765-769

102. Harris J.B. The neurotoxicity of the venom phospholipase A2, notexin and taipoxin / Harris J.B., Grubb B.D., Maltin C.A., Dixon R. // Exp. Neurol. 2000. -V.161. - P.517-526.

103. Hatton C.J. Effects of cytochrome P-450 inhibitors on ionic currents in isolated rat type I carotid body cells / Hatton C.J., Peers C. //Am. J. Physiology. 1996. -V.271. -P.C85-C92.

104. Hemker D.P. Actions of indomethacin and prostaglandins E2 and D2 on nerve transmission in the nictitating membrane of the cat / Hemker D.P., Aiken J.W. // Prostaglandins. 1981. - V.22(4). - P.599-611.

105. Heron D.S. Lipid fluidity markedly modulates the binding of serotonin to mouse brain membranes / Heron D.S., Shinitzky M., Hershkowitz M., Samuel D.// PNAS. 1980. - V.77. - P.7463-7467.

106. Hildebrandt E. Regulationof calcium influx and Catecholamine secretion in chromafin cells by a cytochrome P450 metabolite of arachidonic acid / Hildebrandt E., J. P. Albanesi, J. R. Falck, and W. B. Campbell // J Lipid Res. 1995. - V.36. -P.2599-2608.

107. Hodgson W.C. In vitro neuromuscular activity of snake venoms / Hodgson W.C., Wickramaratna J.C. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2002. - V.29(9). -P.807-814.

108. Horimoto N. Arachidonic acid activation of potassium channels in rat visual cortex neurons / Horimoto N., Nabekura J., Ogawa T. // Neuroscience. 1997. -V.77(3). - P.661-671.

109. Huag Y-S. Enzymes for transgenic biosynthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids / Huag Y-S., S.L. Pereira, A.F. Leonard // Biochimie. 2004. - V. 86. -P.793- 798.

110. Huang J. Long-chain fatty acids activate calcium channels in ventricular myocytes / Huang J., Xian H., Bacaner M. // PNAS. 1992. - V.89, - P.6452-6456.

111. Huang K.P. How is protein kinase C activated in CNS / Huang K.P., Huang F.L. // Newochem. Int. 1993. - V.22. - P.417-433.

112. Huang W. Calcium mobilization from the intracellular mitochondrial and nonmitochondrial stores of the rat cerebellum / Huang W., Chueh S. // Brain Research 1996.- V.718. P.151-158.

113. Hwang T.C. Direct modulation of secretory chloride channels by arachidonic and other cis unsaturated fatty acids / Hwang T.C., Guggino S.E., and Guggino W.B. // PNAS. 1990. - V. 87. - P.5706-5709.

114. Ikeda S.R. Prostaglandin modulation of Ca2+ channels in rat sympathetic neurons is mediated by guanine nucleotide binding // J. Physiol. 1992. - V. 458. -P.339-359.

115. Illes P. Effect of prostaglandins El and F2 alpha on neuromuscular transmission in the frog sartorius muscle / Illes P., Magazanik L.G., Knoll J. // Acta Physiol. Acad. Sci. Hung. 1977. - V. 49(3-4). - P.235-239.

116. Irvine R.F. How is the level of free arachidonic acid controlled in mammalian cells? // Biochem J. 1982. - V. 204. - P.3-16.

117. Izumi Y. Arachidonic acid rescues hippocampal long-term potentiation blocked by group I metabotropic glutamate receptor antagonists / Izumi Y., Zarrin

118. A.R., Zorumski C.F. //Neuroscience. 2000. - V. 100(3). - P.485-491.

119. Kang L-T. Momo(S)hydroxy fatty acids: novel ligands for cytosolic actin / Kang L-T., Vanderhoek J.Y. // J Lipid Res. 1998. - V.39. - P. 1476-1482

120. Katsuki H. Arachidonic acid as a neurotoxic and neurotrophic substance / Katsuki H., Okuda S. // Prog Neurobiol. 1995. - V.46. - P.607-636.

121. Katsuki H. Arachidonic acid: toxic and trophic effects on cultured hippocampal neurons / Katsuki H., Okuda S.5 Saito H. //Neurosci. 1994. - V.63. - P.691-699.

122. Kattah L.R. Analysis of fatty acids release by crotoxin in rat brain synaptosomes / Kattah L.R., Ferraz V., Santoro M.M. et al. // Toxicon. 2002. -V.40. - P.43-49.

123. Katz B. The timing of calcium action during neuromuscular transmission / Katz

124. B, Miledi R. //J Physiol. 1967. -V. 189(3). - P.535-544.

125. Kent J.D. Identification and regulation of protein kinase C-delta in human neutrophils / Kent, J.D., Sergeant, S., Bums, D.J., and MePhail, L.C. // J. Immunol. -1996. V.l57.-P.4641-4647.

126. Kim D. A mechanosensitive K+ channel in heart cells. Activation by arachidonic acid. //J. gen. Physiol. 1992. - V.l00. - P. 1021-1040.

127. Klann, E. Persistent protein kinase activation in the maintenance phase of long-term potentiation / Klann, E., Chen, S. J., and Sweatt, J. D. // J. Biol. Chem. 1991. - V.266. - P.24253-24256.

128. Knapp H.R. The antihypertensive effects of fish oil. A controlled study of polyunsaturated fatty acid supplements in essential hypertension / Knapp H.R., FitzGerald G.A. //N. Engl. J. Med. 1989. - V.320(16). - P. 1037-1043.

129. Koide H. Isolation and characterization of the e subspecies of protein kinase C from rat brain / Koide H., Ogita K., Kikkawa U. // PNAS. 1992. - V.89. - P.l 1491153.

130. LaBelle F.E. Norepinephrine stimulates arachidonic acid release from vascular smooth muscle via activation of cPLA2 / LaBelle F.E., Polyak E. //Am. J. Phisiol.1998.-V.274.-P.C1129-C1137.

131. Lambeau G. Structural elements of secretory phospholipases A2 involved in the binding to M-type receptors / Lambeau G., P. Ancian, J-P. Nicolas, S. H. W. Beiboer, D. Moinier, H. Verheij, M. Lazdunski // J. Biol. Chem. 1995. - V.270. -P.5534-5540.

132. Lauritzen N. Polyunsaturated fatty acids are potent neuroprotectors / Lauritzen, N. Blondeau, N. Heurteaux, C. Widmann, G. Romey, M. Lazdunski // EMBOJ.- 2000. V.19. - P.1784—1793.

133. Lazarewicz J. NMDA-sensitive glutamate receptors induce Ca-mediated arachidonic acid release in primary cultures of cerebellar granule cells / Lazarewicz, J. W., Wroblewski, J. T., Costa E. // J. Neurochem. 1990. - V.55. - P. 1875-1881.

134. Leaf A. Clinical prevention of sudden cardiac death by n3 polyunsaturated fatty acids and mechanism of prevention of arrhythmias by n3 fish oils / Leaf A., J.X. Kang, Y.-F. Xiao, G.E. Billman // Circulation. 2003. - V.107. - P.2646-2652.

135. Leifert W.R. Saint Inhibition of cardiac sodium currents in adult rat myocytes by n3 polyunsaturated fatty acids / Leifert W.R., E.J. McMurchie // J. Physiol.1999.-V.520(3).-P 671-679.

136. Lim D.Y. Influence of arachidonic acid on catecholamine secretion in the perfused rat adrenal medulla / Lim D.Y., Choi M.K., Kang T.J., Lee J.J. et al. // Korean. J. Intern. Med. 1993. - V.8. - P. 103-113.

137. Linsdell P. Inhibition of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator chloride channel currents by arachidonic acid // Can. J. Physiol. Pharmacol. 2000. -V.78.-P. 490-499.

138. Lister M.D. Cyclopentanoid analogs of phosphatidylcholine: susceptibility to phospholipase A2 / Lister M.D., Hancock A.J. // J Lipid Res. 1988. - V.29(10). -P.1297-1308.

139. Liu L. Arachidonic acid mediates muscarinic inhibition and enhancement of2+

140. N-type Ca current in sympathetic neurons / Liu L, A. R. Rittenhouse // PNAS. -2003. -V. 100. -№ 1. P.295-300.

141. Liu L. Arachidonic acid both inhibis and enhances whole cell Ca2+ currents in rat sympathetic neurons / Liu L., Barrett C.F., Rittenhouse A.R. // Am. J. Physiol Cell Physiol.- 2001. V.280.-P.C1293-C1305.

142. Liu L. Arachidonic acid mediates muscarinic inhibition and enhancement of N-type Ca2+ current in sympathetic neurons / Liu L, Rittenhouse A.R. // PNAS. 2003. -V.lOO(l).- P.295-300.

143. Louis N.A. Lipid mediator networks and leukocyte transmigration / Louis N.A., Hamilton K.E., Colgan S.P. // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. -1991. V.73(3-4). - P.197-202.

144. Lu T. Dihydroxyeicosatrienoic acids are potent activators of Ca(2+)-activated K(+) channels in isolated rat coronary arterial myocytes / Lu T., Katakam P.V., Van Rollins M., Weintraub N.L et al. // J. Physiol. 2001 - V.534. - P.651-667.

145. Macica C.M. Arachidonic acid inhibits activity of cloned renal K+ channel, ROMK1 /Macica C.M., Yang Y, Hebert S.C., Wang W.H. // Am. J. Physiol. 1996.- V.271(3). P.F588-F594.

146. Madden K.S. Indomethacin, prostaglandin E2 and transmission at the frog neuromuscular junction / Madden K.S, Van der Kloot W. // J. Pharmacol. Exp. Ther.- 1985. V.232. - P.305-314.

147. Mallart A. Electric currents flow inside perineural sheaths of mouse motor nerves // J. Physiol. 1985. - V.368. - P.565-575.

148. Mameya S. Arachidonic cascade and stimulation of acetylcholine release by human recombinant interleukin-1 beta in guinea pig ileum / Mameya S., Sawa T., Taniyama K. //J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995. - V.275. - P.319-324.

149. Martin R.E. Docosahexaenoic, arachidonic, palmitic, and oleic acids are differentially esterified into phospholipids of frog retina / Martin R.E., Hopkins S.A.,

150. Brush R.S., Williamson C.R. et al. // Prost. Leukotr. Esset. Fatty Acids. 2002. -V.67. - P. 105-111.

151. McGanon B. Analysis of the effect of membrane arachidonic acid concentration on modulation of glutamate release by interleukin-1: an age-related study / McGanon B, Murray CA, Clements MP, Lynch MA. // Exp. Gerontol. 1998.- V.33(4). P.343-354.

152. McGanon B.M. Age-related changes in synaptic function: analysis of the effect of dietary supplementation with raMMa-3 fatty acids / McGanon B. M, D.S.D. Martin, D.F. Horrobin, M.A. Linch // Neurosci. 1999. - V.94. - № 1. - P.305-314.

153. Mead J.F. The non-eicosanoid functions of the essential fatty acids. // J. Lipid. Res. 1984. - V.25. - P.1517-1521.

154. MePhail L.S. inhibition of receptor-mediated calcium influx in T cells by unsaturated non-esterified fatty acids / MePhail L.S., Claiton C.C., Snyderman R. // Science. 1984. - V.224. - P.622-626.

155. Meves H. Modulation of ion channels by arachidonic acid. // Prog. Neurobiol.- 1994. -V.43. P.175-186.

156. Montecucco C. How do presynaptic PLA2 neurotoxins block nerve terminals? / Montecucco C., Rossetto O. // Trends Biochem Sci. 2000. - V.25. - P.266-270.

157. Nagano N. Effect of arachidonic acid on A-type potassium currents in smooth muscle cells of the guinea pig / Nagano N., Imaizumi Y., Watanabe M. // Am. J. Physiol. 1997. - V.272. - P.860-869.

158. Nakamura S. Lipid mediators and protein kinase C activation for the intracellular signaling network / Nakamura S., Nishizuka Y. // J. Biochem. 1994. -V.l 15. - P.1029-1034.

159. Nakanishi H. Purification and characterization of the zeta isoform of protein kinase C from bovine kidney / Nakanishi H., Exton J.H. // J. Biol. Chem. 1992. -V.267(23). - P.16347-16354.

160. Naor Z. Arachidonic acid and lipoxygenase products stimulate gonadotropin alpha-subunit mRNA levels in pituitary alpha T3-1 cell line: role in gonadotropin releasing hormone action // Mol. Cell. Endocr. 1991. - V.80. - P.C181-C186.

161. Nashio H. Ca2+-independent fusion of synaptic vesicles with phospholipase A2-treated presynaptic membranes in vitro / Nashio H., Takeuchi T., Hata F., Yagasaki 0. // Biochem. J. 1996. - V.318. - P.981-987.

162. Naves L.A. Repetitive nerve stimulation decreases the acetylcholine content of quanta at the frog neuromuscular junction / Naves L.A., Van der Kloot W. // J Physiol. 2001. - V.532(Pt 3). - P.637-647.

163. Negretti N. Inhibition of sarcoplasmic reticulum function by polyunsaturated fatty acids in intact, isolated myocytes from rat ventricular muscle / Negretti N., M. R. Perez, D. Walker, S. C. O'Neill // J. Physiol. 2000. - V.2. - P.367—375.

164. Nishizaki T. Arachidonic acid potentiates currents through Ca2q-permeable AMPA receptors by interacting with a CaMKII pathway / Nishizaki T., T. Matsuoka, T. Nomura, G. Enikolopov, K. Sumikawa // Mol. Brain Res. 1999b. - V.67. -P. 184-189.

165. Nishizaki T. Modulation of ACh receptor currents by arachidonic acid / Nishizaki T., T. Matsuoka, T. Nomura, K. Sumikawa // Mol. Brain Res. 1998. -V.57. - P. 173-179.

166. Nishizaki T. Short-term depression and lond-term enhancement of Ach-gated channel currents induced by linoleic and linolenic acid / Nishizaki T., Ikeuchi Y., Matsuoka T., Sumikawa K. // Brain Res. 1997. - V.751. - P.253-258.

167. Nishizuka Y. Intracellular signaling by hydrolysis of phospholipids and activation of protein kinase C // Science. 1992. - V.258. - P.661-665.

168. Nitsch R.M. Evidence for a membrane defect in Alzheimer disease brain / Nitsch R.M., Blusztajn J.K., Pittas A.G., Slack B.E. // PNAS. 1992. - V.89. - P. 1671-1675.

169. Normandin M. Involvement of the 12-lipoxygenase pathway of arachidonic acid metabolism in homosynaptic long-term depression of the rat hippocampus / Normandin M., Gagne J., Bernard J., Elie R. et. al. // Brain Res. 1996. - V.730. -P.40-46.

170. Nozawa Y. Phospholipid-mediated signaling in receptor activation of human platelets / Nozawa Y., Nakashima Sh., Nagata K. // Biochim. Biophys. Acta. 1991. - V.1082. - P.219-238.

171. Ogita K. Isolation and characterization of c-subspecies of protein kinase C from rat brain / Ogita K., Miyamoto S., Yamaguchi K., Koide H. et al. // PNAS USA. 1992. - V.88. - P.l 1285-11289.

172. Ogorochi T. Regional distribution of prostaglandins D2, E2 and F2 and related enzymes in the postmortem human brain / Ogorochi T., Narumiya S., Mizuno N., Yamashita K. // J. Neurochem. 1984. - V.43. - P.71-82.

173. Ohta K. Stearic acid facilitates hippocampal neurotransmission by enhancing nicotinic Ach receptor responses via a PKC pathway / Ohta K., Miyamoto H., Yaguchi T. Nagai K. et al. // Mol. Brain. Res. 2003. - V.l 19. - P.83-89.

174. Ong W.L. Diffential effects of polyunsaturated fatty acids on membrane capacitance and exocytosis in rat pheochromocytoma-12 cells / Ong W.L., Jiang B., Tang N., Ling S.F. et al. // Neurochem. Res. 2006. - V.31. - P.41-48.

175. Ordway R.W. Direct regulation of ion channels by fatty acids / Ordway R.W., Singer J.J., Walsh J.V. // TINS. 1991. - V.14(3). - P.96-100.

176. Patel A.J. A mammalian two pore domain mechano-gated S-like K+ channel / Patel A.J., Honore E., Maingret F., Lesage F. et al. // EMBO J. 1998. - V.17. -P.4283-4290.

177. Pickard R.T. The role of arachidonic acid in physiology and pathophysiology / Pickard R.T., Strifler B.A., Kramer R.M., Sharp J.D. // J. Biol. Chem. 1999. -V.174. - P.8823-8831.

178. Piomelli D. Arachidonic acid in cell signaling // Curr. Opin. Cell Biol. 1993. -V.2. - P.274-280.

179. Piomelli D. Arachidonic acid in cell signaling // US and Canada Copyright. -1999. -200 p.

180. Piomelli D. Inhibition of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II by arachidonic acid and its metabolites / Piomelli D., Wang J.K., Sihra T.S., Nairn A.C. et al. //Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1989. - V.21. - P.8550-8554.

181. Piomelli D. Metabolism of arachidonic acid in nervous system of marine mollusk Aplysia californica // Am. J. Physiol. -1991. V.260. - P.844-848.

182. Raghupathi R. Inhibition of phospholipase A2 by cis-unsaturated fatty acids: evidence for the binding of fatty acid to enzyme / Raghupathi R., Franson, R.C. // Biochim. Biophys. Acta. 1992. -V. 1126. - P.206-221.

183. Ram well P.W. Prostaglandin: release from the rat phrenic nerve-diafhragm preparation / Ramwell P.W., Shaw J.E., Kucharski J. // Science. 1965. - V.149. -P.1390-1391.

184. Rao K.V. Diacylglycerol kinase is stimulated by arachidonic acid in neural membranes / Rao K.V., Vaidyanathan V.V., Sastry P.S. // J. Neurochem. 1994. -V.63(4). - P. 1454-1459.

185. Reddy T.S. Arachidonic acid and other long-chain fatty acids in canine ceroid lipofusion. Distribution in glycerolipids, metabolism, and pathophysiological correlations / Reddy T.S., Bazan N.G. // Neurochem. Pathol. 1985. - V.3(2). - P.83-97.

186. Redman R.S. The simultaneous electrophysiological measurements of neurotransmitter release and perineural calcium currents from frog motor nerve endings / Redman R.S., Silinsky E.M. // J. Neurosci. Methods. 1995. - V.57(2). -P.151-159.

187. Rhoads D.E. Release of neurotransmitter amino acids from synaptosomes: enhancement of calcium-independent efflux by oleic and arachidonic acids / Rhoads D.E., Osburn L.D., Peterson N.A., Raghupathy E. // J. Neurochem. 1983. -V.41(2). -P.531-537.

188. Richards D.A. Synaptic vesicle pools at the frog neuromuscular junction / Richards D.A., Guatimosim C., Rizzoli S.O., Betz W.J. // Neuron. 2003. - V. 39(3).- P.529-541.

189. Richieri G.V. A fluorescently labeled intestinal fatty acids binding protein. Interactions with fatty acids and its use in monitoring free fatty acids / Richieri G.V., Ogata R.T., Kleinfeld A.M. // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267. - P.23495-23501.

190. Richieri G.V. Short term exposure to cis unsaturated free fatty acids inhibits degranulation of cytotoxic T lymphocytes / Richieri G.V., Mescher M.F., Kleinfeld A.M.//J. Immunol.- 1990.-V. 144. P.671-677.

191. Rickman C. Arachidonic acid allows SNARE complex formation in the presence of Muncl8 / Rickman C., Davletov B. // Chem. Biol. 2005. - V. 12. -P.545-553.

192. Rigoni M. Equivalent effects of snake PLA2 neurotoxins and lysophospholipid-fatty acid mixtures / Rigoni M., Caccin P., Gschmeissner S., Koster G., Postle A.D, Rossetto O., Schiavo G., Montecucco C. // Science. 2005. - V.310.- P.1678-1680.

193. Ristan A. Fatty acids: structure and properties / A. Ristan, K. Drevon // Encyclopedia of life science Nature publishing group. 2001. - P. 1-6.

194. Rizzoli S.O. Synaptic vesicle pools / Rizzoli S.O. Betz W.J. // Nat. Rev. Neurosci. -2005. V.6(l). -P.57-69.

195. Rohrbough J. Lipid regulation of the synaptic vesicle cycle / Rohrbough J., Broadie K. // Nat. Rev. Neurosci. 2005. - V.6. - P. 139-150.

196. Rosenstock M. Dual regulation of PLA2 and PGI2 production by G proteins in bovine aortic endothelial cells / Rosenstock M., Danon A., Rimon G. // Am. J. Physiology 1996. - V.271. -P.C555-C562.

197. Rousaire-Dubois Q.S. COX-2 inhibition and colorectal cancer / Rousaire-Dubois Q.S Trotti D., Volterra A., Lehre K.P., Rossi D., Gjesdal O., Racagni G., Danbolt N.C. // Semin. Oncol. 1991. - V.31. - P. 12-21.

198. Saitoh H. An excised patch membrane sensor for arachidonic acid released in mouse hippocampal slices under stimulation of L-glutamate / Saitoh H., Namatame Y., Hirano A., Sugawara M. // Anal Biochem. 2004. - V.329(2). - P. 163-172.

199. Sawyer D.B. Platelet-activating factor is a general membrane perturbant / Sawyer D.B., Andersen O.S. // Biochim. Biophys. Acta. 1989. - V.987(l). - P.129-132.

200. Scales S.L. Lipid membranes shape up / Scales S.L., Scheller R.H. // Nature. -1999. V.40. - P.123-124.

201. Schiavo G. Neurotoxins affecting neuroexocytosis / Schiavo G., M. Matteoli, C. Montecucco // Physiol. Rew. 2000. - V.80. - №. 2, - P.766-717.

202. Schmitt H. Modulation of neuronal calcium channels by arachidonic acid and related substances / Schmitt H., Meves H. // J Memb. Biol. 1995. - V. 145(3). -P.233-244.

203. Sergeeva M. Arachidonic acid in astrocytes blocks Ca2+ oscillations by inhibiting store-operated Ca2+ entry, and causes delayed Ca2+ influx / Sergeeva M., Strokin M., Wang H., Ubl J.J., Reiser G. // Cell. 2003. - V.33. - P.283-292.

204. Serhan C.N. Novel eicosanoid and docosanoid mediators: resolvins, docosatrienes, and neuroprotectins // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 2005. -V.8(2).-P.l 15-121.

205. Shinomura T. Synergistic action of diacyiglicerol and unsaturated fatty acids for PKC activation: its possible implications / Shinomura T., Asaoka Y., Oka M. et al // PNAS. 1991. - V.88. - P.5149-5153.

206. Shiose A. Arachidonic acid and phosphorylation synergistically induce a conformational change of p47phox to activate the phagocyte NADPH oxidase / Shiose A., Sumimoto H. // J. Biol. Chem. 2000. - V.275. - P.13793-13801.

207. Shuttleworth T.J. Arachidonic Acid Activates the Noncapacitative Entry of Ca2+ during Ca2+., Oscillations // Am. Society. Biochem. Mol. Biol. 1996. - V. 271. - №36. -P.21720-21725.

208. Siegel G.J. (Ed) et.al. Basic Neurochemistry: Molecular, Cellular and Medical Aspects//7-th edition. Elsevier. - 2006. - 992c.

209. Smith C.B. Simultaneous independent measurement of endocytosis and exocytosis / Smith C.B., Betz W.J. // Nature. 1996. - V.380(6574). - P.531-534.

210. Soliven B. Arachidonic acid inhibits potassium conductance in cultured rat oligodendrocytes / Soliven B., Wang N. // Am. J. Physiol. 1995. - V.269. - P.341-348.

211. Stella N. Modulation of the glutamate-evoked release of arachidonic acid from mouse cortical neurons: involvement of a pH-sensitive membrane phospholipase A2 / Stella N., Pellerin L., Magistretti P. J. // J. Neurosci. 1995. - V.15. - P.3307-3317.

212. Striggow F. Regulation of intracellular calcium release channel function by arachidonic acid and leukotrien B4 / Striggow F., Ehlich B.E. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1997. - V.237. - P.431-418.

213. Sun C-W. Role of cGMP versus 20-HETE in the vasodilator response to nitric oxide in rat cerebral arteries / Sun C-W., Falck J.R. // Am J Physiol. 2000. -V.279(l). - P.H339-H350.

214. Sun G.Y. Deacylation-reacylation of arachidonoyl groups in cerebral phospholipids. Arachidonic acid metabolism in the nervous system / Sun G.Y., MacQuany R.A. // NY Academy of Sciences 1989. - V.559. - P.37-55.

215. Takenaka T. Effects of arachidonic acid and the other long-chain fatty acids on the membrane currents in the sqid giant axon / Takenaka T., Horie H., Hori H., Kawakami T. // J. Memb. Biol. 1988. - V. 106. - P. 141 -147.

216. Terracina L. Arachidonic and palmitic acid utilization in aged rat brain areas / Terracina L., Brunetti M., Avellini L., De Medio G.E., Trovarelli G., Gaiti A. // Mol. Cell Biochem. 1992. - V.l 15(1). - P.35-42.

217. Tetsuya H. Localization and regulation of cytosolic phospholipase A2 / Tetsuya H., Takao S. // Biochim Biophys. Acta. 2000. - V.1488. - P. 124-138.

218. Tsurusaki M. Postsynaptic inhibition of the frog neuromuscular transmission by prostaglandin Ej / Tsurusaki M., Tokimasa T., Akasu T. // Neurosci. Lett. 1987. -V. 77.-P.303-307.

219. Ueki S. 2-hydroxy-5Z, 8Z, 10E, 14Z, eicosatetraenoic acid (12-HETE) stimulates cAMP production in normal human fibroblasts / Ueki S., Takagi J., Kobayashi Y, Sato F., Saito Y. // J. Cell Physiol. 1999. - V.l78. - P.63-68.

220. Veit M. Palmitoylation of the 25-kDa synaptosomal protein (SNAP-25) in vitro occurs in the absence of an enzyme, but is stimulated by binding to syntaxin // Biochem. J. 2000 Jan 1. - V.345. - Pt 1. - P.145-151.

221. Villarroel A Suppression of neuronal potassium A-current by arachidonic acid // FEBS Lett. 1993. - V.335. - P. 184-188.

222. Waku K. Origins and fates of fatty acyl-coA esters. // Biochem. Biophys Acta. 1992. - V.l 124. - P. 101-111.

223. Wallach D. Stimulation of guanylate cyclase of fibroblasts by free fatty acids / Wallach D., Pastan I. //J. Biol. Chem. 1976. - V.251. - P.5802-5809.

224. Wallert M.A. Two novel cardiac atrial K+ channels / Wallert M.A., Ackerman M.J., Kim D., Clapham D.E. //J. gen. Physiology. 1991. - V.98. - P.921-939.

225. Wang M.H. Cytochrome P450-derived arachidonic acid metabolism in the rat kidney: characterization of selective inhibitors / Wang M.H., Brand-Schieber E., Zand B.A., Nguyen X. //J. Pharm. Exp. Ther. 1998. - V.284. - P.966-973.

226. Webster G.R. On the site of action of phosphatide acyl-hydrolase activity of rat brain homogenates on lecithin / Webster G.R., Cooper M. // J. Neurochem. 1968. -V.15. - P.795-802.

227. Whatley R.E. Lipid metabolism and signal transduction in endothelial cells / Whatley R.E., Zimmerman G.A., Mclntyre T.M. // Prog. Lipid Res. 1990. - V.29. -P.45-63.

228. Wieland S. Differential modulation of a sodium conductance in skeletal muscle by intracellular and extracellular fatty acids / Wieland S., Fletcher J., Gong Q. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1992. - V.263. - P.308-312.

229. Wieland S. Modulation of Human muscle sodium channels by intracellular fatty acids is dependent on the Channels isoform / Wieland S, Gong Q., Poblete H., Fletcher J.E. et al. // J ofBiochem. 1996.-V.271. -№32. - P. 19037 -19041.

230. Wilding T.J. Inhibition of rat neuronal kainite receptors by cis-unsaturated fatty acids / Wilding T.J., Chai YH, Huettner JE // J. Physiol. 1998. - V.513. - P.331-339.

231. Williams J.N. Arachidonic acid induces a long-term activity-dependent enhancement of synaptic transmission in the hippocampus / Williams J.N., Errington M.L., Lynch M.A., Bliss T.V.P. // Nature. 1989. - V.341. - P.739-742.

232. Wilson D.B. Discovery of an arachidonoyl coenzyme A synthetase in human platelets / Wilson D.B., Prescott S.M., Majerus P.W. // J. Biol. Chem. 1982. -V.257. - P.3510—3515.

233. Woelk H. On the activity of phospholipases Al and A2 in glial and neuronal cells / Woelk H., G.Goracci, G.Arienti, G.Porcellati // Adv. Prostaglandin Thromboxane. 1978. - Res.3. - P.77-83.

234. Wu L.G. Kinetics of synaptic depression and vesicle recycling after tetanic stimulation of frog motor nerve terminals / Wu L.G., Betz W.J. // Biophys J. 1998 Jun. - V.74(6). - P.3003-3009.

235. Xi ZP Effect of dietary n-3 fatty acids on the composition of long- and very-long-chain polyenoic fatty acid in rat retina / Xi ZP, Wang JY. // J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokyo). -2003. -V. 49(3). P.210-213.

236. Xiao Y. The antiarrhythmic effect of n-3 polyunsaturated fatty acids: modulation of cardiac ion channels as a potential mechanism / Xiao Y., Sigg D., Leaf F. // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 2002 Feb-Mar. - V. 66(2-3). -P.287-299.

237. Xiao Y-F. Blocking effect of polyunsaturated fatty acids on Na+ channels of neonatal rat ventricular myocytes / Xiao Y-F., Kang J.X., Morgan J.P., Leaf A. //PNAS. 1995. - V. 92. - P.l 1000-11004.

238. Xu X. Dual effects of arachidonic acid on ATP-sensitive K+ current of coronary smooth muscle cells / Xu X., Lee K.S. // Am. J. Physiology. 1996. -V. 270. - P.H1957-1996.

239. Yau WM. Evidence for an involvement of eicosanoids in neurokinin3-receptor mediated acetylcholine release from myenteric neurons / Yau W.M., Bowen D.J., Youther M.L. // Neurosci Lett. 1991. - Aug. 19. - V. 129(2). - P.259-261.

240. Zefirov A. Localization of active zones / Zefirov A, Benish T, Fatkullin N, Cheranov S, Khazipov R. // Nature. 1995. - V.376(6539). - P.393-394.

241. Zimmerberg J. Synaptic membranes bend to the will of a neurotoxin / Zimmerberg J., Chernomordik L.V. // Science. 2005. - V.310. - P. 1626-1627.

Информация о работе

Яковлева, Ольга Владиславовна
кандидата биологических наук
Казань, 2007
ВАК 03.00.13

Диссертация

Механизмы действия арахидоновой кислоты на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы