Малые молекулы в изучении особенностей белок-белковых взаимодействий

Колотьева, Наталия Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Малые молекулы в изучении особенностей белок-белковых взаимодействий
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Малые молекулы в изучении особенностей белок-белковых взаимодействий"

КОЛОТЬЕВА НАТАЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ В ИЗУЧЕНИИ ОСОБЕННОСТЕЙ БЕЛОК-БЕЛКОВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ

03.01.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 8 НОЯ 2012

Москва 2012

005054463

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные' руководители:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

кандидат биологических наук

Гильмиярова Фрида Насыровна Рыскина Елена Анатольевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой биологической химии ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И.Разумовского» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

доктор биологических наук, профессор заведующий отделом биохимии животной клетки НИИ Физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Бородулин Владимир Борисович

Муронец Владимир Израилевич

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится /¿¿Р^^*^ 2012 г. в 14.00 на заседании Диссертационного

совета Д.212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8, Медицинский факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан 2012 1

Ученый секретарь Диссертационного Совета

доктор биологических наук.

профессор

^ 1 Д-;: /Л-,- '

Е.В. Лукашева

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Начавшееся тысячелетие для медицины можно обозначить как время поиска новых путей повышения качества жизни и здоровья человека с использованием новых технологий протеомики и метаболомики. Интенсивно развивающееся медико-биологическое направление наномедицины, возникшее на стыке ряда перспективных наук, требует фундаментального подхода к решению лечебно-диагностических и валеологических задач. Имеющиеся на сегодняшний день в арсенале медицинской науки высокотехнологичные методы исследования позволяют получить информацию о состоянии базовых метаболических путей в организме. Однако практически отсутствует система данных для индивидуализации молекулярных основ метаболизма, факторах эндогенной природы, определяющих физиологический уровень обмена и специфику индивидуальной реакции. Одним из таких параметров, на наш взгляд, является генетически детерминированный признак - группа крови, определяющий особенности клеточного состава, показателей метаболизма, молекулярную основу развития различной патологии (Тананян А.О., 2001; Гармонов С.Ю. с соавт., 2004; Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2007, Lomenick В., 2010). В настоящее время актуально: дальнейшее более детальное изучение структурно-функциональных г характеристик отдельных антигенов, ответственных за каждую группу крови. Современные представления о структуре и топографии антигенов А,В,Н позволяют объяснить их высокую иммуногенность, роль в формировании иммунного ответа (Сахаров P.C., 2001; Оловникова Н.И.; 2001, Донсков С.И., 2001; Smolarek D. et al., 2008; Eiji Hosoi, 2008;). В этом плане перспективным является исследование антигенов и антител ABO системы в качестве объектов межмолекулярных, в том числе белок-белковых взаимодействий. Известно, что последние во многом определяются наличием микроокружения, создаваемого промежуточными продуктами обмена, так называемыми малыми молекулами, играющими значительную роль в поддержании метаболического баланса (Никитина B.C. с соавт., 2000; Павлюченко И.И., 2003; Титов В.Н., 2010; Petry, J.J., Hadley S.K., 2001; Лима-де-Фариа А., 2012). Интересным представляется использование естественных интермедиатов в качестве метаболических зондов, возможно влияющих на функциональные группы антигенов и вызывающих их дальнейшие конформационные перестройки, реализующиеся в изменении характера антиген-антительных взаимоотношений. С одной стороны это пополнит сведения об особенностях строения изучаемых антигенов, с другой - раскроет новые молекулярные механизмы белкового взаимодействия, что в дальнейшем будет содействовать более глубокому пониманию регуляции процессов рецепции, межмолекулярного узнавания, способствовать индивидуальному подходу к трактовке результатов иммуноферментного,

электроу.&милюминесцентного методов исследования.

Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральных программ:

• «Взаимодействие биологически активных веществ растительного и животного происхождения с системами жизнеобеспечения организма с учетом биологической вариабельности метаболизма, ассоциированной с групповой принадлежностью крови» (номер гос. регистрации 0120.0 809698)

• «Новые возможности индивидуализации донозологической диагностики и оптимизации лечебных мероприятий с учетом молекулярно-генетических особенностей организма и алиментарных факторов» (номер гос. регистрации 0120.0 809697)

Цель настоящего исследования заключается в изучении влияния пиру вата на белок-белковые взаимодействия.

Задачи:

1. Оценить специфику метаболизма, обусловленную групповой принадлежностью крови по системе ABO, определив в сыворотке крови показатели углеводного обмена (содержание глюкозы, пирувата, лактата, активность лактатдегидрогеназы, амилазы), а также уровень инсулина и кортизола. _J

2. Охарактеризовать спектр биологической активности ключевого интермедиата метаболизма — пирувата с помощью компьютерной программы «Prediction of Activity Spectra for substances: Complex & Training» и «Pharma Expert».

3. Используя пируват в качестве метаболического зонда, изучить процессы межбелкового взаимодействия в различных модельных экспериментах с гликопротеинами АВО-системы.

4. Изучить влияние пирувата на естественные и моноклональные антитела в процессах белок-белкового взаимодействия.

5. Визуализировать межмолекулярные взаимодействия и антиген-антительные комплексы в условиях влияния пирувата, используя методы флуоресцентного зондирования и лазерной сканирующей конфокальной микроскопии.

анаэробного катаболизма. Для обладателей А(Н) группы крови характерно наибольшее содержание инсулина и кортизола в сыворотке крови, что, очевидно, вызвано усиленным синтезом данных регуляторов-антагонистов с целью поддержания метаболического баланса. У обследуемых с В(Ш) группой крови наблюдается самая высокое содержание пирувата и лактата, наибольшая активность лактатдегидрогеназы, низкая амилолитическая активность и минимальное содержание кортизола, что свидетельствует о поддержании концентрации глюкозы в крови посредством интенсивно протекающего процесса гликолиза. Метаболический профиль лиц с AB (IV) группой крови характеризуется самым высоким содержанием глюкозы на фоне низкой амилолитической и лактатдегидрогеназной активности, повышенного относительно значений в генеральной совокупности уровня кортизола, что вероятно, говорит о преобладании анаболических процессов.

При анализе полученных данных установлено, что колебания концентрации пирувата в крови лиц с различной групповой принадлежностью минимальные, несмотря на выраженные отклонения показателей содержания глюкозы и лактата. Исследование соотношения лактат/пируват выявило значительно более, низкую концентрацию в крови пирувата по сравнению с содержанием лактата у обладателей всех четырех групп/крови, что позволяет рассматривать пируват не только как интегральный метаболит, но и регуляторную, сигнальную молекулу, стабильность концентрации которой необходима для межмолекулярных взаимоотношений.

Впервые при изучении биологической активности пирувата с помощью компьютерной системы «Prediction of Activity Spectra for substances: Complex & Training» и «Pharma Expert» выявлен широкий спектр его возможных биологических эффектов. Пируват может выступать регулятором обмена липидов, цито- и гемопрогектором, оказывать антитоксическое, гиперхолестеролемическое, противовоспалительное, обезболивающее, фибринолитическое, антинейротоксическое действие, а также проявлять свойства модулятора иммунных реакций.

Новыми являются сведения об особенностях межмолекулярного взаимодействия антигенов и антител системы ABO при влиянии на них пирувата. Показано, что при добавлении пирувата взаимодействие антигенов А и В носит различный характер. Время наступления агглютинации гликопротеинов с детерминантой N-ацетилгалактозамин (антиген А) возрастало после инкубации с. пируватом более значительно, чем гликопротеины с детерминантой D-галактоза (антиген В), что очевидно обусловлено имеющимися различиями в vïx химической структуре.

В экспериментах с изогемагглютининами выявлено, что пируват не оказывает влияни® на анти-А антитела В(Ш) группы и вызывает увеличение

степени агглютинации эритроцитов А(П) группы крови, что вероятно, связано с его модифицирующим влиянием на конформацию антител, способствующим более быстрому узнаванию их антигенными детерминантами В-антигена. Показано также, что пируват ускоряет время образование антиген-антительных комплексов моноклональных антител с антигенами А и В.

Впервые с целью количественной оценки результатов взаимодействия антигенов и антител при введении малых молекул в систему использован метод проточной цитофлуориметрии. Выявлено разнонаправленное действие пирувата на экспрессию антигенных детерминант. Количество образующихся иммунных комплексов увеличивалось в образцах А(И) группы, уменьшалось — в В(Ш) и АВ (IV) группах крови.

Новыми являются результаты, полученные в ходе визуализации антиген-антительных комплексов под влияниям биорегуляторов, в частности, пирувата. Установлено не только изменение размера агглютинатов, но и уменьшение их количества. Возможно, это обусловлено стерическими изменениями антигенных детерминант в условиях действия высоко реакционноспособного пирувата, что снижает степень авидности антител, общую стабильность комплекса, вызывад в итоге его разрушение.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Результаты

исследования имеют теоретическое и практическое значение. В фундаментальном отношении разработана новая методология экспериментов in vitro - предложена наглядная молекулярная модель для изучения межбелковых взаимодействий. Использование естественных интермедиатов эндогенного происхождения в качестве молекулярных зондов позволяет выяснить не только биологические эффекты данных соединений, но и характер регулируемых ими молекулярных взаимоотношений. Данная модель может быть рекомендована для тестирования широкого спектра веществ, обладающих биологической и фармакологической активностью.

В прикладном отношении полученные данные о влиянии пирувата на характер антиген-антительного взаимодействия, лежащего в основе иммуноферментного и электрохемилюминесцентного анализа, важны при интерпретации результатов лабораторных исследований, что диктует необходимость оценки индивидуального метаболического статуса пациента.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Особенности углеводного обмена, ассоциированные с групповой принадлежностью крови по системе ABO. Наименьшее содержание глюкозы и инсулина,, наибольшая амилолитическая активность, высокое содержание пирувата и лактата в крови обследованных с 0(1) группой крови. Наибольшее содержание инсулина и кортизола, низкая концентрация лактата у обладателей А(И) группы. Максимальная лактатдегидрогеназная и минимальная амилолитическая активности, наибольшее содержание пирувата и лактата у лиц с В(Ш) группой крови. Самый высокий уровень глюкозы при низкой

амилолитической и лактатдегидрогеназной активности, наименьшее содержание лактата и пирувата у обследованных с AB(IV) группой крови.

2. Широкий спектр биологических эффектов пирувата, установленный с помощью компьютерной программы «Prediction of Activity Spectra for substancés: Complex & Training» и «Pharma Expert», ключевыми из которых являются антитоксическое, гиперхолестеролемическое, противовоспалительное, обезболивающее, фибринолитическое, цито- и гемопротекторное, иммуномодулирующее действия.

3. Способность пирувата участвовать в процессах межбелковых взаимоотношений, оказывая разнонаправленное влияние на взаимодействие антигенов и антител системы ABO. Более быстрое узнавание естественных антител антигенными детерминантами В-антигена, что выражается в увеличении степени агглютинации. Ускорение образования антиген-антительных комплексов моноклональных антител с антигенами А и В.

4. Использование методов проточной цитофлуориметрии и лазерной сканирующей конфокальной микроскопии для визуализации межмолекулярных взаимодействий в условиях влияния биологически активных веществ эндогенного происхождения.

АПРОБАЦИЯ' РАБОТЫ. Результаты исследований были представлены на 73 итоговой с-туденческой научной конференции, посвященной 75-летию клиник СамГМУ (Самара, 2005); 64 итоговой студенческой научной конференции с международным участием (Москва, 2006); 74 итоговой студенческой научной конференции «Человек и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты российской науки» (Самара, 2006); 71 итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2006); международной всероссийской конференции студентов и молодых ученых «Пироговские чтения» (Москва, 2007, 2009); всероссийской итоговой студенческой научной конференции «Студенческая наука и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты» (Самара, 2007, 2008, 2009); XV Форуме «Национальные дни лабораторной медицины России-2011» (Москва, 2011); Международной конференции Инновационные технологии, модернизация, качество, доступность и б&зопасность лекарственных средств в системе здравоохранения современной России. Щкола формирования принципов здорового образа жил'ни (Москва, 2011); II международной научно-практической конферещйй «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: геномика, протеомика, биоинформауика» (Новосибирск, 2011); Всероссийской конференции с международным, участием «Молодые ученые - медицине» (Самара, 2011); всероссийской научно-практи.ческой конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» (Омск, 2011); XVII Всероссийской научно-практической

конференции «Молодые ученые в медицине», 86-я Всероссийская научная конференция памяти член-корреспондента АН РТ, прфессора И.Г. Салихова (Казань, 2012); Международной Интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (Казань, 2012); журналах Клиническая лабораторная диагностика (Москва, 2011); альманахе «Жизнь плюс наука». Интернациализация и инновации (Самара, 2011); Медицинский альманах (Н.Новгород, 2012), совместном заседании Самарского отделения Всероссийского биохимического общества, кафедр общей, бионеорганической и биоорганической химии и фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ» (Самара, 2012).

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ. Результаты диссертационного исследования используются в работе клинико-диагностической лаборатории клиник СамГМУ ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ; в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ, на кафедре биохимии ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

Свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ № 2010611397 от 17 февраля 2012 г.

Заявки на патент «Способ определения антигенов эритроцитов» (№2012108863/20(013302) от 07.03.2012), «Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антителыюе взаимодействие» (№ 2012115145 (022873) от 16.04.2012), «Способ оценки антиген-антительных комплексов системы ABO» (№ 2012133378 от 03.08.2012).

Данная работа выполнена при поддержке Губернского гранта в области науки и техники «Способ визуализации антиген-антительного взаимодействия методом конфокальной микроскопии».

ПУБЛИКАЦИИ

Всего опубликовано 19 работ, из них по теме диссертации 16 , 1 свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ, 5 работ -в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию объектов и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Диссертация изложена на 156 страницах, иллюстрирована 28 рисунками, содержит 22 таблицы. В работе использовано 237 источников, из них 127 отечественных и 110 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Исследования проводились на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России.

Под наблюдением находилось 446 лиц, их клиническое состояние подтверждалось отсутствием обострения хронических соматических и стоматологических заболеваний, а также латентных социально значимых вирусных инфекций, из них мужчин - 142 человек, женщин - 304 человека, средний возраст которых составил 26,8 ± 1,4 лет. Распределение по групповой принадлежности крови оказалось следующим: лиц с 0(1) группой крови -29,6%, с А(П) группой крови - 31,8%, с B(III) группой крови - 24,3%, с AB(IV) группой крови - 14,3%. Материалом для исследования служила кровь, которую получали из локтевой вены путем венопункции в пробирки для взятия крови фирмы «VACUTANER» (США).

Всем обследованным проводилось определение группы крови с использованием ЭРИТРОТЕСТ - Цоликлонов Анти-А, Анти-В диагностических жидких методом прямой агглютинации на плоскости. Агглютинация подсчитывалась по W. Marsh (Marsh W.L., 1972) с индикацией степени агглютинации (бальная оценка интенсивности-агглютинации - pt). Определение группы крови также проводилось на автоматическом анализаторе для проведения иммуногематологических исследований «Хемос СП II» фирмы BIO-Rad с использованием реактивов TransClone Anti-ABOl (A), TransClone Anti-AB02 (В), TransClone Anti-AB03 (АВ) (BIO-Rad, США).

В качестве контроля брали среднее значение времени (в секундах) и степени агглютинации антигенов А и В (по шкале) II, III, IV групп крови с моноклональными антителами. Для изучения биологического действия малых молекул на агглютиногены А, В, изоагглютинины анти-А и анти-В группы крови по системе АВО и моноклональные антитела анти-А и анти-В перед постановкой реакции гемагглютинации эритроциты инкубировали с раствором пирувата в конечной концентрации 2 мМ.

Всем обследованным в крови определяли содержание пировиноградной кислоты, активность лактатдегидрогеназы, а-амилазы. Исследования проводили на автоматическом биохимическом анализаторе «Hitachi - 902» фирмы «Roche-Diagnostics», производству Японии с помощью набора реактивов фирмы «Roche-Diagnostics» (Швейцария). Контроль качества при выполнении исследований осуществляли с использованием контрольной сыворотки "Precinorm", "Precipat", фирмы «Roche-Diagnostics», (Швейцария). Содержанке молочней кислоты и глюкозы проводили на анализаторе «BIOSEN С_Ипе» фирмы «EKF-diagnostic, GmbH».

Исследования содержания кортизола и инсулина проводили на автоматическом иммунохемилюминисцентном анализаторе Elecsys 2010 фирмы «Roche-Diagnostics» (Япония), с помощью набора реактивов фирмы «Roche-

Diagnostics» (Германия), твердофазным двухступенчатым «sandwich» -вариантом проведения анализа.

Визуализация белок-белковых комплексов проводилась при помощи экспериментального стенда, который реализован на базе конфокального оптического микроскопа Olympus IX 71 («Olympus», Япония), конфокального сканирующего блока и лазерного комбайна (фирма ANDOR) (кафедра радиотехнических устройств ФГБОУ ВПО «Самарский государственный аэрокосмический университет имени академика С.П. Королева»); на проточном цитофлуориметре FACS Calibur компании Beckton Dickinson (США), с использованием специфичных моноклональных конъюгированных антител Blood group A antigen (Z2A), Blood group В antigen (89-F), меченными флуоресцеинизотиоционатом (FITC) фирмы Santa Cruz biotechnology, Inc. (США)

Компьютерное прогнозирование спектра биологической активности пирувата проводили с помощью компьютерной системы Prediction of Activity Spectra for Substances: Complex & Training учитывая структурную формулу соединения с использованием единообразного описания химической структуры и универсального математического алгоритма установления зависимости «структура - активность» (лаборатория структурно-функционального конструирования ^лекарств Института биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМИ). /

Статистический анализ данных проводили в среде статистического пакета прикладных программ SPSS 12.0 и в программе MS EXCEL 2007. Полученные данные были описаны с использованием таких статистических характеристик как медиана (Me), средняя арифметическая (М), стандартная ошибка от средней арифметической (m), максимум и минимум, 95% интервал. Для оценки формы распределения исследуемых показателей использовался графический метод (визуальная оценка гистограмм распределения), оценивались показатели скошенности и крутизны, отражающие асимметрию распределения, тесты на нормальность с помощью критерия Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиефорса и Шапиро-Уилки. Для сравнения здоровых лиц по группам крови применялся однофакторный дисперсионный анализ. Поскольку формы распределения признаков часто отличались от нормальной, а также наблюдались различные величины дисперсий, к которым чувствителен классический дисперсионный анализ, также использовался его непараметрический аналог — анализ Краскела - Уолллиса (Платонов А.Е., 2000; Реброва, 2002). Если дисперсионный анализ выявлял статистически значимые различия, проводили второй этап статистического анализа, так называемые апостериорные тесты. В настоящем исследовании применялся критерий Даннета, как один из менее чувствительных к различиям дисперсий в сравниваемых группах. Для показателей, имеющих значительные выбросы, при которых некорректно применять классический ANOVA, использовался тест Манна-Уитни (для парных сравнений) с поправкой Бонферони (Боровиков В., 2001; Реброва, 2002). Критическое значение уровня значимости принимали равным 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящее время практически отсутствует фактическая база данных, раскрывающих биологическую вариабельность показателей углеводного обмена и его регуляторов, обусловленную групповой принадлежностью крови. В крови практически здоровых лиц определяли содержание глюкозы, пирувата и лактата, активность лактатдегидрогеназы и амилазы,. а также оценивали содержание основных регуляторов углеводного обмена инсулина и кортизола в сыворотке крови (табл.1).

При наличии 0(1) группы крови установлены следующие особенности углеводного обмена. Глюкоза служит активно метаболизирующимся соединением: медиана ниже генеральной совокупности и уровня при других группах крови. При этом амилолитический распад гликогена является реальным поставщиком этого метаболита, что характеризуется высокой активностью амилазы в крови обследованных. Активный вклад в этот процесс вносит анаэробный путь катаболизма, о чем свидетельствует наибольшее содержание пирувата и лактата в крови обследованных (наибольшая медиана по сравнению с другими группами крови и генеральной совокупностью), характерно самое низкое содержание инсулина в крови.

Для обладателей А(П) группы крови характерно наибольшее содержание, как гипогликемического гормона инсулина, так и его антагониста, гормона кортизола (наибольшее среднее значение показателей похравнению с другими группами крови и генеральной совокупностью). Установлено наименьшее содержание конечного метаболита анаэробного окисления глюкозы молочной кислоты.

У лиц В(Ш) группы крови определяются характерные тенденции в показателях углеводного . обмена: установлена наибольшая лактатдегидрогеназная и наименьшая амилолитическая активности. В то же время обнаружено наибольшее содержание конечных метаболитов гликолиза пирувата и лактата, наименьшее содержание глюкокортикоидного гормона кортизола. Выявлено наибольшее содержание пировиноградной кислоты в крови клинически здоровых обследованных мужчин, что совпадает в целом с

данными генеральной совокупности. т>тл

По специфике приведенных показателей у обследованных с АВ(1У) группой крови выявлен самый высокий уровень глюкозы при низкой амилолитической и лактатдегидрогеназной активности, что может говорить о преобладании анаболических процессов. Установлено наименьшее содержание лактата и пирувата.

Таблица 1

Показатели углеводного обмена в сыворотке крови клинически здоровых доноров 0(1) - АВ(ГУ) групп крови Группа крови

Генерал.

Показатели 0(1) ! А(П) В(Ш) АВ(1У) совокупность

Мй 4,31±0,08 4,41±0,10 4,42±0,11 4,6б±0,17* 4,42±0,05

Глюкоза Ме . .. 4>21 .. 4,30 4,31 4,50 4,31

(ммоль/л) эр ' 0,38 0,66 0,34 0,78 0,56

Лактатдегид • М±т : 364,22± ■ 384,44± 393,79± ' 377,82± 379,81±

рогеназа 18,12 13,01 18,41 16,40 8,38

(Е/л) Ме 342,50 376,00 372,00 368,00 : 366,00

86,83 78,72 102,69 75,84 87,96

Лактат М±т • 2,26±0,15 : 2,02±0,12 2,27±0,14 2,01±0,18 2,15±0,07

(ммоль/л) ; Ме 2,10 ; 1,74 2,29 1,85 1,99

эр 0,91 0,72 0,77 0,97 0,82

Пируват М±т 0,053± 0,050± 0,053± 0,047± ' 0,051±

(ммоль/л) 0,002 0,0017 0,0019 0,0022 0,001

Ме" • 0,052 0,048 0,052 ,0,046 0,050

БЕ) 0,012 0,009 0,007 ¿0,008 0,010

Лактат / М±т 44,34± 40,69± 44,04± ' 42,42± 42,78±

пируват 3,07 2,01 2,83 2,94 1,36

Ме 38,65 39,95 45,26 40,39 : 39,99

19,32 12,98 15,41 13,59 15,76

Амилаза М±т 68,81± 64,39± 60,83± 60,53± 64,31±

(Е/л) 3,67 3,68 4,20 5,63 2,05

Ме 66,50 65,00 : . . 63,00 70,00 65,00

Бр 21,83 25,30 23,86 26,07 23,90

Кортизол М±т 447,06± 473,95± 431,49± 464,97± 454,83±

(ммоль/л) 44,16 41,52 40,64 36,85 21,64

Ме 418,80 472,20 391,30 420,00 426,60

173,58 286,67 221,50 171,46 230,73

Инсулин М±т 10,16± 13,82± 12,47± 10,85± 12,04±

(мкЕ/мл) 1,45 2,74 2,79 2,14..... 1,24

Ме 7,24 8,06 8,28 9,61 8,10

6,92 9,24 10,77 8,77 8,87

* - р 1-1У = 0,05

Интересными являются данные о содержании пирувата в крови клинически здоровых лиц в зависимости от полового признака. Оценка результатов содержания пирулата показала, что у мужчин наибольшее содержание пирувата в крови с В(Ш) группой крови, наименьшее содержание с АВ(1У) группой (табл. 2).

Таблица 2

Содержание пирувата (ммоль/л) в сыворотке крови клинически здоровых мужчин 0(1) - AB(IV) групп крови

Группа крови М±ш Me Q1-Q3

0(1) 0,055±0,004* 0,056 0,045-0,063

А(П)"' 0,051 ±0,004 : 0,047 0,039-0,064

В(Ш) 0,060±0,007* 0,056 0,050-0,066

AB(IV) 0,041±0,002 0,042 0,035-0,048

* - р I-IV = 0,02, * - р III-IV = 0,005 Таким образом, колебания пирувата в крови практически здоровых лиц с различными группами по системе ABO незначительные, несмотря на относительно высокие колебания показателей глюкозы и лактата. Большая роль принадлежит интермедиатам, вступающим, возможно, в параметаболические взаимодействия, создавая тем самым определенное микроокружение крупных молекул-регуляторов. В этом плане представляет интерес изучение полного спектра биологической активности пирувата, принимающего участие в регуляции метаболизма в физиологических условиях. Решить поставленную задачу позволила нам компьютерная система Prediction of Activity Spectra for Substances (PASS-fC&T) и программа интерпретации результатов «Pharma Expert». Л

При анализе результатов у пирувата существует вероятность наличия 257 фармакологических эффектов из 384 возможного и 1578 механизмов их реализации из 2242. Определено 35 из 41 возможных побочных и токсических эффектов, 56 метаболически опосредованных действий.

Рис.1. Прогнозируемый спектр биологической активности пирувата

Стимулятор лейкопоэза

! Ингибитор энтеропептидаз! Стимулятор секреции инсулина

1нгйбитор тромбоцитопоэза />Хемопротекторный Jí

Лилотропный

Антитоксический

Гиперхолестеролемический .......... /

Антагонист апоптоза

Регулятор обмена липидов

Антигипоксйческий

Фибринолитик

Антиканцерогенный

^Противовоспалительный

. V .Антидот

................'Обезболивающий

"Иммуномодулятор

^Противовирусный -:^ Антинейротоксическии

Обращает на себя внимание наличие способности у пирувата выступать регулятором метаболизма липидов, цитопротектором, стимулировать эритропоэз и лейкопоэз, ингибировать тромбодитопоэз, вызывать гемопротекторный эффект, оказывать антигипоксическое, антитоксическое, действие и другие (рис.1). Данная особенность позволяет предположить реализацию перечисленных эффектов за счет имеющейся в составе карбоксильной группировки производных карбоновых кислот ОН-группы. Как известно, в карбоновых кислотах гидроксильная группа выполняет роль заместителя. В результате такие соединения способны выступать в реакции ■ нуклеофильного замещения.

Важными являются данные о способности участия пирувата в, антиоксидантной защите практически всех клеток, так или иначе находящихся в контакте с кислородом. Так, являясь ингибитором каталазы и ингибитором супероксидцисмутазы, пируват замедляет или даже прекращает процесс защиты организма человека от постоянно образующихся высокотоксичных кислородных радикалов. Участвуя в процессе тканевого дыхания, пируват ингибирует Ь- и Б- формы лактатдегидрогеназы цйтохрома.

Таблица 2

Возможные молекулярные механизмы действия пирувата

Молекулярный механизм действия Рз Р!

Ингибитор ацилглицеролипазы 0,855 0,020

Ингибитор оксалоацетатдекарбоксилазы 0,848 0,004

Ингибитор кислой фосфатазы 0,847 0,004

Ингибитор пируватдегидрогеназы 0,827 0,004

Ингибитор Ь-лактат дегидрогеназы (цйтохрома) 0,818 0,002

Ингибитор Э-лактат дегидрогеназы (цйтохрома) 0,808 Г 0,002

Ингибитор супероксиддисмутазы 0,805 ' 0,022

Ингибитор глюкозооксидазы 0,794 0,035

Ингибитор каталазы 0,781 0,004

Модулятор цитокинов 0,720 : 0,007

Антагонист нейротрансмиттера 0,699 0,019

Антагонист интегрина 0,680 0,056

Агонист нейротрофического фактора 0,670 0,026

Окислитель 0,602 0,006

Ингибитор пируваткиназы 0,540 0,011

Ингибитор алкогольдегидрогеназы 0,499 0,014

Приведенные данные свидетельствуют о том, что пирувату присущи различные механизмы влияния на активность факторов, регулирующих внутри-и межклеточные взаимодействия. Указывается участие пирувата в белковом, липидном и углеводном обменах. Так, он является окислителем, ингибитором

глюкозооксидазы, ингибитором многоферментного пируватдегидрогеназного комплекса, ингибитором оксалоацетатдекарбоксилазы, ингибитором ацилглицеролипазы, регулятором обмена липидов, оказывая гиперхолестеролемический и липотропный эффекты.

Создатели программы PASS отмечают, что высокая вероятность какого-либо эффекта необязательно говорит о том, что этот эффект присущ данному соединению (Филимонов Д.А. с соавт., 2006, Poroikov V. et al., 2001). Мы лишь предполагаем его наличие, поэтому необходимо экспериментальное подтверждение или исключение этих эффектов.

Уникальные свойства и регуляторная способность естественного интермедиата пирувата, участие данного соединения в различных процессах, направленных на поддержание физиологического уровня обмена, позволили нам предположить возможность его влияния на один из ключевых механизмов организма - белок-белковое взаимодействие.

Белок-белковое узнавание - ключевой молекулярный механизм реализации сигнальной информации в живых организмах. Процесс распознавания молекулярных объектов лежит в основе взаимодействия эндогенных и экзогенных соединений с рецепторами, в .т.ч. гормонами, ферментами и субстратами, лекарственными препаратами и др. Использование молекулярных зондов с применением малых молекул раскрывает перспективы воздействия на эти процессы, в том числе коррекцию нарушенных метаболических процессов. В этом плане эритроцит в его естественном окружении, с большим количеством встроенных в его мембрану антигенов представляет собой прекрасную модель, для исследования. Мы решили обратиться к белкам, выполняющим рецепторную функцию и участвующим в реакции узнавания. Такими белками являются групповые гликолипиды системы ABO, которые можно визуализировать на поверхности мембраны эритроцита с помощью реакции антиген-антитело. Таким образом, следующим этапом нашего исследования является изучение влияния пирувата на антигены А и В, естественные изогемагглютинины и моноклональные антитела.

0 2 4 6

Время наступления агглютинации (сек.)

□ Контроль

и антиген А (II)

□ антиген В (III)

□ антиген А (IV) в антиген В (IV)

Рис.2 . Влияние пирувата на антигены ABO системы

В условиях in vitro у эритроцитов А(И) группы крови при добавлении пировиноградной кислоты, время начала агглютинации увеличилось по сравнению с контролем, а у В(Ш) группы крови увеличилось незначительно, то есть пировиноградная кислота слабее влияет на антиген-антительную реакцию эритроцитов В(Ш) группы крови с анти-В антителами (рис.2).

При оценке агглютинации антигенов А и В эритроцитов AB(IV) группы крови время агглютинации возросло на 23%, а степень агглютинации слабее, чем в контрольных образцах. Существенно снижается полнота взаимодействия, процесс преципитации белковых комплексов. При этом нивелируется специфика, характерная для анти-А и анти-В антигенов. Гликопротеиновые компоненты антигенов, участвующие в процессе взаимодействия антигена с, антителами менее интенсивно образуют комплексы.

После взаимодействия пирувата с изогемагглютининами анти-В А (II) группы крови степень агглютинации увеличилась на 20% по сравнению с контролем. Степень агглютинации не изменилась при взаимодействии стандартных эритроцитов В (III) группы крови с анти-А антителами проинкубированным с пируватом. Показано, что действие пирувата на систему цельной крови, возможно, оказывает модифицирующее влияние на иммуноглобулины плазмы, способствующее более быстрому узнаванию антител антигенными детерминантами В-антигена и вступают во взаимодействие аналогично контрольным образцам с А-анТигеном.

Взаимодействие эритроцитов А(П) группы крови с моноклональными антителами, проинкубированными с пируватом уменьшилось на 22% по сравнению с контрольным временем. Время агглютинации анти-В моноклональных антител с эритроцитами В(Ш) группы сократилось. При взаимодействии анти-А и анти-В моноклональных антител, предварительно проинкубированных с пируватом, с эритроцитами AB(IV) группы крови время взаимодействия с антигенами А и В увеличилось (рис.3).

Рис. 3. Влияние пирувата на моноклональные антитела

Исходя из полученных данных, можно предположить, что инкубация с ггаруватом приводит к конформационным перестройкам моноклональных антител, которые варьируют от небольших сдвигов боковых цепей аминокислотных остатков до глобальных перестроек в третичной и четвертичной структуре Fab-фрагментов молекулы иммуноглобулина.

Таким образом, при исследовании образцов крови в условиях добавления пирувата антигены, естественные и моноклональные антитела по-разному вступают во взаимодействие. Вероятно, это происходит из-за различия в строении А и В антигенов. Несмотря на то, что антигены групп крови системы ABO близки между собой по строению и содержат общий структурный компонент - вещество Н, групповую антигенную специфичность определяют терминальные сахара, располагающиеся на концах углеводородных цепей. Различие между А и В антигенами заключается в том, что у N-ацетилгалактозамина (A-антигена) в позиции С2 располагается наиболее реакционноспособный NHCOCH3, а у Д-галактозы (В-антиген) в этой позиции находится ОН - группа. Специфичность взаимодействия антигенов с антителами определяется особенностями строения поверхностной структуры антигенов - наличием различных химических групп, их пространственным расположением (Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидороаич И.Г., 2000; Малинка М.К., Петриев В^.М,, Подгородниченко В.К., 2007). Возможно, высоко реакционноспособная молекула пирувата взаимодействуем с детерминантными группами антиген'ов А и В, изменяя и модифицируя их специфичность. Данное явление, несомненно, отражается на процессах взаимодействия его с антителами. Стерические, электростатические изменения иммуноглобулинов, обусловленные взаимодействием функциональных групп белка с пируватом, так изменяют макромолекулу белков, что это приводит к полноте агглютинации.

170

И контроль □ пируват

120

100

Ад В III Ag А IV

Ад В IV

Ад А II

антигены ABO системы

Р*ис.4 . Показатели экспрессии антигенов А и В группы крови по системе ABO до и после инкубации с пируватом

Впервые с целью количественной оценки результатов взаимодействия антигенов и антител при введении малых молекул в систему использован метод проточной цитофлуориметрии (рис.4). Выявлено разнонаправленное действие пирувата на экспрессию антигенных детерминант. Количество образующихся иммунных комплексов увеличивалось в образцах А(Н) группы, уменьшалось — в В(Ш) и АВ (IV) группах крови. Следующим этапом нашего исследования является визуализация комплексов антиген-антитело с использованием флуоресцентных зондов с помощью лазерной сканирующей конфокальной микроскопии.

Рис.5. Диаграммы пространственного распределения интенсивностей флуоресценции FITC в комплексах антиген - антитело

(а) контрольные "эритроциты А(П) группы крови; (б) эритроциты А(П) группы крови после инкубации с пируватом; (в) контрольные эритроциты В(Ш) группы крови; (г) эритроциты B(III) группы крови после инкубации с пируватом

Анализ данных пространственного распределения интенсивности флуоресценции свечения флуорохрома в комплексах антиген - антитело (рис.5) свидетельствует об уменьшении пиков флуоресценции в эритроцитах А(П) и В(Ш) группы крови после инкубации с пируватом по сравнению с контрольными эритроцитами. Пируват, по-видимому, конкурирует за активные реакционноспособные группы антигенов А и В с моноклональными антителами, меченными флуоресцеинизотиоцианатом, что отражается на изменении конформационной структуры белковой молекулы, а также способности антигенов образовывать комплексы антиген-антитело.

ВЫВОДЫ:

1. Выявлены группоспецифические особенности углеводного обмена лиц с 0(1) - AB(IV) группами. крови. Для обследованных 0(1) группы крови характерно наименьшее содержание глюкозы и инсулина, наибольшая амилолитическая активность, высокое содержание пирувата и лактата в крови; для лиц А(П) группы - наибольший уровень инсулина и кортизола, низкое содержание лактата; для пациентов с В(Ш) группой - максимальная лактатдегидрогеназная и минимальная амилолитическая активность, наибольшее содержание пирувата и лактата; для обследованных AB(IV) группы - самь!й высокий уровень глюкозы, низкай амилолитическая и лактатдегидрогеназная активность, наименьшее содержание лактата и пирувата в крови.

2. С использованием компьютерной системы «PASS: С&Т» и «Pharma Expert» охарактеризованы возможные биологические эффекты пирувата. Установлена способность пирувата оказывать антитоксическое, гиперхолестеролемическое, противовоспалительное, обезболивающее, фибринолитическое, цито- и гемопротекторное, иммуномодулирующее действия.

3. Показано, что пируват изменяет сродство гликопротеина с детерминантой N-ацетилгалактозамин (антиген А) к антителу более интенсивно по сравнению с гликопротеином с детерминантой D-галактоза (антиген В), что выражается в уменьшении способности образовывать комплексы антиген-антитело, снижении степени и увеличении времени начала агглютинации.

4. Выявлено модифицирующее влияние пирувата на иммуноглобулины плазмы крови. Показано более быстрое узнавание естественных антител антигенными детерминантами B-антигена, что выражается в увеличении степени агглютинации. Установлено ускорение образования комплексов анти-А и анти-В# моноклональкых антител с антигенами, обусловленное, вероятно, ' конформашлонными изменениями в молекулах иммуноглобулинов.

5. Разнонаправленное действие пирувата на экспрессию антигенов нашло свое подтверждение при оценке результатов белок-белкового взаимодействия методом проточной цитофлуориметрии, которая показала изменение количества образующихся иммунных комплексов. Визуализация антиген-антительных комплексов с помощью конфокальной микроскопии при введении в систему пирувата позволила выявить изменение размера и количества агглютинатов, что подтверждает возможность использования малых молекул с целью изучения белок-белковых взаимодействий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. При оценке метаболического статуса пациента учитывать генетически детерминированный фактор - АВО-групповую принадлежность крови, с которой ассоциированы особенности обмена.

2. Рекомендуется включить в перечень показателей биохимического анализа определение в крови' содержания пирувата, который влияет на взаимодействие белков, для оценки риска развития патологии.

3. При постановке чувствительных высокотехнологичных методов (иммунофервдентный, иммунофлуоресцентный, полимеразная цепная реакция) учитывать возможные искажения результатов анализа в крови при повышенном уровне минорных компонентов метаболизма.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

1. Бортникова, H.A. Влияние этанола на активность ферментов мозга / H.A. Бортникова // Вестник РГМУ. - Москва. - 2007. - № 2 (55) - с. 253

2. Бортникова, H.A. Этанол как модулятор активности ферментов мозга / H.A. Бортникова, З.Ж. Махмутова // Сборник материалов I Всероссийской 75 итоговой студенческой научной конференции «Студенческая наука и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты» - Самара, 2007. -С. 51

3. Бортникова, H.A. Влияние «силистронга» на окислительно-восстановительный метаболизм лимфоцитов / H.A. Бортникова, Н.Т. Аюпова // Сборник материалов II Всероссийской 76 итоговой студенческой научной конференции «Студенческая наука ■ и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты». - Самара. - 2008. - С. 31.

4. Бортникова, H.A. Изучение экспрессии генов под воздействием ингибитора рецепторов эпидермального фактора роста канертиниба в условиях in vitro / H.A. Бортникова // Вестник РГМУ. - Москва. - 2009. - № 3 - с. 225

5. Колотьева, H.A. Модифицирующее влияние малых молекул на белок-лигандное взаимодействие / H.A. Колотьева, Е.А. Шахнович, Н.С. Нефедова, Е.А. Рыскина, A.A. Епифанова, К.И. Колесова, O.A. Долгова // Тезисы II г" международной научно-практической конференции «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: геномика, протеомика, биоинформатика». - Новосибирск. -2011.-с. 211

6. Гильмиярова, Ф.Н. Прогнозируемая биологическая активность антигенных детерминант ABO системы крови / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, H.A. Колотьева, Е.А. Шахнович, Н.С. Нефедова, Е.А. Рыскина, A.A. Епифанова, A.B. Бабичев // Альманах «Жизнь плюс наука». Интернализация и инновации. - Вып. 7. Самара: ООО «Книга». - 2011. - с. 24-28.

7. Гильмиярова, Ф.Н. Метаболическое зондирование и компьютерное моделирование в изучении структурно-функциональных особенностей антигенов Н, А, В / Ф.Н. Гильмиярова, Е.А. Рыскина, В.М. Радомская, H.A. Бортникова, Е.А. Гамзова, A.A. Епифанова, Ю.В. Мякишева // Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований: материалы Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине. - Омск: Изд-во^ОмГМА. - 2011. - с. 74-75

8. Гильмиярова, Ф.Н. Отличительные признаки антигенов системы ABO -основа индивидуального ответа на различные стимулы / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, Е.А. Рыскина, H.A. Бортникова, Е.А. Гамзова, A.A. Епифанова // Клиническая лабораторная диагностика. - Москва. - 201-1. -№ 10,-с.З

9. Колотьева, H.A. Влияние лактата на антиген-антительное взаимодействие / H.A. Колотьева // Материалы докладов Всероссийской конференции с

международным участием «Молодые ученые - медицине». - Самара. -

2011.-с. 208-209

10. Шахнович, Е.А. Группоспецифические особенности лигандного взаимодействия под влиянием силистронга / Е.А. Шахнович, H.A. Колотьева, Н.С. Нефедова, Е.А. Рыскина, A.A. Епифанова, О.И. Мелешкина, O.A. Долгова, Е.И. Кобзева II Здоровье и образование в XXI веке. Инновационные технологии, модернизация, качество, доступность и безопасность лекарственных средств в системе здравоохранения современной России. Школа формирования принципов здорового образа жизни. - Москва.: РУДН. - 2011. - с. 510-511 И. Гильмиярова, Ф.Н. Метаболический профиль 0(1) - AB(IV) групп крови / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, Е.А. Шахнович, Н.С. Нефедова, H.A. Колотьева, Е.А. Рыскина, A.A. Епифанова // Медицинский альманах. -Н.Новгород. — 2012. — № 1 (20)-с. 174- 178.

12. Колотьева, H.A. Роль малых молекул в реализации белок-белковых взаимодействий / H.A. Колотьева, Е.А. Шахнович, Н.С. Нефедова, Е.И. Кобозева, Е.Д. Волков, Е.А. Рыскина // Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии: сборник трудов II Международной Интернет-конференции. - Казань: изд-во «Казанский университет». - 2012. - с.152-153 .

13. Колотьева, Н.'А. Прогнозирование спектра биологической активности пирувата / bÍA. Колотьева, И.А. Савельев, Е.И. Кобозева // Материалы докладов XVII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине», 86-я Всероссийская научная конференция памяти член-корреспондента АН РТ, профессора И.Г. Салихова. - Казань. -

2012.

14. Гильмиярова, Ф.Н. Оценка полиморфизма ABO- и резус- систем крови доноров / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, O.A. Гусякова, A.A. Епифанова, Е.А. Рыскина, И.Ф. Сидорова, Е.А. Шахнович, H.A. Колотьева, Н.С. Нефедова, O.A. Николаева, A.A. Чудинова, Е.И. Кобозева // XVI Международная научная конференция «Здоровье семьи в XXI веке» Будапешт (Венгрия). - 2012. - с. 70-72

15. Гильмиярова, Ф.Н. Оценка иммуногенетических особенностей донорской крови / Ф.Н. Гильмиярова, Е.А. Шахнович, H.A. Колотьева, Н.С. Нефедова, И.Ф. Сидорова, A.A. Епифанова, Н.И. Гергель II Клиническая лабораторная диагностика. - Москва. - 2012. - № 9. - с. 42

16. Мурский, С.И. Программа для импорта данных, полученных с биохимического анализатора COBAS INTEGRA 400 Plus / С.И. Мурский, O.A. Гусякова, И.А. Зубова, Е.Е. Воронкова, H.A. Бортникова, Е.С. Липатова, Е.А.. Рыскина и др. // Свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ № 2010611397 от 17 февраля 2012 г.

Малые молекулы в изучении особенностей белок-белковых взаимодействий

Колотьева Наталия Александровна (Россия)

В данной работе было проведено изучение влияния пирувата на белок-белковое взаимодействие. Получен блок новых данных, раскрывающих биологическую вариабельность показателей углеводного обмена и его регуляторов, обусловленную групповой принадлежностью крови. Получены сведения о возможной биологической активности пирувата, обусловленной его химической структурой.

Выявлено, что пируват оказывает разнонаправленное влияние на взаимодействие антигенов и антител системы АВО, вызывая увеличение времени наступления и уменьшение степени агглютинации эритроцитов, ускорение образования антиген-антительных комплексов моноклональных антител с антигенами А и В.

Впервые с целью количественной оценки и визуализации результатов взаимодействия антигенов и антител при введении малых молекул в систему использован метод проточной цитофлуориметрии и лазерной сканирующей конфокальной микроскопии. Выявлено разнонаправленное действие пирувата на экспрессию антигенных детерминант, изменение размера агглютинатов, уменьшение их количества.

Small molecules in research of protein-protein interactions

Nataliya Koloteva (Russia)

In this work the influence of pyruvate on protein - protein interaction was studied. The block of the new data opening biological variability of indexes of carbohydrate metabolism and its regulators, caused by ABO blood group accessory was received. Evidences of the possible biological effects of pyruvate caused by its chemical structure were obtained.

It was revealed that pyruvate shows multidirectional influence on interaction of antigens and antibodies of ABO system, increasing the time of approach and decreasing the extent of agglutination of erythrocytes, formation acceleration of antigen-antibody complexes of monoclonal antibodies with antigens A and B.

For the first time for the purpose of the quantitative assessment and visualization of results of interaction of antigens and antibodies at injection of small molecules in system the metho'd of a Flow Cytofluorometry and a Laser Scanning Confocal Microscopy was used, Multidirectional action of a pyruvate on an expression of an antigen determinant, a dimensional change of agglutinates, decrease of their quantity was revealed.

КОЛОТЬЕВА НАТАЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ В ИЗУЧЕНИИ ОСОБЕННОСТЕЙ БЕЛОК-БЕЛКОВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ

Автореферат

; диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 19 октября 2012 г. Тираж 100 экз. Заказ № 794 Отпечатано на ризографе. Формат 60x85/16 Объем 1,5 услов.печ.л. Уч.-изд.л. 1,5

Типография Клиник Самарского государственного медицинского университета 443089, г. Самара, пр. Карла Маркса, 165 б.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Колотьева, Наталия Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антигены системы ABO крови

1.1.1. История изучения

1.1.2. Распространенность в природе

1.1.3. Строение, общность и отличительные особенности антигенов А, В человека

1.2. Генетическое обеспечение синтеза антигенов системы ABO

1.3. Ассоциированность метаболических особенностей с антигенным представительством ABO системы

1.4. Малые молекулы в регуляции метаболических процессов

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика обследуемого контингента

2.2. Методы исследования

2.2.1. Определение группы крови по системе ABO

2.2.2. Биохимические методы исследования

2.2.3. Исследование содержания кортизола и инсулина

2.2.4. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия

2.2.5. Исследование антигенов А и В на эритроцитах методом проточной цитофлуориметрии

2.2.6. Компьютерное прогнозирование спектра биологической активности пиру вата

2.3. Статистическая обработка результатов исследований

ГЛАВА III. АССОЦИИРОВАННОСТЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ УГЛЕВОДНОГО МЕТАБОЛИЗМА КРОВИ У ПРАКТИЧЕСКИ ЗДОРОВЫХ ЛИЦ С РАЗЛИЧНОЙ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬЮ КРОВИ

ГЛАВА IV. ВЛИЯНИЕ ПИРУВАТА НА АНТИГЕН-АНТИТЕЛЬНОЕ ВЗАИМО ДЕЙСТВИЕ

4.1. Изучение биологической активности пирувата in silico

4.2. Влияние пирувата на антиген-антительное взаимодействие

4.2.1. Влияние пирувата на антигены А и В

4.2.2. Влияние пирувата на изогемагглютинины ABO системы

4.2.3. Влияние пирувата на моноклональные антитела анти-А и анти

ГЛАВА V. ВИЗУАЛИЗАЦИЯ АНТИГЕН-АНТИТЕЛЬНОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В УСЛОВИЯХ ДЕЙСТВИЯ ПИРУВАТА

5.1. Оценка влияния пирувата на лиганд-рецепторное взаимодействие флуоресцентных антител с антигенными детерминантами ABO системы

5.2. Оценка влияния пирувата на лиганд-рецепторное взаимодействие флуоресцентных антител с антигенными детерминантами ABO системы с использованием лазерной сканирующей конфокальной микроскопии 109 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 117 ВЫВОДЫ 128 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 130 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Малые молекулы в изучении особенностей белок-белковых взаимодействий"

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Начавшееся тысячелетие для медицины можно обозначить как время поиска новых путей повышения качества жизни и здоровья человека с использованием новых технологий протеомики и метаболомики. Интенсивно развивающееся медико-биологическое направление наномедицины, возникшее на стыке ряда перспективных наук, гребует фундаментального подхода к решению лечебно-диагностических и валеологических задач. Имеющиеся на сегодняшний день в арсенале медицинской науки высокотехнологичные методы исследования позволяют получить информацию о состоянии базовых метаболических путей в организме. Однако практически отсутствует система данных для индивидуализации молекулярных основ метаболизма, факторах эндогенной природы, определяющих физиологический уровень обмена и специфику индивидуальной реакции. Одним из таких параметров, на наш взгляд, является генетически детерминированный признак - группа крови, определяющий особенности клеточного состава, показателей метаболизма, молекулярную основу развития различной патологии (Тананян А.О., 2001; Гармонов С.Ю. с соавт., 2004; Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2007, Lomenick В., 2010). В настоящее время актуально дальнейшее более детальное изучение структурно-функциональных характеристик отдельных антигенов, ответственных за каждую группу крови. Современные представления о структуре и топографии антигенов А,В,Н позволяют объяснить их высокую иммуногенность, роль в формировании иммунного ответа (Сахаров P.C., 2001; Оловникова Н.И.; 2001, Донсков С.И., 2001; Smolarek D. et al., 2008; Eiji Hosoi, 2008;). В этом пиане перспективным является исследование антигенов и антител ABO системы в качестве объектов межмолекулярных, в том числе белок-белковых взаимодействий. Известно, что последние во многом определяются наличием микроокружения, создаваемого промежуточными продуктами обмена, так называемыми малыми молекулами, играющими значительную роль в поддержании метаболического баланса (Никитина B.C. с соавт., 2000; Павлюченко И.И., 2003; Титов В.Н., 2010; Petry, J.J., Hadley S.K., 2001; Лима-де-Фариа А., 2012). Интересным представляется использование естественных интермедиатов в качестве метаболических зондов, возможно влияющих на функциональные группы антигенов и вызывающих их дальнейшие конформационные перестройки, реализующиеся в изменении характера антиген-антительных взаимоотношений. С одной стороны это может пополнить сведения об особенностях строения изучаемых антигенов, с другой стороны -раскрыть новые молекулярные механизмы белкового взаимодействия, что в дальнейшем будет содействовать более глубокому пониманию регуляции процессов рецепции, межмолекулярного узнавания, способствовать индивидуальному подходу к трактовке результатов иммуноферментного, электрохемилюминесцентного методов исследования.

Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральных программ:

Цель настоящего исследования заключается в изучении белок-белковых взаимодействий в условиях влияния пирувата с учетом генетически детерминированных особенностей организма.

Задачи:

1. Оценить специфику метаболизма, обусловленную групповой принадлежностью крови по системе ABO, определив в сыворотке крови показатели углеводного обмена (концентрацию глюкозы, пирувата, лактата, активность лактатдегидрогеназы, амилазы), а также уровень инсулина и кортизола.

5. Визуализировать межмолекулярные взаимодействия и антиген-антительные комплексы в условиях влияния пирувата, используя методы флуоресцентного биоимаджинга и лазерной сканирующей конфокальной микроскопии.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Получен блок новых данных, раскрывающих биологическую вариабельность показателей углеводного обмена и его регуляторов, обусловленную групповой принадлежностью крови. Так, у пациентов 0(1) группы глюкоза является активно метаболизирующимся соединением: при самом низком ее содержании в крови относительно других групп наблюдается минимальный уровень инсулина, высокая амилолитическая активность, максимальная концентрации пирувата и лактата, что, вероятно, обусловлено интенсивно протекающими процессами распада гликогена и анаэробного катаболизма. Для обладателей А(П) группы крови характерно наибольшее содержание инсулина и кортизола в сыворотке крови, что, очевидно, вызвано усиленным синтезом данных регуляторов-антагонистов с целью поддержания метаболического баланса. У обследуемых с В(Ш) группой крови наблюдается самая высокое содержание пирувата и лактата, наибольшая активность лактатдегидрогеназы, низкая амилолитическая активность и минимальное содержание кортизола. Метаболический профиль лиц с AB (IV) группой крови характеризуется самым высоким содержанием глюкозы на фоне низкой амилолитической и лактатдегидрогеназной активности, повышенного относительно значений в генеральной совокупности уровня кортизола, что вероятно, говорит о преобладании анаболических процессов.

При анализе полученных данных установлено, что колебания концентрации пирувата в крови лиц с различной групповой принадлежностью минимальные, несмотря на выраженные отклонения показателей содержания глюкозы и лактата. Исследование соотношения лактат/пируват выявило значительно более низкую концентрацию в крови пирувата по сравнению с содержанием лактата у обладателей всех четырех групп крови, что позволяет рассматривать пируват не только как интегральный метаболит, но и регуляторную, сигнальную молекулу, стабильность концентрации которой необходима для межмолекулярных взаимоотношений.

Впервые при изучении биологической активности пирувата с помощью компьютерной системы «Prediction of Activity Spectra for substances: Complex & Training» и «Pharma Expert» выявлен широкий спектр его возможных биологических эффектов. Пируват может выступать регулятором обмена липидов, цито- и гемопротектором, оказывать антитоксическое, гиперхолестеролемическое, противовоспалительное, обезболивающее, фибринолитическое, антинейротоксическое действие, а также проявлять свойства модулятора иммунных реакций.

Новыми являются сведения об особенностях межмолекулярного взаимодействия антигенов и антител системы ABO при влиянии на них пирувата. Показано, что при добавлении пирувата взаимодействие антигенов А и В носит различный характер. Время наступления агглютинации гликопротеинов с детерминантой Ы-ацетилгалактозамин (антиген А) возрастало после инкубации с пируватом более значительно, чем гликопротеины с детерминантой Б-галактоза (антиген В), что очевидно обусловлено имеющимися различиями в их химической структуре.

В экспериментах с изогемагглютининами выявлено, что пируват не оказывает влияния на анти-А антитела В(Ш) группы и вызывает увеличение степени агглютинации эритроцитов А(П) группы крови, что вероятно, связано с его модифицирующим влиянием на конформацию антител, способствующим более быстрому узнаванию их антигенными детерминантами В-антигена. Показано также, что пируват ускоряет время образование антиген-антительных комплексов моноклональных антител с антигенами А и В.

Впервые с целью количественной оценки результатов взаимодействия антигенов и антител при введении малых молекул в систему использован метод проточной цитофлуориметрии. Выявлено разнонаправленное действие пирувата на экспрессию антигенных детерминант. Количество образующихся иммунных комплексов увеличивалось в образцах А(П) группы, уменьшалось — в В(Ш) и АВ (IV) группах крови.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Результаты исследования имеют теоретическое и практическое значение. В фундаментальном отношении разработана новая методология экспериментов in vitro - предложена наглядная молекулярная модель для изучения межбелковых взаимодействий. Использование естественных интермедиатов эндогенного происхождения в качестве молекулярных зондов позволяет выяснить не только биологические эффекты данных соединений, но и характер регулируемых ими молекулярных взаимоотношений. Данная модель может быть рекомендована для тестирования широкого спектра веществ, обладающих биологической и фармакологической активностью.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Особенности углеводного обмена, ассоциированные с групповой принадлежностью крови по системе ABO. Наименьшее содержание глюкозы и инсулина, наибольшая амилолитическая активность, высокое содержание пирувата и лактата в крови обследованных с 0(1) группой крови. Наибольшее содержание инсулина и кортизола, низкая концентрация молочной кислоты у обладателей А(П) группы. Максимальная лактатдегидрогеназная и минимальная амилолитическая активности, наибольшее содержание пирувата и лактата у доноров с В(Ш) группой крови. Самый высокий уровень глюкозы при низкой амилолитической и лактатдегидрогеназной активности, наименьшее содержание лактата и пирувата у пациентов с AB(IV) группой крови.

2. Широкий спектр биологических эффектов пирувата, установленный с помощью компьютерной программы «Prediction of Activity Spectra for substances: Complex & Training» и «Pharma Expert», ключевыми из которых являются антитоксическое, гиперхолестеролемическое, противовоспалительное, обезболивающее, фибринолитическое, цито- и гемопротекторное, иммуномодулирующее действия.

3. Способность пирувата участвовать в процессах межбелковых взаимоотношений, оказывая разнонаправленное влияние на взаимодействие антигенов и антител системы ABO. Более быстрое узнавание естественных антител антигенными детерминантами B-антигена, что выражается в увеличении степени агглютинации. Ускорение времяобразования антиген-антительных комплексов моноклональных антител с антигенами А и В.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследований были представлены на 73 итоговой студенческой научной конференции, посвященной 75-летию клиник СамГМУ (Самара, 2005); 64 итоговой студенческой научной конференции с международным участием (Москва, 2006); 74 итоговой студенческой научной конференции «Человек и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты российской науки» (Самара, 2006); 71 итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2006); международной всероссийской конференции студентов и молодых ученых «Пироговские чтения» (Москва, 2007, 2009); всероссийской итоговой студенческой научной конференции «Студенческая наука и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты» (Самара, 2007, 2008, 2009); XV Форуме «Национальные дни лабораторной медицины России-2011» (Москва, 2011); Международной конференции Инновационные технологии, модернизация, качество, доступность и безопасность лекарственных средств в системе здравоохранения современной России. Щкола формирования принципов здорового образа жизни (Москва, 2011); II международной научно-практической конференции «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине: геномика, протеомика, биоинформатика» (Новосибирск, 2011); Всероссийской конференции с международным участием «Молодые ученые - медицине» (Самара, 2011); Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине «Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований» (Омск, 2011); XVII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине», 86-я Всероссийская научная конференция памяти член-корреспондента АН РТ, прфессора И.Г. Салихова (Казань, 2012); Международной Интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (Казань, 2012); журналах Клиническая лабораторная диагностика (Москва, 2011); альманахе «Жизнь плюс наука». Интернализация и инновации (Самара, 2011); Медицинский альманах (Н.Новгород, 2012), совместном заседании Самарского отделения Всероссийского биохимического общества, кафедр общей, бионеорганической и биоорганической химии и фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ» (Самара, 2012).

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ. Результаты диссертационного исследования используются в работе клинико-диагностической лаборатории клиник СамГМУ ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ»; в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ», на кафедре биохимии ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ».

Свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ № 2010611397 от 17 февраля 2012 г.

Заявки на патент «Способ определения антигенов эритроцитов» (№2012108863/20(013302) от 07.03.2012), «Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» (№ 2012115145 (022873) от 16.04.2012), «Способ оценки антиген-антительных комплексов системы ABO» (№ 2012133378 от 03.08.2012).

ПУБЛИКАЦИИ

Всего опубликовано 19 работ, из них по теме диссертации 16,1 свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ, 5 работ - в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Колотьева, Наталия Александровна

ВЫВОДЫ:

1. Выявлены группоспецифические особенности углеводного обмена лиц с 0(1) - AB(IV) группами крови. Для обследованных 0(1) группы крови характерно наименьшее содержание глюкозы и инсулина, наибольшая амилолитическая активность, высокое содержание пирувата и лактата в крови; для лиц А(П) группы - наибольший уровень инсулина и кортизола, низкое содержание лактата; для пациентов с В(Ш) группой -максимальная лактатдегидрогеназная и минимальная амилолитическая активность, наибольшее содержание пирувата и лактата; для обследованных AB(IV) группы - самый высокий уровень глюкозы, низкая амилолитическая и лактатдегидрогеназная активность, наименьшее содержание лактата и пирувата в крови.

2. С использованием компьютерной системы «PASS: С&Т» и «Pharma Expert» охарактеризованы возможные биологические эффекты пирувата. Установлена способность пирувата оказывать антитоксическое, антигипоксическое, противовоспалительное, обезболивающее, фибринолитическое, цито- и гемопротекторное, иммуномодулирующее действия.

4. Выявлено модифицирующее влияние пирувата на иммуноглобулины плазмы крови. Показано более быстрое узнавание естественных антител антигенными детерминантами B-антигена, что выражается в увеличении степени агглютинации. Установлено ускорение времени образования комплексов анти-А и анти-В моноклональных антител с антигенами, обусловленное, вероятно, конформационными изменениями в молекулах иммуноглобулинов.

5. Разнонаправленное действие пирувата на экспрессию антигенов нашло свое подтверждение при оценке результатов белок-белкового взаимодействия методом проточной цитофлуориметрии, которая показала изменение количества образующихся иммунных комплексов. Визуализация антиген-антительных комплексов с помощью конфокальной микроскопии при введении в систему пирувата позволила выявить изменение размера и количества агтлютинатов, что подтверждает возможность использования малых молекул с целью изучения белок-белковых взаимодействий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

2. Рекомендуется включить в перечень показателей биохимического анализа определение в крови содержание пирувата, который влияет на взаимодействие белков, для оценки риска развития патологии.

3. При постановке чувствительных высокотехнологичных методов (иммуноферментный, иммунофлуоресцентный, полимеразная цепная реакция) учитывать возможные искажения результатов анализа в крови при повышенном уровне минорных компонентов метаболизма.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Колотьева, Наталия Александровна, Москва

1. Аврунин A.C. Роль биоритмов в разбросе данных динамического исследования красной крови на предоперационном этапе// A.C. Аврунин , В.Н. Хрулев // Клиническая лабораторная диагностика N 4. - 2006. - С.44-47.

2. Андреева, C.B. Перестройка хромосомы 9 при различных гематологических неоплазиях / C.B. Андреева, В.Д. Дроздова, Е.В. Поночевная, Н.В. Кавардакова // Цитология и генетика. 2008. - № 5. -с. 72-80.

3. Барсегянц, Л.О. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств (кровь, выделения, волосы): Руководство для судебных медиков. -М., 1999.

4. Бойко, Т.К. Содержание метаболитов и активность ферментов в учатсках сопряжения углеводного и липидного обменов при атеросклерозе / Т.К. Бойко // Диссертация на соискание ученой степени к.м.н. Куйбышев. - 1983.

5. Вельков В.В. Многомерная биология XXI века и клиническая лабораторная диагностика // Химия и Жизнь. 2007. - № 3

6. Гармонов, С. Ю. Аналитические методы исследования генетического полиморфизма организма человека / С.Ю. Гармонов, М.И. Евгеньев, И.Е. Зыкова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2004.- №1- С.З.

7. Гармонов, С.Ю. Аналитические методы исследования генетическогополиморфизма организма человека / С.Ю. Гармонов, М.И. Евгеньев, И.Е. Зыкова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2004. - №1. - С. 3.

8. Гехт Б. М., Меркулова Д. М., Мясоедов С. П. и др. // Тезисы доклада VII Всероссийского съезда неврологов. — Н. Новгород, 1995

9. Гильмиярова, Ф.Н. Группы крови: биологическая вариабельность клеточного состава и метаболизма в норме и патологии / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, Н.И. Гергель, O.A. Гусякова, И.Ф. Сидорова // Монография. Москва, 2007, -490с.

10. Гильмиярова, Ф.Н. Клинико-лабораторная оценка эффективности применения парафармацевтиков и паранутрицевтиков. /Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, JI.H. Виноградова и др. //Клинич. лаборатор. диагн. 1998. - № 9. - С.32-33.

11. Грибов Л.А., Баранов В.И. Теория и методы расчета молекулярных процессов: спектры, химические превращения и молекулярная логика. 2006.- 480 с.

12. Губанов, P.A. Биохимические молекулы как объект воздействия ионов лития / P.A. Губанов // Материалы науч.-практ. конф. «Здоровье и образование в XXI веке». М. 2006. - С. 145.

13. Гуртовая, C.B. Определение антигенов с помощью карточек «Скангель» / C.B. Гуртовая, М.В. Маяцкая // Судебно медицинская экспертиза. - 2001. - № 4. - с. 39 - 40.

14. Данилова JI.A. Анализы крови и мочи. // 4-е изд. исправ. СПб.: Салит-Медкнига. - 2003. 128 с.

15. Делевский, Ю.П. Обоснование изотипической дифференциации в системе ABO с учетом неагглютиногенных кислых гликотопов липидного происхождения / Ю.П. Делевский // Вестник Российской академии медицинских наук. 2008. № 4. - с. 3 - 10.19

16. Долгов, В.В. Клинико-диагностическое значение лабораторных показателей / Долгов, В В., Морозова и др. М., 1995. - 95 с.20

17. Долгов, В.В. Обеспечение качества в лабораторной медицине: учеб. пособие /В.В. Долгов, A.B. Мошкин, В.Н. Малахов и др. М, 1997. -С. 231

18. Доманский, A.B. Окислительные процессы, индуцируемые органической гидроперекисью в эритроцитах человека: хемилюминесцентные исследования / A.B. Доманский, Е.А. Лапшина, И.Б. Заводник // Биохимия. 2005. - т.70, вып. 7. - с. 922 - 932.

19. Донсков, С.И. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии // С.И. Донсков, В.А. Мороков М.: Скороходов В.А.-2011.- 1016с.

20. Донсков, С.И. Аллоиммунизация антигенами эритроцитов -глобальный популяционный процесс / С.И. Донсков, И.С. Липатова // Вестник службы крови России. 2001. - № 3. - с. 18-24.

21. Донсков, С.И. Группы крови в биологии человека факты и предположения / С.И. Донсков // Гематология и трансфузиология. -2001.-т. 46., №5.-с. 32-33

22. Донсков, С.И. Группы крови системы Rhesus. Теория и практика / С.И. Донсков. М.: ВИНИТИ РАН, 2005. - 392 с.

23. Донсков, С.И. Ошибки при определении групп крови (лекция) / С.И. Донсков // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. № 4. - с. 25 -32.

24. Донсков С.И., Дубинкин И.В., Михайлова Н.М. Антиген «С» системы ABO. Сообщение I. Перекрестные реакции сывороток 0(1) // Вестник службы крови России. 2002. - № 3. - С. 13-20.

25. Донсков С.И., Дубинкин И.В., Михайлова Н.М. Антиген «С» системы ABO. Сообщение II. Перекрестные реакции моноклональных анти-АВ-антител // Вестник службы крови России. 2003. - № 1. - С. 16-21.

26. Донсков, С.И. Перекрестные реакции антигенов системы ABO / С.И. Донсков, Н.П. Соболева, И.В. Дубинкин // Трансфузиология и служба крови: тез. докл. М., 1998. - С. 68.

27. Дранник, Г.Н. Генетические системы крови человека и болезни / Г.Н. Дранник, Г.М. Дизик. // Киев: Здоровье, 1990. С. 196.

28. Дубровский, В.А. Определение групповой принадлежности крови человека на основе цифровых фотографий процесса агглютинации эритроцитов / В.А. Дубровский, A.A. Долмашкин // Оптика и спектроскопия. 2010. - т. 109, № 2. - с. 296 - 300.

29. Дуткевич, И.Г. К истории открытия групп крови / И.Г. Дуткевич // Трансфузиология. 2002. - Т.З., №1. - С.49-53

30. Ермакова, Т. А. Интегральная оценка окислительно-восстановительного метаболизма эритроцитов у больных с различными формами анемий / Т.А. Ермакова, Н.В. Цветаева // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - № 3. - с. 24 - 35

31. Жибурт, Е.Б. Фенотип ABO и резус предрасположенности к развитию инфекционного эндовардита / Е.Б. Жибурт, H.H. Шихвердиев, З.М. Насретдинова, H.A. Ашинов, H.H. Попова, Н.Б. Серебряная // Гематология и трансфузиология. 1999. - т. 44, № 6. - с. 15-17.

32. Зайчик, А.Ш. Основы общей патологии. Часть 1. Основы общей патофизиологии // А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. СПб: Элби, 1999. - 624 с.

33. Земсков, A.M. Зависимость иммунологической реактивности от групп крови и характера микрофлоры у больных хроническим гнойным средним отитом / A.M. Земсков, С.Д. Полякова // Вестн. Оториноларингологии. 1996. №5. - С. 35-38.

34. Земсков, A.M. Иммунологическая реактивность здоровых людей разного возраста и антигены системы ABO / A.M. Земсков, В.М. Земсков, В.А. Вороновский, М.А. Земсков, Е. Бжозовский // Физиология человека. 2000. - т.26, № 2.-е. 132 - 138.

35. Зимин, A.A. Биологические макромолекулы: структура, формы и функции / A.A. Зимин, В.Д. Лахно, H.H. Назипова- Ижевск, 2002. С. 35-54.

36. Зотиков, Е.А. Антигены форменных элементов крови и антитела к ним (характеристика, методы определения, значение в медицине) (лекция) / Е.А. Зотиков // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 12. -с. 25 -30.

37. Зотиков, Е.А. Карл Ландштейнер и его наследие / Е.А. Зотиков //

38. Гематология и трансфузиология. 2001. - т. 46., №5. - с. 25-28

39. Каландаров, P.C. Автоматизированные методы серологических исследований / P.C. Каландаров // Проблемы гематологии. 1998. - № З.-с. 40-44.

40. Кишкун, A.A. Гормональные генетические исследования в клинической практике/ A.A. Кишкун.- М.:Лабора, 2007.- 400с.

41. Кишкун, A.A. Лабораторные информационные системы и экономические аспекты деятельности лаборатории/ A.A. Кишкун, АЛ. Гузовский. М.:Лабора. - 2007. - 256 с.

42. Кленова, H.A. Строение, метаболизм и функциональная активность эритроцитов человека в норме и патологии / H.A. Кленова, P.O. Кленов. Самара: Издательство «Самарский университет», 2009. 116 с.

43. Косяков, П.Н. Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии / П.Н. Косяков // М.: Медицина, 1974. с. 21, 24, 25.

44. Крылов, В.Н. Типовые изменения электрофоретической подвижности эритроцитов и их фосфолипидный состав при разных заболеваниях / В.Н. Крылов, A.B. Дерюгина, Е.А. Антипенко // Клиническая лабораторная диагностика. 2009. - № 9. - с. 37 - 40.

45. Кульман, P.A. Превращение любой группы крови человека в нулевую -не миф, а реальность / P.A. Кульман // Медицинская консультация. -1997.-№4.-с. 5-7.

46. Курганов, Б.И. Стабильность и фолдинг белков / Б.И. Курганов // Биохимия. 1998. Т. 63, вып. 3. - С. 291-293.

47. Лапенков, М.И. А(В) вариант антигенной системы ABO / М.И. Лапенков, Е.В. Белкина, Е.И. Дерюгина, Т.Л. Николаева, Н.В. Проскурина, Н.И. Оловникова // Гематология и трансфузиология. -2002. т.47, № 5. - с. 25-29

48. Лапенков, М.И. Анти-АВН-LEWIS моноклональные антитела. Получение, определение эпитопной специфичности и применение в судебной медицине: дис. . докт. мед. наук / М.И. Лапенков. М., 2002. - 273 с.

49. Лима-де-Фариа А. Похвала глупости хромосомы. Исповедь непокорной молекулы. М.: Бином. 2012. - 312 с.

50. Литвинов, A.B. Норма в медицинской практике / A.B. Литвинов // Справочное пособие. М.: МЕДпресс. - 2000. - 144 с.

51. Литвинов, М. Малые молекулы организмов / М. Литвинов // Химия и жизнь 21 век. 2000. - С. 23-26.

52. Лобуи, Д. Современная гематология и онкология / Д. Лобуи, A.C. Городон, Р. Сильбер, Ф.М. Маджиа // Пер. с англ. 1983. - М.: Медицина. - 312 с.

53. Лолор-младший Г., Фишер Т., Адельман Д. Клиническая иммунология и аллергология. М.: Практика. - 2000

54. Луговская, С.А. Иммунофенотипирование в диагностике гемобластозов / С.А. Луговская, М.Е. Почтарь, H.H. Тупицин // 2005. -М. Тверь: ООО «Издательство «Триада». - 168 с.

55. Льюис, С.М. Практическая и лабораторная гематология / С.М. Льюис, Б. Бэйн, И. Бэйтс; пер. с англ. Под ред. А.Г. Румянцева. М.: ГЭОТАР- Медиа, 2009. 672 с.

56. Малинка, М. К. Увеличение способности иммуноглобулинов, инкубированных при кислых значения pH, связывать отрицательно заряженные антигены / М. К. Малинка, В. М. Петриев, В. К. Подгородниченко // Иммунология. 2007. - N 1. - С. 16-19.

57. Малинка, М. К., Петриев В. М., Подгородниченко В. К. // Иммунология. 2007. № 1. - С. 16-19.

58. Малыгин, А.Г. Структурно-химический подход к организации материала на метаболических картах / А.Г. Малыгин // Биохимия. — 2004. Т. 69, вып. 12. С. 1691-1699.

59. Маршалл, В. Дж. Клиническая биохимия / В.Дж. Маршалл; пер. с англ.- М.; СПб.: Изд. БИНОМ, 2000. 368 с.

60. Медик, В.А. Специальные вопросы методологии статистического анализа в биомедицинских исследованиях Текст. / В.А. Медик, Б.Б. Фишман // Проблемы управления здравоохранением. 2004. - № 14. -с.78 - 8269

61. Меньшиков, В.В. Внелабораторные причины ошибочных результатов лабораторных исследований /В.В. Меньшиков // Клин. лаб. диагностика. 1999. - №1. - С. 21-35.

62. Меньшиков, В.В. Клиническая лабораторная аналитика /В.В.

63. Меньшиков. М.: Агат-Мед, 2002. - 860 с.

64. Меркулова, H.H. Сравнительная оценка использования сульфидредуцентов для выявления IgG-антител к антигенам эритроцитов системы ABO / H.H. Меркулова, Е.А. Хромова, Н.В. Минеева // Гематология и трансфузиология. 2004. - т. 49, № 3. - с. 16 - 17.72

65. Минеева, Н.В. Антигены эритроцитов: методы определения групп крови и резус принадлежности / Н.В. Минеева. - СПб., 1999. - 40 с.

66. Минеева, Н.В. Группы крови человека. Основы имменогематологии. -СПб., 2004.-с.20.

67. Минеева, Н.В. Случаи выявления редких вариантов антигена А / Н.В. Минеева, H.H. Меркулова, Е.А. Хромова, H.H. Бодрова // Гематология и трансфузиология. 2003. - т.48, №1. - с. 39 - 42.

68. Морков, В.А. Поликатионный тест в планшетах для иммунологических реакций как метод определения эритроцитарных антигенов и антител / В.А. Мороков, И.В. Pay // Гематология и трансфузиология. 2001. -т.1, № 4. - с. 45-47.

69. Морозова, В.Т. Эритроциты: структура, функции, клинико-диагностическое значение (лекция) / В.Т. Морозова, С.А. Луговская, М.Е. Почтарь // Клиническая лабораторная диагностика. 2007. - № Ю.-с. 21-35.

70. Мороков, В.А. Эффективный метод выявления IgG- антител системы ABO и его ускоренная микромодификация / В.А. Мороков, Д.В. Лабунов, И.В. Pay // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. -№4.-с. 40-43.

71. Мухитов, А.Р. Метод конфокальной лазерной сканирующей микроскопии в выявлении тирозинового фосфорилирования белков растений / А.Р. Мухитов, Н.В. Петрова, О.В. Власова, Ф.Г. Каримова // Ученые записки Казанского государственного университета Серия:

72. Естественные науки. 2008. - Том 150, кн. 2 - с. 144 - 154

73. Назаренко Г.И., Кишкун A.A. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. -М.: Медицина. 2006

74. Неретин, В.Я. Анализ ассоциации групп крови ABO и резус фактора с миастенией у детей / В.Я. Неретин, Б.В. Агафонов, Б.М. Гехт, В.Г. Цуман, О.П. Сидорова, А.Е. Наливкин // Журнал неврологии и психиатрии. 2000. - № 5. с. 61 - 62.

75. Никитина, B.C. Флавоноиды листьев малины и ежевики и их антиоксидантная активность / B.C. Никитина, Г.В. Шендель, А.Я. Герчиков, Н.Б. Ефименко // Химико-фармацевтический журнал. — 2000. -Т. 34, № п.-С. 25-27.

76. Оловникова, Н.И. Антигены эритроцитов человека / Н.И. Оловникова, Т.Л. Николаева // Гематология и трансфузиология. 2001. - № 5. - с. 37-45.

77. Оловникова, Н.И. Иммуногематология в трансфузиологии в начале XXI века / Н.И. Оловникова // Гематология и трансфузиология. 2001. -т. 46,№3.-с.95- 100.

78. Пальцев, М.А., Иванов A.A. Межклеточные взаимодействия. М.:1. Медицина, 1995

79. Пальцев, М.А., Иванов A.A., Северин С.Е. Межклеточные взаимодействия. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2003. - 288 с.

80. Патрушев, JI. И. Искусственные генетические системы, ИБХ РАН. — М.: Наука. 2004. - с. 407

81. Перехрестенко, П.М. Группоспецифические антигены системы ABO человека и современные методы их выявления ( К 100-летию открытия групп крови) / П.М. Перехрестенко, Р.П. Равлюк, JI.M. Исакова // Украинский медицинский журнал. 2000. - № 5 (19). - с. 5-8.

82. Песков, С.А. Биологические маркеры раннего развития пневмокониозов / С.а. Песков. Автореф. дис. .канд. мед. наук. — Новосибирск, 2000. 23 с.

83. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1992. - 415 с.

84. Поройков В.В. Компьютерное предсказание биологической активности веществ: пределы возможного // Химия в России. 1999. - № 2. - с. 812.

85. Потапов, М.И. Антигены типа Ах и Am. Возможные диагностические реагенты к ним / М.И. Потапов // Судебно-медицинская экспертиза.2005. -№2. -с. 27-29.

86. Потапов, М.И. О методах достижения группоспецифической активности растительных экстрактов / М.И. Потапов // Судебно-медицинская экспертиза. 2003. -№ 1. - с. 15-18.

87. Потапов, М.И. Определение антигенов AI и А2 эритроцитов фитогемагглютининами / М.И. Потапов // Судебно медицинская экспертиза. - 2004. - № 6. - с. 32-35.

88. Потапов, М.И. Парциальные группоспецифические фитогемагглютинины анти-В1 и анти-В2 / М.И. Потапов // Судебно -медицинская экспертиза. 2004. - № 1.-е. 16-19.

89. Провоторов, В.М. Роль и место эритроцитов в системе направленного транспорта различных фармакологических средств / В.М. Провоторов, Г.А. Иванова // Клиническая медицина. 2009. - № 9. - с. 4 - 7.

90. Прокоп, О. Биохимия групповых субстанций крови/ О. Прокоп, В. Гёлер // Группы крови человека (Пер. с нем.). 1991. - М.: Медицина . - с. 50-54.

91. Рагимов, A.A. От К. Ландштейнера к трансфузионной иммунологии / A.A. Рагимов // Гематология и трансфузиология. 2001. - т. 46, № 5. -с. 33 -37.

92. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных Текст.: применение пакета прикладных программ «STATISTICА» / О.Ю. Реброва. М.: Медиа сфера. - 2003 .-312 с.

93. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейбл. М., 2000. -206 с.

94. Рыжова, О.Б. Современные методы определения группы крови и резус принадлежности крови / О.Б. Рыжова, Е.Л. Семикина // Российский педиатрический журнал. 2008. - № 5. - с. 42 - 47.

95. Садым A.B., Лагунин A.A., Филимонов Д.А., Поройков В.В. Интернет-система прогноза спектра биологической активности химическихсоединений // Химико-фармацевтический журнал. 2002. - 36 (10). - с. 21-26.

96. Сахаров P.C. Поликатионный экспресс метод типирования эритроцитарных антител в жидкой крови и ее пятнах / P.C. Сахаров, Г.В. Скосырев, М.В. Федулова // Судебно - медицинская экспертиза. -1997.-т. 40, №4. -с. 29-31.

97. Сахаров, P.C. Частота групп крови ABO, выраженность групповых антиенов и изогемагглютининов у арабов Сирии / P.C. Сахаров, X. К. Нофаль // Судебно-медицинская экспертиза. 1996. - № 2. - с. 34 - 36.

98. Сохина A.A., Чернушенко Е.А. Иммуногематология и клиническая иммуногенетика // Прикладная иммунология. 1984. - Киев: Здоров'я. -с. 123—124.

99. Тимченко П.Е., Захаров В.П., Волова Л.Т., Болтовская В.В., Тимченко Е.В. Микроскопический контроль процесса остеоинтеграции имплантов / Компьютерная оптика. том 35. - № 2. - 2011. - с. 183-187

100. Томилин, В.В. Частота встречаемости антигенов системы ABO у населения Российской Федерации / В.В. Томилин, C.B. Гуртовая // Судебно-медицинская экспертиза. 1999. - № 3. - с. 16-18.112

101. Торшин В.А. Уровень лактата крови как показатель STAT-анализа. Лаборатория. № 4, 2001, с. 17.

102. Феофанова, A.B. Изучение частоты встречаемости групп крови системы ABO у доноров гемокомпонентов и пациентов онкологического стационара / A.B. Феофанова, О.Я. Волкова // Клиническая лабораторная диагностика. -2011.-№ 1.-е. 35-37.

103. Фесенко, Д.О. Генотипирование биологического материала по локусам

104. HLA DQA1, ABO, AMEL с помощью биочипов / Д.О. Фесенко, О.Н. Митяева, Т.В. Наседкина, П.М. Рубцов, Ю.П. Лысов, A.C. Заседателев // Молекулярная биология. - 2010. - т. 44, № 3. - с.456 - 462.

105. Филимонов, Д.А. Прогноз спектра биологической активности органических соединений / Филимонов Д.А., Поройков В.В. // Российский химический журнал. 2006. - №50 (2). - с. 66-75.

106. Фрейдин, М.Б. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям / М.Б. Фрейдин, И.А. Гончарова, A.A. Рудко // Молекулярная медицина.- 2006,- №3- С.39-42.

107. Хаитов, P.M. Иммунология / Р.М Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович М.: Медицина, 2000. 429 с.

108. Хайдуков, C.B. Подходы к стандартизации метода проточной цитометрии для иммунофенотипирования. Настройка цитометров и подготовка протоколов для анализа / C.B. Хайдуков // Медицинская иммунология. 2007. - Т.9, № 6. - с. 569 - 574

109. Хайдуков, C.B. Проточная цитометрия как современный метод анализа в биологии и медицине / C.B. Хайдуков, A.B. Зурочка // Медицинская иммунология. 2007. - Т.9, № 4-5. - с. 373 - 378120

110. Хейль, В. Референтные пределы у взрослых и детей. Преаналитические предосторожности /В. Хейль, Ф. Шуклис, Б. Цавта. Москва, 1996. -144 с.

111. Хельте Х.-Д. Молекулярное моделирование: теория и практика / Х.-Д. Хельте, В.Зиппль, Д.Роньян, Г.Фолькерс. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний. - 2010

112. Чумакова, Е.Д. Использование метода аналитического микроэлектрофореза клеток крови для выявления комплекса антиген -антитело на поверхности эритроцитов / Е.Д. Чумакова // Медицинский журнал. 2009. - № 3. - с. 92 - 94.

113. Чхиквадзе В.Д., Тананян А.О. Сравнительная оценка липидногоспектра крови у больных колоректальным раком и пациентов с абдоминальным ожирением // Вопросы онкологии, 2007.-N 3.-С.311-314.

114. Ширшев, С.В. Роль репродуктивных гормонов в контроле апоптоза Т-лимфоцитов / С.В. Ширшев, Е.М. Куклина, А.А. Ярилин // Биохимия. 2003. Т.68, № 4. С. 577-583.

115. Ширяев, Н. В. Эволюционное прошлое IgG млекопитающих в свете современных знаний о структуре и функционировании данной белковой молекулы / Н. В. Ширяев // Иммунология. 2006. № 1. - С. 58-60.127

116. Эммануэль, В. JI. Лабораторная медицина как составная часть медицины доказательной / В.Л.,Эммануэль, В.Г. Пантелеев // Научно-практический журнал Клинико-лабораторный Консилиум, 2004, №2, с.36-38.

117. Bernstein F. Ergebnisseeinerbiostatischenzusammen-fassenden Betrachtung uber die erblichen Blutstrakturen des Men-schen. Klin. Wschr. 1924. - № 3. - p. 1495.

118. Caren I.D., Bellavance R., Grumet F.C. // Transfusion. 1982. - Vol. 22. -p. 475-478.

119. Caron P.R., Vullican M.D., Mashal R.D. et al. Chemogenomic approaches to drug discovery // Current Opinion in Chemical Biology. 2001. - Vol. 5,-p. 464-470.

120. Cases M., Carcia-Serna R., Hettne K. et al. Chemical and biological profiling of an annotated compound library directed to the nuclear receptorfamily. Current topics in medical chemistry. - 2005. - Vol. 5. - p. 763772.

121. Clausen H., Hakomori S, Graem N, Dabelsteen E. Incompatible A antigen expressed in tumors of blood group O individuals: immunochemical, immunohistologic, and enzymatic characterization. J. Immunol. - 1986. -Vol. 136.-p. 326-330

122. Clausen H., Hakomori S. ABH and related histo-blood group antigens; immunochemical differences in carrier isotypes and their distribution. Vox Sang. 1989.-Vol. 56. p. 1-20.

123. Clausen H., Levery S.B., Dabelsteen E., Hakomory S. Review Blood group ABH antigens: a new series of blood group A-associated structures (genetic regulation and tissue distribution) // Transplant. Proc. 1987. -Vol. 19, № 6. - Suppl. 3. - p. 67.

124. Clausen, H. A new series of blood group A associated structures: Genetic regulation and tissue distribution / Clausen H., Levery S.B., Dabelsteen E., Hakomori S. // Transplant Proc. 1987. - Vol. 49. - p. 4408-4412.

125. Crow J. Felix Bernstein and the first human marker locus // Genetics. -1993.-Vol. 133 (l).-p. 4-7.

126. Curley G.P., Blum H., Humphries M.J. Integrin antagonists // Cell. Mol. Life Sci. 1999. - Vol. 56. - p. 427 - 441.

127. Dabehteen E., Pindborg J. J. // Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1973. -Vol. 81.-P. 435-444.

128. Dabeisteen E., Vedtofte P., Hakomori S. et al. // Cancer Res. — 1983. -Vol.43. P. 1451-1454.

129. Davidsohn J., Kovarik S., Ni L.Y. Isoantigens A, B, and H in benign and malignant lesions of the cervix // Arch. Pathol. 1969. - № 87. - p. 306. Salmon C. Blood group changes in preleukemic states // Blood Cells. -1976. -№3.-p. 653.

130. Davidsohn L., Stejskal R. Tissue antigens A, B and H in health and disease. // Haematologia. 1972. - Vol. 6.- P. 177-184.

131. Daviss B. Growing pains for metabolomics // The Scientist. 2005. - Vol. 19 (8).-p. 25-28

132. De Luca V., St. Pierre B. The cell and developmental biology of alkaloid biosynthesis // Trends Plant Sci. 2000. - Vol. 5 (4). - p. 168-173.

133. Dean P.M. Molecular foundations by drug-receptor interactions // Cambridge University Press, Cambridge. 1986

134. Decastello A., Sturli A. Ueber die Izoagglutinine im Serum gesunder und krancer Menschen // Mlinch. med. Wychrrt. 1902. - № 26. - s. 10901095.

135. Dinarello C.A. Inflamantory cytokines: interleukin-1 and tumor necrosis factor as effector molecules in autoimmune disease // Cur. Opin. Immunol. 1991.-Vol. 3.-p. 941-948.

136. Finne J., Krusius T., Rauvala H. et al. Alkali-stable blood group A-and B-active poly (glycosyl)-peptides from human erythrocyte membrane. // FEBS. Lett. 1978.-V.89. -P.l 11-115.

137. Gamberg C.G., Jokinen M., Anderson L.C. Expression of the major red cell sialoglycoprotein, glycophorin A in the human leucemic cell line K 562. // J. Biol. Chem. 1979. -Vol. 254, N 15. -P.7442-7448

138. Garatty G. Association of blood groups and disease: do blood group antigens and antibodies have a biological role? // History and philosophyof the life sciences. 1996. - Vol. 18. - p. 321 - 344.

139. Garatty G., Arndt P., Co S. Fatal ABO haemolytic transfusion reaction resulting from acquired B antigen only detectable by some monoclonal grouping reagents // Transfusion. 1993. - p.33

140. Gasteiger J., Rudolph C., Sadowski J. Automatic generation of 3D-atomic coordinates for organic molecules // Tetrahedron computer methods. -1990.-Vol.3.-p. 537-547.

141. Geronikaki A., Druzhilovsky D., Zakharov A., Poroikov V. Computer-aided predictions for medicinal chemistry via Internet // SAR and QSAR in Environ. Res.-2008. 19(1 & 2). -p. 27-38.

142. George D. Cody, Nabil Z. Boctor, Timothy R. Filley, Robert M. Hazen, James H. Scott, Anurag Sharma, Hatten S. Yoder Jr. Primordial carbonylated Iron-Sulfur compounds and the synthesis of pyruvate. -Science. 2000. - Vol. 289 (5483). - pp. 1337—1340

143. Griffin J.L., Shockcor J.P. Metabolic profiles of cancer cells // Nat. Rev. Cancer. 2004. - Vol. 4 (7). - p. 551-561.

144. Griffin J.L., Vidal-Puig A. Current challenges in metabolomics for diabetes research: a vital functional genomic tool or just a ploy for gaining funding? // Physiol. Genomics. 2008. - Vol. 34 (1). - p. 1-5.

145. Grunnet N., Steffenson R., Bennet E.P. et al. , Evaluation of histo-blood group ABO genotyping in a Danish population: frequency of a novel O allele defined as 02 // Vox Sang. 1994. - Vol. 67. - p. 210-215.

146. Haest C.W.M. Interaction between membrane skeleton proteins and the intrinsic domain of the erythrocyte membrane // Biochim. Biophys. Acta. -1982.-Vol. 694.-p. 331-352.

147. Hakomori S. Antigen structure and genetic basis of histo-blood groups A, B and O: their changes associated with human cancer// Biochim. Biophys. Acta. 1999. - Vol. - 1473. - p. 247-266.

148. Hounsell E.F. Structural and conformational characterization of carbohydrate differentiation antigens // Biochem. Soc. Rev. 1987. - Vol. 16.-p. 161-185.

149. Kennard O. F.R.S. Cambridge Structural Database, Cambridge Crystallographic. Data Centre, www.ccdc.cam.ac.uk

150. Kino, G. S. Confocal scanning optical microscopy / G.S. Kino, T.R. Corle // Phys. Today. 1989. - № 42. - p. 55 - 62

151. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 1975. - 256 (5517). - p. 495497

152. Kominato Y.P.D., McNeill M., Yamamoto M., Russell S., Hakomori F., Landsteiner K. // Wien. Klin. Wschr. 1901. - Bd 14. - S. 1112.

153. Kuger G. Myocardial release of lactate, inosine and hypoxantine during arterial pacing and exercise-induced angina / Kuger G. // Lactate Physiol, and Pathol. Approach. Berlin. 1980. - p. 224 - 229

154. Labus J.M., Petersen B.H. Quantitation of human anti-mouse antibody in serum by flow cytometry.// Cytometry 1992. - V. 13. - P. 275-281.

155. Lagunin A., Stepanchikova A., Filimonov D., Poroikov V. PASS: prediction of activity spectra for biologically active substances // Bioinformatics. 2000. - 16 (8). - p. 747-748.

156. Landsteiner K. Ueber Agglutinationserscheinungen normalen menschlichen Blutes // Wiener klin.Wschrft. 1901 - Jg. XIV. - N 46 - s. 1132-1134.

157. Laurenzi I.J., Diamond S.L. Monte Carlo simulation of the heterotypic aggregation kinetics of platelets and neutrophis. //Biophys. J. 1999. -V.77. - P. 1733-1746.

158. Lee J.S., Ro J. K., Sahin A. A. et al. Expression of blood-group antigen A a favorable prognostic factor in non-small-cell lung cancer // N. Engl. J. Med. - 1991.- Vol. 324.-P 1084-1090.

159. Lipchock, J.M. Monitoring molecular interactions by NMR / J.M. Lipchock, J.P.Loria // Methods Mol Biol. 2009. Vol. 490. - P. 115-134.

160. Logan A. Intracrine regulation at the nucleus a further mechanismgrowth factor activity? 11 J. Endocr. 1990. - Vol. 125. - p.339 - 343

161. Lomenick B., Olsen R.W., Huang J. Identification of Direct Protein Targets of Small Molecules // Chemical biology. 2010. - Vol. 6 № 1. -p. 34-46.

162. Long M., Goldsmith H.L., Tees D., Zhu C. Probabilistic modeling of shear-induced formation and breakage of doublets cross-linked by receptors-ligand bonds. //Biophys. J. 1999. - V.76. - P. 1112-1128.

163. Lope Z.M. Le groupe sanguine Cis AB. Etude quantitative et qualitative des antigenes ABH // Rev. Franc. Transf. 1976. - Vol. 19, № 1. - p. 117121.

164. Mallinson G., Martin P.G., Anstee D.G. et al. Identification and partial characterization of the human erythrocyte membrane component(s) that express the antigens of the LW blood-group system // Biochem. J. 1986. -Vol. 234.-p. 649-652.

165. Marsh W.L. Scoring of hemoagglutination reaction. Transfusion. 1972. -p. 352-353

166. Martinko , J. M., V. Vincek, D. Klein, J. Klein. Primate ABO glycosy transferases: evidence for trans-speties evolution // Immunogenetics. 1993. Vol. 37. - p. 274-278.

167. Masamune H., Kawasaki H., Sinobara H. Et al. // Ibid. 1960. - Vol. 72. -p. 328-336.

168. Matsumoto H., Muramatsu H., Shimotakahara T. et al. Correlation of expression of ABH blood group carbohydrate antigens with metastatic potential in human lung carcinomas // Cancer. 1993. - Vol. 72. - P. 75

169. MDL Informations Systems, www.mdli.com

170. Mestres J., Martin-Couce L., Gregory-Puigjane E. et al. Ligand-based approach to in silico pharmacology: nuclear receptor profiling // Journal of chemistrical information and modeling. 2006. - Vol. 46. - p. 27252736.

171. Mollicone R., Candelier J. J., Reguigne I. et al. Molecular genetics of alpha-L-fucosyltransferase genes (H, Se, Le, FUT4, FUT5 and FUT6) // Transfiis. Clin. Biol. 1994. - Vol. 1, № 2. - p. 91-97.

172. Morgan, W. T. J., Watkins, W. M. Genetic and biochemical aspects of human blood-group A-, B-, H-, Le-a- and Le-b-specificity // Br. Med. Bull. 1969. -№25, p. 30-34.

173. Morphy R. The influence of target family and functional activity on the physicochemical properties of pre-clinical compounds // Journal of medicinal chemistry. 2006. - Vol. 49. - 2969 - 2978.

174. Mourant, A.E. Blood group and diseases / A.E. Mourant, A.C. Kopes, K. Domaniewska-Sobczak // Oxford, 1978; 21-38.

175. O'Donnell J., Laffan M. The relationship between ABO histo-blood group, factor VIII and von Willebrand factor // Transfusion medicine. 2001. -Vol. 11.-p. 343 -351.

176. Oh-Uti K. Polysaccharides and a glycidamin in gastric cancer tissue// Tohoku J. Exp. Med. 1949. - Vol. 51. - p. 297-304.

177. Oliver S.G., Winson M.K., Kell D.B., Baganz F. Systematic functional analysis of the yeast genome // Trends in Biotechnology. 1998. - Vol. 16 (9).-p. 373-378.

178. Omega, Version 2.0, OpenEye Scientific Software, Santa Fe, www.eyesopen.com

179. Orntoft T. F., Meldgaard P., Pedersen B. et al. he blood group ABO gene transcript is down-regulated in human bladder tumors and growth-stimulated urothelial cell lines // Cancer Res. 1996. - Vol. 56. - P. 10311036.

180. Pearlman R.S. 3D molecular structures: generation and use in 3D searching, 3D QSAR in Drug Design // Escom science publishers. -Leiden. 1993.-41 -79.

181. Pearson H. Meet the human metabolome // Nature. Vol. 446 (7131). -2007.-p. 8.

182. Perkins S.I., Kerkaert J.P., Louxeax-Lefebvre M.N. The shapes of biantennary and try/tetraantennary m acid glycoprotein by small-angle neutron and X-ray scattering // Eur. J. Biochem. 1985. - Vol. 147, №3. -p. 525-531.

183. Petry, J.J. Medicinal herbs: answers and advice, part 1 / J.J. Petry, S.K. Hadley // Hosp. Pract. (Off Ed). 2001. Vol. 36, N 7. - P. 57-60.

184. Robert, H. Webb Confocal optical microscopy / H. Webb Robert // Rep. Prog. Phys. 1996. - № 59. - p. 427 - 471

185. Sadek, H. Cardiogenic small molecules that enhance myocardial repair by stem cells / H. Sadek, B. Hannack, E. Choe et al. // Proc Natl Acad Sci U S A.-2008.-Vol. 105, N 16.-P. 6063-8.

186. Sadym A., Lagunin A., Filimonov D., Poroikov V. Prediction of biological activity spectra via Internet // SAR and QSAR in Environmental Research.-2003.- 14 (5-6).-p. 339-347.

187. Salmon C., Cartron J.P. Le renforcement allelique // Rev. Franc. Transfiis. 1976.-Vol. 19, № l.-p. 145-156.

188. Samuelson B.E., Breimer M.E. ABH antigens: some basic aspects // Transplant. Proc. 1987. - Vol. 19, № 6. - p. 4401-4407.

189. Samuelsson L.M., Larsson D.G. Contributions from metabolomics to fish research // Mol. Biosyst. 2008. - Vol. 4 (10). - p. 974-979.

190. Scheraga H.A. Theoretical and experimental studies of conformations of polypeptides // Cemical Reviews. 1971. - Vol. 71. - p. 195-217.

191. Shapiro, H.M. Practical flow cytometry. WILLEY LISS, INC., N.Y., Brisbane, Toronto, Singapore. - 1995. - p. 542

192. Sheppard, C.J. The theory of the direct-view confocal microscope / C.J. Sheppard, T. Wilson//J. Microsc. 1981. - V. 124.-p. 107 - 117

193. Smolarek D. Molecular background of the ABO blood group system / D. Smolarek, A. Krop-Watorek, K. Wasniowska, M. Czerwinski // Postepy Hig Med Dosw. (online). 2008. - № 62. - p. 4-17.

194. Sporn M.B. The importance of context in cytokine action // Kidney Int. -1997.-Vol. 51.-p. 1352 1354

195. Stapleton A., Nudelman E.D., Clausen H et al. Binding of uropathogenic Escherichia coli R45 to glycolipids extracted from vaginal epithelial cells is dependent on histo-blood group secretor status // Ibid. 1992. - Vol. 90. -p. 965-972.

196. Steindl T.M., Schuster D., Laggner C., Langer T. Parallel screening : a novel concept in pharmacophore modeling and virtual screening // Journal of chemical information and modeling. 2006. - Vol. 46. - p. 2146 -2157.

197. Stepanchikova A.V., Lagunin A.A., Filimonov D.A., Poroikov V.V. Prediction of biological activity spectra for substances: Evaluation on the diverse set of drugs-like structures // Current Medicinal Chemistry.2003.- 10 (3).-p. 225-233.

198. Telen M.J. Erythrocyte Blood Group Antigens: Not So simple after All // Ibid. 1995. Vol. 85, №2. p. 299-306.

199. Thompson J.C., Graig A.R., Davey C.L., Newman D.J., Londsdale M.L., Busher W.J., Nagle P., Price C.P. Kinetics and proposed mechanism of the reaction of an immunoinhibition, particle-enhanced immunoassay. // Clin. Chem. 1997. - V.43. - P. 2384- 2389.

200. Troyanovsky S.M. Mechanism of cell-cell adhesion complex assembly // Curr. Opin. Cell Biol. 1999. - Vol.11. - p. 561-566

201. Vitala J., Jarnefelt J. // Trends Biochem. Sci. 1985. - Vol. 10, № 10. - p. 392-395.

202. Watanabe K., Hakomori S. Status of blood group carbohydratechains in ontogenesis and in oncogenesis // J. Exp. Med. 1976. - Vol. 144.-p. 644-653.

203. Watanabe M., Ohishi T., Kuzuoka E.D. et al. In vitro and in viro antitumor effects of murine monoclonal antibody NCC-ST-421 reacting with dimeric Le' (Le'/Le') epitope. // Cancer Res. 1991. - Vol. 51. - p. 2199-2204.

204. Watkins, W. M. Advances in Human Genetics // Harris, H., Hirschhorn, K. New York: Plenum. 1980. - Vol. 10. - p. 1-136.

205. Watkins, W. M., Morgan, W. T. J. Possible genetical pathways for biosynthesis of blood group mucopolysaccharides // Vox Sang. 1959. -Vol.-4.-p. 97-119.

206. Weininger D. SMILES, a chemical language and information system. 1. Introduction to methodology and encoding rules // Journal of chemical information and computer sciences. - 1990. - Vol. 28. - p. 31 - 36.

207. Weininger D. SMILES. 3. DEPICT graphical depiction of chemical structures // Journal of chemical information and computer sciences. -1988.-Vol. 30.-p. 237 - 243.

208. Wishart D.S., Tzur D., Knox C., et al. HMDB: the Human Metabolome

209. Database // Nucleic Acids Research. 2007. - Vol. 35 (Database issue). -p. 521-526.

210. Wu, A., Kabat, E. Laine and Rush in Molecular Immunology of Complex Carbohydrates // Plenum Publishing Corporation, N.Y. NY. 1988.

211. Yamamoto F., Clausen H., White T. et al. Molecular genetic basis of the histo-blood group ABO system // Nature. 1990. - Vol. 345. - p. 229233.

212. Yamamoto F., McNeil P.D., Yamamoto M. Et al. Molecular genetic analysis of the ABO blood group system: 3. Ax and B(A) alleles // Vox Sang. 1993. - Vol. 64. - p. 171-174.

213. Yamamoto F., P. D. McNeill, S. Hakomori. Genomic organization of histo-blood group ABO genes // Glycobiology. 1995. - Vol. 5. - p. 5158.

214. Yamamoto F., Saitou N. Evolution of primate ABO blood group genes and their homologous genes // Mol. Biol. Evol. 1997. - Vol. 14 (4). - p. 399411.

215. Yamamoto. Animal histoblood group ABO genes // Biochem. Biophys. Res. Corn. 1992.-Vol.189.-p. 154-164.

Информация о работе

Колотьева, Наталия Александровна
кандидата медицинских наук
Москва, 2012
ВАК 03.01.04

Диссертация

Малые молекулы в изучении особенностей белок-белковых взаимодействий - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно