Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Люминесцентно-гистохимическое исследование центральных органов иммунитета после воздействия акупунктуры

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Люминесцентно-гистохимическое исследование центральных органов иммунитета после воздействия акупунктуры"

На правах рукописи

□ОЗОВВ1БЭ

НЕСТЕРИН КИРИЛЛ ВАЛЕРЬЕВИЧ

ЛЮМИНЕСЦЕНТНО-ГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЦЕНТРАЛЬНЫХ ОРГАНОВ ИММУНИТЕТА ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АКУПУНКТУРЫ

00 03 25 -Цитология, гистология, клеточная биология 14 00 51 — Восстановнтсльная медицина

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саранск 2007

003068169

Работа выполнена на кафедре цитологии, эмбриологии, гистологии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н.Ульянова»

Научный руководители: доктор биологических наук, заслуженный

деятель науки ЧР, профессор Любовь Алексеевна Любовцева доктор медицинских наук, профессор Вячеслав Борисович Любовцев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Кругляков Павел Павлович доктор медицинских наук, профессор Радзиевский Сергей Алексеевич

Ведущая организация: Российский государственный

медицинский университет

ЯОО¥г. £ ^.оыие^ои

Защита состоится /уи^ /ЫГ /Ь/?0 „ М^С/ М. /7.0&у>ё£

/го си&ьм^: 42)ОоОО, /? Салсисск,

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)

Автореферат разослан

Ученый секретарь доктор биологических наук,

диссертационного совета профессор

Балашов Владимир Павлович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Лечение большинства заболеваний связано с воздействием на иммунную систему организма, при этом нередко приходится прибегать к традиционным методам терапии, таким как акупунктура. В этой связи представляется интересным изучить влияние акупунктуры на процессы гемопоэза и иммуногенеза в костном мозге и тимусе, а также действие рефлексотерапии на автономную регуляцию этих органов через нейромедиаторные структуры.

Многие исследователи пытались определить структуру акупунктурных точек, высказывая по этому поводу разные мнения (Вогралик В.Г, Вогралик В.М.,1988, 1996; Гурьянова Е.А., 2003). Однако, ученые не ставили цель определить влияние акупунктурных воздействий на тонкие механизмы регуляции и структурную перестройку органов иммунитета и кроветворения. Как известно, регуляция многих органов на месте происходит при помощи особых биоаминсодержащих структур совместно с адренергическим звеном вегетативной нервной системы (Ермолаев В.В., 1997, Гурьянова Е.А., 2004; Агафонкин С.А., 2006). Исследуя биоаминный статус тимуса и костного мозга на фоне иглотерапии, мы опосредованно изучали действие акупунктуры на изменение иммунных процессов в организме. Тимус -вилочковая железа является центральным органом клеточного иммунитета, а биогенные амины влияют на ее микроокружение и способствуют тому или иному направлению цитодифференцировок Т-лимфоцитов.

Костный мозг также является центральным органом иммунитета, где происходит антигеннезависимая дифференцировка B-лимфоцитов и единственным органом у взрослого человека, в котором происходит миелоидное кроветворение. Здесь также нейромедиаторы являются трансмиттерами и участвуют в дифференцировке клеток и их созревании.

Таким образом, мы попытались выявить влияние акупунктуры на изменение работы, как самих центральных органов иммунитета, так и на их регуляцию.

Целью настоящего исследования является изучение влияния акупунктуры на гемопоэз и иммуногенез в тимусе и костном мозге через биоаминсодержащие структуры.

В связи с поставленной целью задачами исследования явились;

1. Выявление специфических изменений в структурах тимуса и костного мозга, содержащих гистамин, катехоламины, серотонин, гепарин и СДГ сразу и спустя 15 мин. после удаления иглы, стоявшей в акупунктурной точке (20Х) 2 мин.

2. Определение корреляционных взаимосвязей между биоаминсодержащими структурами в костном мозге и тимусе после акупунктуры.

3. Сравнение влияния биоамининактивирующих веществ (гепарина и МАО) на биоаминпродуцирующие и поглощающие структуры тимуса и костного мозга в норме и в динамике после введения акупунктурной иглы.

4. Определение серотонинового индекса в изучаемых структурах и выявление ведущего медиатора после воздействия иглотерапии на изучаемых сроках воздействия.

Научная новизна

Впервые с помощью люминесцентно-гистохимических методов Кросса (1977) и Фалька-Хилларпа (1971) описаны и количественно охарактеризованы биоаминосодержащие структуры тимуса, костного мозга при воздействии иглы в точку акупунктуры кожи 20Х у крыс.

При помощи корреляционных методов исследования показано, что иглотерапия влияет на связь между биоаминсодержащими структурами, как в самих органах, так и между костным мозгом и тимусом.

Впервые выявлено, что соотношение тучных клеток, гранулярных клеток (ГЛК) и содержание в них БА в изучаемых органах зависит от времени после воздействия акупунктуры.

Выявлено, что иглотерапия влияет на биоамининактивирующие вещества, регулирующие поступление биоаминов в межклеточное пространство.

Иглотерапия изменяет активность фермента аэробного окисления.

Практическая значимость

Результаты исследования существенно расширяют представления о возможных механизмах функционирования точек акупунктуры.

Для практической акупунктуры важны полученные результаты о том, что рефлексогенное воздействие приводит к перераспределению в структурах тимуса и костного мозга гистамина, катсхоламинов и серотонина.

Показано, что ферменты в основных биоаминсодержащих структурах участвуют в регуляции содержания биогенных аминов в изучаемых органах. Акупунктура, произведенная в 20Х, влияет на корреляционные взаимоотношения между биоаминсодержащими структурами тимуса, костного мозга. Ведущими медиаторами в этих взаимоотношениях является в первую очередь серотонин и только потом гистамин.

Полученные результаты используются в лекциях, читаемых на кафедре акупунктуры и традиционной медицины медицинского института при Чувашском государственном университете, Институте усовершенствования врачей Минздрава ЧР, а также курсах усовершенствования врачей в Москве.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Распределение нервных волокон, тучных клеток и гранулярных люминесцирующих клеток в тимусе, костном мозге имеет значительные отличия, заключающиеся в преобладании в тимусе ГЛК, в костном мозге -тучных клеток, ГЛК и липоцитов в равной степени, также содержащих биоамины.

2. Иглотерапия влияет на корреляционную связь между биоаминсодержащими структурами кроветворных органов и зависит от времени после воздействия акупунктуры.

3. Иглотерапия влияет на биоамининактивирующие вещества и фермент аэробного окисления, регулирующие поступление биоаминов в межклеточное пространство.

4. Ведущим медиатором по серотониновому индексу в изучаемых структурах является серотонин.

Апробация работы

На научно-практической конференции «Здоровье населения и физическое воспитание», г. Чебоксары, 1994; Российской научно-практической конференции «Экология здоровья природопользования», г. Саратов, 1997; на II съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск, 1998; на 27 студенческой конференции ЧТУ, г. Чебоксары, 1999; на международном конгрессе «Восстановительная медицина и реабилитация», г. Москва, 2005; на международной конференции «Посвященной 100-ю со дня рождения И.С. Кудрина», г. Тверь, 2006; «Бабухинские чтения», г. Орел, 2006.

Структура и объем диссертации

Диссертационный материал изложен на 125 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы, содержащего 255 источников, из них отечественных 152 и зарубежных 103. Диссертация, иллюстрирована 9 таблицами, 46 рисунками и диаграммами

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Исследования проведены на 60 белых беспородных крысах. Материал был взят в осенне-зимний период и разделен на несколько групп. Материалом исследования являлся костный мозг и тимус крыс самцов весом от 180 до 200 гр. Органы брали под глубоким эфирным наркозом. Тимус замораживали в криостате при температуре минус 25 градусов С0, делали срезы толщиной 15 мкм. Костный мозг извлекали из бедренной косточки и делали отпечатки и мазки. Производили параллельное окрашивание. Так, после проведения метода по Кроссу, препараты перекрашивали полихромным толуидиновым синим по Унна. После проведения реакции по методу Фалька вместе со свежими мазками, использованные препараты перекрашивали методом Глениера на МАО.

Первая группа интактные животные (10 крыс) исследовалась без воздействия (табл. 1). Вторая - контрольные животные (10 крыс) подвергалась воздействию акупунктурной иглы в течение 2-х мин. рядом с точкой акупунктуры 20Х, в месте, где электрокожное сопротивление составляет 100 кОм и выше. Третья - (20 крыс) подвергалась воздействию иглоукалывания в точку гипоталамуса 20Х с обеих сторон, ЭКС 55-65 кОм. Время экспозиции иглы равнялось 2 мин. Органы брали сразу после снятия иглы. Четвертая группа (20 крыс) подвергалась воздействию иглотерапии в точку гипоталамуса 20Х с обеих сторон, ЭКС 55-65 кОм. Время экспозиции

иглы равнялось 2 мин. Органы брали через 15 мин после снятия иглы. Локализацию точки акупунктуры 20Х определяли с помощью анатомо-топографического метода, располагается непосредственно над ушной раковиной, и стандартного прибора Элитерис 5 УМ - 003. Измерения осуществлялось на стабилизированном постоянном токе величиной 2 мкА при напряжении IV.

Таблица 1

Материалы и методы исследования _

Название животногс Места взятия материала Группы животных

Интактнь Контрольны Взятие органов сразу после снятия иглы Взятие органе через 15 мин. после снятия иглы

Воздействие

Крыса Нет Рядом с ТА 20Х, ЭКОЮО кС В область ТА - 20Х, ЭКО(55-65) кОм

Число особей

Тимус 10 10 20 20

Костный мозг 10 10 20 20

Итого: 10 10 20 20

Всего: 60

Методы исследования

1 .Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Евена, Роста (Cross S.A., 1971) для выявления тканевого гистамина.

2. Для избирательного выявления нервных и ненервных аминосодержащих структур тимуса и костного мозга применялся люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа (Falk В., Hillarp N.A., 1962) в модификации Е.М. Крохиной (Крохина Е.М., 1971).

3. Количественно концентрации гистамина (Г), КА и серотонина (С) в структурах органов оценивались с помощью цитоспектрофлуориметрии (Карнаухов В.Н., 1978) осуществляемой на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ-4 с применением микрофлуориметрической насадки ФМЭЛ-1А. Наблюдение велось на вольтметре при напряжении 800 вольт с зондом 0,5. Для определения Г использовали интерференционный фильтр 7 с длиной волны 515 нм, для КА - использовали фильтр «6» с длиной волны 480 нм, для С - «8» с длиной волны 525 нм. Замер интенсивности свечения производился в единицах флуоресценции (условные единицы (у. е.) по шкале

регистрирующего прибора-усилителя).

4. Применялась окраска на моноаминоксидазу (МАО) по Гленнеру для изучения ферментативного ингибирования биоаминов

5. Для качественной и количественной характеристики тучных клеток срезы обрабатывали полихромным толуидиновым синим по Уина (Пирс Э., 1962).

6. Использовалась окраска по Паппенгейму для подсчета миелограммы.

7. СДГ выявляли по Лойда для исследования аэробного окисления.

8. Исследование индолсодержащих веществ проводили методом Массона-Фонтаны.

9. Представление о количественном распределении, тучных и гранулярных клеток дает метод подсчета их в 5 полях зрения микроскопа при увеличении об. 90, ок. 10.

10.Вычисление серотонинового индекса осуществлялось для определения ведущей роли одного из биогенных аминов в каждой конкретной ситуации. Соотношение серотонина и КА принято называть серотониновым индексом (Is). Когда серотониновый индекс больше единицы, можно говорить о преобладании в структуре серотонина. Если серотониновый индекс меньше единицы, то в структуре преобладают КА.

11. Корреляционный анализ применялся для выявления взаимосвязи между показателями интенсивности люминесценции КА, С и Г в изучаемых структурах у контрольных животных и после воздействия акупунктуры. Методом корреляционного анализа нами были изучены следующие пары нейромедиаторных биогенных аминов:_КА и С, КА и гистамином, а также между С и гистамином в ГЛК, тучных клетках изучаемых органов.

12. Математическая обработка с вычислением коэффициента корреляции и его достоверности проводилась на компьютере Pentium 233 ММХ по специально разработанной программе.

Результаты исследований и их обсуждение

Исследование биогенных аминов в структурах костного мозга (КМ)

Современную медицину характеризует стремление к выявлению механизмов иглотерапии из-за положительного эффекта при ее применении. Мы исследовали два основных центральных органа иммунитета и кроветворения, способствующие антигеннезависимой дифференцировки Т- и В- лимфоцитов. Нами подтверждено, что основные функции в регуляции этих органов на месте выполняют особые клетки, которые можно отнести к нейроэндокринной системе: это гранулярные люминесцирующие клетки (ГЛК), их же П.А. Мотавкин (1977) назвал аминоцитами, В.Н.Швалев (1991) малыми люминесцирующими клетками, а Л.А. Любовцева (1993) назвала Pix ГЛК. К ним относятся ГЛК премедуллярной и субкапсулярной зоны тимуснои дольки и такие же клетки в костном мозге. В состав ГЛК входят и дендритные макрофаги, которые при реакции на кислую фосфатазу обнаруживают положительную реакцию на этот фермент. Последним

приписывается роль поглотителей биогенных аминов (Сергеева В.Е., 1976; Любовцева Л.А., 1980).

Немаловажную функцию в обеспечении органов нейромедиаторами выполняют тучные клетки, однако, соотношение этих клеток в названных органах разное. Неоднократно замечено, что в тимусе крыс преобладают ГЛК, а в костном мозге - тучные клетки. Вполне возможно, что это связано с тем, что тучные клетки очень лабильны, способны быстро как уменьшать содержание нейромедиаторов в ткани при выделении белков и гепарина, так и выделять их при дегрануляции (Гордон Б.М., 1987; Любовцева Л.А., 1993; Ермолаев В.В., 1996; Агафонкин С.А., 2006). Этим самым они могут «подстроиться» под любой нужный в данный момент процесс, что необходимо при дифференцировке разных видов клеток. Однако эффект, оказываемый тучными клетками краткосрочный.

Мы изучали малые сроки после воздействия, предполагая, что механизм рефлексотерапии может быть связан со стресс - реакцией. Для опровержения или подтверждения этого предположения одновременно с опытными группами исследовались эти же органы у контрольных животных, которым ставили иглу на 2 мин. рядом с точкой 20Х. Установлено, что реакции цитоструктур тимуса и костного мозга в этих группах резко отличались. Чаще, в первый момент, они были разнонаправлены. Выявлено, что в контрольном эксперименте был инъекционный стресс, ведущий к увеличению содержания гистамина (Любовцева Л.А., 1993), а иглотерапия в основном влияет на снижение содержания серотонина и гистамина, меняет корреляционные связи между биоаминами. Учитывая эти обстоятельства, мы изучали изменения биогенных аминов в структурах тимуса и костного мозга только при постановке иглы в точку 20Х.

Распределение гистамина в структурах костного мозга.

ГЛК в костном мозге представлены в небольшом числе, всего 2-3 на одно поле зрения при увеличении 10x40. Кроме того, встречаются единичные люминесцирующие гранулы. По своему строению и функциональному состоянию их Л.А. Любовцева (1980) разделила на 3 группы. В единичных, крупных клетках 1-й группы, по данным A.B. Московского (2006) содержатся вещества, присутствующие в нервных клетках: эналаза, нейропептидаза, хромогранин. Эти клетки относятся к АПУД-системе. Ко 2-й группе относятся макрофаги, iik как они дают реакцию на кислую фосфатазу и в них определяется беток S-100 (Олангин О. Н., 2000). 3-я группа клеток предположительно относится к молодым, из которых возможно впоследствии образуется каком-то из перечисленных видов клеток. При постановке параллельных реакций с Фальком, следует отметить, что только часть ГЛК и тучных клеток костного мозга содержат гистамин. ГЛК встречаются около сосудов, нервнкх волокон. Чаще всего они располагаются цепочкой вокруг островкоь размножения, мегакариоцитов, липоцитов, что также совпадает с данными Jl.A. Любовцевой (1993).

При постановке иглы в точку 20Х на 2 мин. и взятии материала сразу после снятия иглы, мы выявили что содержание гистамина в ГЛК осталось практически неизмененным или имело небольшую тенденцию к понижению с 54 до 52 у.е. Через 15 мин. после удаления иглы происходит уменьшение числа ГЛК без изменения содержания в них гистамина. Из данных исследований следует, что иглотерапия, на первый взгляд, при 2-х минутной экспозиции слабо влияет на содержание гистамина в ГЛК.

Таблица 2

Содержание биогенных аминов в структурах костного мозга после

воздействия акупунктуры, у.е., *-р<0,01.

ГЛК Тучные клетки

Интак- Сразу после ч/з 15 Интак- Сразу после ч/з 15

тные снятия иглы мин. тные снятия иглы мин.

Гистамин 53,6 51,9 50,9 46,2 31,0 41,5

±1,7 ±2,3 ±2,7 ±1,3 ±1,3* ±2,0

КА 5,3 5,9 5,9 5,6 5,2 4,8

±0,2 ±0,2 ±0,2 ±0,4 ±0,2 ±0,2

Серотонин 25,9 30,2 29,7 23,1 23,6 21,3

±0,4 ±0,8* ±0,8* ±1,5 ±1,2 ±0,7

Сразу после снятия иглы, содержание гистамина в тучных клетках понизилось с 46.2 до 31,0 у.е. Наблюдалась повышенная дегрануляция этих клеток. Через 15 мин. после акупунктуры содержание гистамина нормализовалось, но наблюдалась повышенная дегрануляция и увеличение выявляемое™ числа тучных клеток в 2 раза (табл. 2). Из полученных данных следует, что иглотерапия в первую очередь воздействует на тучные клетки и обмен гистамина в них. Выяснилось, что на это воздействие отвечают и мегакариоциты, изменяя содержание гистамина. Данный момент, очевидно, имеет значение для созревания тромбоцитов и на их выход в кровь.

Распределение катехоламинов (КА) в структурах костного мозга.

Было определено, что в наибольшем количестве КА определяются в нервных волокнах, которые проходят по адвентиции сосудов, подходят к островкам размножения, особенно к эритроидно-гранулоцитарным, имеют ярко-зеленую люминесценцию и варикозные расширения. Наши данные совпадают с исследованиями Юй-Пин (1960); Л.А. Любовцевой (1993); С.А. Агафонкиным (2005). Наибольшие количественные изменения КА при иглотерапии наблюдается в группе макофагов, которые через 15 мин. после акупунктуры увеличиваются в числе, что возможно связано с изменением поглотительных способностей этих клеток, через вегетативное звено нервной системы.

Тучные клетки чаще всего расположены по ходу сосудов, нервов.

Содержание КА в тучных клетках КМ сразу после проведения

9

акупунктуры имело небольшую тенденцию к понижению с 5.6 до 5.2 у.е. Через 15 мин. после акупунктуры содержание КА в тучных клетках так же продолжало незначительно понижаться до 4.8 у.е. Наблюдалась их повышенная дегрануляция, но дегранулированные частицы продолжали люминесцировать. Вполне возможно, что в этом случае изменяется инактивация этого амина, она снижается, что совпадает с данными (Лукашин Б.П., 1976). В нервных волокнах содержание КА было не всегда однозначным. Около островков размножение в варикозных расширениях его содержание было наибольшим и колебалось от 6 до 8 у.е.

Распределение серотонина в структурах костного мозга.

Содержание серотонина в ГЛК КМ сразу после акупунктуры незначительно повысилось с 26 до 30 у.е., и через 15 мин. после воздействия осталось на этом уровне. Число ГЛК КМ, как сказано было ранее, увеличилось в 1,7 раза. По данным Любовцевой Л.А. (2005), серотонин обладает супрессивными свойствами, снижает дифференцировку клеток на поздних стадиях развития. Сопоставляя эти данные с миелограммой, оказалось, что действительно увеличивается число молодых форм эозинофильного, базофильного, лимфоцитарного рядов и бластных форм клеток. Однако число клеток нейтрофильного и эритроидного рядов снижается.

Содержание серотонина в тучных клетках не изменялось, а через 15 мин. после акупунктуры имело небольшую тенденцию к снижению с 23.6 до 21.3 у.е. В этом случае происходило увеличение выявляемое™ тучных клеток в два раза и их повышенная дегрануляция. В некоторых МКЦ сразу после снятия иглы содержание серотонина увеличилось в 1.5 раза, а через 15 мин. приходило в норму (табл. 3).

Таблица 3

Содержание биогенных аминов в структурах мегакариоцитах костного

мозга после воздействия акупунктуры, у.е., *-р<0,01.

Мегакарноцнты

Интактные Сразу после снятия иглы ч/з 15 мин.

Гистамин 54,2±5,9 84,3±9,9* 58,7±3,8

КА 4,6±0,2 5,9±0,2 5,0±0,1

Серотонин 18,8±1,4 27,2±1,4* 19,7±0,5

Серотонин определялся в нервных волокнах, которые проходили как в адвентиции сосудов и составил от 16 до 20 у.е., так и свободно ветвились. Резкое повышение содержания КА и серотонина после воздействия акупунктуры происходит в клетках эритроидного ряда и в лимфоцитах.

Корреляционный анализ биогенных аминов в ГЛК

При исследовании корреляционных взаимоотношений между биоаминами в ГЛК интактной группы животных выяснилось, что связь между КА и серотонином сильная, между КА и гистамином в костном мозге хорошая, между серотонином и гистамином слабая - равна 0.25 (рис. 1).

Корреляционные взаимоотношения между КА и серотонином сразу после снятия иглы ослабевают, а через 15 мин восстанавливаются. Сразу после снятия иглы связь между КА и гистамином ослабляется и становится равной 0,2, а через 15 мин после снятия иглы появляются отрицательные взаимодействия до - 0,5. Связь между серотонином и гистамином у интактных животных слабая и под воздействием акупунктуры также становится отрицательной. Таким образом, иглотерапия ослабевает корреляционные связи между всеми парами биогенных аминов в ГЛК костного мозга.

Интактные

Сразу после акупунктуры КА 5,9

0,2/\0,2

53,6 30,2 -0,2 51,9 29,7 -0,4 Гист. Сер. Гист. Сер.

Через 15 мин. после акупунктуры

50,9 Гист.

Рис. 1. Корреляционный анализ в гранулярных люминесцирующих

клетках в структурах костного мозга после воздействия акупунктуры.

(Сер. - серотонин, Гист. - гистамин, *-р<0,05)

Корреляционный анализ биогенных аминов в тучных клетках костного мозга

При изучении корреляционных взаимоотношений между биоаминами в тучных клетках интактных крыс (рис.2) определено, что связь между КА и серотонином сильная, сразу после снятия иглы эта связь становится очень сильной, а через 15 мин она несколько ослабевает и не отличается от интактной группы животных. Между КА и гистамином в тучных клетках костного мозга связь отрицательная слабая и в норме и после акупунктуры во все временные сроки.

Корреляционные взаимоотношения между серотонином и гистамином отрицательны в норме, ослабевают после воздействия акупунктуры и остаются отрицательными, что говорит о конкурентности этих аминов.

Влияние акупунктуры и в этих структурах костного мозга ведет к ослаблению корреляционных взаимодействий между нейромедиаторами, исключая пару КА/С.

Интактные

Сразу после акупунктуры КЛ 5,2

Через 15 мин. после акупунктуры

КА 5,6

4,8

КА

23,1 Сер.

-0,5* 46,2 23,6 -0,1 31,0 21,3 -0,1 Гист. Сер. Гист. Сер.

41,5 Гист.

Рис. 2. Корреляционный анализ тучных клеток в структурах костного мозга, после воздействия акупунктуры.

(Сер. - серотонин, Гист. - гистамин, *-р<0,05)

Локализация индолсодержащих веществ в структурах костного мозга.

Распределение связанного серотонина, определяемого методом Массона-Фонтаны в структурах костного мозга было неравномерным. Сразу после снятия иглы, в наибольшем количестве этот моноамин определялся в лимфоцитах, где наблюдались митозы, с повышенным содержанием исследуемого вещества в хромосомах. Частично определялись нервные волокна в строме костного мозга и в средней оболочке сосудов. Можно предположить, что иглотерапия влияет на размножение Т-супрессоров. Введение иглы в точку влияет на увеличение содержания серотонина в биоаминсодержащих структурах. Как известно (Любовцева Л.А., 1993; Ермолаев В.В., 1997; Агафонкин С.А., 2006), серотонин влияет на поздние стадии дифференцировки клеток. В нашем случае было снижено число зрелых форм нейтрофильного и эритроидного ряда и увеличено число молодых форм и лимфоцитов, что, возможно, говорит о том, что именно на эти структуры влияет серотонин, как супрессор.

Серотониновый индекс.

Без и после воздействия акупунктуры в точку 20Х серотониновый индекс остается выше единицы. В ГЛК он постепенно увеличивается с 4,9 до 5,1 и 5,9. В тучных клетках он практически не меняется и равен 4. В МКЦ вначале увеличивается с 4 до 4,6, а через 15 мин. уменьшается с 4,6 до 3,9. Таким образом, ведущим медиатором во всех случаях остается серотонин, что еще раз подтверждает предположение, что иглотерапия при данной экспозиции тормозит дифференцировку некоторых клеток.

Распределение сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в структурах костного мозга.

В наибольшем количестве СДГ определяется в мегакариоцитах (МГЦ), меньше, но примерно в одинаковых количествах гранулы формазана определяются в клетках эозинофильного ряда, в миелоцитах, тучных клетках. В наименьшем количестве этот фермент выявляется в моноцитах и

плазмоцитах. Сразу после снятия иглы резко повысилось содержание гранул нитросинего тетразолия во всех клетках ККМ, особенно в МКЦ, плазмоцитах, макрофагах, АПУД-клетках. Наиболее сильная реакция наблюдается в бластных и молодых формах клеток и метамиелоцитах. Слабая реакция наблюдается в клетках нейтрофильного ряда и моноцитах. В тучных клетках изменения прошли по-разному. Часть клеток имеет хорошую реакцию, а в части клеток в цитоплазме выявляются лишь единичные гранулы. Через 15 мин после воздействия акупунктуры содержание этого фермента увеличивается во всех изучаемых структурах, но особенно в лимфоцитах. Исследование СДГ после иглотерапии показывает, что этот фермент резко увеличивается во всех клетках, но особенно в молодых формах, что благотворно сказывается на развитие клеток этих рядов.

Распределение мономиноксидазы (МАО) в структурах костного мозга.

Сразу после снятия иглы снизился уровень МАО. Небольшое количество гранул формазана определяется в клетках эозинофильного ряда, моноцитах. Через 15 мин после снятия иглы содержание МАО возвращается к норме. В бластных формах и лимфоцитах, напротив, содержание МАО увеличивается, снижая, таким образом, содержание гистамина. Из данных исследований следует, что основное расщепление биогенных аминов происходит каким-то иным способом. При этом иглотерапия практически или не влияет на моноаминоксидазу, или даже снижает ее в тучных клетках.

Распределение гепарина в структурах костного мозга

Сразу после снятия иглы происходит увеличение сульфатированности гепарина в плазмоцитах, мегакариоцитах, клетках эозинофильного ряда и особенно в зрелых эозинофилах, в молодых формах клеток эритроидного ряда, липоцитах. Этот факт говорит о том, что иглотерапия увеличивает инактивацию биогенных аминов с помощью зрелого гепарина, т.е. регуляция поступления биогенных аминов в межклеточное пространство происходит при помощи этого сложного углевода. Это означает, что иглотерапия ускоряет присоединение к основной молекуле дополнительные сульфатные группы, которые полнее связывают биогенные амины.

Распределение биогенных аминов в структурах тимуса после акупунктуры

Очень небольшие данные о влиянии акупунктуры на структуры тимуса мы обнаружили в тезисах В.Е. Сергеевой, Д.С. Гордон с соав. (1991). Однако, эти сведения очень малы. В этом органе, также как и в предыдущем, мы исследовали, ГЛК и тучные клетки, а также лимфоциты коркового( и мозгового вещества, и нервные волокна.

Распределение гистамина в структурах тимуса.

ГЛК в структурах тимуса, как было известно ранее, в виде цепочек, или групп распределяются в основном в премедуллярной и субкапсулярной зонах. В небольшом числе они встречаются в толще коркового вещества и единично в мозговом. В толще коркового вещества лимфоциты образуют

группы, так называемые фолликулы Кларка, около которых и распределяются ГЛК. Иногда ГЛК распределяются около нескольких фолликулов Кларка. Лимфоциты также обладают люминесценцией, но она слабая (166 у.е.). В мозговом веществе также находятся лимфоциты (таблица 4), люминесценция которых еще слабее, чем в корковом веществе (148 у.е.). Кроме того, в мозговом веществе находятся каплевидные тимусные тельца, в которых люминесценция гистамина у крыс имеет равномерное распределение (170 у.е.).

Таблица 4

Распределение биогенных аминов в лимфоцитах тимуса (у.е.),

*-р<0.05

Название Тимоциты коркового Тимоциты мозгового

медиаторов вещества вещества

без Сразу через без Сразу через 15

возден- после 15 мин. воздей- после мин. после

ете и я снятия после ствия снятия снятия

иглы снятия иглы иглы иглы

Гистамин 166 145 121 148 88 55,9

±8,3 ±5,7* ±4,4* ±8,6 ±3,1* ±1,4*

КА 4,9 4,5 6,4 4,6 4,6 4,9

±0,17 ±0,16 ±0,22 ±0,2 ±0,1 ±0,2

Серотонин 22,9 20,2 33,2 21,6 23 22,9

±1,2 0,78 1,86* ±1,1 ±0,4 ±0,9

Сразу после снятия иглы в препарате снижается свечение, уменьшается число ГЛК как в премедуллярной, так и в субкапсулярной зонах, цепочка становится неполной. Содержание гистамина в премедуллярных клетках снижается в 2 раза, в субкапсулярных - в 2, 5 раза, в ГЛК коркового вещества в 1,5 раза (табл. 5).

Через 15 мин. после снятия иглы происходит небольшое повышение содержания гистамина в названных структурах, но число этих клеток остается пониженным, и содержание гистамина все еще остается ниже уровня интактных животных. В тимоцитах мозгового вещества сразу после снятия иглы содержание гистамина падает с 148,5 у.е. до 88у.е., а через 15 мин. после снятия иглы еще более уменьшается до 60 у.е. В тимоцитах коркового вещества сразу после снятия иглы содержание гистамина падает медленнее, чем в мозговом веществе с 166,3 у.е. до 144,6 у.е., а через 15 мин. после снятия иглы еще более уменьшается до 121,3 у.е. Таким образом, реакция в тимоцитах однанаправленная (табл.4).

Тучные клетки в тимусе единичны, выявляются по септам. При воздействии иглы они дегранулируют, образуя около клетки светящееся облачко.

Таблица 5

Распределение нейромедиаторов в гранулярных люминесцирующих

клеток тимуса (у.е.), *-р<0.05

Название ГЛК субкапсулярной ГЛК прсмедулярной

медиа- Зоны Зоны

торов без Сразу через без Сразу через 15

воздей- после 15 мин. воздей- после мин.

ствия снятия после ствия снятия после

иглы снятия иглы иглы снятия иглы

Гистамин 509,9 221,3 316,8 398,3 181,5 200,3

±33.1 ±13,5* ±22,5* ±21,9 ±10,4* ±15,6*

КА 16,5 7,9 14,7 32,6 9,6 24,6

±1,4 ±0,4* ±1,3 ±2,1 ±0,6* ±2,1*

Серотонин 128,3 51,6 105,1 268,6 69,2 190,6

±13,4 ±3,4* ±9,2* ±19,6 ±5,8* ±17,3*

По ранним работам кафедры, известно что премедуллярные ГЛК являются местными продуцирующими нейромедиаторы структурами, а субкапсулярные - в основе своей поглощающими. В нашем эксперименте уменьшение содержания гистамина следует понимать как снижение его синтеза, а значит и недополучение поглощения, а вследствие этого снижение его и в тимоцитах. Этот факт может свидетельствовать о задержке экспрессии гистамина на мембране Т-лимфоцитов и снижение дифференцировки их на ранних этапах развития. Гистамин, по данным Бростофа (1997), в повышенном количестве супрессирует ранние стадии развития клеток. Здесь же, напротив, происходит его уменьшение, а значит увеличение дифференцировки клеток, в том числе и лимфоцитов. Распределение катехоламинов в структурах тимуса Люминесцентная картина срезов тимуса по Фальку похожа на люминесцентную картину при проведении метода Кросса с соав. (1971) на гистамин. Однако, имеется некоторая разница. Фон свечения тимусных долек темный, т.е. лимфоциты люминесцируют очень слабо. На этом фоне очень ярко люминесцируют нервные волокна. Иннервация тимуса полностью совпадает с данными, полученными В.Е. Сергеевой (1976). Число ГЖ в премедуллярной и субкапсулярной зонах выявляется значительно больше, чем при предыдущем методе. Единичные тучные клетки располагаются по септам и на периферии субкапсулярной зоны. Сразу после снятия иглы содержание КА в ГЛК премедуллярной зоны уменьшается в 3 раза с

15

уменьшением числа этих клеток в 0,8 раза. Увеличивается выявляемость адренергических нервных волокон. Через 15 мин. после снятия иглы содержание К А увеличивается, но остается меньше нормы в 1,3 раза (табл. 5).

Сразу после снятия иглы содержание КА в ГЛК субкапсулярной зоны уменьшается в 2 раза. Через 15 мин. содержание КА в них возрастает, но остается ниже нормы. При иглотерапии увеличивается выявляемость телец Гассаля. Тельца очень бледные, люминесцируют зеленым цветом, имеют каплевидную форму. Иногда 2-3 тельца встречаются вместе. Они ведут себя иначе, чем ГЛК. Сразу после снятия иглы содержание КА в них несколько снижается, а через 15 мин. повышается и становится выше нормы в 1,2 раза. В настоящее время тельцам Гассаля приписывают роль адсорбентов биогенных аминов и таким образом они могут убирать излишки этих веществ и участвовать в регуляции дифференцировки Т-лимфоцитов.

В тимоцитах мозгового вещества содержание КА небольшое и остается неизменным на протяжении всего эксперимента. Однако, после иглотерапии обозначаются мембраны этих клеток и светятся очень ярко. В тимоцитах коркового вещества содержание КА имеет тенденцию к увеличению КА только через 15 мин после снятия иглы. В нервных волокнах содержание К А увеличивается в 1,3 раза, нервные волокна выявляются в большем числе и становятся четкими без диффузного свечения в конце эксперимента.

Распределение серотонина в структурах тимуса

При исследовании структур тимуса на серотонин обнаруживается, что содержание этого моноамина в ГЛК премедуллярной зоны сразу после снятия иглы резко снижается почти в 4 раза, а через 15 мин повышается в два раза, но остается ниже нормы (табл. 5). В ГЛК субкапсулярной зоны содержание серотонина сразу после снятия иглы, также понижается в 2,5 раза, а через 15 мин. повышается, но остается ниже нормы (табл. 4).

В тимоцитах коркового вещества содержание серотонина сразу после снятия иглы уменьшается в 1,5 раза, а к концу эксперимента становится в 1,2 раза выше нормы. Клетки имеют бледно желтый цвет. В тимоцитах мозгового вещества содержание серотонина на протяжении всего эксперимента остается неизменным.

Таким образом, корковые тимоциты реагируют на введение иглы в точку 20Х более активно, чем мозговые (табл. 4). Факт снижения серотонина в ГЛК обеих зон предполагает снижение числа или дифференцировки Т-лимфоцитов и на поздних стадиях развития.

Корреляционные взаимодействия биогенных аминов в структурах

коркового вещества тимуса на разных сроках после снятия

акупунктурной иглы.

В премедуллярных клетках тимуса „ у интактных животных корреляционных связей между С/Г, а также между КА/Г практически нет. Между КА/С имеется очень сильная связь, что говорит о том, что эти два вещества действуют однонаправлено (рис. 3). Сразу после снятия иглы

возникает связь как между КА/Г, так и между С/Г. Через 15 мин после снятия иглы связь между КА/С остается такой же сильной, а вот между КА/Г и между С/Г становится отрицательной, что говорит или об истощении структур, или об их антагонистическом отношении друг к другу.

Интактные

Через 15 мин. после акупунктуры

Сразу после акупунктуры КА 9,6

0,9*/\р,5*

268,6 0,05 398,3 69,2 0,6* 181,5 190,6 -0,4* 200,3 Сер. Гист. Сер. Гист. Сер. Гист.

Рис.3. Корреляционные взаимодействия биогенных аминов в ГЛК премедуллярной зоны тимуса на разных сроках после снятия акупунктурной иглы, (Сер. - серотонин, Гист. - гистамин, *-р<0,05)

Интактные

128,3 -0,2 509,9 Сер. Гист.

Сразу после акупунктуры КА 7,9

51,6 -0,3 221,3 Сер. Гист.

Через 15 мин. после акупунктуры

КА 14,7

105,1 Сер.

0,8*

316,8 Гист.

Рис. 4 Корреляционные взаимодействия биогенных аминов в ГЛК субкапсулярной зоны тимуса на разных сроках после снятия акупунктурной иглы, (Сер. - серотонин, Гист. - гистамин, *-р<0,05)

В субкапсулярных клетках тимуса интактных крыс корреляционная связь между КА/С очень сильная и равна 0,9. Между КА/Г, а также С/Г связь отрицательная (рис. 4). Сразу после снятия иглы при 2-х мин экспозиции эта связь не изменяется, а через 15 мин после воздействия иглы, становится очень сильной по всем нейромедиаторам. Таким образом, можно сделать предварительный вывод, что иглотерапия воздействует как на

премедуллярные ГЛК, так и на субкапсулярные, но разнонаправлено, что еще раз говорит о разной функции этих клеток.

Корковые лимфоциты

В корковых лимфоцитах нет хороших корреляционных связей между нейромедиаторами (рис.5).

Особенно сверх слабые связи между КА/Г. Слабая связь возникает через 15 мин. после акупунктуры между С/Г. На связь между КА/С в корковых лимфоцитах иглотерапия не действует никак.

В мозговых лимфоцитах, также как и в корковых, нет хороших связей между нейромедиаторами как у интактных животных, так и после акупунктуры на всех временных параметрах (рис. 6). Особенно сверх слабые связи существуют между КА/Г. Слабая связь возникает через 15 мин. после акупунктуры между С/Г, равная 0,4. На связь между КА/С в мозговых лимфоцитах иглотерапия не действует никак (рис. 6).

Интактные

Сразу после акупунктуры

КА 4,5

0,2/\0,03

Через 15 мин. после акупунктуры

166 20,2 Гист. Сер.

0,1

145 Гист.

Рис. 5 Корреляционные взаимодействия биогенных аминов в корковых лимфоцитах тимуса на фоне акупунктуры, (Сер. - серотонин, Гист. - гистамин, *-р<0,05)

Таким образом, можно сделать вывод, что иглотерапия не воздействует на динамику биогенных аминов в тимоцитах вилочковой железы, независимо от их локализации и происхождения, а воздействует лишь опосредованно, через ГЛК.

Интактные

21,6 0,1 14,8 23 0,3 Сер. Гист. Сер.

Сразу после Через 15 мин. после акупунктуры акупунктуры

КА КА

4,6 4,9

0,2^4),05 0,2/\0,07

22,9 0,4* 5,6 Гист. Сер. Гист.

Рис. 6 Корреляционные взаимодействия биогенных аминов в мозговых лимфоцитах тимуса на разных сроках после снятия акупунктурной иглы, (Сер. - серотонин, Гист. - гистамин, *-р<0,05)

Серотониновый индекс

В премедуллярных ГЛК без воздействия серотониновый индекс был равен 8,2, сразу после снятия иглы он становится равным 7,2, практически изменяясь мало и через 15 мин. также изменяется мало и становится равным 7,7. Ведущим медиатором во всех взаимодействиях является серотонин.

В субкапсулярных ГЛК без воздействия серотониновый индекс был равен 7,8, сразу после снятия иглы он становится равным 6,5, и через 15 мин. становится равным 7,1. Ведущим медиатором во всех взаимодействиях является серотонин.

В корковых лимфоцитах без воздействия серотониновый индекс был равен 4,7, сразу после снятия иглы он становится равным 4,5, практически изменяясь мало и через 15 мин. после иглотерапии становится равным 5,2. Ведущим медиатором во всех взаимодействиях является серотонин.

В мозговых лимфоцитах без воздействия серотониновый индекс был равен 4.7, сразу после снятия иглы он становится равным 5, и через 15 мин. после иглотерапии снова становится равным 4,7. Ведущим медиатором во всех взаимодействиях всех структур тимуса также остается серотонин.

Корреляционные взаимодействия биогенных аминов в структурах коркового вещества тимуса между разными структурами на разных сроках после снятия акупунктурной иглы.

В связи с литературными данными (В.Е.Сергеева, 1976; Л.А.Любовцева, 1980; Б.М. Гордон, 1988), по которым премедулярные клетки тимуса являются продуцентами, субкапсулярные поглотителями, а тимоциты и с теми, и другими имеют тесную связь, мы в верхушке треугольника поместили премедуллярные клетки.

У интактных крыс существует слабое взаимодействие между ГЛК премедуллярной и субкапсулярной зон, а также между премедуллярной и корковыми тимоцитами и практически отсутствует между субкапсулярными ГЛК и корковыми тимоцитами (рис. 7).

Сразу после снятия иглы отрицательные взаимодействия возникают между премедуллярными и субкапсулярными ГЛК и корковыми лимфоцитами, что возможно говорит о том, что корковые тимоциты забирают на себя КА. Через 15 мин после снятия иглы средние связи возникают между премедуллярными ГЛК и тимоцитами. Между премедуллярными и субкапсулярными ГЛК возникает сильная отрицательная связь, это, возможно, говорит о том, что эти структуры начинают работать независимо друг от друга или нарушаются процессы синтеза и поглощения. Разрыв связей происходит и между субкапсулярными ГЛК и тимоцитами. Тимоциты не берут КА от субкапсулярных ГЛК, что, возможно, связано с поглотительными, а не продуцирующими функциями этих клеток.

При исследовании корреляционных взаимодействий серотонина в корковых структурах тимуса у интактных крыс существует слабое взаимодействие между ГЛК премедуллярной и субкапсулярной зон, и очень

слабое взаимодействие между субкапсулярными ГЛК и корковыми тимоцитами (рис. 8).

Интактные

Сразу после акупунктуры Премед. 9,6

16,5 0,07 Субк.

4,9 7,9 Тим. Субк.

Через 15 мин. после акупунктуры

Премед. 24,2 -0,3/\0,5*

14,7 -0,5* 6,4 Субк. Тим.

Рис 7. Корреляционные взаимодействия по КА в корковых структурах тимуса, (Прем. - премедуллярные ГЛК, Субк. - субкапсулярные ГЛК, Тим. -корковые тимоциты, *-р<0,05)

Сильное взаимодействие существует между премедуллярными ГЛК и корковыми лимфоцитами. Сразу после снятия иглы усиливаются взаимодействия между премедуллярными и субкапсулярными ГЛК, и отрицательные взаимодействия возникают между премедуллярными ГЛК и корковыми лимфоцитами, а также между субкапсулярными ГЛК и корковыми лимфоцитами, что, возможно, говорит о разрыве этих связей. Через 15 мин после снятия иглы слабые связи возникают между премедуллярными и субкапсулярными ГЛК. Остальные связи остаются отрицательными. Очевидно, иглотерапия приводит к ослаблению корреляционных связей по серотонину между всеми корковыми структурами тимуса (рис. 8).

Интактные

Премед. 268,6 0,1/МХ7*

Сразу после акупунктуры Премед. 69,2 0,Я/\с0,7*

Через 15 мин. после акупунктуры

Премед. 190

0,06^^-0,06

128 0,06 23 51 -0,5* 20 Субк. Тим. Субк. Тим.

105 -0,5* Субк.

Рис 8. Корреляционные взаимодействия по серотонину в корковых структурах тимуса, (Прем. - премедуллярные ГЛК, Субк. - субкапсулярные ГЛК, Тим. - корковые тимоциты, *-р<0,05)

Умеренные корреляционные взаимодействия гистамина в корковых структурах тимуса имеются во всех парах, кроме (субкапсулярные ГЛК)/тимоциты (рис. 9). Сразу после снятия иглы повышаются

взаимодействия между премедуллярными и субкапсулярными ГЛК, а также между премедуллярными ГЛК и тимоцитами, усиливаются процессы синтеза и поглощения биоаминов. Отрицательные взаимодействия возникают между премедуллярными ГЛК и корковыми лимфоцитами. Через 15 мин после снятия иглы сильные связи возникают между всеми структурами тимуса.

Таким образом, у интактных животных в корковых структурах имеются корреляционные взаимодействия между всеми веществами. Наиболее сильные связи после иглоукалывания возникают между корковыми структурами, насыщенными гистамином. Серотониновые связи очень слабые, более того наступает супрессия и разрыв этих связей.

По КА хорошая связь возникает только через 15 мин после воздействия между премедуллярными клетками и корковыми тимоцитами.

Интактные

Премед. 398 0,4>/\р,4*

509 0,2 Субк.

166 Тим.

Сразу после акупунктуры Премед. 181,5 0.5/NP.01

Через 15 мин. после акупунктуры

Премед. 200 0,8/\0,7

221 0,6* Субк.

166 Тим.

316 0,7* Субк.

Рис 9. Корреляционные взаимодействия по гистамину в корковых структурах тимуса, (Прем. - премедуллярные ГЛК, Субк. - субкапсулярные ГЛК, Тим. -корковые тимоциты, *-р<0,05).

Корреляционные взаимодействия между биогенными аминами в бноаминсодержащих структурах костного мозга и тимуса

Исследование корреляционных связей между нейромедиаторами в структурах костного мозга и тимуса показало следующее: у интактных крыс между ГЛК костного мозга и тимуса по серотонину нет взаимодействия (рис.10).

Интактные Сразу после Через 15 мин. после акупунктуры

акупунктуры

ГЛК с/к, тимус ГЛК с/к, тимус ГЛК с/к, тимус

128 -0,3 268 51 0,07 69 105 0,09 190 ГЛК КМ ГЛК прем. ГЛК КМ. ГЛК прем. ГЛК КМ. ГЛК прем.

Рис 10. Корреляционные взаимодействия по серотонину в структурах тимуса и костного мозга (ГЛК с/к - субкапсулярные ГЛК тимуса, ГЛК прем. -премедуллярные ГЛК тимуса, ГЛК-КМ - костномозговые ГЛК).

Сразу после снятия иглы такие взаимодействия возникают до умеренных. Через 15 мин. постепенно все приходит к уровню интактных животных (рис. 10).

В структурах костного мозга и тимуса через КА связи появляются сразу после снятия иглы между субкапсулярными и костномозговыми ГЛК, а через 15 мин становятся отрицательными. Возникает слабая связь между костномозговыми ГЛК и ГЛК премедуллярной зоны (рис. 11).

Интактные

ГЛК с/к, тимус 16,5 0,1/^,2

Сразу после акупунктуры ГЛК с/к, тимус 7,9

0,6К\0,1

Через 15 мин. после акупунктуры

ГЛК с/к, тимус

14,7 -0,2^x0,2

5,3 -0,04 32,6 5,9 -0,2 9,6 5,9 0,3 24,6 ГЛК КМ ГЛК прем. ГЛК КМ. ГЛК прем. ГЛК КМ. ГЛК прем.

Рис . 11 Корреляционные взаимодействия по катехоламинам в структурах тимуса и костного мозга, (ГЛК с/к - субкапсулярные ГЛК тимуса, ГЛК прем. - премедуллярные ГЛК тимуса, ГЛК КМ - костномозговые ГЛК, *-р<0,05).

В структурах костного мозга и тимуса через КА связи появляются сразу после снятия иглы между субкапсулярными и костномозговыми ГЛК, а через 15 мин становятся отрицательными. Возникает слабая связь между костномозговыми ГЛК и ГЛК премедуллярной зоны (рис. 11).

Гистаминовые связи в структурах костного мозга и тимуса у интактных крыс имеются между всеми БА, сразу после снятия иглы эти связи становятся отрицательными и таковыми остаются и через 15 мин. Однако, в паре субкапсулярные-премедуллярные ГЛК связи остаются положительными и усиливаются (рис. 12)

Интактные

ГЛК с/к, тимус 509 0,5>"/\{),4*

Сразу после акупунктуры ГЛК с/к, тимус 221

Через 15 мин. после акупунктуры

ГЛК с/к, тимус

316 -0,5>^чр,8*

53,6 0,3 398 52 -С,2 182 50,8 -0,3 200 ГЖКМ ГЛК прем. ГЛК КМ. ГЛК прем. ГЛК КМ. ГЛК прем.

Рис 12. Корреляционные взаимодействия по гистамину в структурах тимуса

и костного мозга, (ГЛК с/к - субкапсулярные ГЛК тимуса, ГЛК прем. -премедуллярные ГЛК тимуса, ГЛК КМ - костномозговые ГЛК, *-р<0,05).

Локализация СДГ в структурах тимуса

Сразу послс снятия иглы содержание СДГ имеет небольшую тенденцию к увеличению. Через 15 мин после снятия иглы содержание СДГ увеличивается в два раза практически во всех структурах, за исключением субкапсулярных ГЛК. СДГ положительными оказываются нервные волокна, находящиеся вблизи премедуллярной зоны коркового вещества тимусной дольки.

Локализация индолсодержащих веществ в структурах ТИМУСА

Сразу после снятия иглы содержание серотонина изменилось мало, а через 15 мин повысилось выявляемость ГЛК и тучных клеток, находящихся в субкапсулярной зоне тимуса. В корковом веществе около фолликулов Кларка выявились нервные волокна.

Локализация гепарина в структурах I ИМ УС Л сразу после снятия иглы мозговое вещество не имеет четких границ. В нем обозначаются островки размножения. Наблюдается некоторое оголение стромы в корковом веществе, что говорит о выходе части лимфоцитов из тимуса. По субкапсулярной зоне и в септах определяются тучные клетки до 14 в поле зрения, из которых половина находится в субкапсулярной зоне. Клетки окрашены бета-метахроматично. В толще коркового вещества определяются ортохромные тучные клетки с некоторыми совершенно не окрашенными гранулами, что говорит об иной природе этих гранул. Около жировых клеток находятся неокрашенные на углеводы гранулярные клетки. Число дегранулированных тучных клеток снижается до 4 на поле зрения, по сравнению с интактными животными.

Через 15 мин после 2 мин экспозиции иглы мозговое вещество не едино, оно как бы разделено на несколько. В нем наблюдаются островки размножения. Корковое вещество сужено, что говорит, возможно, о том что наблюдается усиленное размножение мозговых лимфоцитов. В корковом веществе наблюдается оголение стромы. Тучные клетки имеют вытянутую форму, они бета-метахроматичны. Их число равно 18, по сравнению с предудущим сроком несколько увеличено, но остается ниже уровня интактных животных.

Выводы.

1. Двухминутная акупунктура в точку 20Х приводит к снижению содержания изучаемых биоаминов в гранулярных люминесцирующих клетках тимуса, с уменьшением числа этих клеток и повышением дегрануляции тучных клеток. Увеличивается выявляемость адренергических нервных волокон, что говорит об активации периферического звена вегетативной нервной системы.

2. Иглоукалывание в точку 20Х в изучаемые периоды ослабляет корреляционные связи между всеми парами нейромедиаторов в гранулярных люминесцирующих и тучных клетках костного мозга. В премедуллярных гранулярных клетках тимуса корреляционные связи после акупунктуры

становятся отрицательными, а в субкапсулярных гранулярных люминесцирующих клетках положительными и резко возрастают.

3. Акупунктура усиливает сульфатацию гепарина в тучных клетках костного мозга и тимуса, снижает активность моноаминоксидазы в цитоструктурах костного мозга. Увеличивается активность фермента аэробного окисления (сукцинатдегидрогеназы) в премедуллярных гранулярных люминесцирующих клетках тимуса и гранулярных люминесцирующих клетках костного мозга, а также в бластах и лимфоцитах, то есть повышается интенсивность энергетического обмена.

4. Через 15 мин. после двухминутной экспозиции иглы в точку акупунктуры 20Х в миелограмме увеличивается число бластов и митотически делящихся клеток, что свидетельствует о стимулировании процессов гемопоэза.

5. Иглоукалывание в точку акупунктуры 20Х в исследуемые сроки оказывает большее влияние на нейромедиаторную систему тимуса, чем костного мозга, что может быть связано с различным составом популяций биоаминсодержащих клеток в этих органах.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Нестерин К.В. Нейромедиаторы гипоталамуса в условиях овариэктомии и эстрогенного воздействия / Нестерин К.В., Леонова Л.К., Гунин А.Г., Козлюк П.А. // Сборник научных работ «Здоровье населения и физическое воспитание». - Чебоксары, 1994. - С. 64-65.

2. Нестерин К.В. Нейромедиаторы гипоталамуса в ранние сроки после КВЧ-воздействия и введения иммуноглобулина / Нестерин К.В., Леонова Л.К. // Российская научно-практическая конференция «Экология здоровья природопользования». - Саратов, 1997. - С. 63-64.

3. Нестерин К.В. Нейромедиаторы гипоталамуса после КВЧ-воздействия на фоне введения иммуноглобулина / Нестерин К.В., Леонова Л.К., Булкин A.B. // Тезисы 2 съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1998.-С. 28-29.

4. Нестерин К.В. Люминесцентно гистохимическая характеристика толщи кожи в области биологически активных точек / Нестерин К.В., Ковалев Д.В., Любовцев В.Б., Афанасьев Д.А.// Тез. докл. XXVII студенческой научной конф. ЧГУ им. И.Н. Ульянова. - Чебоксары, 1999. - С. 228.

5. Нестерин К.В. Влияние акупунктуры на биоаминсодержащие структуры тимуса и гипоталамуса / Нестерин К.В., Любовцева Е.В., Любовцев В.Б., Любовцева Л.А. // Тезисы международного конгресса «Восстановительная медицина и реабилитация -2005». - Москва, 2005. - С. 99-100.

6. Нестерин К.В. Влияние акупунктуры на биоаминсодержащие структуры кроветворных органов / Нестерин К.В., Любовцева Е. В., Любовцева Л. А. // «Морфология». - СПб., 2006. - Т.130. - № 5. - С. 64.

7. Нестерин К.В. Люминесцентно-гистохимическое исследование структуры красного костного мозга после иглотерапии / Нестерин К.В., Любовцева Л.А, Любовцева Е.В., Любовцев В.Б. // Материалы 5-й Всероссийской конференции «Бабухинские чтения в 0рле-2006». - Орел, 2006. - С. 76-77.

8. Нестерин К.В. Влияние акупунктуры на биоаминное обеспечение центральных органов кроветворения / Нестерин К.В., Любовцева Е. В., Любовцева Л. А. // «Морфологические ведомости». - М., 2007. - № 1-2. - С. 57-59.

Подписано к печати 20.02.2007 г. Формат 60x84/16. Объем 1,0 п.л. Бумага писчая. Печать оперативная.

Тираж 100 экз. ¿сниу.^ .

Отпечатано в типографии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова» 428015, г. Чебоксары, Московский проспект, 15.