Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы

Чернышева, Фанзиля Абузаровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы
ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы"

На правах рукописи

Чернышева Фанзиля Абузаровна

ЛОКАЛИЗАЦИЯ АТФ-азной АКТИВНОСТИ, ДЫХАНИЕ И УЛЬТРАСТРУКТУРА КЛЕТОК КОРНЕЙ ПШЕНИЦЫ ПРИ МОДИФИКАЦИИ ИОННОЙ ПРОНИЦАЕМОСТИ ПЛАЗМАЛЕММЫ

03.00.12 - физиология и биохимия растений

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2004

Работа выполнена в лаборатории регуляции клеточного окисления и кабинете электронной микроскопии Казанского института биохимии и биофизики Казанского научного центра Российской академии наук.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Лев Хаймович Гордон

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Владимир Иванович Чиков

доктор биологических наук, профессор Александр Павлович Веселое

Ведущая организация Казанский государственный университет

им. В.И. Ульянова-Ленина; Кафедра физиологии и биотехнологии растений

Защита состоится «_,£_» ССЮнЛ. 2004 г. В /У часов на заседании диссертационного совета К 002.005.01 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук при Казанском институте биохимии и биофизики КНЦ РАН (420503 г. Казань, а/я 30, ул. Лобачевского, 2/31).

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке Казанского научного центра РАН.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Постановка проблемы и ее актуальность. Среди множества клеточных мембран имеется одна, роль которой особенно важна - это плазматическая мембрана, образующая поверхность клетки (Поликар, 1972; 1975).

Вся внешняя регуляция жизни клетки проходит через воздействие регуляторных сигналов на наружную плазматическую мембрану, занимающую ключевое положение в иерархии систем управления (Конев, 1987). При этом значительная часть клеточного ответа непосредственно связана со структурно-функциональным состоянием мембраны и им же определяется (Болдырев, 2001). Важно, что в ответную реакцию клеток вовлекается большое число функциональных блоков мембраны, и в таком случае физиологическая регуляция приобретает особое значение в критические моменты жизни клетки, например при стрессовых воздействиях или при переключении от состояния покоя к активности.

В связи с этим, особый интерес представляет работа ИАТарчевского (Тарчевский, 2002), где рассматриваются конкретные механизмы функционирования сигнальных систем у растений и их взаимодействие.

Плазматическая мембрана со встроенными в нее функциональными элементами играет ведущую роль в поддержании клеточного гомеостаза, без которого невозможна жизнь. Одной из составляющих частей клеточного гомеостаза является ионный (функциональный), который тесно связан с энергетическим и пластическим (Новосельцев, 1991). Именно сдвигам ионного гомеостаза придается основное значение в запуске ответных реакций клетки на различные воздействия. Плазматическая мембрана не только регулирует вход и выход веществ через клеточную мембрану, но и осуществляет обмен информацией и энергией между внешней средой и клеткой (Кагава, 1985).

В основе формирования функционального ответа клеток на внешние воздействия лежит взаимосвязь энергетического обмена с ионным транспортом. Можно полагать, что одним из звеньев в регуляции внутриклеточного обмена и соответствующих энергетических затрат является смещение ионного гомеостаза клеток через изменения структурно-функциональных свойств плазмалеммы. Степень возмущения ионного гомеостаза клеток определяется изменениями соотношения пассивных и активных транспортных процессов (Лев, 1975). В связи с этим, особый интерес представляют исследования структурно- функциональных изменений, происходящих в интактных клетках при различных воздействиях. Исследования, проводимые на интактных растительных тканях, позволяют выявить функционирование регуляторных механизмов поддержания ионного гомеостаза и энергетические возможности клеток при направленном изменении структурно-функциональных свойств плазмалеммы.

Цель и задачи исследования. Основной целью исследования являлось выявление сопряженности изменений

АТФ-азноЙ активности и ультраструктурной орг^^^ОД^иДО^^ корней

СПстерб;

оэ яо

Ы}

пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы и блокировании активного ионного транспорта.

Исходя из указанной цели, были поставлены следующие задачи:

❖ исследовать изменения локализации АТФ-азной активности и дыхательного газообмена при многочасовой инкубации отсеченных корней в воде;

исследовать изменения проницаемости плазмалеммы для ионов калия, биоэлектрических характеристик плазмалеммы, локализации АТФ-азной активности, а также ультраструктурные перестройки и дыхание клеток корней пшеницы на ранних этапах ответных реакций (2 часа) при действии:

а) мембранотропного соединения широкого спектра действия -хлорпромазина (ХП);

б) неспецифического каналогена - грамицидина 8 (Гр);

в) ингибитора Н+-АТФ-азы -дициклогексилкарбодиимида (ДЦКД);

г) специфического^ К+-ионофора - валиномицина (Вал);

❖ выявить особенности действия Вал на проницаемость плазмалеммы для ионов калия, локализацию АТФ-азной активности, ультраструктуру и дыхательный газообмен клеток при многочасовой инкубации отсеченных корней, оценить компенсаторные возможности клеток при специфическом увеличении калиевой проницаемости.

Научная новизна работы. Впервые сочетание физиолого-биохимических методов, электронной микроскопии и ультрацитохимии позволило выявить взаимосвязи изменений локализации АТФ-азной активности, дыхания, ультраструктуры, МП клеток, содержания К* и рН среды инкубации корней. Это дало возможность оценить участие отдельных клеточных структур в поддержании ионного гомеостаза клеток при направленном изменении ионной проницаемости плазмалеммы.

Впервые показано, что локализация АТФ-азной активности зависит от степени изменения ионной проницаемости плазмалеммы. Получены данные о действии модификаторов ионной проницаемости плазмалеммы на локализацию АТФ-азной активности в клетках корней пшеницы. При действии специфического -ионофора - валиномицина - локализованная на плазмалемме АТФ-азная активность увеличивается, что обеспечивает восстановление нарушенного ионного гомеостаза. Это компенсаторное регулируемое активирование -АТФ-азы плазмалеммы сопровождается усилением энергетических затрат (увеличение потребления кислорода). Ультраструктурные перестройки митохондриального аппарата

свидетельствуют о непосредственном участии митохондрий в аккумуляции ионов.

Впервые показано, что при увеличении ионной проницаемости плазмалеммы под действием неспецифического мембраноактивного соединения ХП АТФ-азная активность на плазмалемме отсутствует и выявляется на тонопласте. Ультраструктурные перестройки митохондриального аппарата не наблюдаются, и происходит снижение потребления кислорода.

Практическая значимость работы, В связи с использованием соединений, обладающих мембранотропным действием, в различных областях жизнедеятельности человека представляется актуальным исследование ранних реакций в ходе формирования ответов клеток на их воздействие. Полученный экспериментальный материал свидетельствует о целесообразности комплексного исследования ответных реакций растительных клеток на воздействие мембраноактивных соединений.

Новые данные об изменениях ультраструктуры клеток корней и локализации АТФ-азной активности под влиянием мембраноактивных соединений могут быть использованы для оценки функционального состояния клеток при других воздействиях.

Материалы исследования углубляют существующие представления о структурно-функциональных взаимоотношениях в клетках растений при модуляции ионной проницаемости плазмалеммы мембранотропными соединениями и могут служить методологической основой при изучении реактивности и адаптации на уровне растительной ткани.

Апробация работы. Основные результаты диссертации были доложены на: конференции молодых ученых «Механизмы регуляции функционирования биологических систем и методы их изучения» (Казань, 1985); итоговых научных конференциях КИББ КНЦ РАН (Казань, 2000,2001); Всероссийском симпозиуме «Клеточная биология на пороге XXI века» (С-Петербург, 2000); Международной конференции «Актуальные вопросы экологической физиологии в XXI веке» (Сыктывкар, 2001); 5th Conference on Oxygen free radicals and oxidative stress in plants (Nice, 2001); V съезде общества физиологов растений России и Международной конференции «Физиология растений -основа фитобиотехнологии» (Пенза, 2003); XIIIth Conference ISBC «Energetics of adaptation and development. From molecular mechanisms to clinical practice» (WDrzburg / Veitsh6chheim, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, изложения результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста, включает 14 таблиц и 26 рисунков. Список цитируемой литературы включает 331 источник , из них 229 отечественных.

1. ОБЪЕКТ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объекта исследования использовали корни 5-6 суточных проростков яровой пшеницы сорта Люба (Triticum aestivum L.). Проростки выращивали на растворе СаСЬ (0,25 мМ) при комнатной температуре и дневном освещении. Для экспериментов использовали отсеченные корни. В работе использовали специфический ионофор - валиномицин (20 мкМ); блокатор протонных АТФ-аз - дициклогексилкарбодиимид (100 мкМ);

неспецифический каналоген - грамицидин S (20 мкМ); мембраноактивное соединение широкого спектра действия - хлорпромазин (100 мкМ). Для всех измерений брали навеску отсеченных корней (150 мг) в 3 мл соответствующего раствора и инкубировали в течение 2 ч при качании (110 об/мин) при температуре +30С0. Опыты проводили в 3-7 биологических и 3-10 аналитических повторностях. Экспериментальный материал обрабатывали статистически (Вознесенский, 1969). В таблицах и на рисунках приведены среднеарифметические значения с их стандартными ошибками.

Определение интенсивности дыхания. Интенсивность потребления кислорода и выделения углекислого газа корнями определяли манометрическим методом в аппарате Варбурга (Семихатова, Чулановская, 1965). Навеску целых корней (150 мг) помещали в сосудики Варбурга с соответствующими растворами (3 мл) и после 10-15 мин термостатирования регистрировали показания манометров каждый час. Расчет проводили в мкл О2 или СО2 в час на грамм сырого веса.

Определение рН и содержания ионов калия в растворе инкубации. О выходе калия из клеток отсеченных корней судили по изменению содержания его в растворе после инкубации корней. Измерения проводили на пламенном фотометре Phlapho-41 (Германия). Содержание калия в среде инкубации выражали в мкэкв на 1г сырого веса корней за соответствующее время. Измерение рН раствора инкубации проводили на рН-метре ОР-211/1 ("Radelkis", Венгрия).

Методика электрофизиологических исследований. Для измерения биоэлектрических параметров мембран использовали микроэлектродную технику. Стеклянные микроэлектроды с помощью микроманипулятора КМ-2 вводили в клетки ризодермиса в области зоны роста (1.5-2 см от кончика корня).

Определение образования супероксидного анион-радикала. Использовали метод регистрации радикалов кислорода (О), основанный на превращении неокрашенного эпинефрина в окрашенный адренохром при взаимодействии с супероксидным анион-радикалом (Barber, Kay, 1996).

Навеску отсеченных корней (150 мг) помещали в бюксы с 3 мл соответствующего раствора и инкубировали в течение 2 ч. После инкубации в раствор добавляли 500 мкл эпинефрина (pH 6.8) в конечной концентрации 1 мМ Об образовании 0"г судили по превращению эпинефрина в течение 15 минут в адренохром, который учитывали с помощью фотоэлектроколориметра при 480 нм. Данные представлены в концентрации адренохрома.

Метод электронной микроскопии. После определения интенсивности дыхания корни из сосудиков фиксировали для изучения изменений ультраструктуры клеток с помощью электронного микроскопа. Брали кусочки ткани длиной 1-2 мм, отступая 1 см от кончика корня. Образцы фиксировали

2,5 % раствором глутарового альдегида в фосфатном буфере (рН 7,2) в течение 2 ч, постфиксировали 2 ч в 1 % растворе OSO4 с добавлением сахарозы (25 мг/мл) в том же буфере. Дегидратация образцов производилась в спиртах восходящей концентрации, ацетоне и окиси пропилена. Заливочной средой служил Эпон-812. Полимеризация осуществлялась в течение трех суток. Срезы, полученные на ультрамикротоме LKB-111 (Швеция), контрастировали водным раствором уранилацетата, а затем цитратом свинца. Препараты просматривались на электронном микроскопе ЭМ-200 (Украина), JEM-100 СХ (Япония), Hitachi-118 (Япония). На поперечном срезе корня анализировали ультраструктуру клеток центрального цилиндра.

Метод ультрацитохимического выявления локализации АТФ-азной активности. Учитывая особенности механизма выявления АТФ-азной активности, известная методика (Gomori, 1952; Wachstien, Meisel, 1957) была модифицирована для нашего объекта исследования (клеток корней пшеницы).

Оптимальные условия выявления специфического осадка, получающегося при ферментативном расщеплении субстрата и последующем его осаждении, были следующие: 1) состав полной среды инкубации: 2 мМ АТФ-натриевая соль, 80 мМ трис-малеат (рН 7,2, доводится 0,2 М NaOH), 0,25 М сахароза; 6,3 мМ MgSO^ 2 мМ '.Pb^'Oj^; 2) приготовление необходимых растворов непосредственно перед инкубированием образцов (за исключением трис-малеатного буфера); 3) порядок растворения компонентов инкубационной среды: АТФ-* MgS04-> РЬ(МОз)г. Контрольные варианты на специфичность получаемого осадка фосфата свинца - инкубационные среды с исключением: Mg2t; Pb2*; АТФ; добавление специфического ингибитора Н+-АТФ-азы плазмалеммы 0,2 мМ диэтилстильбистрола.

Удовлетворительные результаты были получены при префиксации кусочков ткани в 1% растворе глутаральдегида в 0,05 М какодилатном буфере рН 7,2 в течение 2 часов при температуре +4° С. Материал затем отмывался от фиксатора в 0,05 М какодилатном буфере рН 7,2 в двух сменах раствора по 10 мин., а затем в трис-малеатном буфере рН 7,2 в 2 смены по 10 мин. На этом этапе и далее добавлялась 0,25 М сахароза, и если температура среды отдельно не отмечается, - температура комнатная. Инкубация образцов в подготовленной среде (как указано выше в п. 1.6) осуществлялась 2 часа при 28° С; с последующим промыванием в трис-малеате рН 7,2 в 2-х сменах по 10 мин. и какодилатном буфере (2 смены по 10 мин.). Дофиксация производилась 1 % OsC>4 в 0,05 М какодилатном буфере рН 7,2 в течение 2 часов. Дальнейшая подготовка кусочков корней пшеницы для изучения с помощью электронного микроскопа описана выше. Ультратонкие срезы просматривались не контрастированными.

Глава 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

2.1. Структурно-функциональная характеристика клеток отсеченных корней пшеницы при многочасовой инкубации

В исследованиях реактивности и механизмов адаптации растений в качестве экспериментальной модели используют отсеченные корни. При исследовании действия мембраноактивных соединений на клетки корней пшеницы все данные рассматривались нами относительно контрольных значений. Контролем служили отсеченные корни проростков пшеницы, инкубированные в дистиллированной воде. В начальный период (1-2 ч после отсечения корней) происходит снижение МП и потеря клетками К+. Реализацию восстановительных процессов, направленных на предотвращение изменений ионного гомеостаза, вызванных отсечением, связывают, в основном, с активированием Н+-АТФ-азы, использующей энергию метаболизма для генерации МП и переноса через мембрану (Cerana et al., 1981). Процессы, связанные с установлением нового уровня ионных градиентов на мембране, завершаются, в основном, через 2 ч после отсечения корней (Glass, 1978). Последующая инкубация отсеченных корней сопровождается фазными ^измен^иями^МП, проницаемости плазмзлеммы для К* и Н+, уровня пиридиннуклео1идов, содержания АТФ, дыхания, метаболизма структурных липидов, а также О'г. генерируемого клетками (Гордон, 1992; Минибаева и др., 1997). Эти изменения являются отражением взаимосвязанных процессов, лежащих в основе формирования адаптационного синдрома — перехода клеток корня от состояния активности в состояние «относительного покоя».

Данные электронной микроскопии свидетельствуют о том, что в течение 5-7 ч инкубации отсеченных корней в дистиллированной воде во всех проанализированных нами экспериментах (так же, как и в описанных ранее (Полыгалова и др., 1982)) ультраструктура клеток корней контрольных вариантов не претерпевает значительных изменений.

Ультрацитохимическое выявление АТФ-азной активности производилось нами после 2 ч, 5 ч, 6 ч и 7 ч инкубации отсеченных корней (в активном состоянии и состоянии «относительного покоя»). В контроле (2 ч инкубация отсеченных корней в воде) наличие осадка в виде крупных гранул, позволяющее судить об АТФ-азной активности, было зарегистрировано на плазмалемме и плазмадесмах. Характер распределения осадка после 5 ч, 6 ч инкубации отсеченных корней не изменился по сравнению с 2 ч; осадок также локализовался на плазмалемме, но становился менее зернистым, чем за 2 ч, а к 7 ч на плазмалемме почти не выявлялся (рис. 1).

Таким образом, после 5-6 ч инкубации отсеченных корней саморегулирующаяся система живой клетки настраивается на новый стационарный уровень метаболизма, обеспечивающий поддержание клеточного гомеостаза и характеризующийся иными функциональными параметрами. При этом происходит изменение реактивности корней и увеличение их устойчивости к действию неблагоприятных факторов (Гордон, 1992).

5 часов

ю ■ ' ** ■■

кс; .Г!

Л"

• 1

2 часа 7 часов

Рис1. Ультрацитохимическое выявление АТФ-азной активности в клетках корней при многочасовой инкубации в дистиллированной воде (контроль). Специфический осадок (стрелки) выявляется на плазмалемме. Условные обозначения: ПЛ-плазмалемма; ПЛД-плазмадесма; Т-тонопласт; КС-клеточная стенка; ЦВ-центральная вакуоль; М-митохондрия; ЭПР-эвдоплазматический ретикулум; АГ- аппарат Гольджи. Ув. 18000.

^ЖЗЩ'"?'

Рис 2. Локализация АТФ-азной активности в клетках корней при действии мембраноактивных соединений в течение 2-х часов: а - ЮОмкМ ХП, осадок фосфата свинца локализуется на тонопласте. Ув. 18000; б - 20мкМ Вал, АТФ-азная активность присутствует на плазмалемме. Ув. 23000 (Усл. обозн. те же, что и на рис 1.).

2.2. Изменение ионной проницаемости, мембранного потенциала плазмалеммы, продукции О^, локализации АТФазной активности, ультраструктуры и дыхания клеток корней пшеницы при действии

хлорпромазина

Одним из подходов в исследовании роли плазмалеммы в регулировании функциональных ответов клеток является использование соединений, модулирующих ее проницаемость для ионов, с различной степенью специфичности.

Сильным мембранотропным эффектом обладают производные фенотиазина, в частности, хлорпромазин (XII). Как видно из данных, представленных на рис.3, потеря К+ клетками отсеченных корней, инкубированных 2 ч с ХП, была значительно больше, чем в контроле (инкубирование в дистиллированной Н20).

Наряду со значительной потерей клетками К+ в присутствии ХП наблюдалось увеличение рН среды инкубации отсеченных корней (рис.4), что свидетельствует об усилении ионных потоков и увеличении проницаемости плазмалеммы. Кроме того, ХП вызывал значительное снижение МП (рис.5).

Изменение ионной проницаемости плазмалеммы и образование активных метаболитов кислорода (АМК) рассматриваются в качестве ранних ответных реакций клеток на стрессовые воздействия (Конев, 1987; Гамалей, Клюбин, 1996).

В наших экспериментах в присутствии ХП содержание 0"г, генерируемого клетками отсеченных корней, возрастало (рис.6), что, вероятно, связано с нарушениями структурной целостности плазмалеммы и активированием пероксидазы клеточной поверхности при увеличении рН среды инкубации в этих условиях.

Действие ХП на образование 0"г клетками корней обусловлено не только

изменениями структуры плазмалеммы и соотношения зарядов на мембране, но, по-видимому, связано с вытеснением ионов кальция и их поступлением в цитоплазму. Уровень свободного кальция в клетках влияет на образование АМК (Гамалей, Клюбин, 1999). Показано увеличение регистрируемого количества

при усилении поступления внутрь клеток (Минибаева и др., 1997).

Отмеченное выше увеличение выхода К* из клеток и рН среды инкубации отсеченных корней, а также снижение мембранного потенциала клеток в присутствии ХП свидетельствуют об увеличении ионной проницаемости плазмалеммы и усилении ионных потоков. Эти эффекты ХП

й:

—

га .

12 14 9

Рис.3 Влияние мембраноастивных соединений на содержание ионов калия в среде инкубации (СИ) 1 .Контроль вода

2.ХП100 мкМ;

3.Гр 20 мкМ;

4.ДЦКД 100 мкМ;

5.Вал 20 мкМ

обусловлены действием его на структуру плазмалеммы и ее функциональные компоненты,

связанные с мембранным транспортом. Известно, что XII подавляет активность мембранных АТФ-аз (Несмеянова, Богданов, 1987; Орлов, 1987), а также ингибирует кальмодулинзависимые ферменты, в частности, фосфодиэстеразу цАМФ, Са2+/М^+-АТФ-азу (Алахов и др., 1985). Об ингибировании мембранных АТФ-аз в наших экспериментах свидетельствуют данные электронной цитохимии (рис.2а). На фоне ХП АТФ-азная активность на плазмалемме отсутствовала, что, вероятно, связано не только с ингибированием мембранных АТФ-аз (протонной и кальциевой), но и с нарушением структурной целостности плазмалеммы, вытеснением ионов кальция, которые, так же как Н+, поступают в цитоплазму. Известно, что ионы кальция способны запускать многие клеточные процессы и играют особую роль в интеграции клеточных функций. Поддержание уровня свободного кальция в цитозоле осуществляется за счет функционирования мембраносвязанных Са2+-АТФ-аз и Са24-каналов плазмалеммы и внутриклеточных мембран. В присутствии ХП АТФ-азная активность локализовалась на тонопласте, что, вероятно, обусловлено функционированием НГ^-АТФ-азы тонопласта и неорганической пирофосфатазы (Rea, Sanders, 1987; Палладина, 1999; Андреев, 2001; Сапега и др., 2003), а также активированием вакуолярной Са2*-АТФ-азы, стимулируемой ионами кальция. Наличие такой АТФ-азы показано у злаков (Diaz de Leon et al., 1985).

По данным ультрацитохимии, АТФ-азная активность выявлялась и на мембранах ЭР. Это согласуется с ультраструктурными изменениями в присутствии ХП (наблюдалось разрастание, разветвление и расширение мембран ЭР с образованием полостей).

Поскольку ХП относится к соединениям с ярковыраженным мембранотропным эффектом, исследование действия таких веществ на окислительный обмен представляет особый интерес, так как позволяет, в ряде случаев, разделить мембранотропное действие и прямое влияние на метаболизм, в частности, на систему энергообеспечения тканей. Изучение дыхательного газообмена (табл.1) выявило снижение его уровня в клетках корней пшеницы под влиянием ХП. Снижение интенсивности дыхания под влиянием ХП может быть связано с подкислением цитоплазмы (Самуилов, Хакимов, 1991), а также с существенной потерей клетками 1С1, поскольку этот ион регулирует работу многих ферментов (в том числе ферментов дыхательной цепи митохондрий), определяет МП и осмотические свойства растительных клеток (Мелихов, Анев, 1992). Потеря клетками IC*" на фоне ХП и поступление протонов в цитоплазму, по-видимому, влияют на ее рН, который снижается

параллельно снижению концентрации К+ в цитозоле (Walker et al., 1996). Показано (Барский и др., 1989; Самуилов, Хакимов, 1991), что при понижении рН цитоплазмы и концентрации калия в цитозоле наблюдается подавление дыхания, связанное с действием катионов на оксидоредуктазные реакции дыхательной цепи. И в наших экспериментах не исключено подобное опосредованное влияние ХП на дыхательную цепь митохондрий. Об этом свидетельствуют изменения дыхательного коэффициента (ДК) (табл.1). Были обнаружены изменения ультраструктуры клеток, которые, по-видимому, отражают взаимосвязь повреждающего действия ХП на клетки (прежде всего на мембраны), и активации репарационных процессов. Однако значительное подавление дыхания ХП, усиливающееся со временем, свидетельствует о том, что энергетические ресурсы клеток недостаточны для устранения повреждающего действия ХП. Было показано (Полыгалова и др., 1982), что длительное инкубирование отсеченных корней с ХП приводит к разрушению значительной части клеток.

23. Влияние грамицидина S на проницаемость плазмалеммы для ионов, МП, локализацию АТФ-азной активности, продукцию 0"г, дыхание и ультраструктуру клеток корней пшеницы

Среди соединений, неспецифически изменяющих проницаемость мембран для ионов, довольно широко используется антибиотик Гр (Шольц, Соловьева, 1977; Островский, 1985). Гр индуцирует проницаемость мембран по каналогенному типу, не обладая специфическими ионофорными свойствами. В высоких

концентрациях Гр, обладая свойствами детергента, вызывает лизис мембран. В работе Б.А. Николаева (1988) была выявлена оптимальная концентрация Гр для использования в исследованиях, проводимых на корнях пшеницы.

В наших экспериментах наблюдалось значительное

увеличение содержания ионов калия в среде после 2 ч инкубации отсеченных корней с Гр (рис.3). В присутствии Гр, так же как и ХП, соединений с ярковыраженным мембранотропным действием, наряду со существенной потерей К+ клетками, происходило увеличение рН среды инкубации корней (рис.4). О значительном действии Гр на плазмалемму клеток корней свидетельствует снижение

мембранного потенциала (рис.5). Как и в случае с ХП, продукция 0'\ клетками отсеченных корней под влиянием Гр увеличивалась (рис.6). Возрастание образования 0""г корнями и в этом случае, по-видимому, обусловлено нарушениями структурной целостности плазмалеммы, освобождением растворимых изоформ пероксидазы клеточной поверхности в апопластное пространство и среду инкубации корней и их активацией при увеличении рН, а также снижением активности антиоксидантных систем.

Рис.6 Влияние мембраноаетивных соединений на содержание О"] , в среде инкубации

1. Контроль вода;

2. ХП 100 мкМ,

3. Гр 20 мкМ;

4. ДЦКД100 мкМ;

5. Вал 20 мкМ

1 2 3 4 5

Снижение МП клеток корней, потеря ими и увеличение рН среды под влиянием Гр обусловлены его действием на структуру плазмалеммы и ее функциональные компоненты, связанные с мембранным транспортом. Известно (Островский, 1976), что Гр ингибирует мембранные АТФ-азы и не оказывает влияния на растворимые формы ферментов. В наших экспериментах зарегистрировано наличие осадка фосфата свинца, демонстрирующего АТФ-азную активность, по всей цитоплазме и отсутствие четкой мембранной локализации его при инкубации корней с Гр.

Дыхание клеток корней в присутствии Гр было подавлено (табл.1). Причем, потребление О^ и выделение СОг ингибировалось в разной степени (выделение СОг подавлялось сильнее, чем поглощение Ог) и было стабильным в течение 2 ч, а ингибирование потребления О2 усилилось за второй час. ДК снижался (табл.1). Вероятно, это связано с неспецифическим увеличением проницаемости плазмалеммы не только для ионов (Н+, К*, Са2+), но и некоторых метаболитов, в частности, субстратов гликолиза и, возможно, восстановительных эквивалентов. Известно, что Гр вызывает потерю клетками ряда метаболитов, угнетение процессов дегидрирования (Егоров, 1979) и ингибирование гликолиза (Вострокнутова и др., 1981).

После 2 ч воздействия Гр наблюдалась пролиферация мембран ЭР, что может быть связано с активацией восстановительных синтезов - «залечиванием мембраны» (Строчкова, 1979). Отсутствие изменений ультраструктуры митохондрий при 2 ч инкубировании корней с Гр свидетельствует, по-видимому, о том, что митохондриальная дыхательная цепь не затронута.

Однако не исключено, что более длительное воздействие Гр на предшествующие системы транспорта электронов (гликолиз) отразится на функционировании дыхательной цепи митохондрий, о чем свидетельствует усиление подавления потребления Ог за 2-й ч инкубации корней с Гр.

И ХП, и Гр вызывали существенное увеличение проницаемости плазмалеммы, которое не было скомпенсировано, поскольку эти соединения не только обладают сильным мембранотропным действием, но также ингибируют мембранные АТФазы, поддерживающие градиенты ионов на плазмалемме.

2.4. Влияние ДЦКД на проницаемость плазмалеммы, МП, продукцию О^» локализацию АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктуру клеток

корней

Действие блокатора протонных АТФ-аз ДЦКД на выход К+ в среду инкубации отсеченных корней было слабее, чем ХП и Гр, а рН среды оставался на уровне контроля (рис.3, 4), что, по-видимому, свидетельствует о незначительном поступлении протонов внутрь клеток.

В проведенных нами опытах ДЦКД вызывал снижение МП клеток корней (рис.5), которое было менее выраженным, чем в случае ХП и Гр.

Содержание образуемого клетками корней в присутствии ДЦКД, было значительно снижено (рис.6). Известно, что ДЦКД может связываться с различными белками, образуя внутри- и межмолекулярные сшивки, что приводит к ингибированию функционирования белковых компонентов. Весьма вероятно, что ДЦКД ингибирует пероксидазу клеточной поверхности. Кроме того, в его присутствии в среде инкубации корней растворимые формы пероксидазы, по-видимому, не вымываются в апопластное пространство. Не исключено, что ДЦКД подавляет продукцию редокс-системой

плазмалеммы, где предполагается наличие хинонных компонентов, как антагонист хинонов, которые способны к обратимым одноэлектронным реакциям окисления-восстановления (Олескин, Самуилов, 1988; Дубинина, 1989). Редокс-система плазмалеммы вовлечена в продуцирование 0'\ клетками корней (Minibayeva et а1., 1998).

По некоторым данным (Ти й а!., 1985), в отличие от других ингибиторов Н^АТФ-азы плазматических мембран (диэтилстильбестрола, ванадата), ДЦКД имеет не одно, а несколько мест связывания с ферментом. Ингибирующий эффект ДЦКД на плазматических мембран в большей степени

относится к транспортной, чем гидролитической функции фермента (Ти et а1., 1992). В наших ультрацитохимических исследованиях АТФ-азная активность обнаруживалась на плазмалемме клеток корней, и интенсивность ее проявления на фоне ДЦКД была больше, чем в контроле. По-видимому, это связано с тем, что ДЦКД в концентрации 100 мкМ полностью угнетает активный транспорт Н+ и лишь частично - гидролиз АТФ при участии Н*-АТФ-азы плазматических мембран, и вызванное присоединением ДЦКД изменение конформации фермента сопряжено, в первую очередь, с ограничением его подвижности и сильнее сказывается на выбросе протонов

Таблица 1. Изменение дыхательного газообмена при действии мембраноактивных соединений на корни пшеницы.

Вариант Потреб. 02, мкл/г сыр. веса/ч Выдел. С02 мкл/г сыр. веса/ч ДК

1 ч 2ч 1ч 2ч 1ч 2ч

Контроль Н20 624 ±21 611 ±26 643 ±25 593 ±17 1,03 0,97

ХП 100 мкМ 522 + 18 423 ±23 647 ±19 406 ±22 1Д4 0,96

Контроль Н20 618 + 31 629 ± 12 630 ±22 610 ± 15 1,02 0,97

Гр20 мкМ 556 + 23 509 ±21 441 ±25 428 ±28 0,78 0,88

Контроль н2о 609 ±15 580 ±24 591 ±18 573 ±20 0,97 0,99

Вал 20мкМ 638 ±13 595 ± 17 625 ±21 589+ 14 0,98 1,00

(Конев и др., 1985; Опритов и др., 1997). Снижение потребления кислорода отсеченными корнями в присутствии ДЦКД было незначительным и было вызвано, вероятно, его действием на структурное состояние мембран и ингибированием Н^АТФ-азы плазмалеммы.

После 2-х часовой инкубации отсеченных корней с ДЦКД изменялась ультраструктура митохондрий: их размер увеличивался, матрикс просветлялся, кристы исчезали. Аналогичная картина наблюдалась на культуре клеток СПЭВ в присутствии ДЦКД (Полякова, 1991), а также при действии на отсеченные корни антимицина А - ингибитора митохондриальной дыхательной цепи (Алексеева и др., 1981). Подобные изменения ультраструктуры могут быть связаны с деэнергизацией митохондрий и аккумулированием ими ионов. Обращает на себя внимание изменение конфигурации митохондрий - они имеют неправильную форму. Это может быть связано с действием ДЦКД на цитоскелет клеток подобно действию колхицина и ротенона. В случае проникновения ДЦКД в клетки митохондрии становятся деэнергизованными и, вероятно, аккумулируют Са2+, избыток которого в клетках создается вследствие блокирования ДЦКД Са2+-АТФ-аз плазмалеммы и тонопласта. Подтверждением этого являются результаты электронной цитохимии - отсутствие АТФ-азной активности на тонопласте при инкубировании отсеченных корней с ДЦКД.

2.5. Изменения ионной проницаемости, МП, продукции О2 локализации АТФ-азной активности, дыхания и ультраструктуры клеток корней при действии валиномицина

Специфическим переносчиком калия является валиномицин (Вал) (Овчинников и др., 1974; Лев, 1976). Ранее (Алексеева и др., 1984; Николаев, 1988) были подобраны оптимальные концентрации Вал и было показано, что в целых растительных тканях (отсеченные корни) Вал работает как калиевый ионофор.

Увеличение содержания в среде инкубации происходит за счет его пассивного выхода из клеток, ускоренного ионофором (рис.3). Однако, усиление потери клетками было значительно меньше, чем в присутствии других мембраноактивных соединений. рН среды инкубации оставался на уровне контроля или незначительно увеличивался (рис.4).

Вал практически не оказывал влияния на функционирование систем, образующих 0**2 (рис.6), что, по-видимому, обуславливалось высокой специфичностью этого ионофора и отсутствием дезорганизующего действия на плазматическую мембрану.

В присутствии Вал наблюдалось снижение МП, коррелирующее с возрастанием потери К+ корнями (рис.5).

Диссипация градиента происходила за счет его пассивного выхода, ускоренного ионофором, что приводило либо к незначительному увеличению интенсивности дыхания, либо к сохранению его на уровне контроля; при этом ДК не изменялся (табл. 1).

В присутствии Вал АТФ-азная активность, так же как и в контроле, выявлялась на плазмалемме. Интенсивность ее проявления была несколько больше, чем в контроле (рис.2б). После 2 ч инкубации корней с Вал наблюдались незначительные изменения ультраструктуры митохондрий по сравнению с контролем. Матрикс слегка просветлялся, количество крист незначительно уменьшалось. Подобные изменения ультраструктуры митохондрий были отмечены ранее (Алексеева и др., 1984) и связаны, вероятно, с аккумулированием ионов для поддержания ионного гомеостаза клеток. В других структурах клетки изменений под влиянием Вал не обнаружено; в частности, отсутствовали изменения ЭР, характерные для ответной реакции клеток обнаружено не было на действие соединений, модифицирующих мембрану.

Таким образом, при 2-часовом воздействии на отсеченные корни каждого из использованных модуляторов ионной проницаемости плазмалеммы наблюдалось увеличение потери клетками К+, снижение биоэлектрических показателей и интенсивности дыхания, а также изменение образования локализации АТФ-азной активности и ультраструктуры клеток. Различия в изменении этих показателей, вероятно, обусловлены особенностями механизмов действия использованных мембраноактивных соединений.

2.6. Действие валииомицина на формирование адаптивных процессов отсеченных корней пшеницы

Исследования, проведенные в лаборатории Л.Х.Гордона (Алексеева и др., 1984; Николаев, 1988), показали, что при длительном инкубировании отсеченных корней с Вал (5-6 ч) наблюдалось значительное восстановление МП, поглощение ионов калия, вышедших из клеток в первые часы инкубации, коррелирующее с увеличением интенсивности дыхания, и эти изменения имеют приспособительный (адаптивный) характер. В наших опытах также происходили подобные изменения. В частности, наблюдалось усиление потребления сопровождающееся значительной компенсацией потери К+ корнями и восстановлением МП клеток почти до уровня контроля, а также снижением рН среды инкубации (табл. 2). По-видимому, наблюдаемые изменения дыхания, потери/поглощения ионов калия, рН среды инкубации отражают интенсивность работы АТФ-азных систем, а усиление валиномицином пассивной проницаемости плазмалеммы для К+ вызывает повышение нагрузки на митохондриальный аппарат. Если через 2 ч инкубации отсеченных корней с валиномицином матрикс митохондрий был слегка просветленный, количество крист немного уменьшено и они слегка набухшие, то через 5-6 ч митохондрии набухали (их объем увеличен), матрикс просветленный, число крист, четко очерченных и располагающихся по всему объему митохондриального матрикса, уменьшался. Появлялись липидные капли. Об использовании липидов в качестве субстратов окисления свидетельствует, по-видимому, снижение дыхательного коэффициента после 6 ч инкубации корней с Вал до 0.79 против 0.94 в контроле.

Таблица 2. Влияние валииомицина на интенсивность дыхания и МП клеток корней, на содержание К* в среде инкубации (СИ) и ее рН в зависимости от продолжительности воздействия

Вариант Время инкубации корней, ч Потребление 02, мкл/г сыр. веса/ч МП, - мв СИ

Содержание К+, мкэкв/г сыр. веса рн

н2о 2 621 ±23 82 ±2 1.85 ±0.50 5.95

6 576 ±25 98 ±3 0.58 ± 0.05 6.00

Вал 20 мкМ 2 609 ±41 74 ± 1 2.97 ±0.21 6.05

6 1096 ±19 90 ±2 1.43 ±0.12 5.85

Ультрацитохимическое выявление АТФ-азной активности показало, что после 5-7 ч инкубации отсеченных корней с Вал осадок неравномерный, представляет собой цепочку нанизанных гранул небольших размеров, однако более интенсивный, чем при 2 ч воздействии. К 7 ч осадок на плазмалемме также присутствует, хотя, как отмечалось ранее (п. 2.1), в контроле (7 ч) АТФ-азная активность в клетках корней пшеницы почти не выявлялась. Эти данные

согласуются с изменениями физиологических параметров, и подтверждают наше предположение об активации АТФ-азных систем при длительном действии Вал на отсеченные корни.

2.7.Действие валиномицинана МП,дыхание и К+- проницаемость клеток преннкубнрованных корней

Как уже отмечалось, в ходе многочасовой инкубации корней в дистиллированной воде физиологическое состояние клеток корней меняется. Разница в ответной реакции свежеотсеченных и преинкубированных корней может быть обусловлена использованием восстановительных эквивалентов, накопленных в ходе инкубирования, редокс-системой плазмалеммы, наличие компонентов которой в растительных клетках показано в ряде работ (Lin, 1984; Куркова и др., 1984). Возможность перераспределения восстановителя в чрезвычайных ситуациях, в том числе при резком увеличении восстановленности пиридиннуклеотидов (при достижении порогового уровня восстановителя), через альтернативные пути окисления, шунтирующие дыхательную цепь и обеспечивающие сброс этих избыточных восстановительных эквивалентов, была отмечена в работах (Гордон и др., 1975; Лукьянова и др., 1982).

Таблица 3. Влияние валиномицина на МП, интенсивность дыхания, содержание К+ и рН среды инкубации преинкубированных корней

Вариант МП, -мв Дыхание СИ

Потреб. 02, мкп/г сыр. веса/ч Выдел. С02, мкл/г сыр. веса/ч дк к\ мкэкв/г сыр. веса рн

Н20 95+2 665+31 572+ 19 0.86 0 6.0

Вал 20 мкМ 99 ±3 820 ±22 541 ±23 0.66 0 5.5

Регуляция процессов активного транспорта при различных функциональных состояниях клетки может осуществляться через изменение проницаемости мембран, контролируемой редокс-состоянием пиридиннуклеотидов (Замараева и др., 1982). Кроме АТФ-аз, транспортные функции выполняет редокс-система плазмалеммы, использующая в качестве источника энергии НАД(Ф)Н. Этой редокс-системой поддерживается отток Н+ из клеток, создающий градиент протонов, который может использоваться для транспорта других ионов. Предполагается, что АТФ-азный механизм и НАД(Ф)Н-оксидаза в мембране включены в общий комплекс, содержащий элементы, общие по отношению к транспорту К+ и Н+ (Lin, 1984). Путем изменения редокс-активности плазмалеммы, зависящей от клеточного метаболизма, можно регулировать транспорт за счет тиолового редокс-

контроля активности транспортных белков - ионных каналов,

переносчиков ионов (Миклашевич и др., 1993; Рудашевская 2003).

Внесение в среду валиномицина после 5 ч инкубации отсеченных корней практически не повлияло на величину МП клеток, интенсивность дыхания увеличилась, не наблюдалось потери клетками среда инкубации

подкислялась (табл. 3). В данном случае клетки преинкубированных корней, находящиеся в энергизованном состоянии, способны противостоять усилению Вал пассивной проницаемости плазмалеммы форсированием активных транспортных механизмов, сопряженных с поглощением калия. Стимуляция дыхания и активация Н+-АТФ-азы сопровождаются, в такой ситуации, выбросом протонов и усилением что способствует поддержанию

МП на определенном уровне. Об активировании АТФ-аз плазмалеммы в данном случае свидетельствуют результаты электронной цитохимии. Однако, усиление дыхания и активация транспортных АТФ-аз, по результатам наших исследований, не сопровождались изменениями ультраструктуры митохондрий, типичными для активного протекания процессов окислительного фосфорилирования (уплотнение матрикса, расширение крист). Наблюдались следующие структурные перестройки митохондриального аппарата: объем митохондрий увеличивался, сильно просветлялся матрикс, число крист, четко очерченных и располагающихся по всему объему митохондриального матрикса, уменьшалось. По-видимому, в данном случае, митохондрии «работают» на ионный транспорт, что и находит отражение в изменении ультраструктуры -аккумуляции ионов митохондриями и их набухание.

Выявленная картина структурно-функциональных изменений при индуцировании пассивной проницаемости клеток отсеченных корней пшеницы Вал свидетельствует о функциональной активности клеток, включении компенсаторных реакций для поддержания нарушенного ионного гомеостаза (Веренинов, 2000). Проявление ответной реакции клеток зависит от степени их энергизованности и физиологического состояния. В низкоэнергизованном состоянии индуцирование пассивной проницаемости вызывает выход калия из клеток, не сопровождающийся изменениями активности дыхания. В энергизованном состоянии клетки отсеченных преинкубированных корней на присутствие Вал в среде отвечают усилением дыхания, активацией транспортных АТФ-аз, поглощения К* и К^-обмена и, вероятно, переключением работы митохондрий на ионный транспорт.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Биологические мембраны занимают особое положение в иерархии клеточных структур, сочетая в себе как элементы управления, так и рабочего аппарата. В механизме гомеостатирования ионного состава цитоплазмы большая роль принадлежит активному транспорту ионов через плазмалемму, который происходит с помощью различных АТФ-азных систем, функционирующих с затратой энергетических ресурсов. Проницаемость плазмалеммы для ионов может служить одним из регуляторных механизмов энергетического обмена клетки.

Для выявления вклада ионной проницаемости плазмалеммы в изменение энергетического обмена клеток и были проведены наши исследования. Была также сделана попытка выяснить, какие ультраструктурные перестройки происходят в клетках в условиях искусственной модификации ионной проницаемости плазмалеммы. Мы полагали, что модификация плазмалеммы даст информацию о локализации АТФ-азной активности в клетках, поскольку будут происходить изменения этой активности. Для этой цели были использованы модификаторы ионной проницаемости плазмалеммы с различным механизмом действия.

Модификация плазмалеммы мембранотропным соединением ХП через 2 часа воздействия приводила к ингибированию АТФ-азных систем плазмалеммы, что усугубляло его действие (имело место преобладание пассивной ионной проницаемости плазмалеммы без компенсации за счет активного транспорта) к значительным изменениям морфофункциональных характеристик клеток корней пшеницы и усилению АТФ-азной активности на тонопласте, выявленной ультрацитохимическим методом, что может быть связано с аккумуляцией ионов в вакуоли.

Для индукции неспецифической проницаемости плазмалеммы был также использован каналоген Гр. Есть определенное сходство в действии на клетки корней ХП и Гр. Все изменения, вызванные Гр, обусловлены, вероятно, теми же причинами, что и ХП. Однако, при действии Гр не выявлена четкая локализация АТФ-азной активности в клетках. Гр вызывал ингибирование дыхания корней с одновременным снижением дыхательного коэффициента. Возможно, что в данном случае происходили изменения в соотношении различных путей дыхания, в частности торможение гликолиза. Не происходило существенных изменений в ультраструктуре митохондрий, но происходила пролиферация мембран ЭР.

При блокаде АТФ-азной активности считающимся' специфическим ингибитором протонной АТФ-азы ДЦКД были получены результаты, которые не поддаются однозначной интерпретации. Вероятно, действие ДЦКД на клетки корней обусловлено не столько блокированием сколько

другими эффектами. По-видимому, использование ДЦКД как специфического ингибитора протонной АТФ-азы не совсем корректно, поскольку это соединение обладает широким спектром действия на клетки in vivo.

Наши исследования ответных реакций клеток корней пшеницы на действие специфического калиевого ионофора Вал позволяют говорить об отсутствии мембранотропного влияния Вал на плазмалемму. Действие Вал на плазмалемму не сопровождалось изменениями в дыхательном газообмене, по крайней мере за 2 часа инкубации корней. Интересно, что небольшие изменения в функциональной активности клеток корней в присутствии Вал коррелировали с неизменностью ультраструктуры. Увеличение длительности действия Вал (до 6 часов) на клетки корней приводило к усилению энергетических затрат, изменению ультраструктуры, которое выражалось в набухании митохондрий и появлении липидных капель. Набухание митохондрий было связано, вероятно, с аккумуляцией ими ионов, в том числе ионов калия.

При многочасовой инкубации отсеченных корней в дистиллированной воде физиологическое состояние клеток изменяется, корни переходят в «подготовленное состояние» или состояние «относительного покоя». В данном случае можно ожидать и другую ответную реакцию клеток на воздействие. Действительно, оказалось, что в такой ситуации действие Вал на функциональную активность клеток корней отличается от действия на свежеотсеченные корни включением компенсаторных процессов в ответ на увеличение калиевой проницаемости плазмалеммы.

Ответные реакции клеток на нарушение ионного гомеостаза зависят от состояния энергизованности клетки. В низкоэнергизованном состоянии индуцирование пассивной ионной проницаемости плазмалеммы не вызывает всплеска дыхания. В энергизованном состоянии клетки отвечают на действие, например валиномицина, активацией транспортных АТФ-аз, усилением дыхания, поглощением ионов калия и выбросом протонов. Митохондриальный аппарат, в данном случае, принимает участие в аккумуляции ионов.

Полученные результаты показали, что индукция ионной проницаемости плазмалеммы различными мембранотропными соединениями сопровождается изменениями в энергетическом обмене и ультраструктурными перестройками клеток. При этом изменяется локализация АТФ-азной активности. Проявление ответных реакций клетки на модификацию ионной проницаемости плазмалеммы определяется степенью мембранотропности индукторов проницаемости. В ряде случаев, в частности с Вал, происходит адаптация, так как имеет место компенсация ионных «потерь». На фоне же сильных мембранотропов, например XII, адаптация может не происходить, и наступает ее срыв.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены изменения локализации АТФ-азной активности в клетках корней при механическом повреждении (отсечение корня от проростка); увеличение АТФ-азной активности по сравнению с клетками исходных корней наблюдали в области плазмалеммы через 2 часа после отсечения корней, а через 7 часов она почти не выявлялась после восстановления калиевого гомеостаза.

2. Впервые показано, что индукция валиномицином калиевой проницаемости плазмалеммы клеток корней сопровождается усилением АТФ-азной активности в области этой мембраны, выявляемой ультрацитохимическим методом. Это сопряжено с увеличением энергетических затрат (потребление кислорода) для поддержания ионного гомеостаза.

3. Неспецифический каналоген грамицидин 8 способствует диффузному распределению АТФ-азной активности. Потребление кислорода несколько снижается, ультраструктура клеток не изменяется.

4. Впервые показано, что нарушение ионной проницаемости плазмалеммы мембранотропным соединением хлорпромазином приводит к локализации АТФ-азной активности на тонопласте. Хлорпромазин резко изменяет ультраструктуру клеток: разрастаются цистерны эндоплазматического ретикулума, митохондрии конденсируются.

5. Показано, что при длительном действии валиномицина АТФ-азная активность оставалась высокой, калиевый гомеостаз восстанавливался, что сопряжено с увеличением энергетических затрат (повышение интенсивности дыхания). Происходили ультраструктурные изменения в клетках корней, в частности набухание митохондрий, которое может быть связано с аккумуляцией в них ионов. Набухание митохондрий сопряжено с усилением потребления кислорода.

6. Модификация ионной проницаемости плазмалеммы является одним из механизмов, регулирующих функционирование АТФ-азных систем и энергетического аппарата клетки. В зависимости от степени модификации ионной проницаемости плазмалеммы может происходить либо формирование адаптации, либо ее срыв.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дыхание и локализация АТФ-аз в корневых клетках при ингибировании энергетического обмена и модификации ионной проницаемости плазмалеммы /Чернышева ФА, Николаев Б.А., Алексеева В.Я. и др. //Вестник Тат.отд. Росэкол.акад.- 2000. - №4 (6). - С.42-45.

2. Структурно-функциональные изменения клеток корней пшеницы при действии мембранотропных соединений /Чернышева Ф.А., Николаев Б.А., Алексеева В.Я. и др. //Цитология. - 2001. - Т.43, № 4.- С.411.

3. Дыхание, локализация АТФ-азной активности и ультраструктура клеток корней пшеницы при стимулировании валиномицином К+-проводимости плазмалеммы /Чернышева ФА, Алексеева ВЛ., Николаев Б.А. и др. //Актуальные вопросы экологической физиологии растений в 21 веке: Сб.тез. /Сыкт.гос.ун-т. - Сыктывкар, 2001. - С.365-366.

4. Influence of modification of plasmamembrane ion conductivity on superoxide formation and electrogenesis of wheat root cells /Chernysheva FA, Alekseeva V.Y., Gordon L.K.. et al. //Oxygen free radicals and oxidative stress in plants: Mat. 5th Conf. - Nice, 2001. - P.80.

5. Генерация супероксида и биоэлектрогенез клеток корней пшеницы при модификации ионной проводимости плазмалеммы /Чернышева Ф.А., Алексеева В.Я., Гордон Л.Х. и др. //Докл. АН. - 2002.- Т.385, №1.- С. 120122.

6. Структурно-функциональные изменения в клетках корней пшеницы при модуляции проводимости и блокировании Н+-АТФ-азы плазмалеммы /Чернышева Ф.А., Алексеева ВЛ, Гордон Л.Х. и др. //Физиология растений - основа фитобиотехнологии: Тез.докл. /Пенз.гос.пед.ун-т. - Пенза, 2003 -С.114-115.

7. Heat production and respiration of wheat roots under the modulation of plasma membrane ion conductivity /Alekseeva V.Y., Gordon L.K., Tsentsevitsky A.N. et al. //From molecular mechanisms to clinical practice XIII th ISBC Conf.: Mat. XIIIth Conf. /WUrzburg, VeitshOchheim. - WUrzburg, 2003. - P. 55.

8. Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модуляции уровня ионной проводимости плазмалеммы /Чернышева ФА, Алексеева В.Я., Полыгалова О.О., Гордон Л.Х. //Цитология. - 2004. - Т.46, № 3. - С.221-228.

**0 í 8/

Технический редактор Попаденко A.A.

ИИД № 01231 от 17.03.2000 г. Формат А5. Бумага "SvetoCopy" 80 гр. Печать ризографическая. Гарнитура Times New Roman. Уч.-изд. л. 1,0 Усл.-печ. л. 1,44 . Тираж 100 экз.

Отпечатано с готового оригинал макета в редакционно-издательском отделе

Камского государственного института физической культуры. 423807, Республика Татарстан, г. Набережные Челны, ул. Студенческая, 21.

Тел. (8552) 42-07-55

©КамГИФК

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чернышева, Фанзиля Абузаровна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Проницаемость плазмалеммы клеток для ионов и потребление кислорода.

1.1.1. Вклад пассивной ионной проницаемости плазматической мембраны в регуляцию энергетических затрат клетки.

1.1.2. Роль АТФ-азных систем плазматических мембран в регуляции энергетического обмена клеток.

1.2. Локализация АТФ-азных систем и ультраструктурные изменения в клетках при различных воздействиях.

Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение интенсивности дыхания.

2.2.2. Определение рН и содержания ионов калия в растворе инкубации.

2.2.3. Методика электрофизиологических исследований.

2.2.4. Определение образования супероксидного анион-радикала.

2.2.5. Метод электронной микроскопии.

2.2.6. Методика ультрацитохимического выявления локализации

АТФ-азной активности.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Структурно-функциональная характеристика клеток отсеченных корней пшеницы при многочасовой инкубации.

3.2. Изменение ионной проницаемости, биоэлектрических характеристик плазмалеммы, локализации АТФ-азной активности, продукции супероксида, ультраструктуры и дыхания клеток корней пшеницы при действии хлорпромазина.

3.3. Влияние грамицидина S на проницаемость плазмалеммы для ионов, мембранный потенциал, мембранное сопротивление, локализацию АТФ-азной активности, продукцию супероксида, дыхание и ультраструктуру клеток корней пшеницы.

3.4. Влияние ДЦКД на проницаемость плазмалеммы, мембранный потенциал, мембранное сопротивление, продукцию супероксида, локализацию АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктуру клеток корней пшеницы.

3.5. Изменение ионной проницаемости, биоэлектрических характеристик, продукции супероксида, локализации АТФ-азной активности, дыхания и ультраструтуры клеток корней при действии валиномицина.

3.6. Действие валиномицина на формирование адаптивных процессов отсеченных корней пшеницы.

3.7. Действие валиномицина на мембранный потенциал, дыхание и К+-проницаемость клеток преинкубированных корней.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы"

Среди множества клеточных мембран имеется одна, роль которой особенно важна, - это плазматическая мембрана, образующая поверхность клетки.

Цитомембрана представляет собой настоящий орган клетки, способный служить материальной основой и в то же время осуществлять важные метаболические процессы [163; 164]. Биологические мембраны занимают особое положение, сочетая в себе элементы как управления, так и рабочего аппарата. Вся внешняя регуляция жизни клетки происходит через воздействие регуляторных сигналов на наружную плазматическую мембрану, занимающую тем самым ключевое положение в иерархии систем управления [89. С.4]. Первичное участие мембран в формировании ответных реакций клеток показано для широкого спектра воздействий различной природы (изменение тоничности среды, температуры, рН и др.) [39]. При этом значительная часть клеточного ответа непосредственно связана со структурно-функциональным состоянием мембраны и им же определяется [18]. Важно, что в ответную реакцию клеток вовлекается большое число функциональных блоков мембраны, и в таком случае физиологическая регуляция приобретает особое значение в критические моменты жизни клетки, например, при стрессовых воздействиях, или при переключении от состояния покоя к активности. В связи с этим, особый интерес представляет работа И.А.Тарчевского [203. С.153-169], где рассматриваются конкретные механизмы функционирования сигнальных систем у растительных клеток и их взаимодействие.

Плазматическая мембрана клеток с встроенными в нее функциональными элементами играет ведущую роль в поддержании клеточного гомеостаза, без которого невозможна жизнь. Одной из составляющих частей клеточного гомеостаза является ионный (функциональный), который тесно связан с энергетическим и пластическим [144]. Именно сдвигам ионного гомеостаза придается основное значение в запуске ответных реакций клетки на различные воздействия. Плазматическая мембрана не только регулирует вход и выход веществ через клеточную мембрану, но и осуществляет обмен информацией и энергией между внешней средой и клеткой [79]. Ответ клеток на внешнее воздействие, включение и развитие репаративных и адаптивных процессов тесно сопряжены с их энергетическим состоянием. Можно отметить, что гомеостатическая система клетки рассматривается как система, состоящая из двух взаимодействующих подсистем. Первая представлена совокупностью биологических макромолекул, информация о структуре которых записана в генетическом коде. Во второй подсистеме информация задается в виде концентраций малых молекул - метаболитов и ионов [84; 281]. В настоящее время к «сигнальным» ионам относят ионы кальция, калия, протоны [203, С.72-83; 120]. Клеточная поверхность, взаимодействуя с внешними (по их отношению к клеткам) системами, контролирует состояние клетки и характер синтетических процессов в ней. В механизме этого контроля первостепенное значение имеют изменения проницаемости и активного транспорта, приводящие к сдвигам во внутриклеточных концентрациях ионов и вызывающие репаративные реакции клетки. На базе этой основной формы ответа построены разноликие, но единые по своей сущности реакции клеток на внешнее воздействие [29; 95].

Постановка проблемы и ее актуальность.

В последние годы вопрос о роли плазматической мембраны в восприятии действующих на растение стимулов экзогенной и эндогенной природы поднимается вновь на молекулярном уровне.

Самые разные изменения в окружающей среде приводят к изменениям в структуре и свойствах мембран, которые, в свою очередь, влекут за собой изменения активности мембраносвязанных белков, воспринимающих и передающих внешние сигналы. К числу таких молекул относятся рецепторные проте-инкиназы и другие сенсоры, ионные каналы, белки-переносчики разных молекул. Информация от сенсорных систем плазмалеммы передается на генетический аппарат с участием сложных каскадов трансдукции сигналов [203. С. 153

169]. Важная роль в запуске сенсорных систем и обеспечении условий их функционирования принадлежит таким параметрам ионного гомеостаза цито-золя, как значение рН и концентрация свободных ионов кальция [206; 262]. Показано, в частности, что физические свойства мембран определяют регуляцию входа и мобилизацию в клетках ионов кальция, которые играют особую роль в клеточной интеграции, а также концентрацию цАМФ, являющейся одной из ре-гуляторных молекул в разных типах клеток [109]. Изменения концентрации кальция в цитоплазме контролируют транспортную активность Н+-АТФ-азы, играющей важную роль в поддержании гомеостаза и устойчивости растительных клеток. Н^-АТФ-аза плазмалеммы является активной компонентой создания электрохимического потенциала и его регуляции в условиях стресса, а также контролирует внутриклеточный и внеклеточный рН [89, 162, С.28-46; 155; 208; 288].

В качестве электрического шунта Н+-АТФ-азы служат пассивные К+-каналы, по которым К+ транспортируется внутрь клеток электрофоретически в обмен на электрогенно секретируемые из клеток протоны [40].

В основе формирования функционального ответа клеток на внешние воздействия лежит взаимосвязь энергетического обмена с ионным транспортом. Можно полагать, что одним из звеньев в регуляции внутриклеточного обмена и соответствующих энергетических затрат является смещение ионного гомеостаза клеток через изменения структурно-функциональных свойств плазмалеммы. Степень возмущения ионного гомеостаза клеток определяется изменениями соотношения пассивных и активных транспортных процессов [103. С.4]. В связи с этим, особый интерес представляют исследования структурно- функциональных изменений, происходящих в интактных клетках при модификации проницаемости плазмалеммы. Исследования, проводимые на интактных растительных тканях, позволяют выявить функционирование регуляторных механизмов поддержания ионного гомеостаза и энергетические возможности клеток при направленном изменении структурно-функциональных свойств плазмалеммы.

Цель и задачи исследования.

Основной целью исследования являлось выявление сопряженности изменений энергетического обмена, локализации АТФ-азной активности и ультраструктурной организации клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы и блокировании активного ионного транспорта.

Исходя из указанной цели, были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать изменения локализации АТФ-азной активности и дыхательного газообмена при многочасовой инкубации отсеченных корней в воде;

2. Исследовать изменения проницаемости плазмалеммы для ионов калия, биоэлектрических характеристик плазмалеммы, локализации АТФ-азной активности, а также ультраструктурные перестройки и дыхание клеток корней пшеницы на ранних этапах ответных реакций (2 часа) при действии: а) мембранотропного соединения широкого спектра действия -хлорпромазина (ХП); б) неспецифического каналогена - грамицидина S (Гр); в) ингибитора Н^-АТФ-азы -дициклогексилкарбодиимида (ДЦКД); г) специфического К+-ионофора - валиномицина (Вал);

3. Выявить особенности действия Вал на проницаемость плазмалеммы для ионов калия, локализацию АТФ-азной активности, ультраструктуру и дыхательный газообмен клеток при многочасовой инкубации отсеченных корней, оценить компенсаторные возможности клеток при специфическом увеличении калиевой проницаемости.

Научная новизна работы.

Впервые сочетание физиолого-биохимических методов, электронной микроскопии и ультрацитохимии позволило выявить взаимосвязи изменений локализации АТФ-азной активности, дыхания, ультраструктуры, МП клеток, содержания К+ и рН среды инкубации корней. Это дало возможность оценить участие отдельных клеточных структур в поддержании ионного гомеостаза клеток при направленном изменении ионной проницаемости плазмалеммы.

Впервые показано, что локализация АТФ-азной активности зависит от степени изменения ионной проницаемости плазмалеммы. Получены данные о действии модификаторов ионной проницаемости плазмалеммы на локализацию АТФ-азной активности в клетках корней пшеницы. При действии специфического К+-ионофора - валиномицина - локализованная на плазмалемме АТФ-азная активность увеличивается, что обеспечивает восстановление нарушенного ионного гомеостаза. Это компенсаторное регулируемое активирование Н+-АТФ-азы плазмалеммы сопровождается усилением энергетических затрат (увеличение потребления кислорода). Ультраструктурные перестройки митохонд-риального аппарата свидетельствуют о непосредственном участии митохондрий в аккумуляции ионов.

Впервые показано, что при увеличении ионной проницаемости плазмалеммы под действием неспецифического мембраноактивного соединения ХП АТФ-азная активность на плазмалемме отсутствует и выявляется на тонопла-сте. Ультраструктурные перестройки митохондриального аппарата не наблюдаются, и происходит снижение потребления кислорода.

Практическая значимость работы.

В связи с использованием соединений, обладающих мембранотропным действием, в различных областях жизнедеятельности человека представляется актуальным исследование ранних реакций в ходе формирования ответов клеток на их воздействие. Полученный экспериментальный материал свидетельствует о целесообразности комплексного исследования ответных реакций растительных клеток на воздействие мембраноактивных соединений.

Апробация работы.

Основные результаты диссертации были доложены на: конференции молодых ученых «Механизмы регуляции функционирования биологических систем и методы их изучения» (Казань, 1985); итоговых научных конференциях КИББ КНЦ РАН (Казань, 2000,2001); Всероссийском симпозиуме «Клеточная биология на пороге XXI века» (С-Петербург, 2000); Международной конференции «Актуальные вопросы экологической физиологии в XXI веке» (Сыктывкар, 2001); 5th Conference on Oxygen free radicals and oxidative stress in plants (Nice, 2001); V съезде общества физиологов растений России и Международной конференции «Физиология растений - основа фитобиотехнологии» (Пенза, 2003); XIII th Conference ISBC «Energetics of adaptation and development. From molecular mechanisms to clinical practice» (Wurzburg / Veitshochheim, 2003).

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Чернышева, Фанзиля Абузаровна

ВЫВОДЫ

3. Неспецифический каналоген грамицидин S способствует диффузному распределению АТФ-азной активности. Потребление кислорода несколько снижается, ультраструктура клеток не изменяется.

127

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы уже отмечали, что биологические мембраны занимают особое положение в иерархии клеточных структур, сочетая в себе как элементы управления, так и элементы рабочего аппарата. Внешняя же регуляция жизни клетки происходит через воздействие регуляторных сигналов на наружную плазматическую мембрану. Плазмалемма играет ведущую роль в поддержании клеточного гомеостаза, одной из составляющих которого является ионный гомеостаз, тесно связанный с энергетическим обменом. В механизме гомеостатирования ионного состава цитоплазмы большая роль принадлежит активному транспорту ионов через плазмалемму с участием различных АТФ-азных систем, функционирующих с затратой энергетических ресурсов. При гомеостатировании ионного состава цитоплазмы процессы активного транспорта в стационарных условиях лишь покрывают расходы, связанные с «утечкой», т.е. с процессами пассивного транспорта ионов через мембрану. Таким образом, проницаемость плазмалеммы для ионов может служить одним из регуляторных механизмов функционирования энергетического обмена клет$ртя выявления вклада ионной проницаемости плазмалеммы в изменение энергетического обмена клеток и были проведены наши исследования. Наше внимание было обращено на выявление взаимосвязи изменений дыхательного газообмена (энергообеспечения), локализации АТФазной активности и ультраструктурной организации клеток корней пшеницы при искусственной модификации ионной проницаемости плазмалеммы мембрано-активными, соединениями с различным механизмом действия.

Двухчасовое воздействие на отсеченные корни хлорпромазина - мембрано-активного соединения широкого спектра действия, вызвало резкое возрастание ионной проницаемости плазмалеммы, о чем свидетельствует значительная потеря ими ионов калия и увеличение рН среды инкубации. Последнее является одним из показателей усиления поступления в клетки протонов. С диссипацией протонного градиента на плазмалемме связано снижение МП на 30 mv) Деполяризация плазмалеммы явилась одной из причин увеличения потери калия клетками корней. Учитывая, что ХП является антагонистом Са2+ и вытесняет его из мембраны, а также значительное возрастание выхода К+ из клеток и увеличение рН среды инкубации, свидетельствующие о неконтролируемом движении ионов, можно полагать, что в присутствии ХП происходит существенное нарушение ионного гомеостаза (в том числе кальциевого). Поддержание Са2+-гомеостаза имеет важное значение в связи с полифункциональностью ионов кальция, которые играют особую роль в клеточной интеграции (являются вторичными посредниками, участвуют в регуляции проницаемости, структурной организации мембран, цитоскелета и клеточной стенки). Значительное усиление пассивного транспорта ионов не компенсируется включением механизмов поддержания ионного гомеостаза, локализованных на плазмалемме (в ча-1 2+ стности li-АТФ-азы и Са -АТФазы), так как ХП ингибируех мембранные АТФ-азы. То есть, в этих условиях плазмалемма не участвует в регулировании систем ионного гомеостатирования. Об этом свидетельствует отсутствие АТФ-азной активности на плазмалемме клеток корней. Однако ХП вызвал усиление АТФ-азной активности на тонопласте, что связано, вероятно, с активированием I-Г-АТФ-азы, пирофосфатазы, а также вакуолярной Са2+-АТФ -азы (стимулируемой Са ). Кроме того, АТФ-азная активность обнаружена на мембранах ЭПР. По-видимому, функции регулятора поддержания уровня свободного кальция, а также содержания других неорганических ионов (1-Г и К+) в цитозоле переходят от плазмалеммы к этим структурам.

С нарушением ионного гомеостаза клеток (закисление цитоплазмы и потеря ионов калия) и ионной регуляции оксидоредуктазных реакций митохондрий связаны в значительной степени изменения дыхательного газообмена, в частности, снижение интенсивности дыхания отсеченных корней под влиянием ХП. Кроме того, не исключено ингибирование первого сегмента электронтранс-портной цепи в случае проникновения ХП в клетки.

Непосредственно с плазмалеммой связано возрастание продукции активных форм кислорода. Нарушение структурной организации плазмалеммы в присутствии ХП способствует, по-видимому, выходу в апопласт (и в среду инкубации) пероксидазы, а усиление образования супероксида обусловлено активацией оксидазной функции пероксидазы при повышении рН внеклеточною раствора, а также снижением активности антипероксидных систем и увеличением уровня окисления SH-групп мембранных белков, способных обезвреживать радикальные формы кислорода и другие окисленные соединения.

Под влиянием ХП обнаружены и ультраструктурные перестройки в клетках. Происходит разрастание, разветвление и расширение мембран ЭПР с образованием вакуолей и полостей, митохондрии имеют электронноплотную структуру (интенсивно работающие), наблюдаются контакты митохондрий с ЭПР. Вполне возможно, что эти контакты обеспечивают функционирование механизма передачи энергии на определенное расстояние в пределах клетки - век-торность транспорта энергии. Существование подобного механизма предполагается при формировании объединенной системы митохондриальных мембран - митохондриального ретикулума. Вероятно, в данном случае восстановительные эквиваленты митохондрий могут быть использованы для детоксикации ХП ферментными системами ЭПР. Поставка восстановителя из митохондрий в ЭПР может быть усилена в случае проникновения ХП в клетки и ингибирова-ния первого сегмента электронтранспортной цепи.

Эффекты неспецифического индуктора ионной проницаемости каналогена грамицидина S на проницаемость плазмалеммы для ионов, биоэлектрические характеристики клеток и продукцию супероксида отсеченными корнями во многом сходны с действием ХП, но были несколько слабее. Сходство в характере действия этих мембрано-активных соединений обусловлено, вероятно, их влиянием на липидные компоненты мембраны. В присутствии Гр происходила значительная потеря клетками ионов калия, деполяризация плазмалеммы и подщелачивание среды инкубации, а также возрастание продукции супероксида. Эти изменения вызваны теми же причинами, что и в случае ХП. Вместе с тем обнаружены и некоторые особенности (отличия от ХП) действия Гр, проявившиеся в изменении локализации АТФ-азной активности, ультраструктуры и дыхательного газообмена клеток. АТФ-азная активность выявлялась в цитоплазме, а на плазмалемме и тонопласте отсутствовала. Существенных изменений ультраструктуры митохондрий не происходило, но наблюдалась пролиферация мембран ЭПР. Вероятно, в присутствии Гр не происходило столь суще/-1 2+ ственных нарушении Са -гомеостаза и систем регулирования ионного гомео-статирования клеток корней, как под влиянием ХП. В пользу этого свидетельствует отсутствие ультраструктурных признаков апоптоза. Гр вызывал ингибирование дыхания корней с одновременным снижением дыхательного коэффициента. Возможно, что в данном случае происходили изменения в соотношении различных путей дыхания, в частности - торможение гликолиза.

Поскольку ХП и Гр, наряду с увеличением ионной проницаемости клеток корней, вызывали ингибирование АТФ-азных систем плазмалеммы, нами была предпринята попытка разделить эти эффекты и выявить ответную реакцию, обусловленную только ингибированием АТФ-азной активности или увеличением ионной проницаемости плазмалеммы.

Для ингибирования АТФ-азной активности нами был использован считающийся специфическим ингибитором АТФ-азы плазмалеммы - ДЦКД. Были получены результаты, которые не поддаются однозначной интерпретации. Оказалось, что ДЦКД вызывает увеличение выхода из клеток ионов калия, но, вероятно, не влияет на вход в клетки протонов (рН среды инкубации на фоне ДЦКД не отличался от контроля). Мембранный потенциал в присутствии ДЦКД снижался но в меньшей степени, чем при обработке корней ХП и Гр. ДЦКД приводил к снижению генерации супероксида, в отличие от ХП и Гр, которые эту генерацию повышали. Последнее, вероятно, связано с тем, что ДЦКД выступает в качестве антагониста хинонов, которые принимают участие в образовании активных форм кислорода. Некоторое удивление вызвали результаты опытов, в которых ДЦКД (ингибитор Н^-АТФ-азы!) способствовал усилению

АТФ-азной активности плазмалеммы, выявляемой ультрацитохимическим методом. Этот факт не находит пока рационального объяснения. Под влиянием ДЦКД наблюдалось незначительное ингибирование потребления кислорода корнями. Несмотря на это, ультраструктура клеток изменилась. Происходило набухание митохондрий, матрикс просветлялся. При этом изменилась конфигурация митохондрий - они имеют неправильную форму. Данный факт находит объяснение, так как известно, что ДЦКД оказывает на клетки колхицинподоб-ное влияние, изменяя цитоскелет. Таким образом, оказалось, что действие ДЦКД на клетки корней обусловлено не столько блокированием ТГ-АТФ-азы, сколько другими эффектами. По-видимому использование ДЦКД как специфического ингибитора протонной АТФ-азы не совсем корректно, поскольку это соединение обладает широким спектром действия на клетки in vivo.

В качестве индуктора ионной проницаемости плазмалеммы нами был использован специфический К+-ионофор валиномицин. Действие Вал на проницаемость плазмалеммы для К+ и биоэлектрические характеристики клеток при 2-х часовой инкубации корней было значительно слабее, чем других мембрано-активных соединений. Кроме того, в присутствии Вал практически не происходило изменений рН среды инкубации и продукции супероксида клетками. Это позволяет говорить об отсутствии мембранотропного влияния Вал на плазма-лемму. «Мягкое» действие Вал на плазмалемму не сопровождалось изменениями дыхательного газообмена отсеченных корней. Дыхательный коэффициент был близок к единице. Ультраструктура клеток изменялась незначительно. Однако наблюдалось небольшое усиление АТФ-азной активности на плазмалемме. То есть, специфическое действие Вал на К+- проницаемость плазмалеммы (2 ч) вызывает незначительные изменения мембранных характеристик и активирование АТФ-азных систем плазмалеммы, вероятнее всего Н*-АТФ-азы. Именно Н^АТФ-аза плазмалеммы рассматривается как одно из звеньев, контролирующих клеточный метаболизм (в частности поддержание ионного гомеостаза) при различных воздействиях на клетки.

Принимая во внимание, что одним из механизмов регуляции Н+-АТФ-азы является модуляция ее активности ионами калия, нами были исследованы ответные реакции клеток корней на более длительное действие Вал (6 ч). Результаты экспериментов показали, что 6 ч инкубация отсеченных корней с Вал вызывает ряд взаимосвязанных изменений исследованных параметров, свидетельствующих об их адаптивном характере. Наблюдалось активирование АТФ-азы на плазмалемме, значительное восстановление МП клеток (почти до уровня контроля), поглощение ионов К+, вышедших из клеток в первые часы инкубации корней, коррелирующее со снижением рН среды и увеличением интенсивности дыхания. Регулируемое компенсаторное активирование ИГ-АТФ-азы сопровождалось изменениями ультраструктуры митохондрий (набухание), связанными, по-видимому, аккумулированием ионов для поддержания ионного гомеостаза клеток. Регулятором включения механизмов поглощения К+ в данной ситуации является, вероятно, его уровень в клетках.

Регуляция процессов активного транспорта (режим работы Н^-АТФазы) зависит от физиологического состояния клеток и может осуществляться через изменение проницаемости мембран. Известно, что при многочасовой инкубации отсеченных корней (в НгО) физиологическое состояние клеток изменяется и характеризуется более высоким уровнем восстановленности пиридиннуклео-тидов и снижением ионной проницаемости, что в значительной мере определяет ответную реакцию корней на воздействия. Действительно, оказалось, что действие Вал на функциональную активность и ультраструктуру клеток преин-кубированных корней отличается от его действия на свежеотсеченные корни. В данной ситуации Вал не оказывал влияния на выход ионов калия из корней, наблюдалось подкисление среды инкубации, МП клеток - немного выше, чем в контроле, интенсивность дыхания возрастала и на плазмалемме выявлялась значительная АТФ-азная активность. Изменения ультраструктуры митохондрий (увеличение объема, просветление матрикса и др.) связаны, вероятно, с аккумуляцией ионов.

То есть, при специфическом увеличении К+-проницаемости плазмалеммы Вал ответные реакции отсеченных корней на нарушение ионного гомеостаза зависят от энергетического состояния клеток. В низкоэнергизованном состоянии повышение пассивной ионной проницаемости плазмалеммы не вызывает всплеска дыхания. В энергизованном состоянии клетки отвечают на действие Вал активацией транспортных АТФ-аз плазмалеммы, усилением дыхания, поглощением ионов калия и выбросом протонов. Митохондриальный аппарат в данном случае принимает участие в аккумуляции ионов.

Полученные результаты показали, что увеличение ионной проницаемости плазмалеммы различными мембрано-активными соединениями сопровождается изменениями в энергетическом обмене и ультраструктурными перестройками клеток. При этом изменяется локализация АТФ-азной активности. Ответные реакции клетки на модификацию ионной проницаемости плазмалеммы определяются степенью мембранотропности индукторов проницаемости. В случае Вал, который специфически усиливает К+-проницаемость плазмалеммы, клетки корней вполне справляются с оказанным воздействием, имеет место регулируемая компенсация ионных «потерь» и происходит адаптация. На фоне же сильных мембранотропов, в частности с хлорпромазином, в присутствии которого не только значительно увеличивается ионная проницаемость плазмалеммы, но и нарушается регуляция поддержания ионного гомеостаза, энергетические ресурсы клеток отсеченных корней недостаточны для устранения повреждающего воздействия. В этих условиях адаптация может не происходить и наступает ее срыв.

125

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Чернышева, Фанзиля Абузаровна, Казань

1. Аверьянов, А.А. Генерация супероксидного радикала интактными корнями гороха /А.А. Аверьянов //Физиол. раст. - 1985. - Т.32, №2. - С.268-273.

2. Авцын, А.П. Изменение ультраструктуры и проницаемости клеточных мембран в патологии /А.П. Авцын, В.А. Шахматова //Итоги науки и техники. Биофизика. -М., 1975. Т. 5. - С. 204-223.

3. Активация электрогенного Н+-насоса плазматических мембран при адаптации клеток высшего растения к низкой положительной температуре /В.А. Опритов, С.С.Пятыгин, В.О.Крауз и др. //Физиол. раст. 1994. - Т.41. - С.488-493.

4. Аллахов, В.Ю. Факторы регуляции метаболизма циклических нук-леотидов / В.Ю. Алахов, С.Е. Северин, И.Д. Бобрускин // 5-й Всесоюзный биохимический съезд: Тез. докл. М., 1985. - 4.1. - С.70.

5. Андреев, И.М. Функции вакуоли в клетках высших растений /И.М.Андреев //Физиол. раст. 2001. - Т. 48, № 5. - С. 777-787.

6. Андреева, И.Н. Электронная микроскопия в физиологических экспериментах /И.Н.Андреева //Новые направления в физиологии растений. М.: Наука, 1985.-С. 33-47.

7. Антиритмические вещества конформационные перестройки белков - кальций /Х.А. Гайнутдинов, Э.В.Нарушевичус, А.С.Пуоджюнас и др. //Биофиз. мембран. - Каунас, 1972. - Ч.Н. - С.173-178.

8. Антонов, В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран / В.Ф.Антонов. М.: Наука, 1982. - 150с.

9. Апоптоз в первом листе у этиолированных проростков пшеницы: влияние антиоксиданта ионола (ВНТ) и перекисей /В.А.Замятина, Л.Е.Бакеева, Н.И.Александрушкина, Б.Ф.Ванюшин // Биохимия. 2002. - Т. 67. - Вып. 2. -С. 253-264.

10. Бакеева, Л.Е. Изменения структуры митохондрий в ответ на функциональные воздействия /Л.Е.Бакеева, А.А.Ясайтис // Митохондр. молекулярные механизмы ферментативных реакций. М.: Наука, 1972. - С. 56-64.

11. Бакеева, Л.Е. Митохондриальный ретикулум: строение и некоторые функциональные свойства /Л.Е.Бакеева, Ю.С.Ченцов //Итоги науки и техники. Общие проблемы биологии. М., 1989. - Т.9 - С. 102.

12. Бакеева, Л.Е.Образование митохондриального ретикулума в мышце диафрагмы в онтогенезе крысы /Л.Е. Бакеева, В.П.Скулачев, Ю.С.Ченцов // Онтогенез. 1982. - Т. 13. - С. 313-317.

13. Бакеева, Л.Е.Ультраструктура митохондрий и дыхание мышц диафрагмы. Влияние повреждения ткани /Л.Е. Бакеева, Д.Б.Зоров, Е.Н.Мохова //Регуляция энергетического обмена и физиологическое состояние организма. -М.: Наука, 1978.-С. 103-111.

14. Барабой, В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов /В.А.Барабой //Успех.совр. биол. 1991. - T.l 11. - С.923-932.

15. Батов, А.Ю. Катионтранспортирующие системы плазматических мембран растительных клеток / А.Ю. Батов, С.В. Юрконен, А.В. Мошков //3-й Съезд Всерос. общ-ва физиологов растений: Тез. докл. С.-Пб., 1993. - 4.1. -С.64.

16. Боева, Т.Г. Гистохимическое изучение активности АТФ-азы в корнях растений: Автореф. дис. . канд.биол.наук: 03.00.12 /Т.Г.Боева; М., 1971. -15 с.

17. Болдырев, А.А. Матриксная функция биологических мембран /А.А. Болдырев // Сорос, образов, жур. 2001. - Т.7, №7. - С.2-8.

18. Болдырев, А.А.Транспортные АТФ-азы /А. А. Болдырев, В.И.Мельгунов // Итоги науки и техники. Сер. биофизика. 1985. - Т. 17. - 241с.

19. Бужурина, И.М. Механизмы формирования клеточного ответа на внешние воздействия /И.М.Бужурина, М.А.Панов // Итоги науки и техники. Сер. Общие проблемы физико-химической биологии. 1986. - Т.З. - 258с.

20. Булычев, А.Г. АТФ-азная активность зон сегрегации новокаина, изолированных из эритроцитов травяной лягушки /А.Г. Булычев, М.Н,Веселкина, А.Д.Браун // Цитология. 1985. - Т.27, №2. - С. 196-202.

21. Булычев, А.Г. Вакуолярный аппарат и слияние мембран в клетке /А.Г. Булычев, Т.П.Моженок // Цитология. 1996. - Т.38, №10. - С. 1001- 1035.

22. Булычев, А.Г. Конфигурационные переходы мембран митохондрий в связи с их энергетическим метаболизмом /А.Г.Булычев //Структуры и функции биологических мембран. М.: Наука, 1975. - С. 59-76.

23. Бутакова, И.В. Структурно-функциональные перестройки в клетках корней пшеницы при изменении протонной проводимости плазмалеммы 2,4-динитрофенолом: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.12 /И.В.Бутакова; КИБ КНЦ РАН.- Казань, 1994. 24 с.

24. Бухвалов, И.Б. Ультраструктурная локализация нуклеозидфосфа-тазной активности в тимоцитах крысы /И.Б. Бухвалов, О.В.Копьев, В.Шульце // Цитология. 1983. - Т. 25, № 8. - С. 904-909.

25. Бухвалов, И.Б. Ультрацитохимия транспортной Na+/ К+ АТФ-азы /И.Б. Бухвалов, П.Д.Бонарцев // Изв. АН. СССР. Сер. Биол. - 1984. - №1. - С. 62-73.

26. Вартапетян, Б.Б. Анаэробиоз и структурно-функциональные перестройки растительной клетки /Б.Б.Вартапетян //Новые направления в физиологии растений. М.: Наука, 1985. - С. 175-199.

27. Васильев, А.Е. Функциональная морфология секреторных клеток растений /А.Е. Васильев JL: Наука, 1977. - 207 с.

28. Васильев, Ю.М. Клеточная поверхность и реакции клеток / Ю.М.Васильев, А.Г.Маленков Д.: Медицина, 1968.-291 с.

29. Вахмистров, Д.Б. Ионный режим растений: эволюция проблемы /Д.Б.Вахмистров // Новые направления в физиол. раст. М., 1985. - С.214-230.

30. Веселов, А.П. Математическая модель возможного триггера обратимого включения режима стресса у растений /А.П.Веселов //Физиол. раст. -2001. Т.48. - С. 124-131.

31. Веселовский, В.А. Структурно-функциональные изменения мембран растительной клетки при адаптации к повреждающим воздействиям: Дис. д-ра биол. наук в форме научного доклада: 03.00.02; 03.00.12 /В.А.Веселовский. М.: МГУ, 1990. - 46с.

32. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А.Владимиров, А.Ю.Арчаков. М.: Наука., 1972. - 252 с.

33. Власюк, П.А. Изменение аденозинтрифосфатазной активности в проростках гороха под влиянием молибдат-иона /П.А.Власюк, А.И.Тернавский // Физиол. и биохимия культурн. раст. 1971. - Т. 3, №4. - С. 372-378.

34. Влияние сшивающих агентов на транспорт электронов и перенос протонов в дыхательной цепи митохондрий /С.В.Конев, А.Н.Руденов, Н.Н.Черноок и др. // Биофизика. 1985. - Т.40, №4. - С.704-706.

35. Возможное регуляторное влияние перекисного окисления липидов на активность 1-Г-АТФ-азы плазмалеммы в условиях стресса /А.П.Веселов, Л.Н.Курганова, А.В.Лихачева, У.А.Сушкова // Физиол.раст.- 2002. Т.49, №3. -С.385-389.

36. Вознесенский, В.Л. Первичная обработка экспериментальных данных /В.Л. Вознесенский. Л.: Наука, 1969. - 83с.

37. Войников, В.К. Рост и устойчивость растений /В.К. Войников. -Новосибирск: Наука, 1988.- 154 с

38. Воробьев, JI.H. Регулирование ионного транспорта: теоретические и практические аспекты минерального питания растений /Л.Н.Воробьев // Итоги науки и техники. Сер. Физиол. раст. М., 1988. - Т.5. - С. 179.

39. Воробьев, Л.Н. Регулирование мембранного транспорта в растениях /Л.Н.Воробьев // Итоги науки и техники. Сер. Физиол. раст. М., 1980. - Т.4. -С.5-77.

40. Гаврилов, В.Б. Активный транспорт протонов и энергизация плазматической мембраны дрожжевых клеток: индукция, регуляция и сопряжение с метаболизмом /В.Б.Гаврилов, С.В.Конев // Биол. мембран. 1993. - Т. 10, №3. -С.255-271.

41. Гайер, Г. Электронная гистохимия / Г. Гайер. М.: Мир, 1974. -488 с.

42. Гамалей, И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула /И.А.Гамалей, И.В.Клюбин // Цитология. -1996. Т.38, №12. - С. 1233-1247.

43. Генкель, П.А. Электронномикроскопическое исследование хлоро-пластов Bellis perennis в связи с переходом в состояние зимнего покоя /П.А. Генкель, Р.С.Морозова // Физиол. раст. -1957. Вып. 6. - С. 509-513.

44. Гордеева, А.В. Взаимосвязь между активными формами кислорода и кальцием в живых клетках /А.В.Гордеева, Р.А.Звягильская, Ю.А.Лабас // Био-ХИМИЯ.-2003.- Т. 68. В. 10. - С. 1318-1322.

45. Гордон, JT.X. Водный обмен, его связь с дыханием и проницаемостью растительных клеток для воды: Дис. . д-ра биол. наук: 03.00.12 защищена 28.01.83; Утв. 2.02.84; БЛ001420. - М., 1983.-339 с.

46. Гордон, JI.X. Дыхание и водно-солевой обмен растительных тканей /Л.Х. Гордон.- М.: Наука, 1976. 119 с.

47. Гордон, Л.Х. Образование супероксида редокс-системой плазмалеммы корневых клеток и ее участие в детоксикации ксенобиотиков /Л.Х.Гордон, О.П.Колесников, Ф.В.Минибаева // Доклады РАН. 1999. - Т.367, №3. - С.409-411.

48. Гордон, Л.Х. Функциональная характеристика адаптивного старения отсеченных корней пшеницы /Л.Х.Гордон // Физиолог, и биохим. культ, раст. 1992. - №2. - С.24-29.

49. Два различных типа изменений ультраструктуры митохондрий в животной и растительной клетках /В.Ф.Машанский, Л.Н.Винниченко, Т.Н. Мо-сева и др. // Ультраструктура растительных клеток. Л.: Наука, 1972. - С. 98102.

50. Действие валиномицина на К+-проницаемость и потребление кислорода в зависимости от физиологического состояния корней пшеницы /В .Я. Алексеева, Б.А. Николаев, Л.Х. Гордон и др. //Физиол. раст. 1984.- Т.31, Вып.4. - С.692-698.

51. Действие грамицидина S на клеточные мембраны /Р.З.Сабиров, О.В.Красильников, А.П.Зарубина и др. // Вестник Моск. ун-та. Сер. биол. -1990.-№2.-С.51-56.

52. Действие физиологически активных соединений на биологические мембраны / JI.A. Пирузян, В.И. Ковалев, Э.Ф. Лаврецкая и др М.: Наука, 1974. - 387с.

53. Действие фузикокцина на протопласты, полученные из суспензионной культуры сахарной свеклы: индукция ^-транспорта и связывание с рецепторами /М.С.Трофимова, А.В.Драпкин, И.Н.Смоленская, А.В.Бабаков //Физиол. раст.- 1996.-Т.43. С.519-526.

54. Дзюбинская, Е.В. Функциональные перестройки ультраструктуры устьичных клеток гороха при апоптозе /Е.В. Дзюбинская, Л.Е. Бакеева, В.Д. Самуилов //Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез. докл. /Пенз.гос.пед.ун-т. - Пенза, 2003. - С. 36.

55. Динамика дыхания и изменения ультраструктуры митохондрий в корнях пшеницы при длительном воздействии антимицина А /В.Я. Алексеева, Л.Х. Гордон, О.О. Полыгалова и др. // Физиол. раст. 1981. - Т.28, Вып.5. -С.995-999.

56. Дмитриев, Л.Ф. Метаболизм бенз(а)пирена в печени крыс. II. Недостаток НАДФН как лимитирующий фактор для инактивации бенз(а)пирена /Л.Ф.Дмитриев, И.И.Иванов // Докл. высш. шк. биол. науки. -1977. Т. 12, №12(168).-С.36-40.

57. Дубинина, Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и суперокситддисмутазы в тканях организма /Е.Е.Дубинина // Успех, совр. биол. 1989. - Т. 108, №1. - С.З.

58. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках /Н.С. Егоров. М.: Высш. шк., 1979. - 455с.

59. Егорова, Н.Н. К+-стимуляция Н+-насосов и биоэлектрогенез /Н.Н.Егорова, Л.Н.Воробьев //Транспорт веществ и биоэлектрогенез у растений. -Горький, 1983.- С.10-22.

60. Загоскин, П.П. Механизм действия нейролептиков фенотиазиново-го ряда на транспорт электронов и окислительное фосфорилирование в митохондриях /П.П.Загоскин, Е.М.Хватова, Л.Д.Лукьянова // Хим.-фарм. ж. -1977.-T.il, №11.- С.53-56.

61. Замараева, М.В. Транспорт ионов через биологические мембраны и механизм действия физиологически активных веществ /М.В.Замараева, А.И.Гагельганс, Б.А.Ташмухамедов // Ташкент: ФАН, 1982.- С.57.

62. Зыкова, В.В. Участие активных форм кислорода в реакции митохондрий растений на низкотемпературный стресс /В.В.Зыкова, А.В.Колесниченко, В.К.Войников // Физиол. раст. 2002. Т.49,- №2. - С. 302310.

63. Иванов, И.И. Механизмы защитного действия токоферолов в биологических мембранах и некоторые родственные вопросы /И.И.Иванов // Биомембраны. Структура, функции, методы исследований. Рига, 1977. - С.248-260.

64. Изменение дыхания и внутриклеточного рН в клетках культуры СПЭВ при действии олигомицина /М.И.Лейкина, Л.Л.Литинская, И.А.Полякова, Д.Б.Зоров // ДАН СССР. 1990. - Т. 312, № 5. - С. 1253-1256.

65. Изменение липид-белковых взаимодействий в мембране бактерий при действии грамицидина S /Д.Н.Островский, В.Г.Булгакова, И.Р.Жукова и др. //Биохимия.-Т.41, №1.-С. 175-182.

66. Изменение липидного состава корней пшеницы при модификации кальцием клеточной поверхности /В.Я.Алексеева, А.В.Лыгин, Л.Х.Гордон., Б.А.Николаев //Физиол. и биохим. культ, раст. 1999. - Т.31, №6. - С.440-446.

67. Изменение липидного состава отсеченных корней пшеницы под влиянием протонофора 2.4-ДНФ /А.В.Лыгин, И.В.Бутакова, О.О.Полыгалова, Л.Х.Гордон //Биохимия. 1995. - Т.60, №9. - С.1468-1475.

68. Изменение содержания стеринов и жирнокислотного состава фос-фолипидов в процессе адаптивного старения отсеченных корней пшеницы /А.В. Лыгин, Л.Х.Гордон, В.Я.Алексеева, Т.К.Балашова // Физиол. и биохим. культур. раст. 1990. - Т.22, №6.- С.584-586.

69. Изучение репарации повреждений мембранного аппарата, вызванных низкотемпературным замораживанием клеток Е. Coli / С.Г.Игнатов, А.В.Андреева, О.А.Евдокимова и др. // Биохимия. 1982. - Т.47, №10. -С.1621-1628.

70. Изучение скорости дыхания и ультраструктуры клеток культуры СПЭВ при действии ингибиторов энергетического обмена /И.А.Полякова, Д.Б.Зоров, М.И.Лейкина, Ю.С.Ченцов // Митохондрии. Механизмы сопряжения и регуляции. Пущино, 1981. - С. 11.

71. Индуцированная перекисью водорода люминолзависимая хемилю-минесценция раневых диффузатов листьев картофеля /М.Н.Мерзляк, Д.Г.Иванова, И.В.Решетникова и др. //Биохимия. 1991. - Т.56, №10. - С.1798-1805.

72. Ионные транспортеры плазмалеммы и тонопласта в проростках ячменя при солевом стрессе / А.В. Васекина, П.В. Ершов, О.С. Решетова и др. //Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез. докл. /Пенза.гос.пед.ун-т. - Пенза, 2003. - С.255-256.

73. Исследование Са -, Mg АТФазы мимозы Mimosa pudica /М.Н. Любимова-Энгельгарт, С.А.Бурнашева, Ф.С.Файн и др. //Немышечные двигательные системы. - М., 1981.- С. 128-133.

74. Кагава, Я. Биомембраны /Я. Кагава. М.: Высш. шк., 1985. - 303 с.

75. Казаченко, В.Н. Макси-Са -активируемые К -каналы: структура и воротный механизм /В.Н.Казаченко, К.В.Кочетков // Биол. мембр. 2003. - Т. 20,№2.-С. 99-120.

76. Карелин, А.А. АТФ как передатчик и усилитель сигналов ростовых факторов и цитокининов /А.А.Карелин, А.Г.Глоба, В.С.Демидова // Усп. биол. химии. 2000. - Т. 40. - С. 267-308.

77. Карелин, А.А. Сигнальный АТФ /А.А. Карелин. М.: Науч.изд. центр. «Инженер», 2000. - 505 с.

78. Касымов, А.К. АТФ-азная активность в различных частях проростков хлопчатника / А.К. Касымов // УзССр Фанлар Акад. докл., Докл. АН УзССР.- 1975.- №12.- С. 53-54.

79. Кафиани, К.А. Роль ионного гомеостаза клетки в явлениях роста и развития /К.А. Кафиани, А.Г.Маленков // Усп. совр. биол. 1976. - Т. 18, Вып.З. - С. 445-463.

80. Кац, М.М. Лекарственные вещества модификаторы проницаемости бислойных липидных мембран /М.М.Кац, С.В.Нижний // Биофизика. - 1977. - Т.22, №4. - С.723-725.

81. Кларксон, Д. Транспорт ионов и структура растительной клетки /Д. Кларксон. М.: Мир, 1978.-368 с.

82. Клюбин, И.В. НАДФН-оксидаза специализированный ферментативный комплекс для образования активных метаболитов кислорода /И.В.Клюбин, И.А.Гамалей // Цитология. - 1997. - Т.39, №4/5.- С.320-339.

83. Кондрашова, М.Н. Метаболические состояния митохондрий при разных физиологических состояниях организма /М.Н.Кондрашова // Молекулярные механизмы регуляции энергетического обмена: Мат. Всесоюз. симп. -Пущино, 1987. С.140-152.

84. Конев, С.В. Структурная лабильность биологических мембран и ре-1уляторные процессы /С.В. Конев. Минск: Наука и техника, 1987. - 240с.

85. Кооперативная гибель дрожжевых клеток при озониндуцированном сбросе протонного градиента на мембране /С.В.Конев, В.Б.Гаврилов, Т.А.Орехова, В.К.Матус // Докл. АН СССР. 1985. - Т.281, №2. - С.454-457.

86. Костюк, П.Г. Кальций и клеточная возбудимость / П.Г. Костюк. -М.: Наука, 1986. 255с.

87. Кочергинский, М.Н. Липиды как возможные переносчики протона от дыхательной цепи к АТФ-синтетазе и механизм окислительного фосфорилирования /М.Н.Кочергинский //Биофизика. 1979. - Т.24, №5. - С.954-978.

88. Кравцов, А.В. Механизмы регуляции векторных ферментов биомембран / А.В.Кравцов, И.Р.Алишко Киев: Наукова думка, 1990. - 176 с.

89. Крауз, В.О. Ингибиторный анализ транспорта Н+ и К+ в клетках корневой системы проростков вики /В.О.Крауз, И.Г.Новоселов // Биоэлектроге-нез и транспорт веществ у растений ЛГУ. Горький, 1987. - С.30-34.

90. Кузнецов, В.В. Адаптация растений к стрессорным факторам: стратегии, механизмы и сигналы /В.В. Кузнецов //Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез.докл. / Пенз.гос.пед.ун-т. - Пенза, 2003. - С. 12.

91. Кулаев, И.С. Биохимия высокомолекулярных полифосфатов /И.С. Кулаев. М.: МГУ, 1975. - 246 с.

92. Куркова, Е.Б. Редокс-компоненты в плазмалемме растительных клеток /Е.Б.Куркова, М.А.Верховская //Физиол. раст. 1984. - Т.31, №3. - С.496-501.

93. Курсанов, А.Л. Функциональная электронная микроскопия и ее задачи. Ученый и аудитория /А.Л. Курсанов .- М.: Наука, 1982. С. 65-78.

94. Ладыженская, Э.П. Влияние фитогормонов на транспорт протонов в везикулах плазмалеммы из клубней картофеля Solarium tuberosum L /Э.П. Ладыженская //Биолог, мембр. 1999. - Т. 16, №5. - С.503-508.

95. Ладыженская, Э.П. Действие фитогормонов на АТФ-зависимое накопление кальция в везикулах плазмалеммы, выделенных из клубней картофеля Solanum tuberosum L /Э.П. Ладыженская, И.К.Гуманова // Биолог, мембр. 1997. -Т.14, №1. - С.66-71.

96. Ландау, М.Л. Молекулярные механизмы действия физиологически активных соединений /М.Л. Ландау. М.: Наука., 1981. - 262 с.

97. Лев, А.А. Ионная избирательность клеточных мембран /А.А. Лев. -Л.: Наука, 1975.-322 с.

98. Лейкина, М.И. Изменение ультраструктуры митохондрий и скорости дыхания в клетках культуры СПЭВ при действии цианида /М.И.Лейкина, З.Е.Внукова, И.А.Полякова // Митохондрии. Механизмы сопряжения и регуляции. Пущино, 1981. - С.12.

99. Лейкина, М.И. Ультраструктура митохондрий при действии различных ингибиторов энергетического обмена / М.И.Лейкина, И.А.Полякова, Ю.С.Ченцов // III Всесоюз. конфер. по патологии клетки: Тез. докл. М., 1982. -С. 73-74.

100. Лойда, 3. Гистохимия ферментов (лабораторные методы) / З.Лойда, Р.Госсрау, Т.Шиблер. М.: Мир, 1982. - 271 с.

101. Локализация АТФ-азной активности в алейроновых клетках прорастающих зерновок ячменя /Н.В.Белицер, Н.П.Ситнянская, Н.А.Белявская,

102. B.Р.Суелиани // Докл. АН СССР. 1980. - Т. 255, №2. - С. 502-503.

103. Локализация грамицидина S на плазматической мембране бактерий продуцента B.brevis и его действие на активность мембранных белков /Т.Н. Вострокнутова, Г.В.Булгакова, Г.П.Удалова и др. // Биохим. - 1981. - Т.46, №4.1. C.657-666.

104. Лось, Д.А. Восприятие сигналов биологическими мембранами: сенсорные белки и экспрессия генов /Д.А. Лось // Сорос. Образов, ж. 2001. - Т. 7, № 9. - С. 14-22

105. Лукьянова, А.Д. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние / А.Д.Лукьянова, Б.С.Балмуханов, А.Т.Уголев. М.: Наука, 1982.-301 с.

106. Луппа, X. Основы гистохимии / Х.Луппа. М.: Мир. - 1980. - 343с.

107. Лялин, О.О. Обратимые изменения электрической проводимости клеточных мембран и межклеточных контактов трихом сальвинии /О.О.Лялин, И.Н.Ктиторова // Структура и функции биологических мембран растений. -Сибир. отдел.: Наука, 1985. С. 78-81.

108. Лялин, О.О. Электрическая проницаемость плазмалеммы корневого волоска и интенсивность белкового синтеза /О.О. Лялин, И.С.Ахмедов // Физиол. раст. 1978. - Т.25, №3. - С.437-444.

109. Лялин, О.О. Электрические свойства клеточных мембран и межклеточных контактов высших растений: Автореф.дис. . д-ра биол. наук: 03.00.12 /О.О. Лялин; Ин-т физиологии раст. АН СССР М., 1980. - 44 с.

110. Маленков, А.Г. Ионный гомеостаз и автономное поведение опухоли /А.Г.Маленков. М.: Наука, 1976. - 169 с.

111. Мартын, Г.И. Структурно-функциональная характеристика клеток коровой паренхимы корня в процессе их специализация: Автореф. дис. . канд.биол.наук: 03.00.12 /Г.И. Мартын. Киев, 1974. - 23 с.

112. Матус, В.К. Влияние хлорпромазина и температуры на транспорт глюкозы в тенях эритроцитов человека /В.К. Матус, А.В.Воробей, Е.А.Черницкий // Биофизика. 1977. - Т.22, №5. -С.861-865.

113. Машанский, В.Ф. О неоднородности распределения АТФазы на плазматической мембране механорецептора в связи с формированием возбуждения /В.Ф.Машанский, А.С.Миркин //Док. АН СССР. 1969. - Т. 184, №6. - С. 1423-1424

114. Машанский, В.Ф. Ранние реакции клеточных органоидов / В.Ф.Машанский, И.М.Рабинович. Л.: Наука, 1987. - 287 с.

115. Медведев, С.С. Система кальциевой сигнализации у растений /С.С. Медведев //Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез. докл. / Пенз.гос.пед.ун-т.- Пенза, 2003. - С. 14.

116. Меерсон, Ф.З. Общий механизм адаптации и роль в нем стресс-реакции, основные стадии процесса /Ф.З.Меерсон //Физиология адаптационных процессов. М.: Наука, 1986. - С.77-119.

117. Межклеточные контакты подводных трихом сальвинии /О.О. Лялин, И.Н.Ктиторова, Е.М.Бармачева, Н.И.Ахмедов // Физиол. раст. 1986. -Т.ЗЗ. - С. 432-446.

118. Межклеточный перенос воды и ионов в корнях проростков пшеницы /Г.А.Великанов, А.Н.Ценцевицкий, И.Х.Нуриев и др. //Физиол. раст. 1992. - Т.39, Вып.5. - С.972-982.

119. Мелихов, Е.И. О механизмах защитной реакции клетки, сопряженной с выходом из нее К+ / Е.И.Мелихов, В.Н.Анев // Усп. совр. биол. 1992. -Т.112, №1. - С.18-28.

120. Мельгунов, В.И. Системы активного транспорта и их роль в поддержании ионно-осмотического гомеостаза клетки /В.И.Мельгунов //5-й Все-союз. биохим. съезд: Тез.докл. М., 1985. - Т.1. - С. 125.

121. Мембраны бактерий и механизм действия антибиотика грамицидина S /А.С.Капрельянц, В.В.Никифоров, А.И.Мирошникова и др. // Биохимия. -1977.- Т.42, №2. С.329-337.

122. Месенко, М.М. Роль ЕГ-АТФ-азы в регуляции роста клеток корня /М.М.Месенко //Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез. докл./ Пенз.гос.пед.ун-т - Пенза, 2003. - С.413.

123. Миклашевич, А.И. Редокс-реакции плазмалеммы растительных клеток и их роль в регуляции транспорта /А.И. Миклашевич, Е.А.Морокова,

124. B.А.Новак //3-ий съезд Всерос. общ. физиол. раст.: Тез.докл С.-Пб., 1993.1. C.163.

125. Минибаева, Ф.В. Электрогенез и дыхательный газообмен корней пшеницы при различном кальциевом и стериновом статусе: Автореф. дис. . канд. биол.наук: 03.00.12 /Ф.В.Минибаева; КИБ РАН. Казань, 1990. - 23 с.

126. Можаева, Л.В. Изучение аденозинтрифосфатазной активности и сократительных свойств клеток корня /Л.В. Можаева, Т.Г.Боева // Изв. ТСХА. -1970. Вып. 3.-С. 16-24.

127. Можаева, Л.В. Электронномикроскопическое изучение структуры клеток поглощающей зоны корня и локализация в них АТФ-азы /Л.В. Можаева, Т.Г.Боева // Известия ТСХА.-1971. Т.1.-С.6-13.

128. Молекулярный механизм действия фузикокцина. II. Энергетика Н1"-транспорта, индуцированного фузикокцином из отделенных корней кукурузы /В.А.Бабаков, С.В.Билуши, Н.Ю.Абрамычева, Г.С.Муромцев //Биол. мембран. -1987. Т.4, №3. - С.238-242.

129. Молотковский, Ю.Г. Механизмы структурных и функциональных переходов мембран // Новые направления в физиологии растений. М.: Наука, 1985. — С.104-121.

130. Морфофункциональные изменения митохондрий в культивируемых клетках при действии и отмывании ротенона /М.И.Лейкина, И.А.Полякова, Е.В.Белосорочко, Д.Б.Зоров // IV Всесоюзн. конф. по патологии клетки: Тез.докл. М., 1987. - С. 25.

131. Мотлох, Н.Н. Митохондрии и посттравматическая регенерация /Н.Н. Мотлох // Усп. совр. биол. 1981. - Т. 92, Вып. 3 (6). - С. 422-439.

132. Мусаев, Н.А. Исследование влияния температуры и физиологически активных веществ на электрические характеристики растительных клеток: Автореф. дис. . канд.биол.наук: 03.00.12 /Н.А. Мусаев. Тбилиси, 1981.- 24с.

133. Негуляев, Ю.А. Функциональная локализация ионных каналов в плазматической мембране интактных клеток /Ю.А.Негуляев, Ю.Е.Корчев // Клеточная биология на пороге XXI века :Тез. докл. Цитология. - 2001. - Т. 43, №4.- С.370-371.

134. Некоторые характеристики поверхностной фосфатазной активности корней ячменя, стимулируемой ионами магния и калия /Д.Б.Вахмистров, Н.Е.Мищустина, В.Н.Исмайлов, С.А.Самойлов //V делегатский съезд ВБО: Тез. докл. Киев, 1973. - С. 80-81.

135. Несмеянова, Н.А., Богданов М.В. Энергетика секреции белков у бактерий //Усп. совр. биол. 1987. - Т.104, №3. - С.361-377.

136. Николаев, Б.А. Дыхательный газообмен корней пшеницы при модификации проницаемости плазмалеммы: Автореф. дис. . канд. биол.наук: 03.00.12 /Б.А. Николаев; КИБ КФАН СССР Казань, 1988.- 23 с.

137. Николаев, Б.А. К вопросу о существовании в плазмалемме растительных клеток окислительно-восстановительной системы / Деп. ВИНИТИ, 1980. -№3472-80 деп. 12 с.

138. Новак, В.А. Светоиндуцированное поглощение ионов клетками пресноводных растений /В.А. Новак, Н.Г.Иванкина // Физиол. раст. 1978. - Т. 25, Вып.2.-С. 315-321.

139. Новосельцев, В.Н. Системные аспекты гомеостаза // Гомеостаз на различных уровнях организации биосистем. Новосибирск: Наука, 1991. - С. 317.

140. О роли плазмалеммы в регуляции дыхания клеток высших растений /Б.А.Николаев, Л.Х.Гордон, В.Я.Алексеева, А.Н.Ценцевицкий // Н+-АТФ-аза и реактивность растительной клетки. Казань, 1989. - С. 79-87.

141. О факторах, влияющих на регуляцию процессов биологического окисления в тканевых препаратах / Л.Д.Лукьянова, О.А.Попова, В.Е.Романова и др. // Регуляция энергетического обмена и физиологическое состяние организма. М.: Наука, 1978.- С. 90-101.

142. Овчинников, Ю.А. Мембрано-активные комплексоны / Ю.А.Овчинников, В.Т.Иванов, A.M. Шкроб. М.: Наука, 1974. - 463с.

143. Олескин, А.В. Побочные эффекты ингибиторов всрцитохромного комплекса в энергопреобразующих биомембранах /А.В.Олескин, В.Д.Самуилов //Биохимия. 1988. - Т.53, №11. - С.1803-1809.

144. Оловников, A.M. Внутриядерные ионные фонтаны как регуляторы работы генома: фонтанная гипотеза доминантности и некоторых эффектов /A.M. Оловников //Мол.биол. 2001. - Т.35, №1. - С. 163-176.

145. Опритов, В.А. Биоэлектрогенез у высших растений / В.А.Опритов, С.С.Пятыгин, В.Г.Ретивин. М.: Наука, 1991. - 214 с.

146. Опритов, В.А. Н*-АТФ-аза плазматической мембраны основная электрогенная система высших растений /В.А. Опритов //Соров. образов, жур. -2000. - Т.6, №3. - С. 28-32.

147. Опритов, В.А. Непосредственное сопряжение генерации потенциала действия в клетках высшего растения Cucurbita реро с работой электрогенного насоса /В.А. Опритов, С.С.Пятыгин, В.А.Воденеев //Физиол. раст. 2002. -Т.49, №1. - С. 160-165.

148. Организация дальнего транспорта ионов у галофита Suaeda altis-sima /Ю.В. Балнокин, Е.Б. Куркова, Н.А. Мясоедов и др. //Физиология растений- основа фитобиотехнологии: Тез.докл. /Пенз.гос.пед.ун-т. Пенза, 2003. -С.245.

149. Палладина, Т.А. Роль протонных насосов плазмалеммы и тонопла-ста в устойчивости растений к солевому стрессу /Т.А. Палладина // Усп. совр. биол. 1999.-Т.119, №5. - С.451-461.

150. Пахомова, В.М. Биология экстремального состояния растительных клеток / В.М. Пахомова. Казань: КГУ, 2001. - 107с.

151. Пахомова, В.М. Изменение редокс-состояния флавопротеинов и пиридиннуклеотидов в корнях пшеницы при адаптивном старении /В.М. Пахомова, Л.Х.Гордон., К.Б.Асланиди //Физиол. раст. 1985. - Т.32, №5. - С.948-953.

152. Пахомова, В.М. Модели стрессовых воздействий и общебиологические закономерности /В.М. Пахомова. Казань: КГУ, 1999. - 150 с.

153. Пахомова, В.М. Неспецифический адаптационный синдром биосистем и общие закономерности реактивности клеток /В.М. Пахомова. Казань: КГУ, 2000. - 180 с.

154. Подавление дыхания клеток Bacillus subtilis при понижении рН цитоплазмы /Е.А.Барский, А.В.Назаренко, В.Д.Самуилов, С.А.Хакимов // Биол.мембран. 1989. - Т.6, №7. - С.720-724.

155. Полевой, В.В. Протонные насосы и их функциональная роль /В.В.Полевой, Т.О.Саламатова // Итоги науки и техники. Физиол. раст. М., 1980.-Т.4.- С.78-126.

156. Полевой, В.В. Роль ауксина в системе регуляции у растений /В.В. Полевой. Л.: Наука, 1986. - 80с.

157. Поликар, А. Молекулярная цитология мембранных систем животной клетки /А. Поликар. М.: Мир, 1972. - 158 с.

158. Поликар, А. Поверхность клетки и ее микросреда /А. Поликар. -М.: Мир, 1975.- 108 с.

159. Полыгалова, О.О. О неоднозначности эффектов 2.4-ДНФ на уровне целой растительной ткани /О.О. Полыгалова, Л.Х.Гордон, И.В.Бутакова и др. //Физиол. и биохим. культ, раст. 1991. - Т.23, №4. С.343-349.

160. Полякова, И.А. Действие олигомицина на ультраструктуру и дыхания клеток /И.А.Полякова, Д.Б.Зоров, М.И.Лейкина III Всесоюз. биофиз. съезд.: Тез. докл.- 1982.-Т. 1.-С. 294.

161. Полякова, И.А. Структурно-функциональные изменения хондриома культивируемых клеток при нарушении энергетического метаболизма /И.А. Полякова, Д.Б.Зоров, М.КЛейкина // Докл. АН. 1995. Т.432, №4. - С.553-555.

162. Полякова, И.А. Структурные и функциональные изменения клеток культуры СПЭВ при действии ингибиторов энергетического метаболизма: Автореф. дис. . канд.биол.наук: 03.00.12 /И.А. Полякова. М.: МГУ. 1991. -21 с.

163. Пономарева, А.А. Изменение ультраструктуры и энергообеспечения клеток корней пшеницы при действии протонофора: Автореф. дис.канд. . биол.наук: 03.00.12 /А.А. Пономарева; КНЦРАН КББ Казань, 2002. - 21 с.

164. Пономарева, А.А. Структурно-функциональные изменения (в клетках корней при действии карбонилцианида 3 - хлорфенил - гидрозона) /А.А.Пономарева, О.О.Полыгалова //Цитология. - 2001. - Т.43, №6. - С.561-566.

165. Попов, В.Н. Регуляция образования активных форм кислорода в митохондриях и роль альтернативной оксидазы в этом процессе /В.Н. Попов // Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез. докл. /Пенз.гос.пед.ун-т. - Пенза, 2003. - С. 64.

166. Пострецепторное образование активных форм кислорода в клетках, не являющихся профессиональными фагоцитами /И.А.Гамалей, И.В.Клюбин, И.П.Арнаутова, К.М.Кирпичникова // Цитология. 1999. - Т.41, №5. - С.394-399.

167. Потапов, Н.Г. К изучению механизма поглощения веществ кор-нем/Н.Г. Потапов, Л.Г.Косулина, В.П.Лапикова // С/х биология. 1970. - T.V, №2.-С. 302-310.

168. Потапов, Н.Г. Функциональная дифференциация поверхностных клеток корня кукурузы /Н.Г.Потапов, Е.А.Карпов // С/х биология. 1971. - Т. VI,№2.-С. 242-250.

169. Продукты перекисного окисления липидов как возможные посредники между воздействием повышенной температуры и развитием стресс-реакции у растений /Л.Н.Курганова, А.П.Веселов, Ю.В.Синицина, Е.А.Еликова //Физиол. раст. 1999. - Т.46, №2. - С.218-222.

170. Пятыгин, С.С. О роли мембранного потенциала клеток высшего растения в формировании адаптационного синдрома при охлаждении /С.С.Пятыгин, В.А.Опритов // Докл. АН. 1992. - Т.326, №1. - С.202-205.

171. Рахматуллина, Д.Ф. Дыхание и термогенез клеток корней пшеницы при изменении К+ / ЬГ-обмена на плазмалемме: Автореф. дис. . канд. биол.наук: 03.00.12 /Д.Ф. Рахматуллина; КНЦРАН КББ Казань, 2002. - 22 с.

172. Регуляция Н+-насоса в плазматических мембранах растений при осмотическом стрессе: роль белков 14-3-3 /В.В.Челышева, С.Э.Зоринянц, И.Н.Смоленская, А.В.Бабаков //Физиол. раст. 2001. - Т.48, №3. - С.325-333.

173. Ретивин, В.Г. Рефрактерность проводящих тканей высшего растения /В.Г.Ретивин, С.С.Пятыгин, В.А.Опритов // Физиол. раст.- 1988. Т.35. -С.486-494.

174. Роль ионов кальция в формировании физиологического состояния корней пшеницы /В.Я.Алексеева, Л.Х.Гордон, Б.А.Николаев, А.Н.Ценцевицкий //Физиол. и биохим. культ, раст. 1993. - Т.25, №4. - С.335-340.

175. Роль супероксида в формировании неспецифического адаптационного синдрома корневых клеток /Ф.В.Минибаева, Д.Ф.Рахматуллина, Л.Х.Гордон, Н.Н.Вылегжанина//Докл. РАН. 1997. -Т.355, №4. - С.554-556.

176. Савина, М.В. Механизмы адаптации тканевого дыхания в эволюции позвоночных /М.В. Савина .- С-Пб.: Наука, 1992. 195 с.

177. Самуилов, В.Д. Зависимость дыхания клеток Bacillus subtilis от одновалентных катионов /В.Д.Самуилов, С.А.Хакимов //Биохимия. 1991. Т.56, №7. - С. 1209-1214.

178. Самуилов, В.Д. Программируемая клеточная смерть у растений /В.Д. Самуилов // Сорос, образов, жур. 2001. - Т.7, №10. - С. 12-17.

179. Сафина, Г.Ф. Дыхательный газообмен и окислительное деметили-рование ксенобиотиков в корнях пшеницы: Автореф. дис. . канд. биол.наук: 03.00.12 /Г.Ф. Сафина; КИБ РАН Казань, 1981. - 22 с.

180. Семихатова, О.А. Манометрические методы изучения дыхания и фотосинтеза / О.А. Семихатова, М.В. Чулановская. М.-Л.: Наука. 1965. - 168с.

181. Семихатова, О.А. Энергетика дыхания растений в норме и при экологическом стрессе. /О.А. Семихатова. JI.: Наука, 1990. - 71с.

182. Сим, Э. Биохимия мембран /Э. Сим. М.: Мир. - 110 с.

183. Симакова, J1.M. Структурно-функциональные изменения, вызываемые грамицидином S в мембранах его продуцента Bacillus brevis /JI.M. Симакова, Е.Ф.Харатьян, А.С.Капрельянц и др. //Биол. мембр.- 1986. Т.З, №1. - С.34-42.

184. Скулачев, В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло /В.П. Скула-чев //Соров. образов, ж. 1996, № 3. - С. 4-10.

185. Скулачев, В.П. Н2О2 сенсоры легких и кровеносных сосудов и их роль в антиоксидантной защите организма /В.П. Скулачев // Биохимия. - 2001. -Т.66, №10. - С.1425-1429.

186. Скулачев, В.П. Трансформация энергии в биомембранах /В.П. Скулачев. М.: Наука, 1972. - 203с.

187. Скулачев, В.П. Энергетика биологических мембран /В.П. Скулачев. -М.: Наука, 1989.-564 с.

188. Совершаев, П.Ф. Активность и локализация щелочной фосфатазы в вегетативных почках и побегах ели: Науч. тр. Арханг. лесотехн. ин-та. 1971. -Т. 24.-С. 51-55.

189. Строчкова, Л.С. Некоторые аспекты изучения ряда фармакологических препаратов на клетку /Л.С. Строчкова // Усп. совр. биол. 1979. - Т.88, №2(5). - С.264-276.

190. Структурно-функциональные изменения цитоплазматической мембраны растительной клетки под влиянием раневого стресса /Н.В.Любимова,

191. В.М.Лахтин, В.И.Бинюков и др. //Прикл. биох. и микробиол. 1988. - Т.24, №1. - С.102-109.

192. Тарчевский, И.А. Сигнальные системы клеток растений /И.А. Тар-чевский. М.: Наука, 2002. - 294 с.

193. Ташмухамедов, Б.А. Активный транспорт ионов через биологические мембраны /Б.А.Ташмухамедов, А.И.Гагельчан. Ташкент: ФАН, 1973. -221 с.

194. Тихая, Н.И. Присуще ли апопласту корневых клеток разнообразие фосфогидролаз? /Н.И.Тихая, Т.Н.Стеханова, М.Д.Федоровская //Физиол. раст. -1999. Т. 46, № 5. - С. 728-737.

195. Трофимова, М.С. Ионный гомеостаз растительной клетки и механизмы его регуляции: Дис. . д-ра биол. наук в виде научн. докл.: 03.00.12/ М.С.Трофимова. М., 2003. - 51 с.

196. Трофимова, М.С. Ион-транспортные системы плазмалеммы в рН-статировании цитозоля растительных протопластов: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.12 /М.С. Трофимова; Ин-т физиологии растений РАН. М.:, 1992.-23 с.

197. Увеличение потенциалчувствительности АТФ-азной активности плазмалеммы при холодовом закаливании проростков пшеницы /В.А. Опритов, В.А.Калинин, С.С.Пятыгин и др. //Физиол. раст. 1999. - Т.46, №1. - С. 153-158.

198. Ультраструктура и дыхательная активность клеток корня при действии аминазина /О.О.Полыгалова, Г.Ф.Сафина, Л.Х.Гордон, В.Я.Алексеева //Цитология. 1982. - Т.24, №10. - С.1160-1165.

199. Ультраструктурные изменения в клетках монослойной культуры при ингибировании митохондриальной АТФ-синтетазы /И.А.Полякова, М.И.Лейкина, Д.Б.Зоров, Ю.С.Ченцов // Ультраструктурные основы патологии органов и тканей. Тбилиси, 1989. - С. 218-219.

200. Финеан, Дж. Мембраны и их функции в клетке / Дж. Финеан, Р. Колмен, Р. Мичелл. М.: Мир, 1977. - 199 с.

201. Фрайштат, Д.М. Реактивы и препараты для микроскопии. Справочник /Д.М. Фрайштат. М.: Химия. - 1980. - 480 с.

202. Фрей-Висслинг, А. Сравнительная органеллография цитоплазмы /А. Фрей-Висслинг. М.: Мир, 1976. - 525 с.

203. Характеристика активности аденозинтрифосфатаз различных зон роста корешков некоторых покрытосеменных растений /К.М.Сытник, Т.Н.Олейникова, Е.Л.Кордюм, Г.И.Мартын // V делегатский съезд ВБО: Тез.докл.-Киев, 1973.-С. 100-101.

204. Ходоров, Б.И. Влияние ионов кальция, магния, бария, никеля и лантана на гиперполяризационные ответы одиночного перехвата Ранвье /Б.И.Ходоров, Э.М.Печанов //Биофизика. 1969. - Т. 14, В.З. - С. 474-478.

205. Ходоров, Б.И. Общая физиология возбудимых мембран /Б.И. Ходо-ров.-М.: Наука, 1975. 406 с.

206. Чернов, Н.Н. Ферменты в клетке и пробирке /Н.Н. Чернов //Соров. образов, ж. 1996. -№ 5. - С. 28-34.

207. Шабадаш, А.Л. Морфологическая (электронномикроскопическая и гистохимическая) организация митохондрий в различные фазы клеточных функций // Митохондрии. Структура и функция. М.: Наука, 1966. - С. 5-21.

208. Шабадаш, А.Л. Роль митохондриальных ансамблей в интеграции физиологических функций // Митохондрии. Биохимические функции и их регуляция в системе клеточных органелл. -М.: Наука, 1969. С. 5-14.

209. Шабадаш, А.Л. Экспериментальная реорганизация митохондрий при инверсии физиологической активности клеток // Митохондрии. Ферментативные процессы и их регуляция. М.: Наука, 1968. - С. 5-14.

210. Шанько, А.В. Белки 14-3-3 регулируют активность ТГ-насоса плазматических мембран корней ячменя Hordeum disticum при солевом стрессе /А.В.Шанько, А.В.Бабаков //Физиол. раст. 2002. - Т.49, №6. - С.847-853.

211. Шиндерите, B.C. Влияние ингибиторов энергетического обмена на структуру митохондрий L-клеток: Автореф. дис. . канд.биол.наук: 03.00.17 /B.C. Шиндерите. Вильнюс, 1984. - 20 с.

212. Шиндерите, B.C. Влияние ингибиторов энергетического обмена на мембранные структуры L-клеток /В.С.Шиндерите, А.А.Ясайтис // Цитология. -1983.-Т. 25.-С. 1076.

213. Шиндерите, B.C. Изменение структуры митохондрий L-клеток при действии цианида /В.С.Шиндерите, И.И.Сабаляускас, А.А.Ясайтис // Цитология. 1983. - Т. 25. - С. 1059-1064.

214. Шиндерите, B.C. Изменение ультраструктуры митохондрий монослоя L-клеток в присутствии цианида /В.С.Шиндерите, А.А.Ясайтис //Мат. I Всесоюз. Биофиз. съезда. М., 1982. - С. 281.

215. Шольц, К.Ф. Энергозависимый «неионофорный» транспорт ионов в митохондриях /К.Ф.Шольц, Н.А.Соловьева // Митохондрии. Аккумуляция энергии и регуляция ферментативных процессов: Сб.ст.- М.: Наука, 1977. -С.88-100.

216. Штейн-Марголина, В.А. Электронно-цитохимическое выявление АТФ-аз в клетках листьев и подушек мимозы // Немышечные двигательные системы.-М., 1981.-С. 133-138.

217. Электрофизиологическое звено рецепции охлаждения клетками высшего растения /В.А.Опритов, С.С.Пятыгин, С.А.Лобов и др. //Физиология растений основа фитобиотехнологии: Тез. докл. /Пенз.гос.пед.ун-т. - Пенза, 2003.-С.313.

218. А 37 kD peroxidase sectreted from liverworts in response to chemical stress /Hirata Т., Ashida Y., Mori H. et al. //Phytochemistry. - 2000. - Vol.55. -P. 197-202.

219. Achmerov, R. N. Qualitative difference in mitochondria of endothermic and eczothermic animals /Achmerov R. N. //FEBS Sett. 1986. - Vol. 198 - P. 251255.

220. Adaptation of active proton pymping and plasmalemma ATP-ase activity of corn roots to low root medium pH /Van F., Feuerele В., Schartter S. et al. //Plant Physiol. 1998.-Vol. 117. - P. 311-319.

221. Baka, Z.A. Distribution of ATPase activity at the host-pathogen interfaces of rust infections /Baka Z.A., Larous L., Losel D.M. //Physiolog and Molec. Plant Pathology. 1995. - N. 47. - P. 67-82.

222. Barber, M.J. Superoxide production during reduction of molecular oxygen by assimilatory nitrate reductase / Barber M.J., Kay C.J. //Arch. Biochem. Bio-phys. 1996. - Vol.326. - P.227-232.

223. Bolwell, G.P. Mechanisms for the generation of reactive oxygen species in plant defense a broad perspective /Bolwell G.P., Wojtaszek P. //Physiol. Mol. Plant Pathol. - 1997. - Vol.51. - P.347-366.

224. Briskin, D.P. How does the plant plasma membrane НГ-ATPase pump protons? /Briskin D.P., Hanson J.B. // J. Exp. Bot. 1992. - Vol.43. - P.269-289.

225. Briskin, D.P. Plasma membrane Yf- transporting ATPase: role in potassium ion transport /Briskin D.P. // Plant Physiol.- 1997. Vol.114. - P. 1137-1140.

226. Briskin, D.P. Role of the plasma membrane H^-ATPase in K+-transport /Briskin D.P., Gawienowski M.C. // Plant Physiol. 1996. - Vol.111. - P.l 199-1207.

227. Briskin, D.P. The plasma membrane ATPase of higher plant cells: biochemistry and transport function /Briskin D.P. // Biochimica et Biophysica Acta. -1990. -Vol.1019. -P.95-109.

228. Browining, A.J. Cytochemical localisation of ATPase activity in phloem tissues of Ricinus communis /Browining A .J., Hall J.L., Baker D.A. // Protoplasma. -1980.-N. 104.-P. 55-65.

229. Busa, W. Metabolic regulation via intracellular pH /Busa W., Nuccitelli R. // Am. J. Physiol. 1984. - Vol.246. - P.409-438.

230. Calcium activation of Mougeotia potassium channels /Lew R.R., Serlin B.S., Schauf Ch.L., Stockton M.E. // Plant Physiol. 1990. - Vol.92. - P.831-836.

231. Cerana, R. On the difference between washing induced and fusicoccin-induced K+-uptake in maize root segment / Cerana R., Rasi-Caldoguo F., Pygliarello M.S. // Plant Sci. Lett. 1981. - Vol.20. - P. 175-181.

232. Chaffey, N.J. Localization of ATPase activity on the plasmalemma of scutellar epithelial cells of germinating barley {Hordeum vulgare L.) /Chaffey N.J., Harris N. //J. Exp. Bot. 1985. - Vol. 36, № 171 - P. 1612-1619.

233. Changes in lipid peroxidation, the redox system and ATP-ase activities in plasma membranes of rice sudling roots caused by lanthanum chloride /Zheng H.L., Zhao Z.Q., Zhang C.G. et al. //Biometal. 2000. - Vol. 13. - P. 157-163.

234. Characteristics of skeletal muscle ecto-ATPase in situ /Manery J.F., Dryden E.E., Still J.S., Madapallimattam G. Dept Biochem., Univ. Toronto, Toronto, Ont., M5S 1A8, СА. //Can. J. Biochem. and Cell Biol. 1984. - Vol. 62, №10.-P. 1015-1026

235. Chavez, E. Dicyclohexylcarbodiimide as inducer of mitochondrial Ca revease /Chavez E., Zazueta C., Diaz E. //J. Bioenergetics and Biomembranes. -1990,-Vol.20.-P.679-689.

236. Comparative biochemistry of the oxidative burst produced by rose and french bean cells reveals two distinct mechanisms /Bolwell G.P., Davies D.R., Ger-rish C. et al. // Plant Physiol. Vol.116, №4. - P.1379-1385.

237. Cooke, D.T. Lipid modulation of plasma membrane bound ATPase /Cooke D.T., Burden R.S. // Physiol, plant. 1990. - Vol.78, №1. - P. 153-159.

238. Cutler Leslie, S. Cytochemical methods for the localization of adenylate cyclase. A reveiw and evalution of the efficacy of the procedures /Cutler Leslie S. // J. Histochem. And Cytochem. 1983. - Vol. 31, № 1. - P. 85-93.

239. Cytochemical localisation of ATPase activity in oat roots localizes a plasma membrane associated soluble phosphatase, not the proton pump /Katz O.B., Sussman M.R., Mierzwa R.J., Evert R.F. //Plant Physiol. - 1988, № 86. - P. 841-847.

240. Deltour, R. Inorganic phosphate accumulation and phosphatase activity in the nucleus of maize embryo root cells /Deltour R., Fransolet S., Loppes R. // J. Cell Sci. -1981.- Vol. 47. P. 77-89.

241. Diaz de Leon J.L. Biochemistry and function vacuolar adenosin-triphosphatase fungi and plants /Diaz de Leon J.L., Wyn Jones R.G. Berlin e.a., 1985. - P.57-66.

242. Else, P.L. Evolution of mammalion endotermia metabolism: «Leaky» membranes as a source of heat /Else P.L., Hulbert A.J. // Amer. J. Physiol. 1987. -№253. - P. 1-7.

243. Emi, T. Specific binding of vf 14-3-3a isoform to the plasma membrane H4^ATPase in response to blue light and fusicoccin in guard cell of broad bean /Emi Т., Kinoshita Т., Shimazaki K. //Plant Physiol. 2001. - Vol.125. - P.l 115-1125.

244. Epstein, E. How calcium enhances plant salttolerance /Epstein E. //Science. 1998. - Vol.280. - P.1906-1907.

245. Evolution of energy metabolism Proton permeability of the inner membrane of liver mitochondria es greater in a mammal than in a reprice /Brand M.D., Youture P., Else P.L. et al. //Biochem. J. 1991. - Vol. 275. - P. 81-86.

246. Ewing, N.N. Assessment of the number and expression of P-type КГ-ATPase genes in tomato /Ewing N.N., Bennet A.B. //Plant Physiol. 1994. - Vol.106. - P.547-557.

247. Felle, H. Short-term рН regulation in plant /Felle H. //Physiol, plant. -1988.-Vol.74.-P.583-591.

248. Ferl, R. 14-3-3 proteins and signal transduction /Ferl R. //Aram. Rev. -Plant Physiol., Mol. Biol. 1996. - Vol.47. - P.49-73.

249. Fitzsimons, J.T.R. Enzyme cytochemistry the present state of the art / Fitzsimons J.T.R. /Ant. J. Biochem. - 1983. - Vol. 15, №3. - P. 267-275.

250. Glass, A.D.M. Enfluence of excision and ageing upon K+-influx into barley roots. Recovery or enhancement? /Glass A.D.M. //Plant Physiol. 1978. -Vol.61, №4.- P.481-483.

251. Glimpse of the mechanisms of ion homeostasis during salt stress / Serrano R., Mulet J.M., Rios G. et al. // J. Exp. Bot. 1999. - Vol. 50. - P. 10231036.

252. Hall, J.L. Cytochemical localisation of ATPase activity in plant roots cells /Hall J.L. // J. Microscopy. 1971.- Vol. 93. - P. 219-225.

253. Hall, J.L. The Validity of the Lead Precipitation Technique for the Localization of ATPase Activity in Plant Cells /Hall J.L., Browning A.J., Harvey D.M.R. //Protoplasma. 1980. - Vol. 104, № 3-4. - P. 193-200.

254. Harper, J.F. The plasma membrane H1-ATPase gene family in Arabi-dopsis: genomic sequence of AHA 10 which is expressed primarily in developing seeds /Harper J.F., Manney L., Sussman M.R. //Mol. Gen. Genet. 1994. - Vol.244. - P.572-587.

255. Hensley, J.R. The action of valinomycin in uncoupling corn mitochondria /Hensley J.R., Hanson J.B. //Plant Physiol. 1975. - Vol. 56. - P. 13-18.

256. Hill, A.B. Chemical wave transmission in nerve /Hill A.B. Gambrige, Univ. Press, 1932. - 74p.

257. Hochachka, P.W. Metabolic arrest and the control of biological time /Hochachka P.W., Yuppy M. //Gambridge etc: Harvars Univ. Press, 1987. 227 p.

258. Hulbert, A.J. Comparison of the «mammal machine» and the «reptile machine: energy use thyroid activity» /Hulbert A.J., Else P.L. // Amer. J. Physiol. -1981.-Vol. 241.-P. 350-356.

259. Identification of an autoinhibitory domain in the C-terminal region of the plant plasma membrane H+-ATPase /Palmgren M.G., Sommarin M., Serrano R., Larsson C. //J. Biol. Chem. 1991. - Vol.266. - P.20740-20745.

260. Jahnke, L.S. Chilling and oxygen metabolizing enzymes in Zea mays L. and Zea diploperennis /Jahnke L.S., Hull M.R., Long S.P. // Plant Cell Envir. 1991. - Vol.14. - P.97-104.

261. Jmprovement of the anoxia induced mitochondrial dysfunction by membrane modulation /Miyahara M., Okimasu E., Mikasa H. et al. //Arch. Biochem. and Biophis. 1984. - Vol. 233. - P. 139-150.

262. Johansson, F. Fusicoccin activates the plasma membrane I-T-ATPase by a mechanism involving the C-terminal inhibitory domain / Johansson F., Sommarin M., Larsson C. // Plant Cell. 1993. - Vol.5. - P.321-327.

263. Kitasato, H. The influence of H* on the membrane potencial and ion fluxes oiNitella I Kitasato H. // J. Gen. Physol. 1968. - Vol. 52. - P. 60-87.

264. Korthout, H.A.A. Plant plasma membrane 14-3-3 proteins differ in solubility and form fusicoccin-dependent complexes /Korthout H.A.A., De Bour A.H. //Plant Physiol. Biochem. 1998.- Vol.36. - P.357-365.

265. Kumar, G.H. Oxidative stress results in increased sinks for metabolic energy during aging and sprouting of potato seed tubers /Kumar G.H., Knowles N.R.//Plant Physiol.- 1996.-Vol. 112.-P. 1301-1313.

266. Lander, H.M. Redox regulation of cell signaling /Lander H.M., Milbank A.J., Tauras J.M.// Nature.- 1996.- Vol.381. P.380-381.

267. Lin, W. Further characterization of the transport property of plas-malemma NADH oxidation system in isolated corn protoplasts /Lin W. //Plant Physiol. 1984. - Vol.74. - P.219-222.

268. Lu, G.H. Phosphorylation and calcium binding properties of an Arabi-dopsis GF14 brain protein homolog /Lu G.H., Sehnke P.C., Ferl R.J. //Plant Cell. -1994.- Vol.6. P.501-510.

269. Malone, C.P. Histochemical evidence for the occurrence of oligomycin-sensitive plasmalemma ATP-ase in corn roots /Malone C.P., Burke I.J., Hanson J.B. //Plant Physiol. 1977. - Vol. 60, №6. - P. 916-922

270. Marre, E. The proton pumps of the plasmalemma and tonoplast of higner plants /Marre E., Ballarin-Denti A. //J. Bioenergetics and biomembranes. 1985. -Vol.17.-№1.- P.l-21.

271. Mehdy, M.C. Active oxygen species in plant defense against pathogens / Mehdy M.C. //Plant Physiol. 1994. - Vol.105. - P.467-472.

272. Meirelles, M.N.L. Localization of a Mg2+-activated ATP-ase in the plasma membrane of Trypanosoma cruzi /Meirelles M.N.L., de Souza W. // J. Proto-zool. 1984. - Vol. 31, №1. - P. 135-140.

273. Michelet, B. The plasma membrane tT-ATPase. A highly regulated enzyme with multiple physiological functions /Michelet В., Boutry M. // Plant Physiol. 1995.-Vol.108. - P.l-6.

274. Minibayeva, F.V. Contribution of a plasma membrane redox system to the superoxid production by wheat root cells / Minibayeva F.V., Kolesnikov O.P., Gordon L.K. // Protoplasma. 1998. - Vol.205 - P. 101-106.

275. Mitochondrial ultrastructure in roots of mesophyte and hydrophyte at anoxia and after glucose feeding /Vartapitian B.B., Andreeva I.N., Kozlova Y.I., Agapova L.P. // Protoplasma. 1977. - Vol. 91. - P. 243-256.

276. Moorhead, G.B. Binding of glicolitic enzymes to a particulate fraction in carrot and sugar beet storage roots. Dependence on metabolic state /Moorhead G.B., Plaxton W.C.// Plant Physiol.- 1988.- Vol.86. P.348-351.

277. Moriyama, Y. Membrane energization by photon pumps is important for compartmentalization of drugs and toxins: a new type of active transport. (Review) /Moriyama Y. // J. of Exper. Biology. 1996. - № 199. - P. 1447-1454.

278. Omokolo Ndoumou, D. Histochemistry of K+ stimulated and Mg++-dependent phosphatases in corn roots /Omokolo Ndoumou D., Dekegel D., Neirinchx L. //Bull. soc. roy. bot. Belg. - 1986.- Vol. 119. - № 1. - p. 101-106.

279. Palmgren, M.G. Proteolytic activation of plant plasma membrane FT-ATPase by removal of a terminal segment /Palmgren M.G., Sommarin M., Larsson C. // J. Biol. Chem. 1990. - Vol.265. - P.13423-13426.

280. Pant and human neurophil oxidative burst complexes contain immunologically related proteins /Dwyer S.C., Legendre L., Low P.S., Leto T.L. // Bio-chim. biophys. acta. 1996. - Vol.1289. - P.231-237.

281. Phosphorylation of Thr-948 at the С terminus of the plasma membrane FT1-ATPase creates a binding site for the regulatory 14-3-3 protein / Svennelid F., Olsson A., Piotrowski M. et al. //Plant Cell. 1999. - Vol.11. - P.2379-2391.

282. Plant cell pH-static circuit mediated by fusicoccin-binding proteins / Drabkin A.V., Trofimova M.S., Smolenskaya I.N. et al. // FEBS Lett. 1997. -Vol.405. - P.145-147.

283. Plasma membrane FT1-ATPase in maize roots induced for NO3" uptake / Santi S., Geraldine L., Pinton R. et al. //Plant Physiol. 1995. - Vol.109. - P. 12771283.

284. Portillo, F. Regulation of plasma membrane H+- ATPase in fungi and plants /Portillo F. // Biochimica et Biophysica Acta. 2000. - Vol.1469. - P.31-42.

285. Potassium channel activation in response to low doses of irradiation involves reactive oxygen intermediates in nonexcitatory cells /Kuo S.S., Saad S.S., Koong A.C. et al. //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1993.- Vol.9. -P.908-912.

286. Prasad, Т.К. Acclimation hydrogen peroxide and abscisic acid protect mitochondria against irreversible chilling injury in maize seeding /Prasad Т.К., Anderson M.D., Stewart C.R. //Plant Physiol. 1994. - Vol.105. - P.619-627.

287. Price, G.D. Cytochemical localisation of ATPase activity on the plas-malemma of Chara corallina /Price G.D., Whitecross M.S. //Protoplasma 1983. -Vol. 116, №1. - P. 65-74.

288. Rea, P.A. Tonoplast energization: Two H+- pumps, one membrane /Rea P.A., Sanders D. //Physiol, plantarum. 1987. - Vol. 71 - P. 131-141.

289. Rogers, K.M. Lipid peroxidation is a consequence of elicitor activity / Rogers K.M., Albert F., Anderson A.J. //Plant Phisiol. 1988. - Vol.86. - P.547-553.

290. Role of extracellular peroxidase in the superoxide producion by wheat root cells /Minibayeva F.V., Gordon L.K., Kolesnikov O.P., Chasov A.V. // Protoplasma. 2001.- Vol.217. - P.125-128.

291. Roles of higher plant K+ channels /Maathuis F.J., Ichida A.M., Sanders D., Schroeder J.I. // Plant Physiol. 1997 - Vol.114. - P. 1141-1149.

292. Sanders, D. Communicating with calcium / Sanders D. Brownlee C., Harper J.F. // Plant Cell. 1999. - Vol. 11. - P. 691-706.

293. Slayman, S.L. The plasma membrane ATPase of Neurospora: a proton pumping electroenzyme /Slayman S.L. //J. Bioenerg. Biomembr. 1987. - Vol.19. -P.l-20.

294. Spanswick, R.M. Jhe membrane potential of Nitella translucens /Spanswick R.M., Stolarek J., Williams E.J. //J. Exp. Bot. 1967. - Vol. 18. - P. 1-16.

295. Stossel, P. Cytochemical staining and in vitro activity of acid trimeta-phosphatase in etiolated soybean hypocotyls /Stossel P., Lazarovits G., Ward E.W.B. //Can. J. Bot. 1981.-Vol. 59, № 8.-P. 1501-1508.

296. Stress signaling in plants. A mitogen-activated protein kinase pathway is activated by cold and drought /Jonak C., Kiegerl S., Ligterink W. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol.93. - P. 11274-11279.

297. Sze, H. Vacuolar H*- translocating ATPases from plants: structure, function and isoforms /Sze H., Ward J.M., Lai S. // J. Bioenerg. Biomembr. 1992. -Vol.24. - P.378-381.

298. Tandler, B. Improved uranyl acetate staining for electron microscopy / Tandler B.//J. Electron. Microsc. Techn. 1990.- Vol.16. - P.1505-1517.

299. The 14-3-3 protein interacts directly with the C-terminal region of the plant plasma membrane FT- ATPase /Jahn Т., Fuglsang A.T., Olsson A. et al. // Plant Cell.- 1997.- Vol.9. P.1805-1814.

300. The 14-3-3 proteins associate with the plasma membrane H*-ATPase to generate a fusicoccin binding complex and a fusicoccin responsive system / Bauns-gaard L., Fuglsang A.T., Jahn T. et al. // Plant J. 1998. - Vol.13. - P.661-671.

301. The nature of proton-translocating ATPase in maize roots /Tu S.-I., Loper M.T., Brauer D., Hsu A.-F. //J. Plant Nutr. 1992. - Vol. 15. - P.929-944.

302. The plasma membrane ATPase from maize roots in phosphorilated in the C-terminal domain by a calcium dependent protein kinase / Camoni L., Fullone M.R., Marra M., Aducci P. // Physiol, plant. 1998. - Vol.104. - P.549-555.

303. The plasmalemmal control center model /Ding J.P., Jens J.S., Pont-Lezica R.F., Mc Nally J.G. //Int. Bot. Congr: Abstr. 15- th. Congr. /Yokogama, 1993. -P. 83.

304. Tian Guo-wei. Ultracytochemical localization of ATPase activity in the degenerating nucellar cells of wheat during degeneration /Tian Guo-wei, Shen Jia-heng. //Acta bot. sin. 1996. - Vol. 38 (2). - P 100-104.

305. Tu, S.-I. Mechanistic investigation on the temperature dependence and ingibition of corn root plasma membrane ATPase /Tu S.-I., Sliwinski B.J. //Arch. Biochem. Biophys. -1985. Vol.241. - P.348-355.

306. Ultrastructural analysis of cytomembrane injury by electron histochemi-cal procedures / Asano G., Yajima G., Oquro T. et al. // Electron Microsc.: Mat. 10 Int. Congr. /Hamburg.- Frankfurt / M., 1982. Vol 3. - P. 311-312.

307. Van Steveninck, P.F.M. The verification of cytochemical tests for ATPase activity in plant cells using X-ray microanalysis /Van Steveninck P.F.M. // Pro-toplasma. 1979. - Vol. 99. - P. 211-220.

308. Venable, J.H. A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy /Venable J.H., Coggeshall R.A. // J. Cell Biol. 1965. - Vol.25. - P.407-408.

309. Vuletic, M. The effect of metabolic inhibitors on the trans-root electrical potential differece of excised maize roots /Vuletic M., Vucinic Z. // J. Plant Physiol. -1996-Vol. 147.-P. 691-696.

310. Wachtstein, M. Histochemistry of hepatic phosphatases at a physiologic pH /Wachtstein M., Meisel E. //Amer. J. Clin. Path. 1957. - Vol 27. - P. 13-23.

311. Walker, D.J. Photassin homeostasis in vacuolate plant cells /Walker D.J., Leigh R.A., Miller A J. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 10510-10514.

312. Winter-Sluiter, E. Cytochemical localization of K+-stimulated adenosine triphosphatase activity in xylem parenchyma cells of barley roots /Winter-Sluiter E., Lauchli A., Kramer D. //Plant Physiol. 1977. - Vol. 60, №6. - P. 923-927.

313. УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ К ФОТОГРАФИЯМ1. В вакуоль;1. АГ — аппарат Гольджи;1. КС — клеточная стенка;1. ЛК липидная капля;1. М митохондрия;

314. НСО неспецифический осадок;1. Пл плазмалемма;1. Плд плазмадесма;1. Р рибосома;1. СО специфический осадок;1. Т тонопласт;1. Хр хроматин;1. ЦВ центральная вакуоль;

315. ЭПР эндоплазматический ретикулум;1. Я ядро;1. Ядр ядрышко;1. ЯМ ядерная мембрана.

Информация о работе

Чернышева, Фанзиля Абузаровна
кандидата биологических наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.12

Диссертация

Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Локализация АТФ-азной активности, дыхание и ультраструктура клеток корней пшеницы при модификации ионной проницаемости плазмалеммы - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы