Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Липиды крови, головного мозга, мочи и желчи при скрепи овец

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Липиды крови, головного мозга, мочи и желчи при скрепи овец"

о'I.

Ч)п

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СШ>(Ж0Х03ЯИ(ЯВЕ11ШХ 11АУК ( Р4СХН )

Всесоюзный научно-исследовательский институт экспериментально!! ветеринарии им. Я.Р.Коваленко ( ВКЗЗ )

На правах рукописи

ТОКСЕИТОВА Рабига Альбеновна

ЛШЩИ КРОВИ, ГОЛОВНОГО МОЗГА, МОЧИ И 1ЕИИ ПРИ СКРЕПИ ОБЩ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ'

диссертации на соиокание ученой степени кандидата' биологических наук

Москва - 1993 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно - исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор В.Ф.1ШЯКОВ; лауреат премии Совета Министров СССР, доктор ветеринарных наук, профессор В.А.ШУБИЦ

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, действительны!! член Нью-йоркской академии 'наук США, доктор биологических наук, • профессор А.П.ПРОСТЯКОВ, кандидат биологически наук Я,.А .МАКАРОВА

Ведущая организация - Всероссийский научно- исследователь-опий институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных

по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии по адресу: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ. С диссертацией г.:о;:шо ознакомиться в библиотеке В11ЭВ. - . :

в -/V ч. на заседав специализированного совета Д.020.28.02

Автореферат разослан

Учении секретарь Специализированного совета, кандидат биологических наук

Г.А.Трондаяа

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние годы внимание исследователей многих стран мира привлекают, так называемые, медленные инфекции животных и человека вирусной и невыясненной этиологии.

Из них особое ветеринарное значение имеет окрепи овец. Высокая - до 100$ смертность заболевших животных (Г.Ф.Коромыслов с соавт.,1981; 1988); крайне длительная и затруднительная диагностика, отсутствие иммунитета, средств специфической профилактики и лечения делают это заболевание весьма опасным с эпидемиологической, эшзоотологической и экономической точек зрения.

В связи с последними открытиями в области этиологии этой болезни у овец и возможного риска заражения человека проблема скрепи стала общебиологической (В.А.Зуев, 1988).

Литература по скрепи в основном представлена работами по изучению физико - химических свойств, химической природе ( S.Eruainer, 1982; B.C.Gajdusak, ISS5; M.Olaxka, 1965), устойчивости к различным физико - химическим воздействиям ( S.Pruainer, 1984; H.H.Kinborlia,I982), а также клини-чеокого проявления и патогиотологическим изменениям у большее животных ( i.stamp, 1980} Oh.lahr, 1980; В.А.Щгбин и соавт., 1991; В.С.Суворов, 1987; Н.И.Архшюв и соавт.,1987).

Патогенез окрепи изучен недостаточно. Установлено, что основная роль в генезе болезни отводатоя лимфоидаой ткани, подчелюстным слюнным железам и центральной нервной системе ( O.îl.Bklund, R.O.Kanudy, w.i.Hailow, 1967 и др.). Возбудитель концентрируется в головном мозга и шд его воздействием происходит гипертрофия и пролиферация астроцитов, что обусловливает нарушение их функции по обеспечению гомеостаза нейронов. Это в свою очередь приводит к дистрофическим изменениям и вакуолизации нейронов, сопряжению: с дисфункцией нервных клеток ( A.HJCimberlin, C.A.Ífaltar, 1980).

Выяснено, что инфекционность агента скрепи находится в тесной взаимосвязи о мембраной клеток ( Dees о et al, 1986). Известно, что в структурной организации и функциональной деятельности мембран клеток важную роль выполняют липиды. В частности, они определяют вязкость, состояние рецепторов и ионных каналов, активность мембраносвязаняых ферлентов клеток (Е.Б.Бур-лакова с соавт.,1987; Л.С.Бикбулатова с соавт.,1990). Известно

также участие лшшдов в энергетических, пластических и регуля-торных процессах органов и организма в целом, а также в передаче нервных импульсов ( А.-А.Алиев, 1980| Н.Е.Кучеренко, 1985 и др.).

Важнейшим компонентом липидов, определяющим их физико -химические свойства и функциональные особенности, являются тарные кислоты (Е.М.Крепс, 1967). Нарушения процессов распада и синтеза жирных кислот находятся в сопряженности о проницаемостью клеточных мембран, что отражается на обмене веществ.

В литературе нет сведений по изучению обмена лшшдов, их роли в патогенезе скрепи у овец. Имеются отдельные сообщения о биохимических исследованиях головного мозга больных скрепи овец, касающиеся синтеза РНК и ДНК ( D.Mould et al., IS67; H.H.Kimberlin,

G.Hunter, 1965; R.H.KXmberlin, IS69), содержания протеинов и свободных аминокислот (D.Mould et al., 1967; H-Xasting und Q.Darcel, 1963; S.Slater, 1965), активности ряда лизо-оомкнх энзимов (o.Milleon, G.Huntaï 1965; Slater 1965; H.H JClmberlixi, 1969; Buenirg, Gistafse, 1970).

В связи о вышеизложенным, актуальным являлось изучение влияния возбудителя скрепи на обмен липидов и взаимосвязь с развитием патологического процесса при скрепа овец.

Целью работы явилось изучение содержания общих липидов, количественного и качественного состава классов липидов в крови и.плазме крови в динамике болезни, в головном мозге, желчи, моче и с од ерша»! ом тонкого отдала кишечника, а также определение жирно-кислотного состава липидов головного мозга больных скрепи овец.

В связи с этим в задачи исследований входило:

- определить содержание общих липидов, классов липидов в различных отделах головного мозга, желчи, моче, содержимом тонкого отдела кишечника больных скрепи овец;

- изучить динамику уровня общих липидов, качественного и ' количественного состава классов липидов в крови и плазме крови больных скрепи овец в процессе развития болезни;

- определить жирнокислотный состав общих липидов различных отделов головного мозга больных скрепи овец.

Научная новизна. Впервые проведены исследования и получены данные по содержанию метаболитов обмена липвдов в крови и плазме крови больных скрепи овец в динамике инфекционного процесса, а также в моче, желчи, содержимом тонкого отдала кишечника.

Впервые определен состав классов липвдов и тарных кислот общих липвдов в отделах головного мозга здоровых и «Зольных скрепи овец романовской породы.

Практическая значимость работы. Материалы диссертации уточняют и расширяют представления о патогенезе скрепи у овец, дают предпосылку для разработки методов прижизненной диагностики болезни, а также возможности прогнозировать течение болезни.

Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены и обсуждены на: заседании Московского отделения Всесоюзного биохимического общества при АН СССР ( Москва, ноябрь, 1991г.), научной конференции БШШВВиМ "Вопросы ветеринарной ви- . русологии, микробиологии и эпидемиологии" (г.Покров, 1992г. ), заседании Ученого совета ВИЭВ (5 августа 1993 г.).

Публикация результатов исследований. ■ По материалам диссертации опубликовано 4 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора ■ литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, сведений о практическом использовании результатов исследований, списка литературы. Работа содерзсит 22 таблийц и 43 рисунка . Список литературы включает 175 источников, из кот орле 66 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Работа выполнена в 1990 - 1993 годах в секторах гпотобиодогии, патоморфологии ВИЭВ, совхозе "Волга" Кимрского района, на мясокомбинате г.Кимры Тверской области.

Исследования проведены на овцах романовской породы, подобранных по принципу аналогов, кормление, уход и содержание всех групп животных были одинаковыми.

Работа была выполнена на одних и тех яе овцах в комплексе о аспирантом Н.Т.Токсеитовым, изучавшим патоморфологию, цитохимические изменения, вопросы патогенеза и иммуногенеза.

В' августе 1990г. проведены клинике - морфологические и биохимические исследования 17 овец о симптомами поражения центральной нервной системы. В конце наблюдений овцы были подвергнуты убою, от них был взят патологический материал для постановки диагноза о применением патоморфологическюс и гистологических

методов, а галке проведены биохимические исследования мозговой ткани.

Для изучения основных компонентов обмена липидов в дрови (Зольных скрепи овец в динамике болезни, выявления связей между отдельными классами липидов в мозге, желчи, моче и содержимом тонкого отдела кишечника, а также выяснения возмозшости исполь- -зовакия результатов исследований в качестве биохимических тестов были сформированы 2 подопытные группы животных с начальными клиническими признаками болезни (обвислость ушей, слабая атаксия, повышенная возбудимость, скрехет зубами и др.): первая -летом 1991 г., вторая - летом 1992 г., соответственно 5 и 6 овец в каждой. Параллельно били подобраны контрольные (условно здоровые) группы животных по 5 и 4 овец в каждой. Исследования проводили в течение 60 суток до легального исхода животных или вынужденного убоя в атональном состоянии. В подопытных группах овец исследовали через 5 дней, в контрольных - 30. Сразу после гибели или вынужденного убоя от животных брали патологический материал для окончательной постановки патогистологического диагноза, а головной мозг, желчь, содержимое тонкого отдела кишечника и мочу для проведения биохимических исследований. Животные контрольных групп также были убиты в конце опыта.

Кровь от овец брали в одно и то не время - утром до кормления.

Материалом исследований для определения обидах липидов, классов липидов, состава жирных кислот служили кровь, плазма крови, головной мозг, желчь, моча, кишечное содержимое, а для исследования на инфицированность висна-мэди - сыворотка крови.

Диагноз и дифференциальный диагноз на скрепи был установлен на основа эпизоотологических данных, клинических признаков болезни и результатов патогистологического исследования. Патогистолси-гичаский диагноз бьи поставлен заведующим сектором патоморфоло-гии, доктором ветеринарных наук, профессором В.А, Шубиным.

Для получения объективных результатов проведены параллельные исследования. От каждого исследуемого материала брали две равные по весу или объему пробы, а при анализе различных отделов мозга дополнительно учитывали также и место взятия проб.

При выполнении работы были использованы следующие методы: I) экстрагирование и определение общих липидов по методу Д Ро£сЬ (1957); 2) количественное соотношение классов липидов методом

тонкослойной хроматографии на пластинах " Siíu-ft^", 0 последующим проявлением 5* спиртовым раствором фосфорно-молибденовой кислоты и денситометриэй; 3) определение состава жирных киолот липидов головного мозга методом газожидкостной хроматографии; 4) серодиагностика на висна-мэди - реакцией дщфузной преципитации в агаровом геле (реакция проведена совместно о Марийским отделом НИШ Нечерноземной зоны Российской Федерации).

Все полученные данные обработаны методом вариационной статистики по Г.Ф.Лакину (1980). Достоверность результатов определяли по таблицам Стыедента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Динамика изменений содержания общих липидов (ОЛ) и классов липидов в крови и плазме крови больных скрепи овец

Результаты проведенных нами исследований по определению содержания ОЛ и классов липидов в крови больных скрепи овец представлены на рисунке I.

И3 риоунка видно, что в период появления начальных симптомов скрепи: слабая атаксия, обвислооть ушей, скрежет зубами (первые пять суток клинико-морфологической отадаи болезни) содержание ОЛ в крови больных овец было на 2,1 - 1,0!? меньше в сравнении о контрольными животными. В последующем (до 40 суток исследований) количество СЛ в крови больных скреш овец на 12,5 -51,7$ превышало значения у здоровых животных. В это время у овец отмечали выраженные симптомы поражения центральной нервной системы (ЦНС) - повышенная возбудимость, нарушение координации движения, начальные признаки пареза у отдельных животных. Начиная с 45 суток и до конца опыта (терминальная стадия), уровень ОЛ был на If9 -.42,2!? меньше, чем у контрольных животных. В плазме крови больных скрепи овец содержание ОЛ в начале исследований было на 34,0$ больше, чем у здоровых животных. Затем этот уровень стал уменьшаться, а с 25 суток и до конца исследований он был на П#2 - 67,5$ меньше, чем в контроле.

Методом тонкоолойной хроматографии на силуфоловых пластинах установлено, что в период появления первых клинических признаков скрепи в крови больных овец содержание фосфолипидов (М), неэоте-рифицированных жирных киолот (НЭШ) и триглицеридов (ТТ) было

и

400

300-

200-

100-

50.

40-

30

20

10

П ? >

Г .}

* г * / / *1

'» г 1 ч.

* • - ■ I ■ »а I ■

I 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 60 дни исследований

Рас. I. Динамика изменений содержания 01 г классов лишвдов в крови больных., скреш овец

Условные обозначения: больные овцы здоровые

ОЛ и» : л»о<*»о

ЭХ .......—

ФЛ <-

НЭНК

ТГ ---

СХ о*—**

ДГ

соответственно на 10,5, 80,0, 28,3$ больше, а свободного холестерина (СХ) и его эфиров (ЭХ) соответственно на 34,0 и 14,2$ меньше, тогда как в плазмо крови уровень СХ, ЗХ и НЭЖК бил соответственно на 149,4, 19,4 и 723,2$ больше, а ФЛ и ТГ соответственно на 3,2 и 20$ меньше, в сравнении со значениями аналогичных показателей у здоровых овец.

В период усиления тяжести клинического проявления заболевания и до терминальной стадии в крови больных скрепи овец установлено повышенное содержание ФЛ, НЭКК, ГГ, СХ и ЭХ по отношению к контрольным животным. Максимальные значения данных классов липи-дов установлены: на 10 сутки у НЭКК (566,7$), на 15 сутки - у ФЛ-(209,4$) и ТГ (189,2$), на 30 сутки у СХ (162,3) и ЭХ (152,6$). Одновременно в плазме'крови количество СХ, ЭХ и ФЛ было меньше, а НЭЖК и ТГ больше, чем у здоровых овец.

В терминальной стадии клинические симптомы болезни усугубляются, что свидетельствует о более глубоких нарушениях структуры и функции центральной нервной системы. В этот период в крови больных скрепи овец содержание ФЛ, НЭКК, ТГ, СХ и ЭХ было меньше, чем у здоровых животных, а на 60.сутки исследований их' величины составили: в крови ФЛ - 59$, НЭКК - 60,7$, ТГ - 55,9$, СХ - 55,8$, ЭХ - 57,0$, в плазме ФЛ - 44,3$, НЭНК - 25,5$, ТГ - 26,8$, СХ -18,7$, ЭХ - 25,2$ от уровней аналогичных показателей здоровых овец.

. Было установлено, что в кропи и плазме крови контрольных овец класс диглицеридов (ДГ) на хроыатограмыэ но выявлялоя. У больных скрепи животных в период начальных нлиничеоких пр1знаков болезни как в крови, таи и в ее плазме данный класс липидов был идентифицирован. В последующем, о усилением тяжести симптомов инфекции уровень Ж повышался до 15 суток исследований (4,6 мг$ в крови и Э,ЗЮ,4 мг$ в плазме от уровней ОЛ), а затем, постепенно уменьшаясь, на хроматограммах.нэ проявлялоя о 35 суток в крови и с 45 суток в плазме крови.

Содержание ОЛ и классов липидов в различных отделах головного мозга больных скрепи овец

Результаты исследований головного мозга больных и здоровых овец предотавлены в таблице I.

Нами определено содержание ОЛ в различных отделах головного мозга здоровых овец: продолговатый мозг - 16,2+1,0 г$, мозжечок -четверохолмие - 12,5+1,1, большие полушария - 9,5+1,0

Таблица I

Содержание 01 и классов липидов в головном мозге больных скрепи (и =14) и условно здоровых ( я,!=10) овец ( М+т, ; х-РР* 0,05)

Классы липидов ! . 0 им» голо В Н 0 г с ) мозг а

! продолговатый мозг! мознечок ! четверохолмие ! большие полушария

!усл.здор.!больные ! овцы ! ¡усл.здор. ! овцы !больные 'усл.здор! ! оецк- ! больные ¡усл.здор.! ! овщ ! больные

0<5щие липиды 16,2+1,0 14,1+0,3 П.2+0,4 8,8+0,8 12,5+1,1 13,5+0,5х 9,5+1,1 8,7+0,6

* 100 87.0 ■ • 100 "• 78,6' 100 - ' 108 юо- 90,6

Фосфолипиды 7.4 +0,1 7,5 +0,5Х : 4,7 +0,5- 4,3+0,4х 5,1 +0,6 6,8 +0,6Х 4,5+0,1 4,4+0,3

% 100 101,3 100 • 91,5 100 • 133,4 100- • 97,3

Свободный 3,3 +0,5 2,2 +0,1 3,0 +0,5 0,9+0,1 3,1+ 0,5 2,0 +0,3 2,0+0,4 1,2+0,09

холестерин % 100 66,7 100 30,0 Ю0~ 64,5~ юо" 60,0

Эфиры холео- 1,5 +0,3 1,3 +0,1 1,0+ 0,2 1,4+0,3х 1,2+ 0,09 1,9+0,2 0,8+0,2 1,4+0,03

торина % 100 86,7- ' юо" ■ 14070 • 100- • • 15873 Ю0~ 125;0

Диглицериды 0,2 +0,06 - 0,1+0,03 0,02+0,03 - 0,1+0,05

Триглицерида 1,5 +0,2 0,9+0,1 0,7+0,3 ' 0,5+0,1 0,9+0,3 0,8+0,1 0,6+0,2 0,4+0,04х

* 100 - 60,0 1С0~ • - 71,4 • 100- ' 88,9 • юо~- 66,7

Неэстерифици- 2,3 ±0,5 2,2+0,5х 1,7^0,06 1,8+0,4х 2,0+0,3 ' 2,0+0,3 1,5+0,3 1,6+0,2

рованнне жир- ■ - . . - ■ ... . - . - ...

вые кислоты % 100 .95,6 100 105,9 100 • 100 100 106,7

В аналогичных отделах головного мозга больных скрепи животных уровень ОЛ отличался. В продолговатом мозге он был на 12$, мозжечке - на 21,4, в больших полушариях - на 9,4# меньше, а в четверохолмии - на В% больше. Наибольшие количественные изменения в содержании ОЛ установлены в продолговатом мозге и мозжечке.

По данным Н.Т.Токсеигова,в этих отделах головного мозга больных скрепи овец выявлены основные гистологические изменения -дистрофия нейронов, в том числе массовая вакуолизация.

Из результатов исследований следует, что содержание классов липидов в различных отделах головного мозга здоровых овец неодинаковое, и при скрепи оно изменяется в различной степени. Уста- . новлено, что у убитых в конце терминальной стадии болезни овец количество ФЛ в четверохолмии (на 33,4$), НЭ2К в мозжечке (на 5,9) и в больших полушариях (на 6,7), ЭХ в мозжечке (на 40), четверохолмии (на 58,3) ив больших полушариях (на 25,С$) быдо больше, чем данных классов липидов в аналогичных отделах мозга здоровых животных. В то яе время пониженным уровнем характеризовались следующие классы липидов: в продолговатом мозге - СХ (на 33,3$), ЭХ(на 13,3), ТТ (на 40), НЭЕК (на 4,4$); в мозжечке - ФЛ (на 8,5?), СХ (на 70), ТГ (на 28,6); в четверохолмии -СХ (на 35,5), ТГ (на 11,1) и в больших полушариях - ФЛ (на 2,7), СХ (на 40), ТТ (на 33,3$) в сравнении о мозгом контрольных овец.

. При анализе количества СХ и ЭХ в различных отделах мозга больных скрепи овец была установлена законамерность, заключающаяся в уменьшении уровня СХ и увеличении уровня ЭХ.

Было установлено, что в различных отделах головного мозга здоровых животных количество ДГ находится в пределах 0,1 - 0р2х£-от уровня ОД, а в мозге больных скрепи овец данный класо липидов не выявлялся.

Содержание 01 г классов липидов в желчи, ыоче и содержимом тонкого отдела кишечника больных, скрепи овец .

Результаты по определению содержания ОЛ и классов липидов в желчи, моче и содержимом тонкого отдела кишечника больных скрепи овец отражены на рио.2 и в таблице 2.

Из рисунка видно, что уровень ОЛ в желчи и ыоче больных окреш овец соответственно был ва 105 и 229,больше, а в содержимом тонкого отдела кишечника на 74,55? меньше, чем у здоровых животных.

Из данных, представленных в таблице 2, следует» что увеличение уровня всех классов липидов установлено в моче и желчи, а уменьшение их содержания - в тонном отделе кишечника больных скрепи овец. Так, в моче содержалось ОД - 322?, СХ -190$, ЭХ - 338,0$, НЭ2К - 378,6$, ТГ - 263,0$, ДГ - 212,0$. В желчи их величины аоставили: Ш - 230,СХ - 157$, ЭХ - 436$, ТГ - 115$, ДГ - 389$. Уровень НЭЖ (¡ал на 2,2$ меньше, чем у контрольных животных.

В тонком отделе кишечника било ФЛ на 75,1$, СХ - на 79,3$, ЭХ - на 35,3$, НЭ2К - на 90,5$, ТГ - на 40,9$? и ДГ - на 28,8$ меньше, в сравнении о содержимым тонкого отдела кишечника здоровых овец.

Таблица 2

Содержание ОЛ и классов лшшдов в желча, моче и содержимом тонкого

отдела кишечника больных скрепи овец (М+/??щ$, х - Р?"0,05) П-5

классы !: дшнадов

е л ч ь

I

Моча

I Содерявмое тонкого отдела !_кизечлика_

(больные овцы! % Г здоров.¡больные овцы! % !здоров, ¡больные овцы! % ¡здоров.

> 1 - и 665,4+24,8 230 289,2+43 87,9*2,4 322 27,3+0,3 207,4+10 24,9 833,6+94,8

и 42,4+1,7 157 27,0±4,7 1,9+0,2 190 1,0+0,3 '5,8+0,2 20,7 28,0+5,5

.эх 66,8^6,8 436 15,3*2,5 31,1+1,8 338 7,8^2,2 43,6+1,7 64,7 67,4^7,9

: ТГ • 41,0+3,7 П5 35,6+4,0 "7,1±0,6 263 2,710,5 19,5+0,9 59,1 33,011,1

: да 14,041,1 389. 3,^0,2 /Х.ЭДОб 212 0,8+6,2 '7,9+0,3 71,2 П,1±2,8

НЭНК 62,9±7,2* 97,8 64,3+10,6 5,3+0,6 378 1.4+0,3 20,811,0 9,5 218,6+33

м

Еирнокислотный соотав ОЛ различных отделов головного мозга больных скрепи овец

Нами установлено, что во всех отделах головного мозга здоровых овец содержание ненасыщенных жирных кислот несколько больше, чем насыщенных, за исключением больших полушарий, где их количество было меньше, что подтверждается данными других авторов (таб. 3).

Исследования головного мозга больных скрепи овец, показали, что в липидах продолговатого мозга, мозжечка и больших полушарий количество ненасыщенных мирных кислот больше, а в четверохолмии меньше, чем насыщенных.

Бри сравнительном анализе результатов по количеству насыщенных и ненасыщенных жирных кислот липидов головного Мозга здоровых и больных овец выявили определенные различия.

£ продолговатом мозге, мозжечке и четверохолмии больных скрепи животных количество насыщенных жирных кислот увеличилось соответственно на 12,2$, 1,6$ и 9,7$, а ненасыщенных уменьшилось на 9,4$, 1,4$, 9,4$ в сравнении с данными показателями аналогичных отделов мозга контрольных овец. В больших полушариях уровень насыщенных жирных кислот был на 17% меньше, а ненасыщенных на 18,4$ больше, чем у здоровых животных.

Для объективной оценки характеристики уровня жирных кислот липидов головного мозга нами был использован индекс насыщенности, отражающий отношение насыщенных к ненасыщенным (рис. 3). Из рисунка видно, что в продолговатом мозге больных скрепи овец индекс насыщенности был на 21,7$, а в четверохолмии на 22,1$ больше, чем в этих отделах мозга контрольных животных. В больших полушариях он был на 30,3$ меньше.

Анализ жирнокислотного состава 01 различных отделов голов-* ного мозга здоровых овец показал, что по количеству основными являются пальмитиновая 16:0, стеариновая 18:0, олеиновая 18:1 и нервоновая 24:1. жирные кислоты. В головном мозге больных скрепи овец эта закономерность сохраняется . Однако выявлено изменение в содержании отдельных жирных кислот (таб. 4).

В продолговатом мозге количество пальмитиновой кислоты увеличилось на 49,7$, а стеариновой, олеиновой и нервоновой уменьшилось соответственно на 2,1$, 26$, 39,6$. Среда других жирных кислот увеличилось содержание миристиновой 14:0 (на 67$), миристолевой 14:1 (на 450$), пальмигодеиновой 16:0 (на 71,9$),

Таблица 3

Содержание насыщенных и ненасыщенных жирных кислот в липидах головного мозга больных окрепи овец (М+ге 5?,/1=4, £<0,05)

! Насыщенные жирные ! _кислоты

Отделы

головного ,--■---

мозга овец больные овцы!усл.здоров.;больные овцы!усл.здоров.

! Ненасыщенные ;глрнке ' кислоты

Продолговатый 45 73+1 3 40,77+0,4 54.27+0,8 59,23±0,7

мозг $ 112,2- 100 - 90.6 • 100

Мозжечок 46,87+1,2 46,17+0,9 53,13+0,5. 53,83+0,8

* 101,б" 100" "" 58,6 100 ' * ■.

Четверохолмие 53,60+1 0 * — 1 48,84+0,8 46,4040,7 51,16+0,3

% 109,7'.' 100 " 90,6 " 100 . "

Большие 43,31+0,9 52,14+0 7 » — > 56,69+0,8 47,86+0,4

полушария % 83,0* " " 100 " 118', 4' юо -

30 20 Ю 100$-

10

20.

й

а - продолговатый • мозг

й - мознечок

в - четверохолмие

г - большие полушария

Рис. 3. Изменение индекса насыщенности липвдов

различных отделов головного мозга (Зольных окрепи овец

Таблица 4

Состав и содержание жирных кислот в липидах головного мозга больных скрепи овац (М+л» 4, Р^-0,05)

- Отделы головного- мозга овец

Жирные кислоты

| продолговатый мозг I

мозжечок

четверохолмие

! большие полушария-

здоровые ¡больные ! здоровые ! больные I здоровые Гибельные ¡здоровые ¡больные

14:0 Мириотиновая 0;33+0,03 0,55+0,02 , 14:1 миристолевая 0^1^0,01 , 0,4&Ю,05 ; 16:0 пальмитиновая 9,36+0,6' 14,01^,-О 16:0изо изопальыитиновая 0^57+0,03 0,54+0^08 16;1 пальмит олеиновая 0,64+0,03> 1,1+0,03 17:0 гептадекановая ■ 0,53+0,01- 0,9^0,03 17:1- гептадецэновая 0,52+0,02 0,81+0,01 18:0 стеариновая ' 18¿74+0,-3 18,34+4,-5 18:1; олеиновая - • 29,16+2,1- 28,41^2,4 18:2 линолевая • 1,25+0,01 1,14+0,02 18:3 линоленовая 6,85+0,03 5,8+0,02 20:0 арахиновая 1,5+0,01- - 0,93+0,0120:2 эйхозадиеновая 0,78+0,03 1,26+0,05 20:4 арахидоновая 3,76+1,0 3,8+1,1 -22:0 бубновая . 3,93+1,3 ' 4,12+1,9 22:1 эруковая 2,74+1,0 3,45±1,2 24:0 лигноцеровая £,07+1,3 8,34±2,0 24:1 нервоновая 13/33+2,'4 8,05+3,1

0,26+0,01 0,34+0,01 0,32+0,01 0,55+0,05 0,46+0,02 0,31+0,04 0,07^0,001 0,1?+ф5 0,1-3+0,01 0,25^01 0,11+0,01 0,17+0,01 14,-44+1 ,-7 15,1+1,-2 1-4,44+1,6 17,7+2,1 1-6,44+1,4 14,44+1,1 0^33+0,06 0,48+0,03 0,51±8,1 0,38^3,01 1,81+0,2 0,31+6,05 0,65*0 • 0,8110,1 • 0,81+0,1 1-,2710,3 1,24+0,2 0,99+0,02 0;3б10,02 0,76^0,02 0,41+0,05 0,8+0,-03 0,54+0,02 0,7£кО,02 0,33±0,05 0,8+0,-04 0,5+0,03 1,13+0,01 0,9%0,03 0,65Т0,01 19,-42+3,-7 10,65+2,8 22,2+1,-3 22,31Д,1 22,84+1»! 1-7,27+3,0 29,4+5,1 27,41+2,0 28,5^1,0 21,71+1,9 30,36+2,3 26,82+3,11,2+0,03 2,09^0,05 0,81+0,01 1,1210,01 1,-43+5,01- 1,82+3,03 5,24+0,014,710,01 4,1&[о,Э - 3,5+0,9 1,31+0,3 7,17+1,2 • 0,71*0,6 0,76+0,2 2,2+8,-9- 1,0710,02 1,54+0,09 0,63к3,01

I,02+0,03 1,05+0,03 0,9+0,03 1,27+0,02.0,87^0,03 1,28+0,04 2,66^3,9 • 2,31+0,3 • 2,03+1,Г 2,7+0,7 - 1,63Л.2 ■ 3,6211,2 5,7812,1 3,12+1,5 4,33+1,5 6,8912,4 5,27+1,1 2,9811,6 3,010,05 2,83+0,9 1,82+0,4 2,1211,1 1,28+0,1 2,26±0,2 4,8711,-3 5,66+1,4 4,43+0,8 4,04+0,8 3,2411-,5 6,64±1,3

II,26+2,1 10,7111,7 11,4410,1 9,8512,3 8,7+1,3 II,91+2Д.

гептадекановой 17:0 (на 69,8), гептадеценовой 17:1 (на 55,8), зйсозадиеновсй 20:2 (на 61;5), эруковой 22:1 (на 25*9$) яир-ных -кислот и уменьшилось содержание незаменимых кирных кислот: линолевой 18:2 (на 8,8%) и линоленовой Й3:3 (на 16,6$).

В мозжечке больных скрепи овец по основным шфным кислотам выявили аналогичные изменения - увеличение пальмитиновой (на 4,655) и уменьшение олеиновой (на 6,8), стеариновой (на 44,2) и нервоновой (на 4,9$) яшрных кислот. Увеличилось количество ми-ристиновой (на 30,8$), миристолевой (на 240), изопальыитиновой (на 45,4), пальмитолеиновой (на 24,6), гептадекановой (на 111,1), гептадеценовой (на 242), эруковой (на 41,5) и лигноцеровой (на 16,2$), а уменьшение содержания бегеновой (на 46,0$) жирных кислот. Содержание незаменимых жирных кислот: линолевой увеличилось (на 74,2$), а линоленовой е араЭсидоновой уменьшилось (соответственно на 10,3 а 13,275),

■В четверохолмии количество пальмитиновой кислоты увеличилось (на 22,6$), а олеиновой и нервоновой уменьшилось (соответственно на 24 и 13,9$). Из незаменимых киршх кислот уровни линолевой (на 38,3$) и арахидояовой (на 31,1) были выше, а линоленовой (на 15,9$) ниже, чем в четверохолмии здоровых овец. Увеличилось также содержание миржзгиновой (на 71,9^), пальмитолеиновой (на 56,8), гептадекановой (на 95,1), гептадеценовой (на 226$), эйхозадиеновой (на 41,1), бегэновой (на 59,1) и эруковой (на 16,5$) лирных кислот, а уменьшилось количество изопальмити-новой (на 25,5) и арахидоновой (на 31,1$),

В больших полушариях установили уменьшение в содержании из основных жирных кислот - у пальмитиновой {на 12,2$), стеариновой (на 24,4), олеиновой (на 11,7); из других идентифицированных жирных кислот - у шристиновой (на 32,6%), изопальмитиновой (на 82,9), гептадеценовой (на 30,1)', арахиновой (на 59,1) и бе-гвновой (на 43,5). Увеличение количества выявили у нервоновой • (на 31,9$), линолевой (на 27,2), лижшэновой (яа 447,3), арахидоновой (на 222,1), миристиновой (на 54), пальмитолеиновой (на 79,8), гептадекановой (на 35,2)k эйхсзадиеновой (на 47,1)» эруковой (на 76,6) и лигноцеровой (на 104,9$) жирных кислот.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты наших исследований показывает, что в организме больных скрепи овец происходят значительные изменения уровня

основных метаболитов обмена липвдов, которые находятся в определенных взаимоотношениях с периодом течения инфекционного процесса и отражают основные этапы патогенеза заболевания.

Выявленная особенность динамики ОЛ в крови овец в начале клинического проявления и в период разгара болезни находится в определенной взаимосвязи с компенсаторной функцией организма, максимальной деструкцией липидов в мембранах клеток организма, а также< возмогло, с иммунологической перестройкой на антигенный раздражитель. Последнее предположение согласуется о результатами НЛ.Токсеитова, выявившего незначительное уменьшение в крови больных животных содержания иммуноглобулинов классов с; и М. , .

В предтерюинальшй и, особенно, в терминальный периоды болезни, в результате нарушения компенсаторных возможностей организма больных животных, происходит параллельное снижение содержания ряда классов лишщов как в плазме, так и в цельной . крови.

Увеличение содержания НЭНК как в плазме, так и в крови больных овец в. периода появления клинических признаков и усиления тяжести'течения болезни указывает, вероятно, на интенсификацию процесса разрушения их комплекса с альбуминами, инги-бировакия их участия в пластических реакциях мозга.

• Накопление триглицерадов в. крови больных скрепи овец в предтерминальный период, видимо, оледует поставить во взаимосвязь со'стрессом, приводящим к уоилению синтеза и выделению катехоламинов, явдяюцихся регулятором липолиза в киррвой ткани, посредством активирования аденилатциклазной системы.

Основными путями выведения липидов из организма больных овец являются моча и желчь, о чем свидетельствуют увеличение количества всех классов липидов в этих экскретах.

Установленные изменения в содержании 01 и классов липидов в продолговатом мозге, мозжечкечетверохолмии и больших полушариях головного мозга больных скрепи овец в терминальной стадии болезни обусловливают нарушение функций этих отделов в результате воздействия возбудителя и взаимосвязанное о этим нарушение обмена вещеотв, проницаемости мембран клеток мозга и гисто-структуряое изменение тканей.

В частности, уменьшение содержания СХ и изменение уровня ОЛ (основных компонентов липопротеидного комплекса клеточных мембран) в различных отделах головного мозга, свидетельствуют о дисбалансе фосфолипид-холестериновых отношений. Повреждения компонентов биоструктур приводят к нарушению свойств и одновременно индуцируют процессы восстановления мембран, чем, вероятно, и объясняется увеличение количества Ф1 в четверохолмии и незначительное в продолговатом мозге, а также увеличение НЭЖК в мозжечке и больших полушариях.

В мозге накапливаются ЭХ, появляющиеся только при патологических изменениях мембран. Еще одной причиной тормозящей процесс восстановления мембран, видимо, является ингибирование синтеза ДГ, участвующих в биосинтезе ФЛ, и способствующих транспорту катионов через клеточные мембраны.

Уменьшение содержания триглицеридов, вероятно, связано о ингибировашем диглицеридов, т.к. они являются промежуточными компонентами в синтезе триглицеридов из моноглицеридов.

Нашими исследованиями установлено, что хшрнокислотный состав липидов различных отделов головного мозга больных скрепи овец подвергается количественным изменениям. Такая особенность является характерной как для насыщенных, так и для ненасыщенных жирных кислот, что, возможно, находит отражение на функциональных отправлениях клеток головного мозга в результате воздействия возбудителя болезни. Дисбаланс в уровне жирных кислот в мозге больных животных, вероятно, находит отражение на физико-химических и функциональных свойствах клеточных мем-.бран, а также,-возможно, токсического влияния на. клетки иммун--ной системы. В связи о этим функционирование иммунной системы организма больных животных, по-видимому, находится в теоной взаимосвязи и отношениях со степенью насыщенности липидов и -уровнем антиоксидантов, способных ингибировать реакции ферментативного пути окисления полиненасвденных жирных кислот.

Исходя из полученных результатов, патогенез скрепи у овец представляется в следующем.

Возбудитель скрепи, попадая в организм овец, размножается в различных его органах, прежде чем его обнаруживают в ЦНС. В головном мозге агент скрепя реплицируется в течение нескольких недель. В результате взаимодействия на липопротеидные ком-

плексы происходит нарушение структуры и функции мембран нервных клеток, обусловливая усиление процесса катаболизма. В результате такого взаимодействия между макроорганизмом и возбудителем болезни происходит нарушение функции головного мозга, обусловливая клиническое проявление заболевания у овец.

В период появления первых клинических признаков скрепи у овоц, в крови уменьшается количество ОЛ, СХ, ЭХ, а в плазме <51, ТГ и одновременно увеличиваются содержание ФЛ, НЭ2К, ТГ в крови и СХ, ЭХ, НЭЕК в плазме. В это время в плазме и крови происходит накопление класса ДГ, который у здоровых овец не выявляется. Отмеченные изменения а метаболизме липидов, по -видимому,, находятся в тесной взаимосвязи с адаптационно-компенсаторной реакцией организма на появление болезни.

В последующем, с усилением тяжести проявления клинических симптомов болезни, в организме больных животных происходит резкое повышение содержания в крови ОЛ и всех клаосов липидов при одновременном уменьшении их уровня в плазме крови. Уровень класса ДГ в этот период болезни понижается до полного отсутствия сначала в крови, а затем и в плазме крови.

В терминальной стадии у больных скрош животных функциональные нарушения ЦКС у отдельных овец проявляются парезом, в основном тазовых конечностей, угнетенным состоянием и иотощэ-нием. В крови и плазме крови содержание 01 и всех классов липидов понижается в оравнении о их уровнем у здоровых животных, что указывает на преобладание в организме процессов катаболизма.

У павших и'вынужденно убитых животных в головном мозге, в большей степени в продолговатом мозге, мозжечке, а в меньшей степени в четверохолмия,обнаруживаются основные патогиотологп-чесше изменения структуры нервных клеток (дистрофия нейронов, массовая вакуолизация), которые находятся в определенной овязи о нарушением обмена вещэств в нервной • ткаш. Одновременно' происходят количественные изменения жирных кислот дщшдов во всех отделах головного мозга, выражающиеся в аналогичных колебаниях уровня основных жирных кислот, а также различной направленностью сдвигов как'замонимых, гак и незаменимых жирных кислот. Индеко насыщенности в продолговатом мозга, мозжечке и четверохолмии выше, а в больших полушариях ниже, по сравнении о индексом насыщенности аналогичных отделов мозга здоровых овец. Выявленная-особенность указывает на происходя-

щие качественные и количественные изменения в структуре липидов.

Следовательно, динамика метаболитов лилвдного обмена у больных скрепи овец находит прямое отражение и взаимосвязь с периодом клинического проявления болезни.

ВЫВОД! .

1. Содержание общих липидов, их иирюкислотного состава и классов липидов в тканях и экскретах больных скрепи овец находятоя в зависимости от степени проявления инфекционного процесса.

2. В крови больных скрепи овец количество общих липидов в начале проявления болезни увеличивается, о усилением симптомов заболевания уменьшается и в терминальный период составляет 57,8% от уровня здоровых овец.

3. В различных отделах головного мозга здоровых овец уровень общих липидов различен: в продолговатом мозге он составляет - 16,£±1,0 г$, в мозкэчке - 11,2+0,4'. 1$, в четверохолмии - 12,5±1,1 г$ и в больших полушариях - 9,5+1,1 г$.

В мозге больных скрепи овец содержание общих липидов изменяется. В продолговатом мозге, мозжечке и больших полушариях их количество соответственно на 13$, 21,4$ и 9,4$ меньше, а в четверохолмии на б$ больше, чем у здоровых животных. •

4. В желчи и моче больных скрепи овец содержание общих липидов соответственно на 105$ и 229,3$ больше, чем в анало-.гичных экокретах здоровых овец. ' . ,

. 5, В' период появления начальных клинических признаков болезни и в последующем, по мере усиления симптомов заболевания,в крови'больных скрепи овец уровень фосфолипвдов, тригли-церидов и неэотерифацированных жирных кислот соответственно на 269$, 89$ и 460$ больше, а в терминальной стадии болезни содеркание этих классов липидов меньше на 44$ (фосфолипиды)., 47$ (триглицериды), 45$ (неэстерифицированные жирные кислоты)., чем у здоровых овец.

6, В начальный период появления клинических признаков болезни содержание свободного холестерина и его эфиров в крови

бальных скрепи овец на 34,0% и 14,2$ меньше, а во время усиления симптомов заболевания соответственно на 81,8$ и 52,4$ (максимальные величины) больше, и перед летальным исходом на 44,2$ и 43$ меньше, чем у здоровых животных.

7. В крови больных скрепи овец, по мере усиления клинических симптомов заболевания, идентифицируется класс дигли-церидов, а в разгар проявления симптомов диглицериды не выявляются. (

8. Установлено, что в различных отделах головного мозга больных скрепи овец происходят значительные изменения в содержании классов лшшдов:

- в продолговатом мозге больных скрепи овец уровень свободного холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, неэо-терифицированных жирных кислот соответственно на 33,3$, 13,3$, 40$ и 4,4$ меньше в сравнении с аналогичным отделом мозга здоровых овец;

- в мозжечке больных овец содержание свободного холестерина, фосфолипидов и триглицеридов на 70$, 8,5$ и 28,6$ соответственно меньше, а эфиров холестерина и неэстерифицированных жирных кислот на 40$ и 5,9$ больше, чем в мозжечке здоровых овец;

- в четверохолмии больных скрепи овец'уроверь свободного холестерина и триглицеридов соответственно на 35,5$ и 11,1$ меньше, а эфиров холестерина и фосфолшгадов на 58,3$ и 33,4$ больше,'чем в аналогичном отделе мозга здоровых животных:;

- в больших полушариях ,больных овец количество, свободного холеотерина и триглицеридов на 40$ и 33,3$ соответственно меньше, а эфиров холеотерина, неэотерифицированных жирных кислот

на 25$ и больше, чем в больших полушариях'здоровых овец.

9. В отделах головного мозга выявлена взаимосвязь изменений между содержанием свободного холестерина и эфиров холеотерина, заключающаяся в. закономерном уменьшении количества свободного холеотерина и увеличением уровня" его ефиров.

10. Во всех отделах головного мозга больных скрепи овец класс диглицеридов не идентифицируется, в то время как у здоровых животных содержание даглицеридов в головном мозге находится в пределах 0,1 - 0,2 '

11. В желчи больных скрепи овец количеотво свободного холестерина, афиров холестерина/ фосфолицидов, триглицеридов,

диглицеридов соответственно на 57, 336$, 130%', 15$, 289$ больше, чем в желчи здоровйх животных.

12. В моче больных скрепи овец уровень всех классов липи-дов: свободного холестерина, диглицеридов, триглицеридов, фос-фолипидов, эфиров холестерина, неэстерифицированных жирных кислот на 90$, 112%, 163$, 222$, 238$, 278$ соответственно больше, чем у здоровых животных.

13. Индекс насыщенности жирных кислот липидов продолговатого мозга и четверохолмия больных овец соответственно на 21,7$ и 22,1$ больше, а больших полушарий на 30,3$ меньше, чем в аналогичных отделах головного мозга здоровых овец.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДПОЕЕНИЯ

1. Результаты исследований по содержанию общих липидов, количественного и качественного состава классов липидов, а также состава жирных кислот общих липидов продолговатого мозга, мозжечка, четверохолмия и больших полушарий головного мозга здоровых овец М017Т быть использованы как критерий нормы в клинической биохимии при изучении медленных инфекций у овец.

2. Отмеченные изменения в содержании диглицеридов в крови, плазме крови, продолговатом мозге, мозжечке, четверохолмии и больших полушариях могут быть использованы при оценке патологического процесса, а также в комплексе диагностических исследований при скрепи овец.

СПИСОК ОПУЫЖОВАНШХ РАБОТ ПО МАТЕРИАЛАМ ' . . . ДИССЕРТАЦИИ .

1, Токсеитова Р^А. Липиды в головном мозге больных скрепи • овец // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии а эпизоотологии / Научная конференция ВНШЗВцМ. Покров. 1992. часть П.

2. Токсеитов Н.Т., Токсеитова P.A. Цитохимические изменения клеток крови и обмен липидов в крови и головном мозге у овец, больных скрепи // Проблемы патоморфологии, патогенеза, диагностики и профилактика болезней / Всероссийская научно-методическая конференция по патологической 'анатомии сельскохозяйственных животных ВГА7 им.Г.Д. Глияки. Воронеж. 1993.

3. Токсеитова P.A.,Поляков В.Ф. Классы лшшдов в головном мозге больных скрепи овец. // Бюллетень ВИЭВ, 73-80.1993. (В печати).

4. Токсеитова P.A., Поляков В.Ф. Содержание общих липи-дов и классов холестерина в головном мозге больных скрепи овец.// Бюллетень ВИЭВ, 79-80. 1993.(В печати).

Подписано в печать U>. №. 199? г.

МАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ «ПЕТИТ»

Зак. 9fl Тир. /00