Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Лиганды адренорецепторов - модуляторы клеточного мутагенеза

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Лиганды адренорецепторов - модуляторы клеточного мутагенеза"

На правах рукописи

РГВ од

2 5 Ш ?пт

Гайнуллина Миляуша Якубовна

ЛИГАНДЫ АДРЕНОРЕЦЕПТОРОВ — МОДУЛЯТОРЫ КЛЕТОЧНОГО МУТАГЕНЕЗА

Специальность: 03.00.04. —биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2000

Работа выполнена на кафедре генетики Казанского государственного университета и на кафедре медицинской биологии и генетики , Казанского государственного медицинского университета.

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Барабанщиков Б.И., доктор медицинских наук, профессор Семенов В.В.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Дурнев А.Д., кандидат биологических наук Зобов В.В.

Ведущая организация: — Институт биофизики и биохимии КНЦ РАН

Защита состоится «ДЗ » Ш^л^ЬеЯ- 2000 г. в час на заседании Диссертационного совета'К.053.29.19. при Казанском государственном университете им. В.И. Ульянова-Ленина, 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, 18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского государственного университета..

Автореферат разослан О&япсЛР1^ 2000 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета,

кандидат биологических наук, ^

доцент АскароваА.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лиганд-рецепторные взаимодействия в клетке приводят к развитию специфического ответа и сопровождаются модуляцией целого ряда биохимических процессов, которые в свою очередь изменяют режим работы многих внутриклеточных систем жизнеобеспечения [Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И., 1999]. Учитывая сопряженность мембранной рецепции с регуляторными системами клетки [Ивашкин

B.Т., Васильев В.Ю., Северин Е.С., 1987], а также предположение о том, что циклазные системы (в частности цАМФ зависимая система) способны активизировать внутриклеточные системы защиты генома, [Семенов В.В. и др., 1997] логично предположить, что лиганды, взаимодействующие с адренорецепторами, могут влиять на резистентность клеток к мутагенам. Особый интерес вызвал у нас вопрос о способности адреномиметиков и адреноблокаторов проявлять генопротекторные свойства. Ведь это особенно актуально в настоящее время, когда ухудшение экологической ситуации в мире приводит к тревожному возрастанию удельного веса наследственных болезней, врожденных пороков развития, опухолевых заболеваний и других патологий, тесно связанных с повреждением генома человека [Худолей В.В., 1994; Дурнев А.Д., Середенин С.Б., 1998; Poot М. et al., 1990; Caggana М. et al., 1991; Mitelman F. et al., 1991; Moustacchi E., 1994; Ashby J. et al., 1996]. Понятно, что в этих условиях поиск антимутагенов, веществ, защищающих генетический аппарат соматических и половых клеток человека от повреждения, является необходимым [Худолей В.В., 1993; Засухина Г.Д.,1994; Тарасов В.А., 1994; Дурнев А.Д., Орещенко А.В., 1996; Дурнев А.Д., Середенин

C.Б., 1998].

В настоящее время открыто несколько сотен антимутагенов, однако широкого применения они не нашли до сих пор. Во многом это связано с тем, что механизм генопротекторного действия большинства антимутагенов неизвестен, не оценена степень их безвредности для человека, отсутствуют традиционные фармакотоксикологические исследования антимутагенов на человеке. Понятно, что в этих условиях поиск эффективных супрессоров мутагенеза наиболее рационально проводить среди лекарственных препаратов с изученным механизмом действия и разрешенных Фармакологическим комитетом к применению.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось определение влияния лигандов адренорецепторов на интенсивность процессов индуцированного мутагенеза в клетках бактерий, растений и животных.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить способность стимуляторов и блокаторов а и ß адренорецепторов индуцировать мутации у тестерных штаммов Salmonella typhimurium TAI 00 и ВА13, в клетках воздушно-сухих

. семян Crépis capillaris и клетках костного мозга мышей.

2. Оценить возможность стимуляторов и блокаторов модифицировать клеточный мутагенез, индуцированный мутагенами - алкиляторами в опытах на:

— штамме Salmonella typhimurium ВА13

— клетках Crépis capillaris

— в клетках костного мозга мышей.

3. Изучить способность блокаторов адренорецепторов модифицировать генетическую активность стимуляторов в опытах на Crépis capillaris.

Научная новизна. Впервые установлено, что в сферу действия биологически активных веществ, взаимодействующих с рецепторами, входит не только индукция специфических физиологических функций, но и активация систем, защищающих генетический аппарат от повреждений. Это является основанием для использования методов генетической токсикологии в исследованиях по выяснению механизма функционирования адреномиметиков и адреноблокаторов.

_ Научно-практическая значимость. В результате проведенной работы впервые выявлены антимутагенные свойства стимуляторов (норадреналина гидротартрата, мезатона, орципреналина сульфата) и блокаторов (пирроксана и обзидана) адренорецепторов в трех тест-системах: тест Эймса, воздушно-сухие семена Crépis capillaris и клетки костного мозга мышей (in vivo). Это не только расширяет представления о механизме их действия, но и может учитываться при выборе лекарственных препаратов для медицинской практики.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на IV научно-практической конференции молодых ученых КГМУ (Казань, 1999), на II съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Санкт-Петербург, 2000), на II съезде медицинских генетиков (Курск,

2000), на ежегодных научных конференциях ЮГУ (Казань, 1998, 1999, 2000), на научном обществе фармакологов (Казань, 2000).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 10 работ, в том числе 1 статья.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы. Работа изложена на 120 страницах, содержит 46 таблиц. Список используемой литературы включает 203 наименований, из них 94 на русском языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Физиологически активные вещества (ФАВ) используемые в

исследованиях

В исследованиях на микроорганизмах, растениях и животных использовали лекарственные препараты, взаимодействующие с адренорецепторами (табл. 1).

Таблица 1

_Тест-объекты и исследованные на них препараты__

Наимено вание препарата Характер действия Изучены ФАВ

Стимуля тор Блока тор Микроо рганизмы Скер да Мыши

Штамм ТА 100 Штамм ВА 13

АГТ а и ¡3 4- 4 + +

НГТ а 4- + 4- —

МЗТ 4- — + +

ОСТ 3 4- + 4-

ПРС а -ь 4- 4- 4-

ОБЗ Р 4- — 4- 4-

Примечание. Полные названия препаратов см. далее, на стр. 5-6.

"+" препарат изучен,"—" препарат не изучен.

В экспериментах использовали следующие формы препаратов. Адреналина гидротартрат (АГТ)

Использовали лекарственую форму препарата в ампулах (0,18%) (Харьковское . производственное химико-фармацевтическое объединение "Здоровье").

Норадреналина гидротартрат (НГТ)

Использовали лекарственную форму препарата в ампулах (0,2%) (Харьковская фармацевтическая фирма "Здоровье"). Мезатон (МЗТ)

Использовали лекарственную форму препарата в ампулах (1%) (Украина, Госкоммедбиопром, Опытный завод ГНЦЛС). Орципрепалина сульфат (ОСТ) (Астмопент (АСМ))

Использовали лекарственную форму препарата в виде дозированного аэрозоля (упаковка содержит взвесь в количестве 400 разовых доз по 0,75 мг) или в ампулах (0,05%) (Познаньский Фармацевтический Завод "ПОЛЬФА" Акционерное Общество). Пирроксан (ПРС)

Использовали лекарственную форму препарата в таблетках по 0,015 г или в ампулах (1%) (АО "Ай си эн октябрь" Санкт-Петербург). Обзидан (ОБЗ)

Использовали лекарственную форму препарата в таблетках по 40мг или в ампулах (0,1%) (Произведено в Германии, ISIS PHARMA).

Индукторы мутаций: этилметансульфонат (ЭМС, "Sigma"), циклофосфан (ЦФ, АО "Биохимик" г. Саранск) и нитрозометилмочевина (НММ, "Sigma")

Методы оценки мутагенной и антимутагенной активности исследуемых соединений

Для исследования генетической активности лигандов использованы тест-объекты, рекомендованные для такого рода исследований.

Следует отметить, что протоколы всех генетических экспериментов учитывали рекомендации, изложенные в материалах ВОЗ [Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ, 1989] и материалах 2-го Международного рабочего совещания в Мельбурне, которые были опубликованы в специальном выпуске журнала "Mutation Research" (vol. 312, № 3) в 1994 г.

Определение генетической активности соединений методом учета генных мутаций в тесте Эймса [Ames B.N. et al., 1975].

В работе использовали два штамма Salmonella typhimurium TAI00 (hisG46 bio uvrB rfa/pKMIOl атрг(Ю0мкг/мл)) и ВА13 (hisG46

агаЕ>531 гГа Дgal иУгВ/рКМ 101) (полученный от кафедры генетики Казанского государственного университета).

Исследовалось влияние стимуляторов и блокаторов адренорецепторов на ЭМС- и НММ- индуцированный мутагенез в тесте Эймса. Все исследуемые компоненты вносились вместе с бактериальной суспензией.

Жидкую среду Спицайзен разливали в чашки Петри, распределяя чашки следующим образом в зависимости от вида опыта.

При изучении мутагенной активности ФАВ необходима постановка чистого контроля, то есть в эти чашки (их 4) вносят только растворитель испытуемого вещества (дистиллированную воду) вместе с бактериальной суспензией. Это необходимо для проверки спонтанного уровня мутагенеза у данного штамма бактерий. А в среду для других добавляли исследуемые концентрации стимуляторов и блокаторов адренорецепторов, по 4 чашки на каждую концентрацию.

При изучении антимутагенной активности ФАВ, помимо чистого контроля, необходима постановка и позитивного контроля с индуктором мутаций (4 чашки). В качестве индуктора мутаций у штамма ТА 100 использовали мутаген -— нитрозометилмочевину, у штамма ВА 13 супермутаген—этилметансульфонат. В среду для других добавляли мутаген и ФАВ в изучаемых концентрациях (по 4 чашки на каждую концентрацию).

После этого чашки просушивали в термостате при 37°С в течение 2 часов. Биомассу бактерий, предварительно выращенную на полноценной питательной среде в течение 24 часов, ресуспензировали в физиологическом растворе (6 мл) до плотности клеток. Затем

на поверхность агара наносили суспензию бактерий в объеме 50 мкл на чашку. Нанесенная суспензия растиралась стеклянной палочкой. Чашки ставили в термостат на 1-2 сутки при 37°С. По истечении срока колонии подсчитывали и проводили статистическую обработку результатов.

Анализ генетической активности соединений путем регистрации хромосомных аберраций оценивали на клетках воздушно-сухих семян Crépis capillaris в результате предварительной обработки [Дубинина Л.Г., 1978] в широком диапазоне нетоксических концентраций.

Семена скерды замачивали 2 часа в дистиллированной воде (контроль). Опытные варианты после замачивания обрабатывали 2 часа стимуляторами или блокаторами адренорецепторов в различных концентрациях. После этого семена промывали 20 минут в проточной воде и обрабатывали 2 часа ЭМС или ЦФ. Вновь промывали 20 минут и помещали в 0,01% раствор колхицина для прорастания (26°С). В период 24-36 часов роста отбирали проростки с длиной корешков 1,0 - 1,5 мм. Верхушку корешков срезали и фиксировали смесью абсолютный этиловый спирт : ледяная уксусная кислота (3:1). Прокрашивали ацетокармином на водяной бане 10 минут. После 30 минутной экспозиции в насыщенном растворе хлоралгидрата готовили давленные препараты. Регистрировали все типы хромосомных и хроматидных аберраций.

Изучение генетической активности соединений путем регистрации хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей IPreston R.J. et al., 1987].

Регистрация протекторного действия лекарственного вещества осуществлялась путем учета индуцированных мутагеном хромосомных аберраций в присутствии и отсутствии ФАВ. Эксперименты выполнены на мышах линии С 57В4/6. На каждый опытный и контрольный вариант брали по 5-6 самцов 1,5-2-х месячного возраста, массой 25-30 гр. Физиологически активные препараты вводили мышам подкожно, однократно. Через 8 часов внутрибрюшинно вводили индуктор мутаций — ЭМС или ЦФ. Мутаген и ФАВ растворяли в физиологическом растворе непосредственно перед введением животным. Через 24 часа после инъекции мутагена мышей забивали цервикальной дислокацией. За 2,5 часа до окончания опыта мышам внутрибрюшинно вводили колхицин (2,5 мг/кг).

Препараты костного мозга готовили стандартным суховоздушным способом [Ford С.Е., Hamerton I.L., 1956]. У каждого животного анализировали по 100 метафаз. Регистрировали клетки с модальным

числом в 40 хромосом с хорошим разбросом без наложений. Подсчитывали фрагменты и обмены хромосом. Гепы не учитывали.

Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с использованием критерия Стьюдента. Расчет антимутагенного эффекта производили по формуле [Урбах В.Ю., 1964].

М, — И 2

АЭ = - • 100

М,

где : М] — процент метафаз с нарушениями при действии мутагена, Мг — процент метафаз с нарушениями при действии мутагена и протектора.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ генетической активности исследуемых физиологически активных веществ (ФАВ) осуществлялся в несколько этапов. Вначале изучалась мутагенная активность соединений. Это дало возможность отобрать для дальнейших исследований не мутагенные концентрации препаратов.

1. Оценка мутагенного эффекта исследуемых соединений

Большинство взятых для исследования ФАВ в изученных концентрациях в экспериментах на микроорганизмах, Crépis capillaris и мышах не обладали мутагенной активностью. Исключение составил адреналина гидротартрат, который в опытах на скерде и мышах, в высокой концентрации, достоверно увеличивал уровень аберраций соответственно в 3,5 и 2,9 раза относительно контроля.

В дальнейших исследованиях адреналина гидротартрат использовали в не мутагенных концентрациях.

2. Оценка антимутагенного эффекта исследуемых соединений 2.1. Оценка анпишутаге!того эффекта исследуемых соединений в тесте Эймса у штамма ВА13 Salmonella typhimurium.

Из всех исследованных препаратов только норадреналина гидротартрат и пирроксан снижали уровень индуцированного мутагенеза.

2.2. Определение ашшшутагениой активности исследуемых соединений на оолдуишо-сухих семенах Crépis capillaris.

Результаты опытов отражены в сводной таблице 2.

Представленные данные показывают, что способностью снижать уровень аберраций, индуцированных мутагенами, обладают как стимуляторы, так и блокаторы а- и р- адренорецепторов. Однако в большей степени этот эффект выражен у адреноблокаторов.

Таблица 2

Максимальный антимутагенный эффект (МАЭ) и диапазоны активных концентраций (ДАК)

Исследуемые ФАВ Исследуемые параметры и индукторы мутаций

(тип рецептора) МАЭ (в %) ДАК (в М)

ЭМС ЦФ ЭМС ЦФ

АГТ (а и Р) 64,3 60,8 10"1и—10"4 10"ш—10"4

л о- НГТ (а) 43,5 47,4 ю-7 10"s, 10'7

н к не не активен

ч МЗТ (а) активен 39,0 10'5,10"4

s ОСТ ((3) 59,3 45,5 Ю"8— 10"J Ю-7,

О 10"4, 10"3

со _, ПРС (а) 76,8 47,4 10"3, 10"2 10"--10"5

а «а О Си ОБ3 (Р) 77,5 61,5 10"'—10"J 10"8—10"6

w н 10"4, 10'3

Необходимо отметить, что ФАВ (и стимуляторы и блокаторы), взаимодействующие с Р-адренорецепторами, были эффективнее, чем взаимодействующие с а-адренорецепторами.

Антимутагенный эффект был выявлен у препаратов, как правило, в широком диапазоне концентраций. Особенно это характерно для адреналина гидротартрага, орцилреналина сульфата, пирроксана и обзидана (см. табл.2). Практически все исследованные ФАВ обладали способностью редуцировать уровень аберраций в высоких (не физиологических) концентрациях и в физиологических Ю"10— 10"7М.

Из всех исследованных препаратов по диапазону активных концентраций и максимальному антимутагенному эффекту (см. табл. 2) можно выделить как наиболее эффективными — адреналин (адреномиметик) и обзидан (адреноблокатор), а наименее — а-адреномиметик — мезатон. Особо следует отметить разную

10

способность препаратов снижать уровень аберраций индуцированный ЭМС и ЦФ. Наиболее эффективно препараты подавляли мутагенез индуцированный ЭМС. При этом выявлена следующая характерная особенность: при подавлении ЭМС-индуцированного мутагенеза МАЭ препаратов приходился на высокие не физиологические концентрации. Напротив, при редукции аберраций индуцированных ЦФ МАЭ был ниже, но выявлялся у препаратов в физиологических концентрациях. Исключение составил ос-адреномиметик мезатон, который редуцировал мутагенный эффект ЦФ, совершенно не влияя на формирование аберраций, возникших под действием ЭМС.

2.3. Определение ант ¡ту таге нной активности исследуемых соединений на клетках костного мозга мышей.

Результаты исследований представлены в сводной таблице 3.

Таблица 3

Максимальный антимутагенный эффект и диапазоны активных концентраций изученых ФАВ в опытах на клетках костного мозга мышей

Исследуемые ФАВ Исследуемые параметры и индукторы мутаций

(тип рецептора) МАЭ (в %) ДАК (в мг/кг)

ЭМС ЦФ ЭМС ЦФ

АГТ (а и Р) 65,0 55,2 10"3—10"' 10"— 10"1

н и МЗТ (а) 34,4 35,3 ю-3 10

ОСТ (Р) 35,5 50,0 10"', 5 10"2, 10"1, 5

« ПРС (а) Р е активен

ОБЗ (р) 34,3 32,5 1 10

Примечание: СТ-стимуляторы, БК-блокаторы.

Анализ результатов показывает, что антимутагенный эффект в опытах in vivo на мышах проявился слабее, чем у растений. Наблюдается он как у стимуляторов, так и у блокаторов адренорецепторов. Как и в опытах на растениях, ФАВ, взаимодействующие с а-адренорецепторами, оказались менее эффективными, чем взаимодействующие с Р-адренорецепторами. Из всех исследованных препаратов наибольшим антимутагенным эффектом и диапазоном активных концентраций обладали адреналина гидротартрат и орципреналина сульфат. Как и в опытах на растениях, в опытах на мышах ЭМС-индуцированный мутагенез в большей мере поддавался коррекции, чем ЦФ-индуцированный.

3. Модификация протекторного эффекта адреналина гидротартрата а- и р- адреноблокаторами, в условиях предварительной обработки, в опытах на Crépis capillaris.

Как известно адреналин относится к стимуляторам а- и f3-адренорецепторов. В наших исследованиях он показал себя как эффективный антимутаген. Было интересно определить его протекторный эффект в условиях, когда клетка обработана блокаторами а- и (З-адренорецепторов до воздействия адреналина. Сложность постановки такого опыта заключалась в том, что сами блокаторы проявляют антимутагенный эффект. Поэтому необходимо было исключить факт аддитивности эффектов адреналина и блокаторов. С этой целью концентрации блокаторов подбирались таким образом, чтобы они не оказывали по отдельности антимутагенный эффект. Для пирроксана такой концентрацией была 2,68-10"7 M, а для обзидана 3,86-10"8М, АГТ использовали в концентрации 3,0-10"9 М. В этой концентрации АГТ эффективно снижал уровень аберраций индуцированный ЭМС. Результаты опытов представлены в таблице 4.

Таблица 4

Антимутагенная активность АГГ и ее модификация

адреноблокаторами в условиях предварительной _обработки на клетках Crépis capillaris_

Вариант опыта Общее Общее Частота

число число аберра АЭ Р

метафаз аберраций иий (в %)

Контроль 888 8 0,90+0,32 — —

АГТ 1031 19 1,84+0,42 — >0,05*

ПРС 1081 20 1,85+0,41 — >0,05*

ОБЗ 574 9 1,57+0,52 — >0,05*

ПРС+АГТ 938 17 1,81+0,44 — >0,05*

ОБЗ+АГТ 1073 18 1,68+0,39 — >0,05*

ЭМС 554 28 5,05+0,93 — <0,001*

ПРС+ЭМС 866 42 4,85+0,73 4,0 >0,05**

ОБЗ+ЭМС 1207 52 4,31+0,58 14,7 >0,05**

АГГ+ЭМС 1184 22 1,86+0,39 63,2 <0,01**

ПРС+АГТ+ЭМС 1108 34 3,07+0,52 39,2 >0,05**

ОБЗ+АГТ+ЭМС 1180 44 3,73+0,55 26,1 >0,05**

Примечание: * — уровень значимости по сравнению с контролем;

** — уровень значимости по сравнению с ЭМС;

АЭ — антимутагенный эффект; Р—-уровень достоверности.

Как видно из таблицы, АГТ достаточно эффективно (на 63,2%) подавлял уровень ЭМС-индуцированных аберраций. В присутствии блокаторов, независимо от их типа, происходило снижение протекторной активности АГТ.

При этом ß-адреноблокатор обзидан в большей степени подавлял АЭ адреналина, чем а-адреноблокатор пирроксан. При блокаде пирроксаном АЭ был равен 39,2%, а при использовании обзидана — 26,1%.

Таким образом, можно заключить, что а и ß-блокаторы адренорецепторов активно снижают антимутагенный эффект адреналина. В большей мере ингибирующий эффект выражен у ß-блокатора.

* * *

В своих исследованиях мы определяли способность адренотропных ФАВ индуцировать в клетке два, в сущности противоположных, эффекта - мутагенез и антимутагенез. Вполне понятно, что добиться этого можно было лишь при изучении генетической активности исследуемых препаратов в широком диапазоне концентраций. В выбранном нами диапазоне находилась область высоких концентраций (10'6— 1(Г2М) и область физиологических концентраций (К)'10—10'7М), когда биологический эффект препаратов можно было связать с их рецепторным действием [Розен В.Б., 1986; Firn R.D., 1987]. Такой подход позволил выявить небольшой, но достоверный мутагенный эффект высоких концентраций адреналина на Crépis capillaris (5,4-10"3М) и мышах (50 мг/кг). В настоящее время мы затрудняемся оценить этот феномен с биологических позиций. Однако известно, что в экстремальных ситуациях у животных и человека их стресс-реализующая система, в том числе и адренергическая, может быть причиной резкого возрастания уровня аберраций в клетках. Подобный факт неоднократно наблюдали ряд исследователей [Керкис Ю.Я., 1977; Меерсон Ф.З., 1981; Михеев B.C., Анисимова Л.Е., 1988; Середенин С.Б, Дурнев А.Д., 1992; Pasachan S.C., Sabhlok V.P., 1983].

При снижении концентраций адреналина мутагенный эффект (iCrépis capillaris) сменялся на антимутагенный. Последний с небольшими колебаниями (во всех случаях различия не достоверны) сохранялся до действующей концентрации адреналина 10"'°М в

опытах с семенами и 10"3мг/кг в опытах с мышами независимо от типа алкилятора, индуцировавшего мутагенез. Необходимо отметить, что в опытах на растениях и животных адреналин по сравнению с другими препаратами оказался наиболее эффективным генопротектором: — у него один из наиболее высоких антимутагенных эффектов (табл. 2, 3). Нам представляется, что для выяснения механизма протекторного действия адреналина необходимо в первую очередь исходить из работ [ОеЬауе I. Р. е! а!., 1980], которые показали, что ввиду быстрого распада адреналина в клетках животных, внутриклеточные взаимодействия этого гормона вряд ли существенны, большее значение имеют его взаимодействия с рецепторами клеточной мембраны. В наших исследованиях были использованы три тест-объекта, имеющие адренорецепторы и не имеющие их. Последнее относится к микроорганизмам, мембранная рецепция которых в значительной степени отличается от животных. Что касается клеток растений, то в монографии [Рощипа В.В., 1991] приведены убедительные факты наличия у растений рецепторных структур, подобных адренорецепторам животных.

Рассматривая с этих позиций антимутагенный эффект адреналина на растениях и животных, необходимо отметить, что он был выявлен в широком диапазоне концентраций, в том числе и в низких — Ю"10-10"9 М (у растений). При этом антимутагенный эффект адреналина, достигнув определенной величины, имел тенденцию сохранятся с небольшими (как правило не достоверными) колебаниями на протяжении значительного диапазона концентраций. И, наконец, результаты экспериментов, приведенные в разделе 3, свидетельствуют, что блокаторы а- и ¡3-адренорецепторов (пирроксан и обзидан) значительно снижают антимутагенный эффект адреналина. Всё это в совокупности даёт нам основание утверждать, что в реализации антимутагенного потенциала адреналина определенное значение имеют рецепториые образования, активация которых приводит к формированию в клетке резистентности к мутагенам. Понятно, что это не исключает и другие пути формирования клеточного антимутагенеза. Один из таких путей возможно задействован при обработке клеток высокими концентрациями адреналина.

Если антимутагенный эффект адреналина может реализоваться через мембранную рецепцию клетки, то возникает вполне

закономерный вопрос, какие рецепторы принимают в этом участие? Наши исследования не дают возможности однозначно связать супрессорный эффект адреналина с преимущественным действием на какой-либо тип рецептора. Однако, полученные данные позволяют высказать некоторые предположения. Прежде всего это касается исследований по определению антимутагенного эффекта у близкого по химическому строению к адреналину — норадреналина. У последнего отсутствует метальная группа у атома азота и, что особенно существенно для нас, его действие связано с преимущественной стимуляцией а-адренорецепторов в то время как адреналин влияет одновременно на а - и Р -адренорецепторы [Машковский М.Д., 1998]. Наши исследования показали, что протекторная активность норадреналина существенно ниже адреналина. Незначительный (менее 50%, Crepis capillar is) антимутагенный эффект норадреналина, регистрируемый в узком диапазоне концентраций 10"7 M (индуктор ЭМС) и 10"8 — 10"7 M (индуктор ЦФ), даёт основание считать стимуляцию Р-адренорецепторов более значимой для формирования устойчивости клеток к повреждающему действию мутагенов. Это предположение подтверждает анализ антимутагенного эффекта, выявленного у стимуляторов а - и Р -адренорецепторов. В опыте на растениях стимулятор а-адренорецепторов (мезатон) или не снижал уровень аберраций индуцированный ЭМС, или проявлял антимутагенный эффект в 1,6 раза слабее, чем адреналин. Существенно то, что этот эффект был присущ мезатону в не физиологических концентрациях ( 1 О*5, 10~4 М). Стимулятор Р-адренорецепторов (орципреналина сульфат) напротив снижал уровень аберраций хромосом, индуцированный ЭМС, соизмеримо с адреналином, а мутации индуцированные ЦФ, соизмеримо с мезатоном. В отличии от мезатона антимутагенный эффект орципреналина сульфата регистрировался в физиологических концентрациях (10~8 — 10'7 М), что даёт основание предположить о большем участии в формировании антимутагенеза р-адренорецепторов.

Кроме стимуляторов адренорецепторов существенный антмутагенный эффект выявлен у блокаторов а- и р-адренорецепторов. Особого внимания заслуживают два момента: во-первых, для блокаторов характерно наличие высокого

антимутагенного эффекта, превышающего аналогичный эффект стимуляторов и, во-вторых, диапазон их активных концентраций лежит в основном за пределами физиологических концентраций (в основном в пределах 10" — 10"3 М). Это в какой-то мере указывает на неспецифический характер действия блокаторов, но с другой стороны не исключено, что предварительная обработка клеток блокаторами препятствует взаимодействию мутагена с рецептором.

Анализ результатов показал, что ФАВ по разному действуют на мутагенез, индуцированный различными индукторами мутаций. В одних случаях протекторы эффективнее снижали уровень аберраций индуцированный ЭМС, в других ЦФ. Каких-либо закономерностей при этом обнаружить не удалось. Однако, понятно, что механизм мутагенеза, индуцируемый различными мутагенами (даже находящимися в одной химической группе — алкилирующие вещества), различен и целесообразность применения того или иного протектора должна определятся на основе фармакологической концепции антимутагенеза [Середенин С .В., Дурнев А.Д., 1992].

Й, наконец, антимутагенный эффект ФАВ, полученный на разных моделях, оказался неоднозначным. Это в какой-то мере можно объяснить различным уровнем эволюционного развития рецепторных систем у микроорганизмов, растений и животных.

И в заключении необходимо отметить, что наши исследования ставят вопрос о наличии на уровне организма антимутагенной системы, существенным компонентом которой является мембранная рецепция клеток. По механизму своего действия эта система полирецепторна (в ней принимают участие представители различных типов рецепторов) и поливалентна (и стимуляторы и блокаторы рецепторов участвуют в формировании клеточного антимутагенеза).

выводы

1. Стимуляторы и блокаторы а- и ß- адренорецепторов не обладают мутагенной активностью в тесте Эймса. Норадреналина гидротартрат (100 мкг/мл) и пирроксан (100 мкг/мл, 200 мкг/мл) снижают уровень этилметансульфонат-индуцированного мутагенеза у штамма Salmonella typhimurhim ВА13.

2. Стимуляторы и блокаторы а- и ß- адренорецепторов, за исключением адреналина гидротартрата, не обладают мутагенной активностью в клетках Crépis capillaris и клетках костного мозга мышей. Адреналина гидротартрат в высокой концентрации (5,4-Ю-3 M и 50 мг/кг) достоверно повышает уровень аберраций в клетках Crépis capillaris и клетках костного мозга мышей.

3. Стимуляторы а- и ß- адренорецепторов в большей степени проявляют протекторный эффект у животных клеток, а блокаторы адренорецепторов — растительных.

4. Блокаторы и стимуляторы ß-адренорецепторов более эффективно снижают уровень хромосомных аберраций в клетках растений и животных, чем лиганды а-адренорецепторов. .

5. Генопротекторньщ эффект стимуляторов а- и ß- адренорецепторов предупреждается соответствующими блокаторами при условии предварительной обработки ими клеток Crépis capillaris.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Семенов В.В., Ибрагимова М.Я., Барабанщиков Б.И. Модификация адреналином мутагенного действия этилметансульфоната // Бюл. экспер. биол. — 1998. — Т. 126, № 10, —С. 427-429.

2. Ибрагимова M .Я. Влияние адреналина и агонистов а-адренорецепторов на этилметансульфонат индуцированный мутагенез // Материалы научной конференции, посвященной 60-летию Заслуженного деятеля науки РТ, доктора биологических наук, профессора Ф.Г. Ситдикова. Проблемы адаптации растущего организма к физической и умственной нагрузке. — Казань, 1998.

— С. 77-78.

3. Ибрагимова М.Я. Биологическая активность адреналина // IV научно-практическая конференция молодых ученых. Тезисы (19 июня 1999 года) / Казань: КГМУ, 1999. — С. 35-36.

4. Ибрагимова М.Я., Бабынин Э.В. Генетическая активность физиологически активных веществ в тесте Эймса // IV научно-практическая конференция молодых ученых. Тезисы (19 июня 1999 года)/ Казань: КГМУ, 1999. — С. 36-37.

5. Семенов В.В., Ибрагимова М.Я., Барабанщиков Б.И., Ибрагимова А.М. Сравнительное исследование влияния а-адреномиметиков и а-адреноблокаторов на цитогенетические эффекты этилметансульфоната у Crépis capillaris / Новое в медицине: Сборник научных трудов Казанского государственного медицинского университета — Казань: Буквица, 1999. — Выл. I.

— С. 48-49.

6. Семенов В.В., Ибрагимова М.Я., Барабанщиков Б.И., Ибрагимова A.M. Изучение генетической активности мезатона и орципреналина сульфата при цикпофосфан и этилметансульфонат индуцированном мутагенезе у мышей / Новое в медицине: Сборник научных трудов Казанского государственного медицинского университета — Казаны Буквица, 1999. — Вып. 1.

— С. 49-50.

7. Семенов В.В., Ибрагимова М.Я., Барабанщиков Б.И., Ибрагимова A.M. Изучение антимутагенной активности а-адреноблокатора пирроксана и ^-адреноблокатора обзидана на клетках костного

мозга мышей / Новое в медицине: Сборник научных трудов Казанского государственного медицинского университета — Казань: Буквица, 1999. — Вып. 1. — С. 50.

8. Ибрагимова М.Я. Модификация орципреналина сульфатом мутагенного эффекта этилметансульфоната и циклофосфана // II съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. Тезисы (1-5 февраля 2000 года) / Санкт-Петербург: НИИ химии СПбГУ, 2000, —Т. 2, —С. 157.

9. Ибрагимова М.Я. Модификация протекторного эффекта адреналина гидротартрата а- и ß- адреноблокаторам и в условиях предварительной и последующей обработки, в опытах на Crépis capillaris // II Российский съезд медицинских генетиков. Тезисы (17-19 мая 2000 года) / Курск, 2000. — Ч. 1.— С. 306-308.

10. Семенов В.В., Барабанщиков Б.И., Ибрагимова М.Я., Харитонов B.C. Кластогенный и антикластогенный эффект лигандов адреналиновых и пуриновых рецепторов // II Российский съезд медицинских генетиков. Тезисы (17-19 мая 2000 года) / Курск,

2000. — Ч. 2,—С. 240-241.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гайнуллина, Миляуша Якубовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Антимутагены. Основные механизмы действия антимутагенов.

1.1.1. Дисмутагены.

1.1.2. Репарагены.

1.1.3. Антиоксиданты.

1.1.4. Модификаторы метаболизма и транспорта мутагенов.

1.2. Место физиологически активных веществ в ряду лекарственных препаратов

1.2.1. Механизм действия препаратов, взаимодействующих с адренорецепторами животных.

1.2.2. Биомедиатор адреналин и рецепторы к нему в животной и растительной клетке.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы используемые в исследованиях.

2.1.1. Физиологически активные вещества (ФАВ) используемые в исследованиях.

2.1.2. Индукторы мутаций.

2.2. Методы оценки мутагенной активности исследуемых соединений

2.2.1. Определение мутагенной активности соединений методом учета генных мутаций в тесте Эймса.

2.2.2. Анализ мутагенной активности соединений путем регистрации хромосомных аберраций.

2.2.2.1. Определение мутагенной активности соединений путем регистрации хромосомных аберраций в клетках воздушно-сухих семян Crepis capillar is.

2.2.2.2. Изучение мутагенной активности соединений путем регистрации хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей.

2.3. Методы оценки антимутагенной активности исследуемых соединений

2.3.1. Регистрация антимутагенной активности соединений путем учета генных мутаций в тесте Эймса.

2.3.2. Анализ антимутагенной активности соединений путем регистрации хромосомных аберраций.

2.3.2.1. Исследование антимутагенной активности соединений путем индукции хромосомных аберраций в клетках воздушно-сухих семян

Crépis capillaris.

2.3.2.2. Оценка антимутагенной активности соединений по формированию хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей.

2.4. Методы статистической обработки результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Оценка мутагенного эффекта исследуемых соединений.

3.2. Оценка антимутагенного эффекта исследуемых соединений.

3.3. Модификация протекторного эффекта адреналина гидротартрата а- и (3- адреноблокаторами в условиях предварительной обработки.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Лиганды адренорецепторов - модуляторы клеточного мутагенеза"

Актуальность темы. Лиганд-рецепторные взаимодействия в клетке приводят к развитию специфического ответа и сопровождаются модуляцией целого ряда биохимических процессов, которые в свою очередь изменяют режим работы многих внутриклеточных систем жизнеобеспечения [Сергеев П.В., Шимановский H.JL, Петров В.И., 1999]. Учитывая сопряженность мембранной рецепции с регуляторными системами клетки [Ивашкин В.Т., Васильев В.Ю., Северин Е.С., 1987], а также предположение о том, что циклазные системы (в частности цАМФ зависимая система) способны активизировать внутриклеточные системы защиты генома, [Семенов В.В., 1997] логично предположить, что лиганды, взаимодействующие с адренорецепторами, могут влиять на резистентность клеток к мутагенам. Особый интерес вызвал у нас вопрос о способности адреномиметиков и адреноблокаторов проявлять генопротекторные свойства. Ведь это особенно актуально в настоящее время, когда ухудшение экологической ситуации в мире приводит к тревожному возрастанию удельного веса наследственных болезней, врожденных пороков развития, опухолевых заболеваний и других патологий, тесно связанных с повреждением генома человека [Худолей В.В., 1994; Дурнев А.Д., Середенин С.Б., 1998; Longstaff Е., 1986; Poot М. et al., 1990; Caggana М. et al., 1991; Mitelman F. et al., 1991; Moustacchi E., 1994; Ashby J. et al., 1996]. Понятно, что в этих условиях поиск антимутагенов, веществ, защищающих генетический аппарат соматических и половых клеток человека от повреждения, является необходимым [Худолей В.В., 1993; Засухина Г.Д.,1994; Тарасов В.А., 1994; Дурнев А.Д., Орещенко А.В., 1996].

В настоящее время открыто несколько сотен антимутагенов, однако широкого применения они не нашли до сих пор [Бариляк И.Р., Исаева A.B., 1994; Stavric В., 1994; Waters M.D. et al., 1996]. Во многом это связано с тем, что механизм генопротекторного действия большинства антимутагенов неизвестен, не оценена степень их безвредности для человека, отсутствуют традиционные фармакотоксикологические исследования антимутагенов на человеке. Понятно, что в этих условиях поиск эффективных супрессоров мутагенеза наиболее рационально проводить среди лекарственных препаратов с изученным механизмом действия и разрешенных Фармакологическим комитетом к применению [Золотарева Г.Н., Акаева Э.А., 1981; Середенин С.Б. и др., 1990; Середенин С.Б., Дурнев А.Д., 1990; Семенов В.В., Артемьева Г.И., 1992; Гончарова Р.И., 1993; Дурнев А.Д., Середенин С.Б., 1993; Семенов В.В., Студенцова И.А., 1993; Дурнев А.Д., Середенин С.Б., 1998].

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось определение влияния лигандов адренорецепторов на интенсивность процессов индуцированного мутагенеза в клетках бактерий, растений и животных.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить способность стимуляторов и блокаторов anß адренорецепторов индуцировать мутации у гестерных штаммов Salmonella typhimurium TAI 00 и ВА13, в клетках воздушно-сухих семян Crépis capillaris и клетках костного мозга мышей.

2. Оценить возможность стимуляторов и блокаторов модифицировать клеточный мутагенез, индуцированный мутагенами - алкиляторами в опытах на: штамме Salmonella typhimurium ВА13 клетках Crépis capillaris клетках костного мозга мышей.

3. Изучить способность блокаторов адренорецепторов модифицировать генетическую активность стимуляторов в опытах на Crépis capillaris.

Научная новизна. Впервые установлено, что в сферу действия биологически активных веществ, взаимодействующих с рецепторами, входит не только индукция специфических физиологических функций, но и активация систем, защищающих генетический аппарат от повреждений. Это является основанием для использования методов генетической токсикологии в исследованиях по выяснению механизма функционирования адреномиметиков и адреноблокаторов.

Научно-практическая значимость. В результате проведенной работы впервые выявлены антимутагенные свойства стимуляторов (норадреналина гидротартрата, мезатона, орципреналина сульфата) и блокаторов (пирроксана и обзидана) адренорецепторов в трех тест-системах: тест Эймса, воздушно-сухие семена Crépis capillaris и клетки костного мозга мышей (in vivo). Это не только расширяет представления о механизме их действия, но и может учитываться при выборе лекарственных препаратов для медицинской практики.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гайнуллина, Миляуша Якубовна

выводы

1. Стимуляторы и блокаторы а- и ß- адренорецепторов не обладают мутагенной активностью в тесте Эймса. Норадреналина гидротартрат (100 мкг/мл) и пирроксан (100 мкг/мл, 200 мкг/мл) снижают уровень этилметансульфонат-индуцированного мутагенеза у штамма Salmonella typhimurium ВА13.

2. Стимуляторы и блокаторы а- и ß- адренорецепторов, за исключением адреналина гидротартрата, не обладают мутагенной активностью в клетках Crépis capillaris и клетках костного мозга мышей. Адреналина гидротартрат в высокой концентрации (5,4-10"3М и 50 мг/кг) достоверно повышает уровень аберраций в клетках Crépis capillaris и клетках костного мозга мышей.

3. Стимуляторы а- и ß- адренорецепторов в большей степени проявляют протекторный эффект у животных клеток, а блокаторы адренорецепторов — растительных.

4. Блокаторы и стимуляторы ß- адренорецепторов более эффективно снижают уровень хромосомных аберраций в клетках растений и животных, чем лиганды а-адренорецепторов.

5. Генопротекторный эффект стимуляторов а- и ß- адренорецепторов предупреждается соответствующими блокаторами при условии предварительной обработки ими клеток Crépis capillaris.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В своих исследованиях мы определяли способность адренотропных ФАВ индуцировать в клетке два, в сущности противоположных, эффекта -мутагенез и антимутагенез. Вполне понятно, что добиться этого можно было лишь при изучении генетической активности исследуемых препаратов в широком диапазоне концентраций. В выбранном нами диапазоне находилась область высоких концентраций (10"6—10"2М) и область физиологических концентраций (К)"10—10"7М), когда биологический эффект препаратов можно было связать с их рецепторным действием [Розен В.Б., 1986; Firn R.D., 1987]. Такой подход позволил выявить небольшой, но достоверный мутагенный эффект высоких концентраций адреналина на Crépis capillaris (5,4-10"3 M) и мышах (50 мг/мл) (см. табл. 10, 15). В настоящее время мы затрудняемся оценить этот феномен с биологических позиций. Однако известно, что в экстремальных ситуациях у животных и человека их стресс-реализующая система, в том числе и адренергическая, может быть причиной резкого возрастания уровня аберраций в клетках. Подобный факт неоднократно наблюдали ряд исследователей [Керкис Ю.Я., 1977; Меерсон Ф.З., 1981; Михеев B.C., Анисимова JI.E., 1988; Середенин С.Б., Дурнев А.Д., 1992; Pasachan S.С., Sabhlok V.P., 1983].

При снижении концентраций адреналина мутагенный эффект {Crépis capillaris) сменялся на антимутагенный. Последний с небольшими колебаниями (во всех случаях различия не достоверны) сохранялся до действующей концентрации адреналина Ю"10 M в опытах с семенами и 10"3 мг/кг в опытах с мышами независимо от типа алкилятора, индуцировавшего мутагенез. Необходимо отметить, что в опытах на растениях и животных адреналин по сравнению с другими препаратами оказался наиболее эффективным генопротектором: — у него один из наиболее высоких антимутагенных эффектов (табл. 31, 42). Нам представляется, что для выяснения механизма протекторного действия адреналина необходимо в первую очередь исходить из работ [Dehaye J. Р. et al., 1980], которые показали, что ввиду быстрого распада адреналина в клетках животных, внутриклеточные взаимодействия этого гормона вряд ли существенны, большее значение имеют его взаимодействия с рецепторами клеточной мембраны. Характерным признаком рецепторного действия медиаторов и гормонов по мнению Розен В.Б. (1986) и Firn A.D. (1987) считаются:

1. Эффект должен вызываться низкими концентрациями (Ю"10 — 10"7М) агента или его агониста.

2. Кинетика связывания лиганда должна описываться кривой с насыщением — условие, свидетельствующее о том, что число рецепторных молекул в мембране ограничено.

3. Антагонисты агента-эффектора, связываясь с рецептором должны препятствовать проявлению индуцированной эффектором реакции.

Рассматривая с этих позиций антимутагенный эффект адреналина на растениях и животных, необходимо отметить, что он был выявлен в широком диапазоне концентраций, в том числе и в низких —- Ю"10 - 10"9 М (у растений). Кроме того результаты опытов, сведенные в таблицы 22, 23, 35 и 36 однозначно показывают, что антимутагенный эффект адреналина, достигнув определенной величины, имел тенденцию сохранятся с небольшими (как правило не достоверными) колебаниями на протяжении значительного диапазона концентраций. И, наконец, результаты экспериментов, приведенные в разделе 3.3, свидетельствуют, что блокаторы а- и (З-адренорецепторов (пирроксан и обзидан) значительно снижают антимутагенный эффект адреналина. Всё это в совокупности даёт нам основание утверждать, что в реализации антимутагенного потенциала адреналина определенное значение имеют рецепторные образования, активация которых приводит к формированию в клетке резистентности к мутагенам. Понятно, что это не исключает и другие пути формирования клеточного антимутагенеза. Один из таких путей возможно задействован при обработке клеток высокими концентрациями адреналина.

Если антимутагенный эффект адреналина может реализоваться через мембранную рецепцию клетки, то возникает вполне закономерный вопрос, какие рецепторы принимают в этом участие? Как известно, адреналин стимулирует а- и Р - адренорецепторы. Стимуляция Р~ адренорецепторов приводит к активации аденилатциклазной активности и повышению внутриклеточного цАМФ, стимуляция а-адренорецепторов, наоборот сопровождается ингибированием аденилатциклазной активности и снижением уровня эндогенного цАМФ (0С2- адренорецепторы) или, в зависимости от подтипа рецепторов (аг-адренорецепторы), приводит к открытию кальциевых каналов и поступлению ионов кальция внутрь клетки [Ивашкин В.Т. и др., 1987; Сергеев П.В. и др., 1999]. Наши исследования не дают возможности однозначно связать супрессорный эффект адреналина с преимущественным действием на какой либо тип рецептора. Однако, полученные данные позволяют высказать некоторые предположения. Прежде всего это касается исследований по определению антимутагенного эффекта у близкого по химическому строению к адреналину — норадреналина. У последнего отсутствует метальная группа у атома азота и, что особенно существенно для нас, его действие связано с преимущественной стимуляцией а-адренорецепторов, в то время как адреналин влияет одновременно на а - и Р -адренорецепторы [Машковский М.Д., 1998]. Наши исследования показали, что протекторная активность норадреналина существенно ниже адреналина. Незначительный (менее 50% у Crépis capillaris) антимутагенный эффект норадреналина, регистрируемый в узком диапазоне концентраций 10"7 M (индуктор ЭМС) и 10"8 — 10"7 M (индуктор ЦФ) (см. табл. 24, 25), даёт основание считать стимуляцию (3 - адренорецепторов более значимой для формирования устойчивости клеток к повреждающему действию мутагенов. Это предположение подтверждает анализ антимутагенного эффекта, выявленного у стимуляторов а- и р-адренорецепторов. В опыте на растениях стимулятор а-адренорецепторов (мезатон) или не снижал уровень аберраций индуцированный ЭМС (см. табл. 23), или проявлял антимутагенный эффект в 1,6 раза слабее, чем адреналин. Существенно то, что этот эффект был присущ мезатону в не физиологических концентрациях (Ю"5, Ю^М). Стимулятор Р-адренорецепторов (орципреналина сульфат) напротив снижал уровень аберраций хромосом, индуцированный ЭМС, соизмеримо с адреналином, а мутации индуцированные ЦФ, соизмеримо с мезатоном. В отличии от мезатона антимутагенный эффект орципреналина сульфата регистрировался в л «у физиологических концентрациях (10" —Ю М) (см. табл. 25, 26), что даёт основание предположить о большем участии в формировании антимутагенеза p-адренорецепторов. Резюмируя вышесказанное, можно отметить, что в механизме формирования клеточного антимутагенеза могут принимать участие различные специфические рецепторные образования - как ос- так и Р- адренорецепторы. Однако степень их участия в антимутагенезе не одинакова. В нашем случае в формировании резистентности клетки к ЭМС и ЦФ преимущественно принимали участие Р-адренорецепторы. Последние регулируют клеточный метаболизм через цАМФ- зависимую систему, которая, по некоторым данным [Семенов В.В. и др., 1994], принимает участие в активации внутриклеточных систем защиты генома.

Кроме стимуляторов адренорецепторов существенный антимутагенный эффект выявлен у блокаторов а- и Р- адренорецепторов. Особого внимания заслуживают два момента: во-первых, для блокаторов характерно наличие высокого антимутагенного эффекта, превышающего аналогичный эффект стимуляторов и, во-вторых, диапазон их активных концентраций лежит в основном за пределами физиологических концентраций (в основном в пределах 10'6—10"3 М). Это в какой-то мере указывает на неспецифический характер действия блокаторов, но с другой стороны не исключено, что предварительная обработка клеток блокаторами препятствует взаимодействию мутагена с рецептором. Если это так, то необходимо допустить, что ДНК-повреждающий эффект мутагенов может реализоваться через мембранную рецепцию клетки. Как бы не выглядело такое предположение пародоксальным, но уже сейчас всё больше и больше накапливается фактов об участии рецепторных систем клетки в формировании клеточного мутагенеза. Так Белоусова А.К. (1991), анализируя механизм действия противоопухолевых препаратов на опухолевые клетки, приводит сведения, указывающие на взаимодействие актиномицина Д, дауномицина, антрациклинов, бифункциональных алкилирующих агентов (хлорамбуцила, мелфалана, этилениминохинонов), арколизина и некоторых других с рецепторным аппаратом клетки. Прямые опыты [Мухин и др., 1990] однозначно показывают, что некоторые бифункциональные алкилирующие соединения обладают сродством к ос-адренорецепторам и ни один из них не взаимодействет с Р-адренорецепторами.

Анализ результатов показал, что ФАВ по разному действуют на мутагенез, индуцированный различными индукторами мутаций. В одних случаях протекторы эффективнее снижали уровень аберраций индуцированный ЭМС, в других ЦФ. Каких-либо закономерностей при этом обнаружить не удалось. Однако, понятно, что механизм мутагенеза, индуцируемый различными мутагенами (даже находящимися в одной химической группе - алкилирующие вещества), различен и целесообразность применения того или иного протектора должна определятся на основе фармакологической концепции антимутагенеза [Середенин С.Б., Дурнев А.Д., 1992].

И, наконец, антимутагенный эффект ФАВ, полученный на разных моделях, оказался неоднозначным. Это в какой-то мере можно обьяснить различным уровнем эволюционного развития рецепторных систем у микроорганизмов, растений и животных.

И в заключении необходимо отметить, что наши исследования ставят вопрос о наличии на уровне организма антимутагенной системы, существенным компонентом которой является мембранная рецепция клеток. По механизму своего действия эта система полирецепторна (в ней принимают участие представители различных типов рецепторов) и поливалентна (и стимуляторы и блокаторы формировании клеточного антимутагенеза).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гайнуллина, Миляуша Якубовна, Казань

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные средства. —М.: Наука, 1985. —230с.

2. Агабейли P.A. Антимутагенная активность оксидазных ферментов // Генетика. — 1986. — Т. 22, № 5. — С. 809 814.

3. Алекперов У.К. Антимутагенез. Теоретические и практические аспекты. М.: Наука, 1986, — 100 с.

4. Алекперов У.К. Антимутагенез в концепции охраны генофонда //5 съезд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им. Н. И. Вавилова. Москва. 24 28 ноября 1987. Тезисы докладов. Москва, 1987. — Т. 1. — С. 8-9.

5. Александров А.Н., Овсянников В.И. О возбуждающих эффектах стимуляции пресинаптических ß-адренорецепторов подвздошной кишки у ненаркотизированных кроликов // Бюл. экспер. биол. — 1993.— Т. CXVI, № 10.— С. 341-343.

6. Аптикаева Г.Ф., Розанова О.М., Саугабаева K.M., Ганасси Е.Э. Участие протеиназ в радиационном повреждении хромосом. Исследование действия фенилметилсульфонил- фторида // Радиобиология. — 1988. — Т. 28, №3, —С. 297 -302.

7. Арутюнян P.M. Современные проблемы модификации интенсивности мутагенеза // Первый Всесоюзный съезд медицинских генетиков. Киев. 16-18 апреля 1984. Тезисы докладов. Москва, 1983. — С. 21 22.

8. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. М.: Мир, 1978. — 463 с.

9. Бабынин Э.В. Индуцированный аминокислотным голоданием мутагенез у Salmonella typhimurium/ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. — Казань, 1997. — 122 с.

10. Ю.Бариляк И.Р., Исаева A.B. Антимутагенные и генопротекторные свойства препаратов растительного происхождения // Цитол. и генет. — 1994.— Т. 28, №3, — С. 3-17.

11. П.Белоусова А.К. Противоопухолевые препараты как индукторы дифференцировки опухолевых клеток // Вопр. мед. химии. — 1991. — Т. 37, вып. 2, —С. 10-14.

12. Бочков Н.П., Дурнев А.Д., Журков B.C. и др. Система поиска и изучения соединений с антимутагенными свойствами (Методические рекомендации) // Хим.-фарм. журн. — 1992. — Т.26, № 9-10. — С. 4246.

13. Булдаков A.C. Пищевые добавки (Справочник). — СПб.: "Ut", 1996. — 240 с.

14. М.Васильева C.B. Антимутагенная активность парааминобензойной кислоты // Реализация наследствен, геноформ.: Тез. к Всес. симпоз. Паланга. 1980. Паланга, 1980. — С. 18.

15. Васильева C.B., Давниченко JI.C., Рапопорт И.А. Усиление парааминобензойной кислотой процессов репарации ДНК в Esherishia coli К-12//Генетика, — 1982а, — Т. 18, № 3. — С. 381 -391.

16. Васильева С.В., Тонкаль Т.Е. Пара-аминобензойная кислота ингибирует проявление индуцибельных "SOS"—функций в Esherishia coli К-12// Генетика, — 1983, —Т. 19, № 11. — С. 1778 1785.

17. Гизатуллин Ф.Ш., Лезин Г.Т., Ломовцева Е.Ю., Бабынин Э.В. К природе возникновения His+ -ревертантов у Salmonella typhimurium // Генетика. — 1993. — Т. 29, № 3. — С. 423-429.

18. Гизатуллин Ф.Ш., Лезин Г.Т., Бабынин Э.В. Индуцированный голоданием мутагенез у Salmonella typhimurium // Генетика. — 1995. — Т. 31, № 10, —С. 1380-1385.

19. Гизатуллин Ф.Ш., Бабынин Э.В. Специфичность и время возникновения His+ -реверсий, индуцированных гистидиновым голоданием, у Salmonella typhimurium // Генетика. — 1996. — Т. 32, № 9. — С.1-8.

20. Гончарова Р.И. Антимутагенез как генетический процесс // Вести. РАМН. — 1993. — № 1. С. 26-33.

21. Григорова H.B. Эффект проявления перестроек хромосомного типа в опытах на растениях с N-нитрозомочевиной и пара-аминобензойной кислотой // Цитология и генетика. — 1987. — Т. 21, № 1. — С. 41 43.

22. Гусев М.В., Минеева JI.A. Микробиология: Учебник. — 2-е изд. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1985. — 376 с.

23. Дубинин Н.П. Молекулярная генетика и действие излучений на наследственность. М.: Госатомиздат, 1963. — 240 с.

24. Дубинин Н.П. Потенциальные изменения в ДНК и мутации. М.: Наука, 1978, —246 с.

25. Дубинина Л.Г. Структурные мутации в опытах с Crépis capillaris. M.: Наука, 1978.— 188 с.

26. Дурнев А.Д., Орещенко A.B. Пища. Мутагенез и антимутагенез // Хран. и перераб. сельхоз. сырья. — 1996. — № 3. — С. 14-18.

27. Дурнев А.Д., Середенин С.Б. Фармакологические проблемы поиска и применения антимутагенов// Вестн. РАМН. — 1993. — № 1. С. 19-26.

28. Дурнев А.Д., Середенин С.Б. Мутагены (скрининг и фармакологическая профилактика воздействий). — М.: Медицина, 1998. — 328с.

29. Дыгало H. H., Шишкина Г.Т., Сурнина Н.Ю., Юшкова A.A. Различия эффектов глюкокортикоидов на плотность ß-адренорецепторов в легких и коре головного мозга // Бюл. экспер. биол. — 1995. — T. CXIX, №3.— С. 328-330.

30. Ерошенко Т.М., Лукьянова Л. Л. Физиологические свойства регуляторных пептидов // Итоги науки и техники. Физиология человека и животных. — 1989,— Т. 51, № 7 — С. 168.

31. Золотарева Г.Н., Акаева Э.А. Лекарственный антимутагенез // Хим-фарм. журнал. — 1981. — Т. 15, № 12. — С. 9-14.

32. Золотарева Г.Н., Логинова Н.С., Паршина О.В., Носик H.H. Эффект индуктора интерферона ридостина на фотрин-индуцированную мутагенность в клетках костного мозга мышей // Вопр. онкол. — 1991. -№7-8.— С. 834-838.

33. Ивашкин В.Т. Васильев В.Ю., Северин Е.С. Уровни регуляции функциональной активности органов и тканей // М.: Наука, 1987. — 272с.

34. Ильинских H.H., Медведев М.А., Бессуднова С.С., Ильинских И.Н. Мутагенез при различных функциональных состояниях организма. — Томск: Изд-во Томского ун-та, 1990. — 228с.

35. Капитанов А.Б., Пименов A.M. Каротиноиды как антиоксидативные модуляторы клеточного метаболизма // Успехи соврем, биол. — 1996. — №2. — С. 179-193.

36. Керкис Ю.Я. Некоторые аспекты изучения мутагенных эффектов загрязнения среды обитания людей// Генетические последствия загрязнения окружающей среды. — М.: Наука, 1977. — С. 37-41.

37. Клюева Н.З., Рыжов Д.Б., Куликов С.В.,Чурина С.К. Особенности прессорного ответа на адреналин при артериальной гипертензии, вызванной дефицитом экзогенного кальция // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. —1997. — Т. 124, № 8. — С. 148-150.

38. Колумбаева С.Ж., Байбекова Т.К. Мутагенный эффект нитрозогуанидина и его модифицирование регуляторами роста в зависимости от стадии клеточного цикла // Цитология и генетика. — 1986. — Т.20, № 5. — С. 350-354.

39. Кондратенко Т.Я., Кузина Н.В., Северин Е.С. и др. Хроническая пневмония и рак: изменения ß-адренергических рецепторов в паренхиме легких человека // Вопросы медицинской химии — 1991а. — Т. 37, №2, —С. 20-21.

40. Кондратенко Т.Я., Кузина Н.В., Северин Е.С. и др. ß-Адренергические и мускариновые ацетилхолиновые рецепторы в паренхиме легких человека при злокачественных новообразованиях // Вопросы медицинской химии — 19916. — Т. 37, № 3.— С. 20-21.

41. Кондратенко Т.Я., Кузина H.В., Северин Е.С. и др. а-адренергические рецепторы паренхимы легких человека при деструктивном туберкулезе // Вопросы медицинской химии —1991в.— Т. 37, № 4.— С. 69-70.

42. Кулинский В.И., Медведева Т.Н. Роль а2-адренорецепторов в устойчивости к полной ишемии головного мозга // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1997. — Т. 124, № 10. — С. 413-416.

43. Малашенко A.M., Васильева C.B. Модификация генетического эффекта N-нитрозоэтилмочевины у инбредных мышей пара-аминобензойной кислотой // Генетика. — 1985. — Т. 21, № 4. — С. 582 585.

44. Маркель A.JL, Шишкина Г.Т. Генетическая корреляция реакции артериального давления при эмоцианальном стрессе с концентрацией al-адренорецепторов в отделах мозга // Генетика.— 1992. — Т. 28, № 11. — С. 130-133.

45. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1998. — 574 с.

46. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. — М.: Наука, — 1981. — 192 с.

47. Михеев B.C., Анисимова Л.Е. Мутагенность гормонов и гормональных препаратов// Деп. в ВИНИТИ № 8871-В88. — 1988.

48. Михельсон М.Я. Теория химической передачи нервного импульса. Этапы развития, состояние. М., — 1981, 212с.

49. Пашин Ю.В., Бахитова Л.М., Бентхен Т.И., Плеханова Л.Г., Ершов Р.В. Антимутагенная активность пространственно затруднённых фенолов // Изв. АН СССР. Сер. биол. — 1987. — № 2. — С. 298 300.

50. Порошенко Г.Г., Абилев С.К. Антропогенные мутагены и природные антимутагены // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Серия "Общая генетика". — 1988. — Т. 12. — С. 206.

51. Птицына С.Н., Шевченко В.А., Туманова JI.JI. Модификация мутагенного процесса в популяциях хлореллы физиологически активными веществами // Генетика. — 1982. — Т. XV111, N 4. — С. 18351844.

52. Реймерс Н.Ф. Популярный биологический словарь.— М.: Наука, 1991.544 с.

53. Розен В.Б. Рецепторы гормонов, их структура, свойства и закономерности функционирования в клетках // Физиология гормональной рецепции / Под ред. В.Г. Шаляпиной. Л.:Наука. — 1986.1. С. 5-33.

54. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ// Гигиенические критерии состояния окружающей среды № 51. — Женева: ВОЗ, 1989. — 212 с.

55. Рощина В.В. Реакции мембран хлоропластов с биомедиаторами // Биофизика. — 1989. — Т.34, №> 4. — С. 602-605.

56. Рощина В.В. Биомедиаторы в растениях. Адетилхолин и биогенные амины. — Пущино, 1991. — ОНТИ ПНЦ АН СССР. — 192 с.

57. Семенов В.В. Рецепторно-регуляторные механизмы действия антимутагенов // Вестн. РАМН,— 1997,— № 7.с. 28-33.

58. Семенов В.В., Артемьева Г.И. Комутагенная и антимутагенная система клетки // Материалы II итоговой конференции " Генетика человека и патология". Томск. 1992. — С. 178 179.

59. Семенов В.В., Ибрагимова М.Я., Барабанщиков Б.И. Модификация адреналином мутагенного действия этилметансульфоната // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1998. — Т. 126, № 10.— С 427-429.

60. Семенов В.В., Каримова Ф.Г., Сабирова Л.Р., Леонова С.А. Предсинтетический период клеточного цикла: уровень эндогенного цАМФ, интенсивность репарации и мутагенеза // Цитология и генетика. — 1993, —Т. 27, № 1, —С. 28-32.

61. Семенов В.В., Студенцова И.А. Количественные и качественные критерии оценки эффективности антимутагенов в эксперименте // Вестник РАМН. — 1993. — № 3. — С. 16-20.

62. Семенов В.В., Студенцова И.А., Дурнев А.Д., Середенин С.Б., Визель А.О. Антимутагены как модификаторы циклазной системы клетки // Вопросы медицинской химии. — 1994. — Т. 40, № 3. — С. 48 50.

63. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л. Рецепторы физиологически активных веществ.— М.: Медицина, 1987.— 400 с.

64. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ: Монография. — Волгоград: "Семь ветров", 1999, —640 с.

65. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л. Рецепторы: от теории к практике // Фармакол. и токсикол.— 1990. — Т.53. — № 2. — С. 4—8.

66. Середенин С.Б. Методологические подходы к созданию протекторов при воздействии мутагенных факторов среды // Второй Всесоюзный съезд медицинских генетиков. Алма-Ата. 4-6 декабря 1990. Тезисы докладов. Москва, 1990. — С. 549 550.

67. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. Разработка фармакологических средств защиты генетических структур на основе изучения клеточных механизмов индукции мутаций// Клеточные механизмы реализации фармакологического эффекта. М., 1990. — С. 273-296.

68. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. и др. Антимутагенные эффекты фармакологических соединений с антиоксидантными свойствами // Тез. докл. 3 Всес. конфер. "Биоантиоксиданты". Москва, 1990. — Т.1. — С. 226-227.

69. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома. М.: ВИНИТИ, —1992. — 160с.

70. Тарасов В.А. Молекулярные механизмы репарации и мутагенеза. М.: Наука, 1982. — 226 с.

71. Тарасов В.А. Принципы качественной и количественной оценки генетической опасности химических веществ. — В сб.: Мутагены и канцерогены окружающей среды и наследственность человека. — М., 1994, —Ч. 1, —С. 3-66.

72. Тутельян В.А., Алексеева И.А. Витамины антиоксидантного ряда: обеспеченность населения и значение в профилактике хронических заболеваний // Клин, фармакол. и тер. — 1995. — № 1. — С. 90-92.

73. Урбах В.Ю. Биометрические методы. — М.: Наука, 1964. — 415с.

74. Худолей В.В. Модификация мутагенеза и антимутагенеза // Вестн. РАМН,—1993,—N1, —С. 34-41.

75. Циркин В.И., Дворянский С.А., Братухина С.В. и др. Эндогенный блокатор Р-адренорецепторов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.—1997. — Т. 123, № 3.— С.248-252.

76. Шишкина Г.Т., Маркель А.Л., Науменко Е.В. Адренорецепторы головного мозга у крыс с наследственной обусловленной эмоцианальным стрессом артериальной гипертензией // Генетика. — 1991. — Т. 27, № 2. — С. 279-284.

77. Ahlquist R. P. Adrenoceptor sensitivity in disease as assessed through response to temperature alteration. — Drug and hypothermia. — 1977. — V. 36.—P. 2572-2584.

78. Akaiwa E. et al. Bio-antimutagenic activities of vitamin В in E. coli and mouse peripheral blood cells // Mutat. Res. — 1992. — V. 272. — P. 249254.

79. Al Dosari A., McDonald J., Olson B., Noblitt T. et al. Influence of benzylisothiocyanate and 13-cis-retinoic acid on micronucleus formation induced by benzo(a)pyrene//Mutat. Res. —1996. — V. 352. — P. 1-7.

80. Alzieu P., Cassand P., Colin C et al. Effect of vitamin A,C and glutathione on the mutagenicity of benz(a)pyrene mediated by S9 from vitamin A-deficient rats // Mutat. Res. Mutat. Res. Lett. — 1987. — V. 192. — P. 227-231.

81. Ames B.N., McCann J., Yamasaki E. Methods for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonella/mammalian microsome mutagenecity test // Mutat. Res. — 1975. — V. 31. — P. 347-364.

82. Anagnostopoulos C., Spizizen J. Requirements for transformation in Bacillus subtilis// J.Bacteriol. — 1961. — V. 81, N2. — P. 741-746.

83. Anderson D., Bishop J. B., Garner R.C. et al. Cyclophosphamide: review of its mutagenecity for an assesment of potential germ cell risk // Mutat. Res.1995, —V. 330, —P. 115-181.

84. Atsuko Y., Minori W., Tetsuhiro N. et al. Stable expression and coupling of cardial L-type Ca2+ channels with pi-adrenoceptors // Circ. Res. — 1995.1. V. 76, №3, —P. 335-342.

85. Bahouth Suleiman W., Gokmen-Polar Yesim, Coronel Elizabeth C., Fain John N. Enhanced desensitization and phosphorylation of the pi-adrenergic receptor in rat adipocytes by peroxovanadate. // Mol. Pharmacol. — 1996. V. 49, №6. — P. 1049-1057.

86. Benova D., Porova M. Antimutagenic efftects of vitamins and combined vitamin+WR-2721 against radiation-induced chromosome aberrations in mice//Mutat. Res. Environ. Mutagenes. Related Subj. — 1989. — V. 216, N5, —P. 291-298.

87. Bouloumie A., Valet P., Dauzats M., Lafontan M., Saulnier-Blache J.-S. In vivo upregulation of adipocyte a2-adrenoceptors by androgens in consequence of direct action on fat cells // Amer. J. Physiol. — 1994. — V. 267, №4, —P. 926-931.

88. Brown E.G., Newton R.P. Cyclic AMP and higher plants // Phytochemistry. — 1981. — V. 20, № 11. — P. 2453-2463.

89. Caggana M., Liber H.L., Mauch P.M. et al. In vivo somatic mutation in the lymphocytes of Hodgkin's patients // Environ. Mol. Mutagen. — 1991. — V. 18.—P. 6-13.

90. Chesis P.L., Levin D.E., Smith M.T. Mutagenicity of quinones; pathways metabolic activation and detoxcication // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. — 1984. — V. 81, —P. 1696-1700.

91. Coleman J., Evans D., Hawes C. Plant coated vesicles // Plant Cell and Environment. — 1988. — V. 11, № 8. — P. 669-684.

92. Davies K.J.A. Proteolytic systems as secondary antioxidant defenses/In.: Cellular antioxidant defence mechanism. Ed. Crow C.K.-Boca Raton, FL: CRC. — 1988, — P. 25-67.

93. De Flora S., Ramel C. Mechanisms of inhibitors of mutagenesis and carcinogenesis. Classification and overview // Mutat. Res. — 1988. — V. 202.—P. 285-306.

94. Dessauer Carmen W., Posner Bruce A., Gilman Aldred G. Visualizing signal transduction: Receptors, G-proteins, and adenylate cyclases // Clin. Sei. — 1996. — V. 91, № 5. — P. 527-537.

95. Ejchart A., Chlopkiewicz A., Czarnomska A., Koziorowska J. Effects of riboflavin on benzo(a)pyrene, 2-acetylaminofluorene and methyl methanesulfonate mutagenecity in vitro // Pol. J. Pharmacol. Pharm. — 1990. — V. 42,—P. 159-164.

96. Ferguson Stepher S.G., Barak Larry S., Zhang Jie, Caron Marc G. G-protein-coupled receptor regulation: Role of G-protein-coupled receptor kinases and arrestins // Can. J. Physiol, and Pharmacol. — 1996. — V. 74, №10.—P. 1095-1110.

97. Firn R.D. Too many binding proteins, not enough receptors? // Plant Hormone Receptors / Ed. by D. Klambt. Berlin ets.: Springer-Verlag. — 1987,—P. 1-11.

98. Fonseca Maria I., Button Donald C., Brown R. Dale. Agonist regulation of alB-adrenergic receptor subcellular distribution and function // J. Biol. Chem.1995. — V. 270, № 15. — P. 8902-8909.

99. Ford C.E., Hamerton I.L. A colchicine, hipotonic citrate, squach sequence for mammalian chromosomes// Stain. Technol. — 1956. — V. 31. — P. 247 -251.

100. Gichner T., Pospisil F., Volkeova Vera, Volke J., Veleminsky J. Gallic and tannic acids inhibit the mutagenicity of a direct acting N-methyl-N'-nitro-N-nitrosamine in Arabidopsis thaliana // Biol. Plant. — 1986. — V. 28, N5. — P. 386-390.

101. Gichner T., Veleminsky J., Rapoport I.A., Vasilieva S.V. Antimutagenic effect of p-aminobenzoic acid on the mutagenicity of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine in Salmonella typhimurium // Mutat. Res. Mutat. Res. Lett.1987. — V. 192, № 2. — P. 95-98.

102. Gizatullin F. S., Lyozin G.T. The origin of His+ revertants of Salmonella typhimurium obtained on selective medium // Res. Microbiol. — 1992. — V. 143, —P. 711-719.

103. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and madicine. — Oxford: Clarendon Press, 1986. — 346 p.

104. Hartman P.E., Shankel D.M. Antimutagens and Anticarcinogens: A Survey of Putative Intrrceptor Molecules. — 1990. — V. 15, № 3. — P. 145182.

105. Horn A. S., Rodgers J. R.: 2-Amino 6,7-dihydroxytetrahydronaphthalene and the receptor site preferred conformation of dopamine- a commentary // J. of Pharmacy and Pharmacology . — 1980. — V. 32, № 7. — P. 521-524.

106. Hrelia P., Morotti M., Vigagni F. et al. The modulating activity of interferon on benzoa.pyrene bioactivation and clastogenesis in mice // Pharmacol. Toxicol. — 1994. — V. 74. — P. 249-254.

107. Jmanishi H., Sasaki Yu, Toshihiro O., Shirasu Y. Tea tannin components modify the induction of SCE and CA in mutagen-treated cultured mammalian cell and mice//Mutat. Res. — 1991. — V. 25a. — P. 79 87.

108. Jung Hans, Windhaber Ralf, Palm Dieter, Schnackerz Klaus D. NMR and circular dichroism studies of synthetic peptides derived from the third intracellular loop of the ^-adrenoceptor // FEBS Lett. — 1995. — V. 358, №2, —P. 133-136.

109. Imanishi H., Sasaki Y.F., Matsumoto K. et al. Suppression of 6-TG-resistant mutations in V79 cells and recessive spot formations in mice by vamlin // Mutat. Res. — 1990. —V. 243. — P. 151-158.

110. Ingraham L. L., Meyer D. L. Biochemistry of Dioxygen. N.Y., London: Plenum Press. — 1985. — 287 p.

111. Kamisaka S., Shibata K. Identification in lettuce seedlings of catecholamine active synergistically enhancing the gibberellin effect on lettuce hypocotyl elongation // Plant Growth Regulation. — 1982. — V.l, № 7. — P.3-10.

112. Khurana J. P., Tamot B.K., Maheshwari N., Maheshwari S. C. Role of catecholamines in promotion of flowering in a sport-day duckweed Lenrna paucicostata 6746 // Plant Physiol. — 1987. — V. 87, № 1. — P. 10-12.

113. Kirshner R.L., White J.M., Pike C.S. Control of bean bud ATP levels by regulatory molecules and phytochrome // Physiol. Plant. —1975. — V. 34, №4. — P. 373-377.

114. Kumari D., Sinha S.P. Effect of retinol on ochratoxin-produced genotoxicity in mice//Food Chem. Toxicol. — 1994. — V. 32. — P. 471-475.

115. Kuroda Yukiaki, Jnoue Tadashi. Antimutagenesis by factors affecting DNA repair in bacteria // Mutat. Res. — 1988. — V. 202, № 2. — P. 387 -391.

116. Kushi A., Yoshida D. Antimutagenic effects of phenols on MNNG-induced mutagenesis in E.coli // Agr. and Biol. Chem. — 1987. — V. 51, №5,—P. 1439 1440.

117. Kusunoki Hideki, Kohno Toshiyuki, Tanaka Takeshi et al. NMP studies of G protein-bound receptor peptide fragments: Abstr. Keystone Symp. Front. NMR Mol. Biol.- IV, Keystone, Colo, Apr. 3-9, 1995 // J. Cell. Biochem. — 1995. — Sappl 21b. — P. 47.

118. Lemmens-Gruber R., Zulberszac A., Heistracher P. Arrhythmogenic effect of p-adrenoceptor-blocking drugs in Purkinje fibres of guinea-pig hearts // Arch. mt. pharmacodyn. et ther. — 1996. — V. 331, № 1. — P. 46-58.

119. Longstaff E. Genetic toxicology: a review // Add. Drug. React. Ac. Pois. Rev. — 1986. — V. 4. — P. 235-255.

120. Lundstrom J. Biosynthesis of mescaline and tetrahydroisoquinoline alkaloids in Lophophora williamsii. Occurence and biosynthesis ofcatecholamine and other intermediates // Acta Chem. Scand. — 1971. — V. 25, № 9. —P. 3489-3499.

121. Martin Shaun C., Thompson Jill, Shuttleworth Trevor J. Potentiation of Ca2+ — activated secretory activity by a cAMP-mediated mechanism in avian salt gland cells // Amer. J. Physiol. — 1994. — V. 267, № 1. — P. 255-265.

122. Melin P.M., Sommarin M., Sandelius A.S., Jergil B. Identification of Ca2+-stimulated polyphosphoinositide phospholipase C in isolated plant plasma membranes //FEBS Lett. — 1987. — V. 223, № 1. — P. 87-91.

123. Mitelman F., Kaneko Y., Trent J. Report of the committee on chromosome changes in neoplasia // Cytogenet. and Cell Genet. — 1991. —■ V. 58. — P. 1053-1079.

124. Miyatomo Atsushi, Ito Ken, Nishio Akira. Characterization of (3-adrenoceptors in pig basilar artery from functional and radioligand binding studies// Jap. J. Pharmacol. — 1993. — V. 61, № 2. — P. 93-99.

125. Moustacchi E. Biologie cellulaire et moleculaire de l'anemie de Fanconi // Med. Sci. — 1994. — V. 10. — P. 979-985.

126. Mukendi N'Combo, De Meester C., Rollmann B. Detoxification of aflatoxin B, by different chemicals // J. Pharm. Belg. — 1991. — V. 46, N 2. — P. 116.

127. Nagabhushan M. Inhibitirs of nitrosation in vitro // Environ, and Mol. Mutagenes. — 1989. — 14 Suppl. — P. 139 144.

128. Nunashiba T., Sato M., Saigusa S., Satano T., Nishioka H. Mutation -inhibitory effect of metal compaunds. 1. Sodium arsenite and sodium selenite // Mutat. Res. Environ. Mutagenes. and Related Subj. — 1987. — V. 182, №6.—P. 371.

129. Oata Y. Removal of the sugar inhibition of flowering in Lemna gibba G-3 by catecholamines // Plant Cell Physiol. — 1974. — V. 15, № 1. — P. 63-68.

130. Oata Y., Nakashima H. Photoperiodic flowering in Lemna gibba G-3: Time measurement // Bot. Magazin, Tokyo (Special issue).—1978. — V. 1, № 1,—P. 177-198.

131. Oesch Franz. Antimutagenesis by shift in monooksigenase isoenzimes and induction of epoxide hidrolase // Mutat. Res. — 1988. — V. 202, N 2. — P. 335 -342.

132. Ohta T. Modification of genotoxicity by naturally occurring flavorings and their derivatives // Crit. Rev. Toxicol. — 1993. — V. 23. — P. 127-146.

133. Ohta Toshihiro, Watanabe Mie, Shirasu Yasuhiro, Lnoue Tadashi. Postreplication repair and recombination in uvr A umu C strains of E.coli are echanced by vanilin, an antimutagenic compound // Mutat. Res. — 1988. — V. 201, N 1. — P.107-112.

134. Pasachan S.C., Sabhlok V.P. Effect of thyroidectomy on bone marrow chromosomes and growth of swiss albino mice at various stages of development/ Harayana Agr. Univ. Res. — 1983. — V. 13. — P. 213-217.

135. Poot M., Rudiyer H.W., Hoehn H. Detection of free radical-induced DNA damage with bromodeoxyuridine. Hoechst flow cytometry: implications for Bloom's syndrome // Mutat. Res. — 1990. — V. 238. — P. 203-208.

136. Preston R.J., Dean B.J., Galloway S. et al. Mammalian in vivo cytogenetic assays. Analysis of chromosome aberrations in bone marrow cells // Mutat . Res. — 1987, —V. 189,—P. 157-165.

137. Ramel C., Alekperov U.K., Ames B.N. et al. Ingibitors of mutagenesis and their relevance to carcinogenesis // Mutat. Res.—1986.—V. 168. — P. 47-65.

138. Ranjeva R., Boudet A.M. Phosphorylation of proteins in plants: regulatory effects and potential involvement in stimulus. Response coupling // Ann. Rev. Plant. Physiol. — 1987. — V. 38. — P. 73-93.

139. Rathore H.S. Protection against ill effects of aspirin on chromosomes in Allium root tips by ascorbic acid or magnesium ions-pilot study // Indian J. Med. Sci. 1986. — V. 40, № 12. P. 304 -306.

140. Renner H.W. In vivo effects of single or combined dietary antimutagens on mutagen induced chromosomal aberrations // Mutat. Res. — 1990. — V. 224. — P. 185-188.

141. Roshchina V.V. Biomediators in chloroplasts of higher plants. 1. The interaction with photosynthetic membranes // Photosynthetica. — 1989. — V. 23, №2. —P. 197-206.

142. Roshchina V.V. Biomediators in chloroplasts of higher plants. 3. Effect of dopamine on photochemical activity // Photosynthetica. — 1990. — V. 24, № 1, —P. 117-121.

143. Rousseau Guy, Nantel Francois, Bouvier Michel. Distinct receptor domains determine subtype-specific coupling and desensitization phenotypes for human pi- and p2-adrenergic receptors // Mol. Pharmacol. — 1996. — V. 49, №4, —P. 752-760.

144. Sahu K., Das R.K. Reduction of clastogenic effect of clofazimine, an antileprosy drug, by vitamin A and vitamin C in bone marrow cells in mice // Food Chem. Toxicol. — 1994. — V. 32. — P. 911-915.

145. Salleo A., Salleo S., Urna G. Impiego di segmenti di fusto di Cucurbita sp per la identificazione dei tessuti dotati di attivita bioelectrica in piante superiori // Giornale Botanico Italiano. — 1977. — V. Ill, № 3. — P. 298299.

146. Salvadori D.M., Ribeiro L.R., Oliveira M.D. et al. The protective effect of beta-carotene on genotoxicity induced by cyclophosphamide // Mutat. Res. — 1992.— V. 265,—P. 237-244.

147. Sarkar D., Sharma A., Talukder G. Chlorophyll and chlorophyllin as modifiers of genotoxic effects/ZMutat. Res. — 1994. — V. 318. — P. 239247.

148. Sato Mayumi, Nunoshiba Tatsuo, Nishioka Hajime. Mutation-ingibitiry effect of sodium selenite and its mechanism//Sci. and Eng. Rev. Doshisha Univ. — 1988. — V. 29, N1. — P. 29 37.

149. Scheer Alexander, Cotecchia Susanna. Constitutively active G proteincoupled receptors: Potential mechanisms of receptor activation // J. Receptor and Signal Transduct. Res. — 1997. — V. 17, № 1-2. — P. 57-73.

150. Shankel D.M., Clarke C.H. Specificy of antimutagens against chemical mutagens in microbiol systems // Antimutagenesis and Anticancerogenesis Mech II.: Proc. 2nd Int. Conf. Ohito. Dec. 4-9, 1988. New York: London. — 1990.— P. 457 -460.

151. Shetty T.K., Francis A.R., Bhattacharya R.K. Modification role of vitamins on the mutagenic action of N- methil-N-nitro-N-nitrosoguanidine // Carcinogenesis. — 1988. — V. 9, N 8. — P. 1513 -1515.

152. Sies H., Stahe W., Sundquist A.R. Antioxidant function of vitamins. Vitamin E and C, beta-carotene, and other carotenoids // Ann. N.Y. Acad. Sei. — 1992. — V. 669. — P. 7-29.

153. Sinha S.P., Dharmshila K. Vitamin A ameliorates the genotoxicity in mice of aflatoxin B1-containing Aspergillus flavus infested food // Cytobios. — 1994.— V. 79.— P. 85-95.

154. Stavric B. Antimutagens and anticarcinogens in foods // Food Chem. Toxicol. 1994. — V. 32. — P. 79-90.

155. Sun Gengyun, Mao Baoling, Lu Baozhang. Changes of pulmonary aj- and p-adrenergic receptors after endotoxin-induced acute lung injury in rats // J. Med. Coll. PLA.—1997.—V. 12, № 1. — P. 71-74.

156. Tamai K., Tezuka H., Kuroda Y. Different modifications by vanillin in cytotoxicity and genetic changes induced by EMS and H2O2 in cultured Chinese hamster cells // Mutat. Res. — 1992. — V. 268. — P. 231-237.

157. Tateishi Jun, Faber James E. ATF-sensitive K+ channels mediate CC2D-adrenergic receptor contraction of arteriolar smooth muscle and reversal of contraction by hypoxia // Circ. Res. — 1995. — V. 76, № 1. — P. 53-63.

158. Tocher R. D., Tocher C. S. Biosynthesis of 3-hydroxytyramine in plants // Abstr. Ilth Int. Bot. Congr. — 1969. — P. 219.

159. Tocher R. D., Tocher C. S. DOPA decarboxylase in Cytisus scoparius // Phytochemistry. —1972. — V. 11, №5, —P. 1661-1667.

160. Tohda Hideoki, Foskett J. Kevin, O'Brodovich Hugh, Marunaka Ioshinori. Cl~ regulation of a Ca2+ —activated nonselective cation channel in p-agonist-treated fetal distal lung epit helium // Amer. J. Physiol. — 1994. — V. 266, № l,Pt 1,—P. 104-109.

161. Trizna Z.,Hsu T.C., Schantz S.P. Protective effects of vitamin E ageinst bleomycin-induced genotoxicity in head and neck cancer patients in vitro//Anticancer Res. — 1992. —V. 12. — P. 325-327.

162. Udenfriend S., Lovenberg W., Sjoerdsma A. Physiologically active amines in common fruits and vegetables // Arch. Biochem. Biophys. — 1959. — V. 85, № 2. — P. 487-490.

163. Uppal S., Maherchandani N. Radio protective effect of gibberellic acid in wheat variety C 306 // Curr. Sei. (India). — 1988. — V. 57, № 2,—P. 93-94.

164. Vellosi R., Delia Croce C., Broneztti G. Effect of cinnamalddehyde on V79 cell line after treatment with mutagenic agents // Atti. Assoc. genet. Ital.1990. — V. 36. — P.75-79.

165. Waalkes T. P., Sjoerdsma A., Greveling C. R., Weissbach H., Udenfriend S. Serotonin, norepinephrine, and related compounds in bananas // Science. — 1958. — V.127, № 3299. — P. 648-650.

166. Wale Janet L., Sly Peter D., Tulic Meri, McWilliam Andrew. Loss of ß-adrenoceptor potency with lipopolysaccharide // Austral. And N. Z. J. Med.1997. — V.27, № 2,— P. 240.

167. Wall M.E. Antimutagenic agents from natural products // J. nat. Prod. — 1992.— V. 55, —P. 1561-1568.

168. Wang Feny, Lidow Michael S. a2A- adrenergic receptors are expressed by diverse cell types in the fetal primate cerebral wall // J. Compar. Neurol. — 1997. — V. 378, №4. — P. 493-507.

169. Watanabe M., Ohta T., Shirasu J., Jnoue I., Kada T. Effect of vanillin an antimutagenic factor on interplasmidic recombination//Mutat. Res. Environ. Mutagenes and Related Subj. — 1987. — V. 182, N6. — P. 384.

170. Waters M.D., Stack H.F., Jackson M.S. et al. Activity profiles of antimutagens: in vitro and in vivo data // Mutat. Res. — 1996. — V. 350. — P. 109-129.

171. Wise Alan et al. Degradation of Gila/ Gqa is accelerated by agonist occupancy of ocia/d, otie, and otic adrenergic receptors // J. Biol. Chem. — 1995.—'V. 270, № 29. — P. 17196-17203.

172. Yatani Atsuko, Wakamori Minora, Niidome Tetsuhiro, Yamamoto Satoshi et al. Stable expression and coupling of cardial L-type Ca2+ channels with |3i-adrenoceptors // Circ. Res. — 1995. — V. 76, № 3. — P. 335-342.