Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов

Кириллов, Давид Арчилович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов"

На правах рукописи

КИРИЛЛОВ ДАВИД АРЧИЛОВИЧ

ЛЕКАРСТВЕННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ПЕРСИСТЕНТНЫХ СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ

03.00.07 — «Микробиология»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург - 2004

Работа выполнена в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН

Научный руководитель:

академик РАМН, член-корреспондент РАН,

доктор медицинских наук, профессор Бухарин Олег Валерьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Усвяцов Борис Яковлевич

доктор медицинских наук,

профессор Габидуллин Зайнулла Гайнулинович

Ведущая организация:

Челябинская государственная медицинская академия

Защита состоится «^¿¿у 2004 г. в ^ часов на

заседании диссертационного совета Д. 208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: 460014, г. Оренбург, ул. Советская 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии

Автореферат разослан «¿¿¿о» 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинскихаук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Появление большого количества новых средств этиологической и патогенетической терапии значительно расширило возможности лечения инфекционных и гнойно-воспалительных заболеваний (Белоусов Ю.Б., 1997). Однако острота проблемы инфекций с годами не только не снижается, но и, напротив, приобретает все большую актуальность в связи с изменением биологических свойств возбудителей (Felmingham D., 2000, Яковлев В.П., 2002, Сидоренко СВ., 2002). Инактивация или инги-бирование факторов защиты и агрессии микроорганизмов под влиянием различных препаратов предотвращает колонизацию слизистых определенными группами патогенных бактерий, тем самым либо снижается, либо полностью нивелируется их отрицательное воздействие на макроорганизм (Шендеров Б.А., 1998). Отличительной особенностью гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваний на современном этапе является увеличение доли затяжных и хронических форм, что связано с возможностью возбудителя длительно персистировать в макроорганизме (Бухарин О.В., 1999). Поэтому особый интерес представляет регуляция персистентных свойств микроорганизмов.

Применение в клинике антимикробных препаратов, антиокси-дантов, иммуномодуляторов для обеспечения антиинфекционной защиты макроорганизма, а также гормональных средств, обеспечивающих общефизиологический статус, приводит к изменению качественного и количественного состава микробиоценозов тела человека. Однако до настоящего времени по-прежнему не выяснены механизмы воздействия препаратов на изменение микробиоценозов человека при их использовании. Остается неизученным действие субингибиторных концентраций современных химиопрепаратов на персистенцию патогенов, спектр антимикробной активности которых включает аэробные и анаэробные бактерии; не расшифровано синергидное действие антимикробных средств с окситоцином в отношении возбудителей острых гнойно-воспалительных процессов. В связи с высокими адаптивными способностями микроорганизмов, по-прежнему актуальным остается поиск новых веществ, обладающих антимикробными свойствами.

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния патогенетических и антимикробных препаратов на факторы перси-

стенции патогенных и условно-патогенн

.Ту пробных и анаэробных

рос. национальная] библиотека |

С Петербург о л Л

оэ №0У

микроорганизмов.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние патогенетических препаратов (антиокси-дантов, полиоксидония, циклоферона, стероидных гормонов, окси-тоцина) на факторы персистенции микроорганизмов.

2. Определить действие антимикробных средств (антибиотиков, фторхинолонов и их комбинаций с окситоцином) на факторы персистенции аэробных и анаэробных патогенных и условно-патогенных бактерий.

3. Изучить антимикробный эффект этилцеллозольволята натрия и оценить его влияние в субингибиторных концентрациях на факторы персистенции патогенов.

Научная новизна. При изучении влияния средств патогенетической и антимикробной терапии инфекционных заболеваний на персистентные характеристики патогенных и условно-патогенных аэробных и анаэробных микроорганизмов выявлена связь строения и концентрации веществ с изменением антилизоцимной и антикомплементарной активностей бактерий.

Установлено, что различные по химической структуре антиок-сидантьь (витамины А, Е, С, полиоксидоний) в терапевтических концентрациях подавляли антилизоцимную и антикомплементарную активности патогенов, усиливая эти свойства у бифидобакте-рий. Витамины.Е, А повышали персистентный потенциал пропио-нибактерий, тогда как витамин С и полиоксидоний оказывали противоположный эффект. Наибольшим ингибирующим влиянием на факторы персистенции изученных видов обладали витамины С, Е, полиоксидоний.

Выявлена способность иммуномодулятора циклоферона подавлять персистентные характеристики внутриклеточных бактериальных патогенов.

Показаны отличия действия катаболических и анаболических стероидных гормонов на факторы персистенции патогенных микроорганизмов и представителей нормальной микрофлоры человека. Катаболические стероидные препараты (гидрокортизон, преднизо-лон, дексаметазон) повышали персистентные признаки патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (эшерихий, клебсиелл, сальмонелл, шигелл, псевдомонад, стафилококков, грибов- рода-Candida, бактероидов, превотелл) и снижали антилизоцимную и антикомплементарную активности пропионибактерий и бифидо-бактерий. Анаболические стероиды (тестостерон, ретаболил, фено-болил) снижали персистентные свойства патогенных бактерий,

грибов рода Candida и повышали факторы персистенции бифидо-бактерий, пропионибактерий.

Расшифрован механизм лечебного эффекта комбинаций антибактериальных препаратов с окситоцином в отношении патогенов. Установлено, что в основе синергидного действия комбинаций «антибиотик-гормон» лежит повышение под действием окситоцина чувствительности патогенных бактерий к антибактериальным препаратам, подавление персистентных свойств и снижение гетерогенности популяций возбудителей.

При изучении влияния антибактериальных препаратов на факторы персистенции патогенных бактерий установлен ингибирую-щий эффект карбапенемов и метронидазола на антилизоцимную и антикомплементарную активности анаэробных возбудителей.

Установлена связь структуры фторхинолонов с их ингибирую-щим влиянием на факторы персистенции микроорганизмов. Изучение действия фторхинолонов различного химического строения на факторы персистенции бактерий позволило установить, что цикло-пропильный радикал в структуре хинолона является ответственным за подавление персистентных свойств патогенов. Фторхинолоны (норфлоксацин, пефлоксацин, ломефлоксацин) без циклопропиль-ного радикала либо не изменяли факторы персистенции бактерий, либо подавляли один из изученных признаков, в то время как фторхинолоны с циклопропильным радикалом (ципрофлоксацин, спар-флоксацин) подавляли персистентные характеристики у всех изученных микроорганизмов.

Впервые изучен антимикробный спектр этилцеллозольволята натрия, включающий грамположительные и грамотрицательные виды бактерий, грибы рода Candida, определено ингибирующее влияние субингибиторных концентраций препарата на факторы персистенции патогенов.

Ценность для науки и практики. В теоретическом плане представляются важными полученные данные, раскрывающие эффекты действия антиоксидантов, циклоферона, гормональных препаратов, антимикробных средств на факторы персистенции и анти-биотикорезистентность различных видов микроорганизмов.

На основе полученных материалов разработан способ лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры микробной этиологии, в том числе и анаэробной неклостридиальной инфекции, путем подбора комбинаций антибиотиков с окситоци-ном по наиболее выраженному ингибирующему влиянию на перси-стентные свойства возбудителей.

Данные о роли циклопропильного радикала в структуре фтор-хинолонов легли в основу способа лечения гнойных ран с применением комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на гидрофильной мазевой основе.

Этилцеллозольволят натрия (1% водный раствор), обладающий широким антимикробным спектром, предложен в качестве нового средства для дезинфекции (положительное решение о выдачи патента РФ №2003110485/15 (011069) от 07.04.2004).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Лекарственные препараты (антиоксиданты, иммуномодуля-торы, гормональные и антибактериальные вещества) модифицируют факторы персистенции бактериальных патогенов. Характер и степень изменений факторов персистенции определяется строением, концентрацией веществ и видовой принадлежности микроорганизмов.

2. Выявлены новые препараты, обладающие антиперсистент-ным эффектом: циклоферон, карбапенемы, фторхинолоны с цикло-пропильным радикалом и этицеллозольволят натрия.

3. В основе механизма этиотропного лечебного эффекта комбинаций «антибиотик- окситоцин» лежит повышение под действием гормона чувствительности патогенных бактерий к антибактериальным препаратам, подавление персистентных свойств с последующей элиминацией возбудителей из организма.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на III и IV Всероссийских конференциях по проблеме персистенции микроорганизмов (Оренбург, 2000, 2003), III Всероссийском научном семинаре по органической химии и медицине, посвященном 50-летию ИОХ УНЦ РАН и УНЦ РАН (Уфа, 2001), Первом съезде микологов России (Москва, 2002); IV и V Российских конференциях «Современные проблемы антимикробной химиотерапии» (Москва, 2002, 2003), фрагменты работы экспонировались во Всероссийском выставочном центре в рамках выставки «Экологическая безопасность России» (медаль ВВЦ, Москва, 2003).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 9 печатных работ

. Объемен структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, 2 главы собственных исследований, заключение, выводы, указатель литературы, включающий 112 отечественных и 105 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 18 таблицами, 10 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования:

Материалом для исследования послужили 150 штаммов аэробных и анаэробных микроорганизмов, выделенных от пациентов с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей, легких и плевры (абсцесс легких, пиопневматоракс, эмпиема плевры) и при обследовании микробиоценоза дистального отдела толстого кишечника, а также музейных штаммов. Среди анаэробных микроорганизмов (60 штаммов) по 10 штаммов составили виды Bacteroides fragilis, Prevotella melaninogenica, Peptostreptococcus an-aerobius, Bifidobacteria spp., Propionibacterium propionicus, Clostridium difficile.

Среди факультативно-анаэробных и аэробных микроорганизмов (90 штаммов) по 10 штаммов составили бактерии семейства Enterobacteriaceae (E. coli, Klebsiella spp., Shigella spp., Salmonella spp.), Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus spp., Candida albicans,. Brucella spp., Francisella tularensis. В работе использованы штаммы бруцелл и франсиселл бактериологической лаборатории ООИ ФГУ «Центр Госсанэпиднадзора в Оренбургской области».

Микрофлору кишечника исследовали в соответствии с методическими рекомендациями "Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника" (Москва, 1986). Выделение и идентификацию микроорганизмов осуществляли общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств (Биргер М.О., 1982). Для грибов рода Candida проводили тесты на выявление ростовых трубок и хламидоспор.

Биохимический профиль оценивали с помощью коммерческих тест-систем фирмы LACHEMA (Чехия): "ENTEROtest" (1 и 2), "NEFERMtest", "STAPHYtest" и "ANAEROtest". Ассимиляцию источников углерода грибами оценивали с помощью API 20 С AUX (Biomerieux, Франция).

Изучение биологических свойств микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Определение антилизоцимной и антикомплементарной активностей проводили по Бухарину О.В. с со-авт. (1999). Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам осуществляли согласно стандартам NCCLS (США).

Полученные результаты обработаны статистически с использованием непараметрических (Т-критерия Вилкоксона) и параметри-

ческих методов вариационной статистики в соответствии с рекомендациями Г.Ф. Лакина (1990) и С. Гланца (1998). Все вычисления проводились на персональном компьютере IBM PC, с использованием программы «Биостатистика».

Результаты исследования и их обсуждение.

С целью оценки действия препаратов на персистентные характеристики микроорганизмов на первом этапе исследований изучено влияние терапевтических и профилактических концентраций патогенетических средств на антилизоцимную и антикомплементарную активности бактерий и грибов рода кандида. Установлен дозозави-симый характер влияния патогенетических препаратов на факторы персистенции микроорганизмов: с увеличением концентрации веществ чувствительность бактерий и грибов к их действию была выше.

Изучение влияния витамина С на АЛА микроорганизмов в концентрации 0,05 мг/мл позволило установить ингибирующее влияние у 60± 16,3% эшерихий, клебсиелл, 70± 15,2% стафилококков, 80±13,3% грибов рода кандида, псевдомонад, превотелл, клостри-дий (р<0,05). Под действием 0,05 мг/мл аскорбиновой кислоты отмечено повышение АЛА у 60±16,3% бифидобактерий (р<0,05).

Действие 0,05 мг/мл витамина С приводило к подавлению АКА у 60±16,3% штаммов псевдомонад, 70+15,2% превотелл, эшерихий, шигелл, грибов рода кандида, 80± 13,3% клебсиелл (р<0,05), повышение АКА установлено 70± 15,2% бифидобактерий (р<0,05).

Повышение концентрации аскорбиновой кислоты до 0,5 мг/мл привело к реверсии персистентных свойств клебсиелл, что нашло отражение в повышении антилизоцимной активности у 70±15,2%, а антикомплементарного признака у 60± 16,3% штаммов клебсиелл (р<0,05). Данный факт, вероятно, может быть связан с проокси-дантным влиянием аскорбиновой кислоты в отношении клебсиелл в использованной концентрации (Ни M.L. et al., 1995).

Характер изменений персистентных свойств патогенов под влиянием витамина Е (10-100 мг/мл), витамина А (500-5000 МЕ/мл) был аналогичен действию витамина С. Наибольшее ингибирующее действие на факторы персистенции микроорганизмов выявлено под влиянием витаминов С и Е. Отличия по влиянию витаминов-антиоксидантов на факторы персистенции микроорганизмов касались видовых особенностей. Установлено, что витамины Е, А повышали персистентные свойства пропионибактерий, в то время как витамин С подавлял их. Под действием витаминов Е, А не выявлено стимулирующего действия на факторы персистенции клебсиелл.

Полученные данные показали, что витамины-антиоксиданты, несмотря на различия в химической структуре, подавляли перси-стентные свойства микроорганизмов и стимулировали факторы персистенции бифидобактерий, что свидетельствует о целесообразности их использования для нормализации микробиоценозов. Высокая эффективность витаминов А, Е, С в клинике, возможно, связана не только с индукцией ими факторов естественной резистентности макроорганизма, но и с их непосредственным влиянием на персистентные свойства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, что, по-видимому, определяет их важную роль в формировании взаимоотношений в системе «паразит-хозяин». Подавление витаминами-антиоксидантами факторов персистенции этиологически значимых аэробных и анаэробных бактерий, расширяет возможности использования препаратов этой группы для коррекции микробиоценозов, санации бактерионосителей и лечении инфекций. Не исключено, что действие витаминов-антиоксидантов при лечении антибиотик-ассоциированной диареи может быть связано с подавлением персистентных свойств клостридий, а снижение персистентных характеристик грибов рода кандида под влиянием витамина С, возможно, определяет его высокую эффективность при комплексном лечении кандидозов (Глазкова Л.К., 1999).

В связи с ингибирующим влиянием витаминов-антиоксидантов на факторы персистенции микроорганизмов для дальнейшего исследования нами был выбран современный иммуномодулятор по-лиоксидоний, обладающий антиоксидантными свойствами (Петров Р.В с соавт., 2000). Для оценки воздействия полиоксидония на факторы персистенции микроорганизмов использованы концентрации препарата 60 мкг/мл, 600 мкг/мл. Полиоксидоний подавлял распространенность и выраженность факторов персистенции большинства микроорганизмов (эшерихий, клебсиелл, шигелл, псевдомонад, грибов рода кандида, бактероидов, пропионибактерий, би-фидобактерий, клостридий), усиливая персистентные характеристики у стафилококков и превотелл.

Так, в концентрации 60 мкг/мл полиоксидоний оказывал инги-бирующее влияние на антилизоцимную активность у 70±15,2% клебсиелл, пропионибактерий, клостридий (р<0,05), 80+13,3% пеп-тострептококков, грибов рода кандида (р<0,05), 90+10,0% шигелл, бифидобактерий и бактероидов (р<0,01). В тоже время у 80+13,3% сальмонелл (р<0,05) установлена индукция признака. Не выявлено изменение признака у 90+10,0% стафилококков.

При изучении влияния полиоксидония (60 мкг/мл) на антиком-

плементарную активность определено ингибирующее влияние у 60±16,3% грибов рода кандида (р<0,05), 70±15,2% сальмонелл, пропионибактерий (р<0,05), 80±13,3% псевдомонад (р<0,05), 90±10,0% эшерихий, клебсиелл, шигелл, бифидобактерий (р<0,01). Не выявлено изменений АКА у бактероидов. У 60± 16,3% стафилококков отмечено повышение антикомплементарной активности (р<0,05).

Повышение концентрации полиоксидония до 600 мкг/мл приводило к увеличению доли штаммов, у которых выявлено снижение персистентных свойств.

Учитывая высокую эффективность циклоферона при лечении хламидийных инфекций (Ершов Ф.И. с соавт., 1999, Федотов В.П., 2001), определенный интерес представляло изучение влияние препарата на факторы персистенции внутриклеточных бактериальных патогенов.

Для оценки воздействия циклоферона на факторы персистен-ции микроорганизмов использованы концентрации препарата 0,0125 мг/мл, 0,025 мг/мл (рис. 1). При изучении влияния циклофе-рона на распространенность персистентных свойств бактерий установлено, что в концентрации 0,0125 мг/мл препарат оказывал ингибирующее влияние на АЛА у 80±13,3% сальмонелл, шигелл, фран-сиселл (р<0,05), 90+10,0% бруцелл (р<0,01) и АКА у 60+16,3% сальмонелл, 70+15,2% шигелл (р<0,05), 90+10,0% бруцелл, франси-селл (р<0,01).

Увеличение концентрации циклоферона до 0,025 мг/мл приводило к усилению ингибирующего действия препарата на перси-стентные характеристики патогенов. Не исключено, что ингибиро-вание циклофероном персистентных характеристик внутриклеточ-но паразитирующих бактерий лежит в основе механизма элиминации патогенов при острых и хронических инфекционных процессах данной этиологии.

Таким образом, иммуномодуляторы полиоксидоний и циклофе-рон помимо известной иммуномодулирующей активности способны подавлять персистентные характеристики бактериальных патогенов и, вероятно, могут быть использованы в комплексном лечении хронических инфекционных процессов и санации бактерионосителей.

Ингибирующее влияние циклоферона на распространенность факторов персистенции микроорганизмов

АЛА

При изучении влияния катаболических стероидных гормонов на факторы персистенции микроорганизмов было установлено, что действие физиологических концентраций гидрокортизона (100-200 нг/мл), преднизолона (25-50 нг/мл), дексаметазона (3,75-7,5 нг/мл) приводило к повышению персистентных свойств различных микроорганизмов (эшерихий, клебсиелл, сальмонелл, шигелл, псевдомонад, стафилококков, грибов рода кандида, бактероидов, прево-телл) и понижению их у пропионибактерий и бифидобактерий. Эффекты действия анаболических стероидов на персистентные свойства микроорганизмов были противоположны глюкокортико-стероидам. Так, тестостерон, ретаболил, феноболил (1-10 нг/мл) подавляли антилизоцимную и антикомплементарную активности изученных бактерий, в том числе и клостридий, грибов рода Candida, повышая факторы персистенции бифидобактерий и пропионибактерий.

Выявленные новые данные по влиянию стероидных гормонов на факторы персистенции микроорганизмов, свидетельствуют о важной роли препаратов этой группы в микробиоценотических отношениях экологических ниш макроорганизма. Нарушение нормальной микрофлоры при лечении глюкокортикостероидными гормонами, вероятно, связано с подавлением факторов персистен-ции одних микроорганизмов, особенно анаэробного грамположи-тельного звена, и повышением персистентных свойств других условно-патогенных видов. Микроэкологические нарушения при лечении препаратами глюкокортикостероидных гормонов часто сопровождаются развитием кандидозов, что может быть связано с изменением состава нормальной микрофлоры и с повышением факторов персистенции грибов рода кандида. А это, по-видимому, имеет значение при применении стероидных препаратов в лечебных и профилактических целях, где снижение персистентного потенциала микроорганизмов может объяснить развитие дисбиотиче-ских состояний при нарушенном гормональном статусе как эндогенного, так и экзогенного происхождения.

Продолжая исследование влияния гормональных препаратов на биологические свойства микроорганизмов, наше внимание привлек гормон задней доли гипофиза окситоцин. Успешное использование окситоцина при местном лечении острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей, легких и плевры аэробной и анаэробной этиологии (Курлаев П.П., 2001, Абрамзон О.М., 2003), определили необходимость изучения механизмов синергидного действия

нонапептида с антимикробными препаратами.

Под действием окситоцина установлено повышение чувствительности бактериальных патогенов к изученным антимикробным препаратам (цефотаксим, линкомицин, клиндамицин, метронида-зол), не отмечено изменение чувствительности бактерий к бактерицидному действию карбапенемов. Оценивая полученные результаты по влиянию окситоцина на чувствительность к фторхинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ломефлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин), оказалось, что под влиянием нонапептида происходит понижение МПК препаратов в отношении аэробных и анаэробных бактерий.

Для выяснения механизма действия окситоцина на персистент-ные свойства микроорганизмов была изучена популяционная структура Е. coli и S. aureus по факторам персистенции и ее изменение под действием нонапептида. В популяционной структуре Е. coli по АЛА были представлены клоны с различной выраженностью признака (рис. 2). Действие окситоцина на АЛА и АКА Е. coli характеризовалось изменением соотношения клонов с разным уровнем признаков, нарастанием доли клонов со средними и низкими значениями факторов персистенции, что приводило к уменьшению среднепопуляционной выраженности персистентных характеристик. Под действием окситоцина установлено снижение гетерогенности популяции Е. coli по АЛА и АКА, что сопровождалось снижением индексов биоразнообразия и выровненности Симпсона.

Для изучения влияния окситоцина на АЛА S. aureus (рис. 2) была определена популяционная структура стафилококков по указанному признаку. Гетерогенность популяции S. aureus по АЛА под влиянием окситоцина не изменилась, так как количество групп клонов различных по признаку сохранилось на прежнем уровне. При этом отмечено нарастание доли клонов с низким и средним значением признака. Средний уровень АЛА стафилококков в популяции понизился с 1,03+0,09 мкг/мл*ОП до 0,66±0,09 мкг/мл*ОП (р<0,05). Действие окситоцина на АКА S. aureus сопровождалось снижением гетерогенности их популяции, появлением группы клонов с уровнем признака 0,5-0,8 анти-ЛЕКЮ6/с, нарастанием доли клонов с уровнем признака 0,8-1,0 анти-ЛЕК*10/с до 40%, снижением доли клонов с уровнем признака 1,0-1,2 анти-ЛЕКЮ6/с до 25%. Средний уровень АКА после действия окситоцина понизился с 135 ±0,06 анти-ЛЕК* 106/сдо0,85±0,04 ан-ти-ЛЕК*106/с(р<0,05). Под влиянием окситоцина на популяционную структуру стафилококков по АКА выявлено понижение индекса биоразнообразия Симпсона.

Популяционная структура Е. coli по факторам персистенции и ее изменение под действием окситоцина

Популяционная структура S. aureus по факторам персистенции и ее изменение под действием окситоцина

АЛА

Проведенные исследования позволили установить, что в основе синергидного ингибирующего влияния окситоцина с антимикробными препаратами на факторы персистенции стафилококков и эшерихий лежит изменение соотношения клонов бактерий с разным уровнем признаков, нарастание доли клонов со средними и низкими значениями факторов персистенции, что приводило к уменьшению среднепопуляционной выраженности персистентных характеристик.

Вместе с тем, спектр влияния окситоцина на персистентный потенциал микроорганизмов оказался значительно шире, чем это представлялось ранее (Курлаев П.П., 2000, 2001), так как препарат подавлял факторы персистенции различных аэробных и, особенно, анаэробных бактерий. Наибольшее подавление АЛА и АКА микроорганизмов под влиянием окситоцина установлено у стафилококков, клебсиелл, несколько меньшая степень отмечена в отношении эшерихий, бактероидов и клостридий.

На следующем этапе исследования изучено действие субинги-биторных концентраций антибактериальных препаратов (1/2 и 1/8 МПК) на факторы персистенции микроорганизмов. Установлено, что антибактериальные препараты в зависимости от химической структуры и видовых особенностей бактерий оказывали различное влияние на персистентные характеристики патогенов.

В субингибиторных концентрациях антимикробные препараты изученных групп (карбапенемы, цефалоспорины, фторхинолоны, имидазолы) подавляли факторы персистенции бактерий. При этом линкозамиды разнонаправлено влияли на персистентные характеристики стафилококков, бактероидов, превотелл, снижая антилизо-цимный и повышая антикомплементарный признаки.

Отмечено понижающее влияние имипенема на персистентные свойства пептострептококков, меропенема — эшерихий, шигелл, превотелл, пептострептококков, пропионибактерий, клостридий. Цефотаксим подавлял АЛА и АКА клебсиелл, шигелл, псевдомонад, стафилококков, бактероидов, пептострептококков, метронида-зол снижал персистентные свойства бактероидов, превотелл, клостридий.

Полученные данные по регуляции персистентных свойств бактерий позволяют объяснить некоторые микроэкологические изменения, возникающие при применении антибиотиков. Так, установленное под влиянием линкозамидов повышение факторов персистенции С. difficile, и понижение антилизоцимной и антикомплементарной активностей бифидобактерий, обладающих способно-

стью подавлять токсинообразование клостридий (Bordello S.P., Barclay F.S., 1986, Шендеров БА, 1998), вероятно, объясняет развитие геморрагического язвенного колита, провоцируемого клост-ридиями. Вместе с тем, подавление АЛА и АКА С. difficile под влиянием карбапенемов, фторхинолонов, метронидазола, по-видимому, объясняет, почему при их применении не развиваются энтероколиты клостридиальной этиологии. Результаты стимулирующего влияния цефотаксима, линкозамидов на факторы перси-стенции клостридий раскрывают особенности развития антибио-тик-ассоциированных колитов при назначении этих препаратов.

В связи с этим, инактивация факторов персистенции у патогенов, и, их стабилизация у представителей нормальной микрофлоры, возможно, является одной из составляющих механизма поддержания межмикробных отношений в нормобиоценозе.

Учитывая повышение чувствительности некоторых видов бактерий к антибиотикам под влиянием окситоцина, определенный интерес представляло изучение их сочетанного влияния на перси-стентные свойства микроорганизмов. Оказалось, что окситоцин усиливал подавляющий эффект цефотаксима, метронидазола на факторы персистенции возбудителей и не влиял на действие карба-пенемов. При этом нонапептид модифицировал действие линкоза-мидов на факторы персистенции с разнонаправленного на ингиби-рующее у стафилококков, бактероидов, превотелл.

Повышение чувствительности микроорганизмов к бактерицидному действию антимикробных препаратов под действием оксито-цина, а также изменение соотношения клонов с разным уровнем факторов персистенции бактерий лежит в основе механизма этио-тропного лечебного эффекта комбинаций «антибиотик-окситоцин», используемых при лечении острых гнойно-воспалительных процессов.

Полученные результаты позволили отобрать антимикробные препараты для этиотропного лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры (абсцесс легких, пи-опневматоракс, эмпиема плевры) по их ингибирующему влиянию на факторы персистенции возбудителей. Усиление окситоцином ингибирующего влияния антибиотиков на персистентные характеристики анаэробных патогенов, было положено в основу способа лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры. Оказалось, что применение комплексов «антибиотик-окситоцин» в лечении этой группы пациентов способствует значительному снижению сроков лечения, нормализации основных кли-

нико-лабораторных показателей и летальности больных (Абрамзон О.М., 2003).

Оценивая влияние фторхинолонов на антилизоцимную и антикомплементарную активности микроорганизмов с учетом их химической структуры, была установлена связь циклопропильного радикала с ингибирующим действием препаратов на персистентные признаки бактерий. Оказалось, что фторхинолоны без циклопро-пильного радикала (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлокса-цин), как правило, не изменяли АЛА и АКА бактерий, и реже понижали лишь один из изучаемых признаков. В то же время фторхи-нолоны с циклопропильным радикалом (ципрофлоксацин, спар-флоксацин) подавляли персистентные свойства у всех бактерий изученных видов.

Доказательством роли циклопропильного радикала в структуре фторхинолонов по подавлению персистентных свойств бактерий можно рассматривать отличия внутрипопуляционных изменений эшерихий и стафилококков по факторам персистенции под влиянием ципрофлоксацина и норфлоксацина (рис. 3). Действие ципроф-локсацина на популяционную структуру эшерихий и стафилококков по АЛА и АКА сопровождалось уменьшением групп клонов с различным уровнем признаков, изменением соотношения клонов с разным уровнем персистентных свойств, приводящих к снижению гетерогенности популяций бактерий по АЛА и АКА, что нашло отражение в понижении индексов биоразнообразия и выровненно-сти популяций Симпсона, а также среднепопуляционного уровня признаков. При этом не выявлено существенных изменений попу-ляционной структуры эшерихий и стафилококков по АЛА и АКА под действием норфлоксацина.

Установленные различия влияния норфлоксацина и ципрофлок-сацина на популяционную структуру по факторам персистенции Е. соП и S. aureus определили роль циклопропильного радикала в структуре хинолона как ингибитора персистентных свойств патогенов. При этом, следует отметить, что окситоцин усиливал ингиби-рующий эффект всех изученных фторхинолонов в отношении факторов персистенции микроорганизмов.

Новые данные о роли циклопропильного радикала позволяют рекомендовать его для включения в структуру хинолона при синтезе новых фторхинолонов, пригодных для борьбы с бактерионосительством и хронизацией инфекций. Усиление окситоцином инги-бирующего влияния фторхинолонов персистентных характеристик микроорганизмов было положено в основу способа лечения острых

Популяционная структура Е. coll по факторам персистенции и ее изменение под действием фторхинолонов

гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей. Оказалось, что использование комплексов «ципрофлоксацин-окситоцин» в лечении пациентов приводит к снижению сроков лечения и нормализации основных клинико-лабораторных показателей.

Экспериментальное изучение этилцеллозольволята натрия выявило широкий спектр бактерицидной и фунгицидной активности 1% и более водных растворов. В связи с этим, 1% водный раствор препарата был использован в качестве дезинфицирующего средства. В субингибиторных концентрациях препарат подавлял перси-стентные характеристики патогенных микроорганизмов. С уменьшением концентрации этилцеллозольволята натрия отмечено увеличение доли индифферентных штаммов. Бактерицидная активность этилцеллозольволята натрия в отношении бруцелл, и подавление субингибиторными концентрациями их персистентных свойств, является, несомненно, достоинством препарата и позволяет рекомендовать его использование в очагах бруцеллеза. В тоже время способность этилцеллозольволята натрия инактивировать токсические вещества (фосфорорганические соединения, кислоты, серо- и хлорсодержащие соединения и т.д.), создает препарату ряд преимуществ по сравнению с другими дезинфицирующими средствами (Бобок С.А., Юртушкин В.И., 2000). Особенности действия препарата позволяют рекомендовать его для применения с целью повышения эффективности дезинфекционных мероприятий.

Обобщая материал по действию антимикробных препаратов на факторы персистенции микроорганизмов, следует отметить, что характер этих влияний зависел от химического строения, концентрации препаратов и видовых особенностей бактерий. Проведенные исследования раскрывают некоторые особенности изменения микробиоценозов человека при назначении антимикробных средств, а результаты синергидного действия окситоцина с антимикробными препаратами позволяют рекомендовать эти сочетания для клинического применения. Полученные данные позволили выделить группу веществ, подавляющих персистентные характеристики патогенов, ранжировать их по степени влияния и подобрать перспективные средства и комбинации для рационального применения в клинике.

Таким образом, экспериментальные исследования показали, что различные классы веществ оказывают модифицирующее влияние на факторы персистенции бактериальных патогенов. Характер и степень модифицирующих изменений определяется строением,

концентрацией изученных веществ и видовыми особенностями микроорганизмов.

Выводы:

1. Витамины-антиоксиданты (А, Е, С) подавляли персистентные свойства аэробных и анаэробных патогенов. Характер и степень влияния препаратов на персистентные характеристики определялся строением, концентрацией антиоксидантов и видовыми особенностями микроорганизмов.

2. Иммуномодуляторы модифицировали персистентные свойства патогенов: полиоксидоний подавлял факторы персистенции микроорганизмов (эшерихий, клебсиелл, шигелл, псевдомонад, грибов рода кандида, бактероидов, пропионибактерий, бифидобак-терий, клостридий), усиливая персистентные характеристики лишь у стафилококков и превотелл; циклоферон подавлял факторы пер-систенции внутриклеточных грамотрицательных бактериальных патогенов.

3. Стероидные гормоны регулируют персистентные свойства широкого спектра аэробных и анаэробных видов микроорганизмов. Препараты, обладающие катаболической активностью, повышали персистентные признаки аэробных и анаэробных бактерий, грибов рода кандида, оказывая ингибирующее влияние у пропионибакте-рий и бифидобактерий. Анаболические стероиды подавляли перси-стентные характеристики бактерий и грибов, повышая факторы персистенции бифидобактерий и пропионибактерий.

4. Окситоцин снижал персистентные свойства бактерий, усиливал ингибирующее влияние антибактериальных препаратов, за исключением карбапенемов, в отношении факторов персистенции микроорганизмов и модифицировал действие линкозамидов с разнонаправленного на ингибирующее у стафилококков, бактероидов, превотелл. Окситоцин повышал чувствительность патогенных бактерий к бактерицидному действию антимикробных препаратов за исключением карбапенемов.

5. Характер влияния антибиотиков на персистентные характеристики микроорганизмов определялся их строением, концентрацией и видовыми особенностями бактерий. В субингибиторных концентрациях антибиотики подавляли персистентные свойства чувствительных микроорганизмов, линкозамиды разнонаправлено влияли на персистентные характеристики возбудителей, подавляя антили-зоцимный и понижая антикомплементарный признаки стафилококков, бактероидов, превотелл.

6. Фторхинолоны в зависимости от химической структуры мо-

дифицировали персистентные свойства бактерий. Фторхинолоны (норфлоксацин, пефлоксацин, ломефлоксацин) без циклопропиль-ного радикала не оказывали влияния на персистентные свойства бактерий, а фторхинолоны (ципрофлоксацин, спарфлоксацин) с циклопропильным радикалом1 подавляли факторы персистенции всех изученных микроорганизмов. Циклопропильный радикал определяет ингибирующее влияние фторхинолонов на антилизоцим-ную и антикомплементарную активность бактерий.

7.Экспериментальное изучение 1% водного раствора этилцелло зольволята натрия выявило широкий спектр его бактерицидной и фунгицидной активности, а субингибиторные концентрации препа рата подавляли факторы персистенции патогенов:

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кириллов Д.А. Влияние водорастворимых витаминов на ан-тилизоцимную активность энтеробактерий / Д.А Кириллов, А.В. Валышев, В.А. Кириллов // Журн. микробиол., эпидемиол. и им-мунобиол. - 2000, №4. - С. 80-82.

2. Экспериментальное обоснование рационального подхода к коррекции дисбактериоза кишечника, обусловленного гиперколонизацией грибами рода кандида / Д.А. Кириллов, О.В. Бухарин, О.Е. Челпаченко и др. // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: тезисы 4-ой Российской конф. - М., 2002. - С. 63 (№124)

3. Модифицирующее действие препарата «Дезоцелл» на биологические свойства микроорганизмов / Д.А. Кириллов, М.Н. Еремин, Н.В. Шеенков, О.В. Бухарин // Вестник ОГУ. - 2003, №1. - С. 100-102

4. Модифицирующее действие окситоцина на биологические свойства анаэробной неклостридиальной инфекции / Д.А. Кириллов, О.В. Бухарин, О.М. Абрамзон и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2003, №4. - С. 71-74.

5. Влияние иммуномодулятора полиоксидония на биологические свойства микроорганизмов / Д.А. Кириллов, О.В. Бухарин, И.Н. Чайникова и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммуно-биол.-2003, -С. 74-78

6. Оценка влияния лекарственных препаратов на биологические свойства С. difficile / Д.А. Кириллов, А.В. Валышев, В.Ф. Прусс и соавт. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. — 2003, №4. - С. 85-88

7. Модифицирующее действие комплексов «антибиотик-окситоцин» на персистентные свойства золотистого стафилококка - возбудителя острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры / Д.А. Кириллов, О.М. Абрамзон, А.В. Валышев, И.В. Валышева // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: тезисы 5-ой Российской конф. - М., 2003. - С. 56 (№110)

8. Экспериментально-клиническое изучение влияния антибиотиков, окситоцина и их сочетаний на персистентные свойства возбудителей острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры / Д.А. Кириллов, О.М. Абрамзон, О.Л. Карташова и др. // Антибиотики и химиотерапия. - 2003, №12. - С. 12-15.

9. Прогнозирование тяжести течения и местное лечение острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры: [Пособие для врачей] / О.М. Абрамзон, О.В. Бухарин, Д.А. Кириллов и др.; МЗ РФ, протокол №7 от 18.11.03 - Оренбург, 2003. - 21 с.

Кириллов Давид Арчилович

Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 22.04.2004. Формат 60*84/16 Тираж 100 экз.

Оригинал-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 97. Гарнитура Тайме. Печать офсетная. Усл. печ. ед. - 1,3 пл.

s8-9145

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Кириллов, Давид Арчилович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛЕКАРСТВЕННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ 9 СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ (обзор литературы)

1.1. Регуляция биологических свойств микроорганизмов антимик- 9 робными препаратами.

1.2.Регуляция биологических свойств микроорганизмов патогенетическими препаратами.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика культур микроорганизмов

2.2. Методы выделения и идентификации микроорганизмов

2.3. Методы определения факторов персистенции микроорганиз- 28 мов

2.3.1. Метод определения антилизоцимной активности микроор- 28 ганизмов

2.3.2. Метод определения антикомплементарной активности 30 микроорганизмов

2.4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибио- 32 тикам

2.5. Определение влияния препаратов на факторы персистенции, 32 антибиотикочувствительность микроорганизмов

2.5.1. Методика определения влияния препаратов на факторы 32 персистенции микроорганизмов

2.5.2. Методика определения влияния препаратов на антибиоти- 34 кочувствительность микроорганизмов.

2.6. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА III. ДИНАМИКА ПЕРСИСТЕНТНЫХ СВОЙСТВ МИКРООР- 36 ГАНИЗМОВ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ.

3.1. Динамика факторов персистенции микроорганизмов под дей- 36 ствием антиоксидантов.

3.2. Динамика факторов персистенции микроорганизмов под дей- 46 ствием иммуномодуляторов.

3.3. Динамика факторов персистенции, антибиотикорезистентно- 54 сти микроорганизмов под действием гормональных препаратов.

ГЛАВА IV. ДИНАМИКА ПЕРСИСТЕНТНЫХ СВОЙСТВ МИКРООР- 82 ГАНИЗМОВ ПОД ВЛИЯНИЕМ АНТИМИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ.

4.1. Динамика факторов персистенции микроорганизмов под дей- 82 ствием антибиотиков и их комбинаций с окситоцином.

4.2. Динамика факторов персистенции микроорганизмов под дей- 93 ствием фторхинолонов и их комбинаций с окситоцином.

4.3. Динамика персистентных свойств микроорганизмов под дей- 109 ствием этилцеллозольволята натрия («Дезоцелл»)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Появление большого количества новых средств этиологической и патогенетической терапии значительно расширило возможности лечения инфекционных и гнойно-воспалительных заболеваний [3]. Однако острота проблемы инфекций с годами не только не снижается, но и, напротив, приобретает все большую актуальность в связи с изменением биологических свойств возбудителей [86, 111, 112, 145]. Поиск новых средств антимикробной терапии и отсутствие критериев выбора средств этиологической терапии, определяет необходимость изучения антибиотикорезистентности микроорганизмов [111,112]. .

Выделяемые патогенными и условно-патогенными микроорганизмами токсины, ферменты и другие факторы защиты и агрессии ингибируют специфические и неспецифические механизмы защиты макроорганизма, подавляя рост индигенной микрофлоры. Инактивация или ингибирование этих веществ под влиянием различных препаратов предотвращает колонизацию слизистых определенными группами патогенных бактерий, тем самым либо снижается, либо полностью нивелируется, их отрицательное воздействие на макроорганизм [105]. Отличительной особенностью гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваний на современном этапе является увеличение доли затяжных и хронических форм, что связано с возможностью возбудителя длительно персисти-ровать в макроорганизме [13]. Поэтому особый интерес представляет регуляция персистентных свойств микроорганизмов.

Учитывая роль биологических свойств микроорганизмов в развитии и под1 держании нормальных биоценозов и определенную эффективность этиологических и патогенетических средств в лечении гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваний, нами изучено влияние различных лекарственных воздействий на факторы персистенции и антибиотикорезистентность патогенных и условно-патогенных аэробных и анаэробных видов. Решение этого вопроса позволило бы подобрать эффективные регуляторы персистентных свойств возбудителей для достижения максимального терапевтического действия и предупреждения нежелательных последствий при инфекционной патологии.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящего исследования явилось изучение влияния средств антимикробной и патогенетической терапии инфекционных заболеваний на факторы персистенции патогенных и условно-патогенных аэробных и анаэробных микроорганизмов.

Основные задачи исследования:

1. Изучить влияние патогенетических препаратов (антиоксидантов, поли-оксидония, циклоферона, стероидных гормонов, окситоцина) на факторы персистенции микроорганизмов.

2. Определить действие антимикробных средств (антибиотиков, фторхи-нолонов и их комбинаций с окситоцином) на факторы персистенции аэробных и анаэробных патогенных и условно-патогенных бактерий.

3. Изучить антимикробный спектр этилцеллозольволята натрия и оценить его влияние в субингибиторных концентрациях на факторы персистенции патогенов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. При изучении влияния средств патогенетической и антимикробной терапии инфекционных заболеваний на персистентные характеристики патогенных и условно-патогенных аэробных и анаэробных микроорганизмов выявлена связь строения и концентрации веществ с изменением анти-лизоцимной и антикомплементарной активностей бактерий.

Установлено, что различные по химической структуре антиоксиданты (витамины А, Е, С, полиоксидоний) в терапевтических концентрациях подавляли антилизоцимную и антикомплементарную активности патогенов, усиливая эти свойства у бифидобактерий. Витамины Е, А повышали персистентный потенциал пропионибактерий, тогда как витамин С и полиоксидоний оказывали противоположный эффект. Наибольшим ингибирующим влиянием на факторы персистенции изученных видов обладали витамины С, Е, полиоксидоний.

Выявлена способность иммуномодулятора циклоферона подавлять перси-стентные характеристики внутриклеточных бактериальных патогенов.

Показаны отличия действия катаболических и анаболических стероидных гормонов на факторы персистенции патогенных микроорганизмов и представителей нормальной микрофлоры человека. Катаболические стероидные препараты (гидрокортизон, преднизолон, дексаметазон) повышали персистентные признаки патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (эшерихий, клебси-елл, сальмонелл, шигелл, псевдомонад, стафилококков, грибов рода Candida, бактероидов, превотелл) и снижали антилизоцимную и антикомплементарную активности пропионибактерий и бифидобактерий. Анаболические стероиды (тестостерон,. ретаболил, феноболил) снижали персистентные свойства патоI генных бактерий, грибов рода Candida и повышали факторы персистенции бифидобактерий, пропионибактерий.

При изучении влияния антибактериальных препаратов на факторы персистенции патогенных бактерий установлен ингибирующий эффект карбапенемов и метронидазола на антилизоцимную и антикомплементарную активности анаэробных возбудителей.

Установлена связь структуры фторхинолонов с их ингибирующим влиянием на факторы персистенции микроорганизмов. Изучение действия фторхинолонов различного химического строения на факторы персистенции бактерий позволило установить, что циклопропильный радикал в структуре хинолона явt ляется ответственным за подавление персистентных свойств патогенов. Фтор-хинолоны (норфлоксацин, пефлоксацин, ломефлоксацин) без циклопропильно-го радикала либо не изменяли факторы персистенции бактерий, либо подавляли один из изученных признаков, в то время как фторхинолоны с циклопропиль-ным радикалом (ципрофлоксацин, спарфлоксацин) подавляли персистентные характеристики у- всех изученйых микроорганизмов.

ЦЕННОСТЬ ДЛЯ НАУКИ И ПРАКТИКИ. В теоретическом плане представляются важными полученные данные, раскрывающие эффекты действия антиоксидантов, иммуномодуляторов, гормональных препаратов, антимикробных средств на факторы персистенции и антибиотикорезистентность различных видов микроорганизмов.

На основе полученных материалов разработан способ лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры микробной этиологии, в том числе и анаэробной неклостридиальной инфекции, путем подбора комбинаций антибиотиков с окситоцином по наиболее выраженному ингибирующему влиянию на персистентные свойства возбудителей.

Данные о роли циклопропильного радикала в структуре фторхинолонов легли в основу способа лечения гнойных ран с применением комбинации ци-профлоксацина с окситоцином на гидрофильной мазевой основе.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Лекарственные препараты (антиоксиданты, иммуномодуляторы, гормональные и антибактериальные вещества) модифицируют факторы персистенции бактериальных патогенов. Характер и степень изменений факторов персистенции определяется строением, концентрацией веществ и видовой принадлежностью микроорганизмов.

2. Выявлены новые препараты, обладающие антиперсистентным эффектом: i циклоферон, карбапенемы, фторхинолоны с циклопропильным радикалом и этилцеллозольволят натрия.

3. В основе механизма этиотропного лечебного эффекта комбинаций «анти-биотик-окситоцин» лежит повышение под действием гормона чувствительности патогенных бактерий к антибактериальным препаратам, подавление персистентных свойств с последующей элиминацией возбудителя из организма.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на III и IV Всероссийских конференциях по проблеме персистенции микроорганизмов (Оренбург, 2000, 2003), III Всероссийском научном семинаре по органической химии и медицине, посвященном 50-летию ИОХ УНЦ РАН и УНЦ РАН (Уфа, 2001), Первом съезде микологов России (Москва, 2002); IV и V Российских конференциях «Современные проблемы антимикробной химиотерапии» (Москва, 2002, 2003), фрагменты работы экспонировались во Всероссийском' выставочном центре в рамках выставки «Экологическая безопасность России» (серебрянная медаль ВВЦ, Москва, 2003).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертационного исследования опубликовано 9 печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Кириллов, Давид Арчилович

ВЫВОДЫ:

1. Витамины-антиоксидйнты (А, Е, С) подавляли персистентные свойства аэробных и анаэробных патогенов. Характер и степень влияния препаратов на персистентные характеристики определялся строением, концентрацией антиоксидантов и видовой принадлежностью микроорганизмов.

2. Иммуномодуляторы модифицировали персистентные свойства патогенов: полиоксидоний подавлял факторы персистенции микроорганизмов (эше-рихий, клебсиелл, шигелл, псевдомонад, грибов рода кандида, бактероиI дов, пропионибактерий, бифидобактерий, клостридий), усиливая персистентные характеристики лишь у стафилококков и превотелл; циклоферон подавлял факторы персистенции внутриклеточных грамотрицательных бактериальных патогенов.

3. Стероидные гормоны .регулируют персистентные свойства широкого спектра аэробных и анаэробных видов микроорганизмов. Катаболические стероиды повышали персистентные признаки аэробных и анаэробных бактерий, грибов рода кандида, оказывая ингибирующее влияние у пропионибактерий и бифидобактерий. Анаболические стероиды подавляли персистентные характеристики бактерий и грибов, повышая факторы персистенции бифидобактерий и пропионибактерий. I

4. Окситоцин снижал персистентные свойства бактерий, усиливал ингибирующее влияние антибактериальных препаратов, за исключением карбапе-немов, в отношении факторов персистенции микроорганизмов и модифицировал действие линкозамидов с разнонаправленного на ингибирующее у стафилококков, бактероидов, превотелл. Окситоцин повышал чувствительность патогенных бактерий к бактерицидному действию антимикробных препаратов за исключением карбапенемов.

5. Характер влияния антибиотиков на персистентные характеристики микроорганизмов зависел от их строения, концентрации и видовой принадлежности бактерий. В субингибиторных концентрациях антибиотики подавляли персистентные свойства чувствительных микроорганизмов, линкозамиды разнонаправлено влияли на персистентные характеристики возбудителей, подавляя антилизоцимный и понижая антикомплементарный признаки стафилококков, бактероидов, превотелл.

Фторхинолоны в зависимости от химической структуры модифицировали персистентные свойства бактерий. Фторхинолоны (норфлоксацин, пефлок-сацин, ломефлоксацин) без циклопропильного радикала не оказывали влияния на персистейтные свойства бактерий, а фторхинолоны (ципроф-локсацин, спарфлоксацин) с циклопропильным радикалом подавляли факторы персистенции всех изученных микроорганизмов. Циклопропильный радикал определяет ингибирующее влияние фторхинолонов на антилизо-цимную и.ацтикомплементарную активность бактерий. Экспериментальное изучение 1% водного раствора этилцеллозольволята натрия выявило широкий спектр его бактерицидной и фунгицидной активности, а субингибиторные концентрации препарата подавляли факторы персистенции патогенов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Появление большого количества новых средств этиологической и патогенетической терапии значительно расширило возможности лечения инфекционных и гнойно-воспалительных заболеваний [3]. Однако острота проблемы инфекций с годами приобретает все большую актуальность в связи с изменением биологических свойств возбудителей [86, 111, 112, 145]. Поиск новых средств антимикробной терапии и отсутствие критериев выбора средств этиологической терапии, определяет необходимость изучения антибиотикорезистентности микроорганизмов [111, 112].

Выделяемые.патогенными и условно-патогенными микроорганизмами токсины, ферменты и другие факторы защиты и агрессии ингибируют специфические и неспецифические механизмы защиты макроорганизма, подавляя рост индигенной микрофлоры. Инактивация или ингибирование этих веществ под влиянием различных препаратов предотвращает колонизацию слизистых определенными группами патогенных бактерий, тем самым либо снижается, либо полностью нивелируется их отрицательное воздействие на макроорганизм [105]. Отличительной особенностью гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваний на современном этапе является увеличение доли затяжных и хронических форм, что связано с возможностью возбудителя длительно персисти-ровать в макроорганизме [13]. В связи с этим, особый интерес представляет регуляция персистентных свойств микроорганизмов.

Учитывая высокую значимость этиологических и патогенетических средств в лечении гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваний, нами I изучено влияние лекарственных препаратов на факторы персистенции и анти-биотикорезистентность патогенных и условно-патогенных аэробных и анаэробных видов микроорганизмов. Решение этого вопроса позволит отобрать препараты, снижающие персистентные свойства возбудителей, для достижения максимального терапевтическрго действия и предупреждения нежелательных последствий [4, 13].

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния средств антимикробной и патогенетической терапии инфекционных заболеваний на факторы персистенции патогенных и условно-патогенных аэробных и анаэробных микроорганизмов.

Для реализации данной цели было изучено влияние патогенетических препаратов (антиоксидантов, полиоксидония, циклоферона, стероидов, окситоци-на) и антимикробных средств (антибиотиков, фторхинолонов, дезинфектантов) I на распространенность и выраженность антилизоцимной и антикомплементарной активностей аэробных и анаэробных микроорганизмов.

Материалом для исследования послужили 150 штаммов аэробных и анаэробных микроорганизмов, выделенных от пациентов с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей, легких и плевры (абсцесс легких, пиопневматоракс, эмпиема плевры) и при обследовании микробиоценоза дистального отдела толстого кишечника, а также музейных штаммов. Выделение и идентификацию микроорганизмов осуществляли общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств. Изучение биологических свойств микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Полученные результаты обрабоI таны с помощью статистических методов.

На первом этапе исследований изучено влияние терапевтических и профилактических концентраций патогенетических препаратов на анТилизоцимную и антикомплементарную активности, аэробных и анаэробных видов микроорганизмов. Установлен дозозависимый характер влияния препаратов этой группы t на факторы персистенции микроорганизмов: с увеличением концентрации веществ чувствительность бактерий и грибов к их действию была выше.

Так, витамины-антиоксиданты (А, Е, С), несмотря на различия в химической структуре, подавляли персистентные свойства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и стимулировали их у бифидобактерий, что свидетельствует о целесообразности использования их для нормализации микробиоценозов. Наибольшее ингибирующее воздействие на факторы персистенции микроорганизмов выявлено под влиянием витаминов С и Е. С увеличением I концентрации витамина С отмечено повышение факторов персистенции клеб-сиелл. Витамины Е, А повышали факторы персистенции пропионибактерий, тогда как витамин С оказывал понижающий эффект.

Особый интерес представляют- данные о дозозависимом эффекте влияния одного и того же витамина на экспрессию персистентных свойств. Так, с увеличением концентрации витамина С отмечено повышение факторов персистенции клебсиелл, что может быть связано с анти- и прооксидантной активностью препарата [105, 156].

Действие витаминов-антиоксидантов на персистентные свойства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов раскрывает новые механизмы формирования и стабилизации микробиоценозов человека. Известно, что нормальной микрофлорой синтезируются значительные количества витаминов-антиоксидантов в концентрациях достаточных для обеспечения собственных потребностей и нужд макроорганизма [7, 209]. При этом сами микроорганизмы способны деградировать значительные количества поступающих с пищей витаминов [144]. В связи с этим, оказывая влияние на факторы естественной резистентности макроорганизма [10, 204], персистентные свойства микроорганизмов, витамины-антиоксиданты, по-видимому, играют важную роль в формировании взаимоотношений в системе «паразит-хозяин».

Подавление витаминами-антиоксидантами факторов персистенции не только стафилококков и эшерихий, как было установлено ранее [74, 97, 100], но других этиологически значимых аэробных и анаэробных бактерий, расширяет возможности использования этой группы препаратов для коррекции микробиоценозов, санаций бактерионосителей и лечении инфекций. Не исключено, что действие витаминов-антиоксидантов при лечении антибиотик-ассоциированной диареи может быть связана с подавлением персистентных свойств клостридий, а снижение персистентных характеристик грибов рода кандида под влиянием витамина С, возможно, определяет его высокую эффективность при комплексном лечении кандидозов [26].

В связи с ингибирующим влиянием витаминов-антиоксидантов на факторы персистенции микроорганизмов для дальнейшего исследования нами был выбран современный иммуномодулятор полиоксидоний, обладающий антиокси-дантными свойствами [80]. Полиоксидоний подавлял персистентные свойства микроорганизмов (эшерихий, клебсиелл, шигелл, псевдомонад, грибов рода кандида, бактероидов, пропионибактерий, бифидобактерий, клостридий), усиливая' факторы персистенции лишь у стафилококков и превотелл. С увеличением концентрации полиоксидония отмечено повышение чувствительности микроорганизмов к действию препарата.

Выявленные новые данные модифицирующего действия полиоксидония на биологические свойства микроорганизмов свидетельствуют о том, что высокая эффективность препарата в клинике острых, хронических инфекционных и гнойно-воспалительных процессов [69, 77, 78], может быть связана не только с его иммуномодулирующими свойствами, но с влиянием на персистентные свойства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. А, как известно, снижение факторов персистенции патогенных бактерий препятствует формированию хронических процессов и бактерионосительства и служит обоснованием назначения лечебных препаратов в терапевтических целях.

Учитывая высокую эффективность циклоферона при лечении острых и хронических бактериальных инфекций, определенный интерес представляло изучение влияние препарата на факторы персистенции внутриклеточных бактериальных патогенов. I

В результате проведенных исследований установлено, что циклоферон, подавлял факторы персистенции внутриклеточно паразитирующих бактерий (шигелл, сальмонелл, бруцелл, франсиселл, эшерихий). Подавление препаратом персистирующих свойств возбудителей, затрудняет их паразитирование внутри клеток и тем самым повышает эффективность лекарственных воздействий. Не исключено, что ингибирование циклофероном персистентных характеристик внутриклеточных бактериальных патогенов, по-видимому, лежит в основе механизма их элиминации при острых и хронических инфекционных процессах.

Выявленные новые свойства циклоферона раскрывают один из возможных механизмов действия препарата при острых и хронических инфекционно-воспалительных процессах. Полученные результаты позволяют рекомендовать использование циклоферона в комплексном лечении хронических бактериальных инфекций, а также для профилактики и санации бактерионосительства.

Полученные данные по влиянию полиоксидония и циклоферона на факторы персистенции микроорганизмов согласуются с ранее полученные результатами о том, что иммуномодуляторы способны оказывать прямое действие на биологические свойства микроорганизмов [52]. Причем, изменяя общий и ло1 кальный статус макроорганизма, иммуномодулирующие агенты, по-видимому, вмешиваются в систему регуляции взаимоотношений организма хозяина и его микрофлоры.

Особенности химического строения производных циклопентанпергидро-фенантрена определяют характер влияния стеройдов на белковый обмен в организме человека. В связи с этим, нами изучено влияние стероидных гормонов на факторы персистенции микроорганизмов. Отмечено, что различный характер влияния стероидов на персистентные характеристики бактерий и грибов связан с их видовой принадлежностью. Катаболические стероиды (гидрокортизон, преднизолон, дексаметазон) повышали персистентные признаки микроорганизмов (эшерихий, клебсиелл, сальмонелл, шигелл, псевдомонад, стафилококков, грибов рода кандида, бактероидов превотелл), оказывая ингибирующее влияние у пропионибактерий и бифидобактерий. При этом анаболические стероиды (тестостерон, ретаболил, феноболил) подавляли персистентные свойства изученных бактерий и грибов, повышая АЛА и АКА бифидобактерий и пропионибактерий. Повышение регулирующей концентрации стероидов приводи/ ло к усилению эффектов действия на АЛА и АКА микроорганизмов.

Полученные новые материалы по влиянию стероидных гормонов на факторы персистенции микроорганизмов, свидетельствуют о важной роли этой группы препаратов в микробиоценотических отношениях экологических ниш макроорганизма. С одной стороны, кишечная микрофлора человека и других животных способна осуществлять синтез и биотрансформацию стероидов [181]. С другой стороны, микрофлора кишечника оказывает регулирующее влияние на синтез стероидных гормонов макроорганизмом [182], а изменение состава I микрофлоры кишечника, как правило, приводит к снижению синтеза половых гормонов и глюкокортикостеройдов [114]. Известно, что анаболические стероиды (эстрогены, андрогены) и глюкокортикостероиды под действием кишечной микрофлоры могут взаимно превращаться, оказывая регулирующее влияние на состав и биологические свойства микроорганизмов. Причем эти процессы, как правило, протекают в условиях анаэробиоза и связаны с определенными видами бактерий [105, 174].

Проведенные исследования позволили установить, что препараты стероидных гормонов регулируют персистентные свойства широкого спектра аэробных и анаэробных видов микроорганизмов. Известно, что изменения в микробиоценозе репродуктивной системы мужчин и женщин связаны со способностью половых стероидных гомонов и их метаболитов повышать активность местных факторов защиты [84, 105], а также с регулирующим действием половых стероидных гормонов на факторы персистенции бактерий [38, 54, 99] '.

Нарушение нормальной микрофлоры при лечении глюкокортикостероид-ными гормонами, вероятно связано с подавлением факторов персистенции одних микроорганизмов, особенно анаэробного грамположительного звена, и повышением персистентных свойств других условно-патогенных видов. Микроэкологические нарушения при лечении препаратами глюкокортикостероидных гормонов часто сопровождаются развитием кандидозов, что может быть связано с изменением состава нормальной микрофлоры и с повышением факторов персистенции грибов рода кандида. Не исключено, что это имеет существенное значение при применении стероидных препаратов в лечебных и профилактических целях. Снижение персистентного потенциала микроорганизмов может объяснять развитие дисбиотических состояний при нарушенном гормональном статусе как эндогенного, так и экзогенного происхождения.

Продолжая исследование регулирующего влияния гормональных препаратов на биологические свойства микроорганизмов, наше внимание привлек гормон задней доли гипофиза окситоцин. Успешное использование окситоцина при местном лечении острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей, легких и плевры аэробной и анаэробной этиологии [48, 96], определили необходимость изучения механизмов синергидного действия нонапептида с анI тимикробными препаратами против возбудителей.

В результате проведенных исследований установлено, что окситоцин усиливал1 чувствительность микроорганизмов к бактерицидному действию современных антимикробных препаратов за исключением группы карбапенемов. В тоже время, под действием окситоцина выявлено снижение персистентных свойств бактериальных патогенов. Проведенные исследования позволили установить, что в основе синергидного ингибирующего влияния окситоцина с антимикробными препаратами на факторы персистенции стафилококков и эшерихий лежит снижение гетерогенности их популяций. Вместе с тем, спектр влияния окситоцина на персистентный потенциал микроорганизмов оказался значительно шире, чем это представлялось ранее [48, 49], так как препарат подавлял факторы персистенции различных аэробных и, особенно, анаэробных бактерий. Исследования позволили установить, что окситоцин усиливал понижающий эффект цефотаксима, метронидазола на факторы персистенции возбудителей и не влиял на действие карбапенемов. При этом нонапептид модифицировал действие линкозамидов на факторы персистенции с разнонаправленного на ингибирующее у стафилококков, бактероидов, превотелл.

Исследования по изучению влияния окситоцина на антибиотикорези-стентность, факторы персистенции патогенных и условно-патогенных видов микроорганизмов раскрывают механизмы действия нонапептида при лечении острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей, легких и плевры [48, 96], а также санации бактерионосителей [100]. Это позволяет рекомендовать комбинированное применение окситоцина с антимикробными средствами в клинической практике.

На следующем этапе исследования изучено регулирующее влияние антибактериальных препаратов на факторы персистенции микроорганизмов. УстаI новлено, что антибактериальные препараты изученных групп оказывают различное влияние на персистентные характеристики возбудителей. Действие антибиотиков может быть ингибирующим как цефотаксима, меропенема, метро-нидазола, так и разнонаправленным как у препаратов группы линкозамидов, либо индифферентным как у имипенема в отношении стафилококков. Исследования показали, что действие антимикробных препаратов на персистентные свойства микроорганизмов зависит как от их структуры и действующей концентрации, так и видовой принадлежности бактерий.

Известно, что применение антибиотиков в лечебных целях сопровождается I изменениями микробной экологии человека. Причем изменения возникают не только в месте локализации инфекции, но и затрагивают практически все экологические ниши человека [105]. В связи с этим, полученные данные по регуляции персистентных свойств, вероятно, позволяют объяснить некоторые микроэкологические изменения, возникающие при применении антибиотиков. Так, изменения в микробиоценозе кишечника под действием антимикробных препаратов, вероятно, связаны не только с гибелью некоторых видов микроорганизt мов [2, 52], но изменениями факторов персистенции индигенной микрофлоры. При изучении механизма поддержания колонизационной резистентности кишечника с помощью бифидобактерий, было установлено их ингибирующее влияние на рост кишечных палочек, клостридий и других видов за счет образо вания в процессе'ферментации органических кислот и продукции других антимикробных субстанций с широким спектром антимикробной активности [53, 150]. Летучие жирные кислоты, как полагают, один из основных механизмов устойчивости к колонизации С. difficile [193]. Поэтому понижение под влиянием антибиотиков антилизоцимной и антикомплементарной активностей представителей нормальной микрофлоры, в том числе и бифидобактерий, обладающих способностью полностью подавлять токсинообразование С. difficile [123], t может приводить к понижению колонизационной резистентности экологической ниши. В тоже время* повышение токсинообразования и факторов перси-стенции клостридий под действием цефотаксима, линкозамидов может способствовать развитию геморрагического язвенного колита. Установленные закономерности, возможно, играют определенную роль в патогенезе развития анти-биотик-ассоциированной диареи. Вместе с тем, подавлением факторов перси-стенции С. difficile под влиянием карбапенемов, фторхинолонов, метронидазола можно объяснить тот факт, что при их применении не развиваются энтерокоI литы клостридиальной этиологии. Результаты стимулирующего влияния цефотаксима, линкозамидов на факторы персистенции клостридий раскрывают особенности развития антибиотик-ассоциированных колитов при их назначении.

В связи с этим, инактивация факторов персистенции у патогенов и их стабилизация у представителей нормальной микрофлоры, возможно, является одной из составляющих механизма поддержания межмикробных отношений в нормобиоценозе.

Полученные результаты раскрывают некоторые механизмы изменений микробного пейзажа при применении антибактериальных препаратов, позволяя отбирать необходимые препараты для этиотропного лечения по их ингиби-рующему влиянию на факторы персистенции возбудителей. Подтверждением этому' послужил успешный выбор антимикробных препаратов и их комбинаций с окситоцином, оказывающих наибольшее ингибирующее влияние на перси-стентный потенциал стафилококков при лечении больных с острыми гнойно-воспалительными процессами мягких тканей, легких и плевры [48, 96]. Результаты по регулирующему влиянию антибиотиков и антибиотиков с окситоцином i на факторы персистенции анаэробных неклостридиальных патогенов легли в основу способа лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры.

Оценивая влияние фторхинолонов на антилизоцимную и антикомплеменi тарную активности микроорганизмов с позиции особенностей их химической структуры, была установлена связь циклопропильного радикала с ингибирую-щим действием препаратов на персистентные признаки бактерий.

Доказательством роли циклопропильного радикала в структуре фторхиноI лонов по подавлению персистентных свойств бактерий можно рассматривать отличия внутрипопуляционных изменений эшерихий и стафилококков по факторам персистенции под влиянием ципрофлоксацина и норфлоксацина. Действие ципрофлоксацина на популяционную структуру эшерихий и стафилококков по АЛА и АКА сопровождалось уменьшением групп клонов с различным уровнем признаков, изменением соотношения клонов с разным уровнем персистентных свойств, приводящих к снижению гетерогенности популяций бактерий по АЛА и АКА, что нашло отражение в понижении индексов биоразнообразия и выровненности популяций Симпсона, а также среднепопуляционного уровня признаков. При этом не выявлено существенных изменений популяци-онной структуры эшерихий и стафилококков по АЛА и АКА под действием I норфлоксацина.

Вопреки бытующему мнению о том, что фторхинолоны практически не действуют, на анаэробную микрофлору кишечника [105], спектр ингибирующе-го влияния фторхинолонов с циклопропильным радикалом на факторы персистенции включал как аэробные, так и анаэробные виды бактерий, что может приводить изменению микробиоценозов тела человека.

Новые данные о роли циклопропильного радикала позволяют рекомендовать его для включения в структуру хинолона при синтезе новых фторхинолонов, пригодных для борьбы с бактерионосительством и хронизацией инфекций. Повышение окситоцином ингибирующего влияния фторхинолонов на перси-стентные свойства патогенных бактерий послужили основой способа лечения гнойных ран с использованием ципрофлоксацина с нонапептидом на гидрофильной мазевой основе.

Экспериментальное изучение этилцеллозольволята натрия-выявило широкий спектр бактерицидной и фунгицидной активности 1% и более водных растворов. В связи с этим, 1% водный раствор препарата был использован в каче стве дезинфицирующего средства. В субингибиторных концентрациях препарат подавлял персистентные характеристики патогенных микроорганизмов. С уменьшением концентрации этилцеллозольволята натрия отмечено увеличение доли индифферентных штаммов. Бактерицидная активность этилцеллозольволята натрия в отношении бруцелл, и подавление субингибиторными концентрациями их персистентных свойств, является, несомненно, достоинством препарата и позволяет рекомендовать его использование в очагах бруцеллеза. В тоже время способность этилцеллозольволята натрия инактивировать токсические вещества (фосфорорганические соединения, кислоты, серо- и хлорсодер-жащие соединбнйя и т.д.), создает препарату ряд преимуществ по сравнению с другими дезинфицирующими средствами [8]. Особенности действия препарата позволяют рекомендовать его для применения с целью повышения эффективности дезинфекционных мероприятий.

Обобщая материал по действию антимикробных препаратов на факторы персистенции микроорганизмов, следует отметить, что характер влияния зависел от их химического строения, концентрации и видовой принадлежности бактерий. Проведенные исследования раскрывают некоторые особенности изменения микробиоценозов человека при назначении антимикробных средств, а результаты синергидного действия окситоцина с антимикробными препаратами позволяют рекомендовать их для дальнейшего клинического применения. Полученные данные позволили выделить группу веществ, подавляющих перси-стентные характеристики патогенов, ранжировать их по степени влияния и подобрать перспективные средства и комбинации для рационального применения в клинике.

Выявлены новые препараты, обладающие антиперсистентным эффектом: циклоферон, карбапенемы, фторхинолоны с циклопропильным радикалом и этицеллозольврлят натрия.

В основе механизма лечебного эффекта комбинаций «антибиотик-окситоцин» лежит повышение под действием гормона чувствительности патогенных бактерий к антибактериальным препаратам, подавление персистентных свойств и снижение гетерогенности популяций возбудителей.

129

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Кириллов, Давид Арчилович, Оренбург

1. Антикомплементарная активность Neisseria gonorrhoeae / Н.Р. Ахунова,

2. Д.Г. Дерябин, Ю.А. Брудастов, О.С. Журлов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - № 4. - С. 63-67.

3. Ануфриева Р.Г. Влияние рифампицина на генеративную функцию и микробную экологию человека (экспериментальное исследование): Автореф. . канд. биол. наук. Москва, 1990 24 с.

4. Белоусов Ю.Б., Леонова М.В. Основы клинической фармакологии и рациональной фармакотерапии. М.: Бионика, 2002. - 357 с.

5. Белоусов Ю.Б. и др. Клиническая фармакология и фармакотерапия. / Ю.Б.i

6. Белоусов, B.C. Моисеев, В.К. Лепахин М: Универсум Паблишинг, 1997. -530 с.

7. Бигон М. и др. Экология. Особи, популяции и сообщества / М. Бигон, Дж. Харпер, К. Таунсенд // Пер. с англ. М.: Мир, 1989. - Т. 2. - С. 118-121.

8. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Медицина, 1982. - 464 с.

9. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции / Г.И. Гончарова, Л.П. Семенова, A.M. Лянная и др. // Антибиотики и мед. биотехнология-1987. Т. 32. -№3. - С. 55-58.

10. Бобок С.А., Юртушкин В.И. Чрезвычайные ситуации: защита населения и территории. Учебное пособие. М.: ГНОМ-Пресс, 2000. - 288 с.

11. Браун Э. Дж. Комплемент. / Э. Дж. Браун, H.A. Джойнер, М.М. Фрэнек. // Иммунология. / Под ред. У. Пола. М.: Мир, 1989.- Т. 3. - С. 89-125.

12. Бредихин В.Т. Влияние некоторых плазмид на устойчивость кишечной палочки к действию факторов естественной резистентности: Автореф. . канд. мед. наук. Челябинск, 1985.- 25 с.

13. И. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Автореф. . канд. мед. наук. Челябинск, 1992- 21 с.

14. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина, 1999.- 365 с.

15. Бухарин О.В. Антилизоцимный признак бактерий, перспективы его практического использования // Персистенция микроорганизмов. — Куйбышев: КМИ, 1987.-С. 4-10.

16. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. Томск, 1974.-210 с.16.' Бухарин О.В. Сальмонеллы и сальмонеллезы / О.В. Бухарин, Ю.Д. Каган, А.Л. Бурмистрова Екатеринбург: УрО РАН, 2000. - 258 с.

17. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактериносительство. Екатеринбург: УрО РАН, 1996.-208 с.

18. Буш В. Настоящее и будущее хинолонов. Обзор лит. / В. Буш, А. Дал-хофф, Х.Й. Цайлер // Антибиотики и химиотерапия. 1993. - Т. 38. - № 3. — С. 3-8.

19. Валышев A.B. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на них пробиотиков при дисбиозе кишечника: Автореф. . канд. мед. наук. Оренбург, 1997—18с.

20. Валышев A.B. Влияние водорастворимых витаминов на антилизоцим-ную активность энтеробактерий / A.B. Валышев, В.А. Кириллов, Д.А. Кириллов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. - № 4. - С. 80-82.

21. Венцел Р.П. Внутрибольничные инфекции. М.: Медицина, 1990. - С. 171-187.

22. Влияние лечебной грязи на жизнеспособность и персистентные свойства бактерий / А.Р. Абдрахманов, Ю.А. Брудастов, P.A. Абдрахманов, О.С. Журлов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - № 4. - С. 89-92.

23. Влияние иммуномодулятора полиоксидония на биологические свойства микроорганизмов / Д.А. Кириллов, И.Н. Чайникова, Н.Б. Перунова. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. - № 4. - С. 74-78.

24. Влияние инулина на биологические свойства энтеробактерий / А.В. Ва-лышев, В.А. Кириллов, Д.А. Кириллов, О.В. Бухарин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2000. № 1. — С. 79-80.

25. Глазкова J1.K. Кандидоз (методическое пособие). Екатеринбург: Ур-ГМА, 1999. - 50 с.

26. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998. - 459I

27. Девис М. и др. Витамин С: химия и биохимия / М. Девис, Дж. Остин, Д.t

28. Патридж.: Пер. с англ. -М., Мир, 1999. 176 с.

29. Действие серотонина (5-окситриптамина) на рост и дифференциацию микроорганизмов / А.В. Олескин, Т.А. Кировская, И.В. Ботвинко, JI.B. Лысак // Микробиология. 1998. - Т.67. - № 3. - С. 305-312.

30. Димова С.Г. Динамика стафилококкового бактерионосительства у детей с респираторным аллергозом в условиях спелеотерапии: Автореф. . канд. мед. наук. Оренбург, 1996. - 30 с.

31. Динамика персистентных характеристик стафилококков под воздействием микроклимата спелеошахты / О.Л. Чернова, С.Б. Матюшина, М.Н. Воляник и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1996.- №3. С. 78-80.

32. Егоров A.M. Фторхинолоны и проблемы молекулярного механизма их действия / A.M. Eropoß, Ю.О. Сазыкин // Антибиотики и химиотерапия. -2000.-Т. 45.-№8.-С. 3-5.

33. Елагина H.H. Факторы персистенции неспорообразующей анаэробной микрофлоры кишечника человека: Автореф. . канд. мед. наук. Оренбург, 2000.- 18 с.

34. Еронкина Е.М. Антиадгезивная активность белковых комплексов биологических жидкостей и секретов / Е.М. Еронкина, Г.А. Афиногенов // Журн.iмикробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1994. № 2. — С. 110114.

35. Жуковский В.Г. Обоснование рациональной антибактериальной терапии в отоларингологии с позиции бактериолога // Consilium medicum. 2001. Т. 3. - № 8. — С. 362-371.,

36. Зыкова JI.C. Факторы персистенции уропатогенов в диагностике, прогнозировании и лечении пиелонефрита у детей: Автореф. . докт. мед. наук.- Оренбург, 1998 22 с.

37. Иванов Ю.Б. Факторы персистенции микрофлоры репродуктивного тракта у мужчин в норме и при патологии: Автореф. . канд. мед. наук. -Оренбург, 1998 20 с.I

38. Изменение микрофлоры толстой кишки крыс при оральном введении цефалексина и эритромицина / A.B. Лапчинская, Б.А. Шендеров, О.В. Чахава и др. // Медицинские аспекты микробной экологии / Под ред. Б.А. Шнейдерова. М.: Грантъ, 1991. - Т. 1. - С. 52-53.

39. Изучение возможности снижения адгезивной активности Corynebacterium diphtheriae биополимерами природного происхождения / И.Д. Макаренкова, Т.С. Запорожец, H.H. Беседнова и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - № 3. - С. 11-14.

40. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника. М., 1989. - 208 с.

41. Кузовникова Т.А. О механизмах ингибирования и стимуляции роста Es-cherichia coli ртутью (Hg ) // Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов: Тез. докл. Всесоюз. конф. Пущино, 1989. - С. 49-50.

42. Кудлай Д.Г., Лиходед В.Г. Бактериоциногения. Л., 1966 - 201 с.

43. Куриленко О.Д. Краткий справочник по химии. 4-е издание. — Киев: Наумова Думка, 1974. 476 с.

44. Курлаев П.П. Экспериментально-клиническое обоснование применения окситоцина в комплексной антибактериальной терапии гнойных заболеваний мягких тканей: Автореф. . канд. мед. наук. Пермь, 1986 — 24 с.

45. Курлаев П.П. Роль факторов бактериальной персистенции в патогенезе, прогнозировании и обосновании выбора метода лечения больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей: Автореф. . докт. мед. наук. Оренбург, 2001. - 46 с.

46. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия. М.: Мир, 1968. -С. 140-246.I

47. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая Школа, 1990. - 352 с.

48. Лапчинская A.B., Шендеров Б.А. Коррекция дисбактериозов, вызванных цефалексином, некоторыми иммуномодуляторами. // Медицинские аспекты микробной экологии / Под ред. Б.А. Шендерова М., 1991. - С. 52-53

49. Ленцер A.A., Ленцер Х.П. Актуальные проблемы микроэкологии человека. // Аутофлора человека в норме и патологии и ее регуляция: Респ. Сб.научных трудов / Под ред. И.Н. Блохиной, К.Я. Соколовой. Горький: Мед. ин-т, 1988. - С. 10-14.

50. Летучих A.A. Лечение и профилактика кольпита // Акуш. и гинекол. — '1985.-№7.-С. 65-68.

51. Ломефл:оксацин (максаквин) в комплексном лечении туберкулеза / Г.Б. Соколова, А.Д. Куничан, Г.Н. Можокина и др. // Пособие для врачей фтизио-пульмонологов. М., 1999. - 16 с.

52. Малышкин А.П. Антилизоцимная активность сальмонелл. Автореф. . канд. мед. наук. Челябинск, 1986 — 20 с.

53. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, в 2-х т., 14 изд.-е, 2002. - 1148 с.

54. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Бри-лис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер и др. // Лаб. дело 1986. - № 4. - С. 210-212.

55. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике: Пер. с англ. М.: Мир, 1976. - 350 с.

56. Михайлова Е.А. Влияние окситоцина на показатели иммунитета и факторы естественной резистентности: Автореф. . канд. мед. наук. Челябинск, 1987- 18 с:I

57. Навашин. С.М. Макро- и микроорганизм — взаимодействие в инфекционном процессе при антибактериальной терапии // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - №11.-С. 3-5

58. Навашин С.М. Некоторые аспекты химиотерапии бактериальный инфекций // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1984.-№ 7. С. 37-45.

59. Навашин С.М., Фомина И.П. Справочник по антибиотикам. М.: Медицина, 1982.-416 с.

60. Некоторые аспекты влияния антибиотиков на адгезивные свойства микроорганизмов и доступная модель его изучения / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, JI.A. Левков и др. // Антибиотики 1986. - № 35 - С. 353-357.

61. Новые подходы к терапии гонореи под контролем факторов персистенции возбудителя / Л.Г. Воронина, Л.А. Первушина, Б.Я. Усвяцов, О.В. Бухарин // Вестн. дерматологии и венерологии. — 1998. № 4. — С. 43-45.

62. О тактике антибактериальной терапии при абдоминальном сепсисе у хирургических больных / Б.Р. Гельфанд, В.А. Гологорский, С.З. Бурневич, Е.Б. Гельфанд // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - № 5. — С. 3-6.

63. Обгольц A.A. Механизмы персистенции бактерий // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1992. - № 4. - С. 70-72.

64. Олескин A.B. Микробкая эндокринология и биополитика / A.B. Оле-скин, И.В. Ботвинко, Т.А. Кировская // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. Биология. -199,8.-№ 4.-С. 3-10.

65. Особенности механизма действия ломефлоксацина на микобактерии туберкулеза / Г.Н. Можокина, А.Д. Куничан, Т.Н. Левченко и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т.43. - № 10. - С. 13-16.

66. Падейская E.H. Фторхинолоны: значение, развитие исследований, новые препараты, дискуссионные вопросы // Антибиотики и химиотерапия. 1998. -Т. 43.-№ 11.-С. 38-44.I

67. Падейская E.H., Яковлев В.П. Фторхинолоны. М.: Биоинформ, 1995. -208 с.

68. Падейская E.H., Яковлев В.П. Антимикробные препараты группы фторхинолонов в клинической практике. М.: Лагота, 1998. - 351 с.

69. Парфенов О.Г. Опыт санации стафилококковых бактерионосителей наiбазе санатория-профилактория УРБ ПО. «Оренбургнефть» / О.Г. Парфенов, В.А. Гриценко // Персистенция бактерий / Под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990. - С. 121-124.

70. Первушина JT.A. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бакте-риологическ'ои диагностике и лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов: Дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1989 -160 с.

71. Перунова Н.Б. Особенности биологических свойств микроорганизмов в условиях бактериально-грибковых ассоциаций: Автореф. . канд. мед. наук. Оренбург, 2003.- 26 с.

72. Пинегин Б.В. Современные представления о стимуляции антиинфекционного иммунитета с помощью иммуномодулирующих препаратов // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - № 12. — С. 3-8.

73. Полиоксидоний иммуномодулятор последнего поколения: итоги трехлетнего клинического применения / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, A.B. Некрасов и др. // Аллергия, астма клин, иммунол. - 1999. - № 3. - С. 3 - 6.

74. Роль антилизоцимного признака для выживания бактерий в макрофагах периферической крови человека / В.Г. Петровская, В.М. Бондаренко, В.В. Гостева и др.// Эпидемиология и микробиология раневых инфекций. М., 1986.-С. 34-35.

75. Самсыгина Г.А Макролиды и фагоцитоз // Антибиотики и химиотерапия. 1999.-№ 2. - С. 33-36.

76. Саттон Д. Определитель патогенных и условно-патогенных грибов / Д. Саттон, А. Фоттергилл, М. Ринальди. М.: Мир, 2001. - С. 88-89.

77. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. — М.: Медицина, 1989. 346 с.

78. Сидоренко С.В. Влияние особенностей патогенеза инфекции на эффективность химиотерапии // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т. 37. - № 9.-С. 47-51.

79. Сидоренко С.В. Исследования распространения антибиотикорезистент-ности: практическое значение для медицины // Инфекции и антимикробная терапия. 2002. - Т. 4. - №2. - С. 38-41.

80. Соколова Н.Ф. Методологические основы определения устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 2002. Т. 4. - С. 55-56.

81. Соколова Г.Б. Пути повышения эффективности лечения больных туберкулезом / Г.Б. Соколова, А.Д. Куничан, Г.Н. Можокина // Практикующий врач. 1997. - Т 2. - № 9. - С. 24-25.

82. Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека / О.В. Бухарин, Т.М. Забирова, K.JI. Чертков и др. // Патент РФ №2175673 от 10.11.2001.

83. Страховская М.Г. Активация роста дрожжей под действием ультрафиолетового света области 280;—380 нм / М.Г. Страховская, Н.С. Беленикина, Г .Я. Фрайкин // Микробиология. 1991. - Т. 60. - С. 292-297.

84. Страховская М.Г. 'Стимулирующее влияние серотонина на рост дрожжей Candida guillermondii и бактерий Streptococcus faecalis / М.Г. Страховекая, E.B. Иванова, Г.Я. Фрайкин // Микробиология. 1993. - Т. 62. - С. 4649.

85. Фадеев С.Б. Видовой состав и персистентные характеристики возбудителей хирургических инфекций мягких тканей: Автореф. . канд. мед. наук. -Оренбург, 1998.-25 с.

86. Федосеева К.Е. Антилизоцимная активность шигелл и ее значение в паIтогенезе и лечении острой дизентерии: Автореф. . канд. мед. наук. Челябинск, 1985. - 17 с.

87. Фотометрическое определение антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, A.B. Валышев, H.H. Елагина и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - № 4. - С. 117 - 120.

88. Характеристика микрофлоры, выделенной при острых воспалительных заболеваниях легких и плевры / О.М. Абрамзон, H.H. Елагина, O.JI. Карта-шова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2003.-№4.-С. 44-47.i

89. Челпаченко O.E. Экспериментальное обоснование рациональной терапии пиелонефрита у детей под контролем маркеров персистенции возбудителя: Автореф. . канд. мед. наук. Челябинск, 1993. - 19 с.

90. Черкасов С. В. Антилизоцимная активность и видовая характеристика микрофлоры репродуктивного тракта женщин во время беременности /C.B. Черкасов, О.Д. Константинова // Журн. микробиологии, эпидемиологии ииммунобиологии. 1996. - № 3. - С. 88-90.i

91. Черкасов С. В. Персистентные характеристики микрофлоры репродуктивного тракта женщин в норме и при патологии: Дисс. . канд. мед. наук. -Оренбург, 1998- 130 с.

92. Чернова О.Л. Персистенция стафилококков как модель системы «пара-зит-хозяин»:'Дйсс. . докт. биол. наук. Пермь, 1999. - 228 с.

93. Шандала М. Г. Дезинфектологические аспекты борьбы с инфекционными 'заболеваниями // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 2002. Т.4. - С. 67-68.

94. Швецов С.А. Клиническое значение персистентных характеристик аэробной условно-патогенной микрофлоры у больных с холециститом: Авто-реф. . канд. мед. наук. Пермь, 1994. - 31 с.

95. Шевелева Н.Е. Антимикробные свойства блокаторов Hi рецепторов гис-тамина: Автореф. . канд. биол. наук. Москва, 1991. — 22 с.

96. Шеенков Н.В. Роль антилизоцимной активности бактерий в развитии инфекционного процесса и пути ее регуляции: Дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1993.-215 с.

97. Шендёров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М.: Грантъ, 1998. в 2-х т.

98. Шубин Ф.Н. Влияние некоторых фторхинолонов на адгезивные свойства различных плазмидоваров Yersinia pseudotuberculosis / Ф.Н. Шубин, Е.Ф. Зайцева, H.H. Беседнова // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - № 5. - С. 9-13

99. Яблочков A.JI. Выделение и характеристика антилизоцимного фактора Klebsiella pneumoniae // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1989. - № 3. - С. 11-14.

100. Яковлев C.B. Критический анализ антибактериальных препаратов для лечения инфекций в стационаре // Consilium medicum. 2002. - С. 7-15.

101. Яковлев C.B. Спирамицин. М., 1997. - 72 с.I

102. Яковлев В.П. Ципрофлоксацин в клинической практике / Яковлев В.П., Падейская E.H., Яковлев C.B. М.: Инфополиграф, 2000. - 271 с. Ш.Яковлев В.П., Яковлев C.B. Моксифлоксацин. - М.: Йнформэлектро, 2002. - 160 с.

103. Яковлев В.П., Яковлев C.B. Рациональная антимикробная фармакотерапия. М.: Бионика, 2002. - 650 с.

104. Andriole V.T. The Quinolones. Acad. Press, London, New-York, Tokyo. 1998.-441 p.

105. Analysis of the increased reproduction in contaminated germfree mice by bacteria / K. Umeahara, S. Tasume, K. Hashimoto, S. Sasaki // J. Germfree Life Gnotobiol. 1991, Vol. 21. №2. - P. 1043-1048.

106. Aspects of amino acid patternon gastro-intestinal contents in germfree and conventional rats / C. Honma, M. Takahashi, M. Kametaka, M.Yamanaka // J. Germfree Life Gnotobiol.- 1985.-Vol. 15.-№1.-P. 1051 1056

107. Aujard Y., Gendrel D. Les quinolone en pediatrie. Paris, Flammarion. 1994. - 124 p.

108. Ball P. Quinolone generations: natural history or natural selection? // J. An-timicrob. Chemother. 2000. - Vol. 46. - Topic T. 1. - P. 17-24.

109. Bedenic B. Post-Exposure Effects of Cefepime and Cefpirome on Isogenic Escherichia coli Hosts Producing SHV-Extended-Spectrum Beta-Lactamases / B. Bedenic, J. Vranes // Journal of Chemotherapy. 2003. - Vol. 15. - № 4. - P. 342-349.

110. Beuth J. Inhibition of bacterial adhesion and infections by lectin blocking / J. Beuth, B. Stoffel, G. Pulverer // Adv. Exp. Med. Biol. 1996. - Vol. 408. - P. 5156.

111. Bhakdi S. Isolation and partial characterization of staphylococcal decomplementation antigen / S. Bhakdi, M. Nuhly // Infect. Immun. 1985. - Vol. 47. - P.i47.51

112. Borriello S.P. The influence of the normal flora on Clostridium difficile colonisation of the gut // Ann. Med. 1990. - Vol. 22. - № 1. - P. 61-67.

113. Braga P.C. Influence of enoxacin sub-MICs on the adherence of Staphylococcus aureus and Escherichia coli to human buccal and urinary epithelialcells / P.C. Braga, G. Piatti // Chemotherapy. 1992. - Vol. 38. - № 4. - P. 261266.

114. Budrene E.O. Dynamics of formation of symmetrical patterns by chemotactic bacteria / E.O. Budrene, H. Berg // Nature. 1995. - Vol. 376. - P. 49-53.

115. Carlier M.B. Cellular uptake and subcellular distribution of roxithromycinand erythromycin in phagocyte cell / M.B. Carlier, A. Zenebergh, R.H. Tulkens // J. Antimicrob. Chemother. 1987. - Vol. 20, Suppl. B. - P. 47-56.

116. Clonal distribution of invasive Neisseria meningitidis isolates from the Norwegian county of Telemark, 1987 to 1995 / R.K. Aakre, A. Jenkins, B.E. Kristian-sen, L.O. Froholm // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol. 36/. - , № 9. - P. 26232628.

117. Comparative in vitro activity of lomefloxacin, a difluoroquinolone / M. Rob-bins, A. Baskerwille, M. Sanghrajaka et al. // Diag. Microbiol. Inf. Dis. 1989. Vol. 12.-P. 65-76.

118. Cunha B.A. Meropenem inhibition of endotoxin release from E.coli / B.A. Cunha, P. Wu, S.M.H. Qudri // Advan. Ther. 1997. - Vol. 14. - № 4. - P. 169171.

119. Decreased heat-labile opsonic activity and complement levels associated with evidence of C3 breakdown products in infected pleural effusion / P.D. Lew, R. Zubler, P. Vandaux et al. // J. Clin. Invest. 1979. Vol. 63. - P. 326-334.

120. Desnottes J. Antibiotiquces et adhesion bacterienne // Rev. Tr. Lab. 1989. -Vol. 18.-№ 196.-P. 77-82.

121. Domagala J.M. Structure-activity and structure-side effect relationships forithe quinolone antibacterials // J. Antimicrob. Chemother. 1994. - Vol. 33. - P. 685-708.

122. Drug interaction and hepatitis produced by some macrolide antibiotics / D. Pessayre, D. Larrey, C. Funck-Brentano, J.P. Denhamon // J. Antimicrob. Chemother. 1985. - Vol 16. Suppl. A. - P. 181-194.

123. Dunny G.M., Winnas S.C. Cell-Cell Signaling in Bacteria. Wash. DC., ASM Press, 1999. - 200 p.

124. Effect of Amoxicillin on colonization resistenze in human volunteers / H.K. Van Saene, P. Stoutenbeek, J.Geitz et al. // Microbiol. Ecol. Health Diseases. -1988.-Vol. l.-P. 16-19

125. Effect of miocamycin and erythromycin on the activity of human neutrophils against Staphylococcus aureus / I. Garcia, A. Pascual, M.C. Guzman, E.J. Perea // Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 1991. - Vol. 9. - №.8. - P. 459-463

126. Effect of subinhibitory concentrations of spiramycin on the adherence of Gram-positive cocci to human cells / J.F. Desnottes, N. Diallo, R. Santonja et al. // Drugs Und. Exper. Clin. Res. 1987. - Vol. 13. - P. 69-73.

127. Effect of tetracycline on the attachment of K88+ enterotoxigenic Escherichia coli to porcine small-intestinal cells / C.F. Deneke, G.M. Thorne, A.D. Larson, S.L. Gorbach//J. Infect. Dis. 1985. - Vol. 152. - №5. - P. 1032-1036.

128. Eisenstein B. I. Divergent effects of cyclic adenosine 3',5'-monophosphate on formation of type 1 fimbriae in different K-12 strains of Escherichia coli / B.I. Eisenstein, E.H. Beachey, S.S. Solomon // J. Bacteriol. 1981.- Vol. 145, №1. -P. 620-623.

129. Eisenstein B.I. Loss of lectin-like activity in aberrant type 1 fimbriae of Escherichia coli / B.I. Eisenstein, I. Ofek, E.H. Beachey // Infect; Immun. 1981. - Vol. 31. - № 2. - P. 792-797,

130. Evaluation of the premier EHEC assay for detection of Shiga toxin-producing4

131. Esche.richia coli / K.S. Kehl, P. Havens, C.E. Behnke, D.W. Acheson // J. Clin. Microbiol. 1997. - Vol. 35. - P. 2051-2054.

132. Factors influencing production of 5(E) 19-nor-10-keto-vitamin D3 by rumen bacteria / R.V. Gardner, M.J. Allison, P.A. Hartman et al. // J. Steroid Bio-chem. - 1987. - Vol. 28. - №2. - P. 335-339.

133. Felmingham D. Pre-clinical microbiology respiratory tract infectious susceptibility survey - USA. / First Intern. Moxifloxacin Symp. Ed. Mandell L. M. -Berlin, 1999; Springer-Verlag., 2000. - P. 59-66.

134. Foster J.W., Spector M.P. How Salmonella survive against the odds / J.W. Foster, M.P. Spector // Ann. Rev. Microbiol. 1995. - Vol. 49. - P. 145-147.

135. Fretter R. Interdependence of mechanisms that control bacteria colonization of the large intestinale // Microecol. and Therapy. 1984. - Vol. 14. - P. 376-380

136. Fuqua W.C. Quorum sensing in bacteria: the LuxR-LuxI family of cell density-responsive transcriptional regulators / W.C. Fuqua, S.C. Winans, E.P. Greenberg // J. Bacteriol. 1994. - Vol. 176. - №. 2. - P. 269-275.

137. Gibson G.R. Regulatory effects of bifidobacteria on the growth of other colonic bacteria / G.R. Gibson, X. Wang // J. Appl. Bacteriol. 1994. - Vol. 77. -№4.-P. 121-127

138. Gemmell C. Expression of virulence factors by Grampositive cocci exposed to sub-MIC levels of linezolid / C. Gemmell, C. Ford // 39th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, San Francisco, 1999. -Abstr. 1537.

139. Hooper D.C., Wolfson J.S. The Quinolone antimicrob. agents. Washington, 2nd ed., 1993.-549 p.

140. Hooper D.C. Fluoroquinolone antimicrob. agents / D.C. Hooper, J.S. Wolf-son//New Engl. J. Med. 1991. - Vol. 324. - P. 384-394

141. Hu M.L. The antioxidant and prooxidant activity of some B vitamins and vitamin-like compounds / M.L. Hu, Y.K. Chen, Y.F. Lin // Chem. Boil. Interact. -1995.-Vol. 97.- №1.-P. 63-73.

142. Increased translocation of Escherichia coli and development of arthritis in vitamin A-deficient rats / U. Wiedermann, L.A. Hanson, T. Bremell et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63. - № 8. - P. 3062-3068.

143. Influence of Roxitromycin on mucin degradation in rats / E. Bezirtzoglou, E. Norin, J. Chen, T. Midtvegt. // Microecol. Therapy. 1995. - Vol. 25. - P. 235239.

144. Jaquot J. In vitro evidence that human airway lysozyme is cleaved and inactiivated by Pseudomonas aeruginosa elastase and hot by human leukocyte elastase / J. Jaquot, J.Tournier , E. Puchelle // Infect. Immun. 1985. - Vol. 47. - P. 555-560.

145. Ji G. Cell density control of Staphylococcus virulence mediated by an octa-peptide pheromone / G. Ji, R.C. Beavis, R.P. Novick // Proc. Natl. acad. Sei. USA. 1995. - Vol. 92. - P. 12055-12059.

146. Ji G. Bacterial interference caused by autoinducing variants / G. Ji, R.C. Beavis, R.P. Novick // Science. 1997.- Vol. 276. - P. 2027-2030i

147. Ji G. Bacterial interference caused by autoinducing variants / G. Ji, R.C. Beavis, R.P. Novick // Proc. Natl. acad. Sei. USA. 1995. - Vol. 92. - P. 1205512059.

148. John G. Holt Bergey's Manual of determinative bacteriology / John G. Holt, Noel R. Krieg, Peter H.A. Sneath et al. W&W, V. 1, 2. - 1994.

149. Kostiukova N.N. The initial stage of the infectious process—colonization and the means for its prevention // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1989. -Vol. 9.-P. 103-110.

150. Kristiansen B.E. Which contacts of patients with meningococcal diseaseicarry the pathogenic strain of Neisseria meningitidis? A population based study / B.E. Kristiansen, Y. Tveten , A. Jenkins // BMJ. 1998. - Vol. 5. - № 317. - P. 621-625.

151. Kudoh S. Antiiflammatory/immunomodulatory properties of roxithromycin. Chlamydia pneumoniae and respiratory disease / Abstracts from a Special Sei Workshop. Berlin, 1997-13 p.

152. Labro M.T. Comparison of in vitro effect of several macrolides on the oxidative burst of human neutrophils / M.T. Labro, El Benna J., C. Babin-Chevaye // Ibid. 1989, - Vol. 24. - P. 561-572.

153. Labro M.T. Modulation of human polymorphonuclear neutrophil function by macrolides: preliminary data concerning dirithromycin / M.T. Labro, El Benna J., H.Abdelghaffar'// J. Antimicrob. Chemother. 1993. - Vol. 31. Suppl. C. - P. 5164.

154. Lenard J. Mammalian hormones in microbial cells // Trends Biochem. Sei. 1992.-Vol. 17,-P. 147-150

155. Lyte M. The role of microbial endocrinology in infectious disease // J. Endocrinol. 1992. - Vol. 137. - P. 343-345.

156. Mackie R.I. Lipid Metabolism in Anaerobic Ecosystems / R.I. Mackie, B.A. White, M.P. Bryant // Critical Rev. Microbiol. 1991. - Vol. 17. - №6. - P. 267271.

157. Macrolides induced suppression of virulence factors produced by Staphylocoocus aureus / N.A. Moneib, A.M. Shibl, M.A. El-Said et al. // J.

158. Chemother. 1993. - Vol. 5. - P. 289-292.i

159. Microbial flora of the vagina / A. Mehta, J. Talwalkar, S.V. Shetty, N.D. Motashaw // Microbial ecology in heals and desease. 1994. - Vol. 7. №35-55. -P. 45.

160. Miller M.B. Quorum sensing in bacteria / M.B. Miller, B.L. Bassler // Annu. Rev. Microbiol. -2001. Vol. 55. - P. 165 - 199.

161. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria. Second Edition. Approvedt

162. Standard. NCCLS document Ml 1-A2. NCCLS, PA, 1990.

163. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically. 4th ed.

164. Approved standard M7-A4. NCCLS, Villanova, PA, 1997.i

165. Nonsteroidal estrogens of dietary origin: possible roles in hormone-dependant diseases / K.D. Setchell, S.P. Borriello, P. Hulme et al. // Am. J. Clin. Nutr. -1984. Vol. 40. - №3. - P. 621- 628.

166. Ohsawa N. Glucocorticoid receptor and enteric flora // J. Germfree. 1979. -Vol. 9. - №1. - P. 33-35.

167. Phillips J. In vitro properties of the quinolones. / Phillips J., King A., Shannon K. // The Quinolones. Ed. Andriole V.T. Acad. Press., London-New-York. 1988. -P. 83-117.

168. Peritti .P. Antibiotic-induced release of bacterial wall components in theipathogenesis of sepsis and septic shock: a review / P. Peritti, T. Mazzei // J. Chemotherapy. 1998. - Vol. 10. - № 6 . - P. 427-448.

169. Pesci E.C. Quinoline signaling in the cell-to-cell communication system of Pseudomonas aeruginosa / E.C. Pesci, J.B. MilbanK, J.P. Pearson // Proc. Natl.

170. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 11229-11234.i

171. Practice guidelines for the management of infectious diarrhea / R.L. Guerrant, T.V. Gilder, T.S. Steiner et al. // Clin. Infect. Dis. 2001. - Vol. 32. - P. 331-350.

172. Prins J.M. Antibiotic-induced release of endotoxin clinical data and humanistudies // J. Endotoxin. Res. 1996. - Vol. 3. -, № 3. - P. 269-273.

173. Progesterone binding of a clinical isolate of Pseudomonas aeruginosa / S. Mokier, M. Nacao, M. Herman et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1991. - Vol. 287.-P. 160-166.

174. Quorum sensing regulators control virulence gene expression in Vibrio chol-erae / J. Zhu , M.B. Miller, R.E. Vance et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2002. Vol. 99. - P. 3129-3134.

175. Rank R.'G. Specific effect of estradiol on the genital mucosal antibody response in chlamydial ocular and genital infecions / R.G. Rank, A.L. Barron // Infect. and immunity. 1987. - Vol. 55. - №9 - P. 2317-2319.

176. Rastogi N. Intracellular bactericidal activity of ciprofloxacin against Mico-bacterium tuberculosis H37Rv in the j-744 macriphage cell line / N. Rastogi,

177. Christine Blom-Potar M. // Zbl. Bacterid., Reine A: Med. Microbiol. 1990. -Vol. 273. - №2. -P. 195-199.

178. Research of mechanisms of colonization resistance to Clostridium difficile by using an experimental animal model / W.J. Su, MJ. Waechter, M. Dolegeal et al. // Ann. Inst. Super. Sanita. 1986. - Vol. 22. - №3. - P. 431-442.

179. Salit I.E. Effect of subinhibitory concentrations of antimicrobials on meningococcal adherence // Can. J. Microbiol. 1983. - Vol. 29. - №3. - P. 369-376.

180. Salm D. Pre-clinical microbiology respiratory tract infectious susceptibility survey - USA. - // First Intern. Moxifloxacin Symp., Ed. Mandell L., Berlin, Springer-Verlag, 2000. - P. 54-58.

181. Schito G.S. The evolving threat of antibiotic resistance in Europe: new data from Alexander project / G.S. Schito, E.A. Debbia, A.Marchese "// J. Antimicrob. Chemother. 2000. - Vol. 46. Topic T. 1. - P. 3-9.

182. Sharon N. Bacterial lectins, cell-cell recognition and infectious // FEBS Lett.i- 1987. Vol. 217. - P. 145-147.

183. Shenderov B.A. The effect of antibiotics on excretion of different metabolites in the faeces of rats / B.A. Shenderov, S.D. Mitrokhin, P.L. Zaslavskaja // Microecol. Therapy. 1990. - Vol. 20. - P. 745-747.t

184. Siporin C. et al. The New Generation of Quinolone / C. Siporin, C.L. Heifetz, J.M. Domaglia New-York-London, 1990,- 422 p.

185. Smith J.T., Levin C.S. Chemistry and mechanisms of action of the quinolone antibacterials. // The Quinolones, Ed. Andriole V.T., Acad. Press., London-New-York, 1988.-P. 23-82.

186. Solomon J.M. Purification and characterization of an extracellular peptide factor that affects two different developmental pathways in Bacillus subtilis / J.M.

187. Solomon, B.A. Lazzazera, A'.D. Grossman // Gen. Dev. 1996. - Vol. 10. - P. 2014-2024.

188. Taga M.E. The luxS-dependent autoinducer AI-2 controls the expression of an ABC transport that functions in AI-2 uptake in Salmonella typhimurium / M.E. Taga, J.L. Semmelhack, B.L. Bassler // Mol. Microbiol. 2001. - Vol. 42. - P. 777-793/

189. The effect of vitamin C on N-acetyltransferase activity in Klebsiella pneumoniae / S.E. Hsieh, H.H. Lo, Y.S. Yen, J.G. Chung // Food Chem. Toxicol.- 1997 -Vol. 35.-№ 12.-P. 1151-1157.

190. The influence of streptomycin on colonization resistence in mice / D. Hent-ges, J.V. Que, S. W. Casey, A.J. Stein // Microecol. and Therapy. 1984. - Vol. 14.-P. 465-458.

191. The lectin activity of mytilan, a bioglycan from mussels, and its effect on microbial adhesion to macroorganism cells / T.S. Zaporozhets, N.N. Besednova, R.G. Ovodova, V.E. Glazkova // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1994. -Vol. 3.-P. 86-88.

192. The Pseudomonas aeruginosa quorum sensing molecule N-(3-oxododecanoil)homoserine lactone contributes to virulence and induce inflammation in vivo / R.S. Smith, S.G. Harris, R. Phillips, B. Iglewski // J. Bacteriol.i2002.-Vol. 184. -P. 1132-1139.

193. Teraguchi S. Vitamin Production by Bifidobacteria Originated from Human Intestine / S. Teraguchi , J. Ono , I. Kiyosawa // J. Jpn. Soc., Nutr. Food Sci. -1984.- Vol. 37.-p. 601-609

194. Vaca Pacheco S. Factores de virulencia de Pseudomonas aeruginosa / S. Vaca Pacheco , Carlos Cervantes, I: Vega // Rev. Latinoamer. Microbiol. 1988. - Vol. 30.-№2.-P. 87-90.

195. Van der Waaij D. The Immunoregulation of the Intestinalo Flora: experiimental investigations on the development and the composition of the microflora in normal and thymusless mise // Microecol. Therapy. 1984. - Vol. 14. - P. 256260.

196. Waldburger C. Chambliss Characterization of a new sporulation factor in Bacillus subtilis-/ C. Waldburger, D. Conzales // J. Bacteriol. 1993. - Vol. 175. - P. 6321-6327.

197. Walker R.C. The fluoroquinolones / R.C. Walker, A J. Wright // Mayo Clin. Proc. 1991. - Vol. 66. - P. 1249-1259.

198. Walstad R. Predicting spiramycin efficacy in pneumonia and tonsillitis / R. Walstad, E. Thurmann-Nielsen, O. Jetlund // Drug. Invest. 1993. - Vol. 6. Suppl. 1. - P. 29-34

199. Wang X. Comporative aspects of carbohydrate fermentation by colonic bacteria. Cambridge, 1993, 500 p.

200. Wilson A.P.R, Gruneberg R.N. Ciprofloxacin: 10 years in clinical experience. Oxford, Maxim Medical, 1997. - 275 p.

201. Winans S.C. Mob Psychology / S.C. Winans, B.L. Bassler // Ibid. 2002. -Vol. 184.-P. 873-888.

Информация о работе

Кириллов, Давид Арчилович
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы