Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Лабораторная оценка липид-транспортной системы при первичной гиперлипидемии и сахарном диабете первого типа

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Лабораторная оценка липид-транспортной системы при первичной гиперлипидемии и сахарном диабете первого типа"

На правах рукописи

Волкова Татьяна Юрьевна

Лабораторная оценка липид-транспортной системы при первичной гиперлипидемии и сахарном диабете первого типа.

(03.00.04 - биохимия )

(14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика )

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2003

Работа выполнена в Российской Медицинской Академии последипломного об разования МЗ РФ.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Владимир Владимирович Долгов доктор биологических наук Мария Глебовна Творогова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Валерий Борисович Хватов доктор медицинских наук Михаил Аркадьевич Голубев

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится « »

/л °°

в часов на заседании диссертационного совета Д 001.042.02 в Гематол

гическом научном центре РАМН по адресу: 125167, г.Москва, Новозыковсю проезд, д.4а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Гематологического на) ного центра РАМН.

Автореферат разослан « ¿¿¿¿¿/¿¡(Х- 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник

В.Д. Ре.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Пандемия сердечно-сосудистых заболеваний, охвативших практически все человечество, связывается с нарушениями липид-транспортной системы - увеличением уровня холестерина липопротеидов низкой и очень низкой плотности, снижением холестерина липопротеидов высокой плотности и апопротеина A-I (А.Н.Климов, 1999; Luc, 2002). Однако нарушения липидного обмена не всегда сопряжены с выраженными количественными изменениями традиционных параметров липид-транспортной системы, а могут проявляться изменением состава основных классов липидов и липопротеидов сыворотки крови. Эти нарушения заключаются в изменении соотношений насыщенных/ненасыщенных жирных кислот сыворотки крови; этерифицированного/свободного холестерина; апопротеинов A-I и В; состава фосфолипидов (Grainer, 1997; Seppo, 1999). Высказано предположение, что атеросклеротические изменения связаны с нарушениями поступления в клетки полиненасыщенных эссенциальных жирных кислот (В.Н. Титов, 1999). Лабораторным тестом ненасыщенности сыворотки крови является суммарное количество двойных связей в липидной фракции. (Т.И. Туркина, 199/).

В клинической практике показано, что при гиперлипопротеидемии формирование атерогенных изменений в значительной степени обусловлено составом жирных кислот, входящих в молекулы липидов разных классов липопротеидов сыворотки крови (Guallar, 1999). У пациентов с сахарным диабетом 1 типа традиционные показатели липид-транспортной системы не всегда выявляют нарушения липидного обмена, хотя заболеваемость и смертность от сердечно-:осудистых заболеваний в 4 и 2 раза выше, по сравнению с популяцией людей 5ез диабета (И.И. Дедов, 2002; М.И. Балаболкин, 2000). В этой связи расширение комплекса методических приемов для дополнительной оценки липид-гранспортной системы при первичных и вторичных дислипидемиях является то-прежнему актуальным.

Цель исследования - комплексная оценка показателей липид-транспортной системы у пациентов с первичной гиперлипидемией и у больных сахарным диабетом 1 типа в условиях стационарной коррекции доз инсулина. Задачи исследования:

1. Оценить и сопоставить показатели липид-транспортной системы и концентрацию двойных связей липидной фракции сыворотки крови у пациентов с первичной гиперлипидемией и у больных сахарным диабетом первого типа.

2. Изучить взаимосвязь показателей липид-транспортной системы и двойных связей липидной фракции сыворотки крови при первичной гиперли-пидемии и у больных сахарным диабетом 1 типа, используя многопараметрические статистические методы.

3. Оценить динамику показателей липид-транспортной системы и уровень двойных связей у больных сахарным диабетом 1 типа при поступлении в стационар, через 10 и 20 дней подбора доз инсулина.

4. Оценить аналитические характеристики методов определения холестерина липопротеидов высокой плотности и холестерина липопротеидов низкой плотности для лабораторной интерпретации выраженных нарушений липид-транспортной системы.

Научная новизна:

- На основе оценки показателей липид-транспортной системы и многопараметрического статистического анализа установлено, что количество двойных связей липидной фракции достоверно выше в группе пациентов с первичной гиперлипидемией и у больных сахарным диабетом 1 типа по сравнению с группой здоровых лиц. Показано, что увеличение уровня двойных связей при первичной гиперлипидемии имеет место при повышении показателей липид-транспортной системы, тогда как у больных сахарным диабетом 1 типа увеличение уровня двойных связей наблюдается при нормальных значениях показателей липидно-го обмена.

Трименение множественного регрессионного анализа для оценки взаимосвя-концентрации двойных связей липидной фракции сыворотки крови с показа-[ями липидного обмена показало, что изменение уровня двойных связей в 'ппе здоровых лиц и у пациентов с первичной гиперлипидемией обусловлено ■личением уровня фосфолипидов сыворотки крови (Л2=62%) и (Я2=6б%) со-(етственно. У больных сахарным диабетом 1 типа при поступлении в стацио-) не выявлена взаимосвязь между двойными связями и показателями липид-нспортной системы; на 10 день изменение числа двойных связей детерми-¡уется уровнем фосфолипидов, общего и свободного холестерина (Я2=62%); 20 день - уровнем общего холестерина (Л2=56%). актическая значимость:

'езультаты сопоставления концентрации двойных связей липидной фракции юротки крови с показателями липид-транспортной системы у пациентов с вичной гиперлипидемией и у больных сахарным диабетом 1 типа позволяют дложить использование метода титрометрического озонирования двойных зей липидов сыворотки крови для дополнительной оценки нарушений ли-ного обмена.

рямые методы определения холестерина липопротеидов высокой и низкой тности могут быть рекомендованы для использования в практике клинико-гностических лабораторий, как обладающие лучшими точностными харак-тстиками и позволяющие проводить обследование больных с гипертригли-вдемией.

дрение в практику:

езультаты диссертации используются при проведении занятий с курсантами циклах повышения квалификации кафедры клинической лабораторной диаг-гики РМАПО (зав. кафедрой д.м.н., профессор В.В.Долгов). Методы оценки /шений липид-транспортной системы внедрены в практику клинико-"ностической лаборатории клинической больницы им.С.П.Боткина МЗ эсквы (зав. КДЛ В.И.Коровина).

Положения, выносимые на защиту :

1. Концентрация двойных связей липидной фракции сыворотки крови в группе пациентов с первичной гиперлипидемией достоверно выше, чем в группе здоровых лиц. Уровень двойных связей липидов у больных сахарным диабетом 1 типа ниже, чем у пациентов с первичной гиперлипидемией, но выше по сравнению с группой здоровых лиц.

2. Применение множественного регрессионного анализа для сопоставления содержания двойных связей липидной фракции сыворотки крови с показателями липидного обмена позволило установить, что изменение концентрации двойных связей в группе пациентов с первичной гиперлипидемией и у здоровых лиц на 66% и 62% соответственно обусловлено вариацией уровня фосфо-липидов сыворотки крови, тогда как у больных сахарным диабетом 1 типа к выписке из стационара концентрация двойных связей липидной фракции сыворотки крови детерминируется уровнем общего холестерина (112=56%).

3. При поступлении в стационар у больных сахарным диабетом 1 типа увеличен уровень двойных связей липидной фракции, неэстерифицированных жирных кислот, фосфолипидов сыворотки крови, тогда как традиционные параметры липидного обмена находятся в пределах нормальных значений.

4. В процессе подбора доз инсулина у больных сахарным диабетом 1 типа изменения показателей липид-транспортной системы разнонаправлены: увеличивается уровень общего холестерина, эфиров холестерина, холестерина липо-протеидов высокой и низкой плотности; снижается концентрация неэстерифицированных жирных кислот и двойных связей. Несмотря на увеличение общего холестерина, эфиров холестерина, холестерина липопротеидов низкой плотности в процессе стационарной коррекции доз инсулина, данные показатели имеют нормальные значения, тогда как уровень двойных связей липидов, несмотря на снижение, остается достоверно увеличенным.

Апробация работы: Апробация работы состоялась 4 апреля 2003 г. на заседании кафедры клинической лабораторной диагностики Российской Медицинской Академии последипломного образования.

Основные результаты исследований, представленных в диссертации, докла-ывались и обсуждались на конференции «Национальные дни лабораторной едицины России», (Москва, 7-10 октября 2002 г.); на 14-ом Международном шгрессе по клинической химии и лабораторной медицине (Прага, 26-31 мая, )01); на 6-й Всероссийской медико-биологической конференции молодых ис-[едователей (Санкт-Петербуг, 19 апреля, 2003г.). убликации

По теме опубликовано 5 научных работ. бьем и структура диссертации

Диссертация изложена на 110страницах машинописного текста, содержит \3 ¡блиц и £?рисунков. Работа состоит из введения, четырех глав (глава 1 - обзор ггературы, глава 2 - описание материалов и методов исследования, глава 3 -¡зультаты исследования, глава 4 - обсуждение полученных результатов), выдав и библиографического указателя, включающего 118 источников. Выра-аго искреннюю благодарность д.м.н., профессору Титову В.Н. и Лисицыну М. за предложенную тему и практическую помощь в проведении начальных апов работы, а также сотрудникам кафедры клинической лабораторной диаг->стики РМАПО к.м.н., доценту К.А. Щетникович и к.м.н., доценту А.П. Ройт-шу за помощь в постановке и налаживании методик определения показателей ГС.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Показатели Л ТС и ДС были исследованы у 70 пациентов: 20 пациентов с ¡рвичной ГЛП, 30 больных СД 1 типа и 20 практически здоровых лиц. Группу пациентов с первичной ГЛП составили 20 человек (Пмужчин, 9 гнщин) в возрасте от 35 до 55 без лабораторных признаков вторичной ГЛП. зеди них 13 человек имели ГЛП IIA типа, 7 пациентов - IIB типа по класси-жации Фридрексона. Пациенты были обследованы в биохимической лабора->рии ГКБ им. С.П.Боткина (главный врач - Яковлев В.Н., зав. КДЛ - Коровина .И.).

В группу больных СД 1 типа вошли 16 мужчин, 14 женщин в возрасте 16-45 лет. К началу исследования состояние всех больных оценивалось как средней степени тяжести. В качестве сахароснижающей терапии все больные получали инсулин. Суточная доза инсулина для большинства наблюдаемых не превышала 0,6 Ед/кг. Больные СД 1 типа были обследованы при подборе терапевтических доз инсулина в условиях 1 и 2 эндокринологического отделения 67 ГКБ (главный врач -Зелекович Р.А., зав. 1-м отделением эндокринологии — Везяш-кина С.Г., зав. 2-м эндокринологическим отделением - к.м.н., Хасанова Э.Р).

Лица без лабораторных нарушений липидного и углеводного обмена составили контрольную группу. Среди них 12 мужчин и 8 женщин в возрасте 30-45 лет.

Кровь для определения показателей ЛТС и количества ДС липидной фракции сыворотки крови у пациентов с ГЛП и в группе здоровых лиц брали однократно, а у пациентов с СД 1 типа трижды в течение госпитального периода: при поступлении в стационар, через 10, 20 дней коррекции доз инсулина в стационаре.

Уровень ХС, ТГ определяли фотометрически ферментативньми методами с использованием диагностических наборов фирм «Olvex diagnosticum». ХС ЛПНП и ХС ЛПВП определяли прямыми методами, используя наборы, стандартные образцы и контрольные материалы фирмы «Pliva Lachema». Прямое определение ХС ЛПВП основано на образовании иммунных комплексов и их осаждении со всеми ЛП, за исключением ЛПВП. ХС ЛПВП определяется в су-пернатанте ферментным методом. Определение ХС ЛПНП основано на следующем подходе: на первом этапе "протективный" реактив избирательно защищает ХС ЛПНП от ферментативного окисления ферментами холестеринэ-стеразой и холестериноксидазой, после чего происходит полное окисление ХС фракций ЛПВП, ЛПОНП и хиломикронов без образования окрашенного продукта. Далее "протективный" реактив разрушается каталазой и сохраненный ХС ЛПНП окисляется с образованием окрашенного продукта, который измеряется ферментативно.

Нами проверены аналитические характеристики прямых методов опреде-гения ХС ЛПВП и ХС ЛПНП. Прямые методы определения ХС ЛПВП и ХС ШНП сравнивали с многоэтапным методом определения ХС ЛПВП и расчет-шм методом определения ХС ЛПНП. В качестве многоэтапного для ХС ЛПВП «пользован метод преципитации фосфовольфрамовой кислотой; для опреде-1ения ХС ЛПНП - расчетный метод по формуле Фридвальда.

Концентрации ФЛ, СХС измеряли с использованием наборов фирмы «Pliva -achema», уровень НЭЖК - ферментативным методом, применяя наборы фир-ш «Randox». ЭХС вычисляли как разность между ХС и СХС. Определение апо \-1 и В проводили иммунотурбидиметрическим методом, применяя наборы, ¡тандарты и контрольные образцы фирмы «Diasis". Для оценки содержания "лкжозы крови натощак использовали наборы фирмы «Olvex diagnosticum», биохимические исследования проводили на биохимических анализаторах «Eos-3ravo» и «Screen Master" фирмы «Hospitex», программируемом фотометре 4010 ¡шрмы «Boehringer Mannheim».

Ненасыщенность сыворотки крови определяли по суммарному количеству ЦС липидной фракции совместно с сотрудником лаборатории полимеризован-шх процессов в лаборатории катализа института Химической физики РАН Ли-:ицыным Д.М. Липидную фракцию сыворотки крови экстрагировали методом Рольча.

Для регистрации количества ДС липидов сыворотки крови использовали щализатор двойных связей (АДС-4). В приборе установлены точечный источ-шк монохроматичного света, U-образная реакционная камера и проточная кю-зета для газов с длиной оптического пути 25 мм. Метод титрометрического озонирования основан на способности озона количественно присоединяться к ЦС. При пропускании газовой смеси с озоном через реакционную камеру с раствором ННЖК, концентрация озона в газовой смеси уменьшается на 1-2 порядка. При озонировании прибор определяет в ходе всей реакции концентрацию эзона УФ-спектроскопией на выходе из реакционной кюветы. Количество ДС пропорционально площади озонограммы (Рис.1) и рассчитывается по формуле:

Сэт ■ Уэт • Snp • Ураств

ДС (ммоль/л)=

, где

S3T • Vnp • Gnp

Сэт - концентрация эталонного соединения (ммоль/л) - раствора стильбена (С ¡у Н ,^) в хлороформе.

Уэт, Упр - объемы вводимых проб эталона и экстракта липидов (мл); вэт, впр - площади озонограмм эталонного и исследуемого образцов, (отн ед); Ураств. - объем растворителя, используемого для приготовления липидного экстракта (мл);

в - количество пробы, взятой для исследования (мл).

Метод обладает высокой чувствительностью 1Т0~пммоль/л, воспроизводимостью (коэффициент вариации в серии не превышает 2%), линейность перекрывает весь интервал биологических концентраций, что исключает разведение.

Полученные результаты представлены как М±т, где М-среднее значение, т-стандартная ошибка среднего. Достоверность различий показателей JITC

Рисунок 1.

Озонограмма различных объемов раствора ХС (1 ДС) в концентрации — 3,86 мг/мл. 1 - 7,5 мкл; 2-5 мкл; 3 - 2,5 мкл; 4-1 мкл.

СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

между группами пациентов рассчитывали по t-критерию. Для оценки взаимо-

ю

;вязи количества ДС липидной фракции сыворотки крови и показателей ЛТС >ассчитывали коэффициенты парной и частной корреляции, коэффициент мно-кественной корреляции, коэффициент детерминации.

Для аналитических характеристик показателей ХС ЛПВП и ХС ЛПНП пря-1ыми и многоэтапными методами рассчитаны: смещение от целевого значения В%), сходимость (СУ% в серии измерений), воспроизводимость (СУ% день >то дня). Для всех видов анализа статистически значимым считали значение ><0,05. Математический обсчет проводили с использованием пакета статисти-[еских программ

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ )ценка аналитических характеристик определения холестерина лнпопро-еидов высокой и низкой плотности.

Сопоставление аналитических характеристик метода преципитации для определения ХС ЛПВП и расчетного метода для ХС ЛПНП с прямыми методами шределения ХС ЛПВП и ХС ЛПНП, выявило высокую правильность послед-[их(табл. 1).

В настоящее время клинико-диагностические лаборатории как правило изме-'Яют ХС ЛПВП на основе ферментативных методов определения ХС после 'Саждения (преципитации) ЛПНП и ЛПОНП при воздействии преципитирую-дих агентов (Mg+гeпapин, декстрансульфат, фосфовольфрамовая кислота и р.) и на основании формулы Фридвальда рассчитывается ХС ЛПНП. Расчет-[ый метод определения ХС ЛПНП и метод осаждения ХС ЛПВП имеют ряд ог-|аничений: не позволяют оценивать классы ЛП при гипертриглицеридемии ТГ>4,5 ммоль/л); в присутствии хиломикронов; при дисбеталипопротеидемиях [ при ряде вторичных нарушений липидного обмена. Низкая воспроизводи-гость этих методов не дает возможности полноценно оценивать изменения ХС ШНП и ХС ЛПВП в ходе широкого спектра медикаментозной терапии.

п

Таблица 1.

Аналитические характеристики определений ХС ЛПВП и ХС ЛПНП прямым и многоэтапным методами (п=10).

Параметры ХС ЛПНП Расчет по формуле ХС ЛПНП Прямой метод ХС ЛПВП Многоэтапный метод ХС ЛПВП Прямой метод

норма патол норма патол норма патол

смещение от целевого значения (%) 10,3 6,49 4,71 14,2 10,4 11,0 7,39

сходимость (СУ % в серии измерений) 2,38 0,56 1,23 8,39 11,0 1,21 1,37

воспроизводимость. (СУ % измерений день ото дня) 3,24 0,63 1,45 9,28 12,3 2,33 5,76

Результаты проведенного исследования (табл.1) показывают, что смещение от целевого значения (правильность) при применении формулы Фридвальда составило 10,3%, а при использовани прямого метода: в нормальной сыворотке -6,49%, в патологической - 4,71%. Метод прямого определения ХС ЛПНП характеризуется лучшей воспроизводимостью как в нормальной сыворотке -0,63%, так и в патологической 1,45%. Смещение от целевого значения значительно ниже при применении прямого метода определения ХС ЛПВП по сравнению с методом преципитации: в сыворотке с нормальным содержанием ли-пидов 11,0% и 14,2% соответственно; в сыворотке с патологическим содержанием липидов 7,39% и 10,4%. Значительно лучше воспроизводимость прямого метода определения ХС ЛПВП как в нормальной (2,33%), так и в патологической (5,76%) сыворотке.

Таким образом, прямые методы определения ХС ЛПНП и ХС ЛПВП позволяют лабораторно оценить выраженные нарушения липидного обмена, которые не регистрируются традиционными методами.

[оказатели липид-транспортнон системы у пациентов с первичной гипер-ипидемисй.

Определение показателей JITC в группе здоровых лиц и у пациентов с периной ГЛП позволило установить, что наряду с более высоким значением тага показателей ЛТС, как общий ХС, ТГ, ХС ЛПНП (р<0,05), традиционно ис-эльзуемых в клинической практике для диагностики нарушений липидного Змена, у пациентов с ГЛП достоверно увеличена концентрация ФЛ, ЭХС, ХС, НЭЖК (р<0,05) (Табл.2). Кроме того у пациентов с ГЛП достоверно из-енены уровни основных липид-транспортных белков: увеличена концентрата ano В и снижен уровень ano A-I (р<0,05). Количество ДС липидов сыворот-1 крови у пациентов с ГЛП в два раза выше, чем у здоровых лиц (р<0,05).

Таблица 2.

оказатели ЛТС в группе пациентов с ГЛП и у здоровых лиц.

Параметры Здоровые (п=20) ГЛП (п=20)

ÍC 4,49±0,09 7,84±0,19*

Т 1,26±0,06 2,26±0,20*

1С ЛПВП 1,16±0,04 1,00±0,03

ССЛПНП 2,78±0,09 5,62±0,23*

шоА-! 1,21 ±0,27 0,92±0,53*

шо В 0,75±0,30 1,41±0,82*

>Л 2,16±0,08 3,13±0,16*

:хс 1,42±0,10 2,70±0,22*

>ХС 3,07±0,16 5,14±0,33*

(С 24,3±1,10 46,6±3,44*

[ЭЖК 0,40±0,03 0,79±0,07*

>имечание -*р< 0,05

щиды и ДС - ммоль/л, алопротеины - г/л

Известно, что многочисленные соединения в составе липидной фракции сы-ротки крови, содержат одну или несколько ДС. Так, ХС является мононена-пценным стерином, ДС расположена между пятым и шестым углеродными омами циклопентанпергидрофенантрена. Помимо ХС, значительную долю 2 содержат ННЖК. В сыворотке крови ЖК находятся преимущественно в >рме эфиров, образуя фракции ТГ, ФЛ и ЭХС которые содержат 45%, 35% и

15% общего пула ЖК, соответственно (А.Н.Климов, 1999). Следовательно, количество ДС во фракции свободного ХС обусловлено его концентрацией в сыворотке крови, а количество ДС во фракциях ТГ, ФЛ и ЭХС зависит от состава ЖК, входящих в молекулы названных соединений. НЭЖК составляют меньшую часть общего пула ЖК.

Методом парной корреляции нами выявлена высокозначимая достоверная корреляция ДС липидной фракции сыворотки крови с уровнем ХС, СХС, ТГ и ФЛ как в группе здоровых лиц, так и в группе пациентов с ГЛП (рис. 2). В тоже время, между уровнями ДС и ЭХС отмечена высокозначимая корреляция в группе здоровых лиц и отсутствие корреляции у пациентов с ГЛП. Можно полагать, что данные отражают многие механизмы взаимосвязи указанных параметров или наличие более сложной, нелинейной зависимости между ними.

лппп

Рисунок 2. Коэффициенты парной корреляции между количеством ДС и показателями ЛТС в группе здоровых лиц и у пациентов с ГЛП.

Судя по коэффициентам парной корреляции, уровень ДС липидной фракции сыворотки тесно связан с основными классами липидов, в меньше степени с транспортной системой, направленной на доставку ХС и его эфиров к периферическим тканям (ХС ЛПНП, апо В) и не связан с показателями обратного транспорта ХС (ХС ЛПВП, апо А1). Однако, полученные данные могут быть объяснены распределением липидов между классами ЛП: ЛПНП у человека содержат 60-70% общего ХС, тогда как ЛПВП - 15-25% (А.Н.Климов, 1981).

Парный коэффициент корреляции позволяет измерить степень тесноты статистической связи между парой переменных без учета опосредованного или совместного влияния других показателей и вычисляется по результатам наблюдений только анализируемой пары показателей. Однако при интерпретации результатов парной корреляции возникают трудности, обусловленные возможным опосредованным влиянием на эту парную связь других переменных ¡С.А.Айвазян, В.С.Мхитарян, 2001).

ДС присутствуют во всех рассматриваемых классах липидов: ХС, СХС, ФЛ, ГГ, НЭЖК. Данное обстоятельство делает необходимым введение таких измерителей статистической связи, которые были бы очищены от опосредованного шияния других переменных и позволили дать оценку степени тесноты связи лежду переменными при условии, что значения остальных переменных зафик-:ированы на некотором постоянном уровне. В этом случае используют частный соэффициент корреляции.

Проведенное исследование коэффициентов частной корреляции между кон-гентрациями ДС и липидов основных классов (а именно ХС, СХС, ТГ, ФЛ и 1ЭЖК) позволило выявить достоверный высокозначимый частный коэффициент корреляции только между ДС и ФЛ как в группе здоровых лиц (г=0,60 ><0,05), так и у пациентов с ГЛП (г=0,71 р<0,05) (Табл. 3).

Таблица 3.

Соэффициенты частной корреляции между содержанием ДС и различны-1И классами липидов сыворотки крови.

Корреляция между концен- Здоровые (п=20) ГЛП (п=20)

трацией

г г

ДСиХС -0,07 -0,01

ДС и ТГ 0,11 -0,35

ДС и ФЛ 0,60' 0,71*

ДС и СХС 0,00 0,20

ДС и НЭЖК 0,25 0,21

[римечание — р<0,05 ■ коэффициент частной корреляции

Для оценки степени тесноты статистической связи между результирующим показателем (в нашем случае ДС) и показателями липидного обмена в моделях линейной регрессии использовали множественный коэффициент корреляции. Множественный коэффициент корреляции несколько выше, чем коэффициент частной корреляции из-за того, что нет предположения, что все остальные параметры постоянны. Коэффициент частной корреляции отражает чистую взаимосвязь ФЛ и ДС, обусловленных только ФЛ, а множественный коэффициент корреляции— взаимосвязь ФЛ и концентрацию ДС во всех липидах.

Результаты, полученные при применении множественного регрессионного анализа для оценки зависимости уровня ДС липидной фракции от изменения содержания основных классов липидов сыворотки крови позволяют полагать, что у пациентов с ГЛП и в группе здоровых лиц изменение уровня ДС обусловлено изменением концентрации ФЛ сыворотки крови (Табл. 4).

Таблица 4.

Коэффициенты множественной корреляции между уровнем ДС и показателями ЛТС в группе здоровых лиц н у пациентов с ГЛП.

Группы пациентов Множественный коэффициент корреляции Коэффициент детерминации

Здоровые 0,799* 62%

Пациенты с ГЛП 0,867* 66%

Примечание -* р<0,05

Предсказательная сила коэффициента детерминации в группе здоровых лиц и у пациентов с ГЛП достаточно велики — 62% и 66% соответственно. Следовательно, изменение уровня ДС липидной фракции сыворотки крови в обследованных группах - у пациентов с ГЛП и в группе здоровых лиц на 66% и 62% обусловлено вариацией концентрации ФЛ. Это не означает, что ДС содержатся только в ФЛ: у данных групп пациентов концентрация ДС в других липидах относительно постоянна, а изменение концентрации ДС обусловлено изменением уровня ФЛ.

Таким образом, проведенные исследования позволили установить, что у пациентов с первичной ГЛП по сравнению с группой здоровых лиц увеличены как традиционные показатели ЛТС, так и уровень ДС липидной фракции сыворотки крови. Сопоставление концентрации ДС с показателями липидного обмена выявило высокозначимую положительную корреляцию между уровнем ДС и основных классов липидов. Полученные данные об однонаправленном изменении ДС липидной фракции и показателей ЛТС у пациентов с ГЛП позволяют заключить, что увеличение ДС обусловлено концентрацией липидов сыворотки крови. Применение множественного регрессионного анализа для оценки взаимосвязи ДС с показателями ЛТС показало, что изменение концентрации ДС в группе здоровых лиц и у пациентов с ГЛП обусловлено увеличением уровня ФЛ сыворотки крови.

Показатели липид-транспортной системы крови у больных СД 1 типа в иинамике стационарной коррекции доз инсулина.

Таблица 5.

Показатели ЛТС, уровень ДС липидов сыворотки крови в группе здоро-

вых лиц и у больных СД 1 типа при поступлении в стационар (М±т).

Параметры Здоровые Больные СД 1 типа

(п=20) (п=30)

ХС 4,49±0,09 4,55±0,21

ТГ 1,26±0,06 1,42±0,14

ХС ЛПВП 1,16±0,04 1,04±0,0б

ХС ЛПНП 2,75±0,09 2,86±0,18

Ano A-I 1,21±0,27 1,51±0,47

Ano В 0,75±0,33 0,73±0,44

ФЛ 2,16±0,08 3,12±0,16*

СХС 1,42±0,10 1,52±0,13

эхе 3,07±0,16 3,03±0,21

НЭЖК 0,40±0,03 0,69±0,04*

ДС 24±1,1 34,9±2,8*

1римечание: * р<0,05

1ипиды и ДС - в ммоль/л; Апопротеины A-I, В -в г/л.

Определение показателей ЛТС у больных СД 1 типа при поступлении в стационар показало, что уровень НЭЖК, ФЛ и ДС выше, чем в группе здоровых лиц (р<0,05), тогда как традиционные показатели липидного обмена не отличались от таковых в контрольной группе (Таб.5). Данные свидетельствуют об увеличении ненасыщенности липидной фракции у больных СД 1 типа и подтверждают полученные ранее результаты об увеличении концентрации ДС при данной патологии (Т.И.Туркина,1997).

При подборе доз инсулина в стационаре к 10 и 20 дню терапии у больных СД 1 типа увеличилась концентрация общего ХС и ЭХС, ХС ЛПНП (р<0,05); снизилась концентрация НЭЖК и ДС липидной фракции (р<0,05) (Табл. 6):

Таблица 6.

Показатели ЛТС в динамике коррекции доз инсулина у больных СД 1типа, М±ш (п=30)

Показатели ЛТС Динамика

Поступление в стационар Через 10 дней Через 20 дней

ХС 4,55±0,21 5,21±0,23* 5,07±0,22*

ТГ 1,42±0,14 1,38±0,15 1,23±0,12

ХСЛПВП 1,04±0,06 1Д6±0,05* 1Д4±0,06

ХСЛПНП 2,86±0,18 3,42±0,21* 3,37±0,22*

Ano A-I 1,51 ±0,47 1,61±0,54 1,59±0,49 !

Ano В 0,73±0,44 0,72±0,44 0,64±0,10*

ФЛ 3,12±0,16 3,30±0,17 3,23±0,21

СХС 1,52±0,13 1,51±0,12 1,53±0,15

эхе 3,03±0,21 3,69±0,19* 3,53±0,21*

НЭЖК 0,69±0,04 0,43±0,03* 0,18±0,01*

ДС 35±2,8 32±2,8 31 ±2,7*

Примечание: * р<0,05 Липиды, ДС и глюкоза - в ммоль/л; Апопротеины A-I, В -в г/л.

Необходимо отметить, что несмотря на увеличение ХС, ЭХС, ХС ЛПНП в процессе стационарной коррекции доз инсулина, данные показатели находились в пределах нормальных значений, тогда как уровень ДС, несмотря на снижение, оставался выше, чем в группе здоровых людей (р<0,05). При улучшении метаболического контроля (снижение глюкозы с 11,9 ммоль/л до 5,24 ммоль/л,

р<0,05) возрастало количество ХС ЛПВП (Табл. 6). Увеличение уровня ХС возможно обусловлено действием экзогенного инсулина, который активирует ключевой фермент синтеза ХС - гидроксиметилглутарил-КоА-редуктазу (А.Н.Климов, 1999). Повышение концентрации ХС ЛПВП может быть вызвано увеличением активности лецитин-холестеринацилтрансферазы, которую также активирует инсулин (И.А. Волчегорский, Н.В. Харченкова , 2003; Liu, 1998). Количество ФЛ в сыворотке крови превышало нормальные значения при поступлении в стационар и не изменялось в процессе стационарного лечения инсулином.

При поступлении в стационар у больных СД 1 типа не выявлено корреляции между концентрацией ДС и показателями ЛТС. На 10 день инсулинотерапии выявлена корреляционная зависимость между уровнем ДС и ХС, ХС ЛПНП и СХС (р<0,05). К 20 дню лечения выявленная зависимость сохраняется (Рис. 3).

ХС СХС ХС ЛПНП

Рисунок 3. Коэффициенты парной корреляции между концентрацией ДС и юказателями ЛТС и у больных СД 1 типа в условиях стационарной кор-эекции доз инсулина.

Согласно полученным данным, при подборе доз инсулина меняется взаимо-:вязь между концентрацией ДС и компонентами ЛТС у больных СД 1 типа табл. 7).

Поскольку инсулин играет важную регуляторную роль в метаболизме липи-;ов, можно ожидать, что при нормализации углеводного обмена показатели

ЛТС также нормализуются, а картина взаимосвязи ДС и липидов станет похожей на таковую в группе здоровых лиц.

Таблица 7.

Коэффициенты частной корреляции между концентрацией ДС и уровнем липидов у больных СД1 типа прн подборе доз инсулина.

Корреляция между уровнем Поступление 10 дней 20 дней

г г г

ДС и ХС 0,09 0,39* 0,65*

ДСиТГ 0,25 -0,02 0,05

ДС и ФЛ -0,15 -0,51* 0,08

ДС и СХС 0,19 0,66* 0,36

ДС и НЭЖК -0,07 0,03 -0,21

Примечание —р<0,05

г-коэффициенты частной корреляции

Действительно, на 10 день стационарного лечения инсулином концентрация НЭЖК в сыворотке крови снижается до уровня НЭЖК в группе здоровых лиц и концентрация липидов также приходит к нормальному уровню (кроме ФЛ). Именно на 10 день инсулинотерапии по составу липидов больные СД 1 типа наиболее схожи с контрольной группой. Однако на 10 день терапии инсулином выявлена корреляция ДС и ХС (0,39, р<0,05), ДС и СХС (0,66, р<0,05). Одновременно наблюдается отрицательная корреляция ФЛ и ДС (-0,51, р<0,05). К 20 дню лечения взаимосвязь ДС с ФЛ и СХС исчезает и появляется сильная взаимосвязь ДС с ХС (0,65, р<0,05).

Результаты, полученные при применении множественного регрессивного анализа для оценки тесноты взаимосвязи уровня ДС и компонентов ЛТС в процессе подбора доз инсулина, свидетельствуют, что концентрация ДС у больных СД 1 типа через 10 дней терапии на 62% обусловлена вариацией как уровня общего ХС и СХС так и концентрации ФЛ. На 20 день стационарного лечения зависимость между ДС и ФЛ, ДС и СХС исчезает и к выписке из стационара концентрация ДС на 56% обусловлена только изменением уровня общего ХС (Табл. 8).

Таблица 8.

Коэффициенты множественной корреляции между уровнем ДС и липида-ми сыворотки крови у больных СД 1 типа при поступлении в стационар, через 10 и 20 дней терапии.

Динамика Множественный коэффициент корреляции Коэффициент детерминации

Поступление 0,346 2%

10 дней 0,810* 62%

20 дней 0,771* 56%

Примечание -* р<0,05

Таким образом, инсулинотерапия не привела к нормализации уровня ненасыщенности липидной фракции сыворотки крови: кроме того, у больных СД 1 типа отличается и характер взаимосвязи уровня ДС с показателями JITC от таковой в группе здоровых лиц и у пациентов с первичной ГЛП.

Во многих исследованиях отмечено изменение показателей ЛТС у больных СД 1 типа (В.А.Алмазов, 1999; С.Г.Козлов, 1999; Hernandez, 2001; Thorne, 1998). В нашем исследовании данные изменения носят различный характер. Несмотря на увеличение уровня ХС, ХС ЛПНП, ЭХС у больных СД 1 типа при сопоставлении с группой здоровых лиц, данные параметры находятся в пределах нормальных значений, тогда как уровень НЭЖК и ДС сыворотки крови по сравнению с контрольной группой увеличен в 3 и 1,5 раза соответственно. Кроме того, концентрация ДС достоверно выше у больных СД 1 типа, чем в группе здоровых лиц, на всем протяжении подбора доз инсулина в стационаре.

Увеличение содержания ДС липидной фракции сыворотки крови отмечается как при первичной ГЛП так и у больных СД 1 типа. Концентрация ДС достоверно ниже в группе здоровых лиц, чем у пациентов с ГЛП и больных СД 1 типа; при этом уровень ДС достоверно ниже у больных СД 1 типа, по сравнению с группой пациентов с первичной ГЛП (Рис.4).

*

0 СД 1 типа В гиперлипидемия □ здоровые

Рисунок 4. Сравнение средних концентраций ДС в группе здоровых лиц, у пациентов с ГЛП и больных СД 1 типа, Примечание* р<0,05

Данные комплексной оценки показателей ЛТС свидетельствуют, что увеличение ненасыщенности липидной фракции сыворотки крови при первичной ГЛП сопровождается повышением концентрации всех показателей липидного обмена, тогда как у больных СД 1 типа традиционные параметры ЛТС находятся в пределах нормальных значений. В процессе подбора доз инсулина у больных СД 1 типа основные показатели ЛТС не выходят за верхнюю границу нормы, тогда как число ДС хотя и снижается, тем не менее остается достоверно выше по сравнению с группой здоровых лиц. Таким образом, проведенные исследования позволяют установить, что концентрация ДС липидной фракции сыворотки крови информативно увеличена при первичной ГЛП и СД 1 типа. Следовательно, увеличение ненасыщенности липидной фракции сыворотки крови отражает нарушения липид-транспортной системы, а метод титрометри-ческого озонирования может быть использован для дополнительной характеристики липидного обмена при первичных и вторичных дислипидемиях.

¡ЫВОДЫ:

. Концентрация двойных связей липидиой фракции сыворотки крови достоверно выше в группе пациентов с первичной гиперлипидемией и у больных сахарным диабетом 1 типа по сравнению с группой здоровых лиц. Увеличение уровня двойных связей при первичной гиперлипидемии имеет место при повышении показателей липид-транспортной системы, тогда как у больных сахарным диабетом 1 типа увеличение уровня двойных связей наблюдается при нормальных значениях показателей липидного обмена.

. При первичной гиперлипидемии выявлена высокозначимая корреляция между концентрацией двойных связей и уровнем общего холестерина, свободного холестерина, триглицеридов и фосфолипидов. Изменение ненасыщенности липидной фракции в группе здоровых лиц и у пациентов с первичной гиперлипидемией обусловлено увеличением уровня фосфолипидов сыворотки крови (К2=62%) и (Г12=66%) соответственно.

. При поступлении в стационар у больных сахарным диабетом 1 типа не выявлена взаимосвязь между двойными связями и показателями липид-транспортной системы; на 10 день изменение числа двойных связей обусловлено вариацией уровня фосфолипидов, общего и свободного холестерина (Кг=62%)-, на 20 день - изменением уровня общего холестерина (112=56%).

. При поступлении в стационар содержание двойных связей липидной фракции, фосфолипидов, неэстерифицированных жирных кислот сыворотки крови у больных сахарным диабетом 1 типа выше, чем в группе здоровых лиц, тогда как традиционные показатели липид-транспортной системы (общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеидов высокой и низкой плотности) имеют нормальные значения.

5. К 10 и 20 дню коррекции доз инсулина выявлено увеличение уровня холестерина, эфиров холестерина, холестерина липопротеидов высокой и низкой плотности и снижение концентрации двойных связей, неэстерифици-рованных жирных кислот и апопротеина В. Несмотря на снижение, к выписке из стационара уровень двойных связей остается достоверно выше, чем в группе здоровых лиц.

6. Прямые методы определения холестерина липопротеидов высокой плотности и холестерина липопротеидов низкой плотности характеризуются высокой сходимостью и воспроизводимостью в сыворотке крови как с нормальным так и с патологическим содержанием липидов, что позволяет ла-бораторно интерпретировать выраженные нарушения липидного обмена.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Брайнек Р., Волкова Т.Ю. «Прямые методы определения ХС ЛПВП и ХС ЛПНП. Принципы и аналитические характеристики», ж-л «Лаборатория», №4,

2000, стр.10-11.

2. Волкова Т.Ю., Лисицын Д.М., Титов В.Н., Долгов В.В., Творогова М.Г. «Оценка липид-транспортной системы в динамике лечения сахарного диабета 1 типа», ж-л «Клиническая лабораторная диагностика», №9,2002, с.23.

3. Волкова Т.Ю., Лисицын Д.М., Титов В.Н., Долгов В.В., Творогова М.Г. «Характеристика показателей липид-транспортной системы у больных СД 1 типа», сб. науч. трудов «Человек и его здоровье», С-Пб, 2003, с.38-39.

4. Трубникова Т.Ю. «Структурная характеристика липид-транспортной системы сыворотки крови», ж-л «Клиническая лабораторная диагностика», №11,

2001, с.12.

5. Trubnicova Т.Y., Baranova L.Y., Roytman А.Р., Starcova N.T., Dolgov V.V. «Lipostat influence on hormone regulation of lipid and carbohydrate metabolism in NIDDM patients'VClinical Chemistry and Laboratory medicine 2001; 39, Special Supplement ppSl-S448.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ТЕКСТЕ:

\ио A-I - апопротеин A-I

\по В - апопротеин В

ГЛП - гиперлипидемия

JC - двойные связи

■КК - жирные кислоты

Ш - липопротеиды

ITC - липид-транспортная система

1НЖК - ненасыщенные жирные кислоты

1ЭЖК - неэстерифицированные жирные кислоты

]Д 1 типа - сахарный диабет 1 типа

ГХС - свободный холестерин

Т - триглицериды

Е>Л - фосфолипиды

СМ - хиломикроны

1С - общий холестерин

[С ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности [С ЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотности [С ЛПОНП - холестерин липопротеидов очень низкой плотности [С ЛППП - холестерин липопротеидов промежуточной плотности •ХС - эфиры холестерина

Принято к исполнению 04/08/2003 Исполнено 05/08/2003

Заказ № 340 Тираж: 100 экз.

ООО «НАКРА ПРИНТ» ИНН 7727185283 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095)318-40-68 www.autoreferat.ru