Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Коррекция иммуно-биохимического статуса при жеребости кобыл

ВАК РФ 06.02.06, Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Автореферат диссертации по теме "Коррекция иммуно-биохимического статуса при жеребости кобыл"

На правах рукописи

00501

Андреева Анна Борисовна Коррекция иммуно-биохимического статуса при жеребости кобыл

06.02.06- ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

- 1 [.!ДР 2012

Санкт-Петербург 2012

005011130

Работа выполнена на кафедре биологической и органической химии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Карпенко Лариса Юрьевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Видении Владимир Николаевич

доктор ветеринарных наук, профессор Турков Владимир Георгиевич

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург.

Защита диссертации состоится «15» марта 2012 г. в 13-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.02 при ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул.Черниговская, дом 5 (Тел./факс: (812) 388-36-31).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат размещен на сайте ВАК «_»_2012 г.

Автореферат размещен на сайте СПбГАВМ «_»_2012 г.

Автореферат разослан «_»_2012 г.

Автореферат разослан «_» февраля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.в.н. '' ~ Урбан В.Г.

1. Введение.

Актуальность темы. На протяжении тысячелетий лошадь остаётся верным спутником и помощником человека. Трудно назвать другое животное, чьё значение для нас было бы столь велико. Уже более четырех десятилетий общая численность лошадей в мире остаётся стабильной и составляет 65 млн. голов (Ливанова Т.К., 2003). При этом экономически развитые страны постоянно наращивают поголовье лошадей: так в США их начитывается уже более 12 млн.; в России же, по неполным данным, их пока всего около 2 млн.(Пэворд Т., 2005). Рост их численности происходит полностью за счёт увеличения количества лошадей спортивного назначения и лошадей для личного непроизводственного использования. Наряду с использованием лошадей в сельском хозяйстве во внутрихозяйственном транспорте, при пастьбе скота, обслуживании индивидуальных подсобных хозяйств, больше стал развиваться конный спорт, прокат лошадей и конный туризм. Эти животные продолжают играть важную роль в развитии эстетического вкуса, физической культуры и здоровья людей (Стеколышков A.A., 2009). В последние годы организм лошади изучается на уровне молекулярной генетики (Bayly W., 1999; Жигачев А.И. и др., 2008).

Лошади также используются в качестве продуцентов в биологической и медицинской промышленности. Актуальным в коневодстве является дальнейшее увеличение поголовья лошадей и повышение продуктивности животных (Жаров

A.B. и др., 2007). За 30 лет произошли коренные изменения в ветеринарном обслуживании коневодства, разработаны новые средства и методы осуществления ветеринарных мероприятий, внедрены новые технические средства. Появился востребованный рынок ветеринарных услуг, систематически повышается рыночный спрос на эти услуги (Гутовец А.Ю., 2008).

Коневодство наряду с широким развитием прочной кормовой базы, включает в себя получение жизнеспособного потомства, что во многом обусловлено условиями содержания и кормления жеребых кобыл (Видении

B.Н., 1998; Зеленевский Н.В., 1996; Калашников В.В., 2011). Беременность -физиологический процесс, который в организме самки обусловливает ряд явлений, граничащих с патологическим процессом (Племяшов К.В., Баженова Н.Б., 2006). Развитие плода во многом зависит от состояния матери

и всякое усиление или ослабление функций органов материнского организма оказывает коррелятивное влияние на состояние плода (Васильева C.B., Конопатов Ю.В., 2009).

Изучение обмена веществ у лошадей в период жеребости является актуальной темой, что предполагает подбирать наиболее рациональные схемы кормления жеребых кобыл, обусловливая тем самым, возможность получения жизнеспособного потомства.

Цель и задачи исследования. Целью исследования являлось комплексное изучение иммуно-биохимических характеристик организма жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости и научное обоснования профилактической эффективности применения комплексного препарата «Гемобаланс» для фармакокоррекции нарушений обмена веществ, наблюдающихся у лошадей при жеребости.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи: изучить гематологические, биохимические показатели крови жеребых кобыл и их жеребят, отражающие состояние белкового, липидного, углеводного и минерального обменов; изучить состояние иммунной системы у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости; изучить состояние антиоксидантной системы у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости; научно обосновать профилактическую эффективность применения комплексного препарата «Гемобаланс» для возможных фармакокоррекции возможных нарушений обмена веществ у жеребых кобыл; изучить влияние данного препарата на иммуно-биохимические характеристики организма жеребят.

Научная новизна. В ходе исследований впервые проведено комплексное изучение состояние белкового, азотистого, жирового и углеводного обменов у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости; изучен антиоксидантпый статус организма жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости; иммунный статус организма жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости; научно обосновано применение препарата «Гемобаланс» для коррекции возможных нарушений обмена веществ у жеребых кобыл; проведена оценка влияния применения препарата «Гемобаланс» у жеребых кобыл на состояние потомства.

Теоретическая и практическая значимость работы. Выполненное исследование содержит решение актуальной проблемы - выяснения особенностей иммуно-бнохимического статуса, метаболизма микро- и макроэлементов, состояния антиоксидантной системы у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости. Предложен эффективный способ фармакокоррекции нарушений обмена веществ, возникающих при жеребости с использованием препарата «Гемобаланс». Полученные данные дают возможность объективно интерпретировать иммуно-биохимические показатели крови лошадей с учетом срока жеребости. Действие препарата «Гемобаланс» на иммуно-биохимический статус организма жеребых кобыл позволяет рекомендовать данный препарат для профилактики нарушений обмена веществ у жеребых кобыл на поздних сроках жеребости.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Динамика изменений гематологических и иммуно-биохимических характеристик крови жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

2. Влияние комплексного препарата «Гемобаланс» на биохимический статус и естественную резистентность организма жеребых кобыл;

3. Оценка применения препарата «Гемобаланс» у жеребых кобыл на состояние потомства.

Апробация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: 56 международной научно-практической конференции (Белая церковь, 2008); объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008); международной научной практической конференции, посвященной 200-летию высшего ветеринарного образования в России (Санкт-Петербург, 2008); XVII Московском Международном ветеринарном конгрессе (Москва, 2009); международной научно-практической конференции «Достижения и перспективы животноводства» (Витебск, 2009); 4-ом Международном симпозиуме «Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введенных в зоокультуру» (Петрозаводск, 2009); III Съезде фармакологов и токсикологов России (Санкт-Петербург, 2011); XIV Всероссийский научный Форум с международным участием имени академика В.И.Иоффе (Санкт-Петербург, 2011); 62,64,65 научных конференциях молодых

ученых и студентов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2008, 2010, 2011); научных международных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2010,2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, 4 из которых в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Российской Федерации для публикации результатов диссертационных работ.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований реализованы в практике обучения студентов по дисциплинам биологическая химия, физиология, акушерство на факультете ветеринарии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», а также в лечебно-профилактической деятельности практикующих врачей Ленинградской области и города Санкт-Петербурга, специализирующихся по болезням лошадей.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 131 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 207 источников, из них 51 иностранных. Работа иллюстрирована 27 таблицами.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследования

Экспериментальная часть работы выполнена в период с 2005 по 2010 год на база КСК «Лада» Ленинградской области, биохимические исследования проводили на кафедре биологической и органической химии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Схема экспериментальной части работы:

Объектом исследований являлись лошади порода ганноверская и латвийская.

Предметом исследований были иммунологические, биохимические, гематологические показатели организма, морфологическое состояние крови жеребых кобыл и жеребят.

Первая серия экспериментов была проведена на двух группах кобыл: подопытная группа - 10 жеребых кобыл в возрасте от 5 до 12 лет, содержащихся в условиях конюшни; контрольная группа - 10 нежеребых кобыл, подобранных по методу аналогов. Кормление лошадей обеих групп производилось по сбалансированным по основным питательным веществам рационам. Все животные имели хорошую упитанность, были клинически здоровыми. Перед взятием крови проводили клинический осмотр животных и термометрию. Взятие крови производили из яремной вены. В крови животных определяли иммуно-биохимические характеристики в течение всего периода жеребости. Взятие проб крови осуществляли каждый месяц жеребости.

Вторая серия экспериментов заключалась в изучении влияния применения препарата «Гемобаланс» на обмен веществ у жеребых кобыл и у их новорожденных жеребят. В ходе данной серии опытов проводили, во-первых, определение иммунологических, биохимических, морфологических показателей сыворотки крови и цельной крови у жеребых кобыл. Подопытная группа - жеребые кобылы на 8 месяце жеребости ( п=10), которым применяли препарата «Гемобаланс» по следующей схеме: 1 мл на 45 кг массы внутримышечно каждые 48 часов на протяжении 7 дней (3 инъекции), группа контроля жеребые кобылы на 8 месяце жеребости (п=10), которым препарат не применяли. Взятие крови осуществляли до применения препарата и через месяц после первой инъекции (на 9 месяце жеребости). Во-вторых, изучали иммунологические, биохимические, морфологические показатели сыворотки крови и цельной крови новорожденных жеребят. В подопытную группу включены новорожденные жеребята, матерям которых вводили препарат на 8 и 11 месяцах жеребости в дозе 1 мл на 45 кг массы каждые 48 часов на протяжении 7 дней (3 инъекции); контрольная группа -новорожденные жеребята, матерям которых препарат не применялся. Забор крови осуществлялся однократно, в первый день после выжеребки.

Концентрацию общего белка определяли колориметрическим методом с использованием биуретового реактива (Кондрахин И.П., 2004), белковые фракции сыворотки крови определяли нефелометрическим методом по Оллу и Маккорду в модификации Карпюка (Кондрахин И.П., 2004), концентрацию мочевины в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с

использованием промышленных наборов НПФ «Абрис+». В основе метода -цветная реакция с диацетилмонооксимом (Тиц Н.У., 1997), креатинин в сыворотке крови определяли фотоколориметрическим методом с пикриновой кислотой с использованием промышленных наборов НПЦ «ЭкоСервис». В основе набора - метод Яффе (Кондрахин И.П., 2004), концентрацию глюкозы в сыворотке крови определяли энзиматическим колориметрическим методом с использованием промышленных наборов НПФ «Абрис+». В основе метода —«глюкозооксидазный» метод по Триндеру (Тиц Н.У., 1997), концентрацию пировиноградной кислоты (ПВК) в крови определяли колориметрическим модифицированным методом по Фреедману и Хаугену (Кондрахин И.П., 2004), содержание молочной кислоты в сыворотке крови определяли энзиматическим методом с использованием наборов реактивов фирмы «БиоМерье» (Камышников B.C., 2003), концентрацию холестерина сыворотки крови определяли энзиматическим колориметрическим методом с использованием промышленных наборов НПФ «Абрис+» (Тиц Н.У., 1997), концентрацию триглицеридов определяли колориметрическим методом с использованием промышленных наборов НПФ «Абрис+» (Тиц Н.У., 1997), определение активности супероксиддисмутазы (СОД) в сыворотке крови определяли по методу торможения восстановления нитросинего тетразоля в присутствии НАД*Н2 (Кондрахин И.П., 2004), определение активности каталазы в крови проводили методом перманганатометрии по Баху А.Н. и Зубкову С.З. (Конопатов Ю.В. и др., 1994), определение активности глутатионпероксидазы в крови определяли при помощи реактива Эллмана (Кондрахин И.П., 2004), определение концетрации малонового диальдегида (МДА) проводили колориметрическим методом с тиобарбитуровой кислотой (Камышников B.C., 2003), определение концентрации диеновых конъюгатов (ДК) и диенкетонов проводили с использованием колориметричекого метода Плацера и соавтор, 1976 (Камышников B.C., 2003), определение иммуноглобулинов (Ig) проводили методом осаждения сульфатом цинка (Холод В.М., Ермолаев Г.Ф., 1988), бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли фотоэлектроколориметрическим методом по Смирновой О.В., Кузьминой Т.П.(1979), лизоцимную активность сыворотки

крови определяли фотоэлектроколориметрическим методом по Дорофейчуку В.Г.(1968), циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) определяли методом преципитации 3,5% раствором полиэтиленгликоля (Меньшиков В.В., 1987), показатели фагоцитоза изучали микроскопическим методом с использованием культуры стафилококка штамма 209, инактивированной нагреванием и стандартизированной с использованием оптического стандарта мутности (Скопичев В.Г., Максимюк Н.Н.,2009), концентрацию кальция в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с применением диагностического набора НПФ «Абрис+». В основе метода -реакция с реагентом Арсеназо III (Тиц Н.У., 1997), концентрацию фосфора в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с применением диагностического набора НПФ «Абрис+». В основе метода - реакция с молибдатом аммония (Тиц Н.У., 1997), концентрацию магния в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с применением диагностического набора НПФ «Абрис+». В основе метода - реакция с ксилидиловым синим (Тиц Н.У., 1997), концентрацию калия в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с применением диагностического набора НПФ «Абрис+». В основе метода - реакция с тетрафенилбората натрия (Тиц Н.У., 1997), концентрацию меди в сыворотке крови определяли колориметрическим методом с применением диагностического набора НПФ «Абрис+». В основе метода - реакция с реагентом 3,5-с11-Вг-РАЕ8А(Тнц Н.У., 1997), концентрацию железа в сыворотке крови определяли колориметрическим методом без депротеинизации с применением диагностического набора НПФ «Абрис+». В основе метода - реакция с реагентом Шго-РАРБ (Тиц Н.У., 1997), концентрацию общей железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС) определяли методом с использованием основного карбоната магния с применением диагностического набора НПФ «Абрис (Тиц Н.У., 1997), латентная железосвязывающая способность (ЛЖСС) и насыщение трансферрина железом определяется по формулам, количество эритроцитов, гемоглобина определяли общепринятыми методами (Кондрахин И.П., 2004), цветовой показатель определяли по формуле, активность щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови определяли фотометрическим методом,

основанным на гидролизе п-нитрофенилфосфата динатриевой соли, с испотльзованием промышленных наборов фирмы «Мицар» (Меньшиков В.В., 1994), активность аминотрансфераз - аланинаминотрансфераза (АлАТ) и аспартатаминотрансфераза (АсАТ) в сыворотке крови определяли методом Райтмана и Френкеля с применением промышленных наборов НПФ «Абрис (Тиц Н.У., 1997), определение содержания билирубина в сыворотке крови методом Йендрашика-Грофа с использованием набора реактивов Клини Тест-Бил фирмы «Мицар», белковосвязанный йод определяли методом экстракции толуолом (Медведев В.В., Волчек Ю.З., 1997).

Полученные данные подвергнуты статистической обработке с помощью программного пакета 81а118^са 6.0 с определением следующих показателей: М - среднее арифметическое; ш- ошибка среднего арифметического; I - критерий Стыодента.

2.2. Динамика иммуно-биохимических показателей крови жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости.

Первой частью нашей работы явилась комплексная оценка иммуно-биохимических характеристик крови жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости и выявление закономерностей развития изменения метаболизма.

При исследовании динамики белкового и азотистого обменов у жеребых кобыл нами было установлено, что содержание общего белка и белковых фракций кобыл сыворотки крови имеет четко выраженную динамику снижения в течение жеребости. Так максимальная концентрация общего белка отмечена на 2 месяце жеребости и составила 60,90 г/л, минимальная концентрация общего белка отмечена на 11 месяце жеребости и составила 55,25 г/л. При этом относительно показателей животных контрольной группы данные были ниже на протяжении всего срока жеребости (р<0,05). Значительное количество белков сыворотки крови у здоровых животных представлены альбуминами. Минимальная концентрация альбуминов отмечена на 3-4 месяце жеребости (36,37±2,06%), максимальная на 6 месяце жеребости (45,17±1,75%), минимальная концентрация а-глобулинов отмечена на 5 месяце жеребости (13,98±2,21),

максимальная на 9 месяц (21,33±2,4). Минимальная концентрация (3-глобулинов отмечена на 7 месяце жеребости (18,01±5,65), максимальная на 11 месяце (27,77± 4,567 %) [8]. Данные изменения на наш взгляд обусловлены тем, что основная масса альбуминов и а- и р -глобулинов необходимы не только для обеспечения усилившегося метаболизма материнского организма, но и для синтеза тканей плода (Пэворд Т., 2005). Данные простые белки сыворотки крови синтезируются в печени, а в третьем триместре наблюдается максимальная нагрузка на данный орган, обусловленная, возможной интоксикацией продуктами обмена плода. Свидетельством этому явилось тенденция повышения концентрации мочевины (максимальная концентрация отмечается 5,60±1,20 ммоль/л на 11 месяце жеребости) с увеличением срока жеребости. Следует отметить, что повышение данного показателя происходило в пределах физиологической нормы, что указывает на усиление интенсивности белкового обмена без нарушений функции печени. Дополнительным подтверждением этому является увеличение концентрации креатинина сыворотки крови жеребых кобыл (с 115,90±13,30 до 170,90±9,30 мкмоль/л), которое также отмечалось в пределах референтных значений и обусловлено увеличением массы жеребых кобыл, которое достигало до 60 кг, что согласуется с данными по повышению активности АсАТ (максимальная активность данного фермента отмечается на 11 месяце жеребости и составляет 47,04±4,04 МЕ).

При изучении углеводного обмена установили, что изменение концентрации глюкозы в крови жеребых кобыл носит достоверный характер (р<0,05). Минимальные значения наблюдались на 11 месяце жеребости и составило 3,43±0,15 ммоль/л, максимальная концентрация отмечалась на 5 месяце жеребости и составляет 4,77±0,14 ммоль/л. Понижение уровня глюкозы может быть связано с тем, что в катаболическую фазу организм матери вступает к середине или к последней трети жеребости, когда потребности плода в питательных веществах и кислороде достигают максимума, в связи с чем концентрация глюкозы в крови матери постепенно снижается.

Изменения концентрации ПВК в течение жеребости носили достоверный характер (р<0,05): наблюдается увеличение концентрации

пировиноградной кислоты с 8 месяца на 29 %, к 11 месяцу на 33,9 %, относительно показателей контрольной группы (100,29±2,96 мкмоль/л).

Изменение показателей липидного обмена в динамике жеребости представляется следующим образом: увеличение концентрации, как холестерина, так и триглициридов наблюдалась в течении всей жеребости. Максимальные концентрации отмечены на 11 месяце жеребости и составили 3,48±0,36 ммоль/л и 1,58±0,44 ммоль/л соответственно. Данные изменения можно связать с тем, что жировая ткань является важным источником энергии в условиях действия стресс-факторов. При данном состоянии наблюдается резкое снижение инсулинглюкагонового соотношения с резким увеличением скорости процессов липолиза. Это приводит к подъему уровня продуктов метаболизма жиров в крови (Чернышева М.П., 1995). Таким образом, отмечается взаимосвязь между двумя видами обменов: углеводным и жировым, при недостаточном обеспечении глюкозой организм стремится компенсировать энергетический дефицит путем сжигания жиров. Нарастание срока жеребости кобыл не сопровождалось достоверными изменениями концентрации триглицеридов в сыворотке крови животных. Концентрация холестерина сыворотки крови жеребых кобыл была достоверно повышена на 10 и 11 месяце жеребости, что следует рассматривать как усиление энергетического обмена в этот период. Наши данные согласуются с результатами исследований Васильевой Е.А. (1982); Мишанина Ю.Ф. (2000); Мачахтыровой В.А. (2010).

При мониторинге встречаемости нарушений минерального обмена в зависимости от месяца жеребости у кобыл нами сделаны следующие выводы: в течение всего срока жеребости наблюдалось снижение в крови кальция и фосфора [9]. Для кальция тенденция к снижению наблюдается до 8 месяца, с 9 по 11 снижение концентрации данного показателя носит достоверный характер (на 9 месяце снижение составило 23 %, на 11 месяце 32 % относительно контрольной группы (2,85±0,08 ммоль/л). Для фосфора тенденция к снижению концентрации наблюдается до 6 месячного возраста, с 7 до 11 месяца снижение концентрации носит достоверный характер, относительно показателей контрольной группы (2,01±0,11 моль/л), на 6 месяце снижение составило 29,9 %, на 11 месяце 39,8 %. Всего за период

жеребости наблюдалось снижение общего кальция в сыворотке крови в 1,5 раза, фосфора в 1,7 раза. Как указывает Bayly W.J., 1999, у кобыл, производящих молоко возможно развитие средней или субклинической гипокальциемии, которая является причиной снижения моторной функции желудочно-кишечного тракта.

На протяжении всего периода жеребости происходило снижение концентрации магния, меди, калия и йода в сыворотке крови, относительно показателей контрольной группы (1,30±0,20 ммоль/л, 7,19±0,34 мкмоль/л, 5,17±0,14 ммоль/л, 250,66±14,69 нмоль/л соответственно). Относительно концентраций магния, наблюдалась тенденция к снижению этого элемента; так на 5 месяце снижение составило на 23 %, на 8 месяце на 33,8 %, к 11 месяцу на 41,5 %. Концентрация меди имела тенденцию к снижению к 4 месяцу на 12,4 %, на 7 месяце на 27,7 %, к 11 месяцу на 40,9 %, относительно показателей контрольной группы.

С начала жеребости на протяжении 4 месяцев отмечалась тенденция к увеличению концентрации калия; на 5 месяце увеличение составило 26 %, затем отмечалась тенденция к снижению, с 9 месяца достоверное снижение составило 51,3 %, на 10 месяце 52,6 %, на 11 месяце 55,5 % относительно показателей контрольной группы. Концентрация йода снижалась на протяжении всего периода жеребости относительно показателей контрольной группы, так достоверное снижение начиная с 9 месяца составило 23,9 %, к 11 месяцу 26 %.

Данные изменения, по-нашему мнению, связаны с максимальным использованием данных элементов для формирования костяка плода, максимальная интенсивность данного процесса наблюдается в третьем триместре жеребости, что соответствует максимально низким концентрациям данных макроэлементов в сыворотке крови животных.

Эти данные согласуется с результатами, полученными нами при исследовании активности фермента щелочная фосфатаза, один из изоферментов которой участвует в процессах деминерализации костной ткани. Повышение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови выявлено, начиная с 3 месячного периода жеребости на 20, 7 %, к 9 месяцу увеличение составило 52,5 %, к 11 месяцу 60,8 % относительно показателей контрольной группы (58,21±4,08 МЕ/л) (р<0,05).

У здоровых жеребых кобыл имеется достаточно широкий резерв компенсаторно-приспособительных реакций организма для поддержания минерального обмена.

В организме матери при нормально протекающей беременности всегда создается состояние временного частичного иммунодефицита, непосредственно обеспечивающее вынашивание плода. При этом в иммунном статусе организма кобылы наблюдается:

- сохранение уровня в сыворотке крови, в отличии от других видов животных, у которых наблюдается перенос ^С через плаценту и временного, на период беременности, изменения механизмов регуляции синтеза .^й;

- компенсаторно в ряде случаев может умеренно увеличиваться уровень .^А и ^М; также наблюдается увеличение ЦИК и у-глобулиновой фракции. Таким образом, со стороны гуморального иммунитета наблюдается усиление антигенной стимуляции при жеребости.

С первого по 9 месяц жеребости отмечено достоверное увеличение концентрации ^М, ^А . В конце жеребости концентрация ^М и .^А была достоверно повышенной (р<0,05). Исследование концентрации иммуноглобулинов сыворотки крови жеребых кобыл показывает, что до 9 месяца жеребости происходило увеличение концентрации всех классов Так концентрация ^ в достоверно увеличивалась, начиная с 1 месяца на 41,6 %, с 3 месяца увеличение составило 54 %; к 6 месяцу происходило снижение концентрации на 14 %, относительно показателей контрольной группы. С 7 месяца жеребости по 9 месяц установлено достоверное повышение концентрации ^ в, относительно контроля (5,3±0,21 г/л)(р<0,05). Концентрация ^М достоверно была повышенной с 4 месяца жеребости до выжеребки, на 4 месяце - 44 %, на 9 месяце - 29,8 %, на 11 - месяце 35,3 % относительно показателей контрольной группы (0,33±0,02 г/л) (р<0,05). Концентрация ^А на протяжении всей жеребости была достоверно повышенной (р<0,05), относительно значений контрольной группы (1,26±0,05 г/л). Суммарная концентрация в сыворотке крови ^М, ^А в 1 месячном сроке жеребости составляла 6,42 г/л. Общая концентрация указанных ^ в 11 месяце - 8,01 г/л, или увеличилось на 19,8 %.

Активность ЦИК имела тенденцию к повышению, начиная с 6 месяца, на 26,7 %, к 11 месяцу - 38,9 %, относительно показателей контрольной группы (р>0,05). На протяжении всего периода жеребости происходит тенденция к снижению лизоцимной активности, достоверное снижение наблюдается с 10 месяца на 18,9 %, к 11 месяцу на 23,4 % относительно показателей контрольной группы (13,44±0,44 % лизиса). Наблюдается тенденция к увеличению у бактерицидной активности до 5 месяца жеребости, затем показатель снижается, достоверное снижение наблюдается на 11 месяце жеребости на 13,7 % относительно показателей контрольной группы (66,39±2,08 % лизиса Е.соН).

Весь период жеребости сопровождается снижением фагоцитарной активности нейтрофилов. Так достоверное снижение фагоцитарной активности наблюдалось с 6 месяца на 19,52 %, с 9 месяца на 30,4 %, к 11 месяцу на 35 % относительно показателей контрольной группы (82,51±3,21). Фагоцитарное число имеет тенденцию к снижению на протяжении всей жеребости, достоверное снижение отмечалось на 9 месяце на 30, 9 %, на 11 месяце на 37,3% относительно показателей контрольной группы (26,37±1,04). Фагоцитарного индекс достоверное снижение, начиная с 7 месяца жеребости на 34,3 %, к 11 месяцу на 40,4 % относительно показателей контрольной группы (11,94±0,71).

Таким образом, во время жеребости отмечается развитие вторичного иммунодефицита [10]. Несмотря на это, следует помнить, что любые попытки воздействия на иммунную систему беременных могут существенно осложнить беременность или стимулировать выкидыш и, следовательно, нецелесообразны и даже опасны.

Особенностью развития анемий у лошадей является то, что эритроциты остаются в костном мозге до полного созревания, даже при тяжелой анемии и интенсивном эритропоезе. Поэтому периферические признаки регенерации эритроцитов, обычно наблюдаемые у других видов животных, такие как ретикулоцитоз, макроцитоз, анизоцитоз, полихромазия, тельца Хауэлла-Жолли, базофильная пунктуация и ядерные эритроциты, редко обнаруживаются у лошадей (Риган В., 2000).

При нашем исследовании было выявлено, что у жеребых кобыл с течением жеребости наблюдается снижение концентрация гемоглобина. Достоверное снижение отмечалось, начиная с 10 месяца, к этому сроку концентрация гемоглобина снизилась, относительно максимальной (112,70±13,02 г/л) на 30%, к 11 месяцу на 34% (р<0,05). Анализ динамики количества эритроцитов позволяет сделать вывод, что количество эритроцитов меняется в зависимости от месяца жеребости. Так максимальное количество отмечается в первый месяц жеребости (10,35±1,46 Т/л), снижение количества относительно максимальных значений в начале жеребости составляет к 4 месяцу 6% (р<0,05),к 8 месяцам количество эритроцитов снижается относительно максимальной величины на 25%, к 11 месяцу на 42%. Относительно значений контрольной группы (10,28±0,16 Т/л) также наблюдалось достоверное снижение данного показателя после 8-го месяца: так содержание эритроцитов на сроке жеребости 8 месяце было снижено на 25%, на сроке жеребости 9 месяцем - на 31%, на 10 месяце жеребости - на 36%, на 11 месяце жеребости на - 42% (р<0,05).

Максимальная величина цветового показателя отмечалась в конце жеребости. Данное увеличении не носило достоверный характер (р>0,05) и составляло 13% относительно минимальных значений в начале жеребости (1,12±0,28) и 14% относительно значений контрольной группы (1,11±0,30).

Таким образом, начиная с 7-8 месяца и до 11 месяца жеребости, наблюдалось достоверное снижение концентрации гемоглобина в 1,4 раза, эритроцитов в 1,7 раза. Наши результаты подтверждаются исследованиями Головаха В.И., Пиддубника О.В., 2007, которые установили, что с возрастом у лошадей уменьшается общее количество эритроцитов.

Концентрация железа в сыворотке крови также зависела от месяца жеребости. Максимальные концентрации данного микроэлемента отмечены в начале жеребости (30,04±4,13 мкмоль/л), минимальные на 11 месяце жеребости (22,60±1,34 мкмоль/л), достоверное снижение (р<0,05) относительно максимальных значений в начале жеребости и значений контрольной группы наблюдалось, начиная с 10 месяца жеребости, и составило в 10 месяцев 19%, в 11 месяцев- 24%. Динамика ОЖСС и ЛЖСС в крови зависела от месяца жеребости, достигая своего максимума на 11

месяце. Так концентрация ОЖСС увеличилась, относительно значений контрольной группы (31,49±1,34 мкмоль/л, 3, 82±0,48 мкмоль/л соответственно) к 11 месяцу жеребости на 27% , ЛЖСС в 5,1 раза (р<0,05). Насыщение трансферрина железом зависит у жеребых кобыл от месяца жеребости. Концентрация данного белка в сыворотке крови снижалась на протяжении всей жеребости, достигая своего минимума на 11 месяце (54,54±6,32%)(р<0,05). Уменьшение составило: железа в 1,3 раза; увеличение ОЖСС в 1,35 раза, цветного показателя в 1,2 раза ЛЖСС в 5,1 раза, насыщение трансферрина железом снизилось в 1,6 раза относительно аналогичных значений у животных контрольной группы.

У жеребых кобыл контрольной группы показатели гемоглобина, эритроцитов, цветного показателя, железа, ОЖСС, ЛЖСС, насыщения трансферрина железом достоверно не изменялись.

Последние три показателя свидетельствуют об интенсификации связывания ионов железа с белками, что значительно уменьшает интенсивность образования активных форм кислорода и, следовательно,уменьшается образование супероксидного анион-радикала (Ог") и гидроксидного радикала (ОН ). При исследовании показателей перекисного окисления липидов нами были сделаны следующие выводы: за весь период жеребости отмечалось достоверное увеличение концентрации МДА данного показателя в 3,3 раза, диенкетонов в 3,4 раза и диеновых конъюгатов в 5,6 раза, относительно показателей контрольной группы (13,97±1,04 мкмоль/л, 0,04±0,007 Е.А./мл, 0,16±0,01Е.А./мл). Это указывает на усиление процессов перекисного окисления липидов. Наиболее заметно этот процесс проявляется в третьем триместре.

При оценке состояния антиоксидантной системы нами была исследована активность ферментов - антиоксидантов. За весь период жеребости выявлено увеличение активности СОД в 2,5 раза относительно значений первого месяца жеребости (15,36±2,46 У.е./мг белка в минуту) и каталазы в 2,2 раза относительно минимальных значений первого месяца жеребости (8,25±1,2 ед. Баха) (р<0,05). Наши данные согласуются с результатами исследований Gorecka R. (2002); Gay L.S. et al. (2004); Al-Qudan K.M., Al-Majali A.M. (2006); Celi P.M. Sullivan D. (2008). Следовательно, в

третьем триместре жеребости отмечается развитие окислительного стресса, на что указывает повышение концентрации продуктов ПОЛ и увеличением активности ферментов-антиоксидантов.

Как показали наши исследования, вторая половина жеребости сопровождается развитием железодефицитной анемией и применение в данный период кобылам комплексного препарата «Гемобаланс» способствует коррекции данного состояния. Поэтому явилось целесообразным для усиления гемопоэза использовать комплексный препарат «Гемобаланс» во второй половине жеребости.

2.3.Влияние препарата «Гемобаланс» для фармакокоррекции обмена веществ у жеребых кобыл.

При коррекции анемии у жеребых кобыл после применения препарата «Гемобаланс» отмечали увеличение количества эритроцитов на 31,23 %, концентрации гемоглобина - 28,55%, цветового показателя - 5,88%, концентрации железа - 21,36 % [6, 7]; при коррекции нарушений минерального обмена выявлено увеличение концентрации магния после приема препарата на 5,68 % (р>0,05) , меди на 30,57 % (р<0,05) [11], калия на 13,57%(р<0,05) [3]. Снижение концентрации йода составило 2,85% (р>0,05) , увеличение концентрации кальция составило 55%, фосфора 33,5 % [5]; при коррекции окислительного стресса после применения препарата (р>0,05) у жеребых кобыл подопытной группы концентрация продуктов перекисного окисления снизилась. В частности малоновый диальдегид снизился в 2,4 раза (р<0,05), диеновые конъюгаты в 2 раза (р>0,05), диенкетоны в 1,6 раза (р<0,05), относительно контрольной группы жеребых кобыл не получавших препарат. Активность СОД в сыворотке крови жеребых кобыл подопытной группы повысилась на 20,3 % (р>0,05), каталазы на 28,4% (р<0,05), относительно показателей до применения препарата; при коррекции нарушений белкового обмена у жеребых кобыл подопытной группы отмечалась тенденция к увеличению общего белка на 4 % (р>0,05), концентрация альбуминов увеличилась на 11 % (р>0,05), концентрация а-глобулинов снизилась на 38,53 % (р<0,05), концентрация (3-глобулинов повысилась на 7 % (р>0,05), концентрация у-глобулинов повысилась на 38,5 % (р>0,05), после приема препарата [5].

концентрация ^А достоверно не изменялась (р>0,05). Наблюдалось достоверное повышение: концентрации 1§М на 37 %, на 30 %, 1§С2 на 54 % после приема препарата, что указывает на усиление гуморального звена иммунитета. У жеребых кобыл контрольной группы уровень иммуноглобулинов и ЦИК достоверно не изменялся.

При коррекции иммунодефицита, установлено, что лизоцимная активность сыворотки крови лошадей увеличилась на 27 % (р<0,05), бактерицидная активность сыворотки крови увеличилась в 1,38 раза (р<0,05) после применения препарата. У жеребых кобыл контрольной группы лизоцимная и бактерицидная активности сыворотки крови достоверно не изменялись. Показатель фагоцитарного индекса увеличился в 1,3 раз (р>0,05), фагоцитарная активность - на 23,21 % (р<0,05), фагоцитарное число — в 1,5 раза (р<0,05) после применения препарата [1]. Таким образом, выявлено увеличение всех показателей фагоцитоза: количество фагоцитов, их способность к захвату микроорганизмов и переваривающая способность. У жеребых кобыл контрольной группы активность показателей фагоцитоза крови достоверно не изменялась.

2.4. Влияние применения препарата «Гемобаланс» у жеребых кобыл на гематологические, иммуно-биохимические показатели крови жеребят.

Концентрация общего белка сыворотки крови у жеребят подопытной группы оказалась выше на 10,6 %, чем в контроле (р<0,05). Концентрация альбуминов в сыворотке крови была на 20,9 % ниже в подопытной группе, чем в контрольной (р<0,05). Концентрация а-глобулинов была достоверно ниже в подопытной группе на (31,5 % ), относительно контрольной группы. Концентрация Р-глобулинов оказалась ниже в подопытной группе на 7,7 % относительно контрольной группы. Концентрация у-глобулинов имела достоверное повышение в подопытной группе на (31 %), относительно контрольной группы. Концентрация мочевины сыворотки крови подопытной группы жеребят имела выраженную тенденцию к повышению, относительно контрольной группы. Это же относится к концентрации креатинина. Количество эритроцитов крови оказалось выше на 18,5 % (р>0,05), концентрация гемоглобина - на 23,4 % (р<0,05), цветового показателя на 5,8 %(р>0,05), относительно показателей контрольной группы жеребят [2].

Выявлено достоверное повышение концентрации железа на 30 %, относительно контрольной группы жеребят. При этом наблюдалась тенденция к увеличение концентрации ОЖСС и показателя насыщения трансферрина железом на 10 % и на 30 %, соответственно, относительно показателей контрольной группы. ЛЖСС снизилась на 23 % относительно показателей контрольной группы (р>0,05).т Концентрации магния в сыворотке крови жеребят подопытной группы выше на 30 % (р<0,05), относительно показателей контрольной группы. Отношение кальция и фосфора сыворотки крови свидетельствует о том, что данный препарат не оказывал на изменение концентраций изучаемых макроэлементов сыворотки крови жеребят. Активность АсАТ и АлАт сыворотки крови жеребят подопытной группы не имела достоверных различий по сравнению с показателями активности данных ферментов контрольной группы жеребят. В то же время активность ЩФ достоверно снизилась в сыворотке крови жеребят подопытной группы на 25 %, относительно показателей контрольной группы. Концентрация общего билирубина увеличилась на 6 %, концентрация непрямого билирубина на 4 %, концентрация прямого билирубина на 11 %, относительно показателей контрольной группы. Выявлена тенденция к увеличению фракций билирубина. Активность лизоцима в сыворотке крови жеребят подопытной группы была выше на 25 % (р<0,05), бактерицидная активность сыворотки крови жеребят подопытной группы - на 20 % (р>0,05), относительно показателей сыворотки крови жеребят контрольной группы. Показатель фагоцитарной активности крови жеребят подопытной группы был выше, чем у контрольной группы. В частности, фагоцитарная активность нейтрофилов повысилась на 8% (р>0,05), фагоцитарное число на 21,7 % (р>0,05), фагоцитарный индекс на 57,87 % (р<0,05), относительно показателей контрольной группы [4]. Изученные показатели перекисного окисления липидов сыворотки крови жеребят подопытной группы не имели достоверных различий по сравнению с данными показателями сыворотки крови жеребят контрольной группы.

Таким образом, выполненное нами комплексное исследование влияния препарата «Гемобаланс» на основные обмены организма жеребых кобыл, свидетельствует о положительном стимулирующим эффекте данного препарата на течение жеребости.

выводы

1. С увеличением срока жеребости отмечено снижение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов крови жеребых кобыл. Так концентрация гемоглобина крови жеребых кобыл была достоверно ниже по сравнению с контролем; на 11 месяце жеребости (74,6±4,82 г/л, в контроле 110,89±1,04 г/л; количество эритроцитов -подопытной группы составило 5,02±0,54 Т/л, контрольной группы -10,28±0,16 Т/л).

2. Под влиянием препарата «Гемобаланс» в представленной схеме (1 мл на 45 кг массы внутримышечно каждые 48 часов на протяжении 7 дней (3 инъекции). Взятие крови осуществляли до применения препарата и через месяц после первой инъекции (на 9 месяце жеребости)) установлено повышение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов до физиологической нормы ( гемоглобина с 79,09±6,21 г/л до 110,70±7,87 г/л, эритроцитов с 6,21±1,10 Т/л до 9,03±1,72 Т/л. Увеличение концентрации железа после применения препарата составило 23 % (р<0,05).

3. Во вторую половину происходит достоверное снижение концентрации общего белка в сыворотке крови ( р<0,05). Под влиянием препарата через 30 дней установлена тенденция к повышению концентрации общего белка сыворотки крови (р>0,05), достоверное повышение концентрации общего кальция в сыворотке крови с 1,50±0,27 ммоль/л до 3,33±0,51 ммоль/л, калия с 5,38±1,68 ммоль/л до 6,22±1,92 ммоль/л и меди с 7,73±1,50 ммоль/л до 10,56±0,50 мкмоль/л ( р<0,05).

4. До девятого месяца жеребости в сыворотке крови кобыл установлено увеличение концентрации ^М, 1§А (с 4,42±0,32 г/л до 7,97±0,65 г/л; с 0,33±0,05 г/л до 0,47±0,05 г/л; с 1,67±0,23 г/л до 1,80±0,19 г/л, соответственно (р<0,05).

5. Под влиянием препарата спустя 30 дней после первой инъекции выявлено достоверное повышение концентрации на 37 %, на 30%,

на 54% (р<0,05), что указывает на активизацию гуморального звена иммунитета.

6. С 10 месяца жеребости выявлено снижение лизоцимной активности сыворотки крови подопытной группы на 18,9%, к 11 месяцу на 23,4 %, снижение бактерицидной активности сыворотки крови кобыл

подопытной группы наблюдалось на 11 месяце жеребости на 13,70%, относительно показателей контрольной группы. Достоверное снижение фагоцитарной активности крови кобыл подопытной группы наблюдалось с 6 месяца жеребости, на 11 месяце снижение составило 35 %, относительно показателей контрольной группы (р<0,05).

7. После применения препарата у подопытной группы кобыл выявлено достоверное повышение бактерицидной активности в 1,3 раза и повышение фагоцитарной активности крови на 23,21 %, относительно показателей контрольной группы.

8. Показатели ПОЛ (концентрация МДА, диенкетонов и диеновых конъюгатов) были достоверно повышены к концу жеребости в 3,3 раза, в 3,4 раза и 5,6 раза, соответственно. Под влиянием препарата на 30 день происходило снижение концентрации МДА в 2,4 раза ( р<0,05), диеновых конъюгатов в 2 раза ( р>0,05), диенкетонов в 1,6 раза ( р<0,05), относительно контрольной группы жеребых кобыл. Активность каталазы крови кобыл подопытной группы повысилась на 28,40 % ( р<0,05), относительно показателей до применения препарата.

9. У новорожденных жеребят подопытной группы кобыл установлено достоверное повышение концентрации общего белка сыворотки крови, по сравнению с контролем (66,70±1,30 г/л и 59,60±2,50 г/л, соответственно), концентрации у-глобулиновой фракции (45,94±2,20 % и 31,68±1,40 %, соответственно), гемоглобина (120,45±7,40 г/л и 92,30±8,40 г/л, соответственно).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Положительные результаты, полученные при использовании препарата Гемобаланс в представленной схеме (1 мл на 45 кг массы внутримышечно каждые 48 часов на протяжении 7 дней (3 инъекции)) на последних месяцах жеребости, позволяют рекомендовать его в коневодстве для профилактики анемии.

2. Основные положения работы, касающиеся динамики иммуно-биохимических показателей крови жеребых кобыл, используются в учебном

процессе для студентов ветеринарного факультета кафедр биохимии, акушерства и физиологии СПбГАВМ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в журналах из списка, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ

1. Андреева, А. Б. Результаты применения препарата «Гемобаланс» при коррекции иммунодефицитных состояний у лошадей /А.Б.Андреева // Российский иммунологический журнал, 2008. - Т. 2 - № 2-3. 164 с.

2. Андреева, А.Б. Изменения гематологических показателей крови жеребых кобыл при применении препарата «Гемобаланс» / Л.Ю.Карпенко, А.Б.Андреева, A.A. Бахта // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, 2009. - № 4. С.47-48.

3. Андреева, А.Б. Динамика показателей минерального обмена у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости / А.Б.Андреева, Л.Ю.Карпенко, А.А.Бахта // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, 2010. - №4. - С.229-230.

4. Андреева, А.Б. Факторы специфического и неспецифического иммунитета у жеребят / А.Б.Андреева //Медицинская иммунология, 2011. -С.545.

Список опубликованных работ по теме диссертации

5. Андреева, А.Б. Влияние комплексного препарата «Гемобаланс» на биохимические показатели крови лошадей / Л.Ю.Карпенко, А.Б.Андреева // Ученые записки учреждения образования Витебская ордена «Знак почета» государственная академия ветеринарной медицины. - Витебск, 2007. - №1, Выпуск 43,- С.89-92.

6. Андреева, А.Б. Фармакокорркция железодефицитных анемий у лошадей / А.Б.Андреева // Вестник Белоцерковского державного аграрного университету,- Белая Церковь, 2008. - Выпуск 56. - С. 19-20.

7. Андреева, А.Б. Опыт применения комплексного препарата «Гемобаланс» при коррекции нарушений минерального обмена у лошадей / А.Б.Андреева // Материалы международной конференции, посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии.- Самара, 2009. - С.11-13.

8. Андреева, А.Б. Показатели белкового обмена у жеребых кобыл / А.Б.Андреева // Материалы 64-й научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ.- СПб.,2010. - С.8-9.

9. Андреева, А.Б. Фармакокоррекция нарушения минерального обмена у жеребых кобыл/А.Б.Андреева//Материалы международной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ,- СПб.,2010. - С.4-6.

Ю.Андреева, А.Б. Иммунный статус у жеребых кобыл / Андреева А.Б., Карпенко Л.Ю., Вахта А.А. // Ученые записки Учреждения образования Витебская ордена «Знак почета» Государственная академия ветеринарной медицины.- Витебск, 2011. - С.8-10.

П.Андреева, А.Б. Влияние применения препарата «Гемобаланс» иа концентрацию в крови железа и меди у жеребых кобыл и новорожденных жеребят / Андреева А.Б., Бахта А.А., Карпенко Л.Ю. // Иппология и ветеринария,- СПб, 2011. - С.10-13.

Подписано в печать «Об» февраля 2012 г. Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,6. Тираж 100 экз. Заказ № 790

Отпечатано в цифровом копировальном центре «Восстания -1» 191036, Санкт-Петербург, Восстания, 1.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Андреева, Анна Борисовна, Санкт-Петербург

61 12-16/89

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

на правах рукописи

Андреева Анна Борисовна

Коррекция иммуно-биохимического статуса при жеребости кобыл

06.02.06 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук,

профессор

Карпенко Л.Ю.

Санкт-Петербург 2012

Содержание

С

Содержание.....................................................................................2

I. ВВЕДЕНИЕ................................................................................4

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................................9

2.1. Влияние жеребости на обменные процессы в организме кобыл.........................................................................................9

2.1.1. Влияние жеребости на показатели белкового и азотистого обменов в крови кобыл................................................................9

2.1.2.Влияние жеребости на показатели углеводного и жирового обменов в крови кобыл..................................................................14

2.1.3. Влияние жеребости на показатели минерального обмена в крови кобыл........................................................................................23

2.1.4. Влияние жеребости на показатели антиоксидантной защиты кобыл........................................................................................35

2.1.5. Влияние жеребости на состояние иммунной системы

кобыл.........................................................................................38

Ш.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..............................................41

3.1. Материалы и методы................................................................41

3.2. Динамика иммуно-биохимических показателей крови жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости.....................................................46

3.2.1. Динамика показателей белкового и азотистых обменов в зависимости от месяца жеребости.....................................................46

3.2.2. Динамика показателей липидного обмена в сыворотке крови в зависимости от месяца жеребости......................................................50

3.2.3. Динамика показателей углеводного обмена в зависимости от месяца жеребости..........................................................................52

3.2.4. Динамика показателей минерального обмена в зависимости от месяца жеребости..........................................................................53

3.2.5. Динамика показателей активности ферментов в зависимости от месяца жеребости...........................................................................55

3.2.6. Динамика показателей пигментного обмена в зависимости от месяца жеребости..........................................................................56

3.2.7. Динамика показателей антиоксидантной защиты в зависимости от месяца жеребости..................................................................................57

3.3. Иммунологические показатели крови жеребых кобыл.......................................................................................60

3.4. Динамика гематологических показателей крови жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости.................................................................................64

3.5. Влияние препарата «Гемобаланс» на метаболизм жеребых кобыл .................................................................................................66

3.5.1. Профилактика железодефицитной анемии у жеребых кобыл.........................................................................................66

3.5.2. Профилактика нарушений минерального обмена у жеребых кобыл.........................................................................................67

3.5.3. Профилактика развития окислительного стресса у жеребых кобыл.......................................................................................67

3.5.4. Влияние препарата «Гемобаланс» на концентрацию общего белка и его фракций в сыворотке крови жеребых кобыл.................................71

3.5.5. Влияние препарата «Гемобаланс» у жеребых кобыл на гематологические, иммуно-биохимические показатели крови жеребят......74

IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ..............................81

V. ВЫВОДЫ..............................................................................107

VI. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................108

VII.CПИCOK

ЛИТЕРАТУРЫ.............................................................................110

I. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

На протяжении тысячелетий лошадь остаётся верным спутником и помощником человека. Трудно назвать другое животное, чьё значение для нас было бы столь велико. Уже более четырех десятилетий общая численность лошадей в мире остаётся стабильной и составляет 65 млн. голов (Ливанова Т.К., 2003). При этом экономически развитые страны постоянно наращивают поголовье лошадей: так в США их насчитывается уже более 12 млн.; в России же, по неполным данным, их пока всего около 2 млн.( Пэворд Т., 2005). Рост их численности происходит полностью за счёт увеличения количества лошадей спортивного назначения и лошадей для личного непроизводственного использования. Наряду с использованием лошадей в сельском хозяйстве во внутрихозяйственном транспорте, при пастьбе скота, обслуживании индивидуальных подсобных хозяйств, больше стал развиваться конный спорт, прокат лошадей и конный туризм. Эти животные продолжают играть важную роль в развитии эстетического вкуса, физической культуры и здоровья людей (Стекольников A.A. и др., 2009). В последние годы организм лошади изучается на уровне молекулярной генетики (Bayly W., 1999; Жигачев А.И. и др., 2008).

Лошади также используются в качестве продуцентов в биологической и медицинской промышленности. Актуальным в коневодстве является дальнейшее увеличение поголовья лошадей и повышение продуктивности животных (Жаров A.B. и др., 2007). За 30 лет произошли коренные изменения в ветеринарном обслуживании коневодства, разработаны новые средства и методы осуществления ветеринарных мероприятий, внедрены новые технические средства. Появился востребованный рынок ветеринарных услуг, систематически повышается рыночный спрос на эти услуги (Гутовец А.Ю., 2008).

Коневодство наряду с широким развитием прочной кормовой базы, включает в себя получение жизнеспособного потомства, что во многом

обусловлено условиями содержания и кормления жеребых кобыл (Видении В.Н., 1998; Зеленевский Н.В. и др., 1996; Калашников В.В. и др., 2011). Беременность - физиологический процесс, который в организме самки обусловливает ряд явлений, граничащих с патологическим процессом (Племяшов К.В., Баженова Н.Б. и др., 2006). Развитие плода во многом зависит от состояния матери и всякое усиление или ослабление функций органов материнского организма оказывает коррелятивное влияние на состояние плода (Конопатов Ю.В., Васильева C.B., 2009).

Изучение обмена веществ у лошадей в период жеребости является актуальной темой, что предполагает подбирать наиболее рациональные схемы кормления жеребых кобыл, обусловливая тем самым, возможность получения наиболее жизнеспособного потомства.

Цель и задачи исследования

Целью исследования являлось комплексное изучение иммуно-биохимических характеристик организма жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости и научное обоснования профилактической эффективности применения комплексного препарата «Гемобаланс» для фармакокоррекции возможных нарушений обмена веществ кобыл, наблюдающихся при жеребости.

Указанная цель осуществлялась посредством решения следующих

задач:

- изучить гематологические, биохимические показатели крови жеребых кобыл, характеризующие состояние белкового, липидного, углеводного и минерального обменов;

- изучить состояние иммунной системы у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

- изучить состояние антиоксидантной системы у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

- научно обосновать профилактическую эффективность применения комплексного препарата «Гемобаланс» для возможных фармакокоррекции возможных нарушений обмена веществ у жеребых кобыл;

- изучить влияние данного препарата на иммуно-биохимические характеристики потомства.

Научная новизна

- впервые проведено комплексное изучение состояние белкового, азотистого, жирового и углеводного обменов у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

- впервые изучен антиоксидантный статус организма жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

- впервые изучен иммунный статус организма жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

- впервые научно обосновано применение препарата «Гемобаланс» для коррекции возможныхнарушений обмена веществ у жеребых кобыл;

- впервые проведена оценка применения препарата «Гемобаланс» у жеребых кобыл на состояние потомства.

Теоретическая и практическая значимость работы

Выполненное исследование содержит решение актуальной проблемы -выяснения особенностей иммуно-биохимического статуса, метаболизма микро- и макроэлементов, состояния антиоксидантной системы у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости. Предложен эффективный способ фармакокоррекции нарушений обмена веществ, возникающих при жеребости с использованием препарата «Гемобаланс». Полученные данные дают возможность объективно интерпретировать иммуно-биохимические показатели крови лошадей с учетом срока жеребости. Действие препарата «Гемобаланс» на иммуно-биохимический статус организма жеребых кобыл позволяет рекомендовать данный препарат для профилактики нарушений обмена веществ у жеребых кобыл на поздних сроках жеребости.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Динамика изменений гематологических и иммуно-биохимических характеристик крови жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости;

2. Влияние комплексного препарата «Гемобаланс» на биохимический статус и естественную резистентность организма жеребых кобыл;

3. Оценка применения препарата «Гемобаланс» у жеребых кобыл на состояние потомства.

Апробация результатов исследования Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены

на:

- 56 международной научно-практической конференции (Белая церковь, 2008);

- Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008); -международной научной практической конференции, посвященной

200-летию высшего ветеринарного образования в России (Санкт-Петербург, 2008);

- XVII Московском Международном ветеринарном конгрессе (Москва,

2009);

- международной научно-практической конференции «Достижения и перспективы животноводства» (Витебск, 2009);

- 4-ом Международном симпозиуме «Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введенных в зоокультуру» (Петрозаводск, 2009);

- III Съезде фармакологов и токсикологов России (Санкт-Петербург,

2011);

- XIV Всероссийский научный Форум с международным участием имени академика В.И.Иоффе ( Санкт-Петербург, 2011);

- научных конференциях молодых ученых и студентов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2008, 2010, 2011);

научных международных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2010, 2011, 2012).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, 4 из которых - в рецензируемых журналах ВАК Российской Федерации для публикации результатов диссертационных работ.

Внедрение результатов исследований

Результаты исследований реализованы в практике обучения студентов по дисциплинам биологическая химия, акушерство, физиология, фармакология, внутренние незаразные болезни и клиническая диагностика животных на факультете ветеринарии ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», также в лечебно-профилактической деятельности практикующих врачей Ленинградской области и города Санкт-Петербурга, специализирующихся по болезням лошадей.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 207 источников, из них 51 иностранных. Работа иллюстрирована 27 таблицами.

И. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Влияние жеребости на обменные процессы в организме кобыл

Жеребость - это физиологическое состояние кобылы с момента ее оплодотворения до рождения жеребенка, продолжительность данного процесса в среднем 333 суток (от 307 до 412 суток) и зависит от возраста, породы и индивидуальных особенностей животного (Племяшов К.В. и др., 2007).

Установлено, что, несмотря на то, что беременность -физиологический процесс, в организме самки он обусловливает ряд явлений, граничащих с патологическим процессом (Куклин А.Д. и др., 1995; Скопичев

B.Г., Максимюк H.H., 2009). Развитие плода во многом определяется состоянием матери и всякое усиление или ослабление функций органов материнского организма оказывает коррелятивное влияние на состояние плода (Пол.У., 1988). Поэтому период беременности подразумевает снижение интенсивности эксплуатации животных с параллельным улучшение питания (Племяшов К.В., 2010). При данном состоянии наблюдается значительное изменение в обмене веществ материнского организма (Нежданов А.Г., 1978; Панков Б.Г., Жаров A.B., 2002; Петров

C.П., 1998).

В литературе отражены данные по иммуно-биохимическим показателям крови беременных животных: коров (Абрамов С.С., Петровский C.B., 2008; Евглевский A.A. и др., 2010), свиней (Ковзов В.В., 2009), коз (Цвилиховский Н.И., Немова Т.В., 2010). Однако, данные по иммуно-биохимическому статусу жеребых кобыл единичны и разрозненны, получены без учета породы, кормления, физиологического состояния. Поэтому представляет интерес изучение иммуно-биохимического профиля крови у жеребых кобыл в зависимости от месяца жеребости и выявление закономерностей метаболизма на данном этапе.

2.1.1. Влияние жеребости на показатели белкового и азотистого обменов у кобыл

Во время жеребости происходит активация всех метаболических процессов, чтобы обеспечить растущие потребности плода, плаценты, матки, а также базальный уровень метаболизма матери. В процессе развития данного процесса происходит интенсификация белкового обмена и накопление белковых субстанций в организме для обеспечения растущего плода и жизнедеятельности организма матери пластическим материалом (Кузовлева Л.В., 2002; Алексеев Н.Д., 2002).

Во второй половине жеребости в организме животного отмечается накопление белковых веществ, даже их избыточность, но лишними они не будут, поскольку затем компенсируют расход белковых веществ, связанных с родами и лактацией (Григорьева Т.Е., 1994).

Лошадь относится к моногастричным травоядным животным, это означает, что они не имеют рубца, в отличие от овец и крупного рогатого скота, в рубце которых присутствуют бактерии, способствующие утилизации растительных волокон (Лаковников Е.А., 2007). Однако лошадь имеет относительно большую слепую кишку, бактериальная микрофлора которой переваривает растительные вещества (Рудаков В.В. и др., 1991; Скопичев В.Г., Максимюк H.H., 2004). Потребность лошади, в кормовом белке определяется качеством белка и его перевариваемостью (National Research Council, 1989). Белки, которые не используются в построении тканей организма, могут использоваться в качестве источника энергии. Лошадь может синтезировать некоторые аминокислоты (заменимые). Другие аминокислоты (лизин, метионин, триптофан, валин, гистидин и фенилаланин) являются незаменимыми и должны присутствовать в корме. Главным участком пищеварительной системы, в котором происходит расщепление белка, начинающееся в желудке, является тонкая кишка. Аминокислоты, которые всасываются, это аминокислоты рациона, не

подвергшиеся воздействию бактерий. Однако, вероятно, имеет место и всасывание аминокислот бактериального происхождения из толстой кишки лошади. Тем не менее результаты некоторых работ показали, что бактериальные аминокислоты, синтезированные в толстой кишке, не подвергаются эффективной утилизации в организме лошади (Wysocki A.A., 1976; Baker J.M. et al., 1999).

Лошади с повышенными потребностями в белке (например, жеребята и жеребые кобылы) проявляют особую зависимость от поступления незаменимых аминокислот. Жеребята обычно рождаются по существу агаммаглобулинемичными, только с небольшим количеством IgM, обнаруживаемого в их сыворотке (Федоров Ю.Н., Верховский O.A., 1996). У новорожденных жеребят происходит всасывание интактных аминокислот в течение 36 часов после рождения. Важно, чтобы жеребенок получил молозиво как можно скорее после своего появления на свет. В молозиве содержатся материнские антитела (иммуноглобулины), которые обеспечивают защиту организма жеребенка от инфицирования. Отсутствие материнских антител у новорожденных препятствует борьбе организма с инфекционными агентами, с которыми он сталкивается в ранней жизни (Федоров Ю.Н., Верховский O.A., 1996). Через плаценту не происходит передача антител. Нарушение пассивной передачи материнских антител может иметь место у любого вида домашнего животного, но наиболее документировано у лошадей. Сообщения показывают, что нарушения передачи материнских антител могут достигать у 24 % жеребят ( Thompson J.P., 1995, Agrícola R., et al., 2008).

Для жеребых племенных кобыл обычный энергетический уровень остается достаточным вплоть до последних 90 дней беременности, когда происходит развити�