Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Комплексы почвенных актиномицетов в зоне действия объекта по уничтожению химического оружия "Марадыковский"

ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Комплексы почвенных актиномицетов в зоне действия объекта по уничтожению химического оружия "Марадыковский""

На правах рукописи

ТОВСТИК ЕВГЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА

КОМПЛЕКСЫ ПОЧВЕННЫХ АКТИНОМИЦЕТОВ В ЗОНЕ ДЕЙСТВИЯ ОБЪЕКТА ПО УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ «МАРАДЫКОВСКИЙ»

03.02.08 - экология (биология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 АПР 2015

Сыктывкар 2015

005566396

005566396

Работа выполнена в лаборатории биотехнологии растений и микроорганизмов

Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Зональный научно-исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Востока имени Н.В. Рудницкого»

Научный руководитель: Широких Ирина Геннадьевна, доктор

биологических наук, заведующая лабораторией биотехнологии растений и микроорганизмов ФГБНУ «НИИСХ Северо-Востока»

Официальные оппоненты: Терехова Вера Александровна, доктор

биологических наук, старший научный сотрудник, заведующая лабораторией изучения экологических функций почв ФГБУН Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН

Лаптева Елена Морисовна, кандидат биологических наук, доцент, заведующая отделом почвоведения ФГБУН Института биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное

учреждение науки Институт проблем промышленной экологии Севера Кольского научного центра Российской академии наук, г. Апатиты

Защита состоится 13 мая 2015 г. в 10:00 часов на заседании диссертационного совета Д 004.007.01 в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН по адресу: 167982, г. Сыктывкар, ГСП-2, ул. Коммунистическая, д. 28.

E-mail: dissovet@ib.komisc.ru, сайт института: www.ib.komisc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Коми научного центра Уральского отделения РАН по адресу: 167982, г. Сыктывкар, ул. Коммунистическая, д. 24.

Автореферат разослан «-/6 » /МАРТА 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Кудяшева Алевтина Григорьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Оценка техногенной нагрузки, вызванной воздействием военно-промышленного комплекса, и её отрицательных последствий для естественных и антропогенных экосистем, является важным звеном в решении экологических проблем.

В Кировской области более 50 лет хранились запасы авиационных химических боеприпасов в снаряжении фосфорорганическими (типа Vx, зарин, зоман) и мышьяксодержащими (смесь иприта с люизитом) отравляющими веществами в суммарном объеме 6929 тонн, или 17,4 % от общего количества запасов отравляющих веществ Российской Федерации (Шкодич и др., 2004; Новикова, Ашихмина, 2010). В соответствии с Конвенцией о запрещении химического оружия и его уничтожении (Конвенция о запрещении ... ,1994), на базе объекта хранения был сформирован объект по уничтожению химического оружия (ОХУХО) «Марадыковский» (далее Объект) и введен в эксплуатацию в сентябре 2006 года (Ашихмина и др., 2008). К декабрю 2013 года на Объекте было уничтожено более 99 % запасов химического оружия (Холстов, 2013).

В целях обеспечения безопасности работы ОХУХО «Марадыковский» проводится производственный экологический мониторинг состояния природных сред, основанный на сочетании химико-аналитических методов с методами биологического мониторинга (Капашин, 2008). По программе биологического мониторинга состояние почв оценивалось по показателям ферментативной активности (Огородникова и др., 2008) и состоянию эукариотических компонентов почвенной микробной системы: водорослей (Кондакова и др., 2008 а, 2012) и микромицетов (Ашихмина и др., 2010; Домрачева и др., 2012). Прокариотньш компонент, за исключением цианобактерий (Домрачева и др., 2012; Кондакова, 2012), в данных экологических условиях ранее не рассматривался. Для биологической оценки экологического состояния почв мицелиальные бактерии - актиномицеты, вследствие лучшей, по сравнению с другими прокариотами, методами идентификации и описанием видовой структуры сообществ, подходят более других бактерий (Звягинцев, Зенова, 2001). Экологическая роль актиномицетов в почве связана с деструкцией разнообразных органических субстратов, труднодоступных для других групп микроорганизмов. Изучение комплексов почвенных актиномицетов в зоне возможного влияния химически опасного Объекта является актуальным как для получения информации об участии мицелиальных прокариот в реализации экологических функций почв в условиях техногенной нагрузки, так и для биодиагностики изменений, происходящих в почвенной микробной системе.

Степень разработанности проблемы. Большой вклад в разработку основ почвенной биодиагностики внесли С.Н. Виноградский (1952), H.A. Красильников (1958), Т.В. Аристовская (1965, 1980), Д.Г. Звягинцев (1978, 1987 а, 1987 б, 2008), E.H. Мишустин (1984). В их работах были установлены основные закономерности формирования и функционирования почвенной микробной системы, особенности распределения микроорганизмов и

протекания процессов в зависимости от свойств почвы, обусловленных её генезисом и характером хозяйственного использования.

Значительный вклад в формирование представлений о структуре актиномицетных комплексов в почвах различных природно-климатических зон внесли работы Г.М. Зеновой с соавт. (1998, 2000, 2002, 2005, 2007, 2009, 2010, 2011) и её учеников: И.Г. Широких (1993), A.A. Лихачевой (1994), Н.В. Михайловой (1998), Ю.В. Закалюкиной (2002), О.И. Захаровой (2003), Т.А. Грачевой (2004), Ж. Норовсурэна (2003, 2007 а, 2007 б, 2009), A.A. Грядуновой (2007), И.И. Суднициной (2009), А.И. Кураповой (2008, 2012), H.A. Манучаровой (2014).

В последние годы активно развивается направление, связанное с использованием актиномицетов в качестве модельной группы организмов для экологической оценки состояния микробной системы почвы при различных антропогенных воздействиях (Калоянова, 2007; Гришко, Сыщикова, 2009; Назаренко, 2013; Мосина и др., 2013). Несмотря на значительное количество работ в этой области, для эффективного использования структуры комплексов актиномицетов остается актуальным проведение исследований сходными методами, обеспечивающими сравнимость результатов, и накопление массива статистического материала.

Цель работы - сравнительная характеристика комплексов актиномицетов в почвах лесных и луговых фитоценозов в зоне влияния ОХУХО «Марадыковский» и выявление наиболее информативных экологических показателей для оценки степени экологического риска.

Задачи работы

1) Исследование численности и структуры комплексов актиномицетов в почвах луговых и лесных фитоценозов, расположенных на территории санитарно-защитной зоны (СЗЗ) и зоны защитных мероприятий (ЗЗМ) ОХУХО «Марадыковский».

2) Оценка изменений, произошедших в структуре комплексов актиномицетов за период производственной деятельности ОХУХО «Марадыковский» (с 2007 по 2013 г.) в почвах разного генезиса.

3) Сравнительная характеристика комплексов актиномицетов в почвах одного генезиса с различной удалённостью от ОХУХО «Марадыковский».

4) Оценка возможности использования синэкологических показателей структуры актиномицетного комплекса для целей биоиндикации техногенного загрязнения почв.

5) Выявление специфических реакций почвенных актиномицетов на отдельные продукты деструкции химического оружия.

Научная новизна. Разработаны и усовершенствованы подходы к биоиндикации нарушений почвенной микробной системы с использованием актиномицетов в качестве модельной группы микроорганизмов. Предложена система синэкологических показателей для оценки экологического состояния почв, подверженных влиянию техногенных факторов, связанных с уничтожением химического оружия. Впервые выявлены отличия комплексов актиномицетов в почвах луговых и лесных фитоценозов, расположенных на

территории СЗЗ и ЗЗМ ОХУХО «Марадыковский», от актиномицетных комплексов почв зонального типа в пределах фоновых территорий. Установлены основные закономерности трансформации структуры актиномицетных комплексов, произошедшие в почвах за период работы ОХУХО «Марадыковский» в режимах хранения и уничтожения химического оружия. Доказано значимое влияние техногенных факторов на варьирование в почвах численности, разнообразия, долевого участия в комплексе представителей отдельных таксонов актиномицетов. Установлены характерные физиологические отклики представителей мицелиальных прокариот на действие приоритетных загрязнителей окружающей среды при хранении и уничтожении химического оружия: метилфосфоновой кислоты (МФК), пирофосфата натрия (ПФН), соединений мышьяка.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты расширяют существовавшие ранее представления об экологии актиномицетов, позволяют понять закономерности взаимодействия природных и техногенных компонентов экосистем.

Результаты работы могут найти применение в области биодиагностики и биоиндикации почв, при решении вопросов, связанных с контролем среды и предотвращением загрязнения почв. Полученная информация о состоянии микробной системы почв может быть использована для дальнейшего мониторинга в зоне действия Объекта, а также для своевременного принятия решений о характере использования почв или выведении их из активного оборота.

Связь работы с научно-исследовательскими программами и темами.

Работа является составной частью комплексных исследований, проводимых в рамках ФЦП «Уничтожение запасов химического оружия в Российской Федерации» и программы «Закономерности функционирования природных и антропогенно трансформированных экосистем подзоны южной тайги», № гос. регистрации 01201180598.

Положения, выносимые на защиту

1. Установленные количественные и качественные различия актиномицетных комплексов в ряду подзолистых и дерново-подзолистых почв луговых и лесных фитоценозов в зоне влияния ОХУХО «Марадыковский», обусловлены как природными свойствами почвы, так и степенью техногенного воздействия на неё, и ммут быть использованы для целей биоиндикации.

2. В начальный период деятельности ОХУХО «Марадыковский» в режиме уничтожения химического оружия в почвах луговых и лесных фитоценозов внутри зоны, радиусом 8 км от Объекта, выявлены существенные отклонения в структуре комплексов почвенных актиномицетов, обусловленные воздействием совокупности техногенных факторов хранения химического оружия, строительства и эксплуатации Объекта по его уничтожению.

3. За период производственной деятельности ОХУХО «Марадыковский» в почвах, внутри зоны радиусом 2,7 км от Объекта, произошли перестройки в родовой и видовой структуре актиномицетных комплексов, свидетельствующие о возвращении их структуры к состоянию, в большей степени, чем ранее,

характерному для почв гумидной зоны.

4. Среди исследованных почв района расположения ОХУХО «Марадыковский» необычной структурой чаще отличались актиномицетные комплексы почв лесных, чем луговых фитоценозов, что указывает на их меньшую устойчивость к данному комплексу техногенных воздействий.

Личный вклад автора состоит в аналитическом обзоре литературы, выборе объектов, проведении лабораторных исследований, в обработке, анализе, интерпретации и обобщении результатов.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на Всероссийских научно-практических конференциях, в том числе с международным участием: «Региональные и муниципальные проблемы природопользования» (Киров, 2008), «Биологический мониторинг природно-техногенных систем» (Киров, 2011), «Биодиагностика состояния природных и природно-техногенных систем» (Киров, 2012, 2014), «Бизнес. Наука. Экология родного края: проблемы и пути их решения» (Киров, 2013), «Актуальные проблемы региональной экологии и биодиагностика живых систем» (Киров,

2013), «Экология родного края: проблемы и пути их решения» (Киров, 2014); Всероссийской научной конференции «Закономерности функционирования природных и антропогенно трансформированных экосистем» (Киров, 2014); Всероссийских молодежных конференциях: «Адаптационные реакции живых систем на стрессорные воздействия» (Киров, 2012), «Молодежь и наука на Севере» (Сыктывкар, 2013), «Актуальные проблемы биологии и экологии» (Сыктывкар, 2014); Международной конференции «Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных систем» (Москва, 2013); Всероссийском симпозиуме с международным участием «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (Москва,

2014); заседаниях методической комиссии ФГБНУ «НИИСХ Северо-Востока» (Киров, 2012,2013,2014).

Работа по теме исследования была отмечена на Всероссийском конкурсе научно-исследовательских работ аспирантов в области наук о Земле дипломом победителя отборочного тура и дипломом за П1 место (г. Томск, Национальный исследовательский Томский государственный университет, 2012).

Публикации. По результатам исследования опубликована 21 печатная работа, в том числе 4 статьи в журналах, входящих в перечень ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения и выводов, списка литературы, включающего 348 источников, из них 67 на иностранных языках, 4-х приложений. Работа изложена на 156 страницах, содержит 15 таблиц, 22 рисунка.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Обзор литературы

В главе описано современное состояние проблемы уничтожения химического оружия. Рассмотрены приоритетные загрязнители, которые могут образовываться в ходе промышленного уничтожения химического оружия и их

влияние на живые организмы. Большое внимание уделено информации о распространении акггиномицетов в почвах естественных и антропогенных экосистем, а также о влиянии на них техногенных факторов загрязнения.

Глава 2. Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили почвы луговых и лесных фитоценозов на территории СЗЗ и ЗЗМ ОХУХО «Марадыковский» (табл. 1).

Таблица 1

Характеристика объектов исследования_

Фитоценоз № участка в системе ГЭМ Расстояние от Объекта, км/ направление Тип почвы Гранулометрический состав Год Слой, см рНка

Лес 16 1,53/Ю средпеподзолистая песчаная 2007 0-20 3,4

34 3,12/С-В 2007 0-10 4,1

2012 0-10 4,6

2013 0-5 4,3

62 3,78/Ю дерново-подзолистая супесчаная 2007 0-20 3,6

88 6,26/Ю-З слабоподзолистая песчаная 2007 0-20 4,5

7 1,63/В 2007 0-20 3,1

2013 0-5 5,3

36 2,75/С-В сильноподзолистая супесчапая 2007 0-8 4,4

2011 0-10 4,2

2012 0-10 5,0

2013 0-5 5,1

42 2,74/Ю-В дерново-подзолистая легкосуглинистая 2007 0-20 3,9

Луг 38 2,78/В 2007 0-20 6,1

43 2,72/Ю 2007 0-20 6,3

2012 0-10 5,8

2013 0-5 6,3

73 5,24/В дерново-слабоподзолисгая 2007 0-20 6,8

2013 0-5 7,4

84 6,24/В дерново-слабоподзолистая супесчаная 2008 0-10 5,4

2012 0-10 5,0

3 1,15/С-В 2007 0-10 4,8

2012 0-10 4,9

2013 0-5 5,5

103 8,68ЛО-В дерново-среднеподзолистая средне-суглинистая 2007 0-20 5,8

135 17,01/Ю-В дерново-слабоподзолистая 2007 0-20 5,4

141 21,34/Ю-В дерново-подзолистая супесчаная 2007 0-15 5,7

60 3,96/Ю-В 2011 0-10 5,1

2012 0-10 6,2

39 2,77/В средне-суглинистая 2011 0-10 4,2

2012 0-10 4,9

140 21,56/В дерново-карбонатная выщелоченная легкосуглинистая 2007 0-15 3,8

75 4,6/Ю-В дерново-слабоподзолистая песчаная 2007 0-20 5,3

Отбор образцов произведен на площадках системы государственного экологического мониторинга (ГЭМ) из верхних горизонтов почвы в сентябре 2007, 2008, 2011-2013 гг. С каждой реперной площадки отбирали по три индивидуальных пробы по диагонали, с последующим объединением их в один смешанный образец почвы. Всего проанализировано более 160 проб почв.

Реакцию почвенной вытяжки (кислотность) определяли в соответствии с ГОСТом 26483-85 потенциометрическим методом.

Изучение отклика актиномицетов на действие отдельных продуктов деструкции химического оружия (пирофосфат натрия, метилфосфоновая кислота, мышьяк), проводили в серии модельных опытов, используя природные изоляты стрептомицетов из почв исследуемой территории.

Учет численности актиномицетов осуществляли методом посева из разведений почвенных суспензий на плотные питательные среды с применением селективных приемов (Зенова, 2000). Родовую структуру актиномицетных комплексов характеризовали на среде с пропионатом натрия, видовую структуру рода Streptomyces — на казеин-глицериновом агаре. Родовую и видовую идентификацию культур проводили в соответствии с определителями (Гаузе и др., 1983; Определитель ... , 1997), используя морфологические и культуральные признаки.

Для характеристики структуры комплексов использовали показатели частоты встречаемости и долевого участия родов и видов (Звягинцев, Зенова, 2001). В зависимости от частоты встречаемости представителей комплекс дифференцировали на группы: доминирующие (> 85%), типичные частые (> 60%), типичные редкие (> 40%) и случайные (< 40%).

Антибиотическую активность актиномицетов изучали методом агаровых блоков (Егоров, 1979). Определение целлюлозолитической активности осуществляли на среде Гетчинсона с карбометилцеллюлозой (Teather, Wood, 1982). Накопление биомассы культурами актиномицетов определяли гравиметрически (Практикум ... , 2005). Наблюдения за интенсивностью прорастания спор актиномицетов при различном содержании мышьяка и ПФН в почве проводили с использованием микроскопа «Leica DM2000» (Германия). Скорость роста актиномицетов определяли путем измерения прироста диаметра колоний на среде Гаузе 1 за определенный промежуток времени. Для расчета использовали формулу (1) (Методы почвенной ..., 1991).

Кг= (1)

<2-11

где Кг - радиальная скорость роста, мм/час; di и di - диаметр колоний, мм; и ¡2 — начальный и конечный моменты времени измерения соответственно, час.

Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами дисперсионного анализа (Дмитриев, 1972) с использованием программ EXCEL и STATGRAFICS.

Глава 3. Характеристика комплексов почвенных актиномицетов на территории СЗЗ и ЗЗМ ОХУХО «Марадыковский»

Численность и таксономический состав почвенных актиномицетных комплексов в начальный период работы ОХУХО. Учет численности микроорганизмов в почвах, отобранных на площадках ГЭМ в начальный период работы Объекта (2007-2008 гг.) показал, что в среднем доля актиномицетов от общего количества прокариот в почвах луговых (36,3 %) фитоценозов, имеющих значения рНоол 5,4-6,8, выше, чем в более кислых (рНсол 3,4-4,5) почвах лесных (21,8 %) фитоценозов. Общая численность актиномицетов, по данным трехфакторного дисперсионного анализа, достоверно определялась типом фитоценоза (^=120,86; р=0,0000), пространственной удаленностью от Объекта (^=24,99; р=0,0000), гранулометрическим составом почвы (Р=10,58; /7=0,0014) и была на порядок выше в почвах луговых (105-10б КОЕ/г), чем лесных фитоценозов (104-105 КОЕ/г) (рис. 1).

С 1 т-

ё 5 —— Иннй

М) 4 --1УГ^||пгж|- , Г ,

12345 6789 10

Рис. 1. Общая численность актиномицетов на среде с прогшонатом натрия, в супесчаных (4, 8), песчаных (1, 3, 5), легкосуглинистых (2, 6, 7) среднесуглинистых (9, 10) подзолистых и дерново-подзолистых почвах лесных (а) и луговых (б) фитоценозов.

В почвах легкого гранулометрического состава (песчаные и супесчаные) регистрировали в среднем более низкие значения общей численности актиномицетов (104-105 КОЕ/г), чем в почвах суглинистых (104-106 КОЕ/г).

В отношении отдельных родов актиномицетов, отмечали статистически значимое влияние пространственной удалённости от Объекта на варьирование численности доминирующих родов Зи-ер1отусг8 и Мгсготопоэрога, а также минорных компонентов актиномицетного комплекса - олигоспоровых актиномицетов. В отношении численности стрептоспорангиумов ни один из рассмотренных факторов не оказал существенного влияния.

Таким образом, варьирование общей численности актиномицетов и численности отдельных родов актиномицетов в ряду рассмотренных почв в начальный период исследований было обусловлено как естественными условиями формирования - кислотностью и гранулометрическим составом почвы, характером растительности, так и удаленностью от Объекта, определяющей степень техногенного воздействия на почву.

Характеристика структуры комплексов почвенных актиномицетов в начальный период работы ОХУХО. Актиномицетные комплексы в почвах луговых и лесных фитоценозов на территории СЗЗ и ЗЗМ ОХУХО

«Марадыковский» в начальный период работы ОХУХО (2007-2008 гг.) были представлены видами родов Зи-ерготусеь, Мкготопозрога, Streptosporangium, олигоспоровыми формами и имели особенности на уровне их родовой структуры (табл. 2).

Таблица 2

Характеристика комплексов актиномицетов в начальный период работы ОХУХО

Фитоценоз № участка Расстояние от Объекта, км Частота встречаемости/долевое участие рода, % Индекс Шеннона, бит/г

1 2 3 4

Лес 16 1,53 100/35,1 100/54,9 60/1,76 40/8,2 1,83±0,70

42 2,74 100/54,9 100/31,8 100/9,8 80/3,5 1,43±0,16

34 3,12 80/9Д 100/46,1 100/44,2 20/0,6 1,30±0,22

62 3,78 40/9,3 100/90,7 0/0 0/0 0,30±0,04

88 6,26 100/68,9 100/17,7 20/0,1 100/13,3 1,20±0,06

Луг 38 2.78 100/6,3 100/90,1 100/0,4 100/3,2 0,58±0,08

73 5,24 100/9,4 100/86,2 100/3,9 60/4,5 0,69±0,13

84 6,24 100/23,6 100/63,7 60/1,0 100/2,7 1,12±0,18

103 8,68 100/71,8 100/26,7 40/0,5 100/1,0 1,08±0,31

135 17,1 100/80,7 100/17,8 60/0,8 80/0,7 0,85±0,11

Примечание: в таблицах 2, 4: 1) после знака «±» указано стандартное отклонение; 2) 1 - Ъ'^ерЮтусех: 2 - Мгсготопоарога; 3 - 3&ер1о$рогап$ит\ 4 - олигоспоровые актиномицеты.

Отличительной особенностью актиномицетных комплексов почв лесных фитоценозов, расположенных вблизи Объекта (до 8 км), явилось нетипичное для зональных типов почв доминирование по частоте встречаемости и относительному обилию в комплексе представителей родов Мкготопоярога и/или Б^-ерШрогап^ит, либо олигоспоровых видов, сопряженное с низким долевым участием или частотой встречаемости представителей рода БКер^тусея. Среди выборки почв под лугами, необычной структурой актиномицетных комплексов (высокая частота встречаемости - 100 % представителей всех выделяемых родов актиномицетов, либо доминирование по относительному обилию микромоноспор) характеризовались почвы, отобранные вблизи от Объекта (до 8 км). Тогда как на более удаленных участках (8,7 и 17,1 км), актиномицетные комплексы почв имели структуру, более характерную для почв таежной зоны (Звягинцев, Зенова, 2001).

Таким образом, для почв, расположенных в зоне до 8 км от ОХУХО «Марадыковский» отмечали изменение показателей относительного обилия и частоты встречаемости представителей родов БКер^тусея и Мкготопоярогсг, сокращение или расширение родового разнообразия; формирование состава доминантов, отличного от комплексов мицелиальных прокариот, описанных для почв таёжной зоны.

Количественные изменения в комплексах почвенных актиномицетов за период производственной деятельности ОХУХО. В ходе мониторинговых исследований на одних и тех же площадках ГЭМ в период с 2007-2008 по 20112012 гг. было выявлено увеличение численности актиномицетов в 4,2-16,1 крат в почвах лесных и в 1,9-4,5 крат в почвах луговых фитоценозов (рис. 2).

г

Удаление от Объекта, ки Рис. 2. Динамика общей численности актиномицетов (на среде с пропионагом натрия) в почвах лесных (а) и луговых (б) фитоценозов за период работы ОХУХО.

Обработка полученных данных методом трехфакторного дисперсионного анализа выявила статистически значимое влияние как природных, так и техногенных факторов на варьирование общей численности почвенных актиномицетов (табл. 3).

Таблица 3

Оценка варьирования общей численности актиномицетов в почве за период работы ОХУХО по данным дисперсионного анализа

Источник варьирования # К р

Продолжительность техногенного воздействия 3 1,59 58.52 0,0000

Разновидность почвы 2 1,49 82,51 0,0000

Удалённость от Объекта 1 334656,0 3,70 0,0056

Общее варьирование 193 6,62

Примечание: с1/- число степеней свободы; ЛУ- сумма квадратов; Г- критерий Фищера;

р- уровень значимости.

I

В первую очередь, численность актиномицетов определялось той почвенной разновидностью, в условиях которой происходило формирование комплекса. Продолжительность техногенного воздействия (^=58,52; />=0,0000) и пространственная удалённость от Объекта (/=3,70; ¿>=0,0056), обратно связанная с уровнем техногенной нагрузки на почву, также оказали существенное влияние на изменение численности актиномицетов в почве. При этом степень влияния фактора продолжительности воздействия на почву многократно (15,8 раз) превосходила влияние фактора пространственной удаленности от Объекта. Наряду с увеличением численности, регистрировали возрастание на 38 и 12 % доли актиномицетов в прокариотном комплексе почв луговых и лесных фитоценозов соответственно.

Изменения структуры комплексов почвенных актиномицетов за период производственной деятельности ОХУХО. За период мониторинговых наблюдений (с 2007-2008 по 2011-2012 гг.) в структуре актиномицетных комплексов исследованных почв отмечали перестройки (табл. 4), которые заключались в увеличении относительного обилия стрептомицетов, на фоне снижения обилия микромоноспор, благодаря чему структура комплексов почвенных актиномицетов в 2011-2012 тт. отбора стала в большей степени соответствовать типичной структуре комплексов зональной дерново-подзолистой почвы. Более выражено эти изменения происходили в почвах

Таблица 4

Характеристика комплексов актяномицетов за период работы ОХУХО

Тип фитоценоза № участка Год Частота встречаемости/долевое участие родов, % Индекс Шеннона, бит/г

1 2 3 4

Лес 36 2007 100/7,7 100/65,2 100/9,9 100/17,2 1,40±0,16

2012 100/66,8 100/20,0 100/13,1 40/0,1 1,23±0,13

34 2007 80/9,1 100/46,1 100/44,2 20/0,6 1,33±0,22

2012 100/53,7 100/28,0 100/16,9 80/1,4 0,50±0,08

Луг 43 2007 100/35,8 100/56,3 100/0,8 100/7,1 1,31±0,07

2012 100/65,7 100/26,5 100/5,0 100/2,8 1,23±0,17

84 2008 100/23,6 100/63,7 60/1,0 100/2,7 1,12±0,18

2012 100/74,8 100/22,1 100/2,5 80/0,6 0,94±0,13

3 2007 80/16,5 100/42,8 100/30,8 60/9,9 1,51±0,44

2012 100/46,9 100/45,7 100/7,4 0/0 1,28±0,10

39 2011 100/72,4 100/25,0 100/1,4 80/0,9 0,99±0,11

2012 100/67,0 100/26,2 100/6,2 80/0,6 1Д9±0,04

60 2011 100/58,1 100/35,5 100/4,6 100/1,8 1,29±0,01

2012 100/58,5 100/38,8 100/2,2 60/0,5 1,12±0,06

лесных фитоценозов.

Изменения относительного обилия и частоты встречаемости минорных компонентов (стрептоспорангиумов и олигоспоровых видов) актиномицетного комплекса носили разнонаправленный характер, в зависимости от типа фитоценоза, почвенной разновидности и удалённости от Объекта.

За период с 2007 по 2012 гг., за редким исключением (участок № 34), в почвах не выявлено достоверного сокращения родового разнообразия актиномицетов, которое, в первую очередь, определялось природными свойствами той почвы, в условиях которой происходило формирование комплекса.

Изменение численности и структуры почвенных комплексов стрептоминетов за период производственной деятельности ОХУХО.

Численность доминантного рода 51гер1отусех в образцах, отобранных в пределах одних и тех же площадок системы ГЭМ, увеличилась от 103-104 в 2007 до 105 КОЕ/г в 2013 году (рис. 3).

5,24

в | 2>72

3

5°

1,15

8 £

£ * * %

1°

3,12 2,75 1,63

________ б

■ 2013 □ 2007

3 4 5 6 ^ N (IV, КОЕ/г)

Рис. 3. Динамика численности стрептомицетов (на казеин-глицериновом агаре) в почвах луговых (а) и лесных (б) фитоценозов за период работы ОХУХО.

Увеличение численности стрептомицетов в почвах, удаленность которых от Объекта не превышала 2,7 км, было более значительным (от 103-104 до 105

КОЕ/г), чем при удалении почвы на большее расстояние (3,12 и 5,24 км) от Объекта.

Наряду с увеличением численности за период мониторинговых наблюдений регистрировали увеличение доли актиномицетов в прокариотном комплексе почв как луговых (33,7-70,5 %), так и лесных (59,9-72,8 %) фитоценозов (рис. 4).

•: 'S

IL

J Ш I

1,15 2,72 5,24

и 2007 ■ 2013

1,63 2,75 3 12 „

Удаленность ог Объекта, км

Рис. 4. Доля актиномицетов в прокариотном комплексе почв луговых (а) и лесных (б) фитоценозов за период работы ОХУХО.

В почвах лесных фитоценозов в 2012 и 2013 гг., по сравнению с 2007 годом, отмечали увеличение относительного обилия видов, принадлежащих к сериям Cinereus Acbiomogenes (на 15,6 %), Cinereus Aureus (на 0,3-5,0 %) (табл. 5),

Таблица 5

Изменения в структуре комплексов почвенных стрентомицстов за период работы ОХУХО

Фитоценоз

Лес

Луг

№ участка/ удаление, км

7/

1,63

36/ 2,75

34/ 3,12

3/ 1,15

43/ 2,72

73/ 5,24

Год

2007

2013

2012

2013

2007

2012

2013

2007

2012

2013

2007

2012

2013

2007

2013

Индекс Шеннона, бит/г

0,38±0,42 1,21±0,11

1,42±0,16

1,56±0,20

1,39±0,54

1,52±0,28

1,68±0,15

0,16±0,36

1,98±0,29

1,39±0,13

1,77±0,16

1,43±0,19

1,23±0,23

0,53±0,16

1,87±0,16

Примечания: 1) Предсгавители секций и серий: 1 - Cinereus Achromogenes; 2 - Cinereus Chromogenes; 3 - Cinereus Aureus; 4 - Cinereus Violaceus; 5 - Roseus Ruber; 6 - Imperfectus; 7 - Helvolo-Flavus Helvolus; 8 - Albus Albus; 9 - Albus Albocoloratus;

2) после знака «±» указано стандартное отклонение;

3) ■ доминирующие типичные частые ШШ типичные редкие ЕЗ

I | вид не встречается.

случайные

Представители серий Cinereus Chromogenes, Cinereus Aureus, Albus Albus из разряда редких и случайных перешли в разряд типичных частых и доминирующих видов. Наблюдали элиминацию из комплекса видов секций и серий Cinereus Achromogenes и Albus Albus, лишенных выраженной окраски, при увеличении доли окрашенных видов из секций и серий Cinereus Chromogenes, Helvolus, Imperfectus, что может свидетельствовать в пользу наличия загрязнения почвы.

Для большинства исследованных почв в 2013 году, по сравнению с начальным периодом наблюдений, фиксировали увеличение количества доминантов в комплексе стрептомицетов и видового разнообразия.

Глава 4. Выявление адаптационных реакций почвенных стрептомицетов на отдельные продукты деструкции химического оружия

Реакция актиномицетов на внесение в почву метилфосфоновой кислоты. В ходе исследования сукцессионной динамики численности актиномицетов в почвенных микрокосмах, отмечен стимулирующий эффект внесения в почву высокой концентрации (0,1 моль/дм3) МФК, выразившийся в увеличении продолжительности сукцессии. На уровне отдельных родов актиномицетов выявлена устойчивость микромоноспор и стрептоспорангиумов к МФК, тогда как представители рода Streptomyces и олигоспоровые формы, напротив, проявили чувствительность к МФК в диапазоне концентраций 0,0001-0,01 и 0,001-0,1 моль/дм3 соответственно (рис. 5).

И л

О4 -Ä

ё2 Z о & о

14

21 3

О4

и

ё2

о

14

21

—♦— Streptomyces - «- Micromonospora Streptosporangium

—«— олигоспоровые формы

21 Сутки

Рис. 5. Динамика численности представителей различных родов актиномицетов в ходе сукцессии, инициированной увлажнением дерново-подзолистой почвы дистиллированной водой (а); раствором фосфатного буфера (б); раствором МФК в концентрациях 0,0001 (в); 0,1 (г) моль/дм3.

Действие метилфосфоновой кислоты на прорастание спор стрептомицетов. При исследовании динамики прорастания спор & хаШоШкш

135.4 в присутствии возрастающих доз МФК установили, что максимальное ингибирующее действие МФК (0,0001-0,1 моль/дм3) на интенсивность прорастания спор имело место на первом этапе сукцессии (24 ч.) и с течением времени ослаблялось в два раза, однако не устранялось полностью (рис. 6).

контроль

МФК 0,0001 моль/дм3 МФК 0,01 моль/дм3 МФК 0,1 моль/дм3

48 120-

Время, ч

Рис. 6. Динамика интенсивности прорастания спор 81гер1отусея хаШосШсш 135.4 при различных концентрациях МФК в почве.

К моменту завершения эксперимента (120 ч.), на фоне увеличения доли проросших спор во всех вариантах, отмечали ингибирующее действие МФК только в концентрациях 0,01 и 0,1 моль/дм3, а в концентрации 0,0001 моль/дм3 МФК уже не оказывала негативного действия на интенсивность прорастания спор.

Действие пирофосфата натрия на кинетику роста и физиологические свойства стрептомицетов. При выращивании стрептомицетов на плотной среде с добавлением ПФН в концентрациях до 0,0005 моль/дм3 регистрировали увеличение радиальной скорости роста от 0,011-0,472 до 0,055-0,065 мм/час у всех исследованных штаммов стрептомицетов. В случае с более высокими концентрациями ПФН (0,001-0,01 моль/дм3), скорость радиального роста культур снижалась, за исключением штамма S. werraensis 88.6, для которого возрастание отмечено во всем диапазоне исследованных концентраций ПФН.

В жидкой питательной среде при продолжительном (14-21 сутки) воздействии 1хЮ"2 моль/дм3 ПФН на культуру S. wedmorensis 38.11 наблюдали ингибирующее действие ПФН на накопление сухой биомассы (рис. 7 а), и угнетение (на 21 сутки) антагонистической активности стрептомицета в отношении грибов рода Fusarium (рис. 7 б), по сравнению с контролем.

- контроль ———— 0,0001 моль/дм3 ■0,001 моль/дм3 ....... 0,01 моль/дм3

0,0001 0,001 0,01

ПФН, моль/дм3

f 14 сутки ■ 21 сутки

Рис. 7. Динамика накопления биомассы штаммом Streptomyces wedmorensis 38.11 в среде с различными концентрациями ПФН (а) и средние значения зон угнетения роста Fusarium oxysporum Ul, F. culmorum Т8, F. avenaceum 7/2 водорастворимыми метаболитами Streptomyces wedmorensis 38.11 при разных концентрациях ПФН (б).

Реакция стрептомицетов на мышьяк в чистых культурах. При изучении интенсивности прорастания спор стрептомицетов в присутствии мышьяка, регистрировали на протяжении всего периода наблюдений (21 сутки) стимулирующее действие его низкой концентрации (1><10'2 моль/дм) на процесс прорастания спор (рис. 8). Более высокая концентрация мышьяка (1ХЮ-1 моль/дм3) в среде, напротив, ингибировала этот процесс к заключительному этапу сукцессии (21 сутки).

30

и

• контроль

* Аз 0,01 моль/дм3

♦ А в 0,02 моль/дм3 ■ Аб 0,1 моль/дм3

2' Сутки

Рис. 8. Динамика интенсивности прорастания спор $№ер1отусе$ осЬг\/ег 103.4 при различных концентрациях мышьяка в почве.

Изучение накопления биомассы культурами стрептомицетов в жидкой среде с добавлением мышьяка, показало, что выделенный из импактной по мышьяку почвы штамм 38.11 характеризовался, по сравнению со штаммом -140.4, изолированным из фоновой почвы, большей устойчивостью к токсиканту (рис. 9). Это проявилось в увеличении интенсивности накопления биомассы, по сравнению с контролем, вплоть до 14 суток (рис. 9 б). Мышьяк в высоких концентрациях (0,003-0,02 моль/дм3), как и в случае со спорами, ингибировал накопление биомассы стрептомицетом.

0 3 7 As 0,02 моль/дм3

14 21 Сутки

0 3 7 14 21

контроль----Ав 0,003 моль/дм3

Рис. 9. Динамика накопления биомассы ЗкерГотусея \vedmorensis 38.11 (а) и £ ЬоЯгоретгя 140.4 (б) в градиенте концентраций мышьяка.

Добавление от 3x10"4 до 6x10"3 моль/дм3 мышьяка в среду для культивирования БКерЮтусея \vedmorensis 38.11 вызывало увеличение антифунгальной активности штамма по сравнению с контролем (рис. 10).

Sog

•а л £

• Fusarium oxysporum И-1 □ Fusarium culmorum Т-8 И Fusarium avenaceum 7/2

0,0003 0,003

0,006 0,02

As, моль/дм3

Рис. 10. Зоны угнетения роста грибов водорастворимыми метаболитами ЗгерМтусея \vedmorensis 38.11 в зависимости от концентрации мышьяка в культуральной среде.

Таким образом, реакция природных изолятов стрептомицетов на мышьяк определялась концентрацией токсиканта, продолжительностью его воздействия, а также характером почвы, служившей источником выделения культуры.

Способность природных изолятов к синтезу биологически активных веществ. В ходе изучения структуры комплексов актиномицетов в верхних горизонтах почв, вблизи ОХУХО «Марадыковский» в чистую культуру были выделены более 220 штаммов стрептомицетов. Изучение их функциональных свойств позволило выявить среди них культуры с антагонистической активностью в отношении грибных (37 штаммов) и бактериальных фитопатогенов (5 штаммов). Наибольшее количество антагонистически активных штаммов выделено из почв с повышенным содержанием мышьяка и органического азота (выпас скота на пастбище).

Более 50 % стрептомицетов, выделенных из почв территории СЗЗ и ЗЗМ ОХУХО «Марадыковский», обладали целлюлозолитической активностью. При этом продуценты целлюлаз встречались как в почвах луговых, так и лесных фитоценозов, однако за шестилетний период мониторинговых наблюдений их доля от общего количества выделяемых природных изолятов сократилась на 11 и 16 % соответственно

Таким образом, изучение антагонистической и целлюлозолитической активности, показало, что, несмотря на снижение доли метаболически активных штаммов, стрептомицеты в прилегающих к Объекту почвах в целом не утратили за период мониторинговых наблюдений свои функциональные свойства.

ВЫВОДЫ

1. Численность актиномицетов в ряду исследованных подзолистых и дерново-подзолистых почв территории санитарно-защитной зоны и зоны защитных мероприятий объекта хранения и уничтожения химического оружия «Марадыковский» изменялась от 104 до 106 КОЕ/г почвы. Комплекс почвенных актиномицетов представлен родами 81гер1отусе$, Мкготопоярога, 5&ерШрогап&ит и олигоспоровыми формами актиномицетов. Долевое участие актиномицетов в прокариотном комплексе почвы составило от 17,4 до 59 %.

2. Факторами, определяющими численность и структуру комплексов актиномицетов в исследованных почвах лесных и луговых фитоценозов, являются: тип фитоценоза, разновидность почвы, пространственная удаленность от Объекта, продолжительность техногенного воздействия. Достоверное влияние техногенного фактора на варьирование численности, разнообразия и долевого участия в комплексе представителей отдельных таксонов является основанием к использованию мицелиальных прокариот в экологической оценке состояния почвенной микробной системы.

3. Впервые в сравнительном аспекте охарактеризованы комплексы актиномицетов в почвах сходного генезиса на различном удалении от объекта. Спустя год после начала эксплуатации объекта «Марадыковский» в режиме

уничтожения химического оружия, в почвах, отобранных в пределах зоны радиусом 8 км от Объекта, комплексы акганомицетов значительно отличались по структуре от комплексов мицелиальных прокариот за пределами данной зоны и в других лесных и луговых фитоценозах гумидной зоны. Структурные отличия заключались в изменении относительного обилия и частоты встречаемости представителей родов Streptomyces и Micromonospora, сокращении или напротив, расширении родового разнообразия, формировании специфического состава доминантов.

4. Установлено, что за исследуемый период работы объекта «Марадыковский» в режиме промышленного уничтожения химического оружия (с 2007 по 2013 гг.) структура почвенных комплексов стрептомицетов претерпела изменения, однако выявленные перестройки не выходили за рамки варьирования, которое может быть обусловлено естественными причинами. В почвах внутри зоны радиусом 2,7 км от Объекта произошли значительные перестройки в родовой и видовой структуре актиномицетных комплексов, свидетельствующие о возвращении их структуры к состоянию, более характерному для почв гумидной зоны, чем ранее.

5. Показано, что синэкологические показатели долевого участия и частоты встречаемости стрептомицетов и микромоноспор в актиномицетном комплексе, доля актиномицетов в прокариотном комплексе почвы, а также варьирование численности стрептомицетов являются параметрами, имеющими наибольшую диагностическую ценность. Элиминация из комплекса стрептомицетов видов секций и серий Cinereus Achromogenes и Albus Albus, лишенных выраженной окраски, при увеличении доли участия окрашенных видов из секций и серий Cinereus Chromogenes, Helvolus, Imperfectus, указывает на возможность техногенного загрязнения почвы.

6. В дерново-подзолистых почвах, характеризующихся по мышьяку даже незначительным (в 1,1-2,1 раза) превышением предельно-допустимой концентрации, увеличилась на порядок численность актиномицетов, по сравнению с аналоговыми почвами фоновых территорий, и более чем в 2 раза снизилось родовое разнообразие их представителей. Основной фон в импактных по мышьяку почвах составили виды рода Streptomyces. Выявлено стимулирующее влияние сверхмалых количеств мышьяка (1x10"2 моль/дм3) на накопление биомассы, антифунгальную активность, интенсивность прорастания спор в чистых культурах актиномицетов. В концентрациях выше 1x10"' моль/дм3 и при продолжительности воздействия более 7-14 суток мышьяк оказывал на актиномицеты противоположные эффекты.

7. Выявлены специфические реакции стрептомицетов на фосфорсодержащие поллютанты. Метилфосфоновая кислота в концентрациях 0,001-0,1 моль/дм3 ингибировала интенсивность прорастания спор на 32-58 % по сравнению с контролем; пирофосфат натрия в концентрациях 1хЮ"2 моль/дм3 и выше угнетал рост вегетативного мицелия, а при 1*10"3 моль/дм3, наоборот, избирательно стимулировал радиальную скорость роста отдельных штаммов стрептомицетов.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

В изданиях, рекомендованных ВАК РФ:

1. Ашихмина,Т. Я. Численность и разнообразие почвенных актиномицетов вблизи объекта по уничтожению химического оружия «Марадыковский» / Т. Я. Ашихмина, Е. В. Товстик, С. Ю. Огородникова и др. // Теоретическая и прикладная экология. - 2012. - № 4. - С. 67-72.

2. Широких, И. Г. Численность и структура комплексов почвенных актиномицетов в районе возможного влияния химически опасного объекта / И. Г. Широких, Е. В. Товстик, Е. В. Дабах, Т. Я. Ашихмина // Почвоведение. - 2013. - № 7. — С. 860-866.

3. Товстик, Е. В. Динамика актиномицетных комплексов в почвах лесных фитоценозов вблизи объекта по уничтожению химического оружия «Марадыковский» / Е. В. Товстик, С. Ю. Огородникова, Е. А. Домнина, И. Г. Широких // Теоретическая и прикладная экология. - 2013. - № 4. - С. 88-92.

4. Широких И. Г. Реакция почвенных актиномицетов на загрязнение почвы мышьяком / И. Г. Широких, Е. В. Товстик, Т. Я. Ашихмина, А. А. Широких // Агрохимия.-2014.-№ 1.-С. 82-89.

В прочих изданиях:

5. Широких, И. Г. Актиномицеты в почвах луговых и пастбищных угодий в зоне влияния объекта по уничтожению химического оружия «Марадыковский» / И. Г. Широких, Е. В. Товстик, Т. Я. Ашихмина // Вестник института биологии Коми НЦ УрО РАН. - 2008. - № 6. - С. 26-29.

6. Товстик, Е. В. Актиномицеты лесных и луговых почв в зоне влияния объекта по уничтожению химического оружия в пос. Мирный Кировской области / Е. В. Товстик, И. Г. Широких, Т. Я. Ашихмина // Биологический мониторинг природно-техногенных систем: Матер. Всерос. науч-практич. конф. с междунар. участием в 2 частях (Киров, 29-30 ноября 2011 г.). - Киров: ООО «Лобань», 2011. —Ч. 1.-173-176.

7. Товстик, Е. В. Реакция почвенных актиномицетов на загрязнение среды мышьяком / Е. В. Товстик, И. Г. Широких // Адаптационные реакции живых систем на стрессорные воздействия: Матер. Всерос. молодежной конф. (Киров, 23-25 апреля 2012 г.). - Киров: ООО «Лобань», 2012. - С. 100-104.

8. Товстик, Е. В. Изучение динамики накопления биомассы актиномицетов под действием хлорида мышьяка / Е. В. Товстик, И. Г. Широких // Биодиагностика состояния природных и природно-техногенных систем: Матер. X Всерос. науч-практич. конф. с междунар. участием. Книга 1. (Киров, 4-5 декабря 2012 г.).- Киров: ООО «Лобань», 2012. - С. 221-224.

9. Товстик Е. В. Биодиагностика почвы в зоне действия объекта по уничтожению химического оружия / Е. В. Товстик, И. Г. Широких // Биодиагностика в экологической оценке почв и сопредельных систем: тезисы докл. Междунар. конф. (Москва, 4-6 февраля 2013 г.). - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2013.-С. 212-212.

10. Товстик, Е. В. Изменение почвенного комплекса стрептомицетов вблизи объекта хранения и уничтожения химического оружия / Е. В. Товстик // Молодежь и наука на Севере: Матер, докл. II Всерос. (XVII) молодежной науч. конф. в 2 томах (Сыктывкар, Республика Коми, Россия, 22-26 апреля 2013 г.).-Сыктывкар, 2013.-Т. 1.-С. 137-138.

И. Товстик, Е. В. Динамика структуры актиномицетных комплексов в почвах луговых угодий вблизи химически опасного объекта «Марадыковский» / Е. В. Товстик, И. Г. Широких // Молодые ученые - аграрной науке Евро-Северо-Востока: Матер. 1-й Молодежной конф. (Киров, 5 июля 2012 г.). - Киров: НИИСХ Северо-Востока, 2013. - С. 60-64.

12. Широких, И. Г. Реакция актиномицетов на пирофосфат натрия / И. Г. Широких, Е. В. Товстик // Актуальные проблемы региональной экологии и биодиагностика живых систем: Матер. XI Всерос. науч-практич. конф-выставки инновац. экол. проектов с междунар. участием (Киров, 26-28 ноября 2013 г.). -Киров: Изд-во ООО «Веси», 2013. - С. 195-197.

13. Товстик, Е. В. Действие метилфосфоновой кислоты на споры стрептомицетов / Е. В. Товстик, И. Г. Широких, С. Ю. Огородникова // Закономерности функционирования природных и антропогенно трансформированных экосистем: Матер. Всерос. науч. конф. (Киров, 22-23 апреля 2014 г.). - Киров: Изд-во ООО «ВЕСИ», 2014. - С. 204-206.

14. Товстик, Е. В. Диагностический потенциал почвенных актиномицетов в экологической оценке агроэкосистем / Е. В. Товстик // Актуальные проблемы биологии и экологии: Матер, докл. XXI Всерос. молодежной науч. конф. -Сыктывкар, 2014. - С. 268-272.

15. Товстик, Е. В. Реакция актиномицетов на загрязнение почвы метилфосфоновой кислотой / Е. В. Товстик, И. Г. Широких, С. Ю. Огородникова // Биодиагностика состояния природных и природно-техногенных систем: Матер. XII Всерос. науч-практич. конф. с междунар. участием. Книга 1. (Киров, 2-3 декабря 2014 г.). - Киров: Изд-во ООО «Веси», 2014. - С. 289-293.

16. Товстик, Е. В. Изучение реакций актиномицетов на фосфорсодержащие поллютанты / Е. В. Товстик, И. Г. Широких // Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов: Матер. Всерос. симпозиума с междунар. участием (Москва, 24-27 декабря 2014 г.). - М.: МАКС Пресс, 2014. - С. 229-229.

Подписано в печать 05.03.2015 г. Формат 60х841/16. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 9.

Отпечатано с оригинал-макета. Типография ФГБНУ «НИИСХ Северо-Востока» 610007, Россия, г. Киров, ул. Ленина, 166 а.