Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Комплексный анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников: молекулярно-генетические и фенотипические характеристики
ВАК РФ 03.02.07, Генетика
Автореферат диссертации по теме "Комплексный анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников: молекулярно-генетические и фенотипические характеристики"
На правах рукописи
Поспелова Наталья Ивановна
КОМПЛЕКСНЫЙ АНАЛИЗ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ФОРМЫ
РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И/ИЛИ ЯИЧНИКОВ: МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
03.02.07 — генетика
Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук
Москва-2011
2 1 ДПР 2011
4844314
Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетическом научном центре РАМН
Научный консультант: доктор биологических наук, профессор
Карпухин Александр Васильевич
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор Мазуренко Наталья Николаевна
доктор биологических наук Наседкина Татьяна Васильевна
доктор биологических наук, профессор Залетаев Дмитрий Владимирович
Ведущая организация: Институт молекулярной генетики РАН
Защита состоится «мая_2011 г. в ^^ часов на заседании
Диссертационного совета Д 001.016.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетическом научном центре РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Медико-генетического научного центра РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.
Автореф ерат разослан «_»__" 2011г.
Учёный секретарь Диссертационного совета Д 001.016.01 по защите докторских и кандидатских диссертаций, доктор медицинских наук, профессор
Актуальность исследования.
В структуре онкологической заболеваемости лидирующее положение занимают опухоли органов женской репродуктивной системы. Наиболее распространенным онкологическим заболеванием является рак молочной железы (РМЖ). РМЖ занимает 1-е ранговое место (19,8%) в структуре онкологической заболеваемости среди женщин в России (Давыдов М.И. и Аксель Е.М., 2008). Рак яичников (РЯ) встречается реже и занимает 6-е ранговое место (4,9%) в структуре онкологической заболеваемости среди женщин. За пятилетний период 2001-2006 гг. отмечен заметный прирост заболеваемости опухолями яичников в России - на 5,8% (Давыдов М.И.и Аксель Е.М., 2008). Одновременно с ростом заболеваемости растёт и смертность от РМЖ и РЯ.
Самым распространённым онкологическим синдромом является наследственный рак молочной железы и/или яичников (НРМЖ/РЯ). Одним из достижений молекулярной генетики явилось картирование генов, ответственных за наследственную предрасположенность к НРМЖ/РЯ - генов BRCA1 и BRCA2. Терминальные мутации генов BRCA1/2 являются высокопенетрантными и приводят к 50-90% риску возникновения заболевания. Пенетрантность мутаций гена BRCA2 ниже в отношении опухолей яичника. Особенностью гена BRCA2 является повышенный риск возникновения рака молочной железы у мужчин - носителей мутации в этом гене. За прошедший после выделения генов период накоплена значительная информация о терминальных мутациях в генах BRCA1/2. Наблюдаются значительные различия в распределении мутаций в разных популяциях. В связи с этим, определение спектра мутаций в популяциях важно как с фундаментальной точки зрения, так и для решения практических задач медицинской генетики. Изучение характеристик мутаций на выборках из разных популяций позволяет получить научную информацию по возникновению и распространению мутаций, их связи с клиническими проявлениями. Особенности структуры генов предрасположенности дают информацию о взаимосвязи генотипа и фенотипа, важны для выяснения вариации риска возникновения рака в разных органах.
Рак молочной железы является наиболее частой онкопатологией при синдроме Ли-Фраумени, включающего также такие злокачественные новообразования, как мягкотканые саркомы, опухоли головного мозга, адренокортикальный рак и некоторые другие. Молекулярно-генетической основой в этом случае являются герминальные мутации в гене ТР53. Пенетрантность мутаций в гене ТР53 очень высока и достигает у женщин почти 100% за счёт значительного риска возникновения РМЖ в молодом (20-40 лет) возрасте. В тоже время, частоты мутаций в гене ТР53 в выборках РМЖ вне синдрома Ли-Фраумени недостаточно определены, и вклад ТР53-мутаций в развитие РМЖ молодого возраста не изучен.
Вместе с тем, мутации в известных генах не охватывают весь спектр семейного рака молочной железы. В связи с этим проводятся исследования по идентификации
дополнительных генов. Имеются основания полагать, что наследственную предрасположенность к этому заболеванию могут обусловливать варианты в нескольких генах (полигены), приводящих в отдельности к невысокому риску, но с высокой частотой представленных в популяции. Такие генетические варианты могут действовать совместно, обеспечивая мультипликативный эффект в отношении риска развития рака.
Семьи с наследственной предрасположенностью, обусловленной наследованием ВЛСЛ-мутации, гетерогенны как по отягощенности раком молочной железы наряду с раком яичников, так и по числу пораженных заболеванием членов семьи. Эти характеристики семей могут определяться носительством мутации в одном из генов предрасположенности, свойством самой мутации, а также наследованием других низкопенетрантных генетических вариантов. Весьма актуальным является изучение генетических причин модификации риска возникновения РМЖ либо РЯ. Механизмом такой модификации может быть влияние аллелей других генов, продукт которых обладает изменённой функциональной активностью. Идентификация и выяснение роли вариантов известных генов является важной задачей. В качестве таких аллелей могут выступать полиморфные варианты в самих генах-супрессорах ВКСА1 и ВИСА2, ТР53, а также в генах, продукты которых функционально взаимодействуют с белками ВЯСА. Несмотря на наличие ряда работ в этом направлении, исследование данного вопроса нельзя признать достаточным. Выявление корреляции генотип-фенотип существенно для углубления понимания молекулярных механизмов действия генов-супрессоров в злокачественной трансформации клеток и важно для прогнозирования риска возникновения рака определенной локализации.
Возможности ранней диагностики РМЖ и РЯ в значительной степени не реализованы. Особенно это актуально для России, где до 40% первичных больных выявляется с Ш-1У стадиями заболевания. Обнаружение мутации в гене предрасположенности является объективным критерием для формирования групп риска в отношении развития рака той или иной локализации, такая информация необходима в практической онкологии для индивидуализации диагностической, лечебной и профилактической тактики. Более ранний возраст развития наследственного рака молочной железы и яичников, его значительная доля в структуре заболеваемости дополнительно акцентирует важность изучения генов, ассоциированных с риском развития РМЖ/РЯ, и практического использования полученных результатов. Создание алгоритма проведения ДНК-диагностики с учетом индивидуального и семейного анамнеза для выявления наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников создает базу для медико-генетического консультирования на принципиально новой основе.
Цель исследования - комплексный анализ молекулярно-генетических механизмов развития наследственной формы рака молочной железы и яичников и
гетерогенности фенотипических характеристик наследственного рака.
Задачи исследования:
1. изучить спектр, характеристики и частоты мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах BRCA1/2 у больных с наследственной формой рака молочной железы и яичников;
2. изучить свойства конкретных повторяющихся мутаций в отношении развития рака определённой локализации;
3. для выяснения происхождения мутаций определить гаплотипы гена, сцепленные с повторяющимися мутациями;
4. изучить частоты ВЛС4//2-мутаций в семьях, различных по структуре онкологической заболеваемости;
5. среди BRCA1/2-негативных семей изучить мутации в других генах, ассоциированных с наследственной формой рака молочной железы и яичников;
6. определить роль мутаций разных генов в формировании фенотипической гетерогенности рака молочной железы;
7. изучить связь полиморфных вариантов генов с раком определённой локализации (яичники или молочная железа) при мутациях в гене BRCA1.
Научная новизна полученных результатов.
• Впервые изучен спектр мутаций в гене BRCA1 на значительной выборке наследственного рака молочной железы и яичников в России. Показано, что частота мутации 5382insC в гене BRCA1 является наибольшей по сравнению с выборками из других популяций. На основании данных о высокой частоте (68%) мутации 5382insC в российской популяции, анализа частот её встречаемости в европейских и азиатских странах и результатов гаплотипирования гена BRCA1 по микросателлитным маркёрам обосновано вероятное происхождение мутации на территории России, связанное с эффектом основателя. Установлены особенности спектра мутаций в гене BRCA1 - наличие наиболее распространённых мутаций и низкая частота впервые выявленных вариантов. Мутации 2080delA и 4154delA в гене BRCA1 обладают специфическими свойствами, обусловливающими предрасположенность к развитию в основном рака яичников.
• Впервые в России определён спектр мутаций в гене BRCA2, характеризующийся уникальностью мутаций и высокой частотой новых вариантов.
• Впервые определены мутации в генах ТР53, СНЕК2 и MLH1/MSH2/MSH6 среди больных РМЖ, имеющих в семейном анамнезе соответствующую синдромальную патологию. Показана существенная частота терминальных мутаций в гене TP53 среди BRCA/-негативных больных очень молодого возраста.
• Определены частоты мутаций в генах BRCA1/2 в семьях, различных по структуре онкологической заболеваемости. Установлено, что частоты BRCAl/2-иутдлщл различны среди семей с наследственным односторонним РМЖ, двухсторонним РМЖ и раком яичников. Часть семей с наследуемой BRCA/-мутацией характеризуются накоплением рака определенной локализации, вне зависимости от характеристик мутации.
• Показано, что генотип 203А/А в гене BRCA2 и гаплотипы гена PGR ассоциированы с развитием РЯ или РМЖ у BRCAJ-носителя; генотипы R72P и Р72Р гена TP53 ассоциированы с раком при мутации C61G в гене BRCA1.
Научно-практическая значимость работы.
В результате работы разработан и внедрён в клиническую практику алгоритм исследования генов, ассоциированных с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы и/или яичников. В ходе выполнения работы создан банк образцов ДНК больных РМЖ и/или РЯ и их родственников (п=1088); пациенты охарактеризованы по мутациям в генах BRCA1/2, TP53, СНЕК2, MLH1/MSH2/MSH6 и ряду полиморфных генетических вариантов. Выявлен спектр и частоты мутаций в генах предрасположенности при одно- и двухстороннем раке молочной железы, раке яичников, сочетанной формы заболевания, а также некоторых клинических формах РМЖ - РМЖ молодого возраста, РМЖ, ассоциированном с беременностью, РМЖ у мужчин; полученные результаты могут быть использованы для индивидуализации диагностики, лечения и профилактики с целью снижения заболеваемости и смертности.
Существенное значение для практической ДНК-диагностики наследственной предрасположенности имеет определение характеристик и частот мутаций в гене BRCA1. Особенность спектра мутаций в России заключается в преобладании пяти повторяющихся мутаций (5382insC, C61G, 185delAG, 4154delA, 2080delA), которые охватывают до 90% всего спектра. С наибольшей частотой (68%) встречается одна из этих мутаций - 5382insC. Редкие BRCA/-мутации встречаются преимущественно в определённом участке 11 экзона гена - с.3360-4215 п.н. Эти данные обеспечивают возможность проведения скрининговых исследований для определения наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ и формирования групп повышенного риска. Выявленные характеристики некоторых BRCA/-мутаций и идентификация генотипов повышенного риска рака яичников и рака молочной железы создают предпосылки для разработки способа идентификации предрасположенности к возникновению рака определённой локализации при наличии мутации в гене BRCA1.
Результаты исследования необходимы в службе медико-генетического консультирования пациентов с онкологически отягощенным анамнезом.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. В спектре мутаций в гене BRCA1 среди российских больных преобладают три мутации - 5382insC, C6IG, 185delAG. С наибольшей частотой в группах наследственного РМЖ, наследственного двРМЖ и/или РЯ встречается мутация 5382insC.
2. Спектр мутаций в гене BRCA2 характеризуется уникальностью мутаций.
3. Семьи с раком молочной железы и яичников гетерогенны по частотам встречаемости мутаций в генах BRCA1/2. Частота BRCA //2-мутаций наименьшая в семьях с наследственным односторонним РМЖ и наиболее высока семьях с раком яичников.
4. Возникновение повторяющихся BRCA1-мутаций - 2080delA, 4154delA и 5382insC связано с эффектом основателя.
5. Ранний возраст возникновения РМЖ в значительной степени обусловлен мутациями в генах BRCA1/2 и ТР53.
6. Генотип 203А/А в гене BRCA2 и генотипы гена PGR, образованные двумя ОНП (G/T, rsl042838 и Т/А, rs608995), ассоциированы с РМЖ или РЯ у BRCA1-носителя.
Апробация работы
Основные положения и результаты работы были представлены и обсуждены на российских и международных научно-практических конференциях и съездах: VII-IX, XII, ХШ, XIV Российских Онкологических Конгрессах (Москва, 2003-2005; 2008-2010 гг.), III-V Съездах Онкологов и Радиологов стран СНГ (Минск, 2004; Баку, 2006, Ташкент 2008), V-VI Съездах Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005; Ростов, 2010), 10th International Congress Of Human Genetics (Вена, 2001); Всероссийской научно-практической конференции «Молекулярные методы диагностики моногенных заболеваний: возможности и перспективы» (Москва 2006); 4 Российской конференции по фундаментальной онкологии (Санкт-Петербург, 2008), Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная онкология» (Новосибирск, 2008); I—II Российских Интернациональных симпозиумах «Молекулярно-генетическая диагностика злокачественных опухолей человека», Москва 2005; 2009), European Human Genetics Conférences 2001-2009 (Бирмингем; Мюнхен; Прага; Амстердам; Барселона; Вена), 14й1 General Meeting of the Breast Cancer Linkage Consortium (Мадрид 2003); Familial Cancer Conférence (Мадрид 2004; 2008); 3 съезде Всероссийского общества генетиков и селекционеров «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития» (Москва, 2004); Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная онкология» (Новосибирск, 2008); IMPAKT Breast Cancer Conférence (Брюссель, 2009); 7-ой Международной конференции «Молекулярная генетика соматических клеток» (Звенигород, 2009).
Работа апробирована и рекомендована к защите на заседании научного семинара МГНЦ РАМН 1 ноября 2010 года.
Личное участие диссертанта.
Все использованные в работе данные получены при непосредственном участии автора: на этапах постановки цели и задач, разработки методов и их выполнения, проведения исследований, обработки, анализа и обобщения полученных результатов, написания и оформления рукописи.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 62 научные работы, из них 18 - в журналах, рекомендуемых ВАК МОН РФ для опубликования основных научных результатов диссертации на соискание учёной степени доктора наук.
Структура и объём работы.
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания использованных в работе материалов и методов, результатов исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на 260 страницах машинописного текста, содержит 41 рисунок и 56 таблиц. Список цитируемой литературы включает 406 источников.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 1. ПАЦИЕНТЫ.
Критерием отбора при семейном раке молочной железы и яичников было наличие у пробанда одного или более родственников 1/11 степени родства, страдающего каким-либо из указанных заболеваний. Сбор образцов крови пациентов, в основном из Москвы и Центрального региона России, и выяснение индивидуального и семейного анамнеза осуществлялся в Российском Онкологическом Научном Центре им. Блохина сотрудниками лаборатории онкологической генетики (руководитель лаборатории д.м.н. Л.Н. Любченко).
В работе исследованы разные выборки больных РМЖ и/или РЯ, подробные характеристики которых приведены в табл. 1.
Табл. 1. Исследованные выборки пациентов.
№№ Характеристика выборки Размер выборки, человек
1 пациенты с наследственной формой РМЖ/РЯ, из них: - больные РМЖ - больные двРМЖ - больные РЯ - больные РМЖ и РЯ 224 122 44 29 29
2 пациенты с диагнозом РЯ (неотобранная выборка РЯ) 101
3 пациенты с диагнозом РМЖ (спорадический РМЖ) 122
4 пациенты с ранней манифестацией РМЖ (возраст диагноза до 31 года) 22
5 пациенты с диагнозом РМЖ на фоне беременности (РМЖ-АБ) 88
6 пациенты молодого возраста с диагнозом РМЖ, не связанного с беременностью 90
7 пациенты с листовидной опухолью молочной железы 7
8 мужчины с диагнозом РМЖ 8
9 контрольная группа онкологически здоровых женщин, семьи которых не отягощены РМЖ и РЯ 120
10 ДНК-диагностика 426
Всего 1208
2. АНАЛИЗ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ ГЕНОВ.
Определение мутантных фрагментов ДНК генов BRCA1, BRCA2, TPS3, MLH1, MSH2, MSH6, СНЕК2 проводили с помощью электрофоретического метода с последующим подтверждением наличия мутации и выявлением ее характеристик путем секвенирования.
При выполнении указанной схемы проводили следующие процедуры: выделение ДНК из образцов крови пациентов; амплификацию экзонов изучаемых генов; электрофоретический анализ продуктов амплификации; секвенирование фрагментов ДНК, идентифицированных в качестве мутантных.
Выделение ДНК. ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови пациентов. Выделение ДНК проводили стандартным методом фенол-хлороформой экстракции.
Полимеразная цепная реакция. При проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР) был использован набор синтезированных праймеров ("Синтол", Россия), обеспечивающих амплификацию экзонов с примыкающими частями интронов (50-100 п.н.). Были определены оптимальные условия ПЦР, экспериментально отработанные для всех синтезированных праймеров, такие как температура отжига, параметры циклов амплификации, состав буфера. Вследствие больших размеров 11 экзон BRCA1 был разбит на 18 более коротких фрагментов, 10 и 11 экзоны BRCA2 - на 5 и 15 фрагментов.
После завершения ПЦР проверяли качество реакции, осуществляя электрофорез продуктов амплификации в 1,8% агарозном геле. Электрофорез проводили в горизонтальном аппарате для электрофореза SUB CELL 96 BIO-RAD
(США) при постоянной силе тока 130 мА в течение 15 мин. Амплифицированные фрагменты ДНК окрашивали бромистым этидием и анализировали на трансиллюминаторе Whatman-Biometra TL-3 в ультрафиолетовом свете.
После амплификации пробы инкубировали при 68,0 "С в течение 50 мин для образования гетеродуплексов.
Электрофорез. Для электрофоретического определения мутантных фрагментов ДНК был использован конформационно - чувствительный гель электрофорез (Conformation Sensitive Gel Electrophoresis - CSGE), обладающий высокой чувствительностью и универсальностью. Разделение гомо- и гетеродуплексов происходит за счёт конформационных различий, которые возникают при добавлении в гель денатурирующих растворителей. Основными преимуществами используемого метода являются независимость от природы исследуемого фрагмента ДНК и его высокая чувствительность. То есть, исследование фрагментов ДНК разной длины и разного нуклеотидного состава можно проводить в одних и тех же условиях.
Основная работа по определению мутаций в генах проводилась с использованием гелей большой протяженности на аппаратах для секвенирования (Macrophor).
В работе были использованы следующие параметры электрофореза: состав геля: 10% полиакриламид, 10% этиленгликоль, 15% формамид в 1-кратном ТТЕ буфере; толщина геля 0,8 мм. Электрофорез проводили при 550 В в течение 24 часов.
Часть работы проводилась с использованием коротких гелей на стандартных аппаратах для электрофореза VE-3 (Хеликон). Найдены условия, позволяющие достигать в коротком геле необходимой чувствительности для разделения гомо- и гетеродуплексов.
Метод анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК -SSCP. В ряде случаев использовали метод SSCP. Состав геля: 6%- или 10% акриламид, метилен-бис-акриламид (соотношение акриламида и метилен-бис-акриламида 39:1), ТВЕ буфер (рН 8,9). Толщина геля 0,8 мм. Электрофорез проводили при 120-280 В в течение 6-16 часов (в зависимости от размеров фрагмента).
Окраска геля. Окрашивание геля проводилась методом серебрения, в некоторых случаях использовали окрашивание бромистым этидием.
ПЦР в реальном времени. ПЦР-РВ проводили на термоциклере Rotor-Gene 3000 (Corbett Research, Australia) в 25 мкл реакционной смеси. Состав реакционной смеси: по 0,25 мкМ каждого оригинального праймера; по 200 мкМ нуклеозидтрифосфата; 1,0 единица активности Taq-полимеразы (СибЭнзим, Россия); буфер для ПЦР (670 мМ трис рН 8,4, 166 мМ сульфата аммония, 20 мМ MgCl2 и 100 мМ Р - меркаптоэтанол); интеркалирующий краситель SYBR Greenl 0,1 мкл (ЮОх). Оптимальные условия для проведения ПЦР были подобраны экспериментально.
Для вычисления числа копий использовали сравнительный дельта-дельта-Ct метод, который позволяет трансформировать значения Ct в относительное количество
ДНК и таким образом сравнить число копий определяемого гена и гена сравнения. При этом единице соответствует диплоидное число копий ДНК, а значению 0,5 -вдвое уменьшенное количество копий (гетерозиготная делеция).
Анализ полиморфизма R72P в гене ТР53. ОНП R72P (rs 1042522) в 4 экзоне гена проводили с помощью ПЦР геномной ДНК с последующим анализом длины рестрикционных фрагментов (RFLP). Полученный фрагмент ДНК длиной 152 п.н. подвергали рестрикции с помощью фермента BstFNl (Fermentas) при 60° в течение ночи. Аллель R72 имеет длины 50 и 102 п.н., редкий аллель 72Р - 152 п.н. Разделение фрагментов проводили при помощи электрофореза в 8% акриламидном геле.
Анализ полиморфизма Int3dupl6 в гене ТР53. Изучение варианта Int3dupl6 в 3 интроне гена проводили с помощью ПЦР фрагмента ДНК, включающего 3-4 экзоны и короткий 3 нитрон гена. Длина разных аллелей гена отличается на 16 нуклеотидов. Анализ проводили при помощи электрофореза в 8% акриламидном геле.
Анализ полиморфизма V660L в гене PGR. ОНП V660L в 4 экзоне гена проводили с помощью PCR геномной ДНК с последующим анализом длины рестрикционных фрагментов (RFLP). Полученный фрагмент ДНК длиной 306 п.н. подвергали рестрикции с помощью фермента Bsrl (Fermentas) при 65° в течение ночи. После рестрикции аллель V660 характеризуется 4 фрагментами длиной 47, 22, 157 и 80 п.н., редкий аллель 660L - 3 фрагментами: 47, 179 и 80 п.н. Разделение фрагментов проводили при помощи электрофореза в 8% акриламидном геле.
Анализ полиморфизма 3' (rs608995) в гене PGR. Анализ 3' ОНП проводили с помощью ПЦР геномной ДНК. Для анализа продуктов ПЦР использовали метод SSCP.
Анализ гаплотипов гена BRCA1 по микросателлитным маркерам. Гаплотипы гена определяли по 5 микросателлитным маркёрам, локализованных на хромосоме 17q внутри гена или близлежащих локусах. От центромере к теломере маркёры расположены в следующем порядке: D17S1320, D17S855, D17S1322, D17S1323, D17S1325 (National Center for Biotechnology Information (NCBI) Database, ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov). Праймеры для амплификации фрагментов ДНК получены из базы NCBI. ПЦР проводили по стандартной схеме с добавлением в буфер 4% ДМСО. Для анализа длины аллелей использовали электрофорез в 8% полиакриламидном геле. Пробег красителя (ксиленцианол) составлял не менее 40 см.
Секвеиирование. Очистку амплифицированной ДНК для секвенирования проводили с помощью наборов Wizard (Promega, США). Секвеиирование проводилось при помощи автоматического секвенатора совместно с сотрудниками Института молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта РАН. Анализ результатов секвенирования осуществляли с помощью программ Chromas и BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast).
Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия %2 на основе четырехклеточных
таблиц. При необходимости был использован точный критерий Фишера. Статистический анализ выполняли с помощью стандартного пакета «Statistica» (версия 6.0, «Statsoft Inc.», США).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
I. ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНАХ-СУПРЕССОРАХ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С РМЖ И/ИЛИ РЯ
В настоящее время известно, что наследственная предрасположенность к РМЖ и/или РЯ в значительной части обусловлена наследуемыми мутациями в генах, в основном являющихся генами-супрессорами опухолевого роста. В большинстве случаев наследственная предрасположенность к РМЖ и РЯ связана с мутациями в двух высокопенетрантных генах-супрессорах - BRCA1 и BRCA2. Некоторая часть заболеваний обусловлена мутациями в других генах - ТР53, MLH1/MSH2/MSH6, СНЕК2 и др. Несмотря на значительные усилия многочисленных исследовательских групп, некоторая доля даже очень высокоотягощённых РМЖ/РЯ-семей не имеет охарактеризованной молекулярно-генетической патологии. В работе на выборке больных, наблюдавшихся в РОНЦ им. Н.Н. Блохина, проведена оценка частот и характеристик терминальных мутаций в генах (BRCA1, BRCA2, ТР53, MLH1, MSH2, MSH6, СНЕК2), ассоциированных с наследственной предрасположенностью к РМЖ и/или РЯ.
Молекулярно-генетический анализ генов BRCA1 и BRCA2 проведён для 224 больных с наследственной формой РМЖ и/или РЯ. Идентифицировано 104 пациента (46,4%) с мутацией в одном из генов. В гене BRCA1 обнаружено 93 мутации (13 различных - табл. 2), в гене BRCA2 -11 мутаций (10 различных - табл. 3).
Одиннадцать мутаций из 13 являются мутациями со сдвигом рамки считывания в результате делеции или вставки 1, 2 или 5 нуклеотидов. Вследствие образования преждевременного стоп-кодона синтезируется укороченный нефункциональный белок, теряющий свои свойства в отношении супрессии опухоли. Миссенс-мутация С6Ю локализуется в высококонсервативном участке ДНК. Кодируемый им участок RING домена BRCA1 содержит консервативные 2п2+-связывающие цистеиновые остатки (C3GC4), критические для димеризации белка с BARD1. Мутация C61G приводит к потере убиквитин-лигазной активности белка и вызывает радиочувствительность к радиации (Brzovik P. et al., 2001; Ruffner Н. et al., 2001). Была обнаружена также мутация с делецией 14-17 экзонов гена BRCA1 -обозначенная нами, как exonl4-17del. Первоначально была выявлена потеря гетерозиготности полиморфного гаплотипа гена в 15 и 16 экзонах гена. С помощью ПЦР в режиме реального времени обнаружена деления одного аллеля, включающая 14-17 экзоны. Делеция подтверждена ПЦР с помощью найденных окаймляющих её праймеров. Три мутации - 2297delT, 3366del5 и exonl4-17del (3,2%) не описаны в Международной базе данных BIC database (Breast Cancer Information Core Database)
для каких-либо других популяций и являются новыми, впервые выявленными в российской выборке больных.
Табл. 2. Спектр мутаций в гене ВЯСА1.
экзон название мутации используемое в тексте название число пациентов
ДНК белок
2 с.185с!е1Аа р.С1и23ГзХ39 185с1е1АО 7
5 с.ЗООТЛЗ р.Суз6Ш1у СбЮ 8
11 с.2297с!е1Т р.Ьеи726ГзХ735 2297(1 е1Т 1
11 с.2080тзА рХуз6541зХ 672 2080тБА 1
11 с.2080с1е1А р.Ьуз654ГзХ700 2080с1е1А 3
11 с.3366_3370йе15 р.МеШ83Г$Х1084 3366(1с15 1
11 с.3411_Ше1СТ рХеи1098ГзХ1101 341 Ые1СТ 1
11 с.3448тзА р.Ьуз11^X1114 3448тэА 1
11 с.3747тэА р.01и12Ю1!зХ1219 3747тзА 1
11 с.3819_3823<3е15 р. Уа11 234ГбХ1 241 38Ше15 1
11 с.4154с1е1А р.01и1345ГзХ1365 4154с1е1А 3
20 с.5382тБС р.01п175бГзХ1829 5382тзС 64
14-17 ехоп14-17(1с1 9 ехоп14-17ёе1 1
жирным шрифтом выделены мутации, не значащиеся в базе данных В1С.
В гене ВЯСА2 идентифицировано 10 различных мутаций (табл.3): 6 различных мутаций со сдвигом рамки считывания, 3 различных нонсенс-варианта и 1 мутация сплайсинга - Р3039Р.
Табл. 3. Спектр мутаций в гене ВЯСА2.
экзон название мутации используемое в тексте название число пациентов
ДНК белок
8 с.886_887с1еЮТ р.Уа1220ГзХ223 886delGT 1
10 С.1642С/Т р.01п472Х ()412Х 1
10 с.2001_2004с1е1ТТАТ р.11е59Н5Х612 200Ые14 1
11 е.3295ш8Т р.А$п1023Г$Х1023 3295ш$Т 1
11 с.6174с!е1Т Р.8ег1982ГзХ2003 6174с1е1Т
И С.6352С/Т р.ап2042Х (}2042Х 1
21 С.8908С/Т р. Оп2894Х <32894Х 1
23 С.9345С/А р.Рго3039Рго Р3039Р 1
25 с.9498с!е1С р.РЬеЗОЭОГвХЗЮЗ 9498ае1С 1
25 с.9643(1е1ТТТ (1с1РЬе Р3090(1е1 1
жирным шрифтом выделены мутации, не значащиеся в базе данных В1С.
В случае мутации Р3039Р вследствие нуклеотидной замены гуанина на аденин в последней позиции 23 экзона происходит разрушение донорского участка сплайсинга. Среди ВКСА2-мутаций четыре (40%) - 3295тзТ, (?2894Х, 9498с1е1С и Р3090с1е1 не описаны в базе данных В1С.
1. ЧАСТОТА МУТАЦИЙ В ГЕНАХ ВЯСА1/2
В зависимости от локализации опухоли пробанды были разделены на 4 группы: больные раком молочной железы - РМЖ (п=122), больные двухсторонним раком молочной железы - двРМЖ (п=44), больные раком яичников - РЯ (п=29) и больные с обеими опухолями - РМЖ+РЯ (п=29). Частоты мутаций изучали отдельно для каждой группы.
Наследственный РМЖ. Среди 122 семейно-отягощенных больных РМЖ выявлено 39 (32%) носителей терминальной мутации в генах В КС А1/2, из них 33 (27%) человека имели мутацию в гене ВКСА1 и 6 (5%) - в гене ВКСА2. Доля мутаций в гене ВЯСА1 составила 84,6% (33/39). Спектр выявленных изменений в гене ВЯСА! характеризуется преобладанием одной частой мутации в 20 экзоне - 53821мС. Её частота составила 84,8% от всех ЛЯСЛ/-мутаций (28 из 33). Дважды повторялись мутации 185с1е1АО и С6Ю, в одной семье обнаружена делеция 5 нуклеотидов в 11 экзоне гена - 3819с1е15. ВЛС42-мутации были уникальными: 2001с1е1ТТАТ, (}472Х, (22894Х, 6174с1е1Т, 3295тзТ и Р3090ёе1. Спектр ВЯСЛ/-мутаций представлен на рис. 1а.
Двухсторонний РМЖ. Другую группу больных наследственным раком составили 44 пациентки, страдающих двухсторонним поражением молочной железы - группа двРМЖ. Мутации выявлены в 23 случаях (52,3%): 19 ВКСА1 (43,2%) и 4 В КС А 2 (9,1%). Доля мутаций в гене ВКСА1 составила 82,6% (19/23). В спектре ВЯСА!-вариантов по сравнению с группой РМЖ доля мутации 5382тзС (12/19; 63%) численно меньше, но различие статистически незначимо (Р=0,07). Дважды повторялись мутации 185<1е1АО и С6Ю. Уникальными явились мутации 4154с1е1А, 341Ые1СТ, 3747шзА, а также все 4 ВЯСА2-варианта: ()2042Х, 886с1еЮТ, 9498с1е1С, Р3039Р. Спектр ВИСА!-мутаций представлен на рис. 16.
Наследственный РЯ. Среди 29 семейно-отягощенных больных РЯ выявлено 20 носителей терминальной мутации в гене ВЯСА1. Мутаций в гене ВЯСА2 не обнаружено. Частота ВДС4/-мутаций среди таких больных составила 69%. Спектр выявленных изменений в гене ВЯСА1 подобен, но не идентичен таковому среди больных с РМЖ: наиболее частой (50%) является мутация 5382т$С, также повторяются 185<1е1АО, С6Ю. Выявлены другие повторяющиеся мутации - 2080с1е1А и 4154с1е1А. Уникальными являются мутации 2080тзА (11 экзон гена) и ехоп14-17с!е1 (Рис. 1в).
Наследственный РМЖ+РЯ. Анализ генов ВЯСА1/2 проведён для 29 семейно-отягощенных больных, страдающих и РМЖ и РЯ. В 75,9% (22/29) случаев
мутация была обнаружена. Только у одной больной изменение касалось гена ВЯСА2 (6174ёе1Т). 21 человек имел мутацию в ВЯСА1. Среди пациентов было 6 человек с диагнозом двухсторонний РМЖ и РЯ (двРМЖ+РЯ) - у всех мутация была идентифицирована (5 ВЯСА1 и 1 ВЯСА2). Спектр выявленных ВЯСА1-вариантов также характеризуется наиболее частой мутацией 5382тэС (65%), встречаются 185с1е1АО, С6Ю и 2080с1е1А. Уникальными являются мутации 2297сЗе1Т. 3448тзА и 3366с1е15 (Рис. 1 г).
Рис. 1. Спектр мутаций в гене BRCA1
Сравнение частот мутаций в разных группах больных. Встречаемость 5ЛС47/2-мутаций варьировала в разных группах больных, составляя от 32% в группе РМЖ до 75,9% в группе РМЖ+РЯ (табл. 4). Различия в частотах мутаций во всех группах по сравнению с группой РМЖ статистически значимы.
Полученные частоты относятся к наиболее высоким значениям по сравнению с данными, полученными в других странах (Meindl А. et al., 2002; Bergman А. et al., 2005; Weitzel J.N. et al., 2005; Nanda R. et al.. 2005). Для славянских популяций характерны следующие частоты. В Польше мутации были найдены в 67% высокоотягощенных семей (Ratajska М. et al., 2008). В Словении частота BRCA-мутаций в семьях, отобранных по менее жестким критериям, составила 39%, а среди семей с РЯ - 52% (Krajc М. et al.. 2008). В Чехии частота мутаций в выборке семей с РМЖ составила 23,3%, а среди семей с РМЖ/РЯ - 59,4% (Pohlreich Р. et al.. 2005). Частота мутаций генов BRCA среди больных с двРМЖ в нашем исследовании составила 52,3%, что соответствует данным, полученных другими авторами (Rogozinska-Szczepka J. et al., 2004; Gershoni-Baruch R. et al.. 1999).
SJSÜnsC
10.5% 415-tiM.V 5,3% Б
Табл. 4. Количество и частота (%) ВЕСА 1/2-мутаций в различных группах больных.
РМЖ п=122 двРМЖ п=44 РЯ п=29 РМЖ+РЯ п=29
Число мутаций % Число мутаций % Число мутаций % Число мутаций %
мутации ВИСА! 33 27 19 43,2 20 69 21 72,4
мутации ВЯСА2 6 5 4 9,1 - - 1 3,5
всего 39 32 23* р=0,017 52,3 20* р=0,0002 69 22* р=0,0000 75,9
* - статистически значимые различия
Вместе с тем, частоты мутаций варьируют и внутри групп больных, в зависимости от накопления случаев онкологических заболеваний в семье. Изучение частот мутаций среди больных РМЖ с разным числом поражённых родственников показало, что наибольшая частота мутаций наблюдается среди больных, в семье которых был диагностирован хотя бы один случай рака яичников (р=0,012 по сравнению с остальными семьями). Было отмечено также, что мутации чаще обнаруживаются у больных с 3 и более родственниками, страдающих РМЖ (т.е. в семье 4 и более случаев рака молочной железы). Это наиболее выражено в отношении гена ВША2. При анализе частоты ВЯСА1-мутаций среди больных РЯ с разной семейной отягощённостью показано увеличение этого показателя с ростом числа больных РЯ в семье.
Таким образом, наблюдается взаимосвязь частоты мутаций с количеством больных в семье; при этом РЯ наиболее значим как показатель носительства мутации в ВЯСА1, а значительное число случаев РЯ в семье почти всегда обусловлено мутацией в этом гене. Накопление случаев только РМЖ примерно в 30% связано с наличием мутации либо в ВЯСА1, либо в ВКСА2. Наличие значительного количества случаев семейного РМЖ/РЯ без ДЛСЛ-мутаций может объясняться иным механизмом инактивации ВЯСА-генов или свидетельствует об ассоциации заболевания с молекулярной патологией в других генах.
Вместе с тем, различается соотношение числа мутаций в ВЯСА1 и в В КС А 2 среди пациентов с разным раком. Как и в других исследованиях, частота мутаций достоверно выше среди пациентов с РЯ, при этом почти все, за исключением одного случая, мутации были обнаружены в гене ВЯСА1. Значительное преобладание ВЛСА/-мутаций в семьях, отягощённых РЯ, характерно для некоторых выборок ^¡пПткоуа О. й а1., 2006; СараШо С. е1 а1., 2006). Таким образом, для российской популяции наличие РЯ в семье является индикатором наследственной предрасположенности, связанной с носительством мутации преимущественно в гене ВВСА1.
В тоже время 10 из 11 (91%) обнаруженных ЛЛСЛ2-мутаций были идентифицированы у больных РМЖ или двРМЖ. Доля ВЯСА2-мутаций в объединённой выборке больных только РМЖ (РМЖ и двРМЖ: 10 из 62 мутаций; 16,1%) значимо отличается от их доли среди больных РЯ (РЯ и РЖМ+РЯ: 1 из 42 мутаций; 2,4%), р<0,05. Следует отметить, что риск заболевания раком яичников вследствие мутации ВЯСА1 или ВЯСА2 значительно варьирует. РЯ характерен для семьи с мутацией в гене ВЯСА1.
ВЯСА1-щтящт. Основную долю обнаруженных нами мутаций (89,4%) составили мутации в гене ВЯСА1. В табл.5 представлены частоты различных ВМС АI-мутаций среди групп больных.
Табл. 5. ВЯСА1-мутации в различных группах больных.
РМЖ п=122 двРМЖ п=44 РЯ п=29 РМЖ+РЯ п=29
Число мутаций Доля (%) Число мутаций Доля (%) Число мутаций Доля (%) Число мутаций Доля (%)
5382тзС 28 84,8 12 63,2 10* Р=0,0063 50 14 66,7
С6Ю 2 6,1 2 10,5 2 10 2 9,5
185с1е1АО 2 6,1 2 10,5 2 10 1 4,8
остальные мутации ВЕ.СА1 1 3 3 Р=0,0964 15,8 6* Р=0,0049 30 4* Р=0,048 19
всего 33 100 19 100 20 100 21 100
* - статистически значимые различия
Примечательным фактом является преобладание в гене ВЯСА1 одной мутации -5382тзС в 20 экзоне гена, её частота составляет 68% от всех выявленных ВКСЛ1-мутаций. По данным литературы, также как и в нашем случае, во многих популяциях встречаются повторяющиеся мутации. Хотя частота 5382in.sC статистически значимо варьирует в различных группах больных - от 84,8% в группе РМЖ и до 50% в группе РЯ (р<0,05), в целом это значение наиболее высокое среди различных популяций, в том числе и славянских (рис.2). Превалирование этой мутации отмечено также в других регионах России, например на Северо-Западе страны (С.-Петербург), на Юге (Краснодар) (Зизркэт Е. Л а1., 2009), в Сибири (Томск) (ТегезсЬепко I. й а1., 2002). Как следует из рис.2, частота мутации 5382тзС, характерной для большинства европейских стран, убывает в западном, северном и южном направлениях от России.
С высокой частотой среди пациентов встречались ещё две повторяющиеся ВЯСА/-мутации - 185с1с1АО (7/93, 7,5%) и С610 (8/93, 8,6%). Обе мутации мы обнаруживали во всех группах больных с близкой частотой (6,1-10,5% для С6Ю и 4,8-10,5% для 185<Зе1АО). Мутация С6Ш характерна для славянских стран, также
встречается она и в других центрально-европейских странах, например, в Венгрии и Германии. Следует отметить, что частота мутации 185с1е1АО - самой частой мутации среди евреев-ашкенази - в нашей работе несколько выше, чем в других славянских популяциях (от 0% в Словении до 7% в Польше). В целом три наиболее частые повторяющиеся мутации (53821шС, С6Ю и 185сЗе1АО) охватывают 85% всего спектра ВЯСА1-мутаций среди российских больных.
ЛрМИ
Рис. 2. Встречаемость мутации 53821пбС в европейских странах.
У 14 пациентов были обнаружены иные, редкие варианты гена ВЯСА1. Частота редких мутаций в гене отличалась у пробандов разных групп: от 0,82% (1 мутация) среди больных РМЖ до 20,7% (6 мутаций) среди РЯ (при сравнении РМЖ с: двРМЖ, р=0,026; РЯ, р=0,0000; РМЖ+РЯ, р=0,0004).
ВЛС42-мутации. Частота ВКСА2-мутаций в общей выборке составила 4,9%. Среди ВЯСА1 -негативных семей (п=131) этот показатель равен 8,4%. Это значение совпадает с результатами других исследований. Частоты терминальных ВЯСА2-мутаций в европейских популяциях близки и находятся на уровне 10%. Не было обнаружено ни одной повторяющейся ВЯСА2-мутации, за исключением 6174с1е1Т в 11 экзоне гена, являющейся одной из мутации с эффектом основателя для евреев-ашкенази. Двое носителей этой мутации также имели еврейское происхождение.
Остальные ВЯСА2-мутации были уникальными. Таким образом, в российской популяции спектр мутаций в гене ВЯСА2 характеризуется уникальностью вариантов и высокой частотой впервые выявленных мутаций - 40%.
2. ЧАСТОТА МУТАЦИЙ СРЕДИ СЕМЕЙ С РАЗНОЙ ОНКОЛОГИЧЕСКОЙ ОТЯГОЩЁННОСТЫО.
Больные с разной локализацией рака происходят из семей, неодинаковых по заболеваемости различными типами рака. Проанализирована частота мутаций в семьях, сгруппированных по принципу встречаемости того или иного рака. Первую группу образовали семьи, в которых все поражённые родственники болели только односторонним РМЖ (п=88). Во вторую группу вошли те семьи, в которых наряду с РМЖ встречался двРМЖ, но не было РЯ (п=41). Остальные семьи помимо РМЖ включали больных РЯ и первично-множественными злокачественными новообразованиями (ПМЗН - РМЖ+РЯ) (п=95). Частота ВИСЛ //2-мутаций в разных семьях составила: 25% среди РМЖ-семей, 46,3% среди семей с двРМЖ и 66,3% в группе с РЯ (табл. 6).
Табл. 6. Частота ВЯСА //2-мутаций в семьях различного типа.
Только РМЖ п=88 Семьи с двРМЖ п=41 Семьи РМЖ/РЯ п=95
Число мутаций % Число мутаций % Число мутаций %
все мутации ВНСА1 16 18,2 15* 36,6 62* 65,3
все мутации ВИСА2 6 6,8 4 9,7 1* I
всего 22* 25 19* 46,3 63* 66,3
* - статистически значимые различия
Наиболее высокое значение частоты мутаций - 66,3% среди семей РМЖ/РЯ достоверно отличается и от двРМЖ-семей (р=0,029) и от семей с односторонним РМЖ (р=0,0000). Следует отметить, что семьи РМЖ/РЯ различны по количеству случаев РЯ. В выборке была 31 высокоотягощенная семья с 2 и более случаями РЯ -мутации среди них были обнаружены в 24 семьях (77,4%). Также, среди 10 семей, в которых были более одного случая двРМЖ, мутации были обнаружены в 6 (60%; 3 ВЯСА] и 3 ВЯСА2). Таким образом, различия частот мутаций в разных по структуре заболеваемости семьях имеет такой же характер, как и при изучении различных групп пробандов. Близки также абсолютные значения. Появление в семье больного двРМЖ, РЯ или РМЖ+РЯ является более значимой характеристикой наследственной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, ассоциированной с ВВ.СА-мутацией, чем накопление случаев только РМЖ. Возможное объяснение этого
наблюдения заключается в том, что семейное накопление РМЖ может быть связано с наследованием изменений в других генах с меньшей пенетрантностью.
Таким образом, наличие в семье РЯ в 60-70% случаев связано с наследованием мутации BRCA1 вне зависимости от других характеристик семьи. Двухсторонний РМЖ примерно в 50% обусловлен наследованием мутации в генах BRCA1 или BRCA2.
Вклад мутаций двух разных генов среди различных семей неодинаков. Доля BRCA1-мутаций также имеет достоверные различия при сравнении трёх групп друг с другом (РМЖ и двРМЖ: р=0,023; РМЖ и РМЖ/РЯ: р=0,0000; двРМЖ и РМЖ/РЯ: р=0,002) и наиболее высока среди семей с РЯ (98,4% от всех мутаций). Среди семей с РМЖ и двРМЖ это значение заметно ниже - 72,3% и 79%, соответственно, (р=0,0002 и р=0,002). Верно и обратное - мутации BRCA2 достоверно чаще встречаются в семьях с РМЖ и двРМЖ. Соотношение частот мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 может быть различным для разных популяций. Частота мутаций в гене BRCA2 в российской популяции относительно невысока, и основной вклад в наследственную предрасположенность к РМЖ (и РЯ) вносит ген BRCA1.
Таким образом, распределение ARC/1-мутаций в семьях имеет характер аналогичный тому, который наблюдается при анализе пробандов. Среди мутаций в гене BRCA1 преобладает 5382insC, причём значения её частот близки и не имеют значимых различий (60-75%). Две мутации 185delAG и C61G встречаются во всех группах, их частота несколько выше среди РМЖ-семей. Редкие варианты гена наблюдались только среди семей с двРМЖ и РМЖ/РЯ. Их частота в двРМЖ-семьях (9,8%) и семьях РМЖ/РЯ (10,5%) значимо отлична от РМЖ, среди которых редкие мутации не встречались (р=0,009 и р=0,0016, соответственно).
3. ХАРАКТЕРИСТИКА И ЧАСТОТА МИССЕНС-МУТАЦИЙ В ГЕНАХ BRCA1/2 В генах BRCAI и BRCA2 обнаружено несколько миссенс-мутаций, функциональное значение которых в настоящее время не определено (табл. 7).
Обнаруженные миссенс-мутации могут быть как и незначимыми, нейтральными аллелями гена, так и мутациями, ассоциированными с повышенным риском рака, а также иметь модифицирующий риск развития рака эффект. Такие варианты могут встречаться с относительно высокой частотой и обнаруживаться также у здоровых женщин (Phelan С. et al., 2005; Wu К. et al., 2005). Все выявленные нами миссенс-мутации обнаружены у больных без какой-либо другой мутации в генах BRCA1/2. Вариант BRCAI S1040N обнаружен у 4 больных (2%), в семьях которых отмечено 2-3 случая РМЖ. Мутация R1347G в исследованной выборке встречается с частотой 0,75%. По данным базы BIC значение этого варианта не определено окончательно, однако имеются данные, позволяющие считать его нейтральным полиморфизмом (Deffenbaugh A.M. et al., 2002).
Табл. 7. Спектр миссенс-мутаций в генах BRCA1/2.
название варианта количество случаев
ген экзон ДНК белок (частота)
И C.1054G 1С G312A 1 (0,75%)
BRCA1 11 C.3238G/A S1040N 4 (2%)
11 C.4158A/G R1347G 1 (0,75%)
10 С.1342А/С N372H 47 (39%) гетерозиготы; 11 (9,2%) гомозиготы по минорному аллелю
10 с. 1409А/С Е394А 1 (0,75%)
BRCA2 11 С.5577А/С N1784H 1 (0,75%)
11 C.5652T/G I1808M 1 (0,75%)
25 С.9530Т/С L3101P 1 (0,75%)
26 C.9733A/G I3169V 1 (0,75%)
жирным шрифтом выделены варианты, не значащиеся в базе данных В1С.
Редкий вариант Е394А в гене BRCA2 описан для ряда европейских популяций, случаев сочетания его с другой мутацией не отмечено. Частоты этих миссенс-мутаций в больших контрольных выборках не известны. Пять миссенс-мутаций (1 - в BRCA1 и 4 - в BRCA2) являются новыми, они не значатся в базе данных BIC и не описаны в литературе. Все они обнаружены в семьях с 3-4 случаями РМЖ. Проследить сегрегацию заболевания в семьях с носительством миссенс-мутации не удалось.
До сих пор большинство миссенс-мутаций остаются неклассифицированными в отношении риска заболевания. При медико-генетическом консультировании такая ситуация является наиболее проблематичной, поскольку не позволяет адекватно оценить риск возникновения рака.
4. ПОЛИМОРФНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ BRCA1/2
Помимо мутаций и миссенс-вариантов неизвестной значимости в генах BRCAH2 выявлено значительное количество полиморфных вариантов. Некоторые ОНП в BRCA1, расположенные в интронах и экзонах на протяжении всего гена, находятся в строгом неравновесии по сцеплению, образуя несколько гаплотипов гена (обозначенных как А, В, С, D), табл. 8. Значимых различий в распределении частот гаплотипов среди больных РМЖ и/или РЯ и в контрольной группе не было.
Табл. 8 . Полиморфные гаплотипы гена BRCÁ1.
Варианты экзон/ интрон гаплотип
А В С D
IVS1-103T/C 1 Т С с С
IVS1-115T/C 1 Т с с С
IVS8-58delT Т delT delT delT
D693N (2196G/A) 11 G G G А
S694S (2201 С/Т) 11 С Т Т Т
L771L (2430Т/С) 11 Т С С С
P871L (2731 С/Т) 11 с т Т Т
E1038G (3232A/G) 11 А G G G
K1183R (3668 A/G) 11 А G G G
S1436S (4427С/Т) 13 С Т Т Т
IVS14-63C/G 14 С G G G
S1613G (4956A/G) 16 А G G G
IVS20+60insl2 20 - - insl2 -
частота гаплотипа (%) 62,5 28 1,5 8
Среди больных также обнаружены единичные ОНП в обоих генах. Частоты вариантов среди больных приведены в табл. 9.
Табл. 9. Полиморфизмы в генах ВЯСА1/2.
ген Экзон/ название варианта число больных (%)
интрон ДНК белок
1 IVSl-21insAT - 2 (0,9%)
2 IVS2-55T/C - 1 (0,4%)
7 IVS7-34T/C - 8 (3,6%)
ВЯСА! 8 INV8-58delT - 1 (0,4%)
11 C.1186A/G Q356R 16 (12%)
16 C.4956A/G S1613G 1 (0,4%)
16 С.5002Т/С М1628Т 1 (0,4%)
16 C.5075G/A MI 6521 1 (0,4%)
18 IVS18+72G/A - 1 (0,4%)
2 203G/A -
3 C.353A/G Y42C 2 (1,5%)
4 IVS4-89T/C - 1 (0,7%)
8 IVS8+56C/T -
10 C.1206C/A S326R 1 (0,7%)
10 C.1379C/T S384F 1 (0,7%)
10 C.1395G/A P389P 1 (0,7%)
11 C.3624A/G K1132K 25 (19%)
11 C.3744G/A S1172S 1 (0,7%)
11 C.4035T/C V1269V 28 (22%)
BRCA2 11 C.4296G/A L1356L 1 (0,7%)
11 C.4486G/T D1420Y 3 (2,3%)
11 C.5972C/T T1915M 4 (3%)
11 IVS11 +80delTTAA 42 (32%) - гетерозиготы, 36 (28%) -гомозиготы по минорному аллелю
14 C.7470A/G S2414S 26 (20%)
16 IVS16-14T/C - 15(12%)
21 IVS21-66T/C - 15 (12%)
24 IVS24-16T/C - 2 (1,5%)
24 IVS24-49T/C - 1 (0,7%)
27 С.10204АЯ K3326X 1 (0,7%)
10 1093A/G N289H 8 (6%)
BRCA2 10 1593A/G S455S
11 3199A/G N99 ID
По данным литературы, базы данных BIC перечисленные в табл. 9 миссенс-мутации и интронные варианты не имеют клинического значения. Однако нельзя исключить, что они могут оказывать влияние на предрасположенность к онкологическим заболеваниям при сочетании с вариантами в каких-то других генах.
5. ГАПЛОТИПИРОВАНИЕ ПОВТОРЯЮЩИХСЯ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ BRCA1 Частота и тип разных мутаций в генах BRCA1/2 варьирует в широких пределах, и их распределение характеризуется географическими и этническими различиями. Ряд ЛЯСЛ-мутаций в определённых популяциях распространились вследствие эффекта основателя (founder mutation) (Neuhausen S. et al., 1996).
Примером такой мутации является 185(1е1АО (ВЕСА 1) у евреев-ашкенази. Мутация расположена на определённом консервативном гаплотипе гена. В тоже время некоторые частые мутации встречаются в составе разных гаплотипов, что свидетельствует о неоднократном их возникновении. Например, мутация 1135тзА в гене ВЯСА1, распространенная в Норвегии, Дании и Италии, находится в составе трёх разных гаплотипов (11ис1кт Т. е1 а!., 2006).
В работе было обнаружено несколько повторяющихся ВЯСА/-мутаций -5382т5С, 185с)е1АО, С6Ю, 2080с1е1А, 4154<1е1А. Мутации были идентифицированы у неродственных пациентов различной национальности: 5382тзС - у русских, евреев и татар, 4154с1е1А - у русских и пациентки еврейской национальности, С6Ю - у русских и польки, 2080(1е1А - только у русских. Все больные с мутацией 185<1е1АС имели еврейское происхождение. Было проведено генотипирование пациентов с 4 мутациями по 5 микросателлитным маркёрам, расположенных внутри гена ВКСА1 (0175855, 01781322, Ш781323) и в прилегающем к ВЯСА1 локусе (Б1781320, Б1781325). Генотипирование 185<1е1АО-носителей не проводили.
Установлено, что мутации 2080с)е1А, 4154(1е1А и 5382юзС находятся каждая на определённом гаплотипе гена по микросателлитным маркерам. Эти гаплотипы не были обнаружены у других пациентов (п=10) и в контрольной группе (п=10), что свидетельствует о сцеплении каждого гаплотипа именно с мутацией (Р=0,0000, двухсторонний критерий Фишера).
Гаплотип гена при мутации 5382шзС идентичен гаплотипу, выявленному в других работах (МеиЬаизеп 8. е1 а1., 1996; Нате1 N. е1 а1., 2010). Результаты доказывают происхождение мутации вследствие эффекта основателя. Данные о частотах 5382тБС в разных популяциях свидетельствуют об её происхождении на территории России. Возраст мутации в работе N. Нате1 с соавт. (2010) оценен в 1800 лет. Носители мутации 2080с1е1А также имеют общий гаплотип гена. Наибольшее число случаев этой мутации выявлено в России, в других славянских популяциях её нет, однако 2080<1е1А известна в некоторых европейских странах, в частности в Голландии. Возможно, 2080с1е1А является мутацией с эффектом основателя для русских. Общий гаплотип гена при 4154(1е1А также свидетельствует об её происхождении вследствие эффекта основателя. Недавно при исследовании неродственных индивидуумов с 4154ёе1А из Латвии, Польши и России была установлена ассоциация мутации с аналогичным гаплотипом гена (ОгоНпа Б. с! а1., 2009). Таким образом, мутация 4154с1е1А имеет общее, скорее всего славянское происхождение.
6. ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНЕ ТР53
Большинство исследованных семей были отягощены РМЖ и/или РЯ, а также другими опухолями, характерными для наследственного синдрома РМЖ/РЯ - рак предстательной железы, рак желудка, рак тела матки. Однако в семьях 6 больных
РМЖ были отмечены другие онкологические заболевания - мягкотканые саркомы или опухоли головного мозга (ОГМ). Мутации BRCA1/2 ни в одном случае обнаружено не было. Хотя ни одна семья не соответствовала критериям синдромов Ли-Фраумени (СЛФ) или Ли-Фраумени подобного (СЛФП), больных исследовали на наличие терминальной мутации в гене ТР53. Ни у одного больного мутации не было выявлено. В двух случаях обнаружен полиморфный вариант ТР53-гена - Int3duplб в гомозиготном состоянии. Аллельная частота этого варианта в европейской популяции составляет около 16%. Частота гомозигот по редкому аллелю не превышает 1%. В некоторых работах показано, что этот полиморфизм ассоциирован с повышенным риском развития - РМЖ (Wang-Gohrke S. et al., 2002; Costa S. et al., 2008), колоректального рака (Germignani F. et al., 2004), рака легкого (Wu X. et al., 2002). Гомозиготный вариант гена Int3dupl6 приводит к снижению уровня мРНК (Germignani F. et al., 2004), возможно изменяя функциональную активность белка. Вариант Int3dupl6 гена ТР53 является аллелем низкой пенетрантности и в определённых случаях повышает риск развития некоторых типов рака и, в частности, РМЖ.
Для определения вклада гена ТР53 в наследственную предрасположенность к РМЖ проведен поиск герминальных Г/\53-мутаций среди больных, с ранней манифестацией РМЖ. Исследовали все кодирующие экзоны гена ТР53 среди 22 молодых больных РМЖ, у которых не было обнаружено мутаций 5382insC, C61G и 185delAG в гене BRCAI и отобранных только по возрасту заболевания - моложе 31 года. Среди них выявлено 3 носителя терминальной мутации в гене ТР53: в 5 экзоне -532delC, в 6 экзоне - Y220C, в 8 - R306X (табл. 10). Частота Г/\53-мутаций в группе составила 13,6%.
Табл. 10. Терминальные мутации в гене ТР53 у пациенток РМЖ раннего
возраста.
Экзон ТР53 Название мутации диагноз возраст диагноза семейная отягощенность
ДНК белок
5 532delC H178TfsX68 1. синхронный двРМЖ 2.адренокортикальный рак 30 31 Нет
6 659A/G Y220C РМЖ 24 Нет
8 916С/Т R306X РМЖ на фоне беременности 26 мать - РМЖ на фоне беременности в возрасте 26 лет
РМЖ - наиболее частая опухоль, встречающаяся у женщин-носителей ТР53-мутации, и в таком молодом возрасте является фенотипическим маркёром синдрома Ли-Фраумени (Birch J.M. et al., 2001). Ни одна из исследованных семей не соответствовала критериям СЛФ. Только у 10 из 22 больных были случаи онкологических заболеваний в семье.
Частота мутаций в ТР53 (13,6%) в изученной группе довольно высока. Значения частот 7Р53-мутаций в подобных выборках остаются не определенными. В других исследованиях BRCA-негативных семей с РМЖ частота П^З-мутаций находится в пределах 0-6,3% (Balz V. et al., 2002; Martin A. et al., 2003; Lalloo F. et al., 2006; Blanco A. et al., 2009). В работе G.Bougeard с соавт. частота 77\55-мутаций была аналогична - 13,1% (5/38) в группе больных РМЖ моложе 36 лет (Bougeard G. et al., 2008). По-видимому, частота обнаружения мутаций в соответствующем гене среди больных РМЖ зависит от способа формирования исследуемой выборки и, возможно, имеет популяционные различия.
В тоже время все ТРЗЗ-постспи не имеют никаких характеристик, позволяющих предположить синдром Ли-Фраумени, кроме ранней манифестации РМЖ. Для одной больной доказано происхождение мутации de novo. Высокая частота мутаций de novo в ТР53 подтверждается результатами ряда исследований спорадического РМЖ молодого возраста. Вклад герминальных мутаций гена ТР53 в развитие РМЖ раннего возраста недооценен вследствие высокой частоты мутаций de novo или наличия в семейном анамнезе нехарактерной синдромальной патологии. Только в последние годы исследователи стали уделять внимание вкладу гена ТР53 в формирование синдрома наследственного РМЖ/РЯ. Как правило, такие ТР53-позитивные семьи не соответствуют критериям СЛФ или СЛФП. Учитывая достаточно высокую частоту мутаций среди РМЖ раннего возраста, предложено тестировать ген ТР53 у всех женщин с ранней манифестацией заболевания (моложе 36 лет).
7. ТЕРМИНАЛЬНАЯ МУТАЦИЯ llOOdeIC В ГЕНЕ СНЕК2
Диагностика мутации llOOdeIC в гене СНЕК2 была проведена среди 107 fi/?C/f-негативных больных наследственным РМЖ или двРМЖ. Было обнаружено двое носителей этой мутации (1,8%). Подобное значение частоты этой мутации -2,1% - показало исследование смешанной выборки российских пациентов (Chekmareva E.V. et al., 2006). Частоты мутантного гена среди больных РМЖ в некоторых популяциях выше - примерно 5% по сравнению с 1% в контроле (Vahteristo P. et al., 2002). Для носителей мутации llOOdeIC показано примерно двукратное увеличение риска развития РМЖ (СНЕК2 Breast Cancer Case-Control Consortium, 2004). В целом, вклад мутации llOOdeIC в гене СНЕК2 в предрасположенность к РМЖ в российской выборке больных невелик. llOOdeIC не является высокопенетрантной мутацией, и, возможно, проявляет синергическое взаимодействие с другими генетическими факторами в отношении риска развития заболевания. Например, ассоциация у носителей мутации в гене СНЕК2 с вариантом Т1915М в гене BRCA2 приводит к неожиданно высокому риску РМЖ, превышающему риск заболевания вследствие только одной СЯЖ2-мутации (Serrano-Fernandez P. et al., 2008).
8. ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНАХ РЕПАРАЦИИ НЕСПАРЕННЫХ
НУКЛЕОДНТОВ - ШНШЗНШЯНб Развитие РМЖ/РЯ в некоторых семьях обусловлено наследованием терминальных мутаций в генах плэта^Ь-репарации. Как правило, в таких семьях идет накопление онкологических заболеваний, характерных для соответствующего синдрома (наследственный неполипозный колоректальный рак- ННКРР, синдром Линча) - РТК, рак желудка (РЖ), рак тела матки (РТМ). ДНК-диагностика генов МШ1, М5112, МБНб была проведена для б 5ЛС4-негативных больных, страдающих РЯ и/или РМЖ в составе ПМЗН, в семье которых были отмечены случаи РТК. Мутации обнаружены у 2 пациенток. У одной больной была выявлена мутация в 16 экзоне гена МШ1 - 618с1е13. Во втором случае больная наследовала мутацию в 4 экзоне гена МБНб - Т764Ы. Интересным является факт накопления в этой семье случаев РМЖ. Сайт-специфичность проявления терминальных мутаций в генах, белки которых участвуют в репарации неспаренных нуклеотидов, достаточно определена - РТК и РЖ, однако следует учитывать повышенный риск развития рака других локализаций, особенно у женщин.
Таким образом, только небольшая часть РМЖ и РЯ связана с иными синдромами, чем наследственный РМЖ/РЯ, в том числе и ННКРР.
9. ЧАСТОТЫ МУТАЦИЙ В НЕОТОБРАННЫХ ВЫБОРКАХ И ВЫБОРКАХ СПОРАДИЧЕСКОГО РМЖ И РЯ
Семейное накопление РМЖ и/или РЯ обнаруживается не у всех больных с мутацией в генах ВЯСА1/2. Доля семейных случаев значительно варьирует для разных популяций. В тоже время для групп больных из разных. популяций, сформированных без учета семейной истории, характерна и разная частота мутаций в генах. В11СА1/2. Для оценки значений частот мутаций среди российских больных была проведена диагностика 3-х мутаций гена ВЯСА1 (5382тзС, 185(Зе1АО и С6Ю) среди больных РМЖ (п=76), двРМЖ (п=32) без семейной истории заболевания, а также диагностика гена ВЯСА1 среди неотобранной выборки больных РЯ (п=101). Значения частот мутаций приведены в табл. 11.
Частота В КС А /-ассоциированного РМЖ среди больных без семейного отягощения значительно варьирует среди популяций - 0,7-8,9%. Полученные для российских больных результаты соответствуют значениям частот, характерным для европейцев. Доля носителей ВЯСА/-мутации среди больных двРМЖ (спорадические случаи) значимо превышает таковую среди больных односторонним РМЖ (12,5% и 1,3%, соответственно; р=0,012). Значение частоты ВЛС4/-мутаций в неотобранной выборке РЯ - 14,8% - является одним из наиболее высоких среди европейских стран.
Табл. 11. Частоты ВИСА/-мутаций в различных выборках больных.
РМЖ (%) двРМЖ (%) РЯ (%)
семейно-отягощённые больные (частота ВИСА/-мутаций) 27 43,2 69
неотобранная выборка - - 14,8
спорадические случаи 1,3 12,5 2,5
Положительная семейная история РМЖ/РЯ является несомненным показателем генетической природы заболевания. Вместе с этим, о генетической предрасположенности может свидетельствовать и диагноз заболевания. Двухсторонний РМЖ наиболее часто свидетельствует о наследственной предрасположенности даже в отсутствие онкологически отягощенного анамнеза у больных.
II. ВСТРЕЧАЕМОСТЬ РМЖ И РЯ В СЕМЬЯХ С ВЛС4/-МУТЛЦ11ЕЙ
В семьях с ВЕСА ./-мутацией было отмечено преимущественное накопление рака определённой локализации - РМЖ или РЯ. Было предположено, что риск развития РМЖ и РЯ отличается для разных мутаций.
Случаи РМЖ и РЯ в семьях при 5 различных мутациях. Существует ли генотип-фенотипическая корреляция для определённых ДЛСЛ/-мутаций? Был проведен анализ количества случаев РМЖ и РЯ в семьях с наследуемой ВЯСА/-мутацией. В исследование вошли неродственные семьи с 5 повторяющимися мутациями (5382тзС, С6Ю, 185с1е1АО, 2080с1е1А и 4154с1е1А), табл. 12.
Табл. 12. Число случаев РМЖ и РЯ в семьях с разными мутациями.
мутация количество семей число случаев РМЖ число случаев РЯ соотношение РМЖ:РЯ
5382шзС 32 55 26 2,1:1
185с1е1АО 9 17 10 1,7:1
С6Ш 10 20 8 2,5:1
208(Ме1А 4 5* 9* 0,56:1
4154(1е1А 4 7 7 1:1
* - статистически значимые различия
Наблюдаются сходные, статистически неразличающиеся значения в соотношении случаев РМЖ:РЯ при трёх мутациях - 5382шзС, С6Ю и 185(1е1АО. Число случаев РМЖ примерно в два раза выше РЯ, что соответствует общепринятым представлениям о двукратном превышении риска развития РМЖ нежели РЯ при ВЯСА1 -мутациях. При этом мутации расположены на разных концах гена - на 5'
конце во 2, 5 экзонах (185с1е1АО и С6Ю) и на 3' конце в 20 экзоне (5382тзС), что не соответствует данным Б.ОауЛег с соавт. (1995) об увеличенном риске РЯ при 5' мутациях. В случае 4154с1е1А количество случаев РЯ увеличивается. В семьях с 2080с1е1А преобладает РЯ (РМЖ:РЯ - 0,56). Различия в количестве случаев разного типа рака при этой мутации достоверны при сравнений с семьями, наследующими 5382цюС (р=0,021) и С6Ю (р=0,026).
Таким образом, существует некоторая фенотипическая вариабельность проявления мутаций, прямо не связанная с её положением в гене, но являющаяся характеристикой мутации. Т.е. некоторые конкретные ВЯСА /-мутации (в нашем исследовании 2080с1е1А и 4154с1е1А) • обладают специфическими свойствами в отношении риска развития рака яичников.
Однако наблюдается накопление определённого рака внутри разных семей и при одной и той же мутации - 5382тзС.
Число случаев РМЖ и РЯ в семьях с мутацией 5382т$С. Были проанализированы семьи пробандов по наличию случаев рака разной локализации, считая при этом двухсторонний РМЖ за два события. 'Оказалось, что среднее число РМЖ и РЯ в расчёте на одну семью значительно варьирует. Без учёта заболевания самого пробанда среднее число случаев РМЖ в семьях пробандов с РМЖ, и двРМЖ значительно превышает таковое для группы пробандов с РЯ, а для четвертой группы (РМЖ+РЯ) имеет промежуточное значение. И, наоборот, РЯ преимущественно встречается в семьях пробандов с РЯ (табл.13). Число случаев РМЖ и РЯ в таких семьях достоверно отличается от семей пробандов с РМЖ.
Табл. 13. Число случаев рака в семьях с мутацией 53821пвС среди различных
групп.
заболевание пробанда РМЖ двРМЖ РЯ РМЖ+РЯ
число семей п=28 п=12 п=10 п=14
число РМЖ в семьях 46 17 5* 19
число РЯ в семьях 19 7 9* 13
соотношение РМЖ:РЯ 2,42:1 2,43:1 0,56:1 1,46:1
число семей с РЯ (без пробанда) 12 (43%) .7(58%) 8* (80%) 9 (64%)
* - статистически значимые различия
Таким образом, наблюдается разделение семей по сайту локализации рака у больных.
Распределение семей с мутацией 5382ш$С по числу случаев рака разной локализации. Описываемые семьи различны не только по структуре заболеваемости,
но отличаются по количеству больных родственников I-II степени родства - это значение варьирует от 2 до 6. Была проведена оценка распределения различных по отягощенности семей (2, 3, 4 случая рака) по типу рака отдельно для семей пробандов с РМЖ и РЯ.
Семьи с 2 случаями рака. В выборке было 13 больных РМЖ, в семье которых отмечен ещё один случай рака. Теоретически, при условии, что риск РМЖ в 2 раза выше, в 67% таких семей обе больные будут страдать РМЖ, а в 33% семей второй человек будет болен РЯ (вероятность заболевания РМЖ - 0,67, РЯ - 0,33). Во всех изученных семьях обе родственницы болели раком молочной железы, т.е. семьи с 2-мя случаями РМЖ составили 100%. Отклонение фактического распределения семей по заболеваемости от предполагаемого статистически значимо (точный критерий Фишера, р=0,039). В случае больного РЯ было 10 семей с 2 случаями рака, из них в 8-ми семьях второй больной также страдал РЯ (80%) и только в двух - РМЖ (20%). Теоретическое распределение семей должно быть таково: семьи с 2 РЯ - 33%, с 1 РЯ и 1 РМЖ - 67% (хг, р=0,0246). Фактические данные указывают на увеличение числа семей с накоплением рака той же локализации, что и у пробанда по сравнению с ожидаемым.
Семьи с 3 и более случаями рака. Как и для семей с меньшей заболеваемостью в распределении наблюдается сдвиг в сторону увеличения доли семей с преобладанием РМЖ, и почти полное отсутствие семей с накоплением РЯ в случае пробанда с РМЖ. Вследствие небольшой выборки отклонения от теоретического распределения семей не могут быть статистически доказаны.
В исследованных семьях с наследуемой BRCA/-мутацией наблюдается накопление у родственников преимущественно одного типа рака. Даже при одной и той же мутации 5382insC семья пробанда с РМЖ характеризуется преимущественно накоплением случаев рака этой локализации, и аналогично при РЯ. Статистически значимые различия по количеству случаев рака различной локализации выявлены для семей больных РМЖ и больных РЯ. В BRCAl-nозитивных семьях риск развития того или иного рака у родственников коррелирует с заболеванием самого пробанда (Lee J. et al., 2006). Однако наблюдается определённый фенотип разных семей и при одной и той же мутации - 5382insC. Различные репродуктивные факторы, например количество и возраст родов, применение оральных контрацептивов, а также характеристики образа жизни (курение), могут изменять риск развития РМЖ у женщин с ВДСЛ-мутаций, но вряд ли подобные факторы сохраняются в семье в разных поколениях. Наиболее вероятным объяснением подобных данных представляется гипотеза наследования других генетических вариантов, влияющих на пенетрантность мутации BRCA1 (и BRCA2) и модифицирующих риск возникновения РМЖ и/или РЯ.
III. НЕКОТОРЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ ФОРМЫ РМЖ Рак молочной железы у молодых женщин. Ранний возраст возникновения опухоли часто свидетельствует о генетической природе заболевания. Частота BRCA-ассоциированного заболевания среди групп больных РМЖ и двРМЖ разного возраста (п=166) значительно увеличивалась при более раннем возрасте диагноза, составляя 70,6% для больных моложе 31 года (табл. 16).
Помимо генов BRCA1/2 в развитие РМЖ молодого возраста в определенной степени определенный вклад вносит ген ТР53. В нашем исследовании частота терминальных 7Р53-мутаций среди российских BRCA /-негативных больных с ранней манифестацией РМЖ (до 31 года) составляет 13,6% (3/22). Таким образом, ранний возраст возникновения РМЖ наряду с положительной семейной историей служит ещё одним критерием генетической природы заболевания, ассоциированной в значительной степени с мутациями в генах BRCA1/2 и ТР53.
Табл. 16. Частота BRCA-мутыхшл среди больных РМЖ разного возраста.
число больных число больных с мутацией число больных с мутацией BRCAI число больных с мутацией BRCA2
п % п % п %
до 31 года 17 12 70,6 10 58,8 2 11,8
31-40 лет 55 31 56,4 29 52,7 2 3,6
41 год и старше 94 19* 20,2 12* 12,8 7 7,4
* - статистически значимые различия
Вклад мутаций в генах BRCA 1/2 среди больных молодого возраста был оценен отдельно для двРМЖ (возраст диагноза 1-го РМЖ меньше 41 года). Доля носителей BRCA/-мутаций среди больных с семейной отягощённостью составила 71% (12/17), что превышает этот показатель среди больных односторонним РМЖ того же возраста (56%). Среди больных со спорадической формой заболевания мутации обнаружены у 25% (3/12). Одна из пациенток моложе 31 года без BRCA-мутации оказалась носителем мутации в гене ТР53. - 532deJC. Такие данные свидетельствуют о значительной ассоциации двРМЖ, особенно молодого возраста, с молекулярной патологией в генах BRCA и в меньшей степени ТР53.
Рак молочной железы, ассоциированный с беременностью. Рак молочной железы, ассоциированный с беременностью (РМЖ-АБ; Pregnancy-associated breast cancer-РАВС), довольно редкое событие и составляет 0,2-3,8% всех случаев РМЖ.
Среди 88 больных РМЖ, диагностированным во время беременности или в течение лактации, и 90 больных РМЖ соответствующего возраста, не ассоциированного с беременностью, частота мутаций (BRCA1 - 5382insC, C61G, 185delAG) составила 15,9% и 6,7% соответственно (р=0,05). Средний возраст больных с мутациями в группах был 31,18+2,99 (26-35) лет и 37,17±4,96 (33-46) лет, соответственно. Помимо 5ЛСЛ/-мутаций в случае РМЖ-АБ чаще, чем в семейном и
спорадическом РМЖ, встречаются некоторые варианты генов: S1040N (4,5%) в BRCA1; 203АА (6,8%), S384F (1,3%) в BRCA2, редкие аллели гена PGR (8%).
Девять больных РМЖ-АБ без BRCA1-мутации вошли в группу «молодого» РМЖ, в которой исследовали первичную структуру гена ТР53. У одной больной обнаружена терминальная 7У.53-мутация R306X в 8 экзоне гена. Значительным представляется факт заболевания её матери раком молочной железы также на фоне беременности. У пяти пациенток присутствовал вариант в 3 интроне гена - Int3dupl6 в гетерозиготном состоянии, у одной был обнаружен редкий вариант в 6 интроне -IVS6-37G/T. То есть у 7 из 9 больных были выявлены варианты нуклеотидной последовательности в гене ТР53.
Таким образом, выявляется некоторая группа носителей мутации BRCA1 и ТР53, характеризующаяся очень молодым возрастом возникновения рака на фоне беременности. По-видимому, существует вариация персонального риска развития рака у женщин с мутацией в течение беременности и последующего кормления ребёнка.
Рак молочной железы у мужчин. Рак молочной железы у мужчин (МРМЖ) -редкое заболевание и составляет примерно 1% всех случаев РМЖ. Основными генетическими факторами, ассоциированными с повышенным риском МРМЖ, являются терминальные мутации в гене BRCA2, и в меньшей степени в BRCA1. ДНК-диагностика генов BRCA1/2 проведена у 8 мужчин с диагнозом РМЖ. Гермнальные BRCA 7/2-мутации обнаружены у 3 (38%) больных - в одном случае мутация 185delAG в гене BRCA1 и 2 мутации в 11 экзоне гена BRCA2 - 6174delT и 6640del7. Л/?СЛ2-мутация 6640del7 является уникальной и выявлена впервые. Один из пациентов с 5 первично-множественными опухолями (2 случая РТК, меланома, РМЖ и РПЖ) по клиническим характеристикам соответствовал критериям синдрома Линч (ННКРР). Поскольку в анамнезе присутствовали РМЖ и РПЖ, проведён анализ генов BRCA1/2 и MLH1/MSH2. Обнаружена терминальная мутация в гене MLH1 - 618del3.
Злокачественные листовидные опухоли молочной железы. Листовидные опухоли молочной железы - редкие фиброэпителиальные опухоли, как правило, имеющие доброкачественный характер. Злокачественные листовидные опухоли состоят из мезенхимальных и эпителиальных клеток в различных пропорциях. Вклад генетических изменений в развитие этого типа опухолей недостаточно изучен.
ДНК-диагностика генов BRCA1 и TP53 была проведена среди 7 пациенток с листовидной опухолью молочной железы в возрасте от 25 до 51 года. Терминальных мутаций в этих генах обнаружено не было. У одной из пациенток с диагнозом двухсторонняя листовидная саркома молочной железы был выявлен вариант в гене ТР53 - Int3dupl6 в гомозиготном состоянии. Ассоциация листовидных опухолей молочной железы с мутациями в гене BRCA1 не очевидна. Только в одной работе у больной с таким типом заболевания была выявлена BRCA /-мутация R1699W (Rhiem
К. et al., 2007). Листовидные опухоли довольно часто встречаются у женщин-носителей 7Р53-мутапии. В одном случае мы идентифицировали в этом гене гомозиготный вариант Int3dupl6 (14,3%). Возможно, вариант Int3dupl6 как аллель низкой пенетрантности ассоциирован с риском развития не только некоторых типов рака, но также листовидных опухолей молочной железы.
IV. АССОЦИАЦИЯ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ BRCA1, BRCA2, ТР53 И PGR С РАЗВИТИЕМ РМЖ И РЯ
Женщины, несущие мутацию в гене BRCA1 или BRCA2, имеют очень высокий риск развития рака на протяжении жизни, особенно РМЖ. Имеются значительные различия в оценке риска развития заболевания для BRCA-носителей. По данным Breast Cancer Linkage Consortium для женщин из высокоотягощённых семей риск развития РМЖ составляет 85-87% (BRCA1) и 77-84% (BRCA2). В тоже время рассчитанный на основании популяционных данных риск РМЖ заметно ниже - 2860% для BRCA1 и ещё ниже для BRCA2-мутаций. Риск возникновения заболевания зависит также от возраста диагноза и сайта локализации рака у родственников. Такие факты подтверждают гипотезу модифицирующего влияния на риск развития РМЖ и РЯ определённых генетических вариантов, кластеризующихся в семье. Существование таких вариантов подтверждается наличием фенокопий в BRCA1/2-позитивных семьях (Smith А. et al., 2007).
Был исследован ряд однонуклеотидных полиморфизмов (ОНП) в генах, как возможных генетических факторов, модифицирующих риск развития рака у носителей BRCA/-мутации: 3232A/G (E1038G) в гене BRCA1; 203G/A, 1342А/С (N372H) в гене BRCA2; R72P и Int3dupl6 в гене ТР53; миссенс-мутация V660L (G/T, rsl042838) и ОНП на З'-конце гена (Т/А, rs608995) в гене PGR.
Частоты редких аллелей по полиморфизмам E1038G, 203G/A и N372H среди всех больных с мутацией не отличались от контрольных значений. Среди больных РМЖ и РЯ частота гомозиготного генотипа 372НН была ниже - 1,87% (2/107) по сравнению с контрольной группой - 5%. Это различие статистически значимо при сравнении с группами спорадического РМЖ (7,4%; р=0,05) и семейного BRCA-негативного РМЖ (9,5%; р=0,015). В тоже время среди больных обоими типами рака РМЖ+РЯ частота 372НН составляет 8,7% (2/23) - подобный генотип может быть фактором, связанным с более тяжелой формой заболевания (РМЖ+РЯ). Генотип 203А/А достоверно чаще встречался в группе РЯ (10,8%) по сравнению с группой РМЖ (1,43%).
Частоты редких аллелей по полиморфизмам R72P и Int3dupl6 среди больных с мутацией не отличались от значений в контрольной выборке. Наблюдалось увеличение количества редких гомозиготных генотипов (72РР и Int3dupl6+/+), однако различие с контрольными значениями статистически не достоверно. Данных в
пользу модифицирующего влияния ГР5J-генотипов на риск развития рака различной локализации не получено. В тоже время среди носителей мутации C61G отмечается преобладание генотипов R72P и 72РР. Хотя число пациентов с этой мутацией не велико (п=10), аллельная частота 72Р (OR=2,7; р=0,028) и частота минорного генотипа 72РР (3/10; OR=5,57; р=0,016) значительно выше и достоверно отличается от контрольных значений. В тоже время распределение генотипов ТР53 среди пациентов с мутацией 5382insC и 185delAG аналогично контролю. Таким образом, аллель 72Р, возможно, ассоциирован с развитием рака у носителей мутации C61G.
Два ОНП в гене PGR (ген рецептора прогестерона) - V660L (G/T, rsl042838) и Т/А, rs608995 образуют 4 гаплотипа, обозначенные как А, В, Р и Т. Гаплотип Р соответствует аллелю PROGINS, связанному по данным ряда работ с повышенным риском развития РЯ. Частота гаплотипа В была значительно выше среди носителей мутации BRCA1, страдающих РМЖ (х2=7,37; р=0,0066). При этом частоты в группе спорадического РМЖ идентичны контрольным значениям. В случае больных РЯ наблюдается превышение гаплотипа Р (т.е. PROGINS), не достигающее достоверности. Наиболее распространенный гаплотип А встречается в контроле и в других группах примерно с одинаковой частотой.
При изучении распределения генотипов гена PGR получены следующие данные. В группе РМЖ встречаемость генотипов гетеро- и гомозиготных по аллелю В (AB и ВВ), значительно превалировала по сравнению как с контролем (%2=9,67; р=0,0019; OR=3,29), так и с группой больных РЯ с мутацией (/2=4,54; р=0,033). Среди больных двРМЖ также повышено число генотипов, содержащих аллель В, причём обе пациентки с генотипом ВВ страдали двРМЖ. И, наоборот, у больных РЯ по сравнению с контролем выше частота генотипов, включающего аллель Р (АР и РР). Эта различие становится статистически значимым при сравнении двух групп больных - РЯ и РМЖ (х2=4,58; р=0,032). Отметим, что среди больных гомозиготный вариант РР был обнаружен только у пациентов с РЯ. Распределение генотипов среди больных со спорадическим заболеванием аналогично контрольным значениям.
Для носителей мутации 5382insC получены аналогичные результаты. Встречаемость генотипов AB и ВВ значительно превалировала среди РМЖ и, особенно двРМЖ, по сравнению как с контролем (у2=8,43; р=0,0037), так и с группой больных РЯ. Среди больных РЯ значительно возрастает частота АР и PP.
Чем могут объясняться такие данные? У женщин с PROGINS повышен риск развития онкопатологии в тех тканях, на которые воздействие прогестерона оказывает протективный эффект - рака яичника, рака эндометрия (Modugno F., 2004; Romano А. et al., 2006). Однако в случае молочной железы, где прогестерон не оказывает протективного действия в отношении опухолевого развития и, наоборот, стимулирует клеточную пролиферацию, женщины-носители PROGINS имеют сниженный риск развития РМЖ (Реагсе С. et al., 2005). Повышенная активность рецептора прогестерона PGR в ткани молочной железы у женщин с мутантным
BRCA1, стимулирует избыточную пролиферацию клеток эпителия. PROGINS как менее стабильный и менее активный рецептор (Romano А. et al., 2007) в такой ситуации играет защитную роль в отношении риска развития РМЖ, но не РЯ.
V. КЛИНИЧЕСКИЕ II ПАТОМОРФОЛОГНЧЕСКНЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАСЛЕДСТВЕННОГО РМЖ II РЯ
Возрастные характеристики /Ш7/4-ассоцпировашюго РМЖ и РЯ. РМЖ и
РЯ у женщин с BRCA-мутациями возникает значительно раньше по сравнению со спорадическими случаями. Средний возраст диагноза у BRCA1-носителей ниже, чем у больных с мутацией в BRCA2. В нашем исследовании получены следующие характеристики возраста диагноза РМЖ и РЯ для наследственной группы больных (BRCAI: средний возраст заболеваемости РМЖ - 41,6 год; BRCA2: 45,3 лет; BRCA1: РЯ - 47,5 лет). В тоже время средний возраст семейного РМЖ - без мутаций в BRCA-генах - также ниже по сравнению с общепопуляционными значениями (47,5 лет и 54 г.) Это свидетельствует об участии в этиологии семейного РМЖ других генетических факторов. Больные двРМЖ с мутациями характеризовались ещё более ранним возрастом диагноза 1-го РМЖ (37,5 лет) по сравнению с BRCA/-ассоциированными случаями одностороннего РМЖ. Эти данные подтверждают связь риска развития контралатерального РМЖ с ранней манифестацией первичного рака, как в случае BRCA/-носителей, так и семейного и спорадического РМЖ
Гистологические и иммуногистохимическне характеристики BRCA-ассоцнированных опухолей молочной железы и яичников. Анализ гистологических и иммуногистохимических характеристик опухолей молочной железы показал типичный «портрет» как в случае ДДС4//2-ассоциированных опухолей, так и спорадических. Среди BRCA/-ассоциированных опухолей преобладает инфильтративно-протоковый рак, отмечается РЭ", РГГ, HER2-neu"-статус опухоли, чаще встречается медуллярный рак, во всех случаях наблюдается выраженный терапевтический эффект. Характерным для больных с мутацией BRCA2 было преобладание инфильтративно-долькового рака (ИДР) - 54,5%, по сравнению с встречаемостью этого вида опухоли у носителей мутаций BRCA1 и больных спорадическим РМЖ. Спорадические опухоли чаще имеют РЭ+, РП+, HER2-neu+-статус, выше доля инфильтративно-долькового, смешанного и редких типов рака. В случае двРМЖ отмечается высокая конкордантность обеих опухолей, как по гистологии рака, так и по рецепторному статусу, особенно в группе с BRCA-мутацией. Такая ситуация может быть следствием генетических факторов риска и/или возникновения общих пренеопластических изменений в ткани обеих молочных желёз, что подтверждается недавними результатами S. de Brakeleer с соавт. (de Brakeleer S. et
а!., 2007), показавших нестабильность генома и в лейкоцитах и в нормальных клетках молочной железы носителей мутаций ВЯСА1 и ВЕСА2.
VI. АЛГОРИТМ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
В ходе выполнения работы создан банк образцов ДНК больных РМЖ и/или РЯ и их родственников (п=1088) и всесторонне исследована значительная группа пациентов. Изучение спектра и частот мутаций в генах предрасположенности в разных группах больных с учетом индивидуального и семейного анамнеза, в т.ч. диагноза заболевания и возраста его возникновения, диагноза заболеваний у родственников, степени онкологической отягощённости в семье, предоставило фундаментальную информацию о природе наследственной формы РМЖ и/или РЯ в российской популяции. Это знание позволило разработать алгоритм исследования генов ВЕСА 1/2, ТР53, МШ1/МЗН2/М$Н6 и СНЕК2, рис.3. ДНК-диагностика генов предрасположенности с применением разработанного алгоритма внедрена в практику МГНЦ РАМН и РОНЦ РАМН им. Н.Н.Блохина. Такой алгоритм применим для российских регионов с преобладанием русского населения - Центрального, СевероЗападного, Южного регионов, Сибири. В тоже время для регионов с другим этническим составом требуется дальнейшее изучение спектра мутаций в генах, поскольку высока вероятность существования иных мутаций с эффектом основателя для определённых этнических групп.
Определение и изучение генов, ответственных за наследственную предрасположенность к РМЖ/РЯ, создало принципиально новые возможности медико-генетического консультирования - ДНК-диагностика с целью выявления мутаций обеспечивает подтверждение формально-генетического диагноза, расчёт риска развития заболевания, возможность ранней диагностики, выбор тактики лечения и профилактики, а также решение проблем планирования семьи. Идентифицированная наследуемая мутация является объективным критерием формирования групп риска в отношении развития рака той или иной локализации для динамического наблюдения пациентов в условиях онкодиспансера.
Рис.3. Алгоритм проведения ДНК-диагностики для пациентов с онкологически отягощенным семейным анамнезом.
ВЫВОДЫ
1. В спектре мутаций в гене ВЯСА1 в Центральном регионе России преобладают три мутации (85%), из них наиболее частая мутация 5382тэС (68%). На долю редких вариантов гена приходится около 15%. Частота впервые выявленных вариантов составляет 3,2% от всех ВЯСА/-мутаций.
2. Спектр мутаций в гене ВКСА2 характеризуется уникальностью вариантов и высокой частотой новых мутаций (40%).
3. Ген ВЯСА1 играет основную роль в наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ - доля ВЯСА/-мутаций составляет 89,4%. Мутации в гене В НС А 2 обусловливают предрасположенность преимущественно к одно- и двухстороннему РМЖ.
4. Повторяющиеся ВЯСА/-мутации - 2080<1е1А, 4154с1е1А и 5382тэС находятся каждая на определённом гаплотипе гена по микросателлитным маркерам. Данные указывают на распространение этих мутаций вследствие эффекта основателя.
5. Возникновение рака различной локализации - РМЖ или РЯ - не связано с положением мутации в гене ВЯСА1. В то же время конкретные мутации в гене ВЯСА1 (2080<)е1А и 4154с1е1А) обладают сайт-специфическими свойствами, обусловливающими предрасположенность к развитию преимущественно рака яичников.
6. В группах больных РМЖ, двухсторонним РМЖ и РЯ мутации в генах ВЯСА 1/2 встречаются с разной частотой - 32%, 52,3%, 69% соответственно (р<0,05). Подобные закономерности сохраняются в выборках, сформированных по наличию в семье разных типов рака: частоты ВЯСА1/2-мутаций в семьях с наследственным односторонним РМЖ, двухсторонним РМЖ и раком яичников составляют 25%, 46,3% и 66,3%, соответственно. Спектры мутаций во всех этих семьях характеризуются преобладанием одних и тех же трёх наиболее частых мутаций.
7. В семьях с мутацией в гене ВЯСА1 наблюдается преимущественное накопление случаев рака той же локализации, что и у пробанда. Соотношение случаев РМЖ и РЯ значимо отличается в семьях пробандов с РМЖ или РЯ. Это характерно и для семей, наследующих одну мутацию 5382тэС. Накопление преимущественно одного типа рака в семье может быть обусловлено наследованием генетических вариантов, модифицирующих риск возникновения РМЖ и/или РЯ при мутации в гене ВЯСА 1.
8. Наличие в семье случаев рака яичников служит показателем высокой вероятности присутствия мутации в гене ВЯСА1 (70%). Двухсторонний РМЖ примерно в 2 раза чаще, чем односторонний, обусловлен мутациями в генах ВЯСА1 и ВЯСА2 и характеризуется ранним возрастом диагноза первичного РМЖ
9. Часть наследственного РМЖ и/или РЯ (оценочно 2%) ассоциирована с мутациями в гене СНЕК2 и генах MLH1, MSH2, MSH6. В таких семьях кроме РМЖ и РЯ наблюдается накопление соответствующей синдромалыюй патологии.
10. Больные с наследственной формой РМЖ при ранней манифестации заболевания характеризуются высокой частотой мутаций в генах BRCA1/2 (70,6%). Среди BRCA-негативных больных с ранней манифестацией РМЖ (до 31 года) отмечается существенная частота мутаций в гене ТР53 - 13,6%, часть из которых являются мутациями de novo. Ранний возраст возникновения РМЖ свидетельствует о генетической природе заболевания, ассоциированного преимущественно с мутациями в генах BRCA1/2 и TP53.
11. При мутации в гене BRCA1 обнаружена ассоциация рака яичников с генотипом 203А/А гена BRCA2. Разные генотипы гена PGR, образованные двумя ОНП (G/T, rsl042838 и Т/А, rs608995), ассоциированы с развитием либо РМЖ, либо РЯ. Генотипы R72P и Р72Р гена ТР53 ассоциированы с раком при мутации C61G в гене BRCA1, при других BRCA1-мутациях такой связи не наблюдается.
12. Наличие терминальной мутации в гене BRCA1 обусловливает определённую клиническую картину заболевания: ранний возраст манифестации заболевания, выраженный терапевтический эффект (100%) и определяет фенотип BRCAI-ассоциированных опухолей молочной железы, характеризующихся преобладанием инфильтративно-протокового рака (80%), высокой частотой медуллярного рака (8%), высокой степенью злокачественности, низкой частотой мультицентричности (3%); РЭ, РП, HER2-neu-eraTyc опухоли является трижды отрицательным (80%).
13.На основе полученных данных разработан и внедрен в практику алгоритм исследования генов BRCA1/2, TP S3, СНЕК2, MLHI, MSH2, MSH6 с целью изучения природы и диагностики наследственных форм РМЖ и/или РЯ. В ходе исследования создан банк образцов ДНК больных РМЖ и/или РЯ и их родственников (п=1088); пациенты охарактеризованы по мутациям в генах BRCA1/2, ТР53, СНЕК2, MLHI/MSH2/MSH6 и ряду полиморфных генетических вариантов.
РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Карпухин А.В., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., Петрова Н.И. и др. Определение мутации гена BRCA 1 при наследственной предрасположенности к раку молочной железы// Тезисы Конференции «Геном человека-99». - Москва, 1999. - С. 99.
2. Логинова А.Н., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., Хомич Е.В., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е. К., Карпухин А.В. Структурные особенности гена BRCA 1, связанные с предрасположенностью к раку молочной железы или яичников// II Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - Москва, 2001. - С. 253
3. Хомич Е.В., Поспехова Н.И., Любченко Л.И., Логинова А.Н., Гинтер Е.К., Гарькавцева Р.Ф., Карпухин А.В. Характеристика структуры кодирующих участков гена BRCA2 при наследственном раке молочной железы среди пациентов московского региона. II Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Москва, 2001.-С.256
4. Loginova A.N., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Khomich E.V., Budilov A.V., Zakharyev V.M., Ginter E.K., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V. Mutations and Sequence Variations of BRCA1 Gene in Breast/Ovarian Cancer Families from Russia// Abstract Of 10th International Congress Of Human Genetics. - Eur. J. Human Genet. -2001.-V. 9. - P.115.
5. Pospekhova N.I., Khomich E.V., Lubchenko L.N., Loginova A.N., Budilov A.V., Zakharyev V.M., Ginter E.K., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V. Sequence Variations of BRCA2 Gene in Breast/Ovarian Cancer Families from Russia// Abstract Of 10th International Congress Of Human Genetics. - Eur. J. Human Genet. - 2001. - V. 9. -P.115.
6. Karpukhin A.V., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Loginova A.N., Khomich E.V., Budilov A.V., Zakharyev V.M., Garkavtseva R.F., Ginter E.K.. The Occurrence Of Breast Or Ovarian Cancer In Families Under Inherited Predisposition Is Associated With Single Nucleotide Polymorphisms Of BRCA 1 Gene// Abstract Of 10th International Congress Of Human Genetics. - Eur. J. Human Genet. -2001. - V. 9. - P. 114-115.
7. Гарькавцева Р.Ф., Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Брюзгин В.В., Хайленко В.А., Карпухин А.В. Возможности клинического применения генодиагностики предрасположенности к раку молочной железы и профилактического лечения носителя этого заболевания// Матер. I всероссийской научно-практической конференции с международным участием, сборник статей "Актуальные вопросы маммологии". - Москва, 2001. - С.127-132
8. Loginova A.N., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Khomich E.V., Kuzmina I.V., Budilov A.V., Zakharyev V.M., Ginter E.K., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V..
Association of 5382insC mutation with SNPs of BRCA1 gene and the mutation frequency in Russia// Abstract Of European Human Genetics Conference. - Eur. J. Human Genet. -2002. - V. 10, Suppl. 1. - P.85.
9. Khomich E.V., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Loginova A.N., Kuzmina I.V., Budilov A.V., Zakharyev V.M., Ginter E.K., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V. BRCA2 mutations and polymorphisms in Russian patients with familial breast/ovarian cancer// Abstract Of European Human Genetics Conference - Eur. J. Human Genet. - 2002. - V. 10, Suppl. 1.-P.85.
10. Карпухин A.B., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., Логинова А.Н., Хомич Е.В., Будилов А.В., Сергеев А.С., Захарьев В.М., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К. Частоты однонуклеотидных полиморфизмов и мутаций в гене BRCA1 при наследственно обусловленном раке молочной железы и яичников// ДАН. - 2002. - Т. 383, N5. - С. 1-4.
И. Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Поспехова Н.И., Карпухин А.В., Шабанов М.А. Генодиагностика наследственной предрасположенности к раку молочной железы и разработка индивидуального прогнозирования развития заболевания// Материалы III научно-практической конференции "Проблемы онкогенетики: научные и прикладные аспекты". - Украина, Киев, 2002. - Онкология. - Т. 4, Suppl. -С.26-27.
12. Liubchenko L., Pospekhova N., Shabanov M., Rotobelskaya L., Brusgin V., Khailenko V., Karpukhin A., Garcavtseva R. Fenotypic characteristics BRCA I-associated breast cancer amoung Russian families// 18th UICC International Cancer Congress. - Int. J. Cancer. - 2002, Suppl.13. - P.327-328.
13. Osmanova L., Liubchenko L., Pospekhova N., Portnoy S., Zhordania K., Brusgin V., Khailenko V., Karpukhin A., Garcavtseva R., Tjulandin S. Frequency of BRCA 1/2 mutations in high-risk breast/ovarian cancer families from Russian population// 27"1 ESMO Congress. - Ann. Oncology. - 2002. - V.13, Suppl. 5. - P.34-35.
14. Карпухин A.B., Логинова A.H., Хомич E.A., Поспехова Н.И. Наследственная предрасположенность к раку молочной железы// Медицинская генетика. - 2002. -Т.1, № 6. - С. 254-261.
15. Loginova A.N., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Budilov A.V., Zakharyev V.M., Ginter E.K., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V. Analysis of genetic heterogeneity breast cancer families by BRCA1/2 gene mutations and single nucleotide polymorphisms// Eur.J.Hum.Gen. - 2003. - V. 11, Suppl. 1. - P.66.
16. Karpukhin A.V., Loginova A.N., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Ginter E.K. The combination of BRCA 1 and BRCA2 variants is associated with risk of familial breast cancer among probands without BRCA1/2 mutations// 14th General Meeting of the BCLC/ICG-FBOC - The Breast Cancer Linkage Consortium. - Madrid, Spain, 2003.-P.41.
17.Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Поспехова Н.И., Брюзгин В.В., Карпухин A.B. ДНК-диагностика и медико-генетическое консультирование при наследственной предрасположенности к раку молочной железы. //В сбор. «Возможности современной онкологии в диагностике и лечении злокачественных заболеваний» -Москва, 2003. - С.44-47.
18.Лк>бченко Л.Н., Поспехова Н.И., Портной С.М., Брюзгин В.В., Карпухин A.B., Гарькавцева Р.Ф. Наследственные формы рака молочной железы и/или яичников: прогноз, тактика лечения и профилактики. //Материалы VII Российского Онкологического Конгресса. - Москва, 2003. - С.134-136.
19.Логинова А.Н., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., Будилов A.B., Гарькавцева Р.Ф., Крпухин A.B. Спектр мутаций в гене BRCA 1 при наследственных формах рака молочной железы и яичников в российских семьях// Бюлл. экспер. биол. мед. -
2003. -Т. 136, №9. -С. 276-178.
20. Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин A.B. Гетерогенность семей с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы по встречаемости мутаций в гене BRCA1// Медицинская Генетика. -2003. - Т. 2, № И. - С. 459-463.
21.Lubchenko L.N., Pospekhova N.I., Bryuzgin V.V., Zharkov S.A., Podistov Y.I., Makhova E.E., Lushnikova A.A., Karpukhin A.V., Garkavtseva R.F.. Clinical and molecular characteristics of hereditaiy breast or/and ovarian cancer in Russian population// Eur. J. Hum. Gen. -2004. - V. 12, Suppl.l. - P.171.
22. Pospekhova N.I., Loginova A.N., Lubchenko L.N., Portnoy S.M., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V.. The BRCA1 and BRCA2 association among patients with sporadic and familial breast cancer without the gene mutations// Eur. J. Hum. Gen. -
2004.-V. 12, Suppl.l.-P.181.
23. Карпухин A.B., Логинова A.H., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., A.B. Будилов, Захарьев В.М., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К. Анализ мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в генах BRCA1/2 при семейном раке молочной железы и яичников: преобладание в России мутации 5382insC. Тезисы 3 съезда Всероссийского общества генетиков и селекционеров «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития». - Москва, 2004. - Т. 2. - С. 25.
24. Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Любченко Л.Н., Хомич Е.В., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин A.B. Генетическая гетерогенность семей с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы и яичников по встречаемости мутаций в генах BRCA1/2 и ассоциация вариантов этих генов с риском заболевания среди пробандов без мутаций в указанных генах// Тезисы 3 съезда Всероссийского общества генетиков и селекционеров «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития». - Москва, 2004. - Т. 2. - С. 90.
25. Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Портной С.М., Летягин В.П., Карпухин A.B., Гарькавцева Р.Ф. Генотипические варианты семей с раком молочной железы// 1
Международная онкологическая конференция «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы». - Санкт-Петербург, 2004. - С. 127-128.
26. Lubchenko L.N., Pospekhova N.I., Portnoy S.M., Zordania K.I., Bryuzgin V.V., Tjulandin S.A., Karpukhin A.V., Garkavtseva R.F.. Genotypic characteristics of of hereditary breast or/and ovarian cancer in Russian population// Abstracts of the ESO Inside Track Conference on Familial Cancer. - Madrid, Spain, 2004. - Familial Cancer. -V. 3, N.2. - P. 168.
27. Lyubchenko L., Pospekhova N., Lushnikova A., Portnoy S., Karpukhin A., Garkavtseva R. Tumor characteristics of BRCAl-associated familial breast cancer from Russian population// Eur. J. Hum. Genetics - 2005. - V. 13, Sup. 1. - P.212.
28. Любченко Л.Н, Поспехова Н.И., Попов A.C, Карпухин A.B., Гарькавцева Р.Ф. Наследственные формы рака молочной железы и яичников: ДНК-диагностика, клинико-молекулярная патология и медико-генетическое консультирование // Медицинская Генетика. -2005. - Т.4, №5. - С.220-221.
29. Lyubchenko L., Pospekhova N., Lushnikova A. et al., Portnoy S., Karpukhin A.V., Garkavtseva R.F. Prognostic factors for BRCAl-associated familial breast cancer from Russian population//Eur. J. Cancer. - 2005. - V. 3, N. 2. - P. 322.
30. Поспехова Н.И., Логинова A.H., Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин А.В. Молекулярно-генетические аспекты наследственной предрасположенности к раку молочной железы и/или яичников I. Что обуславливает риск при мутациях в гене BRCA1? //Медицинская Генетнка. -2005.-№ 1,-С. 23-27.
31. Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Сергеев А.С., Гинтер Е.К., Карпухин А.В.. Молекулярно-генетические аспекты наследственной предрасположенности к раку молочной железы и/или яичников. II. Что обусловливает риск семейного рака молочной железы без мутаций в генах BRCA1/2? // Медицинская Генетика. - 2005. - № 2,- С.71-75.
32. Карпухин А.В., Поспехова Н.И., Музаффарова Т.А., Захаров С.Ф., Смирнова Т.Ю., Цуканов А.С., Логинова А.Н., Любченко Л.Н., Гончарова Е.А., Апанович П.В., Апанович Н.В. и др. Молекулярная диагностика моногенных форм рака// Медицинская Генетика. - 2006. - №5, прил.2. - С. 1-6.
33. Pospekhova N.I., Smirnova T.Yu., Lubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V.. BRCA 2 variant associated with modification of ovarian cancer occurrence among Russian carriers with BRCA1 mutations// Eur. J. Hum. Gen. - 2006. -V. 14, Suppl.-P. 209.
34. Smirnova T.Yu., Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V.. Analysis of BRCA 1 and BRCA 2 genes among unselected ovarian cancer cases in Russia// Eur. J. Hum. Gen. - 2006. - V. 14, Suppl. -P. 225.
35. Smirnova T.Y., Pospekhova N.I., Loginova A.N., Lyubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V. Different profiles of BRCA1 and BRCA2 SNPs association
with breast/ovarian cancer risk among sporadic cases and BRCA1 mutation carriers// Eur. J. Hum. Genet. - 2007. - V. 15, Sup. 1. - P. 166.
36. Смирнова Т.Ю., Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Портной С.М., Жорданиа К.И., Гарькавцева Р.Ф., Карпухин А.В. Рак молочной железы и яичников. Роль наследственных факторов//Опухоли женской репродуктивной системы. - 2007. -№4. - С. 90-96.
37. Lyubchenko L.N., Pospekhova N.I., Lushnikova А.А., Portnoy S.M., Bryzgin V.V., Karpukhin A.V., Garkavtseva R.F. Prognostic factors for BRCA1/2 - associated familial breast cancer from Russian population// Breast Cancer Res. Treat. - 2007. - V.106. - P. 62.
38. Смирнова Т.Ю., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н.Дюляндин С.А., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин А.В. Высокая частота мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 при раке яичников. //Бюлл. Эксп. Биол. Мед. - 2007. - №144 (1). - С. 83-85.
39. Любченко Л.Н., Поспехова Н,И. Медико-генетическое консультирование онкологических больных молодого возраста// Материалы XII Российского онкологического конгресса. - Москва, 2008. - С. 57-59.
40. Пароконная А.А., Нечушкин М.И., Воротников И.К., Лушникова А.А., Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Ермилова В.Д.. Неэпителиальная опухоль молочной железы на фоне существующей беременности. Клинико-генетические особенности// Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохииа. - 2008. - Т. 19, №1. - С. 71-75.
41. Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Поспехова Н.И., Карпухин А.В. Медико-генетическое консультирование при наследственном раке молочной железы// Медицинская Генетика. - 2008. - № 10. - С.30-34.
42. Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Лушникова А.А., Пароконная А.А., Карпухин А.В., Гарькавцева Р.Ф. Клинико-генетический скрининг при опухолях женской репродуктивной системы/'/ Вопросы онкологии. - 2008. - Т.54, №2. - С.17-18.
43. Пароконная А.А., Лушникова А.А., Любченко Л.Н., Полевая Е.Б., Поспехова Н.И. Прогноз и течение рака молочной железы на фоне беременности и лактации: вирусно-генетические особенности// Сибирский онкологический журнал. - 2008. -№2.-С. 15-20.
44. Smirnova T.Yu., Pospekhova N.I., Loginova A.N., Lubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V. Complex BRCA1 and BRCA2 SNP combinations are associated with breast and ovarian cancer risk modification// Eur. J. Hum. Gen.- 2008. -V.16, Suppl. 2. - P.204.
45. Loginova A.N., Lubchenko L.N., Parokonnaya A.A., Lushnykova A.A., Garkavtseva R.F., Pospekhova N.I., Karpukhin A.V. High frequency of BRCA1 gene mutations among patients with pregnancy associated breast cancer// Eur. J. Hum. Gen. - 2008. - V. 16, Suppl. 2. - P.204.
46. Pospekhova N.I., Lubchenko L.N., Loginova A.N., Poddubskaya E.V., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V. Genetic peculiarities of families with inherited bilateral breast cancer// Eur. J. Hum. Gen. - 2008. - V.16, Suppl. 2. - P.203.
47. Карпухин A.B., Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Музаффарова Т.А., Смирнова Т.Ю., Цуканов A.C., Апанович Н.В., Коротаева A.A., Любченко Л.Н., Гинтер Е.К. Молекулярные особенности генов-супрессоров наследственных форм ряда частых онкологических заболеваний// Сборник матер. Всеросс. конф. с международным участием «Молекулярная онкология». - Новосибирск, 2008. - С. 112-113.
48. Смирнова Т.Ю., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин A.B. Модификация риска локализации рака при мутациях в гене BRCA// Сборник матер. Всеросс. конф. с международным участием «Молекулярная онкология». - Новосибирск, 2008. - С. 158-159.
49. Смирнова Т.Ю., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин A.B. Молекулярные причины предрасположенности к раку яичников// Сборник матер. Всеросс. конф. с международным участием «Молекулярная онкология». - Новосибирск, 2008. - С. 156-157.
50. Lyubchenko L., Pospekhova N., Parokonnaya A., Loginova A., Lushnikova A., Karpukhin A., Garkavtseva R.. Clinical-genetic characteristics of pregnancy associated breast cancer in Russian patients// 3-th Familial Cancer Conference. - Madrid, Spain, 2008. - P.96.
51. Апанович H.B., Поспехова Н.И., Логинова A.H., Любченко Л.Н., Апанович П.В., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин A.B. Определение протяженных делеций в гене BRCA1 при семейной форме рака молочной железы/яичников среди российских больных// Медицинская Генетика. - 2009. - №9. - С.25-31.
52. Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Пароконная A.A., Лушникова A.A., Чевкина Е.М. Рак молочной железы и /или яичников в составе наследственного онкологического синдрома. //Опухоли женской репродуктивной системы. - 2009, № 1-2. - С. 59-63.
53. Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Пароконная A.A., Стенина М.Б., Тюляндин С.А. Брюзгин В.В., Карпухин A.B., Гарькавцева Р.Ф. Редкие наследственные онкологические синдромы. Значение клинико-молекулярной диагностики// Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. - 2009. - Т. 2, № 1. - С. 93-94.
54. Карпухин A.B., Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Музаффарова Т.А., Цуканов A.C., Смирнова Т.Ю., Апанович Н.В., Коротаева A.A., Гончарова Е.А., Любченко Л.Н., Новикова О.В., Гинтер Е.К. Генетическая гетерогенность проявления мутаций в генах-супрессорах наследственных форм онкологических заболеваний// Матер. 7-ой Международной конференции «Молекулярная генетика соматических клеток». -Звенигород, 2009. - С.16-17.
55. Апанович Н.В., Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Любченко Л.Н., Апанович П.В., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин A.B.. Исследование перестроек генов: новая протяженная делеция в гене BRCA1 при семейной форме рака молочной железы/яичников// Матер. 7-ой Международной конференции «Молекулярная генетика соматических клеток». - Звенигород, 2009. - С. 47-48.
56. Pospekhova N.I., Loginova A.N., Lubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Karpukhin A.V. The BRCA1/2 and TP53 mutations among patients with bilateral breast cancer// Eur. J. Hum.Gen. - 2009. - V.17, Suppl. 2. -P. 192.
57. Lyubchenko L., Pospekhova N., Parokonnaya A., Portnoy S, Lushnykova A., Karpukhin A., Garkavtseva R. BRCA1 and TP53 mutations in pregnancy-associated breast cancer in Russian Patients// Abs. IMP АКТ Breast Cancer Conference. - Brussels, Belgium, 2009. - Ann. Oncology. - V. 20, Suppl.2. - ii39.
58. Smirnova T.Y., Pospekhova N.I., Loginova A.N., Lubchenko L.N., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V. The BRCA1/2 mutations and SNPs in ovarian cancer risk// Eur. J. Hum.Gen. - 2009. - V.17, Suppl. 2. - P. 191.
59. Поспехова Н.И., Логинова A.H., Шубин В.П., Портной С.М., Лушникова А.А., Анурова О.А., Любченко Л.Н., Карпухин А.В.. Двухсторонний рак молочной железы в российской популяции: молекулярно-генетические, семейные и клинические характеристики// Молекулярная медицина. - 2010.- № 3. - С. 38-42.
60. Апанович Н.В., Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Любченко Л.Н., Апанович П.В., Гарькавцева Р.Ф., Гинтер Е.К., Карпухин А.В. Исследование наследуемых протяженных делеций в гене BRCA1 при раке молочной железы/яичников// Матер. VI съезда мед. генетиков. - Медицинская генетика. - 2010. - С. 10.
61. Поспехова Н.И., Логинова А.Н., Крохина О.В., Соболевский В.А., Любченко Л.Н., Карпухин А.В.. Наследственный рак молочной железы и/или яичников: молекулярно-генетический и семейный анализ// Матер. VI съезда мед. генетиков. -Медицинская генетика. - 2010,- С.146.
62. Apanovich N.V., Pospekhova N.I., Loginova A.N., Lubchenko L.N., Apanovich P.V., Garkavtseva R.F., Ginter E.K., Karpukhin A.V.. The large BRCA1 new deletion revelation among Russian families with breast/ovarian cancer// Eur. J. Hum. Gen. - 2010. -V.18, Suppl.-P.164-165.
Список сокращений
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота ИДР - инфильтративио-дольковый рак ЛФС - синдром Ли-Фраумени МРМЖ - мужской рак молочной железы .
ННКРР - синдром наследственного неполипозного колоректального рака НРМЖ/РЯ - наследственный рак молочной железы и/или яичников ОГМ - опухоль головного мозга ОНП - однонуклеотидный полиморфизм
ПМЗН - первично-множественные злокачественные новообразования ПЦР — полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени
РЖ - рак желудка
РМЖ - рак молочной железы
РМЖ-АБ - рак молочной железы, ассоциированный с беременностью
двРМЖ - двухсторонний рак молочной железы
РП - рецептор прогестерона
РПЖ - рак предстательной железы
РТК - рак толстой кишки
РТМ - рак тела матки
РЭ - рецептор эстрогена
РЯ - рак яичников
СЛФП - синдром Ли-Фраумени подобный
BIC database - Breast Cancer Information Core Database
CSGE - метод конформационно-чувствительного электрофореза
RFLP - метод анализа длины рестрикционных фрагментов
SSCP - метод анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК
Подписано в печать:
15.03.2011
Заказ № 5171 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Поспехова, Наталья Ивановна
ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность работы.
Научная новизна полученных результатов.
Научно-практическая значимость работы.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1. РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
2. РАК ЯИЧНИКОВ.
3. КАНЦЕРОГЕНЕЗ.
4. НАСЛЕДСТВЕННЫЙ РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
И/ИЛИ ЯИЧНИКОВ.
4.1. Наследственный рак молочной железы.
4.2. Наследственный рак яичников.
4.3. Риск развития BRCA-ассоциированного РМЖиРЯ.
5. ГЕНЫ BRCA1 и BRCA2.
5.1. Структура гена BRCA1.
5.2. Доменная структура белка BRCA1.
5.3. Функции белка BRCА1.
5.4. Структура гена BRCA2.
5.5. Доменная структура белка BRCA2.
5.6. Функции белка BRCA
6. СПЕКТР МУТАЦИЙ В ГЕНАХ BRCA1/
6.1. Частота мутации 53 82insC в гене BRCA1 в разных странах.
6.2. Популяционные частоты мутаций в генах BRCA1/2.
7. СПОРАДИЧЕСКИЙ РМЖ И РЯ.
8. ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЛИМОРФИЗМОВ В ГЕНАХ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ.
9. РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, АССОЦИИРОВАННЫЙ
С МУТАЦИЯМИ В ГЕНЕ TP53.
9.1. Структура гена TP53.
9.2. Доменная структура ТР53.
9.3. Функции ТР53.і.
9.4. Синдром Ли-Фраумени
9.5. Терминальные мутации в гене ТР53.
10. СНЕК-АССОЦИИРОВАННЫЙ РМЖ.
11. НАСЛЕДСТВЕННЫЙ НЕПОЛИПОЗНЫЙ КОЛОРЕКТАЛЬНЫЙ РАК (ННКРР ИЛИ СИНДРОМ ЛИНЧА).
12. ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ НАСЛЕДСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ
МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
12.1. Гистология ЯКС^-ассоциированного РМЖ
12.2. Молекулярные изменения в опухолях молочной железы, связанных с мутациями в генах BRCA1/2.
12.3. Фенотип наследственных опухолей молочной железы.
13. ТКАНЕСПЕЦИФИЧНОСТЬ
ЖСЛ/-АССОЦИИРОВАННЫХ ОПУХОЛЕЙ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. ПАЦИЕНТЫ.
2. АНАЛИЗ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ ИССЛЕДУЕМЫХ ГЕНОВ.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
L ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНАХ-СУПРЕССОРАХ
ОПУХОЛИ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С РМЖ ШИЛИ РЯ.
1. ВЫЯВЛЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ ДНК ИССЛЕДОВАННЫХ ГЕНОВ.
2. ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНАХ BRCA1/2.
2.1. ХАРАКТЕРИСТИКА МУТАЦИЙ ГЕНАХ BRCA1/2.
2.2. ЧАСТОТА МУТАЦИЙ В ГЕНАХ BRCA1/
2.2.1. Наследственный РМЖ.
2.2.2. Двухсторонний РМЖ
2.2.3. Наследственный РЯ.
2.2.4. Наследственный РМЖ+РЯ.
2.2.5. Сравнение частот мутаций в разных группах больных.
2.2.6. BRCA1 -мутацшi
2.2.7. £ДС42-мутации
2.3. ЧАСТОТА МУТАЦИЙ СРЕДИ СЕМЕЙ С РАЗНОЙ
ОНКОЛОГИЧЕСКОЙ ОТЯГОЩЕННОСТЬЮ.
2.4. ХАРАКТЕРИСТИКА И ЧАСТОТА МИССЕНС-ВАРИАНТОВ
В ГЕНАХ BRCA1/
2.5. ПОЛИМОРФНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ BRCA1/
2.6. ГАПЛОТИПИРОВАНИЕ ПОВТОРЯЮЩИХСЯ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ BRCA1.
3. ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНЕ ТР53.
4. ТЕРМИНАЛЬНАЯ МУТАЦИЯ llOOdelC В ГЕНЕ СНЕК2.
5. ТЕРМИНАЛЬНЫЕ МУТАЦИИ В ГЕНАХ РЕПАРАЦИИ HECH AРЕННЫХ НУКЛЕОДИТОВ - MLH1/MSH2/MSH6.
IL ЧАСТОТЫ МУТАЦИЙ В СПОРАДИЧЕСКИХ
И НЕОТОБРАННЫХ ВЫБОРКАХ РМЖ И РЯ.
1. Рак молочной железы
2. Двухсторонний РМЖ
3. Рак яичников
4. Сравнение частот BRCA1-мутаций среди групп больных, различных по способу формирования.
III. ВСТРЕЧАЕМОСТЬ РМЖ И РЯ В СЕМЬЯХ НОСИТЕЛЕЙ BRCAl-МУТАЦИЙ.
1. Случаи РМЖ и РЯ в семьях при 5 различных мутациях.
2. Число случаев РМЖ и РЯ в семьях с мутацией BRCA 1.
3. Распределение семей по числу случаев рака разной локализации.
IV. НЕКОТОРЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ ФОРМЫ РМЖ
1. Рак молочной железы у молодых женщин
2. Рак молочной железы, ассоциированный с беременностью.
3. Рак молочной железы у мужчин.
4. Злокачественные листовидные опухоли молочной железы
К АССОЦИАЦИЯ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ BRCA1, BRCA 2, ТР53 И
PGR С РАЗВИТИЕМ РМЖ И
1. Однонуклеотидные полиморфизмы в генах BRCA 1/2.
2. Полиморфные варианты в гене TP53.
3. Однонуклеотидные полиморфизмы в гене PGR.
VI. КЛИНИЧЕСКИЕ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ НАСЛЕДСТВЕННОГО РМЖ И РЯ.
VII МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯДИАГНОСТИКА.
Заключение Диссертация по теме "Генетика", Поспехова, Наталья Ивановна
ВЫВОДЫ
1. В спектре мутаций в \qhqBRCA1 в Центральном регионе России преобладают три мутации (85%), из них наиболее частая мутация 5382тБС (68%). На долю редких вариантов гена приходится около 15%. Частота впервые выявленных вариантов составляет 3,2% от всех ВЯСА /-мутаций.
2. Спектр мутаций в гене ВЯСА2 характеризуется уникальностью вариантов и высокой частотой новых мутаций (40%).
3. Ген ВЯСА1 играет основную роль в наследственной предрасположенности к РМЖ и РЯ - доля ВЯСА1-мутаций составляет 89,4%. Мутации в гене ВЯСА2 обусловливают предрасположенность преимущественно к одно- и двухстороннему РМЖ.
4. Повторяющиеся- ВЯСА/-мутации - 2080с1е1А, 4154с1е1А и 5382шбС находятся каждая на определённом гаплотипе гена по микросателлитным маркерам. Данные указывают на распространение этих мутаций вследствие эффекта основателя.
5. Возникновение рака различной локализации - РМЖ или РЯ - не связано с положением мутации в гене ВЯСА]. В то же время конкретные мутации в гене ВЯСА1 (2080ёе1А и 4154с1е1А) обладают сайт-специфическими свойствами, обусловливающими предрасположенность к развитию преимущественно рака яичников.
6. В группах больных РМЖ, двухсторонним РМЖ и РЯ мутации в генах ВЯСА1/2 встречаются с разной частотой — 32%, 52,3%, 69% соответственно (р<0,05). Подобные закономерности сохраняются в выборках, сформированных по наличию в семье разных типов рака: частоты ВЯСА //2-мутаций в семьях с наследственным односторонним РМЖ, двухсторонним РМЖ и раком яичников составляют 25%, 46,3% и 66,3%, соответственно. Спектры мутаций во всех этих семьях характеризуются преобладанием одних и тех же трёх наиболее частых мутаций.
7. В семьях с мутацией в гене ВЯСА1 наблюдается преимущественное накопление случаев рака той же локализации, что и у пробанда. Соотношение случаев РМЖ и РЯ значимо отличается в семьях пробандов с РМЖ или РЯ. Это характерно и для семей, наследующих одну мутацию 5382insC. Накопление преимущественно одного типа рака в семье может быть обусловлено наследованием генетических вариантов, модифицирующих риск возникновения РМЖ и/или РЯ при мутации в гене BRCA1.
8. Наличие в семье случаев рака яичников служит показателем* высокой вероятности присутствия мутации в гене BRCA1 (70%). Двухсторонний РМЖ примерно в 2 раза чаще, чем односторонний, обусловлен мутациями в генах BRCA1 и BRCA2 и характеризуется ранним возрастом диагноза первичного РМЖ.
9. Часть наследственного РМЖ и/или РЯ (оценочно 2%) ассоциирована с мутациями в гене СНЕК2 и генах MLH1, MSH2, MSH6. В таких семьях кроме РМЖ и РЯ наблюдается накопление соответствующей синдромальной патологии.
10. Больные с наследственной формой РМЖ при ранней манифестации заболевания характеризуются высокой частотой мутаций в генах BRCA 1/2 (70,6%). Среди BRС4 -негативных больных с ранней манифестацией РМЖ (до 31 года) отмечается существенная частота мутаций в гене TP53 - 13,6%, часть из которых являются мутациями de novo. Ранний возраст возникновения РМЖ свидетельствует о генетической природе заболевания, ассоциированного преимущественно с мутациями в генах jBRCA 1/2 и TP53.
11. При мутации в гене BRCA1 обнаружена ассоциация рака яичников с генотипом 203А/А гена BRCA2. Разные генотипы гена PGR, образованные двумя ОНП (G/T, rs 104283 8 и Т/А, rs608995), ассоциированы с развитием либо РМЖ, либо РЯ. Генотипы R72P и Р72Р гена ТР53 ассоциированы с раком при мутации C61G в гене BRCA1, при других BRCA /-мутациях такой связи не наблюдается.
12. Наличие терминальной мутации в гене BRCA1 обусловливает определённую клиническую картину заболевания: ранний возраст манифестации заболевания, выраженный терапевтический эффект (100%) и определяет фенотип BRCA1-ассоциированных опухолей молочной железы, характеризующихся преобладанием инфильтративно-протокового рака (80%), высокой частотой медуллярного рака (8%), высокой степенью злокачественности, низкой частотой мультицентричности (3%); РЭ, РП, НЕ112-пеи-статус опухоли является трижды отрицательным (80%).
13. На основе полученных данных разработан и внедрен в практику алгоритм исследования генов ВЯСА1/2, ТР53, СНЕК2, МЬН1, МБН2, МЯНб с целью изучения природы и диагностики наследственных форм РМЖ и/или РЯ. В ходе исследования создан банк образцов ДНК больных РМЖ и/или РЯ и их родственников (п=1088); пациенты охарактеризованы по мутациям в генах ВЕСА 1/2, ТР53, СНЕК2, МЬН1/М8Н2/М8Н6 и ряду полиморфных генетических вариантов.
ИНТЕРНЕТ-РЕСУРСЫ
1. BIC database, http://www.nhgri.nih.govЯntramuralresearch/Labtransfer/Bic/ (for BRCA1 and BRCA2 mutations)
2. Online Mendelian Inheritance in Man (OMIM), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/ (for BRCA1 [МІМ 113705] andBRCA2 [МІМ 600185])
3. IARC TP53 database, http://www-p53.iarc.fr/
4. BLAST, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/
5. РгітегЗ, http://frodo.wi.mit.edu/primer3/
6. Insight database, www.insight-group.org/
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В настоящей работе исследована структура генов-супрессоров опухоли BRCA1/2, ТР53, MLHI/MSH2/MSH6 и СНЕК2 на выборке российских больных с наследственной формой РМЖ и/или РЯ; определены частоты и спектр терминальных мутаций среди больных с различным диагнозом (РМЖ, двРМЖ, РЯ, сочетанный РМЖ и РЯ) и в семьях, неодинаковых по структуре онкологической заболеваемости.
У больных с наследственной формой рака молочной железы и яичников мутации обнаруживаются во всех участках генов BRCA1 и BRCA2. Спектры мутаций имеют значительные популяционные различия. Мы определили спектр BRCA1- и Д/?С42-мутаций на выборке 224 российских больных с наследственной формой заболевания. В этой группе идентифицировано 104 пациента (46,4%) -носителей патогенетической мутации в одном из генов. В гене BRCA1 было обнаружено 93 мутации (13 различных), в гене BRCA2 - 11 мутаций (10 различных). Спектр, характеристики и частоты мутаций в двух генах неодинаковы. Спектр BRCA1-мутаций включает три наиболее распространенные мутации -5382insC, 185delAG и C61G. Примечательным фактом является преобладание одной BRCA1-мутации - 5382insC в 20 экзоне гена, её частота составляет 68% от всех выявленных мутаций в этом гене. Столь высокая частота одной мутации не является уникальной особенностью нашей популяции. Также как и в России, во многих странах (и популяциях) встречаются повторяющиеся мутации. Так, например, у евреев-ашкенази наиболее частой мутацией в гене BRCA1 является 185delAG, которая составляет около 80% спектра мутаций в гене [Brody & Biesecker, 1998]. В восточной части Швеции одна'мутация 3171ins5 в гене BRCA1 охватывает 70% всех мутаций BRCA1/2. Частые повторяющиеся мутации известны во Франции, Нидерландах и Бельгии, в некоторых районах Италии. Мутации с эффектом основателя обнаружены и в неевропейских популяциях -Е881Х в ЮжнойАфрике, 1081delG в Южном Китае, а также в Японии (Q934X, L63X), Малазии (2846insA) и других азиатских странах.
Частота 5382insC наиболее высокая в России по сравнению с другими популяциями, в том числе и славянскими. Среди других стран наибольшая частота этой мутации отмечена в Латвии - 63%, причём ее носители относят себя к русским. В Польше, Югославии, Чехии, Венгрии и Греции частота мутации также высока - 40-51%. В Германии, Бельгии и Турции частота 5382insC составляет 2230%. Встречаемость этой мутации снижается в северном и западном направлениях - в Финляндии, Дании, Голландии, Англии доля мутации 5382insC находится в пределах 3-5%. В Испании, Швеции и Норвегии 5382insC не обнаруживают. В странах Азии, Южной Америки и в Австралии эту мутацию тоже не находят. Т.е., частота мутации 5382insC, характерной для большинства европейских стран, наиболее высока в России и убывает в северном, западном и южном направлениях (рис. 25).
Частоты встречаемости мутации и анализ гаплотипов гена служат доказательством определённого географического и этнического происхождения мутации. При генотипировании пациентов-носителей 5382insC по STR-маркёрам обнаружен общий, сцепленный с мутацией гаплотип гена, идентичный гаплотипу, выявленному ранее в других работах. Общий гаплотип гена при 5382insC характерен для индивидуумов трёх национальностей - русских, татар и евреев. Таким образом, характер изменения частоты 5382insC по мере географического удаления от России и результаты гаплотипирования свидетельствуют о происхождении этой мутации в нашей стране вследствие эффекта основателя.
С высокой частотой среди пациентов встречались ещё две повторяющиеся BRCAУ-мутации - 185delAG и C61G. Мутация С61G характерна для славянских стран. С высокой частотой эта мутация обнаружена в Польше, Чехии и Словении, встречается она и в других центрально-европейских странах, например, в Венгрии и Германии. Мутация 185delAG — самая частая founder-мутация среди евреев-ашкенази. В нашей работе её частота выше, чем в других славянских популяциях, а большинство носителей 185delAG считают себя евреями. В целом три наиболее частые повторяющиеся мутации (5382insC, C61G и- 185delAG) охватывают 85% всего спектра i?i?C47-мутаций среди российских больных. В' остальных случаях были обнаружены иные, редкие варианты гена BRCA1, из которых 3 (3,2%) выявлены впервые. По-видимому, с учётом частоты встречаемости и результатов гаплотипирования мутация 2080delA, как и 5382insC, возникла среди русских вследствие эффекта основателя, а мутация 4154delA имеет славянское происхождение. В отличие от BRCA1 спектр мутаций в гене BRCA2 характеризуется уникальностью вариантов и высокой частотой впервые выявленных мутаций- - 40% Повторяющихся ЯКС42-мутаций (за исключением еврейской founder-мутации 6174delT) мы не обнаружили.
Также как и спектр вариантов, частота BRCA1- и BRCA2-мутаций варьирует в широких пределах, и- их распределение характеризуется географическими и этническими различиями. В нашей выборке наследственного РМЖ и/или РЯ частота терминальных мутаций в генах BRCA1/2 составила 46,4%. Встречаемость BRCA 1/2-мутаций значительно варьирует в группах больных с различным диагнозом. Наименьшая доля носителей BRCA-мутации отмечены среди больных односторонним РМЖ (32%), наибольшая - среди больных РЯ или при наличии у больного двух опухолей (РМЖ и РЯ). При изучении частот мутаций в семьях, гетерогенных по структуре заболеваемости, получены аналогичные данные: частота BRCAl/2-uyim\\m составила 25% среди семей только с РМЖ, 46,3% среди семей, в которых отмечали случаи двРМЖ и 66,3% в семьях со случаями РЯ. Такие значения частот мутаций одни из наиболее высоких. Подобная или несколько меньшая доля семей х мутациями наблюдаются в некоторых выборках при аналогичных критериях их формирования. Наибольшая доля BRCA 1/2позитивных семей (75%) обнаружена в работе Sinilnikova с соавторами, однако эта выборка отличается от нашей более жесткими критериями формирования, включая семьи с 4 и более случаями РЯ и/или РМЖ.
Доля семей с мутациями в генах BRCA1/2 при наличии в семье случаев РЯ или двРМЖ достоверно выше, чем при семейпом раке молочной железы. То есть, вероятность выявления мутации в генах BRCA1/2 зависит от присутствия в семье больных раком4 яичников и/или двухсторонним РМЖ. Значительное количество ДЛСЛ-негативных семей с двРМЖ (50%) свидетельствует об ассоциации заболевания с молекулярной патологией в других генах предрасположенности. Таким образом, степень отягощённости наследственным раком (обусловленным £/?С4//2-мутациями) определяется характеристиками онкологического заболевания как самого пробанда, так и его кровных родственников. Наличие в семье больного РЯ, двРМЖ или РМЖ+РЯ является более значимым критерием наследственной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, ассоциированной с 5/?С4-мутацией, чем просто накопление случаев РМЖ. Накопление одностороннего РМЖ в Д7?С47/2-негативных семьях, по-видимому, связано с наследованием молекулярных изменений в других генах с меньшей пенетрантностью, что объясняет совокупность полученных данных.
Таким образом, наличие в семье случаев РЯ (как и РЯ+РМЖ) с большой вероятностью свидетельствует о наследственной предрасположенности и не менее чем в 70% случаев обусловлено наследованием BRCA1-мутации вне зависимости от других характеристик семьи. Двухсторонний РМЖ, также как и РЯ, служит индикатором наследственной предрасположенности, обусловленной примерно в 50% герминальными мутациями в генах BRCA1 и BRCA2.
Мы определили также соотношение частот BRCA1- и BR С А 2-мутаци й в сформированных выборках. Отмечено значительное варьирование частот мутаций в двух генах как среди больных с разным диагнозом, так и в семьях гетерогенных по онкологической отягощённости. Пациенты, страдающие РЯ, характеризуются не только высокой: вероятностью наследования, мутации- предрасположенность к РЯ связана преимущественно с наследованием' мутации , в гене BRCA1. Значительное преобладание BRCAi-uymi\mi в семьях, отягощенных РЯ; получено.' не только в нашейфаботе, но также характерно дляфяда других исследований.- В; тоже время £/?С42-мутации были идентифицированы в основном у больных РМЖ или двРМЖ. Доля 5/?(М2-мутаций среди больных . РМЖ в 7 раз» превышает их долю среди больных РЯ. При изз'чении семей пробандов также было установлено, что мутации BRGA2 достоверно чаще встречаются! в семьях со случаями РМЖ и/или двРМЖ. Следует отметить, что риск заболевания раком яичников вследствие мутации BRCAJ или BRGA2 значительно варьирует. ДКС4-ассоциированный РЯ возникает чаще при наследовании в семье- мутаций в- гене BRGA1. По данным Breast Cancer Linkage Consortium, мутации в данном; гене присущи 86% семей с раком молочной железы и яичников и только в 14% таких семей найдены мутации в гене BRGA2; напротив, в большинстве семей с раком молочной железы, но с отсутствием рака яичников; наблюдаются мутации в гене BRGA2. Такие результаты в основном1 обусловлены различиями^ в проявлении мутаций обоих генов: Соотношение частот мутаций в. генах BRGA1 и BRCA2 отличается также для разных популяций. Ярким примером является доминирование одной: founder-мутации 999del5 в vent BRCA2 в Исландии. В тоже: время количество случаев РЯ, ассоциированного с 5У?СЛ2-мутацией, значительно варьирует в разных этнических группах. Если в нашей выборке соотношение РМЖ/РЯ в 5/?С42-позитивных семьях составляет 18:1, то среди евреев-ашкенази:это значение равно 5:1; случаи рака яичников мы отмечали лишь в 2 семьях из 11, в то время как в Исландии РЯ встречается в половине: семей с мутацией 999del5. Таким образом, частота мутаций в гене BRCA2 в российской популяции (и, возможно,, некоторых других славянских группах) относительно невысока, и, мутации встречаются» в основпом в семьях, отягощенных РМЖ, и двРМЖ. Рак яичников в нашей , популяции редко ассоциирован с \ВЯС42-мутациями. Основной, мутационный вклад в наследственную предрасположенность к РМЖ (и особенно к РЯ) вносит ген ВКСА1.
В последние годы в мировой литературе активно обсуждается вопрос о взаимосвязи, разных мутаций и сайта локализации рака (молочная железа или яичники). Первоначальные предположения о том, что возникновение РМЖ или РЯ зависит от положения мутации в гене ВЯСА1, не находят подтверждения как в нашей работе, так и других исследованиях, например, 81орра-Ьуоппе1 с соавт (1997). В нашем исследовании одна и та же мутация - 5382тзС - преобладает и при наследственной форме рака молочной железы, и при двухстороннем РМЖ, и при раке яичников. Мутации С6Ш и 185с1е1АО также встречаются в разных группах больных с близкой частотой. В отношении других ВЛСА1-мутаций чёткой взаимосвязи между нуклеотидным положением мутации в гене и фенотипическим проявлением её у носителя в виде заболевания РМЖ либо РЯ не имеется. В тоже время наблюдается корреляция между некоторыми определёнными мутациями (генотипом) и фенотипическими характеристиками семьи. Мы считаем, что существует некоторая фенотипическая вариабельность проявления мутации, прямо не связанная с её положением в гене, но являющаяся свойством определённой мутации. Некоторые конкретные /?/?С4 /-мутации (в нашем случае 2080с1е1А и 4154с1е1А) характеризуются высокой пенетрантностью в отношении развития рака яичников и обладают определенными свойствами в отношении сайта локализации рака. В целом, наши данные показывают, что положение мутации в гене ВЯСА1 не является фактором, определяющим локализацию рака. По-видимому, другие факторы и генотипические особенности определяют тип заболевания.
Развитие РМЖ/РЯ в некоторых семьях обусловлено наследованием терминальных мутаций в других генах, например ТР53, СНЕК2 и генах пшта^Ь-репарации (МЬН1/М8Н2/М8Н6). Как правило, в таких семьях идет накопление онкологических заболеваний, наиболее характерных для соответствующего синдрома. Мы идентифицировали мутации в генах СНЕК2, МЬН1, МБНб для некоторых больных РМЖ, имеющих в семейном анамнезе синдромальную патологию. Относительно гена ТР53 нами получены представляющие значительный интерес данные. Терминальные мутации ТР53 были обнаружены в 13,6% (3/22) случаев среди ДКС4-негативпых больных очень молодого возраста (до 31 года). Вклад ГР55-мутаций в развитие РМЖ молодого возраста в других популяционных выборках вследствие неоднородности критериев формирования групп не определён. Частота обнаружения мутаций в соответствующем гене среди больных РМЖ различна в зависимости от способа формирования исследуемой выборки и, вероятно, имеет популяционные различия. В тоже время в нашей работе все 7Р53-носители не имеют никаких характеристик, позволяющих предположить синдром Ли-Фраумени, кроме ранней манифестации РМЖ. Для одной больной доказано происхождение мутации de novo. Высокая частота мутаций de novo в ТР53 подтверждается результатами ряда исследований в выборках спорадического РМЖ и РМЖ молодого возраста. Мы считаем, что вклад терминальных мутаций гена ТР53 в развитие РМЖ раннего возраста недооценен вследствие высокой частоты мутаций de novo или наличия в семейном анамнезе нехарактерной синдромальной патологии. Только в последние годы исследователи стали уделять внимание вкладу гена ТР53 в формирование синдрома наследственного РМЖ/РЯ. Как правило, такие Г/^З-позитивные семьи не соответствуют критерия СЛФ или СЛФП, как и в нашей работе. Учитывая достаточно высокую частоту мутаций, предложено тестировать ген ТР53 у всех женщин с ранней манифестацией РМЖ (моложе 36 лет).
Онкологически отягощенный семейный анамнез является несомненным показателем генетической природы заболевания. Вместе с этим, изучение частот мутаций в спорадических выборках РМЖ и РЯ демонстрирует, что о генетической предрасположенности может свидетельствовать и диагноз заболевания. Двухсторонний РМЖ наиболее часто является ЯК СЛ-ассоциированным заболеванием в отсутствие семейной отягощённости у больных. Рак яичников связан с носительством BRCA1-мутаций при наличии положительной семейной истории, а высокая пенетрантность BRCA1 в семьях с РЯ объясняет невысокую частоту мутаций в выборках спорадического рака.
Фенотипические характеристики Б/?С4-позитивных семей, по-видимому, обусловлены многими составляющими, в том числе и генетическими факторами. Мы провели анализ структуры онкологической заболеваемости семей с наследуемой BRCA1-мутацией. В исследованных семьях наблюдалось накопление преимущественно одного типа рака. Т.е. существует чёткая тенденция увеличения доли семей с накоплением рака той же локализации, что и у пробанда (как в случае РМЖ, так и РЯ), по сравнению с ожидаемым. Это наблюдение характерно не только для суммарной выборки BRCA /-позитивных семей, включающей семьи с «яичниковыми» мутациями (таких как 2080delA и 4154delA). Фактическое распределение семей с одной и той же мутацией 5382insC по количеству случаев рака различной локализации также статистически значимо отличается от ожидаемого распределения.
Накопление РМЖ либо РЯ в высоко-отягощённых семьях с BRCA1-мутацией была отмечена ещё в 1995 г. Easton с соавт. [1995]. Для объяснения гетерогенности риска возникновения рака в разных семьях авторы предположили существование двух BRCA/-аллелей со значительно различающимися величинами риска РМЖ и РЯ - то есть риск развития РМЖ и РЯ отличается для разных мутаций. Для некоторых мутаций это верно - в нашем исследовании 2080delA и 4154delA ассоциированы преимущественно с РЯ. Аналогичные данные о корреляции сайта локализации рака у родственников получены Lee с соавт. [2006]. Что может объяснять такие наблюдения? Некоторые BRCA/-мутации действительно имеют повышенный риск развития РЯ по сравнению с РМЖ, однако мы наблюдаем определённый фенотип внутри разных семей и при одной и той же мутации - 5382insC. На риск развития РМЖ у носителей /?/?С4-мутаций оказывают влияние различные факторы - образ жизни, репродуктивное поведение, факторы внешней среды, но вероятность их ассоциации в семье в разных поколениях маловероятна.
Имеются значительные различия в оценке риска развития заболевания для ЯЛС4-носителей. По данным Breast Cancer Linkage Consortium для женщин из высокоотягощённых семей риск развития РМЖ составляет 85-87% (BRCA1) и 7784% (BRCA2). В тоже время рассчитанный на основании популяционных данных риск РМЖ заметно ниже - 28-60% для BRCA1 и ещё ниже для BRCA2-мутаций. Предполагается, что некоторая доля риска в семейных случаях, ассоциированных с Я/?С4-мутацией, определяется другими генетическими вариантами. Существование таких вариантов подтверждается наличием фенокопий в BRCA1/2-позитивных семьях [Smith et al., 2007]. Аллели генов, обусловливающие риск развития заболевания у BRCA i/2-негативных женщин в таких семьях, у носителей увеличивают риск развития рака, при этом возможна ассоциация разных аллелей с развитием рака определённой локализации. Antoniou с соавт. [2001] постулировали либо существование рецессивного гена BRCA3 с пенетрантностью около 42%, либо действие полигенной модели. До сих пор BRCA3 не открыт, хотя существование гена (генов) предрасположенности с довольно высокой пенетрантностью и частотой аллельных вариантов исключить нельзя. Полигенная модель предполагает мультипликативный эффект многих низкопенетрантных аллелей. По нашему мнению, гипотеза наследования генетических вариантов, влияющих на пенетрантность BRCA-мутации и модифицирующих риск возникновения РМЖ и/или РЯ наиболее существенна для объяснения полученных данных. Сегрегационный анализ также показал, что модель модифицирующего эффекта других генов наиболее предпочтительна [Antoniou et al., 2005]. В качестве генов-модификаторов BRCA //¿-ассоциированного РМЖ Rebbeck [2002] предложил гены, связанные с метаболизмом канцерогенов окружающей среды и стеродных гормонов. Гены, кодирующие белки, функционально и физически взаимодействующие с BRCA1 и BRCA2, также могут иметь модифицирующее влияние на риск развития рака. Первоначально на небольших выборках BRCA-носителей в качестве генов-модификаторов были определены AR, AIB1, AURKA, RAD51. Полиморфные варианты в этих генах, как правило, приводят к изменению функциональных свойств кодируемого белка, дальнейший каскад функциональных нарушений мало изучен, однако в результате носители разных генотипов имеют неодинаковый риск развития рака. Недавно образованный Consortium of Investigators of Modifïers of BRCA1 and BRCA2 (CIMBA) продолжает исследования на существенной выборке BRCA-носителей, включающей около 10000 BRCA1- и 5000 Л/?С42-носителей из коллекций 30 исследовательских центров. На такой большой выборке было доказано модифицирующее влияние на риск развития РМЖ вариантов таких генов, как RAD51, FGFR2, ТОХЗ (TNRC9), LSP1 и отсутствие ассоциации с ОНП в генах GATA3, ERCC4, MDM2. Наиболее значимое влияние аллелей генов RAD51, FGFR2, ТОХЗ, LSP1 показано для BRCA2-носителей. Можно предположить, что в случае мутации в BRCA1 более значительный эффект оказывают варианты, модифицирующие риск РЯ. В исследовании Ovarian Cancer Associated Consortium была получена ассоциация риска развития РЯ с аллелями генов RB1 и AURKA. Возможно, имеется влияние этих вариантов и в случае носительства BRCA1-мутации. Таким образом, гипотеза о модификации приобретает характер факта - далее необходимо выявить набор генетических вариантов, образующих систему взаимодействия «Я/?С4-мутация ± варианты-модификаторы» .
На выборке наших пациентов-носителей BRCA1-мутации мы исследовали ассоциацию некоторых генетических вариантов с местом локализации рака. Были обнаружены существенные отличия в частотном профиле ОНП между больными РМЖ и РЯ для варианта 203 G/A в гене BRCA2 и гаплотипов гена PGR, образованных двумя ОНП (G/T, rs 104283 8 и Т/А, rs608995). Полиморфные варианты в самих генах BRCA1/2 достаточно давно предложены в качестве кандидатов на роль низкопенетрантных аллелей риска развития РЯ либо РМЖ.
BRCA1 и BRCA2 совместно участвуют в процессе репарации повреждений ДНК, и можно предполагать ассоциированное воздействие генетических вариантов на риск развития онкологического заболевания. Мы определили генотип риска развития РЯ у BRCA 1-носителя - 203А/А в гене BRCA2. Подобные результаты характерны также для спорадического РЯ, что свидетельствует о наличии общих механизмов* модификации риска при развитии этой онкопатологии. Другим кандидатом на роль «гена-модификатора» в нашей работе был ген рецептора прогестерона PGR, в котором известны ОНП, влияющие на функциональную активность белка. Исследование частот гаплотипов PGR, образованных ОНП (G/T, rs 1042838 и Т/А, rs608995), показало разнонаправленные влияние двух разных гаплотипов на развитие заболевания различной локализации у BRCA1-носителей. Таким образом, мы определили, что варианты генов BRCA2 (203G/A) и PGR участвуют в мультикомпонентной системе «генотип-фенотип», модифицирующей риск развития рака у носителей Л/?С47-мутации.
Другим объектом в нашем исследовании был ген ТР53, некоторым вариантам которого уделяется значительное внимание. Наиболее изучен вариант R72P. На суммарной выборке всех больных с BRCA 7-мутацией мы не выявили модифицирующего влияния 7Р53-генотипов. При сравнении распределения генотипов ТР53 среди больных РМЖ или РЯ различий также не обнаружено. Такие результаты согласуются с данными CIMBA, не выявивших ассоциацию 7Р53-гаплотипов с риском развития РМЖ [Osorio et al., 2008]. В тоже время для носителей одной мутации C61G в отличие от других мутаций и контроля выявлены достоверные отличия в распределении R72P генотипов. Вариант ТР53-белка 72Р с изменённой функциональной активностью ассоциирован с развитием рака при мутации C61G, возможно выполняя роль модификатора пенетрантности этой миссенс-мутации в отличие от других ВRCAJ-мутаций.
Помимо молекулярно-генетического анализа наследственного РМЖ/РЯ в целом были изучены характеристики некоторых специфичных наследственных (в том числе 5/?С4-ассоциированных) нозологических форм заболевания. В частности, известно, что ранний возраст возникновения опухоли часто свидетельствует о генетической природе заболевания. Мы изучили молекулярно-генетические характеристики групп больных в зависимости от возраста диагноза. В нашем исследовании доля 7?/?С4-ассоциированного РМЖ увеличивается при снижении возраста постановки диагноза. Ещё большее увеличение частоты мутаций среди «молодых» больных двРМЖ по сравнению с односторонним РМЖ (71% и 40,3% при возрасте диагноза до 41 года) снова отчётливо демонстрирует обусловленность этого типа рака наследованием £7?С4-мутации. Такие данные свидетельствуют также, что именно возраст возникновения рака является наиболее важным фактором прогноза контралатерального РМЖ. В группе очень молодого РМЖ - до 31 года — доля больных с BRСА-мутацией составляет 70,6%. Среди BRCA1-негативных больных высока частота 7Р53-мутаций - 13,6%. Т.е., ранний возраст возникновения РМЖ является несомненным критерием генетической природы заболевания, обусловленной в значительной степени мутациями в генах BRCA1/2 и ТР53.
Другой редкой нозологической формой является рак молочной железы, ассоциированный с беременностью (РМЖ-АБ). Исследования последних лет относительно риска развития рака на фоне беременности довольно разноречивы, в том числе относительно 7?7?С/4-носитслей. Однако показано, что частота РМЖ-АБ выше среди пациенток с наследственной предрасположенностью. В нашем исследовании частота трёх BRCA J-мутаций у больных РМЖ-АБ составила 16%, что превышает частоты мутаций в выборках «молодого» РМЖ,'не связанного с беременностью. Этот показатель может быть ещё выше вследствие наличия иной BRCA /-мутации или мутации в BRCA2 Также в этой группе больных с повышенной частотой выявляются некоторые варианты генов BRCA1, BRCA2 и PGR. Вклад генетических факторов в развитие РМЖ-АБ представляется несомненным. Также, по нашему мнению, существует вариация персонального риска развития рака у женщин с мутацией ВЛСА1 в течение беременности и последующего кормления ребёнка, связанная с некоторыми генотипическими вариантами. В тоже время генетические основы патогенеза РМЖ, связанного с беременностью, остаются не определёнными.
Идентификация и изучение генов, ответственных за наследственную предрасположенность к РМЖ/РЯ, создало принципиально новые возможности медико-генетического консультирования. Обнаружение терминальной мутации при проведении ДНК-диагностики подтверждает формально-генетический диагноз, обеспечивает возможность ранней диагностики, а также выбор тактики лечения и профилактики. Для здорового пациента идентифицированная наследуемая мутация позволяет выполнить расчет риска развития заболевания и является объективным критерием формирования групп риска в отношении развития рака для динамического наблюдения в условиях онкодиспансера. Применение ДНК-диагностических методов решает многие проблемы, связанные с дифференциальной диагностикой синдромальной патологии, и резко повышает эффективность медико-генетического консультирования.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Поспехова, Наталья Ивановна, Москва
1. Громыко O.E. Диагностика полиморфизма гена ТПМТ и наследственныхмутаций в генах BRCA1/2 и СНЕК2 // Автореф. дис. канд. биол. наук. 2008.
2. Давыдов М.И. и Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в
3. России и странах СНГ в 2006 году // Вестн. РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. -2008. Т. 19, N2 (прил. 1). - С.52-91.
4. Копнин Б.П. Молекулярные механизмы канцерогенеза. Энциклопедияклинической онкологии. Под ред. Давыдова М.И. М.; РЛС-Пресс.- 2004. -С.34-53.
5. Копнин Б.П. Нестабильность генома и онкогенез // Молекулярная биология.2007 Т. 41, №2. - С.369-380.
6. Логинова А.Н., Поспехова Н.И., Любченко Л.Н. и др. Спектр мутаций в гене
7. BRCA1 при наследственной предрасположенности к раку молочной железы ияичников в российских семьях // Бюлл. эксп. биол. мед. 2003. - Т.136, №9 -С. 315-317.
8. Логинова А.Н. Молекулярно-генетический анализ наследственной формырака молочной железы и/или яичников // Автореф. канд. дис. 2004.
9. Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Поспехова Н.И., Карпухин А.В., Шабанов
10. Смирнова Т.Ю., Любченко Л.Н., Поспехова Н.И., Гарькавцева Р.Ф., Карпухин
11. А.В. Наследственные факторы в заболеваниях репродуктивной системы женщин: рак молочной железы и яичников // Опухоли женской репродуктивной системы: маммология, онкогинекология. — 2007. №4. - С. 90-96.
12. Чумаков П.М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточноморганизме // Успехи биологической химии. — 2007. Т. 47. - С. 3-52.
13. Aarnio М., Sankila R., Pukkala Е. et al. Cancer risk in mutation carriers of DNA-mistmach-repair genes // Int. J. Cancer. 1999. -V. 81. - P. 214-218.
14. Adami H.O., Bergstrom R. & Hansen J. Age at first primary as a determinant of the incidence of bilateral breast cancer. Cumulative and relative risks in a population-based case-control study// Cancer. 1985. - V. 55. - P. 643-647.
15. Akbari M., Malekzadeh R., Nasrollahzadeh D. et al. Germline BRCA2 mutations and the risk of esophageal squamous cell carcinoma // Oncogene. 2007. - V. 27. -P. 1290-1297.
16. Albano W., Recabaren J., Lynch H. et al. Natural history of hereditary cancer of the breast and colon // Cancer. 1982. - V. 50. - P. 360-363.
17. Al-Hajj M. & Clarke M.F. Self-renewal and solid tumor stem cells // Oncogene. -2004. -V. 23. P. 7274-7282.
18. Al-Hajj M. et al. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells // PNAS. 2003. - V. 100. - P. 3983-3988.
19. Anderson S.F. et al. BRCA1 protein is linked to the RNA polymerase II holoenzyme // Nat. Genet. 1998. - V. 19. - P. 254-256.
20. Anderson T.J. Pathological studies of apoptosis in the normal breast // Endocr. Relat. Cancer. 1999. - V. 6. - P. 9-12.
21. Andrieu N., Goldgar D.E., Easton D.F. et al. Pregnancies, breast feeding, and breast cancer risk in the International BRCAM2 Carrier Cohort Study // J. Natl. Cancer Inst. 2006. - V.98. - P. 535-544.
22. Anglian Breast Cancer Study Group. Prevalence and penetrance of BRCA1 and BRCA2 mutations in a population-based series of breast cancer cases // Br. J. Cancer. 2000. - V. 83. - P. 1301-1308.
23. Antoniou A.C., Gayther S.A., Stratton J.F., Ponder B.A.J., Easton D.F. Risk models for familial ovarian and breast cancer // Genet. Epidemiol. 2000. - V. 18. -P. 173-190.
24. Antoniou A.C., Pharoah P.D.P., McMullan G., et al. A comprehensive model for familial breast cancer incorporating BRCA1, BRCA2 and other genes // Br. J. Cancer. 2002. - V. 86. - P. 76-83.
25. Antoniou A., Goldgar D.E., Andrieu N. et al. A weighted cohort approach for analysing factors modifying disease risks in carriers of high-risk susceptibility genes // Genet. Epidemiol. 2005. - V. 29(1). - P. 1-11.
26. Antoniou A.C., Shenton A., Maher E.R. et al. Parity and breast cancer risk among BRCA1 And BRCA2 mutation earners // Breast Cancer Res. 2006. - V.8. - R72.
27. Antoniou A.C., Sinilnikova O.M., Simard J. et al. RAD51 135G—>C modifies breast cancer risk among BRCA2 mutation carriers: results from a combined analysis of 19 studies // Am. J. Hum. Genet. 2007. - V. 81. - P. 1186-1200.
28. Antoniou A.C., Spurdle A.B., Sinilnikova O.M. et al. Common breast cancer-predisposition alleles are associated with breast cancer risk in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers // Am. J. Hum. Genet. 2008. - V. 82. - P. 937-948.
29. Asher G. & Shaul Y. p53 proteasomal degradation: poly-ubiquitination is not the whole story // Cell Cycle. -2005.- V.4(8). P. 1015-1018.
30. Auranen A., Spurdle A.B., Chen X. et al. BRCA2 Arg372His polymorphism and epithelial ovarian cancer risk // Int. J. Cancer. 2003. - V. 103. - P. 427-430.
31. Bachelier R. et al. Effect of bilateral oophorectomy on mammary tumor formation in breast cancer associated gene 1 (Brcal) mutant mice // Oncol. Rep. 2005. - V. 14.-P. 1117-1120.
32. Balci A., Huusko P., Paakkonen K. Mutation analysis of BRCA1 and BRCA2 in Turkish cancer families: a novel mutation BRCA2 3414del4 found in male breast cancer//Eur. J. Can. 1999. - V.35, № 5. -P.707-710.
33. Balmain A., Gray J. and Ponder B. The genetics and genomics of cancer // Nat. Genet. 2003. - V. 33, S. - P. 238^14.
34. Balz V., Prisack H.B., Bier H., Bojar H. Analysis of BRCA1, TP53, and TSG101 germline mutations in German breast and/or ovarian cancer families // Cancer Genet. Cytogenet. — 2002. — V. 138.-P. 120-127.
35. Barkardottir R. B., Sarantaus L., Arason A., et al. Haplotype analysis in Icelandic and Finnish BRCA2 999del5 breast cancer families // Europ. J. Hum. Genet. -2001.-V. 9.-P. 773-779.
36. Bar-Sade R. B., Kruglikova A., Modan B. et al. The 185delAG BRCA1 mutation originated before the dispersion of Jews in the diaspora and is not limited to Ashkenazim // Hum. Mol. Genet. 1998. - V. 7. - P. 801-805.
37. Baudi F., Quaresima B., Grandinetti C. et al. Evidence of a founder mutation of BRCA1 in a highly homogeneous population from southern Italy with breast/ovarian cancer // Hum. Mutat. 2001. - V. 18. - P. 163-164.
38. Baumann P., Benson F.E. and West C.S. Human Rad51 protein promotes ATP-dependent homologous pairing and strand transfer reactions in vitro II Cell. 1996. -V. 87.-P. 757-766.
39. Begg C.B. On the use of familial aggregation in population-based case probands for calculating penetrance // J. Natl. Cancer Inst. 2002. - V. 94. - P. 1221- 1226.
40. Begg C., Haile R.W., Borg A. et al. Variation of Breast Cancer Risk Among BRCA1/2 Carriers // JAMA. 2008. - V. 299. - P. 194-201.
41. Ben David Y., Chetrit A., Hirsh-Yechezkel G. Effect of BRCA mutation on the length of survival in epithelial ovarian tumor // J. Clin. Oncol. 2002. - V. 20. - P. 463-466.
42. Bergman A., Einbeigi Z., Olofsson U. et al. The western Swedish BRCA1 founder mutation 3171ins5: a 3.7 cM conserved haplotype of today is a reminiscence of a 1500-year-old mutation//Eur. J. Hum. Genet. -2001. -V. 9. P. 787-793.
43. Bergman A., Flodin A., Engwall Y. et al. A high frequency of germline BRCA1/2 mutations in western Sweden detected with complementary screening techniques // Fam. Cancer. 2005. - V. 4. - P. 89-96.
44. Bergthorsson J.T., Ejlertsen B., Olsen J.H., et al. BRCA1 and BRCA2 mutation status and cancer family history of Danish women affected with multifocal orbilateral breast cancer at a young age // J. Med. Genet. 2001. - V. 38. - P. 361368.
45. Birch J.M., Alston R.D., McNally R.J. et al. Relative frequency and morphology of cancers in carriers of germline TP53 mutation // Oncogene. 2001. - V. 20. - P. 4621-4628.
46. Bjorge T. et al. BRCA1 mutations in ovarian cancer and borderline tumours in Norway: a nested case control study // Br. J. Cancer. 2004. - V. 91. - P. 18291834.
47. Blanco A., Grana B., Fachal L. et al. Beyond BRCA1 and BRCA2 wild-type breast and/or ovarian cancer families: germline mutations in TP53 and PTENII Clinical Genetics. 2010. - V. 77. - P. 193-196.
48. Bonnet D. et al. CD8+minor histocompatibility antigen-specific cytotoxic T lymphocytes clones eliminate human acute myeloid leukemia stem cell // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. -V. 96. - P. 8639-8644.
49. Bork P.," Blomberg N., Nilges M. Internal repeats in the BRCA2 protein sequence// Nat. Genet. 1996. - V. 13. - P. 22-23.
50. Breast Cancer Linkage Consortium. Cancer risks in BRCA2 mutation carriers // J. Natl. Cancer Inst. 1999.-V. 91.-P. 1310-1316.
51. Britt K., Ashworht A. & Smalley M. Pregnancy and the risk of breast cancer // Endocrine-related Cancer. 2007. - V. 14. - P. 907-933.
52. Brody L.C., Biesecker B.B. Breast cancer susceptibility genes BRCA1 and BRCA2 II Rev. in Molec. Medicine. 1998. - V.77, № 3. - P. 208-226.
53. Broeks A., de Witte L., Nooijen A. et al. Excess risk for contralateral breast cancer in CHEK2*1 lOOdelC germline mutation carriers // Breast Cancer Res. Treat. -2004.-V. 83(1).-P. 91-93.
54. BroetP., de la Rochefordiere, Scholl S.M. et al. Contralateral breast cancer: annual incidence and risk parameters // J. Clin. Oncol. 1995. - V. 13. - P. 1578-1583.
55. Brooks CX. & Gu W. p53 ubiquitination: Mdm2 and beyond // Mol. Cell. 2006. -V. 21(3).-P. 307-315.
56. Brzovic P.S. et al. Structure of a BRCA1-BARD1 heterodimeric RING-RING complex // Nat. Struct. Biol. 2001a. - V. 8. - P. 833-837.
57. Brzovic P.S., Meza J.E., King M.C., Klevit R.E. BRCA1 RING domain cancer-predisposing mutations. Structural consequences and effects on protein-protein interactions //J. Biol. Chem. 2001b. -V. 276. - P. 41399-41406.
58. Brzovic P.C., Keeffe J.R., Nishikawa H. et al. Binding and recognition in the assembly of an active BRCA1/BARD1 ubiquitin-ligase complex. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - V. 100. - P. 5646-5651.
59. Calderon-Margalit R. & Paltiel O. Prevention of breast cancer in women who carry BRCA1 or BRCA2 mutations: a critical review of the literature // Int. J. Cancer. -2004.-V. 112.-P. 357-364.
60. Caligo M.A., Agata S., Aceto G. et al. The CHEK2 c.l lOOdelC mutation plays an irrelevant role in breast cancer predisposition in Italy // Hum. Mutat. 2004. - V. 24.-P. 100-101.
61. Cantor S.B. et al. BACH1, a novel helicase-like protein, interacts directly with BRCA1and contributes to its DNA repair function // Cell. 2001. - V. 105. - P. 149-160.
62. Capalbo C., Ricevuto E., Vestri A. et al. BRCA1 and BRCA2 genetic testing in Italian breast and/or ovarian cancer families: mutation spectrum and prevalence and analysis of mutation prediction models // Ann. Oncol. 2006. - V. 17 (S.7). — P. 34-40.
63. Cass I., Baldwin R.L., Varkey T. et al. Improved survival in women with BRCA-associated ovarian carcinoma // Cancer. 2003. - V. 97. - P. 2127- 2179.
64. Castilla L. H. et al. Mutations in the BRCA1 gene in families with early-onset breast and ovarian cancer//Nature Genet. 1994. -V. 8. -P.387-391.
65. Cavalli L.R. et al. Loss of heterozygocity in normal breast epithelial tissue and benign breast lesion in BRCA1 carriers with breast cancer // Cancer Genet. Cytogenet. 2004. - V. 149. - P. 38-43.
66. Cavallone L., Arcand S., Maugard C. et al. Haplotype analysis of TP53 polymorphisms, Arg72Pro and Ins 16, in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers of French Canadian descent // BMC Cancer. 2008. - V. 8. - P. 96-104.
67. Chai Y.L., Cui J., Shao N. et al. The second BRCT domain of BRCA1 proteins interacts with p53 and stimulates transcription from the p21WAFl/CIPl promoter // Oncogene. 1999. - V. 18. - P. 263-268.
68. Chang-Claude J., Andrieu N., Rookus M. et al. Age at menarche and menopause and breast cancer risk in the International BRCA1/2 Carrier Cohort Study // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2007. -V. 16. - P. 740-746.
69. Chappuis P.O., Nethercot V. & Foulkes W.D. Clinico-pathological characteristics of BRCA1- and BRCA2-reIated breast cancer // Semin. Surg. Oncol. 2000. - V. 18.-P. 287-295.
70. Chapman M.S., Verma I.M. Transcriptional activation by BRCA1 // Nature -1996. V.382. - P.678-679.
71. Chaturvedi P. et al. Mammalian Chk2 is a downstream effector of the ATM-dependent DNA damage checkpoint pathway // Oncogene. 1999. - V. 18. - P. 4047-4054.
72. CHEK2 Breast Cancer Case-Control Consortium. CHEK2* llOOdelC and susceptibility to the breast cancer: A collaborative analysis involving 10860 breast cancer cases and 9065 controls from 10 studies // Am. J. Hum. Genet. 2004. - V. 74.-P. 1175-1182.
73. Chehab N.H., Malikzay A., Appel M., Halazonetis T.D. Chk2/hCdsl functions as a DNA damage checkpoint in G(l) by stabilizing p53 // Genes Dev. 2000. - V. 14(3). -P. 278-288.
74. Chen P.L. et al. The BRC repeats in BRCA2 are critical for RAD51 binding and resistance to methyl methanesulfonate treatment // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1998. V. 95. - P. 5287-5292.
75. Chen S. & Parmigiani G. Meta-analysis of BRCA1 and BRCA2 penetrance // J. Clin. Oncol. -2007. V. 25. - P. 1329-33.
76. Chiba N. & Parvin J.D. The BRCA1 and BARD associated with the RNA polymerase II holoenzyme I I Cancer Res. 2002. - V. 62. - P. 4222-4228.
77. Choi D. H., Lee M. H., Bale A. E. et al. Incidence of BRCA1 and BRCA2 mutations in young Korean breast cancer patients // J. Clin. Oncol. 2004. - V. 22. -P. 1638-1645.
78. Clarke M.F. et al. Cancer stem cells perspectives on current status and future directions: AACR Workshop on cancer stem cells // Cancer Res. - 2006. - V. 66. -P. 9339-9344.
79. Claus E., Risch N., Thompson W. Genetic analysis of breast cancer in the cancer and steroid hormone study // Am. J. Hum. Genet. 1991. - V. 48. - P. 232.
80. Cortez D. et al. Requirement of ATM-dependent phosphorylation of brcal in the DNA damage response to double strand breaks // Science. -1999. V. 286. - P.1162-1166.
81. Couch F.J., Farid L.M., DeShano M.L. et al. BRCA2 germline mutations in male breast cancer cases and breast cancer families // Nat. Genet. 1996. - V.13. -P.123-125.
82. Cox A., Dunning A.M., Garcia-Closas M. et al. A common coding variant in CASP8 is associated with breast cancer risk // Nat. Genet. 2007. - V. 39. - P. 352-358.
83. Crook T., Crossland S., Crompton M.R. et al. p53 mutations in BRCA1-associated familial breast cancer // Lancet. 1997. - V. 350. - P. 638-639.
84. Csokay B., Tihomirova L., Stengrevics A. et al. Strong founder effects in BRCA1 mutation carrier breast cancer patients from Latvia// Hum. Mut. Mutât. 1999. -V. 258.-P.1-6.
85. Cybulski C., Görski B., ITuzarski T. et al. CHEK2 is a multiorgan cancer susceptibility gene // Am. J. Hum. Genet. 2004. - V. 75(6). - P. 1131-1135.
86. Davies O.R., Pellegrini L. Interaction with the BRCA2 C-terminus protects RAD51-DNA filaments from disassembly by BRC repeats // Nat. Struct. Mol. Biol. 2007. - V. 14. - P. 475-483.
87. Deffenbaugh A.M., Frank T.S., Hoffman M. et al. Characterization of Common BRCA1 and BRCA2 Variants // Genetic Test. 2002. - V. 6. - P. 119-122.
88. De Leon Matsuda M., Liede A., Kwan E. et al. BRC Al and BRCA2 mutations among breast cancer patients from the Philippines // Int. J. Cancer. 2002. - V. 98. -P. 596-603.
89. Deng C.X. Roles of BRCA1 in centrosome duplication // Oncogene. 2002. - V. 21.-P. 6222-6227.
90. Deng C.X. & Wang R.H. Roles of BRCA1 in DNA damage repair: a link between development and cancer//Hum. Mol. Genet. 2003. - V. 12. - P. 113-123.
91. De Vivo I., Hankinson S.E., Colditz G.A. et al. The progesterone receptor Val660—»Leu polymorphism and breast cancer risk // Breast Cancer Res. 2004. -V. 6. - R636-R639.
92. Diez O., Cortes J., Domenech M. BRCA1 mutation analysis in 83 Spanish breast and breast/ovarian cancer families // Int. J. Cancer. 1999. — V. 83. - P. 465-469.
93. Diez O. et al. BRCA2 germ-line mutations in Spanish male breast cancer patients // Ann. Oncol. 2000. - V. 11. - P. 81-84.
94. Dontu G. et al. Stem cells in normal breast development and breast cancer // Cell Prolif. 2003. - V. 36 (S. 1.). - P. 59-72.
95. Dufault M.R., Betz B., Wappenschmidt B. et al. Limited relevance of the CHEK2 gene in hereditary breast cancer // Int. J. Cancer. 2004. - V. 110. - P. 320-325.
96. Dunning A.M., Chiano M., Smith N.R. et al. Common BRCA1 variants and susceptibility to breast and ovarian cancer in the general population // Hum. Mol. Genet. 1997. -V. 6. - P. 285-289.
97. Durocher F., Shattuck-Eidens D., McClure M., et. al. Comparison of BRCA1 polymorphisms, rare sequence variants and/or missense mutations in unaffected and breast/ovarian cancer populations// Hum. Mol. Genet. 1996. - V.5, №6. — P.835-842.
98. Easton D., Bishop D., Ford D. et al. Genetic linkage analysis in familial breast and ovarian cancer: Results from 214 families // Am. J. Hum. Genet. -1993. V. 52.-P. 678.
99. Easton D.F., Ford D., Bishop D.T. Breast and ovarian cancer incidence in BRCA1-mutation carriers. Breast Cancer Linkage Consortium // Am. J. Hum. Genet. 1995.-V. 56.-P. 265-271.
100. Eerola H. et al. Histopathological features of breast tumours in BRCA1, BRCA2, and in mutation negative breast cancer families // Breast Cancer Res. 2005. - V. 7.-P. 93-100.
101. Elledge S.J., Amon A. The BRCA1 suppressor hypothesis: an explanation for the tissue-specific tumor development in BRCA1 patients // Cancer Cell. 2002. — V. l.-P. 129-132.
102. Esashi F. et al. CDK-dependent phosphorylation of BRCA2 as a regulatory mechanism for recombinational repair // Nature. 2005. - V. 434. - P. 598-604.
103. Esashi F. et al. Stabilization RAD51 nucleoprotein filaments by the C-terminal region of BRCA2 // Nat. Struct. Mol. Biol. 2007. - V. 14. - P. 468-474.
104. Esteller M. et al. DNA methylation patterns in hereditary human cancers mimic sporadic tumorigenesis // Hum. Mol. Genet. 2001. - V. 10. - P. 3001-3007.
105. Easton D.F., Ford D., Bishop D.T. Breast and ovarian cancer incidence in BRCA1 mutation carriers. Breast Cancer Linkage Consortium // Am. J. Hum. Genet. -1995.-V. 56.-P. 265-271.
106. Easton D.F., Steele L., Fields P. et al. Cancer risks in two large breast cancer families linked to BRCA2 on chromosome 13ql2-13 // Am. J. Hum. Genet. -1997.-V. 61.-P. 120-128.
107. Easton D.F., Pooley K.A., Dunning A.M. et al. Genome-wide association study identifies novel breast cancer susceptibility loci // Nature. 2007. - V. 447. -P.1087-1093.
108. Falck J., Lukas C., Protopopova N. et al. Functional impact of concomitant versus alternative defects in the Chk2-p53 tumour suppressor pathway // Oncogene. 2001. -V. 20. - P. 5503-5510.
109. Fan S. et al. BRCA1 inhibition of estrogen receptor signaling in transfected cells // Science. 1999. -V. 284. - P. 1354-1356.
110. Fan S. et al. Role of direct interaction in BRCA1 inhibition of estrogen receptor activity // Oncogene. 2001. - V. 20. - P. 77-87.
111. Fishman J. et al. The role of estrogen in mammary carcinogenesis // Ann. New York Acad. Sci. 1995. - V. 768. - P. 91-100.
112. Fleming M., Potter J., Ramirez C. et al. Understanding missense mutations in the BRCA1 gene: An evolutionary approach // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. — V. 100.-P. 1151-1156.
113. Friedman L.S. Ostermeyer EA, Szabo C et al. Confirmation of BRCA1 by analysis of germline mutations linked to breast and ovarian cancer in ten families // Nat. Genet. 1994. - V. 8. - P. 399-404.
114. Ford D., Easton D. F., Stratton M. et al. Genetic heterogeneity and penetrance analysis of the BRCA1 and BRCA2 genes in breast cancer families // Am. J. Hum. Genet. 1998. - V. 62. - P. 676-689.
115. Foulkes W.D. et al. Estrogen receptor status in BRCA1- and BRA2-related breast cancer: the influence of age, grade, and histological type // Clin. Cancer Res. -2004.-V. 10.-P. 2029-2034.
116. Frank T.S., Deffenbaugh A.M., Reid J.E. et al. Clinical characteristics of individuals with germline mutations in BRCA1 and BRCA2: analysis of 10,000 individuals // J. Clin. Oncol. 2002. - V. 20. - P.1480-1490.
117. Frebourg T., Barbier N., Yan Y. et al. Germ-line p53 mutations in 15 families with Li-Fraumeni syndrome // Am. J. Hum. Genet. 1995. - V. 56. - P. 608-615.
118. Friedman L.S., Gayther S.A., Kurosaki T. et al. Mutation analysis of BRCA1 and BRCA2 in a male breast cancer population // Am. J. Hum. Genet. -1997. V.60. -P. 313-319.
119. Futreal P.A. et al. BRCA1 mutations in primary breast and ovarian carcinomas // Science. 1994. - V. 266. - P. 120-122.
120. Gatei M. et al. Role for ATM in DNA damage-induced phosphorylation of BRCA1 // Cancer Res. 2000. - V. 60. - P. 3299-3304.
121. Gatei M. et al. Ataxia-telangiectasia mutated (ATM) kinase and ATM and Rad3 related kinase mediate phosphorylation of Brcal at distinct and overlapping sites // J. Biol. Chem. 2001. - V. 276. - P. 17276-17280.
122. Gayther S. A., Warren W., Mazoyer S., et al. Germline mutations of the BRCA1 gene in breast and ovarian cancer families provide evidence for a genotype-phenotype correlation//Nature Genet. 1995. - V.ll.-P.428-433.
123. Gayther S. A., Harrington P., Russell P. et al. Frequently occurring germ-line mutations of the BRCA1 gene in ovarian cancer families from Russia // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V.60. - P. 1239-1242.
124. Gershoni-Baruch R., Dagan E., Fried G. et al. BRCA1 and BRCA2 founder mutations in patients with bilateral breast cancer // Eur. J. Hum. Genet. 1999. -V. 7(7).-P. 833-836.
125. Germignani F., Moreno V., Landi S. et al. A TP 53 polymorphism is associated with increased risk of colorectal cancer and with reduced levels of TP53 mRNA // Oncogene. 2004. - V. 23. - P. 1954-1956.
126. Ginolhac S.M., Gad S., Corbex M. et al. BRCA1 wild-type allele modifies risk of ovarian cancer in carriers of BRCA1 germ-line mutations // Cancer Epidemiol. Biomark. Prev. 2003. - V.12. - P.90-95.
127. Goelen G., Teugels E., Bonduelle M. et. al. High frequency of BRCA1/2 germline mutations in 42 Belgian families with a small number of symptomatic subjects // J. Med. Genet. 1999. - V. 36. - P. 304-308.
128. Gorski B., Byrski T., Huzarski T. et al. Founder mutations in the BRCA1 gene in Polish families with breast-ovarian cancer // Am. J. Hum. Genet. 2000. - V. 66. — P. 1963-1968.
129. Gorski B., Narod S.A. and Lubinski J. A common missense variant in BRCA2 predisposes to early onset breast cancer // Breast Cancer Res. 2005a. - V. 7. -R1023-R1027.
130. Gorski B. et al. Breast cancer predisposing alleles in Poland // Breast Cancer Res. Treat. 2005b. - V. 92. - P. 19-24.
131. Greenberg R.A. et al. Multifactorial contributions to an acute DNA damage response by BRCA1/BARD 1-containing complexes // Genes Dev. 2006. - V. 20. -P. 34-46.
132. Greenblatt M.S. et al. TP53 mutations in breast cancer associated with BRCA1 or BRCA2 germ-line mutations: distinctive spectrum and structural distribution // Cancer Res. 2001. - V. 61. - P. 4092-4097.
133. Gudas J.M. et al. Hormone-dependent regulation of BRCA1 in human breast cancer cells//Cancer Res. 1995.-V. 55.-P. 4561-4565.
134. Hakansson S., Johannsson O., Johansson U. et al. Moderate frequency of BRCA1 and BRCA2 germ-line mutations in Scandinavian familial breast cancer // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V. 60. - P. 1068-1078.
135. Hall J. M., Lee M. K., Newman B. et al. Linkage of early-onset familial breast cancer to chromosome 17q21 // Science 1990. - V.250. - P. 1684-1689.
136. Hamann U., Liu X., Lange S. et al. Contribution of BRCA2 germline mutations to hereditary breast/ovarian cancer in Germany // J. Med. Genet. 2002. - V. 39. -E12.
137. Hamann U. et al. Similar contributions of BRCA1 and BRCA2 germline mutations to early-onset breast cancer in Germany // Eur. J. Hum. Genet. — 2003. -V. 11.-P. 464-467.
138. Hanahan D., Weinberg R.A. The hallmarks of cancer // Cell. 2000. - V. 100(1). -P. 57-70.
139. Haraldsson K., Loman N., Zhang Q.X. et al. BRCA2 germ-line mutations are frequent in male breast cancer patients without a family history of the disease // Cancer Res. 1998. - V. 58. - P.1367-1371.
140. Haupt Y., Maya R., Kazaz A., Oren M. Mdm2 promotes the rapid degradation of p53 //Nature. 1997. - V. 387(6630). - P. 296-299.
141. Healey C.S., Dunning A.M., Teare D.M. et al. A common variant in BRCA2 is associated with both breast cancer risk and prenatal viability // Nat. Genet. 2000. -V. 26.-P. 362-364.
142. Heimdal K. et al. The Norwegian founder mutation in BRCA1: high penetrance confirmed in an incident cancer series and differences observed in the risk of ovarian cancer // Eur. J. Cancer 2003. - V. 39. - P. 2205-2213.
143. Hennighausen L. & Robinson G.W. Signaling pathway in mammary gland development // Dev. Cell. 2001. - V. 1. - P. 467-475.
144. Hughes D.J., Ginolhac S.M., Coupier I. et al. Breast cancer risk in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers and polyglutamine repeat legth in the AIB1 gene // Int. J. Cancer. 2005a. - V. 117. - P. 230-233.
145. Hughes D.J., Ginolhac S.M., Coupier I. et al. Common BRCA2 variants and modification of breast and ovarian cancer risk in BRCA1 mutation carriers // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2005b. - V.14. - P. 265-267.
146. Hughes-Davies L. et al. EMS Y links the BRCA2 pathway to sporadic breast and ovarian cancer // Cell. 2003. - V. 115. - P. 523-535.
147. Hu Y. et al. Modulation of aromatase expression by BRCA1: a possible link to tissue-specific tumor suppression // Oncogene. 2005. - V. 24. - P. 8343-8348.
148. Hu Y. BRCA1, Hormone, and Tissue-Specific Tumor Suppression // Int. J. Biol. Sci. 2009. - V. 5. - P. 20-27.
149. Hu Z., Wu J., Liu C.H. et. al. The analysis of BRCA1 mutations in eastern Chinese patients with early onset breast cancer and affected relatives // Hum. Mut. -2003. V. 22, № 1. — P.104.
150. Hunter D.J., Kraft P., Jacobs K.B. et al. A genome-wide association study identifies alleles in FGFR2 associated with risk of sporadic postmenopausal breast cancer // NatGenet. 2007. - V. 39. - V. 870-874.
151. Hwang S.J., Lozano G., Amos C.I. et al. Germline p53 mutations in a cohort with childhood sarcoma: sex differences in cancer risk // Am. J. Hum. Genet. 2003. -V. 72.-P. 975-83.
152. Hwang-Verslues W.W. et al. Breast Cancer Stem Cells and Tumor Suppressor Genes // J. Formos Med. Assoc. 2008. - V. 107. - P. 751-766.
153. Ikeda N., Miyoshi Y., Yoneda K. et al. Frequency of BRCA1 and BRCA2 germline mutations in Japanese breast cancer families // Int. J. Cancer. 2001. - V. 91.- P. 83-88.
154. Ishida T., Yokoe T., Kasumi F. et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of breast cancer patients associated with pregnancy and lactation: analysis of case-control study in Japan // Jpn. J. Cancer Res. 1992. - V. 83. - P. 1143-1149.
155. Jara L., Ampuero S., Seccia L. et al. Analysis of 5382insC (BRCA1) and 6174delT (BRCA2) mutations in 382 healthy Chilean women with a family history of breast cancer // Biol. Res. 2002. - V. 35, № 1. - p. 85-93.
156. Jasin M. Homologous repair of DNA damage and tumorigenesis: the BRCA connection//Oncogene.-2002.-V.21. P. 8981-8993.
157. Jeffrey P.D., Gorina S., Pavletich N.P. Crystal structure of the tetramerization domain of the p53 tumor suppressor at 1.7 angstroms // Science. 1995. - V. 267(5203).-P.1498-1502.
158. Jernstrom H., Lerman C., Ghadirian P. et al. Pregnancy and risk of early onset breast cancer in carriers of BRCA 1 and BRCA 2 // Lancet. 1999. - V. 354. - P. 1846-1850.
159. Johannsson O., Borg A., Olsson H. Pregnancy-associated breast cancer in BRCA1 and BRCA2 germline mutation carriers // Lancet. 1998. - V. 352. - P.1359-1360.
160. Johannsson O., Loman N., Moller T. Incidence of malignant tumours in relatives of BRCA1 and BRCA2 germline mutation carriers // Eur. J. Cancer. 1999. -V.35. -P.1248-1257.
161. Johnson N., Fletcher O., Naceur-Lombardelli C. et al. Interaction between CHEK2* 1 lOOdelC and other lowpenetrance breast cancer susceptibility genes: a familial study//Lancet. 2005. -V. 366. - P. 1554-1557.
162. Johnson N., Fletcher O., Palles C. et al. Counting potentially functional variants in BRCA1, BRCA2 and ATM predicts breast cancer susceptibility // Hum. Mol. Genet. -2007. V. 16. -P.1051-1057.
163. Jordan C.T., Guzman M.L., Noble M. Cancer stem cell // N. Engl. J. Med. 2006. -V. 355.-P. 1253-1261.
164. Kadouri L., Kote-Jarai Z., Hubert A. et al. A singlenucleotide polymorphism in the RAD51 gene modifies breast cancer risk in BRCA2 carriers, but not in BRCA1 carriers or noncarriers // Br. J. Cancer. 2004. - V. 90. - P. 2002-2005.
165. Kauff N.D. et al. Risk-reducing salpingo-oophorectomy in women with a BRCA1 or BRCA2 mutation //N. Engl. J. Med. 2002. - V. 346. - P. 1609-1615.
166. Kaufman B., Laitman Y., Gronwald J., Lubinski J., Friedman E. Haplotype of the C61G BRCA1 mutation in Polish and Jewish individuals // Genet. Test Mol. Biomarkers. -2009. V. 13(4). - P. 465-469.
167. Kilpivaara O., Yahteristo P., Falck J. et al. CHEK2 variant I157T may be associated with increased breast cancer risk // Int. J. Cancer. 2004. - V. 111. - P. 543-547.
168. Kim H., Chen J. & Yu X. Ubiquitin-binding protein RAP80 mediates BRCA1-dependent DNA damage response // Science. 2007a. - V. 316. - P. 1202-1205.
169. Kim H., Huang J. & Chen J. CCDC98 is a BRCA1-BRCT domain-binding protein involved in the DNA damage response // Nat. Struct. Mol. Biol. 2007b. -V. 14.-P. 710-715.
170. Kinzler K.V. & Vogelstein B. Cancer susceptibility genes. Gatekeepers and caretakers // Nature. - 1997. - V. 386. - P. 761-763.
171. Knudson A.G. & Strong L.C. Mutation and cancer: neuroblastoma and pheochromocytoma // Am. J. Hum. Genet. 1972. - V. 24(5). - P. 514-32.
172. Krajc M., Teugels E., Zgajnar J. et al. Five recurrent BRCA1/2 mutations are responsible for cancer predisposition in the majority of Slovenian breast cancer families // BMC Medical Genetics. 2008. - V. 9. - P. 83-90.
173. Klioo U., Chan K., Cheung A. et al. Recurrent BRCA1 and BRCA2 germline mutations in ovarian cancer: a founder mutation of BRCA1 identified in the Chinese population // Hum. Mutat. 2002. - V. 19(3). - P. 307-308.
174. Khoo U.S., Ngan H.Y., Cheung A.N. et al. Mutational analysis of BRCA1 and BRCA2 genes in Chinese ovarian cancer identifies 6 novel germline mutations // Hum. Mutat. 2000. - V. 16. - P. 88 -89.
175. Krum S.A., Miranda G.A., Lin C., Lane T.F. BRCA1 associates with processive RNA polymerase II // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278(52). - P. 52012-52020.
176. Kwiatkowska E. et al. BRCA2 germline mutations in male breast cancer patients in the Polish population // Hum. Mutat. 2001. - V. 17. - P.73.
177. Lacroix M., Tiollon R.A., Leclercq G. Stable "portrait" of breast tumors during progression. Data from biology, pathology, and genetics // Endocr. Relat. Cancer. — 2004.-V. 11.-P. 497-523.
178. Ladopoulou A., Kroupis C., Konstantopoulou I., Ioannidou-Mouzaka L. et al.
179. Germline BRCA1/BRCA2 mutations in Greek breast/ovarian cancer families:5382insC is the most frequent mutation observed// Cancer Lett. 2002. - V.185, №1.-P. 61-70.
180. Lakhani S.R. et al. Pathology of familial breast cancer: differences between breast cancers in carriers of BRCA1 or BRCA2 mutations and sporadic cases // Lancet. -1997.-V. 349.-P. 1505-1510.
181. Lalloo F., Varley J., Moran A. et al. BRCA1, BRCA2 and TP53 mutations in very early-onset breast cancer with associated risks to relatives // Eur. J. Cancer 2006. - V. 42.-P. 1143-1150.
182. Lattuada D., Somigliana E., Vigano P. et al. Genetics of endometriosis: a role for the progesterone receptor gene polymorphism PROGINS? // Clinical Endocrinology. 2004. -V. 61. - P. 190-194.
183. Lee A., Ho G., Oh P. et al. Founder mutation in the BRCA1 gene in Malay breast cancer patients from Singapore // Hum. Mutat. 2003. - V. 22(2). - P.178.
184. Lee J.S., John E.M., MeGuire V. et al. Breast and ovarian cancer in relatives of cancer patients, with and without BRCA mutations // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2006. - V. 15. - P. 359-363.
185. Levy-Lahad E., Lahad A., Eisenberg S. et al. A single nucleotide polymorphism in the RAD51 gene modifies cancer risk in BRCA2 but-not BRCA1 carriers // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2001. -V. 98. P. 3232-3236.
186. Li F.P. & Fraumeni J.F. Soft-tissue sarcomas, breast cancer, and other neoplasms. A familial syndrome? //Ann. Intern. Med. 1969. -V. 71. -P: 747-52.
187. Li S., Tseng H.-M., Yang T.-P. Molecular characterization of germline mutations in the BRCA1 and BRCA2 genes from breast cancer families in Taiwan // Hum. Genet.-1999.-V. 104.-P. 201-204.
188. Liede A., Narod S. A. et. al. Hereditary breast and ovarian cancer in Asia: genetic epidemiology of BRCA1 and BRCA2 // Hum. Mut. 2002a. - V. 20. - P. 413-424.
189. Liede A. et al. Contribution of BRCA1 and BRCA2 mutations to breast and ovarian cancer in Pakistan // Am. J. Hum. Genet. 2002b. - V. 71. - P. 595-606.
190. Liu S., Dontu G. & Wicha M.S. Mammary stem cells, self-renewal pathways, and carcinogenesis// Breast Cancer Res. 2005. - V.7. — P. 86-95.
191. Lynch B.J. et al. Pathobiologic characteristics of hereditary breast cancer // Hum. Pathol. 1998. - V. 29. - P. 1140-1144.
192. Ma Y., Bernstein L., Pike' M.C. & Ursin G. Reproductive factors and breast cancer risk according to joint estrogen and progesterone receptor status: a metaanalysis of epidemiological studies // Breast Cancer Res. 2006a. - V. 8. — R43.
193. Ma Y. et al. The Breast Cancer Susceptibility Gene BRCA1 Regulates Progesterone Receptor Signaling in Mammary Epithelial Cells // Molec. Endocrinology. 2006b. - V. 20. - P. 14-34.
194. Machackova E., Foretova L., Navratilova M., Valik D., Claes K., Messiaen L. A high occurrence of BRCA1 and BRCA2 mutations among Czech hereditary breast and breast-ovarian cancer families // Cas. Lek. Cesk. 2000. - V. 139, №20. - P. 635-637.
195. Machackova E., Foretova L., Lukesova M. et al. Spectrum and characterisation of BRCA1 and BRCA2 deleterious mutations in high-risk Czech patients with breast and/or ovarian cancer // BMC Cancer. 2008. - V. 8. - P. 140-151.
196. Majdak E. J., Debniak J. et al. Prognostic Impact of BRCA1 Pathogenic and BRCA1/ BRCA2 Unclassified Variant Mutations in Patients with Ovarian Carcinoma // Cancer. 2005. - V.104. - P. 1004-1012.
197. Malander S. et al. One in 10 ovarian cancer patients carry germ line BRCA1 or BRCA2 mutations: results of a prospective study in Southern Sweden // Eur. J. Cancer. 2004. - V. 40. - P. 422-428.
198. Malkin D. et al. Germ line p53 mutations in a familial syndrome of breast cancer, sarcomas, and other neoplasms // Science. 1990. - V.250. - P.1233-1238.
199. Malone K. E. et al. Frequency of BRCA1/BRCA2 mutations in a population-based sample of young breast carcinoma cases // Cancer. 2000. - V. 88. - P. 1393-1402.
200. Malone K. E. et al. Prevalence and predictors of BRCA1 and BRCA2 mutations in a population-based study of breast cancer in white and black American women ages 35 to 64 years // Cancer Res. 2006. - V. 66. - P. 8297-8308.
201. Manke I.A. et al. BRCT repeats as phosphopeptide-binding modules involved in protein targeting // Science. 2003. - V. 302. - P. 636-639.
202. Marcus J.N. et al. BRCA2 hereditary breast cancer pathophenotype // Breast Cancer Res. Treat. 1997. - V. 44. - P. 275-277.
203. Margolin S., Werelius B., Fornander T. & Lindblom A. BRCA1 mutations in a population-based study of breast cancer in Stockholm County // Genet. Test. — 2004.-V. 8. -P.127-132.
204. Marmorstein L.Y et al. A human BRCA2 complex containing a structural DNA binding component influences cell cycle progression // Cell. 2001. —V. 104. - P. 247-257.
205. Martin A.M., Kanetsky P., Amirimani B. et al. Germline TP53 mutations in breast cancer families with multiple primary cancers: is TP53 a modifier of BRCA1// J. Med. Genet. -2003. V. 40. - e34.
206. Martinez-Ferrandis J. I. et al. Mutational analysis of BRCA1 and BRCA2 in Mediterranean Spanish women with early-onset breast cancer: identification of three novel pathogenic mutations // Hum. Mutat. 2003. - V. 22. - P. 417-418.
207. Matsushima M. et al. Mutation analysis of the BRCA1 gene in 76 Japanese ovarian cancer patients: four germline mutations, but no evidence of somatic mutation//Hum. Mol. Genet. 1995. -V. 4. - P. 1953-1956.
208. Mavraki E., Gray I.C., Bishop D.T. & Spurr N.K. Germline BRCA2 mutations in men with breast cancer // Br. J. Cancer. 1997. - V. 76. - P. 1428-1431.
209. Mazoyer S., Dunning A.V., Serova O. et al. A polymorphic stop codon in BRCA2 // Nature Genet. 1996. - V. 14. - P. 253-254.
210. McLaughlin J., Risch H., Lubinski et al. Reproductive risk factors for ovarian cancer in carriers of BRCA1 or BRCA2 mutations: a case-control study // Lancet Oncol. 2007. - V. 8. - P. 26-34.
211. Meindl A. Comprehensive analysis of 989 patients with breast or ovarian cancer provides BRCA1 and BRCA2 mutation profiles and frequencies for the German population // Int. J. Cancer. 2002. - V. 97(4). - P. 472-80.
212. Meijers-Heijboer H., van den Ouweland A., Klijn J. et al. Low-penetrance susceptibility to breast cancer due to CHEK2*1100delC in noncarriers of BRCA1 or BRCA2 mutations // Nat. Genet. 2002. - V. 31. - P. 3-4.
213. MeijersHeijboer H., Wijnen J., Vasen H. et al. The CHEK2 llOOdelC mutation identifies families with a hereditary breast and ovarian cancer phenotype // Am. J. Hum. Genet. 2003. - V. 72. - P. 1308-1314.
214. Metcalfe K., Lynch H.T., Ghadirian P. et al. Contralateral Breast Cancer in BRCA1 and BRCA2 Mutation Carriers // J. Clin. Oncol. 2004. - V. 22. - P. 2328-2335.
215. Meyer M.E., Quirin-Stricker C., Lerouge T. et al. A limiting factor mediates the differential activation of promotes by the human progesterone receptor isoforms // J. Biol. Chem.- 1992. V. 267. - P. 10882-10887.
216. Miki Y. et al. A strong candidate for the breast and ovarian cancer susceptibility gene BRCA1 // Science. 1994. - V.266. - P.66-71.
217. Mirkovic N., Marti-Renom M., Weber B. et al. Structure-Based Assessment of Missense Mutation in Human BRCA1: Implications for Breast and Ovarian Cancer Predisposition // Cancer Res. 2004. - V. 64. - P. 3790-3797.
218. Mizuta R. et al. Rab22 and Rabl63/mouse BRCA2: proteins that specifically interact with the RAD51 protein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - V. 94. -P. 6927-6932.
219. Modugno F. Ovarian cancer and polymorphisms in the androgen and progesterone receptor genes: a HuGE review // Am. J. Epidemiol. — 2004. V. 159.-P. 319-335.
220. Moslehi R., Chu W., Karlan B. et al. BRCA1 and BRCA2 mutation analysis of 208 Ashkenazi Jewish women with ovarian cancer // Am. J. Hum. Genet. 2000. -V. 66.-P. 1259-1272.
221. Moller P., Heimdal K., Apold J., et.al. Genetic epidemiology of BRCA1 mutations in Norway // Eur. J. Cancer. 2001. - V. 37, №18. - P. 2428-2434.
222. Molyneux G., Geyer F., Magnay F. et al. BRCA1 Basal-like Breast Cancers Originate from Luminal Epitelial Progenitors and Not from Basal Stem Cells // Cell Stem Cell. 2010. - V. 7. - P. 403-417.
223. Monteiro A.N. BRCA1: the enigma of tissue-specific tumor development // Trends in Genet.-2003.-V. 19,N.6.-P. 312-315.
224. Moynahan M.E. et al. Brcal controls homology-directed DNA repair // Mol. Cell. 1999.-V. 4.-P. 511-518.
225. Moynahan M.E., Pierce A.J. and Jasin M. BRCA2 is required for homology-directed repair of chromosomal breaks // Mol. Cell 2001. - V. 7. - P. 263-272.
226. Muller D., Bonaiti-Pellie C., Abecassis J. et al. BRCA1 testing in breast and/or ovarian cancer families from northeastern France identifies two common mutations with a founder effect // Fam. Cancer. 2004. - V. 3. - P. 15-20.
227. Mullineaux L.G., Castellano T.M., Shaw J. et al. Identification of germline 185delAG BRCA1 mutations in non-Jewish Americans of Spanish ancestry from the San Luis Valley, Colorado // Cancer. 2003. - V. 98. - P. 597-602.
228. Natarajan T.G. & FitzGerald K.T. Markers in normal and cancer stem cells // Cancer Biomarkers. 2007. - V. 3. - P. 211-231.
229. Nedau S., Jain N., Husain S. et al. Novel germline mutation in breast cancer susceptibility genes BRCA1, BRCA2 and p53 gene in breast cancer patient from India // Breast Cancer Res. Tterat. 2004. - V. 88. - P. 177-186.
230. Neuhausen S., Mazoyer S., Friedman L. et al. Haplotype and Phenotype Analysis of Six Recurrent BRCA1 Mutations in 61 Families: Results of an International Study // Am. J. Hum. Genet. 1996. - V. 58. - P.271-280.
231. Newman B., Austin M., Lee C. et al. Inheritance of human breast cancer. Evidance for autosomal dominant transmission in high-risk families // Proc. JSTat. Acad. Sei. USA. 1988. -V. 85. - P. 3044-3048.
232. Newman B. et al. Frequency of breast cancer attributable to BRCA1 in a . population-based series of American women // JAMA. 1998. - V. 279. - P. 915— 921.
233. O'Donovan P.J. &.Livingston D.M. BRCA1 and BRCA2: breast/ovarian cancer susceptibility gene products and participants in DNA double-strand break repair // Carcinogenesis. 2010. - V.31. - P.961-967.
234. Oldenburg R.A., Kroeze-Jansema K., Kraan J. et al. The CHEK2*1100delC variant acts as a breast cancer risk modifier in nonBRCAl/BRCA2 multiplecase families //Cancer Res.- 2003. -V. 63.-P. 8153-8157.
235. Olivier M., Goldgar D., Sodha N. et al. Li-Fraumeni and Related Syndromes: Correlation between Tumor Type, Family Structure, and TP53 Genotype I I Cancer Res. -2003. -V. 63. P. 6643-6650.
236. Olopade O., Fackenthal J., Dunston G. et al. Breast cancer genetics in African Americans // Cancer. 2003. - V. 97. - P. 236-245.
237. Osorio A. et al. Loss of heterozygocity analysis at the BRCA1 loci in tumor samples from patients with familial breast cancer // Int. J. Cancer. 2002. - V. 99. -P. 305-309.
238. Osorio A., Rodriguez-Lopez R., Diez O. et al. The breast cancer low penetrance allele 1 lOOdelC in the CHEK2 gene is not present in Spanish familial breast cancer population // Int. J. Cancer. 2004. - V. 108. - P. 54-56.
239. Osorio A., Pollan M., Pita G. An evaluation of the polymorphisms Insl6bp and Arg72Pro in p53 as breast cancer risk modifiers in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers // British J. Cancer. 2008. - V. 99. - P. 974-977.
240. Oszurek O., Gorsku B., Gronwald J. et al. Founder mutations in the BRCA1 gene in west Belarusian breast-ovarian cancer families // Clin. Genet. 2001. - V. 60. -P. 470-471.
241. Ottini L., Masala G., D'Amico G. et al. BRCAl and BRCA2 mutation status and: tumor characteristics ini male breast cancer: a population-based study in Italy // Cancer Res. 2003. - V. 63. - V. 342-347.
242. Oüchi T., Monteiro A.N., August A. et aK BRCAl regulates p53-dependent gene expression //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - V: 95. - P. 2302-2306. .
243. Ozolina S., Sinicka O., Jankevics E. et al The 4154delA mutation carriers in the BRCAl gene share a common ancestry // Familial Cancer. 2009. — V. 8: — P. 1-4.
244. Pal T., Permuth-Wey J., Betts J: A. et al. BRCAl and BRCA2 mutations account for a large proportion of ovarian carcinoma cases // Cancer. 2005. - V: 104 - P. 2807-2816. /
245. Papelard H. et al. Prevalence of BRCAl in a hospital based population of Dutch breast cancer patients // Br. J. Cancer. 2000. - V. 83. - P. 719-724. ' • :
246. Papp J., Raicevic L., Milasin J. et al. Germline mutation analysis of BRGA1 and BRCA2 genes in Yugoslav breast/ovarian cancer families// Oncol. Rep. — 1999: — V.6, № 6. P.1435-1438.
247. Patel K.J. et al. Involvement of BRCA2 in DNA repair // Mol. Cell. 1998. - V. 1.-P. 347-357. . .
248. Paull T.T. et al. Direct DNA binding by brcal // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2001.-V: 98. -P. 6086-6091.
249. Pearce C.L., Hirschhorn J.N., Wu A.H. et al. Clarifying the PROGINS allele association in ovarian and breast cancer risk: a haplotype-based analysis // J. Natl. Cancer Inst. 2005.-V. 97.-P. 51-59.
250. Peelen T., van der Vliet M., Petrij-Bosch A. et al. A high proportion of novel mutations in BRCAl with strong founder effects among Dutch and Belgianhereditary breast and ovarian cancer families // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V. 60.-P. 1041-1049.
251. Pellegrini L. et al. Insights into DNA recombination from the structure of a RAD51-BRCA2 complex // Nature. 2002. - V. 420. - P. 287-293.
252. Peltomâki P., Vasen H. Mutations associated with HNPCC predisposition -Update of ICG-HNPCC/INSiGHT mutation database // Dis. Markers. 2004. - V. 20.-P. 269-276.
253. Peto J. et al. Prevalence of BRCA1 and BRCA2 gene mutations in patients with early-onset breast cancer // J. Natl. Cancer Inst. 1999. - V. 91. - P. 943-949.
254. Pharoah P.D. & Ponder B A. The genetics of ovarian cancer // Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 2002. V. 16. - P. 449-68.
255. Phelan C., Dapic V., Tice B. et al. Classification of BRCA1 missense variants of unknown clinical significance // J. Med. Genet. 2005. - V. 42. - P. 138-146.
256. Pisano M., Cossu A., Persico I. et al. Identification of a founder BRCA2 mutation in Sardinia // Br. J. Cancer. 2000. - V. 82. - P. 553-559.
257. Pohlreich P., Zikan M., Stribrna J. et al. High proportion of recurrent germline mutations in the BRCA1 gene in breast and ovarian cancer patients from the Prague area // Breast Cancer Res. 2005. - V. 7(5). - P. 728-736.
258. Polanowska J. et al. A conserved pathway to activate BRCA1-dependent ubiquitylation at DNA damage sites // EMBO J. 2006. - V. 25. - P. 2178-2188.
259. Ponder B.A., Antoniou A., Dunning A., et al. Polygenic inherited predisposition to breast cancer // 2005. V. 70. - P. 35-41.
260. Poole A J. et al. Prevention of Brcal -Mediated Mammary Tumorigenesis in Mice by a Progesterone Antagonist // Science. 2006. -V. 314. -P. 1467-1470.
261. Prall O.W., Rogan E.M., Sutherland R.L. Estrogen regulation of cell cycle progression in breast cancer cells // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 1998. - V. 65.-P. 169-174.
262. Prat J., Ribe A. and Gallardo A. Hereditary ovarian cancer // Hum. Pathol. -2005.-V. 36.-P. 861-70.
263. Presneau N. et al. New mechanism of BRCA1 mutation by deletion/insertion at the same nucleotide position in three unrelated French breast/ovarian cancer families// Hum. Genet. 1998. - V.103. - P.334-339.
264. Quintana-Murci L., Gal I., Bakhan T. et al. The Tyr978X BRCA1 mutation: occurrence in non-Jewish Iranians and haplotype in French-Canadian and non-Ashkenazy Jews // Fam. Cancer. 2005. - V. 4. - P. 85-88.
265. Rapakko K., Allinen M., Syrjakoski K. et al. Germ-line TP53 alterations in Finnish breast cancer families are rare and occur at conserved mutation-prone sites //Br. J. Cancer. -2001. V. 84.-P. 116-119.
266. Rashid M., ZaidiA., Torres D. et al. Prevalence of BRCA1 and BRCA2 mutations in Pakistani breast and ovarian cancer patients // Int. J. Cancer. 2006. - V. 119.-P. 2832-2839.
267. Ratajska M., Brozek I., Senkus-Konefka E. et al. BRCA1 and BRCA2 point mutations and large rearrangements in breast and ovarian cancer families in Northern Poland//Oncol. Rep. -2008.- V. 19.-P. 263-268.
268. Rebbeck T.R., Kantoff P.W., Krithivas K. et al. Modification of BRCA1-associated breast cancer risk by the polymorphic androgen-receptor CAG repeat // Am. J. Hum. Genet. 1999. - V.64. - P. 1371-1377.
269. Rebbeck T.R., Wang Y., Kantoff P.W. et al. Modification of BRCA1- and BRCA2-associated breast cancer risk by AIB1 genotype and reproductive history // Cancer Research 2001. - V. 61. - P. 5420-5424.
270. Rebbeck T.R. Inherited predisposition and breast cancer: modifiers of BRCA1/2-associated breast cancer risk // Environ. Mol. Mutagen. 2002. - V. 39. - P. 228234.
271. Reeves M.D., Yawitch T., van Der Merwe N. et al. BRCA1 mutations in South African breast and/or ovarian cancer families: evidence of a novel founder mutation in Afrikaner families // Int. J. Cancer. 2004. - V. 110. - P. 677-682.
272. Reid et al. E3 ligase activity of BRCA1 is not essential for mammalian cell viability or homology-directed repair of double-strand DNA breaks // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2008.-V. 105.-P. 20876-20881.
273. Rliiem K., Flucke U., Engel C. et al. Association of the BRCA1 missense variant R1699W with a malignant phyllodes tumor of the breast // Cancer Genet. Cytogenet. 2007. - V. 176. - P. 76-79.
274. Risch H.A., McLaughlin J., Cole D. et al. Prevalence and penetrance of germline BRCA1 and BRCA2 mutations in a population series of 649 women with ovarian cancer//Am. J. Hum. Genet. 2001. - V. 68. - P.700- 710.
275. Rodriguez G.C., Walmer D.K., Cline M. et al. Effect of progestin on the ovarian epithelium of macaques: cancer prevention through apoptosis? // J. Soc. Gynecol. Investig. 1998. - V. 5. - P. 271-276.
276. Rogacou E.P. et al. Megabase chromatin domains involved in DNA double-strand breaks in vivo // J. Cell Biol. 1999. - V. 146. -P. 905-916.
277. Rogozinska-Szczepka J., Utracka-Hutka B., Grzybowska E. et al. BRCA1 and BRCA2 mutations as prognostic factors in bilateral breast cancer patients // Ann. Oncol. 2004. - V. 15. - P. 1373-1376.
278. Romano A., Lindsey P.J., Fischer D.C. et al. Two functionally relevant polymorphisms in the human progesterone receptor gene (+331G/A and progins) and the predisposition for breast and/or ovarian cancer // Gynecol.Oncol. — 2006. -V. 101.-P. 287-295.
279. Romano A., Delvoux D., Fischer D. et al. The PROGINS polymorphism of the human progesterone receptor diminishes the response to progesterone // J. Mol. Endocrinol. -2007. -V. 38. P. 331-350.
280. Rubin S.C., Benjamin I., Behbakht K. et al. Clinical and pathological features of ovarian cancer in women with germ-line mutations of BRCA1 // N. Engl. J. Med. -1996. -V. 335(19). -P.1413-1416.
281. Rudkin T., Hamel N., Galvez M. et al. The different BRCA1 mutation 1135insA has multiple origins: a haplotype study in different populations // BMC Med. Genet.-2006.-V. 7.-P. 15-19.
282. Ruiz-Flores P., Sinilnikova O.M., Badzioch M. BRCA1 and BRCA2 mutation analysis of early-onset and familial breast cancer cases in Mexico // Hum. Mut. — 2002. V. 20, №6. - P. 474-475.
283. Ruffner H., Joazeiro C.A., Hemmati D. et al. Cancer-predisposing mutations within the RING domain of BRCA1: Loss of ubiquitin protein ligase activity and protection from radiation .hypersensitivity // PNAS. 2001. - V. 98. - P. 51345139.
284. Runnebaum I.B., Wang-Gohrke S., Vesprini D. et al. Progesterone receptor variant increases ovarian cancer risk in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers who were never exposed to oral contraceptives // Pharmacogenetics 2001. — V. 11. — P. 635-638.
285. Russo J. et al. Pattern of distribution of cells positive for estrogen receptor alpha and progesterone receptor in relation to proliferating cells in the mammary gland // Breast Cancer Res. Treat. 1999. - V/ 53. - P. 217-227.
286. Russo A. et al. Hereditary ovarian cancer // Critical Reviews in Oncology/Hematology. 2009. - V. 69. - P. 28^4.
287. Sarkaria J.N., Busby ЕЛС., Tibbetts R^S. et al. Inhibition of ATM and ATR kinase activities by the radiosensitizing agent, caffeine // Cancer Res. 1999. -V. 59(17). -P. 4375-82.
288. Sankaran S., Starita L.M., Simons A.M. et al. Identification of domains of BRCA1 critical for the ubiquitin-dependent inhibition of centrosome function // Cancer Res. 2006. - V.66(8). - P. 4100-4107.
289. Santarosa M., Dolcetti R., Magri M.D. et al. BRCA1 and BRCA2 genes: role in hereditary breast and ovarian cancer in Italy// Int. J. Cancer. 1999. - V. 83, № 1. -P. 5-9.
290. Sarantaus L., Huusko P., Eerola H. et al. Multiple founder effects and geographical clustering of BRCA1 and BRCA2 families in Finland // Eur. J. Hum. Genet. 2000. - V. 8. - P. 757-763.
291. Saxena S., Szabo C.I., Chopin S. BRCA1 and BRCA2 in Indian breast cancer patients // Hum. Mutat. 2002. - V. 20, № 6. - P. 473-474.
292. Scadden D.T. The stem-cell niche as an entity of action// Nature. 2006. - V. 441.-P. 1075-1079.
293. Scully R. & Livingston D. In search of the tumor-suppressor functions of BRCA1 and BRCA2 // Nature. 2000. - V. 408. - P. 429-432.
294. Scully R. et al. Dynamic changes of BRCA1 subnuclear location and phosphorylation state are initiated by DNA damage// Cell. 1997a. - V.90. -P.425-435.
295. Scully R. et al. Association of BRCA1 with Rad51 in mitotic and meiotic cells // Cell. 1997b. - V. 88. - P. 265-275.
296. Scully R. et al. BRCA1 is a component of the RNA polymerase II holoenzyme // Proc.Nat. Acad. Sei. 1997c. -V.94. -P.5605-5610.
297. Sensi E. et al. p53 inactivation is a rare event in familial breast tumors negative for BRCA1 and BRCA2 mutations // Breast Cancer Res. Treat. 2003. - V. 82. -P. 1-9.
298. Serrano-Fernandez P., Debniak T., Gorski B. et al. Synergistic interaction of variants in CHEK2 and BRCA2 in breast cancer risk // Breast Cancer Res. Treat. -2008. -V. 117(1). -P.161-165.
299. Seymour I., Casadei S., Zampiga V. et al. Disease family history and modification of breast cancer risk in common BRCA2 variants // Oncol. Reports -2008.-V. 19.-P. 783-786.
300. Shao S. et al. Mitotic recombination is suppressed by chromosomal divergence in hybrids of distantly related mouse strains // Nat. Genet. 2001. - V. 28. - P. 169172.
301. Sharan S.K. et al. BRCA2 deficiency in mice leads to meiotic impairment and infertility//Development. -2004. V. 131.-P. 131-142.
302. Shattuck-Eidens D., Oliphant A., McClure M., et al. BRCA1 sequence analysis in women at high risk for susceptibility mutations // JAMA. 1997. - V. 278, №15 -P.1242-1250.
303. Sigurdson A.J., Hauptmann M., Chatteijee N. et al. Kin-cohort estimates for familial breast cancer risk in relation to variants in DNA base excision repair, BRCA1 interacting and growth factor genes // BMC Cancer. 2004. - V. 4. - P. 9.
304. Silva J.M. et al. Loss of heterozygocity in BRCA1 and BRCA2 markers and highgrade malignancy in breast cancer // Breast Cancer Res. Treat. 1999. - V. 53. -P. 9-17.
305. Sinilnikova O.M., Mazoyer S., Bonnardel C. et al. BRCA1 and BRCA2 mutations in breast and ovarian cancer syndrome: reflection on the Creighton University historical series of high risk families // Fam. Cancer. 2006. -V. 5. - P.15-20.
306. Singh S.K. et al. Identification of a cancer stem cell in human brain tumors // Cancer Res. 2003. - V. 63.- P. 5821-5828.
307. Singh S.K. et al. Cancer stem cells in nervous system tumors // Oncogene. 2004. -V. 23.-P. 7267-7273.
308. Sjalander A., Birgander R., Hallmans G. et al. p53 polymorphisms and haplotypes in breast cancer// Carcinogenesis.— 1996.-V. 17. — P.1313-1316.
309. Smith T.M. et al. Complete genomic sequence and analysis of 117 kb of human DNA containing the gene BRCA1 // Genome Res. 1996. - V. 6. - P. 1029-1049.
310. Smith A., Moran A., Boyd M. et al. Phenocopies in BRCA1 and BRCA2 families: evidence for modifier genes and implication for screening // J. Med. Genet. 2007. -V. 44.-P. 10-15.
311. Sobhian B. et al. RAP80 targets BRCA1 to specific ubiquitin structures at DNA damage sites // Science. 2007. - V. 316. - P. 1198-1202.
312. Sorlie T. et al. Repeated observation of breast tumor subtypes in independent gene expression data sets // Proc. Nat. Acad. Sci. 2003. -V. 100. - P. 8418-8423.
313. Sousek P., Borovanova T.5 Pohlreich P. et al. Role of single nucleotide polymorphisms and haplotypes in BRCA1 in breast cancer: Czech case-control study // Breast Cancer Res. Treat. 2006. - V. 103(2). - P. 219-24.
314. Southey M. C. & Hopper J. L. BRCA1 mutations and other sequence variants in a population-based sample of Australian women with breast cancer // Br. J. Cancer. -1999.-V. 79.-P. 34-39.
315. Spillman M.A. & Bowcock A. BRCA1 and BRCA2 mRNA levels are coordinately elevated in human breast cancer cells in response to estrogen // Oncogene. 1996.-V. 13.-P. 1639-1645.
316. Spurdle A.B., Hopper J.L., Chen X. et al. The BRCA2 372HH genotype is associated with risk of breast cancer in Australian women under age 60 years // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2002. - V.l 1(4). - P. 413-416.
317. Spurdle A.B., Antoniou A.C., Duffy D.L. et al. The androgen receptor CAG repeat polymorphism and modification of breast cancer risk in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers // Breast Cancer Res. 2005. - V. 7. - R176-R183
318. Stacey S.N., Manolescu A., Sulem P. et al. Common variants on chromosomes 2q35 and 16ql2 confer susceptibility to estrogen receptor-positive breast cancer // Nat Genet. -2007. V. 39. - P. 865-869.
319. Staff S. et al. Frequent somatic loss of BRCA1 in breast tumors from BRCA2 germline mutation carriers and vice versa // Br. J. Cancer. 2001. - V. 85. - P. 1201-1205.
320. Stoppa-Lyonnet D., Laurent-Puig P., Laurent E. et al. BRCA1 sequence variations in 160 individuals referred to a breast/ovarian family cancer clinic // Am. J. Hum. Genet.-1997.-V. 60.-P. 1021-1030.
321. Suspitsin E., Sherina N., Ponomariova D. et al. High frequency of BRCA1, but not CHEK2 or NBS1 (NBN), founder mutation in Russian ovarian cancer patient // Hereditary Cancer in Clinical Practice. 2009. - V. 7. - P. 5-11.
322. Suter N.M. et al. BRCA1 and BRCA2 mutations in women from Shanghai China // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2004. - V. 13. - P. 181-189.
323. Syed V. & Ho S.M. Progesterone-induced apoptosis in immortalized normal and malignant human ovarian surface epithelial cells involves enhanced expression of FasL // Oncogene. 2003. - V. 22. - P. 6883-6890.
324. Syrjakoski K., Vahteristo P., Eerola H. et al. Population-based study of BRCA1 and BRCA2 mutations in 1035 unselected Finnish breast cancer patient // J. Natl. Cancer Inst.-2000.-V. 92.-P. 1529-1531.
325. Tavtigian S.V. et al. The complete BRCA2 gene and mutations in chromosome 13q-linked kindreds//Nature Genet. 1996. - V.12. - P.333-337.
326. Tereschenko I., Basham V., Ponder B. and Pharaoh P.D. BRCA1 and BRCA2 mutations in Russian familial breast cancer // Hum. Mutat. — 2002. V. 19. - P. 184.
327. Thompson D. & Easton D. Variation in cancer risks, by mutation position, in BRCA2 mutation carriers //Am. J. Hum. Genet. -2001. -V. 68. -P. 410-419.
328. Thompson D., Easton D., Breast Cancer Linkage Consortium. Variation in BRCA1 cancer risks by mutation position // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. -2002. V.l 1, № 4. - P. 329-336.
329. Thorlacius S., Sigurdsson S., Bjarnadottir H. et al. Study of a single BRCA2 mutation with high carrier frequency in a small population // Am. J. Hum. Genet. -1997.-V. 60.-P. 1079-1084.
330. Thorslund T., Esashi F., West S.C. Interaction between human BRCA2 protein and the meiosis-specific recombinase DMC1 // EMBO J. 2007. - V. 26. - P. 2915-2922.
331. Thorslund T. & West S.C. BRCA2: a universal recombinase regulator // Oncogene. 2007. - V. 26. - P. 7720-7730.
332. Thorslund T., Mcllwraith M., Compton S. et al. The breast cancer tumor suppressor BRCA2 promotes the specific targeting of RAD51 to single-stranded DNA//Nat. Struct. Mol. Biol. 2010. - V. 17(10).-P. 1263-1265.
333. Thellenberg C., Maimer B., Tavelin B. et al. Second primary cancers in men with prostate cancer: an increased risk of male breast cancer // J. Urol. 2003. - V. 169. -P. 1345-1348.
334. Tryggvadottir L., Olafsdottir E., Gudlaugsdottir S. et al. BRCA 2 mutation carriers, reproductive factors and breast cancer risk // Breast Cancer Res. 2003. -V. 5.-P. 121-128.
335. Turner N., Tutt A. and Ashworth A. Hallmarks of 'BRCAness' in sporadic cancers // Nat. Rev. Cancer. 2004. - V. 4. - P. 814-819.
336. Vahteristo P., Bartcova J., Eerola H. et al. A CHEK2 genetic variant contributing to a substantial fraction of familial breast cancer // Am. J. Hum. Genet. — 2002. -V. 71.-P. 432-438.
337. Van der Looij M., Szabo C., Besznyak I. et al. Prevalence of founder BRCA1 and BRCA2 mutations among breast and ovarian cancer patients in Hungary // Int. J. Cancer. 2000. - V. 86. - P. 737 - 740.
338. Varley J.M., McGown G., Thorncroft M. et al. Germ-line mutations of TP53 in Li-Fraumeni families: an extended study of 39 families // Cancer Res. 1997. - V. 57.-P. 3245-3252.
339. Vasen H.F., Wijnen J.T., Menko F.H. et al. Cancer risk in families with hereditary nonpolyposis colorectal cancer diagnosed by mutation analysis // Gastroenterology. 1996. -V. 110.-P. 1020-1027.
340. Vehraanen P., Friedman L.S., Eerola H. et al. Low proportion of BRCA1 and BRCA2 mutations in Finnish breast cancer families: evidence for additional susceptibility genes // Hum. Mol. Genet. 1997. - V. 6. - P. 2309-2315.
341. Venkitaraman A.R. Function of BRCA1 and BRCA2 in the biological response to DNA damage// J. Cell Sei. -2001. -V. 114. P. 3591-3598.
342. Venkitaraman A.R. Cancer susceptibility and the functions of RCA1 and BRCA2// Cell. 2002. - V. 108. - P. 171-182.
343. Verhoog L.C., Brekelmans C.T., Seynaeve C. et al. Contralateral breast cancer risk is influenced by the age at onset in BRCA1-associated breast cancer // Br. J. Cancer. 2000. - V. 83. - P. 384-386.
344. Verhoog L.C., Van den Ouweland A.M.W., Berns E. et. al. Large regional differences in the frequency of distinct BRCA1/BRCA2 mutations in 517 Dutch breast and/or ovarian cancer families // Eur. J. Cancer. 2001. - V. 37. - P.2082-2090.
345. Vrieling H. Mitotic maneuvers in the light // Nat. Genet. 2001. - V. 28. - P. 101-102.
346. Wagner T.M., Hirtenlehner K., Shen P. et al. Global sequence diversity of BRCA2: analysis of 71 breast cancer families and 95 control individuals of worldwide populations // Hum. Mol. Genet. 1999. - V. 8. - P. 413-423.
347. Wagner T.M., Moslinger R.A., Muhr D. et al. BRCAl-related breast cancer in Austrian breast and ovarian cancer families: specific BRCA1 mutations and pathological characteristics // Int. J. Cancer. 1998. - V.77, №3. - P. 354-360.
348. Wang Y. et al. BASC, a super complex of BRCAl-associated proteins involved in the recognition and repair of aberrant DNA structures // Genes Dev. 2000. -V.14.-P. 927-939.
349. Wang W.W., Spurdle A.B., Kolachana P. et al. A single nucleotide polymorphism in the 50 untranslated region of RAD51 and risk of cancer among BRCA1/2mutation carriers // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2001. - V. 10. - P. 955960.
350. Wang B. et al. Abraxas and RAP80 form a BRCA1 protein complex required for the DNA damage response // Science. 2007. - V. 316. - P. 1194-1198.
351. Wang X., Pankratz S., Fredericksen Z. et al. Common variant associated with breast cancer in genome-wide associated studies are modifiers of breast cancer risk in BRCA1 and BRCA2 mutation carriers // Hum. Mol. Genet. 2010. - V. 19. - P.
352. Wang-Gohrke S., Rebbeck T.R., Besenfelder W. et al. p53 germline polymorphisms are associated with an increased risk for breast cancer in German women //Anticancer Res. 1998. - V.l 8. - P. 2095-2099.
353. Wang-Gohrke S., Becher H., Kreienberg R. et al. Intron 3 16 bp duplication polymorphism of p53 is associated with an increased risk for breast cancer by the age of 50 years // Pharmacogenetics. 2002. - V. 12. - P. 269-272.
354. Watson P. & Lynch H.T. Extracolonic cancer in hereditary nonpolyposis colorectal cancer // Cancer. 1993. - V. 71(3). - P. 677-85.
355. Watson P., Vasen H.F., Mecklin J.P., et al. The risk of extra-colonic, extraendometrial cancer in the Lynch syndrome // Int. J. Cancer. 2008. - V.123. - P. 444-449.
356. Weitzel J.N., Lagos V., Blazer K.R. et al. Prevalence of BRCA mutations and founder effect in high-risk Hispanic families // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev.-2005.- V. 14.-P. 1666-71.
357. Welcsh P.L. and King M.C. BRCA1 and BRCA2 and the genetics of breast and ovarian cancer // Hum. Mol. Genet. 2001. - V. 10. - P. 705-713.
358. Weston A. & Godbold J.H. Polymorphisms of H-ras-1 and p53 in breast cancer and lung cancer: a meta-analysis // Environ. Health Perspect. 1997. - V. 105, S. 4.-P. 919-926.
359. Williams W. & Anderson D. Genetic epidemiology of breast cancer analysis of 200 danish pedigrees // Genet. Epidem. 1984. - V. 1. - P. 7-20.
360. Williams R.S., Green R. and Glover J.N. Crystal structure of the BRCT repeat region from the breast cancer-associated protein BRCA1 // Natl. Struct. Biol. -2001.-V. 8.-P. 838-842.
361. Wilson J., Bateman A., Hanson H. et al. A novel HER2~positive breast cancer phenotype arising from germline TP53 mutation // J. Med. Genet. 2010. - V. 47. -P.
362. Weitzel J. N., Robson M., Pasini B. et al. A Comparison of Bilateral Breast Cancers in BRCA Carriers // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2005. - V.14. -P. 1534-1538.
363. Wenham R., Schildkraut J., McLean K. et al. Polymorphisms in BRCA1 and BRCA2 and risk of epithelial ovarian cancer // Clin. Cancer Res. 2003. -V. 9.-P. 4396-4403.
364. Whittemore A.S., Gong G. On the use of familial aggregation in population-based case probands for cal-culating penetrance // J. Natl. Cancer Inst. 2003. - V.95. -P. 76-77.
365. Wong A.K. et al. RAD51 interact with the evolutionarily conserved BRC motifs in the human breast cancer susceptibility gene BRCA2 // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272.-P. 31941-31944.
366. Woodward W. et al. On mammary stem cells// J. Cell Science. 2005. - V.l 18. -P. 3585-3594.
367. Wooster R. et al. Identification of the breast cancer susceptibility gene BRCA2 // Nature. 1995. - V. 378. - P. 789-792.
368. Wu K., Hinson S.R., Ohashi A. et al. Functional evaluation and cancer risk assessment of BRCA2 unclassified variants // Cancer Res. 2005. - V. 65. - P. 417-426.
369. Wu L.J.C., Wang Z.W., Tsan J.T. et al. Identification of a RING protein that can interact in vivo with the BRCA1 gene product // Nat. Genet. 1996. - V.14. -P.430-440.
370. Wu X. et al. Independence of R/M/N focus formation at the presence of intact BRCA1 // Science. 2000. - V. 289. - P. 11.
371. Xia B. et al. Control of BRCA2 cellular and clinical fonctions by a nuclear partner, PALB2 // Mol. Cell. 2006. - V. 22. - P. 719-729.
372. Xu C. F., Chambers J. A., Nicolai H. et al. Mutations and alternative splicing of the BRCA1 gene in UK breast/ovarian cancer families // Genes Chromosomes Cancer.-1997.-P. 18.-P. 102-110.
373. Xu X. et al. Centrosome amplification and a defective G2-M cell cycle checkpoint induce genetic instability in BRCA1 exon 11 isoform-deficient cells //Mol. Cell. -1999. V.3. -P.389-395.
374. Xu J., Fan S. and Rosen E.M. Regulation of the Estrogen- Inducible Gene Expression Profile by the Breast Cancer Susceptibility Gene BRCA1 // Endocrinology. 2005. - V. 146. - P. 2031-2047.
375. Yang H. et al. BRCA2 function in DNA binding and recombination from a BRCA2-DSSI-ssDNA structure // Science. 2002. - V. 297. - P. 1837-1848.
376. Yassaee V. R. et al. Novel mutations in the BRCA1 and BRCA2 genes in Iranian women with early-onset breast cancer // Breast Cancer Res. 2002. -V. 4, R6.
377. Yazici H., Bitisik O., Akisik E. et al. BRCA1 and BRCA2 mutations in Turkish breast/ovarian families and young breast cancer patients// Br. J. Cancer. 2000. -V. 83, №6. — P.737-742.
378. Yoshida K. & MikiY. Role or BRCA1 and BRCA2 as regulators of DNA repair, transcription, and cell cycle in response to DNA damage // Cancer Sci. 2004. — V. 95.-P. 866-871.
379. Yu V.P. et al. Gross chromosomal rearrangements and genetic exchange between nonhomologous chromosomes following BRCA2 inactivation // Genes Dev. -2000.-V. 14.-P. 1400-1406.
380. Yu X. et al. The Cterminal (BRCT) domains of BRCA1 interact in vivo with CtIP, a protein implicated in the CtBP pathway of transcriptional repression // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 25388-25392.
381. Yu X. et al. The BRCT domain is a phospho-protein binding domain // Science. -2003. -V. 302. P. 639-642.
382. Zeegers M., van Poppel F., Vlietinck R. et al. Founder mutations among the Dutch // Eur. J. Hum. Genet. 2004. - V. 12. - P. 591-600.
383. Zelada-Hedman M. et al. A screening for BRCA1 mutations in breast and breast-ovarian cancer families from the Stockholm region // Cancer Res. 1997. - V. 57. -P. 2474-2477.
384. Zhang H., Somasundaram K., Peng Y. et al. BRCA1 physically associates with p53 and stimulates its transcriptional activity // Oncogene. 1998. - V. 16. -P.1713-21.
385. Zheng L. et al. Sequence-specific transcriptional corepressor function for BRCA1 through a novel zinc finger protein, ZBRK1 // Mol. Cell. 2000. - V. 6. - P. 757768.
386. Zheng L. et al. BRCA1 mediates ligand-independent transcriptional repression of the estrogen receptor // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2001. - V. 98. - P. 95879592.
387. Zhi X., Szabo C., Chopin S. BRCA1/BRCA2 sequence variants in Chinese breast cancer families // Hum. Mutat. 2002. - V. 20, №6. - P. 474.
388. Zhong Y., Sheng X.G., Ma Z.F. et al. Clinicopathological characteristics of hereditary ovarian cancer syndrome // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. 2009. - V. 44(9).-P. 676-680.260
389. Zikan M., Pohlreich P. & Stribrna J. Mutational analysis of the BRCA1 gene in 30 Czech ovarian cancer patients // J. Genet. 2005. - V. 84. - P. 63-67.
-
Поспехова, Наталья Ивановна
-
доктора биологических наук
-
Москва, 2011
-
ВАК 03.02.07
- Изучение генетических факторов риска развития рака яичников
- Молекулярно-генетический анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников
- Диагностическое значение сывороточных белков для ранней диагностики рака яичников
- Молекулярно-генетический анализ особенностей структуры и экспрессии генов BRCA1/2 при раке яичников и молочной железы
- Молекулярно-генетическое изучение рака молочной железы
