Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Коллагенолитическая активность в смешанной слюне, ткани десны и десневой жидкости и роль фибронектина у больных катаральным гингивитом и пародонтитом

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Коллагенолитическая активность в смешанной слюне, ткани десны и десневой жидкости и роль фибронектина у больных катаральным гингивитом и пародонтитом"

РОССИЙСКАЯ

академия медицинских НАУК

ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ

На правах рукописи УЖ 616.31 - 002:6X5.314 - 007 (17)

ЕЗИКЯН ТИРУИ ИОСИФОВНА

Коллагенолитическая активность в смешанной слюне,ткани десны и десневой жидкости и роль фибтюнектина у больных катаральным гингивитом и пародонтитом

( 03.00.04. - биохимия )

Автореферат

диссертации на соискание ученой степэни кандидата биологических наук

МОСКВА 1992

Работа выполнена в Центовльном научно-исслецовательскоц

институте стоматологии НПО " Стоматология " МЗ РСФСР

/

I

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.К.ЛЕОНТЬЕВ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук профессор В.Б.СПИРИЧЕВ

доктор медицинских наук, профессор Ю.А.ПЕТРОВИЧ

Ведущее угщеадение: Институт ревматологии РАМН

Защита состоится " ^¿¿¿З-^--/"1^ 1992 г. в У / час!

на васедании Специализированного Совета Л 001.02.01 при Институт Питания РАМН по адресу: Москва,Устьиновский пр., 2/14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Питания.

л 7

Автореферат разослан "/) "__1992 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета,кандидат медицинских наук

В.М.Жмиченко

OB ПАЯ ХАРАКТЕРИСТИК« РАБОТЫ

Актуальность исследования. Большая распространенность заболе- . шний пародонта среди населения обусловливает особую актуальность »той проблемы.Теоретическая и практическая ценность исследований I этом направлении бесспорна,поскольку до настоящего времени не >ешен окончательно вопрос о ранней диагностике и лечений заболева-шй пародонта.несмотря на немалое число предложенных методов.

В этой связи возникает вопрос о необходимости глубокого изучения гатогенеэа заболевания,так как это позволит разработать эффективные «етоды лечения и профилактики,а также определить объективные тесты щп выявления состояния тканей пародонта.

Наряду с общепринятыми методами обследования больных с заболе-шниями пародонта (юенгенологический,функциональные пробы,индексы зоспаления и гигиены) в последнее время изучении десневой жидкости iосвящены рад работ отечественных и зарубежных исследователей [Л.В.Плешков а,1982; Cicaaoni. G.J983; Bickel к., 1985; Е.В Боровс-сий,1986; Curtis 11.« 1939). Применяются методы количественного опре-^ления десневой жидкости (Э.С.Халитова,I4BI) при воспалительных эа-5олеваниях пародонта. Т.И.Лемецкая (1983) исследовала ферментный сое-гав десневой жидкости.Специфические и неспецифические факторы имму-татета десневой жидкости определяли по уровню лизоцима.пропг лдина, тероксидазы и иммуноглобулине в (р.Д.Бапабаи,1ЭД1;Л.В.Плешкова,1ОД2; эабяян Г.С.,1483; Friedman Poison eb WIQ85).

Известно,что основным белком соединительной ткани пародонта является коллаген,поэтому с целью выявления катаболизма этого белка три заболеваниях пародонта важно изучение каллагенолитической активности а тканях пародонта.Несмотря на то,что имеются отдельные ^следования по определению коллагенолитической активности,вопросы, ¡вязанные с регуляцией этой активности не выяснены.Работ по изуче-таю уровня коллагенолитической активности в отечественной литера-

туре ш не нашли.

Целью настоящего исследования явилось выяснение тонких механизмов патогенеза пародонтита и на этой основе совесмоенствование методов дифференциальной диагностики и лечения. Задачи исследования:

- изучить взаимосвязь между степень» воспаления в тканях пародон-та и коллагенолитической акгивностьо в смешанной слюне,ткани десны

и десневой жидкости у больных катаральным гингивитом и пасодонтитом легкой,средней и тяжелой форм;

т исследовать действие ингибиторов протеслитической активности ЭДТА, ФЫСФ и ПХЫЕ на коллагенолитическую активность в десневой жидкости у больных на разных стадиях заболевания;

- определить количество латентной фошы кодлагеназы у болышх в воспалением тканей пародопта;

- изучить следующие биохимические показатели в смешанной слюне

и плазме крови:фибронектйн,фибриноген,растворимый фибоин.фактор XII] фибринолитическую активность,активность активатора плвзминогена и плазыина.тромбопластическую активность у болышх гингивитом и паро-донтитом на разных стадиях заболевания;

- выявить корреляционную зависимость между изучаемыми показателями и клиническими данными у исоледуеиых больных;

- разработать метод вффишшй хроматогрвфии для получения тканевых колдагеназ и фибсонектина.

Научная новизна.

Впервые в отечественной стоматологии проведено количественное определение колдагенояитичесхой активности в смвванной с^юче,ткани десны м десневой жидкости у больных с воспалении« тканей пародонта, а также содержание фибронектина в смешанной слсне.

В результате исследований получены новые данные о путях рагу ля-

ции холлагенолитической активности,лежащие в основе деструкции соединительной ткани пародонта ,что представляет определенный теоретически Я интерес.

Полученные данныз по действию ингибиторов гтротеолитической активности ЭДТА.ФМСФ и ПХМБ на коллагенолитичесиуп активность десневой жидкости и содержимого пародонтального катана могут служить обоснованием использования ингибиторов пазличных типов протеолитичзских ферментов при лечении воспалительных заболеваний печодоята.

Значительный научный интерес представляет разработка метода аффик-ной хроматографии для получения тканевых коллагенэз и фибронектина (работа защищена авторским свидетельством).

9

Практическая ценность.

На основании проведенных исследований выделена группа риска среди больных катаральным гингивитом.Количественное определение коллагенолитической активности в десневой жидкости может бить использовано для прогнозирования (выделения групп риска) развития воспалительного процесса у лиц с гингивитом,когда его клинико-рентгеноло-гические признаки не определяются.Количественное определение фибронектина можно использовать в диагностическом и прогностическом плане у больных гингивитом и пародонтитом.

Важное практическое значение имеет вывод о необходимости использования в качестве лечебных средств при развитии воспалительного процесса ингибиторов различных типов протеолитических ферментов.

На основе разработанного метода аффинной хроиатографии для получения тканевых коллагенэз и фибронектина налажено крупномасштабное получение фибронектина из плазмы крови.

Апробация работы. Основные положения и материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзном симпозиуме по медицинской »нэи-мологии (Махачкала,1986); на У Всесоюзной конференции "Методы полу-

чения и анализа биохимических препаратов" (Юрмала,1987), итоговых сессиях ЦНИИС (1989,1991), на конференции ЦНИИС (1989).

Апробация диссертационной работы проведена 24 июня 1991 г. на совместном заседании отдела терапевтической стоматологии.лабораторий '.биохимии, патологической анатомии,иммунологии и микробиологии, методов и средств профилактики Центрального научно-исследовательского института ВНПО "Стоматология" МЗ РСФСР,лаборатории биохимии и химической патологии бгдков Института биологической и медицинской химии РАМН.

Публикации. По теме диссертации onyf лковано 4 научные статьи, получено авторское свидетельство на изобретение.

Диссертационная работа выполнялась в соответствии с планом научно-исследовательских работ Ц"ИИС ВНПО "Стоматология" МЗ РСФСР, . № государственной регистрации темы - 01900006400.

Основные положения,выносимые на защиту.

1, Определение коллагенолитической активности десневой жидкости при t' спалительных заболеваниях пародонта может быть использовано для выявления групп риска.

2. Установление определенной зависимости мевду уровнем фибро-нектина в смененной слюне и степенью воспаления в тканях пародонта.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на III страницах машинописного текста и состоит из введения,четырех глав.обсуждения полученных результатов, выводов,практических рекомендаций и списка литературы.

Работа иллюстрировала 4 рисунками и 1.0 таблицами.

. Библиографический указатель включает 215 литературных источника, из них 5? отечественных и ISO иностранных.

Собственные исследования.

Проведено обследование 1^3 больных гингивитом и пародонтитом

в возрасте от 18 до ¡55 лат.Контрольную группу составили 52 практически здоровых людей в возрасте от Т? до 20 лет.

С целью оцеикм с-чаяния тканей паоодонта применяли клинические и биохимические методы обследования.В работе использовали классификацию,утвержденную на Х1У пленуме Всесоюзного общества стоматологов в ноябре 1983 г.

В соответствии с клинико-ренгенологическими признаками диагноз гингивита ставился при наличии воспалительных изменений в тканях песнн.и отсутствии патологического процесса в костной ткани.В зависимости от выраженности патологического процесса ь тканях паро-донта диагностировали одну из стадий пародонтита - легкую,среднюю или тяжелую,а также характер расгтоостранения процесса.

Гигиетгческое состояние полости рта оценивали с помощью гигиенического индекса Грина-Яермийона.При наличии пародонтита глубину зубодееневого кармана определяли с помощью специального градуированного пародонтологического зонда.Клиническое состояние тканей пародонта оценивали с помощью пародонталъного индекса - Рамфьерда, оенгенологического обследования (оргаПЕНтомография),а также функциональны?: методов исследования:пеопародонтография,остеометрия.

Из биохимических методов исследования применяли следующие:

I) Определение коллагенолитической активности (получение натив-ного коллагена,меЧение коллагена С —укеусным ангидридом,определение коллагена по океигтролину) по Kur;>hy G. 1983;

Z) определение, фйбринолитической активности,активности активе-'-тора плазминогена и плазмина в крови.проводили по методу Азtrun т. (1970).а в смешанной слюне по тому же методу в модификации O.K.Сахарова CI98I);

3) определенив-рэстзоршого фибрина в плазме крови проводили . по MeTojjystiion/i-^xa •/.( 1972),впервые по этому методу нами апроби--рована опредэятгое растЕорим'ого фибрина в сметанкой елтэ;

4) определение фибриногена проводили сульфидным методом по Baorpllng Ы. et al (1976);

5) определение фактора XHIa в плазме крови проводили по методу Балуда (1972),а в смешенной слюне по ыетоду Ю.К.Сахарова;

6) определение содержания белка по Lowrs et al (1951);

7) содержание фибронектина в плазме крови и смешанной слюне определяли иммуноферментным методом с помощью диагностикума,разработанного в ВКНЦ АМН РСФСР на микрофотометре "Мультискан", ОТА.

Забор смешанной сл»ны проводили как описано в руководстве В.К.Леонтьева и Ю.А.Петровича (1976).Для забора десневой жидкости был использован метод Brill и Сгаввв (1958).Из биоптпта десны, полученного во время кюретажа,готовили гомогенат в 0,Ой М растворе трис HCl буфера pH 7,5, содержащем 0,005 М CaCIg.

Полученный цифровой материал был обработан методом вариационной статистики по Стьюдэнту.Величины считались достоверными при р ^ 0,|

Результаты исследований и их обсуждение

Результаты наших исследований по изучению коллагенолитической активности показали,что она увеличивается в смешанной слюне,ткани десны и десневой жидкости у больных по мере усиления воспаления ( рис.1 ).У больных гингивитом.пародонтитом на начальной и средне-тяжелой стадиях коллагенолитичаская активность увеличивается в 2,0, 3,5 и 5,3 раза соответственно,в то время как количество белка изменяется незначительно.

Е десневой жидкости в норме коллвгенолитическая активность не оп ределйяась.У больных пародонтитом в начальной стадии коллагенолити-ческая активность возрастает незначительно по сравнению с группой гингивита от 43,7^7,в до Й0,5±6,4 мкг коллагена/ыг белка.тогда как у больных средне-тяжелой формы активность возрастает в 2 раза и равна 11)0,5^21,5 мкг" коллагена/ыг белка,при атом происходит сущест-

венное увеличение белка в десневой жидкости и содержимом паролонталь» ного кармана.

Наши исследования показали,что десневая жидкость и содержимое пародонтального кармана при гингивите и пародонтите имеют более высокую яоллагенолитиЧесную активность,чем смешанная слюна и ткань десны.Это говорит о той,что десневая жидкость более ярко отражает те изменения,которые происходят в тканях пародонта.Следует отметить, что коляагенолитическан активность в десневой жидкг-сти появляется при гингивите,то есть тогда,когда зубодескевая связка не нарупена и нет пародонтального кармана.Следовательно,коллагэнолитическая активность в десневой жидкости появляется до проявления клинических изменений.

Данные по определению коллагенолитаческой активности в ткани дескы показало,что у больных пародонтитом на начальной и средне-тяжелой стадиях существенно выше: в 3,1 и 8,8 раза,соответственно, по сравнению с контрольной группой.

Для выяснения вопросов,связанных с регуляцией кзллагенолитичес-кой активности,мы использовали десневуя жидкость больных гингивитом и содержимое пародонтального кармана больных пародонтитом.При этих исследованиях мы установили,что при разбавлении десневой жидкости коллагснолитическоя активность у разных групп больных увеличивается,но по паяному.Сам факт увеличения активности при разбавлении десневой жидкости можно объяснить уменьшением онцогенных ингибиторов (изменением молярных соотношений фермента и ингибитора).

Из таблицы.I видно,что при разбаЕЛении десневой жидкости в 2 ра~ йа у больных гингивитом группы А коллвгенолитическая активность возрастает в 1,5 разя, а у группы В - она почти не меняется. По видимому,у больных группы Л концентрация эндогенных ингибиторов ниже,чем у больных группы Вив таком случае больные группы А скорее могут попасть в группу риска и у них гингивит скорее

100

В!

«5 *

а

X

£ а

3

о

ii

X

« а . св д о ч

ЦОК ООО

ге ко

А

и1

,, ГЖТоТГ) к I п

смешанная слюна

тгг

г

ь

12

1

аз

I

десневая жидкость и содержимое паро-донтального кармана

к-йтдат-

ткань десны

рис. I. Коллагенолитичеекая активность в смешанной слюне.десневой жидкости,содержимом пародонтального кармана и ткани десны у больных с воспалением псаней пародонта

К - контрольная группа, Г - гингивит, П(л),П(с),П(т) пародонтит легкой, средней и тяжелой формы

Влияние разбавления ¿10 десиевой жидкости и содержимого пародонтального

аашане не их коллагенолитическу» активность

без разбавления разбавление в 2 раза разбавление в 4 раза

Диагноз бедок (тег) КА мк волдакаа.. мг Йелга белоя (мяг) КА мкг коллагена мг белка белок (мкг) КА мкг коллагена мг белка

20,011,9 Гингивит п=»16 го.в 22,812,3 п=»7 43,1*5,1 42,617,А 10,0*0,8 11,4*1,1 65,5*7,8 ¿7,1*8,8- 6,0*0,4 5,710,9 «5,3*9,1 51,0*6,9

Паоодонтит (легкая форма) п=5 Зб,0±б,4 р < 0,05 47,919,9 '•18,0*3,2 82,4*14,9 8,811,6 110,7*27,2

ГТародонтит (сведняя форма) п=12 63,519,6 о < 0,01 ' 63,1*7,4 о ^ 0,05 31,8*5,4 59,3*9,1 15,912,7 117,0*12,3

Пародонтит (тяжелая форма) п=>4 66,218,4 р < 0,01 154,4*42,8' р ^-0,02 33,1*4,2. 159,6*46,8 16,612,2 196,0*47,0

Примечание: и вычислено относительно группы гингивита

- ю -

. перейдет в пародонтит.

В случае легкой формы пародонтита при разбавлении содержимого пародонтального кармана в 2 раза наблюдаем увеличение коллагено-лкгической активности в 1,0 раза,а при дальнейшем разбавлении в 2,3 раза по сравнению к исхоцной.

У больных пародонтитом средней формы картина близка к легкой форме при сравнимых концентрациях белка в пробе и по удельной кол лагенолитической активности,а также по увеличению активности при разбавлении.

При тяжелой форме пародонтита выяв* ются:во-первых,резкое увеличение коллагемолитической активности по сравнению со средней формой (от Ь9,3£9,1 до 159,(>¿46,8 ынг кол-на/мг белка); во-вторых при соответствующих концентрациях белка (по сравнению с легкой и средней формами) разбавление содержимого пародонтального кармана приводит к увеличению активности лишь на 20%.Это говорит о том, что увеличение коллагенолитической активности у больных пародон-тйты тяжелой формы происходит,по видимому, из-за истощения ингибиторов.

При действии трипсина на коллагенолитическую активность десневой жидкости и содержимого пародонтального кармана у больных гингивитом и папоцонтитом легкой и средней форм происходит увеличение коллагенолитической активности по сравнении к исходной на 54,2Ж, 47,1/6, 26,0$ соответственно,что можно объяснить активацие{ трипсином латентной формы Еоялагенааы (рис.2). Причем,намечается тенденция к уменьшению-лоличаетвв латентной формы коллагенааы по мере усилеккч воспаления,а при тяжелой форме она не обнаруживается. Таким образом,по мере усиления воспаления происходит переход •гагйнтмой формы коллагенааы в активную и за счет этого происходи1 увеличение коллагенолитической активности,что приводят к усилен«]

- IT -

зструктивных процессов ткани паводокта.

R группе больных гингивитом у 44% больных обработка трипсином »сневой жидкости не приводила к увеличению коллагенолитической ктивности,то есть, у этих больных латентная форма коллагеназы не бнаруживалась,поэтому вероятность попадания этих больных в группу иска (для перехода гингивита в птоодонтит) чрезвычайно мала.

Исследования по действию ингибиторов протеолитической активнсс-и ЭЛТД,ПХМБ и ФМСФ на коллагенолитическую активность в десневой ядкос'И и содержимом пародонтального кармана при воспалительных роцессах в тканях пародснтв показали ,что присутствуют все основ-не типы нейтральных протеиназ установлены некоторые отличия в на- . ope ферментов у различных групп больных (рис.3).

Мнгибирование ЭЯТА коллагенолитической активности свйдетельст-¡ует о том,что в десневой жидкости и содержимом, пяоодонталького кар-iaira содержатся кеталлозависимые коллагенолитические ферменты,к ко-•оркм в частности,относится коллагеназа,причем по мере успения юспаления ингибирование ЭЦТА коллагенолитической активности уся-1ивается,и соответственно,содержание коллагеназы увеличивается. 1ри этом,в группе гингивита ингибирование происходит на 30,3%,в при тродонтите легкой,средней и тяжелой форм на 33,3%, 49,Ь% и 83,1%, :оответственно.

Кроме этого,в присутствгч ЭЦТА наблюдается и значительное.уяе-итччние тиоловых и металлозависимых протеиназ.

Причина увеличения коллагенолитической активности под действием РДСФ и ПХМВ у большинства больных,очевидно,связана с разрушением' Ёермент-ингибиторных комплексов соответствующе протеинов (серино-вых и тиоловых).

Представленные данные свидетельствуют,что протеиназы являются важными факторами патогенеза при воспалительных процессах в гквн>; .

||

ч

о к

*

в> к

л " ь

к® £

о а ш к я о

ю £ К

51 ш ^

ОКЯ

Ю о » К1_

П

I:

П(л)

п(е)

П(т)

лз 1

рис.2. Действие трипсине на коллагенолитическую активность в цеотезой жидкости и содержимом пародоктального кармана у больных гингивитом и пародон^итсм

Г - гингивит, П(л),П(с),П)т) - пагодонтит легкой,средней

и тяжелой формы

□ - исходная, В- ингибирование, ЕЗ - активация

к

ас о а 1ХХ ьпд> «ко

О 03

к *>»

г

ООО

к «е I

мч-

§38

о & о

её8

с ч к

%

100

Э Д Т А 10 "3 Ы

i

Л

л

пы П(с) Ф М С Ф 10 -3 м

ж

П(л) ГКс) П(т)

ПС*)

в)

% '

II X М Б 10 -3 М

Л

ж!

П(л)

П(с)

П(т)

рис.3. Действия ЭДТА.Й1СФ и ПХМБ на коллагенолитическую активность в десневой жидкости и содержимся! пародонтального кармана

Г - гингивит, П(л),П(с),П(т) п.- исходная, (Ш - ингибирование

пародонтит легкой,средней и тяжелой

формы

Ш - активация

пародонта,что несомненно,связано с деструктивными процесса»..л.Это позволяет сделать вывод о том,что в терапии в качестве лечебных средств при развитии воспалительного процесса может оказаться ' целесообразным использование ингибиторов различных типов лротеоли-тических ферментов,а не только трасило.-.а и контрикала- ингибиторов сериновых протеиназ.

Нами также изучалось участие фибронектина и родственных с ним гликопротеидов при соответственном определении фибринолитической активности в плазме крови и смешанной слюне у больных катаральным гингивитом и пародонтитом разных форм (таблицы ?. и 3).

Данные наших исследований показали,что изменения уровня фибро-нектина и других гликопротеидов в плазме крови при соответственном выявлении фибринолитической активности не носят выраженного характера для организма в целом при Пародонтите и свидетельствуют о развитии адаптационной реакции на локальный патологический процесс.

Содержание фибронектина в пласме крови у больных гингивитом, пародонтитом легкой и средней форм колебалось от 295,45119,16 мкг/м? до 198,6611'?,02 мкг/мл при тяжелой форме пародонтита.что несколько . ниже контроля (214,50-9,80 мкг/мл).

Уровень фибриногена в плазме крови больных с воспалительными заболеваниями пародонта был близок к контрольной величине,нахоцясь В пределах нормы (2,014,0 г/л),Однако при легкой форме пародонтите его содержание было на нижней границе норки.

Активность фактора XI Па в плазме крови обследованных больных оказалась пониженной по сравнению с контролем (Я,9010,56 мин) до 5,5010,84 мин при легкой форме пародонтита.

При изучении общего теста состояния свертывающей способности крови,времени рекальцификации плазмы,было выяснено,что у обследованных больных с гингивитом,пародонтитом легкой и средней формами

Таблица 2

Содержание гликотоотевдов в плазме крови у больных с заболеваниями пародонта

Биохимические показатели Контроль п«42 Гингивит п=19 .легкая п=20 ПАРОДОНТИТ средняя п=27 тяжелая п=27

Фибронектин мкг/мл 214,50±9,80 295,45*19,16 0,001 207,0*22,60 273,70*29,20 198,66*17,02 .

Фибриноген г/л р 3,84*0,13 4,49*0,93 0,001 2,'63*0,50 0,05 4,75*0,42 ' ^ 0,05 4,55*0,26 • ^0,001 *

Фактор XIII а мин о • В,90±0,йб 7,70*0,57 5,50*0,84 < 0,001 РМ43Х0,92 Я,33*0,42

Время рекаль-цификации сек Р 194,30±п,60 264,0*16,4п ^0,001 270,0*25,0 < 0,001 ?.вз,«)±го,о ^0,001 19В,30±2£,0

Примечание: в вычислено относительно контрольной группы

Таблица 3

, Содержание гяикопрстеидов в смешанной слюна у больных с заболеваниями пародоята

Биохимические Контроль Гингивит ПАР0Д0НТИТ

показатели . п-42 / п-19 легкая п=20 средняя п»27 тяжелая п=27

Фибвонектин нг/мл п=19 п=8

251,38±25,20 319,70^66,87 4в7,0±Ю2,3 252,63±43,62 874,1(267,91 227,7±2Б,8

р ^ 0,001 ^0,001

Фибриноген г/л 0,30-^0,012 0,4Я-0,053 Ь,28±0,01Й 0,39±0,01Я 0,40^0,015

р. < 0,001 * 0,001 < 0,001

Фактор XIII а мин 20,70±1,13 22,90^0,617 20,70±1,62 19,30^1,46 1б,ЗЙ2,29

т> с 0,05

Время рекаль-цифияации сек т> Ю0,0±ГО,0 73,80±5,й3 с 0,05 91,30£Ц,57 51,0±4,31 ^ 0,001 101,40±3,89

Примечание; в вычислено относительно контрольной группы

Содержание фибронектина,активность фибринолиза и его основных компонентов

в плазме крови.и смешанной слюне у больных с заболеваниями пародонта

Биохимические показатели Контроль. п»42 Гингивит п»19 ' легкая • №»20 ПАР0Д0НТИТ средняя п-27 тяжелая п=Г7

плазма Фибоонектин МЕГ/МЛ . смешанная сл*$ня нг/мл 214,50*9,80 251,38*25,20 295,45*19. <0,б01 319,70*66,37 207,0*22,60 467,0*102,3 < 0,001 273,70*29,20 п=Т9 п=8 252,63*43,61 874,16*67,91 < 0,001 198,66*17,02 227,70*28,80 >0,1

Фибринолитич. плазма активность р смешанная £тна р 158,90*5,50 Г70,50*6,44 150,0*17,45 136,00*15,50 ^ 0,05 163,0*41,30 4.0,05 117,90*6,52 4 0,001 168,0*21,90 0,25 167,75*9,36 197,0*45,0 <•0,5 86,35*17,68 4 0,001

Активность плазма активатора р. плазминогена 2 смешанная мм слюна . Р 9,55*1,44 : 8,52*0,86 18,16*0,50 ^0,001 40,20*1,10 4 0,001 • 13,0*0,80 4 0,05 49,50*8,58 4 0,001 11,25*0,20 40,38*5,50 ^ 0,001 12,83*0,72 0,05 62,10*4,26 .4 0,001

плазма Активность р плазмина смешанная мм" , слюна р 5,90*1,09 1,0*0,007 9,10*1,0 0,05 4,8*0,04 4 0,001 8,0*1,50 14,7*0,58 "N0,001 5,40*0,10 „ 13,58*0,47 4 0,001 2,67*0,77 32,39*3,33 4 0,001

Примечание: т> вычислено относительно контрольной группы

^увеличена свертываемость (в ^ 0,001),при тяжелой форме пзоодонтита этот показатель не имел достоверных отличий от контроля.

Изучение гликопротеидных комплексов б смешанной слюне показало, что изменения этих показателей носили более выраженный характер,чем в плазме крови.Кроме того,они имели пгюгностическую направленность.

В смешанной слюне у больных гингивитом и пародонтитом легкой формы содержание фибронектина увеличивалось по сравнению с контролем. Однако ,у больных со средней формой пародонтита отмечалось в 67% случаев понижение содержания фибронектинз до контрольной величины, а в 33% - его повышение.При тяжелой форме пародонтита в 76% случаев содегшшие фибронектина снижалось до 227,60^28,89 нг/мл, а позышение отмечалось лишь в 24%.

Содержание фибриногена в смешанной слюне по сравнению с кон ро-лем было увеличено ппи гингивите ,паоодонтите средней и тяжелой форм (р 0,001).При легкой форме отмечено некоторое снижение фибронектина до контрольной величины (ю 0,25).

В смешанной слюне больных по мере усиления воспаления в тканях пародонта снижалась активность фактора ХШа; при тяжелой форме пародонтита фактор ХШя был снижен до 1£>,3б£2,29 мин (р^- 0,05).

Изучение фибринолитической активности в плазме крови у обследуемых больных свидетельствовало о ее понижении по мере усиления воспаления (таблица 4).при колеблющихся значениях активности активатора плазминогена в плазме крови от 18,18^,5 мм^ при гингивите до 1£,83±0,72 мм? (контрольная величина - 9,55±1,44 мм2) при тяжелой форме пародонтитп,плазмии соответственно снижался от 9,102:1,0 мм пли гингивите до 2,(контроль - 5,90±1,,09 мм2) при тяжелой форме пародонтита.Однако эти изменения не носили выраженного характера для организма в целом и свидетельствовали о развитии адаптационной реакции на локальный патологический процесс.

В смешанной слоне больных с усилением патологичгского процесса выявлено повышение фибринолитической активности до 86,35*17(б8 мин (контроль - 170,50*6,44 мин)при тяжелой форме пародонтита при значительном усилении активности активаторе ллазминогена 62,2*4,26 мм2 (контрольная группа - 8,52*0,86 мм2) и плазмина 32,39*3,33 мм2 (контрольная группа - 1,0*0,007 мм2).

Проведение многофакторного математического анализа биохимических данных у больных с воспалительными заболеваниями пародонта подтвердило информативность., использования показателей,определяемых в сметанной слюне.Это дает возможность-проводить эти биохимические исследования с диагностической и прогностической целью только в слюне,не прибегая к анализу крови.

Последняя часть нашей работы связана с разработкой метода аффин-, ной хроматографии для получения фибронектина и коллагеназ высокой степени чистоты.

Проведено выделение коллагеназы из культуральной среды фиброб-ластов кожи человека (по данным литературы интерстициальная кол-лагеназа из культуральной соеды фибробластов десны человека является подобной,если-нв-идентичной ин^еротицивльной коллагевазе. си-новиума и КОЖИ (Вл.гс1еиа1-Иаазеп 1976,.Пшгвд БЛ9Й1 01982).

Белок концентрировался осаждениемСкн^гЗО^ОДб насыщения) .На следующих стадиях ионнообменную хроматографию на катионо- и анионообмен— никах использовали в хромвтографической системе КРХО .В резуль- : тате яоллагемолитическая активность увеличивалась в 30-70 раз. На заключительной стадии очистки была применена аффинная хроматография на сефарозе с иммобилизованными ¿^-цвпь» и я^ -СВ 7-фрагментом коллагена.Выход коллагенолитической активности «а стадии аффинной хроматографии составил 40%,степень очистки 10 раз.

С использованием сорбентов с0б1 -цепьв «ля -СВ 7-пептидом коллагена разработан сПреоб крупнзмесштабного получений фиброиектинч.

ВЫВОДЫ

I. Воспалительные заболевания пародонта соптювсадаются увеличением коллагенологической активности смешанной слюны,ткани десны, десневой жидкости и содержимого пародоктального кармана.

В десневой жидкости коллагенолитическая активность в норме не проявляется,при гингивите она ргвна 43,£¿7,8 мкг коллагена/м белка.

2« Выявлено снижение количества латентной формы коллагеназл по мере нарастания клинических проявлений при воспалительных забо-• леваний пародонта.

3. Полученные сведения по действию ингибиторов протеолитической активности ЭДТАи ПХМБ на коллагенолитическую активность десневой жидкости и содержимого пародонтального кармана могут служить обоснованием использования ингибиторов различных типов протеолитических ферментов при лечении воспалительных заболевв-

■ннй пародонта.

4. Изменения содержания фибронектина .соодственнъгх с ним гликопро-! теидов и фибринолитической активности в плазме крови у больных

' с воспалением пародонта не носят выраженного характера для ор-

1 .

: ганизма в целом и свидетельствуют о развитии адаптации организма на локальный патологический процесс.

Уменьшение содержания фибронектина»растворимого фибрина, фибриногена .фактора ХШа и повышение фибринолитической активности в смешанной слюне больных с тяжелой формой пародон^йта свидетельствуют об ослаблении репаративных процессов в тканях пародонта.

5. Определение фибронэктина,сходственных с ним гликопротеидоз и фибринолитической активности можно проводить длй диагностики

и прогноза только в смешанной слюне,не прибегая к анализу крови.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение коллагенояитической активности в десневой «едкости рекомендуется использовать для прогнозирования (ввделения групп риска) развития воспалительного процесса у лиц с гингивитом,когда его ялинико-ренгенологические признаки не определяются.

2. С целью дополнительной оценки состояния тканей пародонта рекомендуется внедрение в практику учреадений,имеющих биохимическую лабораторий,исследование смешанной слюны по тестам определения количества фибронектина.

3. Для работы оекомендуется биохимический метод аффинной хро-«атографии ддя получения фибронектина и коллагеназ высокой степе-

I

ни чистоты.

ИЗОБРЕТЕНИЕ

"Способ получения биоспецифических адсорбентов для выделения фибронектина и коллагеназ" - авторское свидетельство № 1419717 от I мая 1968 г.

Список работ,опубликованных по теме диссертации

1. "Очистка коллагеназы из культуральной среды фибробластов кожи человека с испольвованием аффинной хроматографии на иммобц- ' лизованных полипептидных фрагментах коллагена" (в соавт. с Н.И.Соловьевой и др.) в кн: "Тезисы докл.на Всесоюзном симпозиуме по Мед.энэимологии", г.Махачкала,198и,2Э окт.-7 ноябр., с.182-Т83.

2. "Использование биоспецифических взаимодействий коллагене и его полипептидных фрагментов с фибронектиноц й коллагенааами в аффинной хроматографии" (в соавт.с Б.А.Юищицким и др.) вюи

" Методы получения и анализа биохимических препаратов",г.Юрмала, 1987, 26-28 окт., С. 116.

3. Прогностическое значение гликопротеидных комплексов и иммуноглобулинов в патологии пародонта ( в соавт. с М.М.Персицем и др. Медицинский реферативный журнал, 1489, Я* 1308.

4. Протеинаэы - как фактор патогенеза при воспалительных процессах в тканях пародонта (в соавт. с Б.К.Леонтьевым и др.). Журнал "Бюллетень вкспериментальной биологии я медицины", 1991, » 9, с.254-256.

5. Коялагенолитическая активность в смешанной слюне,ткани десНы и десневой жидкости при воспалении тканей пародонта (в соавт. с В.К.Леонтьевым и др.).Журнал "Стоматология", 1991, * 6, с.15-17.

6. Метод определения коллагенолитической активности в десневой жидкости при заболеваниях пародонта (в соавт. с С.А.Дедеян и пр.)» кн: "Новые методы диагностики и результаты их внедрения в стоматологическую практику", Труды ЦНИИС, 1991, с.54-57.