Аналитические подходы к изучению показателей метаболизма в ротовой жидкости

Рыскина, Елена Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Аналитические подходы к изучению показателей метаболизма в ротовой жидкости
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Аналитические подходы к изучению показателей метаболизма в ротовой жидкости"

На правах рукописи

РЫСКИНА Елена Анатольевна

□03054301

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ ПОКАЗАТЕЛЕЙ МЕТАБОЛИЗМА В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ

03.00.04-Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2007

003054301

Работа выполнена на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Самарского государственного медицинского университета и в клинико-диагностической лаборатории детской городской поликлиники № 118 ЮЗ АО г. Москвы.

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Гильмиярова Фрида Насыровна Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Козельцев Владислав Львович доктор биологических наук Сазонтова Татьяна Геннадьевна

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится « 16 » февраля 2007 года в_часов на заседании

диссертационного совета Д 212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан «_» января 2007 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

д.фарм.н., доцент

Т.П. Лагуткина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Трудности в получении крови у детей и широкое распространение трансмиссивных заболеваний обуславливают актуальность исследований, направленных на научное обоснование целесообразности внедрения новых неинвазив-ных методов диагностики в педиатрии (Sreebny L.M., 2000). В этом плане интересным объектом для изучения является ротовая жидкость.

Ротовая жидкость обращает внимание исследователей доступностью получения в практически не ограниченном количестве в физиологических условиях (Меньшиков В.В. 1994., Jurjus А. et al., 1999, Денисов A.B., 2003).

Получены данные о закономерностях функционировании слюнных желез, об изменении состава и физико-химических свойствах смешанной слюны при стоматологической (Вавилова Т.П. с соавт., 1995; Воложин А.И. с соавт., 1997, 2000, 2001; Гру-дянов А.И., 1997, 1998; Леонтьев В.К. с соавт., 1996, 1999; Соловьев A.M., 2000; Бережной В.П. с соавт., 1999, 2003; Гильмияров Э.М., 2002; Денисов А.Б., 2003) и соматической патологии (Терехина H.A. с соавт., 1995; Herzog A.G. et al., 2001). Исследованиями последних лет выявлен параллелизм изменений параметров метаболизма в крови и ротовой жидкости при ряде заболеваний (Готовцева Л.П., Коротько Г.Ф., 2002). При действии различных факторов окружающей среды, с которыми сталкивается человек в современных социально-экологических условиях (Персиц М.М. с соавт., 1999), большинство функциональных сдвигов носит выраженный адаптивно-компенсаторный характер. Сведения об изменении состава ротовой жидкости у детей представлены в единичных работах, согласно которым состав ротовой жидкости имеет некоторые особенности, обусловленные возрастными отличиями метаболизма, эндокринной регуляцией, влиянием комплекса экологических факторов (Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2004).

В настоящее время отсутствуют нормативные данные о составе ротовой жидкости в различные возрастные периоды, нет законодательно оформленных правил сбора и хранения, отсутствуют наборы реактивов для исследования в ротовой жидкости большинства аналитов, за исключением наборов фирмы IBL (Hamburg) для определения содержания стероидных гормонов.

Цель настоящего исследования заключается в обосновании аналитической надежности и диагностической информативности изучения показателей метаболизма в ротовой жидкости у детей.

Задачи исследования:

1. Отработать условия преаналитического этапа при исследовании ротовой жидкости.

2. Оценить аналитическую надежность биохимических методов, предлагаемых для определения параметров метаболизма в ротовой жидкости.

3. Определить в ротовой жидкости детей в разные возрастные периоды показатели обмена: содержание общего белка, альбумина, мочевины, креатинина, мочевой кислоты, глюкозы, холестерина, триглицеридов, билирубина, кальция, фосфора, железа, натрия, калия, хлоридов, магния, активность аспартатаминотрасферазы, алани-наминотрансферазы, а-амилазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, значение тимоловой пробы.

4. Изучить физико-химические параметры ротовой жидкости в разные возрастные периоды детства и при сахарном диабете.

5. Оценить возможность проведения глюкозотолерантного теста у детей по определению содержания глюкозы в ротовой жидкости.

6. Исследовать показатели белкового, углеводного, липидного и минерального обменов в ротовой жидкости у детей, больных инсулинозависимым сахарным диабетом с учетом уровня гликемии.

7. Провести корреляционный анализ между параметрами метаболизма в ротовой жидкости и гематологическими показателями.

Научная новизна. На большом экспериментальном и клиническом материале аргументирована диагностическая информативность оценки состояния организма по показателям ротовой жидкости, что раскрывает широкие возможности для неинва-зивной диагностики.

Новыми являются результаты оценки аналитической надежности методов биохимического анализа ротовой жидкости путем проверки сходимости, воспроизводимости, аналитической чувствительности. Определены оптимальные условия пробо-подготовки образцов ротовой жидкости для биохимических и физико-химических исследований.

Впервые получены данные, характеризующие состав и свойства ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные возрастные периоды с определением широкого спектра метаболических показателей углеводного, белкового, липидного и минерального обменов и физико-химических параметров: скорости саливации и водородного показателя.

Впервые при проведении глюкозотолерантного теста у здоровых детей получены данные об однотипной динамике изменения содержания глюкозы в ротовой жидкости и крови.

В ротовой жидкости детей, больных инсулинозависимым сахарным диабетом, обнаружено повышение уровня глюкозы в ротовой жидкости. В фазу декомпенсации отмечено уменьшение содержания холестерина, железа, повышение содержания кальция и активности а-амилазы.

Блок данных о составе, физико-химических свойствах, метаболических характеристиках ротовой жидкости у детей может служить научной базой для широкого использования саливодиагностики в педиатрии.

Научно-практическая значимость работы. Результаты, полученные при проведении исследований, имеют теоретическое и практическое значение.

Определены оптимальные условия сбора, центрифугирования и хранения проб ротовой жидкости у детей, что способствует повышению качества исследований. Хорошая воспроизводимость, чувствительность методов биохимического анализа свидетельствует об их аналитической надежности.

Полученные результаты исследования ротовой жидкости здоровых детей трех возрастных групп могут служить основой для выработки референтных пределов для биохимических показателей в разные периоды детства.

Показана информативность оценки теста толерантности к глюкозе по анализу ее содержания в ротовой жидкости, поскольку динамика концентрации этого метаболита в крови и ротовой жидкости однотипна. Это расширяет возможности ранней неин-вазивной диагностики скрытого сахарного диабета у детей при скрининговых исследованиях.

Перспективно проводить мониторинг эффективности лечения и адекватности подбора дозы инсулина при инсулинозависимом сахарном диабете у детей по изучению показателей ротовой жидкости. Дополнены критерии степени тяжести инсули-нозависимого сахарного диабета по скорости саливации, содержанию в ротовой жидкости глюкозы, альбумина, билирубина, активности аминотрансфераз, характеризующих функциональное состояние печени.

Положения, выносимые на защиту:

1. Обоснование аналитической надежности, выбор оптимального режима пробо-подготовки образцов ротовой жидкости при определении показателей углеводного, белкового, липидного и минерального обменов.

2. Динамика показателей ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные периоды детского возраста. В 3-5 лет отмечается наиболее высокое содержание глюкозы, холестерина, триглицеридов, кальция, магния, железа, билирубина, значения тимоловой пробы. В 5-7 лет наблюдаются наиболее высокое содержание альбумина, активность аспартатаминотрансферазы, скорость саливации. В 9-12 лет отмечены максимальные значения содержания мочевины, мочевой кислоты, креатинина, хлоридов, активности а-амилазы, лактатдегидрогеназы. В разные возрастные периоды детства содержание общего белка, натрия, калия, фосфора, значение рН колеблется в одинаковых пределах.

сулинозависимом сахарном диабете у детей по определению уровня глюкозы в ротовой жидкости. Возможность оценки тяжести заболевания по содержанию в ротовой жидкости глюкозы, альбумина, билирубина, активности аспартатаминотрансферазы, значению тимоловой пробы.

Внедрение результатов в практику. Результаты исследований используются в работе клинико-диагностической лаборатории Клиник Самарского государственного медицинского университета, клинико-диагностической лаборатории 118 детской городской поликлиники Юго-Западного административного округа г. Москвы, Клинической больницы Управления делами Президента РФ г. Москвы, в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на Межрегиональной научно-практической конференции «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005), Всероссийской конференции «Современные проблемы охраны труда и здоровья работающих женщин» (Самара, 2005), VI Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, РУДН, 2005), X Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век» (Бангкок - Паттайя, 2006), VIII Российском съезде травматологов-ортопедов «Травматология и ортопедия XXI века» (Самара, 2006), VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, РУДН, 2006), совместном заседании Самарского отделения Всероссийского биохимического общества, Ассоциации медицинской лабораторной диагностики, кафедр общей, бионеорганической и биоорганической химии и фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2006).

Публикации. Всего опубликовано 11 работ, все по теме диссертации, в том числе одна монография.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материала и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация изложена на 171 странице, иллюстрирована 21 рисунком, содержит 32 таблицы. В работе использовано 233 источника, из них 106 отечественных и 127 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для реализации цели настоящей работы были поэтапно выполнены следующие исследования:

На большом экспериментальном материале (11 000 исследований) определены оптимальные условия, обеспечивающие должное качество исследований ротовой жидкости на преаналитическом этапе. Отработаны сроки хранения, условия центрифугирования, температурный режим. По оценке сходимости, воспроизводимости и аналитической чувствительности измерений определены аналитически надежные методы исследования показателей метаболизма ротовой жидкости.

На следующем этапе работы оценивали показатели белкового, углеводного, ли-пидного и минерального обменов в ротовой жидкости детей в разные возрастные периоды, а также проводили корреляционный анализ между параметрами метаболизма в ротовой жидкости и гематологическими показателями.

Выполнен глюкозотолерантный тест у здоровых детей, интерпретация его проведена по динамике содержания глюкозы в крови и ротовой жидкости.

Следующий блок исследований посвящен изучению особенностей метаболических нарушений у детей при заболевании инсулинозависимым сахарным диабетом различной степени тяжести, компенсированной и декомпенсированной формах, по показателям в ротовой жидкости с учетом уровня гликемии.

Проведено клинико-лабораторное обследование 172 детей на базе 118 детской городской поликлиники Юго-Западного административного округа г. Москвы. Из них было 120 клинически здоровых детей разного возраста и пола, отобранных по итогам дис-

пансеризации. Детей осматривали педиатр, хирург, стоматолог, окулист и ортопед. Обследовано 40 детей с инсулинозависимым сахарным диабетом. У 12 здоровых детей по направлению детского эндокринолога был проведен тест толерантности к глюкозе.

Здоровые дети были распределены по возрастам: I группа - возраст от 3 до 5 лет, II группа - от 5 до 7 лет, III группа - от 9 до 12 лет. Критериями отбора детей в группы были: отсутствие хронической патологии со стороны внутренних органов; гематологические показатели в пределах общепринятых норм; стоматологический статус без патологии. Группы по полу были сопоставимы.

В IV группу вошли дети, больные инсулинозависимым сахарным диабетом, в количестве 40 человек в возрасте от 9 до 12 лет, состоящие на диспансерном учете у эндокринолога. Из них у 25 течение заболевания было стабильным: уровень гликемии был до 9 ммоль/л, уровень гликозилированного гемоглобина был в норме. У другой части больных уровень глюкозы в крови был выше 9 ммоль/л в течение суток. Уровень гликозилированного гемоглобина был больше 8%.

Ротовую жидкость у детей собирали в утренние часы - в 10-11 часов - время максимальной секреции ротовой жидкости путем сплевывания в центрифужные пробирки без стимуляции в течение 10 минут. За 15 минут перед взятием ротовой жидкости прополаскивали рот питьевой водой. Сразу после получения ротовую жидкость центрифугировали при 3000 об/мин. 10 мин. и разливали по стеклянным пробиркам. Пробирки закрывали пробкой и замораживали при -20°С в холодильной камере. Перед исследованием пробы оттаивали в течение 10 часов при +3"С, затем температуру проб доводили до комнатной.

Определяли содержание метаболитов и активность ферментов в ротовой жидкости на биохимическом анализаторе Screen Master Plus фирмы Hospitex Diagnostics (Швейцария): концентрацию общего белка, альбумина, мочевины, креатинина, мочевой кислоты, билирубина, глюкозы, холестерина, триглицеридов, активность ала-нинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, а-амила-зы, значение тимоловой пробы. Для оценки минерального обмена проводилось определение активности щелочной фосфатазы, концентрации кальция, фосфора, калия, натрия, железа, магния и хлоридов.

Показатели метаболизма в ротовой жидкости определяли, используя готовые наборы и стандарты фирмы «Human» (Германия). В качестве контрольного материала использовали контрольный материал фирмы «Human» - «Humatrol». Определение pH ротовой жидкости проводили на рН-метре «Piccolo-2».

Внутрилабораторный контроль качества проведен согласно приказу № 45 МЗ РФ от 07.02.2000 г. В наших исследованиях оценивали сходимость, воспроизводимость и чувствительность измерений предлагаемых методов для определения содержания метаболитов и активность ферментов ротовой жидкости. Основной метод, который использовали для внутрилабораторного контроля качества - метод построения контрольных карт Леви - Дженнигса.

Общий анализ крови выполнялся на гематологическом анализаторе «Хайсел», модель Датаселл-16 (Франция). Гематологический анализатор Датаселл-16 предназначен для количественного подсчета лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT), а также для определения: гемоглобина (HGB), гематокрита (HCT), среднего объема эритроцита (MCV), среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН), средней концентрации гемоглобина в эритроците (МСНС), среднего объема тромбоцитов (MPV), анизоцитоза эритроцитов (RDW). Кроме перечисленных параметров, анализатор Датаселл-16 распечатывает гистограммы кривых распределения по объему: PLT, WBC и RBC. Использовали контрольные образцы цельной крови и реагенты фирмы «Hycel».

Обработку результатов исследований проводили с помощью специализированной статистической программы Statistica 6.0. Рассчитывали среднюю арифметическую (М), стандартную ошибку от средней арифметической (т), медиану (Me) и интервал значений - 95%. Различие между зависимыми группами определяли, используя критерий Вилкоксона, и представляли в виде диаграмм размаха. Для сравнения показателей группы здоровых детей и группы детей, больных сахарным диабетом, использовали U-критерий Манна -Уитни (непараметрическая альтернатива t-критерию

Стьюдента). Выявление взаимодействий между показателями проводили с помощью корреляционного анализа. При отличном от нормального распределения хотя бы одного параметра использовали статистику И Спирмана (Боровиков В.П., 2003).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При выборе оптимальных условий пробоподготовки ротовой жидкости было проведено исследование концентрации глюкозы в образцах ротовой жидкости, которую центрифугировали в шести разных условиях: с длительностью центрифугирования 10 мин., 20 мин., 30 мин. и скоростью центрифугирования 3000 об/мин. и 5000 об/мин. Определено, что оптимальными условиями центрифугирования, при которых содержание глюкозы не отличается от исходной, являются длительность центрифугирования - 10 мин. при 3000 об/мин.

Для определения времени возможного хранения ротовой жидкости после получения материала содержание глюкозы определяли в образцах, которые хранили в холодильнике при температуре + 3°С в течение 3 часов, 6 часов и 24 часов. Определено, что концентрация глюкозы в ротовой жидкости стабильна в течение 3 часов хранения в холодильнике при +3°С и снижается после 6 часов хранения - на 6,5%, после 24 часов хранения - на 13%.

При отработке оптимального температурного режима хранения образцов ротовой жидкости исследовали концентрацию глюкозы в образцах ротовой жидкости, которые хранили в течение 24 часов при температуре морозильной камеры +3°С, - 10°С и -20°С. Хранение пробы ротовой жидкости в течение суток при +3°С приводит к снижению концентрацию глюкозы на 12,2%. Хранение пробы ротовой жидкости в течение суток при -10°С и -20°С не влияет на содержание глюкозы в образце ротовой жидкости.

Аналитическую надежность ряда биохимических методов, предлагаемых для исследования ротовой жидкости, оценивали по критериям сходимости, воспроизводимости, используя ротовую жидкость здоровых пациентов. При оценке сходимости результатов определения концентрации общего белка биуретовым методом рассчитанные коэффициенты вариации (¿V) по результатам 20 измерений в двух сериях составили соответственно 1,33 и 1,45, тогда как СУ табличный для общего белка в сыворотке крови равен 3 (Приказ МЗ № 45). Это свидетельствует о хорошей сходимости результатов и возможности определения содержания общего белка биуретовым методом в ротовой жидкости.

Оценку воспроизводимости проводили по результатам определения содержания мочевины уреазным методом в ротовой жидкости в 20 аналитических сериях в течение 3 недель. Рассчитанный коэффициент вариации для мочевины ротовой жидкости составил 2,44. Табличное значение СУ для мочевины сыворотки крови равно 10 (Приказ МЗ № 45). Хорошая воспроизводимость результатов исследований содержания мочевины в ротовой жидкости, выполненных уреазным методом, позволяет использовать его для определения концентрации мочевины в ротовой жидкости.

В серии исследований образцов ротовой жидкости здоровых детей рассчитали коэффициенты вариации при определении активности аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, содержания общего белка, глюкозы, холестерина, мочевины, креатинина, триглицеридов, хлоридов, кальция и железа унифицированными для крови методами, которые были меньше предельно допустимых значений коэффициентов вариации для сыворотки крови (Приказ № 45 МЗ РФ). Это свидетельствует о хорошей воспроизводимости и аналитической надежности предлагаемых методов исследования ротовой жид каст к.

Для проверки аналитической чувствительности глюкозооксидазного метода определения глюкозы в ротовой жидкости, используя метод добавок, определили нижний предел чувствительности метода, который составил 0,03 ммоль/л.

Убедившись в аналитической надежности биохимических методов исследования ротовой жидкости, мы исследовали в ротовой жидкости здоровых детей в разные возрастные периоды (3-5 лет, 5-7 лет, 9-12 лет) показатели белкового, углеводного, липидного и минерального обменов, а также скорость саливации и водородный показатель (Табл. 1).

Таблица 1

Показатели белкового, углеводного, липидного и минерального обмепов в ротовой жидкости детей в разные возрастные периоды

№ и/и Показатель Возраст Ме М ± м 95%

1. Общий белок, г/л 3-5 лет 2,75 2,78 ± 0,67 2,46-3,10

5-7 лет 3,0 3,2 ± 1,0 2,7-3,6

9-12 лет 2,5 2,61 ± 0,94 2,0-3,2

2. Альбумин, г/л 3-5 лет 1,0 1,25 ±0,52 1-1,5

5-7 лет 1,2 1,23 ±0,48 1,4-1,16

9-12 лет 0,8 0,76 ± 0,26 0,58-0,94

3. Холестерин, ммоль/л 3-5 лет 0,79 0,73 ± 0,2 0,63-0,83

5-7 лет 0,55 0,57 ±0,19 0,49-0,66

9-12 лет 0,51 0,63 ± 0,34 0,39-0,86

4. Триглицериды, ммоль/л 3-5 лет 0,36 0,42 ± 0,2 0,32-0,51

5-7 лет 0,25 0,38 ± 0,28 0,25-0,52

9-12 лет 0,16 0,16+0,04 0,13-0,19

5. Глюкоза, ммоль/л 3-5 лет 0,40 0,46 ±0,19 0,37-0,55

5-7 лет 0,36 0,36 ±0,11 0,31-0,42

9-12 лет 0,20 0,20 ± 0,08 0,14-0,25

6. Билирубин, мкмоль/л 3-5 лет 5,15 5,32± 1,4 4,65-5,99

5-7 лет 4,0 4,6 ± 1,6 3,9-5,4

9-12 лет 4,1 3,88 ± 1,9 2,5-5,1

7. Мочевина, ммоль/л 3-5 лет 4,45 4,45 ± 0,92 4,0-4,88

5-7 лет 4,8 4,7 ± 0,76 4,3-5,0

9-12 лет 5,4 5,5 ± 1,44 4,6-6,5

8. Креатинин, мг/дл 3-5 лет 0,36 0,36 ± 0,06 0,33-0,39

5-7 лет 0,31 0,34 ±0,10 0,29-0,39

9-12 лет 0,30 0,36 ± 0,06 0,32-0,41

9. Мочевая кислота, мг/дл 3-5 лет 1,75 1,81 ±0,56 1,54-2,08

5-7 лет 1,9 2,0 ± 0,58 1,7-2,3

9-12 лет 2,1 2,27 ± 0,74 1,8-2,8

10. Тимоловая проба, ед. 3-5 лет 0,95 0,95 ± 0,52 0,70-1,20

5-7 лет 0,7 0,71 ±0,31 0,56-0,85

9-12 лет 0,40 0,42 ± 0,26 0,25-0,60

№ п/п Показатель Возраст Ме М±м 95%

11. АСАТ, Е/л 3-5 лет 18,7 20,7 ± 7 17,4-24,0

5-7 лет 22 25 ±11 20-30

9-12 лет 17,0 19,6 ± 9,5 13-26

12. АЛАТ, Е/л 3-5 лет 16,5 16,6 ±5,1 14,2-19,0

5-7 лет 18 20 ±8 17-24,5

9-12 лет 17,0 18,7 ± 8,8 12-24

13. Щелочная фосфатаза, Е/л 3-5 лет 35 33 ±5,9 30,2-35,7

5-7 лет 28 27,7 ± 4,5 25,7-29,7

9-12 лет 30,0 30,3 ±5,1 26,8-33,7

14. ЛДГ, Е/л 3-5 лет 213 216 ±45 195-237

5-7 лет 226 233 ± 66 203-263

9-12 лет 305 337 ±127 251-422

15. а-Амилаза, Е/л 3-5 лет 561 584 ± 286 449-718

5-7 лет 561 592 ± 224 490-694

9-12 лет 1040 1043 ±571 659-1427

16. Кальций, ммоль/л 3-5 лет 0,80 0,79 ± 0,21 0,69-0,89

5-7 лет 0,59 0,67 ± 0,22 0,57-0,78

9-12 лет 0,67 0,6 ± 0,28 0,40-0,80

17. Магний, ммоль/л 3-5 лет 0,85 0,87 ± 0,20 0,77-0,96

5-7 лет 0,80 0,77 ± 0,22 0,67-0,87

9-12 лет 0,5 0,54 ±0,17 0,42-0,66

18. Железо, мкмоль/л 3-5 лет 6,95 6,56 ± 0,04 5,6-7,5

5-7 лет 5,2 5,5 ± 0,36 4,8-6,3

9-12 лет 4,0 4,2 ± 0,2 3,77-4,7

19. Калий, ммоль/л 3-5 лет 15,7 16 ± 0,4 15,2-16,8

5-7 лет 15,9 15,4 ± 0,4 14,6-16,2

9-12 лет 18,5 18,9 ±0,9 17-21

20. Фосфор, ммоль/л 3-5 лет 11,8 12,4 ±0,51 11,34-13,5

5-7 лет 13,2 12,9 ± 0,48 11,9-13,9

9-12 лет 11,3 11,1 ±0,4 10,1-12,1

21. Натрий, ммоль/л 3-5 лет 27,7 29,0 ± 7,6 27,4-30,6

5-7 лет 28,3 27,9 ±4,7 26,9-28,8

9-12 лет 26,0 26,1 ±5,2 25,0-27,2

22. Хлориды, ммоль/л 3-5 лет 75,5 77,2 ± 1,8 73,5-80

5-7 лет 83 80,6 ± 1,9 76-84

9-12 лет 90 89,9 ± 2,0 85-94

Как известно, каждому возрастному периоду соответствует определенное соотношение пластических и энергетических процессов, отличающихся лабильностью, обусловленной морфологической незрелостью, функциональной неполноценностью регуляторных механизмов, недостаточной активностью целого ряда ферментных систем.

По нашим данным, в ротовой жидкости общая активность лактатдегидрогеназы в период 3-5 и 5-7 лет была почти равной, некоторое увеличение ее в 1,4 раза отмечено в группе детей 9-12 лет. По данным литературы, у новорожденного в крови преобладает ЛДГ5, что отражает высокую активность процессов анаэробного метаболизма, то с возрастом увеличивается доля ЛДГ2, что свидетельствует об активации аэробных путей метаболизма (Твердохлиб В.П., 1997).

Полученные результаты исследований ротовой жидкости у детей свидетельствуют о возрастании ферментативной активности гидролитического фермента а-амилазы по мере взросления, она была наибольшей в группе детей 9-12 лет: выше в 1,75 раза у мальчиков и в 3,2 раза у девочек по сравнению с показателями детей 3-5 лет. Это свидетельствует о том, что в раннем детском возрасте активность ферментов, обеспечивающих пищеварение, невысока, она прогрессивно увеличивается к подростковому возрасту. Эта тенденция прослеживается и в отношении внутриклеточных ферментов. Так, активность аланинаминотрансферазы у девочек также увеличивается к 9-12 годам. Активность щелочной фосфатазы была выше в группе детей 3-5 лет, а активность аспартатаминотрансферазы - в 5-7 лет, в период смены молочных зубов, отражая активный обмен аминокислот в этот период.

Содержание общего белка в ротовой жидкости относится к довольно стабильным, мало зависящим от пола и возраста показателям. Напротив, содержание альбумина в ротовой жидкости было более высоким в период 5-7 лет. Очевидно, это отражает становления ферментных систем гепатоцитов, где синтезируется данный белок.

С увеличением возраста детей прослежено снижение значения тимоловой пробы. Обратная тенденция прослежена в отношении содержания мочевины и мочевой кислоты. С увеличением возраста детей становится более высоким уровень мочевины в ротовой жидкости, что отражает усиление уреотельного типа выведения азота, при котором основная масса аммиака обезвреживается путем превращения в мочевину в печени, когда становятся функционально полноценными ферментативные системы в гепатоцитах.

Известно, что в организме ребенка после рождения усилен обмен пуриновых соединений, высока активность ферментов урикотельного пути выведения аминного азота. Биосинтез мочевой кислоты у детей проходит у детей в 200 раз быстрее, чем у взрослых (Твердохлиб В.П., 1997).

Возрастные изменения обменных процессов сочетаются с изменениями скорости саливации у детей. Наиболее высокая скорость саливации отмечена в возрасте 5-7 лет - 5,4 ± 2.4 мл за 10 мин., наименьшая - в 3-5 лет - 4,05 ± 2,6 мл за 10 мин. У детей показатель рН ротовой жидкости колеблется в пределах 7,1-7,3 в трех возрастных группах.

Гематологические данные обследуемых детей в I, П и Ш группах существенно не отличаются, входят в возрастные референтные нормы. Выявлены обширные корреляционные зависимости гематологических показателей с биохимическими показателями ротовой жидкости: положительные взаимосвязи между значением гемоглобина крови и содержанием натрия и железа в ротовой жидкости, сильные отрицательные взаимосвязи между концентрацией калия в ротовой жидкости и значением эритроцитов в сыворотке крови; содержанием калия и концентрацией глюкозы в ротовой жидкости.

Нами проведено исследование глюкозотолерантного теста по показателям крови и ротовой жидкости, при этом выявлены однонаправленные изменения содержания глюкозы в обеих биологических жидкостях. Через 1 час после приема глюкозы из расчета 1,75 г/кг массы тела содержание глюкозы в сыворотке крови повысилось на 21%, а в ротовой жидкости на 52%. Через 2 часа после нагрузки содержание глюкозы в сыворотке крови снизилось на 15% от исходной, а в ротовой жидкости на 19% от исходной концентрации глюкозы. Однонаправленное изменение содержания глюкозы в крови и ротовой жидкости позволяет рекомендовать оценивать толерантность к глюкозе по параметрам ротовой жидкости, что расширяет возможности неинвазивной диагностики латентного

сахарного диабета. Изменения в содержании глюкозы при нагрузке в сыворотке крови и ротовой жидкости представлены на рисунке 1,

140.00 120-00 100.00 $0.00 ЁО.ОО 40.00 20.00

. Кровь

. ротовая жидкость

Рис. 1. Динамика концентрации глюкозы н крови и ротовой жидкости при выполнении глю-козотолерантного теста (100% - исходный уровень)

Нами изучены параметры ротовой жидкости у детей при инсу л инозав ней м ом сахарном диабете. Было обследовано 40 детей п возрасте от 9 до 12 лет, состоявших на поликлиническом учете у эндокринолога. У детей, больных сахарным диабетом, отмечено снижение скорости саливации до 0,37 ±0,025 мл/мин по сравнению с 0,49±0,023 мл/мин в группе здоровых детей. Водородный показатель ротовой жидкости у детей, больных сахарным диабетом, был 6,85±0,06, что соответствует кислой реакции. В группе здоровых детей рН составил 7,1±0,23. Снижение водородного показателя у детей, больных сахарным диабетом, служит предпосылкой развития стоматологической патологии.

При сахарном диабете закономерно повышается уровень глюкозы в крови и ротовой жидкости. У детей, больных сахарным диабетом, по сравнению с группой здоровых детей концентрация глюкозы в сыворотке крови была выше на 163,2% (р<0,05, а в ротовой жидкости - на 255,0% (р<0,05) (рис. 2).

Диаграмма размаха по группам Прмн:

3 группа

диад.

медиана

Рис. 2. Диаграмма размаха содержания глюкозы и ротовой жидкости в норме и при сахарном диабете

У здоровых детей наиболее высокий уровень глюкозы отмечен в возрасте 3-5 лет, в последующие возрастные периоды уровень глюкозы в ротовой жидкости ниже. Содержание глюкозы в ротовой жидкости у взрослых в норме очень низкое, так как она практически полностью реабсорбируется в выводных протоках слюнных желез (Денисов А.Б., 2003).

Имеется корреляционная зависимость между концентрацией глюкозы сыворотки крови у детей, больных сахарным диабетом, и активностью а-амилазы ротовой жидкости (11=0,66; р<0,03), тогда как активность а-амилазы в ротовой жидкости больных детей несколько меньше, чем в группе здоровых детей.

В ротовой жидкости детей, больных сахарным диабетом, по сравнению с группой контроля достоверно ниже содержание холестерина (-50,8%, р<0,05), общего белка -на 17% (р<0,05). Содержание альбумина при этом имело тенденцию к снижению. У детей, больных сахарным диабетом, по сравнению с группой здоровых детей этого же возраста в ротовой жидкости было выше значение тимоловой пробы на 33,4% (р<0,05), активность аспартатаминотрансферазы - +27% (р<0,05). Активность алани-наминотрансферазы в ротовой жидкости у детей, больных сахарным диабетом существенно не отличалась. Содержание билирубина в ротовой жидкости в группе больных детей, равное 4,77 ± 0,28 мкмоль/л, было несколько выше, чем в группе контроля (3,88 ± 0,6 мкмоль/л). Изменения показателей ротовой жидкости у детей, больных сахарным диабетом, а именно снижение содержания общего белка при тенденции к снижению уровня альбумина, увеличение тимоловой пробы, тенденция к повышению уровня билирубина и повышение активности аспартатаминотрансферазы - можно оценить как проявление снижения функциональных способностей печени. Результаты исследования показали возможность мониторинга нарушений функции печени по параметрам ротовой жидкости при сахарном диабете у детей.

При сахарном диабете в ротовой жидкости у детей по сравнению с группой контроля изменены параметры минерального обмена: концентрация кальция увеличилась на 46,7% (р<0,05), фосфора - на 17% (р<0,05), магния на 66,6% (р<0,05), содержание хлоридов, напротив, было ниже на 13,4% (р<0,05). Увеличение содержания кальция и магния в ротовой жидкости связано либо с вымыванием этих минералов из костной ткани при сахарном диабете, либо с нарушением минерализации твердых тканей зубочелюстной области из-за гликилирования связывающих белков. У детей, больных сахарным диабетом, уровень натрия, калия, железа в ротовой жидкости остался неизменным.

Детей, больных инсулинозависимым сахарным диабетом в зависимости от тяжести течения заболевания разделили на две группы: с компенсированной и декомпен-сированной формами. Для компенсированного сахарного диабета характерна нор-могликемия и отсутствие глюкозы в моче, верхний уровень глюкозы в крови в течение суток при соблюдении физиологической диеты не превышал 9,0 ммоль/л. При декомпенсированной форме сахарного диабета уровень глюкозы существенно колебался в течение суток, превышал 9,0 ммоль/л, уровень гликозилированного гемоглобина был выше нормы (табл. 2).

Таблица 2

Биохимические показатели ротовой жидкости у детей с декомпенсированным и компенсированным сахарным диабетом

Показатель Декомпенсированный сахарный диабет (глюкоза крови > 9 ммоль/л) Компенсированный сахарный диабет (глюкоза крови < 9 ммоль/л) д,%

М-т 95% Ме М-т 95% Ме

Глюкоза крови (ммоль/л) 15,6±1,9 11,2-20 13,6 7,1±0,52 5,9-8,3 7,6 + 119,7*

Общий белок (г/л) 2,2±0,19 1,8-2,7 2,35 2,1 ±0,2 1,6-2,6 2,0 +4,8

Показатель Декомпенсированный сахарный диабет (глюкоза крови > 9 ммоль/л) Компенсированный сахарный диабет (глюкоза крови < 9 ммоль/л) Д, %

М-т 95% Ме М-т 95% Ме

Альбумин (г/л) 0,66+0,03 0,6-0,74 0,65 0,7±0,06 0,56-0,84 0,7 -5,7

Мочевина (ммоль/л) 4,3±0,3 3,6-5,0 4,0 5,2±0,25 4,6-5,8 5,6 -17,3

Креатинин (мг/дл) 0,4±0,03 0,33-0,46 0,39 0,35±0,02 0,31-0,40 0,34 +14,3

Мочевая кислота (ммоль/л) 2,3±0,4 1,4-3,1 2,0 2,47±0,3 1,66-3,3 2,15 -6,9

Холестерин (ммоль/л) 0,26±0,05 0,14-0,38 0,2 0,36±0,06 0,21-0,50 0,27 -27,3*

Триглицериды (ммоль/л) 0,20±0,03 0,12-0,30 0,17 0,18±0,02 0,13-0,24 0,15 +11,1

Билирубин (мкмоль/л) 5,2±0,4 4,2-6,1 4,8 4,5±0,37 3,7-5,4 4,6 +15,5

Глюкоза ротовой жидкости (ммоль/л) 0,72±0,13 0,43-1,0 0,6 0,7±0,14 0,40-1,0 0,67 +2,8

Тимоловая проба (ед.) 0,58±0,16 0,21-0,95 0,4 0,7±0,18 0,3-1,1 0,45 -17,7

АЛАТ (Е/л) 19,2±2,7 13-25 17,5 21,8±3,5 14-30 18,5 -12,0

АСАТ (Н/л) 25,2±3,0 18-32 24 24,7±4,0 15,8-33,6 21,5 +2,0

Щелочная фос-фатаза (Е/л) 34,2+2,3 29-39 33 31,3±1,9 26,9-35,6 29 +9,3

лдг (Е/л) 371±35 291-450 329 313±26,9 252-374 276 +18,5

Амилаза (Е/л) 1071±32 886-1255 1140 620±74,4 451-788 570 +72,7*

Калий (ммоль/л) 17,5±1,23 14,7-20,3 18,3 1,8±1,4 15,1-21,5 19,2 -6,7

Натрий (ммоль/л) 27,3±3,1 24,8-29,8 27,9 25,7±2,9 23-28,4 24,9 +5,4

Кальций (ммоль/л) 0,95±0,09 0,73-1,1 1,0 0,81 ±0,09 0,6-1,0 0,7 +17,3*

Магний (ммоль/л) 0,8±0,08 0,6-1,0 0,9 1,0±0,1 0,8-1,2 0,98 -20,0

Железо (мкмоль/л) 3,5 ±0,27 2,9-4,1 3,5 4,51±0,53 3,2-5,7 4,1 -22,4*

Хлориды (ммоль/л) 79,1±2,9 72-85 80,5 76,7±3,0 76,7-80 79,5 +3,1

Фосфор (ммоль/л) 13,6±1,0 11-16 14,1 12,5±0,7 10,8-14,2 12,5 +8,8

*р<0,05; 100% - показатели больных с компенсированной формой сахарного диабета.

При декомиеисированной форме сахарного диабета изменения метаболизма были более значимыми. По сравнению с больными с компенсированной формой заболевания в ротовой жидкости было выше содержание кальция (+17,3%, р<0,05), активность а-амилазы (+72,7%, р<0,05); ниже содержание холестерина (-27,3%, р<0,05), железа (-22,4%, р<0,05), мочевины (-17,7%, р<0,05). Данные показатели ротовой жидкости можно использовать как дополнительные критерии декомпенсации сахарного диабета у детей.

Коррелятивные зависимости между показателями ротовой жидкости в группе детей с компенсированным и декомпенсированным сахарным диабетом отличаются. В группе детей с компенсированным сахарным диабетом обнаружены коррелятивные взаимосвязи между содержанием глюкозы крови и концентрацией калия в ротовой жидкости (Я = 0,78; р<0,05), содержанием глюкозы в ротовой жидкости и концентрацией общего белка в ротовой жидкости (Я = 0,74; р<0,05); между содержанием глюкозы и концентрацией мочевины в ротовой жидкости (И = 0,73; р<0,05); содержанием глюкозы и активностью аспартатаминотрансферазы (И = 0,80, р<0,03); содержанием глюкозы и активностью аланинаминотрансферазы в ротовой жидкости (Я = 0,80; р<0,05). У детей с декомпенсированной формой сахарного диабета имеется корреляционная зависимость между содержанием глюкозы и концентрацией мочевины в ротовой жидкости (К = 0,77; р<0,05), между содержанием глюкозы крови и концентрацией билирубина в ротовой жидкости, между содержанием глюкозы и концентрацией калия в ротовой жидкости (11 = 0,80; р<0,05); между содержанием глюкозы и активностью лактатдегидрогеназы (Я = 0,73, р<0,03); между содержанием глюкозы и концентрацией железа в ротовой жидкости (Я = 0,80; р<0,05). В обеих группах определена связь между содержанием глюкозы крови и концентрацией калия в ротовой жидкости (И = 0,78; р<0,05; Я = 0,80, р<0,05). Разные коэффициенты корреляции между показателями ротовой жидкости у детей больных сахарным диабетом при компенсированной и декомпенсированной формах отражают качественно иные изменения метаболизма при различной степени тяжести заболевания.

Результаты проведенной работы свидетельствуют о перспективности использования саливадиагностики в педиатрии.

ВЫВОДЫ

1. Регламентированы условия определения показателей метаболизма в ротовой жидкости. Установлена зависимость концентрации метаболитов углеводного обмена в ротовой жидкости от температуры, длительности хранения, условий центрифугирования.

2. Экспериментально обоснован оптимальный режим при пробоподготовке ротовой жидкости для определения глюкозы: центрифугирование при 3000 об/мин. в течение 10 минут, хранение образца при температуре +3° С до 3 часов, хранение образца при температуре ниже 10° длительное время.

3. Аргументирована аналитическая надежность методов определения в ротовой жидкости содержания общего белка биуретовым методом, мочевины уреазным методом, глюкозы глюкозооксидазным методом, что подтверждается высокой сходимостью, воспроизводимостью. Нижний предел чувствительности глюкозооксидазно-го метода определения глюкозы в ротовой жидкости составляет 0,03 ммоль/л.

4. Определена динамика показателей ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные периоды детского возраста. В 3-5 лет отмечается наиболее высокое содержание глюкозы, холестерина, триглицеридов, кальция, магния, железа, билирубина, значения тимоловой пробы. В 5-7 лет наблюдаются наиболее высокое содержание альбумина, активность аспартатаминотрансферазы, скорость саливации. В 9-12 лет отмечены максимальные значения содержания мочевины, мочевой кислоты, креатинина, хлоридов, активности а-амилазы, лактатдегидрогеназы. В разные возрастные периоды детства содержание общего белка, натрия, калия, фосфора, значение рН колеблется в одинаковых пределах.

ного уровня. Однотипная динамика содержания глюкозы в крови и ротовой жидкости позволяет использовать определение глюкозы в ротовой жидкости при проведении глюкозотолерантного теста для выявления латентного сахарного диабета у детей.

6. Получена база данных, пополняющая неинвазивную диагностику в педиатрии. У детей, больных инсулинозависимым сахарным диабетом, в ротовой жидкости отмечено достоверное увеличение концентрации глюкозы в 3,5 раза. При декомпенси-рованном сахарном диабете отмечена отчетливая тенденция к снижению содержания альбумина, повышению билирубина, активация аспартатаминотрансферазы. При де-компенсированной форме сахарного диабета по сравнению с больными с компенсированной формой заболевания в ротовой жидкости было выше содержание кальция (+17,3%, р<0,05), активность а-амилазы (+72,7%, р<0,05); ниже содержание холестерина (-27,3%, р<0,05), железа (-22,4%, р<0,05), мочевины (-17,7%, р<0,05), что позволяет использовать эти данные как дополнительные критерии степени тяжести заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для обеспечения высокого качества исследований ротовой жидкости отработаны оптимальные условия сбора, центрифугирования и хранения проб ротовой жидкости у детей. При подготовке ротовой жидкости к биохимическим исследованиям образцы можно центрифугировать при 3000 об/мин. в течение 10 минут, далее хранить в морозильной камере при температуре -10 - -20 градусов.

2. Полученные результаты исследования ротовой жидкости здоровых детей трех возрастных групп могут служить основой для выработки референтных пределов для биохимических показателей в разные периоды детства.

3. Информативно оценивать тест толерантности к глюкозе по анализу ее содержания в ротовой жидкости, поскольку динамика концентрации этого метаболита в крови и ротовой жидкости однотипна. Это расширяет возможности ранней неинва-зивной диагностики скрытого сахарного диабета у детей при скрининговых исследованиях.

4. Перспективно проводить мониторинг эффективности лечения и адекватности подбора дозы инсулина при инсулинозависимом сахарном диабете у детей по изучению показателей ротовой жидкости. Дополнены критерии степени тяжести инсули-нозависимого сахарного диабета по скорости саливации, содержанию в ротовой жидкости глюкозы, альбумина, билирубина, активности аминотрансфераз, характеризующих функциональное состояние печени.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Рыскина Е.А. Практические аспекты внутрилабораторного контроля качества // Материалы межрегиональной научно-практической конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины». - Самара, 2005. - С. 330-336 (в т. ч. 100% авт.).

2. К поиску средств метаболической коррекции при экологически индуцированных нарушениях состояния здоровья / А.В.Бабичев, Г.М.Баишева, Е.А.Рыскина и [др.] // Материалы межрегиональной научно-практической конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины». - Самара, 2005. - С. 41-45 (в т. ч. 20% авт.).

3. Метаболический статус больных вирусным гепатитом В / О.Ю.Кузнецова, И.Ф.Сидорова, Е.А.Рыскина и [др.] // Материалы межрегиональной научно-практической конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины». - Самара, 2005. -С. 229-235 (в т. ч. 13% авт.).

4. Рыскина Е.А. Показатели метаболитов ротовой жидкости различных групп детей И VI Международная научно-практическая конференции «Здоровье и Образование в XXI веке». - Москва, 2005. - С. 413 (в т. ч. 100% авт.).

5. Рыскина Е.А. Проблемы здоровья детей, рождающихся у женщин, больных диабетом беременных // Материалы Всероссийской научной конференции «Современные проблемы охраны труда и здоровья работающих женщин». - Самара, 2006. -С. 84-87 (в т. ч. 100% авт.).

6. Рыскина Е.А. Неинвазивные методы исследования как фактор охраны здоровья женщин и детей // Материалы Всероссийской научной конференции «Современные проблемы охраны труда и здоровья работающих женщин». - Самара, 2006. -С. 87-91 (в т. ч. 100% авт.).

7. Метаболические особенности, ассоциированные с групповой принадлежностью крови как предрасположенность развития остеопороза / Ф.Н.Гильмиярова, Л.Н.Виноградова, Е.А.Рыскина и [др.] //Материалы VIII Российского съезда травматологов-ортопедов «Травматология и ортопедия XXI века». - Самара, 2006. - С. 103-104 (в т. ч. 5 % авт.).

8. Продуктивные подходы к неинвазивной диагностике исследований ротовой жидкости / Ф.Н.Гильмиярова, В.М.Радомская, Е.А.Рыскина и [др.] // Материалы X Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век». - Бангкок -Паттайя, 2006. - С. 86-92 (в т. ч. 4% авт.).

9. Аналитические подходы к изучению показателей метаболизма в ротовой жидкости / Ф.Н.Гильмиярова, В.М.Радомская, Е.А.Рыскина и [др.] // Книга - Москва, 2006 - С. 312 (в т. ч. 10% авт.).

10. Модернизация здравоохранения: вклад кафедры клинической лабораторной диагностики в подготовку врача общей практики / Ф.Н.Гильмиярова, В.М.Радомская, Е.А.Рыскина и [др.] // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - С. 450-454 (в т. ч. 6% авт.).

11. Актуальные подходы к изучению содержания глюкозы в ротовой жидкости / Е.А.Рыскина // Материалы VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке». - Москва, 2006. - С. 425-426 (в т. ч. 100% авт.).

Рыскина Елеиа Анатольевна (Россия).

Аналитические подходы к изучепию показателей метаболизма ротовой жидкости.

Аргументирована аналитическая надежность методов определения в ротовой жидкости показателей метаболизма, что подтверждается высокой сходимостью, воспроизводимостью. Впервые изучены показатели белкового, углеводного, липидного и минерального обмена в ротовой жидкости у детей в разные возрастные периоды в норме и при инсулинозависимом диабете. Полученные результаты исследования ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные периоды детского возраста (от 3 до 12 лет) могут служить основой для выработки референтных пределов для биохимических показателей. Однотипная динамика содержания глюкозы в крови и ротовой жидкости позволяет использовать определение глюкозы в ротовой жидкости при проведении глюкозотолерантного теста для выявления латентного сахарного диабета у детей. У детей, больных инсулинозависимым сахарным диабетом, в ротовой жидкости отмечено достоверное увеличение концентрации глюкозы в 3,5 раза. При декомпенсированном сахарном диабете отмечена отчетливая тенденция к снижению содержания альбумина, повышению билирубина, активация аспартатаминот-рансферазы, что позволяет использовать эти данные как дополнительные критерии степени тяжести заболевания.

Ryskina Elena Anatolievna (Russia).

Analytical points of view to the exploration of rates of metabolism in oral fluid.

Analytical reliability of determination's methods of metabolism rates in oral fluid is argued. It was confirmed with high reproducibility. Rates of protein, carbonhydrate, lipid and mineral metabolism in oral fluid of children in different age-dependent periods normal and with diabetes mellitus are first explored. The received results of researches of oral fluid of clinical healthy children (3-12 years old) are able to take as the basis for elaboration of limits of biochemical rates. Dinamics of the same type of glucose's content in blood and oral fluid gives an opportunity to use determination of glucose and oral fluid with execution of glucose-tolerant test for detection of latent diabetes mellitus. Children with insulin diabetes mellitus have reliable increase of glucose concentration in oral fluid in 3.5 times. Children with decompensation diabetes mellitus have lowering of albumin's content, increase bilirubin, activation of aspartat aminotransferaza. It gives an opportunity to use this data as additional criterias of degree of severity of disease.

Отпечатано в ООО ИД «Медиа-Пресса». 127137, Москва, ул. Правды, д. 24. Тираж 150 экз. Заказ 70022.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рыскина, Елена Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Ротовая жидкость как объект исследования в клинике и эксперименте.

1.2. Неинвазивная диагностика в педиатрии.

Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Общая характеристика обследованных детей.

2.2. Методы исследования ротовой жидкости и крови.

2.3. Статистическая обработка результатов исследований.

Глава 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ ПОКАЗАТЕЛЕЙ МЕТАБОЛИЗМА РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ.

3.1. Выбор оптимального режима пробоподготовки ротовой жидкости на преаналитическом этапе: оценка влияния температуры, длительности хранения, условий центрифугирования.

3.2. Аналитическая надежность биохимических методов исследования.47 ротовой жидкости.

3.2.1. Оценка сходимости результатов (внутрисерийная воспроизводимость).

3.2.2. Оценка воспроизводимости измерений.

3.2.3. Оценка чувствительности измерений.

Глава 4. ПОКАЗАТЕЛИ МЕТАБОЛИЗМА В РОТОВОЙ

ЖИДКОСТИ ДЕТЕЙ В РАЗНЫЕ ВОЗРАСТНЫЕ ПЕРИОДЫ.

4.1. Физико-химические параметры ротовой жидкости детей в разные.56 возрастные периоды.

4.2. Параметры белкового обмена в ротовой жидкости.

4.3. Показатели углеводного и липидного обмена в ротовой жидкости.

4.4. Показатели минерального обмена в ротовой жидкости детей.

4.5. Взаимосвязь параметров метаболизма в ротовой жидкости и с гематологическими показателями.

Глава 5. МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ У ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ

ИНСУЛИНОЗАВИСИМЫМ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ.

5.1 Оценка теста толерантности к глюкозе в крови и ротовой жидкости здоровых детей.

5.2. Параметры ротовой жидкости у детей при сахарном диабете.

5.3. Гематологические показатели детей, больных сахарным диабетом.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аналитические подходы к изучению показателей метаболизма в ротовой жидкости"

Актуальность темы. Трудности в получении крови у детей и широкое распространение трансмиссивных заболеваний обуславливают актуальность исследований, направленных на научное обоснование целесообразности внедрения новых неинвазивных методов диагностики в педиатрии (Sreebny L. М., 2000). В этом плане интересным объектом для изучения является ротовая жидкость.

Получены данные о закономерностях функционировании слюнных желез, об изменении состава и физико-химических свойствах смешанной слюны при стоматологической (Вавилова Т.П. с соавт., 1995; Воложин А.И. с соавт., 1997, 2000, 2001; Грудянов А.И., 1997,1998; Леонтьев В.К.с соавт. 1996, 1999; Соловьева A.M., 2000; Бережной В.П. с соавт., 1999, 2003; Гильмияров Э.М., 2003; Денисов А.Б., 2003) и соматической патологии (Терехина H.A. с соавт., 1995; Herzog A.G. et al., 2001). Исследованиями последних лет выявлен параллелизм изменений параметров метаболизма в крови и ротовой жидкости при ряде заболеваний (Григорьев И.В. 1998,2000). Сведения об изменении состава ротовой жидкости у детей представлены в единичных работах, согласно которым состав ротовой жидкости имеет некоторые особенности, обусловленные возрастными отличиями метаболизма, эндокринной регуляцией, влиянием комплекса экологических факторов (Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2004).

Задачи:

1. Отработать условия преаналитического этапа при исследовании ротовой жидкости.

3. Определить в ротовой жидкости детей в разные возрастные периоды показатели обмена: содержание общего белка, альбумина, мочевины, креатинина, мочевой кислоты, глюкозы, холестерина, триглицеридов, билирубина, кальция, фосфора, железа, натрия, калия, хлоридов, магния, активность аспартатаминотрасферазы, аланинаминотрансферазы, а-амилазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, значение тимоловой пробы.

Новыми являются результаты оценки аналитической надежности методов биохимического анализа ротовой жидкости путем проверки сходимости, воспроизводимости, аналитической чувствительности. Определены оптимальные условия пробоподготовки образцов ротовой жидкости для биохимических и физико-химических исследований.

Впервые получены данные, характеризующие состав и свойства ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные возрастные периоды с определением широкого спектра метаболических показателей углеводного, белкового, липидного, минерального обменов, и физико-химических параметров: скорости саливации и водородного показателя.

Впервые при проведении глюкозотолерантного теста у здоровых детей получены данные об однотипной динамике содержания глюкозы в ротовой жидкости и крови.

Научно-практическая значимость. Результаты, полученные при проведении исследований, имеют теоретическое и практическое значение.

Показана информативность оценки теста толерантности к глюкозе по анализу ее содержания в ротовой жидкости, поскольку динамика концентрации этого метаболита в крови и ротовой жидкости однотипна. Это расширяет возможности ранней неинвазивной диагностики скрытого сахарного диабета у детей при скрининговых исследованиях.

Перспективно проводить мотиторинг эффективности лечения и адекватности подбора дозы инсулина при инсулинзависимом сахарном диабете у детей по изучению показателей ротовой жидкости. Дополнены критерии степени тяжести инсулинозависимого диабета по скорости саливации, содержанию в ротовой жидкости глюкозы, альбумина, билирубина, активности аминотрансфераз, характеризующих функциональное состояние печени.

Положения, выносимые на защиту:

1. Обоснование аналитической надежности, выбор оптимального режима пробоподготовки образцов ротовой жидкости при определении показателей углеводного, белкового, липидного и минерального обмена.

2. Динамика показателей ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные периоды детского возраста. В 3-5 лет отмечается наиболее высокое содержание глюкозы, холестерина, триглицеридов, кальция, магния, железа, билирубина, значения тимоловой пробы. В 5-7 лет наблюдаются наиболее высокое содержание альбумина, активность аспартатаминотрансферазы, скорость саливации. В 9 - 12 лет отмечены максимальные значения содержания мочевины, мочевой кислоты, креатинина, хлоридов, активности а-амилазы, лактатдегидрогеназы. В разные возрастные периоды детства содержание общего белка, натрия, калия, фосфора, значение рН колеблется в одинаковых пределах.

3. Расширение возможности ранней неинвазивной диагностики сахарного диабета. Информативность проведения теста толерантности к глюкозе по определению содержания глюкозы в ротовой жидкости на основании однотипной динамики ее концентрации в крови и ротовой жидкости. Мониторинг эффективности лечения при инсулинозависимом сахарном диабете у детей по определению уровня глюкозы в ротовой жидкости. Возможность оценки тяжести заболевания по содержанию в ротовой жидкости глюкозы, альбумина, билирубина, активности аспартатаминотрансферазы, значению тимоловой пробы.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на Межрегиональной научно-практической конференции «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005), Всероссийской конференции «Современные проблемы охраны труда и здоровья работающих женщин» (Самара, 2005), VI Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, РУДН, 2005), X Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век» (Бангкок-Паттайя, 2006), VIII Российском Съезде травматологов-ортопедов «Травматология и ортопедия XXI века» (Самара, 2006), VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, РУДН, 2006), совместном заседании Самарского отделения Всероссийского биохимического общества, Ассоциации медицинской лабораторной диагностики, кафедр общей, бионеорганической и биоорганической химии и фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2006).

Внедрение результатов в практику. Результаты исследований используются в работе клинико-диагностической лаборатории Клиник Самарского государственного медицинского университета, клинико-диагностической лаборатории 118 детской городской поликлиники Юго-западного административного округа г. Москвы, Клинической больницы Управления делами Президента РФ г. Москвы, в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Публикации. Всего опубликовано 11 работ все по теме диссертации, в том числе одна монография.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию объектов и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Рыскина, Елена Анатольевна

ВЫВОДЫ

2. Экспериментально обоснован оптимальный режим при пробоподготовке ротовой жидкости для определения глюкозы: центрифугирование при 3000 об/мин. в течение 10 минут, хранение образца при температуре +ЗС С до 3 часов, хранение образца при температуре ниже 10°длительное время.

3. Аргументирована аналитическая надежность методов определения в ротовой жидкости содержания общего белка биуретовым методом, мочевины уреазным методом, глюкозы глюкозооксидазным методом, что подтверждается высокой сходимостью, воспроизводимостью. Аналитическая чувствительность глюкозооксидазного метода определения глюкозы составляет 0,03 ммоль/л.

4. Определена динамика показателей ротовой жидкости у клинически здоровых детей в разные периоды детского вофаста. В 3-5 лет отмечается наиболее высокое содержание глюкозы, холестерина, триглицеридов, кальция, магния, железа, билирубина, значения тимоловой пробы. В 5-7 лет наблюдаются наиболее высокое содержание альбумина, активность аспартатаминотрансферазы, скорость саливации. В 9 - 12 лет отмечены максимальные значения содержания мочевины, мочевой кислоты, креатинина, хлоридов, активности а-амилазы, лактатдегидрогеназы. В разные возрастные периоды детства содержание общего белка, натрия, калия, фосфора, значение рН колеблется в одинаковых пределах.

5. При проведении теста толерантности к глюкозе установлено увеличение содержания глюкозы через 1 час в крови на 21%, в ротовой жидкости - на 52 %, через 2 часа концентрация глюкозы в обеих биологических жидкостях становится ниже исходного уровня. Однотипная динамика содержания глюкозы в крови и ротовой жидкости позволяет использовать определение глюкозы в ротовой жидкости при проведении глюкозотолерантного теста для выявления латентного сахарного диабета у детей.

6. Получена база данных, пополняющая неинвазивную диагностику в педиатрии. У детей, больных инсулинозависимым сахарным диабетом, в ротовой жидкости отмечено достоверное увеличение концентрации глюкозы в 3,5 раза. При декомпенсированном сахарном диабете отмечена отчетливая тенденция к снижению содержания альбумина, повышению билирубина, активация аспартатаминотрансферазы. При декомпенсированной форме сахарного диабета по сравнению с больными с компенсированной формой заболевания в ротовой жидкости было выше содержание кальция (+17,3%, р<0,05), активность а-амилазы (+72,7%, р<0,05); ниже содержание холестерина (-27,3%, р<0,05), железа (-22,4%, р<0,05), мочевины (-17,7%, р<0,05), что позволяет использовать эти данные как дополнительные критерии тяжести заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для обеспечения высокого качества исследований ротовой жидкости отработаны оптимальные условия сбора, центрифугирования и хранения проб ротовой жидкости у детей. При подготовке ротовой жидкости к биохимическим исследования образцы можно центрифугировать при 3000 об/мин. в течение 10 минут, далее хранить в морозильной камере при температуре - 10 - -20 градусов

3. Информативно оценивать тест толерантности к глюкозе по анализу ее содержания в ротовой жидкости, поскольку динамика концентрации этого метаболита в крови и ротовой жидкости однотипна. Это расширяет возможности ранней неинвазивной диагностики скрытого сахарного диабета у детей при скрининговых исследованиях.

4. Перспективно проводить мотиторинг эффективности лечения и адекватности подбора дозы инсулина при инсулинозависимом сахарном диабете у детей по изучению показателей ротовой жидкости. Дополнены критерии степени тяжести инсулинозависимого сахарного диабета по скорости саливации, содержанию в ротовой жидкости глюкозы, альбумина, билирубина, активности аминотрансфераз, характеризующих функциональное состояние печени.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рыскина, Елена Анатольевна, Москва

1. Алексеева O.A. Роль коррекции общего и местного иммунного статуса и биохимических показателей ротовой жидкости в комплексной терапии пародонтита при сахарном диабете. // Автореф. дис. кмн. М., 2001.

2. Багиров Ш.Т., Зайчик B.C., Калашников В.М. Физиологическая изменчивость концентрации химических элементов в смешанной нестимулированной слюне человека. // Азерб. Мед. Журнал. 1985, -№8.

3. Боровиков В.П. Statuistika: исскуство анализа данных на компьютере. Для профессионалов. С.-Пб.: Питер, 2003.

4. Боровский Е.В., Леонтьев В.К. Биология полости рта. М., 1991. - С. 304

5. Боровский Е.В. с соавт. Состав и свойства слюны в норме и при кариесе зубов. М., 1980.

6. Вавилова Т.П. с соавт. (1995) Состояние ферментных констелляций как показатель гомеостаза челюстно-лицевой системы /Т.П.Вавилова,

7. Ю.А.Петрович, И.Н.Марокко, Л.Т.Малышкина //Стоматология. 1995. - № 4. - С. 79.

8. Вавилова Т.П., Ларионова Н.И., Петрович Ю.А. Ингибиторы трипсиноподобных протеиназ смешанной слюны человека // Вопр. Мед. хим. 1988. - № 3. - С. 74-78.

9. Велигоря И.Е. Активность фосфатаз в слюне у лиц, подвергшихся воздействию ионизирующей радиации и стресса // Вкн. Стоматол. -1999. № 2. - С. 12-13.

10. Виллерсхаузен-Ценхен Б., Гляйснер К. Изменения тканей ротовой полости в пожилом возрасте // Клиническая стоматология. 2000. - № 3.-С. 58-63.

11. Воложин А.И. с соавт. (1997) Патофизиология кислотно-основного равновесия в общеклинической и стоматологической практике: Методическое пособие / А.И.Воложин, А.Ж.Петрикас, В.А.Румянцев и др.-М., 1997.-74 с.

12. Воложин А.И. с соавт. (2000) Оценка состояния пародонта по химическому составу сред полости рта / А.И.Воложин, Е.С.Филатова, Ю.А.Петрович и др. // Стоматология. 2000. - № 1. - С. 13-16.

13. Воложин А.И. с соавт. (2001) Летучие соединения в воздухе и слюне ротовой полости здоровых людей, при пародонтите и гингивите / А.И.Воложин, Ю.А.Петрович, Е.С.Филатова и др. // Стоматология. -2001.-№ 1.-С. 9-12.

14. Гаврикова Л.М. Ферментативная активность ротовой жидкости человека как показатель бактериального дисбаланса полости рта при пародонтозах: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Тверь, 1998. - 22 с.

15. Гаврилова O.A. с соавт.(1998) Состояние кислотно основного равновесия в полости рта у детей с врождненными расщелинами верхней губы и неба.// Стомотология 1998 № 4 с. 37 - 41.

16. Гергель Н.И. с соавт, 2004. Исследование ротовой жидкости в оценке активности воспалительного процесса /Н.И Гергель, И.Ф.Сидорова, Ю.А.Косякова и др. //«Здоровье и образование в XXI веке» Материалы Пятой научн.-практич. конф., Москва, 2004. С.24 25.

17. Гильмияров Э.М.с соавт.,2003. Метаболические предпосылки развития стоматологической патологии при пневмонии / В.П.Бережной, Э.М. Гильмияров, И.Г. Кретова, Н.И. Гергель // Стоматология.-2003.-№2,-С.25-27.

18. Гильмиярова Ф Н. с соавт., 2000. Соматический статус организма в показателях ротовой жидкости / Ф.Н.Гильмиярова, В.М. Радомская, Н.И. Гергель и др. // Материалы III Съезда биохимического общества.- Санкт-Петербург, 2002.-С. 148

19. Гожая Л.Д. Содержание железа, меди, марганца в слюне человека в норме и при некоторых стоматологических и других заболеваниях. // Автореф. дис. кмн. М., 1966.

20. Григорьев И.В. Уланова Е.А. Неинвазивные методы диагностики: роль исследований смешенной слюны в ревматологии. // Вестник новых медицинских технологий. 2000. - № 3-4. - С. 77-78.

21. Григорьев И.В. Чиркин A.A. Роль биохимического исследования слюны в диагностике заболеваний. // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - №6 - С. 18-20.

22. Грудянов А.И. Обследование лиц с заболеваниями пародонта // Пародонтология. 1998. -№3.-С 8-13.

23. Грудянов А.И. Пародонтология: Этиология, патогенез, лечение, профилактика. М.: ОАО «Стоматология», 1997. - 32 с.

24. Денисов А.Б. Слюнные железы. Слюна. М., 2003.

25. Денисов А.Б., Лебеденко И.Ю., Дубова Л.В. Слюноотделительная функция при включенных дефектах зубных рядов. Взаимосвязь между протяженностью дефекта и качественным составом слюны // Проблемы стоматологии и нейростоматологии. 1999. - № 3. - С. 23-26.

26. Денисова О.В. Внутрилабораторный контроль качества клинических лабораторных исследований. -М., 1998.

27. Денисова О.В. Проведение неавтоматического внутрилабораторного контроля качества клинических лабораторных исследований. М., -2003.

28. Дударь Л.В., Гусак М.М. Изменение ферментного спектра слюны при остром и хроническом панкреатите // Врач. дело. -1981. -№ 12.

29. Езикян Т.И., Персиц М.М. Коллагенолитическая активность в десневой жидкости и смешанной слюне при заболеваниях пародонта // Материалы 2 симпозиума «Неинвазивные методы диагностики». М., 1995.

30. Елизарова В.М., Петрович Ю.А. Ионизированный кальций в слюне детей при множественном кариесе // Стоматология. 1997. - № 4. - С. 6-8.

31. Елизарова В.М., Петрович Ю.А. Нарушение гомеостаза кальция при множественном кариесе зубов у детей // Стоматология. 2002. - № 1. -С. 67-71.

32. Енчаева Р. с соавт Исследование активности ЛДГ в смешанной слюнедетей и юношей с травматическим парадонтитом // Стоматология. 1985 Т. 64. № 4

33. Есаян З.В. Некоторые клинико лабораторные показатели поражений полости рта при сахарном диабете и патогенетическая терапия диабетического пародонтолизма. Автореф. дис. канд. мед. наук. -Ереван, 1999.

34. Жуматов У.Ж. Влияние экологических факторов на иммунологические показатели полости рта у детей // Стоматология. 1996. - № 4. - С. 3335.

35. Зайчик В.Е., Багиров Ш.Т. Содержание химических элементов в смешанной нестимулированной слюне при заболеваниях пародонта // Стоматология, 1994.-№ 1,-С. 8-11.

36. Зубачик В.М. Маркерный и прогностический тест на фосфолипазу А2 при заболеваниях пародонта // Стоматология. 2000. - № 3. - С. 9-11.

37. Зубкова Л.П., Мардашко O.A. Кининогеназная и кининазная активность в слюне детей с зубочелюстными аномалиями и патологией желудочно-кишечного тракта // BicH. Стоматол. 2000. - № 2. - С. 2932.

38. Зырянов Б.Н., Конвай В.Д. Роль нарушения функции антиоксидантной системы слюнных желез в развитии кариеса зубов у пришлого населения Тюменского Севера // Новое в стоматол. 1997. - № 2. - С. 40-42.

39. Инджов Б. Электролиты, pH и сахар в слюне больных сахарной болезнью. // Стоматология. Т. 56, № 6, София, 1974.

40. Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Минск, - 2003.

41. Качество клинических лабораторных исследований. Новые горизонты и ориентиры. Под ред. Меньшикова В В. М., 2002.

42. Кирюхина C.JI. Некоторые особенности среды полости рта у детей, больных сахарным диабетом. // Автореф. кмн. 1968.

43. Кильдиярова P.P. Сиалосодержащие соединения в диагностике хронического гастродуоденита у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук.-Уфа, 1997.-21 с.

44. Клиническая лабораторная аналитика. Под ред. Меньшикова B.B. М., -2002.

45. Комарова В.И., Храмов В.А., Темкин Э.А. Антибиотики как ингибиторы нитратредуктазы ротовой жидкости человека // Стоматология. 2000. - № 2. - С. 4 .

46. Коновалов М.Ф. Влияние минерального концентрата «ВИТА» на показатели редокс-состояния и перекисного окисления липидов в ротовой жидкости школьников при кариесе // Одесск. Мед. Жур. -2000. № 3. - С. 78-80.

47. Кузнецова М.Н., Пинелис В.Г., Змановский Ю.Ф. Исследование электролитов слюны как неинвазивный метод определения здоровья дошкольников // Материалы 2 симпозиума «Неинвазивные методы диагностики». Москва, 1995. - С. 51 -52.

48. Кучумова Е.Д. с соавт. (1997) Опыт изучения содержания некоторых металлов в слюне больных пародонтитом / Е.Д.Кучумова, О.В.Прохорова, С.С.Ермаева, Е.Б.Носова, // Пародонтология. 1997. -№ 2. - С. 13-15.

49. Кучумова Е.Д. с соавт. (1998) Динамика содержания железа и меди в смешанной слюне после хирургического лечения заболеваний пародонта / Е.Д.Кучумова, О.В.Прохорова, Е.Б.Носова, В.Б.Панкратов // Пародонтология. 1998. - № 4. - С. 27-28.

50. Кухта С И., Колодмй Г.Ф. Кариес зубов и биохимические свойства слюны у дошкольников. // Науч. Тр. Харьковского мед. Института. 1974. Вып. 144.

51. Куцик Л.Б. Динамика электролитного обмена и ферментных процессов в поджелудочной и слюнной железах при различных состояниях слюнной железы. Дис. кмн. Львов, 1985.

52. Левицкий А.П. Пищеварительные ферменты слюнных желез. Автореф. дис. дмн. М., 1974.

53. Леонтьев В.К. с соавт. Водородный показатель полости рта. Обзор литературы. // МРЖ. Раздел XII. - Стоматология. № 9. - М., 1988.

54. Леонтьев В.К. Мицеллярное строение слюны // Стоматология. 1995. -№ 4. - С. 80.

55. Леонтьев В.К. с соавт. (1996) Структурные свойства слюны при моделировании кариесогенной ситуации// В.К.Леонтьев, М.В.Галиулина, И.В.Ганзина и др. // Стоматология. 1996. - № 2. - С. 9-11.

56. Леонтьев В.К. с соавт. Изменение структурных свойств слюны при изменении рН // В.К.Леонтьев, М.В.Галиулина, И.В.Ганзина и др. //Стоматология. 1999. - №2. - С.22-24.

57. Лифшиц В.М. Сидельникова В.И. Лабораторные тесты у здоровых людей. М., 2004.

58. Медицинская лабораторная диагностика. Под ред. Карпищенко А.И. -С-Птб.,- 1997.

59. Меньшиков В.В. Стандартизация в клинической лабораторной медицине. М., - 2005.

60. Меньшиков В.В., Лукичева Т.Н. Неинвазивные и малоинвазивные методы в лабораторной диагностике: концепция и практика. // Неинвазивные методы диагностики: Тез. докл. науч. конф. М., 1994.

61. Моисеенко 0.0 Клинико диагностические параллели в патогенезе стоматологических заболеваний у детей больных сахарным диабетом 1 тина. Автореф. дис. кмн. - М. - 2001.

62. Мошкин A.B., Долгов В.В. Обеспечение качества в клинической лабораторной диагностике. М., 2004.

63. Назаренко Г.И., Кишкун A.A. Управление качеством лабораторных исследований. М., 2001 г.

64. Назаретян Э.Е. с соавт. (2000) Содержание окиси азота в слюне и легочная гипертензия у больных с различной степенью тяжести бронхиальной астмы / Э.Е.Назаретян, М.З.Нариманян, Т.В.Мартиросян, А.Ю.Гаспарян // Пульмонология. 2000. - № 2. - С. 23-27.

65. Никитина Т.В. с соавт. Показатели концентрации йонов водорода в полости рта человека. // Стоматология. Т. 61. № 2. 1982.

66. Ордашев Х.А. Заболевания слюнных желез при сахарном диабете. // Автореф. кмн. М., 1997.

67. Петрикас А.Ж., Румянцев В.А. Практическое применение в стоматологии стимулированных изменений pH слюны и зубного налета // Новое в стоматол. 1998. - № 7. - С. 36-46.

68. Петрович Ю.А. с соавт. (1986) Железо жидкостей полости рта при воспалении десны / Ю.А.Петрович, Р.П.Подорожная, Т.И.Генесина, Г.Ф.Белоклицкая // Пат. физиол. и эксперим. терапия. 1986. - № 3. -С. 22-24.

69. Петрович Ю.А. с соавт. (1995) Ферменты и их ингибиторы в слюне и десневой жидкости в диагностике пародонтита / Ю.А.Петрович, Т.П.Вавилова, И.Н.Марокко и др. // Материалы 2 симпозиума «Неинвазивные методы диагностики». Москва, 1995. - С. 54.

70. Пинелис И.С. Нарушения иммунитета, неспецифической резистентности и гемостаза у больных с переломами нижней челюсти, злоупотребляющих алкоголем // Стоматология. 1992. - № 2. - С. 4649.

71. Приказ МЗ РФ № 45 от 07.02.2000 г. «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации».

72. Приказ МЗ РФ № 220 от 26.05.2003 г. «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов»».

73. Рединова Т.Л. Влияние сахарозы на состав и свойства смешанной слюны у детей с различной подверженностью кариесу. // Стоматология. Т. 68. № 1.- 1989.

74. Розколупа Н.В., Бобырев В.Н. Экспериментальные и клинические основы микрофлоры полости рта мочевиной (карбамидом) // Новое в стоматол. 1994 - № 2. - С. 29-34.

75. Ромачева И.Ф. с соавт. Содержание калия, натрия в слюне при заболевания слюнных желез. // Результаты экспериментальных и клинических исследований. / Под ред. К.М.Лакина. М., - 1976.

76. Руденко М.Н. с соавт. Исследование минерального состава слюны и функционирования глюколиза при различных формах кариеса. // Науч. труды Казанского мед. института. Казань, - 1988.

77. Румянцев В.А. Водородный показатель слюны, зубного и язычного налета: нарушения, регуляция и клиническое значение. // Автореф. кмн. Калинин, 1989.

78. Рыбалов О.В., Яценко И.В. Физико-химические свойства смешанной слюны и паротидного секрета у больных хроническим паренхиматозным паротитом и у лиц, ранее перенесших острый паротит // Стоматология. 1993. - № 4. - С. 30-32.

79. Сатыго Е.А. Состав и свойства ротовой жидкости у принимающих таблетки фторида натрия детей с различными уровнями гигиены полости рта // Стоматология. 2000. - № 2. - С. 34-36.

80. Сахарный диабет. Под ред. Елисеева Ю.Ю. М., 2004.

81. Саяпина JT.M., Цебржинский О.И. «Дыхательный взрыв» нейтрофилов в полости рта и протоковой слюне при воспалении тканей челюстно-лицевой области // Вюник стоматологи. 1997. - №. 3. - С. 385-387.

82. Серговская F.T. Выделение слюнными железами стероидов и их фракций у больных бронхиальной астмой // Врач, дело.- 1975.- № 5. С. 25-27.

83. Соловьева A.M. рН зубной бляшки и роль слюны в ее нормализации // Новое в стоматол. 2000. - № 4. - С. 88-96.

84. Стандартизация в клинической лабораторной медицине. Под ред. Меньшикова В.В. М., 2005.

85. Стрелков Н.С. Прогнозирование тяжести течения остеомиелита у детей по уровню свободного и связанного оксипролина // Материалы 2симпозиума «Неинвазивные методы диагностики». Москва, 1995. - С. 56.

86. Токуева Л.И. Кальций, неорганический фосфор смешенной слюны, скорость слюноотделения и кариесрезистентность зубов в период их минерализации у детей. // Стоматология. Т. 62. № 1. 1983.

87. Тарасенко Л.М. с соавт. (1990) Биохимия органов ротовой полости: Учебное пособие / Л.М.Тарасенко, Р.А.Юхновец, В.К.Григоренко и др. -Полтава, 1990.- 120 с.

88. Тарасенко Л.М. с соавт. (1990) Реакция слюнных желез на острый стресс / Л.М.Тарасенко, Т.А.Девяткина, О.И.Цебржинский и др. // Физиологический журнал. 1990. - № 2. - С. 104-106.

89. Твердохлиб В.П. Особенности развития детей. 1997.

90. Темирбаев М.А., Хасенова Б.Ж. Методика оценки функциональной активности нейтрофилов слюны у людей. Казань, 1988 (Информ. Листок № 373.).

91. Терехина H.A. с соавт. Значение исследования слезы и слюны в диагностике вирусных инфекций // Материалы 2 симпозиума «Неинвазивные методы диагностики». Москва, 1995. - С. 31.

92. Токмакова С.И. с соавт. (2001) Микрофлора слизистой оболочки полости рта у пожилых лиц при общесоматической патологии / /С.И.Токмакова, Л.Ю.Бутакова, Г.Г.Ефремушкин и др. // Стоматология. -2001.-№ 4.-С. 24-27.

93. Хазанова В.В. с соавт. (1995) Состояние местного иммунитета полости рта при кариесе зубов / В.В.Хазанова, Е.А.Земская, Н.А.Дмитриева и др. // Стоматология. 1995. - № 5. - С. 62-64.

94. Храмов В.А. Утилизация аминокислот и мочевины ротовой жидкостью человека // Стоматология. 1997. - № 6. - С. 13-15.

95. Черно С.В., Чичиленко М.В., Глушков А.Н. Сезонная динамика концентрации секреторного IgA в слюне жителей Кемерово // Иммунология. 1999. - № 6. - С. 59.

96. Яценко И.В., Цебржинский О.И., Рыбалов О.В. Показатели свободнорадикального окисления смешанной слюны и паротидного секрета у лиц, перенесших острый и хронический паротит // Актуальные вопросы стоматологии. Полтава, 1991. - Т. 1. - С. 189.

97. Amaechi В.Т., Higham S.M. Eroded enamel lesion remineralization by saliva as a possible factor in the site-specificity of human dental erosion // Arch Oral. Biol. 2001. - Vol. 46, N 8. - P. 697-703.

98. A time-resolved fluorescence immunoassay for the measurement of testosterone in saliva: monitoring of testosterone replacement therapy with testosterone buciclate / M. Tschop, H.M. Behre, E.Nieschlag et all.) 1998

99. Albo F. et al. (2001) Neuropeptide degradation in naive and steroid-treated allergic saliva / F.Albo, R.Antonangeli, A.Cavazza et al. // Int. Immunopharmacol. 2001. -Vol. 1,N9-10.-P. 1777-1788.

100. Ballam L.D. et al. (2000) Western blotting is useful in the salivary diagnosis of Helicobacter pylori infection / L.D.Ballam, M.A.Mendall, M.Asante et al. // J. Clin. Pathol. 2000. - Vol. 53, N 4. - P. 314-317.

101. Banoczy J. et al. (1987) Salivary secretion rate, pH, lactobacilli and yeast counts in diabetic woman // Acta Dabetol. Lat. 1987. - Vol. 24, N 3 . -P. 223-228.

102. Belce A. et al. (2000) Evaluation of salivary sialic acid level and Cu-Zn superoxide dismutase activity in type 1 diabetes mellitus / A.Belce, E.Uslu, M.Kucur et al. // Tohoku. J. Exp. Med. 2000. - Vol. 192, N 3. - P. 219225.

103. Bergdahl M., Bergdahl J. Low unstimulated salivary flow and subjective oral dryness: association with medication, anxiety, depression, and stress // J. Dent. Res. 2000. - Vol. 79, N 9. - P. 1652-1658.

104. Bolaji II. Sero-salivary progesterone correlation // lnt J Gynaecol Obstet. 1994. V45, N2. P.125-131.

105. Brambilla E. et al. (1999) Salivary mutans streptococci and lactobacilli in 9-and 13-ycar-old Italian schoolchildren and the relation to oral health /

106. Bretz W.A. et al. (2001) Unstimulated salivary flow rates of young children / W.A.Bretz, E.V. do Valle, J.J.Jacobson et al. // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 2001. - Vol. 91, N 5. - P. 541-545.

107. Bretz W.A. et al. (2000) Minor salivary gland secretion in the elderly / W.A.Bretz, W.J.Loesche, Y.M.Chen et al. // Oral Surg., Oral Med., Oral Pathol., Oral Radiol, Endod. 2000. - Vol. 89, N 6. - P. 696-701.

108. Chase W.R. Salivary markers: their role in breast cancer detection // J. Okla. Dent. Assoc.-2000.-Vol. 91, N 1.-P. 10-11.

109. Chaushu G. et al. (2001) Salivary flow dynamics after parotid surgery: a preliminary report / G. Chaushu, S.Don, B.A.Sela et al. // Otolaryngol. Head. Neck. Surg. 2001. - Vol. 124, N 3. - P. 270-273.

110. Connell T. et al. (2001) Oral fluid collection by post for viral antibody testing / T.O'Connell, L.Thornton, D.O'Flanagan et al. // Int. J. Epidemiol.- 2001. Vol. 30, N 2. - P.298-301

111. Dawes C., O'Connor A.M., Aspen J.M. The effect on human salivary flow rate of the temperature of a gustatory stimulus // Arch Oral. Biol. 2000. Vol. 45, N 11.-P. 957-961.

112. Dawies C Physiological factors affecting salivary flow rate, oral sugar clearance, and the sensation of dry mouth in man // J. Dent. Res. 1987. -Vol. 66, Febr. - P. 648-652.

113. De Magalhaes M.G. et al. (2000) Diagnosis of HIV infection using saliva samples: comparative study between adults and children / M.G.De Magalhaes, K.L.Ortega, N.P.de Rezende, N.S.de Araujo // J. Clin. Pediatr. Dent. 2000. - Vol. 24, N 2. - P. 79-82.

114. Denovan L.A. et al. (2000) Saliva biomonitonng of atrazine exposure among herbicide applicators / L.A.Denovan, C.Lu, C.J.Hines, R.A.Fenske // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 2000. - Vol. 73, N 7. - 457-462.

115. Denver R. et al. (2000) Salivary endothelin concentrations in the assessment of chronic heart failure / R.Denver, A.Tzanidis, P.Martin, H.Krum // Lancet.- 2000. Vol. 355, N 9202. - P. 468-469.

116. Detection of high-risk groups and individuals for periodontal diseases: Laboratory markers from analysis of saliva / J.M.A.WiIton, M.A.Curtis, J.A.C.Sterne et al. // J. Clin. Periodontol. 1989. - Vol. 16, N 8. - P. 475483.

117. Dodds M.W., Yeh C.K., Johnson D.A. Salivary alterations in type 2 (non-insulin-dependent) diabetes mellitus and hypertension // Community Dent. Oral. Epidemiol. 2000. - Vol. 28, N 5. - P. 373-381.

118. Dorn LD, Hitt SF, Rotenstein D. Biopsychological and cognitive differences in children with premature vs. on-time adrenarche //Arch Pediatr Adolesc Med. 1999. - V153, N2. - P. 137-146.

119. Effimiadi G. et al. (1995) Butyric acid, a metabolic and product of anaerobic bacteria, inhibits B-lymfocyte function / G.Effimiadi, S.Valente, S.Mangiante et al. // Minerva stomatol. 1995. - Vol. 44, N 10. - P. 445447.

120. Eisana S. et al. (2001) Salivary HCV-antibodies; a follow-up cohort study of liver disease patients / S.Elsana, E.Sikuler, A.Yaan et al. // Clin. Lab.2001. Vol. 47, N 7-8. P. 335-338.

121. Ghezzi E.M., Lange L.A., Ship J. A. Determination of variation of stimulated salivary flow rates // J. Dent. Res. 2000. - Vol. 79, N 11. - P. 1874-1878.

122. Gocke R. et al. (1999) Components of antibacterial and fibrinolytic activity of human saliva in normal and disordered wound healing / R.Gocke, B.Rafalzyk, M.Seyfarth et al. // Mund. Kiefer Gesichtschir. 1999. - Vol. 3. N 1.-P. 38-42.

123. Gordi T. et al. (2000) Use of saliva and capillary blood samples as substitutes for venous blood sampling in pharmacokinetic investigations of artemisinin / T.Gordi, T.N.Hai, N.M.Hoai et al. // Eur. J. Clin. Pharmacol. -2000.- Vol. 56, N8.-P. 561-566.

124. Granger D.A. et all. (1999) Salivary testosterone determination in studies of child health and development / D.A.Granger, E.B.Schwartz, A.Booth, M.Arentz//Horm Behav. 1999.-V35,N1 -P.18-27.

125. Growth hormone and Cortisol in serum and saliva / P.J.Rantonen, l.Penttila, J.H.Meurman et al. // Acta. Odontol. Scand. 2000. - Vol. 58, N 6. - P. 299-303.

126. Guh J Y. et al. (2001) Significance of salivary epidermal growth factor in peptic ulcer disease in hemodialysis patients / J.Y.Guh, H.C.Chen, L.Y.Chuang et al // Nephron. 2001. - Vol. 87, N 2. - P. 134-138.

127. Heaney T.G. Inhibition of attachment of human gingival fibroblast-like cells in vitro by saliva and salivary-sulfated glycoprotein in the presence of serum // J. Periodontol. 1990. - Vol. 61, N 8. - P. 509-509.

128. Hedriana H.L. et al. (2001) Changes in rates of salivary estriol increases before parturition at term / H.L.Hednana, C.J.Munro, E.M.Eby-Wilkens, B.L.Lasley//Am. J. Obstet. Gynecol. 2001.-Vol. 184, N2.-P. 123-130.

129. Hereliuk V.I. The neutral lipid and total phospholipid content of the saliva in gingivitis and periodontitis // Lik. Sprava. 2000. - N 2. - P. 37-40.

130. Herkes G.K., Eadie M J. Salivary concentrations of antiepileptic drugs, oestradiol and progesterone throughout pregnancy in epileptic women //Clin Exp Neurol. 1992. - V29. - P.74-80.

131. Hernandez C.C., Donadi E.A., Reis M.L. Kininogen-Kallikrein-Kinin system in plasma and saliva of patients with Sjogren's syndrome // J. Rheumatol. 1998. - Vol. 25, N 12. - P. 2381-2384.

132. Hockers T., Lamy M. Oral dryness in geriatric patients // Rev. Beige. Med. Dent. 1999. - Vol. 54, N 1. - P. 41-50.

133. Hofman L.F. Human saliva as a diagnostic specimen // J. Nutr. 2001. -Vol. 131,N5.-P. 1621S-1625S.

134. Humphrey S.P, Williamson R.T. A review of saliva: normal composition, flow, and function//J. Prosthet. Dent. 2001. - Vol. 85, N 2. - P. 162-169. Igarashi M. et al. (1994)

135. Herzog A.G, Edelheit P.B, Jacobs AR. Low salivary Cortisol levels and aggressive behavior // Arch. Gen. Psychiatry. 2001. - Vol. 58, N 5. - P. 513-515.

136. Ilondu N. et al. (2000) Pharmacokinetics of diethylcarbamazine: prediction by concentration in saliva / N.Ilondu, O.E.Orisakwe, S.Ofoefule et al. // Biol. Pharm. Bull. 2000. - Vol. 23, N 4. - P. 443-445.

137. Immunoquantification of human salivary mucins MG1 and MG2 in stimulated whole saliva: factors influencing mucin levels / S.A.Rayment, B.Liu, G.D.Offner et al. // J. Dent. Res. 2000. - Vol. 79, N 10. - P. 17651772.

138. In vitro volatile sulfur compound production of oral bacteria in different culture media / M.Quirynen, J.Van Eldere, M.Pauwels et al. // Quintessence intern. 1999. - Vol. 30. - P. 351-356.

139. Ionescu S. et al (1998) Diurnal behaviour of some salivary parameters in patients with diabetes mellitus (flow rate, pH, thiocianat, LDH activity) -note II / S.Ionescu, D.Badita, M.Artino et al. // Rom. J. Physiol. 1998. -Vol. 35, N 1-2.-P. 85-89.

140. Jeng J.H. et al. (1999) Effects of butyrate and propioate on the adhesion, growth, cell cycle kinetics and protein synthesis of cultured human gingival fibroblasts / J.H Jeng, C.P.Chan, Y.S.Ho et al. // J. Periodontol. 1999. -Vol. 70.-P. 1435-1442.

141. Jenkins R.A, Counts R.W. Personal exposure to environmental tobacco smoke: salivary cotinine, airborne nicotine, and nonsmoker misclassification // J. Expo. Anal. Environ. Epidemiol. 1999. - Vol. 9, N 4. - P. 352-363.

142. Jurjus A. et al. (1999) The impact of new technologies on health. Saliva as a valuable diagnostic tool. Minireview / A.Jurjus, R.Serhan, D.Ilyia, E.Ilyia // J. Med. Liban. 1999. - Vol. 47, N 5. - P. 297-300.

143. Decreased salivary function in patients with end-stage renal disease requiring hemodialysis / C.H.Kao, J.F.Hsieh, S.C.Tsai et al. // Am. J. Kidney. Dis. 2000. - Vol. 36, N 6. - P. 1110-1114.

144. Kao C.H. et al. (2000). Decreased salivary function in patients with endstage renal disease requiring hemodialysis / C.H.Kao, J.F.Hsieh, S.C.Tsai et al. // Am. J. Kidney. Dis. 2000. - Vol. 36, N 6. - P. 1110-1114.

145. KnowlesJ. Dog saliva complicates the healing of ulcers // Nurs. Times. Vol. 96, N 4. P. 8.

146. Kim N. et al. (2000) Helicobacter pylori in dental plaque and saliva / N.Kim, S.H.Lim, K.H.Lee et al. // Korean. J. Intern. Med. 2000. - Vol. 15, N3.-P. 187-194.

147. Kintz P., Cirimele V., Ludes B. Detection of cannabis in oral fluid (saliva) and forehead wipes (sweat) from impaired drivers // J. Anal. Toxicol. -2000. -Vol. 24, N 7. P. 557-561.

148. Kleeberg U.R. Plasma and salivary pharmacokinetics of 5-fluorouracil // Strahlenther. Onkol. 2000. - Vol. 176, N 5. - P. 240-241.

149. Kongara K., Varilek G., Soffer E.E. Salivary growth factors and cytokines are not deficient in patients with gastroesophageal reflux disease or Barrett's esophagus // Dig. Dis. Sci. 2001. - Vol. 46, N 3. - P. 606-609.

150. Kongara K.R., Soffer E.E. Saliva and esophageal protection // Am. J. Gastroenterol. 1999. - Vol. 94, N 6. - P. 1446-1452.

151. Kos-Kudla B. et al. (1996) Serum, salivary and urinary Cortisol level in the evaluation of adrenocortical function in-patients with bronchial asthma / B.Kos-Kudla, B.Buntner, B.Marek et al. // Endocr. Regul. 1996. - Vol. 30, N4.-P. 201-206.

152. Kudo I. Mammalian cellular phospholipases A2 and their physiological roles // J. Pharm. Soc. Jap. 1991. - Vol. 111, N 9. - P. 488-498.

153. Kurita-Ochiwi T., Fukushima K., Ochiai K. Volatile fatty acid, metabolic byproducts of penodoopathic bacteria, inhibit lymphocyte and cutocine production // J. Dent. Res. 1995. - Vol. 74. - P. 1367-1373.

154. Laine M., Pienihakkinen K. Salivary buffer effect in relation to late pregnancy and postpartum // Acta Odontol. Scand. 2000. - Vol. 58, N 1. -P. 8-10.

155. Landc G., Dudouet D., Escande D. Measurement of potassium concentration in salivary and sweat fluids as a screening test for the long QT1 syndrome // Int. J. Cardiol. 2001. - Vol. 77, N 2-3. - P. 323-324.

156. Lin Y.T. et al. Deficiency of the specific granule proteins, R-binder/transcobalamin I and lactofernn, in plasma and saliva: a new disorder //Am. J. Med. Genet. 2001. - Vol. 100, N2.-P. 145-151.

157. Lin Y.T., Lu S.Y. Effects of fluoride chewing gum on stimulated salivary flow rate and fluoride content // Chang. Gung. Med. J. 2001. - Vol. 24, N 1.-P. 44-49.

158. Liskovitch M., Cantley L.C. Lipid second messengers // Cell. 1994. - Vol. 77, № 33. - P. 329-334.

159. Longman L.P. et al. (2000) The clinical assessment of oral dryness is a significant predictor of salivary gland hypofunction / L.P.Longman, C.F.McCracken, S.M.Higham, E.A.Field // Oral Dis. 2000. - Vol. 6, N 6. - P. 366-370.

160. Markopoulos A.K. et al. (2001) Epidermal growth factor in saliva and serum of patients with cyclosponn-induced gingival overgrowth / A.K.Markopoulos, M.Belazi, D.Drakoulakos et al. // J. Periodontal. Res. -2001.-Vol. 36, N2.-P. 88-91.

161. McKinney E.T. et al. (2000) Plasma, urinary, and salivary 8-epi-prostaglandin f2alpha levels in normotensive and preeclamptic pregnancies /

162. Morita M., Wang H.L. Association between oral malodor and adult periodontitis: a review // J. Clin. Penodontol. 2001. - Vol. 28, N 9. - P. 813-819.

163. Nagler R.M., Klein I., Reznick A.Z. The interaction between saliva and cigarette smoke and its devastating biological effects as related to oral cancer // Harefuah. 2001. - Vol. 140, N 7 - P. 614-618, 677.

164. Negoro M. et al. (2000) Oral glucose retention, saliva viscosity and flow rate in 5-year-old children / M.Negoro, H.Nakagaki, S.Tsuboi et al. // Arch. Oral. Biol.-2000.-Vol. 45, N 11.-P. 1005-1011.

165. Niedbala R.S. et al. (2001) Immunoassay for detection of cocaine/metabolites in oral fluids / R.S.Niedbala, K.Kardos, T.Fries et al. // J. Anal. Toxicol. 2001. - Vol. 25, N 1. - P. 62-68.

166. Nikiforuk G. Understuding dental Caries. II. Prevention. Basic Clinical aspects. Basel, 1985. - 288 p.

167. Noppornpanth S. et al. Detection of HbsAg and HBV DNA in serum and saliva of HBV carriers / S.Noppornpanth, N.Sathirapongsasuti, V.Chongsnsawat, Y.Poovorawan // Southeast. Asian. J. Trop. Med. Public. Health. 2000. - Vol. 31, N 2. - P. 419-421.

168. Ohashi M., Iwase M., Nagumo M. Elevated production of salivary nitric oxide in oral mucosal diseases // J. Oral Pathol. Med. 1999. - Vol. 28, N 8. -P. 355-359.

169. Owen L., McNeill A. Saliva cotinine as indicator of cigarette smoking in pregnant women // Addiction. 2001. - Vol. 96, N 7. - P. 1001 -1006.

170. Palmer L.B. et al. (2001) Oral clearance and pathogenic oropharyngeal colonization in the elderly / L.B.Palmer, K.Albulak, S.Fields et al. // Am. J. Respir. Cnt. Care. Med. 2001. - Vol. 164, N 3. - P. 464-468.

171. Perlik F., Pucelikova T., Slanar O. Use of the paraxanthine/caffeine ratio in the saliva of patients with liver cirrhosis // Cas. Lek. Cesk. 2001. - Vol. 140, N2.-P. 51-53.

172. Petrovich Yu.A. et al. (2000)Effect of cariogenic diet on components of rats saliva / Yu.A.Petrovich, V.A.Zubov, R.P.Podoroznaja et al. // 16 International Conference on oral biology. Saliva in health and disease. -Chantilly, USA, 2000. P. 27.

173. Petrovich Yu.A., Podoroznaja R.P. Discharge of 14C-glycine and 35S-methionine by salivary glands during conditioned secretion // Nat. Sci. Found. USA, 1962. Vol. 143. - P. 404-406.

174. Rajda C. et al. Amino aacids in the saliva of patients with migraine // Headache. 1999. - Vol. 39, N 9. - P. 644-649.

175. Rantonen P.J, Meurman J.H. Correlations between total protein, lysozyme, immunoglobulins, amylase, and albumin in stimulated whole saliva during daytime // Acta. Odontol. Scand. 2000. - Vol.58, N 4. - P. 160-165.

176. Rayment S.A. et al. The effects of duration and intensity of stimulation on total protein and mucin concentrations in resting and stimulated whole saliva // J. Dent. Res. 2001. - Vol. 80, N 6.

177. Retton V. et al. (2000)Control of salivary secretion by nitric oxide and its role in neuroimmunomodulation / V.Retton, A.Lomniczi, J.C.Elverdin et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2000. - Vol. 917. - P. 258-267.

178. Rivera V. et al. (2001)IgA and IgM anti-Naegleria fowlen antibodies in human serum and saliva / V.Rivera, D.Hernandez, S.Rojas et al. // Can. J. Microbiol. 2001. - Vol. 47, N 5. - P. 464-466.

179. Reynolds L.A. What you should know about on-site saliva drug and alcohol testing // Occup. Health. Saf. 2001. - Vol. 70, N 9. - P. 188-190.

180. Saksena R, Bartlett D.W, Smith B.G. The role of saliva in regurgitation erosion // Eur. J. Prosthodont. Restor. Dent. 1999. - Vol. 7, N 4. - P. 121124.

181. Salivary and gastric epidermal growth factor in patients with ZollingerEllison syndrome: its protective potential / J.Sarosiek, R.T.Jensen, P.N.Maton et al. // Am. J. Gastroenterol. 2000. - Vol. 95, N 5. - P. 11581165.

182. Salivary Cortisol levels and anxiety are not increased in women destined to develop preeclampsia / J.M.Sikkema, P.G.Robles de Medina, R.R.Schaad et al. // J. Psychosom. Res. 2001. - Vol. 50, N 1.-P. 45-49.

183. Salivary immunoglobulin A antibodies to gp41 in human immunodeficiency virus-seropositive patients: lack of correlation with disease progression / M.J.Toro, L.Escalona, P.Chaiyarit et al. // Oral. Microbiol. Immunol. -2001.-Vol. 16, N3.-P. 188-192.

184. Silva M.A. et al. Gastroesophageal reflux disease: New oral findings // Oral Surg., Oral Med., Oral Pathol., Oral Radiol., Endod. 2001. - Vol. 91, N 3. -P. 301-310.

185. Seidel B.M. et al. Secretory IgA, free secretory component and IgD in saliva of newborn infants // Early Hum. Dev. 2001. - Vol. 62, N 2. - P. 159-164.

186. Song Q. et al. (2000) Helicobacter pylori in the oral cavity: high prevalence and great DNA diversity / Q.Song, A.Spahr, R.M.Schmid et al. // Dig. Dis. Sei. 2000. - Vol. 45, N 11. - P. 2162-2167.

187. Sreebny L.M. Saliva in health and disease: an appraisal and update // Int. Dent. J. 2000 Vol. 50, N3.-P. 140-161.

188. Suarez Lopez de Vergara R. et al. Smoking in adolescents, saliva cotinine concentrations and respiratory disease // An Esp. Pediatr. 2001. - Vol. 54, N2.-P. 114-119.

189. Shugars D.C. et al. Hyper-excretion of human immunodeficiency virus type 1 RNA in saliva//J. Dent. Res. 2001. - Vol. 80, N 2. - P. 414-420.

190. Shugars D.C., Watkins C.A., Cowen H.J. Salivary concentration of secretory leukocyte protease inhibitor, an antimicrobial protein, is decreased with advanced age // Gerontology. 2001. - Vol. 47, N 5. - P. 246-253

191. Schmekel B. et al. (2001)Eosinophil cationic protein (ECP) in saliva: a new marker of disease activity in bronchial asthma / B.Schmekel, J.Ahlner, M.Malmstrom, P.Venge // Respir. Med. 2001. - Vol. 95, N 8. - P. 670675.

192. Streckfus C. et al. (2000)The presence of soluble c-erbB-2 in saliva and serum among women with breast carcinoma: a preliminary study / C.Streckfus, L.Bigler, T.Dellinger et al. // Clin. Cancer. Res. 2000. - Vol. 6, N 6. - P. 2363-2370.

193. Synanen S.M. et al. (1990) Free amino acid levels in oral fluids of normal subjects and patients with periodontal disease / S.M.Synanen, L Alakuula, P. Alakuula et al. // Arch. Oral. Biol. 1990. - Vol. 35, N 3. - P. 189-193.

194. Tay P.Y., Lenton E.A. The optimum time for exogenous human chorionic gonadotropin to rescue the corpus luteum. J Assist Reprod Genet. 1999 Oct;16(9):495-9

195. Tanner A. et al. Microbiotia of health, gingivitis and initial periodontitis // J. Clin. Penodontol. 1998. - N 2. - P. 85-89.

196. Therapeutic drug monitoring of once daily gentamicin in serum and saliva of children / M.Berkovitch, M.Goldman, R.Silverman et al. // Eur. J. Pediatr.2000. Vol. 159, N 9. - P. 697-698.

197. Tsiropoulos I., Kristensen O., Klitgaard N.A. Saliva and serum concentration of lamotrigine in patie

198. Turan T. et al. nts with epilepsy // Ther. Drug Monit. 2000. - Vol. 22, N 5.-P. 517-521.(2000)

199. Turan T. et al. Free and total prostate-specific antigen levels in saliva and the comparison with serum levels in men // Eur. Urol. 2000. -Vol. 38, N 5. - P. 550-554

200. Uhlig T. et al. Sicca symptoms, saliva and tear production, and disease variables in 636 patients with rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis. -1999. Vol. 58, N7. P 415-422.

201. Van Steijn G.J. et al. (1999) hitinase in whole and glandular human salivas and in whole saliva of patients with periodontal inflammation / G.J.Van Steijn, A.V.Amerongen, E.C.Veerman et al. // Eur. J. Oral Sci. 1999. -Vol. 107, N5.-P. 328-337.

202. Vila L. et al. Variations of serum eosinophil cationic protein and tryptase, measured in serum and saliva, during the course of immediate allergic reactions to foods / L.Vila, M.L.Sanz, G.Sanchez-Lopez et al. // Allergy.2001.-Vol. 56, N6.-P. 568-572.

203. Walton A G. et al. Oral health and juvenile idiopathic arthritis: a review / A.G.Walton, R.R.Welbury, J.M.Tho. 2000.

204. Wang B. et al. A longitudinal study of salivary sialic acid in preterm infants: Comparison of human milk-fed versus formula-fed infants // J. Pediatr. -2001.-Vol. 138, N6.-P. 914-916.

205. Willers S. et al. Assessment of environmental tobacco smoke exposure in children with asthmatic symptoms by questionnaire and cotinine concentrations in plasma, saliva, and urine // J. Clin. Epidemiol. 2000. -Vol. 53, N7.-P. 715-721.

206. Wu Q., Yang M., Zhong D. Antibacterial activity of histidine-nch polypeptides in human parotid saliva // Zhonghua. Kou. Qiang. Yi. Xue. Za. Zhi. 1997. - Vol. 32, N 6. - P. 356-359.

207. Wu X., Jackson S. Plasma and salivary IgG subclasses in HIV type 1 infection: evidence of both transudation and local synthesis of IgG in parotid saliva // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2000. - Vol. 20, N 16. - P. 14231431.

208. Xu J., Xu X., Verstraete W. Quantitative measurement of the nitrate reductase activity in the human oral cavity // Food Chem. Toxicol. 2001. -Vol. 39, N 4. - P. 393-400.

209. Yeh C.K. Association of salivary flow rates with maximal bite force // J. Dent. Res. 2000. - Vol. 79, N 8. - P. 1560-1565.

210. Yurdukoru B., Terzioglu H., Yilmaz T. Assessment of whole saliva flow rate in denture wearing patients // J. Oral. Rehabil. 2001. - Vol. 28, N 1. -P. 109-112

Информация о работе

Рыскина, Елена Анатольевна
кандидата биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Аналитические подходы к изучению показателей метаболизма в ротовой жидкости - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно