Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Клинико-морфологические проявления гепатопатий собак в условиях города Тюмени

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологические проявления гепатопатий собак в условиях города Тюмени"

На правах рукописи

КРАСНОЛОБОВА Екатерина Павловна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ГЕПАТОПАТИИ СОБАК В УСЛОВИЯХ ГОРОДА ТЮМЕНИ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

8 АПР 2015

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

005567086

Омск-2015

005567086

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Государственный аграрный университет Северного Зауралья"

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Сидорова Клавдия Александровна

доктор биологических наук, профессор

Дроздова Людмила Ивановна

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой анатомии, гистологии ФГБОУ ВПО "Уральский государственный аграрный университет"

Хазнмухаметова Идалья Фуатовна

доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры диагностики и терапии ФГБОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины"

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО "Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д. Н. Прянишникова"

Защита состоится "7" мая 2015 г., в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина по адресу: 644008, г. Омск, ул. Институтская площадь, 2, тел. (3812) 24-39-63, факс (3812) 24-39-63, e-mail: leschevag-ilistRi

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина www.omgau.ru

Автореферат разослан «

<Л

2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. ветеринар, наук, доцент

¿'■f'^f- Лещёва Надежда Алексеевна

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В результате нарушения деятельности печени организм начинает испытывать недостаток в питательных веществах, страдает от интоксикации, в нем нарушается баланс воды и обмен веществ. К счастью, этот орган обладает огромными функциональными резервами, а его паренхима в случаях повреждений способна регенерироваться (Х.Г. Ниманд, П.Ф. Сутер, 2008; В. Бьюрж, 2010). Исследование домашних животных с предполагаемым первичным гепатобилиарным заболеванием обычно бывает достаточно сложным, поскольку ни один из существующих в настоящее время диагностических тестов не обладает должной чувствительностью и специфичностью. Задача осложняется тем, что печень играет многоплановую роль в процессе пищеварения, промежуточном метаболизме, биосинтезе и выделении продуктов распада, в результате чего симптомы заболевания печени являются неспецифическими и она становится уязвимой и поражается при системных нарушениях организма (Р. Кирк, Д. Бонагура, 2005; В.Н. Денисенко, Е.А. Кесарева, 2006). Все возрастающие требования к информативности лабораторных тестов выдвигают на повестку дня необходимость многостороннего и комплексного обследования животного с использованием методов позволяющих выявить скрытые функциональные нарушения в органах. Так как печень занимает ключевые позиции в поддержании гомеостаза, играет важную роль в адаптационных реакциях организма, поддерживает межорганные и межсистемные связи, то вполне обосновано рассмотрение механизмов развития патологического процесса при гепатозах с учетом характера выраженности и направленности метаболических реакций (Р. Keller, U. Freudiger, 1983; B.B. Меньшиков и др., 1985; N.C. Jain, 1993; A.S. Center, 1995; В.Г. Морозова, 1996; C.B. Козлов, 2004). С целью выяснения патогенетической сущности патологических процессов, происходящих в организме, для своевременного целенаправленного лечения и профилактики нужны знания клинико-функциональных и структурных особенностей нарушений, происходящих в печени (К.А. Сидорова, 2000).

В связи с этим поиск дополнительных методов исследования, а также уточнение ряда специальных методов для более точной диагностики патологий печени у собак с учетом среды обитания весьма актуально и необходимо в практике ветеринарного врача. Работа выполнялась в соответствии с основными направлениями научных исследований ФГБОУ ВПО "ГАУ Северного Зауралья" (№ гос. регистрации 0120.0503976).

Степень ее разработанности. Существенный вклад в изучение проблемы диагностики гепатопатий у собак по изменениям показателей крови внесли Уша Б.В., Савкин H.A., Уошебау Р., Анохин Б.М., Сысуева A.B., Казаков Д.Н. и другие. Однако в их трудах не рассматриваются индексы эндогенной интоксикации, а также диагностическая значимость некоторых показателей экзокринной функции печени. Проблеме ультразвуковой диагностики патологий печени уделяли внимание Колб X., Дорошина Т.В., Мавлитов С.С., Барр Ф. и другие, но в их исследованиях отражены только качественные изменения паренхимы печени, что является весьма субъективным показателем при обследовании.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является изучение особенностей функциональных и структурных изменений в печени при ее патологиях у собак в условиях городской среды для разработки методов ранней диагностики и коррекции.

В соответствии с целью работы нами были поставлены следующие задачи:

1. изучить распространение, этиологию проявления гепатоцеллюлярной недостаточности в условиях ветеринарных клиник г.Тюмени;

2. изучить информативность и диагностическую ценность клинико-морфологических и метаболических показателей при патологиях печени;

3. изучить специфические изменения в печени в зависимости от патологического процесса при ультразвуковой диагностике;

4. изучить влияние лекарственной композиции на функциональное состояние печени при использовании ее с целью профилактики и лечения.

Научная новизна. Изучено распространение основных видов гепатопатий собак в условиях г. Тюмени. Выявлены основные этиологические факторы, вызывающие данные патологии в зависимости от возраста, породы и сопутствующих заболеваний. Изучены морфологические и биохимические показатели крови здоровых и больных животных, качественные и количественные ультразвуковые показатели при некоторых патологиях печени собак. Изучено действие нового способа лечения клинически выраженного гепатоза собак. Выявлена высокая терапевтическая эффективность применения лекарственной композиции, состоящей из урсодеоксихолевой кислоты, селена и настоя лекарственных трав (цветков ромашки и листьев березы) при гепатозах собак.

Теоретическая и практическая значимость. Разработанные практические предложения внедрены в клиническую практику и используются для диагностики и лечения в ветеринарных клиниках г.Тюмени "Ветэкспресс", "Доктор-А", Центре кинологической службы УМВД России по Тюменской области, а также в учебном процессе в Институте биотехнологии и ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО "ГАУ Северного Зауралья" при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсу: "Болезни собак и кошек", "Кинология", "Лабораторная диагностика", "Методы инструментальной диагностики", "Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных". Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО Пермской государственной сельскохозяйственной академии им. академика Д. Н. Прянишникова.

По итогам выполненной работы получен патент на изобретение №2490018 "Способ терапии гепатозов собак" от 20.08.2013 г.

Методология и методы исследования. Методологическая основа исследований - анализ и синтез информации по проблеме диагностики и терапии патологий печени, представленной в отечественных и зарубежных источниках литературы, а также полученной в экспериментальных условиях.

Объектами исследования служили собаки с расстройствами гепатобилиарной системы, которые обращались в ветеринарные клиники г. Тюмени. Исследования проведены на кафедре анатомии и физиологии ФГБОУ ВПО "ГАУ Северного Зауралья" за период с 2011 по 2014 гг.

В работе использованы следующие методы исследований: патологоанатомические, гистологические, биохимические, ультразвуковые.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Основные клинико-гематологические, биохимические и морфофункциональные показатели в зависимости от вида гепатопатий собак.

2. Ультразвуковые показатели печени при различных патологиях.

3. Научное обоснование использования лекарственной композиции для лечения собак, больных гепатозом.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов подтверждается организацией большого количества экспериментов в лабораторных и производственных условиях с использованием комплекса современных методов исследований и статистической обработкой цифрового материала с помощью программы одно- и многофакторного корреляционного и регрессионного анализов, а также одним из вариантов регрессионного метода - дискретно-динамическим анализом. Степень достоверности полученных показателей оценена путем сравнения величин вариационных рядов с помощью критерия Стьюдента.

Основные положения диссертационной работы представлены на международной научно-практической конференции молодых ученых ТГСХА "Научные исследования - основа модернизации сельскохозяйственного производства" (Тюмень, 2011); на региональной научно-практической конференции молодых ученых ТГСХА "Инновационное развитие АПК Северного Зауралья"(Тюмень, 2012); на региональной научно-практической конференции молодых ученых ГАУ Северного Зауралья "Перспективы развития АПК в работах молодых ученых" (Тюмень, 2014); на международной научно-практической конференции Пермской ГСХА им. академика Д.Н. Прянишникова "Инновации аграрной науки - предприятиям АПК" (Пермь, 2012); на VII международной научно-практичной конференции "Альянс наук: вчений - вченому" (Киев, 2012); на международной научно-практической конференции «Современная наука -агропромышленному производству» (Тюмень, 2014).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (журналы: "Фундаментальные исследования" - 1, "Агропродовольственная политика" - 1) и патент на изобретение Российской Федерации.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственного исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 175 источников, в том числе 37 на иностранных языках. Работа содержит 11 таблиц, 16 рисунков.

2. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1. Материалы и методы исследований

Научно-исследовательская работа выполнялась в 2011-2014 гг. на кафедре анатомии и физиологии ФГБОУ ВПО "ГАУ Северного Зауралья", а также в производственных условиях на базе ветеринарных клиник города Тюмени «Ветэкспресс», «Доктор А». В ходе работы было изучено 308 историй болезни с диагнозом гепатопатия. Проведено клиническое обследование более 400 собак по общепринятым методикам.

Общий анализ крови проводили на гематологическом анализаторе Medonic СА 620. Из лейкоформулы вычисляли индексы эндогенной интоксикации по

, пн + сн следующим формулам: ЛИИ =-,

1 LYM +EOS + MONO

г,,, MONO + ПИ FO^ + EAT + ПН+ СН ПН + СН LYM

Я И =-—- мел К = ^ + + иснм = НСЛМ :

СИ MONO + LYM ' MONO MONO

илсоэ = шсс6э ил г - = =

100 ) ПН + СИ + EOS ) ПН+СН ; LYM , где ПН

3

- палочкоядерные нейтрофилы (%), СН - сегментоядерные нейтрофилы (%), LYM

- лимфоциты (%), EOS - эозинофилы (%), MONO - моноциты (%), БАЗ - базофилы (%), WBC - количество лейкоцитов (Ю'/л), СОЭ - скорость оседания эритроцитов (мм/ч).

В сыворотке крови на полуавтоматическом биохимическом анализаторе Clima МС-15 определяли изменения активности АЛТ, ACT, щелочной фосфатазы, содержание мочевины, креатинина, общего белка, альбумина, общего билирубина, холестерина, триглицеридов, трансферрина, С-реактивного белка. Иммунодиагностику (иммуноглобулины А, М, G) и определение фибриногена проводили в лаборатории ИНВИТРО г.Тюмень.

Ультразвуковая диагностика проводилась на ультразвуковом сканере Medison SonoAce R3 конвексным, микроконвексным и линейным датчиками с частотой 2-8 МГц с использованием допплеров: цветного, энергетического, импульсно-волнового и высокочастотного импульсного.

После уточнения топографии печени проводили пункцию и забор клеточного материала паренхимы. Из полученного материала делали мазок, который окрашивали красителями гематофиксом или Дифф-Квиком. Мазок исследовали при большом увеличении по общепринятым методикам. С целью изучения морфологического состояния печени собак, больных гепатопатиями проводили гистологическое исследование.

Лечебную эффективность предложенного способа терапии испытывали на собаках с клинически выраженными признаками гепатоза, из которых были сформированы 4 группы по 15 собак: 1 контрольная и 3 опытные. Внедрение данного способа терапии при гепатопатиях проведено на 120 собаках.

Статистическую обработку результатов исследований проводили общепринятыми методиками (Е.К. Меркурьева, 1964).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Анализ заболеваемости собак гепатопатиями в условиях города Тюмени

Состояние окружающей среды в г. Тюмени продолжает оставаться неблагоприятным. Экологическая обстановка в Тюменской области оценивается как напряженная и опасная (Е.В. Чуба, В.Н. Родина, 2013). По материалам наблюдений, осуществляемых ФГБУ «Тюменский центр по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды» в г. Тюмени, можно говорить о неблагоприятной геоэкологической обстановке, несмотря на то, что в большинстве из них в последние годы степень загрязнения подземных вод уменьшилась. Таким образом, городская среда с различными экологическими проблемами влечет за собой очень серьезные последствия, которые приводят к различным заболеваниям незаразного характера.

При обследовании 403 собак было обнаружено, что гепатопатии составляют 14,1%, как самостоятельное заболевание и сопровождают множество других патологий. Из общей структуры гепатопатий собак нами были выделены следующие виды: 41,95% - гепатозы, при этом зачастую по биохимическому анализу крови не всегда можно поставить данный диагноз, т.к. показатели могут быть немного повышены, либо оставаться в пределах нормы. Из них 4% приходилось на жировой гепатоз, 24,71% - гепатиты, 12,07% - циррозы, 18,97% -холециститы (острые и хронические), 2,3% - новообразования печени, как доброкачественные, так и злокачественные.

Анализ возрастных характеристик собак, заболевших гепатопатиями в условиях домашнего содержания, показал, что болезни печени у этих животных регистрируются во всех возрастных группах. Наиболее подвержены заболеваниям печени собаки в возрасте от 9 лет до 16 лет. У животных в возрасте до 5 лет заболевания встречались в виде единичных случаев.

По результатам клинических и лабораторных исследований собак домашнего содержания выяснили, что гепатопатиями болеют в равной степени как беспородные, так и породистые животные.

Как известно, зачастую при различных заболеваниях наблюдаются поражения печени. По результатам анамнеза было выяснено, что гепатоцеллюлярная недостаточность проявилась: 80% - при нарушении обмена веществ; 76,9% - при заболеваниях желудочно-кишечного тракта; 74,1% - при инфекционных заболеваниях (парвовирусный гастроэнтерит, лептоспироз, короновироз и другие); 61,4% - при инвазионных заболеваниях (токсокароз^ пироплазмоз, описторхоз и другие); 45,5% - при заболеваниях сердечнососудистой системы; 41,7% - при несбалансированном кормлении; 31,4% - при заболеваниях мочеполовой системы; 20% - при гиподинамии; 17,9% - при заболеваниях дыхательной системы.

Таким образом, из общей структуры гепатопатий 41,95% составляют гепатозы, наиболее подвержены данному заболеванию беспородные собаки, пекинесы, пудели, азиатские овчарки, йоркширские терьеры.

Диагнозы гепатит (24,71% случаев) и холецистит (18,97% случаев) наблюдаются практически у всех рассматриваемых пород собак, однако гепатиты больше отмечались у пекинесов, пуделей, коккер-спаниелей, а холециститы - у такс, пекинесов и пуделей.

Цирроз ставился в 12,07% случаях, в основном беспородным собакам, немецким овчаркам и пекинесам. Новообразования наблюдались у беспородных собак, немецких овчарок, лабрадоров и бульмастифов и от общего количества выявляемых поражений печени составили 2,3%.

Таким образом можно заключить, что гепатоцеллюлярная недостаточность сопровождает в основном заболевания, связанные с нарушением обмена веществ, с заболеваниями желудочно-кишечного тракта, при различных инфекционных и инвазионных заболеваниях.

2.2.2. Морфофункциональное состояние печени собак при ее патологии

Нами были рассмотрены такие патологии как острый гепатит, липидоз и амилоидоз печени.

При жировом гепатозе печень у животных увеличена в объеме, набухшая, с притуплёнными краями. Капсула напряжена, консистенция дряблая. Окраска неравномерная ярко-желтого цвета. Исследуя патологический материал печени собак, нами отмечались нарушения балочного строения печени печеночные клетки подвержены некрозу или жировой дегенерации. В различных отделах долек много переполненных желчью капилляров. В просвете протоков находилось скопление большого количества слизи и слущенных клеток эпителия. Соединительнотканная основа стенок протока утолщена и инфильтрирована эозинофильными лейкоцитами. Центральная вена печеночных долек находится в состоянии хронической застойной гиперемии.

При амилоидозе печень бледная, светло-коричневого цвета. Из-за обширного накопления амилоида печень увеличена, дряблая и очень хрупкая, что может

сопровождаться внутрипеченочным кровотечением. На разрезе рисунок печеночных долек не различается. На ранних стадиях амилоидоза при небольшом увеличении обнаруживаются тонкие гомогенные бледно окрашенные тяжи или небольшие глыбки по ходу капилляров в основном в периферических частях долек, вокруг сосудов и в междольковой соединительной ткани. Происходит сдавливание и деформация печеночных балок, а также сужение просветов капилляров. На поперечном разрезе амилоид образует вокруг капилляров гомогенные кольца и муфты. Наблюдается отложение амилоида и в стенке центральной вены. В результате отложения амилоида в дольках под эндотелием капилляров (между стенкой капилляра и печеночной балкой) происходит сдавливание с одной стороны капилляров, а с другой - балок, что нарушает питание ткани, вызывая атрофию и гибель гепатоцитов. Атрофированные балки имеют вид тонких, угловатых пластинок, потерявших взаимную связь. Проходя в разных направлениях, они образуют небольшие перемычки между массами амилоида. В протоплазме атрофированных клеток при сильном увеличении можно найти зерна пигмента липофусцина и капли жира. Ядра гепатоцитов также подвергаются изменениям (пикнозу) и распаду.

При макроскопическом осмотре печень при остром гепатите увеличена. Печень может выступать за край реберной дуги. Край печени закруглен. Желчный пузырь увеличен с желчью темно-зеленого цвета. На разрезе печень ярко-красного цвета, рисунок сглажен. При микроскопическом исследовании печени при гепатите собак гепатоциты могут быть измененные. Наблюдается нечеткие контуры ядер гепатоцитов, которые могут содержать более двух ядрышек. В ядрах и купферовских клетках могут обнаруживаться крупные тельца-включения относительно постоянного размера и однородные по своей структуре. Возможна визуализация участков с выраженным некрозом в периацинарных областях. В гепатоцитах наблюдается вакуолизация цитоплазмы. Можно регистрировать расширение межбалочных капилляров, которые заполнены эритроцитами. Отек стромы в результате изменений сосудов. Воспалительная реакция также представлена клеточными инфильтратами, состоящими из лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов, макрофагов и плазматических клеток.

Следовательно, изучение морфофункционального состояния печени позволяет точно диагностировать патологию печени.

2.2.3. Данные лабораторных исследований крови при патологиях печени

2.2.3.1. Гематологические показатели и индексы эндогенной интоксикации

Для оценки уровня интоксикации и степени тяжести протекания гепатопатий мы исследовали целесообразность применения интегральных лейкоцитарных индексов крови, так как данный метод отличается простотой и доступностью для ветеринарных врачей. Для этого использовали морфологические показатели периферической крови собак.

При проведении исследований нами установлено, что в крови клинически здоровых животных содержится эритроцитов 9,85±0,68х1012/л, лейкоцитов 8,92±0,48х109/л, гемоглобина 9б,08±2,49 г/л, тромбоцитов 256,4±7,0х 109/л. При остром токсическом гепатите и острой форме гепатоза наблюдается лейкоцитоз, анемия и тромбоцитопения. При новообразованиях картина крови в целом несильно изменяется.

Лейкоцитарные индексы, в которых использованы параметры лейкоцитарной формулы, считаются показателями, характеризующими степень выраженности ЭИ в организме животных. Установлено, что они имеют диагностическое и прогностическое значение, так как позволяют оценить работу эффекторных механизмов иммунной системы, а также уровень иммунологической реактивности, определяющие процесс формирования неспецифических адаптационных реакций (B.C. Тихончук и др., 1992, М.А. Дерхо, Е.С. Самойлова, 2011).

Анализ интегральных индексов эндогенной интоксикации показал, что ЛИИ Кальф-Калифа при гепатопатиях повышается, при остром гепатите он составил -4,17±0,95 усл.ед., при гепатозе - 3,09±1,82 усл.ед., а при новообразованиях печени - 4,77±1,56 усл.ед. Это свидетельствует о значительном бактериальном компоненте эндогенной интоксикации. ЛИИ Кальф-Калифа может быть использован в основном в 1-2 сутки заболевания. ЛИИ был достоверно выше, чем у клинически здоровых животных при всех заболеваниях печени. Повышение ЛИИ связано с исчезновением эозинофилов, увеличением количества сегменгоядерных форм лейкоцитов, плазматических клеток и снижением числа лимфоцитов.

ИК является более чувствительным показателем эндогенной интоксикации, чем ЯИ Г.Д. Даштаянца. При остром токсическом гепатите и гепатозе по ИК можно говорить о средней степени тяжести эндогенной интоксикации, а при новообразованиях печени - о тяжелой. ЯИ Г.Д. Даштаянца при всех рассмотренных видах поражения печени позволяет оценить состояние животных как средней степени тяжести и говорит о наличии слабо выраженной интоксикации, а при новообразованиях печени практически не изменился, что позволяет говорить о малой информативности в данном случае.

Повышение ИСЛК при различных гепатопатиях свидетельствует об активном воспалительном процессе и нарушении иммунологической реактивности. Его увеличение связано со снижением числа эозинофилов и повышением количества палочко- и сегментоядерных нейтрофилов. ИСЛК является маркером реактивности организма при остром воспалительном процессе. ЛИ во всех случаях ниже нормативных значений, что свидетельствует о наличии эндогенной интоксикации, снижении гуморального иммунитета и повышение роли клеточного звена иммунитета. При остром токсическом гепатите (4,64±1,98 усл.ед.) и гепатозе.(4,24±4,63 усл.ед.) уровень ИЛСОЭ превышает нормативные показатели почти в 10 раз. Это свидетельствует о том, что интоксикация связана с аутоиммунными процессами. Снижение ИЛГ указывает на наличие эндогенной интоксикации у больных собак, связанной с инфекционным процессом.

На основании проведенных исследований можно сделать следующее заключение:

• Комплексная оценка гематологических интегральных лейкоцитарных индексов более информативна, чем изучение простой гемограммы. Она позволяет оценить развитие, течение, тяжесть воспалительного процесса и эндогенной интоксикации при различных видах гепатопатий у собак.

•При остром токсическом гепатите и гепатозе можно говорить о умеренно выраженной эндогенной интоксикации, которая возникла вследствие ретеционного механизма развития, при котором накопление эндогенных токсических субстанций происходит в результате нарушения их выделения;

активный воспалительный процесс и значительные нарушения иммунологической активности, при этом отмечено компенсирование эндогенной интоксикации.

• Уровень эндогенной интоксикации в организме собак при некоторых видах гепатопатий отражают: индекс Кребса, ЛИИ Кальф-Калифа; ЯИ Г.Д. Даштаянца; ЛИ; ИЛСОЭ.

2.2.3.2. Биохимические показатели при гепатопатиях собак

Проведенные исследования больных собак с различными патологиями печени свидетельствуют, что в крови в момент болезни происходят серьезные биохимические изменения, что отражается в показателях крови.

Гиперфосфатаземия, по данным наших исследований, наблюдается при остром токсическом гепатите (164,0±5,0 Ед/л). При малоактивных гепатозах значения щелочной фосфатазы незначительно повышены 121,0±2,43 Ед/л. При новообразованиях данный показатель составляет 90,0±5,09 Ед/л, что является верхней границей нормы.

Исходя из данных проведенных исследований (рисунок 1) нами установлено, что у больных гепатозом собак наблюдается снижение уровня холестерина (1,84±0,6 мкмоль/л), что предполагает возможное проявление печеночно-клеточной недостаточности. При острых гепатитах уровень холестерина в крови был повышен и составил 19,1 ±1,21 мкмоль/л.________ __________

ШОстрыйтоксический гепатит (п-Зб) £Э Здоровые животные (п-20)

Рисунок 1. Изменение биохимических показателей крови

Фибриноген является белком острой фазы воспаления. На основании данных, приведенных на рисунке I, низкая концентрация (ниже 1г/л) наблюдается при острых гепатитах, вероятно вследствие сниженного синтеза. Высокая концентрация наблюдалась у собак с гепатозом и новообразованиях печени (6,8±0,19г/л и 11,3±0,08 г/л соответственно). В результате полученных анализов установлено, что определение фибриногена можно использовать для дифференциальной диагностики поражения печени. Г'ипофибриногенемия выявляет острое диффузное поражение печени, а гиперфибриногенемия - опухоли печени.

Трансферрин - гликопротеин, который осуществляет транспорт железа, регулирует его поступление в клетки. (А.И. Хазанов, 1988). Повышение уровня трансферрина происходит при остром гепатите (0,93±0,03г/л). При гепатозе он составляет 0,23±0,01 г/л, что немного выше, чем у клинически здоровых животных. При новообразованиях происходит небольшое снижение трансферрина в сыворотке крови 0,18±0,03г/л.

Так как С-реактивный белок является результатом реакции организма на любое воспаление, то для дифференциальной диагностики данный показатель будет не информативен вследствие повышения во всех рассматриваемых нами случаях.

Триглицериды поступают в организм с пищей, а также синтезируются клетками жировой ткани, печени, кишечника. Уровень триглицеридов повышается только при остром токсическом гепатите 18,3±0,53 ммоль/л, в остальных случаях данный показатель был в пределах нормы.

Иммуноглобулины являются индикаторами нарушения иммунных процессов. В медицинской гепатологической практике широко используется определение ^ А, в, М. В доступных нам источниках не были выявлены их изменения при различных патологиях печени у собак.

Иммуноглобулин в в) является основным сывороточным

иммуноглобулином. Он осуществляет важные защитные функции в отношении патогенных микроорганизмов и токсинов в сосудистом русле, а также в экстраваскулярных пространствах, куда достаточно свободно проникает.

Иммуноглобулин М М) находится в основном в сосудистом русле. Играет важную защитную роль при бактериемиях на ранней стадии инфекции.

Иммуноглобулин А А), основная часть этого иммуноглобулина

содержится в секретах (молоко, секреты кишечного и респираторного трактов, желчь, слюна, слезная жидкость). Он осуществляет также защиту слизистых оболочек от патогенных микроорганизмов и потенциальных аутоаллергенов. Продуцируемый местно А играет важную роль в резистентности мельчайших желчных ходов к различным повреждениям (А.И. Хазанов, 1998).

Из полученных нами данных, представленных на рисунке 2, видно, что наиболее значительно повышение концентраций иммуноглобулинов сыворотки крови при острой форме гепатоза. Так, мы наблюдаем повышение концентрации иммуноглобулина А - 4,9±0,19 г/л, иммуноглобулина О - 46,2±1,68г/л и иммуноглобулина М - 25,63±1,30 г/л. При остром гепатите наблюдается только гипериммуноглобулинемия М, в среднем концентрация М равно 13,75±0,95 г/л. При новообразованиях печени наблюдается небольшое повышение всех иммуноглобулинов.

50 г

igG, г/л

М, г/л

Рисунок 2. Уровень иммуноглобулинов крови собак

оБ Клинически здоровые животные (0=20)

ш Острый токсический гепатит (п=36)

■ Ост ран форма гепатоза (п=18)

Новообразования печени (п=12)

Обобщая полученные данные можно сделать следующие заключения:

9

• при острых гепатитах наблюдается гиперфосфатаземия (164,0±5,0 Ед/л) гиперхолестеринемия (19,1±1,21 мкмоль/л), гипофибриногенемия (0,8±0,03г/л) повышение уровня трансферрина (0,93±0,03г/л) и триглицеридов (18,3±0,53ммоль/л), а также гипериммуноглобулинемия ^ М (13,75±0,95 г/л).

• при острых гепатозах щелочная фосфатаза незначительно повышена 121,0±2,43Ед/л, происходит снижение уровня холестерина (1,84±0,6мкмоль/л), также наблюдается гиперфибриногенемия (6,8±0,19г/л). Трансферрин составил 0,23±0,01г/л, что немного выше нормы. Наблюдается гипериммуноглобулинемия за счет повышения концентрации иммуноглобулина А - 4,9±0,19 г/л, иммуноглобулина в - 46,2±1,68 г/л и иммуноглобулина М - 25,63±1,30 г/л.

• при новообразованиях печени наблюдается высокая концентрация фибриногена (11,3±0,08 г/л), небольшое снижение трансферрина, щелочная фосфатаза повышается незначительно, триглицериды и холестерин находятся в пределах нормы, что свидетельствует о том, что данные показатели являются неинформативными. Также наблюдается незначительное повышение всех иммуноглобулинов.

• С-реактивный белок не является информативным для рассматриваемых патологий.

2.2.3.3 Ультразвуковая диагностика печени при ее основных патологиях

Среди наиболее информативных и доступных инструментальных методов исследования печени, ведущее место занимает ультразвуковые методы: эхография в В-режиме с допплерографией сосудистой системы. Для изучения изменений в сосудистой системе печени было проведено 70 комплексных ультразвуковых исследований у больных с диффузными поражениями печени (острым и хроническим гепатитом, жировой дистрофией печени).

В результате исследования качественных показателей нами были выявлены следующие изменения:

- при острых гепатитах: увеличение размеров печени (в 95% случаев), тупой край (85%), снижение эхогенности паренхимы во всех случаях, васкуляризация не нарушена, структура однородная, мелкозернистая (75%), но может протекать без изменения ультразвуковой картины, при сочетании с холангитом отмечают утолщение стенок внутрипеченочных желчных протоков.

- при хронических гепатитах: размеры были во всех случаях увеличены, особенно левая доля (в 15,38% только за счет левой доли наблюдалось увеличение и в 76,92% за счет обеих долей); эхогенность паренхимы повышена (у 38,46% собак), сосудистый рисунок обеднен; эхоструктура неоднородная, без очаговых образований; периферические отделы плохо визуализируются.

- при жировой дистрофии печени: небольшое увеличение размеров, контуры ровные; диффузное повышение эхогенности во всех случаях, структура паренхимы неоднородная, слабозернистая; в периферических отделах отмечали затухание эхосигналов и сосудистого рисунка, визуализация диафрагмального контура у 16,67% была затруднена, но просматривалась на всем протяжении.

С помощью режима импульсноволновой доплерографии мы оценивали качественные и количественные показатели кровотока в воротной вене и печеночных венах. При проведении наших исследований было выяснено (таблица 1), что диаметр воротной вены и печеночных вен собак с хроническим гепатитом практически не отклонялся от показателей клинически здоровых животных. Также при данной патологии происходит небольшое отклонение линейной

скорости в воротной вене, в среднем он составил 14,8±0,03см/с, у клинически здоровых собак данный показатель составил 15,0 ±0,6см/с.

Таблица 1. Динамика допплерографических параметров печеночного кровотока при диффузных заболеваниях печени собак_

Показатели Клинически здоровые животные Острый гепатит Хронический гепатит Жировая дистрофия печени

п=20 п=20 п=26 п=24

Диаметр воротной вены (см): -3-10кг - 10-25кг - 25-40кг - более 40кг 0.24 ± 0,02 0,3± 0,04 0.44 ±0,05 0,54 ±0,06 0,26±0,04 0.41±0,03 0.52±0,03* 0,56±0,06 0,25±0,01 0,34±0.03 0,45±0,06 0,53±0,08 0,18±0,01 0.26±0.03 0,28±0,06* 0,36±0,09*

Диаметр печеночных вен (см): -3-10кг - 10-25кг - 25-40кг - более 40кг 0,3 ± 0.04 0,45±0,05 0,48± 0.07 0,71 ±0,09 0,39±0,05 0,51 ±0.03 0.58±0,09* 0,75±0.07 0,33±0.02 0,46±0,02 0.57±0.03 0.74±0,06 0,27±0,02 0,34±0,05 0,38±0,06 0,61±0,07

Линейная скорость в воротной вене (см/с) 15 ±0,6 13,6±0,08* 14,8±0,03 13,1±0,06*

Примечание: * - рС0,О5

При остром гепатите у собак с различной массой регистрировалось расширение как печеночных, так и воротной вен. При этом наблюдалось небольшое снижение линейной скорости в воротной вене (13,6±0,08см/с), что объясняется затрудненным кровотоком вследствие сдавливания стенок сосудов отечными тканями. При жировой дистрофии печени наблюдалось наоборот уменьшение сосудов и снижение линейной скорости в воротной вене (13,1±0,0бсм/с). Это связано с выраженным воспалением, жировым перерождением и увеличением в размерах паренхимы печени.

Во всех случаях кровоток определялся ламинарным гепатопетального типа (направлен в сторону печени). Сосудистая архитектоника внутрипеченочных сосудов была не изменена.

Таким образом, на основании данных изучения ультразвуковой диагностики вен печеночного русла нами установлено, что диаметр сосудов и линейная скорость кровотока в воротной вене дает дополнительную информацию для постановки более точного УЗ-диагноза.

2.2.3.4. Анализ лечебных мероприятий при гепатозах собак

Изучение влияния предложенной нами схемы лечения на клинический статус и функциональное состояние печени было проведено в нескольких разновозрастных группах собак. Апробация лекарственной композиции была проведена в условиях ветеринарных клиник г.Тюмени "Ветэкспресс" и "Доктор А".

Было сформировано 3 опытных и 1 контрольная группа. В каждой опытной и контрольной группе находилось по 15 собак больных клинически выраженным

гепатозом. Всем животным были проведены клинические и лабораторно-диагностические исследования, а также ультразвуковая диагностика. Опытным группам собакам давали лекарственную композицию в следующих дозах и режимах - Урсосан 10 мг/кг, Змкг/кг селена и 1 мл/кг растительного сбора 2 раза в день в течение 30 дней: 1 группа собаки в возрасте старше 9 лет, 2 группа - собаки в возрасте 7-9 лет, 3 группа - собаки в возрасте 5-7 лет. Для лечения собак контрольной группы в течение 30 суток применяли стандартную схему лечения — проводили терапию с применением препарата «Эссенциале» 10мг/кг живой массы курсом 25-30дней, но-шпу по 0,04мл/1 кг живой массы 1 раза в день, в/м (5 дней); гамавит по 1-5 мл, 1 раза в день, п/к (7 дней).

Лечение в первые дни для животных всех групп сопровождалось инфузионной терапией, всем собакам назначали натрия хлорид 0,9% 10-25мл/кг 1 раз в день внутривенно, цефотаксим 30 мг/кг 1 раз в день внутривенно в течение 3 дней и диету.

При оценке эффективности препарата (таблица 2) во внимание бралось отсутствие или наличие клинических признаков, результаты исследования биохимических показателей крови, результаты ультразвуковой диагностики. Учет клинического состояния собак, больных гепатозом осуществляли на 7, 15 и 30 сутки лечения.

Таблица 2. Эффективность схем лечения

Показатель Группа собак

Контрольная (п=15) 1 группа (п=15) 2 группа (п=15) 3 группа (п=15)

Выздоровело за 30 дней лечения, голов 11 12 15 15

Выздоровело за 30 дней лечения, % 73,33 80 100 100

Сроки выздоровления, сутки 39,1 ±3,2 38,6±2,5 30,1±3,4 27,3±1,6

Перед началом лечения у всех подопытных собак были следующие симптомы: вялость, отказ от корма, шерстный покров тусклый, небольшая желтушность видимых слизистых оболочек, болезненность при пальпации живота в области печени.

На 7 сутки лечения, согласно указанных схем, общее состояние у собак контрольной и 1 опытной группы оставалось без изменений. У собак 2 и 3 опытных групп происходило восстановление аппетита, двигательная активность собак повысилась, слизистые оболочки и кожа стали приобретать физиологическую окраску. У собак 1 и контрольный группы желтушность осталась без видимых изменений. У всех животных, в зависимости от индивидуальных особенностей организма и тяжести процесса, по мере лечения на 3-8-й дни отмечалось восстановление аппетита.

На 15 сутки лечения у 73,33% собак контрольной группы, у 80% 1 опытной группы и у всех собак 2 и 3 группы аппетит восстанавливался полностью. Собаки всех групп стали активнее. При пальпации печень была безболезненной.

К концу лечения двигательная активность собак всех групп повысилась, шерстный покров приобрел блеск, слизистые оболочки и кожа приобрели физиологическую окраску. У собак 1 и контрольный группы желтушность не пропала, но стала намного меньше.

Следовательно, можно утверждать, что применение предложенной нами лекарственной композиции при клинически выраженном гепатозе собак более активно восстанавливает клиническое состояние животных, чем общепринятое лечение.

В результате проведенных исследований крови установлено, что введение исследуемых схем лечения способствовало увеличению количества эритроцитов, гемоглобина и снижению уровня лейкоцитов до нормативных значений во всех группах собак.

Анализируя содержание альбуминов (рисунок 3} можно сказать, что в 3 опытной группе произошло их увеличение до нормативных значений уже на 7-й день (уровень составил 24,5±0,02г/л), в отличие от контрольной группы, в которой данный показатель достиг нормативных значений на 30-й день терапии. В 3 контрольной группе наблюдалось снижение до нормативных значений уже на 7-й день лечения таких показателей как глобулин (31,6±0,40г/л), AST (47,5±0,82Ед/л), ALT (62,5±0,23Ед/л) (рисунки 5,6), в то время как в остальных исследуемых группах происходило небольшое уменьшение данных показателей. Общий билирубин (рисунок 4) и щелочная фосфатаза на 30-й день терапии в контрольной (9,4±0,56мкмоль/л и 93,8±l,05u/L) и 3 опытной группе (9,3±0,63мкмоль/л и 83,6±l,23u/L) было в пределах нормы, однако более быстрое снижение данных показателей наблюдалось в 3 группе.______ _____

30 25 20 15 10 5 О

сунок 3. Уровень альбуминов, g/L Рисунок 4. Уровень билирубина, мкмоль/л

— я Контрольна я группа (п=15) ■ 1 опытная (п=15)

я 2 опытная (, (п=15)

я 3 опытная (п=15)

Рисунок 5. Уровень А5Т,и/Ь Рисунок 6. Уровень АЬТ,ц/Ь

Таким образом на основании анализа лабораторных данных можно утверждать, что использование лекарственной композиции положительно влияет

1й 7й ЗОЙ день день день

■ Контрольная 60

группа(п=15) 50

■ 1 опытная 40

(п=15) 30

®2 опытная 20

(п=15) 10

0

■ 3 опытная

(п=15)

ЗОЙ день

■ Контрольная группа(п=15)

■ 1 опытная (n=lS)

2 опытная <п=15)

■ 3 опытная (п=15)

Ри

1й 7й ЗОЙ день день день

■ Контрольная группа (п=15)

■ 1 опытная (п=15)

S2

опытная(п-15 )

■ 3 опытная (п=15)

150

100

1й 7й ЗОЙ день день ден1

на метаболический статус больных собак, выражающееся в более быстром терапевтическом эффекте, чем стандартная схема лечения.

Ультразвуковая картина печени в начале лечения у всех животных была следующая: увеличение размеров печени, тупой край, повышение эхогенности паренхимы, васкуляризация не нарушена, структура однородная, мелкозернистая. Во всех контрольных и опытных группах ультразвуковые признаки поражения были выявлены, т.к. полной регенерации при данной патологии не происходит, однако во 2 и 3 группах печень находилась в пределах анатомической нормы.

У собак, которым применяли лекарственную композицию в указанных дозировках, побочных эффектов не наблюдалось.

Таким образом, в результате проведенных нами исследований установлено, что предложенная схема лечения (Урсосан 10 мг/кг, Змкг/кг селена и 1 мл/кг растительного сбора 2 раза в день в течение 30 дней) оказалась более эффективна, чем стандартная схема, которая использовалась в контрольной группе животных.

3. ВЫВОДЫ

1. В условиях г. Тюмени гепатопатии собак занимают особое место среди незаразных заболеваний. Большую часть из общей структуры занимают гепатозы (41,95%).

2. Наиболее подвержены заболеваниям печени собаки в возрасте от 9 до 16 лет. Основными этиологическими факторами развития гепатопатий у собак явились: нарушения обмена веществ (80%), заболевания желудочно-кишечного тракта (76,9%), инфекционные заболевания (74,1%), инвазионные заболевания (61,4%), заболевания сердечно-сосудистой системы (45,5%), несбалансированное кормление (41,7%), заболевания мочеполовой системы (31,4%), 20% гиподинамия (20%), заболевания дыхательной системы (17,9%).

3. Гистологическое исследование биопсийного материала способствует дифференциальной диагностике. Основными признаками амилоидоза является деформация и сужение печеночных балок и капилляров, отложение амилоида в стенках вен и капилляров, изменение и распад ядер. При стеатозе происходит отложение липидов в цитоплазме клеток, в связи с чем происходит некроз или жировая дегенерация клеток. При остром гепатите - некроз отдельных гепатоцитов или их групп, при этом гепатоциты подвергаются балонной, гидропической дистрофии, апоптозу, происходит образование телец-включений, появляется воспалительный инфильтрат в зонах некроза.

4. Комплексная оценка гематологических интегральных лейкоцитарных индексов позволяет оценить развитие, течение, тяжесть воспалительного процесса и эндогенной интоксикации при различных видах гепатопатий у собак кроме новообразований печени.

5. При острых гепатитах собак выявлена гиперфосфатаземия (164,0±5,0 Ед/л) гиперхолестеринемия (19,1±1,21 мкмоль/л), гипофибриногенемия (0,8±0,03г/л) повышение уровня трансферрина (0,93±0,03г/л) и триглицеридов (18,3±0,53 ммоль/л), а также гипериммуноглобулинемия ^ М (13,75±0,95 г/л).

6. При острых гепатозах щелочная фосфатаза незначительно повышена 121±2,43Ед/л, снижается уровень холестерина (1,84±0,60 мкмоль/л), наблюдается гиперфибриногенемия (6,8±0,19г/л), гипертрансферринемия (0,23±0,01г/л), гипериммуноглобулинемия за счет повышения концентрации иммуноглобулина А - 4,9±0,19 г/л, иммуноглобулина в - 46,2±1,68 г/л и иммуноглобулина М -25,63±1,3 г/л.

7. При новообразованиях печени установлена высокая концентрация фибриногена (11,3±0,08 г/л), повышение щелочной фосфатазы, снижение трансферрина, незначительное повышение всех иммуноглобулинов.

8. Дуплексное сканирование сосудов портальной системы эффективно повышает информативность эхографии при гемодинамических изменениях в печени.

9. Под влиянием Урсосана в дозе 10 мг/кг, Змкг/кг селена и 1 мл/кг растительного сбора 2 раза в день в течение 30 дней происходит нормализация функционального состояния печени, что проявляется нормализацией метаболических процессов и восстановлением функции гепатоцитов.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В качестве диагностических критериев при патологиях печени у собак необходимо наряду с общим анализом крови рассматривать лейкоцитарные индексы эндогенной интоксикации. Для более точной дифференциальной диагностики гепатопатий использовать такие биохимические показатели, как холестерин, триглицериды, фибриноген, трансферрин и иммуноглобулины класса А, М, G.

2. Рекомендуется включение комплексного ультразвукового исследования печени с обязательной оценкой допплерографических показателей кровотока печеночного бассейна для диагностики диффузных поражений печени

3. Для нормализации функционального состояния печени при клинически выраженном гепатозе рекомендуется применять следующую схему лечения: Урсосан 10 мг/кг, Змкг/кг селена и 1 мл/кг растительного сбора 2 раза в день в течение 30 дней.

СПИСОК

опубликованных работ по теме диссертации

1. Краснолобова, Е.П. Распространение и терапия гепатоцеллюлярной недостаточности у собак / Е.П. Краснолобова, К.А. Сидорова, H.A. Череменина, E.H. Маслова // Научные исследования - основа модернизации сельскохозяйственного производства: Материалы международной научно-практической конференции 9-11 ноября 2011. - Тюмень: ТГСХА, 2011. - С. 39-42.

2. Краснолобова, Е.П. Распространение и этиология гепатопатий собак в условиях г.Тюмени / Е.П. Краснолобова // Фундаментальные исследования. -2012.-№9.-С. 44-46.

3. Краснолобова, Е.П. Интегральные индексы эндогенной интоксикации при некоторых видах гепатопатий у собак / Е.П. Краснолобова, Т.В. Корчнева // Агропродовольственная политика России. - 2012. - JV»12. - С. 6769.

4. Краснолобова, Е.П. Состояние печени моногастричных животных / Е.П. Краснолобова, К.А. Сидорова, H.A. Череменина, E.H. Маслова // Альянс наук: вчений-вченому: Материали VII м1ждународно1 науково-практично1 конференци Knie. 15-16 березня 2012 р. - Т.5. - Knie, 2012. - С. 9-10.

5. Краснолобова, Е.П. Оценка недостаточности печени собак / Е.П. Краснолобова, К.А. Сидорова// Инновации аграрной науки - предприятиям АПК: Материалы научно-практической конференции (Пермь, 24-25 апреля 2012) -42 -Пермь: Изд-во ФГБОУ ВПО Пермская ГСХА, 2012. - С. 176-177.

6. Пат. № 2490018 Российская Федерация, МПК" А61КЗЗ/04, А61К35/413, А61К36/185, А61К36/28, А61Р1/16. Способ терапии гепатозов собак / К.А. Сидорова, E.H. Маслова, Е.П. Краснолобова; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО "Тюменская государственная сельскохозяйственная академия" -2012128045/15; 03.07.2012; опубл. 20.08.2013, бюл. №23. - 5 с.

7. Краснолобова, Е.П. Некоторые диагностические приемы при патологиях печени у собак / Е.П. Краснолобова // Инновационное развитие АПК Северного Зауралья. Сборник материалов региональной научно-практической конференции молодых ученых. — Тюмень: ГАУСЗ, 2013. - С. 318-322.

8. Краснолобова, Е.П. Ультразвуковые изменения печени при основных гепатопатиях собак / Е.П. Краснолобова // Перспективы развития АПК в работах молодых ученых. Сборник материалов региональной научно-исследовательской конференции молодых ученых. 5 февраля 2014. Часть 2. - Тюмень: ГАУСЗ, 2014. - С. 59-62.

9. Краснолобова, Е.П. Изменение ультразвуковой картины сосудов при основных патологиях печени / Е.П. Краснолобова // Современная наука -агропромышленному производству. Сборник материалов международной научно-практической конференции. 22-24 октября 2014. — Том 1. — Тюмень: ГАУСЗ, 2014. -С. 174-175.

Список сокращений

ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации

ЯИ - ядерный индекс интоксикации Г.А.Даштаянца

ИСЛК - индекс сдвига лейкоцитов крови

ИСНМ - индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов

ИСЛМ - индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов

ИЛСОЭ - индекс соотношения лейкоцитов и СОЭ

ИЛГ - лимфоцитарно-гранулоцитарный индекс

ЛИ - лейкоцитарный индекс

ИК - индекс Кребса

Подписано в печать 04.03.2015 г. Тираж 100 экз. Печать трафаретная. Заказ 025. Усл. печ. л. 1,0.

Отпечатано в печатном цехе «Ризограф» Тюменского Аграрного Академического Союза 625003, г. Тюмень, ул. Республики, 7