Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Клинико-морфологическая характеристика эритробластического ростка и эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологическая характеристика эритробластического ростка и эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак"

На правах рукописи

Боженова Елена Юрьевна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКОГО РОСТКА И ЭРИТРОЦИТОВ В ПОСТОПЕРАЦИОННЫЙ ПЕРИОД ПРИ ЗАВОРОТЕ ЖЕЛУДКА У СОБАК

Специальность: 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

5 ДЕК 2013

Москва 2013

005542476

Работа выполнена на кафедре клинической ветеринарии аграрного факультета ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Научный руководитель Ватников Юрий Анатольевич, заведующий

кафедрой клинической ветеринарии ФГБОУ ВПО «РУДН», доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты Пронин Валерий Васильевич, заведующий

кафедрой морфологии, физиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Ивановская ГСХА им. академика Д.К. Беляева», доктор биологических наук, профессор

Крюковская Галина Михайловна, доцент кафедры ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «МГУПП», кандидат ветеринарных наук, доцент

Ведущая организация ФГБОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Защита состоится 26 декабря 2013 г. в 1200 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.32 при ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов», по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8/2.

С диссертацией можно ознакомиться в Учебно-научном информационно-библиографическом центре Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6.

Автореферат диссертации размещен на сайте РУДН - www.rudn.ru Автореферат диссертации разослан 25 ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Куликов Е.В.

1. Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Заворот желудка у собак — это тяжелая патология и в отсутствии своевременной диагностики и оперативного лечения сопровождается 100% летальностью. Гибель животных после операции достигает 47 %, вместе с этим, происходит большое количество рецидивов. При этом, развитие и закономерность патологических процессов связанных с заворотом желудка, представляют большой интерес для ветеринарной науки и практики, причем научный подход к решению данной проблемы осложняется отсутствием достоверной статистики послеоперационных осложнений (Тимофеев C.B., Позябин C.B., 2005; Шебиц X., Брасс В., 2001; Холл Э., Симпсон Д., с соавт. 2010; Ефимов А.Н., 2010; Позябин C.B.. 2013; Fossum T.W., 2008). В этой связи, понимание и клинический контроль, основанные на анализе эритробластического ростка и эритроцитов, открывают перспективное направление в поиске причин, вызывающих гибель животных в постоперационный период.

Сопутствующий фактор - постоперационная анемия, нарушение гемодинамики и микроциркуляции у животных значительно снижают устойчивость организма к инфекции, осложняют течение посттравматического периода, являются очагом ферментативной агрессии, эндотоксикоза и полиорганной недостаточности (Селезнев С.А., Богненко Ю.Б., 2004; Ротанов Д.А., 2007; Ватников Ю.А., 2012) и тяжело подвергаются коррекции.

На сегодняшний день в клинической ветеринарии недостаточно полно отработана система методов, дающих возможность обеспечить надежное, научно-обоснованное влияние на течение постоперационного периода при завороте желудка. Структурные и функциональные изменения в костном мозге и периферической крови заставляют уделять большее внимание всесторонних» исследованиям организма, так как создание алгоритмов постоперационной стабилизации является основой профилактики смертельных случаев и серьезных посттравматических осложнений.

Статистические показатели, анализ научной литературы, собственные наблюдения показывают, что решение задач постоперационной стабилизации животных и создания условий контролируемой коррекции основных систем организма на сегодняшний день изучено недостаточно. Нет научно-обоснованных критериев, дающих полное представление о контроле над развитием эритрогенеза. При этом углубленное изучение постоперациошюго состояния с позиций морфофункциональных особенностей эритрогенеза в сравнительном аспекте при различных способах оперативного вмешательства в случае заворота желудка представляется актуальной.

Цель исследования - изучить клинико-морфологическую характеристику эритробластического ростка и эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак.

Задачи исследования:

1. Провести мониторинг постоперационных осложнений при завороте желудка. 2. Изучить функциональное состояние эритробластического ростка, вызванного заворотом желудка, при различных методах оперативного вмешательства

3. Проанализировать клинико-морфологическое состояние эритроцитов у собак, в случаях заворота желудка, при различных методах оперативного вмешательства.

Научная новизна. Представлены новые данные о распространении и частоте постоперационных осложнений при завороте желудка у собак. Впервые проведен анализ динамики эритробластического ростка у животных с операцией, выполненной в различные сроки после начала заворота с удаленной селезенкой и без ее удаления в ходе операции. Проведено исследование функционального и структурного состояния

эритроцитов у собак в динамике развития постоперационного периода, вызванного заворотом желудка и при различных методах оперативного вмешательства.

При анализе показателей эритробластического ростка и эритроцитов выявлено, что оперативное вмешательство следует проводить с удалением селезенки, если время с начала заворота составляет более 4-х часов. Установлено, что оперативное вмешательство с удалением селезенки, является оптимальным решением для обеспечения благоприятного исхода в постоперационный период.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана научная, теоретически и практически обоснованная концепция прогноза течения постоперационного периода на основе анализа динамики эритробластического ростка у животных с операцией, выполненной в различные сроки после начала заворота с удалением селезенки и без ее удаления в процессе операции. Получены новые данные об особенностях постоперационного периода, основанного на анализе количественных показателей клеток эритробластического ростка и эритроцитов.

Наблюдениями установлено, что операция, проведенная с удалением селезенки, имеет положительный исход и является благоприятным признаком течения постоперационнного периода. Оценка цитоархитектоники эритроцитов является диагностическим скргашнговым критерием степени тяжести постоперационного периода при завороте желудка, что позволит разрабатывать и контролировать лечебные мероприятия.

Апробация работы. Основные положения работы доложены, обсуждены и одобрены: на кафедре клинической ветеринарии РУДН, а также на Международной НПК «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и образования», Курск (2013).

Внедрение результатов исследований. На основании результатов научно-исследовательской работы изданы методические рекомендации «Метод оценки функционального состояния эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак». Научные разработки внедрены в учебный процесс ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина», ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет», ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.И. Вавилова», ФГБОУ ВПО «Ульяновская сельскохозяйственная академия».

Публикации. По результатам исследований опубликованы 4 научные работы, 2 из которых в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Мониторинг постоперационных осложнений при завороте желудка у собак.

2. Динамика функционального состояния эритробластического ростка у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах оперативного вмешательства.

3. Анализ клинико-морфологического состояния эритроцитов у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах оперативного вмешательства.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 130 страницах и отвечает необходимому минимуму, в полной мере раскрывающему суть поставленной цели. Структура диссертации состоит из общей характеристики работы, обзора научной литературы, охватывающего такие вопросы как характеристика желудка и причины его заворота, функциональные изменения при гиповолемическом шоке, анемии как реакции на повреждение; собственных исследований и их обсуждения, выводов, рекомендаций по практическому использованию результатов исследования, библиографического списка из 207 источников, включающего 115 отечественных, и 92 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 22 рисунками.

г. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы н методы. Работа выполнена на кафедре клинической ветеринарии аграрного факультета Российского университета дружбы народов. Клиническая часть проведена в условиях ветеринарных клиник г. Москвы и Московской области. В работе представлены результаты исследований, полученные нами при анализе данных собак (п=46) крупных и гигантских пород с заворотом желудка до и после операции. Исследования проведены в 2 этапа на 6 группах животных, в которые включены результаты исследований 33-х собак. Каждый этап включал в себя 3 группы наблюдений:

1 этап - животные были разделены на 3 группы; в 1-ю группу (п=8) входили собаки, поступившие на первичный прием в течение 2-4-х часов с момента начала заворота желудка, во 2-ю группу (п=4) входили собаки, поступившие на прием в течение 4-6-ти часов, и в 3-ю (п=5) - животные, поступившие в клинику в период 6-8 часов с начала заворота. Всем животным делали операцию по выправлению заворота желудка с удалением селезенки.

2 этап - животные были разделены на 3 группы; в 4-ю группу (п=9) входили собаки, поступившие на первичный прием в течение 2-4-х часов с момента начала заворота желудка, в 5-ю группу (п=4) входили собаки, поступившие на прием в течение 46-ти часов и в 6-ю (п=3) - животные, поступившие в клинику в период 6-8 часов с начала заворота. Животным выполняли операцию по выправлению заворота желудка без удаления селезенки. 2-х часовой интервал времени, по нашим наблюдениям, это то время, за которое владельцы животных оценивают угрозу для своего питомца и доставляют его в клинику в этот промежуток времени входит и тот период, который необходим для подготовки животного к операции.

Исследования проводили перед операцией, во время первичного приема и на 3, 7, 11 и 15-е сутки постоперационного периода. В случае гибели животного в процессе наблюдений его дачные учитывали до окончания исследований.

Стабилизацию животных до и после операции проводили посредством инфузионной терапии — введения раствора реополиглюкина (10 мл /кг живой массы), 10% глюкозы (10 мл /кг живой массы) и раствора Рингера-Локка в дозе 50 - 90 мл/кг живой массы по методу Макинтайр Д., Дробац К., с соавт. (2008). Наряду с этим, выполняли и другие, необходимые в этом случае, виды сиптоматической, патогенетической заместительной терапий.

При изучении структурно-функциональной активности костного мозга, ретикулоцитов, эритроцитов, использовали методику исследования крови и оценку показателей по методу Долгова В.В., Луговской С.А., с соавт. (2001); Уиллард М., Тведтен Г. С соавт. (2004); Бажибиной Е.Б. Коробов A.B. с соавт. (2004). Общее количество проб костного мозга и крови — п=220. Наряду с этим, исследования эритроцитов проводили методом фазово-контрастной микроскопии на микроскопе Leica DM 1000.

Метод аспирационной биопсии костного мозга. Для пункции использовали инъекционные иглы с мандреном, десятиграммовые шприцы, предметные стекла. Аспирационную биопсию костного мозга производили из гребня подвздошной кости. После асептической обработки инфильтрировали кожу и подкожный слой над подвздошным гребнем 0,5%-ным раствором новокаина. На месте будущей пункции выполняли надрез кожи. Вводили аспирационную ишу с мандреном в костную ткань, небольшими вращательными движениями разминали внутреннюю ткань метафиза, после этого извлекли мандрен. Присоединили к игле шприц на 10 мл и аспирировали ткань. Внутри цилиндра и поршня шприца появилось 0,3 — 0,5 мл кровянистой жидкости. Извлекали шприц вместе с игаой. Наносили каплю костного мозга на предметные стекла

(3 с каждой пункции) и готовили обычный мазок крови. Окраску производили по Палпенгейму или Май-Грюивальду. Исследовали мазки под микроскопом с помощью иммерсионной системы. Подсчитывали 500 клеток (Ватников Ю.А. 2004; 2009).

Подсчет миелокариоцитов. Подсчет клеток в разведенном пунктате костного мозга в счетной камере с последующим пересчетом на 1 мкл пунктата в 3-5%-ный раствор уксусной кислоты. Ход исследования. В пробирку с 4 мл раствора уксусной кислоты вносят 0,02 мл пунктата костного мозга (разведение в 200 раз).

Содержимое пробирки тщательно перемешивали и заполняли счетную камеру. Через 1-2 мин., после оседания форменных элементов, подсчитывали миелокариоциты, т. е. все ядерные элементы в 100 больших квадратах (аналогично подсчету лейкоцитов в крови). Количество миелокариоцитов в 1 мкл пунктата рассчитывают по формуле: X = (п • 200 • 250)/100, где X — число миелокариоцитов в 1 мкл пунктата, п — количество миелокариоцитов в 100 больших квадратах; 200 — разведение пунктата костного мозга; 250 — множитель для приведения к 1 мкл, так как объем одного большого квадрата равен 250 мкл; 100 — число просчитанных больших квадратов.

Эритроцитарные параметры Подсчет числа эритроцитов (RBC), уровень гемоглобина (HGB), гематокрит (НСТ). MCV (средний объем эритроцита); МСН (среднее содержание гемоглобина в эритроците); МСНС (средняя концентрация гемоглобина в эритроците); RDW (ширина распределения эритроцитов по объему). Наряду с этим, проведены исследования тромбоцитов (PLT).

Эритрограмму производили на гематологическом анализаторе РСЕ-90 (ERMAINC). Средний объём эритроцита (MCV) вычисляться по формуле как отношение гематокрита к количеству эритроцитов, измеряется в фемтолитрах (10"15/л). Один фемтолитр равен одному кубическому микрометру (одна миллионная часть метра), рассчитывается по формуле: MCV = IICTxlO/ RBC (фл).

Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) отражает, сколько гемоглобина в среднем содержится в одном эритроците. Измеряется в пикограммах (одна триллионная часть грамма, 10~12) па эритроцит и рассчитывается как отношение гемоглобина к количеству эритроцитов, соответствует цветному показателю, который использовался ранее для отражения содержания гемоглобина в эритроцитах и рассчитывается по формуле: MCII = HGBxlO/RBC (пг).

Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах (МСНС) - показатель насыщения эритроцита гемоглобином, в отличие от МСН характеризует не количество гемоглобина в клетке, а «плотность» заполнения клетки гемоглобином, рассчитывается как отношение общего гемоглобина к гематокриту - объему, который занимают эритроциты в кровяном русле. Он измеряется в граммах на литр и является наиболее чувствительным показателем при нарушениях образования гемоглобина. Рассчитывается по формуле МСНС = НСВх100/НСТ (г/дл).

Распределение эритроцитов по объему (RDW) измеряется в процентах и показывает, насколько объём эритроцитов отклоняется от среднего, демонстрируя разницу между самым маленьким эритроцитом и самым большим.

Гистологическое исследование селезенки проводили по общепринятой методике, патматериал фиксировали в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации, заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином Манера и эозином по Романовскому-Гимза. Статистическую обработку результатов выполняли с помощью программы MedCalc для Windows.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Мониторинг постоперационных осложнений при завороте желудка у собак

Заворот желудка у собак - широко известная в ветеринарии патология, при этом, несмотря на значительное продвижение в научных знаниях об этиологии и патогенезе заболевания, количество осложнений и смертность в постоперациошюм периоде остаются достаточно высокими (Тимофеев C.B., Позябин C.B., с соавт., 2009; Позябин C.B., 2012). На сегодняшний день достаточно работ о причинах осложнений и гибели животных — Пульняшенко, П.Р. (2004); Bojrab M. (1990); Brockman D.J., Holt D.E. (2000), по большой интерес вызывает патогенетический аспект в динамике развития необратимых состояний. В этой связи, изучение причин осложнений и гибели животных в постоперационный период в зависимости от времени прошедшего с начала заболевания заслуживает особого внимания.

Анализ собственных исследований (п=46) при завороте желудка у собак (Табл. 1) показал, что у 3-х собак породы королевский пудель и эрдельтерьер осложнений и случаев гибели нами не отмечено. При этом, у собак пород кавказская овчарка (п=3) и бассет-хаунд (п=4), что составило 33,3 и 25,0%, соответственно, мы отмечали осложнения в виде острой почечной недостаточности (ОПН), гибели животных этих пород не было. Среди пород ирландский сеттер (п=5) и доберман-пинчер (п=6) количество осложнений в виде сердечно-сосудистой недостаточности (ССН) и гнойного воспаления шва составило 40,0% и 50,0%, соответственно.

Таблица 1.

Распределение осложнений и гибели животных по породам собак

Порода Собаки с Осложне- Осложне- Гибель Гибель

заворотом ния (абс) ния (%) (абс) (%)

Пудель королевский 3 0 0 0 0

Эрдельтерьер 3 0 0 0 0

Кавказская овчарка 3 1 33,3 0 0

Бассет-хаунд 4 1 25,0 0 0

Ирландский сеттер 5 2 40,0 2 40,0

Доберман-пинчер 6 3 50,0 1 16,7

Немецкий дог 6 2 33,3 1 16,7

Ротвейлер 7 5 71.4 3 43,0

Немецкая овчарка 9 5 55,5 3 33,3

У добермана-пинчера в двух случаях наблюдали ОПН и локальный перитонит, при этом гибель животных в постоперационный период составила 40% у ирландских сеттеров и 16,7% у доберман-пинчеров. У немецких догов (п=6) осложнения в виде массивного кровотечения культи селезеночной артерии (п=1) повлекшая за собой смерть животного, в другом - острый флегмонозный процесс в области паха.

Дальнейшие исследования показали рост осложнений и гибели животных, так при исследовании породы ротвейлер нами установлены первичные осложнения, связанные с острой сердечной недостаточностью в 3-х случаях и ОПН мы констатировали в 2-х случаях, при этом во всех случаях в процессе наблюдений развивалась ОПН, которая и приводила к смерти животного. Среди немецких овчарок осложнения в виде ССН (п=2) и ОПН (п=3) отмечали в 5-ти случаях, первопричиной гибели собак явилась ОПН. Наши

исследования подтверждают данные научной литературы, указывающие, что смертность в послеоперационный период достигает 25-30% (Bojrab М., 1990), а количество осложнений - 50% (Brockman D.J., Drobajau K.J., 2005; Glickman L.T., Glickman N.W., et all., 2000). Анализ осложнений и смертности собак при завороте желудка в различные сроки после операций показал прямую корреляцию сроков оперативного вмешательства и характера послеоперационных осложнений. Нами установлено, что проведение у 12-ти собак операции в течение 2-х часов после начала заворота желудка отмечено одно осложнение, вызванное массивной кровопотерей (Табл. 2).

Таблица 2.

Анализ осложнений и смертности собак при завороте желудка в различные сроки

после операций

Количество Время после Осложнений Количество, Смертность смертность

собак (п=46) заворота после осложнений после %

(час) операции % операции

10 до 2 1 10 0 0

17 2-4 4 23,6 1 5,9

8 4-6 6 75 2 25

8 6-8 8 100 4 50

3 8-12 3 100 3 100

Примечание. 100% гибель собак прооперированных в период 8-12 часов - животные, с заворотом на 360° проходившие обследование в рамках данной работы.

Как видно из табл. 2, у 17 собак, оперированных нами в период 2- 4 часов после начала заболевания, осложнения отмечали у 4-х животных, что составило 23,6%, при атом отмечена гибель собаки, что составило 5,9%. Изучение данных животных оперированных в течении 4 - 6-ти часов, показало, что осложнения встречались в 6-ти случаях (75%), а гибель животных констатировали в 2-х случаях, что составило 25%. Из 8-ми животных, которым неотложная помощь была оказана в течение 6 - 8-ми часов, мы отмечали 6 различных осложнений, приведших к гибели 3-х животных (50%). Операция, проведенная в период 8—12 часов, не увенчалась успехом и в 100% случаев мы устанавливали гибель животных. Исследования показывают количество купируемых осложнений и тех осложнений, которые привели к гибели животных в постоперационный период. Анализ показывает, что ранний период после операции сопровождается ОГГН - 47,4 %, ССН -31,5 %, затем следуют нарушения, сопровождающиеся хирургической инфекцией -15,8% и кровотечением - 5,3%.

Нарушение периферического кровообращения, гиповолемия и гипоксия вызывают патологические изменения на клеточном уровне. В тканях начинают преобладать анаэробные процессы над аэробными, развивается метаболический ацидоз, что ведет к необратимым последствиям (Алексеев Н.А. 2004). Гипоксия возникает в результате расстройств микроциркуляции, замедление кровотока в капиллярах приводит к агрегации форменных элементов, застою крови, повышению внутрикапиллярного давления, выходу плазмы в интерстициальную ткань. Прогрессирует гемоконцентрация, что, наряду с агрегацией эритроцитов и тромбоцитов, приводит к сладж-синдрому, капиллярный кровоток в органах прекращается (Лиховецкая З.М., 2004; Cowgill L.D., Langston С.Е., 1996; Mezzano S.A., Ruiz-Ortega M., et al., 2001).

Таким образом, мониторинг последствий заворота желудка выявил, что при оперативном вмешательстве в ранние сроки после начала заворота практически во всех случаях мы наблюдали положительный результат. При увеличении инервалов времени, прошедших с начала заболевания до оказания первой помощи, количество осложнений и

послеоперационной смертности возрастает (Недобежкова Е.Ю., Ватников Ю.А., Позябин C.B., 2013).

2. Анализ функционального состояния эритробластичсского ростка собак в постоперационный период, при различных способах оперативного вмешательства

Патогенетический анализ посттравматического периода, основанный на изучении костномозгового кроветворения, заслуживает особого внимания, так как функциональная активность клеток костного мозга и реализация их функций являются основой в восстановительном процессе тканей и органов. Изменение клеточного состава ростков кроветворения отражает динамику и глубину процесса и предоставляет возможность осуществлять прогноз патологического состояния у животных (Ватников Ю.А., 2012).

Динамика показателей эритробластического ростка в постоперационный период при завороте желудка без удаления селезенки, выполненного через 2-4 часа после заворота на момент поступления собаки с признаками заворота, выявила снижение общего количества миелокариоцитов до 155,3±3,3 х103 при исходных данных 165,0±3,7 х103. После проведения операции их количество имело волнообразную динамику, и было в пределах 157,9±1,7 (3-й сутки) и 176,3±3,1 хЮ3 на 15-е (Табл.3). Исследование ростка КМ показало ровную динамику его развития на протяжении всего периода наблюдений. В отношении базофильных нормобластов (БФНБ, %) их количество было в 3 и более раз больше чем эритробластов. При этом изучение полихроматофильных нормобластов (ПХФНБ, %) показало, что их количество превосходит БФНБ в 5 и более раз, что говорит о незначительном вовлечении костного мозга в патологический процесс. На уровне рассмотренных клеток росток имеет ровную раскрывающуюся тенденцию. В отношении оксифильных нормобластов (ОФНБ, % ФП-6,3±0,6) нами отмечено сужение ростка на протяжении всего периода наблюдений.

Динамика показателей эритробластического ростка в постоперационный период при завороте желудка без удаления селезенки, выполненного через 4-6 часов после развития заворота желудка выявила изменения как в отношении миелокариоцитов, так и в отношении эритробластического ростка костного мозга, продемонстрировали аналогичные изменения на протяжении всего наблюдения. При этом, следует отметить более выраженные изменения в клеточном составе, по сравнению с предыдущим исследованием. Так, нами установлено большее снижение миелокариоцитов на 3-й сутки (135,0±3,1 х103). Также мы отмечали сужение ростка на 3-й сутки на уровне ПХФНБ (6,0±0,6%) и расширение ростка на уровне ОФНБ (13,3±1,1%) на 3-й и 7-е сутки (18,2±1,3%). В дальнейшем количественные характеристики соответствовали предыдущим наблюдениям.

Динамика показателей эритробластического ростка костного мозга в постоперационный период при завороте желудка без удаления селезенки, выполненного через 6-8 часов после развития заворота желудка, вскрыла типичные изменения в эритробластическом ростке при асептических процессах. Изменения количества миелокариоцитов выделялись лишь большим снижением их количества на 3-и и 7-есутки. Динамика эритобластического ростка была схожей с предыдущим сроком, сужение ростка в период 3-7-х суток было на уровне ПХФНБ и расширение - на уровне ОФНБ.

Динамика показателей эритробластического ростка собак в постоперационный период при завороте желудка с удалением селезенки. Изменения клеточного состава миелокариоцитов и эритробластического ростка на момент

9

первичного приема, а также на всем протяжении постоперационного периода имели ровную волнообразную динамику в допустимых пределах физиологических показателей развития ростка костного мозга (Табл.3).

Таблица 3.

Динамика показателей эритробластического ростка

Клеточные показатели костного мл зга ФП Состояние на момент поступлен ия 3 сутки 7 сутки 11 сутки 15 сутки

Операция через 2-4 часа после заворота

Миелокариоциты 165,0±3,7 155,3±3,3 163,3 ±3,9 157,9±1,7 169,7±2,7 176,3±3,1

Операция через 4-6 часов после заворота

Миелокариоциты 165,0±3,7 155,3±3,3 135,0±3,1 146,0±3,6 165,7±6,1 157,0*3,4

Эритробласты 0,7±0,03 0,6±0,07 1,6±0,03 2,1±0,1 0,£t0,3 0,6±0,1

БФНБ 2,1 ±0,3 5,3±0,6 9,6±2,8 6,1±1,1 8,0±1,6 6,1±1,3

ПХФНБ 9,8±0,2 11,0±1,2 6,0±0,6 13,0±3д 20,6±3,7 11,2±0,7

ОФНБ 6,3±0,6 9,6±0,5 13,3±1,1 18,2±1,3 7,3±0,6 3,7±0,7

Операция через 6-8 часов после заворота

Миелокариоциты 165,0±3,7 155,3±3,3 123,0±3,6 111,6±3,9 136,6±6,1 153,0±3,1

Эритробласты 0,7±0,03 0,8±0,06 2,1±0,6 2,6±0,7 1,6±0,3 0,7±0,1

БФНБ 2,1±0,3 5,7±0,6 14,6±3,1 18,1±3,1 15,0±1,6 9,6±1,3

ПХФНБ 9,8±0,2 18,0±1,2 8,3±0,3 3,3±0,6 23,6±3,1 16,1±2,3

ОФНБ 6,3±0,6 26,6±0,5 16,3±3,7 22,1±3,5 11,1±1,3 6,1±0,3

Примечание. ФП - физиологический показатель; ОФНБ - оксифильные нормобласты; ПХФНБ -

полихроматофильные нормобласты; БФНБ - базофильные нормобласты

Следует заметить, изменения в развитии эритробластического ростка выявили ровную динамику накопления клеток. Сужение па уровне ОФНБ за счет превращения в ретикулоциты, что мы расцениваем как благоприятный фактор. При этом, сужение ростка на уровне ПХФН говорит на наш взгляд, о задержанном развитии клеток, что может быть связано с воспалительной реакцией и замедлением кровотока, что в свою очередь, может оказывать негативное влияние на развитие ростка КМ. Аналогичной может быть реакция на уровне ОФНБ, когда мы отмечали расширение на уровне зрелых форм в самый острый период 3 - 7-е сутки, который характеризовался переполнением гемопоэтического региона ОФНБ. Данный процесс можно характеризовать как относительно негативную сосудистую реакцию и невозможность покинуть сосудистый регион КМ для ОФНБ, что может повлечь за собой задержанное созревание и переход к более зрелой стадии (Ротанов Д.А. 2004).

3. Анализ функционального и структурного состояния эритроцитов у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах оперативного вмешательства

Исследование такой тяжелой патологии как странгуляционная непроходимость кишечника заставляет исследователей искать причины высокой смертности, так C.B.

10

Позябин (2013), отмечает, что заворот желудка собак - одна из сложно решаемых проблем ввиду тяжелой патогенетической перестройки организма, а также ввиду каскадно-развивающихся нарушений гемодинамики. Вместе с этим пик смертности (40,6%) приходится на 4-6 сутки после оперативного лечения, при этом развитие патологических процессов при завороте желудка у собак, их изучение и понимание требуют более детального рассмотрения. Выраженное проявление постгеморрагической анемии и попытка адекватного купирования этого состояния заставляет более углубленно заниматься вопросами изучения структурных изменений эритроцитов собак при завороте желудка. Анемия приводит к гипоксии тканей, и ее развитие при различных заболеваниях способствует ухудшению прогноза (Broadstone R.V. 1999; Day Т.К. 2003; Goldhammer, М.А., 2010).

Динамика ретикулоцитов после операции с удалением селезёнки. Изменение количества (2-4 часа после начала заворота) ретикулоцитов (ФП - 2,0±0,03%) сопровождалось их увеличением, начиная с момента приема до 11-ых суток и составило 11,6±1,3% (Табл. 4). Количество ретикулоцитов (4-6 часов после начала заворота) увеличилось до 7-ых суток и составило 14,6±2,1%, после чего началось снижение. (Количество ретикулоцитов 6-8 часов после начала заворота) увеличилось до 7-х суток (13,0±,1%).

Динамика ретикулоцитов после операции без удаления селезёнки. Количество ретикулоцитов (2-4 часа после начала заворота) увеличилось до 11-х суток (16,2±1,9%). К 7-м суткам (4-6 часов после начала заворота) определена устойчивая тенденция к увеличению количества ретикулоцитов и постепенное их увеличение остановилось на уровне 18,6±2,1% к 11-м суткам. Изменение количества ретикулоцитов (6-8 часов после начала заворота) сопровождалось их увеличением, начиная с момента приема. Увеличение процентного содержания ретикулоцитов продолжалось и на 11-е сутки 22,0±1,6% и лишь к 15 -м суткам наметилась тенденция к снижению (16,6±2,6%).

Количество ретикулоцитов увеличивается в соответствии с закономерностью течения острого процесса геморрагической анемии. Их количество неизменно возрастает, что подтверждает обратимость данного процесса и расширение эритробластического ростка на уровне ОФНБ — это естественный процесс накопления и реализации клеток сосудистым регионом КМ (Табл. 4).

Динамика эритроцитов после операции с удалением селезёнки. Заворот желудка вызывает выраженные изменения в эритроцитарной составляющей крови и сопровождается снижением количества эритроцитов. Так на момент первичного приема (2-4 часа после начала заворота) их количество снизилось до 5,3±0,3 х106/мкл.

Оперативное вмешательство по устранению заворота желудка выявило снижение RBC, и на 3-й сутки числовой показатель был на отметке 5,1±0,03 х106/мкл, через 4-6 часов после начала заворота - 3,2±0,2 х106/мкл, через 6-8 часов после начала заворота — 2,9±0,2 х106/мкп. На 7-е сутки после операции показатель RBC продолжал снижаться до 4,3±0Д х106/мкл. Через 4-6 часов - 2,5±0,2 х106/мкл и 6-8 часов - 2,3±0,1 х106/мкл. К 11-м суткам количество эритроцитов незначительно увеличивалось (Табл.4).

Динамика эритроцитов после операции без удаления селезёнки. Снижение RBC на 7-е сутки (2-4 часа после начала заворота) достигло уровня 3,3±0,3 х106/мкл. К 11-м суткам количество эритроцитов снизилось еще в большей степени и составило 2,7±0,3х106/мкл, к 15-м их количество увеличилось до 4,9±0,3 х10б/мкл. Постоперационный период отмечен снижением количества эритроцитов (4-6 часов после начала заворота) на 3-й сутки до 4,8±0,3 х106/мкл.

На 7-е сутки нами установлено самое нижнее их значение — 1,9±0,3 х106/мкл, а к 15-м - увеличилось до 3,3±0,3 х106/мкл. Количество эритроцитов на момент первичного приема (6-8 часов после начала заворота) составило 4,1±0, Зх106/мкл, на 3-й сутки было

на уровне 3,1±0,02 х106/мкл. На 7-е сутки количество КВС было на уровне - 1,3±0,01 х106/мкл, к 11-м — 1,7±0,03х106/мкл, а к 15-м - их количество увеличилось и составило 2,9±0,2х106/мкл (Табл.4).

Таблица 4.

Динамика функционального состояния эритроцитов собак в постоперационныИ период при завороте желудка

Показатели крови % Часы после операции ФП Состояние на момент поступления 3 сутки 7 сутки 11 сутки 15 сутки

Исследования эритрона после удаления селезенки

Ретикулоциты 2-4 2,0±0,03 4,1±1,1 9,110,3 12,011,4 11,611,3 9,811,1

ИВС х106/мкл 7,310,3 5,310,3 5,1Ю,03 4,310,2 4,810,2 6,210,8

Дискоциты 88,6*3,3 71,2±3,1 77,8±2,6 59,212,3 46,313,1 72,6±3,6

Ретикулоциты 4-6 2,0±0,03 4,1±1,1 12,3±0,8 14,612,1 8,2±1,2 6,211,2

ЯВС х106/мкл 7,310,3 5,310,3 3,210,2 2,510,2 3,010,03 5,310,1

Дискоциты 88,613,3 71,213,1 67,513,1 51,511,3 41,113,2 62,613,3

Ретикулоциты 6-8 2,0±0,03 4,811,1 11,2±1,3 13,01,1 9,611,6 5,211,3

ИВС х107мкл 7,3±0,3 4,1±0,3 2,910,2 2,310,1 3,6±0,1 4,110,3

Дискоциты 88,6±3,3 73,2±3,1 62,513,3 46,511,6 39,813,2 58,613,1

Исследования эритрона после операции без удаления селезёнки

Ретикулоциты 2-4 2,0±0,03 4,1±1,1 9,611,6 11,012,3 16,211,9 7,611,6

КВС х10°/мкл 7,3±0,3 5,зю,з 5,9±1,1 3,3±0,3 2,7±0,3 4,9Ю,3

Дискоциты 88,613,3 71,213,1 82,1±3,1 76,713,6 64,413,1 77,214,1

Ретикулоциты 4-6 2,ОАО,03 4,1±1,1 8,110,6 14,813,1 18,612,1 15,211,6

ИБС х10'7мкл 7,31:0,3 5,3±0,3 4,810,3 1,910,3 2,010,2 з,зю,з

Дискоциты 88,6±3,3 71,2±3,1 77,3±5,1 46,814,3 36,1±3,6 42,6±3,6

Ретикулоциты 6-8 2,0±0,03 4,811,1 7,1±0,3 22,0±1,6 24,1±1,3 16,6±2,6

ИВС х10°/мкл 7,3±0,3 4,1 ±0,3 3,110,02 1,310,01 1,710,03 2,9Ю,2

Дискоциты 88,613,3 73,2±3,1 69,713,7 51,513,6 33,613,6 41,6±3,6

Следует отметить разнонаправленную динамику количественного показателя эритроцитов с тельцами Жолли, при которой установлено достоверное увеличение их количества в группе животных с удаленной селезенкой (Долгов В.В., Луговская С.А., с соавт., 2001). Вместе с этим, снижение количества эритроцитов может быть связано с

гиперплазией красной пульпы и увеличенным потреблением эритроцитов. В этот период селезенка имеет признаки диффузного кровенаполнения, содержит участки геморрагического пропитывания. Стенки центральных артерий утолщены за счет умеренного склероза.

Динамика дискоцитов собак в при завороте желудка с удалением селезенки. Количество дискоцитов (2-4 часа после начала заворота) имело волнообразную динамику своего развития, но отмечено снижение показателя на всем протяжении наблюдений. На 7-е сутки (4-6 часов после начала заворота) снижение клеток достигло уровня 51,5±1,3%, а к 11-м их количество было в 2 раза ниже по сравнению с ФП. Количественный показатель дискоцитов (6-8 часов после начала заворота) к 11-м в 2,2 раза уступал ФП и составил (39,8±3,2%).

Динамика дискоцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки. Количество дискоцитов (2-4 часа после начала заворота) на момент первичного приема снизилось до 71,2±3,1% при ФП - 88,6±3,3%, после незначительного увеличения, к 11-м суткам их количество в 1,2 раза ниже ФП. На 7-е сутки снижение клеток (4-6 часов после начала заворота) достигло уровня 46,8±4,3%, а к 11-м их количество было в 2 раза гаже по сравнению с ФП (36,1±3,6%) К окончанию наблюдений их количественный показатель не установлен на уровне 42,6±3,6%. Максимальное снижение дискоцитов (6-8 часов после начала заворота) отмечено к 11-м суткам (33,6±3,6%). К окончанию наблюдений их количественный показатель был на уровне 41,6±3,6%.

Динамика пойкилоцитов собак при завороте желудка. Нарушение архитектоники поверхности эритроцитов влияет на срок продолжительности жизни клеток и может приводить к развитию анемии. Долгов В.В., Луговская С.А., с соавт. (2001). Динамика пойкилоцитов при завороте желудка с удалением селезенки продемонстрировала достоверное их увеличение к 7 и 11-м суткам во всех группах животных независимо от времени выполнения операции, что же касается собак, которым селезенку не удаляли, то здесь динамика деформированных клеток в период 2-4 часа после начала заворота значительно отличалась от остальных групп и занимала самое низкое графическое расположение, что в прогностическом плане является положительным моментом, не обремененном интоксикацией и прогрессирующим воспалением, а также влиянием на мембрану эритроцита белков острой фазы.

Анализ данных показывает, что уменьшение эластичности мембраны эритроцитов может быть следствием гипоксии, ацидоза, влияния продуктов липопероксидпого обмена и механических воздействий (Barosi G., 2001). Изменение формы клетки можно объяснить агрегацией спектрина, вызванной кальцием и связанным с этим изменением конфигурации и площади мембраны (Singer S.J., 1994; Zhang D. Kiyatkin A., et al., 2000). Способность к деформации эритроцитов обеспечивается также особыми свойствами лшшдного биелоя мембраны и белкового каркаса, их составом и структурой, внутренней вязкостью клетки, которая зависит, прежде всего, от концентрации и физико-химических свойств гемоглобина (Huang С.Н., Liu Z„ et all., 1998; Higgs D.R., Wood W.G., 2005).

Функциональное состояние эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией, выполненной через 6-8 часов после начала заворота. Изучение функциональных и структурных изменений эритроцитов в этот период проявились в наибольшей степени и отразили наиболее глубокие изменения в своем развитии. В данной таблице представлены наиболее тяжелые изменения представленных Количество эритроцитов на момент первичного приема составило 4,1±0, Зх106/мкл, на 3-й сутки было на уровне 3,1±0,02 х106/мкл. На 7-е сутки после операции показатель RBC продолжал снижаться и в этот день установлено самое нижнее их значение - 1,3±0,01 х106/мкл. К 11-м суткам количество эритроцитов незначительно увеличивалось, а к 15-м составило 2,9±0,2х10<;/мкл (Табл.5).

Таблица 5.

Динамика функционального состояния эритроцитов собак при завороте желудка с _операцией, выполненной без удаления селезенки _

Показатели крови ФП Состояни е на момент поступлен ия Исследования после операции, выполненной через 6 — 8 ч.

3 сутки 7 сутки 11 сутки 15 сутки

RBC хЮ'Умкл 7,3±0,3 4,1 ±0,3 3,1±0,02 \,3±0,01 1,7±0,03 2,9АО,2

HGB, г/дл 16,2±0,6 8,2±1,4 7,1±0,3 6,6±0,3 6,9i0,3 9,7±1,6

нет, % 48,6±2,2 24,6±2,3 33,6±1,6 18,1±3,1 11,7±2,3 18,1±3,1

MCV, фл 66,4±3,4 60,0±3,1 108,3±6,3 139,2±7,2 68,8±6,6 62,4±3,3

МСН, пг 22,2±1,7 20,0±3,3 22,9±3,1 50,7±2,6 40,5±3,2 33,4±1,6

мснс, г/дп 33,3±2,2 34,1±5,1 21,1±4,1 36,4±3,4 59,<Ш,6 53,6±3,3

RDW,% 12,7±0,3 18,8±3,3 10,0±2,2 14,&-Ь1,3 16,4±1,4 13,2±1,3

СОЭ, мм/ч 3,2±0,08 6,3±0,3 11,3±0,6 13,8±1,4 19,6±2,3 8,0±0,8

PLT (тыс/мкл) 210,6±6,7 246,3±7,3 281Д±7,3 379,3±11,2 172,3±6Д 82,6±8,3

Несмотря на медикаментозное и физиологическое восстановление кроводатери, анемия зачастую нарастает, снижение числа эритроцитов обусловлено не только кровопотерей, но и повышенным их потреблением вследствие гиперагрегации и разрушения (Takahashi Y., Henmi Н. et al., 1983; Kucera W., Meier W., et al., 1984).

Эритроцит является сложным образованием, характеризуется наличием мембраны, цитоскелета мембраны и гемоглобина, особенностями метаболизма. Все это способствует выполнению этими клетками определенных функций. Нарушение структуры и метаболизма эритроцитов приводит к изменению их структуры и преждевременной гибели (Ватников Ю.А., 2012). На момент приема концентрация гемоглобина (HGB) составила 8,2±1,4 г/дл, к 7-м суткам мы отмечали самое низкое снижение гемоглобина до 6,6±0,3 г/дл, после чего его концентрация начала увеличиваться и к 15-м суткам составила 9,7±1,6 г/дл. Результат исследования гематокрита (НСТ) на момент первичного приема составил 24,6±2,3, на 3-й сутки - 33,6±1,6%, на 7-е сутки - 18,1±3,1 %. С 11-х суток (11,7±2,3) происходило увеличение данного показателя и к 15-м суткам достигло 18,1±3,1%. Данные изменения мы связываем с нарастанием токсического воздействия за счет появления мертвых тканей, накопления протеолитических ферментов и экзотоксинов, что подтверждается исследованиями (Ватников Ю.Л., 2004; Ватников Ю.А., Ротанов Д.А., 2007; Higgs D.R., Wood W.G., 2005). Важным элементом диагностики степени кровопотери является изучение гематологических показателей. Кровопотеря ведет к снижению числа эритроцитов и гемоглобина в периферической крови, уменьшению гематокрита и удельного веса крови (Чернух А.М., Александрова JI.M., с соавт., 1975; Ватников Ю.А., 2001; 2002).

Исследованием среднего объёма эритроцита (MCV) установлено, что на 3-й сутки после операции увеличение его объема было до 108,3±6,3 фл, к 7-м суткам объем увеличился до 139,2±7,2 фл, после чего снизился до 68,8±6,6 фл, а к окончанию исследования объем снизился до 62,4±3,3 фл. Изучение среднего содержания гемоглобина (МСН) в эритроците на 3-й сутки после операции не отличалось от ФП, в дальнейшем динамика содержания гемоглобина имела волнообразную направленность (Табл. 6). Концентрация гемоглобина (МСНС), увеличивалась на протяжении всего периода

наблюдений и наибольший ее показатель был на уровне 59,0±3,6 г/дл. Исследование RDW выявило снижение показателя на 3-й сутки после операции до 10,0±2,2%, к 7-м суткам данный показатель увеличился до 14,8±1,3%. На 11-е сутки объем эритроцитов увеличился до 16,4±1,4%, а к 15-м суткам отклонение от среднего значения составило 13,2±1,3%. Следует отметить, что гипоксия в результате анемии и тяжелейшего токсического воздействия на организм может говорить о нарастании гемолитической анемии, при этом повышенное разрушение эритроцитов поддерживает гиперагрегацию, нарушение микроциркуляции и развитие осложнений (Климко H.H., 1986; Алексеев H.A., 2004). Скорость оседания эритроцитов на 3-й сутки составила 11,3±0,6 мм/ч., к 7-м СОЭ увеличилось до 13,8±1,4 мм/ч, на 11-е сутки скорость оседания эритроцитов была на уровне 19,6±2,3 мм/ч и к окончанию исследований скорость снизилась и составила 8,0±0,8 мм/ч. Количество тромбоцитов увеличивалось до 7-х суток, (379,3±11,2 тыс/мкл), начиная с 11-х, их количественный показатель начал снижаться и к 15 суткам составил 82,6±8,3 тыс/мкл.

Таблица 6.

Динамика структурных изменений эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки

Показатели крови, % ФП Состоян. на момент поступлен ия Исследования после операции выполненной через 6- 8 ч.

3 сутки 7 сутки 11 сутки 15 сутки

Нормоциты 78,5±3,2 53,6±3,3 36,8±3,9 29,1±3,6 24,6±2,7 31,1±3,3

Микроциты 12,3±0,5 19,7±2,1 6,6±0,7 3,3±0,6 3,li0,01 4,2±0,7

Макроциты 9,2+1,1 26,7±2,3 56,б±4,2 67,6±6,6 72,3±7,3 64,7±6,3

Диско циты 88,6±3,3 73,2±3,1 69,7±3,7 51,5±3,6 41,6±3,6 49,б±3,6

Эхиноциты 7,5±0,8 9,8=Ю,8 18,9±3,3 26,1±ЗД 21,3±3,6 16,6t3,l

Стоматоциты 2,6±0,02 2,3±0.03 3,2±0,6 11,7±3,1 13,1±3,3 9,3±2,1

Сфероциты 1,3±0,01 2,6±0.02 3,6±0,3 4,7±1,3 8,7*1,7 9,2±1,1

Шизоциты 0 0,2±0,01 0,4±0,02 1,9±0,07 3,6±0,7 8,1±0,3

Акантоциты 0 0 0,3±0,02 0,8±0,0б 3,2±0,1 2,0±0,1

Монетные столбики 0 2,7±0,1 6,7±0,3 Я$± 1,0 9,7±0,7 б,8±2,2

RBCc т Жолли 1,3±0,05 1,7±0,8 3,3±0,3 8,1±1,1 13,3±2,6 12,8±2,1

Примечание. ФП - физиологический показатель. Другие формы пойкилоцигон и разрушенные клетки до 100.

Структура эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией, выполненной через 6-8 часов после заворота. Количество нормоцитов на момент первичного приема было 53,6±3,3%, к 3-м суткам постоперационного периода составило 36,8±3,9%, в дальнейшем эта направленность имела волнообразную динамику и к заключительному дню, количественный показатель составил 31,1±3,3%. Количество микроцитов на момент первичного приема было на уровне 19,7±2,1%, в процессе наблюдегаш количественный показатель снижался и на 15-е сутки их количество составило 4,2±0,7% (Табл.6). На 3-й сутки количество макроцитов увеличилось до 56,6±4,2%, при показателе первичного приема 26,7±2,3%. На 7- е и 11-е сутки процентное содержание макроцитов увеличилось, к окончанию наблюдений их показатель снизился и

составил 64,7±6,3 %. Аналогичной была динамика эхииоцитов, которая проявилась увеличением на 3-й сутки до 18,9±3,3%, на 7-е, а затем на 11-е сутки количественный показатель достиг уровня 21,3±3,6%. К окончанию наблюдений отмечено снижение их количества до 16,6±3,1%.

Деформированность эритроцитов, изменения реологии крови, а равно и структуры эритроцитов, могут происходить в период развития катаболической фазы реакции организма на агрессию, когда отмечается интенсификация катаболизма белков, жиров, углеводов. Следует отметить, что изменение структуры эритроцитов, возможно, происходит под воздействием низкого уровня рН, а также под влиянием белков острой фазы. В.А. Гурьянов с соавт. (2000) отмечает, что изменения реологии крови усугубляют нарушения микроциркуляции, повышая угрозу ишемических повреждений органов, а вместе с этим (Геннис Р., 1997; Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., 2004) на поверхности эритроцитарной мембраны могут адсорбироваться продукты метаболизма и иммунные комплексы, что позволяет рассматривать эритроциты и как неспецифические клетки иммунной системы.

Количество стоматоцитов увеличивалось с начала постоперационного периода, и на 3-й сутки их значение было на уровне 3,2±0,6%, а к окончанию наблюдений значение достигло 9,3±2,1%, число сфероцитов в постоперационный период увеличилось к 15 суткам до 9,2±1,1 %. На момент первичного приема количество шизоцитов составило 0,2±0,01%, после операции на 3-й сутки их количество начало увеличиваться, к 11-м суткам их значение составило 6,6±0,7%, а на 15-е сутки - 8,1 ±0,3%. На 3-й сутки посте операции количество акантоцитов увеличивалось на протяжении всего периода наблюдений. Монетные столбики обнаружены на момент первичного приема в количестве 2,7±0,1%, в дальнейшем их процентное содержание продолжало увеличиваться, к 11-м суткам их количество было 9,7±0,7%, а в заключительный день их содержание составило 6,8±2,2%. Следует отметить, что изменение формы клетки можно объяснить агрегацией спектрина, вызванной кальцием и связанным с этим изменением

конфигурации и площади мембраны (Singer S.J., 1994).

* * ♦

Заворот желудка вызывает выраженные негативные сдвиги в динамике эритробластического ростка и эритроцитов, при этом структура эритроцитов подвергается значительной деформации, снижается количество дискоцитов и нормоцитов, появляются такие клетки как: эхиноциты, стоматоциты, сфероциты шизоциты, акантоциты, большое количество монетных столбиков. Эти данные свидетельствуют о развитии сложной функциональной перестройки эритрона. Наблюдениями установлена прямая зависимость изменений структуры эритроцитов от временного интервала, связанного с операцией и со способом ее проведения. Происходит увеличение разнородности эритроцитов, в крови увеличивается количество ретикулоцитов, происходит накопление ядерных форм и эритроцитов с тельцами Жолли. Оперативное вмешательство, выполненное через 2-4 часа после заворота, сопровождается наименьшими осложнениями и прогноз является благоприятным независимо от способа операции. Чем больше срок от начала заворота до проведения операции, тем сильнее заметны патологические изменения. Так, при 6-8 часовом завороте налицо все признаки геморрагической и гемолитической анемии, отмечены тяжелые изменения в эритроцитарном звене.

Исходя из данных динамики эритробластического ростка и эритроцитов, оперативное ьмешательство, проведенное с удалением селезенки, имеет на наш взгляд большие перспективы на положительный постоперационный исход, что и следует считать прогностически благоприятным признаком течения постоперационнного периода.

4. ВЫВОДЫ

1. Динамика кликико-морфологических показателей эритробластического ростка и эритроцитов находится в зависимости от времени с начала заворота, способа выполнения операции и характеризуется пойкилоцитозом, постгеморрагической и смешанной анизоцитарной анемией.

2. Эритробластический росток в постоперационный период при завороте желудка характеризуется равномерным развитием при операции, выполненной с удалением селезенки, и имеет сужение ростка на уровне ПХФНБ на 7-е сутки (4-6 час) и 7- 11-е сутки при завороте 6-8 час у животных, прооперированных без удаления селезенки.

3. Выраженная эритропения (1,3±0,01; 1,7±0,03 7-11 сутки) у животных без удаления селезенки происходит вследствие гиперплазии красной пульпы селезенки. Пойкилоцитоз нарастает прямо пропорционально времени от начала заворота и наибольшее их количество наибольшее количество приходится на 7-11 сутки и достигает 45,2% и 49,9% (соответственно).

4. В крови животных, начиная с 3-х суток постоперационного периода, появляются такие клетки, как шизоциты 0,4±0,02%, акантоциты 0,3±0,02%. Сладж-синдром в группе животных с заворотом 6-8 час, достигают уровня 6,7±0,3%.

5. В постоперационный период развивается смешанный анизоцитоз с достоверным снижением нормоцитов и дискоцитов в группе животных, у которых время с момента заворота составляет более 4-6 часов. Увеличивается количество эритроцитов с тельцами Жолли после удаления селезенки до 26,3±2,7% на 7-е, и 28,3±1,2% - на 11-е сутки.

6. Анализ осложнений и смертности собак при завороте желудка в различные сроки после операций показал, что количество осложнений с заворотом желудка до 2-х часов составило 10%, при длительности заворота 2-4 часа - 23% и смертность - 6%. Заворот в течение 4-6 часов сопровождался 75% осложнений и 25% гибели. При увеличении продолжительности заворота до 6-8 часов количество осложнений составляет 100%, смертность - 50%. Выраженные патоморфологические изменения цитоархитектоники эритроцитов, не имеют породной и возрастной зависимости.

5. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Оперативное вмешательство следует проводить с удалением селезенки, если время с момента заворота превышает 4 часа.

2. Оценка цитоархитектоники эритроцитов позволяет представить параметры эритроцитов для оценки степени тяжести организма в постоперационный период, что даст возможность контролировать и разработать алгоритм лечебных мероприятий.

3. Результаты исследований, изложенные в диссертационной работе, используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий для студентов специальности «Ветеринария».

4. Опубликованы Утвержденные ученым советом аграрного факультета методические рекомендации «Метод оценки функционального состояния эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак» по вопросам постоперационного анализа эритрогенеза и предназначенные для студентов специальности Ветеринария, слушателей ДПО и практикующих врачей.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Недобежкова ЕЛО. Динамика эритроцитов под воздействием заворота желудка и операционной травмы у собак/ ЕЛО. Недобежкова, Ю.А. Ватников // Материалы МНПК «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и образования», Часть 2, 28-29 марта 2013. Курск: «Курская городская типография». 2013. - С. 144-146.

Недобежкова ЕЛО. Морфологические характеристики эритроцитов собак в постоперационный период при завороте желудка/ ЕЛО. Недобежкова //Материалы МНПК «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и образования», Часть 2,28-29 марта 2013. Курск: «Курская городская типография». 2013. - С. 146-148.

Недобежкова Е.Ю. Мониторинг постоперациониых осложнений при завороте желудка у собак/ Е.Ю. Недобежкова, Ю.А. Ватников С.В. Позябни// Ветеринарная патология. 2013, № 3. - С. 92-95.

Недобежкова Е.Ю. Структурно-функциональное состояние эритроцитов при завороте желудка у собак/ Е.Ю. Недобежкова, Ю.А. Ватников // Теоретические и прикладные проблемы агропромышленного комплекса. 2013, As 3 (16). - С. 45-47.

Боженова Е.Ю. Метод оценки функционального состояния эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак. / Е.Ю. Боженова, Ю.А. Ватников, Е.Д. Сотникова //Методические рекомендации М..: «11-й ФОРМАТ». - 2013. - 10 с.

Боженова Елена Юрьевна (Россия)

Клинико-морфологнческая характеристика эритробластического ростка и

эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак

В работе представлены данные о распространенности и встречаемости постоперационных осложнений при завороте желудка у собак. Проведен анализ динамики эритробластического ростка у животных с операцией, выполненной в различные сроки после начала заворота с удаленной селезенкой и без ее удаления в процессе операции. Проведено исследование функционального и структурного состояния эритроцитов у собак, вызванного заворотом желудка и при различных методах оперативного вмешательства. Представлен прогноз течения постоперационного периода.

Bozhenova Elena Yurievna (Russia) Clinical and morphological characteristics of erythroblast germ cells in the postoperative period, when roll the stomach in dogs

The work presents the data regarding the distribution and occurrence of postoperative complications roll the stomach in dogs. The analysis of the dynamics erythroblast sprout in animals with the operation, performed in different periods after the start wrapping spleen and without its removal in the process of operation. Study of functional and structural state of erythrocyte in dogs caused by the inversion of the stomach and in various methods of surgical intervention. Presents a forecast of the flow of the postoperative period.

Подписано в печать:

25.11.2013

Заказ № 9212 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 vvwvv.autoreferat.ru

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Боженова, Елена Юрьевна, Москва

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Российский университет дружбы народов»

04201454370 ^а пРавахрукописи

Боженова Елена Юрьевна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКОГО РОСТКА И ЭРИТРОЦИТОВ В ПОСТОПЕРАЦИОННЫЙ ПЕРИОД ПРИ ЗАВОРОТЕ ЖЕЛУДКА У СОБАК

Специальность: 06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Ватников Ю.А.

Москва 2013

СОДЕРЖАНИЕ

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ..................................................5

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................................................9

2.1. Морфофуикцаональная характеристика желудка и причины его заворота у собак...............................................................................................9

2.2. Состояние животных в постоперационный период.............................13

2.3. Функциональные изменения при гиповолемическом шоке.....................20

2.4. Анемия как реакция на повреждение......................................................22

2.5. Морфофункционалъные изменения эритробластического ростка......24

2.7. Функциональная активность селезенки.................................................44

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.......................................................46

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................50

4.1. Мониторинг постоперационных осложнений при завороте желудка у собак................................................................................................................50

4.2. Анализ функционального состояния эритробластического ростка у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах оперативного вмешательства......................................................................55

4.2.1. Динамика эритробластического ростка у животных с операцией, выполненной через 2-4 часа после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции.................................................................55

4.2.2. Динамика эритробластического ростка у животных с операцией выполненной через 4-6 часов после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции.................................................................56

4.2.3. Динамика эритробластического ростка у животных с операцией выполненной через 6-8 часов после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции.................................................................57

4.2.4. Динамика эритробластического ростка у животных с операцией выполненной через 2-4 часа после начала заворота без удаления селезенки в процессе операции..................................................................58

4.2.5. Динамика эритробластического ростка у животных с операцией выполненной через 6-8 часов после начала заворота без удаления

селезенки в процессе операции..................................................................63

4.3. Анализ функционального и структурного состояния эритроцитов у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах

оперативного вмешательства......................................................................67

4.3.1. Функциональное состояние эритроцитов у животных с операцией выполненной через 2-4 часа после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции.................................................................67

4.3.2. Структура эритроцитов собак с операцией выполненной через 2-4 часа после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции ......................................................................................................................71

4.3.3. Функциональное состояние эритроцитов у животных с операцией

выполненной через 4-6 часов после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции.................................................................74

4.3.4. Структура эритроцитов собак при завороте желудка с удалением селезенки с операцией, выполненной через 4-6 часов после начала заворота........................................................................................................77

4.3.5. Функциональное состояние эритроцитов у животных с операцией выполненной через 6-8 часов после начала заворота и удаленной селезенкой в процессе операции.................................................................80

4.3.6. Структура эритроцитов собак при завороте желудка с удалением селезенки с операцией, выполненной через 6-8 часов после начала заворота........................................................................................................82

4.3.7. Функциональное состояние эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией, выполненной через 2-4 часа после начала заворота.........................................................................86

4.3.8. Структура эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией через 2-4 часа после заворота...............................88

4.3.9. Функциональное состояние эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией выполненной через 4-6 часов после заворота...................................................................................94

4.3.10. Структура эритроцитов собак в постоперационный период при завороте желудка без удаления селезенки с операцией через 4-6 часов после заворота..............................................................................................97

4.3.11. Функциональное состояние эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией, выполненной через 6-8 часов после начала заворота.....................................................................100

4.3.12. Структура эритроцитов собак при завороте желудка без удаления селезенки с операцией выполненной через 6-8 часов после заворота.... 104

5. ВЫВОДЫ.....................................................................................................110

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................................111

7. БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК....................................................112

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заворот желудка у собак, это тяжелая патология и в отсутствии своевременной диагностики и оперативного лечения сопровождается 100% летальностью, причем гибель животных после операции достигает 47%, вместе с этим, происходит большое количество рецидивов. При этом развитие и закономерность патологических процессов связанных с заворотом желудка, представляют большой интерес для ветеринарной науки и практики, причем научный подход к решению данной проблемы осложняется отсутствием достоверной статистики послеоперационных осложнений (Шебиц X., Брасс В., 2005; Холл Э., Симпсон Д., 2010; Ефимов А.Н., 2010; Позябин C.B. 2013; Fossum T. W., 2008; Elliot D. et al., 2010). В этой связи, понимание и клинический контроль, основанные на анализе эритробластического ростка и эритроцитов, открывают перспективное направление в поиске причин, вызывающих гибель животных в постоперационный период.

Постоперационная анемия, нарушение гемодинамики и микроциркуляции у животных значительно снижают устойчивость организма к инфекции, осложняют течение посттравматического периода, являются очагом ферментативной агрессии, эндотоксикоза и полиорганной недостаточности (Селезнев С.А., Богненко Ю.Б., 2004; Ротанов Д.А., 2007; Ватников Ю.А., 2012). И.В. Давыдовский (1961), указывает, что «какой бы ни была характеристика патологического процесса (травматического, инфекционного...) - это саморазвивающийся процесс, не зависящий от участия в нем этиологического фактора».

На сегодняшний день в клинической ветеринарии недостаточно полно отработана система методов, дающих возможность обеспечить надежное, научно-обоснованное влияние на течение постоперационного периода при завороте желудка. Структурные и функциональные изменения в костном мозге и периферической крови заставляют уделять большее внимание

всесторонним исследованиям организма, так как создание алгоритмов постоперационной стабилизации является основой профилактики смертельных случаев и серьезных посттравматических осложнений.

Статистические показатели, анализ научной литературы, собственные наблюдения показывают, что решение задач постоперационной стабилизации животных и создания условий контролируемой коррекции основных систем организма на сегодняшний день изучено недостаточно. Нет научно-обоснованных критериев, дающих полное представление о контроле над развитием эритрогенеза. При этом углубленное изучение постоперационного состояния с позиций морфофункциональных особенностей эритрогенеза в сравнительном аспекте при различных способах оперативного вмешательства в случае заворота желудка представляется актуальной.

Цель исследования - изучить клинико-морфологическую характеристику эритробластического ростка и эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак.

Задачи исследования: 1. провести мониторинг постоперационных осложнений при завороте желудка. 2. Изучить функциональное состояние эритробластического ростка, вызванного заворотом желудка, при различных методах оперативного вмешательства;

3. проанализировать клинико-морфологическое состояние эритроцитов у собак, в случаях заворота желудка, при различных методах оперативного вмешательства.

Научная новизна. Представлены новые данные о распространении и частоте постоперационных осложнений при завороте желудка у собак. Впервые проведен анализ динамики эритробластического ростка у животных с операцией, выполненной в различные сроки после начала заворота с удаленной селезенкой и без ее удаления в ходе операции. Проведено исследование функционального и структурного состояния эритроцитов у собак в динамике развития постоперационного периода, вызванного

заворотом желудка и при различных методах оперативного вмешательства. При анализе показателей эритробластического ростка и эритроцитов выявлено, что оперативное вмешательство следует проводить с удалением селезенки, если время с начала заворота составляет более 4-х часов. Установлено, что оперативное вмешательство с удалением селезенки, является оптимальным решением для обеспечения благоприятного исхода в постоперационный период.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана научная, теоретически и практически обоснованная концепция прогноза течения постоперационного периода на основе анализа динамики эритробластического ростка у животных с операцией, выполненной в различные сроки после начала заворота с удалением селезенки и без ее удаления в процессе операции. Получены новые данные об особенностях постоперационного периода, основанного на анализе количественных показателей клеток эритробластического ростка и эритроцитов. Наблюдениями установлено, что операция, проведенная с удалением селезенки, имеет положительный исход и является благоприятным признаком течения постоперационного периода. Оценка цитоархитектоники эритроцитов является диагностическим скрининговым критерием степени тяжести постоперационного периода при завороте желудка, что позволит разрабатывать и контролировать лечебные мероприятия.

Апробация работы. Основные положения работы доложены, обсуждены и одобрены: на кафедре клинической ветеринарии РУДН, а также на Международной НПК «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и образования», Курск (2013).

Внедрение результатов исследований. На основании результатов научно-исследовательской работы изданы методические рекомендации «Метод оценки функционального состояния эритроцитов в постоперационный период при завороте желудка у собак». Научные разработки внедрены в учебный процесс ФГБОУ ВПО «Московская

государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина», ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет», ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.И. Вавилова», ФГБОУ ВПО «Ульяновская сельскохозяйственная академия».

Публикации. По результатам исследований опубликованы 4 научные работы, 2 из которых в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Мониторинг постоперационных осложнений при завороте желудка у собак.

2. Динамика функционального состояния эритробластического ростка у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах оперативного вмешательства.

3. Анализ клинико-морфологического состояния эритроцитов у собак, вызванного заворотом желудка при различных методах оперативного вмешательства.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 130 страницах и отвечает необходимому минимуму, в полной мере раскрывающему суть поставленной цели. Структура диссертации состоит из Общей характеристики работы, Обзора научной литературы, охватывающего такие вопросы, как характеристика желудка и причины его заворота, функциональные изменения при гиповолемическом шоке, анемии как реакции на повреждение, Собственных исследований и их обсуждения, Выводов, Рекомендаций по практическому использованию результатов исследования, Библиографического списка из 207 источников, включающего 115 отечественных, и 92 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 22 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Морфофункциопалышя характеристика желудка и причины его заворота у собак

Данные научной литературы показывают, что развитие заворота желудка у собак, представляют собой сложный каскад изменений, который требует не только всесторонней клинической оценки, но и понимание постоперационного периода как основы успешного лечения.

C.B. Позябин (2013) указывает, что причинами послеоперационной смертности собак при завороте желудка являются в 27% случаев -перитонит, в 24,4% - почечная недостаточность, в 21,6% - легочная недостаточность, в 13,5% - сердечная недостаточность, в 13,5% - повторная гастрэктазия; пик смертности (40,6%) приходится на 4-6 сутки после оперативного вмешательства.

Желудок у собак занимает дорсальную область живота слева и расположен в поперечном направлении. Пустой или частично заполненный желудок имеет J-образную, а заполненный С-образную формы (Хромов Б.М.,1972; Слесаренко H.A., 2004; Акаевский А.И., Юдичев Ю.Ф., Селезнёв С.Б., (2009); Burdas K.D., 1994). С дорсальной поверхности желудка подходит сегмент большого сальника его дорсального листка, а в каудальном направлении к большой кривизне желудка слева частично прилегает краниальный сегмент селезенки. Дорсальная поверхность левой стороны желудка прилежит к париетальной брюшине на уровне 9-10 ребра, а медиально соприкасаясь с краниальным краем левой почки достигает уровня 11-13 ребра (Matthiessen D. Т., 1983; Harvey R. С., 1986; Parks J. L. Greene R. W., 1992).

Анатомически анализируя желудок, в нем дифференцируют кардиальную, фундальную и пилорическую зоны. Привратник желудка

расположен в области 9-го ребра. Пилорическая часть располагается на, справа от срединной линии на уровне 9-го ребра у ворот печени и на достаточно протяженном расстоянии она прикасается к печеночной доле и незначительным фрагментом к диафрагме (Слесаренко H.A., 2004; Акаевский А.И., Юдичев Ю.Ф., Селезнёв С.Б., (2009). Желудок у собак кровоснабжается посредством чревной артерии (a. coeliaca), которая в свою очередь делится на три ветви: селезеночную (a. lienalis), левую желудочную (a.gastrica sinistra), печеночную артерию (a. hepatica). Селезеночная артерия проходит в левую сторону к верхнему отделу селезенки, далее по её воротной части опускается до её верхушки и переходит в левую желудочно-сальниковую артерию, наряду с этим, селезеночная артерия отдает несколько мелких веточек к желудку. Левая желудочная артерия обслуживает верхнюю часть желудка. Правая желудочно-сальниковая артерия идет к его большой кривизне (Хромов В.Б., 1972). Венозный отток от желудка осуществляется одноименными артериям сосудами, в связи с этим обильная сеть анастомозов обеспечивает отток крови в воротную вену (Хромов Б.М., Короткевич Н.С. , 1972; Слесаренко H.A., 2004, Burdas K.D., 1994).

Иннервация желудка осуществляется от ветвей обоих стволов блуждающего нерва через экстра- и интрамедуллярные ганглии, а симпатические нервные волокна идут в составе ветвей, которые отходят от чревного сплетения и вместе с артериями подходят к желудку (Хрусталева И.В., Слесаренко H.A., с соавт. 1997). Желудочный лимфатический узел, расположен между листками малого сальника по малой кривизне желудка около от кардиального сфинктера. Основная часть лимфы проходит через лимфатические узлы печени (Barone R.,1976; Ромер А., Парсон Т., 1992; Акаевский А.И., Юдичев Ю.Ф., Селезнёв С.Б., 2009).

Стенка желудка состоит из слизистой оболочки, подслизистого слоя, мышечной и серозной оболочек. Слизистая оболочка, в свою очередь, состоит из эпителиального слоя, собственного слоя и мышечной оболочки.

Слизистая оболочка имеет неровный контур из-за рыхлого соединения с мышечной оболочкой. Собственный слой слизистой оболочки состоит из рыхлой соединительной ткани, клетки слизистой оболочки вырабатывают профермент пепсиноген, а также амилоидные ферменты. Эпителиальный слой оболочки выстлан однослойным цилиндрическим железистым эпителием, железы простые трубчатые неразветвленные (Акаевский А.И., Юдичев Ю.Ф., Селезнёв С.Б., 2009; McCarthy Т., 2012).

Мышечная оболочка состоит из гладких волокон расположенных продольно и циркулярно, при этом, подслизистая основа состоит из рыхлой соедин�